Штамм вируса гриппа b/novosibirsk/40/2017-ma для изучения лечебной и профилактической эффективности противовирусных препаратов in vitro и in vivo

Изобретение относится к биотехнологии, медицинской вирусологии и может быть использовано при исследовании эффективности лечебных и профилактических препаратов против вируса гриппа В. Штамм вируса гриппа B/Novosibirsk/40/2017-MA предназначен для изучения лечебной и профилактической эффективности противовирусных препаратов in vitro и in vivo. Штамм получен на основе оригинального паспортизованного, обладающего антигенной актуальностью родительского штамма вируса гриппа B/Novosibirsk/40/2017 путем слепого пассирования через легкие мышей и пассажа в культуре клеток MDCK. Штамм депонирован в Коллекции культур микроорганизмов Государственного научного центра вирусологии и биотехнологии «Вектор» под регистрационным номером V-811. Штамм адаптирован к мышам и способен вызывать нелетальную гриппозную инфекцию у мышей, что позволяет исследовать лечебную и профилактическую эффективность противовирусных препаратов in vivo, а также in vitro на культуре клеток MDCK. 4 ил., 2 табл., 4 пр.

 

Изобретение относится к медицинской вирусологии и может быть использовано в при исследовании эффективности лечебных и профилактических препаратов против вируса гриппа В, а также при изучении биологии вируса гриппа.

Вирус гриппа В (ВГВ, influenza В virus, IBV, FLUBV) относится к семейству Orthomyxoviridae. Строение генома ВГВ в целом схоже с геномом вируса гриппа А (ВГА), но существует ряд отличий: большинство сегментов генома ВГВ кодируют по одному белку, при этом сегменты 6, 7 и 8 каждый кодируют по два белка. А именно, сегмент 6 кодирует белки NA и NB (1). Наличие белка NB отличает вирус гриппа В от вируса гриппа A. NB - интегральный мембранный белок, который обнаруживается как на поверхности инфицированных клеток (2-4) так и в составе оболочек вирионов (5). Предполагается, что этот белок формирует ионные каналы и функционирует подобно белку М2 ВГА, обеспечивая процесс репликации вируса посредством участия в «раздевании» вируса и проникновении его в клетку (6-8).

ВГВ выделяли от человека, тюленей, собак и домашней свиньи (9-10). Предполагается, что природным резервуаром ВГВ могут быть тюлени (11) и/или человеческие популяции.

Инфекция, вызванная данным типом, может развить серьезное респираторное заболевание, особенно среди детей младшего школьного возраста (5-8 лет) (12). В Соединенных Штатах Америки в каждом эпидемиологическом сезоне 2004-2011 годов (за исключением пандемии 2009 года) от 22 до 44% всех смертельных случаев, связанных с детским гриппом, были вызваны ВГВ.

Впервые вирус гриппа В был выделен в 1940, с тех пор продолжив свою циркуляцию среди людей и вызывая спорадические эпидемии (13). Филогенетические исследования показали, что после в 1970-х годах появились две различные генетические линии, различающиеся по НА и NA, и известные как линии B/Victoria/2/87-подобные (B/Vic) и B/Yamagata/16/88-подобные (B/Yam). Известно, что в 1980-х годах доминировала линия B/Vic, а в 1990-х годах - линия B/Yam. Данные линии практически не имеют перекрестной реактивности по сывороткам крови при оценивании методом реакция торможения гемагглютинации (РТГА) (14-16). Несмотря на то, что скорость мутации у генома ВГВ ниже, чем у ВГА, обе линии вируса гриппа В (B/Vic и B/Yam) продолжают подвергаться антигенному дрейфу как в результате возникновения ошибок, сделанных RdRp, так и опосредованных давлением антител хозяина.

Вакцины против сезонных вирусов гриппа создаются с целью обеспечения защиты от ВГА и ВГВ. Современные вакцины, в основном, направлены на ответ антител к вирусному поверхностному белку НА. Антигенный дрейф НА требует регулярного обновления вакцин против гриппа, чтобы они антигенно соответствовали циркулирующим в настоящее время штаммам (15). Сезонные вакцины против гриппа традиционно имеют три штамма вируса гриппа, включая два штамма ВГА (A/H1N1 и A/H3N2) и один штамм ВГВ, представленный линией B/Yam или B/Vic. Однако в последние годы две линии ВГВ показали не только сезонные изменения, но и значительные различия в распространенности в разных странах, что чрезвычайно затрудняет прогнозирование того, какая линия ВГВ будет преобладать в конкретном регионе в течение сезона. Более того, были зарегистрированы значительные антигенные несоответствия между сезонными вакцинами и циркулирующими штаммами ВГВ в различных частях мира (14, 17). В ответ на данный факт были одобрены и созданы четырехвалентные вакцины, включающие обе антигенные линии ВГВ в дополнение к двум штаммам ВГА (18).

Несмотря на то, что ВГВ неоднократно вызывал массовые эпидемии среди людей, его генетические детерминанты вирулентности и трансмиссивность до сих пор недостаточно изучены. Ограниченные данные о диапазоне хозяина ВГВ и отсутствие гриппозной модели затрудняют изучение факторов патогенности и способы передачи ВГВ, а также оценку действия противовирусных лекарств и эффективности вакцин.

Анализ известных аналогов

В отличие от вируса гриппа А неизвестны рекомбинантные штаммы вируса гриппа В, применяемые для изучения лечебной и профилактической эффективности противовирусных препаратов in vitro и in vivo. Известны рекомбинантные штаммы вируса гриппа В, пригодные для получения противогриппозных вакцин (19-23). Их общим недостатком является то, что они аттенуированны и апатогенны для экспериментальных животных, что, в свою очередь, не позволяет моделировать гриппозную инфекцию у экспериментальных мышей для оценки лечебной и профилактической эффективности противовирусных препаратов при исследованиях in vivo и на культуре клеток in vitro. Кроме того, многие из представленных рекомбинантных штаммов утратили антигенную актуальность.

Задача изобретения состоит в получении нового, обладающего антигенной актуальностью штамма вируса гриппа типа В, пригодного для моделирования гриппозной инфекции у экспериментальных мышей для оценки лечебной и профилактической эффективности противовирусных препаратов и вакцин in vivo и in vitro.

Указанная задача решена получением на основе родительского штамма B/Novosibirsk/40/2017 адаптированного к мышам штамма вируса гриппа B/Novosibirsk/40/2017-МА.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является создание штамма вируса гриппа B/Novosibirsk/40/2017-MA на основе оригинального паспортизованного, обладающего антигенной актуальностью родительского штамма вируса гриппа B/Novosibirsk/40/2017 путем слепого пассирования через легкие мышей и пассажа в культуре клеток MDCK.

Заявленный штамм способен моделировать у экспериментальных животных нелетальную гриппозную инфекцию с выраженными клиническими признаками заболевания, что позволяет получить наиболее близкую картину патологии аналогично той, что развивается у инфицированных вирусом гриппа людей и провести оценку лечебной и профилактической эффективности противовирусных препаратов in vivo и in vitro.

Заявленный штамм B/Novosibirsk/40/2017-MA депонирован в Государственную коллекцию возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов Федерального государственного учреждения науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора под регистрационным номером V-811 (630559, р.п. Кольцово, Новосибирская область, Россия). Родительский штамм B/Novosibirsk/40/2017 депонирован там же под регистрационным номером V-810.

Раскрытие сущности изобретения

Характеристика штамма

Заявленный штамм вируса гриппа B/Novosibirsk/40/2017-MA является представителем вирусов гриппа род Influenzavirus В семейство Orthomyxoviridae.

Происхождение. Для получения заявленного штамма вируса гриппа в качестве родительского штамма использовали эпидемический штамм B/Novosibirsk/40/2017. Родительский штамм был выделен из мазка из носа и зева, полученного от девочки 6 лет, госпитализированной в специализированный стационар г. Новосибирска с симптомами острой респираторной инфекции в январе 2017 г. Штамм был выделен в культуре клеток MDCK (Madin-Darby canine kidney, культура клеток почки собаки) в соответствии с методикой, рекомендованной ВОЗ (24). На первом пассаже гибель клеток по апоптотическому пути наблюдалась через 3-4 суток с момента инфицирования. Индикация вируса была проведена в реакции гемагглютинации с эритроцитами петуха, гемагглютинирующая активность составила 5120 ГАЕ/мл. Инфекционная активность выделенного вируса в культуре клеток MDCK составила 6,87±0,24 lg TCID₅₀/мл. Штамм прошел 17 слепых пассажей через легкие мышей линии BALB/c, а затем 1 пассаж в культуре клеток MDCK.

Идентификация родительского и заявленного штаммов вируса

Идентификация родительского штамма B/Novosibirsk/40/2017 и заявленного штамма B/Novosibirsk/40/2017-MA осуществлена методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени с помощью тест-системы «АмплиСенс Influenza virus A/B-FL» («Интерлабсервис», Россия), а также в реакции торможения гемагглютинации с использованием гриппозных диагностикумов (ООО «ППДП», Россия). По результатам исследования родительский штамм B/Novosibirsk/40/2017 был отнесен к вирусу гриппа типа В генетической линии Виктория и был антигенно подобен циркулировавшим штаммам в эпидемический период 2017 года. Штамм B/Novosibirsk/40/2017 депонирован в базе данных GISAID под номером EPI_ISL_338315, а его адаптированный к мышам вариант - заявленный штамм B/Novosibirsk/40/2017-MA - под номером EPI_ISL_338316. Нуклеотидные последовательности родительского и заявленного штаммов приведены в Приложении 1.

Пример 1. Получение адаптированного к мышам заявленного штамма вируса гриппа B/Novosibirsk/40/2017-MA и определение 50% инфекционной дозы

Родительский штамм вируса гриппа B/Novosibirsk/40/2017 адаптировали в серии последовательных пассажей через легкие мышей линии BALB/c. Для этого 8-недельных мышей (масса тела 18-20 г) линии BALB/c интраназально инфицировали 50 мкл фосфатно-солевого буфера (ФСБ), содержащего 10⁴ TCID₅₀ вируса B/Novosibirsk/40/2017. Всех животных содержали на стандартном рационе с достаточным количеством воды. На третьи сутки после инфицирования трех мышей умерщвляли путем декапитации и из их легких готовили 10%-ные гомогенаты на ФСБ. После этого вновь проводили интраназальное заражение мышей 10%-ми гомогенатами легких в объеме 50 мкл. Параллельно на каждом пассаже оставляли по 4 животных для оценки клинических симптомов заболевания, измерения массы тела и определения летальности в течение 14 суток после инфицирования. Инфекционные титры вируса в легких мышей на каждом пассаже определяли титрованием 10%-го гомогената из легких мышей на клетках MDCK (табл. 1). После первого пассажа инфекционный титр вируса составил 3,5 lg TCID₅₀/ml. В процессе пассирования вируса через легкие мышей титр вируса изменялся в диапазоне от 4,0 lg TCID₅₀/ml до 5,88 lg TCID₅₀/ml.

После стабильного появления клинических признаков заболевания, начиная с 3-их суток после инфицирования, и значимого снижения массы тела до 30% у всех животных в группе был получен адаптированный вариант вируса гриппа В - заявленный штамм B/Novosibirsk/40/2017-MA и определено значение 50% инфекционной дозы для мышей (MID₅₀, 50% mouse infectious dose). Для этого 4 группы (по 10 животных в группе) 8-недельных мышей линии BALB/c с массой тела 18-20 г интраназально инфицировали под легким эфирным наркозом 10-кратными разведениями (1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000) полученного заявленного штамма B/Novosibirsk/40/2017-MA. На 4-е сутки после инфицирования всех животных умерщвляли путем декапитации и брали легкие для детекции вируса путем инфицирования культуры клеток MDCK полученными гомогенатами легочной ткани. Определяли количество животных в каждой группе, у которых в легких обнаруживался вирус, после чего рассчитывали величину MID₅₀ по методу Кербера в модификации И.П. Ашмарина и А.А. Воробьева по формуле: lgTCID50/ml=lgДн δ (ΣLi - 0,5) (25, 26). Величина MID₅₀ заявленного штамма вируса гриппа B/Novosibirsk/40/2017-MA для мышей линии BALB/c составила 4.6±0.261 g/ml, или 1,88 TCID₅₀.

Таким образом, был получен адаптированный к мышам заявленный штамм вируса гриппа B/Novosibirsk/40/2017-MA путем 17-ти последовательных слепых пассажей через легкие экспериментально инфицированных мышей линии BALB/c.

Пример 2. Генетический и филогенетический анализы родительского штамма вируса гриппа B/Novosibirsk/40/2017 (Victoria lineage) и его адаптированного варианта - заявленного штамма B/Novosibirsk/40/2017-MA

Анализ нуклеотидных последовательностей РНК сегментов 1-8 генома родительского штамма B/Novosibirsk/40/2017 и его адаптированного варианта - заявленного штамма B/Novosibirsk/40/2017-MA (SEQ ID NO 1-8) показал, что они принадлежат к генетической линии B/Victoria (Приложение 1). В результате анализа аминокислотных последовательностей белка НА (SEQ ID NO 10) этих штаммов выявлены мутации I117D, N129D, V146I относительно более ранних референс-штаммов, которые характерны для штаммов генетической подгруппы 1А линии B/Victoria. В аминокислотной последовательности белка NA (SEQ ID NO 11) исследованных штаммов также были выявлены характерные для генетической группы 1А линии B/Victoria аминокислотные замены N340D, E358K, S295R, I120V, K220N.

Филогенетических анализ штаммов B/Novosibirsk/40/2017 и B/Novosibirsk/40/2017-МА по всем сегментам генома выполнен методом филогенетических дендрограмм с использованием доступных в базе данных GISAID нуклеотидных последовательностей штаммов вируса гриппа типа В, выделенных от людей на территории РФ, ближнего зарубежья (Казахстан), а также вакцинные и референс-штаммы по классификации ВОЗ. Согласно филогенетическим дендрограммам исследованные штаммы формируют общую филогенетическую группу с другими изолятами из г. Новосибирска, а также штаммами из Алтайского региона и из Республики Казахстан. При этом все они филогенетически дистанцированы (хотя и незначительно) от штаммов вируса гриппа В, выделенных в иных регионах РФ.

