Гидролизат полисахаридного комплекса цветков пижмы обыкновенной как ингибитор белка-транспортера гликопротеина-р

Авторы патента:

Кириченко Екатерина Евгеньевна (RU)

Грандинарь Мария Михайловна (RU)

Есенина Анна Сергеевна (RU)

Черных Иван Владимирович (RU)

Попова Наталья Михайловна (RU)

Щулькин Алексей Владимирович (RU)

Якушева Елена Николаевна (RU)

A61K36/28 - Лекарства и медикаменты для терапевтических, стоматологических или гигиенических целей (изготовление специальных лекарственных форм A61J; химические аспекты или использование материалов для дезодорации воздуха, для дезинфекции или стерилизации или для бандажей, перевязочных средств, впитывающих прокладок или хирургических приспособлений A61L; соединения как таковые C01, C07,C08,C12N; мыла C11D; микроорганизмы как таковые C12N)

A61K31/715 - полисахариды, т.е. имеющие больше, чем пять сахаридных радикалов, соединенных друг с другом гликозидными связями; их производные, например простые эфиры, сложные эфиры

Владельцы патента RU 2699042:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к применению гидролизата полисахарида цветков пижмы обыкновенной в качестве ингибитора белка-транспортера гликопротеина-Р. Применение гидролизата полисахаридного комплекса цветков пижмы обыкновенной с молекулярной массой 3,8 кДа, полученного методом кислотного гидролиза цветков пижмы обыкновенной 0,1 М серной кислотой в течение 3 часов, в качестве ингибитора белка-транспортера гликопротеина-Р. Полученный гидролизат в опытах in vitro ингибирует активность Pgp, причем по выраженности эффекта он сопоставим с классическим ингибитором белка-транспортера верапамилом. 1 ил., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии и клинической фармакологии и предназначено для использования гидролизата полисахарида цветков пижмы обыкновенной в качестве ингибитора белка-транспортера гликопротеина-Р (Pgp), который может применяться для повышения эффективности фармакотерапии лекарственными веществами-субстратами Pgp, прогнозирования возможной принадлежности изучаемых лекарственных препаратов к субстратам данного транспортера и в качестве положительного контроля пониженной активности PGp при поиске веществ аналогичного действия.

Гликопротеин-Р (Pgp) - мембранный белок-транспортер, играющий ключевую роль во всасывании, распределении и выведении широкого спектра лекарственных веществ, являющихся его субстратами.

Известен ряд синтетических ингибиторов Pgp, таких как верапамил [Involvement of cytochrome Р450 3А4 and P-glycoprotein in first-pass intestinal extraction of omeprazole in rabbits / H.M. Fang [et al.] // Act. Pharmacologica Sinica. - 2009. - Vol. 30. - P. 1566-1572], тариквидар [Tariquidar-induced P-glycoprotein inhibition at the rat blood-brain barrier studied with (R)-11C-verapamil and PET / J.P. Bankstahl [et al.] // J. Nucl. Med. - 2008. - Vol. 49. - P. 1328-1335], циклоспорин [Cyclosporine Nephrotoxicity / By Emmanuel [et al.] // Bennett Seminars in Nephrology. - 2003. - Vol. 23, №5. - P. 465-476], кетоконазол [Inhibitory effect of ketoconazole on the pharmacokinetics of a multireceptor tyrosine kinase inhibitor BMS-690514 in healthy participants: assessing the mechanism of the interaction with physiologically-based pharmacokinetic simulations / Z. Yang [et al.] // J. Clin Pharmacol. - 2013. - Vol. 53, №2. -P. 217-227], линестренол [Патент РФ 2553362], афобазол [Патент РФ 2649134]. Однако синтетические средства, как правило, обладают системными побочными эффектами, а многие из них (например, тариквидар) являются весьма дорогостоящими.

В настоящее время актуальным направлением развития фармакологии является поиск и исследование новых лекарственных веществ растительного происхождения. Лекарственные растительные средства реже, чем синтетические вызывают побочные эффекты, в том числе и аллергические реакции, технологии их получения являются экономически выгодными.

