Способ получения олигонуклеотидного комплекса для доставки в клетки млекопитающих



Способ получения олигонуклеотидного комплекса для доставки в клетки млекопитающих
Способ получения олигонуклеотидного комплекса для доставки в клетки млекопитающих
Способ получения олигонуклеотидного комплекса для доставки в клетки млекопитающих

Владельцы патента RU 2698726:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение Федеральный исследовательский центр "Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук" (ИЦиГ СО РАН) (RU)

Изобретение относится к способу получения олигонуклеотидного комплекса для доставки в клетки млекопитающих и может быть использовано в молекулярной медицине. Предложенный способ включает смешивание раствора соответствующего олигонуклеотида с раствором носителя в определенном соотношении и отличается тем, что водный раствор олигонуклеотида с концентрацией 2,0-25 мкг/мл смешивают с водным раствором декстрана с мол. массой 65-70 кДа с концентрацией 2,0-2,5 мг/мл, полученную смесь перемешивают и подвергают облучению пучками электронов высокой энергии в дозе 2,5-10 кГр. Предложен новый эффективный способ, позволяющий упростить и уменьшить длительность получения указанного олигонуклеотидного комплекса. 2 з.п. ф-лы, 4 ил., 1 табл., 4 пр.

 

Изобретение относится к области химии, биологии и молекулярной медицины и может быть использовано для быстрой и специфичной доставки любых олигонуклеотидов в эукариотические клетки, что способно значительно повысить эффективность ген-направленных воздействий.

Применение ген-направленных олигонуклеотидных препаратов для исследовательских целей, а также коррекции аномальной экспрессии генов, приводящей к патологии, считается перспективным направлением биомедицины (Dygalo N.N., Kalinina T.S., Shishkina G.T. //Ann N Y Acad Sci. 2008. V. 1148. P. 409-414; Shishkina G.T., Kalinina T.S., Popova N.K., Dygalo N.N. // Behav Neurosci. 2004. V. 118. P. 1285-1292). Использование этого подхода сдерживается нерешенной проблемой доставки олигонуклеотидов, комплементарных последовательностям мРНК гена-мишени, в клетку. Для увеличения поступления, олигонуклеотиды подвергают разнообразным химическим модификациям, а также создают на их основе различные мультимолекулярные комплексы (Schoch К.М., Miller Т.М. // Neuron. 2017. V. 94. P. 1056-1070; Juliano R.L. // Nucleic Acids Res. 2016. V. 19. P. 6518-6548).

Известен способ получения композиции носителя для доставки нуклеиновой кислоты (коротких интерферирующих РНК) и собственно носителя, на основе диацилфосфатидилхолина, и, по меньшей мере, одного компонента, выбранного из группы, состоящей из холестерина и катионного липида с холестериновым каркасом, и алифатического первичного амина. Заявленная композиция способна эффективно доставлять нуклеиновую кислоту в клетки, а также имеет низкую токсичность и высокую безопасность (патент RU 2476229 С2, оп. 27.02.2013). Этот способ аналогичен созданию липосом и, кроме того, данный способ доставки требует обязательной стерилизации полученных смесей, что усложняет технологическую процедуру.

Известен способ доставки нуклеозидтрифосфатов в эукариотические клетки в виде комплекса нуклеозидтрифосфата с катионными наногелями, представляющими собой сополимер полиэтиленимина и полиэтиленгликоля (Vinogradov S.V., Expert Opin. Drug. Deliv. 2007, v. 4(1), p.5-17; Vinogradov S.V., Curr. Pharm. Des. 2006, v. 12, p. 36). Предварительно полученный наногель диспергируют в воде при рН 10 для депротонирования аминогрупп, затем титруют его полученным раствором нуклеозидтрифосфата до рН 7.5, концентрируют в вакууме, пропускают через колонку NAP-20 и лиофилизуют.Недостатками данного способа являются длительность процедуры и низкое качество целевого продукта, вследствие недостаточно прочной связи нуклеозидтрифосфата с носителем.

