Конъюгаты связующего (adc) с ингибиторами ksp

Авторы патента:

Изобретение относится к конъюгатам связующее-активное соединение (ADC), где молекула активного соединения представляет собой ингибитор кинезинового белка веретена, присоединенный к связующему через линкер, причем связующее представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. Также предложены способы получения этих ADC. Конъюгаты предназначены для получения лекарственного средства для лечения и/или профилактики заболеваний, таких как гиперпролиферативные и/или ангиогенные заболевания. 15 н. и 60 з.п. ф-лы, 7 ил., 40 табл., 256 пр.

Введение и уровень техники

Настоящее изобретение относится к конъюгатам антитело-лекарственное средство (ADC) ингибиторов кинезинового белка веретена, к активным метаболитам этих ADC, способам получения этих ADC, к применению этих ADC для лечения и/или профилактики заболеваний, а также к применению этих ADC для получения лекарственных средств для лечения и/или профилактики заболеваний, в частности гиперпролиферативных и/или ангиогенных заболеваний, таких как, например, раковые заболевания. Такие терапии могут проводиться в виде монотерапии или также в комбинации с другими лекарственными средствами или дополнительными терапевтическими мерами.

Раковые заболевания являются следствием неконтролируемого клеточного роста различных тканей. Во многих случаях, новые клетки проникают в существующие ткани (инвазивный рост), или они метастазируют в отдаленные органы. Раковые заболевания встречаются в различных органах и часто имеют ткани-специфическое происхождение заболевания. Поэтому «рак» в качестве общего термина описывает большую группу определенных заболеваний различных органов, тканей или клеточных типов.

Опухоли на ранних стадиях можно удалять посредством хирургических и радиотерапевтических мер. Метастазированные опухоли, как правило, можно лечить только паллиативно посредством химиотерапии. Задачей является достижение оптимальной комбинации улучшения качества и увеличения срока жизни.

Конъюгаты связующих белков с одной или более молекулами активного соединения известны, в частности в форме так называемых «конъюгатов антитело-лекарственное средство» (ADC), в которых интернализирующее антитело, направленное против опухоль-связанного антигена, ковалентно присоединяется посредством связывающей единицы ("линкера") к цитотоксическому агенту. После введения ADC в опухолевую клетку и последующего диссоциирования конъюгата, либо цитотоксический агент сам по себе, либо цитотоксический метаболит, образованный из него, высвобождается внутри опухолевой клетки и может развивать свое действие в ней непосредственно и селективно. В этом случае, в отличие от обычной химиотерапии, повреждение нормальной ткани происходит в значительно более узких пределах [смотрите, например, J.M. Lambert, Curr. Opin. Pharmacol. 5, 543-549 (2005); A.M. Wu и P.D. Senter, Nat. Biotechnol. 23, 1137-1146 (2005); P.D. Senter, Curr. Opin. Chem. Biol. 13, 235-244 (2009); L. Ducry и В. Stump, Bioconjugate Chem. 21, 5-13 (2010)]. Таким образом, в WO 2012/171020 описываются ADC, в которых множество токсофорных молекул присоединяются посредством полимерного линкера к антителу. В качестве возможных токсофоров в WO 2012/171020 упоминаются среди прочего вещества SB 743921, SB 715992 (Испинесиб), MK-0371, AZD8477, AZ3146 и ARRY-520.

Вещества, упомянутые последними, представляют собой ингибиторы кинезинового белка веретена. Кинезиновый белок веретена (KSP, также известный как Eg5, HsEg5, KNSL1 или KIF11) представляет собой кинезин-подобный моторный белок, который является существенным для функции биполярного митотического веретена. Ингибирование KSP приводит к митотическому блоку и, через относительно длительный период, к апоптозу (Тао et al., Cancer Cell 2005 Jul 8(1), 39-59). После открытия первого проникающего в клетку ингибитора KSP, Монастрол, ингибитор KSP были признаны как класс новых химиотерапевтических средств (Mayer et al., Science 286: 971-974, 1999), и они стали объектом ряда заявок на патент (например, WO 2006/044825; WO 2006/002236; WO 2005/051922; WO 2006/060737; WO 03/060064; WO 03/040979; и WO 03/049527). Однако, так как KSP развивает свое действие только в течение относительно короткого периода в ходе фазы митоза, ингибиторы KSP должны

быть представлены в достаточно высокой концентрации в ходе этих начальных фаз.

Сущность изобретения

В отличие от уровня техники, задачей настоящего изобретения является обеспечение веществ, которые, после введения при относительно низкой концентрации, проявляют апоптозное действие и, поэтому, могут быть предпочтительными для лечения рака.

Для решения данной задачи настоящее изобретение обеспечивает конъюгаты связующего или его производных с одной или более молекулами активного соединения, причем молекула активного соединения представляет собой ингибитор кинезинового белка веретена (Ингибитор KSP), присоединенный к связующему через линкер L. Связующее предпочтительно представляет собой связующий белок или пептид, особенно предпочтительно человеческое, гуманизированное или химерное моноклональное антитело или его антиген-связывающий фрагмент, в частности анти-TWEAKR антитело или его антиген-связывающий фрагмент, или анти-EGFR антитело или его антиген-связывающий фрагмент. Особенно предпочтительным является анти-TWEAKR антитело, которое специфически связывается с аминокислотой D в положении 47 (D47) TWEAKR (SEQ ID NO: 169), в частности анти-TWEAKR антитело ТРР-2090, или анти-EGFR антитела Цетуксимаб или Нимотузумаб.

Авторы настоящего изобретения обнаружили ряд путей присоединения связующего к ингибитору KSP для решения указанной выше задачи.

Согласно настоящему изобретению ингибиторы кинезинового белка веретена могут иметь следующую подструктуру I (sub), показанную далее:

в которой

#а обозначает связь с остальной частью молекулы;

R^1a представляет собой Н или -(СН₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, -NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, -(CH₂CH₂O)_0-3-(СН₂)_0-3Z' (например, -(CH₂)_0-3Z'), или -CH(CH₂W)Z', и Y³представляет собой Н или -(СН₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂, СООН, -NH-CO-CH₂-CH₂-CH(NH₂)COOH или -(CO-NH-CHY⁴)_1-3COOH, причем W представляет собой Н или ОН, причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил;

R^2a и R^4a независимо друг от друга представляют собой Н, -CO-CHY⁴-NHY⁵ или -(СН₂)_0-3Z, или R^2a и R^4a вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-СН₂-, причем R¹⁰ представляет собой Н, NH₂, СООН, SO₃H, SH, или ОН, и причем Z представляет собой -Н, -OY³, -SY³, -NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил, и Y⁵ представляет собой Н или -CO-CHY⁶-NH₂ причем Y⁶представляет собой линейный или разветвленный C_1-6 алкил.

Согласно настоящему изобретению ингибитор кинезинового белка веретена может быть присоединен к связующему посредством линкера путем замещения атома водорода при R^1a, R^2a, R^4a или R¹⁰.

Ингибитор KSP, который присоединен к этому связующему (или ингибиторы KSP, так как часто более одного ингибитора KSP присоединяется к связующему), предпочтительно представляет собой соединение следующей формулы (Ia) или (IIa):

Формулы (Ia):

в которой

R^1a представляет собой Н, -MOD или -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, -NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

где Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, -(CH₂CH₂O)_0-3-(СН₂)_0-3Z' (например, -(CH₂)_0-3Z'), или -CH(CH₂W)Z', и Y³представляет собой Н или -(СН₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂, СООН, -NH-CO-CH₂-CH₂-CH(NH₂)COOH или -(СО-NH-CHY⁴)_1-3СООН; причем W представляет собой Н или ОН,

R^2a и R^4a независимо друг от друга представляют собой Н, -CO-CHY⁴-NHY⁵ или -(СН₂)_0-3Z, или R^2a и R^4a вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-CH₂-, причем R¹⁰ представляет собой Н, SO₃H, NH₂, СООН, SH, или ОН;

причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил, и Y⁵ представляет собой Н или -CO-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶ представляет собой линейный или разветвленный C_1-6 алкил;

R^3a представляет собой -MOD или необязательно замещенную алкил-, циклоалкил-, арил-, гетероарил- гетероалкил- или гетероциклоалкил-группу,

предпочтительно C_1-10-алкил-, С_6-10-арил- или С_6-10-аралкил-, C_5-10-гетероалкил-, C_1-10-алкил-О-С_6-10-арил- или С_5-10-гетероциклоалкил-группу, которая может быть замещена 1-3 -ОН группами, 1-3 атомами галогена, 1-3 галогенированными алкильными группами (причем каждая может содержать 1-3 атома галогена), 1-3 O-алкильными группами, 1-3 -SH группами, 1-3 -S-алкильными группами, 1-3 -O-СО-алкильными группами, 1-3 -O-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -S(O)_n-алкильными группами, 1-3 -SO₂-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-алкильными группами, 1-3 -N(алкил)₂ группами, 1-3 -NH₂ группами или 1-3 -(СН₂)_0-3Z группами, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, -NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³, где Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, или -(СН₂)_0-3Z', и Y³ представляет собой Н, -(CH₂)_0-3-CH(NHCOCH₃)Z', -(CH₂)_0-3-CH(NH₂)Z', или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН,

(причем "алкил" предпочтительно представляет собой C_1-10-алкил);

R^8a представляет собой C_1-10-алкил или -(CH₂)_0-2-(HZ²), причем HZ²представляет собой 4-7-членный гетероцикл, содержащий до двух гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из N, О и S;

HZ представляет собой моно- или бициклический гетероцикл, который может быть замещен одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, C_1-10-алкильных групп, С_6-10-арильных групп или С_6-10-аралкильных групп, которые необязательно могут быть замещены галогеном;

причем -MOD представляет собой -(NR¹⁰)_n-(G1)_o-G2-H, причем

R¹⁰ представляет собой Н или C₁-C₃-алкил;

G1 представляет собой -NHCO-, -CONH- или (причем

когда G1 представляет собой -NHCO- или , R¹⁰ не представляет собой NH₂);

n равно 0 или 1;

o равно 0 или 1; и

G2 представляет собой неразветвленную и/или разветвленную углеводородную группу, которая имеет 1-10 атомов углерода и которая может прерываться один или более раз одной или более группами -O-, -S-, -SO-, SO₂, -NR^y-, -NR^yCO-, CONR^y-, -NR^yNR^y, -SO2NR^yNR^y-, -CONR^yNR^y-, (причем R^y представляет собой Н, фенил, С₁-С₁₀-алкил, С₂-С₁₀-алкенил, или C₂-C₁₀-алкинил, каждый из которых может быть замещен заместителем NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид, или сульфоновая кислота), -СО-, -CR^x=N-O- (причем Rx представляет собой Н, С₁-С₃-алкил или фенил), причем углеводородная цепь, включая боковые цепи, если присутствуют, может быть замещена заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид, или сульфоновая кислота, причем группа -MOD предпочтительно имеет по меньшей мере группу -СООН;

причем ингибитор кинезинового белка веретена присоединяется к линкеру путем замещения атома водорода при R^1a, R^2a, R^3a, R^4a, R^8a или R¹⁰ или через один из заместителей HZ, в частности через R^1a, R^2a, R^3a, R^4a или R¹⁰, а также его соли, сольваты и соли сольватов.

Формулы (IIa):

в которой

X₁ представляет собой N, Х₂ представляет собой N, и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой N, Х₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N; или

X₁ представляет собой СН или CF, Х₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N; или

X₁ представляет собой NH, X₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой CH, Х₂ представляет собой N, и Х₃ представляет собой С;

(причем предпочтительно X₁ представляет собой СН, Х₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N предпочтительно

R¹ представляет собой Н, -L-#1, -MOD или -(СН₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, -NHY³, -OY³, -SY³, галоген, -CO-NY¹Y², или -СО-OY³,

R² представляет собой -L-#1, Н, -MOD, -CO-CHY⁴-NHY⁵ или -(CH₂)_0-3Z, или R² и R⁴ вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-СН₂-, причем R¹⁰представляет собой L-#1, Н, NH₂, SO₃H, СООН, SH, или ОН;

причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил, и Y⁵ представляет собой Н или -CO-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶ представляет собой линейный или разветвленный C_1-6 алкил;

R⁴ представляет собой -L-#1, H, -CO-CHY⁴-NHY⁵ или -(CH₂)_0-3Z,

причем Z представляет собой -H, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой H, NH₂, или -(СН₃)_0-3Z', и Y³ представляет собой Н или -(СН₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН;

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил, и Y⁵ представляет собой Н или -СО-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶представляет собой линейный или разветвленный C_1-6 алкил;

или R² и R⁴ вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-CH₂-, причем R¹⁰ представляет собой L-#1, Н, NH₂, SO₃H, СООН, SH, или ОН;

А представляет собой СО, SO, SO₂, SO₂NH или CNNH;

R³ представляет собой -L-#1, -MOD, или необязательно замещенную алкил-, циклоалкил-, арил-, гетероарил- гетероалкил-, гетероциклоалкил-группу, предпочтительно -L-#1 или C_1-10-алкил-, С_6-10-арил- или С_6-10-аралкил-, С_5-10-гетероалкил-, C_1-10-алкил-О-С_6-10-арил- или C_5-10-гетероциклоалкил-группу, которая может быть замещена 1-3 -ОН группами, 1-3 атомами галогена, 1-3 галогенированными алкильными группами (причем каждая может содержать 1-3 атома галогена), 1-3 O-алкильными группами, 1-3 -SH группами, 1-3 -S-алкильными группами, 1-3 -O-СО-алкильными группами, 1-3 -O-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -S(O)_n-алкильными группами, 1-3 SO₂-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-алкильными группами, 1-3 -N(алкил)₂ группами, 1-3 -NH₂ группами

или 1-3 -(СН₂)_0-3Z группами, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, -NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³, где Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, или -(СН₂)_0-3Z', и Y³ представляет собой Н, -(CH₂)_0-3-CH(NHCOCH₃)Z', -(CH₂)_0-3-CH(NH₂)Z', или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН,

(причем "алкил" предпочтительно представляет собой С_1-10-алкил);

R⁵ представляет собой -L-#1, Н, NH₂, NO₂, галоген (в частности F, Cl, Br), -CN, CF₃, -OCF₃, -CH₂F, -CH₂F, SH или -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, -OY³, -SY³, галоген, NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, или -(CH₂)_0-3Z', и Y³ представляет собой Н или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН;

R⁶ и R⁷ независимо друг от друга представляют собой Н, циано, (необязательно фторированный) С_1-10-алкил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкенил, (необязательно фторированный) C_2-10-алкинил, гидрокси, NO₂, NH₂, СООН или галоген (в частности F, Cl, Br),

R⁸ представляет собой (необязательно фторированный) C_1-10-алкил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкенил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкинил, (необязательно фторированный) C_4-10-циклоалкил или -(CH₂)_0-2-(HZ²), причем HZ² представляет собой 4-7-членный гетероцикл, содержащий до двух гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из N, О и S, причем каждая из этих групп может быть замещена -ОН, CO₂H или NH₂, или -L-#1;

причем один или ни одного из заместителей R¹, R², R³, R⁴ R⁵, R⁸ и R¹⁰представляют собой -L-#1 или (в случае R⁸) содержат,

L представляет собой линкер, и #1 представляет собой связь со связующим или его производным,

причем -MOD представляет собой -(NR^l0)_n-(G1)_o-G2-H, причем

R¹⁰ представляет собой Н или C₁-C₃-алкил;

G1 представляет собой -NHCO-, -CONH- или (причем

когда G1 представляет собой -NHCO- или , R¹⁰ не представляет собой NH₂);

n равно 0 или 1;

o равно 0 или 1; и

G2 представляет собой неразветвленную и/или разветвленную углеводородную группу, которая имеет 1-10 атомов углерода и которая может прерываться один или более раз одной или более группами -O-, -S-, -SO-, SO₂, -NR^y-, -NR^yCO-, CONR^y, -NR^yNR^y-, -SO2NR^YNR^Y-, -CONR^yNR^y-, (причем R^y представляет собой Н, фенил, С₁-С₁₀-алкил, С₂-С₁₀-алкенил, или С₂-С₁₀-алкинил, каждый из которых может быть замещен заместителем NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид, или сульфоновая кислота), -СО-, -CR^x=N-O- (причем Rx представляет собой Н, C₁-С₃-алкил или фенил), причем углеводородная цепь, включая боковые цепи, если присутствуют, может быть замещена заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид, или сульфоновая кислота, причем группа -MOD предпочтительно имеет по меньшей мере одну группу -СООН;

а также его соли, сольваты и соли сольватов.

Конъюгаты согласно настоящему изобретению могут иметь химически лабильные линкеры, ферментативно лабильные линкеры или стабильные линкеры. Особенно предпочтительными являются стабильные линкеры и линкеры, которые могут отщепляться посредством катепсина.

Настоящее изобретение также обеспечивает способы получения конъюгатов согласно настоящему изобретению, а также предшественники и промежуточные соединения для получения.

Получение конъюгатов согласно настоящему изобретению, как правило, включает следующие стадии:

(i) получение предшественника линкера, который необязательно несет защитные группы и имеет реакционноспособную группу, которая способна связываться со связующим;

(ii) конъюгация предшественника линкера с производным, которое необязательно несет защитные группы, низкомолекулярного ингибитора KSP (предпочтительно ингибитора KSP, имеющего подструктуру I (sub), особенно предпочтительно формулы (Ia) и в частности формулы (IIa), причем в этих формулах еще нет связи с линкером), с получением реакционноспособного конъюгата ингибитор KSP-линкер, который необязательно несет защитные группы;

(iii) удаление любых защитных групп, присутствующих в конъюгате ингибитор KSP-линкер, и

(iv) конъюгация связующего с конъюгатом ингибитор KSP - Линкер, с получением конъюгата связующее-ингибитор KSP согласно настоящему изобретению.

Присоединение реакционноспособной группы может также осуществляться после получения необязательно защищенного конъюгата ингибитор KSP-предшественник линкера.

В зависимости от линкера, связанные с сукцинимидом ADC могут, после конъюгации, быть превращены согласно схеме 26 в сукцинамиды с открытой цепью, которые имеют предпочтительный профиль стабильности.

Как показано выше, конъюгация предшественника линкера с низкомолекулярным ингибитором KSP может осуществляться путем замещения атома водорода при R^1a, R^2a, R^4a или R¹⁰ в подструктуре I(sub), R^1a, R^2a, R^3a, R^4a, R^8a или R¹⁰ в формуле (Ia), или R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁸ или R¹⁰ в формуле (IIa) на линкер. На стадиях синтеза до конъюгации любые присутствующие функциональные группы могут также присутствовать в защищенной форме. Перед стадией конъюгации эти защитные группы удаляются известными способами пептидной химии. Конъюгация может осуществляться химически различными путями, как показано примерным образом на схемах 7-31 в примерах. В частности, необязательно возможно модифицировать низкомолекулярный ингибитор KSP для конъюгации с линкером, например, путем введения защитных групп или уходящих групп для облегчения замещения.

В частности, настоящее изобретение обеспечивает новые низкомолекулярные ингибиторы KSP, которые необязательно могут быть конъюгированы со связующим. Эти ингибиторы KSP или их конъюгаты со связующим имеют следующую общую формулу (IIIa):

в которой

X₁ представляет собой N, X₂ представляет собой N, и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой N, Х₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N; или

X₁ представляет собой СН или CF, X₂ представляет собой С и Х₃ представляет собой N; или

X₁ представляет собой NH, X₂ представляет собой С и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой СН, Х₂ представляет собой N, и Х₃ представляет собой С;

(причем предпочтительно X₁ представляет собой СН, X₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N);

R¹ представляет собой Н, -L-СВЯЗУЮЩЕЕ, -MOD или -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, -NHY³, -OY³, -SY³, галоген, -CO-NY¹Y², или -СО-OY³,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, -(CH₂CH₂O)_0-3-(СН₂)_0-3Z' (например, -(СН₂)_0-3Z'), или -CH(CH₂W)Z', и Y³представляет собой Н или -(СН₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, NH₂, SO₃H, СООН, -NH-CO-CH₂-CH₂-CH(NH₂)COOH или -(CO-NH-CHY⁴)_1-3COOH; причем W представляет собой Н или ОН,

R² представляет собой -L-СВЯЗУЮЩЕЕ, Н, -MOD, -CO-CHY⁴-NHY⁵ или -(СН₂)_0-3Z, или R² и R⁴ вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-CH₂-, причем R¹⁰представляет собой L-#1, Н, NH₂, SO₃H, СООН, SH, или ОН;

причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, или -(СН₂)_0-3Z', и Y³ Н или -(СН₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН;

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил, и Y⁵ представляет собой Н или -CO-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶представляет собой линейный или разветвленный C_1-6 алкил;

R⁴ представляет собой -L-СВЯЗУЮЩЕЕ, Н, -CO-CHY⁴-NHY⁵ или -(CH₂)_0-3Z,

причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6 алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил, и Y⁵ представляет собой Н или -CO-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶ представляет собой линейный или разветвленный C_1-6 алкил;

или R² и R⁴ вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-CH₂-, причем R¹⁰представляет собой -L-СВЯЗУЮЩЕЕ, Н, NH₂, SO₃H, СООН, SH, или ОН;

А представляет собой СО, SO, SO₂, SO₂NH или CNNH;

R³ представляет собой -L-СВЯЗУЮЩЕЕ, -MOD, или необязательно замещенную алкил-, циклоалкил-, арил-, гетероарил- гетероалкил-, гетероциклоалкил-группу, предпочтительно -L-СВЯЗУЮЩЕЕ или С_1-10-алкил-, С_6-10-арил- или С_6-10-аралкил-, С_5-10-гетероалкил-, С_1-10-алкил-О-С_6-10-арил- или С_5-10-гетероциклоалкил-группу, которая может быть замещена 1-3 -ОН группами, 1-3 атомами галогена, 1-3 галогенированными алкильными группами (причем каждая может содержать 1-3 атома галогена), 1-3 O-алкильными группами, 1-3 -SH группами, 1-3 -S-алкильными группами, 1-3 -O-СО-алкильными группами, 1-3 -O-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -S(O)_n-алкильными группами, 1-3 -SO₂-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-алкильными группами, 1-3 -N(Алкил)₂ группами, 1-3 -NH₂ группами или 1-3 -(СН₂)_0-3Z группами, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, -NHY³, -CO-NY¹Y², или -СО-OY³, где Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, или -(СН₂)_0-3Z', и Y³ представляет собой Н, -(CH₂)_0-3-CH(NHCOCH₃)Z', -(CH₂)_0-3-CH(NH₂)Z', или -(СН₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или COOH,

(причем "алкил" предпочтительно представляет собой С_1-10-алкил);

R⁵ представляет собой -L-СВЯЗУЮЩЕЕ, Н, NH₂, NO₂, галоген (в частности F, Cl, Br), -CN, CF₃, -OCF₃, -CH₂F, -CH₂F, SH или -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, -OY³, -SY³, галоген, NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

R⁸ представляет собой (необязательно фторированный) С_1-10-алкил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкенил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкинил, (необязательно фторированный) C_4-10-циклоалкил или -(CH₂)_0-2-(HZ²), причем HZ² представляет собой 4-7-членный гетероцикл, содержащий до двух гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из N, О и S (предпочтительно оксетан), причем каждая из этих групп может быть замещена -ОН, СО₂Н или NH₂ или -L-СВЯЗУЮЩЕЕ;

причем L представляет собой линкер, и СВЯЗУЮЩЕЕ представляет собой связующее или его производное, причем связующее необязательно может быть присоединено к множеству молекул активного соединения,

причем самое большее один представитель из R¹, R², R³ R⁴, R⁵, R⁸ и R¹⁰представляет собой -L-Связующее;

R⁶ и R⁷ независимо друг от друга представляют собой Н, циано, (необязательно фторированный) C_1-10-алкил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкенил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкинил, гидрокси, NO₂, NH₂, СООН или галоген (в частности F, Cl, Br),

причем -MOD представляет собой -(NR¹⁰)_n-(G1)_o-G2-H, причем

R¹⁰ представляет собой Н или C₁-C₃-алкил;

G1 представляет собой -NHCO-, -CONH- или (причем когда G1 представляет собой -NHCO- или , R¹⁰ не представляет собой NH₂);

n равно 0 или 1;

o равно 0 или 1; и

G2 представляет собой неразветвленную и/или разветвленную углеводородную группу, которая имеет 1-10 атомов углерода и которая может прерываться один или более раз одной или более группами -O-, -S-, -SO-, SO₂, -NR^y-, -NR^yCO-, CONR^y, -NR^yNR^y-, -SO2NR^yNR^y-, -CONR^yNR^y-, (причем R^y представляет собой Н, фенил, С₁-С₁₀-алкил, С₂-С₁₀-алкенил, или С₂-С₁₀-алкинил, каждый из которых может быть замещен заместителем NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид, или сульфоновая кислота), -СО-, -CR^x=N-O- (причем Rx представляет собой Н, С₁-С₃-алкил или фенил), причем углеводородная цепь, включая боковые цепи, если присутствуют, может быть замещена заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид, или сульфоновая кислота, причем предпочтительно группа -MOD имеет по меньшей мере одну группу -СООН;

а также его соли, сольваты или соли сольватов.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1: Выравнивание TWEAKR цистеин-обогащенного домена (аминокислоты 34-68) различных видов. (Числа показывают положение аминокислоты в

конструкциях полной длины, включая сигнальные последовательности; SEQ ID NO: 169).

Фиг. 2: А - схематический рисунок структуры TWEAKR (SEQ ID NO: 169). Рисунок показывает внеклеточный домен (аминокислоты 28-80) (SEQ ID NO: 168), включая цистеин-обогащенный домен (36-67), трансмембранный домен - ТМ (81-101) и внутриклеточный домен (102-129). ТРР-2202 - полный эктодомен (28-80), сопряженный с Fc доменом hIgG1. ТРР-2203 - внеклеточный домен с N- и С-концевым усечением (34-68), сопряженный с Fc доменом hIgG1. Дисульфидные мостики Cys36-Cys49, Cys52-Cys67 и Cys55-Cys64 показаны черными полосами. N-конец ТРР-2203 содержит на две аминокислоты больше, и С-конец содержит на одну аминокислоту больше по сравнению с немодифицированным цистеин-обогащенным доменом, для обеспечения надлежащей складчатой структуры. ТРР-1984 - внеклеточный домен, имеющий С-концевое усечение (28-68), сопряженный с HIS6 меткой. Все три конструкции показывают сопоставимое связывание с антителами согласно настоящему изобретению и PDL-192 (ТРР-1104). Р4А8 (ТРР-1324) связывается только с внеклеточным доменом полной длины (ТРР-2202).

В - Аминокислотная последовательность внеклеточного домена: было опубликовано, что аминокислота 64 является существенной для связывания лиганда TWEAK; и аминокислота 47 является существенной для связывания антител согласно настоящему изобретению, как было определено в настоящей заявке.

Фиг. 3: взаимодействие эктодомена TWEAKR с антителами и контрольными антителами. Показаны результаты теста ELISA со слоем TWEAKR-Fc-сопряженного белка (ТРР-2202, 1 мкг/мл) и с 0,08 мкг/мл (белые столбики) и с 0,03 мкг/мл (черные столбики) биотинилированного IgG в качестве растворимого партнера связывания. Обнаружение осуществляли с помощью стрептавидин-HRP и субстрата Amplex-Red. На оси Y показана "Интенсивность сигнала ELISA-[Rfu]"; На оси Х показаны "тестируемые конструкции антител": a обозначает "ТРР-2090"; b обозначает "ТРР-2084"; c обозначает "PDL-192(TPP-1104)"; d

обозначает "Р4А8(ТРР-1324)"; e обозначает "P3G5(TPP-2195)"; f обозначает "136.1(ТРР-2194)"; h обозначает "ITEM1"; i обозначает "ITEM4"; j обозначает контроль мышиного изотипа; k обозначает контроль человеческого изотипа. Все протестированные антитела показывают насыщенное связывание при концентрации 80 нг/мл.

Фиг. 4; взаимодействие цистеин-обогащенного домена TWEAKR с антителами и контрольными антителами. Показаны результаты теста ELISA со слоем TWEAKR (34-68)-Fc-сопряженного белка (ТРР-2203, 1 мкг/мл) и с 0,08 мкг/мл (белые столбики) и с 0,03 мкг/мл (черные столбики) биотинилированного IgG в качестве растворимого партнера связывания. Обнаружение осуществляли с помощью стрептавидин-HRP и субстрата Amplex-Red. На оси Х показаны "протестированные конструкции антител": a обозначает "ТРР-2090"; b обозначает "ТРР-2084"; c обозначает "PDL-192(TPP-1104)"; d обозначает "Р4А8(ТРР-1324)"; e обозначает "P3G5(TPP-2195)"; f обозначает "136.1(ТРР-2194)"; h обозначает "ITEM1"; i обозначает "ITEM4"; j обозначает контроль мышиного изотипа; k обозначает контроль человеческого изотипа. Все протестированные антитела показывают насыщенное связывание при концентрации 80 нг/мл.

Фиг. 5: взаимодействие TWEAKR (28-68) с антителами и контрольными антителами. Показаны результаты теста ELISA со слоем TWEAKR (28-68)-HIS-(ТТР-1984, 1 мкг/мл) и с 0,08 мкг/мл (белые столбики) и с 0,03 мкг/мл (черные столбики) биотинилированного IgG в качестве растворимого партнера связывания. Обнаружение осуществляли с помощью стрептавидин-HRP и субстрата Amplex-Red. На оси Х показаны "протестированные конструкции антител": a обозначает "ТРР-2090"; b обозначает "ТРР-2084"; с обозначает "PDL-192(ТРР-1104)"; d обозначает "Р4А8(ТРР-1324)"; e обозначает "P3G5(TPP-2195)"; f обозначает "136.1(ТРР-2194)"; h обозначает "ITEM1"; i обозначает "ITEM4"; j обозначает контроль мышиного изотипа; k обозначает контроль человеческого изотипа. Все протестированные антитела показывают насыщенное связывание при концентрации 80 нг/мл.

Фиг. 6: А - Аланиновый скан цистеин-обогащенного домена. Мутеины TWEAKR(34-68)-Fc были проанализированы на PDL-192(TPP-1104) (X)- и ТРР-2090 (Y)-связывание. S37A-, R38A-, S40A-, W42A-, S43A-, D45A-, D47A-, K48A-, D51A-, S54A-, R56A-, R58A-, Р59А-, Н60А-, S61A-, D62A-, F63A- и L65A-мутеины были экспрессированы в HEK293 клетках (черные ромбики). PFL192(TPP-1104) и ТРР-2090 были нанесены (1 мкг/мл), и 8-ми кратно разбавленный супернатант ферментационного бульона HEK293 был добавлен для TWEAKR-белкового связывания. На оси Х показана "ELISA интенсивность PDL-192/ТТР-1104) взаимодействия [Rfu]", На оси Y показана "ELISA интенсивность ТРР-2090 взаимодействия [Rfu]". ТРР-2090 (Y) показывает ухудшение связывания для D74A-TWEAKR мутеина (закрытый квадрат), и PDL-192(TPP-1104) (X) показывает ухудшение связывания для R56A (пунктирный квадрат).

В - На оси Y показано "связывание в %, нормализованное к сигналу связывания дикого типа [%]", 1 обозначает "ТРР-2090"; 2 обозначает "PDL-192(TPP-1104); 3 обозначает "Р4А8(ТРР-1324)". (1 мкг/мл), вариант TWEAKR добавили при 250 нг/мл, обнаружение осуществляли посредством анти-HIS HRP. ТТР-2090 показывает менее чем 5% связывания.

Фиг. 7: ЯМР структура эктодомена TWEAKR, как опубликовано Pellegrini et al. (FEBS 280:1818-1829). Связывание TWEAK зависит от L46 (Pellegrini et al.), связывание ТТР-2090 зависит от D47, и PDL-192 связывается с R56. PDL-192 связывается противоположно сайту связывания лиганда TWEAK, ТРР-2090 связывается непосредственно с сайтом лиганда TWEAK.

