Стабильная водная композиция антитела против фактора роста эндотелия сосудов (vegf)

Настоящее изобретение относится к области фармацевтических композиций антител. В частности, настоящее изобретение относится к стабильной жидкой композиции антитела и к ее фармацевтическому препарату и применению. Данное изобретение проиллюстрировано на примере водной композиции антитела против факторов роста эндотелия сосудов (VEGF). 4 н. и 6 з.п. ф-лы, 3 ил., 11 табл., 5 пр.

 

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к области фармацевтических композиций антител. В частности, настоящее изобретение относится к стабильной водной композиции антитела и к его фармацевтическому препарату и применению.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Препараты антител, предназначенные для терапевтического или профилактического применения, требуют стабилизаторов для предупреждения потери активности или структурной целостности белка из-за эффектов денатурации, окисления или агрегации в течение периода времени хранения и транспортировки перед использованием. Эти проблемы усугубляются при высоких концентрациях антитела, часто желательных для терапевтического введения.

Основная цель при разработке композиций антител заключается в сохранении растворимости, стабильности антитела и его антигенсвязывающей способности. Особенно желательно избегать агрегатов и макрочастиц в растворе, что требует стерильной фильтрации перед применением для внутривенной или подкожной инъекции и ограничивает путь введения. Составление препаратов антител требует тщательного выбора этих факторов среди прочих, чтобы избежать денатурации белка и потери антигенсвязывающей активности. Соответственно, существует потребность в стабильной водной композиции антител, которая стабильно поддерживает высокие концентрации биоактивного антитела в растворе и подходит для парентерального введения, включая внутривенное, внутриглазное, интравитреальное, внутриартериальное, интратекальное, интравентрикулярное, внутриуретральное, внутригрудинное, внутричерепное, внутримышечное, внутри костное, внутрибрюшинное, внутрикожное или подкожное введение.

Кроме того, существует необходимость в предложении такой стабильной водной композиции для антитела против фактора роста эндотелия сосудов (VEGF). Было показано, что VEGF-антитело полезно в лечении состояний или заболеваний, которые включают патологический ангиогенез, включая опухоли. Существует потребность в стабильном водном препарате антитела против VEGF для удовлетворения медицинских потребностей пациентов, страдающих от рака.

Все публикации, патенты и патентные заявки, цитируемые здесь, включены в данное описание изобретения посредством ссылки во всей полноте для всех целей в такой же степени, как если бы каждая отдельная публикация, патент и патентная заявка были конкретно и отдельно указаны как включенные посредством ссылки. В случае если один или более из включенной литературы и аналогичных материалов отличаются от данной заявки или противоречат ей, включая, но без ограничения ими, определения терминов, использование терминов, описанные методики и т.п., то данная заявка имеет преимущественную силу.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Предложены стабильные водные фармацевтические композиции с повышенным сроком годности, содержащие антитело против фактора роста эндотелия сосудов (VEGF). Показано, что водная фармацевтическая композиция по настоящему изобретению с высокой концентрацией антитела является стабильной (например имеет низкие уровни % HMMS (высокомолекулярные молекулы), % LMMS (низкомолекулярные молекулы), % фрагментов и окисления) и пригодна для парентерального введения.

В одном аспекте предложена водная композиция, содержащая: от примерно 15 мг/мл до примерно 200 мг/мл антитела против фактора роста эндотелия сосудов (VEGF); буфер; полиол; поверхностно-активное вещество; хелатирующий агент; где композиция имеет рН от примерно 5,0 до примерно 6,0.

В некоторых воплощениях буфер представляет собой сукцинатный буфер. В некоторых воплощениях буфер представляет собой гистидиновый буфер. В некоторых воплощениях концентрация буфера составляет от примерно 1 мМ до примерно 40 мМ.

В некоторых воплощениях полиол представляет собой сахарозу. В некоторых воплощениях концентрация полиола составляет от примерно 1 мг/мл до примерно 150 мг/мл.

В некоторых воплощениях поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат, например полисорбат 20 или 80. В некоторых воплощениях концентрация поверхностно-активного вещества составляет от примерно 0,01 мг/мл до примерно 10 мг/мл.

В некоторых воплощениях хелатирующий агент представляет собой EDTA (эдетат). В некоторых воплощениях концентрация хелатирующего агента составляет от примерно 0,01 мг/мл до примерно 1,0 мг/мл.

В некоторых воплощениях антитело содержит определяющий комплементарность участок один (CDR1) вариабельной области тяжелой цепи (VH), имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 1, VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 2, VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 3, CDR1 вариабельной области легкой цепи (VL), имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 4, VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 5, и VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 6. В некоторых воплощениях антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи (VH) и вариабельную область легкой цепи (VL), где область VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и область VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8. В некоторых воплощениях антитело представляет собой человеческое антитело, такое как анти-VEGF антитело (AVASTIN® или rhuMAB VEGF). В некоторых воплощениях концентрация антитела составляет примерно 15 мг/мл, примерно 20 мг/мл, примерно 25 мг/мл, примерно 30 мг/мл, примерно 35 мг/мл, примерно 40 мг/мл, примерно 45 мг/мл, примерно 50 мг/мл, примерно 55 мг/мл, примерно 60 мг/мл, примерно 70 мг/мл, примерно 80 мг/мл, примерно 90 мг/мл, примерно 100 мг/мл, примерно 110 мг/мл, примерно 120 мг/мл, примерно 130 мг/мл, примерно 140 мг/мл, примерно 150 мг/мл или примерно 160 мг/мл.

В другом аспекте предложена водная композиция, содержащая: примерно 25 мг/мл белка против фактора роста эндотелия сосудов (VEGF); примерно 20 мМ сукцинатного или гистидинового буфера; примерно 85 мг/мл сахарозы; примерно 0,2 мг/мл полисорбата 80; примерно 0,05 мг/мл EDTA; где антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; и где композиция имеет рН примерно 5,5 или 5,8. В некоторых воплощениях антитело представляет собой анти-VEGF антитело (AVASTIN® или rhuMAB VEGF).

В другом аспекте предложен способ лечения или ингибирования рака у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества композиции, как описано здесь. В некоторых воплощениях композицию вводят субъекту подкожно или внутривенно.

В другом аспекте предлагается применение композиции, как описано здесь, для изготовления лекарственного средства для лечения рака у субъекта.

В некоторых воплощениях рак выбран из группы, состоящей из колоректального рака, рака прямой кишки, неплоскоклеточного немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), неходжкинской лимфомы (NHL), метастатического почечно-клеточного рака (mRCC), рака предстательной железы, рака печени, рака поджелудочной железы, саркомы мягких тканей, саркомы Калоши, карциноидной карциномы, рака головы и шеи, меланомы, рака яичников, мезотелиомы, глиобластомы, рака шейки матки, рака молочной железы и множественной миеломы.

В некоторых воплощениях композиция, описанная здесь, имеет срок годности по меньшей мере примерно 36 месяцев.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

На Фиг. 1 изображен график, на котором обобщенно представлено количество высокомолекулярных молекул (% HMMS) согласно SE-HPLC (эксклюзионная высокоэффективная жидкостная хроматография) для анти-VEGF антител в SSEP или для имеющегося в продаже препарата (фосфат) при 25°C.

На Фиг. 2 изображен график, на котором обобщенно представлено количество высокомолекулярных молекул (% HMMS) для лекарственного продукта на основе анти-VEGF антитела либо в целевой композиции (SSEP), с высокими уровнями эксципиентов, либо с низкими уровнями эксципиентов, который хранился при 5°C и при 30°C.

На Фиг. 3 изображен график, на котором обобщенно представлено количество высокомолекулярных молекул (% HMMS) согласно SE-HPLC для анти-VEGF антител в гистидиновых, сукцинатных или фосфатных композициях при 40°C.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В данном описании изобретения раскрыты стабильные водные фармацевтические композиции с повышенным сроком годности, содержащие антитело против фактора роста эндотелия сосудов (VEGF). Показано, что водная фармацевтическая композиция по настоящему изобретению стабильно поддерживает высокую концентрацию антитела (например имеет низкие уровни % HMMS (высокомолекулярных молекул) в концентрации антитела по меньшей мере примерно 15 мг/мл) и подходит для парентерального введения, включая подкожное, внутривенное, внутримышечное, внутрибрюшинное или внутрикожное введение. Соответственно, в одном аспекте предложена водная композиция, содержащая: от примерно 15 мг/мл до примерно 200 мг/мл антитела против фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) или его антигенсвязывающего фрагмента; буфер; полиол; поверхностно-активное вещество; хелатирующий агент; где композиция имеет рН от примерно 5,0 до примерно 6,0. Например, в некоторых воплощениях предложена водная композиция, содержащая: от примерно 15 мг/мл до примерно 200 мг/мл антитела против фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) (например анти-VEGF антитела); от примерно 1 мМ до примерно 40 мМ буфера (например сукцинатного буфера); от примерно 1 мг/мл до примерно 300 мг/мл полиола (например сахарозы); от примерно 0,01 мг/мл до примерно 10 мг/мл поверхностно-активного вещества (например полисорбата 80); от примерно 0,01 мг/мл до примерно 1,0 мг/мл хелатирующего агента (например EDTA (или эдетата)); где композиция имеет рН от примерно 5,0 до примерно 6,0. В некоторых воплощениях концентрация антитела составляет от примерно 22,5 мг/мл до примерно 27,5 мг/мл. В других воплощениях концентрация антитела составляет от примерно 100 до примерно 150 мг/мл.

Основные методы

В практическом осуществлении настоящего изобретения используют, если не указано иное, общепринятые методы молекулярной биологии (включая рекомбинантные методы), микробиологии, клеточной биологии, биохимии и иммунологии, которые находятся в пределах знаний специалиста в данной области техники. Такие методы полностью пояснены в литературе, например в Molecular cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook et al., 1989) Cold Spring Harbor Press; Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-1998) J. Wiley and Sons; Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Handbook of Experimental Immunology (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel et al., eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Current Protocols in Immunology (J.E. Coligan et al., eds., 1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999); Immunobiology (C.A. Janeway and P. Travers, 1997); Antibodies (P. Finch, 1997); Antibodies: a practical approach (D. Catty., ed., IRL Press, 1988-1989); Monoclonal antibodies: a practical approach (P. Shepherd and C. Dean, eds., Oxford University Press, 2000); Using antibodies: a laboratory manual (E. Harlow and D. Lane (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999); The Antibodies (M. Zanetti and J.D. Capra, eds., Harwood Academic Publishers, 1995).

Определения

Следующие термины, если не указано иное, следует понимать, как имеющие следующие значения: термин "выделенная молекула" (где молекула представляет собой, например, полипептид, полинуклеотид или антитело) представляет собой молекулу, которая в силу своего происхождения или источника получения (1) не ассоциирована с природно-ассоциированными компонентами, которые сопровождают ее в нативном состоянии, (2) по существу не содержит других молекул из тех же видов (3) экспрессируется клеткой других видов или (4) не встречается в природе. Таким образом, молекулу, которая химически синтезируется или экспрессируется в клеточной системе, отличной от клетки, из которой она происходит в природе, "выделяют" от природно-ассоциированных компонентов. Молекула также может стать практически не содержащей природно-ассоциированных компонентов посредством выделения с использованием способов очистки, хорошо известных в данной области. Молекулярную чистоту или гомогенность можно анализировать с помощью ряда средств, хорошо известных в данной области техники. Например, чистота полипептидного образца может быть проанализирована с использованием электрофореза в полиакриламидном геле и окрашивания геля для визуализации полипептида с использованием методов, хорошо известных в данной области. Для некоторых целей более может быть обеспечено высокое разделение путем использования HPLC или других средств, хорошо известных в области очистки.

При использовании здесь подразумевается, что термин "композиция" в отношении антитела описывает антитело комбинации с фармацевтически приемлемым эксципиентом, содержащим по меньшей мере один буфер, по меньшей мере одно поверхностно-активное вещество, по меньшей мере один хелатирующий агент и рН является таким, как определен.

Термины "фармацевтическая композиция" или "фармацевтический препарат" относятся к препаратам, которые находятся в такой форме, которая обеспечивает эффективную биологическую активность активных ингредиентов.

"Фармацевтически приемлемые эксципиенты" (носители, добавки) являются такими, которые можно безопасно вводить субъекту для обеспечения эффективной дозы используемого активного ингредиента. Термин "эксципиент" или "носитель", при использовании здесь, относится к инертному веществу, которое обычно используется в качестве разбавителя, носителя, консерванта, связывающего или стабилизирующего агента для лекарственных средств. При использовании здесь термин "растворитель" относится к фармацевтически приемлемому (безопасному и нетоксичному для введения человеку) растворителю и может быть полезен для приготовления водных композиций в данном изобретении. Типичные разбавители включают, без ограничения ими, стерильную воду и бактериостатическую воду для инъекций (BWFI).

"Антитело" представляет собой молекулу иммуноглобулина, способную специфически связываться с мишенью, такой как углевод, полинуклеотид, липид, полипептид и т.д., посредством по меньшей мере одного сайта распознавания антигена, расположенного в вариабельной области молекулы иммуноглобулина. При использовании здесь этот термин охватывает не только интактные поликлональные или моноклональные антитела, но также, если не указано иное, любую их антигенсвязывающую часть, которая конкурирует с интактным антителом за специфическое связывание, слитые белки, содержащие антигенсвязывающую часть и любую другую модифицированную конфигурацию молекулы иммуноглобулина, которая содержит сайт распознавания антигена. Антигенсвязывающие части включают, например, Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, доменные антитела (dAb, например антитела акул и верблюдовых), фрагменты, включающие участки, определяющие комплементарность (CDR), одноцепочечные вариабельные фрагменты антител (scFv), макситела, минитела, интратела, диатела, триатела, тетратела, v-NAR (вариабельная область нового рецептора антигена) и bis-scFv, и полипептиды, которые содержат по меньшей мере часть иммуноглобулина, которая достаточна для обеспечения специфического связывания антигена с полипептидом. Антитело включает антитело любого класса, такое как IgG, IgA или IgM (или его подкласса), и это антитело не обязательно должно принадлежать к какому-либо конкретному классу. В зависимости от аминокислотной последовательности константной области тяжелых цепей антитела, иммуноглобулины могут быть отнесены к разным классам. Существует пять основных классов иммуноглобулинов: IgA, IgD, IgE, IgG, и IgM, и некоторые из них могут быть, кроме того, разделены на подклассы (изотипы), например IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 и IgA2. Константные области тяжелой цепи, которые соответствуют разным классам иммуноглобулинов, называются альфа, дельта, эпсилон, гамма и мю, соответственно. Структуры субъединиц и трехмерные конфигурации разных классов иммуноглобулинов хорошо известны.