Для выявления штаммов, наиболее генетически родственных родительскому штамму B/Novosibirsk/40/2017 и его адаптированному на мышах варианту - заявленному штамму B/Novosibirsk/40/2017-MA, был проведен BLAST-анализ, согласно которому исследованные штаммы на 99-100% идентичны вариантам вируса гриппа В, циркулировавшим в человеческой популяции на территории Новосибирской области, на Алтае и в Казахстане. Таким образом, родительский штамм B/Novosibirsk/40/2017 представляет собой генетический вариант вируса гриппа типа В, характерный для эпидемического сезона 2016-2017 гг. и наиболее генетически родственный штаммам, циркулировавшим в Азии.

При сравнительном анализе нуклеотидных и аминокислотных замен между родительским B/Novosibirsk/40/2017 и заявленным B/Novosibirsk/40/2017-MA штаммами было показано наличие синонимичных нуклеотидных замен: замены в нуклеотидной последовательности сегмента 6 РНК, кодирующей белки NA (SEQ ID NO 6), а именно замена G1037T в NA и G1044T - в NB; замена A2175G в нуклеотидной последовательности сегмента 2 РНК, кодирующей белок РВ1 (SEQ ID NO 2). Кроме того, была обнаружена нуклеотидная замена С641Т в нуклеотидной последовательности сегмента 4 РНК, кодирующей белок НА (SEQ ID NO 4), которая привела к аминокислотной замене T214I в аминокислотной последовательности белка НА (SEQ ID NO 10). Согласно анализу множественных выравниваний последовательностей НА из баз данных GenBank и GISAID, обнаруженная замена является редкой и присутствует в 0.43% НА штаммов вируса гриппа В. Выявленная аминокислотная замена локализована в антигенно активной субъединице НА-НА1, что потенциально может оказывать влияние на биологические свойства вируса.

Пример 3. Моделирование гриппозной инфекции у инбредных мышей линии BALB/c. Сравнение патогенности заявленного штамма B/Novosibirsk/40/2017-MA с родительским штаммом

Поскольку доклинические испытания противогриппозных лекарственных препаратов проводят, главным образом, на мышах, патогенность полученного штамма была тщательно исследована в экспериментах на этих животных в сравнении с родительским штаммом B/Novosibirsk/40/2017.

Был проведен эксперимент по моделированию гриппозной пневмонии у мышей линии BALB/c. В эксперименте использовали 8-недельных мышей линии BALB/c с массой тела 18-20 г. Было сформировано 3 группы мышей по 12 животных в каждой группе. Животных экспериментальной группы интраназально под легким эфирным наркозом инфицировали 10 MID₅₀ заявленного штамма B/Novosibirsk/40/2017-MA; животных группы сравнения интраназально инфицировали 10⁴ TCID₅₀ родительского штамма B/Novosibirsk/40/2017; животным контрольной группы интраназально вводили 0,9% раствора хлорида натрия. В течение 14 дней после инфицирования ежедневно производили взвешивание животных, измерение температуры тела, а также вели наблюдение за животными, регистрируя клинические признаки заболевания. Начиная с 3-их суток после инфицирования, у животных, инфицированных заявленным штаммом вируса, обнаруживались клинические проявления гриппозной инфекции, такие как взъерошенность шерсти, сгорбленная осанка, снижение аппетита, усиленное брюшное дыхание, у 3-5% инфицированных отмечался коньюктивит. Также, начиная с 3-их суток после инфицирования, регистрировали снижение массы и температуры тела (Фиг. 1, 2).

На 3-й и 6-е сутки после инфицирования по 3 животных из каждой группы выводили из эксперимента путем декапитации и брали образцы внутренних органов (легкие, головной мозг, сердце, печень, почки, селезенка) для определения титра вируса в культуре клеток MDCK. Для этого планшеты с суточным монослоем культуры клеток MDCK инфицировали десятикратными разведениями гомогенатов органов мышей в диапазоне концентраций 1:10-1:10000. Инфекционный титр вируса рассчитывали по методу Кербера в модификации И.П. Ашмарина и А.А. Воробьева (25) как описано выше, и выражали в lg TCID₅₀/ml. Вирус гриппа не был обнаружен ни в одном органе, кроме легких, как у животных, инфицированных заявленным штаммом вируса гриппа В, так и у животных, инфицированных родительским штаммом вируса. При этом в легких животных, инфицированных родительским штаммом, вирус обнаруживался только на 3-й сутки после инфицирования, в то время как в легких животных, инфицированных заявленным штаммом, вирус детектировали на 3-й и 6-е сутки после инфицирования. Средние значения инфекционного титра вируса представлены в таблице 2.

В ходе анализа полученных данных было показано, что на 3-й сутки после инфицирования заявленный штамм вируса гриппа В реплицировался в легких инфицированных животных в достоверно более высоком титре по сравнению с родительским штаммом. Кроме того, репликация заявленного штамма вируса гриппа в легких экспериментальных животных продолжалась до 6-х суток после инфицирования, в то время как родительский штамм не детектировался на 6-е сутки.

Пример 4. Оценка действия противовирусных препаратов осельтамивира этоксисукцинат и Тамифлю® при использовании заявленного штамма вируса гриппа B/Novosibirsk/40/2017-MA

Вирус гриппа В имеет важную эпидемиологическую значимость, особенно среди детского населения, вызывая, наряду с вирусом гриппа А, ежегодные сезонные подъемы заболеваемости. При этом известно, что препараты адамантанового ряда неэффективны в отношении вируса гриппа В, поэтому препаратом выбора при лечении гриппозной инфекции, вызванной вирусом гриппа В, является осельтамивир.

В связи с вышеизложенным было проведено сравнительное изучение специфической эффективности противогриппозных препаратов осельтамивир этоксисукцинат (27) или Тамифлю® при лечении гриппозной инфекции у экспериментальных животных, вызванной адаптированным вариантом вируса гриппа В.

Осельтамивир этосукцинат (этоксисукцинат этил (3S,4R,5S)-4-ацетамидо-5-амино-3-(1-этилпропокси)-циклогекс-1-ен-1-овой кислоты. Исходя из структурного сходства осельтамивира фосфата и осельтамивира этоксисукцината, можно предположить, что противовирусное действие последнего соединения, так же, как и у осельтамивира фосфата, реализуется за счет ингибирующего влияния на нейраминидазу вирусов гриппа. Предварительное исследование безопасности осельтамивира этоксисукцината показало высокую степень его безвредности. При внутрижелудочном введении мышам ЛД₅₀ превосходила 2000 мг/кг. Фармацевтическая субстанция (ФС) осельтамивира этоксисукцината представляет собой белый порошок без запаха, молекулярная масса которого составляет 474,5 г/моль. Производитель: ООО НПЦ «Химические технологии» (г. Томск).

Эксперимент по изучению специфической активности противовирусных препаратов осельтамивира этоксисукцинат и Тамифлю® проводили на мышах линии BALB/c (возраст 6-8 недель, вес 18-20 г). Было сформировано четыре группы мышей по 10 животных в группе. Животных 1-3 групп инфицировали интраназально под легким эфирным наркозом вирусом гриппа В штаммом B/Novosibirsk/40/2017-MA. Доза вируса составила 10 MID₅₀ в 50 мкл. Животным группы 4 (неинфицированные животные) интраназально вводили 0,9% раствор хлорида натрия в объеме 50 мкл. Затем животным группы 1 (экспериментальная группа) per os вводили ФС осельтамивира этоксисукцинат, а животным группы 2 (группа сравнения) - ФС Тамифлю® в дозе 25 мг/кг/сут. (в объеме 200 мкл) по следующей схеме: первую дозу препарата вводили через 2 часа после инфицирования, далее - через каждые 24 часа в течение 4 дней. Животным групп 3 (контроль вируса) и 4 per os вводили дистиллированную воду в объеме 200 мкл по такой же схеме. В течение 14 дней после инфицирования ежедневно производили взвешивание животных, измерение температуры тела, а также вели наблюдение за животными, регистрируя клинические признаки заболевания.

Наблюдение за группой неинфицированных мышей линии BALB/c (n=10), получавших интраназально однократно 0,9% раствор хлорида натрия в объеме 50 мкл, показало положительную динамику изменения массы тела животных в течение всего срока наблюдения от 18,70±0,2 г до 20,45±0,3 г, а колебания значений температуры тела, измеренные в ушном канале, составили 35,05-36,05°С.

Наблюдение за контрольной группой мышей линии BALB/c (n=10), инфицированных интраназально заявленный штамм вируса гриппа B в дозе 10 МIД₅₀ и получавших per os дистиллированную воду в объеме 200 мкл/сут в течение 5 дней, начиная через 2 ч после инфицирования, показало отсутствие летальности животных в течение всего периода наблюдения (14 суток). Начиная со 2-х суток после инфицирования, у животных отмечалось уменьшение массы тела (Фиг. 3). Максимальная потеря массы тела наблюдалась на 9-е сутки после инфицирования на 25,3% от исходной. Начиная с 10-х суток после инфицирования, отмечали положительную динамику изменения массы тела, которая, однако, не достигла исходных значений к окончанию периода наблюдения, составив 83,7% относительно исходной массы тела животных в данной группе. Значения температуры тела (Фиг. 4), измеренные в ушном канале, уменьшались со 2-х суток после инфицирования, достигнув минимального значения (32,80±0,36°С) на 10-е сутки после инфицирования, после чего наблюдалась положительная динамика изменения температуры тела.

Экспериментальная группа животных была представлена мышами линии BALB/c (n=10), которых интраназально инфицировали дозой 10 МIД₅₀ штамма B/Novosibirsk/40/2017-MA, а затем спустя 2 часа им вводили per os 200 мкл препарата осельтамивира этоксисукцинат в дозе 25 мг/кг/сут. В последующие 4 суток данный препарат вводили животным в той же дозе однократно в сутки.

Наблюдение за животными в течение 14 суток после инфицирования показало:

- к началу эксперимента среднее значение массы тела мышей в группе составило 18,97±0,3 г, а средняя температура тела - 35,0±0,3°С;

- признаки заболевания в виде отрицательной динамики изменения массы тела были отмечены, начиная с 3-х суток после инфицирования;

- минимальное среднее значение массы тела животных экспериментальной группы отмечено на 6-е сутки после инфицирования, составив 90,68±1,57% от исходной средней массы тела. Начиная с 7-х суток после инфицирования, отмечали положительную динамику изменения массы тела, которая достигла исходных значений к 9-м суткам после инфицирования;

- изменения температуры тела животных экспериментальной группы были незначительными в течение всего периода наблюдения;

- летальности среди животных экспериментальной группы не наблюдалось в течение всего периода наблюдения.

Группа сравнения была представлена мышами линии BALB/c (n=10), которых интраназально инфицировали дозой 10MIД₅₀ штамма B/Novosibirsk/40/2017-МА, а затем спустя 2 часа им вводили per os 200 мкл препарата Тамифлю® в дозе 25 мг/кг/сут. В последующие 4 суток данный препарат вводили животным в той же дозе однократно в сутки.

Наблюдение за животными в течение 14 суток после инфицирования показало:

- к началу эксперимента среднее значение массы тела мышей в группе составило 19,34±0,25 г, а средняя температура тела - 35,04±0,17°С;

- признаки заболевания в виде отрицательной динамики изменения массы тела были отмечены, начиная с 3-х суток после инфицирования;

- минимальное среднее значение массы тела животных группы сравнения отмечено на 6-е сутки после инфицирования, составив 89,66±1,3% от исходной средней массы тела. Начиная с 7-х суток после инфицирования, отмечали положительную динамику изменения массы тела. При этом средняя масса тела животных в группе достигла исходных значений к 10-м суткам после инфицирования, а к концу периода наблюдения составила 104,91±1,24% относительно исходной;

- изменения температуры тела животных группы сравнения были незначительными в течение всего периода наблюдения и достоверно не отличались от среднего значения температуры тела животных данной группы в начале эксперимента, а также относительно среднего значения температуры тела неинфицированных животных;

- летальности среди животных группы сравнения не наблюдалось в течение всего периода наблюдения.

Таким образом, при сравнении данных о массе и температуре тела экспериментальных животных выявлено, что у животных, получавших лекарственные препараты, минимальная масса тела была зарегистрирована на 6-е сутки после инфицирования, составив 89,66% от исходной массы у животных, получавших Тамифлю®, и 90,68% у животных, получавших осельтамивира этоксисукцинат. При этом она была достоверно выше средней массы тела инфицированных животных, не получавших лечения, как у животных, получавших Тамифлю® (t-критерий Стьюдента равен 6,64 при р<0,001), так и у животных, получавших осельтамивира этоксисукцинат (t-критерий Стьюдента равен 5,33 при р<0,001). Кроме того, средняя масса тела инфицированных животных, не получавших лечения, достигла минимальных значений на 9-е сутки после инфицирования, составив 74,7% от исходной, что было достоверно ниже средней массы тела животных, получавших осельтамивира этоксисукцинат (t-критерий Стьюдента равен 11,77 при р<0,001) и Тамифлю® (t-критерий Стьюдента равен 11,61 при р<0,001).

Самые низкие значения температуры тела животных, получавших лекарственные препараты, отмечались на 5-е сутки после инфицирования, но была достоверно выше среднего значения температуры тела инфицированных животных, не получавших лечения, которая составила на 5-е сутки 33,50±0,22°С (35,15±0,22°С у животных, получавших Тамифлю®, t-критерий Стьюдента равен 5,30 при р<0,001, и 34,89±0,15°С у животных, получавших осельтамивира этоксисукцинат, t-критерий Стьюдента равен 5,22 при р<0,001). Кроме того, отмечено, что изменения температуры тела у животных, получавших лечение, не имели достоверных различий относительно исходных значений температуры тела. Средняя температура тела нелеченых животных достигала минимальных значений на 8-е сутки после инфицирования, составив 33,02±0,45°С, что было достоверно ниже температуры тела у животных, получавших Тамифлю® (36,06±0,47°С, t-критерий Стьюдента равен 4,67 при р<0,001), и у животных, получавших осельтамивира этоксисукцинат, (35,64±0,46°С, t-критерий Стьюдента равен 4,07 при р<0,001), измеренной на эти же сутки.