Подробное описание изобретения

Настоящее изобретение обеспечивает конъюгаты связующего или его производного с одной или более молекулами активного соединения, причем молекула активного соединения представляет собой ингибитор кинезинового белка веретена (ингибитор KSP), который присоединен к связующему через линкер L.

Конъюгат согласно настоящему изобретению может быть представлен общей формулой

в которой СВЯЗУЮЩЕЕ представляет собой связующее, предпочтительно антитело, L представляет собой линкер, KSP представляет собой ингибитор KSP, m равно числу от 1 до 2, предпочтительно 1, и n равно числу от 1 до 50, предпочтительно от 1,2 до 20 и особенно предпочтительно от 2 до 8. Согласно настоящему изобретению m обозначает число ингибиторов KSP на линкер, и n обозначает среднее число конъюгатов ингибитор KSP-Линкер на СВЯЗУЮЩЕЕ. Сумма всех KSP, присутствующих в конъюгате, таким образом, представляет собой произведение m и n. KSP-L предпочтительно имеет Формулу (I) или (II). Предпочтительно связующим является связующий пептид или белок, такой как, например, антитело. Кроме того, линкер предпочтительно присоединяется к различным аминокислотам связующего пептида или белка или его производного. Особенно предпочтительным является связывание с различными цистеиновыми остатками связующего.

Связующие, подходящие согласно настоящему изобретению, ингибиторы KSP, подходящие согласно настоящему изобретению, а также линкеры, подходящие согласно настоящему изобретению, которые могут применяться в комбинации, описаны далее, без какого-либо ограничения. В частности, связующие, представленные в каждом случае в качестве предпочтительных или особенно предпочтительных, могут применяться в комбинации с ингибиторами KSP, представленными в каждом случае в качестве предпочтительных или особенно предпочтительных, необязательно в комбинации с линкерами, представленными в каждом случае в качестве предпочтительных или особенно предпочтительных.

Ингибитор KSP и их конъюгаты со связующим

Низкомолекулярные ингибиторы KSP известны, например, из WO 2006/044825; WO 2006/002236; WO 2005/051922; WO 2006/060737; WO 03/060064; WO 03/040979; и WO 03/049527.

Как правило, ингибитор KSP имеет следующую подструктуру I (sub):

в которой

#а обозначает связь с остальной частью молекулы;

R^1a представляет собой Н или -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, галоген, NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

где Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой H, NH₂, -(CH₂CH₂O)_0-3-(СН₂)_0-3Z' (например, -(CH₂)_0-3Z'), или -CH(CH₂W)Z', и Y³ представляет собой Н или -(СН₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ СООН, -NH-CO-CH₂-CH₂-CH(NH₂)COOH или -(CO-NH-CHY⁴)_1-3СООН; причем W представляет собой Н или ОН,

R^2a и R^4a независимо друг от друга представляют собой Н, -CO-CHY⁴-NHY⁵ или -(СН₂)_0-3Z, или R^2a и R^4a вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-CH₂-, причем R¹⁰ представляет собой Н, NH₂, СООН, SO₃H, SH, или ОН;

причем Z представляет собой -Н, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y², или -СО-OY³,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH², или -(СН₂)_0-3Z', и Y³ представляет собой Н или -(СН₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН,

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил, и Y⁵ представляет собой Н или -CO-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶представляет собой линейный или разветвленный C_1-6 алкил.

Особенно часто встречается следующая структура II(sub)

в которой #а, R^1a, R^2a, R^4a имеют такие же значения, как указано для I(sub), и R^12a и R^13a представляют собой Н, или R^12a и R^13a вместе представляют собой (при образовании пиперидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-СН₂-, причем R¹⁰ представляет собой Н, NH₂, СООН, SO₃H, SH, или ОН;

причем Z представляет собой -Н, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y², или -СО-OY³,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, или -(CH₂CH₂O)_0-3-(СН₂)_0-3Z' (например, -(СН₂)_0-3Z'), и Y³ представляет собой Н или -(СН₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂, СООН или -(CO-NH-CHY⁴)_1-3COOH; причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил.

В частности, ряд ингибиторов KSP имеет подструктуру II(sub), причем R^1a, R^2a, R^4a, R^12a и R^13a представляют собой Н.

Согласно настоящему изобретению могут применяться ингибиторы KSP подструктуры I(sub) или подструктуры II(sub). Ингибитор KSP, которые применяются согласно настоящему изобретению, также включают, например, Испинесиб (цитокинетики/GSK), MK-0731 (Merck), AZD4877 (AstraZeneca), ARRY-520 (Array BioPharma) и ARQ 621 (ArQule).

Ингибиторы KSP, которые являются особенно предпочтительными согласно настоящему изобретению, имеют следующую основную структуру:

Формула (I):

в которой

R^1a представляет собой Н, -MOD или -(СН₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, -NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

где Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, -(CH₂CH₂O)_0-3-(СН₂)_0-3Z'(например, -(СН₂)_0-3Z'), или -CH(CH₂W)Z', и Y³представляет собой Н или -(СН₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂, СООН, -NH-CO-CH₂-CH₂-CH(NH₂)COOH или -(CO-NH-CHY⁴)_1-3COOH; причем W представляет собой Н или ОН,

R^2a и R^4a независимо друг от друга представляют собой Н, -CO-CHY⁴-NHY⁵ или -(СН₂)_0-3Z, или R^2a и R^4a вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-CH₂-, причем R¹⁰ представляет собой Н, SO₃H, NH₂, СООН, SH, или ОН;

причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

причем Y₁ и Y₂ независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, или -(СН₂)_0-3Z', и Y³ представляет собой Н или -(СН₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН;

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил, и Y⁵ представляет собой Н или -CO-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶представляет собой линейный или разветвленный C_1-6 алкил.

R^3a представляет собой -MOD или необязательно замещенную алкил-, циклоалкил-, арил-, гетероарил- гетероалкил- или гетероциклоалкил-группу, предпочтительно C_1-10-алкил-, С_6-10-арил- или С_6-10-аралкил-, C_5-10-гетероалкил-, С_1-10-алкил-O-С_6-10-арил- или С_5-10-гетероциклоалкил-группу, которая может быть замещена 1-3 -ОН группами, 1-3 атомами галогена, 1-3 галогенированными алкильными группами (причем каждая может содержать 1-3 атома галогена), 1-3 O-алкильными группами, 1-3 -SH группами, 1-3 -S-алкильными группами, 1-3 -O-СО-алкильными группами, 1-3 -O-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -S(O)_n-алкильными группами, 1-3 -SO₂-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-алкильными группами, 1-3 -N(алкил)₂ группами, 1-3 -NH₂ группами или 1-3 -(СН₂)_0-3Z группами, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, -NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³, где Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, или -(СН₂)_0-3Z', и Y³ представляет собой Н, -(CH₂)_0-3-CH(NHCOCH₃)Z', -(CH₂)_0-3-CH(NH₂)Z', или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН,

(причем "алкил" предпочтительно представляет собой C_1-10-алкил);

R^8a представляет собой C_1-10-алкил;

HZ представляет собой моно- или бициклический гетероцикл, который может быть замещен одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, C_1-10-алкильных групп, С_6-10-арильных групп или С_6-10-аралкипъных групп, которые необязательно могут быть замещены галогеном;

причем -MOD представляет собой -(NR¹⁰)_n-(G1)_o-G2-H, причем

R¹⁰ представляет собой Н или С₁-С₃-алкил;

G1 представляет собой -NHCO-, -CONH- или (причем когда G1 представляет собой -NHCO- или , R¹⁰ не представляет собой NH₂);

n равно 0 или 1;

o равно 0 или 1; и

G2 представляет собой неразветвленную и/или разветвленную углеводородную группу, которая имеет 1-10 атомов углерода и которая может прерываться один или более раз одной или более группами -O-, -S-, -SO-, SO₂, -NR^y, -NR^yCO-, CONR^y, -NR^yNR^y, -SO2NR^yNR^y-, -CONR^yNR^y-, (причем R^y представляет собой Н, фенил, C₁-C₁₀-алкил, C₂-C₁₀-алкенил, или С₂-С₁₀-алкинил, каждый из которых может быть замещен заместителем NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид, или сульфоновая кислота), -СО-, -CR^x=N-O- (причем Rx представляет собой Н, С₁-С₃-алкил или фенил), причем углеводородная цепь, включая боковые цепи, если присутствуют, может быть замещена заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид, или сульфоновая кислота, причем группа -MOD предпочтительно имеет по меньшей мере одну группу -СООН;

а также их соли, сольваты или соли сольватов

Согласно настоящему изобретению ингибитор кинезинового белка веретена может быть присоединен к линкеру путем замещения атома водорода при R^1a, R^2a, R^3a, R^4a, R^8a или R¹⁰ или необязательно посредством одного из заместителей HZ, в частности через R^1a, R^2a, R^3a, R^4a или R¹⁰.

Заместители формулы (I) предпочтительно имеют следующие значения, причем эти предпочтительные значения предпочтительно объединяются друг с другом:

R^1a предпочтительно представляет собой Н или -(СН₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y², или -СО-OY³,

где Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, -(CH₂CH₂O)_0-3-(СН₂)_0-3Z' (например, -(CH₂)_0-3Z'), или -CH(CH₂W)Z', и Y³ представляет собой Н или -(СН₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂, СООН, -NH-CO-CH₂-CH₂-CH(NH₂)COOH или -(СО-NH-CHY⁴)_1-3СООН; причем W представляет собой Н или ОН,

R^2a и R^4a предпочтительно независимо друг от друга представляют собой Н, -COCHY⁴-NHY⁵ или -(СН₂)_0-3Z, или R^2a и R^4a вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-CH₂-, причем R¹⁰ представляет собой Н, SO₃H, NH₂, СООН, SH, или ОН;

причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, или -(СН₂)_0-3Z', и Y³ представляет собой Н или -(СН₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН; причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6алкил или необязательно

замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил, и Y⁵ представляет собой Н или -СО-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶ представляет собой линейный или разветвленный С_1-6 алкил.

R^3a представляет собой предпочтительно необязательно замещенную алкил-, арил-, гетероарил- гетероалкил-, гетероциклоалкил-группу, предпочтительно -L-#1 или С_1-10-алкил-, С_6-10-арил- или С_6-10-аралкил-, C_5-10-гетероалкил-, C_1-10-алкил-О-С_6-10-арил- или С_5-10-гетероциклоалкил-группу, которая может быть замещена 1-3 -ОН группами, 1-3 атомами галогена, 1-3 галогенированными алкильными группами (причем каждая может содержать 1-3 атома галогена), 1-3 O-алкильными группами, 1-3 -SH группами, 1-3 -S-алкильными группами, 1-3 -O-СО-алкильными группами, 1-3 -O-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -S(O)_n-алкильными группами, 1-3 -SO₂-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-алкильными группами, 1-3 -N(Алкил)₂ группами, 1-3 -NH₂ группами или 1-3 -(СН₂)_0-3Z группами, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, -NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³, где Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, или -(СН₂)_0-3Z', и Y³ представляет собой Н, -(CH₂)_0-3-CH(NHCOCH₃)Z', -(CH₂)_0-3-CH(NH₂)Z', или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН,

(причем „алкил" предпочтительно представляет собой С_1-10-алкил).

R^8a предпочтительно представляет собой C_1-10-алкил.

HZ предпочтительно представляет собой моно- или бициклический гетероцикл, который может быть замещен одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, C_1-10-алкильных групп, С_6-10-арильных групп или С_6-10аралкильных групп, которые необязательно могут быть замещены галогеном.

C_1-10-алкил в контексте настоящего изобретения представляет собой (т.е. в приведенной выше формуле, а также в последующих формулах) неразветвленный или разветвленный алкильный остаток, содержащий от 1 до 10 атомов углерода. Примерами, которые можно упомянуть в качестве предпочтительных, являются: метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, 1-метилпропил и трет.-бутил.

С_6-10-арил- в контексте настоящего изобретения представляет собой моно- или бициклический ароматический гомоцикл, например, фенил и нафтил.

С_6-10-аралкил-группа в контексте настоящего изобретения представляет собой моноциклический ароматический гомоцикл, например, фенил, к которому присоединена С1-С4-алкильная группа. Примерной С_6-10-аралкил-группой является бензил.

С_5-10-гетероарил в контексте настоящего изобретения представляет собой моно- или бициклический, ароматический гетероцикл, имеющий в общем от 6 до 10 кольцевых атомов, причем кольцо или кольца содержит/содержат один или два кольцевых гетероатома из группы N, О, S, SO и/или SO₂, и который присоединяется через кольцевой атом углерода или необязательно через кольцевой атом азота. Примерами, которые могут быть упомянуты, являются пиридил, фуранил, пиримидил, имидазолил, тиенил, тиофенил, изоксазолил, изотиазолил, 1,2,3-оксадиазолил, фуразанил, 1,2,3-триазоил, 1,2,4-триазоил, пиридазил, пирролил, триазинил, индолил, хинолинил, хиназолинил, 1,3-бензодиоксол, изоиндолил, индазолил, 1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидил, бензотриазолил, изохинолинил, синолинил, фталазинил, птерединил, нафтинидинил, бензимидазолинил, бензотиазолинил, бензоксазолинил, 3,4-метилендиоксифенил и бензо[6]фуранил.

Моно- или бициклический гетероцикл в контексте настоящего изобретения представляет собой моно- или бициклический гетероцикл, имеющий в общем от 5 до 10 кольцевых атомов углерода, причем кольцо или кольца содержит/содержат от одного до трех кольцевых гетероатомов из группы, состоящей из N, О, S, SO

и/или SO_2, и который присоединяется через кольцевой атом углерода или необязательно кольцевой атом азота. Примерами, которые можно упомянуть, являются пиперидил, пирролинил, морфолинил, 3,4-метилендиоксифенил и тетрагидрофуранил.

Атом галогена в контексте настоящего изобретения представляет собой F, Cl, Br или I.

Посредством замещения атома водорода при R^1a, R^2a, R^4a или R¹⁰ в подструктуре I(sub) или подструктуре II(sub), или R^1a, R^2a, R^3a, R^4a, R^8a или R¹⁰ при HZ в Формуле (I), соединение Формулы (I) может быть присоединено к линкеру способом, известным специалисту в данной области техники. Особенно предпочтительно замещение атома водорода происходит при R^1a, R^2a, R^3a, R^4a, или при пирролидиновом кольце, образованном R^2a и R^4a. Эта конъюгация может происходить химически различными путями, как показано примерным образом на Схемах 7-31 в примерах. В частности, необязательно возможно модифицировать низкомолекулярный ингибитор KSP для конъюгации с линкером, например, путем введения защитных групп или уходящих групп для облегчения замещения (так что в реакции указанная уходящая группа, а не атом водорода, замещается на линкер). Молекулы ингибитор KSP-линкер, полученные таким образом (причем линкер имеет реакционноспособную группу для связывания со связующим), могут затем реагировать со связующим, с получением конъюгата связующего согласно настоящему изобретению. В экспериментальной части эта методика проиллюстрирована примерным образом посредством большого числа примеров.

R^1a предпочтительно представляет собой Н, -СООН, -CONHNH₂, -(CH₂)_1-3NH₂, -CONZ''(CH₂)_1-3NH₂ и -CONZ''CH₂COOH, причем Z'' представляет собой Н или NH₂.

R^2a и R^4a предпочтительно представляют собой Н, или R^2a и R^4a вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-CH₂-, причем R¹⁰ представляет собой Н.

R^3a предпочтительно представляет собой С_1-10-алкил-, который может быть замещен -ОН, O-алкилом, SH, S-алкилом, O-СО-алкилом, O-CO-NH-алкилом, NH-CO-алкилом, NH-CO-NH-алкилом, S(O)_n-алкилом, SO₂-NH-алкилом, NH-алкилом, N(алкилом)₂, или NH2 (причем алкил предпочтительно представляет собой C_1-3 алкил).

R^8a предпочтительно представляет собой разветвленную C_1-5-алкильную группу, предпочтительно метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, 1-метилпропил и трет.-бутил.

HZ предпочтительно представляет собой моно- или бициклический гетероцикл, который может быть замещен одним или более заместителями, выбранными из группы, состоящей из галогена, C_1-10-алкильных групп, С_6-10-арильных групп или С_6-10-аралкильных групп, которые необязательно могут быть замещены галогеном.

Особенно предпочтительно HZ представляет собой замещенный пиррол, пиразол, имидазол, хиназолин или дигидрохиназолин, которые замещены в орто-положении (в отношении заместителей с R1a и т.д.) необязательно замещенной бензильной группой. Кроме того, замещенный пиррол, пиразол, Имидазол или хиназолин могут предпочтительно быть замещены заместителем оксо (в случае дигидрохиназолина) или фенильной группой, замещенной 1 или 2 атомами галогена. Особенно предпочтительно HZ представляет собой замещенный пиррол.

Ингибитором KSP, который предпочтительно применяется, является Испинесиб. Другим предпочтительным ингибитором KSP является Arry-520.

Другие особенно предпочтительные соединения имеют следующую Формулу (IIa) или (II):

Формула (IIa):

в которой

X₁ представляет собой N, Х₂ представляет собой N, и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой N, X₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N; или

X₁ представляет собой СН или CF, X₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N; или

X₁ представляет собой NH, Х₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой СН или CF, X₂ представляет собой N, и Х₃ представляет собой С;

(причем предпочтительно X₁ представляет собой СН, X₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N);

R² представляет собой -L-#1, Н, -MOD, -CO-CHY⁴-NHY⁵ или -(СН₂)_0-3Z,

причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил, и Y⁵ Н или -CO-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶ представляет собой линейный или разветвленный C_1-6 алкил;

R⁴ представляет собой -L-#1, Н, -СО-CHY⁴-NHY⁵ или -(CH₂)_0-3Z,

причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил, и Y⁵ представляет собой Н или -CO-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶ представляет собой линейный или разветвленный C_1-6 алкил;

А представляет собой СО, SO, SO₂, SO₂NH или CNNH;

R³ представляет собой -L-#1, -MOD или необязательно замещенную алкильную, циклоалкильную, арильную, гетероарильную, гетероалкильную, гетероциклоалкильную группу, предпочтительно C_1-10-алкил-, С_6-10-арил- или С_6-10-аралкил-, С_5-10-гетероалкил-, C_1-10-алкил-О-С_6-10-арил- или С_5-10-гетероциклоалкил-группу, которая может быть замещена 1-3 -ОН группами, 1-3 атомами галогена, 1-3 галогенированными алкильными группами (причем каждая может содержать 1-3 атома галогена), 1-3 O-алкильными группами, 1-3 -SH группами, 1-3 -S-алкильными группами, 1-3 -O-СО-алкильными группами, 1-3 -O-CO-NH-Алкильными группами, 1-3 -NH-CO-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -S(О)_n-алкильными группами, 1-3 -SO₂-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-алкильными группами, 1-3 -N(алкил)₂ группами, 1-3 -NH((CH₂CH₂O)_1-20Н)-группами, 1-3 -NH₂ группами или 1-3 -(СН₂)_0-3Z группами, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³,

-NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³, где Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, или -(СН₂)_0-3Z', и Y³ представляет собой Н, -(CH₂)_0-3-CH(NHCOCH₃)Z', -(CH₂)_0-3-CH(NH₂)Z', или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН, (причем „алкил" предпочтительно представляет собой C_1-10-алкил);

R⁵ представляет собой -L-#1, Н, -MOD, NH₂, NO₂, галоген (в частности F, Cl, Br), -CN, CF₃, -OCF₃, -CH₂F, -CH₂F, SH или -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, -OY³, -SY³, галоген, NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

R⁸ представляет собой (необязательно фторированный) C_1-10-алкил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкенил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкинил, (необязательно фторированный) С_4-10-циклоалкил или -(CH₂)_0-2-(HZ²), причем HZ² представляет собой 4-7-членный гетероцикл, содержащий до двух гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из N, О и S (предпочтительно оксетан), причем каждая из этих групп может быть замещена -ОН, CO₂H или NH₂ или -L-#1;

причем один или ни одного из заместителей R¹, R², R³, R⁴ R⁵, R⁸ и R¹⁰представляют собой -L-#1 (или, в случае R⁸, содержит),

L представляет собой линкер, и #1 представляет собой связь со связующим или его производным,

R⁹ представляет собой Н, F, СН₃, CF₃, CH₂F или CHF₂;

причем -MOD представляет собой -(NR¹⁰)_n-(G1)_o-G2-H, причем

R¹⁰ представляет собой Н или C₁-C₃-алкил;

G1 представляет собой -NHCO-, -CONH- или (причем когда G1 представляет собой -NHCO- или , R¹⁰ не представляет собой NH₂);

n равно 0 или 1;

o равно 0 или 1; и

G2 представляет собой неразветвленную и/или разветвленную углеводородную группу, которая имеет 1-10 атомов углерода и которая может прерываться один или более раз одной или более группами -O-, -S-, -SO-, SO₂, -NR^y-, -NR^yCO-, CONR^y, -NR^yNR^y-, -SO2NR^YNR^Y-, -CONR^yNR^y-, (причем R^y представляет собой Н, фенил, С₁-С₁₀-алкил, C₂-C₁₀-алкенил, или С₂-С₁₀-алкинил, каждый из которых может быть замещен заместителем NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид, или сульфоновая кислота), -СО-, -CR^x=N-O- (причем Rx представляет собой Н, С₁-С₃-алкил или фенил), причем углеводородная цепь, включая боковые цепи, если присутствуют, может быть замещена заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид, или сульфоновая кислота, причем группа -MOD предпочтительно имеет по меньшей мере одну группу -СООН;

а также их соли, сольваты или соли сольватов.

Формула (II):

в которой

X₁ представляет собой N, Х₂ представляет собой N, и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой N, Х₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N; или

X₁ представляет собой СН или CF, X₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N; или

X₁ представляет собой NH, Х₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой СН, Х₂ представляет собой N, и Х₃ представляет собой С;

R¹ представляет собой Н, -L-#1, или -(СН₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, -NHY³, -OY³, -SY³, галоген, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6 Алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил.

R² и R⁴ независимо друг от друга представляют собой Н, -L-#1, -CO-CHY⁴-NHY⁵ или -(СН₂)_0-3Z, или R² и R⁴ вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-CH₂-, причем R¹⁰ представляет собой Н, -L-#1, NH₂, SO₃H, СООН, SH, или ОН;

причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил, причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6 алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂

арил или бензил, и Y⁵ представляет собой Н или -CO-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶ представляет собой линейный или разветвленный C_1-6 алкил;

А представляет собой СО, SO, SO₂, SO₂NH или CNNH;

R³ представляет собой необязательно замещенную алкил-, арил-, гетероарил- гетероалкил-, гетероциклоалкил-группу, предпочтительно -L-#1 или C_1-10-алкил-, С_6-10-арил- или С_6-10-аралкил-, С_5-10-гетероалкил-, C_1-10-алкил-О-С_6-10-арил- или С_5-10-гетероциклоалкил-группу, которая может быть замещена 1-3 -ОН группами, 1-3 атомами галогена, 1-3 галогенированными алкильными группами (причем каждая может содержать 1-3 атома галогена), 1-3 O-алкильными группами, 1-3 -SH группами, 1-3 -S-алкильными группами, 1-3 -O-СО-алкильными группами, 1-3 -O-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -S(O)_n-алкильными группами, 1-3 -SO₂-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-алкильными группами, 1-3 -N(Алкил)₂ группами, 1-3 -NH₂ группами или 1-3 -(СН₂)_0-3Z группами, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, -NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³, где Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, или -(СН₂)_0-3Z', и Y³ представляет собой Н, -(CH₂)_0-3-CH(NHCOCH₃)Z', -(CH₂)_0-3-CH(NH₂)Z', или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН,

(причем "алкил" предпочтительно представляет собой С_1-10-алкил);

R⁵ представляет собой Н, F, NH₂, NO₂, галоген, SH или -(СН₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

R⁶ и R⁷ независимо друг от друга представляют собой H, циано, (необязательно фторированный) C_1-10-алкил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкенил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкинил, гидрокси или галоген,

R⁸ представляет собой (необязательно фторированный) С_1-10-алкил, (необязательно фторированный) С_4-10-циклоалкил или необязательно замещенный оксетан; и

R⁹ представляет собой Н, F, СН₃, CF₃, CH₂F или CHF₂;

а также их соли, сольваты или соли сольватов.

Путем замещения атома водорода при R¹, R², R³, R⁴, R⁵ или R⁸ или при пирролидиновом кольце (R¹⁰), образованном R² и R⁴, образом, известным специалистам в данной области техники, соединение Формулы (IIa) или (II), в котором ни один из заместителей R¹, R², R³, R⁴ R⁵, R⁸ и R¹⁰ не представляет собой -L-#1, может быть присоединено к линкеру. Это обеспечивает конъюгаты Формулы (IIa) или (II), в которых один из заместителей R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁸ или R¹⁰ представляет собой -L-#1, L представляет собой линкер, и #1 представляет собой связь со связующим или его производным. Если ингибитор KSP согласно Формуле (IIa) или (II) объединяется со связующим, один из заместителей R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁸ или R¹⁰, таким образом, представляет собой -L-#1, причем L представляет собой линкер, и #1 представляет собой связь со связующим или его производным. То есть, в случае конъюгатов, один из заместителей R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁸ и R¹⁰ представляет собой -L-#1, причем -L-#1 присоединяется к связующему, например, антителу. Особенно предпочтительно один из заместителей R¹ и R³ представляет собой -L-#1. Связующее предпочтительно представляет собой человеческое, гуманизированное или химерное моноклональное антитело или его антиген-связывающий фрагмент, в частности анти-TWEAKR антитело или его антиген-связывающий фрагмент, или анти-EGFR антитело или его антиген-связывающий фрагмент. Особенно предпочтительным является анти-TWEAKR антитело, которое специфически связывается с

аминокислотой D в положении 47 (D47) TWEAKR (SEQ ID NO: 169), в частности анти-TWEAKR антитело ТРР-2090, или анти-EGFR антитело Цетуксимаб или Нимотузумаб.

Вместо -L-#1 группа -L-#3 также может присутствовать в соединении, причем L представляет собой линкер, и #3 представляет собой реакционноспособную группу для связывания со связующим или его производным. Соединения, содержащие -L-#3, представляют собой реакционноспособные соединения, которые реагируют со связующим или его производным. #3 предпочтительно представляет собой группу, которая реагирует с амино- или тиольной группой с образованием ковалентной связи, предпочтительно с цистеиновым остатком в белке. Цистеиновый остаток в белке может, конечно, присутствовать естественным образом в белке, может быть введен биохимическими способами или, предпочтительно, может быть получен путем предварительного восстановления дисульфидов связующего.

Особенно предпочтительными являются соединения Формулы (IIa) или (II), в которой заместители R¹, R², R³, R⁴, R⁵ и R¹⁰ представляют собой -L-#1, и в которой

X¹ представляет собой N, Х₂ представляет собой N, и Х₃ представляет собой С;

X₁ представляет собой СН или CF, Х₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N;

X₁ представляет собой NH, Х₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой СН, Х₂ представляет собой N, и Х₃ представляет собой С;

в частности те, в которых

Х₁ представляет собой N, X₂ представляет собой N, и Х₃ представляет собой С; или X₁ представляет собой СН, Х₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N. Особенно предпочтительными являются соединения, в которых X₁ представляет собой СН, X₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N.

А предпочтительно представляет собой СО (карбонил).

R¹ предпочтительно представляет собой -L-#1, Н, -СООН, -CONHNH₂, -(CH₂)_1-3NH₂, -CONZ''(CH₂)_1-3NH₂ и -CONZ''CH₂COOH, причем Z'' представляет собой Н или NH₂.

R² и R⁴ предпочтительно представляют собой Н, -L-#1, или R² и R⁴ вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH2-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-CH₂-, причем R¹⁰ представляет собой Н или -L-#1.

R³ предпочтительно представляет собой -L-#1 или C_1-10-алкил-, который необязательно может быть замещен -ОН, O-алкилом, SH, S-алкилом, O-СО-алкилом, O-CO-NH-алкилом, NH-CO-алкилом, NH-CO-NH-алкилом, S(O)_n-алкилом, SO₂-NH-алкилом, NH-алкилом, N(алкилом)₂, или NH₂ (причем алкил предпочтительно представляет собой C_1-3 алкил).

R⁵ предпочтительно представляет собой -L-#1, Н или F.

R⁶ и R⁷ независимо друг от друга представляют собой предпочтительно Н, (необязательно фторированный) C_1-3-алкил, (необязательно фторированный) C_2-4-алкенил, (необязательно фторированный) С_2-4-алкинил, гидрокси или галоген.

R⁸ предпочтительно представляет собой разветвленную C_1-5-алкильную группу, в частности группу формулы -С(СН₃)₂-(СН₂)_0-2-R_y, причем R_y представляет собой -Н, -ОН, CO₂H, NH₂ или -L-#1. Особенно предпочтительной является группа формулы -С(СН₃)₂-(СН₂)-R_y, причем R_y представляет собой -Н или -L-#1.

R⁹ предпочтительно представляет собой Н или F.

Особенно предпочтительными являются соединения формулы (IIa) или (II), в которых ни один или один из заместителей R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁸ и R¹⁰представляет собой -L-#1, и

в которых

X₁ представляет собой N, Х₂ представляет собой N, и Х₃ представляет собой С;

X₁ представляет собой СН или CF, X₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N;

X₁ представляет собой NH, X₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой СН, X₂ представляет собой N, и Х₃ представляет собой С;

А представляет собой СО (карбонил);

R¹ представляет собой Н, -СООН, -CONHNH₂, -(CH₂)_1-3NH₂, -CONZ''(CH₂)_1-3NH₂ и -CONZ''CH₂COOH, причем Z'' представляет собой Н или NH₂;

R² и R⁴ представляют собой Н, или R² и R⁴ вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-СН2-, причем R¹⁰ представляет собой Н или -L-#1,;

R³ представляет собой фенильную группу, которая может быть моно- или полизамещенной галогеном (в частности F) или необязательно фторированным С_1-3 алкилом, или представляет собой необязательно фторированную C_1-10-алкильную группу, которая может быть необязательно замещена -OY⁴, -SY⁴, -O-CO-Y⁴, -O-CO-NH-Y⁴, NH-CO-Y⁴, -NH-CO-NH-Y⁴, S(O)_n-Y⁴ (причем n равно 0, 1

или 2), -SO₂-NH-Y⁴, NH-Y⁴, или N(Y⁴)₂, причем Y⁴ представляет собой Н, Фенил (необязательно моно- или полизамещенный галогеном (в частности F) или необязательно фторированным С_1-3 алкилом), или алкил (причем алкильная группа может быть замещена -ОН, -СООН, и/или -NHCO-C_1-3-алкилом, и причем алкил предпочтительно представляет собой C_1-3 алкил);

причем особенно предпочтительно R³ может быть замещен -ОН, O-алкилом, SH, S-алкилом, O-СО-алкилом, O-CO-NH-алкилом, NH-CO-алкилом, NH-CO-NH-алкилом, S(O)_n-алкилом, SO₂-NH-алкилом, NH-алкилом, N(алкилом)₂, или NH₂ (причем алкил предпочтительно представляет собой C_1-3 алкил);

R⁵ представляет собой Н или F;

R⁶ и R⁷ независимо друг от друга представляют собой Н, (необязательно фторированный) C_1-3-алкил, (необязательно фторированный) С_2-4-алкенил, (необязательно фторированный) С_2-4-алкинил, гидрокси или галоген;

R⁸ представляет собой разветвленную C_1-5-алкильную группу; и

R⁹ представляет собой Н или F.