"Вариабельная область" антитела относится к вариабельной области легкой цепи антитела или к вариабельной области тяжелой цепи антитела, отдельно или в комбинации. Как известно в данной области, каждая вариабельная область тяжелой и легкой цепи состоит из четырех каркасных областей (FR), соединенных тремя участками, определяющими комплементарность (CDR), также известными как гипервариабельные области, и способствует образованию антигенсвязывающего сайта антител. Если необходимы варианты рассматриваемой вариабельной области, в частности, с заменой аминокислотных остатков за пределами CDR (то есть в каркасной области), подходящая аминокислотная замена, предпочтительно замена консервативной аминокислоты, может быть идентифицирована путем сравнения рассматриваемой вариабельной области с вариабельными областями других антител, которые содержат последовательности CDR1 и CDR2 в том же каноническом классе, что и рассматриваемая вариабельная область (Chothia and Lesk, J Mol Biol 196(4): 901-917, 1987).

В некоторых воплощениях окончательное картирование CDR и идентификацию остатков, содержащих сайт связывания антитела, осуществляют путем определения структуры антитела и/или определения структуры комплекса антитело-лиганд. В некоторых воплощениях это может быть выполнено любым из множества способов, известных специалистам в данной области, таким как рентгенокристаллография. В некоторых воплощениях можно использовать различные способы анализа для идентификации или аппроксимации участков CDR. Примеры таких способов включают, без ограничения ими, определение по Kabat, определение по Chothia, определение AbM, контактное определение и конформационное определение.

Определение по Kabat является стандартом для нумерации остатков в антителе и обычно используется для идентификации областей CDR. См., например, Johnson & Wu, 2000, Nucleic Acids Res., 28: 214-8. Определение по Chothia сходно с определением по Kabat, но определение по Chothia учитывает положения некоторых структурных петлевых областей. См., например, Chothia et al., 1986, J. Mol. Biol., 196: 901-17; Chothia et al., 1989, Nature, 342: 877-83. В определении AbM используют комплексный набор компьютерных программ, созданных Oxford Molecular Group, которые модулируют структуру антител. См., например, Martin et al., 1989, Proc Natl Acad Sci (USA), 86:9268-9272; "AbM™, A Computer Program for Modeling Variable Regions of Antibodies," Oxford, UK; Oxford Molecular, Ltd. Определение AbM моделирует третичную структуру антитела исходя из первичной последовательности с использованием комбинации баз данных и на основании неэмпирических способов, таких как описаны в Samudrala et al., 1999, "Ab Initio Protein Structure Prediction Using a Combined Hierarchical Approach," in PROTEINS, Structure, Function and Genetics Suppl., 3:194-198. Контактное определение основано на анализе доступных сложных кристаллических структур. См., например, MacCallum et al., 1996, J. Mol. Biol., 5:732-45. В другом подходе, упоминаемом здесь как "конформационное определение" CDR, положения CDR могут быть идентифицированы, как остатки, которые вносят энтальпические вклады в связывание антигена. См., например, Makabe et al., 2008, Journal of Biological Chemistry, 283:1156-1166. Другие определения границ CDR могут не соответствовать строго одному из вышеуказанных подходов, но тем не менее перекрываются по меньшей мере с частью CDR по Kabat, хотя они могут быть укороченными или удлиненными в виду прогнозирования или экспериментальных данных, что конкретные остатки или группы остатков не оказывают существенного влияния на связывание антигена. При использовании здесь, CDR может относиться к CDR, определенному посредством любого подхода, известного в данной области, включая комбинацию подходов. Применяемые здесь способы могут использовать CDR, определенные в соответствии с любым из этих подходов. Для любого заданного воплощения, содержащего более одного CDR, эти CDR могут быть определены в соответствии с любым из Kabat, Chothia, расширенного, AbM, контактного и/или конформационного определений.

Как известно в данной области "константная область" антитела относится к константной области легкой цепи антитела или к константной области тяжелой цепи антитела отдельно или в комбинации.

При использовании здесь термин "моноклональное антитело" относится к антителу, полученному из популяции по существу гомогенных антител, то есть отдельных антител, составляющие популяцию, идентичны за исключением возможных естественных мутаций, которые могут присутствовать в незначительных количествах. Моноклональные антитела являются высокоспецифичными, будучи направленными против одного антигенного сайта. Кроме того, в отличие от препаратов поликлональных антител, которые обычно включают разные антитела, направленные против разных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело направлено против одной детерминанты на антигене. Модификатор "моноклональный" указывает на характеристику антитела, как получаемого из по существу гомогенной популяции антител, и не должен истолковываться, как требующий получения антитела каким-либо конкретным способом. Например, моноклональные антитела для применения в соответствии с настоящим изобретением, могут быть получены с помощью гибридомного метода, впервые описанного Kohler and Milstein, 1975, Nature 256:495 или могут быть получены с помощью методов рекомбинантной ДНК, таких как описаны в патенте США 4816567. Например, моноклональные антитела также могут быть выделены из фаговых библиотек, образованных с использованием методов, описанных в McCafferty et al., 1990, Nature 348:552-554. При использовании здесь термин "гуманизированное" антитело относится к формам антител, не являющихся человеческими (например мышиных) которые представляют собой химерные иммуноглобулины, цепи иммуноглобулина или их фрагменты (такие как Fv, Fab, Fab', F(ab')2 или другие антигенсвязывающие последовательности антител), которые содержат минимальную последовательность, происходящую из иммуноглобулина, не являющегося человеческим. Предпочтительно, гуманизированные антитела представляют собой человеческие иммуноглобулины (антитело-реципиент), в которых остатки из CDR реципиента заменены остатками из CDR не являющихся человеческими видов (донорное антитело), таких как мышь, крыса или кролик, имеющих нужную специфичность, аффинность и активность. Гуманизированное антитело может содержать остатки, которые не обнаружены ни в реципиентном антителе, ни в импортированных CDR или каркасных последовательностях, но включены для дополнительного улучшения и оптимизации характеристик антитела.

"Человеческое антитело" представляет собой антитело, которое имеет аминокислотную последовательность, соответствующую аминокислотной последовательности антитела, продуцируемого человеком, и/или получено с использованием любого из способов получения человеческих антител, как описано в данном описании изобретения. Это определение человеческого антитела в связи с этим исключает гуманизированное антитело, содержащее не являющиеся человеческими антигенсвязывающие остатки.

При использовании здесь подразумевается, что термин "человеческое антитело" включает антитела, имеющие вариабельные и константные области, происходящие от последовательностей иммуноглобулина зародышевой линии человека. Такое определение человеческого антитела включает антитела, содержащие по меньшей мере один полипептид тяжелой цепи человека или по меньшей мере один полипептид легкой цепи человека. Человеческие антитела по изобретению могут включать аминокислотные остатки, не кодируемыми последовательностями иммуноглобулина зародышевой линии человека (например мутации, введенные посредством случайного или сайт-специфического мутагенеза in vitro или посредством соматической мутации in vivo), например в CDR, и в частности в CDR3. Однако, подразумевается, что используемый в данном описании изобретения термин "человеческое антитело" не включает антитела, в которых последовательности CDR, происходящие из зародышевой линии млекопитающих других видов, таких как мышь, были привиты на каркасные последовательности человека.

Термин "химерное антитело" предназначено для обозначения антител, в которых последовательности вариабельной области происходят из одного вида, а последовательности константной области происходят из другого вида, таких как антитело, в котором последовательности вариабельной области происходят из мышиного антитела, а последовательности константной области происходят из человеческого антитела.

При использовании здесь термин "гуманизированное" антитело относится к формам не являющихся человеческими (например мышиных) антител, которые представляют собой химерные иммуноглобулины, цепи иммуноглобулинов или их фрагменты (такие как Fv, Fab, Fab', F(ab')2 или другие антигенсвязывающие подпоследовательности антител), которые содержат минимальную последовательность, происходящую из иммуноглобулина, не являющегося человеческим. Предпочтительно, гуманизированные антитела представляют собой человеческие иммуноглобулины (реципиентное антитело), в которых остатки из участка, определяющего комплементарность (CDR), реципиента заменены остатками из CDR не являющихся человеческими видов (донорное антитело), таких как мышь, крыса или кролик, имеющий нужную специфичность, аффинность и активность. В некоторых случаях остатки каркасной области Fv (FR) человеческого иммуноглобулина заменены соответствующими остатками, не являющимися человеческими. Кроме того, гуманизированное антитело может содержать остатки, которые не встречаются ни в реципиентном антителе, ни в импортированных последовательностях CDR или каркаса, но включены для дополнительного улучшения и оптимизации характеристик антител. В целом, гуманизированное антитело содержит по существу все из по меньшей мере одного, и обычно двух, вариабельных доменов, в которых все или практически все области CDR соответствуют областям иммуноглобулина, не являющегося человеческим и все или практически все области FR представляют собой области консенсусной последовательность человеческого иммуноглобулина. Гуманизированное антитело оптимально также содержит по меньшей мере часть константной области или домена (Fc) иммуноглобулина, обычно человеческого иммуноглобулина. Предпочтительными являются антитела, имеющие Fc-области, модифицированные, как описано в WO 99/58572. Другие формы гуманизированных антител имеют один или более CDR (CDR L1, CDR L2, CDR L3, CDR Н1, CDR Н2 или CDR Н3), которые изменены по отношению к исходному антителу, которые также называются как один или более CDR, "происходящие от" одного или более CDR исходного антитела.

Существует четыре общие стадии гуманизации моноклонального антитела. Это: (1) определение нуклеотидной и предсказанной аминокислотной последовательности вариабельных доменов легкой и тяжелой цепи исходного антитела, (2) конструирование гуманизированного антитела, то есть принятие решения, какую каркасную область использовать в процессе гуманизации, (3) фактические методы/методики гуманизации, и (4) трансфекция и экспрессия гуманизированного антитела. См., например, патенты США 4816567; 5807715; 5866692; 6331415; 5530101; 5693761; 5693762; 5585089; и 6180370.

Был описан ряд молекул "гуманизированного" антитела, содержащих антигенсвязывающий сайт, происходящий от иммуноглобулина, не являющегося человеческим в том числе химерные антитела, имеющие модифицированные или немодифицированные V-области грызунов и ассоциированные с ними участки, определяющие комплементарность (CDR), слитые с константными доменами человека. См., например, Winter et al. Nature 349: 293-299 (1991), Lobuglio et al. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 86: 4220-4224 (1989), Shaw et al. J Immunol. 138: 4534-4538 (1987) и Brown et al. Cancer Res. 47: 3577-3583 (1987). Другие документы описывают CDR грызунов, привитые в несущую каркасную область (FR) человека, перед слиянием с подходящим константным доменом человеческого антитела. См., например, Riechmann et al. Nature 332: 323-327 (1988), Verhoeyen et al. Science 239: 1534-1536 (1988) и Jones et al. Nature 321: 522-525 (1986). Другой документ описывает участки CDR грызунов, которые несет рекомбинантно венированные каркасные области грызунов. См., например, публикацию европейского патента 0519596. Эти "гуманизированные" молекулы спроектированы так, чтобы минимизировать нежелательный иммунологический ответ на молекулы анти-человеческого антитела грызунов, что ограничивает продолжительность и эффективность терапевтических применений этих группировок у реципиентов-людей. Например, константная область антитела может быть сконструирована так, что она является иммунологически инертной (то есть не вызывает лизиса комплементом). См., например, РСТ публикацию WO 99/58572; патентную заявку Великобритании 9809951.8 Другие способы гуманизации антител, которые также могут быть использованы, раскрыты в Daugherty et al., Nucl. Acids Res. 19: 2471-2476 (1991) и в патентах США 6180377; 6054297; 5997867; 5866692; 6210671; и 6350861; и в РСТ публикации WO 01/27160.

При использовании здесь подразумевается, что термин "рекомбинантное антитело" включает все антитела, которые получают, экспрессируют, создают или выделяют при помощи рекомбинантных средств, например антитела, экспрессируемые с использованием рекомбинантного экспрессионного вектора, трансфицированного в клетку-хозяина, антитела, выделенные из рекомбинантной, комбинаторной библиотеки человеческих антител, антитела, выделенные из животного (например мыши), которое является трансгенным в отношении генов иммуноглобулина человека или полученных антител, такие рекомбинантные человеческие антитела могут быть подвергнуты мутагенезу in vitro.

Термин "эпитоп" относится к той части молекулы, которая может быть распознана и связана антителом в одной или нескольких антигенсвязывающих областях антитела. Эпитопы часто состоят из поверхностных группировок молекул, таких как аминокислоты или боковые цепи сахара, и имеют специфические трехмерные структурные характеристики, а также специфические характеристики заряда. В некоторых воплощениях эпитоп может представлять собой белковый эпитопом. Белковые эпитопы могут быть линейными или конформационными. В линейном эпитопе все точки взаимодействия между белком и взаимодействующей молекулой (такой как антитело) присутствуют линейно вдоль первичной аминокислотной последовательности белка. "Нелинейный эпитоп" или "конформационный эпитоп" содержит несмежные полипептиды (или аминокислоты) в пределах антигенного белка, с которыми связывается антитело, специфическое к этому эпитопу. Термин "антигенный эпитоп", при использовании здесь, определен как часть антигена, с которой антитело может специфически связываться, как определено любым способом, хорошо известным в данной области, например посредством обычных иммуноанализов. После того как нужный эпитоп на антигене определен, можно создавать антитела к этому эпитопу, например, с использованием способов, описанных в настоящем описании. Альтернативно, в процессе обнаружения, образование и характеристика антител может предоставить информацию о нужных эпитопах. Исходя из этой информации, затем можно конкурентно протестировать антитела на связывание с тем же эпитопом. Подход к выполнению этого заключается в проведении конкурентных и перекрестно-конкурентных исследований для обнаружения антител, которые конкурируют или перекрестно конкурируют друг с другом за связывание с VEGF, например антител, которые конкурируют за связывание с антигеном.

При использовании здесь термины "выделенное антитело" или "очищенное антитело" относятся к антителу, которое в силу своего происхождения или источника получения имеет от одной до четырех следующих характеристик: (1) не ассоциирован с природно-ассоциированными компонентами, которые окружают его в природе, (2) не содержит других белков из того же вида, (3) экспрессируется клетками другого вида, или (4) не встречается в природе.

Термин "антагонистическое антитело" относится к антителу, которое связывается с мишенью и предупреждает или уменьшает биологический эффект этой мишени. В некоторых воплощениях этот термин может обозначать антитело, которое препятствует выполнению биологической функции мишени, например VEGF, с которым он связан.

Антитело, которое "предпочтительно связывается" или "специфически связывается" (которые используются здесь взаимозаменяемо) с эпитопом, представляет собой термин, хорошо известный в данной области, и способы определения такого специфического или предпочтительного связывания также хорошо известны в данной области. Говорят, что молекула демонстрирует "специфическое связывание" или "предпочтительное связывание", если она взаимодействует или связывается чаще, быстрее, с большей продолжительностью и/или с большей аффинностью с конкретной клеткой или веществом, чем с альтернативными клетками или веществами. Антитело "специфически связывается" или "предпочтительно связывается" с мишенью, если оно связывается с большей аффинностью, авидностью, легче и/или с большей продолжительностью, чем оно связывается с другими веществами. Например, антитело, которое специфически или предпочтительно связывается с эпитопом VEGF, представляет собой антитело, которое связывается с последовательностью этого эпитопа с большей аффинностью, авидностью, легче и/или с большей продолжительностью, чем оно связывается с другими последовательностями. Также понятно из этого определения, что, например, антитело (либо группировка или эпитоп), которое специфически или предпочтительно связывается с первой мишенью, может специфически или предпочтительно связываться или не связываться со второй мишенью. Таким образом, "специфическое связывание" или "предпочтительное связывание" не обязательно требует (хотя и может включать) исключительное связывание. Как правило, но не обязательно, указание на связывание означает предпочтительное связывание.

