Способ определения антиокислительной активности чая

Изобретение относится к пищевой промышленности, в частности к производству чая, и может быть использовано при анализе черного, зеленого и других видов чая. Способ определения антиокислительной активности чая включает взаимодействие разбавленного экстракта чая, полученного в режиме дегустационного заваривания, с реагентом-окислителем - 2,6-дихлорфенолиндофенолятом натрия, определение величины изменения оптической плотности реакционного раствора колориметрическим методом при длине волны 500-520 нм, расчет антиокислительной активности чая в пересчете на кверцетин по предложенной формуле. Использование способа обеспечивает получение достоверных данных о величине антиокислительной активности веществ чая, переходящих в водный экстракт при заваривании для дегустационного анализа или пищевого потребления этого напитка. 1 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к пищевой промышленности, в частности к производству чая, и направлено на разработку новых ускоренных методов оценки качества сырья и готовой продукции.

Качество чая в значительной степени обусловлено высоким содержанием биологически активных веществ (БАВ) антиокислительного типа. Эта группа веществ представлена полифенолами - флавоноидами и их производными, фенолкарбоновыми кислотами, танинами, а также аскорбиновой кислотой и др. Концентрация веществ - антиокислителей в чае и их суммарная биологическая активность зависят от ряда факторов (качества сырья, технологии переработки, способа заваривания) и имеют широкий диапазон варьирования. Системный контроль этих показателей практически не производится, в частности, из-за отсутствия удобного метода определения антиокислительной активности (АОА).

Известен способ определения суммарной антиоксидантной активности экстрактов чаев методом вольтамперометрии на модифицированном электроде [1]. Данное изобретение относится к группе электрохимических способов определения АОА. Способ включает подготовку модифицированного фталоцианином кобальта Со(II) платинового электрода и определение антиоксидантной активности экстрактов чаев, которое проводят при скорости развертки потенциала 40 мВ/с и рабочем диапазоне потенциалов от 0 до -1,2 В, используя для расчета кинетический критерий, отражающий количество активных кислородных форм, прореагировавших с антиоксидантами за минуту времени, при этом в качестве фонового электролита для водно-спиртовых сред используют 0,1 моль/дм3 NaClO3, растворенный в диметилформамиде. Недостатком способа является использование специального лабораторного оборудования, необходимость предварительного модифицирования платинового электрода, причем результаты анализа будут зависеть от точности выполнения этой операции. Кроме того, анализу подвергаются водно-спиртовые экстракты чаев, т.е. на водные экстракты черного или зеленого чаев из растения семейства Theaceae, полученные в режиме дегустационного заваривания, способ не распространяется.

Известны и другие электрохимические способы определения антиоксидантной активности водорастворимых биологически активных веществ: амперометрические [2] и вольтамперометрические [3]. Недостатками способов является использование громоздкой измерительной установки и дорогостоящих реактивов.

Известен, способ количественного определения антиоксидантной активности пептидов животного происхождения путем спектрофотометрического определения оптической плотности продукта реакции изучаемых пептидов с 2,2-дифенил-1-пекрилгидразилом в органическом растворителе, выбранном из группы, включающей метанол, этанол, изопропанол, ацетон и метилэтилкетон, отличающийся тем, что определяют оптическую плотность продукта реакции референтного пептидного антиоксиданта природного происхождения L-глутатиона восстановленного с 2,2-дифенил-1-пекрилгидразилом и рассчитывают антиоксидантную активность изучаемых пептидов как глутатионэквивалентную, которая выражается как отношение IC50, найденной для глутатиона, к IC50(sub), найденной для субстанции [4]. Недостатком способа является необходимость большой предварительной работы: определение антиоксидантной активности растворов глутатиона и растворов исследуемых пептидов разных концентраций, построение графиков зависимостей антиоксидантной активности растворов пептидов от концентрации растворенного вещества. Недостатками способа являются также использование токсичных органических растворителей, существенное различие химической природы антиоксидантов чая и пептидов животного происхождения, использование в качестве стандартного антиоксиданта трипептида - восстановленного глутатиона.

Наиболее близким к заявляемому способу является способ определения антиокислительной активности биологически активных веществ [5], включающий взаимодействие анализируемой пробы с перманганатом калия до обесцвечивания последнего в водной сернокислой среде при комнатной температуре, отличающийся тем, что 0,05 Н раствор перманганата калия в 0,24 М растворе серной кислоты титруют раствором анализируемой пробы до обесцвечивания и расчет концентрации проводят в пересчете на кверцетин по соответствующей формуле.

К недостаткам этого метода можно отнести возможную неточность титрования, значительные различия в расходе на титрование растворов анализируемых БАВ и, в связи с этим, необходимость приготовления дополнительного количества раствора БАВ, если антиокислительная активность веществ в растворе будет низкой.