При этом не было выявлено достоверных отличий значений массы и температуры тела между группами животных, получавших Тамифлю® и осельтамивира этоксисукцинат.

Пример 5. Оценка антинейраминидазной активности осельтамивира этоксисукцината и Тамифлю® в отношении вируса гриппа В (родительский и заявленный штаммы) in vitro

Для проведения работ по оценке антинейраминидазной активности препарата осельтамивира этоксисукцината в сравнении с Тамифлю® в отношении вируса гриппа В (Victoria lineage) родительского штамма B/Novosibirsk/40/2017 и заявленного штамма B/Novosibirsk/40/2017-MA были наработаны пулы вируссодержащех жидкостей (ВСЖ). Для этого использовали исходный вируссодержащий биологический материал. Готовили его десятикратные разведения (1-10) на стерильном физиологическом растворе. Затем каждое разведение оценивали по продукции гемагглютинина в реакции гемагглютинации (РГА) и 50% инфекционному титру на культуре клеток MDCK. Отобранные образцы с наибольшими показателями использовались для наработки пулов на 2-х культуральных флаконах по 10 мл объема каждый. Общий пул получали путем объединения ВСЖ из двух культуральных флаконов, зараженных одинаковым разведением вируса. Вируссодержащий раствор хранили при -70°С.

Оценка антинейраминидазной активности лекарственного средства на основе осельтамивира этоксисукцината и Тамифлю® определялась по модифицированной флуориметрии, используя флюориметричный субстрат 2'-(4-метилумбеллиферил)-α-D-N-ацетилнейраминовой кислоты (Munana; Sigma-Aldrich). Вирусы гриппа стандартизировали до эквивалентной активности нейраминидазы (NA-neuraminidase) и инкубировали с осельтамивира этоксисукцинатом и Тамифлю® при значениях разведений от 5×10^-3 до 5М. Флуоресценцию свободного 4-метилумбеллиферила измеряли на мультимодальном ридере планшетного формата Varioscan (Thermo Fisher Scientific) при длинах волн возбуждения и излучения 360 нм и 460 нм, соответственно.

Значения микромолярной 50% ингибирующей концентрации (IC_50s - micromolar 50% inhibitory concentrations;) были определены с помощью программы GraphPad Prism и по сравнению со значениями, представленными для группы эталонных вирусов гриппа А и В, предоставленных антивирусной группой Международного общества по гриппу и другим респираторным вирусным заболеваниям (ISIRV) (28).

Полученные в ходе исследования данные обрабатывались стандартными методами нахождения средних значений и их средних ошибок. Обработку данных производили в программе Microsoft Office Excel 2016. Значения IC₅₀ рассчитывали с помощью программы GraphPad Prism.

По полученным данным были определены дозы лекарственных средств осельтамивира этоксисукцината и Тамифлю® способные подавлять 50% активности вируса гриппа В на примере штаммов B/Novosibirsk/40/2017 (Victoria lineage) и B/Novosibirsk/40/2017-MA. Для осельтамивира этоксисукцината в отношении штамма B/Novosibirsk/40/2017 (Victoria lineage) IC₅₀ составила 75,68±10,42 μМ и для штамма B/Novosibirsk/40/2017-MA IC₅₀=107,645±53,96 μМ. Для Тамифлю® в отношении штамма B/Novosibirsk/40/2017 (Victoria lineage) IC₅₀ составила 122,7±24,04 μМ и для штамма B/Novosibirsk/40/2017-MA IC₅₀=43,47±8,12 μМ.

Анализ действия исследуемых лекарственных средств на нейраминидазную активность вируса гриппа В (родительский и заявленный штаммы) показал, что осельтамивир этоксисукцинат и Тамифлю® снижают активность нейраминидазы одинаково эффективно. Достоверных различий между сравниваемыми группами обнаружено не было.

Перечень фигур

Фиг. 1. Динамика изменения массы тела инфицированных мышей линии BALB/c

Примечание: K - животные контрольной группы, получавшие интраназально однократно 0,9% раствор NaCl; 40B-W - животные группы сравнения, инфицированные интраназально 10⁴ TCID₅₀ родительского штамма B/Novosibirsk/40/2017; 40 В-MA - животные, инфицированные интраназально 10⁴ TCID₅₀ заявленного штамма B/Novosibirsk/40/2017-MA. ^-р<0,05; р<0,01; ^-р<0,001 - при сравнении данных от мышей группы 40B-W и группы 40 В-МА (по t критерию Стьюдента).

Фиг. 2. Динамика изменения температуры тела инфицированных мышей линии BALB/c.

Примечание: K - животные контрольной группы, получавшие интраназально однократно 0,9% раствор NaCl; 40B-W - животные группы сравнения, инфицированные интраназально 10⁴ TCID₅₀ родительского штамма B/Novosibirsk/40/2017; 40В-МА - животные, инфицированные интраназально 10⁴ TCID₅₀ заявленного штамма B/Novosibirsk/40/2017-МА. ^-p<0,05; p<0,01; ^-р<0,001 - достоверность различий при сравнении данных от мышей группы 40B-W и группы 40В-МА (по t критерию Стьюдента).

Фиг. 3. Динамика изменения массы тела мышей линии BALB/c

Примечание: неинфицированные животные - животные, получавшие интраназально однократно 0,9% раствора NaCl, затем получавшие per os дистиллированную воду; 40В-МА - животные, инфицированные интраназально 10 MID₅₀ штамма B/Novosibirsk/40/2017-МА, затем получавшие per os дистиллированную воду; 40В-МА + этоксисукцинат - животные, инфицированные интраназально 10 MID₅₀ штамма B/Novosibirsk/40/2017-МА, затем получавшие per os осельтамивира этоксисукцинат; 40В-МА + Тамифлю® - животные, инфицированные интраназально 10 MID₅₀ штамма B/Novosibirsk/40/2017-МА, затем получавшие per os Тамифлю®. - р<0,05; р<0,01; - р<0,001 - достоверность различий при сравнении данных от мышей группы 40В-МА и «40В-МА + Тамифлю» (по t критерию Стьюдента). * - р<0,05; ** - р<0,01; ** - р<0,001 - достоверность различий при сравнении данных от мышей группы 40В-МА и «40В-МА + этоксисукцинат» (по t критерию Стьюдента).

Фиг. 4. Динамика изменения температуры тела мышей линии BALB/c.

Примечание: неинфицированные животные - животные, получавшие интраназально 0,9% раствор NaCl, затем получавшие per os дистиллированную воду; 40В-МА - животные, инфицированные интраназально 10 MID₅₀ штамма B/Novosibirsk/40/2017-МА, затем получавшие per os дистиллированную воду; 40В-МА + этоксисукцинат - животные, инфицированные интраназально 10 MID₅₀ штамма B/Novosibirsk/40/2017-МА, затем получавшие per os осельтамивира этоксисукцинат; 40В-МА + Тамифлю - животные, инфицированные интраназально 10 MID₅₀ штамма B/Novosibirsk/40/2017-МА, затем получавшие per os Тамифлю®. - р<0,05; р<0,01; - р<0,001 - достоверность различий при сравнении данных от мышей группы 40В-МА и «40В-МА + Тамифлю» (по t критерию Стьюдента). * - р<0,05; ** р<0,01; *** - р<0,001 - достоверность различий при сравнении данных от мышей группы 40В-МА и «40В-МА + этоксисукцинат» (по t критерию Стьюдента).

Список использованных источников

1. Williams, М.A. Effect of mutations and deletions in a bicistronic mRNA on the synthesis of influenza В virus NB and NA glycoproteins / M.A. Williams, R.A. Lamb // J Virol. - 1989. - 63 (1). - P. 28-35.

2. Betakova, T. The NB protein is an integral component of the membrane of influenza В virus / T. Betakova, M.V. Nermut, A.J. Hay // J Gen Virol. - 1996. - 77 (11). - P. 2689-2694.

3. Shaw, M.W. A previously unrecognized influenza В virus glycoprotein from a bicistronic mRNA that also encodes the viral neuraminidase / M.W. Shaw, P.W. Choppin, R.A. Lamb // Proc Natl Acad Sci USA. - 1983. - 80 (16). - P. 4879-4883.

4. Sunstrom, N.A. Ion channels formed by NB, an influenza В virus protein / N.A. Sunstrom, L.S. Premkumar, A. Premkumar et al. // J Membr Biol. - 1996. - 150 (2). - P. 127-132.

5. Brassard, D.L. Influenza В virus NB glycoprotein is a component of the virion / D.L. Brassard, G.P. Leser, R.A. Lamb // Virology. - 1996. - 220 (2). - P. 350-360.

6. Fischer, W.B. Transmembrane peptide NB of influenza B: a simulation, structure, and conductance study / W.B. Fischer, M. Pitkeathly, B.A. Wallace et al. // Biochemistry. - 2000. - 39 (41). - P. 12708-12716.

7. Sunstrom, N.A. Ion channels formed by NB, an influenza В virus protein / N.A. Sunstrom, L.S. Premkumar, A. Premkumar et al. // J Membr Biol. - 1996. - 150 (2). - P. 127-132.

8. Hatta, M. The NB protein of influenza В virus is not necessary for virus replication in vitro / M. Hatta, Y. Kawaoka // J Virol. - 2003. - 77 (10). - P. 6050-6054.

9. Osterhaus, A.D. Influenza В virus in seals / A.D. Osterhaus, G.F. Rimmelzwaan, B.E. Martina et al. // Science. - 2000. - 288 (5468). - P. 1051-1053.

10. Bodewes, R. Recurring influenza В virus infections in seals / R. Bodewes, D. Morick, G. de Mutsert et al. // Emerging infectious diseases. - 2013. - №19(3). - P. 511-2.

11. Щелканов, М.Ю. Таксономическая структура Orthomyxoviridae: современное состояние и ближайшие перспективы // М.Ю. Щелканов, И.Т. Федякина, Е.С. Прошина [и др.] / Вестник российской академии медицинских наук. - 2011. - Т. 5. - С. 12-19.

12. Чен М. Мир в начале пандемии гриппа 2009 года.

http://www.who.int/mediacentre/news/statements/2009/h1n1_pandemic_phase6_20090611/ru/

13. ICTV. International Committee on Taxonomy of Viruses. - 2012. - http://www.ictvonline.org/virusTaxonomy.asp

14. Rota, P.A. Laboratory characterization of a swine influenza virus isolated from a fatal case of human influenza / P.A. Rota, E.R. Rocha, M.W. Harmon et al. // Journal of clinical microbiology. - 1989. - №27(6). - P. 1413-1416.

15. McCullers, JA. Insights into the interaction between influenza virus and pneumococcus / J.A. McCullers // Clinical microbiology reviews. - 2006. - №19. - P. 571-582.

16. Chen, R. Avian influenza virus exhibits rapid evolutionary dynamics / R. Chen, E.C. Holmes // Mol Biol Evol. - 2006. - 23 (12). - P. 2336-2341.

17. Shaw M.W., Xu X., Li Y., Normand S., Ueki R.T., Kunimoto G.Y., Hall H., Klimov A., Cox N.J., Subbarao K. Reappearance and global spread of variants of influenza B/Victoria/2/87 lineage viruses in the 2000-2001 and 2001-2002 seasons // Virology. 2002. V. 303(1). P. 1-8.

18. Jain, A. Genetic changes in influenza A(H3N2) viruses circulating during 2011 to 2013 in northern India (Lucknow) / A. Jain, T. Dangi, B. Jain et al. // J Med Virol. - 2015. - 87 (8). - P. 1268-1275

19. Патент на изобретение РФ №2105063 Штамм вируса INFLUENZA В (Ленинград) 14/76/50, предназначенный для получения безвредных и высокорепродуктивных вирусов гриппа В для производства инактивированных и живых гриппозных вакцин, опубл. 20.02.1998, МПК C12N 7/00, A61K 39/145.

20. Патент на изобретение РФ №2215786 Штамм вируса гриппа В/60/ Иоханнесбург/99/50 для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и детей, опубл. 10.11.2003, МПК МПК C12N 7/00, А61К 39/145.

21. Патент на изобретение РФ №2307161 Штамм вируса гриппа В/60/Джилин/03/1 для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и детей, дата публ. 27.09.2007. МПК C12N 7/00, A61K 39/145.

22. Патент на изобретение РФ №2605926 Штамм вируса гриппа В/60/Пхукет/2013/26 для производства живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и для детей, опубл. 27.12.2016, МПК C12N 7/00, A61K 39/145, А61З 31/16.

23. Патент на изобретение РФ №25229772 Холодоадаптированный штамм вируса гриппа В-В/Виктория/2/63/87, предназначенный в качестве штамма-донора аттенуации для получения реассортантов холодоадаптированных штаммов для живой гриппозной вакцины, опубл. 27.09.2014, МПК C12N 7/00, A61K 39/145.

24. Manual for the laboratory diagnosis and virological surveillance of influenza // WHO. 2011 - 153 p.

25. Ашмарин, И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях. М.: Медгиз, 1962. - 179 с.

26. WHO. 2010b. Evolution of a pandemic A(H1N1) 2009, April 2009 - March 2010. World Health Organization. Situation Update, 8 March 2014.

http://whqlibdoc.who.int/publications/2010/9789241599924_eng.pdf

27. Патент на изобретение РФ №2639158 Этил (3S,4R,5S)-4-ацетамидо-5-амино-3-(1-этилпропокси)циклогекс-1-ен-1-карбоксилата этоксисукцинат в качестве противовирусного препарата и способ его получения, опубл. 20.12.2017, МПК С07С 233/52, A61K 31/16, А61Р 31/12.

28. ISIRV. 2014. Panel of influenza A and В viruses is for the assessment of neuraminidase inhibitor susceptibility.

https://isirv.org/site/images/AVG_panel_leaflet_Nov14.pdf. Accessed February 2016..