При использовании здесь термин "иммуноспецифическое" связывание антител относится к антигенспецифическому связывающему взаимодействию, которое происходит между антигенсвязывающим сайтом антитела и конкретным антигеном, распознаваемым этим антителом (то есть антитело взаимодействует с белком в ELISA или другом иммуноанализе и не взаимодействует детектируемым образом с неродственными белками).

Термин "конкурировать" при использовании здесь в отношении антитела означает, что первое антитело или его антигенсвязывающая часть связывается с эпитопом способом, достаточно похожим на связывание второго антитела или его антигенсвязывающей части, так что результат связывания первого антитела с его когнатным эпитопом заметно уменьшается в присутствии второго антитела по сравнению со связыванием первого антитела в отсутствие второго антитела. Альтернативно, связывание второго антитела с его эпитопом также заметно снижается в присутствии первого антитела, но это необязательно. То есть первое антитело может ингибировать связывание второго антитела с его эпитопом без ингибирования связывания первого антитела с его соответствующим эпитопом вторым антителом. Однако, когда каждое антитело заметно ингибирует связывание другого антитела с его когнатным эпитопом или лигандом, в той же, большей или меньшей степени, говорят, что антитела "перекрестно конкурируют" друг с другом за связывание с их соответствующим(и) эпитопом(ами). И конкурирующие и перекрестно-конкурирующие антитела включены в настоящее изобретение. Независимо от механизма, посредством которого осуществляется такая конкуренция или перекрестная конкуренция (например стерическое затруднение, конформационное изменение или связывание с общим эпитопом или его частью), специалист в данной области может оценить на основании изложенных здесь принципов, что такие конкурирующие и/или перекрестно-конкурирующие антитела охватываются изобретением и могут быть полезны для способов, раскрытых здесь.

При использовании здесь термин "человеческий VEGF" относится к 165-аминокислотному фактору роста эндотелия сосудов и родственным 121-, 189-, и 206-аминокислотным факторам роста эндотелия сосудов, как описано в Leung et al. Science, 246:1306 (1989) и Houck et al. Mol. Endocrin., 5:1806 (1991), вместе с их природными аллельными и процессированными формами. Термин "VEGF" также используется для указания на усеченные форм полипептида, содержащие аминокислоты 8-109 или 1-109 из 165-аминокислотного человеческого фактора роста эндотелия сосудов. Указание на любые такие формы VEGF может быть обозначено в настоящей заявке, например, как "VEGF (8-109)," "VEGF (1-109)" или "VEGF165." Положения аминокислот для "усеченного" нативного VEGF нумеруются, как указано в последовательности нативного VEGF. Например, положение аминокислоты 17 (метионин) в усеченном нативном VEGF также является положением 17 (метионин) в нативном VEGF. Усеченный нативный VEGF обладает аффинностью связывания к рецепторам KDR и Flt-1, сопоставимой с нативным VEGF.

"Терапевтически эффективное количество" относится к количеству, эффективному в дозировках и в течение периодов времени, необходимых для достижения нужного терапевтического результата, что, применительно к анти-VEGF антителам, включает лечение или профилактическое предупреждение целевого патологического состояния, например рака. Следует отметить, что величины дозировки могут варьировать в зависимости от тяжести состояния, которое необходимо облегчить. Также следует понимать, что для любого конкретного субъекта, конкретные схемы приема должны со временем корректироваться в соответствии с индивидуальной потребностью и профессиональной оценкой лица, осуществляющего введение или контролирующего введение композиций, и что указанные здесь диапазоны доз являются только примерами и не подразумевают ограничения объема или практического осуществления заявленной композиции. Аналогично, терапевтически эффективное количество антитела или части антитела может варьироваться в зависимости от таких факторов, как болезненное состояние, возраст, пол и масса тела субъекта, способность антитела или части антитела вызывать нужный ответ у субъекта и желательный путь введения композиции антитела. Терапевтически эффективным количеством также является такое, при котором любые токсичные или негативные эффекты антител или части антител перевешиваются терапевтически благоприятными эффектами.

При использовании здесь термин "лечение" относится как к терапевтическому лечению, так и к профилактическим и предупредительным мерам, целью которых является предупреждение или замедление (облегчение) целевого патологического состояния (например любого состояния, на которое оказывает благоприятное влияние лечение антителом). Оно включает хронические и острые расстройства или заболевания, включающие такие патологические состояния, которые предрасполагают млекопитающего к рассматриваемому расстройству. Неограничивающие примеры расстройств, подлежащих лечению согласно изобретению, включают доброкачественные и злокачественные опухоли; лейкозы и лимфоидные злокачественные новообразования; нейрональные, глиальные, астроцитарные, гипоталамические и другие железистые, макрофагальные, эпителиальные, стромальные и бластоцельные нарушения; и воспалительные, ангиогенные и иммунологические расстройства). Нуждающиеся в лечении включают тех, кто уже имеет это состояние, а также тех, кто склонен к этому состоянию, или тех, у кого следует предупредить это состояние. При использовании здесь, "лечение" представляет собой подход к получению полезных или желательных клинических результатов, включающих, без ограничения ими, один или более из следующего: уменьшение тяжести, облегчение одного или более симптомов, связанных с патологическим состоянием.

"Эффективное количество" лекарственного средства, композиции, соединения или фармацевтической композиции представляет собой количество, достаточное для получения полезных или желательных результатов, включающих клинические результаты, такие как облегчение или уменьшение целевого патологического состояния. Эффективное количество может быть введено в виде одного или более введений. Для целей настоящего изобретения эффективное количество лекарственного средства, соединения или фармацевтической композиции представляет собой количество, достаточное для лечения, улучшения или снижения интенсивности целевого патологического состояния. Как понятно в контексте клиники, эффективное количество лекарственного средства, соединения или фармацевтической композиции может достигаться или может не достигаться в сочетании с другим лекарственным средством, соединением или фармацевтической композицией. Таким образом, "эффективное количество" можно рассматривать в контексте введения одного или более терапевтических агентов, и можно считать, что агент вводят в эффективном количестве, если в сочетании с одним или более агентами может быть достигнут или достигается нужный результат.

При использовании здесь термин "субъект" для целей лечения включает любого субъекта и предпочтительно представляет собой субъекта, который нуждается в лечении целевого патологического состояния (например рака). При профилактике субъектом является любой субъект и предпочтительно субъект, который имеет риск развития или предрасположен к развитию целевого патологического состояния. Предполагается, что термин "субъект" включает живые организмы, например прокариоты и эукариоты. Примеры субъектов включают млекопитающих, например людей, собак, коров, лошадей, свиней, овец, коз, кошек, мышей, кроликов, крыс и трансгенных животных, не являющихся людьми. В конкретных воплощениях изобретения субъект представляет собой человека.

При использовании здесь термин "полинуклеотид" или "нуклеиновая кислота", которые используются здесь взаимозаменяемо, означает полимерную форму нуклеотидов, либо рибонуклеотидов, либо дезоксинуклеотидов, или модифицированную форму нуклеотида любого типа и может представлять собой одно- и двухцепочечные формы. "Полинуклеотидная" или "нуклеиновокислотная" последовательность охватывает ее комплементарную цепь, если не указано иное. При использовании здесь термин "выделенный полинуклеотид" или "выделенная нуклеиновая кислота" означает полинуклеотид геномной ДНК, кДНК или ДНК синтетического происхождения или их комбинации, где в силу своего происхождения или источника получения выделенный полинуклеотид имеет от одной до трех следующих характеристик: (1) не ассоциирован со всем полинуклеотидом или частью полинуклеотида, с которым "выделенный полинуклеотид" находится в природе, (2) функционально связан с полинуклеотидом, с которым он не связан в природе, или (3) не встречается в природе, как часть более длинной последовательности.

При использовании здесь термин "фармацевтически приемлемый носитель" включает любое вещество, которое в сочетании с активным ингредиентом, позволяет ингредиенту сохранять биологическую активность и не взаимодействует с иммунной системой субъекта. Примеры включают, без ограничения ими, любой из стандартных фармацевтических носителей, таких как фосфатный забуференный физиологический раствор, вода, эмульсии, такие как эмульсия масло/вода, и различные типы смачивающих агентов. Предпочтительными разбавителями для аэрозольного или парентерального введения являются фосфатный забуференный физиологический раствор, нормальный (0,9%) физиологический раствор или 5% декстроза. Композиции, содержащие такие носители, составляют посредством хорошо известных традиционных методов (см., например, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, A. Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990; and Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing, 2000).

Подразумевается, что при использовании здесь термин "Koff" указывает на константу скорости диссоциации антитела из комплекса антитело/антиген.

Подразумевается, что при использовании здесь термин "Kd" указывает на константу диссоциации взаимодействия антитело-антиген. Одним из способов определения Kd или аффинности связывания антител с VEGF человека является измерение аффинности связывания монофункциональных Fab-фрагментов антитела. Для получения монофункциональных Fab-фрагментов антитело (например IgG) может быть расщеплено папаином или рекомбинантно экспрессировано. Аффинность Fab-фрагмента анти-VEGF антитела может быть определена с помощью поверхностного плазмонного резонанса (BIAcorC1GM000™ surface plasmon resonance (SPR), BIAcore, INC, Piscaway NJ). Чипы CM5 могут быть активированы с помощью N-этил-N'-(3-диметиламинопропил)-карбодиимида гидрохлорида (EDC) и N-гидроксисукцинимида (NHS) в соответствии с инструкциями поставщика.

"Снижение заболеваемости" означает любое снижение тяжести (которое может включать снижение потребности в других лекарственных средствах, и/или количества (например воздействия) других лекарственных средств и/или терапевтических воздействий, обычно используемых для этого состояния. Как понятно специалистам в данной области, реакция субъектов на лечение может быть различной и, как таковой, например, "метод снижения заболеваемости" соответствует введению человеческого антагонистического антитела к VEGF, основанное на обоснованном ожидании, что такое введение вероятно может вызывать такое снижение заболевания у данного конкретного субъекта.

"Облегчение" означает уменьшение или улучшение одного или более симптомов по сравнению с отсутствием введения антагонистического антитела против VEGF. "Облегчение" также включает сокращение или уменьшение длительности симптома.

Указание "примерно" в отношении значения или параметра в данном описании изобретения включает (и описывает) воплощения, которые относятся к этому значению или параметру как таковым. Например, описание, указывающее на "примерно X", включает описание "X". Числовые диапазоны включают числа, задающие этот диапазон.

Когда аспекты или воплощения изобретения описаны применительно к группе Маркуша или другой группе альтернатив, настоящее изобретение охватывает не только всю группу, перечисленную в целом, но и каждого члена группы отдельно, и все возможные подгруппы основной группы, а также основную группу с отсутствием одного или более представителей этой группы. Настоящее изобретение также предусматривает явное исключение одного или более любых представителей группы в заявленном изобретении.

При включении элементов настоящего изобретения или его предпочтительного(ых) воплощения(й), подразумевается, что артикли "a", "an", "the" и слово "указанный" означают, что имеется один или более элементов. Подразумевается, что термины "содержащий", "содержать", "содержит", "включающий" и "имеющий" являются охватывающими и означают, что могут присутствовать дополнительные элементы, кроме перечисленных. Понятно, что когда воплощения в описании изобретения описаны с помощью выражения "содержащий", также предложены иные аналогичные воплощения, описанные с помощью терминов "состоящий из" и/или "по существу состоящий из".

Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые здесь, имеют такое же значение, которое обычно подразумевается специалистом в данной области техники, к которой относится настоящее изобретение. В случае конфликта настоящее описание изобретения, включающее определения, имеет преимущественную силу. На всем протяжении описания или формулы изобретения слово "содержать" или его варианты, такие как "содержит" или "содержащий" подразумевает включение указанного целого числа или группы целых чисел, но не исключение какого-либо другого целого числа или группы целых чисел. Если контекст не требует иного, термины в единственном числе включают множественное число, и термины во множественном силе включают единственное число.

Здесь описаны типичные способы и вещества, хотя способы и вещества, аналогичные или эквивалентные описанным здесь, также могут быть использованы в практическом воплощении или в тестировании настоящего изобретения. Вещества, способы и примеры являются только иллюстративными и не считаются ограничивающими.

Композиция анти-VEGF антитела

В одном аспекте предложена стабильная водная композиция, содержащая: от примерно 15 мг/мл до примерно 200 мг/мл антитела против фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) или его антигенсвязывающего фрагмента; буфер; полиол; поверхностно-активное вещество; хелатирующий агент; где композиция имеет рН от примерно 5,0 до примерно 6,0. Описанная здесь композиция имеет продолжительный срок годности, предпочтительно по меньшей мере или более чем примерно 36 месяцев (например, при примерно 5°C).

В некоторых воплощениях композиция содержит по меньшей мере одно анти-VEGF антитело. Например, анти-VEGF антитело представляет собой человеческое антитело (например AVASTIN® или rhuMAB VEGF). В некоторых воплощениях может присутствовать более одного антитела. Может присутствовать по меньшей мере одно, по меньшей мере два, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять или более разных антител. Как правило, два или более разных антитела имеют взаимодополняющие активности, которые не оказывают неблагоприятного влияния друг на друга. Одно или каждое антитело также можно использовать в сочетании с другими агентами, которые служат для усиления и/или дополнения эффективности антител.

В некоторых воплощениях анти-VEGF антитело в композиции по настоящему изобретению представляет собой антитело, которое диссоциирует от человеческого VEGF с Kd 1×10-8 М или менее, и константой скорости диссоциации Koff 1×10-3 с-1 или менее, где обе константы определяют с помощью поверхностного плазмонного резонанса и нейтрализуют цитотоксичность человеческого VEGF в стандартном L929 анализе in vitro с IC50 1×10-7 М или менее. В некоторых воплощениях анти-VEGF антитело в композиции по настоящему изобретению представляет собой антитело, которое диссоциирует от человеческого VEGF с константой скорости диссоциации Koff 5×10-4 с-1 или менее, или с константой скорости диссоциации Koff 1×10-4 с-1 или менее. В некоторых воплощениях анти-VEGF антитело в композиции по настоящему изобретению представляет собой антитело, которое нейтрализует цитотоксичность человеческого VEGF в стандартном L929 анализе in vitro с IC50 1×10-7 М или менее, IC50 1×10-8 М или менее, IC50 1×10-9 М или менее, или IC50 1×10-10 М или менее. В некотором воплощении анти-VEGF антитело в композиции по настоящему изобретению также нейтрализует VEGF-индуцированную клеточную активацию, определенную с использованием стандартного in vitro анализа VEGF-индуцированной экспрессии ELAM-1 (фактор адгезии эндотелиальных лейкоцитов - 1) на эндотелиальных клетках пупочной вены человека (HUVEC). См., например, патенты США 6090382, 6258562 и 8216583, каждый из которых включен в качестве ссылки в данный документ.