Известен способ доставки ДНК в эукариотические клетки, заключающийся в том, что доставку ДНК осуществляют в биосовместимых и биодеградируемых микрокапсулах, состоящих из мультислойных полимерных оболочек DEAE-декстран/к-каррагинан, которые предохраняют ДНК от расщепления нуклеазами в процессе ее доставки в клетки организма. Сорбируют плазмидную ДНК пористыми частицами СаСО3 методом соосаждения. Получают мультислойные оболочки путем поочередного наслоения DEAE-декстран и к-каррагинан на пористые частицы СаСО3. Помещают микрокапсулы в раствор 0,1М ЭДТА. Интенсивно перемешивают до полного растворения внутреннего ядра, состоящего из СаСО3. Трижды промывают водой полученные микрокапсулы. Вводят в клетки животных путем инъекции (патент RU 2409384С1, оп. 20.01.2011).

Способ увеличивает количество сорбированной ДНК до 96,0-99,1% и увеличивает прочность оболочки микрокапсулы, но требует технически сложных многостадийных процедур создания мультислойных оболочек.

Наиболее близким к заявляемому способу - прототипом, является способ получения олигонуклеотидного комплекса, содержащего поликатионный амфифил в качестве компонента, связывающего и упаковывающего нуклеиновую кислоту, нейтральный фосфолипид в качестве структурообразующего и промотирующего компонента при следующем содержании компонентов, мол. %: поликатионный амфифил -30-75; нейтральный фосфолипид - 70-25. В качестве поликатионного амфифила используют одно из соединений (1-3), выраженное общей формулой, представленной на фиг. 1, где n=3 для амфифилов 1 и 2, n=5 для амфифила 3; Х=>С=O (карбонильная группа) для 1, X=-NH-CO-(карбаматная группа) для амфифилов 2 и 3. Олигонуклеотидный комплекс получают следующим образом. Раствор поликатионного амфифила (1-3) и нейтрального фосфолипида DOPE, взятые в определенном соотношении в подходящем органическом растворителе (например, этиловый спирт, хлороформ) упаривают в вакууме до образования липидной пленки. Полученную липидную пленку гидратируют в необходимом количестве воды, а затем озвучивают на ультразвуковой бане до получения однородной смеси. Озвучивание можно заменить экструзией через поликарбонатную мембрану с размером пор от 50 до 200 нм. (патент RU 2423147С1, оп. 10.07.2011).

Недостатками прототипа являются трудоемкость и длительность, поскольку предлагаемый способ предусматривает предварительное получение с помощью органического синтеза 9 соединений, что существенно увеличивает длительность процесса.

Задачей изобретения является разработка простого и быстрого способа эффективной доставки олигонуклеотидов внутрь клеток млекопитающих в составе комплексов, не обладающих токсичностью.

Технический результат: упрощение и уменьшение длительности способа.

Поставленная задача достигается предлагаемым способом, заключающимся в следующем.

Водный раствор необходимых олигонуклеотидов (ОН) с длиной от 18 до 501 п. о. с концентрацией 2,0-25 мкг/мл смешивают с водным раствором декстрана с мол. весом 65-70 кДа с концентрацией 2,0-2,5 мг/мл в соотношении ОН:декстран, равном около 1:2000 - 1:1500, соответственно. Полученную смесь перемешивают и подвергают облучению пучками электронов высокой энергии в дозе 2,5 - 10 кГр. В результате образуется олигонуклеотидный комплекс. Индуцированные пучками электронов высокой энергии сшивки декстрана с олигонуклеотидами могут иметь либо химическую природу, в виде ковалентных связей, либо физическую природу в виде координационных, электростатических, гидрофобных, диполь-дипольных взаимодействий или цепных зацеплений между сегментами сети. Эффективность сшивки может быть подтверждена замедлением электрофоретической подвижности ОН, облученных в смеси с декстраном, по сравнению с облучением водных растворов ОН без декстрана.

Образование комплекса ОН:декстран происходит в результате однократной радиационной сшивки, что не требует затратной и трудоемкой очистки получаемого комплекса от продуктов химических реакций, а также обеспечивает требуемый уровень стерильности вводимого препарата, необходимый для работы с живыми биологическими объектами.

Полученные комплексы ОН:декстран используются для непосредственного введения в клетки млекопитающих. Доставка полученных комплексов ОН:декстран в клетки значительно эффективнее введения ОН без комплекса с декстраном.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами конкретного выполнения.

Пример 1.