Техническим результатом настоящего изобретения является получение безопасного и доступного ингибитора белка-транспортера PgP.

Осуществление изобретения

Для выделения полисахаридного комплекса цветков пижмы брали воздушно-сухое сырье цветков пижмы обыкновенной, продающееся в аптечной сети. 50 г лекарственного сырья помещали в колбу на 1 литр, добавляли 250 мл 40%-ного этанола и проводили предварительную тридцатиминутную экстракцию на водяной бане 3 раза для удаления из растительного сырья экстрактивных веществ (аминокислоты, моносахариды, органические кислоты, антоцианы, цианиды), после этого шрот высушивали и помещали в колбу на 1 литр, заливали 500 мл 1%-ного раствора оксалата аммония, экстракцию проводили на кипящей водяной бане в течение 1,5 часов. Проводили фильтрацию полученного экстракта через двойной слой марли, с проложенным между слоями слоем ваты. Экстракцию повторяли 3 раза, полученные экстракты объединяли, затем осаждали полисахарид трехкратным избытком 96%-ного этанола. Полученный осадок промывали последовательно этанолом, ацетоном и эфиром, высушивали в эксикаторе над концентрированной серной кислотой [Фармакологическая оценка полисахаридного комплекса цветков пижмы обыкновенной: диссертация … кандидата биологических наук: 14.03.06 / Енгалычева Екатерина Евгеньевна. - Рязань, 2016. - 143 с.)].

Далее проводили кислотный гидролиз полученного полисахарида. Для этого 0,1 г полисахаридного комплекса цветков пижмы помещали в круглодонную колбу и добавляли 3 мл 0,1 М раствора серной кислоты. Кипятили с обратным холодильником на водяной бане в течение 3 часов. Полученный раствор остужали, фильтровали через двойной слой марли и осаждали гидролизат полисахаридного комплекса трехкратным избытком 96% этанола. Осадок отфильтровывали и высушивали в эксикаторе над безводным хлоридом кальция. Гидролизат полисахаридного комплекса цветков пижмы обыкновенной представляет собой порошок светло-бежевого цвета.

Подлинность полисахарида подтверждена следующими качественными реакциями:

1. После добавления к водному раствору гидролизата полисахаридного комплекса цветков пижмы спиртового раствора α-нафтола и концентрированной серной кислоты на границе двух слоев появилось темно-фиолетовое кольцо, что свидетельствует о наличии углеводов (реакция Молиша);

2. После добавления к водному раствору гидролизата полисахаридного комплекса цветков пижмы спиртового раствора нафторезорцина, концентрированной хлороводородной кислоты, кипячения смеси и добавления бензола органический слой окрасился в фиолетовый цвет, что доказывает наличие в структуре полисахарида уроновых кислот.

3. После добавления к гидролизату полисахаридного комплекса цветков пижмы раствора сульфата меди (II) появилось зеленоватое окрашивание; раствора ацетата свинца основного - оранжевое окрашивание; реактива Феллинга при нагревании - выпадал красно-коричневый осадок оксида меди (I). Данные реакции подтверждают присутствие в гидролизате моносахаридов.

Молекулярную массу полученного гидролизата определяли вискозиметрическим методом. Готовили серию растворов гидролизата, измеряли время их истечения из вискозиметра Оствальда с диаметром капилляра 0,54 см. Рассчитывали удельную вязкость каждого раствора по формуле (таблица 1):

где

η_уд - удельная вязкость раствора;

- время истечения раствора из вискозиметра;

- время истечения воды очищенной из вискозиметра.

Далее рассчитывали приведенную вязкость η_уд/C. По полученным данным строили график зависимости приведенной вязкости от концентрации раствора (Фиг. 1) и экстраполировали его к С=0, таким образом, рассчитав характеристическую вязкость [η].