Кроме того, предпочтительно, когда (сами по себе или в комбинации)

- R¹ представляет собой -L-#1, СООН или Н,

- R² и R⁴ независимо друг от друга представляют собой -L-#1 или Н, или R²и R⁴ вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-CH₂-, причем R¹⁰ представляет собой Н или -L-#1,

- А представляет собой СО,

или 1-3 алкильными группами (которые необязательно могут быть галогенированы), или представляет собой -L-#1,

- R⁵ представляет собой -L-#1 или Н,

- R⁶ и R⁷ независимо друг от друга представляют собой Н, C_1-3-алкил или галоген, в частности R⁶ и R⁷ представляют собой F;

- R⁸ представляет собой C_1-4-алкил (предпочтительно трет.-бутил); и/или

- R⁹ представляет собой Н,

- причем один из заместителей R¹, R², R³, R⁴, R⁵ и R¹⁰ представляет собой -L-#1.

Кроме того, согласно настоящему изобретению, предпочтительно, когда

- R¹ представляет собой -L-#1, СООН или Н,

- А представляет собой СО,

- R³ представляет собой -(СН₂)ОН, -СН(СН₃)ОН, -CH₂SCH₂CH(COOH)NHCOCH₃, -СН(СН₃)ОСН₃, фенильную группу, которая может быть замещена 1-3 атомами галогена, 1-3 аминогруппами или 1-3 алкильными группами (которые могут быть необязательно галогенированы), или представляет собой -L-#1,

- R⁵ представляет собой -L-#1 или Н,

- R⁸ представляет собой C_1-4-алкил (предпочтительно трет.-бутил); и

- R⁹ представляет собой Н,

- причем заместители R¹, R², R³, R⁴, R⁵ и R¹⁰ представляют собой -L-#1.

Другие особенно предпочтительные соединения имеют следующую Формулу (IIIa) или (III):

Формулы (IIIa):

в которой

X₁ представляет собой N, X₂ представляет собой N, и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой N, X₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N; или

X₁ представляет собой СН или CF, Х₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N; или

X₁ представляет собой NH, Х₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой СН, X₂ представляет собой N, и Х₃ представляет собой С;

(причем предпочтительно X₁ представляет собой СН, X₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N);

R¹ представляет собой Н, -L-Связующее, -MOD или -(СН₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, -NHY³, -OY³, -SY³, галоген, -CO-NY¹Y², или -СО-OY³,

R² представляет собой Н, -L-Связующее, -MOD, -CO-CHY⁴-NHY⁵ или -(СН₂)_0-3Z, причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил, и Y⁵ представляет собой Н или -CO-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶ представляет собой линейный или разветвленный C_1-6 алкил,

причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, или -(СН₂)_0-3Z', и Y³ представляет собой Н или -(СН₂)_0-3Z', причем Z' Н, SO₃H, NH₂ или СООН;

R⁴ представляет собой Н, -L-Связующее, -CO-CHY⁴-NHY⁵ или -(СН₂)_0-3Z,

причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, или -(CH₂)_0-3Z', и Y³ представляет собой Н или -(СН₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН;

причем Y независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6 алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил, и Y⁵ представляет собой Н или -CO-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶представляет собой линейный или разветвленный C_1-6 алкил;

или R² и R⁴ вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-CH₂-, причем R¹⁰представляет собой -L-Связующее, Н, NH₂, SO₃H, СООН, SH, или ОН;

А представляет собой СО, SO, SO₂, SO₂NH или CNNH;

R³ представляет собой -L-Связующее, -MOD, или необязательно замещенную алкил-, циклоалкил-, арил-, гетероарил- гетероалкил-, гетероциклоалкил-группу, предпочтительно -L-#1 или C_1-10-алкил-, С_6-10-арил- или С_6-10-аралкил-, С_5-10-гетероалкил-, C_1-10-алкил-О-С_6-10-арил- или С_5-10-Гетероциклоалкил-группу, которая может быть замещена 1-3 -ОН группами, 1-3 атомами галогена, 1-3 галогенированными алкильными группами (причем каждая может содержать 1-3 атома галогена), 1-3 O-алкильными группами, 1-3 -SH группами, 1-3 -S-алкильными группами, 1-3 -O-СО-алкильными группами, 1-3 -O-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-NH-алкильными группами, 1-3 S(О)_n-алкильными группами, 1-3 -SO₂-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-алкильными группами, 1-3 -N(алкил)₂ группами, 1-3 -NH₂ группами или 1-3 -(СН₂)_0-3Z группами, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, -NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³, где Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, или -(СН₂)_0-3Z', и Y³ представляет собой Н, -(CH₂)_0-3-CH(NHCOCH₃)Z', -(CH₂)_0-3-CH(NH₂)Z', или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН,

(причем "алкил" предпочтительно представляет собой C_1-10-алкил);

R⁵ представляет собой -L-Связующее, Н, NH₂, NO₂, галоген (в частности F, Cl, Br), -CN, CF₃, -OCF₃, -CH₂F, -CH₂F, SH или -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, -OY³, -SY³, галоген, NHY³, -CO-NY¹Y², или -СО-OY³,

R⁶ и R⁷ независимо друг от друга представляют собой Н, циано, (необязательно фторированный) С_1-10-алкил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкенил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкинил, гидрокси, NO₂, NH₂, СООН или галоген (в частности F, Cl, Br),

R⁹ представляет собой Н, F, СН₃, CF₃, CH₂F или CHF₂;

причем -MOD представляет собой -(NR¹⁰)_n-(G1)_o-G2-H, причем

R¹⁰ представляет собой Н или C₁-С₃-алкил;

G1 представляет собой -NHCO-, -CONH- или (причем когда G1 -NHCO- или , R¹⁰ не представляет собой NH₂);

N равно 0 или 1;

O равно 0 или 1; и

G2 представляет собой неразветвленную и/или разветвленную углеводородную группу, которая имеет 1-10 атомов углерода и которая может прерываться один или более раз одной или более группами -O-, -S-, -SO-, SO₂, -NR^y-, -NR^yCO-, CONR^y-, -NR^yNR^y, -SO2NR^yNR^y-, -CONR^yNR^y-, (причем R^y представляет собой Н, фенил, C₁-C₁₀-Алкил, C₂-C₁₀-алкенил, или С₂-С₁₀-алкинил, каждый из которых может быть замещен заместителем NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид, или сульфоновая кислота), -СО-, -CR^x=N-O- (причем Rx представляет собой Н, С₁-С₃-алкил или фенил), причем углеводородная цепь, включая боковые цепи, если присутствуют, может быть замещена заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид, или сульфоновая кислота, причем группа -MOD предпочтительно содержит по меньшей мере одну группу -СООН;

а также их соли, сольваты или соли сольватов.

В случае конъюгатов связующего и ингибиторов KSP Формулы (IIIa), самое большее один из R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁸ и R¹⁰ (альтернативно одному из приведенных выше условий) может представлять собой -L-связующее, причем L представляет собой линкер, и СВЯЗУЮЩЕЕ представляет собой связующее или

его производное, причем связующее необязательно может быть присоединено к множеству молекул активного соединения.

Формулы (III):

в которой

X₁ представляет собой N, X₂ представляет собой N, и Х₃ представляет собой С, или X₁ представляет собой СН, X₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N, или X₁ представляет собой NH, X₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой С, или X₁ представляет собой СН, X₂ представляет собой N и Х₃ представляет собой С;

R1 представляет собой -L-СВЯЗУЮЩЕЕ, Н, или -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, -NHY³, -OY³, -SY³, галоген, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH2, -(CH₂CH₂O)_0-3-(СН₂)_0-3Z', или -CH(CH₂W)Z', и Y³ представляет собой Н или -(СН₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, NH₂, SO₃H, СООН, -NH-CO-CH₂-CH₂-CH(NH₂)COOH или -(CO-NH-CHY⁴)_1-3COOH; причем W представляет собой Н или ОН;

R² и R⁴ независимо друг от друга представляют собой -L-СВЯЗУЮЩЕЕ, Н, -СО-CHY⁴-NHY⁵ или -(СН₂)_0-3Z, или R² и R⁴ вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-CH₂-, причем R¹⁰представляет собой L-#1, Н, NH₂, SO₃H, COOH, SH, или ОН;

причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, или -(СН₂)_0-3Z', и Y³ представляет собой Н или -(СН₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или COOH;

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6 алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил, и Y⁵представляет собой Н или -CO-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶ представляет собой линейный или разветвленный C_1-6 алкил;

А представляет собой СО, SO, SO₂, SO₂NH или CNNH;

R³ представляет собой -L-СВЯЗУЮЩЕЕ или необязательно замещенную Алкил-, арил-, гетероарил- гетероалкил-, гетероциклоалкил-группу, предпочтительно -L-#1 или C_1-10-алкил-, С_6-10-арил- или С_6-10-аралкил-, C_5-10-гетероалкил-, С_1-10-алкил-O-С_6-10-арил- или С_5-10-гетероциклоалкил-группу, которая может быть замещена 1-3 -ОН группами, 1-3 атомами галогена, 1-3 галогенированными алкильными группами (причем каждая может содержать 1-3 атома галогена), 1-3 O-алкильными группами, 1-3 -SH группами, 1-3 -S-алкильными группами, 1-3 -O-СО-алкильными группами, 1-3 -O-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -S(O)_n-алкильными

группами, 1-3 -SO₂-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-алкильными группами, 1-3 -N(алкил)₂ группами, 1-3 -NH₂ группами или 1-3 -(СН₂)_0-3Z группами, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, -NHY³, -СО-NY¹Y², или -CO-OY³, где Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, или -(СН₂)_0-3Z', и Y³ представляет собой Н, -(CH₂)_0-3-CH(NHCOCH₃)Z', -(CH₂)_0-3-CH(NH₂)Z', или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН,

(причем "алкил" предпочтительно представляет собой С_1-10-алкил);

R⁵ представляет собой -L-СВЯЗУЮЩЕЕ, Н, F, NH₂, NO₂, галоген, SH или -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, -NHY³, -СО-NY¹Y², или -CO-OY³,

R⁶ и R⁷ независимо друг от друга представляют собой Н, циано, (необязательно фторированный) С_1-10-алкил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкенил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкинил, гидрокси или галоген,

R⁸ представляет собой (необязательно фторированный) C_1-10-алкил, (необязательно фторированный) С_4-10-циклоалкил или необязательно замещенный оксетан; и

R⁹ представляет собой Н, F, СН₃, CF₃, CH₂F или CHF₂;

а также их соли, сольваты или соли сольватов.

Кроме того, предпочтительными согласно настоящему изобретению являются следующие ингибиторы KSP и их конъюгаты со связующим:

Формулы (IIIb):

причем X₁, X₂, Х₃ имеют такие же значения, как указано для Формулы (IIIa) или (III) (где предпочтительно X₁ представляет собой СН, X₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N), R¹, R², R⁴, R⁵, R⁶, R⁷, R⁸ и R⁹ имеют такие же значения, как указано для Формулы (IIIa) или (III), А представляет собой СО, В представляет собой простую связь, -O-СН₂- или -СН₂-O-, и R²⁰ представляет собой NH₂, F, CF3, или СН₃, и n равно 0, 1 или 2.

Формулы (IIIc):

причем X₁, Х₂, Х₃ имеют такие же значения, как указано для Формулы (IIIa) или (III) (где предпочтительно X₁ представляет собой СН, Х₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N), A, R¹, R³, R⁶, R⁷, R⁸, и R⁹ имеют такие же значения, как указано для Формулы (IIIa) или (III), причем А предпочтительно представляет собой СО, и R³ представляет собой -CH₂OH, -СН₂ОСН₃, СН(СН3)ОН или СН(СН₃)ОСН₃.

Формулы (IIId):

причем X₁, X₂, Х₃ имеют такие же значения, как указано для Формулы (IIIa) или (III) (где предпочтительно X₁ представляет собой СН, Х₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N), A, R³, R⁶, R⁷, R⁸ и R⁹ имеют такие же значения, как указано для Формулы (IIIa) или (III), причем А предпочтительно представляет собой СО, и R³ представляет собой -CH₂-S_x-(CH₂)_0-4-CHY⁵-COOH, причем x равно 0 или 1, и Y⁵ представляет собой Н или NHY⁶, причем Y⁶ представляет собой H или -COCH₃.

Формула (IIIe):

в которой X₁ представляет собой СН, Х₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N, A, R³, R⁶, R⁷, R⁸ и R⁹ имеют такие же значения, как указано для Формулы (IIIa) или (III), и R¹ представляет собой -L-СВЯЗУЮЩЕЕ.

Кроме того, предпочтительно, когда в соединениях Формулы (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc), (IIId) и (IIIe) (сами по себе или в комбинации):

- Z представляет собой Cl или Br;

- R¹ представляет собой -(СН₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -СО-NY¹Y², причем Y² представляет собой -(CH₂CH₂O)_0-3-(CH₂)_0-3Z', и Y¹ представляет собой Н, NH2, или -(CH₂CH₂O)_0-3-(CH₂)_0-3Z';

- Y¹ представляет собой Н, Y² представляет собой -(CH₂CH₂O)₃-CH₂CH₂Z', и Z' представляет собой -СООН;

- Y¹ представляет собой Н, Y² представляет собой -CH₂CH₂Z', и Z' представляет собой -(CONHCHY⁴)₂COOH;

- Y¹ представляет собой Н, Y² представляет собой -CH₂CH₂Z', Z' представляет собой -(CONHCHY⁴)₂COOH, и один из радикалов Y⁴представляет собой изо-пропил, а другой представляет собой -(CH₂)₃-NHCONH₂;

- Y¹ представляет собой Н, Y² представляет собой -CH₂CH₂Z', Z' представляет собой -(CONHCHY⁴)₂COOH, и один из радикалов Y⁴ представляет собой -СН₃, а другой представляет собой -(CH₂)₃-NHCONH₂;

- Y⁴ представляет собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6 алкил;

- По меньшей мере один радикал из Y⁴ выбирается из изо-пропила или -СН₃.

- Y¹ представляет собой Н, Y² представляет собой -CH₂CH₂Z', Z' представляет собой -CONHCHY⁴COOH, и Y⁴ представляет собой необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил;

- Y⁴ представляет собой аминобензил;

- R² представляет собой -(СН₂)_0-3Z, и Z представляет собой -SY³;

- R⁴ представляет собой -CO-CHY⁴-NHY⁵, и Y⁵ представляет собой Н;

- R⁴ представляет собой -CO-CHY⁴-NHY⁵ и Y⁵-CO-CHY⁶-NH₂;

- Y⁴ представляет собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6 алкил.

Кроме того, предпочтительно, когда R¹, R² или R³ в Формуле (IIa) или (IIIa) представляют собой -MOD, в частности когда R⁴ представляет собой -L-#1 или -L-СВЯЗУЮЩЕЕ (в частности когда -L представляет собой расщепляемый линкер, который отщепляется непосредственно при -N-R⁴ или -N-L-#1 или -L-СВЯЗУЮЩЕЕ, так что R⁴ или L замещается на Н).

Особенно предпочтительно R³ представляет собой -MOD, и R¹ или R⁴представляют собой -L-#1 или -L-СВЯЗУЮЩЕЕ,

причем -MOD представляет собой -(NR¹⁰)_n-(G1)_o-G2-Н, причем

R¹⁰ представляет собой Н или С₁-С₃-алкил;

G1 представляет собой -NHCO-, -CONH- или (причем

когда G1 представляет собой -NHCO- или , R¹⁰ не представляет собой NH₂);

n равно 0 или 1;

o равно 0 или 1; и

G2 представляет собой неразветвленную и/или разветвленную углеводородную группу, которая имеет 1-10 атомов углерода и которая может прерываться один или более раз одной или более группами -O-, -S-, -SO-, SO₂, -NR^y-, -NR^yCO-, CONR^y-, -NR^yNR^y, -SO2NR^yNR^y-, -CONR^yNR^y-, (причем R^y представляет собой Н, фенил, С₁-С₁₀-алкил, C₂-C₁₀-алкенил, или С₂-С₁₀-алкинил, каждый из которых может быть замещен заместителем NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид, или сульфоновая кислота), -СО-, -CR^x=N-O- (причем Rx представляет собой Н, С₁-С₃-алкил или фенил), причем углеводородная цепь, включая боковые цепи, если присутствуют, может быть замещена заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид, или сульфоновая кислота, причем группа -MOD предпочтительно содержит по меньшей мере одну группу -СООН;

Особенно предпочтительно группа -MOD содержит (предпочтительно концевую) -СООН- группу, например, в бетаиновой группе. Предпочтительно группа -MOD имеет Формулу -CH₂-S_x-(CH₂)_0-4-CHY⁵-COOH, где x равно 0 или 1, и Y⁵представляет собой Н или NHY⁶, причем Y⁶ представляет собой Н или -СОСН₃.

Другие особенно предпочтительные соединения имеют следующую Формулу (IV):

в которой

X₁ представляет собой N, Х₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N;

R1 представляет собой -L-СВЯЗУЮЩЕЕ, Н, или -(СН₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, -NHY³, -OY³, -SY³, галоген, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, или -(CH₂CH₂O)_0-3-(СН₂)_0-3Z' или -CH(CH₂W)Z', и Y³ представляет собой Н или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, NH₂, SO₃H, СООН, -NH-CO-CH₂-CH₂-CH(NH₂)COOH или -(CO-NH-CHY⁴)_1-3COOH;

причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, С_1-6 алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил, и Y⁵представляет собой Н или -CO-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶ представляет собой линейный или разветвленный C_1-6 алкил;

А представляет собой СО, SO, SO₂, SO₂NH или CNNH;

R³ представляет собой -L-СВЯЗУЮЩЕЕ, необязательно замещенную алкил-, арил-, гетероарил- гетероалкил-, гетероциклоалкил-группу, или -CH₂-S_x-(CH₂)_0-4-CHY⁵-COOH, причем x равно 0 или 1, и Y⁵ представляет собой Н или NHY⁶, причем Y⁶ представляет собой Н или -СОСН₃, предпочтительно -L-СВЯЗУЮЩЕЕ или C_1-10-алкил-, С_6-10-арил- или С_6-10-аралкил-, С_5-10-гетероалкил-, C_1-10-алкил-О-С_6-10-арил- или С_5-10-гетероциклоалкил-группу, которая может быть замещена 1-3 -ОН группами, 1-3 атомами галогена, 1-3 галогенированными алкильными группами (причем каждая может содержать 1-3 атома галогена), 1-3 O-алкильными группами, 1-3 -SH группами, 1-3 -S-алкильными группами, 1-3 -O-СО-алкильными группами, 1-3 -O-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -S(O)_n-алкильными группами, 1-3 -SO₂-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-алкильными группами, 1-3 -N(алкил)₂ группами, 1-3 -NH₂ группами или 1-3 -(СН₂)_0-3Z группами, причем Z -Н, галоген, -OY³, -SY³, -NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³, где Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, или -(СН₂)_0-3Z', и Y³ представляет собой Н, -(CH₂)_0-3-CH(NHCOCH₃)Z', -(CH₂)_0-3-CH(NH₂)Z', или -(СН₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН,

(причем "алкил" предпочтительно представляет собой С_1-10-алкил);

R⁵ представляет собой -L-СВЯЗУЮЩЕЕ, Н, F, NH₂, NO₂, галоген, SH или -(СН₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, -NHY³, -СО-NY¹Y², или -CO-OY³,

R⁹ представляет собой Н, F, СН₃, CF₃, CH₂F или CHF₂;

а также их соли, сольваты или соли сольватов;

при условии, что R¹, R² и R⁴ одновременно не представляют собой Н.

Кроме того, предпочтительно, когда в Формуле (IIa), (II), (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc), (IIId), (IIIe), или (IV) (сами по себе или в комбинации):

- Z представляет собой Cl или Br;

- R¹ представляет собой -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -СО-NY¹Y², причем Y² представляет собой -(CH₂CH₂O)_0-3-(СН₂)_0-3Z', и Y¹ представляет собой Н, NH2, или -(CH₂CH₂O)_0-3-(СН₂)_0-3Z';

- Y¹ представляет собой Н, Y² представляет собой -(CH₂CH₂O)₃-CH₂CH₂Z', и Z' представляет собой -СООН;

- Y¹ представляет собой Н, Y² представляет собой -CH₂CH₂Z', и Z' представляет собой -(CONHCHY⁴)₂COOH;

- Y¹ представляет собой Н, Y² представляет собой -CH₂CH₂Z', Z' представляет собой -(CONHCHY⁴)₂COOH, и один из Y⁴ представляет собой изо-пропил, а другой представляет собой -(CH₂)₃-NHCONH₂;

- Y¹ представляет собой Н, Y² представляет собой -CH₂CH₂Z', Z' представляет собой -(CONHCHY⁴)₂COOH, и один из Y⁴ представляет собой -СН₃, а другой представляет собой -(CH₂)₃-NHCONH₂;

- Y⁴ представляет собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6 алкил;

- По меньшей мере один из Y⁴ выбирается из изо-пропила или -СН₃.

- Y⁴ представляет собой аминобензил;

- R² представляет собой -(СН₂)_0-3Z, и Z представляет собой -SY³;

- R⁴ представляет собой -CO-CHY⁴-NHY⁵, и Y⁵ представляет собой Н;

- R⁴ представляет собой -CO-CHY⁴-NHY⁵, и Y⁵ представляет собой -СО-CHY⁶-NH₂;

- Y⁴ представляет собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6 алкил.

Кроме того, предпочтительными являются соединения Формул (IIa), (II), (III), (IIIa) или (IV),

В которых

X₁ представляет собой N, X₂ представляет собой N, и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой N, X₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N; или

X₁ представляет собой СН или CF, X₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N; или

X₁ представляет собой NH, Х₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой СН или CF, X₂ представляет собой N, и Х₃ представляет собой С;

(причем предпочтительно X₁ представляет собой СН, X₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N);

R¹ представляет собой Н, -L-#1 или -L-СВЯЗУЮЩЕЕ, -MOD или -(СН₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, -NHY³, -OY³, -SY³, галоген, -СО-NY¹Y², или -CO-OY³,

R² представляет собой Н, -CO-CHY⁴-NHY⁵ или -(CH₂)_0-3Z,

причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6 алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил, и Y⁵ представляет собой Н или -CO-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶ представляет собой линейный или разветвленный C_1-6 алкил;

R⁴ представляет собой Н;

А представляет собой СО, SO, SO₂, SO₂NH или CNNH;

R³ представляет собой -L-#1 или -L-СВЯЗУЮЩЕЕ, -MOD или необязательно замещенную алкильную, циклоалкильную, арильную, гетероарильную, гетероалкильную, гетероциклоалкильную группу, предпочтительно C_1-10-алкил-, С_6-10-арил- или С_6-10-аралкил-, C_5-10-гетероалкил-, С_1-10-алкил-O-С_6-10-арил- или С_5-10-гетероциклоалкил-группу, которая может быть замещена 1-3 -ОН группами, 1-3 атомами галогена, 1-3 галогенированными алкильными группами (причем каждая может содержать 1-3 атома галогена), 1-3 O-алкильными группами, 1-3 -SH группами, 1-3 -S-алкильными группами, 1-3 -O-СО-алкильными группами, 1-3 -O-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -S(O)_n-алкильными группами, 1-3 -SO₂-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-алкильными группами, 1-3 -N(Алкил)₂ группами, 1-3 -NH((CH₂CH₂O)_1-20Н)-группами, 1-3 -NH₂ группами или 1-3 -(СН₂)_0-3Z группами, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, -NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³, где Y¹ и Y²независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, или -(СН₂)_0-3Z', и Y³

представляет собой Н, -(CH₂)_0-3-CH(NHCOCH₃)Z', -(CH₂)_0-3-CH(NH₂)Z', или -(СН₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН, (причем "алкил" предпочтительно представляет собой C_1-10-алкил);

R⁵ представляет собой Н, -MOD, NH₂, NO₂, галоген (в частности F, Cl, Br), -CN, CF₃, -OCF₃, -CH₂F, -CH₂F, SH или -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, -OY³, -SY³, галоген, NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

R⁸ представляет собой (необязательно фторированный) С_1-10-алкил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкенил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкинил, или (необязательно фторированный) C_4-10-циклоалкил;

причем один или ни один из заместителей R¹ и R³ не представляет собой -L-#1-L-#1 или -L-СВЯЗУЮЩЕЕ,

L представляет собой линкер, и #1 представляет собой связь со связующим или его производным, и СВЯЗУЮЩЕЕ представляет собой связующее,

R⁹ представляет собой Н, F, СН₃, CF₃, CH₂F или CHF₂;

причем -MOD представляет собой -(NR¹⁰)_n-(G1)_o-G2-H, причем

R¹⁰ представляет собой Н или C₁-C₃-алкил;

G1 представляет собой -NHCO-, -CONH- или (причем

когда G1 представляет собой -NHCO- или , R¹⁰ не представляет собой NH₂);

n равно 0 или 1;

o равно 0 или 1; и

G2 представляет собой неразветвленную и/или разветвленную углеводородную группу, которая имеет 1-10 атомов углерода и которая может прерываться один или более раз одной или более группами -O-, -S-, -SO-, SO₂, -NR^y, -NR^yCO-, CONR^y-, -NR^yNR^y, -SO2NR^yNR^y-, -CONR^yNR^y-, (причем R^y представляет собой Н, фенил, C₁-C₁₀-алкил, С₂-С₁₀-алкенил, или C₂-C₁₀-алкинил, каждый из которых может быть замещен заместителем NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид, или сульфоновая кислота), -СО-, -CR^x=N-O- (причем Rx представляет собой Н, С₁-С₃-алкил или фенил), причем углеводородная цепь, включая боковые цепи, если присутствуют, может быть замещена заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид, или сульфоновая кислота, причем группа -MOD предпочтительно имеет по меньшей мере одну группу -СООН;

а также их соли, сольваты или соли сольватов.

Кроме того, предпочтительными являются соединения Формулы (IIa), (II), (III), (IIIa) или (IV), в которых

X₁ представляет собой N, Х₂ представляет собой N, и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой N, X₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N;или

X₁ представляет собой СН или CF, X₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N; или

X₁ представляет собой NH, Х₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой СН или CF, X₂ представляет собой N, и Х₃ представляет собой С;

(причем предпочтительно X₁ представляет собой СН, X₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой N);

R² представляет собой Н, -CO-CHY⁴-NHY⁵ или -(СН₂)_0-3Z,

причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6 алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил, и Y⁵ представляет собой Н или -СО-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶ представляет собой линейный или разветвленный C_1-6 алкил;

R⁴ представляет собой Н,

А представляет собой СО, SO, SO₂, SO₂NH или CNNH;

R³ представляет собой -L-#1 или -L-СВЯЗУЮЩЕЕ, -MOD или необязательно замещенную алкильную, циклоалкильную, арильную, гетероарильную, гетероалкильную, гетероциклоалкильную группу, предпочтительно С_1-10-алкил-, С_6-10-арил- или С_6-10-аралкил-, C_5-10-гетероалкил-, C_1-10-алкил-О-С_6-10-арил- или С_5-10-гетероциклоалкил-группу, которая может быть замещена 1-3 -ОН группами, 1-3 атомами галогена, 1-3 галогенированными алкильными группами (причем каждая может содержать 1-3 атома галогена), 1-3 O-алкильными группами, 1-3 -SH группами, 1-3 -S-алкильными группами, 1-3 -O-СО-алкильными группами, 1-3 -O-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -S(O)_n-алкильными группами, 1-3 -SO₂-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-алкильными группами, 1-3 -N(Алкил)₂ группами, 1-3 -NH((CH₂CH₂O)_1-20H)-группами, 1-3 -NH₂ группами или 1-3 -(СН₂)_0-3Z группами, причем Z

представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, -NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³, где Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, или -(СН₂)_0-3Z', и Y³ представляет собой Н, -(CH₂)_0-3-CH(NHCOCH₃)Z', -(CH₂)_0-3-CH(NH₂)Z', или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН, (причем "алкил" предпочтительно представляет собой C_1-10-алкил);

R⁵ представляет собой H, -MOD, NH₂, NO₂, галоген (в частности F, Cl, Br), -CN, CF₃, -OCF₃, -CH₂F, -CH₂F, SH или -(СН₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, -OY³, -SY³, галоген, NHY³, -CO-NY¹Y², или -CO-OY³,

R⁶ и R⁷ независимо друг от друга представляют собой Н или галоген (в частности F, Cl, Br),

R⁸ представляет собой (необязательно фторированный) С_1-10-алкил;

причем один или ни одного из заместителей R¹ и R³ представляет собой -L-#1 или -L-СВЯЗУЮЩЕЕ,

R⁹ представляет собой Н, F, СН₃, CF₃, CH₂F или CHF₂;

причем -MOD представляет собой -CH₂-S_x-(CH₂)_0-4-CHY⁵-COOH, причем x равно 0 или 1, и Y⁵ представляет собой Н или NHY⁶, причем Y⁶ представляет собой Н или -СОСН₃,

а также их соли, сольваты или соли сольватов.

Кроме того, предпочтительными являются следующие соединения, которые необязательно могут присутствовать вместе с кислотой, такой как, например, трифторуксусная кислота. Эти соединения могут быть присоединены через положения, соответствующие положениям R¹, R², R³ R⁴, R⁵, R⁸ и R¹⁰, в частности R¹ и R³, посредством линкера к связующему (причем атом водорода замещается на линкер):

N-(3-Аминопропил)-N-{(1R)-1-[4-бензил-1-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиразол-3-ил]-2,2-диметилпропил}-2-гидроксиацетамид;

N-(3-Аминопропил)-N-{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}-2-гидроксиацетамид;

(2S)-2-амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]-N-метилбутанамид(1:1);

N-(3-Аминопропил)-N-{(1S)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}ацетамид.