В некоторых воплощениях анти-VEGF антитело в композиции по настоящему изобретению содержит определяющий комплементарность участок один (CDR1) вариабельной области тяжелой цепи (VH), имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 1, VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 2, VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 3, или вариант SEQ ID NO: 3, CDR1 вариабельной области легкой цепи (VL), имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 4, VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 5, и VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 6.

В некоторых воплощениях анти-VEGF антитело в композиции по настоящему изобретению содержит вариабельную область тяжелой цепи (VH) и вариабельную область легкой цепи (VL), где область VH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и где область VL содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8. В некоторых воплощениях анти-VEGF антитело в композиции по настоящему изобретению имеет константную область тяжелой цепи IgG1, или константную область тяжелой цепи IgG4, или представляет собой Fab-фрагмент, или одноцепочечный Fv-фрагмент.

В одном воплощении анти-VEGF антитело в композиции по настоящему изобретению представляет собой AVASTIN® (анти-VEGF антитело или rhuMAb VEGF).

Антитело может присутствовать в композиции в концентрации в диапазоне от примерно 0,1 мг/мл до примерно 200 мг/мл, от примерно 15 мг/мл до примерно 200 мг/мл, от примерно 20 мг/мл до примерно 175 мг/мл или от примерно 25 мг/мл до примерно 150 мг/мл. Например, в некоторых воплощениях концентрация антитела составляет примерно 0,5 мг/мл, примерно 1 мг/мл, примерно 2 мг/мл, примерно 2,5 мг/мл, примерно 3 мг/мл, примерно 3,5 мг/мл, примерно 4 мг/мл, примерно 4,5 мг/мл, примерно 5 мг/мл, примерно 5,5 мг/мл, примерно 6 мг/мл, примерно 6,5 мг/мл, примерно 7 мг/мл, примерно 7,5 мг/мл, примерно 8 мг/мл, примерно 8,5 мг/мл, примерно 9 мг/мл, примерно 9,5 мг/мл, примерно 10 мг/мл, примерно 11 мг/мл, примерно 12 мг/мл, примерно 13 мг/мл, примерно 14 мг/мл, примерно 15 мг/мл, примерно 16 мг/мл, примерно 17 мг/мл, примерно 18 мг/мл, примерно 19 мг/мл, примерно 20 мг/мл, примерно 21 мг/мл, примерно 22 мг/мл, примерно 23 мг/мл, примерно 24 мг/мл, примерно 25 мг/мл, примерно 26 мг/мл, примерно 27 мг/мл, примерно 28 мг/мл, примерно 29 мг/мл, примерно 30 мг/мл, примерно 31 мг/мл, примерно 32 мг/мл, примерно 33 мг/мл, примерно 34 мг/мл, примерно 35 мг/мл, примерно 36 мг/мл, примерно 37 мг/мл, примерно 38 мг/мл, примерно 39 мг/мл, примерно 40 мг/мл, примерно 41 мг/мл, примерно 42 мг/мл, примерно 43 мг/мл, примерно 44 мг/мл, примерно 45 мг/мл, примерно 46 мг/мл, примерно 47 мг/мл, примерно 48 мг/мл, примерно 49 мг/мл, примерно 50 мг/мл, примерно 51 мг/мл, примерно 52 мг/мл, примерно 53 мг/мл, примерно 54 мг/мл, примерно 55 мг/мл, примерно 56 мг/мл, примерно 57 мг/мл, примерно 58 мг/мл, примерно 59 мг/мл, примерно 60 мг/мл, примерно 70 мг/мл, примерно 80 мг/мл, примерно 90 мг/мл, примерно 100 мг/мл, примерно 101 мг/мл, примерно 102 мг/мл, примерно 102,5 мг/мл, примерно 103 мг/мл, примерно 103,5 мг/мл, примерно 104 мг/мл, примерно 104,5 мг/мл, примерно 105 мг/мл, примерно 105,5 мг/мл, примерно 106 мг/мл, примерно 106,5 мг/мл, примерно 107 мг/мл, примерно 107,5 мг/мл, примерно 108 мг/мл, примерно 108,5 мг/мл, примерно 109 мг/мл, примерно 109,5 мг/мл, примерно 110 мг/мл, примерно 111 мг/мл, примерно 112 мг/мл, примерно 113 мг/мл, примерно 114 мг/мл, примерно 115 мг/мл, примерно 116 мг/мл, примерно 117 мг/мл, примерно 118 мг/мл, примерно 119 мг/мл, примерно 120 мг/мл, примерно 121 мг/мл, примерно 122 мг/мл, примерно 123 мг/мл, примерно 124 мг/мл, примерно 125 мг/мл, примерно 126 мг/мл, примерно 127 мг/мл, примерно 128 мг/мл, примерно 129 мг/мл, примерно 130 мг/мл, примерно 131 мг/мл, примерно 132 мг/мл, примерно 133 мг/мл, примерно 134 мг/мл, примерно 135 мг/мл, примерно 136 мг/мл, примерно 137 мг/мл, примерно 138 мг/мл, примерно 139 мг/мл, примерно 140 мг/мл, примерно 141 мг/мл, примерно 142 мг/мл, примерно 143 мг/мл, примерно 144 мг/мл, примерно 145 мг/мл, примерно 146 мг/мл, примерно 147 мг/мл, примерно 148 мг/мл, примерно 149 мг/мл, примерно 150 мг/мл, примерно 151 мг/мл, примерно 152 мг/мл, примерно 153 мг/мл, примерно 154 мг/мл, примерно 155 мг/мл, примерно 156 мг/мл, примерно 157 мг/мл, примерно 158 мг/мл, примерно 159 мг/мл, примерно 160 мг/мл, примерно 170 мг/мл, примерно 180 мг/мл, примерно 190 мг/мл или примерно 200 мг/мл.

В соответствии с настоящим изобретением буфер (например сукцинатный буфер) обеспечивает композицию с близким к физиологическому значением рН для снижения риска боли или анафилактоидных побочных эффектов при инъекции, а также обеспечивает повышенную стабильность антитела и устойчивость к агрегации, окислению и фрагментации.

Буфер может представлять собой, например, без ограничения ими, ацетат, сукцинат (например динатрия сукцината гексагидрат), глюконат, цитрат, гистидин, уксусная кислота, фосфат, фосфорная кислота, аскорбат, винная кислота, малеиновая кислота, глицин, лактат, молочная кислота, аскорбиновая кислота, имидазол, бикарбонат и углекислота, янтарная кислота, бензоат натрия, бензойная кислота, глюконат, эдетат, ацетат, малат, имидазол, трис, фосфат и их смеси. Предпочтительно, буфер представляет собой сукцинат, где сукцинат может включать динатрия сукцината гексагидрат (основная форма) и/или янтарную кислоту или их смесь.

Концентрация буфера может варьироваться от примерно 0,1 миллимоль (мМ) до примерно 100 мМ. Предпочтительно, концентрация буфера составляет от примерно 0,5 мМ до примерно 50 мМ, также предпочтительно от примерно 1 мМ до примерно 30 мМ, более предпочтительно от примерно 1 мМ до примерно 25 мМ. Предпочтительно, концентрация буфера составляет примерно 1 мМ, примерно 2 мМ, примерно 3 мМ, примерно 4 мМ, примерно 5 мМ, примерно 6 мМ, примерно 7 мМ, примерно 8 мМ, примерно 9 мМ, примерно 10 мМ, примерно 11 мМ, примерно 12 мМ, примерно 13 мМ, примерно 14 мМ, примерно 15 мМ, примерно 16 мМ, примерно 17 мМ, примерно 18 мМ, примерно 19 мМ, примерно 20 мМ, примерно 21 мМ, примерно 22 мМ, примерно 23 мМ, примерно 24 мМ, примерно 25 мМ, примерно 30 мМ, примерно 35 мМ, примерно 40 мМ, примерно 45 мМ, примерно 50 мМ, примерно 55 мМ, примерно 60 мМ, примерно 65 мМ, примерно 70 мМ, примерно 75 мМ, примерно 80 мМ, примерно 85 мМ, примерно 90 мМ, примерно 95 мМ или примерно 100 мМ. В одном воплощении буфер представляет собой сукцинатный буфер с концентрацией примерно 20 мМ.

Концентрация буфера также может варьироваться от примерно 0,01 мг/мл до примерно 30 мг/мл, от примерно 0,1 мг/мл до примерно 5 мг/мл, или от примерно 0,5 мг/мл до примерно 4 мг/мл. Например, концентрация буфера составляет примерно 0,01 мг/мл, 0,02 мг/мл, 0,03 мг/мл, примерно 0,04 мг/мл, примерно 0,05 мг/мл, примерно 0,06 мг/мл, примерно 0,07 мг/мл, 0,08 мг/мл, 0,09 мг/мл, примерно 0,10 мг/мл, 0,11 мг/мл, 0,12 мг/мл, 0,13 мг/мл, примерно 0,14 мг/мл, примерно 0,15 мг/мл, примерно 0,16 мг/мл, примерно 0,17 мг/мл, 0,18 мг/мл, 0,19 мг/мл примерно 0,20 мг/мл, примерно 0,25 мг/мл, примерно 0,3 мг/мл, примерно 0,4 мг/мл, примерно 0,5 мг/мл, примерно 0,6 мг/мл, примерно 0,7 мг/мл, примерно 0,8 мг/мл, примерно 0,9 мг/мл, примерно 1,0 мг/мл, примерно 2,0 мг/мл, примерно 3,0 мг/мл, примерно 4,0 мг/мл, примерно 5,0 мг/мл, примерно 6,0 мг/мл, примерно 7,0 мг/мл, примерно 8,0 мг/мл, примерно 9,0 мг/мл, примерно 10,0 мг/мл, примерно 11,0 мг/мл, примерно 12,0 мг/мл, примерно 13,0 мг/мл, примерно 14,0 мг/мл, примерно 15,0 мг/мл, примерно 16,0 мг/мл, примерно 17,0 мг/мл, примерно 18,0 мг/мл, примерно 19,0 мг/мл, примерно 20 мг/мл, примерно 21,0 мг/мл, примерно 22,0 мг/мл, примерно 23,0 мг/мл, примерно 24,0 мг/мл, примерно 25,0 мг/мл, примерно 26,0 мг/мл, примерно 27,0 мг/мл, примерно 28,0 мг/мл, примерно 29,0 мг/мл или примерно 30 мг/мл. В некоторых воплощениях буфер представляет собой сукцинатный буфер, содержащий примерно 0,5-5,0 мг/мл динатрия сукцината гексагидрата и примерно 0,1-1,0 мг/мл янтарной кислоты. В некоторых воплощениях буфер представляет собой сукцинатный буфер, содержащий примерно 4,08 мг/мл динатрия сукцината гексагидрата и примерно 0,58 мг/мл янтарной кислоты. В некоторых воплощениях буфер представляет собой сукцинатный буфер, содержащий примерно 2,362 мг/мл янтарной кислоты.

В некоторых воплощениях полиол может иметь молекулярную массу, которая, например, и без ограничения, составляет менее чем примерно 600 кД (например в диапазоне от примерно 120 до примерно 400 кД), и содержит несколько гидроксильных групп, включая сахара (например восстанавливающие и невосстанавливающие сахара или их смеси, сахарид или углевод), сахарные спирты, сахарные кислоты или соль или их смеси. Примеры невосстанавливающего сахара включают, но без ограничения ими, сахарозу, трегалозу и их смеси. В некоторых воплощениях полиол представляет собой маннитол, трегалозу, сорбит, эритрит, изомальт, лактит, мальтит, ксилит, глицерин, лактит, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, инозит или их смеси. В других воплощениях полиол может представлять собой, например и без ограничения, моносахарид, дисахарид или полисахарид, или смесь любого из вышеперечисленных соединений. Сахарид или углевод может представлять собой, например и без ограничения, фруктозу, глюкозу, маннозу, сахарозу, сорбозу, ксилозу, лактозу, мальтозу, сахарозу, декстран, пуллулан, декстрин, циклодекстрины, растворимый крахмал, гидроксиэтил крахмал, водорастворимые глюканы или их смесь.

Концентрация полиола в композиции варьируется от примерно 1 мг/мл до примерно 300 мг/мл, от примерно 1 мг/мл до примерно 200 мг/мл или от примерно 1 мг/мл до примерно 120 мг/мл. Предпочтительно, концентрация пол иола в композиции составляет от примерно 50 мг/мл до примерно 120 мг/мл, от примерно 60 мг/мл до примерно 110 мг/мл или от примерно 80 мг/мл до примерно 90 мг/мл). Например, концентрация полиола в композиции составляет примерно 0,5 мг/мл, примерно 1 мг/мл, примерно 2 мг/мл, примерно 2,5 мг/мл, примерно 3 мг/мл, примерно 3,5 мг/мл, примерно 4 мг/мл, примерно 4,5 мг/мл, примерно 5 мг/мл, примерно 5,5 мг/мл, примерно 6 мг/мл, примерно 6,5 мг/мл, примерно 7 мг/мл, примерно 7,5 мг/мл, примерно 8 мг/мл, примерно 8,5 мг/мл, примерно 9 мг/мл, примерно 9,5 мг/мл, примерно 10 мг/мл, примерно 11 мг/мл, примерно 12 мг/мл, примерно 13 мг/мл, примерно 14 мг/мл, примерно 15 мг/мл, примерно 16 мг/мл, примерно 17 мг/мл, примерно 18 мг/мл, примерно 19 мг/мл, примерно 20 мг/мл, примерно 21 мг/мл, примерно 22 мг/мл, примерно 23 мг/мл, примерно 24 мг/мл, примерно 25 мг/мл, примерно 26 мг/мл, примерно 27 мг/мл, примерно 28 мг/мл, примерно 29 мг/мл, примерно 30 мг/мл, примерно 31 мг/мл, примерно 32 мг/мл, примерно 33 мг/мл, примерно 34 мг/мл, примерно 35 мг/мл, примерно 36 мг/мл, примерно 37 мг/мл, примерно 38 мг/мл, примерно 39 мг/мл, примерно 40 мг/мл, примерно 41 мг/мл, примерно 42 мг/мл, примерно 43 мг/мл, примерно 44 мг/мл, примерно 45 мг/мл, примерно 46 мг/мл, примерно 47 мг/мл, примерно 48 мг/мл, примерно 49 мг/мл, примерно 50 мг/мл, примерно 51 мг/мл, примерно 52 мг/мл, примерно 53 мг/мл, примерно 54 мг/мл, примерно 55 мг/мл, примерно 56 мг/мл, примерно 57 мг/мл, примерно 58 мг/мл, примерно 59 мг/мл, примерно 60 мг/мл, примерно 65 мг/мл, примерно 70 мг/мл, примерно 75 мг/мл, примерно 80 мг/мл, примерно 81 мг/мл, примерно 82 мг/мл, примерно 83 мг/мл, примерно 84 мг/мл, примерно 85 мг/мл, примерно 86 мг/мл, примерно 87 мг/мл, примерно 88 мг/мл, примерно 89 мг/мл, примерно 90 мг/мл, примерно 91 мг/мл, примерно 92 мг/мл, примерно 93 мг/мл, примерно 94 мг/мл, примерно 95 мг/мл, примерно 96 мг/мл, примерно 97 мг/мл, примерно 98 мг/мл, примерно 99 мг/мл, примерно 100 мг/мл, примерно 101 мг/мл, примерно 102 мг/мл, примерно 103 мг/мл, примерно 104 мг/мл, примерно 105 мг/мл, примерно 106 мг/мл, примерно 107 мг/мл, примерно 108 мг/мл, примерно 109 мг/мл, примерно 110 мг/мл, примерно 111 мг/мл, примерно 112 мг/мл, примерно 113 мг/мл, примерно 114 мг/мл, примерно 115 мг/мл, примерно 116 мг/мл, примерно 117 мг/мл, примерно 118 мг/мл, примерно 119 мг/мл, примерно 120 мг/мл, примерно 121 мг/мл, примерно 122 мг/мл, примерно 123 мг/мл, примерно 124 мг/мл, примерно 125 мг/мл, примерно 126 мг/мл, примерно 127 мг/мл, примерно 128 мг/мл, примерно 129 мг/мл, примерно 130 мг/мл, примерно 131 мг/мл, примерно 132 мг/мл, примерно 133 мг/мл, примерно 134 мг/мл, примерно 135 мг/мл, примерно 136 мг/мл, примерно 137 мг/мл, примерно 138 мг/мл, примерно 139 мг/мл, примерно 140 мг/мл, примерно 141 мг/мл, примерно 142 мг/мл, примерно 143 мг/мл, примерно 144 мг/мл, примерно 145 мг/мл, примерно 146 мг/мл, примерно 147 мг/мл, примерно 148 мг/мл, примерно 149 мг/мл или примерно 150 мг/мл.

