Способ определения чувствительности тромбоцитов к ацетилсалициловой кислоте



Способ определения чувствительности тромбоцитов к ацетилсалициловой кислоте
Способ определения чувствительности тромбоцитов к ацетилсалициловой кислоте

Владельцы патента RU 2699569:

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ "КРАСНОЯРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ ПРОФЕССОРА В.Ф. ВОЙНО-ЯСЕНЕЦКОГО МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ" (RU)

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу определения чувствительности тромбоцитов. Способ определения чувствительности тромбоцитов к ацетилсалициловой кислоте (АСК), включающий забор крови, при этом исследуют АДФ-индуцированную люцигенин-зависимую хемилюминесценцию тромбоцитов; по значению площади (S) под кривой хемилюминесценции определяют резистентность тромбоцитов к АСК: S<360000 у.ед. указывает на резистентность тромбоцитов к АСК, если же S≥360000, то говорят о чувствительности тромбоцитов к АСК. Предложенное изобретение позволяет эффективно осуществить диагностику резистентности к АСК у пациента. 1 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для диагностики чувствительности тромбоцитов к действию ацетилсалициловой кислоты (АСК) у больных с ишемической болезнью сердца (ИБС).

Известно, что резистентность к АСК при ИБС встречается в 8-48% случаев [Neubauer Н., Kaiser A.F., Endres H.G. et al. Tailored antiplatelet therapy can overcome clopidogrel and aspirin resistance - the BOchum CLopidogrel and Aspirin Plan (BOCLA-Plan) to improve antiplatelet therapy // BMC Medicine. - 2011. - Vol. 9, №3. - P. 1-12]. Такая вариабельность данных связана, в первую очередь, с отсутствием стандартной общепринятой методики определения чувствительности тромбоцитов к АСК.

Существуют несколько прототипов способа определения резистентности к АСК с помощью агрегометрии. Известен оптический метод агрегометрии с коллагеном, где за пороговый уровень принимают 70%, с АДФ пороговый уровень 70%, при агрегации с арахидоновой кислотой - 20%, при агрегации в цельной крови импедансным методом - 18 Ом [Голухова Е.З., Рябинина М.Н. Современные аспекты антиагрегантной терапии // Креативная кардиология. - 2013. - Т.7, №1. - С. 46-58; Demen't'eva I.I., Charnaya М.А., Morozov Yu.A. Hemostasis system at surgery on heart and mainvessels. Disorders, prophylaxis, correction // Moscow: GEOTAR-Media. - 2009. - P. 360-372]. Существенный недостаток этого метода кроется в невозможности определения резистентности к АСК до начала терапии.

Известен способ диагностики резистентности, который заключается в исследовании АДФ - индуцированной и АСК-зависимой агрегации тромбоцитов с определением коэфициента ингибирования агрегации (КИА): величина КИА<24% свидетельствует о резистентности к АСК, при КИА 24% - о чувствительности к АСК [Способ диагностики резистентности к ацетилсалициловой кислоте [Электронный ресурс] : пат. 2413953 Рос. Федерация : МПК G01N 33/86 / Гринштейн Ю.И., Филоненко И.В., Савченко А.А. [и др.]; заявитель и патентообладатель Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации". - 2009131242/15; заявл. 17.08.2009; опубл. 10.03.2011, Бюл. №7]. Этот способ является длительным в исполнении и трудоемким.

Известен способ количественного анализа содержания в моче одного из метаболитов тромбоксана А2 - 11-дегидротромбоксана В2 (11-ДТхВ2). Наблюдается положительная корреляционная зависимость между концентрацией этого метаболита в моче и частотой сердечно-сосудистых событий на фоне приема аспирина [Eikelboom J., Hirsh J., Weitz J.I. et al. Aspirin-resistant thromboxane biosynthesis and the risk of myocardial infarction, stroke, or cardiovascular death in patients at high risk for cardiovascular events // Circulation Journal. - 2002. - Vol.14, №105. - P. 1650-1655.]. Минусом такого определения является дороговизна, необходимость наличия специального оборудования, а также то, что о резистентности судят не по активности самих клеток, а лишь по продуктам их метаболизма.