(15S,19R)-15-Амино-19-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-имидазол-2-ил]-18-гликолоил-20,20-диметил-14-оксо-4,7,10-триокса-13,18-диазагенэйкозан-1-овая кислота;

N-{(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-имидазол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}-бета-аланил-L-валил-N⁵-карбамоил-L-орнитин;

N-{(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-имидазол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}-бета-аланил-L-аланил-N⁵-карбамоил-L-орнитин;

N-{(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-имидазол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}-бета-аланил-4-амино-L-фенилаланин;

N-{(1R)-1-[1-(3-аминобензил)-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-имидазол-2-ил]-2,2-диметилпропил}-N-(3-аминопропил)-2-гидроксиацетамид(1:1);

(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-имидазол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутановая кислота;

N-[(3S)-3-амино-4-гидразино-4-оксобутил]-N-{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-имидазол-2-ил]-2,2-диметилпропил}-2-гидроксиацетамид(1:1);

N-{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-имидазол-2-ил]-2,2-диметилпропил}-N-[(3S)-3,4-диаминобутил]-2-гидроксиацетамид(1:1);

N-{(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-имидазол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}-бета-аланин;

(2S)-2-амино-N-(2-аминоэтил)-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-имидазол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутанамид(2:1);

(1-{(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-имидазол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}гидразино)уксусная кислота;

N-[3-Амино-2-(сульфанилметил)пропил]-N-{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-имидазол-2-ил]-2,2-диметилпропил}-2-гидроксиацетамидгидрохлорид(1:1);

4-амино-N-(3-аминопропил)-N-{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-имидазол-2-ил]-2,2-диметилпропил}бензамид(2:1);

N-{3-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-имидазол-2-ил]-2,2-диметилпропил)(гликолоил)амино]пропил}-N5-карбамоил-L-орнитинамид(1:1);

L-валил-N-{3-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-имидазол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]пропил}-N5-карбамоил-L-орнитинамид(1:1);

N-(3-Аминопропил)-N-{(1S)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}-2-гидроксиацетамид;

S-(1-{2-[(N-{(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-имидазол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}-бета-аланил)амино]этил}-2,5-диоксопирролидин-3-ил)-L-цистеин;

S-[1-(2-{[2-({(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[4-бензил-1-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиразол-3-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}амино)этил]амино}-2-оксоэтил)-2,5-диоксопирролидин-3-ил]-L-цистеин:

N-{(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[4-бензил-1-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиразол-3-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}-бета-аланил-L-аланил-N-[4-(3-{[(2R)-2-амино-2-карбоксиэтил]сульфанил}-2,5-диоксопирролидин-1-ил)фенил]-N⁵-карбамоил-L-орнитинамид;

S-(1-{2-[(N-{(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}-бета-аланил)амино]этил}-2,5-диоксопирролидин-3-ил)-L-цистеин;

N-[6-(3-{[(2R)-2-Амино-2-карбоксиэтил]сульфанил}-2,5-диоксопирролидин-1-ил)гексаноил]-L-валил-N⁵-карбамоил-L-омитил-N⁶-{(2S)-2-амино-4-[{(1R)-1-[4-бензил-1-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиразол-3-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}-L-лизин;

S-[1-(2-{[2-({(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}амино)этил]амино}-2-оксоэтил)-2,5-диоксопирролидин-3-ил]-L-цистеин;

S-(2-{[2-({(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[4-бензил-1-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиразол-3-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}амино)этил]амино}-2-оксоэтил)-L-цистеин;

S-{1-[6-(2-{(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[4-бензил-1-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиразол-3-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}гидразино)-6-оксогексил]-2,5-диоксопирролидин-3-ил}-L-цистеин;

N-[19-(3(R/S)-{[(2R)-2-Амино-2-карбоксиэтил]сульфанил}-2,5-диоксопирролидин-1-ил)-17-оксо-4,7,10,13-тетраокса-16-азанонадекан-1-оил]-R/S-{2-[(3-аминопропил){(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}амино]-2-оксоэтил}гомоцистеин;

S-{(3R/S)-1-[2-({(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}амино)этил]-2,5-диоксопирролидин-3-ил}-L-цистеин;

N-[19-(3(R/S)-{[(2R)-2-Амино-2-карбоксиэтил]сульфанил}-2,5-диоксопирролидин-1-ил)-17-оксо-4,7,10,13-тетраокса-16-азанонадекан-1-оил]-R/S-{2-[(3-аминопропил){(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-имидазол-2-ил]-2,2-диметилпропил}амино]-2-оксоэтил}гомоцистеин;

S-[(3R/S)-1-(2-{[6-({2-[(3-Аминопропил){(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил)амино]-2-оксоэтил}сульфанил)гексаноил]амино}этил)-2,5-диоксопирролидин-3-ил]-L-цистеин;

S-{1-[2-({[(1R,3S)-3-({(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}амино)циклопентил]карбонил}амино)этил]-2,5-диоксопирролидин-3-ил}-L-цистеин;

S-(2-{[2-({(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}амино)этил]амино}-2-оксоэтил)-L-цистеин;

N⁶-(N-{(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1H-имидазол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}-D-аланил)-L-лизин;

N⁶-(N-{(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1H-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}-бета-аланил)-N²-{N-[6-(3-{[(2R)-2-амино-2-карбоксиэтил]сульфанил}-2,5-диоксопирролидин-1-ил)гексаноил]-L-валил-L-аланил}-L-лизин;

N-[2-({(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}амино)этил]-L-глутамин;

N⁶-(N-{(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}-бета-аланил)-L-лизин;

N-(3-Аминопропил)-N-{(1R)-1-[4-бензил-1-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиразол-3-ил]-2,2-диметилпропил}ацетамид;

N-(3-Аминопропил)-N-{(1R)-1-[4-бензил-1-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиразол-3-ил]-2,2-диметилпропил}-2-метоксиацетамид;

N-(3-Аминопропил)-N-{(1R)-1-[4-бензил-1-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиразол-3-ил]-2,2-диметилпропил}-2,4-дифторобензамид;

N-(3-Аминопропил)-N-{(1R)-1-[4-бензил-1-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиразол-3-ил]-2,2-диметилпропил}-4-метилбензамид;

N-(3-Аминопропил)-N-{(1R)-1-[4-бензил-1-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиразол-3-ил]-2,2-диметилпропил}-2-этоксиацетамид;

N-(3-Аминопропил)-N-{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}-3,3,3-трифторпропанамид;

N-(3-Аминопропил)-N-{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}-4-фторбензамид;

N-(3-Аминопропил)-N-{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}ацетамид;

N-(3-Аминопропил)-N-{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}-4-(трифторметил)бензамид;

N-(3-Аминопропил)-N-{(1R)-1-[4-бензил-1-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиразол-3-ил]-2,2-диметилпропил}-2-этоксиацетамид;

N-(3-Аминопропил)-N-{(1R)-1-[4-бензил-1-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиразол-3-ил]-2,2-диметилпропил}-2-этоксиацетамид

(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутановая кислота;

(2S)-2-амино-N-(2-аминоэтил)-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутанамид;

4-[(2-{[2-({(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}амино)этил]амино}-2-оксоэтил)амино]-3-{[(2R)-2-амино-2-карбоксиэтил]сульфанил}-4-оксобутановая кислота;

4-[(2-{[2-({(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}амино)этил]амино}-2-оксоэтил)амино]-2-{[(2R)-2-амино-2-карбоксиэтил]сульфанил}-4-оксобутановая кислота;

N-{(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}-бета-аланин;

N-{(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}-L-серин;

N-{(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}-L-аланин;

N-{(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}глицин;

N-(3-аминопропил)-N-{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}-4-метилбензамид;

N-(3-аминопропил)-N-{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}-4-(метилсульфанил)бензамид;

(2S)-N-(3-аминопропил)-N-{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}-2-гидроксипропанамид;

N-(3-аминопропил)-N-{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}-2-(метилсульфанил)ацетамид;

(2S)-N-(3-аминопропил)-N-{(1R)-1-[4-бензил-1-(2,5-дифторфенил)- 1H-пиразол-3-ил]-2,2-диметилпропил}-2-гидроксипропанамид;

Метил-4-[(3-аминопропил){(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}амино]-4-оксобутаноат;

4-[(3-Аминопропил){(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}амино]-4-оксобутановая кислота;

(2R)-22-[(3R/S)-3-{[(2R)-2-Амино-2-карбоксиэтил]сульфанил}-2,5-диоксопирролидин-1-ил]-2-[({2-[(3-аминопропил){(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}амино]-2-оксоэтил}сульфанил)метил]-4,20-диоксо-7,10,13,16-тетраокса-3,19-диазадокозан-1-овая кислота;

4-амино-N-(3-аминопропил)-N-{(1R)-1-[4-бензил-1-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиразол-3-ил]-2,2-диметилпропил}бензамид;

N-Ацетил-S-{2-[(3-аминопропил){(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}амино]-2-оксоэтил}-L-цистеин;

N-Ацетил-S-[2-([3-(L-аланиламино)пропил]{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}амино)-2-оксоэтил]-L-цистеин;

(2S)-N-(3-аминопропил)-N-{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}тетрагидрофуран-2-карбоксамид;

3-({2-[(3-Аминопропил){(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}амино]-2-оксоэтил}сульфанил)пропановая кислота;

S-{2-[(3-Аминопропил){(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}амино]-2-оксоэтил}гомоцистеин;

4-амино-N-(3-аминопропил)-N-{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}бензамид;

4-[(2-{[(2R)-2-({(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}амино)-2-карбоксиэтил]амино}-2-оксоэтил)амино]-3-{[(2R)-2-амино-2-карбоксиэтил]сульфанил}-4-оксобутановая кислота;

4-[(2-{[(2R)-2-({(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}амино)-2-карбоксиэтил]амино}-2-оксоэтил)амино]-2-{[(2R)-2-амино-2-карбоксиэтил]сульфанил}-4-оксобутановая кислота;

Особенно предпочтительными согласно настоящему изобретению являются следующие соединения формул V, VI или VII, в которых R¹, R², R³, R⁴ и R⁵ имеют значения, указанные выше (как например, для приведенных выше формул (IIa) или (IIIa)):

Особенно предпочтительными являются соединения формул V, VI, VII, в которых R¹, и R⁵ представляет собой Н или -L-#1; R² и R⁴ независимо друг от друга представляют собой -L-#1 или Н, или R² и R⁴ вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -СН₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-CH₂-, причем R¹⁰ представляет собой Н или -L-#1; и R³ представляет собой CH₂OH, СН(СН₃)ОН или -L-#1, причем один из заместителей R¹, R², R³, R⁴, R⁵ и R¹⁰

представляет собой -L-#1. Особенно предпочтительными являются соответствующие соединения формулы VI.

Линкер

В литературе раскрываются различные пути ковалентного связывания (конъюгации) органических молекул со связующим, как например, антитело (смотрите, например, K. Lang and J.W. Chin. Chem. Rev. 2014, 114, 4764-4806, M. Rashidian et al. Bioconjugate Chem. 2013, 24, 1277-1294). Предпочтительным согласно настоящему изобретению является конъюгация ингибиторов KSP с антителом через один или более атомов серы или остатков цистеина антитела, которые либо уже присутствуют в виде свободных тиолов, либо образуются путем восстановления дисульфидных мостиков, и/или через одну или более NH группу лизиновых остатков антитела. Однако возможно присоединить ингибитор KSP к антителу через тирозиновые остатки, через глютаминовые остатки, через остатки неприродных аминокислот, через свободные карбоксильные группы или через остатки сахара антитела. Для связывания применяется, так называемый, линкер. Линкеры могут разделяться на группу линкеров, которые расщепляются in vivo, и группу линкеров, которые стабильны in vivo (смотрите L. Ducry и В. Stump, Bioconjugate Chem. 21, 5-13 (2010)). Линкеры, которые расщепляются in vivo, имеют группу, которая может расщепляться in vivo, причем в свою очередь различаются группы, которые химически расщепляются in vivo, и группы, которые ферментативно расщепляются in vivo. "Химически расщепляемый in vivo" или "ферментативно расщепляемый in vivo" означают, что линкер или группы стабильны в системе кровообращения и расщепляются только при или в целевой клетке с химически или ферментативно отличающейся средой (более низкое значение pH; повышенная концентрация глутатиона; присутствие лизосомальных ферментов, таких как катепсин или плазмин, или гликозидазы, такие как, например, β-глюкуронидазы), таким образом, обеспечивая низкомолекулярный ингибитор KSP или его производную. Группами, которые могут химически расщепляться in vivo, в частности, являются дисульфидная, гидразон, ацеталь и аминаль; группами, которые могут ферментативно расщепляться in vivo, являются в частности 2-8-олигопептидная группа, в

частности дипептидная группа или гликозид. Сайты пептидного расщепления раскрываются в Bioconjugate Chem. 2002, 13, 855-869, а также Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 8 (1998) 3341-3346, а также Bioconjugate Chem. 1998, 9, 618-626. Сюда относятся, например, валин-аланин, валин-лизин, валин-цитруллин, аланин-лизин и фенилаланин-лизин (необязательно с дополнительной амидной группой).

Линкеры, которые стабильны in vivo, отличаются высокой стабильностью (менее 5% метаболитов через 24 часа в плазме) и не имеют химически или ферментативно расщепляемые группы, упомянутые выше.

Линкер -L- предпочтительно имеет одну из основных структур (i)-(iv), приведенных далее:

(i)	-(CO)_m-SG1-L1-L2-
(ii)	-(CO)_m-L1-SG-L1-L2-
(iii)	-(CO)_m-L1-L2-
(iv)	-(CO)_m-L1-SG-L2

где m равно 0 или 1; SG представляет собой (химически или ферментативно) in vivo расщепляемую группу (в частности, дисульфид, гидразон, ацеталь и аминаль; или 2-8-олигопептидная группа, которая может расщепляться катепсином или плазмином), SG1 представляет собой олигопептидную группу или предпочтительно дипептидную группу, L1 независимо друг от друга представляют собой in vivo стабильные органические группы, и L2 представляет собой связывающую группу для связующего или простую связь. Связывание предпочтительно осуществляется с цистеиновым остатком или лизиновым остатком связующего. Альтернативно связывание может осуществляться с тирозиновым остатком, глутаминовым остатком или неприродной аминокислотой связующего. Неприродные аминокислоты могут содержать, например, альдегидные или кето группы (как например, формилглицин) или азидные или алкиновые группы (смотрите Lan & Chin, Cellular Incorporation of Unnatural Amino Acids and Bioorthogonal Labeling of Proteins, Chem. Rev. 2014, 114, 4764-4806).

Предпочтительной согласно настоящему изобретению является основная линкерная структура (iii), в частности, когда связующее представляет собой анти-TWEAKR-антитело или анти-EGFR-антитело. Введение конъюгата согласно настоящему изобретению, имеющего основную структуру линкера (iii), и связывание линкера с цистеиновым или лизиновым остатком связующего белка или пептида, посредством метаболизации, приводит к цистеиновым или лизиновым производным приведенных далее формул:

причем L1 в каждом случае присоединяется к низкомолекулярному ингибитору KSP, как например, соединения формул (I), (IIa), (II), (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc), (IIId), (IIIe), или (IV).

Предпочтительными согласно настоящему изобретению также являются основные структуры линкера (ii) и (iv), в частности при присоединении в положении (iii), в частности когда группа L1 имеет одну из следующих структур:

(a) -NH-(CH₂)_0-4-(CHCH₃)_0-4-CHY⁵-CO-Y⁷, причем Y⁵ представляет собой Н или NHY⁶, причем Y⁶ представляет собой Н или -СОСН₃, и Y⁷ представляет собой простую связь или -NH-(СН₂)_0-4-CHNH₂-СО-, так что посредством расщепления соответствующей структуры образуется -NH-(СН₂)_0-4-(CHCH₃)_0-4-CHY⁵-СООН или -NH-(CH₂)_0-4-(CHCH₃)-CHY⁵-CO-NH-(CH₂)_0-4-CHNH₂-COOH.

(b) -CH₂-S_x-(CH₂)_0-4-CHY⁵-CO-, где x равно 0 или 1, и Y⁵ представляет собой Н или NHY⁶, причем Y6 представляет собой Н или -СОСН₃, так что посредством расщепления соответствующей структуры образуется -CH₂-S_x-(CH₂)_0-4-CHY⁵-СООН.

Согласно настоящему изобретению предпочтительно, когда L1 в каждом случае представляет собой низкомолекулярный ингибитор KSP, например, соединение

формулы (I), (IIa), (II), (III), (IIIa), (IIIb), (IIIc), (IIId), (IIIe), или (IV), в частности в положении R₄. Связующее предпочтительно представляет собой анти-TWEAKR антитело или анти-EGFR антитело.

Если связующее присоединяется к цистеиновой боковой цепи или цистеиновому остатку, L2 предпочтительно образуется из группы, которая реагирует с сульфгидрильной группой цистеина. Сюда относятся галоацетил, малеимид, азиридин, акрилоил, арилирующие соединения, винилсульфон, пиридилдисульфид, TNB-тиол и дисульфид-восстанавливающие агенты. Эти группы в общем реагируют электрофильным образом с сульфгидрильной связью, образуя сульфидный (например, простой тиоэфир) или дисульфидный мостик. Предпочтительными являются стабильные сульфидные мостики. L2 предпочтительно представляет собой

где

#¹ обозначает точку присоединения атома серы связующего,

#² обозначает точку присоединения к группе L¹, и

R₂₂ представляет собой СООН, COOR, COR, CONHR, CONR₂ (R в каждом случае представляет собой C1-3-Алкил), CONH2, предпочтительно СООН.

Особенно предпочтительно L2 представляет собой:

или

причем #¹ обозначает точку присоединения атома серы связующего, #² обозначает точку присоединения к активному соединению, x равно 1 или 2, и R²² представляет собой СООН, COOR, COR, CONHR (R в каждом случае представляет собой C1-3-алкил), CONH2, предпочтительно СООН. Предпочтительно, когда x=1, и R²² представляет собой СООН.

В конъюгате согласно настоящему изобретению или в смеси согласно настоящему изобретению, связи с цистеиновым остатком связующего присутствуют в количестве, предпочтительно до 80%, особенно предпочтительно до 90% (в каждом случае на основе общего числа связей линкера со связующим), особенно предпочтительно в виде одной из двух структур формул A3 или А4. Согласно настоящему изобретению структуры формул A3 или А4, как правило, присутствуют вместе, предпочтительно при отношении от 60:40 до 40:60, на

основе числа связей со связующим. Оставшиеся связи тогда присутствуют в виде структуры

Согласно настоящему изобретению L1 предпочтительно имеет Формулу

#¹-(NR¹⁰)_n-(G1)_o-G2-#², причем

R¹⁰ представляет собой Н, NH₂ или C₁-C₃-алкил;

G1 представляет собой -NHCO-, -CONH- или ; (R¹⁰ предпочтительно не представляет собой NH₂, когда G1 представляет собой NHCO или ).

n равно 0 или 1;

o равно 0 или 1; и

или С₂-С₁₀-алкинил, каждый из которых может быть замещен заместителем NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид, или сульфоновая кислота), -СО-, -CR^x=N-O- (причем Rx представляет собой Н, С₁-С₃-алкил или фенил), и/или 3-10-членного, ароматического или неароматического гетероцикла, имеющего до 4 гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из N, О и S, -SO- или -SO2- (предпочтительно ), причем углеводородная цепь, включая боковые цепи, если присутствуют, может быть замещена заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид, или сульфоновая кислота.

G2 представляет собой неразветвленную или разветвленную углеводородную цепь, содержащую от 1 до 100 атомов углерода, из ариленовых групп, и/или неразветвленных и/или разветвленных, и/или циклических алкиленовых групп, которая может прерываться один или более раз одной или более группами из -O-, -S-, -SO-, SO2, -NH-, -СО-, -NHCO-, -CONH-, -NMe-, -NHNH-, -SO2NHNH-, -CONHNH-, и 5-10-членного, ароматического или неароматического гетероцикла, имеющего до 4 гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из N, О и S, или -SO- (предпочтительно ), причем боковые цепи, если присутствуют, могут быть замещены заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид или сульфоновая кислота.

G2 представляет собой неразветвленную или разветвленную углеводородную цепь, содержащую от 1 до 100 атомов углерода, из ариленовых групп, и/или неразветвленных и/или разветвленных, и/или циклических алкиленовых групп, которая может прерываться один или более раз одной или более группами из -O-, -S-, -SO-, SO2, -NH-, -СО-, -NHCO-, -CONH-, -NMe-, -NHNH-, -SO2NHNH-, -CONHNH-, -CR^x=N-O- (причем Rx представляет собой Н, С₁-С₃-алкил или фенил), и 3-10-членного, например, 5-10-членного, ароматического или неароматического гетероцикла, имеющего до 4 гетероатомов, выбранных из

группы, состоящей из N, О и S, -SO- или -SO2- (предпочтительно ), причем углеводородная цепь, включающая боковые цепи, если присутствует, может быть замещена заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид, или сульфоновая кислота.

Другими прерывающими группами в G2 предпочтительно являются

причем Rx представляет собой Н, С₁-С₃-алкил или фенил.

Согласно настоящему изобретению #¹ обозначает связь с ингибитором KSP, и #² обозначает связь со связывающей группой для связующего (например, L2).

Неразветвленная или разветвленная углеводородная цепь ариленовых групп и/или неразветвленных и/или разветвленных и/или циклических алкиленовых групп в общем содержит α,ω-двухвалентный алкильный радикал, имеющий соответствующее установленное число атомов углерода. Примерами, которые могут быть упомянуты в качестве предпочтительных, являются: метилен, этан-1,2-диил (1,2-этилен), пропан-1,3-диил (1,3-пропилен), бутан-1,4-диил (1,4-бутилен), пентан-1,5-диил (1,5-пентилен), гексан-1,6-диил (1,6-гексилен), гептан-1,7-диил (1,7-гексилен), октан-1,8-диил (1,8-октилен), нонан-1,9-диил (1,9-нонилен),

декан-1,10-диил (1,10-децилен). Однако алкиленовые группы в углеводородной цепи также могут быть разветвленными, т.е. один или более атомов водорода неразветвленных алкиленовых групп, упомянутых выше, необязательно могут быть замещены C1-10-алкильными группами, таким образом образую боковые цепи. Углеводородная цепь может, кроме того, содержать циклические алкиленовые группы (циклоалкандиил), как например, 1,4-циклогександиил или 1,3-циклопентандиил. Эти циклические группы могут быть ненасыщенными. В частности, ароматические группы (ариленовые группы), например, Фенилен, могут присутствовать в углеводородной группе. В свою очередь, в циклических алкиленовых группах и ариленовых группах, также, один или более атомов водорода необязательно могут быть замещены C1-10-алкильными группами. Таким образом, образуется необязательно разветвленная углеводородная цепь. Такая углеводородная цепь имеет в общем от 0 до 100 атомов углерода, предпочтительно от 1 до 50, особенно предпочтительно от 2 до 25 атомов углерода.

Боковые цепи, если присутствуют, могут быть замещены заместителем - NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид, или сульфоновая кислота.

Углеводородная цепь может прерываться один или более раз одной или более группами из -O-, -S-, -SO-, SO2, -NH-, -СО-, -NHCO-, -CONH-, -NMe-, -NHNH-, -SO2NHNH-, -CONHNH- и 5-10-членного, ароматического или неароматического гетероцикла, имеющего до 4 гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из N, О и S, -SO- или -SO2- (предпочтительно ).

Другими прерывающими группами в G2 предпочтительно являются

Предпочтительно линкер имеет следующую Формулу:

§-(CO)m-L1-L2-§§,

где

m равно 0 или 1;

§ обозначает связь с молекулой активного соединения, и

§§ обозначает связь со связующим пептидом или белком, и

L1 и L2 имеют значения, приведенные выше.

Особенно предпочтительно L1 имеет Формулу -NR¹¹B-, в которой

R¹¹ представляет собой Н или NH₂;

В представляет собой -[(CH₂)_x-(X⁴)_y]_w-(CH₂)_z-,

w=0-20;

x=0-5;

y=0 или 1;

z=0-5; и

X⁴ представляет собой -O-, -CONH-, -NHCO- или .

Линкер L, который является предпочтительным согласно настоящему изобретению, имеет следующую формулу:

в которой

#3 обозначает связь с молекулой активного соединения,

#4 обозначает связь со связующим пептидом или белком,

R¹¹ представляет собой Н или NH2;

В представляет собой -[(CH₂)_x-(X⁴)_y]_w-(CH₂)_z-,

w=0-20;

x=0-5;

y=0 или 1;

z=1-5; и

X⁴ представляет собой -O-, -CONH-, -NHCO- или .

Упомянутые выше линкеры особенно предпочтительно находятся в конъюгатах формулы (I) или (II), в которых линкер присоединяется путем замещения атома водорода при R1, или в комбинации с расщепляющим линкером SG1 при R4, т.е. R1 представляет собой -L-#1, или R4 представляет собой -SG1-L-#1, причем #1 обозначает связь со связующим.

Кроме того, предпочтительными согласно настоящему изобретению являются следующие линкеры: В конъюгате согласно настоящему изобретению или в смеси согласно настоящему изобретению, связи с цистеиновым остатком связующего присутствуют в количестве, предпочтительно до 80%, особенно предпочтительно

до 90% (в каждом случае на основе общего числа связей линкера со связующим), особенно предпочтительно в виде одной из двух структур формул А5 или А6:

причем

#¹ обозначает точку присоединения к атому серы связующего,

#² обозначает точку присоединения к группе L¹, и

R²² представляет собой СООН, COOR, COR, CONHR (где R в каждом случае представляет собой C1-3-Алкил), CONH₂, предпочтительно СООН.

Согласно настоящему изобретению структуры формул А5 или А6, как правило, присутствуют вместе, предпочтительно при отношении от 60:40 до 40:60, на основе числа связей со связующим. Оставшиеся связи тогда присутствуют в виде структуры

Другие линкеры -L-, присоединенные к цистеиновой боковой цепи или цистеиновому остатку, имеют следующую формулу:

в которой

§ обозначает связь с молекулой активного соединения, и

§§ обозначает связь со связующим пептидом или белком,

m равно 0, 1, 2, или 3;

n равно 0, 1 или 2;

p равно 0-20; и

L3 представляет собой

;

в которой

o равно 0 или 1;

G₃ представляет собой неразветвленную или разветвленную углеводородную цепь, имеющую от 1 до 100 атомов углерода, из ариленовых групп, и/или неразветвленных, и/или циклических алкиленовых групп, которая может прерываться один или более раз одной или более группами из -O-, -S-, -SO-, SO2, -NH-, -СО-, -NHCO-, -CONH-, -NMe-, -NHNH-, -SO2NHNH-, -CONHNH- и 3-10-членного (предпочтительно 5-10-членного), ароматического или неароматического гетероцикла, имеющего до 4 гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из N, О и S, -SO- или -SO2- (предпочтительно ), причем боковые цепи, если присутствуют, могут быть замещены заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид или сульфоновая кислота.

В приведенной выше формуле предпочтительно

m равно 1;

p равно 0;

n равно 0;

и L3 представляет собой

;

в которой

o равно 0 или 1; и

G₃ представляет собой -(CH₂CH₂O)_s(CH₂)_t(CONH)_uCH₂CH₂O)_v(CH₂)_w-, причем

s, t, v и w, в каждом случае, независимо друг от друга представляют собой от 0 до 20, и u равно 0 или 1.

Предпочтительно группами L1 в вышеуказанной формуле §-(CO)m-L1-L2-§§ являются приведенные далее, причем r, в каждом случае, независимо друг от друга представляют собой число от 0 до 20, предпочтительно от 0 до 15, особенно предпочтительно от 1 до 20, в частности предпочтительно от 2 до 10:

Следующие примеры L1 приводятся в Таблице C, в которой эта группа выделена квадратом.

В следующих таблицах А и А' приводятся примеры линкерной составляющей L1. В таблицах, кроме того, приводится группа L2, с которой эти примеры L1 предпочтительно объединяются, а также предпочтительная точка связывания (R¹-R⁵), а также предпочтительное значение m, а также указывается находится ли перед L1 карбонильная группа или нет (§-(CO)m-L1-L2-§§). Эти линкеры предпочтительно связываются с цистеиновым остатком. В первой колонке, кроме того, приводятся номера примеров для ADC Цетуксимаба, в которых применяются рассматриваемые линкеры, но которые, равным образом, в каждой строке для ADC, применяются с другими антителами. Если L2 представляет собой сукцинамид или его производную, этот амид полностью или частично может быть в форме гидролизованного сукцинамида с открытой цепью, как описано выше. В зависимости от L1, этот гидролиз до сукцинамидов с открытой цепью может быть более или менее выраженным или вообще не происходить.

и/или

причем #¹ обозначает точку присоединения к атому серы связующего, #² обозначает точку присоединения к группе L¹, R²² предпочтительно представляет собой COOH. В конъюгате согласно настоящему изобретению или в смеси согласно настоящему изобретению, связи с цистеиновым остатком связующего присутствуют в количестве, предпочтительно до 80%, особенно предпочтительно до 90% (в каждом случае на основе общего числа связей линкера со связующим), особенно предпочтительно в виде одной из двух структур формул А7 или А8. Согласно настоящему изобретению структуры формул А7 или А8, как правило, присутствуют вместе, предпочтительно при отношении от 60:40 до 40:60, на основе числа связей со связующим.

Примеры конъюгатов, содержащих соответствующие линкеры, имеют следующие структуры, причем X1, Х2, Х3, и L1 имеют значения, приведенные выше, L2 и L3 имеют такие же значения как L1, AK1 представляет собой антитело, присоединенное через цистеиновый остаток, и n равно числу от 1 до 10. Особенно предпочтительно AK1 представляет собой человеческое, гуманизированное или химерное моноклональное антитело или его антиген-связывающий фрагмент, в частности анти-TWEAKR антитело или его антиген-связывающий фрагмент, или анти-EGFR антитело или его антиген-связывающий фрагмент.Особенно предпочтительным является анти-TWEAKR антитело, которое специфически связывается с аминокислотой D в положении 47 (D47) TWEAKR (SEQ ID

NO: 169), в частности анти-TWEAKR антитело ТРР-2090, или анти-EGFR антитела Цетуксимаб или Нимотузумаб.

Если линкер присоединяется к лизиновой боковой цепи или лизиновому остатку, он предпочтительно имеет следующую формулу:

-§-(SG)_x-L4-CO-§§,

причем

§ обозначает связь с молекулой активного соединения, и

§§ обозначает связь со связующим пептидом или белком,

x равно 0 или 1,

SG представляет собой расщепляемую группу, предпочтительно 2-8 олигопептид, особенно предпочтительно дипептид,

L4 представляет собой простую связь или группу -(CO)_y-G4-, причем y равно 0 или 1, и

G4 представляет собой неразветвленную или разветвленную углеводородную цепь, содержащую от 1 до 100 атомов углерода, из ариленовых групп и/или неразветвленных и/или разветвленных и/или циклических алкиленовых групп, которая может прерываться один или более раз одной или более группами из -О-, -S-, -SO-, SO₂, -NH-, -СО-, -NHCO-, -CONH-, -NMe-, -NHNH-, -SO2NHNH-, -CONHNH- и 5-10-членного, ароматического или неароматического гетероцикла, имеющего до 4 гетероатомов, выбранных из N, О и S, -SO- или -SO2- (предпочтительно ), причем боковые цепи, если присутствуют, могут быть замещены заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид или сульфоновая кислота.

В следующей Таблице B приводятся примеры линкеров для лизинового остатка. Кроме того, в таблице приводится предпочтительная точка связывания (R¹-R⁵). В первой колонке, кроме того, приводятся номера примеров, в которых соответствующие линкеры применяются.

Примеры конъюгатов, содержащих соответствующие линкеры, имеют следующие структуры, в которых X1, Х2, Х3, и L4 имеют значения, приведенные выше, AK2 представляет собой антитело, присоединенное через лизиновый остаток, n равно от 1 до 10. Особенно предпочтительно AK2 представляет собой человеческое, гуманизированное или химерное моноклональное антитело или его антиген-связывающий фрагмент, в частности анти-TWEAKR антитело или его антиген-связывающий фрагмент, анти-EGFR антитело или его антиген-связывающий фрагмент. Особенно предпочтительным является анти-TWEAKR антитело, которое специфически связывается с аминокислотой D в положении 47 (D47) TWEAKR (SEQ ID NO:169), в частности анти-TWEAKR антитело ТРР-2090, или анти-EGFR антитело Цетуксимаб или Нимотузумаб.

Кроме того, предпочтительными согласно настоящему изобретению являются основные структуры (i), (ii), или (iv), в которых SG1 или SG представляют собой группу, которая может расщепляться катепсином, и L1 и L2 имеют значения, приведенные выше. Особенно предпочтительными являются следующие группы:

- -Val-Ala-CONH- (расщепление амидной связи при С-терминальном амиде аланина)

- -NH-Val-Lys-CONH- (расщепление амидной связи при С-терминальном амиде лизина)

- -NH-Val-Cit-CONH- (расщепление амидной связи при С-терминальном амиде цитруллина)

- -NH-Phe-Lys-CONH (расщепление амидной связи при С-терминальном амиде лизина)

- -NH-Ala-Lys-CONH- (расщепление амидной связи при С-терминальном амиде лизина)

- -NH-Ala-Cit-CONH- (расщепление амидной связи при С-терминальном амиде цитруллина)

SG1 или SG особенно предпочтительно представляет собой

или

причем X представляет собой Н, C_1-10-алкильную группу, необязательно замещенную заместителем -NHCONH₂, -COOH, -ОН, NH₂, -NH-CNNH₂, или сульфоновая кислота.

В следующей таблице C приводятся примеры линкерной составляющей -SG1-L1-или -L1-SG-L1-, в которой SG1 или SG представляет собой расщепляемую катепсином группу. В таблице С, кроме того, приводится группа L2, с которой эти примеры -SG1-L1- и -L1-SG-L1-предпочтительно объединяются, а также предпочтительная точка связывания (R¹-R⁵), а также предпочтительное значение т, а также указывается находится ли перед L1 карбонильная группа или нет (§-(CO)m-L1-L2-§§). Эти линкеры предпочтительно связываются с цистеиновым остатком. В первой колонке, кроме того, приводятся номера примеров для ADC Цетуксимаба, в которых применяются рассматриваемые линкеры. Они

применяются, равным образом, для соответствующих ADC, с другими антителами. Группа L1 выделена в квадрате. Однако эти группы L1 могут быть замещены на одну из групп L1, приведенных для формулы §-(CO)m-L1-L2-§§. Если L2 представляет собой сукцинамид или его производную, этот амид полностью или частично может быть в форме гидролизованного сукцинамида с открытой цепью, как описано выше.