В некоторых воплощениях полиол представляет собой сахарозу в концентрации от примерно 1 мг/мл до примерно 300 мг/мл, от примерно 1 мг/мл до примерно 200 мг/мл или от примерно 1 мг/мл до примерно 120 мг/мл. Предпочтительно, концентрация сахарозы в композиции составляет от примерно 50 мг/мл до примерно 120 мг/мл, от примерно 60 мг/мл до примерно 110 мг/мл или от примерно 80 мг/мл до примерно 90 мг/мл. В некоторых воплощениях концентрация сахарозы в композиции составляет примерно 85 мг/мл.

Поверхностно-активные вещества, используемые в настоящем изобретении, могут изменять поверхностное натяжение жидкой композиции антител. В некоторых воплощениях поверхностно-активное вещество уменьшает поверхностное натяжение жидкой композиции антител. В других воплощениях поверхностно-активное вещество может способствовать улучшению стабильности любого антитела в композиции. Поверхностно-активное вещество также может уменьшить агрегацию антител в композиции (например, при транспортировке и хранении), и/или минимизировать образование частиц в композиции, и/или уменьшать адсорбцию (например адсорбцию на контейнер). Например, поверхностно-активное вещество также может улучшить стабильность антитела во время и после цикла замораживания/оттаивания. Поверхностно-активное вещество может представлять собой, например и без ограничения, полисорбат, полоксамер, тритон, додецилсульфат натрия, лаурилсульфат натрия, октилгликозид натрия, лаурилсульфобетаин, миристилсульфобетаин, линоилсульфобетаин, стеарилсульфобетаин, лаурил-саркозин, миристил-саркозин, линоил-саркозин, стеарил-саркозин, линоил-бетаин, миристилбетаин, цетилбетаин, лаурамидопропилбетаин, кокамидопропилбетаин, линолеамидопропилбетаин, миристамидопропилбетаин, пальмидопропилбетаин, изостеарамидопропилбетаин, миристамидопропил-диметиламин, пальмидопропил-диметиламин, изостеарамидопропил-диметиламин, метил-кокоил-таурат натрия, динатрия метил-олеил-таурат, дигидроксипропил ПЭГ-5-линолеаммония хлорид, полиэтиленгликоль, полипропиленгликоль и их смеси. Поверхностно-активное вещество может представлять собой, например и без ограничения, полисорбат 20, полисорбат 21, полисорбат 40, полисорбат 60, полисорбат 61, полисорбат 65, полисорбат 80, полисорбат 81, полисорбат 85, PEG3350 и их смеси.

Концентрация поверхностно-активного вещества обычно находится в диапазоне от примерно 0,01 мг/мл до примерно 10 мг/мл, от примерно 0,01 мг/мл до примерно 5,0 мг/мл, от примерно 0,01 мг/мл до примерно 2,0 мг/мл, от примерно 0,01 мг/мл до примерно 1,5 мг/мл, от примерно 0,01 мг/мл до примерно 1,0 мг/мл, от примерно 0,01 мг/мл до примерно 0,5 мг/мл, от примерно 0,01 мг/мл до примерно 0,4 мг/мл, от примерно 0,01 мг/мл до примерно 0,3 мг/мл, от примерно 0,01 мг/мл до примерно 0,2 мг/мл, от примерно 0,01 мг/мл до примерно 0,15 мг/мл, от примерно 0,01 мг/мл до примерно 0,1 мг/мл, от примерно 0,01 мг/мл до примерно 0,05 мг/мл, от примерно 0,1 мг/мл до примерно 1 мг/мл, от примерно 0,1 мг/мл до примерно 0,5 мг/мл или от примерно 0,1 мг/мл до примерно 0,3 мг/мл. Также предпочтительно, концентрация поверхностно-активного вещества составляет примерно 0,05 мг/мл, примерно 0,06 мг/мл, примерно 0,07 мг/мл, примерно 0,08 мг/мл, примерно 0,09 мг/мл, примерно 0,1 мг/мл, примерно 0,15 мг/мл, примерно 0,2 мг/мл, примерно 0,3 мг/мл, примерно 0,4 мг/мл, примерно 0,5 мг/мл, примерно 0,6 мг/мл, примерно 0,7 мг/мл, примерно 0,8 мг/мл, примерно 0,9 мг/мл или примерно 1 мг/мл.

В некоторых воплощениях полисорбат представляет собой полисорбат 80 в концентрации в диапазоне от примерно 0,1 мг/мл до примерно 0,3 мг/мл, например 0,2 мг/мл.

Хелатирующие агенты, используемые в настоящем изобретении, уменьшают образование восстановленных форм кислорода, уменьшают образование кислых компонентов (например дезаминирование), снижают агрегацию антител, и/или снижают фрагментацию антител, и/или снижают окисление антител в композиции по настоящему изобретению. Например, хелатирующий агент может представлять собой мультидентатный лиганд, который образует по меньшей мере одну связь (например ковалентную, ионную или иную) с ионом металла и действует, как стабилизатор с образованием комплекса с формами, которые в противном случае могут способствовать нестабильности.

В некоторых воплощениях хелатирующий агент может быть выбран из группы, состоящей из аминополикарбоновых кислот, гидроксиаминокарбоновых кислот, N-замещенных глицинов, 2-(2-амино-2-оксоктил)аминоэтансульфокислоты (BES), дефероксамина (DEF), лимонной кислоты, ниацинамида и дезоксихолатов и их смеси. В некоторых воплощениях хелатирующий агент выбран из группы, состоящей из этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA), диэтилентриаминпентауксусной кислоты 5 (DTPA), нитрилотриуксусной кислоты (NTA), N-2-ацетамидо-2-иминодиуксусной кислоты (ADA), бис(аминоэтил)гликолевого эфира, N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты (EGTA), транс-диаминоциклогексантетрауксусной кислоты (DCTA), глутаминовой кислоты и аспарагиновой кислоты, N-гидроксиэтилиминодиуксусной кислоты (HIMDA), N,N-бис-гидроксиэтилглицина (бицин) и N-(трис(гидроксиметил)метил) 10 глицина (трицин), глицилглицина, дезоксихолата натрия, этилендиамина, пропилендиамина, диэтилентриамина, триэтилентетрамина (тиен), динатрия эдетата дигидрата (или динатрия EDTA дигидрата или динатриевой соли EDTA), кальция EDTA, щавелевой кислоты, малата, лимонной кислоты, моногидрата лимонной кислоты и тринатрий цитрата дигидрата, 8-гидроксихинолята, аминокислот, гистидина, цистеина, метионина, пептидов, полипептидов и белков, и их смесей. В некоторых воплощениях хелатирующий агент выбран из группы, состоящей из солей EDTA, включающих дикалия эдетат, динатрия эдетат, динатрия кальция эдетат, натрия эдетат, тринатрия эдетат и калия эдетат; и подходящая соль дефероксамина (DEF) представляет собой дефероксамина мезилат (DFM), или их смеси. Хелатирующие агенты, используемые в изобретении, могут присутствовать, где это возможно, в виде свободной кислоты или свободного основания или солевой формы соединения, а также в виде безводной, сольватированной или гидратированной формы соединения или соответствующей соли.

В предпочтительном воплощении хелатирующий агент представляет собой EDTA (эдетат).

Концентрация хелатирующего агента, обычно находится в диапазоне от примерно 0,01 мг/мл до примерно 50 мг/мл, от примерно 0.1 мг/мл до примерно 10,0 мг/мл, от примерно 5 мг/мл до примерно 15,0 мг/мл, от примерно 0,01 мг/мл до примерно 1.0 мг/мл, от примерно 0,02 мг/мл до примерно 0,5 мг/мл, от примерно 0,025 мг/мл до примерно 0,075 мг/мл. Кроме того, предпочтительно, когда концентрация хелатирующего агента, обычно находится в диапазоне от примерно 0,01 мМ до примерно 2,0 мМ, от примерно 0,01 мМ до примерно 1,5 мМ, от примерно 0,01 мМ до примерно 0,5 мМ, от примерно 0,01 мМ до примерно 0,4 мМ, от примерно 0,01 мМ до примерно 0,3 мМ, от примерно 0,01 мМ до примерно 0,2 мМ, от примерно 0,01 мМ до примерно 0,15 мМ, от примерно 0,01 мМ до примерно 0,1 мМ, от примерно 0,01 мМ до примерно 0,09 мМ, от примерно 0,01 мМ до примерно 0,08 мМ, от примерно 0,01 мМ до примерно 0,07 мМ, от примерно 0,01 мМ до примерно 0,06 мМ, от примерно 0,01 мМ до примерно 0,05 мМ, от примерно 0,01 мМ до примерно 0,04 мМ, от примерно 0,01 мМ до примерно 0,03 мМ, от примерно 0,01 мМ до примерно 0,02 мМ, от примерно 0,02 или от примерно 0,05 мМ до примерно 0,01 мМ. Предпочтительно концентрация хелатирующий агент может быть примерно 0,01 мг/мл, примерно 0,02 мг/мл, примерно 0,025 мг/мл, примерно 0,03 мг/мл, примерно 0,04 мг/мл, примерно 0,05 мг/мл, примерно 0,06 мг/мл, примерно 0,07 мг/мл, примерно 0,075 мг/мл, примерно 0,08 мг/мл, примерно 0,09 мг/мл, примерно 0,10 мг/мл или примерно 0,20 мг/мл. Кроме того, предпочтительно, когда концентрация хелатирующего агента составляет примерно 0,025 мг/мл, примерно 0,03 мг/мл, примерно 0,035 мг/мл, примерно 0,04 мг/мл, примерно 0,045 мг/мл, примерно 0,05 мг/мл, примерно 0,055 мг/мл, примерно 0,06 мг/мл, примерно 0,065 мг/мл, примерно 0,07 мг/мл или примерно 0,075 мг/мл. Наиболее предпочтительно, когда концентрация хелатирующего агента составляет примерно 0,05 мг/мл.

Согласно некоторым воплощениям настоящего изобретения, рН может находиться в диапазоне от примерно рН 5,0 до примерно 6,6, предпочтительно от примерно рН 5,0 до 6,5, или от примерно 5,0 до 6,0, и наиболее предпочтительно рН от 5,2 до 5,8. Например, анти-VEGF антитело в композиции по настоящему изобретению при рН в диапазоне от 5,2 до 5,8 образует меньше высокомолекулярных компонентов по сравнению с рН 5,0 или рН 6,5. Соответственно, в некоторых воплощениях рН композиции по настоящему изобретению может находиться в диапазоне, выбранном из любого из примерно рН 5,2, 5,3, 5,4, 5,5 или 5,6, и любого из примерно рН 6,5, 6,4, 6,3, 6,2, 6,1, 6,0, 5,9, 5,8 или 5,7. В некоторых воплощениях значение рН может быть выбрано из значений рН, соответствующих любому из примерно рН 5,0, 5,1, 5,2, 5,3, 5,4, 5,5, 5,6, 5,7, 5,8, 5,9, 6,0, 6,1, 6,2, 6,3, 6,4, 6,5, 6,6, 6,7, 6,8, 6,9, 7,0, 7,1, 7,2, 7,3, 7,4 или 7,5. Предпочтительно рН представляет собой рН 5,5 +/- 0,5 и наиболее предпочтительно рН представляет собой рН 5,5 +/- 0,3.

В некоторых воплощениях композиция может содержать консервант. Предпочтительно, консервант выбран из фенола, м-крезола, бензилового спирта, бензалкония хлорида, бензалтония хлорида, феноксиэтанола и метилпарабена.

Концентрация консерванта обычно находится в диапазоне от примерно 0,001 мг/мл до примерно 50 мг/мл, от примерно 0,005 мг/мл до примерно 15,0 мг/мл, от примерно 0,008 мг/мл до примерно 12,0 мг/мл or от примерно 0,01 мг/мл до примерно 10,0 мг/мл, Предпочтительно, концентрация консерванта может составлять примерно 0,1 мг/мл, 0,2 мг/мл, 0,3 мг/мл, примерно 0,4 мг/мл, примерно 0,5 мг/мл, примерно 0,6 мг/мл, примерно 0,7 мг/мл, 0,8 мг/мл, 0,9 мг/мл примерно 1,0 мг/мл, 2,0 мг/мл, 3,0 мг/мл, примерно 4,0 мг/мл, примерно 5,0 мг/мл, примерно 6,0 мг/мл, примерно 7,0 мг/мл, 8,0 мг/мл, 9,0 мг/мл примерно 9,1 мг/мл, примерно 9,2 мг/мл, 9,3 мг/мл, 9,4 мг/мл, 9,5 мг/мл, 9,6 мг/мл, 9,7 мг/мл, 9,8 мг/мл, 9,9 мг/мл, 10,0 мг/мл. Наиболее предпочтительно концентрация консерванта составляет примерно 0,1 мг/мл или 9,0 мг/мл.