Смесь ОН с длиной от 26 до 501 п. о. в концентрации 0,02 мг/мл смешивают с водным раствором декстрана с мол. весом 70 кДа (декстран70) в концентрации 2,5 мг/мл в объеме 20 мкл. Заявленные смеси готовят в количестве не менее 3 для каждой дозы облучения. Смеси перемешивают и подвергают облучению пучками электронов высокой энергии (2.5 МэВ) мощностью 0; 0,25; 0,50; 0,75; 2,5; 10 и 25 кГр на ускорителе ИЛУ-10 (ИЯФ СО РАН). После процедуры облучения комплексы ОН:декстран наносят на гель, окрашенный бромистым этидием. После электрофоретического разделения проводят денситометрию с применением любой пригодной для этих целей программы, преимущественно ScionImage. Контролем являются смеси ОН с декстраном70, не облученные на ускорителе ИЛУ-10, а также ОН без декстрана (нативные).

На Фиг. 1 представлены результаты денситометрии комплексов ОН:декстран, облученных пучками электронов разной мощности. Видно, что облучение низкими дозами электронных пучков, менее 1 кГр, не приводит к выраженным отклонениям в подвижности фрагментов ОН (левый график). Выраженное снижение электрофоретической подвижности (ассиметрия пиков, выделенных вертикальными линиями относительно максимума и минимума пиков в контрольном образце) происходит при облучении 2,5 и 10 кГр, а применение высокой дозы облучения в 25 кГр вызывает деструкцию нуклеинового материала (правый график), что исключает применение этой дозы в дальнейшем. Таким образом, эффективная доза облучения комплекса ОН:декстран составляет 2,5-10кГр.

Пример 2.

Водный раствор ОН с длиной 100 п. о. смешивают с декстраном70 в концентрации 0,025; 0,25 и 2,5 мг/мл в объеме 20 мкл. Смеси готовят в количестве не менее 3-х для каждой дозы декстрана. Смеси перемешивают и подвергают облучению пучками электронов высокой энергии (2.5 МэВ) мощностью 1; 2,5 и 10 кГр на ускорителе ИЛУ-10 (ИЯФ СО РАН). После процедуры облучения комплексы ОН:декстран наносят на гель, окрашенный бромистым этидием. После электрофоретического разделения проводят денситометрию с применением любой пригодной для этих целей программы, в нашем случае мы использовали программу ScionImage.

На Фиг. 2 видно, что наибольшее снижение электрофоретической подвижности происходит при образовании комплекса ОН с декстраном в дозе 2,5 мг/мл.

Пример 3.

Водный раствор смеси ОН с длинами от 26 до 501 п. о. в концентрации 0,02 мг/мл смешивают с водным раствором декстрана70 в концентрации 2,5 мг/мл в объеме 20 мкл. Смеси готовят в количестве не менее 3 для каждой дозы облучения. Смеси перемешивают и подвергают облучению пучками электронов высокой энергии (2.5 МэВ) мощностью 0; 2,5 и 10 кГр на ускорителе ИЛУ-10 (ИЯФ СО РАН). После процедуры облучения комплексы ОН:декстран наносят на гель, окрашенный бромистым этидием. После электрофоретического разделения проводят денситометрию с применением программы ScionImage. Контролем являются смеси ОН с декстраном70, не облученные на ускорителе ИЛУ-10, а также ОН без декстрана (нативные).

На Фиг. 3 представлены результаты денситометрии комплексов ОН:декстран при использовании ОН разного размера. Видно, что выраженное снижение электрофоретической подвижности (ассиметрия пиков, выделенных вертикальными линиями относительно максимума и минимума пиков в контрольном образце) наблюдается как для ОН условно малого размера (26-110 п. о.), так и для ОН условно большого размера (330-501 п. о.).

С учетом установленных оптимальных параметров дозы облучения и дозы декстрана70 снижение электрической подвижности в геле было зафиксировано для комплексов ОН:декстран в диапазоне пограничных значений для разной концентрации ОН, разного размера ОН, концентрации декстрана70 и дозы облучения (Таблица).

Пример 4.

