Способ количественного определения аминокапроновой кислоты при её совместном присутствии с сополимером 2-метил-5-винилпиридина и n-винилпирролидона методом вэжх



Способ количественного определения аминокапроновой кислоты при её совместном присутствии с сополимером 2-метил-5-винилпиридина и n-винилпирролидона методом вэжх
Способ количественного определения аминокапроновой кислоты при её совместном присутствии с сополимером 2-метил-5-винилпиридина и n-винилпирролидона методом вэжх
Способ количественного определения аминокапроновой кислоты при её совместном присутствии с сополимером 2-метил-5-винилпиридина и n-винилпирролидона методом вэжх
Способ количественного определения аминокапроновой кислоты при её совместном присутствии с сополимером 2-метил-5-винилпиридина и n-винилпирролидона методом вэжх
Способ количественного определения аминокапроновой кислоты при её совместном присутствии с сополимером 2-метил-5-винилпиридина и n-винилпирролидона методом вэжх
Способ количественного определения аминокапроновой кислоты при её совместном присутствии с сополимером 2-метил-5-винилпиридина и n-винилпирролидона методом вэжх
Способ количественного определения аминокапроновой кислоты при её совместном присутствии с сополимером 2-метил-5-винилпиридина и n-винилпирролидона методом вэжх
Способ количественного определения аминокапроновой кислоты при её совместном присутствии с сополимером 2-метил-5-винилпиридина и n-винилпирролидона методом вэжх
Способ количественного определения аминокапроновой кислоты при её совместном присутствии с сополимером 2-метил-5-винилпиридина и n-винилпирролидона методом вэжх
Способ количественного определения аминокапроновой кислоты при её совместном присутствии с сополимером 2-метил-5-винилпиридина и n-винилпирролидона методом вэжх
Способ количественного определения аминокапроновой кислоты при её совместном присутствии с сополимером 2-метил-5-винилпиридина и n-винилпирролидона методом вэжх
Способ количественного определения аминокапроновой кислоты при её совместном присутствии с сополимером 2-метил-5-винилпиридина и n-винилпирролидона методом вэжх
Способ количественного определения аминокапроновой кислоты при её совместном присутствии с сополимером 2-метил-5-винилпиридина и n-винилпирролидона методом вэжх
Способ количественного определения аминокапроновой кислоты при её совместном присутствии с сополимером 2-метил-5-винилпиридина и n-винилпирролидона методом вэжх
G01N2496/00 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2700167:

Кедик Станислав Анатольевич (RU)

Изобретение относится к аналитической химии и предоставляет способ количественного определения аминокапроновой кислоты (АКК) при ее совместном присутствии с сополимером 2-метил-5-винилпиридина и N-винилпирролидона (СП) в различных готовых лекарственных формах, таких как, например, назальные капли или спреи. Для этого готовят градуировочные растворы АКК фармакопейного качества с концентрациями, значения которых находятся на границах допустимых отклонений, а также в области недопустимых отклонений. Количественное определение АКК проводят методом обращеннофазной ВЭЖХ в ионпарном варианте на колонке с длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненной неподвижной фазой, образованной сферическими частицами диоксида кремния размером 5 мкм, модифицированными октадецилсиланом в градиентном режиме, подвижная фаза А содержит (1%H3PO4+10 ммоль PSNa+15 ммоль К2НРО4 в Н2О):метанол в соотношении 70:30, а подвижной фазой Б является метанол. Детектирование АКК проводят спектрофотометрически при длине волны 210 нм и вычисляют средние арифметические значения площади под кривой АКК (AUC) с последующей аппроксимацией линейной функции до AUC=kcAKK для вычисления коэффициента k. Раствор препарата для исследования разбавляют подвижной фазой А до 0,5-5 мг/мл, хроматографируют не менее 3 раз. После проведения анализа образцов формулируют заключение о соответствии препарата предъявляемым к нему требованиям по содержанию АКК. Изобретение обеспечивает экспрессность анализа, а также снижение трудоемкости и стоимости количественного определения АКК. 1 з.п. ф-лы, 5 ил., 2 табл., 2 пр.

 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к области анализа лекарственных препаратов, биологически активных добавок, косметической и пищевой продукции. Более конкретно изобретение предоставляет способ количественного определения аминокапроновой кислоты (АКК) при ее совместном присутствии с сополимером 2-метил-5-винилпиридина и N-винилпирролидона (СП) высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ) в различных готовых лекарственных формах, таких как, например, назальные капли или спреи и растворы для инъекций или инфузий.