Штамм вируса гриппа В/Novosibirsk/40/2017-MA для изучения лечебной и профилактической эффективности противовирусных препаратов in vitro и in vivo

Перечень нуклеотидных последовательностей РНК

штамма В/Novosibirsk/40/2017-MA

Все нуклеотидные последовательности РНК указаны в направлении от 5' к 3' концу.

SEQ ID NO 1. Нуклеотидная последовательность сегмента 1 РНК, кодирующая белок РВ2 размером 2313 п.н.

ATGACATTAGCCAAAATTGAATTGTTAAAACAACTGCTAAGGGACAATGA

GGCCAAAACAGTTTTGAAGCAAACAACAGTAGACCAATATAACATAATAA

GAAAATTCAATACATCAAGGATTGAAAAGAATCCTTCACTAAGGATGAAG

TGGGCCATGTGTTCTAACTTTCCCTTGGCTCTAACCAAGGGCGATATGGC

AAACAGAATCCCCTTGGAATACAAAGGGATACAACTTAAAACAAATGCTG

AAGACATAGGAACTAAAGGCCAAATGTGCTCAATAGCAGCAGTTACTTGG

TGGAATACATATGGACCGATAGGAGACACTGAAGGTTTTGAAAGGGTCTA

CGAAAGCTTTTTTCTCAGAAAAATGAGACTTGACAACGCCACTTGGGGCC

GGATAACTTTTGGCCCAGTTGAAAGAGTGAGAAAAAGAGTACTACTAAAC

CCTCTCACCAAGGAAATGCCTCCGGATGAGGCGAGCAATGTGATAATGGA

AATATTGTTCCCTAAAGAAGCAGGAATACCAAGAGAATCCACTTGGATAC

ATAGGGAACTGATAAAAGAAAAAAGAGAAAAATTGAAAGGGACAATGATA

ACTCCAATCGTACTGGCATACATGCTTGAAAGAGAACTGGTTGCTCGAAG

AAGATTCTTGCCAGTGGCAGGAGCAACATCAGCTGAGTTCATAGAAATGC

TACACTGCTTACAAGGTGAAAATTGGAGACAAATATATCACCCAGGAGGG

AATAAATTAACTGAGTCCAGGTCTCAATCAATGATAGTAGCTTGTAGGAA

AATAATCAGAAGATCAATAGTCGCTTCAAACCCACTGGAGCTAGCTGTAG

AAATTGCAAACAAGACTGTGATAGATACTGAACCTTTAAAGTCATGTCTG

GCAGCCATAGACGGAGGTGATGTAGCTTGTGACATAATAAGAGCTGCATT

AGGACTAAAGATCAGACAAAGACAAAGATTTGGACGGCTTGAGCTAAAAA

GAATATCAGGAAGAGGATTCAAAAATGATGAAGAAATATTAATAGGAAAC

GGAACAATACAGAAGATTGGAATATGGGACGGGGAAGAGGAGTTCCATGT

AAGATGTGGTGAATGCAGGGGAATATTAAAAAAGAGTAAAATGAAACTGG

AAAAACTACTGATAAATTCAGCCAAAAAGGAGGATATGAGAGATTTAATA

ATCTTATGCATGGTATTTTCTCAAGACACTAGGATGTTCCAAGGGGTGAG

AGGAGAAATAAATTTTCTTAATCGAGCAGGCCAACTTTTATCTCCAATGT

ACCAACTCCAACGATATTTTTTGAATAGAAGCAACGACCTTTTTGATCAA

TGGGGGTATGAGGAATCACCCAAAGCAAGTGAACTACATGGGATAAATGA

ATCAATGAATGCATCTGACTATACATTGAAAGGGATTGTAGTGACAAGAA

ATGTAATTGACGACTTTAGCTCTACTGAAACAGAAAAAGTATCCATAACA

AAAAATCTTAGCTTAATAAAAAGGACTGGAGAAGTCATAATGGGAGCTAA

TGACGTGAGTGAATTAGAATCACAAGCACAGCTGATGATAACATATGATA

CACCTAAAATGTGGGAAATGGGAACAACCAAAGAACTGGTGCAAAACACT

TATCAATGGGTGCTAAAAAACTTGGTGACACTGAAGGCTCAGTTTCTTCT

AGGAAAAGAGGACATGTTCCAATGGGATGCATTTGAAGCATTTGAGAGCA

TAATTCCTCAGAAAATGGCTGGTCAGTACAGTGGATTTGCAAGAGCAGTG

CTCAAACAAATGAGAGACCAGGAGGTTATGAAAACTGACCAGTTCATAAA

GTTGCTGCCTTTTTGTTTCTCACCACCAAAATTAAGGAGCAATGGGGAGC

CTTATCAATTCTTAAAACTTGTATTGAAAGGAGGAGGGGAAAATTTCATC

GAAGTAAGGAAAGGATCTCCTCTATTTTCCTATAATCCACAAACAGAAGT

CTTAACTATATGCGGCAGAATGATGTCATTAAAAGGGAAAATTGAAGATG

AAGAAAGGAATAGATCAATGGGGAATGCAGTATTAGCAGGCTTTCTCGTT

AGTGGCAAGTATGACCCAGATCTTGGAGATTTCAAAACTATTGAAGAACT

TGAAAAGCTGAAACCAGGGGAAAAGGCAAACATCTTGCTTTATCAAGGAA

AACCAGTTAAAGTAGTGAAAAGGAAAAGGTATAGTGCTTTGTCCAATGAC

ATTTCACAAGGAATTAAGAGACAAAGAATGACAGTTGAGTCTATGGGGTG

GGCCTTGAGCTAA

SEQ ID NO 2. Нуклеотидная последовательность сегмента 2 РНК, кодирующая белок PB1, размером 2259 п.н.

ATGAATATAAATCCTTATTTTCTCTTCATAGATGTGCCCGTACAGGCAGC

AATTTCAACAACATTCCCATACACTGGTGTTCCCCCTTATTCCCATGGAA

CAGGAACAGGTTACACAATAGACACAGTGATCAGAACGCATGAGTACTCA

AACAAGGGGAAACAGTACATTTCTGATGTTACAGGATGCACAATGGTGGA

TCCAACAAATGGACCATTACCCGAAGATAATGAGCCGAGTGCCTATGCGC

AATTAGATTGCGTTTTAGAGGCTTTGGATAGAATGGATGAAGAACACCCA

GGTCTTTTTCAAGCAGCCTCACAGAATGCTATGGAGGCCCTAATGGTCAC

AACTGTAGACAAATTAACCCAGGGGAGACAGACTTTTGATTGGACAGTAT

GCAGAAACCAACCTGCTGCAACGGCACTGAATACAACAATAACCTCTTTT

AGGTTGAATGATTTAAATGGAGCCGACAAAGGTGGATTAATACCTTTTTG

CCAGGATATCATTGATTCATTAGACAGACCTGAAATGACTTTCTTCTCAG

TAAAGAATATAAAGAAAAAATTGCCTGCCAAAAACAGAAAGGGTTTCCTC

ATAAAGAGGATACCAATGAAGGTAAAAGACAAAATAACCAAAGTGGAATA

CATCAAAAGAGCATTATCATTAAACACAATGACAAAAGACGCTGAAAGAG

GCAAACTGAAAAGAAGAGCGATTGCCACTGCTGGAATACAAATAAGAGGG

TTTGTATTAGTAGTTGAAAACTTGGCTAAAAATATATGTGAAAATCTAGA

ACAAAGTGGTTTACCAGTAGGTGGAAACGAGAAGAAAGCCAAACTGTCAA

ATGCAGTGGCCAAAATGCTCAGTAACTGCCCACCAGGAGGGATTAGCATG

ACAGTAACAGGAGACAATACAAAATGGAATGAATGTTTAAACCCAAGAAT

CTTTTTGGCCATGACTGAAAGAATAACCAGAGACAGCCCAGTTTGGTTCA

GGGATTTTTGTAGTATAGCACCGGTCCTGTTCTCCAATAAGATAGCAAGA

TTGGGGAAAGGATTTATGATAACAAGCAAAACAAAAAGACTAAAGGCTCA

AATACCTTGTCCTGATCTGTTTAGTATACCATTAGAAAGATATAATGAAG

AAACAAGGGCAAAATTGAAGAAGCTAAAACCATTCTTCAATGAAGAAGGA

ACTGCATCTTTGTCACCTGGGATGATGATGGGAATGTTTAATATGCTATC

TACCGTGTTGGGAGTAGCTGCACTAGGTATCAAGAACATTGGAAACAAAG

AATACCTATGGGATGGACTGCAATCTTCTGATGATTTTGCTCTATTTGTT

AATGCAAAGGATGAAGAAACATGTATGGAAGGAATAAACGACTTTTACCG

AACATGTAAATTATTGGGAATAAACATGAGCAAAAAGAAAAGTTACTGTA

ATGAGACTGGAATGTTTGAATTTACAAGCATGTTCTACAGAGATGGATTT

GTATCTAATTTTGCAATGGAACTCCCTTCGTTTGGGGTTGCTGGAGTAAA

TGAATCAGCAGATATGGCAATAGGAATGACAATAATAAAGAACAACATGA

TCAACAATGGAATGGGTCCAGCAACAGCACAAACAGCCATACAGCTATTC

ATAGCTGATTATAGATACACCTACAAATGCCACAGGGGAGATTCCAAAGT

AGAAGGAAAGAGAATGAAAATCATAAAGGAGTTATGGGAAAACACTAAAG

GAAGAGATGGTCTATTAGTAGCAGATGGTGGGCCCAACATTTACAATTTG

AGAAACTTGCATATCCCAGAAATAGTATTGAAGTATAATCTAATGGACCC

TGAATACAAAGGGCGGTTACTTCATCCTCAAAATCCCTTTGTGGGACATT

TGTCTATTGAGGGCATCAAAGAGGCAGACATAACTCCAGCACATGGTCCA

GTAAAGAAAATGGACTACGATGCGGTGTCTGGAACTCATAGTTGGAGAAC

CAAAAGAAACAGATCTATACTAAACACTGATCAGAGGAACATGATTCTTG

AGGAACAATGCTACGCTAAATGTTGCAACCTATTTGAGGCCTGTTTTAAC

AGTGCATCATACAGGAAGCCAGTGGGTCAACATAGCATGCTTGAGGCTAT

GGCCCACAGATTAAGAATGGATGCGCGATTAGATTATGAATCAGGGAGAA

TGTCAAAAGATGATTTTGAGAAAGCAATGGCTCACCTTGGTGAGATTGGG

TACATATAA

SEQ ID NO 3. Нуклеотидная последовательность сегмента 3 РНК, кодирующая белок РА, размером 2165 п.н.

ATGGATACTTTTATTACAAGAAACTTCCAGACTACAATAATACAAAAGGC

CAAAAACACAATGGCAGAATTTAGTGAAGATCCTGAATTGCAACCAGCAA

TGCTATTCAATATCTGCGTCCATCTAGAGGTTTGCTATGTAATAAGTGAC

ATGAATTTTCTTGACGAAGAAGGAAAAGCATATACAGCATTAGAAGGACA

AGGGAAAGAACAAAACTTGAGACCACAATATGAAGTAATTGAGGGAATGC

CAAGAACCATAGCATGGATGGTCCAGAGATCCTTAGCTCAAGAGCATGGA

ATAGAGACTCCCAAGTATCTGGCTGATTTGTTTGATTACAAAACCAAAAG

ATTTATAGAAGTTGGAATAACAAAGGGATTGGCTGATGATTACTTTTGGA

AAAAGAAAGAAAAATTGGGAAATAGCATGGAACTGATGATATTCAGCTAC

AATCAAGACTACTCGTTAAGTAATGAATCCTCATTGGATGAGGAAGGGAA

AGGGAGAGTGCTAAGCAGACTCACAGAACTTCAGGCTGAATTAAGTCTGA

AAAATTTATGGCAAGTTCTCATAGGAGAAGAAGATGTTGAAAAGGGAATT

GATTTTAAACTTGGACAGACAATATCTAGACTAAGGGATATATCTGTTCC

AGCCGGTTTCTCCAACTTTGAAGGAATGAGGAGCTACATAGACAATATAG

ACCCAAAAGGAGCAATAGAGAGAAATCTAGCAAGGATGTCTCCCTTAGTA

TCAGTCACACCTAAAAAGTTAACATGGGAGGACCTAAGACCAATAGGGCC

TCACATTTACGACCATGAGCTACCAGAAGTTCCATATAATGCCTTTCTTC

TAATGTCTGATGAACTAGGATTGGCCAATATGACTGAGGGAAAGTCCAAA

AAACCGAAGACATTAGCCAAAGAATGTCTAGAAAAGTACTCAACACTACG

GGATCAAACTGACCCAATATTAATAATGAAAAGCGAGAAAGCTAACGAAA

ATTTCCTATGGAAGCTTTGGAGAGACTGTGTAAATACAATAAGTAATGAG

GAAGCAAGTAACGAGTTACAGAAAACCAATTATGCCAAATGGGCCACAGG

GGATGGATTAACATACCAGAAAATAATGAAAGAAGTAGCAATAGATGACG

AAACAATGTGCCAAGAAGAGCCTAAAATCCCTAACAAATGTAGAGTGGCT

GCTTGGGTTCAAACAGAGATGAATCTATTGAGCACTCTGACAAGTAAAAG

AGCTCTGGACCTACCAGAAATAGGGCCAGACATAGCACCCGTAGAGCATG

TAGGAAGTGAAAGAAGGAAATACTTTGTTAACGAAATCAACTACTGTAAG

GCCTCTACAGTTATGATGAAGTATGTGCTTTTTCATACTTCATTGTTGAA

TGAAAGCAATGCCAGCATGGGAAAATACAAAGTAATACCAATAACCAACA

GAGTAGTAAATGAAAAAGGAGAAAGTTTCGACATGCTTTACGGTTTGGCG

GTTAAAGGACAATCTCATCTGAGGGGAGATACTGATGTTGTAACAGTTGT

AACTTTTGAATTTAGTAGTACAGATCCCAGAGTGGACTCAGGAAAGTGGC

CAAAATATACTGTGTTTAGGATTGGCTCCCTATTTGTGAGTGGGAGGGAA

AAATCTGTGTACTTGTACTGCAGAGTGAATGGCACAAATAAGATCCAAAT

GAAATGGGGAATGGAAGCTAGAAGATGTTTGCTTCAATCAATGCAACAAA

TGGAGGCAATTGTTGAACAGGAATCATCAATACAAGGATATGACATGACC

AAAGCCTGTTTCAAGGGAGACAGAATAAATAGCCCCAAAACTTTCAGTAT

TGGAACTCAAGAAGGAAAACTAGTAAAAGGATCCTTTGGAAAAGCACTAA

GAGTAATATTTACTAAATGCTTGATGCACTATGTATTTGGAAATGCCCAA

TTGGAGGGGTTTAGTGCCGAGTCTAGGAGACTTCTATTGTTGATTCAAGC

ATTAAAGGACAGAAAGGGTCCTTGGGTGTTCGACTTAGAGGGAATGTATT

CTGGAATAGAAGAATGTATTAGCAACAACCCTTGGGTGATACAGAGTGTA

TACTGGTTCAATGAATGGTTGGGCTTTGAAAAGGAGGGGAGTAAAGTGTT

GGAATCAGTGGATGG

SEQ ID NO 4. Нуклеотидная последовательность сегмента 4 РНК, кодирующая белок НА, размером 1488 п.н.