Эксперимент проведен на крысятах линии Вистар 3-4-суточного возраста. Водный раствор ОН (18 п.о.) с концентрацией 15 мкг/мл, был смешан с водным раствором декстрана70 с концентрацией 2,5 мг/мл и облучен на ускорителе ИЛУ-10 пучками электронов высокой энергии в дозе 10 кГр. Для последующей визуализации на срезах мозга использованный ОН был флуоресцентно мечен бис-имидазолом. ОН такого размера используются в качестве антисмысловых и при создании коротких интерферирующих РНК для подавления экспрессии гена-мишени. Комплекс ОН:декстран был стереотаксически точно введен в дозе 0.06 мкг/5 мкл в головной мозг (стволовую часть) неонатальных крысят под Холодовым наркозом, описанным ранее способом [Shishkina G.T., Kalinina T.S., Dygalo N.N. // Neuroscience. 2007. V. 150. P. 404-412]. Контрольные животные получали внутримозговую инъекцию ОН без декстрана либо водную смесь ОН:декстран без облучения на ускорителе ИЛУ-10. Через 24 часа после введения препаратов, животных в состоянии глубокой холодовой анестезии транскардиально перфузировали сначала физиологическим раствором и затем раствором параформальдегида, после чего головной мозг извлекали для последующего микроскопического анализа локализации флуоресцентно меченных олигонуклеотидов в клетки [Lanshakov D.A., Sukhareva E.V., Kalinina T.S., Dygalo N.N. // Neurobiol Dis. 2016. V. 91. P. 1-9].

На Фиг. 4 представлена картина локализации комплексов ОН:декстран, несущих флуоресцентную метку (верхний ряд фотографий), а также свободных флуоресцентно меченных ОН (нижний ряд фотографий) в клетках головного мозга неонатальных животных. Стрелками отмечены наиболее организованные скопления ОН в клетках. Линейка - 10 мкм.

На Фиг. 4 видно, что ОН значительно лучше поступают в клетки мозга в комплексах с декстраном, чем такие же меченные флуоресцентной меткой олигонуклеотиды, но не включенные в комплексы с декстраном. В комплексах с декстраном, ОН обнаруживались в значительной части клеток мозга, и лишь небольшое их количество оставалось в межклеточном пространстве. В отличие от комплексов, свободные ОН проникали в существенно меньшее число клеток, и их пропорция [(в клетке)/(в межклеточном пространстве)] была в 3 раза ниже, чем для комплексов. Статистическая обработка выявила достоверно значимое увеличение проникновения в клетки мозга комплексов ОН:декстран - (F(2,3)=10,10; р<0,01).

Предлагаемый способ получения олигонуклеотидного комплекса для доставки в клетки млекопитающих имеет ряд очевидных преимуществ перед применяемыми для этих целей разнообразными химическими модификациями, а также формированием физико-химическим путем на их основе всевозможных мультимолекулярньгх комплексов. Получаемые обоими последними, как правило, многостадийными способами препараты нуждаются в затратной и трудоемкой очистке от зачастую весьма токсичных компонентов, используемых в этих технологиях. Кроме того, для применения in vivo препараты необходимо стерилизовать, что также добавляет еще одну технологическую процедуру. При радиационной сшивке полимеров вся процедура получения комплексного препарата сводится к приготовлению смеси олигонуклеотидов с олигосахаридом (декстраном) и одностадийному ее облучению пучком электронов высокой энергии, что одновременно стерилизует препарат, исходно свободный от токсичных примесей. Предлагаемый способ свидетельствует о неоспоримых преимуществах радиационной сшивки олигонуклеотидов с олигосахаридами для повышения эффективности доставки ген-нацеленных олигонуклеотидных препаратов в клетки млекопитающих.

1. Способ получения олигонуклеотидного комплекса для доставки в клетки млекопитающих, включающий смешивание раствора соответствующего олигонуклеотида с раствором носителя в определенном соотношении, отличающийся тем, что водный раствор олигонуклеотида (ОН) с концентрацией 2,0-25 мкг/мл смешивают с водным раствором декстрана с мол. массой 65-70 кДа с концентрацией 2,0-2,5 мг/мл, полученную смесь перемешивают и подвергают облучению пучками электронов высокой энергии в дозе 2,5-10 кГр.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что используют олигонуклеотиды с длиной от 18 до 501 п.о.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что для облучения смеси используют ускоритель ИЛУ-10.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к соединению общей формулы (I): в которой K представляет собой активную группу эфира карбоновой кислоты или -О-RM; где RM обозначает атом Н, метальную, этильную, бензильную или трет-бутильную группу; Pr представляет собой атом Н или аминозащитную группу; # обозначает асимметричный атом С; Е представляет собой аденинильную, цитозинильную, псевдо-изоцитозинильную, гуанинильную, тиминильную, урацилильную или фенильную группу, при необходимости замещенную защитной группой для нуклеотидного основания; R1 обозначает группу общей формулы (II): в которой R2 обозначает группу эфира фосфоновой кислоты или группу фосфоновой кислоты; R3 обозначает аминозащитную группу; m обозначает 1, 2, 3 или 4; и h обозначает 0, 1, 2 или 3; при условии что сумма m и h в общей формуле (II) находится в пределах: 2≤х≤5.