Уровень техники

Аминокапроновая кислота (АКК, 6-аминогексановая кислота) представляет собой синтетический аналог природной аминокислоты лизина и способна оказывать системный гемостатический эффект при кровотечениях, обусловленных повышенной фибринолитической активностью плазмы за счет ингибирования активаторов профибринолизина и торможения его превращение в фибринолизин. Также она проявляет прямое угнетающее действие на фибринолизин. Кроме этого, она уменьшает проницаемость капилляров, обладает противоаллергической активностью, улучшает антитоксическую функцию печени.

Благодаря своим свойствам АКК применяется в хирургической практике для предотвращения кровотечения при хирургических вмешательствах на органах, богатых активаторами фибринолиза (головном и спином мозге, легких, сердце, сосудах, щитовидной и поджелудочной железах, предстательной железе) и в случае осложненного аборта. Также она показана при заболеваниях внутренних органов с геморрагическим синдромом.

Также известно применение АКК в качестве противовирусного средства. Препарат АКК используется для профилактики и лечения гриппа и острых респираторных вирусных инфекций, создавая барьер для вирусов, эффективно блокируя проникновение возбудителей в клетки носоглотки и легких (РУ № UA/11103/01/01 от 24.10.2014. Приказ №771 от 24.10.2014 г., Украина).

Известно, что для количественного определения АКК хроматографическими методами в сложных матрицах проводят ее предварительную дериватизацию. В статье Nagy A. Farid. Fluorescamine Use in High-Performance Liquid Chromatographic Determination of Aminocaproic Acid in Serum // Journal of Pharmaceutical Sciences. Vol. 68, No. 2 (1979) Pp. 249-252 было предложено применять флуорескамин (также известный как флурам или 4'-фенилспиро[2-бензофуран-3,2'-фуран]-1,3'-дион), который флуоресценцией не обладает, но быстро реагирует с первичными аминами с образованием интенсивно флуоресцирующих пирролиноновых соединений с максимумом поглощения около 390 нм и максимумом флуоресценции в области 475 нм.

Авторы статьи указывают, что для определения АКК были приготовлены модельные растворы (50-600 мг/л), для которых наблюдалась линейная зависимость аналитических сигналов (как поглощения, так и флуоресценции) от концентрации в изократическом режиме элюирования. Элюент содержал 44% ацетонитрила в 0,5 мМ Н3РО4. В ходе пяти исследований образца сыворотки крови человека (400 мг/л АКК) было экспериментально найдено содержание АКК, равное 403,6±4,4 мг/л, что подтверждает правильность метода в применении к реальным матрицам.

Другим реагентом, часто используемым для дериватизации первичных аминов перед их хроматографическим определением, является дансилхлорид (5-(диметиламино)нафталин-1-сульфонилхлорид, DNS-Cl). Так в публикации С.A. Lau-Cam & R.W. Roos (1993) Assay of Aminocaproic Acid in Dosage Forms by Reversed Phase High Performance Liquid Chromatography with Dansylation // Journal of Liquid Chromatography. Vol. 16 No. 2 (1993). Pp. 403-419 описан способ определения АКК в таблетках (500 мг), растворах для инъекций (250 мг/мл) и сиропах (0,25 мг/мл) включающий обработку пробы избытком DNS-Cl и удаление непрореагировавшего DNS-Cl добавлением моноэтаноламина. Хроматографирование со спектрофотометрическим детектированием аналитического сигнала проводят в изократическом режиме (подвижная фаза: метанол/вода/уксусная кислота/триэтиламин 60:38:1,5:0,5) на колонке длиной 150 мм и внутренним диаметром 4,6 мм с неподвижной фазой Econosphere C18 (5 мкм). Основным недостатком метода является невысокая экспрессность, поскольку реакция АКК с DNS-Cl завершается приблизительно за 30 минут, удаление избытка DNS-Cl занимает еще примерно 15 минут, тогда как для элюирования дериватизированной АКК требуется около 5 минут. Кроме того, применение DNS-Cl увеличивает стоимость анализа.