Недостатком является также то, что в формуле изобретения не указаны типы и свойства анализируемых БАВ, способы подготовки растворов БАВ, типы растворителей и другие факторы, которые могут повлиять на ход реакции и ее результаты.

Задачей настоящего изобретения является создание способа количественного определения АОА конкретного вида пищевой продукции - чая, выработанного из растения семейства Theaceae, превосходящего по точности и объективности результатов известный метод за счет использования в качестве реагента-окислителя 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия, создания оптимальных условий для действия БАВ чая, колориметрического контроля результатов реакции.

Поставленная задача решается тем, что предложенный способ определения антиокислительной активности чая предусматривает взаимодействие анализируемой пробы с реагентом-окислителем при обесцвечивании последнего, отличающийся тем, что в качестве анализируемой пробы используют разбавленный экстракт чая, полученный в режиме дегустационного заваривания, в качестве реагента-окислителя используют 0,001 н раствор 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия, анализируемую пробу и реагент-окислитель смешивают в соотношении объемов 9:1, через 5 мин реакции определяют уменьшение оптической плотности раствора колориметрическим методом при длине волны 500-520 нм.

Количественно АОА чая, соответствующую концентрации БАВ восстанавливающего характера в пересчете на стандартный антиокислитель (кверцетин), рассчитывают по формуле (1)

где АОА - концентрация биологически активных веществ восстанавливающего характера в образце чая в пересчете на кверцетин, мг/г;

Ак, Ас, Аn - оптическая плотность растворов: контрольного, стандартного антиокислителя (кверцетина) и анализируемой пробы чая, соответственно;

сс, - концентрация стандартного антиокислителя (кверцетина) в растворе, мг/мл;

v - общий объем исходного раствора пробы чая, мл;

к - степень разведения исходного раствора пробы чая;

m - масса навески анализируемой пробы чая, г.

В заявляемом способе определение АОА чая основано на реакции веществ восстанавливающего характера (АН, АН2) с DCPIP (2,6-дихлорфенолиндофенолятом натрия, C12H6C12NNaO2) по схеме:

или

Раствор DCPIP в воде имеет темно-синюю окраску. В результате восстановления DCPIP темно-синяя окраска исчезает; реакцию контролируют колориметрическим методом по уменьшению оптической плотности раствора при длине волны 500-520 нм. Предложенный способ осуществляется следующим образом.

Для определения используют 0,001н водный раствор 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия. Раствор пригоден в течение 10 суток хранения во флаконе темного стекла с притертой пробкой, в защищенном от света месте.

В качестве стандартного антиоксиданта используют раствор кверцетина в этиловом спирте с концентрацией кверцетина 1 мг/мл.

Подготовка анализируемой пробы чая. Листовой чай измельчают по ИСО 1572 [6] и хранят в герметичных контейнерах, обеспечивая защиту от солнечного света. Берут пробу измельченного чая массой 1,0 г, переносят количественно в химический стакан вместимостью 150-200 см3, добавляют 50 см3 дистиллированной воды с температурой 95-100°С, перемешивают, настаивают в течение 5 мин при комнатной температуре и фильтруют. Соотношение массы пробы измельченного чая и воды, температура воды и продолжительность экстракции определены на основании технических рекомендаций заваривания чая при дегустационной оценке и при потреблении этого напитка [7]. При уменьшении массы пробы чая менее 1,0 г результат будет неточным из-за уменьшения объема чайной заварки, ускоренного ее охлаждения во время экстракции и вследствие этого снижения выхода веществ восстанавливающего характера в экстракт. Полученный исходный экстракт чая разбавляют водой в 10 раз.

Контрольная проба. Смешивают 9 см3 воды и 1 см3 раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия. Определяют оптическую плотность полученного раствора Ак на фотоэлектроколориметре при длине волны 500-520 нм; в качестве раствора сравнения используют воду.

Проба с экстрактом чая. Смешивают 9 см3 анализируемой пробы чая и 1 см3 раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия. Через 5 мин реакции определяют оптическую плотность полученного раствора Аn на фотоэлектроколориметре при длине волны 500-520 нм; в растворе сравнения 2,6-дихлорфенолиндофенолят натрия заменяют на воду. Величина Аn должна составлять не менее 20% от значения оптической плотности контрольного раствора, в противном случае следует увеличить кратность разведения исходного раствора чая. Если после 5 мин реакции величина Аn превышает 80% от оптической плотности контрольного раствора, кратность разведения исходного раствора чая рекомендуется уменьшить.

