Способ приготовления препарата отделяемого слизистой влагалища для оценки микробиоценоза
Владельцы патента RU 2702237:
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научно-исследовательский институт акушерства, гинекологии и репродуктологии имени Д.О. Отта" (RU)
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, урологии, венерологии, паразитологии, медицинской микробиологии, клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для приготовления препарата отделяемого слизистой оболочки влагалища для оценки микробиоценоза. Для этого отделяемое слизистой влагалища предварительно переносят в пробирку с физиологическим раствором, затем полученную суспензию переносят на предметное стекло, которое помещают в цитоцентрифугу, центрифугируют, после чего препарат высушивают. Способ позволяет повысить точность результата исследования за счет улучшения визуализации материала при микроскопическом исследовании при его быстроте и простоте. 3 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, урологии, венерологии, паразитологии, медицинской микробиологии, клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для приготовления препарата отделяемого слизистой оболочки влагалища для оценки микробиоценоза.
Известен способ приготовления препарата отделяемого слизистой оболочки влагалища, включающий получение клинического материала с заднебокового свода влагалища с применением стерильной бактериологической петли определенного объема (10 мкл) или ватного/дакронового тампона, последующим перенесением на предметное стекло прокатыванием (Порядок проведения микроскопического исследования мазков из урогенитального тракта, А.М. Савичева, Е.В. Соколовский, М. Домейка, 2007, 67 с.). Этот способ является ближайшим аналогом и принят авторами за прототип.
Недостатки прототипа являются отсутствие стандартного предметного стекла и четкой локализации материала на стекле; отсутствие равномерности распределения клинического материала по поверхности предметного стекла; возможная деформация клеток при соприкосновении инструмента для взятия материала с поверхностью предметного стекла, что затрудняет визуализацию при микроскопическом исследовании.
Технический результат изобретения заключается в улучшении визуализации материала при микроскопическом исследовании и повышении точности результата исследования, в быстроте и простоте исследования, в экономии красителя.
Указанный технический результат достигается в известном способе приготовления препарата отделяемого слизистой влагалища для оценки микробиоценоза, включающем взятие отделяемого слизистой влагалища, нанесение его на предметное стекло и высушивание, в котором взятое отделяемое слизистой влагалища предварительно переносят в пробирку с физиологическим раствором, затем полученную суспензию переносят на предметное стекло, которое помещают в цитоцентрифугу, центрифугируют, после чего препарат высушивают.
Цитоцентрифуги используются в цитологических, иммунохимических, генетических, гематологических, микробиологических лабораториях с различными клиническими материалами, такими, как: цереброспинальная жидкость, плевральная жидкость, перикардиальная жидкость, перитониальная жидкость, синовиальная жидкость, моча, бронхиальные и альвеолярные смывы; смывы из полости рта, желудочные смывы, экссудаты, транссудаты, любые виды аспиратов, мокрота.
Во всех этих случаях с помощью центрифугирования добиваются концентрации определенных клеток, чаще всего онкологических.
В заявленном способе центрифугирование отделяемого слизистой влагалища в виде суспензии в физиологическом растворе позволяет достичь равномерного однослойного распределения клеток отделяемого слизистой влагалища при полном сохранении объема взятого отделяемого. Это подтверждается путем сравнения микроскопической картины отделяемого сразу же после взятия материала и после центрифугирования его в суспензии.
Под действием центробежной силы клетки распределяются в один слой на предметном стекле, монтируемом в одноразовой камере, в прямоугольном поле размером 7×7 мм. После центрифугирования материал для исследования остается на предметном стекле цитоцентрифуги, а именно в прямоугольном поле размером 7×7 мм.
Приготовление мазков с диаметром поверхности клеток на стекле 7 мм позволяет существенно экономить красители.
Исследование отделяемого влагалища дозированным объемом позволяет стандартизировать исследование.
Таким образом, качество приготовленных препаратов достигается тем, что при взятии отделяемого влагалища дозированным объемом, использовании метода центрифугирования на предметном стекле, и автоматическом окрашивании получаются препараты, содержащие определенный объем клинического материала, форменные элементы и бактерии, эпителиальные клетки распределяются по стеклу равномерно, что позволяет более качественно оценить микробиоценоз влагалища.
Способ иллюстрируется фиг. 1-2, где:
на фиг. 1 - препарат, приготовленный ручным способом и окрашенный по Граму и метиленовым синим. Увеличение х1000;
на фиг.2 - препарат, приготовленный автоматизированным способом и окрашенные по Граму и метиленовым синим. Увеличение х1000;
на фиг.3 - предметные стекла с ручным и автоматизированным приготовлением препаратов для микроскопии. Окраска по Граму и метиленовым синим.
При автоматическом приготовлении мазков сохраняется клеточный состав и взаимное расположение оцениваемых элементов (эпителиальные клетки, лейкоциты, бактерии, элементы дрожжеподобных грибов, трихомонады). Для сравнения представлены фотографии препаратов клинического материала, нанесенного на предметное стекло двумя способами: ручным (фиг. 1) и автоматическим (фиг. 2). При ручном приготовлении мазок содержит недоступное детальному изучению беспорядочное нагромождение клеток или тканевые клочки, что снижает информативность такого материала. При автоматическом способе приготовления мазка клеточные элементы распределяются равномерной толщиной по всей площади прямоугольного поля 7×7 мм и препарат получается максимально тонким, приближенным к однослойному.
Способ осуществляют, например, следующим образом.
Взятие клинического материала осуществляют при отсутствии кровянистых выделений и местной терапии последние 48-72 часа. Получение клинического материала проводят на гинекологическом кресле с использованием гинекологического зеркала с заднего или боковых сводов влагалища. Стерильной пластиковой калиброванной микробиологической петлей объемом 10 мкл или ватным/дакроновым тампоном собирают отделяемое слизистой влагалища с поверхности заднебоковых сводов. Полученный клинический материал переносят в пробирку с определенным объемом физиологического раствора для получения суспензии. Объем физиологического раствора определяется типом цитоцентрифуги. Далее суспензию клинического материала переносят в одноразовую камеру цитоцентрифуги, которая включает предметное стекло, фильтрующий материал для захвата и абсорбции жидкости при центрифугировании. Под действием центробежной силы клетки распределяются в один слой на предметном стекле, монтируемом в одноразовой камере, в прямоугольном поле размером 7×7 мм с минимальными потерями на фильтре. После центрифугирования материал для исследования остается на предметном стекле цитоцентрифуги, а именно в прямоуголном поле размером 7×7 мм. Далее материал высушивают на воздухе, фиксируют окрашивают метиленовым синим или по Граму и проводят микроскопическое исследование.
Заявляемый способ позволяет улучшить визуализацию материала при микроскопическом исследовании, повысить точность результата исследования, обеспечить быстроту и простоту исследования, за счет равномерного однослойного распределения клеток на предметном стекле со стандартными размерами, а также в быстроте и простоте исследования, существенно экономить красители.
Способ приготовления препарата отделяемого слизистой влагалища для оценки микробиоценоза, включающий взятие отделяемого слизистой влагалища, нанесение его на предметное стекло и высушивание, отличающийся тем, что взятое отделяемое слизистой влагалища предварительно переносят в пробирку с физиологическим раствором, затем полученную суспензию переносят на предметное стекло, которое помещают в цитоцентрифугу, центрифугируют, после чего препарат высушивают.