Таким образом, существует потребность в более экспрессном и менее затратном способе количественного определения АКК в конкретной матрице, образуемой сополимером 2-метил-5-винилпиридина и N-винилпирролидона и обычно используемыми фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами.

Раскрытие сущности изобретения

Объектом, для хроматографического анализа которого предназначено настоящее изобретение, является фармацевтическая композиция для профилактики вируса гриппа и ОРВИ в виде раствора для местного применения, содержащая аминокапроновую кислоту и сополимер 2-метил-5-винилпиридина с N-винилпирролидоном (СП), компоненты фосфатно-буферного раствора, консервант и очищенную воду, при следующих соотношениях компонентов (масс. %):

АКК 0,1-5
СП 0,1-1
компоненты фосфатно-буферного раствора 0,5-1,5
консервант 0,05-1,5
вода очищенная до 100.

В качестве консерванта могут выступать натрия бензоат или бензалкония хлорид. Композиция представлена в виде двух вариантов комплексного назального спрея, содержащего 1% (масс.) или 3% (масс.) АКК и 0,1% (масс.) СП.

В соответствии с настоящим изобретением предлагается способ количественного определения аминокапроновой кислоты (АКК) высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ) при совместном присутствии АКК с сополимером 2-метил-5-винилпиридина и N-винилпирролидона (СП) методом градуировочной функции, для осуществления которого:

а) готовят градуировочные растворы из АКК фармакопейного качества с концентрациями, значения которых равно отстоят от номинальной концентрации АКК в препарате и находятся на границах допустимых отклонений, а также в области недопустимых отклонений;

б) готовят подвижную фазу А (ПФ А) состава 1%H3PO4+10 ммоль PSNa+15 ммоль К2НРО4 в Н2О/метанол 70:30, дегазируют ее и обрабатывают ультразвуком;

в) выполняют хроматографирование градуировочных растворов обращеннофазной ВЭЖХ в ионпарном варианте в градиентном режиме по следующей программе:

где подвижной фазой Б (ПФ Б) является метанол, не менее 3 раз для каждого образца на колонке с длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненной неподвижной фазой, образованной сферическими частицами диоксида кремния размером 5 мкм, модифицированными октадецилсиланом, со спектрофотометрическим детектированием аналитического сигнала в виде поглощения при длине волны 210 нм;

г) определяют время удерживания АКК, вычисляют средние арифметические значения площадей под выходными кривыми АКК (AUC) для всех концентраций, аппроксимируют полученные значения AUC линейной функцией вида

AUC=AUC0+kcAKK,

удостоверяют незначимость слагаемого AUC0, после чего повторно аппроксимируют полученные значения AUC линейной функцией вида

AUC=kcAKK

и определяют значение k;

д) готовят раствор препарата для исследования, разбавляя, при необходимости, исходный препарат подвижной фазой ПФ А до 0,5-5 мг/мл, полагая при этом, что препарат соответствует предъявляемым требованиям по содержанию АКК;

е) хроматографируют раствор препарата для исследования в условиях, указанных в подпункте в) не менее 3 раз и идентифицируют АКК на выходной кривой по времени удерживания;

ж) вычисляют среднее арифметическое значение площади под выходными кривыми АКК (AUC) для всех хроматографических исследований и рассчитывают cAKK как

з) формулируют заключение о соответствии препарата предъявляемым к нему требованиям по содержанию АКК.

Предпочтительно в указанном способе неподвижной фазой является фаза NUCLEODUR C18 Pyramid.

Технический результат изобретения заключается в увеличении экспрессности анализа, т.е. в сокращении времени, требуемого на проведение одного определения. Достижение этого результата приведет к увеличению времени полезного использования хроматографа. Кроме того, дополнительными преимуществами изобретения являются снижение трудоемкости и стоимости количественного определения АКК.

Краткое описание чертежей

На фиг. 1 представлена схема приготовления градуировочных растворов.

На фиг. 2 представлен общий вид выходной кривой ВЭЖХ для образца, полученного десятикратным разбавлением аликвоты комплексного назального спрея 3% на основе АКК и СП.

На фиг. 3 представлен в укрупненном масштабе вид выходной кривой АКК для градуировочного образца АКК с концентрацией 3 мг/мл.

На фиг. 4 даны графическое и аналитическое представления градуировочной функции ВЭЖХ со значениями параметра к, коэффициента корреляции R и остаточной суммы квадратов SD для анализа образцов комплексного назального спрея 3% на основе АКК и СП.