Также известно, что у больных с ИБС резистентность к АСК диагностируют с помощью измерения активности до начала терапии НАД- и НАДФ-зависимых дегидрогеназ в тромбоцитах. При этом вычисляется коэффициент кофакторной активности (ККОТ). При ККОТ>0,3 говорят о резистентности [Способ диагностики аспиринорезистентности у больных ишемической болезнью сердца [Электронный ресурс] : пат. 2348041 Рос. Федерация : МПК G01N 33/68 / Савченко А.А., Гринштейн Ю.И., Савченко Е.А. [и др.]; заявитель и патентообладатель Государственное учреждение Научно-исследовательский институт медицинских проблем Севера Сибирского отделения Российской академии медицинских наук. - 2007129257/15; заявл. 30.07.2007; опубл. 27.02.2009, Бюл. №6]. Такой метод дает возможность определять резистентность тромбоцитов к АСК до приема препарата, но он достаточно трудоемкий, требует долгой и кропотливой пробоподготовки для исследования ферментов.

Известен способ импедансного определения агрегации с коллагеном и с одновременным измерением динамики высвобождения АТФ из гранул тромбоцитов люминесцентным методом при инкубации с АСК. Далее, на основании полученных данных рассчитывается индекс резистентности [Способ определения резистентности тромбоцитов к ацетилсалициловой кислоте [Электронный ресурс] : пат. 2538219 Рос. Федерация: МПК G01N 33/86, G01N 33/15 / Ольховский И.А., Столяр М.А.; заявитель и патентообладатель Федеральное государственное бюджетное учреждение "Гематологический научный центр" Министерства здравоохранения Российской Федерации, Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Красноярский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук", Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Институт физики им. Л.В. Киренского Сибирского отделения Российской академии наук". - 2013116658/15; заявл. 11.04.2013; опубл. 10.01.2015, Бюл. №1]. Диагностическая ценность такого способа определения резистентности тромбоцитов к АСК ограничена ввиду его длительности и сложности выполнения.

Так как непосредственным компонентом сгустков являются тромбоциты, то их качественная составляющая влияет на процесс тромбообразования. Хемилюминесценция клеток связана с их способностью к синтезу активных форм кислорода при изменении функциональной активности и поэтому использование данных свойств тромбоцитов является обоснованным при рассмотрении вопроса резистентности к проводимой терапии.

Принцип метода заключается в том, что у больных ИБС до начала приема АСК исследуют АДФ-индуцированную люцигенин-зависимую хемилюминесценцию тромбоцитов. По значению площади (S) под кривой хемилюминесценции определяют чувствительность тромбоцитов к АСК: S<360000 у.ед. указывает на недостаточный ответ тромбоцитов, если же S≥360000, то говорят о чувствительности к АСК. Способ позволяет достоверно осуществить диагностику резистентности к АСК у пациента до проведения лечения, что помогает подобрать более адекватное и обоснованное лечение для больных с высоким риском тромботических осложнений.

Задачей изобретения является определение чувствительности тромбоцитов к АСК для повышения эффективности вторичной профилактики сердечно-сосудистых заболеваний у больных ИБС, снижение у них риска развития неблагоприятных коронарных событий и определение тактики лечения на этапе до приема препарата.

Задачу решают путем исследования до начала приема АСК АДФ-индуцированной люцигенин-зависимой хемилюминесценции тромбоцитов. Площадь (S) под кривой хемилюминесценции меньше 360000 у.ед. указывает на на отсутствие чувствительности тромбоцитов к АСК, при S≥360000 наблюдается чувствительность тромбоцитов к АСК..

Способ выполняют следующим образом. Из 4,5 мл стабилизированной 3,2% цитратом натрия крови выделяют по методу поэтапного центрифугирования с буферами, предложенному Савченко Е.А. с соавт. (2006) [Савченко Е.А., Савченко А.А., Герасимчук А.Н., Грищенко Д.А. Оценка метаболического статуса тромбоцитов в норме и при ишемической болезни сердца. // Клиническая лабораторная диагностика. - 2006. - №5. - С. 33-36]. Для дальнейших исследований забирают супернатант. Хемилюминесценцию тромбоцитов измеряют на биохемилюминисцентном анализаторе БЛМ-3607 (ООО «МедБиоТех», Россия) в течение 90 минут. Для этого к 200 мкл тромбоцитарного супернатанта (содержание тромбоцитов 108 в мкл) добавляют 200 мкл буфера №2 (0,13 М NaCl, 0,02 М Трис-HCl буфера, 0,03 М ЭДТА, 0,015 М глюкозы, рН=7,4), 40 мкл АДФ 0,1 М и 50 мкл люцигенина в концентрации 50 мкг/мл. Затем измеряют площадь (S) под кривой хемилюминесценции.