Примеры конъюгатов, содержащих основную структуру (i), имеют следующую структуру, в которой X1, X2, и X3 имеют значения, приведенные выше, L4 имеет такие же значения как L1, AK1 представляет собой антитело, присоединенное через цистеиновый остаток, и n равно числу от 1 до 10. Особенно предпочтительно AK1 представляет собой анти-TWEAKR антитело, особенно специфически связывающееся с аминокислотой D в положении 47 (D47) TWEAKR (SEQ ID NO: 169), в частности анти-TWEAKR антитело ТРР-2090.

Ингибитор KSP - Линкер-Промежуточные соединения и получение конъюгатов

Конъюгаты согласно настоящему изобретению получают путем сначала обеспечения низкомолекулярного ингибитора KSP с линкером. Промежуточное соединение, полученное таким образом, затем вступает в реакцию со связующим (предпочтительно антителом).

Предпочтительно, для конъюгации с цистеиновым остатком, одно из приведенных далее соединений вступает в реакцию с цистеин-содержащим связующим, таким как антитело, которое необязательно частично редуцируется для этой цели:

где R представляет собой -H или -COOH,

где K представляет собой линейный или разветвленный C₁-C₆, алкил, необязательно замещенный заместителем C₁-C₆ алкокси или -OH, и где X₁, X₂, X₃, SG1, L1, L2, L3 и L4 имеют такие же значения, как описано выше.

Соединение может применяться, например, в форме соли трифторуксусной кислоты. Для реакции со связующим, таким, как например, антитело, соединение предпочтительно применяется в 2-12 кратном избытке относительно связующего.

Предпочтительно, для связывания с лизиновым остатком, одно из приведенных далее соединений вступает в реакцию с лизин-содержащим связующим, таким как антитело:

в которой X₁, X₂, X₃ имеют такие же значения, как для формулы (II), и L4 имеет такие же значения как L1, и L1 имеет такие же значения, как описано выше,

Для связывания промежуточного соединения с цистеиновым остатком, может применяться реакция, как проиллюстрировано далее:

Другие промежуточные соединения и другие антитела могут вступать в реакцию соответствующим образом.

Для связывания промежуточного соединения с лизиновым остатком, может применяться реакция, как проиллюстрировано далее:

Согласно настоящему изобретению, таким образом, получают следующие конъюгаты:

В зависимости от линкера, сукцинимид-связанные ADC могут, после конъюгации, быть превращены в сукцинамиды с открытой цепью, которые имеют предпочтительный профиль стабильности.

Реакция (открытие кольца) может проводиться при pH 7.5-9, предпочтительно при pH 8, при температуре от 25°C до 37°C, например, посредством перемешивания. Предпочтительное время перемешивания составляет от 8 до 30 часов.

В приведенных выше формулах X₁, X₂, X₃ имеют такие же значения, как указано для Формулы (II), SG1 и L1 имеют такие же значения, как описано выше, и L2, L3 и L4 имеют такие же значения как L1; R и K имеют такие же значения, как описано выше. AK1 представляет собой антитело, связанное посредством цистеинового остатка, и AK2 представляет собой антитело, связанное посредством лизинового остатка. Особенно предпочтительно AK1 и AK2 представляют собой анти-TWEAKR антитело, в частности специфически

связывающееся с аминокислотой D в положении 47 (D47) TWEAKR (SEQ ID NO: 169), в частности анти-TWEAKR антитело ТРР-2090.

Связующие

В самом широком смысле термин "связующее", как понимается, означает молекулу, которая связывается с целевой молекулой, присутствующей при определенной целевой клеточной популяции, на которую направлен конъюгат связующее/активное соединение. Термин «связующее», как понимается в его самом широком значении, также охватывает, например, лектины, белки, способные связываться с определенными цепями сахаров, и фосфолипид-связывающие белки. Такие связующие включают, например, высокомолекулярные белки (связывающие белки), полипептиды или пептиды (связывающие пептиды), непептидные (например, аптамеры (US 5,270,163) обзор Keefe AD., et al., Nat. Rev. Drug Discov. 2010; 9:537-550), или витамины) и все другие связывающиеся с клеткой молекулы или вещества. Связывающими белками являются, например, антитела и фрагменты антител или миметики антител, такие как, например, аффитела, аднектины, антикалины, дарфины, авимеры, нанотела (обзор Gebauer М. et al., Curr. Opinion in Chem. Biol. 2009; 13:245-255; Nuttall S.D. et al., Curr. Opinion in Pharmacology 2008; 8:608-617). Связывающими пептидами являются, например, лиганды пары лиганд/рецептор, такие как, например, VEGF пары лиганд/рецептор VEGF/KDR, как например трансферин пары лиганд/рецептор трансферин/трансфериновый рецептор, или цитокин/цитокиновый рецептор, как например TNFalpha пары лиганд/рецептор TNFalpha/TNFalpha.

В литературе также раскрываются различные варианты ковалентного связывания (конъюгации) органических молекул с антителами. Предпочтительной согласно настоящему изобретению является конъюгация токсофоров с антителом посредством одного или более атомов серы цистеиновых остатков антитела и/или посредством одной или более NH групп лизиновых остатков антитела. Однако также возможно связывать токсофор с антителом посредством свободных карбоксильных групп или посредством остатков сахаров антитела.

Термин "целевая молекула" в самом широком смысле, как понимается, означает молекулу, которая присутствует в целевой клеточной популяции и которая может представлять собой белок (например, рецептор фактора роста) или непептидную молекулу (например, сахар или фосфолипид). Предпочтительно она представляет собой рецептор или антиген.

Термин "внеклеточная" целевая молекула описывает целевую молекулу, присоединенную к клетке, которая локализуется вне клетки, или часть целевой молекулы, которая локализуется вне клетки, т.е. связующее может связываться на интактной клетке с ее внеклеточной целевой молекуле. Внеклеточная целевая молекула может быть заякорена в клеточной мембране или быть компонентом клеточной мембраны. Специалисту в данной области техники известны способы идентификации внеклеточных целевых молекул. Для белков это может осуществляться посредством определения трансмембранного домена (доменов) и ориентации белка в мембране. Эти данные, как правило, имеются в базах данных белков (например, SwissProt).

Термин "раковая целевая молекула" описывает целевую молекулу, которая в большем количестве присутствует при одном тили более видах раковых клеток, чем при нераковых клетках того же типа ткани. Предпочтительно, раковая целевая молекула селективно присутствует при одном тили более видах раковых клеток, по сравнению с нераковыми клетками того же типа ткани, где селективность означает двукратное обогащение при раковых клетках по сравнению с нераковыми клетками того же типа ткани ("селективная раковая целевая молекула"). Применение раковых целевых молекул обеспечивает селективную обработку раковых клеток с применением конъюгатов согласно настоящему изобретению.

Связующее может быть присоединено к линкеру через связь. Присоединение связующего может осуществляться через гетероатом связующего. Гетероатомами связующего, согласно настоящему изобретению, которые могут применяться для присоединения, являются сера (в одном варианте выполнения настоящего изобретения, через сульфгидрильную группу связующего), кислород (в одном

варианте выполнения настоящего изобретения, через карбоксильную или гидроксильную группу связующего) и азот (в одном варианте выполнения настоящего изобретения, через первичную или вторичную аминную группу или амидную группу связующего). Эти гетероатомы могут присутствовать в связующем естественным путем или могут вводиться посредством химических способов или способов молекулярной биологии. Согласно настоящему изобретению, присоединение связующего к токсофору оказывает только незначительный эффект на связывающую активность связующего в отношении целевой молекулы. В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения, присоединение не оказывает эффекта на связывающую активность связующего в отношении целевой молекулы.

Согласно настоящему изобретению термин "антитело" понимается в его самом широком значении и охватывает иммуноглобулиновые молекулы, например, интактные или модифицированные моноклональные антитела, поликлональные антитела или мультиспецифические антитела (например, биспецифические антитела). Иммуноглобулиновая молекула предпочтительно содержит молекулу, имеющую четыре полипептидные цепи, две тяжелые цепи (Н цепи) и две легкие цепи (L цепи), которые, как правило, связаны дисульфидными мостиками. Каждая тяжелая цепь содержит вариабельный домен тяжелой цепи (аббревиатура VH) и константный домен тяжелой цепи. Константный домен тяжелой цепи может, например, содержать три домена CH1, CH2 и CH3. Каждая легкая цепь содержит вариабельный домен (аббревиатура VL) и константный домен. Константный домен легкой цепи содержит домен (аббревиатура CL). VH и VL домены могут подразделяться далее на области, имеющие гипервариабельность, также упоминаемые как комплементарность-определяющие области (аббревиатура CDR), и области, имеющие низкую вариабельность последовательности (каркасная область, аббревиатура FR). Как правило, каждая VH и VL область состоит из трех CDR и до четырех FR. Например, от аминоконцов до карбокси концов в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Антитело может быть получено из любых подходящих видов, например, кролика, ламы, верблюда, мыши или крысы. В одном варианте выполнения настоящего изобретения, антитело является человеческого или мышиного происхождения.

Антитело может, например, быть человеческим, гуманизированным или химерным.

Термин "моноклональное" антитело относится к антителам, полученным из популяции по существу гомогенных антител, т.е. отдельные антитела популяции являются идентичными, за исключением мутаций природного происхождения, которые могут присутствовать в небольшом количестве. Моноклональные антитела распознают один антигенный сайт связывания с высокой специфичностью. Термин "моноклональное" антитело не относится к конкретному способу получения.

Термин "интактное" антитело относится к антителам, содержащим как антиген-связывающий домен, так и константный домен легкой и тяжелой цепи. Константным доменом может быть домен природного происхождения или его вариант, имеющий ряд модифицированных аминокислотных положений.

Термин "модифицированное интактное" антитело относится к интактным антителам, сопряженным по их аминоконцам или карбоксильным концам посредством ковалентной связи (например, пептидная связь) с другим полипептидом или белком, не происходящим из антитела. Кроме того, антитела могут быть модифицированы таким образом, что в желательных положениях, реакционноспособные цистеины вводятся для усиления связывания с токсофором (смотрите Junutula et al. Nat Biotechnol. 2008 Aug; 26(8):925-32).

Термин "человеческое" антитело относится к антителам, которые могут быть получены у человека, или которые представляют собой синтетические человеческие антитела. "Синтетическое" человеческое антитело представляет собой антитело, которое является частично или полностью получено in silico из синтетических последовательностей, на основе анализа последовательностей человеческих антител. Человеческое антитело может быть кодировано, например, нуклеиновой кислотой, выделенной из библиотеки последовательностей антител человеческого происхождения. Пример такого антитела можно найти в Sderlind et al., Nature Biotech. 2000, 18:853-856.

Термин "гуманизированное" или "химерное" антитело описывает антитела, состоящие из нечеловеческой и человеческой части последовательности. В этих антителах, часть последовательностей человеческого иммуноглобулина (реципиент) замещена на части последовательностей нечеловеческого иммуноглобулина (донор). Во многих случаях, донором является мышиный иммуноглобулин. В случае гумманизированных антител, аминокислоты CDR реципиента замещаются на аминокислоты донора. Иногда аминокислоты каркасного участка также замещаются на соответствующие аминокислоты донора. В некоторых случаях гуманизированное антитело содержит аминокислоты, не присутствующие ни у реципиента, ни у донора, которые были введены в ходе оптимизации антитела. В случае химерных антител, вариабельные домены донорного иммуноглобулина сливаются с константными областями человеческого антитела.

Термин «участок, определяющий комплементарность» (CDR), как применяется в настоящей заявке, относится к тем аминокислотам вариабельного домена антитела, которые необходимы для связывания с антигеном. Как правило, каждая вариабельная область имеет три CDR области, обозначаемые как CDR1, CDR2 и CDR3. Каждая CDR область может охватывать аминокислоты согласно определению Kabat и/или аминокислоты гипервариабельной петли, определенные согласно Chotia. Определение согласно Kabat содержит, например, область аминокислотных положений 24-34 (CDR1), 50-56 (CDR2) и 89-97 (CDR3) вариабельной легкой цепи, и 31-35 (CDR1), 50-65 (CDR2) и 95-102 (CDR3) вариабельной тяжелой цепи (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). Определение согласно Chotia содержит, например, область аминокислотных положений 26-32 (CDR1), 50-52 (CDR2) и 91-96 (CDR3) вариабельной легкой цепи, и 26-32 (CDR1), 53-55 (CDR2) и 96-101 (CDR3) of вариабельной тяжелой цепи (Chothia and Lesk; J Mol Biol 196: 901-917 (1987)). В некоторых случаях, CDR может содержать аминокислоты из CDR области, определенной согласно Kabat и Chotia.

В зависимости от аминокислотной последовательности константного домена тяжелой цепи, антитела могут распределяться в различные классы. Существует пять различных классов интактных антител: IgA, IgD, IgE, IgG и IgM, и некоторые из них могут быть поделены на дополнительные подклассы. (Изотипы), например, IgGI, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2. Константные домены тяжелой цепи, которые соответствуют различным классам, упоминаются как [альфа/α], [дельта/δ], [эпсилон/ε], [гамма/γ] и [my/μ]. Известны как трехмерные структуры, так и структуры субъединиц антител.

Термин "функциональный фрагмент" или "антиген-связывающий фрагмент антитела" антитела/иммуноглобулина определяется как фрагмент антитела/иммуноглобулина (например, вариабельные домены IgG), который все еще содержит антиген-связывающие домены антитела/иммуноглобулина. "Антиген-связывающий домен" антитела, как правило, содержит одну или более гипервариабельных областей антитела, например, область CDR, CDR2 и/или CDR3. Однако участок "рамки" или "скелет" антитела может также играть роль в ходе связывания антитела с антигеном. Участок рамки образует скелет областей CDR. Предпочтительно, антиген-связывающий домен содержит по меньшей мере аминокислоты 4-103 вариабельной легкой цепи и аминокислоты 5-109 вариабельной тяжелой цепи, более предпочтительно аминокислоты 3-107 вариабельной легкой цепи и 4-111 of вариабельной тяжелой цепи, особенно предпочтительно полные вариабельные легкие и тяжелые цепи, т.е. аминокислоты 1-109 VL и 1-113 VH (нумерация согласно W097/08320).

"Функциональные фрагменты" или "антиген-связывающие фрагменты антител" согласно настоящему изобретению охватывают, не окончательно, Fab, Fab', F(ab')₂ и Fv фрагменты, диатела, антитела с одним доменом (DAb), линейные антитела, отдельные цепи антител (одноцепочечный Fv, аббревиатура scFv); и мультиспецифичные антитела, такие как би- и три-специфичные антитела, например, образованные из фрагментов антител С.А. K Borrebaeck, editor (1995) Antibody Engineering (Breakthroughs in Molecular Biology), Oxford University Press; R. Kontermann & S. Duebel, editors (2001) Antibody Engineering (Springer Laboratory Manual), Springer Verlag. Антитела, отличные от "мультиспецифичных" или

"мультифункциональных" антител представляют собой имеющие идентичные сайты-связывания. Мультиспецифичные антитела могут быть специфичными для различных эпитопов антигена или могут быть специфичными для эпитопов более одного антигена (смотрите, например, WO 93/17715; WO 92/08802; WO 91/00360; WO 92/05793; Tutt, et al., 1991, J. Immunol. 147:60 69; U.S. Pat. Nos. 4,474,893; 4,714,681; 4,925,648; 5,573,920; 5,601,819; или Kostelny et al., 1992, J. Immunol. 148: 1547 1553). Молекула F(ab')₂ или Fab может быть сконструирована так, что число межмолекулярных дисульфидных взаимодействий, происходящих между ChI и CL доменами, может быть уменьшено или даже полностью предотвращено.

"Эпитопы" относятся к белковым детерминантам, способным к специфичному связыванию с иммуноглобулином ил Т-клеточными рецепторами. Эпитопные детерминанты, как правило, состоят из химически активных поверхностных групп молекул, таких как аминокислоты или боковые цепи Сахаров или их комбинации, и, как правило, имеют специфические 3-мерные структурные свойства, а также специфические свойства заряда.

"Функциональные фрагменты" или "антиген-связывающие фрагменты антител" могут быть слиты с другим полипептидом или белком, не происходящим из антитела, через их аминоконцы или карбоксильные концы, посредством ковалентной связи (например, пептидной связи). Кроме того, антитела и антиген-связанные фрагменты могут быть модифицированы посредством введения реакционноспособных цистеинов в определенных положениях, чтобы облегчить связывание с токсофором (смотрите Junutula et al. Nat Biotechnol. 2008 Aug; 26(8):925-32).

Поликлональные антитела могут быть получены способами, известными специалистам в данной области техники. Моноклональные антитела могут быть получены способами, известными специалистам в данной области техники (Kohler and Milstein, Nature, 256, 495-497, 1975). Человеческие и гуманизированные моноклональные антитела могут быть получены способами, известными специалистам в данной области техники (Olsson et al., Meth Enzymol. 92, 3-16 или Cabilly et al. US 4,816,567 или Boss et al. US 4,816,397).

Специалистам в данной области техники известны различные способы получения человеческих антител и их фрагментов, такие как, например, посредством трансгенных мышей (N Lonberg and D Huszar, Int Rev Immunol. 1995; 13(1):65-93) или методом фаговых отображений (Clackson et al., Nature. 1991 Aug 15; 352(6336):624-8). Антитела согласно настоящему изобретению могут быть получены из библиотек рекомбинантных антител, состоящих, например, из аминокислотных последовательностей множества антител, составленных на основе большого числа клинически здоровых добровольцев. Антитела также могут быть получены посредством известных методик рекомбинантной ДНК. Последовательность нуклеиновой кислоты антитела может быть получена стандартным образом или является доступной из общедоступных баз данных.

"Выделенное" антитело или связующее очищено с удалением других составляющих клетки. Загрязняющие составляющие клетки, которые могут мешать диагностическому или терапевтическому применению, представляют собой, например, ферменты, гормоны, или другие пептидные или непептидные составляющие клетки. Предпочтительным антителом или связующим является то, которое было очищено до степени более 95 мас. %, относительно антитела или связующего (определено, например, посредством метода Фолина-Чикальтеу, спектроскопии в УФ-видимом свете или SDS капиллярного гель-электрофореза). Более того, антитело, которое было очищено до такой степени, что возможно определить по меньшей мере 15 аминокислот аминоконцов или внутренней аминокислотной последовательности, или которое было очищено до гомогенности, причем гомогенность определяется посредством SDS PAGE при восстанавливающих или невосстанавливающих условиях (обнаружение может быть определено посредством Coomassie - Blau окрашивания или предпочтительно посредством окрашивания серебром). Однако антитело, как правило, получают посредством одной или более стадий очистки.

Термин "специфическое связывание" или "связывается специфически" относится к антителу или связующему, которое связывается с предопределенным антигеном/целевой молекулой. Специфическое связывание антитела или связующего, как правило, описывает антитело или связующее, имеющее

аффинность по меньшей мере 10^-7 М (в виде значения Kd; т.е. предпочтительны имеющие значения Kd, меньшие чем 10^-7 М), с антителом или связующим, имеющим по меньшей мере в два раза более высокую аффинность для предопределенного антигена /целевой молекулы, чем для неспецифического антигена/целевой молекулы (например, бычий сывороточный альбумин или казеин), который не представляет собой предопределенный антиген/целевую молекулу или тесно связанный антиген/целевую молекулу. Антитела предпочтительно имеют аффинность, равную по меньшей мере 10^-7 М (в виде значения Kd; другими словами предпочтительны имеющие значения Kd менее 10^-7 М), предпочтительно по меньшей мере 10^-8 М, более предпочтительно в интервале от 10^-9 М до 10^-11 М. Значения Kd могут быть определены, например, посредством поверхностной плазмонной резонансной спектроскопии.

Конъюгаты антитело-лекарственное средство, подобным образом, показывают аффинности в этих диапазонах. На аффинность предпочтительно существенно не влияет конъюгация с лекарственными средствами (в общем, аффинность уменьшается на менее чем один порядок величины, другими словами, например, самое большее от 10^-11 М до 10^-7 М).

Антитела согласно настоящему изобретению также очень предпочтительны с точки зрения высокой селективности. Высокая селективность существует, когда антитело согласно настоящему изобретению проявляет аффинность для целевого белка, которая лучше на фактор, равный по меньшей мере 2, предпочтительно на фактор, равный по меньшей мере 5, или более предпочтительно на фактор, равный по меньшей мере 10, чем для другого независимого антигена, например, человеческого сывороточного альбумина (аффинность может быть определена, например, посредством поверхностной плазмонной резонансной спектроскопии).

Кроме того, антитела, применяемые согласно настоящему изобретению, предпочтительно являются перекрестнореагирующими. Для облегчения и лучшей интерпретации преклинических исследований, например, токсикологических или исследований активности (например, на ксенотрансплантатных мышах), предпочтительно, когда антитело, применяемое согласно настоящему

изобретению, не только связывается с человеческим целевым белком, но также связывается со специфическим целевым белком в видах, применяемых для исследований. В одном варианте выполнения настоящего изобретения антитело, применяемое согласно настоящему изобретению, в дополнение к человеческому целевому белку, перекрестно реагирует с целевым белком по меньшей мере одного другого вида. Для токсологических исследований и исследований активности предпочтительно применять виды семейства грызунов, собак и нечеловекообразных приматов.

Предпочтительными видами грызунов являются мыши и крысы. Предпочтительными нечеловекообразными приматами являются макаки-резус, шимпанзе и длиннохвостые макаки. В одном варианте выполнения настоящего изобретения антитело, применяемое согласно настоящему изобретению, которое в дополнение к человеческому целевому белку, является перекрестнореагирующим с целевым белком по меньшей мере одного другого вида, выбранного из группы видов, состоящей из мышей, крыс и длиннохвостых макак (Масаса fascicularis). Особенно предпочтительными являются антитела, применяемые согласно настоящему изобретению, которые в дополнение к человеческому целевому белку являются по меньшей мере перекрестнореагирующими с мышиным целевым белком. Предпочтительными являются перекрестнореагирующие антитела, аффинность которых для целевого белка нечеловеческого вида отличается на фактор не более 50, более предпочтительно на фактор не более 10, от аффинности для человеческого целевого белка.

Антитела, направленные против целевой молекулы раковой клетки

Целевая молекула, в отношении которой связующее, например антитело или его антиген-связывающий фрагмент, направлено, предпочтительно представляет собой целевую молекулу раковой клетки. Термин "целевая молекула раковой клетки" описывает целевую молекулу, которая более предпочтительно присутствует на одном или более видах раковых клеток того же типа ткани. Предпочтительно, целевая молекула раковой клетки селективно присутствует на одном или более видах раковых клеток, по сравнению с нераковыми клетками

того же типа ткани, причем селективно описывается по меньшей мере двукратное обогащение на раковых клетках по сравнению с нераковыми клетками того же типа ткани ("селективная целевая молекула раковой клетки"). Применение целевых молекул раковых клеток обеспечивает селективное лечение раковых клеток с применением конъюгатов согласно настоящему изобретению.

Антитела, которые являются специфическими против антигена, например, антигена раковых клеток, могут быть получены специалистом в данной области техники посредством способов, которые им известны (такие как, рекомбинантная экспрессия, например), или могут быть получены коммерческим путем (как например, от Merck KGaA, Germany). Примерами известных коммерчески доступных антител для раковой терапии являются Erbitux® (цетуксимаб, Merck KGaA), Avastin® (бевацизумаб, Roche) и Herceptin® (Трастузумаб, Genentech). Трастузумаб представляет собой рекомбинантное гуманизированное моноклональное антитело типа IgGikappa, которое в анализе на основе клетки (Kd=5 нМ) связывается с внеклеточными доменами рецептора человеческого эпидермального фактора роста с высокой аффинностью. Антитело получают рекомбинантно в СНО клетках.

В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения, целевой молекулой является селективная раковая целевая молекула.

В особенно предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения, целевой молекулой является белок.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения целевой молекулой является внеклеточная целевая молекула. В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения, внеклеточной целевой молекулой является белок.

Целевые раковые молекулы известны специалистам в данной области техники.

Примеры перечислены далее.

Примерами целевых молекул раковых клеток являются:

(1) EGF рецептор (NCBI ссылочная последовательность NP_005219.2), SEQ ID NO: 213(1210 аминокислот):

>gi|29725609|ref|NP_005219.2|EGFR предшественник рецептора [Homo sapiens]

Внеклеточный домен выделен подчеркиванием.

(2) мезотелин (SwissProt ссылка Q13421-3), SEQ ID NO: 214 (622 аминокислот):

>sp|Q13421-3|MSLN_HUMAN изоформа 2 мезотелина OS=Homo sapiens GN=MSLN

Причем мезотелин кодирован аминокислотами 296-598. Аминокислоты 37-286 кодируют "мегакариоцит-потентирующий фактор". Мезотелин заякорен в клеточной мембране посредством GPI якоря и локализуется внеклеточно.

(3) карбоангидраза IX (SwissProt ссылка Q16790), SEQ ID NO: 215 (459 аминокислот):

>sp|Q16790|CAH9_HUMAN карбоангидраза 9 OS = Homo sapiens GN=CA9 PE=1 SV=2

Внеклеточный домен выделен подчеркиванием.

(4) С4.4а (NCBI ссылочная последовательность NP_055215.2; Синоним LYPD3), SEQ ID NO: 216 (346 аминокислот):

>gi|93004088|ref|NP_055215.2| ly6/PLAUR домен-содержащий белок 3-предшественник [Homo sapiens]

Зрелый внеклеточный домен выделен подчеркиванием.

(5) CD52 (NCBI ссылочная последовательность NP_001794.2), SEQ ID NO: 217

>gi|68342030|ref|NP_001794.2| CAMPATH-1 антиген-предшественник [Homo sapiens]

(6) Her2 (NCBI ссылочная последовательность NP_004439.2), SEQ ID NO: 218

>gi|54792096|ref|NP_004439.2| рецептор тирозин-протеин киназа erbB-2 изоформа [Homo sapiens]

(7) CD20 (NCBI ссылочная последовательность NP_068769.2), SEQ ID NO: 219

>gi|23110987|ref|NP_068769.2| B-лимфоцит антиген CD20 [Homo sapiens]

(8) Лимфоцит-активирующий антиген CD30 (SwissProt ID P28908), SEQ ID NO: 220

>gi|68348711|ref|NP_001234.2| член 8 суперсемейства рецепторов фактора некроза опухоли изоформа 1-предшественник [Homo sapiens]

(9) адгезионная молекулами лимфоцитов CD22 (SwissProt ID Р20273), SEQ ID NO: 221

>gi|157168355|ref|NP_001762.2| B-клеточный рецептор CD22 изоформа 1-предшественник [Homo sapiens]

(10) поверхностный антиген миелоидных клеток CD33 (SwissProt ID Р20138), SEQ ID NO: 222

>gi|130979981|ref|NP_001763.3| поверхностный антиген миелоидных клеток CD33 изоформа 1-предшественник [Homo sapiens]

(11) трансмембранный гликопротеин NMB (SwissProt ID Q14956), SEQ ID NO: 223

>gi|52694752|ref|NP_001005340.1| трансмембранный гликопротеин NMB изоформа a-предшественник [Homo sapiens]

(12) адгезионная молекула CD56 (SwissProt ID PI 3591), SEQ ID NO: 224

>gi|94420689|ref|NP_000606.3| адгезионная молекула нервных клеток 1 изоформа 1 [Homo sapiens]

(13) поверхностная молекула CD70 (SwissProt ID Р32970), SEQ ID NO: 225

>gi|4507605|ref|NP_001243.1|CD70 антиген [Homo sapiens]

(14) поверхностная молекула CD74 (SwissProt ID P04233), SEQ ID NO: 226

>gi|10835071|ref|NP_004346.11 HLA класс II гамма цепь антигена тканевой совместимости изоформа b [Homo sapiens]

(15) антиген В-лимфоцитов CD19 (SwissProt ID Р15391), SEQ ID NO: 227

>gi|296010921|ref|NP_001171569.1| антиген B-лимфоцитов CD19 изоформа 1-предшественник [Homo sapiens]

(16) поверхностный белок муцин-1 (SwissProt ID Р15941), SEQ ID NO: 228

>gi|65301117|ref|NP_002447.4| муцин-1 изоформа 1-предшественник [Homo sapiens]

(17) поверхностный белок CD138 (SwissProt ID PI 8827), SEQ ID NO: 229

>gi|29568086|ref|NP_002988.3| синдекан-1-предшественник [Homo sapiens]

(18) Интегрин альфаV (номер доступа в Genbank: NP_002201.1), SEQ ID NO: 230

>gi|4504763|ref|NP_002201.11 интегрин альфа-V изоформа 1-предшественник [Homo sapiens]

(19) происходящего из тератокарциномы фактора роста 1 белок TDGF1 (номер доступа в Genbank: NP 003203.1), SEQ ID NO: 231

>gi|4507425|ref|NP_003203.1| происходящий из тератокарциномы фактор роста 1 изоформа 1-предшественник [Homo sapiens]

(20) предстательная железа-специфический мембранный антиген PSMA (Swiss Pro: ID: Q04609), SEQ ID NO: 232

>gi|4758398|ref|NP_004467.1| глутамат карбоксипептидаза 2 изоформа 1 [Homo sapiens]

(21) тирозин-протеинкиназа EPHA2 (Swiss Prot ID: P29317), SEQ ID NO: 233

>gi|32967311|ref|NP_004422.2| эфринового типа-A рецептор 2-предшественник [Homo sapiens]

(22) поверхностный белок SLC44A4 (номер доступа в Genbank: NP_001171515), SEQ ID NO: 234

>gi|295849282|ref|NP_001171515.1| холиновый транспортер-подобный белок 4 изоформа 2 [Homo sapiens]

(23) поверхностный белок BMPR1B (SwissProt: 000238)

(24) транспортный белок SLC7A5 (SwissProt: Q01650)

(25) эпителиальный антиген простаты STEAP1 (SwissProt: Q9UHE8)

(26) антиген овариальной карциномы MUC16 (SwissProt: Q8WXI7)

(27) транспортный белок SLC34A2 (SwissProt: O95436)

(28) поверхностный белок SEMA5b (SwissProt: Q9P283)

(29) поверхностный белок LYPD1 (SwissProt: Q8N2G4)

(30) эндотелиальный рецептор типа В EDNRB (SwissProt: Р24530)

(31) Ring белок "цинковый палец" RNF43 (SwissProt: Q68DV7)

(32) карцинома предстательной железы-ассоциированный белок STEAP2 (SwissProt: Q8NFT2)

(33) катионный канал TRPM4 (SwissProt: Q8TD43)

(34) комплементарный рецептор CD21 (SwissProt: Р20023)

(35) комплекс В-клеточный рецептор антигена-ассоциированный белок CD79b (SwissProt: Р40259)

(36) клеточный адгезионный антиген СЕАСАМ6 (SwissProt: Р40199)

(37) дипептидаза DPEP1 (SwissProt: PI6444)

(38) интерлейкиновый рецептор IL20Ralpha (SwissProt: Q9UHF4)

(39) протеогликан BCAN (SwissProt: Q96GW7)

(40) эфриновый рецептор ЕРНВ2 (SwissProt: Р29323)

(41) стволовые клетки предстательной железы - ассоциированный белок PSCA (номер доступа в Genbank: NP_005663.2)

(42) поверхностный белок LHFPL3 (SwissProt: Q86UP9)

(43) рецепторный белок TNFRSF13C (SwissProt: Q96RJ3)

(44) комплекс B-клеточный рецептор антигена-ассоциированный белок CD79a (SwissProt: P11912)

(45) рецепторный белок CXCR5 (SwissProt: Р32302)

(46) ионный канал Р2Х5 (SwissProt: Q93086)

(47) антиген лимфоцитов CD180 (SwissProt: Q99467)

(48) рецепторный белок FCRL1 (SwissProt: Q96LA6)

(49) рецепторный белок FCRL5 (SwissProt: Q96RD9)

(50) МНС класс II молекула Iа антиген HLA-DOB (номер доступа в Genbank: NP_002111.1)

(51) Т-клеточный белок VTCN1 (SwissProt: Q7Z7D3)

(52) TWEAKR (SEQ ID NO:169 (белок); SEQ ID NO: 170 (DNA).