На фиг. 5 даны графическое и аналитическое представления градуировочной функции ВЭЖХ со значениями параметра k, коэффициента корреляции R и остаточной суммы квадратов SD для анализа образцов комплексного назального спрея 1% на основе АКК и СП.

Осуществление изобретения

В результате обширных исследований авторы настоящего изобретения неожиданно установили, что проведение хроматографического разделения в градиентном режиме позволяет достичь полного разделения аналита (АКК) и матрицы (СП + вспомогательные вещества) без его предварительной дериватизации, например, обработкой дансилхлоридом.

Таким образом в соответствии с изобретением предложен способ, основанный на разделении АКК и сополимера СП и дальнейшем определении концентрации АКК обращеннофазной ВЭЖХ в ионпарном варианте в градиентном режиме со спектрофотометрическим детектированием аналитического сигнала, которым является поглощение при длине волны 210 нм. Рабочая концентрация СП в образцах после пробоподготовки находится на уровне 1 мг/мл (20 мкг/ввод), что в условиях ВЭЖХ анализа обеспечивает полное элюирование основного количества сополимера с колонки и обеспечивает продолжительный срок службы элемента разделения.

Способ включает растворение навески исследуемого препарата в подвижной фазе (ПФ), разделение аминокапроновой кислоты и сополимера 2-метил-5-винилпиридина и N-винилпирролидона на хроматографической колонке и дальнейшее определение концентрации АКК по уравнению градуировочной функции AUC = ƒ (cAKK), где AUC представляет площадь под выходной кривой АКК для различных ее концентраций, соответствующих недопустимым и предельно допустимым границам концентрации, а также концентрации АКК в препарате, полностью соответствующем предъявляемым к нему требованиям.

Все компоненты подвижных фаз имеют степень чистоты «чистый для ВЭЖХ». В качестве подвижной фазы А (ПФ А) используют смесь водной части (водный раствор фосфорной кислоты 1%, 10 ммоль пентилсульфоната натрия и 15 ммоль К2НРО4 в Н2О) с метанолом в соотношении 70:30, в качестве подвижной фазы Б используют метанол.

Для осуществления способа готовят не менее 5 градуировочных растворов по схеме, представленной на фиг. 1.

Далее возможность осуществления изобретения с достижением технических результатов будет показана на неограничивающих примерах.

Пример 1. Приготовление подвижной фазы (ПФ), стандартных растворов и их хроматографический анализ препарата «Комплексный назальный спрей 3%»

1.1. Приготовление подвижной фазы

Для получения ПФ А сначала готовят ее водную часть, для чего в 1%-ный водный раствор ортофосфорной кислоты добавляют 10 ммоль пентилсульфоната натрия (PSNa) и 15 ммоль гидрофосфата калия, устанавливая рН 2,0-2,2, а затем добавляют в нее метанол как будет раскрыто ниже.

В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 1740±0,5 мг пентилсульфоната натрия и 4560±0,5 мг К2НРО4⋅3Н2О, приливают 800 мл дистиллированной воды, добавляют приблизительно 10 мл концентрированной ортофосфорной кислоты, тщательно перемешивают и устанавливают значение рН 2,0-2,2 добавлением небольшого объема ортофосфорной кислоты. Объем раствора в колбе доводят до 1000 мл дистиллированной водой и вновь тщательно перемешивают.

В мерный цилиндр вместимостью 1000 мл с ценой деления 10 мл помещают 700 мл полученного раствора, в мерный цилиндр объемом 500 мл с ценой деления 10 мл помещают 300 мл метанола. Отмеренные объемы растворов объединяют в сосуде подходящей вместимости и тщательно перемешивают. Подвижную фазу А [(1%H3PO4+10 ммоль PSNa+15 ммоль К2НРО4 в H2O)/метанол 70:30] дегазируют, пропуская через мембранный нейлоновый фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и обрабатывают ультразвуком в течении 5 минут.

Фаза В. Метанол (HPLC Gradient Grade).