В некоторых воплощениях композиция не содержит консервант.

В некоторых воплощениях антитело может быть выбрано из группы, состоящей из моноклональных антител, поликлональных антител, фрагментов антител (например Fab, Fab', F(ab')2, Fv, Fc, ScFv и т.д.), химерных антител, биспецифических антител, гетероконъюгатных антител, одноцепочечных (ScFv), их мутантов, слитых белков, содержащих часть антитела (например доменного антитела), гуманизированных антител, человеческих антител и любой другой модифицированной конфигурации молекулы иммуноглобулина, которая содержит сайт распознавания антигена нужной специфичности, в том числе гликозилированные варианты антител, варианты аминокислотной последовательности и ковалентно модифицированные антитела. Антитело может быть мышиным, крысиным, человеческим или любого другого происхождения (включая химерные или гуманизированные антитела). В некоторых воплощениях антитело может быть человеческим, но более предпочтительно гуманизированным. Предпочтительно, антитело выделено, более предпочтительно оно является по существу чистым. Когда антитело является фрагментом антитела, оно предпочтительно сохраняет функциональные характеристики исходного антитела, то есть связывание с лигандом и/или антагонистическую или агонистическую активность.

В некоторых воплощениях константная область тяжелой цепи антитела может происходить из любого типа константной области, например IgG, IgM, IgD, IgA и IgE; и любых изотипов, например IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. Предпочтительно, антитело представляет собой антитело IgG1.

В соответствии с другим аспектом настоящего изобретения предложена водная композиция, содержащая или состоящая из: от примерно 15 мг/мл до примерно 200 мг/мл антитела против фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) или его антигенсвязывающего фрагмента; от примерно 1 мМ до примерно 100 мМ буфера; от примерно 1 мг/мл до примерно 300 мг/мл полиола; от примерно 0,01 мг/мл до примерно 10 мг/мл поверхностно-активного вещества; от примерно 0,01 мг/мл до примерно 1,0 мг/мл хелатирующего агента; где композиция имеет рН от примерно 5,0 до примерно 6,0. В некоторых воплощениях антитело содержит CDR1 вариабельной области тяжелой цепи (VH), имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 1, VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 2, VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 3, или вариант SEQ ID NO: 3, и CDR1 вариабельной области легкой цепи (VL), имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 4, VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 5, и VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 6. В некоторых воплощениях анти-VEGF антитело содержит область VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и область VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8. В некоторых воплощениях анти-VEGF антитело представляет собой AVASTIN® (анти-VEGF антитело или rhuMAb VEGF). В некоторых воплощениях буфер представляет собой сукцинатный буфер, полиол представляет собой сахарозу, поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат (например полисорбат 80), и/или хелатирующий агент представляет собой EDTA (или эдетат).

В некоторых воплощениях водная композиция лекарственного вещества -анти-VEGF антитела, раскрытая в данном описании изобретения, может храниться в стерилизованных мешках из этиленвинилацетата (EVA) с поверхность контакта с продуктоми из этиленвинилацетатного мономатериала (EVAM). В некоторых воплощениях водная композиция лекарственного вещества - анти-VEGF антитела, раскрытая в данном описании изобретения, может храниться в контейнере из нержавеющей стали.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения, предложена водная композиция, содержащая или состоящая из: примерно 15 мг/мл, примерно 20 мг/мл, примерно 25 мг/мл, примерно 30 мг/мл, примерно 35 мг/мл, примерно 40 мг/мл, примерно 45 мг/мл, примерно 50 мг/мл, примерно 55 мг/мл, примерно 60 мг/мл, примерно 70 мг/мл, примерно 80 мг/мл, примерно 90 мг/мл, примерно 100 мг/мл, примерно 110 мг/мл, примерно 120 мг/мл, примерно 130 мг/мл, примерно 140 мг/мл, примерно 150 мг/мл или примерно 160 мг/мл антитела против фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) (например человеческого анти-VEGF антитела); от примерно 1 мМ до примерно 100 мМ буфера; от примерно 1 мг/мл до примерно 300 мг/мл полиола; от примерно 0,01 мг/мл до примерно 10 мг/мл поверхностно-активного вещества; от примерно 0,01 мг/мл до примерно 1,0 мг/мл хелатирующего агента; где композиция имеет рН от примерно 5,0 до примерно 6,0. В некоторых воплощениях антитело содержит CDR1 вариабельной области тяжелой цепи (VH), имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 1, VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 2, VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 3, или вариант SEQ ID NO: 3, и CDR1 вариабельной области легкой цепи (VL), имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 4, VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 5, и VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 6. В некоторых воплощениях антитело представляет собой анти-VEGF антитело (AVASTIN® или rhuMAB VEGF).

В некоторых воплощениях концентрация антитела в композиции составляет примерно 1-150 мг/мл, примерно 5-145 мг/мл, примерно 5-80 мг/мл, примерно 10-140 мг/мл, примерно 15-135 мг/мл, примерно 20-130 мг/мл, примерно 25-125 мг/мл, примерно 25-50 мг/мл, примерно 30-120 мг/мл, примерно 35-115 мг/мл, примерно 40-110 мг/мл, примерно 45-105 мг/мл, примерно 50-100 мг/мл, примерно 55-95 мг/мл, примерно 60-90 мг/мл, примерно 65-85 мг/мл, примерно 70-80 мг/мл или примерно 75 мг/мл. Например, в некоторых воплощениях концентрация антитела в композиции составляет менее или равна примерно 5 мг/мл, примерно 6 мг/мл, примерно 7 мг/мл, примерно 8 мг/мл, примерно 9 мг/мл, примерно 10 мг/мл, примерно 11 мг/мл, примерно 12 мг/мл, примерно 13 мг/мл, примерно 14 мг/мл, примерно 15 мг/мл, примерно 16 мг/мл, примерно 17 мг/мл, примерно 18 мг/мл, примерно 19 мг/мл, примерно 20 мг/мл, примерно 21 мг/мл, примерно 22 мг/мл, примерно 23 мг/мл, примерно 24 мг/мл, примерно 25 мг/мл, примерно 26 мг/мл, примерно 27 мг/мл, примерно 28 мг/мл, примерно 29 мг/мл, примерно 30 мг/мл, примерно 31 мг/мл, примерно 32 мг/мл, примерно 33 мг/мл, примерно 34 мг/мл, примерно 35 мг/мл, примерно 36 мг/мл, примерно 37 мг/мл, примерно 38 мг/мл, примерно 39 мг/мл, примерно 40 мг/мл, примерно 41 мг/мл, примерно 42 мг/мл, примерно 43 мг/мл, примерно 44 мг/мл, примерно 45 мг/мл, примерно 46 мг/мл, примерно 47 мг/мл, примерно 48 мг/мл, примерно 49 мг/мл, примерно 50 мг/мл, примерно 51 мг/мл, примерно 52 мг/мл, примерно 53 мг/мл, примерно 54 мг/мл, примерно 55 мг/мл, примерно 56 мг/мл, примерно 57 мг/мл, примерно 58 мг/мл, примерно 59 мг/мл, примерно 60 мг/мл, примерно 70 мг/мл, примерно 75 мг/мл, примерно 80 мг/мл, примерно 90 мг/мл, примерно 100 мг/мл, примерно 110 мг/мл, примерно 120 мг/мл, примерно 130 мг/мл, примерно 140 мг/мл или примерно 150 мг/мл. В некоторых воплощениях антитело представляет собой анти-VEGF антитело (например AVASTIN® или rhuMAB VEGF) в концентрации примерно 25 мг/мл.

В соответствии с еще одним аспектом настоящего изобретения, предложена водная композиция, содержащая или состоящая из: от примерно 25 мг/мл до примерно 150 мг/мл антитела против фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) или его антигенсвязывающего фрагмента; примерно 20 мМ буфера; от примерно 1 мг/мл до примерно 300 мг/мл полиола; от примерно 0,1 мг/мл до примерно 0,3 мг/мл поверхностно-активного вещества; от примерно 0,025 мг/мл до примерно 0,075 мг/мл хелатирующего агента; где композиция имеет рН от примерно 5,0 до примерно 6,0. В некоторых воплощениях антитело содержит CDR1 вариабельной области тяжелой цепи (VH), имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 1, VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 2, VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 3, или вариант SEQ ID NO: 3, и CDR1 вариабельной области легкой цепи (VL), имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 4, VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 5, и VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 6. В некоторых воплощениях анти-VEGF антитело содержит область VH, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и область VL, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8. В некоторых воплощениях анти-VEGF антитело представляет собой анти-VEGF антитело (AVASTIN® или rhuMAB VEGF). В некоторых воплощениях буфер представляет собой сукцинатный буфер, полиол представляет собой сахарозу, хелатирующий агент представляет собой EDTA (или эдетат), и/или поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80.

В некоторых воплощениях предложена водная композиция, содержащая или состоящая из: примерно 25 мг/мл или примерно 150 мг/мл антитела, которое специфически связывается с человеческим антителом против фактора роста эндотелия сосудов (VEGF); примерно 20 мМ сукцинатного буфера; примерно 85 мг/мл сахарозы; примерно 0,2 мг/мл полисорбата 80; от примерно 0,025 мг/мл до примерно 0,05 мг/мл EDTA (или эдетата); где композиция имеет рН примерно 5,5. В некоторых воплощениях антитело содержит CDR1 вариабельной области тяжелой цепи (VH), имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 1, VH CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 2, VH CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 3, или вариант SEQ ID NO: 3, и CDR1 вариабельной области легкой цепи (VL), имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 4, VL CDR2, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 5, и VL CDR3, имеющий аминокислотную последовательность, показанную в SEQ ID NO: 6. В некоторых воплощениях анти-VEGF антитело представляет собой AVASTIN® или rhuMAB VEGF.

В некоторых воплощениях описанная здесь композиция имеет срок годности по меньшей мере или более чем примерно 6 месяцев, 12 месяцев, 18 месяцев, 24 месяца, 30 месяцев, 36 месяцев, 42 месяца или 48 месяцев (например, при 5°C, 25°C или 40°C). Например, в некоторых воплощениях композиция по настоящему изобретению имеет срок годности по меньшей мере примерно 6 месяцев, 7 месяцев, 8 месяцев, 9 месяцев, 10 месяцев, 11 месяцев, 12 месяцев, 13 месяцев, 14 месяцев, 15 месяцев, 16 месяцев, 17 месяцев, 18 месяцев, 19 месяцев, 20 месяцев, 21 месяц, 22 месяца, 23 месяца, 24 месяца, 25 месяцев, 26 месяцев, 27 месяцев, 28 месяцев, 29 месяцев, 30 месяцев, 31 месяц, 32 месяца, 33 месяца, 34 месяца, 35 месяцев, 36 месяцев, 37 месяцев, 38 месяцев, 39 месяцев, 40 месяцев, 41 месяц, 42 месяца, 43 месяца, 44 месяца, 45 месяцев, 46 месяцев, 47 месяцев, 48 месяцев, 49 месяцев, 50 месяцев, 51 месяц, 52 месяца, 53 месяца, 54 месяца, 55 месяцев, 56 месяцев, 57 месяцев, 58 месяцев, 59 месяцев или 60 месяцев (например, при 5°C, 25°C или 40°C).

В некоторых воплощениях описанная в данном описании изобретения композиция, имеет менее чем примерно 5% HMMS при 40°C в течение вплоть до 1 месяца, 2 месяцев, 3 месяцев, 4 месяцев, 5 месяцев или 6 месяцев (например, при измерении посредством эксклюзионной HPLC). В некоторых воплощениях описанная здесь композиция имеет менее чем примерно 5% HMMS при 2-8°C в течение вплоть до 36 месяцев (например, как измерено посредством эксклюзионной HPLC). В некоторых воплощениях описанная здесь композиция имеет менее чем примерно 1% HMMS при 40°C вплоть до 1 месяца, 2 месяцев, 3 месяцев, 4 месяцев, 5 месяцев или 6 месяцев (например, при измерении посредством эксклюзионной HPLC). В некоторых воплощениях описанная здесь композиция имеет менее чем примерно 5% фрагментов при 2-8°C в течение вплоть до 36 месяцев (например, при измерении посредством восстанавливающего капиллярного гель-электрофореза).

Если не указано иное, приведенные здесь концентрации представляют собой концентрации в условиях окружающей среды, то есть при 25°C и атмосферном давлении.

Способы применения композиции анти-VEGF антитела

Композиции по настоящему изобретению имеют различные применения, включая, без ограничения ими, терапевтические методы лечения.

В одном аспекте изобретения предложен способ лечения заболеваний и патологических состояний. В частности, в изобретении предложен эффективный подход к лечению раковых заболеваний. Соответственно, в некоторых воплощениях предложен способ лечения или ингибирования рака у субъекта, нуждающегося в этом, включающий введение субъекту терапевтически эффективного количества описанной здесь композиции. В некоторых воплощениях предложено применение композиции по настоящему изобретению для изготовления лекарственного средства для лечения рака.

Рак, поддающийся лечению согласно настоящему изобретению, включает, например и без ограничения, карциному, лимфому, бластому, саркому, лейкоз или лимфоидные злокачественные новообразования. Более конкретные примеры таких раковых заболеваний включают плоскоклеточный рак, рак легкого (включая мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, аденокарциному легкого и плоскоклеточный рак легкого), рак брюшины, гепатоцеллюлярный рак, желудочный рак или рак желудка (включая рак желудочно-кишечного тракта), рак поджелудочной железы, глиобластомы, рак шейки матки, рак яичника, рак печени, рак мочевого пузыря, гепатому, рак молочной железы, рак толстой кишки, колоректальный рак, карциному эндометрия или матки, карциному слюнных желез, рак почек или почечный рак, рак печени, рак предстательной железы, рак влагалища, рак щитовидной железы, карциному печени и различные типы рака головы и шеи, а также В-клеточную лимфому (включая низкозлокачественную/фолликулярную неходжкинскую лимфому (NHL); мелкоклеточную лимфоцитарную (SL) NHL; среднезлокачественную/фолликулярную NHL; среднезлокачественную диффузную NHL; высокозлокачественную иммунобластную NHL; высокозлокачественную лимфобластную NHL; высокозлокачественную мелкоклеточную лимфому NHL с нерассеченными ядрами; генерализованную лимфаденопатию NHL; мантийноклеточную лимфому; СПИД-ассоциированную лимфому; и макроглобулинемию Вальденстрёма); хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL); острый лимфобластный лейкоз (ALL); волосатоклеточный лейкоз; хронический миелобластный лейкоз; и посттрансплантационное лимфопролиферативное расстройство (PTLD), а также аномальную сосудистую пролиферацию, ассоциированную с факоматозами, отеком (например, ассоциированную с опухолями головного мозга) и синдром Мейга. В некоторых воплощениях рак выбран из группы, состоящей из рака молочной железы, колоректального рака, рака прямой кишки, немелкоклеточного рака легкого, неходжкинской лимфомы (NHL), рака почек, рака предстательной железы, рака печени, рака поджелудочной железы, саркомы мягких тканей, саркомы Капоши, карциноидной карциномы, рака головы и шеи, меланомы, рака яичников, мезотелиомы и множественной миеломы. В некоторых воплощениях рак представляет собой колоректальный рак. Раковые состояния, поддающиеся лечению по изобретению включают метастатические раковые заболевания. Способ по настоящему изобретению особенно подходит для лечения васкуляризированных опухолей.