Изобретение относится к соединениям для лечения метаболических заболеваний и может быть использовано в медицине. Предложено соединение, содержащее одноцепочечный модифицированный олигонуклеотид и конъюгирующую группу, или его фармацевтически приемлемая соль, при этом конъюгирующая группа содержит ,где расщепляемый фрагмент (СМ) представляет собой связь или группу, которая может быть расщеплена при физиологических условиях; модифицированный олигонуклеотид имеет формулу: Ges Ges Tes Tds mCds mCds mCds Gds Ads Gds Gds Tds Gds mCes mCes mCes Ae, где A = аденин, mC = 5'-метилцитозин, G = гуанин, T = тимин, e = 2'-O-метоксиэтиловый модифицированный нуклеозид, d = 2'-дезоксинуклеозид и s = тиофосфатная межнуклеозидная связь; и конъюгирующая группа связана с модифицированным олигонуклеотидом на 5'-конце модифицированного олигонуклеотида.

Изобретение относится к биотехнологии. Описан антисмысловой олигомер, который вызывает пропуск 55-го экзона в гене дистрофина человека, состоящий из нуклеотидной последовательности, комплементарной любой из нуклеотидных последовательностей, состоящих из 10 - 31-го, 10 - 32-го, 11 - 31-го, 11 - 32-го, 13 - 34-го, 13 - 35-го, 13 - 36-го, 14 - 35-го, 14 - 36-го, 15-го – 35-го, 15-го – 36-го, 16 - 34-го, 16 - 35-го или 16 - 36-го нуклеотидов, считая от 5'-конца 55-го экзона гена дистрофина человека.

Изобретение относится к области биохимии и молекулярной биологии. Предложено применение молекулы нуклеиновой кислоты, способной к связыванию с SDF-1 и блокированию взаимодействия между SDF-1 и рецептором SDF-1 CXCR7.

Изобретение относится к биохимии. Описано двухцепочечное средство для РНКи для ингибирования экспрессии транстиретина (TTR), содержащее смысловую цепь, комплементарную антисмысловой цепи, где указанная антисмысловая цепь содержит последовательность, комплементарный нуклеотидам 504-526 гена транстиретина (TTR) (SEQ ID NO:1), где смысловая цепь имеет длину 21 нуклеотид, а антисмысловая цепь имеет длину 23 нуклеотида.

Изобретение относится к применимому в медицине соединению, содержащему модифицированный олигонуклеотид и конъюгирующую группу, при этом модифицированный олигонуклеотид состоит из 12-30 связанных нуклеозидов и содержит последовательность азотистых оснований, включающую часть из по меньшей мере 8 смежных азотистых оснований, комплементарную равной по длине части SEQ ID NO: 1, при этом последовательность азотистых оснований модифицированного олигонуклеотида по меньшей мере на 90% комплементарна SEQ ID NO: 1, где конъюгирующая группа содержит где конъюгирующая группа связана с модифицированным олигонуклеотидом на 5'-конце или 3'-конце модифицированного олигонуклеотида.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к самособирающейся в наночастицу олигонуклеотидной конструкции, и может быть использовано в медицине. Олигонуклеотидная конструкция согласно настоящему изобретению может быть полезной в качестве системы доставки на основе олигонуклеотида нового типа, а также инструмента для лечения злокачественных заболеваний, инфекционных заболеваний и т.п.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способам обнаружения молекулы-мишени в тест-образце, что может быть использовано в медицине. Описанные способы облегчают детекцию мишени, отличающейся от нуклеиновой кислоты (например, белка-мишени), в исследуемом образце путем детекции нуклеиновой кислоты (т.е., аптамера).

Изобретение относится к биотехнологии. Описаны трансляторы на основе нуклеиновых кислот, способные осуществлять логические операции с улучшенной эффективностью, максимизированным выходом и сниженным побочным действием, в частности в биологической системе.