(53) антиген лимфоцитов CD37 (Swiss Prot: P11049)

(54) FGF рецептор 2; FGFR2 (ген ID: 2263; официальное обозначение: FGFR2). FGFR2 рецептор встречается в различных (альфа, бета, IIIb, IIIc). Все сплайс-варианты могут действовать в качестве целевой молекулы.

(55) трансмембранный гликопротеин В7Н3 (CD276; ген ID: 80381)

(56) рецепторный белок ROR 1 (ген ID: 4919)

(58) поверхностный рецептор IL3RA (CD123; ген ID: 3561)

(59) СХС хемокиновый рецептор CXCR5 (CD185; ген ID 643)

(60) рецепторный белок синцитин (ген ID 30816)

В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения целевая молекула раковых клеток выбирается из группы, состоящей из целевых молекул раковых клеток (1)-(60), в частности (1), (6) и (52).

В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения связующее связывается с внеклеточной целевой молекулой раковых клеток, которая

выбирается из группы, состоящей из целевых молекул раковых клеток (1)-(60), в частности (1), (6) и (52).

В другом предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения связующее специфически связывается с внеклеточной целевой молекулой раковых клеток, которая выбирается из группы, состоящей из целевых молекул раковых клеток (1)-(60), в частности (1), (6) и (52). В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения связующее, после связывания с его внеклеточной целевой молекулой на целевой клетке, интернализуется целевой клеткой в результате связывания. Это приводит к конъюгату связующее-активное соединение, который может представлять собой иммуноконъюгат или ADC, образуемый посредством целевой клетки. Связующее затем обрабатывается, предпочтительно внутриклеточно, предпочтительно лизосомально.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения связующее представляет собой связующий белок. В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения связующее представляет собой антитело, антиген-связывающий фрагмент антитела, мультиспецифическое антитело или миметическое антитело.

Предпочтительное миметические антитела представляют собой аффитела, аднектины, антикалины, дарфины, авимеры или нанотела. Предпочтительными мультиспецифическими антителами являются биспецифические и триспецифические антитела.

В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения связующее представляет собой антитело или антиген-связывающий фрагмент антитела, более предпочтительно выделенное антитело или выделенный антиген-связывающий фрагмент антитела.

Предпочтительными антиген-связывающими фрагментами антител являются Fab, Fab', F(ab')₂ и Fv фрагменты, диатела, DAbs, линейные антитела и scFv. Особенно предпочтительными являются Fab, диатела и scFv.

В особенно предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения связующим является антитело. Особенно предпочтительными являются моноклональные антитела или их антиген-связывающие фрагменты. Кроме того, особенно предпочтительными являются человеческие гуманизированные антитела или их антиген-связывающие фрагменты.

Антитела или антиген-связывающие фрагменты антител, которые связываются с целевыми молекулами раковых клеток, могут быть получены специалистом в данной области техники известными способами, такими как, например, химический синтез или рекомбинантная экспрессия. Связующие для целевых молекул раковых клеток могут быть приобретены коммерческим путем или могут быть получены специалистом в данной области техники, применяя известные способы, такие как, например, химический синтез или рекомбинантная экспрессия. Другие способы получения антител или антиген-связывающих фрагментов антител описываются в WO 2007/070538 (смотрите стр. 22 "Antibodies"). Специалистам в данной области техники известно как, так называемые, библиотеки фагофых отображений (например, Morphosys HuCAL Gold) могут быть составлены и применяться для открытия антител и антиген-связывающих фрагментов антител (смотрите WO 2007/070538, стр. 24 ff и Пример АК 1 на стр. 70, Пример АК 2 на стр. 72). Другие способы получения антител, в которых применяются библиотеки ДНК из В клеток, описываются, например, на стр. 26 (WO 2007/070538). Способы гуманизации антител описываются на стр. 30-32 WO 2007070538 и подробно в Queen, et al., Pros. Natl. Acad. Sci. USA 86:10029-10033, 1989, или в WO 90/0786. Кроме того, способы рекомбинантной экспрессии белков в общем и в частности антител известны специалистам в данной области техники (смотрите, например, в Berger and Kimrnel (Guide to Molecular Cloning Techniques, Methods in Enzymology, Vol. 152, Academic Press, Inc.); Sambrook, et al., (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, (Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Cold Spring Harbor, N.Y.; 1989) Vol. 1-3); Current Protocols in Molecular Biology, (F.M. Ausabel et al. [Eds.], Current Protocols, Green Publishing Associates, Inc. / John Wiley & Sons, Inc.); Harlow et al., (Monoclonal Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1988, Paul [Ed.]); Fundamental Immunology, (Lippincott Williams & Wilkins (1998)); and Harlow, et al.,

(Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1998)). Специалисту в данной области техники известны соответствующие векторы, промоторы и сигнальные пептиды, которые необходимы для экспрессии белка/антитела. Стандартные способы также описываются в WO 2007/070538 на стр. 41-45. Способы получения IgGI антитела описываются, например, в WO 2007/070538, в Примере 6, на стр. 74 ff. Способы, которые позволяют определять интернализацию антитела после связывания с его антигеном известны специалистам в данной области техники и описываются, например, в WO 2007/070538 на стр. 80 Специалист в данной области техники способен применять способы, описанные в WO 2007/070538, которые применялись для получения антител карбоангидразы IX (Mn), аналогично получению антител с другой специфичностью к целевым молекулам.

анти-EGFR антитела

Примеры антител, которые связываются с раковыми целевыми молекулами EGFR, являются Цетуксимаб (INN номер 7906), Панитумумаб (INN номер 8499) и Нимотузумаб (INN номер 8545). Цетуксимаб (номер доступа в банке лекарственных средств DB00002) представляет собой химерное анти-EGFRl антитело, которое продуцируется в SP2/0 клетках мышиной меланомы и поставляется компанией ImClone Systems Inc/Merck KgaA/Bristol-Myers Squibb Co. Цетуксимаб указывается для лечения метастазирующей, EGFR экспрессирующей колоректальной карциномы с геном-K-Ras дикого типа. Он имеет аффинность, равную 10^-10 М.

Последовательность:

Легкая цепь Цетуксимаба (kappa), SEQ ID NO: 235:

Тяжелая цепь Цетуксимаба, SEQ ID NO: 236:

Панитумумаб (INN номер 8499) (номер доступа в банке лекарственных средств DB01269) представляет собой рекомбинантное моноклональное человеческое IgG2 антитело, которое специфически связывается с человеческим EGF рецептором 1 и поставляется компанией Abgenix / Amgen. Панитумумаб образуется в результате иммунизации трансгенных мышей (XenoMouse). Эти мыши способны продуцировать человеческий иммуноглобулин (легкая и тяжелая цепи). Специфический B-клеточный клон был выделен, который продуцирует антитела против EGFR, и этот клон был иммортализован клетками СНО (клетки яичника китайского хомячка). Эти клетки в настоящее время применяются для получения 100% человеческих антител. Панитумумаб указывается для лечения EGFR-экспрессирующей, метастазирующей колоректальной карциномы, которая резистентна к лечению химиотерапией на основе фторпиримидина, оксалиплатина и иринотекана. Он имеет аффинность, равную 10^-11 М.

Последовательность:

Легкая цепь Панитумумаба (kappa), SEQ ID NO: 237:

Тяжелая цепь Панитумумаба, SEQ ID NO: 238:

Нимотузумаб (INN номер 8545) (ЕР 00586002, ЕР 00712863) представляет собой гуманизированное моноклональное IgG1 антитело, которое специфически связывается с человеческим EGF рецептором 1 и поставляется фирмой YM BioScienecs Inc. (Mississauga Canada). Оно продуцируется несекретирующими клетками NSO (клеточная линия млекопитающих). Нимотузумаб одобрен для лечения опухолей головы и шеи, весьма злокачественной астроцитомы и мультиформ глиобластомы (нет в EU и US) и панкреатической карциномы (Orphan drug, ЕМА). Он имеет аффинность, равную 10^-8 М.

Легкая цепь Нимотузумаба, SEQ ID NO: 239:

Тяжелая цепь Нимотузумаба, SEQ ID NO: 240:

Другие варианты выполнения антител EGFR являются следующими:

- Залутумумаб / 2F8 / HuMax-EGFR, компания Genmab A/S (WO 02/100348, WO 2004/056847, INN номер 8605)

- Нецитумумаб / 11F8, ImClone / IMC-11F8, компания ImClone Systems Inc [Eli Lilly & Co] (WO 2005/090407 (ЕР 01735348-A1, US 2007/0264253-A1, US 7,598,350, WO 2005/090407-A1), INN номер 9083)

- Матузумаб / анти-EGFR MAb, Merck KGaA / анти-EGFR MAb, Takeda / EMD 72000 / EMD-6200 / EMD-72000 и EMD-55900 / MAb 425 / моноклональное антитело 425, компания Merck KGaA / Takeda (WO 92/15683, INN номер 8103 (Матузумаб))

- RG-7160 / GA-201 / GA201 / R-7160 / R7160 / RG7160 / RO-4858696 / RO-5083945 / RO4858696 / RO5083945, компания Glycart Biotechnology AG (Roche Holding AG) (WO 2010/112413-A1, WO 2010/115554)

- GT-MAB 5.2-GEX / CetuGEX, компания Glycotope GmbH (WO 2008/028686-A2 (ЕР 01900750-A1, ЕР 01911766-A1, ЕР 02073842-A2, US 2010/0028947-A1)

- ISU-101, компания Isu Abxis Inc (ISU Chemical Co Ltd) / Scancell (WO 2008/004834-A1)

- ABT-806 / mAb-806 / ch-806 / анти-EGFR моноклональное антитело 806, компания Ludwig Institute for Cancer Research / Abbott / Life Science Pharmaceuticals (WO 02/092771, WO 2005/081854 и WO 2009/023265)

- SYM-004 (состоит из двух химерных IgG1 антител (992 и 1024)), компания Symphogen A/S (WO 2010/022736-А2)

- MR1-1 /MR1-1KDEL, компания IVAX Corp (Teva Pharmaceutical Industries Ltd) (Duke University), (патент: WO2001/062931-A2)

- Антитело против мутанта с делецией, EGFRvIII, компания Amgen/Abgenix (WO 2005/010151, US 7,628,986)

- SC-100, компания Scancell Ltd (WO 01/088138-A1)

- MDX-447 / EMD 82633 / BAB-447 / H 447 / MAb, EGFR, Medarex/Merck KgaA, компания Bristol-Myers Squibb (US) / Merck KGaA (DE) / Takeda (JP), (WO 91/05871, WO 92/15683)

- анти-EGFR-Mab, компания Xencor (WO 2005/056606)

- DXL-1218 / анти-EGFR моноклональное антитело (рак), InNexus, компания InNexus Biotechnology Inc, Pharmaprojects PH048638

В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения анти-EGFR антитела выбираются из группы, состоящей из Цетуксимаба, Панитумумаба, Нимотузумаба, Залутумумаба, Нецитумумаба, Матузумаба, RG-716, GT-MAB 5.2-GEX, ISU-101, АВТ-806, SYM-004, MR1-1, SC-100, MDX-447 и DXL-1218.

В особенно предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения анти-EGFR антитела выбираются из группы, состоящей из Цетуксимаба, Панитумумаба, Нимотузумаба, Залутумумаба, Нецитумумаба и Матузумаба.

Специалисту в данной области техники известны способы, которые могут применяться для получения других антител, из CDR областей вышеупомянутых антител, посредством вариаций последовательности, причем эти другие антитела имеют подобную или более хорошую аффинность и/или специфичность в отношении целевой молекулы.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения анти-EGFR антитела или антиген-связывающие фрагменты антител выбираются из группы, состоящей из

антител или антиген-связывающих фрагментов антител, содержащих три области CDR легкой цепи и три области CDR тяжелой цепи одного из следующих антител: Цетуксимаб, Панитумумаб, Нимотузумаб, Залутумумаб, Нецитумумаб, Матузумаб, RG-716, GT-MAB 5.2-GEX, ISU-101, АВТ-806, SYM-004, MR1-1, SC-100, MDX-447 и DXL-1218.

антител или антиген-связывающих фрагментов антител, содержащих три области CDR легкой цепи и три области CDR тяжелой цепи одного из следующих антител: Цетуксимаб, Панитумумаб, Нимотузумаб, Залутумумаб, Нецитумумаб, Матузумаб. Эти антитела и их антиген-связывающие фрагменты включены в настоящую заявку посредством ссылки, и они могут применяться в контексте настоящего изобретения.

анти-карбоангидраза IX антитело

Примеры антител, которые связываются с целевой молекулой раковых клеток карбоангидразой IX, описываются в WO 2007/070538-А2 (например, пункты 1-16).

В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения анти-карбоангидраза IX антитела или антиген-связывающие фрагменты антител выбираются из группы, состоящей из анти-карбоангидраза IX антител или антиген-связывающих фрагментов антител 3ее9 (пункт 4(а) в WO 2007/070538-А2), 3ef2 (пункт 4(b) в WO 2007/070538-А2), 1е4 (пункт 4(с) в WO 2007/070538-А2), 3а4 (пункт 4(d) в WO 2007/070538-А2), 3ab4 (пункт 4(е) в WO 2007/070538-А2), 3ah10 (пункт 4(f) в WO 2007/070538-А2), 3bb2 (пункт 4(g) в WO 2007/070538-А2), 1aa1 (пункт 4(h) в WO 2007/070538-А2), 5a6 (пункт 4(i) в WO 2007/070538-А2) и 5aa3 (пункт 4(j) в WO 2007/070538-А2).

анти-С4.4а антитела:

Согласно настоящему изобретению могут применяться антитела С4.4а.

Примеры антител С4.4а и их антиген-связывающих фрагментов описываются в WO 2012/143499 А2. Посредством ссылки все антитела из WO 2012/143499 А2 включены в описание настоящего изобретения, и они могут применяться в настоящем изобретении. Последовательности антител приводятся в Таблице 1 в WO 2012/143499 А2, где в каждой строке показаны соответствующие CDR аминокислотные последовательности вариабельной легкой цепи или вариабельной тяжелой цепи антитела, приведенного в столбце 1.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения анти-С4.4а антитела или их антиген-связывающие фрагменты, после связывания с клеткой, экспрессирующей С4.4а, интернализуются клеткой.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения анти-С4.4а антитела или их антиген-связывающие фрагменты содержат по меньшей мере одну, две или три CDR аминокислотных последовательности антитела, перечисленного в Таблице 1 в WO 2012/143499 А2 или в Таблице 2 в WO 2012/143499 А2. Предпочтительные варианты выполнения таких антител, подобным образом, перечисляются в WO 2012/143499 А2 и включены в настоящую заявку посредством ссылки.

анти-HER2 антитело:

Примером антитела, связывающегося с целевой молекулой раковых клеток Her2, является Трастузумаб (Genentech). Трастузумаб представляет собой гуманизированное антитело, применяемое, среди прочего, для лечения рака молочной железы.

Другими примерами антител, связывающихся с HER2, являются, в дополнение к Трастузумабу (INN 7637, CAS NR: RN: 180288-69-1) и Пертузумабу (Cas NR: 380610-27-5), также антитела, описанные в WO 2009/123894-А2, WO 200/8140603-А2 или в WO 2011/044368-А2. Примером конъюгата анти-HER2 является Трастузумаб-эмтанзин (INN номер 9295). Эти антитела и их антиген-связывающие фрагменты включены в настоящую заявку посредством ссылки, и они могут применяться в контексте настоящего изобретения.

анти-CD20 антитела:

Примером антитела, связывающегося с целевой молекулой раковых клеток CD20 является Ритуксимаб (Genentech). Ритуксимаб (CAS номер: 174722-31-7) представляет собой химерное антитело, применяемое для лечения неходжкинской лимфомы. Эти антитела и их антиген-связывающие фрагменты включены в настоящую заявку посредством ссылки, и они могут применяться в контексте настоящего изобретения.

анти-CD52 антитела

Примером антитела, связывающегося с целевой молекулой раковых клеток CD52 является Алемтузумаб (Genzyme). Алемтузумаб (CAS номер: 216503-57-0) представляет собой гуманизированное антитело, применяемое для лечения хронической лимфоцитарной лейкемии. Эти антитела и их антиген-связывающие фрагменты включены в настоящую заявку посредством ссылки, и они могут применяться в контексте настоящего изобретения.

анти-Мезотелин антитело:

Примерами анти-Мезотелин антител являются, например, описанные в WO 2009/068204. Все антитела, описанные в WO 2009/068204, включены в настоящую заявку посредством ссылки, так что эти антитела могут применяться в контексте настоящего изобретения.

Анти-Мезотелин антитела, применяемые в соответствии с настоящим изобретением, также являются в значительной степени предпочтительными для инвариантного связывания с Мезотелином. Инвариантное связывание характеризуется, например, тем, что антитело, применяемое в соответствии с настоящим изобретением, связывается с эпитопом Мезотелина, который не может быть замаскирован другим внеклеточным белком. Таким другим внеклеточным белком является, например, белок антиген рака яичников 125 (СА125). Антитела, которые предпочтительно применяются, характеризуются тем, что их связывание с Мезотелином не блокируется посредством СА125.

анти-CD30 антитела

Примерами антител, которые связываются с целевой молекулой раковых клеток CD30 и могут применяться для лечения рака, например, неходжкинской лимфомы, являются брентуксимаб, иратумумаб и Антитела, описанные в WO 2008/092117, WO 2008/036688 или WO 2006/089232. Примером анти-CD30 Конъюгата является Брентуксимаб-Ведотин (INN номер 9144). Эти антитела и их

антиген-связывающие фрагменты включены в настоящую заявку посредством ссылки, и они могут применяться в контексте настоящего изобретения.

анти-CD22 антитела

Примерами антител, которые связываются с целевой молекулой раковых клеток CD22 и могут применяться для лечения рака, например, лимфомы, являются инотузумаб или эпратузумаб. Примером анти - CD22 Конъюгата является инотузумаб-озагамицин (INN номер 8574), или анти-CD22-ММАЕ и анти-CD22-МС-ММАЕ (CAS RN: 139504-50-0 или 474645-27-7). Эти антитела и их антиген-связывающие фрагменты включены в настоящую заявку посредством ссылки, и они могут применяться в контексте настоящего изобретения.

анти-CD33 антитела

Примерами антител, которые связываются с целевой молекулой раковых клеток CD33 и могут применяться для лечения рака, например, лейкемии, являются гемтузумаб или линтузумаб (INN 7580). Примером анти-CD33 Конъюгата является гемтузумаб-озагамицин. Эти антитела и их антиген-связывающие фрагменты включены в настоящую заявку посредством ссылки, и они могут применяться в контексте настоящего изобретения.

анти-NMB антитела

Примером антитела, которое связывается с целевой молекулой раковых клеток NMB и может применяться для лечения рака, например, меланомы или рака молочной железы, является глембатумумаб (INN 9199). Примером анти-NMB Конъюгата является глембатумумаб - ведотин (CAS RN: 474645-27-7). Эти антитела и их антиген-связывающие фрагменты включены в настоящую заявку посредством ссылки, и они могут применяться в контексте настоящего изобретения.

Анти-CD56 антитела

Примером антитела, которое связывается с целевой молекулой раковых клеток CD56 и может применяться для лечения рака, например, множественной миеломы, немелкоклеточной карциномы, МСС или рака яичников, является лорвотузумаб. Примером анти-CD56 Конъюгата является лорвотузумаб - мертанзин (CAS RN: 139504-50-0). Эти антитела и их антиген-связывающие фрагменты включены в настоящую заявку посредством ссылки, и они могут применяться в контексте настоящего изобретения.

анти-CD70 антитела

Примеры антител, которые связываются с целевой молекулой раковых клеток CD70 и могут применяться для лечения рака, например, неходжкинской лимфомы или почечно-клеточного рака, описываются в WO 2007/03 8637-А2 или WO 2008/070593-А2. Примером анти-CD70 Конъюгата является SGN-75 (CD70 MMAF). Эти антитела и их антиген-связывающие фрагменты включены в настоящую заявку посредством ссылки, и они могут применяться в контексте настоящего изобретения.

анти-CD74 антитела

Примером антитела, которое связывается с целевой молекулой раковых клеток CD74 и может применяться для лечения рака, например, множественной миеломы, является милатузумаб. Примером анти-CD74 Конъюгата является милатузумаб-доксорубицин (CAS RN: 23214-92-8). Эти антитела и их антиген-связывающие фрагменты включены в настоящую заявку посредством ссылки, и они могут применяться в контексте настоящего изобретения.

анти-CD19 антитела

Примеры антитела, которое связывается с целевой молекулой раковых клеток CD19 и может применяться для лечения рака, например, неходжкинской

лимфомы, описываются в WO 2008/031056-А2. Другие антитела и примеры анти-CD19 конъюгатов (SAR3419) описываются в WO 2008/047242-A2. Эти антитела и их антиген-связывающие фрагменты включены в настоящую заявку посредством ссылки, и они могут применяться в контексте настоящего изобретения.

анти-муцин антитела

Примерами антител, которые связываются с целевой молекулой раковых клеток Mucin-1 и могут применяться для лечения рака, например, неходжкинской лимфомы, является кливатузумаб, или эти антитела описываются в WO 2003/106495-А2, WO 2008/028686-A2. Примеры анти-муцин конъюгатов описываются в WO 2005/009369-A2. Эти антитела и их антиген-связывающие фрагменты включены в настоящую заявку посредством ссылки, и они могут применяться в контексте настоящего изобретения.

анти-CD138 антитела

Примеры антител, которые связываются с целевой молекулой раковых клеток CD138, и их конъюгатов, которые могут применяться для лечения рака, например, множественной миеломы, описываются в WO 2009/080829-A1, WO 2009/080830-А1. Эти антитела и их антиген-связывающие фрагменты включены в настоящую заявку посредством ссылки, и они могут применяться в контексте настоящего изобретения.

анти-интегрин-alphaV антитела

Примерами антител, которые связываются с целевой молекулой раковых клеток интегрин alphaV и могут применяться для лечения рака, например, меланомы, саркомы или карциномы, являются интетумумаб (Cas RN: 725735-28-4), абциксимаб (Cas-RN: 143653-53-6), этарацизумаб (Cas-RN: 892553-42-3), или эти антитела описываются в US 7,465,449, ЕР 719859-А1, WO 2002/012501-A1 или WO 2006/062779-A2. Примерами анти-интегрин AlphaV конъюгатов являются интетумумаб -DM4 и ADC, описанные в WO 2007/024536-A2. Эти антитела и их

анти-TDGF1 антитела

Примерами антител, которые связываются с целевой молекулой раковых клеток TDGF1 и могут применяться для лечения рака, являются антитела, описанные в WO 02/077033-A1, US 7,318,924, WO 2003/083041-А2 и WO 2002/088170-A2. Примеры анти-TDGF1 конъюгатов описываются в WO 2002/088170-A2. Эти антитела и их антиген-связывающие фрагменты включены в настоящую заявку посредством ссылки, и они могут применяться в контексте настоящего изобретения.

анти-PSMA антитела

Примерами антител, которые связываются с целевой молекулой раковых клеток PSMA и могут применяться для лечения рака, например, карциномы предстательной железы, являются антитела, описанные в WO 97/35616-А1, WO 99/47554-А1, WO 01/009192-A1 и WO 2003/034903. Примеры анти-PSMA конъюгатов описываются в WO 2009/026274-A1 и WO 2007/002222. Эти антитела и их антиген-связывающие фрагменты включены в настоящую заявку посредством ссылки, и они могут применяться в контексте настоящего изобретения.

анти-ЕРНА2 антитела

Примеры антител, которые связываются с целевой молекулой раковых клеток ЕРНА2, для получения конъюгатов и для лечения рака, описываются в WO 2004/091375-А2. Эти антитела и их антиген-связывающие фрагменты включены в настоящую заявку посредством ссылки, и они могут применяться в контексте настоящего изобретения.

анти-SLC44A4 антитела

Примеры антител, которые связываются с целевой молекулой раковых клеток SLC44A4, для получения конъюгатов и для лечения рака, например, карциномы поджелудочной железы или предстательной железы, описываются в WO 2009/033094-A2 и US 2009/0175796-A1. Эти антитела и их антиген-связывающие фрагменты включены в настоящую заявку посредством ссылки, и они могут применяться в контексте настоящего изобретения.

анти-HLA-DOB антитела

Примером антитела, которое связывается с целевой молекулой раковых клеток HLA-DOB, является антитело Lym-1 (Cas-RN: 301344-99-0), которое может применяться для лечения рака, например, неходжкинской лимфомы. Примеры анти-HLA-DOB конъюгатов раскрываются, например, в WO 2005/081711-А2. Эти антитела и их антиген-связывающие фрагменты включены в настоящую заявку посредством ссылки, и они могут применяться в контексте настоящего изобретения.

анти-VTCN1 антитела

Примеры антител, которые связываются с целевой молекулой раковых клеток VTCN1, которые могут применяться для получения конъюгатов и для лечения рака, например, рака яичников, рака поджелудочной железы, легких или молочной железы, описываются в WO 2006/074418-А2. Эти антитела и их антиген-связывающие фрагменты включены в настоящую заявку посредством ссылки, и они могут применяться в контексте настоящего изобретения.

анти--FGFR2 антитела

Согласно настоящему изобретению могут применяться анти-FGFR2 антитела.

Примеры анти-FGFR2 антител и антиген-связывающих фрагментов раскрываются в WO 2013076186. Все антитела, описанные в WO 2013076186, включены в настоящий документ посредством ссылки и могут применяться согласно настоящему изобретению. Последовательности антител показаны в Таблице 9 и Таблице 10 документа WO 2013076186. Предпочтительными являются антитела, антиген-связывающие фрагменты и варианты антител, полученные из антител, обозначенных M048-D01 и M047-D08. Предпочтительное анти-FGFR2 связывается с различными сплайс-вариантами, известными как FGFR2.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения анти- FGFR2 антитела или их антиген-связывающие фрагменты, после связывания с клеткой, экспрессирующей FGFR2, интернализируются клеткой.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения анти- FGFR2 антитела или антиген-связывающие фрагменты антител содержат по меньшей мере одну, две или три CDR аминокислотные последовательности антител, перечисленные в Таблице 9 или Таблице 10 в WO 2013076186. Предпочтительные варианты выполнения настоящего изобретения, подобным образом, перечислены в WO 2013076186 и включены в настоящий документ посредством ссылки.

Анти-TWEAKR антитела

В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения, когда анти-TWEAKR-антитело или его антиген-связывающий фрагмент применяются в способах согласно настоящему изобретению, это антитело или фрагмент выбираются из описанных далее. Кроме того, антитела, которые связываются с TWEAKR, известны специалистам в данной области техники, смотрите, например, WO 2009/020933(A2) или WO 2009140177 (А2).

Настоящее изобретение относится, в частности, к конъюгатам с антителами или их антиоген-связывающими фрагментами или их вариантами, которые приводят к сильной активации TWEAKR (SEQ ID NO: 169 (белок); SEQ ID NO: 170 (ДНК)),

приводя к сильной индукции апоптоза в различных раковых клетках, сверхэкспрессирующих TWEAKR.

Агонистическая активность TWEAKR в отношении индукции апоптоза и ингибирования пролиферации уже описанных анти-TWEAKR антител (например, PDL-192) ограничено и не достигает эффективности эндогенного лиганда TWEAK. Этот недостаток агонистической активности не основан на уменьшенной аффинности, так как эти антитела связываются с TWEAKR с аффинностями, которые, по сравнению с эндогенным лигандом TWEAK, находятся в подобном диапазоне (Michaelson JS et al, MAbs. 2011 Jul-Aug; 3(4):362-75; Culp PA et al, Clin Cancer Res. 2010 Jan 15; 16(2):497-508), и даже антитела, имеющие более высокую аффинность связывания, не обязательно проявляют более эффективную сигнальную активность (Culp PA, et al, Clin Cancer Res. 2010 Jan 15; 16(2):497-508). Кроме того, было показано, что противоопухолевая активность уже описанных антител зависит от функции Fc эффектора, и было показано, что ADCC играет важную роль для in-vivo эффективности в мышиных моделях.

Получение анти-TWEAKR антител

Полная фаговая библиотека человеческих антител (Hoet RM et al, Nat Biotechnol 2005; 23(3):344-8) применялась для выделения TWEAKR-специфических человеческих моноклональных антител согласно настоящему изобретению посредством пэннинга белков (Hoogenboom H.R., Nat Biotechnol 2005; 23(3):1105-16), применяя димерные Fc-слитые внеклеточные домены человеческого и мышиного TWEAKR в качестве иммобилизованной мишени. 11 различных фагов Fab были идентифицированы, и соответствующие антитела клонировали в млекопитающий EgG экспрессионный вектор, который обеспечивает СН2-СН3 домены, отсутствующие в растворимом FAb. После идентификации предпочтительных антител, они были экспрессированы в виде IgG полной длины. Эти конструкции были экспрессированы, например, в клетках млекопитающих, как описано Tom et al., Kapitel 12 in Methods Express: Expression Systems herausgegeben von Micheal R. Dyson and Yves Durocher, Scion Publishing Ltd, 2007

(смотрите Пример АК 1). Антитела очистили посредством хроматографии на основе белка А и затем охарактеризовали посредством их аффинности связывания с растворимым мономерным TWEAKR, применяя анализы ELISA и BIAcore, как описано в Примере АК 2. Для определения характеристик клеточного связывания анти-TWEAKR антител, связывание было протестировано посредством проточной цитометрии на ряде клеточных линий (НТ29, HS68, HS578). Анализы репортерных генов NFκB осуществляли для изучения агонистической активности всех 11 идентифицированных антител (человеческий IgG1). Антитело, имеющее самую высокую in-vitro активность (ТРР-883), было выбрано дальнейшего развития активности и аффинности (подробности смотрите в Примере АК 1). Вариант с одним замещением, имеющий улучшенную агонистическую активность, был обнаружен: G102T для CDR-H3. Наконец, 7 вариантов были выбраны на основе увеличенной аффинности по сравнению с наилучшим вариантом с одним замещением G102T. Их соответствующая ДНК была клонирована в млекопитающем IgG экспрессирующем векторе и исследована в отношении функциональной активности в упомянутом выше анализе репортерных генов NF-kappaB. Наконец, полученные последовательности сравнили с последовательностями человеческих зародышевых клеток, и отклонения без какого-либо значительного эффекта на аффинность и эффективность были адаптированы. Следующие антитела были получены посредством скрининга библиотеки антител и посредством развития аффинности и/или активности: "ТРР-2090", "ТРР-2149", "ТРР-2093", "ТРР-2148", "ТРР-2084", "ТРР-2077", "ТРР-1538", "ТРР-883", "ТРР-1854", "ТРР-1853", "ТРР-1857", и "ТРР-1858".

Антитела согласно настоящему изобретению, кроме того, могут быть получены способами, известными в данной области техники, такими как скрининг фаговых отображений антител (например, смотрите Hoet RM et al, Nat Biotechnol 2005; 23(3):344-8), хорошо установленной методики гибридом (например, смотрите and Milstein Nature. 1975 Aug 7; 256(5517):495-7), или иммунизации мышей, среди прочего, иммунизации hMAb мышей (например, VelocImmune mouse®).