Для расчета молекулярной массы использовали нелинейное уравнение Марка-Хувинка:

где К и α - константы для данной системы полимер-растворитель при температуре 20°С (К=1,1 * 10^-5 дл/г, α=1,22), a М - молекулярная масса [Определение молекулярной массы пектина, полученного кислотным экстагированием из кожуры семян люпина / Васина Т.М. [и др.] - Сибирский мед. журнал, 2012. - Т. 3. - С. 126-128].

Молекулярная масса гидролизата полисахаридного комплекса цветков пижмы обыкновенной составила 3,8 кДа.

Изучение принадлежности полученного гидролизата

полисахаридного комплекса цветков пижмы обыкновенной к ингибиторам Pgp выполнено на линии клеток Сасо-2 (клетки аденокарциномы ободочной кишки человека), гиперэкспрессирующих данный белок-транспортер.

Клетки линии Сасо-2 культивировали при 37°С и 5%-м содержании CO₂ в Дульбекко модифицированной среде Игла (DMEM) с высоким содержанием глюкозы (4500 мг/л), содержащей L-глутамин (4 ммоль/л), 15% бычьей сыворотки и по 100 ЕД/мл и 100 мкг/мл пенициллина и стрептомицина соответственно. После достижения 70-90% конфлюентности клетки пересеивали на полупроницаемую мембрану лунок transwell-системы.

В лунках transwell-системы клетки культивировали в течение 21 дня в той же питательной среде до достижения трансэпителиального сопротивления выше 500 мОм*см².

Транспортные эксперименты выполнялись в лунке transwell-системы. Для этого заменяли питательную среду на раствор Хэнкса, забуференный 15 мМ Хепес при рН 7,4 с содержанием 1% диметилсульфоксида.

Активность Pgp оценивали по транспорту его маркерного субстрата - фексофенадина (концентрация 150 мкмоль/л) через полупроницаемую мембрану с клетками Сасо-2, который анализировали по суммарному коэффициенту потока для данного вещества.

Концентрации фексофенадина в транспортной среде определяли методом ВЭЖХ с УФ детектированием при длине волны 220 нм.

В качестве препарата сравнения исследовали транспорт классического ингибитора PgP - верапамила в концентрации 200 мкМ.

Влияние гидролизата полисахаридного комплекса цветков пижмы обыкновенной на активность Pgp оценивали его добавлением в транспортную среду в концентрации 10 мкМ.

В каждой серии было по три повторения.

Полученные результаты обрабатывались в программе StatsoftStaatistica 8.0. Для оценки статистической значимости различий использовали дисперсионный анализ, попарные сравнения выполняли с помощью критерия Ньюмена-Кейсла. Статистически значимыми считали различия при р < 0,05.

Суммарный коэффициент потока в контрольной серии (в transwell-системе содержался один фексофенадин) составил 4,02.

Добавление в транспортную среду верапамила (препарат сравнения, классический ингибитор Pgp) приводило к снижению суммарного коэффциента потока на 41,0% (р < 0,05) по сравнению с показателями контрольной серии, что свидетельствует об ингибировании Pgp.

Добавление в среду инкубации полисахарида в концентрации 10 мкМ приводило к снижению коэффициента потока на 55,5% (р<0,05), по сравнению со значениями контрольной серии.

При этом достоверных различий между верапамилом и гидролизатом полисахаридного комплекса цветков пижмы обыкновенной по изучаемому показателю получено не было (р > 0,05).

Таким образом, гидролизат полисахаридного комплекса цветков пижмы обыкновенной с молекулярной массой 3,8 кДа в опытах in vitro ингибирует активность Pgp, причем по выраженности эффекта он сопоставим с классическим ингибитором белка-транспортера -верапамилом.

Применение гидролизата полисахаридного комплекса цветков пижмы обыкновенной с молекулярной массой 3,8 кДа, полученного методом кислотного гидролиза полисахаридного комплекса цветков пижмы обыкновенной 0,1 М серной кислотой в течение 3 часов, в качестве ингибитора белка-транспортера гликопротеина-Р.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу лечения и/или профилактики нейродегенеративного расстройства или заболевания у страдающего от него субъекта.