ATGAAGGCAATAATTGTACTACTCATGGTAGTAACATCCAATGCAGACCG

AATCTGCACTGGGATAACATCGTCAAACTCACCACATGTCGTCAAAACTG

CTACTCAAGGGGAGGTCAATGTGACCGGTGTAATACCACTGACAACAACA

CCCACCAAATCTCATTTTGCAAATCTCAAAGGAATAGAAACCAGGGGAAA

ACTATGCCCAAAATGCCTCAACTGCACAGATCTGGATGTAGCCTTGGGCA

GACCAAAATGCACAGGGAAAATACCCTCTGCAAGGGTTTCAATACTCCAT

GAAGTCAGACCTGTTACATCTGGGTGCTTTCCTATAATGCACGATAGAAC

AAAAATTAGACAGCTGCCTAACCTTCTCCGAGGATACGAACATGTCAGGT

TATCAACTCACAACGTTATCAATGCAGAAGATGCACCAGGAGGACCCTAC

AAAATTGGAACCTCAGGGTCTTGCCCTAACATTACCAATGGAAACGGATT

CTTCGCAACAATGGCTTGGGCCGTCCCAAAAAACGACAAAAACAAAACAG

CAACAAATCCATTAACAATAGAAGTACCATACATTTGTACAGAAGGAGAA

GACCAAATTACCGTTTGGGGGTTCCACTCTGACAACGAGATCCAAATGGC

AAAGCTCTATGGGGACTCAAAGCCCCAGAAGTTCACCTCATCTGCCAACG

GAGTGACCACACATTACGTTTCACAGATTGGTGGCTTCCCAAATCAAACA

GAAGACGGAGGACTACCACAAAGTGGCAGAATTGTTGTTGATTACATGGT

GCAAAAATCTGGAAAAACAGGAACAATTACCTATCAAAGAGGTATTTTAT

TGCCTCAAAAGGTGTGGTGCGCAAGTGGCAGGAGCAAAGTAATAAAAGGA

TCCTTGCCTTTAATTGGAGAAGCAGATTGCCTCCATGAAAAATACGGTGG

ATTGAACAAAAGCAAGCCTTACTACACAGGGGAACATGCAAAGGCCATAG

GAAATTGCCCAATATGGGTGAAAACACCCTTGAAGCTGGCCAATGGAACC

AAATATAGACCTCCTGCAAAACTATTAAAGGGAAGGGGTTTCTTCGGAGC

TATTGCTGGTTTCTTAGAGGGAGGATGGGAAGGAATGATTGCAGGTTGGC

ACGGATACACATCCCATGGGGCACATGGAGTAGCGGTGGCAGCTGACCTT

AAGAGCACTCAAGAGGCCATAAACAAGATAACAAAAAATCTCAACTCTTT

GAGTGAGCTGGAAGTAAAGAATCTTCAAAGACTAAGCGGTGCCATGGATG

AACTCCACAACGAAATACTAGAACTGGATGAGAAAGTGGATGATCTCAGA

GCTGATACAATAAGCTCACAAATAGAACTCGCAGTCCTGCTTTCCAATGA

AGGAATAATAAACAGTGAAGATGAACATCTCTTGGCGCTTGAAAGAAAGC

TGAAGAAAATGCTGGGCCCCTCTGCTGTAGAGATAGGG

SEQ ID NO 5. Нуклеотидная последовательность сегмента 5 РНК, кодирующая белок NP, размером 1683 п.н.

ATGTCCAACATGGATATCGACGGTATGAACACTGGGACAATTGACAAAAC

ACCGGAAGAAATAACTTCTGGAACCAGTGGGACAACCAGACCAATCATTA

GACCAGCAACCCTTGCCCCACCAAGCAACAAACGAACCCGTAACCCATCC

CCGGAAAGAGCAACCACAAGCAGTGAAGATGATGTCGGAAGGAAAGCCCA

AAAGAAGCAGACCCCGACAGAGATAAAGAAGAGCGTCTACAACATGGTGG

TGAAACTGGGCGAATTCTACAACCAGATGATGGTTAAAGCTGGACTCAAT

GATGACATGGAGAGAAATCTAATCCAAAATGCGCATGCCGTGGAAAGAAT

TTTATTGGCTGCCACTGATGACAAGAAAACCGAGTTCCAGAAGAAAAAGA

ATGCCAGAGATGTCAAAGAAGGGAAGGAAGAAATAGATCACAACAAAACA

GGAGGCACCTTTTACAAGATGGTAAGAGATGATAAAACCATCTATTTCAG

CCCTATAAGAATTACCTTTTTAAAAGAAGAGGTGAAAACAATGTACAAAA

CCACCATGGGGAGTGATGGCTTCAGTGGATTAAATCACATAATGATTGGG

CATTCACAGATGAATGATGTCTGTTTCCAAAGATCAAAGGCACTAAAAAG

AGTTGGACTTGATCCTTCATTAATCAGTACCTTTGCGGGAAGCACAGTCC

CCAGAAGATCAGGTGCGACTGGTGTTGCAATCAAAGGAGGTGGAACCTTA

GTGGCTGAAGCCATTCGATTTATAGGAAGAGCAATGGCAGACAGAGGGCT

ATTGAGAGACATCAAAGCCAAGACTGCCTATGAAAAGATTCTTCTGAATC

TAAAGAACAAATGCTCTGCGCCCCAACAAAAGGCTCTAGTTGATCAAGTG

ATCGGAAGCAGAAATCCAGGGATTGCAGACATTGAAGATCTAACCCTGCT

TGCTCGTAGTATGGTCGTTGTTAGGCCCTCTGTGGCAAGCAAAGTGGTGC

TTCCCATAAGCATTTACGCCAAAATACCTCAACTAGGGTTCAATGTTGAA

GAGTACTCCATGGTTGGGTACGAAGCCATGGCTCTTTACAATATGGCAAC

ACCTGTTTCCATATTAAGAATGGGGGATGATGCAAAGGATAAATCGCAAT

TATTCTTCATGTCTTGCTTCGGAGCTGCCTATGAAGACCTGAGAGTTTTG

TCTGCATTAACAGGCACAGAATTCAAGCCTAGATCAGCATTAAAATGCAA

GGGTTTCCATGTTCCAGCAAAGGAACAGGTAGAAGGAATGGGAGCAGCTC

TGATGTCCATCAAGCTCCAGTTTTGGGCTCCGATGACCAGATCTGGGGGG

AACGAAGTAGGTGGAGACGGAGGGTCTGGCCAAATAAGCTGCAGCCCAGT

GTTTGCAGTGGAGAGACCTATTGCTCTAAGCAAGCAAGCTGTAAGAAGAA

TGCTGTCAATGAATATTGAGGGGCGTGATGCAGATGTCAAAGGAAATCTA

CTCAAGATGATGAATGACTCAATGGCTAAGAAAACCAGTGGAAATGCTTT

CATTGGGAAGAAAATGTTTCAAATATCAGACAAAAACAAAACCAATCCCA

TTGAAATTCCAATTAAGCAGACCATCCCCAATTTCTTCTTTGGGAGGGAT

ACAGCAGAGGATTATGATGACCTCGATTATTAA

SEQ ID NO 6. Нуклеотидная последовательность сегмента 6 РНК, кодирующая белки NA и NB, размером 1044 п.н.

ATGAACAATGCTACCTTCAACTATACAAACGTTAACCCTATTTCTCACAT

CAGGGGGAGTATTATTATCACTATATGTGTCAGCTTCATTATCATACTTA

CTATATTCGGATATATTGCTAAAATTCTCACCAACAGAAATAACTGCACC

AACAATGCCATTGGATTGTGCAAACGCATCAAATGTTCAAGCTATGAACC

GTTCTGCAACAAAAGGGGTGACACTTCTTCTCCCAGAACCGGAGTGGACA

TACCCGCGTTTATCTTGCCCGGGCTCAACCTTTCAGAAAGCACTCCTAAT

TAGCCCTCATAGATTCGGAGAAACCAAAGGAAACTCAGCTCCCTTGATAA

TAAGGGAACCTTTTGTTGCTTGTGGACCAAATGAATGCAAACACTTTGCT

TTAACCCATTATGCAGCCCAACCAGGGGGATACTACAATGGAACAAGAGG

AGACAGAAACAAGCTGAGGCATCTAATTTCAGTCAAATTGGGCAAAATCC

CAACAGTAGAGAACTCCATTTTCCACATGGCAGCATGGAGCGGGTCCGCG

TGCCATGATGGTAAGGAATGGACATATATCGGAGTTGATGGCCCTGACAA

TAATGCATTGCTCAAAGTAAAATATGGAGAAGCATATACTGACACATACC

ATTCCTATGCAAACAACATCCTAAGAACACAAGAAAGTGCCTGCAATTGC

ATCGGGGGAAATTGTTATCTAATGATAACTGATGGCTCAGCTTCAGGTGT

TAGTGAATGCAGATTTCTTAAGATTCGAGAGGGCCGAATAATAAAAGAAA

TATTTCCAACAGGAAGAGTAAAACACACTGAGGAATGCACATGCGGATTT

GCCAGCAATAAAACCATAGAATGTGCCTGTAGAGACAACAGGTACACAGC

AAAAAGACCTTTTGTCAAATTAAACGTGGAGACTGATACAGCAGAAATAA

GGTTGATGTGCACAGATACTTATTTGGACACCCCCAGACCAAATGATGGA

AGCATAACAGGCCCTTGTGAATCTGATGGGGACAAAGGGAGTGT

SEQ ID NO 7. Нуклеотидная последовательность сегмента 7 РНК, кодирующая белок MP, размером 1067 п.н.

ATGTCGCTGTTTGGAGACACAATTGCCTACTTGCTTTCATTGACAGAAGA

TGGAGAAGGCAAAGCAGAACTAGCAGAAAAGTTACACTGTTGGTTTGGTG

GGAAAGAATTTGACCTAGACTCAGCCTTGGAATGGATAAAAAACAAAAGA

TGCTTAACTGATATACAAAAAGCACTAATTGGTGCCTCTATATGCTTTTT

AAAACCCAAAGACCAGGAAAGAAAAAGAAGATTCATCACAGAGCCCTTAT

CAGGAATGGGAACAACAGCAACAAAAAAGAAAGGCCTGATTCTGGCTGAG

AGAAAAATGAGAAGATGTGTTAGCTTTCATGAAGCATTTGAAATAGCAGA

AGGCCATGAAAGCTCAGCGCTACTATACTGTCTCATGGTCATGTACCTGA

ATCCTGGAAATTATTCGATGCAAGTAAAACTAGGAACGCTCTGTGCTTTA

TGCGAGAAACAAGCATCACATTCACACAGGGCTCATAGCAGAGCAGCGAG

ATCTTCAGTGCCTGGAGTGAGACGAGAAATGCAGATGGTCTCAGCTATGA

ACACAGCAAAAACAATGAATGGAATGGGAAAGGGAGAAGACGTCCAAAAG

CTGGCAGAAGAGTTGCAAAGCAACATTGGAGTGCTGAGATCTCTTGGGGC

AAGTCAAAAGAATGGGGAAGGGATTGCAAAGGATGTAATGGAAGTGCTAA

AGCAGAGCTCCATGGGAAATTCAGCTCTTGTGAAGAAATATCTATAATGC

TCGAACCATTTCAGATTCTTACAATTTGTTCCTTTATCTTATCAGCTCTC

CATTTCATGGCTTGGACAATAGGGCATTTGAATCAAATAAAAAGAGGAAT

AAACATGAAAATACGAATAAAAGGTCCAAACAAAGAGACAATAAACAGAG

AGGTATCAATTTTGAGACACAGTTACCAAAAAGAAATCCAGGCCAAAGAA

ACAATGAAGGAAGTGCTCTCTGACAACATGGAGGTATTGAATGACCACAT

AATAATTGAGGGGCTTTCTGCCGAAGAGATAATAAAAATGGGTGAAACAG

TTTTGGAGATAGAAGAATTGCATTAA

SEQ ID NO 8. Нуклеотидная последовательность сегмента 8 РНК, кодирующая белок NS, размером 995 п.н.