Частные варианты выполнения анти-TWEAKR антител

В одном варианте выполнения настоящего изобретения обеспечиваются антитела или их антиген-связывающие фрагменты или их варианты, показывающие сильную индукцию каспазы 3/7 в одной или более TWEAKR-экспрессирующих клеточных линиях. В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения одна или более TWEAKR-экспрессирующих клеточных линий выбираются из группы, состоящей из WiDr, A253, NCI-H322, НТ29 и 786-O. "Индукция каспазы 3/7" может быть измерена обычными способами, известными в данной области техники, включая описанные в настоящей заявке. В одном варианте выполнения настоящего изобретения "индукция каспазы 3/7" определяется согласно настоящему изобретению посредством определения активности с использованием раствора каспазы 3/7 (Promega, #G8093) и измерения люминесценции на VICTOR V (Perkin Elmer). В конце периода инкубации, активность каспазы 3/7 определили, и фактор индукции каспазы 3/7 определили по сравнению с необработанными клетками. Антитело, которое указывается как показывающее "сильную индукцию" каспазы 3/7, когда фактор индукции равен более 1,2, предпочтительно более 1,5, даже более предпочтительно более 1,8, еще более предпочтительно более 2,1, еще более предпочтительно более 2,5. Обеспечиваются анти-TWEAKR антитела, приводящие к сильной индукции каспазы 3/7 в НТ29 клетках, по сравнению с уже описанными агонистическими антителами [например, PDL-192(TPP-1104), Р4А8(ТРР-1324), 136.1(ТРР-2194)], а также по сравнению с 300 нг/мл рекомбинантного человеческого TWEAK. Эта сильная активность индукции каспазы 3/7 в раковых клетках наблюдалась также в WiDr-, A253-, NIC-H322- и 786-0 клетках, где в большинстве экспериментов исследованные антитела согласно настоящему изобретению индуцировали более высокие факторы изменения по сравнению со ссылочными антителами [PDL-192(TPP-1104), Р4А8(ТРР-1324)] и с 300 нг/мл TWEAK. Некоторые антитела согласно настоящему изобретению связываются с TWEAKR только с умеренной аффинностью (>10 нМ), которая, ясным образом, меньше аффинности эндогенного лиганда TWEAK, а также меньше по сравнению с другими известными агонистическими антителами. Это свойство обеспечивает другие

возможные преимущества, такие как, например, потенциально более глубокое проникновение в опухоль.

В этом отношении, в одном варианте выполнения настоящего изобретения является обеспечиваются антитела или их антиген-связывающие фрагменты, специфически связывающиеся с TWEAKR при новом эпитоме, отличающемся специфическим связыванием с аспартатом (D) при положении 47 (D47) TWEAKR (SEQ ID NO: 169; смотрите также Фиг. 1). Зависимости, идентифицированные для определенных аминокислот TWEAKR для взаимодействия с антителом, коррелируют с агонистической активностью, определенной для этих антител. Природный лиганд TWEAK показывает эффективную активацию TWEAKR и связывается в зависимости от лейцина 46 в цистеин-обогащенном домене TWEAKR (Pellegrini et al, FEBS 280:1818-1829). P4A8 показывает очень низкую агонистическую активность и взаимодействует по меньшей мере частично с доменами вне цистеин-обогащенного домена TWEAKR. PDL-192 показывает умеренную агонистическую активность и связывается в зависимости от R56 с цистеин-обогащенным доменом, но противоположно сайту-связывания TWEAK. Антитела согласно настоящему изобретению (например, ТРР-2090) связываются в зависимости от D47, и TWEAK связывается в зависимости от L46. Таким образом, TWEAK связывается с подобным, но другим сайтом связывания (Фиг. 7). Соответственно, антитела согласно настоящему изобретению, проявляющие сильную агонистическую активность, связываются с новым эпитопом (D47-зависимый) для антител, ассоциированных с очень высокой агонистической активностью.

Аминокислоты в положении 47 (D47) TWEAKR (SEQ ID NO: 169) рассматриваются как критические для связывания антител согласно настоящему изобретению, что означает, что антитело специфически связывается с D в положении 47 (D47) TWEAKR (SEQ ID NO: 169), когда антитело теряет более 20%, альтернативно более 30%, альтернативно более 40%, альтернативно более 50%, альтернативно более 60%, альтернативно более 70%, альтернативно более 80%, альтернативно более 90%, альтернативно 100% его сигнала ELISA посредством модификации этого остатка в аланин, как описано в Примере АК 2 и

на Фиг. 6. Альтернативно, антитело специфически связывается с D в положении 47 (D47) TWEAKR (SEQ ID NO: 169), когда антитело теряет более 20%, альтернативно более 30%, альтернативно более 40%, альтернативно более 50%, альтернативно более 60%, альтернативно более 70%, альтернативно более 80%, альтернативно более 90%, альтернативно 100% его сигнала ELISA для ТРР-2614 по сравнению с ТРР-2203. Предпочтительно, антитело специфически связывается с D в положении 47 (D47) TWEAKR (SEQ ID NO: 169), когда антитело теряет более 80% его сигнала ELISA для ТРР-2614 по сравнению с ТРР-2203.

В настоящей заявке приводится ссылка на следующие предпочтительные антитела согласно настоящему изобретению, как показано в приведенной далее Таблице: "ТРР-2090", "ТРР-2149", "ТРР-2093", "ТРР-2148", "ТРР-2084", "ТРР-2077", "ТРР-1538", "ТРР-883", "ТРР-1854", "ТРР-1853", "ТРР-1857", "ТРР-1858".

ТРР-2090 представляет собой антитело, которое содержит область тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 2, а также область легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 1.

ТРР-2149 представляет собой антитело, которое содержит область тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 12, а также область легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 11.

ТРР-2093 представляет собой антитело, которое содержит область тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 22, а также область легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 21.

ТРР-2148 представляет собой антитело, которое содержит область тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 32, а также область легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 31.

ТРР-2084 представляет собой антитело, которое содержит область тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 42, а также область легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 41.

ТРР-2077 представляет собой антитело, которое содержит область тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 52, а также область легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 51.

ТРР-1538 представляет собой антитело, которое содержит область тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 62, а также область легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 61.

ТРР-883 представляет собой антитело, которое содержит область тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 72, а также область легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 71.

ТРР-1854 представляет собой антитело, которое содержит область тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 82, а также область легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 81.

ТРР-1853 представляет собой антитело, которое содержит область тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 92, а также область легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 91.

ТРР-1857 представляет собой антитело, которое содержит область тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 102, а также область легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 101.

ТРР-1858 представляет собой антитело, которое содержит область тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 112, а также область легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 111.

ТРР-2090 представляет собой антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 10, а также вариабельную область легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 9.

ТРР-2149 представляет собой антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 20, а также вариабельную область легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 19.

ТРР-2093 представляет собой антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 30, а также вариабельную область легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 29.

ТРР-2148 представляет собой антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 40, а также вариабельную область легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 39.

ТРР-2084 представляет собой антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 50, а также вариабельную область легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 49.

ТРР-2077 представляет собой антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 60, а также вариабельную область легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 59.

ТРР-1538 представляет собой антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 70, а также вариабельную область легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 69.

ТРР-883 представляет собой антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 80, а также вариабельную область легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 79.

ТРР-1854 представляет собой антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 90, а также вариабельную область легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 89.

ТРР-1853 представляет собой антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 100, а также вариабельную область легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 99.

ТРР-1857 представляет собой антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 110, а также вариабельную область легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 109.

ТРР-1858 представляет собой антитело, которое содержит вариабельную область тяжелой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 120, а также вариабельную область легкой цепи, соответствующую SEQ ID NO: 119.

1. Конъюгат связующего с одной или более молекулами активного соединения, причем молекула активного соединения представляет собой ингибитор кинезинового белка веретена, присоединенный к связующему через линкер L, причем связующее представляет собой антитело или его антигенсвязывающий фрагмент и причем ингибитор кинезинового белка веретена имеет следующую формулу (IIa):

в которой

Х₁ представляет собой N, Х₂ представляет собой N и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой СН или CF, Х₂ представляет собой С и Х₃ представляет собой N; или

X₁ представляет собой NH, Х₂ представляет собой С и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой СН, Х₂ представляет собой N и Х₃ представляет собой С;

R¹ представляет собой Н, -L-#1, -MOD или -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, -NHY³, -OY³, -SY³, галоген, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, -(CH₂CH₂O)_0-3-(CH₂)_0-3Z' или -CH(CH₂W)Z' и Y³ - Н или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, NH₂, SO₃H, СООН, -NH-CO-CH₂-CH₂-CH(NH₂)COOH или -(CO-NH-CHY⁴)_1-3COOH; причем W представляет собой Н или ОН, причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, С_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил;

R² представляет собой -L-#1, Н, -MOD, -CO-CHY⁴-NHY⁵ или -(CH₂)_0-3Z или R² и R⁴ вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-CH₂-, причем R¹⁰ представляет собой L-#1, Н, NH₂, SO₃H, СООН, SH или ОН;

причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂ или -(CH₂)_0-3Z' и Y³ представляет собой Н или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН;

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил и Y⁵ представляет собой Н или -CO-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶ представляет собой линейный или разветвленный С_1-6алкил;

R⁴ представляет собой -L-#1, Н, -CO-CHY⁴-NHY⁵ или -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³,

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, С_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил и Y⁵ представляет собой Н или -CO-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶ представляет собой линейный или разветвленный С_1-6алкил;

или R² и R⁴ вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-CH₂-, причем R¹⁰ представляет собой L-#1, Н, NH₂, SO₃H, СООН, SH или ОН; А представляет собой СО, SO, SO₂, SO₂NH или CNNH;

R³ представляет собой L-#1, -MOD или необязательно замещенную алкильную, циклоалкильную, арильную, гетероарильную, гетероалкильную, гетероциклоалкильную группу, предпочтительно -L#1 или С_1-10-алкильную, C_6-10-арильную или С_6-10-аралкильную, С_5-10- гетероалкильную, С_1-10-алкил-О-С_6-10-арильную или С_5-10-гетероциклоалкильную группу, которая может быть замещена 1-3 -ОН группами, 1-3 атомами галогена, 1-3 галогенированными алкильными группами (причем каждая может содержать 1-3 атома галогена), 1-3 О-алкильными группами, 1-3 -SH группами, 1-3 -S-алкильными группами, 1-3 -О-CO-алкильными группами, 1-3 -O-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -S(O)_n-алкильными группами, 1-3 -SO₂-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-алкильными группами, 1-3 -N(алкил)₂ группами, 1-3 -NH₂ группами или 1-3 -(CH₂)_0-3Z группами, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, -NHY³, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³, где Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂ или -(CH₂)_0-3Z' и Y³ представляет собой Н, -(CH₂)_0-3-CH(NHCOCH₃)Z', -(CH₂)_0-3-CH(NH₂)Z' или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН,

R⁵ представляет собой -L-#1, Н, NH₂, NO₂, галоген,

-CN, CF₃, -OCF₃, -CH₂F, -CH₂F, SH или -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -H, -OY³, -SY³, галоген, NHY³, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³, причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂ или -(CH₂)_0-3Z' и Y³ представляет собой Н или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН;

R⁶ и R⁷ независимо друг от друга представляют собой Н, циано, (необязательно фторированный) С_1-10-алкил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкенил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкинил, гидрокси, NO₂, NH₂, СООН или галоген,

R⁸ представляет собой (необязательно фторированный) С_1-10-алкил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкенил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкинил, (необязательно фторированный) С_4-10-циклоалкил или -(CH₂)_0-2-(HZ²), причем HZ² представляет собой 4-7- членный гетероцикл, содержащий до двух гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из N, О и S, причем каждая из этих групп может быть замещена -ОН, СО₂Н или NH₂, или -L-#1;

причем один из заместителей R¹, R², R³, R⁴ R⁵, R⁸ или R¹⁰ представляет собой или (в случае R⁸) содержит -L-#1,

L представляет собой линкер и #1 представляет собой связь со связующим,

R⁹ представляет собой Н, F, СН₃, CF₃, CH₂F или CHF₂,

причем -MOD представляет собой -(NR¹⁰)_n-(G1)_o-G2-H, причем

R¹⁰ представляет собой Н или С₁-С₃-алкил;

G1 представляет собой -NHCO-, -CONH- или (причем когда G1 -NHCO- или , R¹⁰ не представляет собой NH₂);

n равно 0 или 1;

о равно 0 или 1; и

G2 представляет собой неразветвленную и/или разветвленную углеводородную группу, которая имеет 1-10 атомов углерода и которая может прерываться один или более раз одной или более группами -О-, -S-, -SO-, SO₂, -NR^y-, -NR^yCO-, CONR^y-, -NR^yNR^y-, -SO2NR^yNR^y-, -CONR^yNR^y- (причем R^y представляет собой H, фенил, С₁-С₁₀-алкил, С₂-С₁₀-алкенил или С₂-С₁₀-алкинил, каждый из которых может быть замещен заместителем NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид, или сульфоновая кислота), -СО-, -CR^x=N-O- (причем Rx представляет собой Н, C₁-С₃-алкил или фенил), причем углеводородная цепь, включая боковые цепи, если присутствуют, может быть замещена заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид или сульфоновая кислота, причем группа -MOD предпочтительно имеет по меньшей мере одну группу -СООН;

а также его физиологически приемлемые соли.

2. Соединения общей формулы (IIa):

в которой

X₁ представляет собой N, Х₂ представляет собой N и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой СН или CF, Х₂ представляет собой С и Х₃ представляет собой N; или

X₁ представляет собой NH, Х₂ представляет собой С и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой СН, Х₂ представляет собой N и Х₃ представляет собой С;

R¹ представляет собой Н, -MOD или -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, -NHY³, -OY³, -SY³, галоген, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, -(CH₂CH₂O)_0-3-(CH₂)_0-3Z' или -CH(CH₂W)Z' и Y³ - Н или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, NH₂, SO₃H, СООН, -NH-CO-CH₂-CH₂-CH(NH₂)COOH или -(CO-NH-CHY⁴)_1-3COOH; причем W представляет собой Н или ОН, причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил;

R² представляет собой Н, -MOD, -CO-CHY⁴-NHY⁵ или -(CH₂)_0-3Z или R² и R⁴ вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-CH₂-, причем R¹⁰ представляет собой Н, NH₂, SO₃H, СООН, SH или ОН;

причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³,

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, С_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил и Y⁵ представляет собой Н или -CO-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶ представляет собой линейный или разветвленный С_1-6алкил;

R⁴ представляет собой Н, -CO-CHY⁴-NHY⁵ или -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂ или - (CH₂)_0-3Z' и Y³ представляет собой Н или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН;

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, С_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил и Y⁵ представляет собой Н или -CO-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶ представляет собой линейный или разветвленный С_1-6алкил;

или R² и R⁴ вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-CH₂-, причем R¹⁰ представляет собой Н, NH₂, SO₃H, СООН, SH или ОН;

А представляет собой СО, SO, SO₂, SO₂NH или CNNH;

R³ представляет собой -MOD или необязательно замещенную алкильную, циклоалкильную, арильную, гетероарильную, гетероалкильную, гетероциклоалкильную группу, предпочтительно C_1-10-алкильную, С_6-10-арильную или С_6-10-аралкильную, С_5-10-гетероалкильную, С_1-10-алкил-О-С_6-10-арильную или С_5-10-гетероциклоалкильную группу, которая может быть замещена 1-3 -ОН группами, 1-3 атомами галогена, 1-3 галогенированными алкильными группами (причем каждая может содержать 1-3 атома галогена), 1-3 О-алкильными группами, 1-3 -SH группами, 1-3 -S-алкильными группами, 1-3 -О-СО-алкильными группами, 1-3 -O-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -S(O)_n-алкильными группами, 1-3 -SO₂-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-алкильными группами, 1-3 -N(алкил)₂ группами, 1-3 -NH₂ группами или 1-3 -(CH₂)_0-3Z группами, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, -NHY³, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³, где Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂ или -(CH₂)_0-3Z' и Y³ представляет собой Н, -(CH₂)_0-3-CH(NHCOCH₃)Z', -(CH₂)_0-3-CH(NH₂)Z' или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН,

R⁵ представляет собой Н, NH₂, NO₂, галоген, -CN, CF₃, -OCF₃, -CH₂F, -CH₂F, SH или -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -H, -OY³, -SY³, галоген, NHY³, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³,

R⁶ и R⁷ независимо друг от друга представляют собой Н, циано, (необязательно фторированный) С_1-10-алкил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкенил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкинил, гидрокси, NO₂, NH₂, СООН или галоген,

R⁸ представляет собой (необязательно фторированный) С_1-10-алкил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкенил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкинил, (необязательно фторированный) С_4-10-циклоалкил или -(CH₂)_0-2-(HZ²), причем HZ² представляет собой 4-7- членный гетероцикл, содержащий до двух гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из N, О и S, причем каждая из этих групп может быть замещена -ОН, CO₂H или NH₂;

R⁹ представляет собой Н, F, СН₃, CF₃, CH₂F или CHF₂,

причем -MOD представляет собой -(NR¹⁰)_n-(G1)_o-G2-H, причем

R¹⁰ представляет собой Н или С₁-С₃-алкил;

G1 представляет собой -NHCO-, -CONH- или (причем когда G1 -NHCO- или , R¹⁰ не представляет собой NH₂);

n равно 0 или 1;

о равно 0 или 1; и

G2 представляет собой неразветвленную и/или разветвленную углеводородную группу, которая имеет 1-10 атомов углерода и которая может прерываться один или более раз одной или более группами -О-, -S-, -SO-, SO₂, -NR^y-, -NR^yCO-, CONR^y-, -NR^yNR^y-, -SO2NR^yNR^y-, -CONR^yNR^y- (причем R^y представляет собой H, фенил, С₁-С₁₀-алкил, С₂-С₁₀-алкенил или С₂-С₁₀-алкинил, каждый из которых может быть замещен заместителем NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид или сульфоновая кислота), -СО-, -CR^x=N-O- (причем Rx представляет собой Н, С₁-С₃-алкил или фенил), причем углеводородная цепь, включая боковые цепи, если присутствуют, может быть замещена заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH- CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид или сульфоновая кислота, причем группа -MOD предпочтительно имеет по меньшей мере одну группу -COOH;

а также его физиологически приемлемые соли.

3. Конъюгат по п. 1, причем X₁ представляет собой СН, Х₂ представляет собой С и Х₃ представляет собой N.

4. Конъюгат по п. 1, причем заместитель R¹ представляет собой -L-#1.

5. Конъюгат по п. 1, причем молекула активного соединения-линкер представлен общей формулой (II):

в которой

X₁ представляет собой N, Х₂ представляет собой N и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой СН, Х₂ представляет собой С и Х₃ представляет собой N; или

X₁ представляет собой NH, Х₂ представляет собой С и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой СН, Х₂ представляет собой N и Х₃ представляет собой С;

R¹ представляет собой Н, -L-#1 или -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, -NHY³, -OY³, -SY³, галоген, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³, причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, -(CH₂CH₂O)_0-3-(CH₂)_0-3Z' или -CH(CH₂W)Z' и Y³ представляет собой Н или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, NH₂, SO₃H, СООН, -NH-CO-CH₂-CH₂-CH(NH₂)COOH или -(CO-NH-CHY⁴)_1-3COOH, причем W представляет собой Н или ОН; причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, С_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил;

R² и R⁴ независимо друг от друга представляют собой -L-#1, Н, -CO-CHY⁴- NHY⁵ или -(CH₂)_0-3Z или R² и R⁴ вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-CH₂-, причем R¹⁰ представляет собой L-#1, Н, NH₂, SO₃H, СООН, SH, или ОН;

причем Z представляет собой -Н, OY³, -SY³, галоген, NHY³, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂ или -(СН₂)_0-3Z' и Y³ представляет собой Н или -(СН₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН;

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, С_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил и Y⁵ представляет собой Н или -СО-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶ представляет собой линейный или разветвленный C_1-6алкил;

А представляет собой СО, SO, SO₂, SO₂NH или CNNH;

R³ представляет собой -L-#1 или необязательно замещенную алкильную, арильную, гетероарильную, гетероалкильную, гетероциклоалкильную группу,

предпочтительно -L-#1 или С_1-10-алкильную, С_6-10-арильную, С_6-10-аралкильную, С_5-10-гетероалкильную, С_1-10-алкил-О-С_6-10-арильную или С_5-10-гетероциклоалкильную группу, которая может быть замещена 1-3 -ОН группами, 1-3 атомами галогена, 1-3 галогенированными алкильными группами (причем каждая может содержать 1-3 атома галогена), 1-3 О- алкильными группами, 1-3 -SH группами, 1-3 -S-алкильными группами, 1-3 -O-CO-алкильными группами, 1-3 -O-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -S(O)_n-алкильными группами, 1-3 -SO₂-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-алкильными группами, 1-3 -N(алкил)₂ группами, 1-3 -NH₂ группами или 1-3 -(CH₂)_0-3Z группами, причем Z представляет собой -Н, галоген, - OY³,

-SY³, -NHY³, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³, где Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂ или -(СН₂)_0-3Z' и Y³ представляет собой Н, -(CH₂)_0-3-CH(NHCOCH₃)Z', -(CH₂)_0-3-CH(NH₂)Z' или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН (причем "алкил" предпочтительно представляет собой С_1-10-алкил);

R⁵ представляет собой -L-#1, Н, F, NH₂, NO₂, галоген, SH или -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -H, OY³, -SY³, галоген, NHY³, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂ или -(CH₂)_0-3Z' и Y³ представляет собой Н или -(CH₂)_0-3Z' (причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН;

причем один из заместителей R¹, R², R³, R⁴ и R⁵ представляет собой -L-#1,

L обозначает линкер и #1 обозначает связь со связующим,

R⁶ и R⁷ независимо друг от друга представляют собой Н, циано, (необязательно фторированный) С_1-10-алкил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкенил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкинил, гидрокси или галоген,

R⁹ представляет собой Н, F, СН₃, CF₃, CH₂F или CHF₂;

а также его физиологически приемлемые соли.

6. Конъюгат по п. 5,

причем R¹ представляет собой -L-#1, Н, -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, -CO-NY¹Y², NHY³, OY³, -SY³ или -CO-OY³, где Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, -(CH₂CH₂O)_0-3-(CH₂)_0-3Z' или -CH(CH₂W)Z' и Y³ представляет собой Н или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, NH₂, СООН, -NH-CO-СН₂-CH₂-CH(NH₂)COOH или -(CO-NH-CHY₄)_1-3COOH; причем W представляет собой Н или ОН, причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, С_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил;

R² и R⁴ независимо друг от друга представляют собой -L-#1, -CO-CHY⁴- NHY⁵ или Н или R² и R⁴ вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰-, причем R¹⁰ представляет собой Н, -L-#1, NH₂, СООН, SH, ОН или SO₃H;

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил и Y⁵ представляет собой Н или -CO-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶ представляет собой линейный или разветвленный С_1-6алкил;

А представляет собой СО,

R³ представляет собой -(СН₂)ОН или -L-#1, и

R⁵ представляет собой -L-#1 или Н,

причем один из заместителей R¹, R², R³, R⁴ и R⁵ представляет собой -L-#1.

7. Конъюгат по п. 5, причем R⁶ и R⁷ независимо друг от друга представляют собой Н, C_1-3-алкил или галоген.

8. Конъюгат по п. 5, причем R⁸ представляет собой C_1-4-алкил (предпочтительно трет-бутил).

9. Конъюгат по п. 5, причем R⁹ представляет собой Н.

10. Конъюгат по п. 5, причем R⁶ и R⁷ представляют собой F.

11. Конъюгат по п. 1, причем каждая молекула активного соединения присоединяется к различным аминокислотам связующего через линкер.

12. Конъюгат по п. 1, причем конъюгат имеет в среднем 1,2-20 молекул активного соединения на связующее.

13. Конъюгат по п. 1, причем антитело имеет следующую структуру

14. Конъюгат по п. 1, причем связующее связывается с целевой молекулой раковой клетки.

15. Конъюгат по п. 14, причем связующее связывается с внеклеточной целевой молекулой.

16. Конъюгат по п. 15, причем связующее после связывания с внеклеточной целевой молекулой интернализируется и обрабатывается внутриклеточно (предпочтительно лизосомально) клеткой, экспрессирующей целевую молекулу.

17. Конъюгат по п. 1, причем связующее представляет собой человеческое, гуманизированное или химерное моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.

18. Конъюгат по п. 17, причем связующее представляет собой анти-HER2 антитело, анти-EGFR антитело, анти-TWEAKR антитело или его антигенсвязывающий фрагмент.

19. Конъюгат по п. 18, причем анти-TWEAKR антитело специфически связывается с аминокислотой D в положении 47 (D47) в TWEAKR (SEQ ID NO: 169), предпочтительно анти-TWEAKR антитела ТРР-2090.

20. Конъюгат по п. 18, причем связующее представляет собой анти-EGFR антитело и R³ представляет собой -L-#1.

21. Конъюгат по п. 1, причем линкер -L- имеет одну из следующих основных структур (i)-(iv):

(i) -(CO)_m-SG1-L1-L2-

(ii) -(CO)_m-L1-SG-L1-L2-

(iii) -(CO)_m -L1-L2-

(iv) -(CO)_m-L1-SG-L2,

в которых m равно 0 или 1, SG и SG1 представляют собой in vivo расщепляемые группы, L1 независимо друг от друга представляют собой in vivo нерасщепляемые органические группы и L2 представляет собой связывающую группу для связывания со связующим.

22. Конъюгат по п. 21, причем in vivo расщепляемая группа SG представляет собой 2-8 олигопептидную группу, предпочтительно дипептидную группу или дисульфид, гидразон, ацеталь или аминаль, и SG1 представляет собой 2-8 олигопептидную группу, предпочтительно дипептидную группу.

23. Конъюгат по п. 1, причем линкер присоединяется к цистеиновой боковой цепи или цистеиновому остатку и имеет следующую формулу:

§-(CO)m-L1-L2-§§,

в которой

m равно 0 или 1;

§ обозначает связь с молекулой активного соединения, и

§§ обозначает связь со связующим, и

-L2- представляет собой

где

#¹ обозначает точку присоединения к атому серы связующего,

#² обозначает точку присоединения к группе L1,

L1 представляет собой -(NR¹⁰)_n-(G1)_o-G2-,

причем R¹⁰ представляет собой Н, NH₂ или С₁-С₃-алкил;

G1 представляет собой -NHCO- или ;

n равно 0 или 1;

о равно 0 или 1; и

G2 представляет собой неразветвленную или разветвленную углеводородную цепь, имеющую от 1 до 100 атомов углерода, из ариленовых групп, и/или неразветвленных, и/или разветвленных, и/или циклических алкиленовых групп, которая может прерываться один или более раз одной или более группами из -О-, -S-, -SO-, SO₂, -NH-, -СО-, - Nme-, -NHNH-, -SO₂NHNH-, -NHCO-, -CONH-, -CONHNH- и 5-10-членного ароматического или неароматического гетероцикла, имеющего до 4 гетероатомов из N, О и S, -SO- или -SO2- (предпочтительно ), причем боковые цепи, если присутствуют, могут быть замещены заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид или сульфоновая кислота, или представляет собой одну из следующих групп:

причем Rx представляет собой Н, С₁-С₃-алкил или фенил.

24. Конъюгат по п. 23, причем L2 представлен одной или обеими следующими формулами:

причем #¹ обозначает точку присоединения к атому серы связующего, #² обозначает точку присоединения к группе L¹, R²² представляет собой СООН и более чем 80% (на основе общего числа связей линкера со связующим) связей с атомом серы связующего присутствует в одной из этих двух структур.

25. Конъюгат по п. 23, причем углеводородная цепь прерывается одной из следующих групп:

причем X представляет собой Н, С_1-10-алкильную группу, которая может быть необязательно замещена заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, NH₂, -NH-CNNH₂, сульфон, сульфоксид или сульфоновая кислота.

26. Конъюгат по п. 23, причем линкер имеет следующую формулу:

в которой

#3 обозначает связь с молекулой активного соединения,

#4 обозначает связь со связующим,

R¹¹ представляет собой Н или NH₂;

В представляет собой -[(СН₂)_х-(Х₄)_у]_w(СН₂)_z-,

w=0-20;

х=0-5;

у=0 или 1;

z=0-5; и

X⁴ представляет собой -О-, -CONH- или -NHCO- .

27. Конъюгат по п. 23, причем R¹ или R⁴ представляет собой -L-#1.

28. Конъюгат по п. 23, причем конъюгат имеет одну из следующих формул:

в которых

X₁ представляет собой N, Х₂ представляет собой N и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой СН или CF, Х₂ представляет собой С и Х₃ представляет собой N; или

X₁ представляет собой NH, Х₂ представляет собой С и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой СН, Х₂ представляет собой N и Х₃ представляет собой С;

AK₁ представляет собой связующее; n равно числу от 1 до 20 и L1 представляет собой необязательно разветвленную углеводородную группу, имеющую от 1 до 70 атомов углерода, которая представляет собой неразветвленную или разветвленную углеводородную цепь, имеющую от 1 до 100 атомов углерода, из ариленовых групп, и/или неразветвленных, и/или разветвленных, и/или циклических алкиленовых групп, которая может прерываться один или более раз одной или более группами из -О-, -S-, -SO-, SO₂, -NH-, -СО-, -CONH-, -NHCO-, -NMe-, -NHNH-, -SO₂NHNH-, - CONHNH- и 5-10-членного ароматического или неароматического гетероцикла, имеющего до 4 гетероатомов из N, О и S, -SO- или -SO₂- (предпочтительно ), причем боковые цепи, если присутствуют, могут быть замещены заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид или сульфоновая кислота,

и SG1 представляет собой 2-8 олигопептид, предпочтительно дипептид; L4 представляет собой простую связь или группу -(CO)_y-G4-, причем у равно 0 или 1 и G4 представляет собой неразветвленную или разветвленную углеводородную цепь, имеющую от 1 до 100 атомов углерода, из ариленовых групп, и/или неразветвленных, и/или разветвленных, и/или циклических алкиленовых групп, которая может прерываться один или более раз одной или более группами из -О-, -S-, - SO-, SO₂, -NH-, -СО-, -NHCO-, -CONH-, -NMe-, -NHNH-, -SO2NHNH-, - CONHNH- и 5-10-членного ароматического или неароматического гетероцикла, имеющего до 4 гетероатомов из N, О и S, -SO- или -SO₂- (предпочтительно ), причем боковые цепи, если присутствуют, могут быть замещены заместителем -NHCONH₂, -СООН, - ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид или сульфоновая кислота.

29. Конъюгат связующего с одной или более молекулами активного соединения, где конъюгат имеет одну из следующих формул:

где

AK_1A представляет собой антитело, n равно числу от 1 до 20 и L1 представляет собой неразветвленную или разветвленную углеводородную цепь, имеющую от 1 до 100 атомов углерода, из ариленовых групп, и/или неразветвленных, и/или разветвленных, и/или циклических алкиленовых групп, которая может прерываться один или более раз одной или более группами из -О-, -S-, -SO-, SO₂, -NH-, -СО-, -CONH-, -NHCO-, -NMe-, -NHNH-, -SO2NHNH-, -CONHNH- и 5-10-членного ароматического или неароматического гетероцикла, имеющего до 4 гетероатомов из N, О и S, -SO- или -SO₂- (предпочтительно ), причем боковые цепи, если присутствуют, могут быть замещены заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид или сульфоновая кислота.