Ретиноидные композиции для местного применения // 2699027

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой композицию для местного применения для лечения кожных заболеваний, а именно угрей или псориаза, или уменьшения морщин на коже, содержащую: а) ретиноидное соединение или его фармацевтически приемлемую соль; b) по меньшей мере одну пенообразующую добавку; c) глюконолактон и токоферсолан как противораздражающие средства и d) один или несколько дерматологически приемлемых наполнителей, при этом содержание глюконолактона составляет не менее чем 0,25% из расчета на общую массу композиции, содержание токоферсолана составляет не менее чем 0,50% из расчета на общую массу композиции, и общее содержание упомянутых противораздражающих средств составляет менее чем 3% из расчета на общую массу композиции.

Фармацевтическая композиция, содержащая силибин и l-карнитин // 2699011

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения неалкогольной жировой дистрофии печени. Описана фармацевтическая композиция для лечения неалкогольной жировой дистрофии печени, которая получена из следующих видов лекарственного сырья: от 26,25 до 180 г силибина, от 45 до 195 г соевого фосфолипида, от 75 до 450 г экстракта чая пуэр, от 15,6 до 226,6 г L-карнитина или тартрата L-карнитина.

Слитые полипептиды и вакцины // 2699006

Изобретение относится к области биохимии. Описана группа изобретений, включающая полипептид, подходящий для индукции иммунного ответа против вируса PCV2, рекомбинантную клетку, содержащую молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую вышеуказанный полипептид, нуклеиновую кислоту, вектор, содержащий нуклеиновую кислоту, рекомбинантный вирус оспы свиней, содержащий в своем геноме нуклеиновую кислоту, композицию, вакцину, применение полипептида, клетки и нуклеиновой кислоты для получения лекарственного средства для лечения или профилактики PCV2-ассоциированного заболевания у свиньи.

Pcsk9 вакцины // 2698971

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к вакцине против пропротеиновой конвертазы субтилизин-кексинового типа 9 (PCSK9), и может быть использовано в медицине для лечения или предотвращения заболеваний, связанных с PCSK9, выбранных из гиперлипидемии, гиперхолестеринемии, атеросклероза или неопластических болезней.

Варианты fc-области с улучшенной способностью связываться с белком а // 2698969

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения антител. Способ включает культивирование клетки-хозяина, содержащей нуклеиновые кислоты, кодирующие антитело в условиях, пригодных для экспрессии антитела, и выделение антитела из клетки или культуральной среды.

Средство для деформирующей обработки волос // 2698908

Изобретение относится к средству для деформирующей обработки волос. Описано средство для деформирующей обработки волос, содержащее следующие компоненты (A), (B), (C) и (D), где молярное отношение содержания компонента (В) к содержанию компонента (A), (B)/(A) составляет 0,2 или более и 5 или менее:(A) глиоксиловая кислота или ее гидрат, или соль,(B) резорцин,(C) вода, и(D) соединение, представленное следующей формулой (1): гдеR1 представляет собой атом водорода или метильную группу, A1 и A2, которые могут быть одинаковыми или различными, каждая представляет собой атом водорода, алкильную группу или алкенильную группу с прямой или разветвленной цепью, содержащую от 1 до 12 атомов углерода, необязательно замещенную аралкильную группу или арилалкенильную группу, содержащую от 7 до 12 атомов углерода, алкоксигруппу или алкенилоксигруппу с прямой или разветвленной цепью, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, атом галогена или -CO-R2 (где R2 представляет собой алкильную группу или алкенильную группу с прямой или разветвленной цепью, содержащую от 1 до 12 атомов углерода, необязательно замещенную аралкильную группу или арилалкенильную группу, содержащую от 7 до 12 атомов углерода, или необязательно замещенную ароматическую углеводородную группу, содержащую от 6 до 12 атомов углерода), B представляет собой атом водорода, алкильную группу или алкенильную группу с прямой или разветвленной цепью, содержащую от 1 до 12 атомов углерода, необязательно замещенную аралкильную группу или арилалкенильную группу, содержащую от 7 до 12 атомов углерода, -OR3 или -COOR3 (где R3 представляет собой атом водорода или алкильную группу, или алкенильную группу с прямой или разветвленной цепью, содержащую от 1 до 6 атомов углерода), D представляет собой атом водорода, гидроксигруппу, метильную группу или алкоксигруппу, или алкенилоксигруппу с прямой или разветвленной цепью, содержащую от 1 до 12 атомов углерода, и E представляет собой атом водорода, гидроксигруппу, алкильную группу или алкенильную группу с прямой или разветвленной цепью, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, или алкоксигруппу, или алкенилоксигруппу с прямой или разветвленной цепью, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, при условии, что две или три из A1, A2, B и E представляют собой атомы водорода, и остальные группы не включают сульфогруппы, и что, когда D представляет собой атом водорода или метильную группу, A1 и B или A2 и B вместе с двумя атомами углерода, смежными с ними, образуют бензольное кольцо, необязательно замещенное гидроксигруппой.