ATGGCGAACAACAACATGACCACAACACAAATTGAGGTGGGTCCGGGAGC

AACCAATGCCACTATAAACTTTGAAGCAGGAATTCTGGAGTGCTATGAAA

GGCTTTCATGGCAAAGAGCCCTTGACTACCCCGGTCAAGACCGCCTAAAC

AGACTAAAAAGAAAATTAGAGTCAAGAATAAAGACTCACAACAAAAGTGA

GCCTGAAAGTAAAAGGATGTCCCTTGAAGAGAGAAAAGCAATTGGAGTAA

AAATGATGAAAGTACTCCTATTTATGAATCCGTCTGCTGGAATTGAAGGG

TTTGAGCCATACTGTATAAACAGTTCCTCAAATAGCAACTGTACGAAATA

CAATTGGACCGATTACCCTTCAACACCAGAGAGGTGCCTTGATGACATAG

AGGAAGAACCAGAAGATGTTGATGGCCCAACTGAAATAGTATTAAGGGAC

ATGAACAACAAAGATGCAAGGCAAAAGATAAAGGAGGAAGTAAACACTCA

GAAAGAAGGGAAGTTCCGTTTGACAATAAAAAGGGATATGCGTAATGTAT

TGTCCTTGAGAGTGTTGGTAAATGGAACATTCCTCAAACACCCCAATGGA

TACAAGTCCTTATCAACTCTGCATAGATTGAATGCATATGACCAGAGTGG

AAGGCTTGTTGCTAAACTTGTTGCCACTGATGATCTTACAGTGGAGGATG

AAGAAGATGGCCATCGGATCCTCAACTCACTCTTCGAGCGTCTCAATGAA

GGACATTCAAAGCCAATTCGAGCAGCTGAAACTGCGGTGGGAGTCTTATC

CCAATTTGGTCAAGAGCACCGATTATCACCAGAAGAGGGAGACAATTAGA

TTGGTCACGGAAGAACTTTATCTTTTAAGTAAAAGAATTGATGATAACAT

ACTATTCCACAAAACAGTGATAGCTAACAGCTCCATAATAGCTGACATGG

TTGTATCATTATCATTATTAGAAACATTGTATGAAATGAAGGATG

SEQ ID NO 9. Аминокислотная последовательность белка PB1, 752 а.о. кодируемого нуклеотидной последовательностью сегмента 2 РНК

MNINPYFLFIDVPVQAAISTTFPYTGVPPYSHGTGTGYTIDTVIRTHEYSNKGKQYISDVTGCTMVDPTNGPLPEDNEPSAYAQLDCVLEALDRMDEEHPGLFQAASQNAMEALMVTTVDKLTQGRQTFDWTVCRNQPAATALNTTITSFRLNDLNGADKGGLIPFCQDIIDSLDRPEMTFFSVKNIKKKLPAKNRKGFLIKRIPMKVKDKITKVEYIKRALSLNTMTKDAERGKLKRRAIATAGIQIRGFVLVVENLAKNICENLEQSGLPVGGNEKKAKLSNAVAKMLSNCPPGGISMTVTGDNTKWNECLNPRIFLAMTERITRDSPVWFRDFCSIAPVLFSNKIARLGKGFMITSKTKRLKAQIPCPDLFSIPLERYNEETRAKLKKLKPFFNEEGTASLSPGMMMGMFNMLSTVLGVAALGIKNIGNKEYLWDGLQSSDDFALFVNAKDEETCMEGINDFYRTCKLLGINMSKKKSYCNETGMFEFTSMFYRDGFVSNFAMELPSFGVAGVNESADMAIGMTIIKNNMINNGMGPATAQTAIQLFIADYRYTYKCHRGDSKVEGKRMKIIKELWENTKGRDGLLVADGGPNIYNLRNLHIPEIVLKYNLMDPEYKGRLLHPQNPFVGHLSIEGIKEADITPAHGPVKKMDYDAVSGTHSWRTKRNRSILNTDQRNMILEEQCYAKCCNLFEACFNSASYRKPVGQHSMLEAMAHRLRMDARLDYESGRMSKDDFEKAMAHLGEIGYI

SEQ ID NO 10. Аминокислотная последовательность белка HA, 496 а.о. кодируемого нуклеотидной последовательностью сегмента 4 РНК

MKAIIVLLMVVTSNADRICTGITSSNSPHVVKTATQGEVNVTGVIPLTTTPTKSHFANLKGIETRGKLCPKCLNCTDLDVALGRPKCTGKIPSARVSILHEVRPVTSGCFPIMHDRTKIRQLPNLLRGYEHVRLSTHNVINAEDAPGGPYKIGTSGSCPNITNGNGFFATMAWAVPKNDKNKTATNPLTIEVPYICTEGEDQITVWGFHSDNEIQMAKLYGDSKPQKFTSSANGVTTHYVSQIGGFPNQTEDGGLPQSGRIVVDYMVQKSGKTGTITYQRGILLPQKVWCASGRSKVIKGSLPLIGEADCLHEKYGGLNKSKPYYTGEHAKAIGNCPIWVKTPLKLANGTKYRPPAKLLKGRGFFGAIAGFLEGGWEGMIAGWHGYTSHGAHGVAVAADLKSTQEAINKITKNLNSLSELEVKNLQRLSGAMDELHNEILELDEKVDDLRADTISSQIELAVLLSNEGIINSEDEHLLALERKLKKMLGPSAVEIG

SEQ ID NO 11. Аминокислотная последовательность белка NA, 345 а.о. кодируемого нуклеотидной последовательностью сегмента 6 РНК

MLPSTIQTLTLFLTSGGVLLSLYVSASLSYLLYSDILLKFSPTEITAPTMPLDCANASNVQAMNRSATKGVTLLLPEPEWTYPRLSCPGSTFQKALLISPHRFGETKGNSAPLIIREPFVACGPNECKHFALTHYAAQPGGYYNGTRGDRNKLRHLISVKLGKIPTVENSIFHMAAWSGSACHDGKEWTYIGVDGPDNNALLKVKYGEAYTDTYHSYANNILRTQESACNCIGGNCYLMITDGSASGVSECRFLKIREGRIIKEIFPTGRVKHTEECTCGFASNKTIECACRDNRYTAKRPFVKLNVETDTAEIRLMCTDTYLDTPRPNDGSITGPCESDGDKGS

SEQ ID NO 12. Аминокислотная последовательность белка NB, 100 а.о. кодируемого нуклеотидной последовательностью сегмента 6 РНК

MNNATFNYTNVNPISHIRGSIIITICVSFIIILTIFGYIAKILTNRNNCTNNAIGLCKRIKCSSYEPFCNKRGDTSSPRTGVDIPAFILPGLNLSESTPN

Перечень нуклеотидных последовательностей РНК

родительского штамма В/Novosibirsk/40/2017

Все нуклеотидные последовательности РНК указаны в направлении от 5' к 3' концу.

SEQ ID NO 1. Нуклеотидная последовательность сегмента 1 РНК, кодирующая белок РВ2 размером 2307 п.н.

ATGACATTAGCCAAAATTGAATTGTTAAAACAACTGCTAAGGGACAATGA

GGCCAAAACAGTTTTGAAGCAAACAACAGTAGACCAATATAACATAATAA

GAAAATTCAATACATCAAGGATTGAAAAGAATCCTTCACTAAGGATGAAG

TGGGCCATGTGTTCTAACTTTCCCTTGGCTCTAACCAAGGGCGATATGGC

AAACAGAATCCCCTTGGAATACAAAGGGATACAACTTAAAACAAATGCTG

AAGACATAGGAACTAAAGGCCAAATGTGCTCAATAGCAGCAGTTACTTGG

TGGAATACATATGGACCGATAGGAGACACTGAAGGTTTTGAAAGGGTCTA

CGAAAGCTTTTTTCTCAGAAAAATGAGACTTGACAACGCCACTTGGGGCC

GGATAACTTTTGGCCCAGTTGAAAGAGTGAGAAAAAGAGTACTACTAAAC

CCTCTCACCAAGGAAATGCCTCCGGATGAGGCGAGCAATGTGATAATGGA

AATATTGTTCCCTAAAGAAGCAGGAATACCAAGAGAATCCACTTGGATAC

ATAGGGAACTGATAAAAGAAAAAAGAGAAAAATTGAAAGGGACAATGATA

ACTCCAATCGTACTGGCATACATGCTTGAAAGAGAACTGGTTGCTCGAAG

AAGATTCTTGCCAGTGGCAGGAGCAACATCAGCTGAGTTCATAGAAATGC

TACACTGCTTACAAGGTGAAAATTGGAGACAAATATATCACCCAGGAGGG

AATAAATTAACTGAGTCCAGGTCTCAATCAATGATAGTAGCTTGTAGGAA

AATAATCAGAAGATCAATAGTCGCTTCAAACCCACTGGAGCTAGCTGTAG

AAATTGCAAACAAGACTGTGATAGATACTGAACCTTTAAAGTCATGTCTG

GCAGCCATAGACGGAGGTGATGTAGCTTGTGACATAATAAGAGCTGCATT

AGGACTAAAGATCAGACAAAGACAAAGATTTGGACGGCTTGAGCTAAAAA

GAATATCAGGAAGAGGATTCAAAAATGATGAAGAAATATTAATAGGAAAC

GGAACAATACAGAAGATTGGAATATGGGACGGGGAAGAGGAGTTCCATGT

AAGATGTGGTGAATGCAGGGGAATATTAAAAAAGAGTAAAATGAAACTGG

AAAAACTACTGATAAATTCAGCCAAAAAGGAGGATATGAGAGATTTAATA

ATCTTATGCATGGTATTTTCTCAAGACACTAGGATGTTCCAAGGGGTGAG

AGGAGAAATAAATTTTCTTAATCGAGCAGGCCAACTTTTATCTCCAATGT

ACCAACTCCAACGATATTTTTTGAATAGAAGCAACGACCTTTTTGATCAA

TGGGGGTATGAGGAATCACCCAAAGCAAGTGAACTACATGGGATAAATGA

ATCAATGAATGCATCTGACTATACATTGAAAGGGATTGTAGTGACAAGAA

ATGTAATTGACGACTTTAGCTCTACTGAAACAGAAAAAGTATCCATAACA

AAAAATCTTAGCTTAATAAAAAGGACTGGAGAAGTCATAATGGGAGCTAA

TGACGTGAGTGAATTAGAATCACAAGCACAGCTGATGATAACATATGATA

CACCTAAAATGTGGGAAATGGGAACAACCAAAGAACTGGTGCAAAACACT

TATCAATGGGTGCTAAAAAACTTGGTGACACTGAAGGCTCAGTTTCTTCT

AGGAAAAGAGGACATGTTCCAATGGGATGCATTTGAAGCATTTGAGAGCA

TAATTCCTCAGAAAATGGCTGGTCAGTACAGTGGATTTGCAAGAGCAGTG

CTCAAACAAATGAGAGACCAGGAGGTTATGAAAACTGACCAGTTCATAAA

GTTGCTGCCTTTTTGTTTCTCACCACCAAAATTAAGGAGCAATGGGGAGC

CTTATCAATTCTTAAAACTTGTATTGAAAGGAGGAGGGGAAAATTTCATC

GAAGTAAGGAAAGGATCTCCTCTATTTTCCTATAATCCACAAACAGAAGT

CTTAACTATATGCGGCAGAATGATGTCATTAAAAGGGAAAATTGAAGATG

AAGAAAGGAATAGATCAATGGGGAATGCAGTATTAGCAGGCTTTCTCGTT

AGTGGCAAGTATGACCCAGATCTTGGAGATTTCAAAACTATTGAAGAACT

TGAAAAGCTGAAACCAGGGGAAAAGGCAAACATCTTGCTTTATCAAGGAA

AACCAGTTAAAGTAGTGAAAAGGAAAAGGTATAGTGCTTTGTCCAATGAC

ATTTCACAAGGAATTAAGAGACAAAGAATGACAGTTGAGTCTATGGGGTG

GGCCTTG

SEQ ID NO 2. Нуклеотидная последовательность сегмента 2 РНК, кодирующая белок PB1, размером 2259 п.н.