1.2. Приготовление градуировочных растворов аминокапроновой кислоты

Градуировочные растворы готовят из аминокапроновой кислоты фармакопейного качества, растворяя навески 25,0 мг, 50,0 мг, 75,0 мг, 100,0 мг и 125,0 мг аминокапроновой кислоты, взятые с точностью ±0,1 мг в отдельных мерных колбах вместимостью 25 мл, добавляют 20 мл ПФ А, помещают в ультразвуковую ванну на 3-5 минут до полного растворения кислоты и доводят объем раствора в колбе до метки добавлением ПФ А. Таким образом получают градуировочные растворы с содержаниями АКК равными 1; 2; 3; 4 и 5 мг/мл.

1.3. Определение параметров градуировочной функции

Для определения параметров градуировочной функции хроматографируют каждый из градуировочных растворов не менее трех раз со спектрофотометрическим детектированием при длине волны 210 нм на колонке NUCLEODUR C18 Pyramid (Macherey-Nagel GmbH, Германия, длина 250 мм, внутренний диаметр 4,6 мм), заполненной сферическими частицами размером 5 мкм. Работают в градиентном режиме по следующей программе:

Численно интегрируют площади под кривыми зависимостей аналитического сигнала от времени элюирования и получают значения AUCi(i=1, 2, 3…). Вычисляют среднее арифметическое значение AUC для каждого раствора. Значения AUC для различных сАКК приведены в таблице 1.

Аппроксимация полученных значений AUC линейной функцией вида

AUC=AUC0+kcAKK

с применением метода наименьших квадратов дает следующие значения ее параметров:

AUC0=0,1291±0,2546

k=4,5106±0,0767,

при этом коэффициент корреляции R равен 0,9996, а остаточная сумма квадратов SD равна 0,2427.

Из сопоставления вычисленных значений параметров и их ошибок следует, что слагаемое AUC0 является незначимым, то есть систематическая погрешность метода определения концентрации АКК отсутствует. Учитывая это и принимая AUC0 тождественно равным нулю, уточненное значение k определяют равным 4,5448±0,1472, при этом коэффициент корреляции R равен 0,9991, а остаточная сумма квадратов SD равна 0,2445.

1.4 Приготовление раствора препарата «Комплексный назальный спрей 3%» для исследования

Аликвоту исследуемого препарата объемом 5,0 мл помещают в мерную колбу объемом 50 мл, добавляют 30 мл ПФ А, закрывают крышкой и тщательно перемешивают, при необходимости корректируют рН до 2,0 1М раствором ортофосфорной кислоты, доводят объем раствора в колбе до метки добавлением ПФ А и повторно тщательно перемешивают.

1.5 Хроматографическое количественное определение АКК в препарате «Комплексный назальный спрей 3%»

Образец раствора исследуемого препарата хроматографируют 3 раза со спектрофотометрическим детектированием при длине волны 210 нм на колонке NUCLEODUR C18 Pyramid (длина 250 мм, внутренний диаметр 4,6 мм), заполненную сферическими частицами размером 5 мкм. Работают в градиентном режиме по следующей программе:

По времени удерживания, равному 3,51 мин. на хроматограммах идентифицируют сигналы АКК и определяют их площади. Количественное определение АКК проводят методом градуировочной функции. За результат хроматографического анализа принимают среднеарифметическое значение концентраций. Содержание АКК в испытуемом растворе составляет 3,02±0,03 мг/мл, а содержание АКК в растворе препарата, с учетом разведения составляет 3,02% (масс.). Таким образом, препарат точно соответствует требованиям по содержанию АКК.

Пример 2. Приготовление подвижной фазы (ПФ), стандартных растворов и их хроматографический анализ препарата «Комплексный назальный спрей 1%»

2.1. Приготовление подвижной фазы

Подвижную фазу готовят, как описано в разделе 1.1 примера 1.

2.2. Приготовление градуировочных растворов аминокапроновой кислоты

Градуировочные растворы готовят из аминокапроновой кислоты фармакопейного качества, растворяя навески 20,0 мг, 35,0 мг, 50,0 мг, 65,0 мг и 80,0 мг аминокапроновой кислоты, взятые с точностью ±0,1 мг в отдельных мерных колбах вместимостью 50 мл, добавляют 40 мл ПФ А, помещают в ультразвуковую ванну на 3-5 минут до полного растворения кислоты и доводят объем раствора в колбе до метки добавлением ПФ А. Таким образом получают градуировочные растворы с содержаниями АКК равными 0,4; 0,7; 1,0; 1,3 и 1,6 мг/мл.