Пограничное значение S=360000 у.ед. было получено опытным путем сопоставления результатов группы чувствительных и резистентных к АСК пациентов, у которых наблюдались статистически значимые различия по показателю S. Резистентность и чувствительность к АСК подтверждали измерением агрегации тромбоцитов с арахидоновой кислотой (АК) до и после инкубации с АСК до начала лечения антитромбоцитарными препаратами и на 8-10 сутки лечения. Чувствительность тромбоцитов к АСК определяли при уровне агрегации с АК (и/или после инкубации с АСК) ниже 20%, в противоположном случае диагностировали резистентность к АСК.

В таблице 1 представлены результаты обследования 34 больных ИБС кардиохирургического отделения Федерального центра сердечно-сосудистой хирургии г. Красноярска. Из них методом оптической агрегации тромбоцитов с арахидоновой кислотой было выявлено 12 резистентных к АСК. До начала лечения АСК был получен результат значения S.

Исходя из полученных данных можно полагать, что резистентные тромбоциты обладают меньшей АДФ-индуцированной люцигенин-зависимой хемилюминесцентной активностью по сравнению с чувствительными, что сказывается на площади под кривой хемилюминесценции.

Из всех 12 резистентных к АСК пациентов оптическим методом с арахидоновой кислотой при инкубации с АСК только 8 были выявлены на этапе до лечения (№2, 9, 14, 21, 26, 30, 31, 34), а остальные 4 (№6, 7, 17, 19) уже на фоне терапии препаратом. При этом хемилюминесцентный анализ показал резистентность у 11 больных еще до приема ими аспирина. Такие данные указывают на большую достоверность и информативность предлагаемого способа, ведь он позволяет выявить до назначения лечения еще и тех резистентных к АСК больных ИБС, которые проявляют данное свойство лишь при приеме лекарственного средства, а в пробирочной пробе показывают себя чувствительными к АСК. Лишь один пациент, отнесенный к резистентным по оптическому методу, по результатам хемилюминесценции был помещен в группу чувствительных.

Таким образом, чувствительность предлагаемого способа равна 91%, а специфичность 100%.

Клинический пример 1. Больной Ш., 60 лет (данные №1 в таблице). Находился на стационарном лечении в кардиохирургическом отделении Федерального центра сердечно-сосудистой хирургии с 25.04.2017 по 05.05.2017 с диагнозом: ИБС, стабильная стенокардия напряжения 3 функционального класса. При поступлении пациента в стационар было выполнено исследование АДФ-стимулированной люцигенин-зависимой хемилюминесценции тромбоцитов и вычислена площадь под кривой хемилюминесценции (S=2039000), что отражает чувствительность тромбоцитов к АСК. Также была проведена оптическая агрегация тромбоцитов с арахидоновой кислотой и с арахидоновой кислотой при инкубации с АСК. Агрегация с арахидоновой кислотой равнялась 61%, а при инкубации с АСК равнялась 3%, что соответствует чувствительности тромбоцитов.

Клинический пример 2. Больной Г., 62 года (данные №2 в таблице). Находился на стационарном лечении в кардиохирургическом отделении Федерального центра сердечно-сосудистой хирургии с 15.05.2017 по 26.05.2017 с диагнозом: ИБС, стабильная стенокардия напряжения 2 функционального класса, постинфарктный кардиосклероз. При поступлении пациента в стационар было выполнено исследование АДФ-стимулированной люцигенин-зависимой хемилюминесценции тромбоцитов и вычислена площадь под кривой хемилюминесценции (S=202900), что отражает резистентность тромбоцитов к АСК. Также была проведена оптическая агрегация тромбоцитов с арахидоновой кислотой и с арахидоновой кислотой при инкубации с АСК. Агрегация с арахидоновой кислотой равнялась 73%, а при инкубации с АСК равнялась 62%, что соответствует резистентности тромбоцитов.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет в лечебном учреждении с высокой чувствительностью (91%) осуществить диагностику чувствительности тромбоцитов к АСК до начала лечения, что является очень важным параметром. Своевременная диагностика резистентности к АСК предотвратит развитие нежелательных коронарных событий у больных ИБС, резистентных к препарату. Способ может быть рекомендован для применения в клинической практике.