Любой химиотерапевтический агент, проявляющий противоопухолевую активность, может быть использован в соответствии с настоящим изобретением. Предпочтительно, химиотерапевтический агент выбран из группы, состоящей из алкилирующих агентов, антиметаболитов, аналогов фолиевой кислоты, аналогов пиримидина, аналогов пурина и соответствующих ингибиторов, алкалоидов барвинка, эпиподофиллотоксинов, антибиотиков, L-аспарагиназы, ингибитора топоизомеразы, интерферонов, координационных комплексов платины, антрацендионзамещенной мочевины, производных метилгидразина, адренокортикального супрессивного агента, адренокортикостероидов, прогестинов, эстрогенов, антиэстрогена, андрогенов, антиандрогена и аналога гонадотропин-рилизинг-гормона. Более предпочтительно, химиотерапевтический агент выбран из группы, состоящей из 5-фторурацила (5-ФУ), лейковорина (LV), иринотекана, оксалиплатина, капецитабина, паклитаксела и доцетаксела. Два или более химиотерапевтических агентов можно использовать в коктейле для введения в комбинации с введением анти-VEGF антитела. Одна предпочтительная комбинированная химиотерапия основана на фторурациле (FU), содержащем 5-FU и один или более других химиотерапевтических агентов. Подходящие схемы дозирования для комбинированной химиотерапии известны в данной области и описаны, например, в Saltz et al. (1999) Proc ASCO 18:233a и Douillard et al. (2000) Lancet 355:1041-7.

Соответственно, в некоторых воплощениях предложен способ лечения или ингибирования рака у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение этому субъекту терапевтически эффективного количества композиции, описанной в данном описании изобретения, где рак выбран из группы, состоящей из колоректального рака, рака прямой кишки, неплоскоклеточного немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), неходжкинской лимфомы (NHL), метастатического почечно-клеточного рака (mRCC), рака предстательной железы, рака печени, рака поджелудочной железы, саркомы мягких тканей, саркомы Капоши, карциноидной карциномы, рака головы и шеи, меланомы, рака яичника, мезотелиомы, глиобластомы, рака шейки матки, рака молочной железы и множественной миеломы. В некоторых воплощениях рак шейки матки является трудноизлечимым, рецидивирующим или метастатическим раком шейки матки. В некоторых воплощениях колоректальный рак является метастатическим колоректальным раком (MCRC)

В некоторых воплощениях композицию по настоящему изобретению можно вводить непосредственно в кровоток, в мышцу, в ткань, в жир или во внутренний орган субъекта. Подходящие средства для парентерального введения включают внутривенное, внутриглазное, интравитреальное, внутриартериальное, внутрибрюшинное, интратекальное, интравентрикулярное, внутриуретральное, внутригрудинное, внутричерепное, внутримышечное, внутрикостное, внутрикожное и подкожное введение. Подходящие устройства для парентерального введения включают игольные (включая микроиглу, микропроекторы, растворимые иглы и другие методы образования микропор) инжекторы, безыгольные инжекторы и методы инфузии. В некоторых воплощениях композицию по настоящему изобретению вводят субъекту внутривенно или подкожно.

В некоторых воплощениях схема введения композиции по настоящему изобретению включает введение дозы композиции один раз каждую неделю, один раз каждые две недели, один раз каждые три недели, один раз каждые четыре недели, один раз каждые пять недель, один раз каждые шесть недель, один раз каждые семь недель, один раз каждые восемь недель, один раз каждые девять недель, один раз каждые десять недель, один раз каждые пятнадцать недель, один раз каждые двадцать недель, один раз каждые двадцать пять недель или один раз каждые двадцать шесть недель. В некоторых воплощениях, композицию по настоящему изобретению вводят один раз каждый месяц, один раз каждые два месяца, один раз каждые три месяца, один раз каждые четыре месяца, один раз каждые пять месяцев или один раз каждые шесть месяцев.

Режимы дозировки могут зависеть от картины фармакокинетического затухания, которую хочет получить практикующий врач. Например, в некоторых воплощениях предполагается схема введения от одного до четырех раз в неделю. Можно использовать еще менее частое дозирование. В некоторых воплощениях дозу вводят один раз каждую 1 неделю, каждые 2 недели, каждые 3 недели, каждые 4 недели, каждые 5 недель, каждые 6 недель, каждые 7 недель, каждые 8 недель, каждые 9 недель, каждые 10 недель, каждые 15 недель, каждые 20 недель, каждые 25 недель или дольше. В некоторых воплощениях, дозу вводят один раз каждый 1 месяц, каждые 2 месяца, каждые 3 месяца, каждые 4 месяца, каждые 5 месяцев, каждые 6 месяцев или дольше. Результативность этой терапии легко контролируют с помощью обычных методов и анализов. Режим дозирования может меняться во времени.

В некоторых воплощениях дозу композиции по настоящему изобретению вводят в дозе 5 мг/кг в/в (внутривенно) каждые две недели. В некоторых воплощениях дозу композиции по настоящему изобретению вводят в дозе 10 мг/кг в/в каждые две недели. В некоторых воплощениях дозу композиции по настоящему изобретению вводят в дозе 7,5 мг/кг в/в каждые три недели. В некоторых воплощениях дозу композиции по настоящему изобретению вводят в дозе 7,5 мг/кг в/в каждые три недели с химиотерапией на основе фторпиримидина-иринотекана или фторпиримидина-оксалиплатина после прогрессирования в режиме первой линии химиотерапии на основе Avastin®. В некоторых воплощениях дозу композиции по настоящему изобретению вводят в дозе 15 мг/кг в/в каждые три недели.

Для цели настоящего изобретения подходящая доза лекарственного средства зависит от используемого антитела, типа и тяжести подлежащего лечению расстройства, вводится агент для профилактических или терапевтических целей, от предыдущей терапии, истории болезни пациента и его реакции на агент, а также мнения лечащего врача. Обычно клиницист вводит лекарственное средство вплоть до достижения дозы, обеспечивающей нужный результат. Дозы могут быть определены эмпирически.

Доза и/или частота введения может меняться во время курса лечения. Эмпирические соображения, такие как период полувыведения антитела, обычно влияют на определение дозы. Частота введения может быть определена и скорректирована во время курса лечения и, как правило, но не обязательно, основана на лечении, и/или подавлении, и/или улучшении, и/или замедлении одного или более симптомов аутоиммунного заболевания. Некоторым субъектам требуется более одной дозы. Частота введения может быть определена и скорректирована во время курса лечения. Например, и без ограничения, в случае повторных введений в течение нескольких суток или более, в зависимости от заболевания и его тяжести, лечение продолжают вплоть до желательного подавления симптомов или вплоть до достижения достаточных терапевтических уровней для снижения уровней глюкозы в крови.

Введение композиции по настоящему изобретению может быть непрерывным или периодическим в зависимости, например, от физиологического состояния реципиента, является цель введения терапевтической или профилактической, и других факторов, известных квалифицированным практикам. Введение композиции по настоящему изобретению может быть по существу непрерывным в течение предварительно выбранного периода времени или может состоять из серии вводимых с интервалами доз.

Предпочтительно, введение дозы представляет собой парентеральное введение, предпочтительно выбранное из внутривенного, внутриглазного, интравитреального, внутриартериального, внутрибрюшинного, интратекального, интравентрикулярного, внутриуретрального, внутригрудинного, внутричерепного, внутримышечного, внутрикостного, внутрикожного и подкожного введения. Предпочтительно, композиция находится в стандартной дозированной стерильной форме для парентерального введения (например для внутривенного введения).

Следующие примеры представлены только в иллюстративных целях и не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения каким либо образом. Действительно, различные модификации изобретения, в дополнение к тем, которые показаны и описаны здесь, станут очевидными специалистам в данной области техники из предшествующего описания и подпадают в объем прилагаемой формулы изобретения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. Исследование стабильности при разработке композиции антитела с сукцинат-сахароза-EDTA-полисорбатом 80 (SSEP), содержащей анти-VEGF антитело

Для оценки выбранной композиции анти-VEGF-антитела было проведено исследование стабильности, включающее анти-VEGF-антитело в композиции SSEP (таблица 2А) и анти-VEGF-антитело в имеющейся в продаже композиции (таблица 2В). Лекарственное вещество - анти-VEGF антитело из опытной партии было включено в состав композиции с получением анти-VEGF антитела в композиции SSEP и анти-VEGF антитела в имеющейся в продаже композиции. Эти данные также сравнивали с данными по исследованию стабильности на репрезентативной партии лицензированного продукта анти-VEGF антитела ("AVASTIN®) для предварительной оценки композиций. В этом примере используемое анти-VEGF антитело имеет вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8.

Скрининговый анализ рН-буфера проводили для оценки влияния буферной системы и рН в диапазоне от 5,2 до 6,0 на молекулу в отсутствие других стабилизирующих эксципиентов. Исследования стабильности при разработке композиции выполняли для сравнения анти-VEGF антитела в имеющейся в продаже композиции (фосфат, рН 6.2) с буферными системами с более низкими значениями рН (рН 5,5 и 5,8) для обеспечения оптимальной стабильности лекарственного продукта. Затем в образцах анализировали показатели качества, которые обычно используют для мониторинга за разрушением продукта, с помощью эксклюзионной HPLC. Анти-VEGF антитело разбавляли до 25 мг/мл, включали в состав либо имеющейся в продаже композиции, либо композиции SSEP, помещали в стеклянные флаконы, герметично закрывали пробками с фторполимерным покрытием, укупоривали алюминиевыми обжимными колпачками и хранили в вертикальном положении при 5°C и 25°C в течение 22 недель или при 40°C в течение 12 недель.

Результаты SE-HPLC для хранения при 25°C представлены в Таблице 3 и на Фиг. 1. Как видно из Таблицы 3 и Фиг. 1, значительно меньшее разрушение наблюдалась в композиции SSEP по сравнению с имеющейся в продаже композицией после хранения анти-VEGF-антитела в течение 4, 8, 12 и 22 недель. Эти результаты показывают, что анти-VEGF антитело в композиции SSEP (рН 5,5) является более стабильным, чем анти-VEGF антитело в имеющейся в продаже композиции (рН 6,2), как в режиме реального времени, так и в условиях ускоренного старения.

Пример 2. Исследование устойчивости стабильности антительной композиции сукцинат-сахароза-EDTA-полисорбат 80 (SSEP). содержащей анти-VEGF антитело

При исследовании устойчивости стабильности композиции анти-VEGF антитела в композиции SSEP (целевые эксципиенты) и анти-VEGF антитело, полученное с высокими или низкими уровнями эксципиентов (диапазон ±25%, определенный для сукцината, сахарозы и ЕРТА, и диапазон ±50% для полисорбата-80) хранили при 5 и 30°C в течение 12 месяцев и 6 месяцев соответственно. Затем образцы анализировали, используя аналитические методы, выбранные для мониторинга биохимической стабильности. В данном примере используемое анти-VEGF антитело имеет вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ IP NO: 7 и вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ IP NO: 8. Результаты наиболее подходящего для определения стабильности метода (эксклюзионная HPLC) показаны ниже в Таблице 4 и на Фиг. 2.

Данные, представленные в Таблице 4 и на Фиг. 2, демонстрируют, что анти-VEGF антитело является стабильным как в режиме реального времени, так и в условиях ускоренного старения в композиции SSEP. Кроме того, образцы, содержащие высокие уровни эксципиентов или низкие уровни эксципиентов, сопоставимы с образцами с заданными уровнями эксципиентов (контрольная композиция), демонстрирующими устойчивость композиции.

Пример 3. Изучение стабильности анти-VEGF антитела в условиях ускоренного разрушения в антительной композиции сукцинат-сахароза-EDTA-полисорбат 80 (SSEP) по сравнению с имеющейся в продаже композицией антитела.

Дополнительное исследование стабильности при разработке композиции анти-VEGF антитела в композиции SSEP (5 партий) и анти-VEGF антитела, приготовленного в имеющейся в продаже композиции (1 партия в растворе натрий фосфат-трегалоза-полисорбат 20, рН 6,2) выполняли при 40°C в течение 12 недель. Затем в образцах определяли показатели качества, которые обычно используются для мониторинга разрушения продукта с использованием SE-HPLC, iCE (капиллярный электрофорез с визуализацией) и rCGE. В этом примере используемое анти-VEGF антитело имеет вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8. Результаты обобщены в Таблицах 5-8 ниже.

Значительно меньшее разрушение (измеренное как % HMMS) наблюдалось в композиции SSEP по сравнению с имеющейся в продаже композицией через 4, 6, 8 и 12 недель хранения (Таблица 5).

Меньшее разрушение (измеренное как % фрагментов) наблюдали в композиции SSEP по сравнению с имеющейся в продаже композицией через 4, 6, 8 и 12 недель хранения (Таблица 6).

В Таблицах 7-8 ниже обобщены данные о стабильности анти-VEGF mAb-SSEP (анти-VEGF антитело в композиции SSEP) и анти-VEGF mAb имеющейся в продаже (анти-VEGF антитело в имеющейся в продаже композиции) после хранения в течение 1 месяца при 40°C. Таблицы стабильности показывают изменение от Т=0. В Таблицах 7-8 a = пониженное количество HMMS, наблюдалось в партиях анти-VEGF mAb, благодаря композиции SSEP; b = процентная разница, рассчитанная для клеточного анализа. CGE = капиллярный гель-электрофорез, iCE = капиллярный электрофорез с визуализацией, HMMS = высокомолекулярные компоненты. В этом примере используемые анти-VEGF-антитела имеют вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8.

Эти результаты показывают, что композиция SSEP обеспечивает повышенную стабильность лекарственного продукта на основе анти-VEGF-антитела по сравнению с имеющейся в продаже композицией. Данные показывают, что анти-VEGF антительный продукт (анти-VEGF mAb) является более стабильным в композиции SSEP по сравнению с имеющейся в продаже композицией при хранении при повышенных температурах, так как наблюдалось меньшее образование HMMS и фрагментов.

Пример 4. Исследование долговременной стабильности композиции антитела с сукцинат-сахароза-EDTA-Полисорбатом 80 (SSEP), содержащей анти-VEGF антитело, для установления срока годности лекарственного вещества и лекарственного продукта.

Дополнительное исследование стабильности анти-VEGF антитела в композиции SSEP было выполнено в масштабе лаборатории для установления срока годности лекарственного вещества и лекарственного продукта.