30. Конъюгат по п. 1, причем линкер -L- присоединяется к цистеиновой боковой цепи или цистеиновому остатку и имеет следующую формулу:

в которой

§ обозначает связь с молекулой активного соединения, и

§§ обозначает связь со связующим,

m равно 0, 1, 2 или 3;

n равно 0, 1 или 2;

р равно 0-20; и

L3 представляет собой

причем

о равно 0 или 1;

G3 представляет собой неразветвленную или разветвленную углеводородную цепь, имеющую от 1 до 100 атомов углерода, из ариленовых групп, и/или неразветвленных, и/или разветвленных, и/или циклических алкиленовых групп, которая может прерываться один или более раз одной или более группами из -O-, -S-, -SO-, SO₂, -NH-, -СО-, -NHCO, -CONH- и 5-10-членного ароматического или неароматического гетероцикла, имеющего до 4 гетероатомов из N, О и S, -NMe-, -NHNH-, -SO₂NHNH-, -CONHNH- -SO- или -SO₂- (предпочтительно ), причем боковые цепи, если присутствуют, могут быть замещены заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, сульфон, сульфоксид или сульфоновая кислота.

31. Конъюгат по п. 30, причем линкер -L- присоединяется к цистеиновой боковой цепи или цистеиновому остатку и имеет следующую формулу:

в которой

§ обозначает связь с молекулой активного соединения, и

§§ обозначает связь со связующим,

m равно 1;

р равно 0;

n равно 0;

и L3 представляет собой

причем

о равно 0 или 1; и

G3 представляет собой -(CH₂CH₂O)_s(CH₂)_t(CONH)_u(CH₂CH₂O)_v(CH₂)_w-, причем

s, t, v и w, в каждом случае, независимо друг от друга равны 0-20 и u равно 0 или 1.

32. Конъюгат по п. 30, причем R² или R³ представляют собой -L-#1.

33. Конъюгат по п. 32, причем конъюгат имеет одну из следующих формул:

в которых

X₁ представляет собой N, X₂ представляет собой N и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой СН или CF, X₂ представляет собой С и Х₃ представляет собой N; или

X₁ представляет собой NH, X₂ представляет собой С и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой СН, X₂ представляет собой N и Х₃ представляет собой С;

AK₁ представляет собой связующее, n равно числу от 1 до 20 и L2 и L3 представляют собой неразветвленную или разветвленную углеводородную цепь, имеющую от 1 до 100 атомов углерода, из ариленовых групп, и/или неразветвленных, и/или разветвленных, и/или циклических алкиленовых групп, которая может прерываться один или более раз одной или более группами из -O-, -S-, -SO-, SO₂, -NH-, -СО-, -Nme-, -NHNH-, -SO₂NHNH-, -NHCO-, -CONH-, -CONHNH- и 5-10-членного ароматического или неароматического гетероцикла, имеющего до 4 гетероатомов из N, О и S, -SO- или -SO₂- (предпочтительно причем боковые цепи, если присутствуют, могут быть замещены заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид или сульфоновая кислота.

34. Соединение по п. 2, причем соединение имеет одну из следующих формул

в которых

X₁ представляет собой N, Х₂ представляет собой N и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой СН или CF, Х₂ представляет собой С и Х₃ представляет собой N; или

X₁ представляет собой NH, Х₂ представляет собой С и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой СН, Х₂ представляет собой N и Х₃ представляет собой С;

L2 и L3 представляют собой неразветвленную или разветвленную углеводородную цепь, имеющую от 1 до 100 атомов углерода, из ариленовых групп, и/или неразветвленных, и/или разветвленных, и/или циклических алкиленовых групп, которая может прерываться один или более раз одной или более группами из -O-, -S-, -SO-, SO₂, -NH-, -СО-, -Nme-, -NHNH-, -SO₂NHNH-, -NHCO-, -CONH-, -CONHNH- и 5-10-членного ароматического или неароматического гетероцикла, имеющего до 4 гетероатомов из N, О и S, -SO- или -SO₂- (предпочтительно причем боковые цепи, если присутствуют, могут быть замещены заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид или сульфоновая кислота.

35. Конъюгат по п. 1, причем линкер -L- присоединяется к лизиновой боковой цепи и имеет следующую формулу:

в которой

§ обозначает связь с молекулой активного соединения, и

§§ обозначает связь со связующим,

x равно 0 или 1,

L4 представляет собой простую связь или группу -(CO)_y-G4-, причем y равно 0 или 1, и

G4 представляет собой неразветвленную или разветвленную углеводородную цепь, имеющую от 1 до 100 атомов углерода, из ариленовых групп, и/или неразветвленных, и/или разветвленных, и/или циклических алкиленовых групп, которая может прерываться один или более раз одной или более группами из -O-, -S-, -SO-, SO₂, -NH-, -СО-, -NHCO-, -CONH-, -Nme-, -NHNH-, -SO₂NHNH-, -CONHNH- и 5-10-членного ароматического или неароматического гетероцикла, имеющего до 4 гетероатомов из N, О и S или -SO- (предпочтительно причем боковые цепи, если присутствуют, могут быть замещены заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид или сульфоновая кислота.

36. Конъюгат по п. 35, причем конъюгат имеет одну из следующих формул:

в которых

X₁ представляет собой N, X₂ представляет собой N и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой СН или CF, X₂ представляет собой С и Х₃ представляет собой N; или

X₁ представляет собой NH, X₂ представляет собой С и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой СН, X₂ представляет собой N и Х₃ представляет собой С;

AK₂ представляет собой связующее, n равно числу от 1 до 20 и L4 представляет собой необязательно неразветвленную или разветвленную углеводородную цепь, содержащую от 1 до 100 атомов углерода, из ариленовых групп, и/или неразветвленных, и/или разветвленных, и/или циклических алкиленовых групп, которая может прерываться один или более раз одной или более группами из -O-, -S-, -SO-, SO₂, -NH-, -СО-, -Nme-, -NHNH-, -SO₂NHNH-,-NHCO-, -CONH-, -CONHNH- и 5-10-членного ароматического или неароматического гетероцикла, имеющего до 4 гетероатомов из N, О и S, -SO- или -SO₂- (предпочтительно причем боковые цепи, если присутствуют, могут быть замещены заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид или сульфоновая кислота, и SG1 представляет собой расщепляемую группу, предпочтительно 2-8 олигопептид, особенно предпочтительно дипептид.

37. Конъюгат по п. 18, причем анти-TWEAKR антитело представляет собой агонистическое антитело.

38. Конъюгат по п. 18, который содержит:

вариабельную тяжелую цепь, содержащую:

a. CDR1 тяжелой цепи, кодированный аминокислотной последовательностью, имеющей формулу PYPMX (SEQ ID NO: 171), причем X представляет собой I или М;

b. CDR2 тяжелой цепи, кодированный аминокислотной последовательностью, имеющей формулу YISPSGGXTHYADSVKG (SEQ ID NO: 172), причем X представляет собой S или K; и

с. CDR3 тяжелой цепи, кодированный аминокислотной последовательностью, имеющей формулу GGDTYFDYFDY (SEQ ID NO: 173);

и вариабельную легкую цепь, имеющую:

d. CDR1 легкой цепи, кодированный аминокислотной последовательностью, имеющей формулу RASQSISXYLN (SEQ ID NO: 174), причем X представляет собой G или S;

е. CDR2 легкой цепи, кодированный аминокислотной последовательностью, имеющей формулу XASSLQS (SEQ ID NO: 175), причем X представляет собой Q, А или N; и

f. CDR3 легкой цепи, кодированный аминокислотной последовательностью, имеющей формулу QQSYXXPXIT (SEQ ID NO: 176), причем X в положении 5 представляет собой Т или S, Х в положении 6 представляет собой Т или S и Х в положении 8 представляет собой G или F.

39. Конъюгат по п. 18, содержащий:

а. вариабельную последовательность тяжелой цепи, как показано SEQ ID NO: 10, а также вариабельную последовательность легкой цепи, как показано SEQ ID NO: 9, или

b. вариабельную последовательность тяжелой цепи, как показано SEQ ID NO: 20, а также вариабельную последовательность легкой цепи, как показано SEQ ID NO: 19, или

с. вариабельную последовательность тяжелой цепи, как показано SEQ ID NO: 30, а также вариабельную последовательность легкой цепи, как показано SEQ ID NO: 29, или

d. вариабельную последовательность тяжелой цепи, как показано SEQ ID NO: 40, а также вариабельную последовательность легкой цепи, как показано SEQ ID NO: 39, или

е. вариабельную последовательность тяжелой цепи, как показано SEQ ID NO: 50, а также вариабельную последовательность легкой цепи, как показано SEQ ID NO: 49, или

f. вариабельную последовательность тяжелой цепи, как показано SEQ ID NO: 60, а также вариабельную последовательность легкой цепи, как показано SEQ ID NO: 59, или

g. вариабельную последовательность тяжелой цепи, как показано SEQ ID NO: 70, а также вариабельную последовательность легкой цепи, как показано SEQ ID NO: 69, или

h. вариабельную последовательность тяжелой цепи, как показано SEQ ID NO: 80, а также вариабельную последовательность легкой цепи, как показано SEQ ID NO: 79, или

i. вариабельную последовательность тяжелой цепи, как показано SEQ ID NO: 90, а также вариабельную последовательность легкой цепи, как показано SEQ ID NO: 89, или

j. вариабельную последовательность тяжелой цепи, как показано SEQ ID NO: 100, а также вариабельную последовательность легкой цепи, как показано SEQ ID NO: 99, или

k. вариабельную последовательность тяжелой цепи, как показано SEQ ID NO: 110, а также вариабельную последовательность легкой цепи, как показано SEQ ID NO: 109, или

l. вариабельную последовательность тяжелой цепи, как показано SEQ ID NO: 120, а также вариабельную последовательность легкой цепи, как показано SEQ ID NO: 119.

40. Конъюгат по п. 18, причем антитело представляет собой IgG антитело.

41. Конъюгат по п. 18, содержащий:

а. последовательность тяжелой цепи, как показано SEQ ID NO: 2, а также последовательность легкой цепи, как показано SEQ ID NO: 1, или

b. последовательность тяжелой цепи, как показано SEQ ID NO: 12, а также последовательность легкой цепи, как показано SEQ ID NO: 11, или

с. последовательность тяжелой цепи, как показано SEQ ID NO: 22, а также последовательность легкой цепи, как показано SEQ ID NO: 21, или

d. последовательность тяжелой цепи, как показано SEQ ID NO: 32, а также последовательность легкой цепи, как показано SEQ ID NO: 31, или

е. последовательность тяжелой цепи, как показано SEQ ID NO: 42, а также последовательность легкой цепи, как показано SEQ ID NO: 41, или

f. последовательность тяжелой цепи, как показано SEQ ID NO: 52, а также последовательность легкой цепи, как показано SEQ ID NO: 51, или

g. последовательность тяжелой цепи, как показано SEQ ID NO: 62, а также последовательность легкой цепи, как показано SEQ ID NO: 61, или

h. последовательность тяжелой цепи, как показано SEQ ID NO: 72, а также последовательность легкой цепи, как показано SEQ ID NO: 71, или

i. последовательность тяжелой цепи, как показано SEQ ID NO: 82, а также последовательность легкой цепи, как показано SEQ ID NO: 81, или

j. последовательность тяжелой цепи, как показано SEQ ID NO: 92, а также последовательность легкой цепи, как показано SEQ ID NO: 91, или

k. последовательность тяжелой цепи, как показано SEQ ID NO: 102, а также последовательность легкой цепи, как показано SEQ ID NO: 101, или

l. последовательность тяжелой цепи, как показано SEQ ID NO: 112, а также последовательность легкой цепи, как показано SEQ ID NO: 111.

42. Конъюгат по п. 1, причем конъюгат имеет 1-10, предпочтительно 2-8, молекул активного соединения на связующее.

43. Способ получения конъюгата по п. 1, в котором соединение одной из следующих формул, предпочтительно в форме соли трифторуксусной кислоты, присоединяется к цистеиновому остатку связующего, который ранее необязательно частично редуцирован, где соединение предпочтительно применяется в 2-12-кратном мольном избытке по отношению к связующему:

причем R представляет собой -Н или -СООН,

причем K представляет собой линейный или разветвленный C₁-C₆ алкил, необязательно замещенный C₁-C₆ алкокси или -ОН, и

причем X₁, Х₂, Х₃, SG1, L1, L2, L3 и L4 имеют такие же значения, как указано в п. 28 или 32.

44. Способ по п. 43, в котором соединение одной из следующих формул, предпочтительно в форме соли трифторуксусной кислоты, присоединяется к лизиновому остатку связующего, где соединение предпочтительно применяется в 2-12-кратном мольном избытке по отношению к связующему:

причем X₁, Х₂, Х₃, SG1 и L4 имеют такие же значения, как указано в п. 35.

45. Соединение одной из следующих формул:

причем R представляет собой -Н или -СООН,

X₁ представляет собой N, X₂ представляет собой N и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой СН или CF, X₂ представляет собой С и Х₃ представляет собой N; или

X₁ представляет собой NH, Х₂ представляет собой С и Х₃ представляет собой С; или

X₁ представляет собой СН, Х₂ представляет собой N и Х₃ представляет собой С;

SG1 представляет собой 2-8 олигопептид,

L1 представляет собой необязательно разветвленную углеводородную группу, имеющую от 1 до 70 атомов углерода, которая представляет собой неразветвленную или разветвленную углеводородную цепь, имеющую от 1 до 100 атомов углерода, из ариленовых групп, и/или неразветвленных, и/или разветвленных, и/или циклических алкиленовых групп, которая может прерываться один или более раз одной или более группами из -O-, -S-, -SO-, SO₂, -NH-, -СО-, -CONH-, -NHCO-, -NMe-, -NHNH-, -SO₂NHNH-, -CONHNH- и 5-10-членного ароматического или неароматического гетероцикла, имеющего до 4 гетероатомов из N, О и S, -SO- или -SO₂-, причем боковые цепи, если присутствуют, могут быть замещены заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид или сульфоновая кислота,

L2 представлен одной или обеими следующими формулами:

причем #¹ обозначает точку присоединения к антителу, #² обозначает точку присоединения к молекуле активного соединения, R²² представляет собой СООН и более чем 80% (на основе общего числа связей линкера со связующим) связей с антителом присутствует в одной из этих двух структур,

L3 представляет собой

причем

о равно 0 или 1;

G3 представляет собой неразветвленную или разветвленную углеводородную цепь, имеющую от 1 до 100 атомов углерода, из ариленовых групп, и/или неразветвленных, и/или разветвленных, и/или циклических алкиленовых групп, которая может прерываться один или более раз одной или более группами из -O-, -S-, -SO-, SO₂, -NH-, -СО-, -NHCO, -CONH- и 5-10-членного ароматического или неароматического гетероцикла, имеющего до 4 гетероатомов из N, О и S, -SO- или -SO₂-, причем боковые цепи, если присутствуют, могут быть замещены заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂-, -NH-CNNH, сульфонамид, сульфон, сульфоксид или сульфоновая кислота,

L4 представляет собой простую связь или группу -(CO)_y-G4-, причем у равно 0 или 1 и G4 представляет собой неразветвленную или разветвленную углеводородную цепь, имеющую от 1 до 100 атомов углерода, из ариленовых групп, и/или неразветвленных, и/или разветвленных, и/или циклических алкиленовых групп, которая может прерываться один или более раз одной или более группами из -O-, -S-, -SO-, SO₂, -NH-, -СО-, -NHCO-, -CONH-, -NMe-, -NHNH-, -SO₂NHNH-, -CONHNH- и 5-10-членного ароматического или неароматического гетероцикла, имеющего до 4 гетероатомов из N, О и S, -SO- или -SO₂-, причем боковые цепи, если присутствуют, могут быть замещены заместителем -NHCONH₂, -СООН, -ОН, -NH₂, NH-CNNH₂, сульфонамид, сульфон, сульфоксид или сульфоновая кислота.

46. Соединение общей формулы (III):

в которой

X₁ представляет собой N, X₂ представляет собой N и Х₃ представляет собой С, или X₁ представляет собой СН, X₂ представляет собой С и Х₃ представляет собой N, или X₁ представляет собой NH, X₂ представляет собой С, и Х₃ представляет собой С, или X₁ представляет собой СН, X₂ представляет собой N и Х₃ представляет собой С;

R¹ представляет собой -L-СВЯЗУЮЩЕЕ, Н или -(СН₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, -NHY³, -OY³, -SY³, галоген, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, -(CH₂CH₂O)_0-3-(СН₂)_0-3Z' или -CH(CH₂W)Z' и Y³ представляет собой Н или -(СН₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, NH₂, SO₃H, СООН, -NH-СО-СН₂-СН₂-СН(NH₂)СООН или -(CO-NH-CHY⁴)_1-3COOH, причем W представляет собой Н или ОН;

R² и R⁴ независимо друг от друга представляют собой -L-СВЯЗУЮЩЕЕ, Н, -CO-CHY⁴-NHY⁵ или -(СН₂)_0-3Z или R² и R⁴ вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-CH₂-, причем R¹⁰ представляет собой L-#1, Н, NH₂, SO₃H, СООН, SH или ОН;

причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂ или -(CH₂)_0-3Z' и Y³ представляет собой Н или -(СН₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН;

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂ C_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил и Y⁵ представляет собой Н или -CO-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶ представляет собой линейный или разветвленный C_1-6алкил;

А представляет собой СО, SO, SO₂, SO₂NH или CNNH;

R³ представляет собой -L-СВЯЗУЮЩЕЕ или необязательно замещенную алкильную, арильную, гетероарильную, гетероалкильную, гетероциклоалкильную группу, которая может быть замещена 1-3 -ОН группами, 1-3 атомами галогена, 1-3 галогенированными алкильными группами (причем каждая может содержать 1-3 атома галогена), 1-3 O-алкильными группами, 1-3 -SH группами, 1-3 -S-алкильными группами, 1-3 -O-CO-алкильными группами, 1-3 -O-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -S(O)_n-алкильными группами, 1-3 -SO₂-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-алкильными группами, 1-3 -N(алкил)₂ группами, 1-3 -NH₂ группами или 1-3 -(CH₂)_0-3Z группами, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, -NHY³, -CO-N¹Y² или -CO-OY³, где Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂ или -(CH₂)_0-3Z' и Y³ представляет собой Н, -(СН₂)_0-3-СН(NHCOCH₃)Z', -(СН₂)_0-3-СН(NH₂)Z' или -(СН₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН,

R⁵ представляет собой -L-СВЯЗУЮЩЕЕ, Н, F, NH₂, NO₂, галоген, SH или -(СН₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, -NHY³, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³,

причем L представляет собой линкер и СВЯЗУЮЩЕЕ представляет собой связующее, причем связующее является антителом и присоединено к множеству молекул активного соединения, причем молекула активного соединения представляет собой ингибитор кинезинового белка веретена,

R⁹ представляет собой Н, F, СН₃, CF₃, CH₂F или CHF₂;

а также его физиологически приемлемые соли.

47. Соединение общей формулы (III):

в которой

X₁ представляет собой N, X₂ представляет собой N и Х₃ представляет собой С, или X₁ представляет собой СН, X₂ представляет собой С и Х₃ представляет собой N, или X₁ представляет собой NH, X₂ представляет собой С и Х₃ представляет собой С, или X₁ представляет собой CH, X₂ представляет собой N и Х₃ представляет собой С;

R¹ представляет собой Н или -(СН₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, -NHY³, -OY³, -SY³, галоген, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, -(CH₂CH₂O)_0-3-(СН₂)_0-3Z' или -CH(CH₂W)Z' и Y³ представляет собой Н или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, NH₂, SO₃H, СООН, -NH-CO-CH₂-CH₂-CH(NH₂)COOH или -(CO-NH-CHY⁴)_1-3COOH, причем W представляет собой Н или ОН;

R² и R⁴ независимо друг от друга представляют собой Н, -CO-CHY⁴-NHY⁵или -(СН₂)_0-3Z или R² и R⁴ вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-CH₂-, причем R¹⁰ представляет собой Н, NH₂, SO₃H, СООН, SH или ОН;

причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³,

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил и Y⁵ представляет собой Н или -CO-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶ представляет собой линейный или разветвленный C_1-6алкил;

А представляет собой СО, SO, SO₂, SO₂NH или CNNH;

R³ представляет собой необязательно замещенную алкильную, арильную, гетероарильную, гетероалкильную, гетероциклоалкильную группу, которая может быть замещена 1-3 -ОН группами, 1-3 атомами галогена, 1-3 галогенированными алкильными группами (причем каждая может содержать 1-3 атома галогена), 1-3 O-алкильными группами, 1-3 -SH группами, 1-3 S-алкильными группами, 1-3 -O-CO-алкильными группами, 1-3 -O-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -S(O)_n-алкильными группами, 1-3 -SO₂-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-алкильными группами, 1-3 -N(алкил)₂ группами, 1-3 -NH₂ группами или 1-3 -(CH₂)_0-3Z группами, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, -NHY³, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³, где Y¹ и Y² ^{независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂ или -(CH₂)_0-3Z' и Y³ представляет собой Н, -(CH₂)_0-3-CH(NHCOCH₃)Z', -(CH₂)_0-3-CH(NH₂)Z' или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН,}

R⁵ представляет собой Н, F, NH₂, NO₂, галоген, SH или -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, -NHY³, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³,

R⁹ представляет собой Н, F, СН₃, CF₃, CH₂F или CHF₂;

а также его физиологически приемлемые соли.

48. Соединение общей формулы (IV):

в которой

X₁ представляет собой СН, Х₂ представляет собой С и Х₃ представляет собой N;

R¹ представляет собой -L-СВЯЗУЮЩЕЕ, Н или -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, -NHY³, -OY³, -SY³, галоген, -CO-NY¹Y² или -СО-OY³,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH2, -(CH₂CH₂O)_0-3-(CH₂)_0-3Z' или -CH(CH₂W)Z' и Y³ представляет собой Н или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, NH₂, SO₃H, СООН, -NH-CO-CH₂-CH₂-CH(NH₂)COOH или -(CO-NH-CHY⁴)_1-3COOH; причем W представляет собой Н или ОН;

R² и R⁴ независимо друг от друга представляют собой -L-СВЯЗУЮЩЕЕ, Н, -CO-CHY⁴-NHY⁵ или -(CH₂)_0-3Z или R² и R⁴ вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-CH₂-, причем R¹⁰ представляет собой L-#1, Н, NH₂, SO₃H, СООН, SH или ОН;

причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³,

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, C_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил и Y⁵ представляет собой Н или -CO-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶ представляет собой линейный или разветвленный С_1-6алкил;

А представляет собой СО, SO, SO₂, SO₂NH или CNNH;

R³ представляет собой -L-СВЯЗУЮЩЕЕ или необязательно замещенную алкильную, арильную, гетероарильную, гетероалкильную, гетероциклоалкильную группу, которая может быть замещена 1-3 -ОН группами, 1-3 атомами галогена, 1-3 галогенированными алкильными группами (причем каждая может содержать 1-3 атома галогена), 1-3 О-алкильными группами, 1-3 -SH группами, 1-3 -S-алкильными группами, 1-3 -О-СО-алкильными группами, 1-3 -O-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-алкильными группами, 1-3 -NH-СО-NH-алкильными группами, 1-3 -S(O)_n-алкильными группами, 1-3 -SO₂-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-алкильными группами, 1-3 -N(алкил)₂ группами, 1-3 -NH₂ группами или 1-3 -(CH₂)_0-3Z группами,

причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, -NHY³, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³, причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂ или -(CH₂)_0-3Z' и Y³ представляет собой Н, -(CH₂)_0-3-CH(NHCOCH₃)Z', -(CH₂)_0-3-CH(NH₂)Z' или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН,

R⁵ представляет собой -L-СВЯЗУЮЩЕЕ, Н, F, NH₂, NO₂, галоген, SH или -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, -NHY³, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³,

R⁶ и R⁷ независимо друг от друга представляют собой Н, циано, (необязательно фторированный) С_1-10-алкил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкенил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкинил, гидрокси или галоген,

R⁹ представляет собой Н, F, СН₃, CF₃, CH₂F или CHF₂;

а также его физиологически приемлемые соли.

49. Соединение общей формулы (IV):

в которой

X₁ представляет собой СН, Х₂ представляет собой С и Х₃ представляет собой N;

R¹ представляет собой Н или -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -Н, -NHY³, -OY³, -SY³, галоген, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂, -(CH₂CH₂O)_0-3-(CH₂)_0-3Z' или -CH(CH₂W)Z' и Y³ представляет собой Н или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, NH₂, SO₃H, СООН, -NH-CO-CH₂-CH₂-CH(NH₂)COOH или -(CO-NH-CHY⁴)_1-3COOH; причем W представляет собой Н или ОН;

R² и R⁴ независимо друг от друга представляют собой Н, -CO-CHY⁴-NHY⁵ или -(CH₂)_0-3Z или R² и R⁴ вместе представляют собой (при образовании пирролидинового кольца) -CH₂-CHR¹⁰- или -CHR¹⁰-CH₂-, причем R¹⁰ представляет собой Н, NH₂, SO₃H, СООН, SH, или ОН;

причем Z представляет собой -Н, галоген, -OY³, -SY³, NHY³, -CO-NY¹Y² или -CO-OY³,

причем Y⁴ независимо друг от друга представляют собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, С_1-6алкил или необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил и Y⁵ представляет собой Н или -CO-CHY⁶-NH₂, причем Y⁶ представляет собой линейный или разветвленный С_1-6алкил;

А представляет собой СО, SO, SO₂, SO₂NH или CNNH;

R³ представляет собой необязательно замещенную алкильную, арильную, гетероарильную, гетероалкильную, гетероциклоалкильную группу, которая может быть замещена 1-3 -ОН группами, 1-3 атомами галогена, 1-3 галогенированными алкильными группами (причем каждая может содержать 1-3 атома галогена), 1-3 О-алкильными группами, 1-3 -SH группами, 1-3 -S-алкильными группами, 1-3 -О-СО-алкильными группами, 1-3 -O-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-алкильными группами, 1-3 -NH-CO-NH-алкильными группами, 1-3 -S(O)_n-алкильными группами, 1-3 -SO₂-NH-алкильными группами, 1-3 -NH-алкильными группами, 1-3 -N(алкил)₂ группами, 1-3 -NH₂ группами или 1-3 -(CH₂)_0-3Z группами,

причем Y¹ и Y² независимо друг от друга представляют собой Н, NH₂ или -(СН₂)_0-3Z' и Y³ представляет собой Н или -(CH₂)_0-3Z', причем Z' представляет собой Н, SO₃H, NH₂ или СООН;

R⁶ и R⁷ независимо друг от друга представляют собой Н, циано, (необязательно фторированный) С_1-10-алкил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкенил, (необязательно фторированный) С_2-10-алкинил, гидрокси или галоген,

R⁹ представляет собой Н, F, СН₃, CF₃, CH₂F или CHF₂;

а также его физиологически приемлемые соли.

50. Соединение по п. 48 или 49, причем Z представляет собой Cl или Br.

51. Соединение по п. 48 или 49, причем R¹ представляет собой -(CH₂)_0-3Z, причем Z представляет собой -CO-NY¹Y², причем Y² представляет собой -(CH₂CH₂O)_0-3-(CH₂)_0-3Z' и Y¹ представляет собой Н, NH₂ или -(CH₂CH₂O)_0-3-(CH₂)_0-3Z'.

52. Соединение по п. 48 или 49, причем Y¹ представляет собой Н, Y² представляет собой -(CH₂CH₂O)₃-CH₂CH₂Z' и Z' представляет собой -СООН.

53. Соединение по п. 48 или 49, причем Y¹ представляет собой Н, Y² представляет собой -CH₂CH₂Z' и Z' представляет собой -(CONHCHY⁴)₂COOH.

54. Соединение по п. 48 или 49, причем Y⁴ представляет собой линейный или разветвленный, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂, С_1-6алкил.

55. Соединение по п. 48 или 49, причем по меньшей мере один Y⁴ выбирается из группы, состоящей из изо-пропила или -СН₃.

56. Соединение по п. 48 или 49, причем Y¹ представляет собой Н, Y² представляет собой -CH₂CH₂Z', Z' представляет собой -CONHCHY⁴COOH и Y⁴ представляет собой необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил.

57. Соединение по п. 51, причем Y¹ представляет собой Н, Y² представляет собой -CH₂CH₂Z', Z' представляет собой -CONHCHY⁴COOH и Y⁴ представляет собой необязательно замещенный заместителем -NH₂ арил или бензил.

58. Соединение по п. 56, причем Y⁴ представляет собой аминобензил.

59. Соединение по п. 48 или 49, причем R² представляет собой -(CH₂)_0-3Z и Z представляет собой -SY³.

60. Соединение по п. 48 или 49, причем R⁴ представляет собой -CO-CHY⁴-NHY⁵ и Y⁵ представляет собой Н.

61. Соединение по п. 48 или 49, причем R⁴ представляет собой -CO-CHY⁴-NHY⁵ и Y⁵ представляет собой -CO-CHY⁶-NH₂.

62. Соединение по п. 60, причем Y⁴ представляет собой линейный или разветвленный C_1-6алкил, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂.

63. Соединение по п. 61, причем Y⁴ представляет собой линейный или разветвленный C_1-6алкил, необязательно замещенный заместителем -NHCONH₂.

64. Соединение по п. 48 или 49, причем соединение имеет одну из следующих формул:

N-(3-Аминопропил)-N-{(1R)-1-[4-бензил-1-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиразол-3-ил]-2,2-диметилпропил}-2-гидроксиацетамид;

N-(3-Аминопропил)-N-{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}-2-гидроксиацетамид;

(2S)-2-амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]-N-метилбутанамид(1:1);

N-(3-Аминопропил)-N-{(1S)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}ацетамид;

(15S,19R)-15-Амино-19-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-имидазол-2-ил]-18-гликолоил-20,20-диметил-14-оксо-4,7,10-триокса-13,18-диазагеникозан-1-овая кислота;

N-{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-имидазол-2-ил]-2,2-диметилпропил}-N-[(3S)-3)4-диаминобутил]-2-гидроксиацетамид(1:1);

4-амино-N-(3-аминопропил)-N-{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-имидазол-2-ил]-2,2-диметилпропил}бензамид(2:1);

N-{3-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-имидазол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]пропил}-N5-карбамоил-1-орнитинамид(1:1);

N-(3-Аминопропил)-N-{(1S)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}-2-гидроксиацетамид;

S-(1-{2-[(N-{(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-имидазол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}-бета-аланил)амино]этил}-2)5-диоксопирролидин-3-ил)-L-цистеин;

N-[6-(3-{[(2R)-2-Амино-2-карбоксиэтил]сульфанил}-2,5-диоксопирролидин-1-ил)гексаноил]-L-валил-N⁵-карбамоил-L-орнитил-N⁶-{(2S)-2-амино-4-[{(1R)-1-[4-бензил-1-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиразол-3-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}-L-лизин;

N-[19-(3(R/S)-{[(2R)-2-Амино-2-карбоксиэтил]сульфанил}-2,5-диоксопирролидин-1-ил)-17-оксо-4,7,10,13-тетраокса-16-азанонадекан-1-оил]-R/S-{2-[(3-аминопропил){(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-имидазол-2-ил]-2,2-диметилпропил}амино]-2-оксоэтил}гомоцистеин;

S-[(3R/S)-1-(2-{[6-({2-[(3-Аминопропил){(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}амино]-2-оксоэтил}сульфанил)гексаноил]амино}этил)-2,5-диоксопирролидин-3-ил]-L-цистеин;

S-{1-[2-({[(1R,3S)-3-({(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}амино)циклопентил]карбонил} амино)этил]-2,5-диоксопирролидин-3-ил}-L-цистеин;

N⁶-(N-{(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-имидазол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}-D-аланил)-L-лизин;

N⁶-(N-{(2S)-2-Амино-4-[{(1R)-1-[1-бензил-4-(2,5-дифторфенил)-1Н-пиррол-2-ил]-2,2-диметилпропил}(гликолоил)амино]бутаноил}-бета-аланил)-N²-{N-[6-(3-{[(2R)-2-амино-2-карбоксиэтил]сульфанил}-2,5-диоксопирролидин-1-ил)гексаноил]-L-валил-L-аланил}-L-лизин;