Икотиниб-содержащие местнодействующие накожные фармацевтические композиции и их применения // 2698796

Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой местнодействующую накожную фармацевтическую композицию для лечения незлокачественной гиперплазии кожи, содержащую активный компонент, способный ингибировать тирозинкиназу, и вспомогательное вещество, пригодное для местнодействующего препарата, отличающуюся тем, что активный компонент включает икотиниб в форме свободного основания, икотиниба гидрохлорид, икотиниба малеат или икотиниба фосфат; где вспомогательное вещество включает дисперсионную среду, эмульгатор и/или одно или несколько фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ местнодействующего препарата.

Бета-казеин а2 и уровень глюкозы в крови // 2698794

Группа изобретений относится к фармации и лечебному питанию. Предложено применение композиции, содержащей бета-казеин, для снижения риска развития гипергликемии, вызванной потреблением бета-казеина A1, у животного, причем указанный бета-казеин в композиции содержит по меньшей мере 75% по массе бета-казеина A2.

Применение каберголина в лечении патологических состояний, вызванных повышенными уровнями фактора роста эндотелия сосудов // 2698728

Изобретение относится фармакологии и офтальмологии. Предложено применение каберголина в качестве активного агента фармацевтической композиции для лечения глазных заболеваний, вызванных повышенным уровнем фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), в котором глазное заболевание выбрано из группы, содержащей диабетический макулярный отек, диабетическую ретинопатию, возрастную макулярную дегенерацию, окклюзию центральной артерии сетчатки, окклюзию вены сетчатки и хориоидальную неоваскуляризацию.

Биополимерная матрица на основе сукцината хитозана, арабиногалактана и способ ее получения // 2698455

Изобретение относится к биологически активной биополимерной матрице (БПМ) для использования в медицине, пищевой промышленности и сельском хозяйстве. Матрица выполнена на основе сукцината хитозана (3,0-5,0 мас.%), янтарного ангидрида (2,0-4,0 мас.%), арабиногалактана (15,0-20,0 мас.%) и ковалентно не связанного с ним дигидрокверцетина (3-5 мас.%).

Средство, обладающее иммуномодулирующей активностью // 2697526

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, и касается применения растительных водорастворимых полисахаридов с молекулярной массой 1070±50 и 17±2 кДа, выделенных посредством заявленного способа из надземной части люцерны посевной (Medicago sativa L.), в качестве иммуномодулирующего средства для активации антигенпрезентирующих клеток и избирательной стимуляции продукции интерлейкина-12, фактора некроза опухоли-альфа макрофагами и интерферона-гамма лимфоцитами.

Способы лечения избыточной массы тела или ожирения // 2696494

Группа изобретений относится к медицине и предназначена для лечения избыточной массы тела или ожирения у пациентов с повышенным уровнем глюкозы в крови. Способ включает стадии (а) перорального введения пациенту от 1,25 г до приблизительно 3 г перекрестно-сшитой карбоксиметилцеллюлозы и (б) перорального введения пациенту 100 мл воды на грамм перекрестно-сшитой карбоксиметилцеллюлозы.