Лекарственное вещество - анти-VEGF антитело (партия 00706253-007) в концентрации 120 мг/мл хранили в стерилизованных этиленвинилацетатных пакетах с поверхностью контакта с продуктом, выполненной из этиленвинилацетатного мономатериала (EVAM), в течение 36 месяцев при -20°C (рекомендуемое хранение) и -40°C (резервная/альтернативная температура) и 3 месяца при 5°C. Образцы оценивали с помощью следующих аналитических методов: внешний вид (прозрачность, окраска, визуальный контроль), рН, УФ-спектроскопия, iCE, SE-HPLC, CGE (невосстанавливающий) и клеточный анализ. Данные, подтверждающие стабильность вплоть до 36 месяцев для образцов, хранящихся при -20°C и -40°C, показывают отсутствие существенных различий с исходными данными. Через 3 месяца хранения при 5°C опытные образцы не показывают существенных различий с исходными данными. В этом примере используемое анти-VEGF антитело имеет вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8. Результаты наиболее показательного для определения стабильности метода (SE-HPLC) показаны ниже в Таблице 9.

NS = не запланировано

Лекарственный продукт - анти-VEGF антитело (партия 00706596-003) в концентрации 25 мг/мл хранили перевернутым в стеклянных флаконах, которые были герметично закрыты пробками с фторполимерным покрытие и укупорены алюминиевыми обжимными колпачками, в течение 36 месяцев при 5°C и 12 месяцев при 25°C. Образцы оценивали с помощью тех же аналитических методов, которые использовали для лекарственного вещества, с дополнительным методом - HIAC (система для подсчета числа частиц в жидкости) для небольшого объема для анализа невидимых невооруженным глазом частиц. Данные, подтверждающие стабильность вплоть до 36 месяцев для образцов, хранящихся при 5°C, не показа.n существенных различий по сравнению с исходными данными. Через 3 месяца опытные образцы, хранящиеся при 25°C, не показывают существенных различий по сравнению с исходными данными. Результаты наиболее показательного для определения стабильности метода (SE-HPLC) показаны ниже в Таблице 10.

NS = не запланировано.

Результаты этого исследования анти-VEGF антитела в композиции SSEP использовали для установления срока годности, составляющего по меньшей мере 36 месяцев при -20°C или -40°C для лекарственного вещества с концентрацией 120 мг/мл, и по меньшей мере 36 месяцев при 5°C для лекарственного продукта с концентрацией 25 мг/мл.

Пример 5. Исследование стабильности водной композиции гистидин-сахароза-EDTA-полисорбат 80 (HSEP), содержащей анти-VEGF антитело

Этот пример иллюстрирует стабильность лекарственного продукта на основе анти-VEGF антитела в композиции HSEP.

Водная композиция HSEP была разработана для анти-VEGF антитела в концентрации приблизительно 25 мг/мл. В частности, композиция HSEP, используемая в данном примере, включала 8,5% сахарозы, 0,05 мг/мл EDTA, 0,02% полисорбата 80 в 20 мМ гистидина при рН 5,5. Концентрацию белка оценивали при 25 и 100 мг/мл (для анти-VEGF антитела).

Анти-VEGF антитело готовили в 20 мМ гистидине (рН 5,5 и 5,8) и 20 мМ сукцинате (рН 5,5 и 5,8) с постоянными количествами 8,5% сахарозы, 0,05 мг/мл EDTA, 0,02% Полисорбата 80, и сравнивали с анти-VEGF антителом в имеющейся в продаже композиции (фосфат, трегалоза, полисорбат 20, рН 6,2). Лекарственное вещество (100 мг/мл) хранили в EVA пакетах в течение 8 недель при -40°C, -20°C и 5°C, и лекарственный продукт (25 мг/мл) хранили в стеклянных флаконах I типа в течение 22 недель при 2-8°C и 25°C, и 12 недель при 40°C. В этом примере используемое анти-VEGF антитело имеет вариабельную область тяжелой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и вариабельную область легкой цепи, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8. Данные SE-HPLC по % HMMS после хранения лекарственного продукта на основе анти-VEGF антитела (25 мг/мл) при 40°C обобщены ниже в Таблице 11.

Эти данные показывают значительное увеличение % HMMS для анти-VEGF антитела в имеющейся в продаже композиции (фосфат, рН 6,2) (Таблица 11 и Фиг. 3). Композиции на основе сукцината и гистидина имеют значительно более низкую скорость образования HMMS, с сукцинатом-pH 5,5 в качестве оптимальной композиции, за которой следуют гистидин-pH 5,5, сукцинат-pH 5,8 и гистидин-pH 5,8, соответственно.

Эти результаты показывают, что анти-VEGF-антитело значительно более стабильно в сукцинатных и гистидиновых композициях, имеющих рН 5,5 или 5,8, чем в имеющейся в продаже композиции.

1. Стабильная фармацевтическая водная композиция, содержащая:

от 25 мг/мл до 120 мг/мл антитела против фактора роста эндотелия сосудов (VEGF);

от 15 мМ до 25 мМ гистидинового или сукцинатного буфера;

от 60 до 110 мг/мл сахарозы;

от 0,1 до 0,3 мг/мл полисорбата 80;

от 0,035 до 0,065 мг/мл EDTA (этилендиаминтетрауксусная кислота);

где антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; и

где композиция имеет рН от 5,5 до 5,8.

2. Водная композиция по п. 1, где концентрация антитела составляет от 25 мг/мл до примерно 30 мг/мл, от 25 мг/мл до примерно 27,5 мг/мл или от примерно 90 мг/мл до 120 мг/мл.

3. Стабильная фармацевтическая водная композиция, содержащая:

примерно 25 мг/мл антитела против фактора роста эндотелия сосудов (VEGF);

примерно 20 мМ гистидинового или сукцинатного буфера;

примерно 85 мг/мл сахарозы;

примерно 0,2 мг/мл полисорбата 80;

примерно 0,05 мг/мл EDTA;

где антитело содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8; и

где композиция имеет рН примерно 5,5 или 5,8.

4. Водная композиция по любому из пп. 1-3, которая имеет срок годности по меньшей мере примерно 36 месяцев.

5. Способ лечения или ингибирования рака у нуждающегося в этом субъекта, включающий введение этому субъекту терапевтически эффективного количества водной композиции по любому из пп. 1-4.

6. Способ по п. 5, где рак выбран из группы, состоящей из колоректального рака, рака прямой кишки, неплоскоклеточного немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), неходжкинской лимфомы (NHL), метастатического почечно-клеточного рака (mRCC), рака предстательной железы, рака печени, рака поджелудочной железы, саркомы мягких тканей, саркомы Капоши, карциноидной карциномы, рака головы и шеи, меланомы, рака яичника, мезотелиомы, глиобластомы, рака шейки матки, рака молочной железы и множественной миеломы.

7. Способ по п. 5 или 6, где композицию вводят субъекту подкожно или внутривенно.

8. Способ по любому из пп. 5-7, где субъект представляет собой человека.

9. Применение водной композиции по любому из пп. 1-4 для изготовления лекарственного средства для лечения рака у субъекта.

10. Применение по п. 9, где рак выбран из группы, состоящей из колоректального рака, рака прямой кишки, неплоскоклеточного немелкоклеточного рака легкого (NSCLC), неходжкинской лимфомы (NHL), метастатического почечно-клеточного рака (mRCC), рака предстательной железы, рака печени, рака поджелудочной железы, саркомы мягких тканей, саркомы Капоши, карциноидной карциномы, рака головы и шеи, меланомы, рака яичников, мезотелиомы, глиобластомы, рака шейки матки, рака молочной железы и множественной миеломы.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к эпитопным пептидам, полученным из CDCA1, со способностью индуцировать цитотоксические T-клетки. Настоящее изобретение дополнительно относится к полинуклеотидам, кодирующим пептиды, антигенпрезентирующим клеткам, презентирующим пептиды, и цитотоксическим T-клеткам, нацеленным на пептиды, а также к способам индуцирования антигенпрезентирующих клеток или ЦТЛ.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для оценки поведения парамагнитных контрастных препаратов в печени и других органах лабораторных животных.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к белкам-агонистам рецептора TRAIL, и может быть использовано в медицине для противоопухолевого лечения.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к фармацевтической композиции для лечения опухолевых заболеваний в андрологии, гинекологии и проктологии.

Изобретение относится к вариантам улучшенного нового способа получения соединения 7Н-пирроло[2,3-d]пиримидина формулы 1 и его ветеринарно приемлемой соли. Соединение формулы 1 является ингибитором JAK и может найти применение при лечении заболеваний, связанных с активностью JAK, таких как рак, астма и др.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для лечения множественной миеломы у субъекта. Для этого субъекту вводят терапевтически эффективное количество антитела к CD38 и терапевтически эффективное количество соединения Леналидомида.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к гетероциклическому соединению формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, где R1 представляет собой C1-7-алкил или C1-7-алкокси-C1-7-алкил; R2 выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, C1-7-алкоксикарбонил-C1-7-алкила и C1-7-алкоксикарбонил-C2-7-алкенила; R3 представляет собой водород; R4 выбран из группы, состоящей из -O-(CH2)m-NHR5 и -O-(CO)-(CH2)n-NHR6, где m представляет собой 2, n представляет собой 1, R5 представляет собой водород и R6 представляет собой водород.

Группа изобретений относится к медицине и касается линкер-активного агента для получения конъюгата антитело-лекарственное средство, содержащего соединение формулы I или его фармацевтически приемлемую соль.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к фармацевтической композиции для лечения опухолей. Фармацевтическая композиция для лечения опухолей, содержащая: (а) по меньшей мере 2х109 БОЕ/мл парвовируса H1 (H-1PV) или родственного парвовируса грызунов, выбранного из группы, состоящей из вируса LuIII, мелкого вируса мышей (MMV), парвовируса мышей (MPV), мелкого вируса крыс (RMV), парвовируса крыс или вируса крыс (RV), и (б) фармацевтически приемлемый носитель, содержащий 40 – 50% йодиксанола, вес/объем, 0,7 – 0,9 ммоль CaCl2 x 2 H2O, 50 – 60 ммоль NaCl, 0,9 – 1,2 ммоль KCl, 0,7 – 0,95 мг/мл трометамина и 0,05 – 0,15 мг/мл натрия кальция эдетата.

Изобретение относится к соединению структурной Формулы II или его фармацевтически приемлемой соли. В Формуле II два из Х2, Х4 и Х5 представляют собой N; и один из Х2, Х4 и Х5 представляет собой О; или один из Х2, Х4 и Х5 представляет собой N; один из Х2, Х4 и Х5 представляет собой О; и один из Х2, Х4 и Х5 представляет собой СН; Z1 и Z2 независимо выбраны из группы, состоящей из N, NR1, С=O и CR1; по меньшей мере один из Z1 и Z2 представляет собой CR1; Z3 выбран из группы, состоящей из N, и CR12; значения остальных радикалов указаны в формуле изобретения.

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и предназначено для профилактики и/или лечения инфекционных конъюнктивитов. Офтальмологический препарат в форме глазных капель для профилактики и/или лечения инфекционных конъюнктивитов, вызванных бактериями и/или вирусами, содержит активный компонент, фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества и воду для инъекций.

Изобретение относится к ветеринарной медицине и касается средства для лечения отитов бактериального происхождения у мелких животных. Комплексный препарат в форме ушных капель содержит, масс.
Изобретение относится к медицине, а именно к реаниматологии, хирургии, терапии, и может быть использовано в качестве солевого электролитного раствора (СЭР) для проведения энтеральных инфузий в реанимационных, хирургических, травматологических, ожоговых, неврологических и терапевтических отделениях.

Группа изобретений относится к области ветеринарии и представляет собой препарат для лечения гипофункции яичников у коров, включающий в качестве компонентов Apis mellifelica, Pulsatilla pratensis, Sulfur, Sepia, Lachesis, Creazotum, отличающийся тем, что дополнительно содержит Aristolochia, причем компоненты в препарате находятся в определенном соотношении, в мас.%, а также к способу лечения гипофункции яичников у коров, включающему введение вышеуказанного препарата подкожно или внутримышечно в количестве 5 мл 3-5 раз с интервалом в 3-5 дней.

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к ветеринарии, и касается лечения протозойных инфекций у животных. Для этого вводят комбинацию толтразурила и комплекса железа.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии. Предложено применение 2-[3-(2-хлорэтил)-3-нитрозоуреидо]-1,3-пропандиола для лечения HER2-положительных опухолей в эксперименте в дозе 15-20 мг/кг парентерально.

Группа изобретений относится к области фармацевтики, а именно к водной композиции, предназначенной для релаксации скелетных мышц, содержащей 1-100 мг/мл галогенида рокурония и эксципиент, выбранный из D-глюконовой кислоты, внутримолекулярного лактона D-глюконовой кислоты или их смеси; при этом pH композиции находится в пределах 2,0-7,0; и осмоляльность композиции находится в пределах 270-340 мОсм/кг.
Группа изобретений относится к фармакологии и медицине. Предложено применение фармацевтической композиции, включающей активный фармакологический компонент - 1',3'-динитроглицериновый эфир 11(S),15(S)-дигидрокси-9-кето-13E-простаеновой кислоты (простанит), для лечения и/или профилактики хронических облитерирующих заболеваний периферических сосудов и способ лечения указанных заболеваний с её использованием.

Настоящее изобретение относится к способу лечения и профилактики паразитозов птиц с оптимизацией их обмена веществ и неспецифической резистентности, включающему применение комбинированного препарата, содержащего активно действующие вещества и вспомогательные компоненты - антиоксидант, консервант, базовый растворитель, сорастворитель, эмульгатор при следующем содержании компонентов, в мас.%: ивермектин - 0,2-2,0, бутафосфан - 5,0-35,0, вспомогательные компоненты: респланта Жожоба - 5,0-10,0, бензиловый спирт - 1,0-2,0, диэтиленгликоля моноэтиловый эфир - 20,0-30,0, твин-80 - 19,0-20,0, вода дистиллированная – остальное, и который применяют перорально в виде раствора групповым способом с водой для поения, в суточной дозе 400 мкг ивермектина на 1 кг массы птицы.

Настоящее изобретение относится к водной фармацевтической композиции ибупрофена и трамадола для офтальмологического применения. Композиция содержит ибупрофен в форме соли с аргинином в концентрации от 0,05 до 0,2% масс./об., трамадол или его фармацевтически приемлемую соль в концентрации от 0,075 до 1,5% масс./об.

Изобретение относится к способу получения олигонуклеотидного комплекса для доставки в клетки млекопитающих и может быть использовано в молекулярной медицине. Предложенный способ включает смешивание раствора соответствующего олигонуклеотида с раствором носителя в определенном соотношении и отличается тем, что водный раствор олигонуклеотида с концентрацией 2,0-25 мкг/мл смешивают с водным раствором декстрана с мол.

Настоящее изобретение относится к области фармацевтических композиций антител. В частности, настоящее изобретение относится к стабильной жидкой композиции антитела и к ее фармацевтическому препарату и применению. Данное изобретение проиллюстрировано на примере водной композиции антитела против факторов роста эндотелия сосудов. 4 н. и 6 з.п. ф-лы, 3 ил., 11 табл., 5 пр.

Наверх