Изобретение относится к пригодному для применения в медицине соединению, содержащему модифицированный олигонуклеотид и конъюгирующую группу при этом модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных азотистых оснований, комплементарных равной по длине части азотистых оснований 3533-3552 в SEQ ID NO: 3, при этом модифицированный олигонуклеотид содержит сегмент гэп, состоящий из связанных дезоксинуклеозидов; сегмент крыла 5', состоящий из связанных нуклеозидов; сегмент крыла 3', состоящий из связанных нуклеозидов; при этом сегмент гэп расположен между сегментом крыла 5' и сегментом крыла 3', и при этом каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит модифицированный сахар, и где по меньшей мере один нуклеозид содержит модифицированное азотистое основание; и модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере одну модифицированную межнуклеозидную связь.

Группа изобретений относится к области ядерной медицины. Набор для приготовления суспензии полипептидных биодеградабельных микрочастиц для проведения трансартериальной радиоэмболизации капилляров печени, находящихся в изотоническом 0,9% водном растворе хлорида натрия, меченных изотопом рения, состоящий из вспомогательных реагентов: антиоксиданта - аскорбиновой кислоты в количестве 10 мг; восстановителя рения до более низкого валентного состояния - хлорида олова дигидрата - 13,3 мг; эмульгатора - полисорбата-80 - 2,5 мг; полипептидного носителя радионуклидов - микросфер альбумина крови человека диаметром 20-40 мкм - 10 мг; трансхелатора и стабилизатора рН - K,Na- виннокислого (тартрат K, Na) - 18,9 мг; при этом все вспомогательные реагенты расфасованы по трем флаконам: во флаконе №1 содержится смесь восстановителя и антиоксиданта, во флаконе №2 содержится смесь полипептидного носителя атомов радионуклида и эмульгатора, во флаконе №3 содержится трансхелатор и стабилизатор рН, способствующий достижению величины рН суспензии полипептидных биодеградабельных микрочастиц, находящихся в изотоническом 0,9% водном растворе хлорида натрия, меченных изотопом рения, в интервале от 2 до 5, при этом содержимое каждого флакона стерильно и лиофилизировано.

Группа изобретений относится к области ядерной медицины. Набор для приготовления суспензии полипептидных биодеградабельных микрочастиц для радиосиновэктомии, находящихся в изотоническом 0,9%-ном водном растворе хлорида натрия, меченных изотопом рения, состоит из вспомогательных реагентов: антиоксиданта - аскорбиновой кислоты в количестве 7 мг, восстановителя рения до более низкого валентного состояния - хлорида олова дигидрата - 11,4 мг, эмульгатора - полисорбата-80 - 1,25 мг, полипептидного носителя радионуклидов - микросфер альбумина крови человека диаметром 5-10 мкм - 5 мг, трансхелатора и стабилизатора рН - K,Na-виннокислого (тартрат K, Na) - 10 мг, при этом все вспомогательные реагенты расфасованы по трем флаконам: во флаконе №1 содержится смесь восстановителя и антиоксиданта, во флаконе №2 содержится смесь полипептидного носителя атомов радионуклида и эмульгатора, во флаконе №3 содержится трансхелатор и стабилизатор рН, при этом содержимое каждого флакона стерильно и лиофилизировано.

Описан способ получения ингаляционных частиц, содержащих фармацевтически активное средство, включающий: a) сухое измельчение композиции, содержащей твердое фармацевтически активное средство и размалываемую матрицу в мельнице, которая содержит множество мелющих тел, в течение периода времени, достаточного для получения ингаляционных частиц, содержащих твердое фармацевтически активное средство и размалываемую матрицу, где измельчение уменьшает размер частиц твердого фармацевтически активного средства до медианного размера частиц на основании значения объема в пределах между 50 нм и 3 мкм; и b) измельчение ингаляционных частиц, полученных на этапе а), в мельнице без мелющих тел в течение периода времени, достаточного для получения ингаляционных частиц со средним массовым аэродинамическим диаметром (ММАD) между 1 мкм и 20 мкм.