Композиция, обладающая детоксикационной и спазмолитической активностью // 2694227

Изобретение относится к пищевой и фармацевтической промышленности и может быть использовано в качестве композиции для детоксикации организма. Композиция включает полидекстрозу, инулин, пектин яблочный, экстракт фенхеля, воду и вспомогательные вещества.

Препарат для лечения заболеваний дыхательных путей у лошадей и способ его применения // 2691110

Группа изобретений относится к ветеринарии и представляет собой препарат для лечения заболеваний дыхательных путей у лошадей, таких как пневмония и хроническое обструктивное заболевание легких, содержащий спиртовой экстракт из пантов северных оленей, арабиногалактан, нипагин и физиологический раствор, причем компоненты в препарате находятся в определенном соотношении, в мас.%, и способ лечения заболеваний дыхательных путей у лошадей, таких как пневмония и хроническое обструктивное заболевание легких, включающий введение вышеуказанного препарата в дозе 5 мл на голову, 3-4 раза, с интервалом 5-7 дней.

Капсульные полисахариды streptococcus pneumoniae и их конъюгаты // 2688831

Изобретение относится к выделенному капсульному полисахариду Streptococcus pneumoniae серотипа 15В и способам его получения. Изобретение также относится к иммуногенным конъюгатам, содержащим капсульный полисахарид Streptococcus pneumoniae серотипа 15В, ковалентно связанный с белком-носителем, к способам их получения и к иммуногенным композициям, содержащим их.

Бактериальная вакцина и способы ее получения // 2684615

Группа изобретений касается стабильных составов вакцин. Предложены: вакцина для предотвращения брюшного тифа, вызыванного Salmonella typhi, включающая частично де-О-ацетилированный капсулярный Vi-полисахарид (ViPs) Salmonella typhi, конъюгированный с белком-носителем с формированием конъюгированного вакцинального антигена, причем ViPs дериватизированы с линекером, представляющим собой дигидразид адипиновой кислоты (ADH), или без него, причем указанный антиген присутствует в концентрации от 5 до 25 мкг на дозу, предпочтительно 25 мкг на дозу; предложены способы её получения (варианты), способ профилактики брюшного тифа и комбинированный состав вакцины, содержащий антиген, представляющей собой конъюгат Vi-полисахарида S.

Фармацевтические комбинации // 2684106

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и касается применения фармацевтической комбинации для лечения липосаркомы. Фармацевтическая комбинация содержит (i) (S)-5-(5-хлор-1-метил-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-ил)-6-(4-хлорфенил)-2-(2,4-диметоксипиримидин-5-ил)-1-изопропил-5,6-дигидро-1Н-пирроло[3,4-d]имидазол-4-он, или его фармацевтически приемлемую соль, и (ii) диметиламид 7-циклопентил-2-(5-пиперазин-1-илпиридин-2-иламино)-7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-6-карбоновой кислоты, или его фармацевтически приемлемую соль.

Комбинация гиалуроновой кислоты и сульфатированного полисахарида // 2683567

Изобретение относится к косметической промышленности и представляет собой комбинацию для борьбы с признаками старения кожи и для улучшения заживления или восстановления кожи, содержащую гиалуроновую кислоту или ее соль, имеющие средневесовую молекулярную массу в диапазоне от 60 до 120 кДа, и сульфатированный полисахарид, имеющий молекулярную массу в диапазоне от 5 до 25 кДа, выбранный из сульфатированных фуканов.

Способ лечения цервикальных интраэпителиальных неоплазий i степени, ассоциированных с впч высокого онкогенного риска, с использованием кавитированного раствора панавира // 2682783

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для лечения ВПЧ-ассоциированных цервикальных неоплазий I степени. Для этого осуществляют воздействие на шейку матки кавитированным раствором панавира, введённым интравагинально в дозе 5,0 мл, разведенным в 50 мл физиологического раствора.