Способ определения чувствительности тромбоцитов к ацетилсалициловой кислоте (АСК), включающий забор крови, отличающийся тем, что исследуют АДФ-индуцированную люцигенин-зависимую хемилюминесценцию тромбоцитов; по значению площади (S) под кривой хемилюминесценции определяют резистентность тромбоцитов к АСК: S<360000 у.ед. указывает на резистентность тромбоцитов к АСК, если же S≥360000, то говорят о чувствительности тромбоцитов к АСК.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования исхода распространенного рака яичников после адъюватной химиотерапии по схеме АР (цисплатин 75 мг/м2 + доксорубицин 50 мг/м2).

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования исхода распространенного рака яичников после адъюватной химиотерапии по схеме АР (цисплатин 75 мг/м2 + доксорубицин 50 мг/м2).

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для лечения больных метаболическим синдромом. Для этого вводят Метформин по 500 мг 2 раза в сутки, Аторвастатин по 10 мг вечером, Лизиноприл 5 мг 1-2 раза в сутки.

Изобретение относится к области медицины, а именно дерматологии и клинической лабораторной диагностике, и касается способа оценки эффективности стандартной терапии у больных нумулярной микробной экземой, который включает определение на 10-й день терапии в венозной крови уровня Т-лимфоцитов-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для определения глубины некроза миокарда по комплексу показателей у пациентов с острым коронарным синдромом с подъемом сегмента ST (ОКСпST).
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для ранней дифференциальной диагностики геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС) от обострения хронического пиелонефрита.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности к клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для анализа состояния стресс-реактивности организма.

Изобретение относится к области медицины, а именно к нефрологии, диетологии, а именно к способу скрининга белково-энергетической недостаточности у пациента, получающего лечение программным гемодиализом.

Изобретение относится к медицине, в частности к акушерству, и может быть использовано для прогнозирования преэклампсии на основе определения внеклеточной ДНК плода в материнской крови при проведении скрининга первого триместра беременности.

Группа изобретений относится к диагностике наличия ацетона в воздухе, выдыхаемом человеком. Способ контроля концентрации ацетона в воздухе, выдыхаемом человеком, включает использование корпуса, источника питания постоянного тока, спектрометра, разрядной ячейки, линии отбора пробы, оснащенной регулируемым клапаном, блока анализа и обработки, осуществление забора воздуха, выдыхаемого человеком, с последующей подачей его в линию отбора пробы, осуществление регулирования натекания воздуха, выдыхаемого человеком, через линию отбора пробы производят посредством регулируемого клапана, инициирование разряда в разрядной ячейке, понижение давления воздуха, выдыхаемого человеком, в разрядной ячейке посредством насоса прокачки, регистрацию эмиссионного спектра, осуществление нормировки эмиссионного спектра пробы воздуха, выдыхаемого человеком.

Предложен способ получения 2-нитроксисукцината 3-окси-6-метил-2-этилпиридина путем нитрования яблочной кислоты серно-азотной смесью, до образования нитроксиянтарной кислоты с последующей ее обработкой 2-этил-6-метил-3-оксипиридином, где нитрояблочную кислоту, синтезируемую в качестве промежуточного продукта, выделяют из реакционной смеси не в сухом виде, а в виде раствора в этилацетате, который затем и используют для проведения заключительной реакции с 3-окси-6-метил-2-этилпиридином.

Изобретение относится к лекарственным веществам, обладающим кардиопротекторным действием. Предложено применение аскорбата лития в качестве средства, обладающего кардиопротекторной активностью.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к молекуле, связывающейся с фактором роста эндотелия сосудов С (VEGF-C) и фактором роста эндотелия сосудов D (VEGF-D) и может быть использовано в медицине для регулирования ангиогенеза.

Настоящее изобретение предоставляет фармацевтическую композицию для профилактики или лечения сердечно-сосудистых нарушений. Фармацевтическая композиция содержит лозартан или его фармацевтически приемлемую соль, амлодипин или его фармацевтически приемлемую соль, разрыхлитель в количестве от 3 до 10 масс.% из расчета общей массы композиции и покрывающий агент.