2.3. Определение параметров градуировочной функции

Параметры градуировочной функции вычисляют по результатам хроматографического анализа градуировочных образцов, приготовленных согласно раскрытому в разделе 2.2, как описано в разделе 1.3 примера 1. Значения AUC для различных сАКК приведены в таблице 2.

Аппроксимация полученных значений AUC линейной функцией вида

AUC=AUC0+kcAKK

с применением метода наименьших квадратов дает следующие значения ее параметров:

AUC0=0,1430±0,2904

k=5,0113±0,2674,

при этом коэффициент корреляции R равен 0,9959, а остаточная сумма квадратов SD равна 0,2536.

Из сопоставления вычисленных значений параметров и их ошибок следует, что слагаемое AUC0 является незначимым, то есть систематическая погрешность метода определения концентрации АКК отсутствует. Учитывая это и принимая AUC0 тождественно равным нулю, уточненное значение k определяют равным 5,1325±0,0940, при этом коэффициент корреляции R равен 0,9910, а остаточная сумма квадратов SD равна 0,3147.

2.4 Приготовление раствора препарата «Комплексный назальный спрей 1%» для исследования

Раствор препарата для исследования готовят, как раскрыто в разделе 1.4 примера 1.

2.5 Хроматографическое количественное определение АКК в препарате «Комплексный назальный спрей 1%»

Образец раствора исследуемого препарата хроматографируют 3 раза как раскрыто в разделе 1.5 примера 1. По времени удерживания, равному 3,49 мин. на хроматограммах идентифицируют сигналы АКК и определяют их площади. Количественное определение АКК проводят методом градуировочной функции. За результат хроматографического анализа принимают среднеарифметическое значение концентраций. Содержание АКК в испытуемом растворе составляет 1,04±0,05 мг/мл, а содержание АКК в растворе препарата, с учетом разведения составляет 1,04% (масс.). Таким образом, содержание АКК в препарате выше номинального, но, тем не менее, находится в допустимом диапазоне. Иными словами, препарат соответствует требованиям по содержанию АКК.

1. Способ количественного определения аминокапроновой кислоты (АКК) высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ) при совместном присутствии АКК с сополимером 2-метил-5-винилпиридина и N-винилпирролидона (СП) методом градуировочной функции, отличающийся тем, что для его осуществления:

а) готовят градуировочные растворы из АКК фармакопейного качества с концентрациями, значения которых равно отстоят от номинальной концентрации АКК в препарате и находятся на границах допустимых отклонений, а также в области недопустимых отклонений;

б) готовят подвижную фазу А (ПФ А) состава (1%H3PO4+10 ммоль PSNa+15 ммоль К2НРО4 в Н2О)/метанол 70:30, дегазируют ее и обрабатывают ультразвуком;

в) выполняют хроматографирование градуировочных растворов обращеннофазной ВЭЖХ в ионпарном варианте в градиентном режиме по следующей программе:

где подвижной фазой Б (ПФ Б) является метанол, не менее 3 раз для каждого образца на колонке с длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм, заполненной неподвижной фазой, образованной сферическими частицами диоксида кремния размером 5 мкм, модифицированными октадецилсиланом, со спектрофотометрическим детектированием аналитического сигнала в виде поглощения при длине волны 210 нм;

г) определяют время удерживания АКК, вычисляют средние арифметические значения площадей под выходными кривыми АКК (AUC) для всех концентраций, аппроксимируют полученные значения AUC линейной функцией вида

AUC=AUC0+kcAKK,

удостоверяют незначимость слагаемого AUC0, после чего повторно аппроксимируют полученные значения AUC линейной функцией вида

AUC=kcAKK,

и определяют значение k;

д) готовят раствор препарата для исследования, разбавляя, при необходимости, исходный препарат подвижной фазой ПФ А до 0,5-5 мг/мл, полагая при этом, что препарат соответствует предъявляемым требованиям по содержанию АКК;

е) хроматографируют раствор препарата для исследования в условиях, указанных в подпункте в) не менее 3 раз и идентифицируют АКК на выходной кривой по времени удерживания;

ж) вычисляют среднее арифметическое значение площади под выходными кривыми АКК (AUC) для всех хроматографических исследований и рассчитывают cАКК как

з) формулируют заключение о соответствии препарата предъявляемым к нему требованиям по содержанию АКК.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что неподвижной фазой является фаза NUCLEODUR С18 Pyramid.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в медицинских, ветеринарных и других исследованиях для определения троксерутина, декспантенола, бензокаина и метилпарагидроксибензоата в лекарственных препаратах.