ATGAATATAAATCCTTATTTTCTCTTCATAGATGTGCCCGTACAGGCAGC

AATTTCAACAACATTCCCATACACTGGTGTTCCCCCTTATTCCCATGGAA

CAGGAACAGGTTACACAATAGACACAGTGATCAGAACGCATGAGTACTCA

AACAAGGGGAAACAGTACATTTCTGATGTTACAGGATGCACAATGGTGGA

TCCAACAAATGGACCATTACCCGAAGATAATGAGCCGAGTGCCTATGCGC

AATTAGATTGCGTTTTAGAGGCTTTGGATAGAATGGATGAAGAACACCCA

GGTCTTTTTCAAGCAGCCTCACAGAATGCTATGGAGGCCCTAATGGTCAC

AACTGTAGACAAATTAACCCAGGGGAGACAGACTTTTGATTGGACAGTAT

GCAGAAACCAACCTGCTGCAACGGCACTGAATACAACAATAACCTCTTTT

AGGTTGAATGATTTAAATGGAGCCGACAAAGGTGGATTAATACCTTTTTG

CCAGGATATCATTGATTCATTAGACAGACCTGAAATGACTTTCTTCTCAG

TAAAGAATATAAAGAAAAAATTGCCTGCCAAAAACAGAAAGGGTTTCCTC

ATAAAGAGGATACCAATGAAGGTAAAAGACAAAATAACCAAAGTGGAATA

CATCAAAAGAGCATTATCATTAAACACAATGACAAAAGACGCTGAAAGAG

GCAAACTGAAAAGAAGAGCGATTGCCACTGCTGGAATACAAATAAGAGGG

TTTGTATTAGTAGTTGAAAACTTGGCTAAAAATATATGTGAAAATCTAGA

ACAAAGTGGTTTACCAGTAGGTGGAAACGAGAAGAAAGCCAAACTGTCAA

ATGCAGTGGCCAAAATGCTCAGTAACTGCCCACCAGGAGGGATTAGCATG

ACAGTAACAGGAGACAATACAAAATGGAATGAATGTTTAAACCCAAGAAT

CTTTTTGGCCATGACTGAAAGAATAACCAGAGACAGCCCAGTTTGGTTCA

GGGATTTTTGTAGTATAGCACCGGTCCTGTTCTCCAATAAGATAGCAAGA

TTGGGGAAAGGATTTATGATAACAAGCAAAACAAAAAGACTAAAGGCTCA

AATACCTTGTCCTGATCTGTTTAGTATACCATTAGAAAGATATAATGAAG

AAACAAGGGCAAAATTGAAGAAGCTAAAACCATTCTTCAATGAAGAAGGA

ACTGCATCTTTGTCACCTGGGATGATGATGGGAATGTTTAATATGCTATC

TACCGTGTTGGGAGTAGCTGCACTAGGTATCAAGAACATTGGAAACAAAG

AATACCTATGGGATGGACTGCAATCTTCTGATGATTTTGCTCTATTTGTT

AATGCAAAGGATGAAGAAACATGTATGGAAGGAATAAACGACTTTTACCG

AACATGTAAATTATTGGGAATAAACATGAGCAAAAAGAAAAGTTACTGTA

ATGAGACTGGAATGTTTGAATTTACAAGCATGTTCTACAGAGATGGATTT

GTATCTAATTTTGCAATGGAACTCCCTTCGTTTGGGGTTGCTGGAGTAAA

TGAATCAGCAGATATGGCAATAGGAATGACAATAATAAAGAACAACATGA

TCAACAATGGAATGGGTCCAGCAACAGCACAAACAGCCATACAGCTATTC

ATAGCTGATTATAGATACACCTACAAATGCCACAGGGGAGATTCCAAAGT

AGAAGGAAAGAGAATGAAAATCATAAAGGAGTTATGGGAAAACACTAAAG

GAAGAGATGGTCTATTAGTAGCAGATGGTGGGCCCAACATTTACAATTTG

AGAAACTTGCATATCCCAGAAATAGTATTGAAGTATAATCTAATGGACCC

TGAATACAAAGGGCGGTTACTTCATCCTCAAAATCCCTTTGTGGGACATT

TGTCTATTGAGGGCATCAAAGAGGCAGACATAACTCCAGCACATGGTCCA

GTAAAGAAAATGGACTACGATGCGGTGTCTGGAACTCATAGTTGGAGAAC

CAAAAGAAACAGATCTATACTAAACACTGATCAGAGGAACATGATTCTTG

AGGAACAATGCTACGCTAAATGTTGCAACCTATTTGAGGCCTGTTTTAAC

AGTGCATCATACAGGAAGCCAGTGGGTCAACATAGCATGCTTGAGGCTAT

GGCCCACAGATTAAGAATGGATGCACGATTAGATTATGAATCAGGGAGAA

TGTCAAAAGATGATTTTGAGAAAGCAATGGCTCACCTTGGTGAGATTGGG

TACATATAA

SEQ ID NO 3. Нуклеотидная последовательность сегмента 3 РНК, кодирующая белок РА, размером 2164 п.н.

ATGGATACTTTTATTACAAGAAACTTCCAGACTACAATAATACAAAAGGC

CAAAAACACAATGGCAGAATTTAGTGAAGATCCTGAATTGCAACCAGCAA

TGCTATTCAATATCTGCGTCCATCTAGAGGTTTGCTATGTAATAAGTGAC

ATGAATTTTCTTGACGAAGAAGGAAAAGCATATACAGCATTAGAAGGACA

AGGGAAAGAACAAAACTTGAGACCACAATATGAAGTAATTGAGGGAATGC

CAAGAACCATAGCATGGATGGTCCAGAGATCCTTAGCTCAAGAGCATGGA

ATAGAGACTCCCAAGTATCTGGCTGATTTGTTTGATTACAAAACCAAAAG

ATTTATAGAAGTTGGAATAACAAAGGGATTGGCTGATGATTACTTTTGGA

AAAAGAAAGAAAAATTGGGAAATAGCATGGAACTGATGATATTCAGCTAC

AATCAAGACTACTCGTTAAGTAATGAATCCTCATTGGATGAGGAAGGGAA

AGGGAGAGTGCTAAGCAGACTCACAGAACTTCAGGCTGAATTAAGTCTGA

AAAATTTATGGCAAGTTCTCATAGGAGAAGAAGATGTTGAAAAGGGAATT

GATTTTAAACTTGGACAGACAATATCTAGACTAAGGGATATATCTGTTCC

AGCCGGTTTCTCCAACTTTGAAGGAATGAGGAGCTACATAGACAATATAG

ACCCAAAAGGAGCAATAGAGAGAAATCTAGCAAGGATGTCTCCCTTAGTA

TCAGTCACACCTAAAAAGTTAACATGGGAGGACCTAAGACCAATAGGGCC

TCACATTTACGACCATGAGCTACCAGAAGTTCCATATAATGCCTTTCTTC

TAATGTCTGATGAACTAGGATTGGCCAATATGACTGAGGGAAAGTCCAAA

AAACCGAAGACATTAGCCAAAGAATGTCTAGAAAAGTACTCAACACTACG

GGATCAAACTGACCCAATATTAATAATGAAAAGCGAGAAAGCTAACGAAA

ATTTCCTATGGAAGCTTTGGAGAGACTGTGTAAATACAATAAGTAATGAG

GAAGCAAGTAACGAGTTACAGAAAACCAATTATGCCAAATGGGCCACAGG

GGATGGATTAACATACCAGAAAATAATGAAAGAAGTAGCAATAGATGACG

AAACAATGTGCCAAGAAGAGCCTAAAATCCCTAACAAATGTAGAGTGGCT

GCTTGGGTTCAAACAGAGATGAATCTATTGAGCACTCTGACAAGTAAAAG

AGCTCTGGACCTACCAGAAATAGGGCCAGACATAGCACCCGTAGAGCATG

TAGGAAGTGAAAGAAGGAAATACTTTGTTAACGAAATCAACTACTGTAAG

GCCTCTACAGTTATGATGAAGTATGTGCTTTTTCATACTTCATTGTTGAA

TGAAAGCAATGCCAGCATGGGAAAATACAAAGTAATACCAATAACCAACA

GAGTAGTAAATGAAAAAGGAGAAAGTTTCGACATGCTTTACGGTTTGGCG

GTTAAAGGACAATCTCATCTGAGGGGAGATACTGATGTTGTAACAGTTGT

AACTTTTGAATTTAGTAGTACAGATCCCAGAGTGGACTCAGGAAAGTGGC

CAAAATATACTGTGTTTAGGATTGGCTCCCTATTTGTGAGTGGGAGGGAA

AAATCTGTGTACTTGTACTGCAGAGTGAATGGCACAAATAAGATCCAAAT

GAAATGGGGAATGGAAGCTAGAAGATGTTTGCTTCAATCAATGCAACAAA

TGGAGGCAATTGTTGAACAGGAATCATCAATACAAGGATATGACATGACC

AAAGCCTGTTTCAAGGGAGACAGAATAAATAGCCCCAAAACTTTCAGTAT

TGGAACTCAAGAAGGAAAACTAGTAAAAGGATCCTTTGGAAAAGCACTAA

GAGTAATATTTACTAAATGCTTGATGCACTATGTATTTGGAAATGCCCAA

TTGGAGGGGTTTAGTGCCGAGTCTAGGAGACTTCTATTGTTGATTCAAGC

ATTAAAGGACAGAAAGGGTCCTTGGGTGTTCGACTTAGAGGGAATGTATT

CTGGAATAGAAGAATGTATTAGCAACAACCCTTGGGTGATACAGAGTGTA

TACTGGTTCAATGAATGGTTGGGCTTTGAAAAGGAGGGGAGTAAAGTGTT

GGAATCAGTGGATG

SEQ ID NO 4. Нуклеотидная последовательность сегмента 4 РНК, кодирующая белок НА, размером 1758 п.н.

ATGAAGGCAATAATTGTACTACTCATGGTAGTAACATCCAATGCAGACCG

AATCTGCACTGGGATAACATCGTCAAACTCACCACATGTCGTCAAAACTG

CTACTCAAGGGGAGGTCAATGTGACCGGTGTAATACCACTGACAACAACA

CCCACCAAATCTCATTTTGCAAATCTCAAAGGAATAGAAACCAGGGGAAA

ACTATGCCCAAAATGCCTCAACTGCACAGATCTGGATGTAGCCTTGGGCA

GACCAAAATGCACAGGGAAAATACCCTCTGCAAGGGTTTCAATACTCCAT

GAAGTCAGACCTGTTACATCTGGGTGCTTTCCTATAATGCACGATAGAAC

AAAAATTAGACAGCTGCCTAACCTTCTCCGAGGATACGAACATGTCAGGT

TATCAACTCACAACGTTATCAATGCAGAAGATGCACCAGGAGGACCCTAC

AAAATTGGAACCTCAGGGTCTTGCCCTAACATTACCAATGGAAACGGATT

CTTCGCAACAATGGCTTGGGCCGTCCCAAAAAACGACAAAAACAAAACAG

CAACAAATCCATTAACAATAGAAGTACCATACATTTGTACAGAAGGAGAA

GACCAAATTACCGTTTGGGGGTTCCACTCTGACAACGAGACCCAAATGGC

AAAGCTCTATGGGGACTCAAAGCCCCAGAAGTTCACCTCATCTGCCAACG

GAGTGACCACACATTACGTTTCACAGATTGGTGGCTTCCCAAATCAAACA

GAAGACGGAGGACTACCACAAAGTGGCAGAATTGTTGTTGATTACATGGT

GCAAAAATCTGGAAAAACAGGAACAATTACCTATCAAAGAGGTATTTTAT

TGCCTCAAAAGGTGTGGTGCGCAAGTGGCAGGAGCAAAGTAATAAAAGGA

TCCTTGCCTTTAATTGGAGAAGCAGATTGCCTCCATGAAAAATACGGTGG

ATTGAACAAAAGCAAGCCTTACTACACAGGGGAACATGCAAAGGCCATAG

GAAATTGCCCAATATGGGTGAAAACACCCTTGAAGCTGGCCAATGGAACC

AAATATAGACCTCCTGCAAAACTATTAAAGGGAAGGGGTTTCTTCGGAGC

TATTGCTGGTTTCTTAGAGGGAGGATGGGAAGGAATGATTGCAGGTTGGC

ACGGATACACATCCCATGGGGCACATGGAGTAGCGGTGGCAGCTGACCTT

AAGAGCACTCAAGAGGCCATAAACAAGATAACAAAAAATCTCAACTCTTT

GAGTGAGCTGGAAGTAAAGAATCTTCAAAGACTAAGCGGTGCCATGGATG

AACTCCACAACGAAATACTAGAACTGGATGAGAAAGTGGATGATCTCAGA

GCTGATACAATAAGCTCACAAATAGAACTCGCAGTCCTGCTTTCCAATGA

AGGAATAATAAACAGTGAAGATGAACATCTCTTGGCGCTTGAAAGAAAGC

TGAAGAAAATGCTGGGCCCCTCTGCTGTAGAGATAGGGAATGGATGCTTT

GAAACCAAACACAAGTGCAACCAGACCTGTCTCGACAGAATAGCTGCTGG

TACCTTTGATGCAGGAGAATTTTCTCTCCCCACCTTTGATTCACTGAATA

TTACTGCTGCATCTTTAAATGACGATGGATTGGATAATCATACTATACTG

CTTTACTACTCAACTGCTGCCTCCAGTTTGGCTGTAACACTGATGATAGC

TATCTTTGTTGTTTATATGGTCTCCAGAGACAATGTTTCTTGCTCCATTT

GTCTATAA

SEQ ID NO 5. Нуклеотидная последовательность сегмента 5 РНК, кодирующая белок NP, размером 1683 п.н.

ATGTCCAACATGGATATCGACGGTATGAACACTGGGACAATTGACAAAAC

ACCGGAAGAAATAACTTCTGGAACCAGTGGGACAACCAGACCAATCATTA

GACCAGCAACCCTTGCCCCACCAAGCAACAAACGAACCCGTAACCCATCC

CCGGAAAGAGCAACCACAAGCAGTGAAGATGATGTCGGAAGGAAAGCCCA

AAAGAAGCAGACCCCGACAGAGATAAAGAAGAGCGTCTACAACATGGTGG

TGAAACTGGGCGAATTCTACAACCAGATGATGGTTAAAGCTGGACTCAAT

GATGACATGGAGAGAAATCTAATCCAAAATGCGCATGCCGTGGAAAGAAT

TTTATTGGCTGCCACTGATGACAAGAAAACCGAGTTCCAGAAGAAAAAGA

ATGCCAGAGATGTCAAAGAAGGGAAGGAAGAAATAGATCACAACAAAACA

GGAGGCACCTTTTACAAGATGGTAAGAGATGATAAAACCATCTATTTCAG

CCCTATAAGAATTACCTTTTTAAAAGAAGAGGTGAAAACAATGTACAAAA

CCACCATGGGGAGTGATGGCTTCAGTGGATTAAATCACATAATGATTGGG

CATTCACAGATGAATGATGTCTGTTTCCAAAGATCAAAGGCACTAAAAAG

AGTTGGACTTGATCCTTCATTAATCAGTACCTTTGCGGGAAGCACAGTCC

CCAGAAGATCAGGTGCGACTGGTGTTGCAATCAAAGGAGGTGGAACCTTA

GTGGCTGAAGCCATTCGATTTATAGGAAGAGCAATGGCAGACAGAGGGCT

ATTGAGAGACATCAAAGCCAAGACTGCCTATGAAAAGATTCTTCTGAATC

TAAAGAACAAATGCTCTGCGCCCCAACAAAAGGCTCTAGTTGATCAAGTG

ATCGGAAGCAGAAATCCAGGGATTGCAGACATTGAAGATCTAACCCTGCT

TGCTCGTAGTATGGTCGTTGTTAGGCCCTCTGTGGCAAGCAAAGTGGTGC

TTCCCATAAGCATTTACGCCAAAATACCTCAACTAGGGTTCAATGTTGAA

GAGTACTCCATGGTTGGGTACGAAGCCATGGCTCTTTACAATATGGCAAC

ACCTGTTTCCATATTAAGAATGGGGGATGATGCAAAGGATAAATCGCAAT

TATTCTTCATGTCTTGCTTCGGAGCTGCCTATGAAGACCTGAGAGTTTTG

TCTGCATTAACAGGCACAGAATTCAAGCCTAGATCAGCATTAAAATGCAA

GGGTTTCCATGTTCCAGCAAAGGAACAGGTAGAAGGAATGGGAGCAGCTC

TGATGTCCATCAAGCTCCAGTTTTGGGCTCCGATGACCAGATCTGGGGGG

AACGAAGTAGGTGGAGACGGAGGGTCTGGCCAAATAAGCTGCAGCCCAGT

GTTTGCAGTGGAGAGACCTATTGCTCTAAGCAAGCAAGCTGTAAGAAGAA

TGCTGTCAATGAATATTGAGGGGCGTGATGCAGATGTCAAAGGAAATCTA

CTCAAGATGATGAATGACTCAATGGCTAAGAAAACCAGTGGAAATGCTTT

CATTGGGAAGAAAATGTTTCAAATATCAGACAAAAACAAAACCAATCCCA

TTGAAATTCCAATTAAGCAGACCATCCCCAATTTCTTCTTTGGGAGGGAT

ACAGCAGAGGATTATGATGACCTCGATTATTAA

SEQ ID NO 6. Нуклеотидная последовательность сегмента 6 РНК, кодирующая белки NA и NB, размером 1408 п.н.