Изобретение относится к применению диаминопиримидинового соединения формулы I или IB, или его фармацевтически приемлемой соли, или его дейтерированной формы. Соединения обладают свойствами ингибитора JNK1, JNK2, IL2 или TNFα и предназначены для получения лекарственного средства для лечения или предотвращения неалкогольного стеатогепатита, фиброза почек, воспаления, гиперплазии, некроза или волчанки.

Изобретение относится к соединению формулы (I), к его фармацевтически приемлемым солям или таутомерам, где R1 независимо выбран из H или необязательно замещенного R01 S(=O)2NH2; R3 независимо выбран из C1-10алкила; R2 выбран из , , , , , , , , , , или ; где от нуля до двух T21-23 представляют собой N, а остальные представляют собой C(Rt); D21 выбран из -C(Rd1)(Rd2)-, -N(Rd4)-, -O-, -S- или -C(=O)-; T24 выбран из N или C(Rt); каждый из D22-24 независимо выбран из -C(Rd1)(Rd2)-, -O-, -S- или -C(=O)-; до двух T25-29 представляют собой N, а остальные представляют собой C(Rt); необязательно любые два из Rt и Rd1-d4 связаны вместе с общим атомом или группой атомов с образованием одного 5-6-членного кольца; каждый из Rt, Rd1 и Rd2 независимо выбран из H, CN, NH2, C(=O)NH2, C(=O)N(CH3)2; или Rt независимо выбран из группы, состоящей из необязательно замещенных R01 C1-10алкила, C1-10гетероалкила, тетрагидропиранила, тетрагидропиридинила, морфолинила, пиридинила, , , , CF3, CH2CF3, CH2CHF2 или фенила; R01 выбран из OH или R02; R02 выбран из C1-10алкила, C1-10гетероалкила, C3-10циклоалкила, гетероциклического C6алкила, который содержит атомы углерода и 1 гетероатом, выбранный из O; при этом «гетеро-» означает гетероатом или содержащую гетероатом группу, которые выбраны из группы, состоящей из -C(=O)N(Rd3)- или -C(=O)O-; каждый из Rd3-d4 независимо выбран из H или CH3; R02 необязательно замещен R001; R001 выбран из F, Cl, Br, I, OH или метила, при этом число каждого из R01, R001, гетероатомов или содержащих гетероатом групп независимо выбрано из 0, 1, 2, 3 или 4.

Изобретение относится к новому соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, обладающими свойствами ингибитора LTA-4-гидролазы. Соединения могут найти применение для лечения заболевания и расстройства, которое облегчается посредством ингибирования активности LTA4-h.

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к соединению, выбранному из: , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , или его фармацевтически приемлемой соли, к применению вышеперечисленных соединений для лечения заболеваний, выбранных из группы, состоящей из хронического инфекционного заболевания, бактериальной инфекции, паразитарной инфекции, травмы, лепры, туберкулеза, трансплантации печени, рака, фиброзных заболеваний и их комбинации, и к фармацевтической композиции, включающей вышеперечисленные соединения.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, анестезиологии и реанимации, и может быть использовано для купирования реперфузионного синдрома у пациентов с острым коронарным синдромом и подъемом сегмента ST.

Изобретение относится к новому соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, которые обладают CDK4/6 ингибирующей активностью. Соединения могут найти применение для получения лекарственного средства для профилактики или лечения ревматоидного артрита, артериосклероза, фиброза легких, ишемического инсульта или злокачественного новообразования.
Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии. Для лечения глубоких дефектов роговицы проводят размещение аутологичного тромбофибринового сгустка на поверхности роговицы.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу определения чувствительности тромбоцитов. Способ определения чувствительности тромбоцитов к ацетилсалициловой кислоте, включающий забор крови, при этом исследуют АДФ-индуцированную люцигенин-зависимую хемилюминесценцию тромбоцитов; по значению площади под кривой хемилюминесценции определяют резистентность тромбоцитов к АСК: S<360000 у.ед. указывает на резистентность тромбоцитов к АСК, если же S≥360000, то говорят о чувствительности тромбоцитов к АСК. Предложенное изобретение позволяет эффективно осуществить диагностику резистентности к АСК у пациента. 1 табл., 2 пр.

Наверх