Изобретение относится к устройствам подачи жидкости, а именно к насосам, применяемым для подачи жидкости в жидкостной хроматографии. .

Изобретение относится к высокоэффективной жидкостной хроматографии, может быть использовано при анализах больных в процессе лечения. .

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения сини анти-форм соединений цефалосперинового ряда методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Изобретение относится к аналитической химии, в частности к количестве1П1ому определению 3,4-бензо(а) пирена, 7,I2-диметилбензантрацена, 20-метилхолантрена (I). .

Предложенная группа изобретений относится к области медицины, в частности онкологии и молекулярной биологии. Предложен способ получения данных, применимых для прогнозирования избыточного веса, ожирения и/или их осложнений, который предусматривает обнаружение и/или количественное определение уровней мРНК генов Lrp11, Gls и Ubash3b в биологическом образце, выделенном из субъекта, причем увеличение экспрессии генов Lrp11, Gls и Ubash3b по отношению к контрольному эталонному значению связано с неблагоприятным прогнозом.

Изобретение относится к способу и устройству для моделирования процесса формирования поверхности сварного шва при дуговой сварке неплавящимся электродом. Технический результат предлагаемого способа: расширение возможностей изучения и оценки процесса формирования сварного шва.

Группа изобретений относится к области технологии обращения с высокорадиоактивными растворами и может быть использована, например, в составе комплекса средств управления проектными и запроектными авариями на АЭС для получения дополнительной информации о характере повреждения активной зоны реактора по результатам радиохимического и химического анализа в лабораторных условиях состава отобранных образцов водных сред из технологических линий и оборудования энергоблока.

Изобретение относится к способам и устройствам для контроля состояния окружающей среды. Способ анализа органических веществ в почвогрунте заключается в прямом спектральном измерении массовой доли гумусовых веществ за счет определения интенсивности отражения световой волны в трех диапазонах: 1610-1640 см-1, 3300-3500 см-1 и 2800-3100 см-1 и построении калибровочной модели с применением методов многомерного анализа на основе спектров почвогрунта, полученных в рабочей области и представленных в численном виде.

Изобретение относится к области медицины, в частности к молекулярной биологии, онкологии, и предназначено для прогнозирования развития метастазов у больных раком тела матки.

Изобретение относится к области биотехнологии. Описана группа изобретений, включающая способ определения TNFR2:Fc с дисульфидной связью Cys78-Cys88 в образце, содержащем TNFR2:Fc с дисульфидными связями Cys74-Cys88/Cys78-Cys96 и TNFR2:Fc с дисульфидной связью Cys78-Cys88, способ очистки TNFR2:Fc с дисульфидными связями Cys74-Cys88/Cys78-Cys96, способ получения и очистки TNFR2:Fc с дисульфидными связями Cys74-Cys88/Cys78-Cys96 и TNFR2:Fc с дисульфидной связью Cys78-Cys88 и композиция TNFR2:Fc для лечения заболевания, выбранного из анкилозирующего спондилита, ювенильного ревматоидного артрита, псориаза, псориатического артрита и ревматоидного артрита.

Изобретение относится к измерительной технике, а именно к устройствам для измерения коэффициента поглощения образца, и может быть использовано в ходе исследования оптических характеристик материалов и покрытий, в том числе отражательной и поглощательной способности, их зависимости от угла падения излучения, зоны облучения, фактуры поверхности и т.д.

Изобретение относится к области приборостроения, более конкретно к методам определения функции распределения частиц по размерам в нанометровом диапазоне. Интерферометрический метод определения функции распределения частиц по размерам основан на анализе изменений как амплитудных, так и фазовых соотношений интерферограмм, полученных до и после введения в рабочий объем интерферометра аэрозоля или взвеси частиц.

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике, основанной на генетическом методе выявления критериев, свидетельствующих о тяжести клинического течения гемофилии.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложен способ получения зоны характеризации аналитической пластины для проведения характеризации популяции микроорганизма в присутствии антимикробного агента методом MALDI, способ характеризации популяции микроорганизма (варианты), аналитическая пластина и средство для характеризации популяции микроорганизма, представляющее собой указанную пластину.
Наверх