Изобретение относится к способу получения лиофилизата бортезомиба. Способ включает следующие стадии: a) предварительную многократную перекристаллизацию субстанции бортезомиба в хлористом метилене, или метаноле, или ацетоне, или этилацетате путем растворения субстанции бортезомиба в одном из указанных растворителей в соотношении их от 1:3 до 1:20 в течение от около 15 минут до около 30 минут при комнатной температуре и по окончании перекристаллизации последующее упаривание досуха полученного раствора после полного растворения субстанции бортезомиба на роторном испарителе под вакуумом; b) приготовление водного раствора маннита до полного его растворения с концентрацией его в растворе 10-20 мг/мл в течение 0,5-5,0 ч и поддержанием рН от 4,0 до 5,0; c) приготовление водного раствора бортезомиба в водном растворе маннита, полученном на стадии (b), путем растворения субстанции бортезомиба в водном растворе маннита при 15-30°С до полного растворения ее в течение менее 60 минут с получением раствора с концентрацией бортезомиба в нем 1,0-2,5 мг/мл при рН от 5,0 до 6,5 и в среде инертного газа азота или аргона; d) стерилизующую фильтрацию раствора со стадии (с) с использованием фильтрации под вакуумом или фильтрации под давлением 0,1-0,6 МПа и дозирование его во флаконы; e) проведение лиофильной сушки продукта со стадий (d) в камере лиофильной сушки в несколько этапов; f) заполнение камеры лиофильной сушки инертным газом, закупоривание флаконов и закатывание их колпачками.

Изобретение относится к области медицины и фармацевтики, а именно, к вагинальному суппозиторию для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний вульвы и влагалища, в особенности, заболеваний вульвы и влагалища, вызванных грибами Candida, например, вагинальных и вульвовагинальных кандидозов, где указанный вагинальный суппозиторий содержащие активный компонент — тетраборат натрия, диспергированный в основе — твердом при комнатной температуре жире, представляющем собой смесь триглицеридов, диглицеридов и моноглицеридов среднецепочечных (С16-С18) жирных кислот с гидроксильным числом, составляющим от 40 до 50 мг KOH/г, а также эмульгатор — полиоксиэтилен (20) сорбитан моноолеат и добавку, предотвращающую снижение температуры плавления и времени полной деформации суппозитория — моноглицериды дистиллированные, и к способу изготовления такого суппозитория.

Изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения перегрузки железом в форме порошка, содержащего от 25 масс. % до 45 масс.

Настоящее изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения стабильной наносуспензии. Представлен способ получения стабильной наносуспензии, содержащей по меньшей мере один природный материал, при этом способ включает стадии: предоставление по меньшей мере одного природного материала, в котором 100% объема частиц имеет размер частиц менее 320 мкм; диспергирование указанного по меньшей мере одного природного материала в растворителе; измельчение дисперсии таким образом, что 90% объема частиц имеет размер частиц менее 500 нм (D90<500 нм), причем стадия диспергирования или стадия измельчения включает добавление стабилизатора, причем по меньшей мере один природный материал выбран из группы, состоящей из растений, цианобактерий, водорослей и грибов, и природный материал не содержит женьшень.

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к вакцинам ассоциированным против эшерихиоза, стрептококкоза и псевдомоноза крупного рогатого скота. Вакцина содержит при следующем соотношении компонентов, мас.%: суспензия клеток чистой культуры возбудителя эшерихиоза E.coli - 24,0-29,0; суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus galloliticus - 24,0-29,0; суспензия клеток чистой культуры возбудителя Pseudomonas aeruginosa - 24,0-29,0; глюкоза - 1,0-2,0; формалин - 1,5-2,0; гидроокись алюминия - остальное.

Изобретение относится к области ветеринарии и представляет собой способ лечения крупного рогатого скота при букстонеллезе, заключающийся в применении комбинированного ветеринарного препарата в дозе по ДВ 510 мг/кг массы внутрь 2 раза в сутки в течение 5 суток, содержащего, мас.

Настоящее изобретение относится к предварительно заполненному стеклянному контейнеру, такому как предварительно заполненный стеклянный шприц, содержащему водную композицию ботулинового токсина.
Изобретение относится к области медицины и касается фармацевтических композиций для парентерального капельного введения, предназначенных для лечения патологических состояний производных кожи, а именно волос и ногтей.

Изобретение относится к способу получения олигонуклеотидного комплекса для доставки в клетки млекопитающих и может быть использовано в молекулярной медицине. Предложенный способ включает смешивание раствора соответствующего олигонуклеотида с раствором носителя в определенном соотношении и отличается тем, что водный раствор олигонуклеотида с концентрацией 2,0-25 мкгмл смешивают с водным раствором декстрана с мол. массой 65-70 кДа с концентрацией 2,0-2,5 мгмл, полученную смесь перемешивают и подвергают облучению пучками электронов высокой энергии в дозе 2,5-10 кГр. Предложен новый эффективный способ, позволяющий упростить и уменьшить длительность получения указанного олигонуклеотидного комплекса. 2 з.п. ф-лы, 4 ил., 1 табл., 4 пр.

Наверх