ATGAACAATGCTACCTTCAACTATACAAACGTTAACCCTATTTCTCACAT

CAGGGGGAGTATTATTATCACTATATGTGTCAGCTTCATTATCATACTTA

CTATATTCGGATATATTGCTAAAATTCTCACCAACAGAAATAACTGCACC

AACAATGCCATTGGATTGTGCAAACGCATCAAATGTTCAAGCTATGAACC

GTTCTGCAACAAAAGGGGTGACACTTCTTCTCCCAGAACCGGAGTGGACA

TACCCGCGTTTATCTTGCCCGGGCTCAACCTTTCAGAAAGCACTCCTAAT

TAGCCCTCATAGATTCGGAGAAACCAAAGGAAACTCAGCTCCCTTGATAA

TAAGGGAACCTTTTGTTGCTTGTGGACCAAATGAATGCAAACACTTTGCT

TTAACCCATTATGCAGCCCAACCAGGGGGATACTACAATGGAACAAGAGG

AGACAGAAACAAGCTGAGGCATCTAATTTCAGTCAAATTGGGCAAAATCC

CAACAGTAGAGAACTCCATTTTCCACATGGCAGCATGGAGCGGGTCCGCG

TGCCATGATGGTAAGGAATGGACATATATCGGAGTTGATGGCCCTGACAA

TAATGCATTGCTCAAAGTAAAATATGGAGAAGCATATACTGACACATACC

ATTCCTATGCAAACAACATCCTAAGAACACAAGAAAGTGCCTGCAATTGC

ATCGGGGGAAATTGTTATCTAATGATAACTGATGGCTCAGCTTCAGGTGT

TAGTGAATGCAGATTTCTTAAGATTCGAGAGGGCCGAATAATAAAAGAAA

TATTTCCAACAGGAAGAGTAAAACACACTGAGGAATGCACATGCGGATTT

GCCAGCAATAAAACCATAGAATGTGCCTGTAGAGACAACAGGTACACAGC

AAAAAGACCTTTTGTCAAATTAAACGTGGAGACTGATACAGCAGAAATAA

GGTTGATGTGCACAGATACTTATTTGGACACCCCCAGACCAAATGATGGA

AGCATAACAGGCCCTTGTGAATCTGATGGGGACAAAGGGAGTGGAGGCAT

CAAGGGAGGATTTGTTCATCAAAGAATGAAATCCAAGATTGGAAGGTGGT

ACTCTCGAACGATGTCTAAAACTGAAAGGATGGGGATGGGACTGTATGTC

AAGTATGATGGAGACCCATGGGCTGACAGTGATGCCCTAGCTTTTAGTGG

AGTAATGGTTTCAATGAAAGAACCTGGTTGGTATTCCTTTGGCTTCGAAA

TAAAAGATAAGAAATGCGATGTCCCCTGTATTGGGATAGAGATGGTACAT

GATGGTGGAAAAGAGACTTGGCACTCAGCAGCAACAGCCATTTACTGTTT

AATGGGCTCAGGACAGCTGCTGTGGGACACTGTCACAGGTGTTGACATGG

CTCTGTAA

SEQ ID NO 7. Нуклеотидная последовательность сегмента 7 РНК, кодирующая белок MP, размером 1076 п.н.

ATGTCGCTGTTTGGAGACACAATTGCCTACTTGCTTTCATTGACAGAAGA

TGGAGAAGGCAAAGCAGAACTAGCAGAAAAGTTACACTGTTGGTTTGGTG

GGAAAGAATTTGACCTAGACTCAGCCTTGGAATGGATAAAAAACAAAAGA

TGCTTAACTGATATACAAAAAGCACTAATTGGTGCCTCTATATGCTTTTT

AAAACCCAAAGACCAGGAAAGAAAAAGAAGATTCATCACAGAGCCCTTAT

CAGGAATGGGAACAACAGCAACAAAAAAGAAAGGCCTGATTCTGGCTGAG

AGAAAAATGAGAAGATGTGTTAGCTTTCATGAAGCATTTGAAATAGCAGA

AGGCCATGAAAGCTCAGCGCTACTATACTGTCTCATGGTCATGTACCTGA

ATCCTGGAAATTATTCGATGCAAGTAAAACTAGGAACGCTCTGTGCTTTA

TGCGAGAAACAAGCATCACATTCACACAGGGCTCATAGCAGAGCAGCGAG

ATCTTCAGTGCCTGGAGTGAGACGAGAAATGCAGATGGTCTCAGCTATGA

ACACAGCAAAAACAATGAATGGAATGGGAAAGGGAGAAGACGTCCAAAAG

CTGGCAGAAGAGTTGCAAAGCAACATTGGAGTGCTGAGATCTCTTGGGGC

AAGTCAAAAGAATGGGGAAGGGATTGCAAAGGATGTAATGGAAGTGCTAA

AGCAGAGCTCCATGGGAAATTCAGCTCTTGTGAAGAAATATCTATAATGC

TCGAACCATTTCAGATTCTTACAATTTGTTCCTTTATCTTATCAGCTCTC

CATTTCATGGCTTGGACAATAGGGCATTTGAATCAAATAAAAAGAGGAAT

AAACATGAAAATACGAATAAAAGGTCCAAACAAAGAGACAATAAACAGAG

AGGTATCAATTTTGAGACACAGTTACCAAAAAGAAATCCAGGCCAAAGAA

ACAATGAAGGAAGTGCTCTCTGACAACATGGAGGTATTGAATGACCACAT

AATAATTGAGGGGCTTTCTGCCGAAGAGATAATAAAAATGGGTGAAACAG

TTTTGGAGATAGAAGAATTGCATTAA

SEQ ID NO 8. Нуклеотидная последовательность сегмента 8 РНК, кодирующая белок NS, размером 1014 п.н.

ATGGCGAACAACAACATGACCACAACACAAATTGAGGTGGGTCCGGGAGC

AACCAATGCCACTATAAACTTTGAAGCAGGAATTCTGGAGTGCTATGAAA

GGCTTTCATGGCAAAGAGCCCTTGACTACCCCGGTCAAGACCGCCTAAAC

AGACTAAAAAGAAAATTAGAGTCAAGAATAAAGACTCACAACAAAAGTGA

GCCTGAAAGTAAAAGGATGTCCCTTGAAGAGAGAAAAGCAATTGGAGTAA

AAATGATGAAAGTACTCCTATTTATGAATCCGTCTGCTGGAATTGAAGGG

TTTGAGCCATACTGTATAAACAGTTCCTCAAATAGCAACTGTACGAAATA

CAATTGGACCGATTACCCTTCAACACCAGAGAGGTGCCTTGATGACATAG

AGGAAGAACCAGAAGATGTTGATGGCCCAACTGAAATAGTATTAAGGGAC

ATGAACAACAAAGATGCAAGGCAAAAGATAAAGGAGGAAGTAAACACTCA

GAAAGAAGGGAAGTTCCGTTTGACAATAAAAAGGGATATGCGTAATGTAT

TGTCCTTGAGAGTGTTGGTAAATGGAACATTCCTCAAACACCCCAATGGA

TACAAGTCCTTATCAACTCTGCATAGATTGAATGCATATGACCAGAGTGG

AAGGCTTGTTGCTAAACTTGTTGCCACTGATGATCTTACAGTGGAGGATG

AAGAAGATGGCCATCGGATCCTCAACTCACTCTTCGAGCGTCTCAATGAA

GGACATTCAAAGCCAATTCGAGCAGCTGAAACTGCGGTGGGAGTCTTATC

CCAATTTGGTCAAGAGCACCGATTATCACCAGAAGAGGGAGACAATTAGA

TTGGTCACGGAAGAACTTTATCTTTTAAGTAAAAGAATTGATGATAACAT

ACTATTCCACAAAACAGTGATAGCTAACAGCTCCATAATAGCTGACATGG

TTGTATCATTATCATTATTAGAAACATTGTATGAAATGAAGGATGTGGTT

GAAGTGTACAGCAG

SEQ ID NO 9. Аминокислотная последовательность белка PB1, 752 а.о. кодируемого нуклеотидной последовательностью сегмента 2 РНК

MNINPYFLFIDVPVQAAISTTFPYTGVPPYSHGTGTGYTIDTVIRTHEYSNKGKQYISDVTGCTMVDPTNGPLPEDNEPSAYAQLDCVLEALDRMDEEHPGLFQAASQNAMEALMVTTVDKLTQGRQTFDWTVCRNQPAATALNTTITSFRLNDLNGADKGGLIPFCQDIIDSLDRPEMTFFSVKNIKKKLPAKNRKGFLIKRIPMKVKDKITKVEYIKRALSLNTMTKDAERGKLKRRAIATAGIQIRGFVLVVENLAKNICENLEQSGLPVGGNEKKAKLSNAVAKMLSNCPPGGISMTVTGDNTKWNECLNPRIFLAMTERITRDSPVWFRDFCSIAPVLFSNKIARLGKGFMITSKTKRLKAQIPCPDLFSIPLERYNEETRAKLKKLKPFFNEEGTASLSPGMMMGMFNMLSTVLGVAALGIKNIGNKEYLWDGLQSSDDFALFVNAKDEETCMEGINDFYRTCKLLGINMSKKKSYCNETGMFEFTSMFYRDGFVSNFAMELPSFGVAGVNESADMAIGMTIIKNNMINNGMGPATAQTAIQLFIADYRYTYKCHRGDSKVEGKRMKIIKELWENTKGRDGLLVADGGPNIYNLRNLHIPEIVLKYNLMDPEYKGRLLHPQNPFVGHLSIEGIKEADITPAHGPVKKMDYDAVSGTHSWRTKRNRSILNTDQRNMILEEQCYAKCCNLFEACFNSASYRKPVGQHSMLEAMAHRLRMDARLDYESGRMSKDDFEKAMAHLGEIGYI

SEQ ID NO 10. Аминокислотная последовательность белка HA, 585 а.о. кодируемого нуклеотидной последовательностью сегмента 4 РНК

MKAIIVLLMVVTSNADRICTGITSSNSPHVVKTATQGEVNVTGVIPLTTTPTKSHFANLKGIETRGKLCPKCLNCTDLDVALGRPKCTGKIPSARVSILHEVRPVTSGCFPIMHDRTKIRQLPNLLRGYEHVRLSTHNVINAEDAPGGPYKIGTSGSCPNITNGNGFFATMAWAVPKNDKNKTATNPLTIEVPYICTEGEDQITVWGFHSDNETQMAKLYGDSKPQKFTSSANGVTTHYVSQIGGFPNQTEDGGLPQSGRIVVDYMVQKSGKTGTITYQRGILLPQKVWCASGRSKVIKGSLPLIGEADCLHEKYGGLNKSKPYYTGEHAKAIGNCPIWVKTPLKLANGTKYRPPAKLLKGRGFFGAIAGFLEGGWEGMIAGWHGYTSHGAHGVAVAADLKSTQEAINKITKNLNSLSELEVKNLQRLSGAMDELHNEILELDEKVDDLRADTISSQIELAVLLSNEGIINSEDEHLLALERKLKKMLGPSAVEIGNGCFETKHKCNQTCLDRIAAGTFDAGEFSLPTFDSLNITAASLNDDGLDNHTILLYYSTAASSLAVTLMIAIFVVYMVSRDNVSCSICL

SEQ ID NO 11. Аминокислотная последовательность белка NA, 466 а.о. кодируемого нуклеотидной последовательностью сегмента 6 РНК

MLPSTIQTLTLFLTSGGVLLSLYVSASLSYLLYSDILLKFSPTEITAPTMPLDCANASNVQAMNRSATKGVTLLLPEPEWTYPRLSCPGSTFQKALLISPHRFGETKGNSAPLIIREPFVACGPNECKHFALTHYAAQPGGYYNGTRGDRNKLRHLISVKLGKIPTVENSIFHMAAWSGSACHDGKEWTYIGVDGPDNNALLKVKYGEAYTDTYHSYANNILRTQESACNCIGGNCYLMITDGSASGVSECRFLKIREGRIIKEIFPTGRVKHTEECTCGFASNKTIECACRDNRYTAKRPFVKLNVETDTAEIRLMCTDTYLDTPRPNDGSITGPCESDGDKGSGGIKGGFVHQRMKSKIGRWYSRTMSKTERMGMGLYVKYDGDPWADSDALAFSGVMVSMKEPGWYSFGFEIKDKKCDVPCIGIEMVHDGGKETWHSAATAIYCLMGSGQLLWDTVTGVDMAL

SEQ ID NO 12. Аминокислотная последовательность белка NB, 100 а.о. кодируемого нуклеотидной последовательностью сегмента 6 РНК

MNNATFNYTNVNPISHIRGSIIITICVSFIIILTIFGYIAKILTNRNNCTNNAIGLCKRIKCSSYEPFCNKRGDTSSPRTGVDIPAFILPGLNLSESTPN

Штамм вируса гриппа B/Novosibirsk/40/2017-MA для изучения лечебной и профилактической эффективности противовирусных препаратов in vitro и in vivo, депонированный в Государственную коллекцию возбудителей вирусных инфекций и риккетсиозов Федерального государственного учреждения науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» Роспотребнадзора под регистрационным номером V-811.