Проба со стандартным антиоксидантом. Смешивают 9 см3 спиртового раствора кверцетина и 1 см3 раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия. Через 5 мин определяют оптическую плотность полученного раствора Ас на фотоэлектроколориметре при длине волны 500-520 нм; в растворе сравнения 2,6-дихлорфенолиндофенолят натрия заменяют на воду.

Расчет показателя суммарной АОА чая осуществляют согласно формуле (1)

где АОА - концентрация биологически активных веществ восстанавливающего характера в образце чая в пересчете на кверцетин, мг/г;

Ак, Ас, Аn - оптическая плотность растворов: контрольного, стандартного антиокислителя и анализируемой пробы, соответственно;

сс, - концентрация стандартного антиокислителя (кверцетина) в растворе, мг/мл;

v - общий объем исходного раствора пробы чая, мл;

к - степень разведения исходного раствора анализируемой пробы;

m - масса навески анализируемой пробы чая, г.

Пример

В качестве объектов выбраны чаи: черный байховый листовой, черный пакетированный, зеленый листовой.

Образцы листового чая измельчают по ИСО 1572. При анализе пакетированного чая пакет разрезают и используют измельченный образец чая. Пробу измельченного чая массой 1,0 г переносят в химический стакан вместимостью 150 см3, добавляют 50 см3 дистиллированной воды с температурой 95°С, перемешивают, настаивают в течение 5 мин при комнатной температуре и фильтруют. Полученный исходный экстракт чая разбавляют водой в 10 раз.

Для контрольной пробы смешивают 9 см3 воды и 1 см3 0,001 н водного раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия. Определяют оптическую плотность раствора на фотоэлектроколориметре при длине волны 520 нм. Для определения активности кверцетина смешивают 9 см3 спиртового раствора кверцетина (1 мг/мл) и 1 см3 0,001 н водного раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия. Через 5 мин реакции определяют оптическую плотность раствора на фотоэлектроколориметре при длине волны 520 нм. В пробах с чаем смешивают 9 см3 разбавленного экстракта чая и 1 см3 0,001 н водного раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия. Через 5 мин реакции определяют оптическую плотность раствора на фотоэлектроколориметре при длине волны 520 нм.

Количественную оценку антиокислительной активности чаев проводили расчетным путем по формуле (1). Результаты определения антиокислительной активности чаев, которая соответствует концентрации БАВ восстанавливающего характера в образце чая в пересчете на кверцетин, приведены в таблице 1.

Заявляемый способ достаточно достоверен, не слишком трудоемок, не требует сложного лабораторного оборудования и позволяет анализировать разные образцы чая в широком диапазоне антиокислительной активности.

Литература

1. Патент РФ №2567727, МПК № G01N 33/00, G01N 27/26, опубл. 10.11.2015.

2. Патент РФ №2238554, МПК G01N 33/15, G01N 27/26, опубл. 20.10.2004.

3. Патент РФ №2356050, МПК G01N 33/15, G01N 27/26, опубл. 20.05.2009.

4. Патент РФ №2680604, МПК G01N 33/50, G01N 33/00, опубл. 25.02.2019.

5. Патент РФ №2170930, МПК G01N 33/50, G01N 33/52, опубл. 20.07.2001.

6. ГОСТ 28550-90 (ИСО 1572-80). Чай. Метод приготовления измельченной пробы и определения сухих веществ.

7. Славянский А.А., Вовк Г.А., Жигалов М.С., Мойсеяк М.Б. Лабораторный практикум по технохимическому контролю чайного сырья и готовой продукции чайного производства. - М.: Издательский комплекс МГУПП, 2007. - 56 с.

Способ определения антиокислительной активности чая (АОА), включающий взаимодействие анализируемой пробы с реагентом-окислителем при обесцвечивании последнего, отличающийся тем, что в качестве анализируемой пробы используют разбавленный экстракт чая, полученный в режиме дегустационного заваривания, в качестве реагента-окислителя используют 0,001 н раствор 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия, анализируемую пробу и реагент-окислитель смешивают в соотношении объемов 9:1, через 5 мин реакции определяют уменьшение оптической плотности раствора колориметрическим методом при длине волны 500-520 нм и расчет показателя АОА в пересчете на стандартный антиокислитель (кверцетин) проводят по формуле

АОА=(Ак - Аn) ⋅ сс ⋅ v ⋅ к / (Ак - Ас) ⋅ m,

где АОА - концентрация биологически активных веществ восстанавливающего характера в образце чая в пересчете на кверцетин, мг/г;

Ак, Ас, Аn - оптическая плотность растворов: контрольного, стандартного антиокислителя (кверцетина) и анализируемой пробы чая, соответственно;

сс, - концентрация стандартного антиокислителя (кверцетина) в растворе, мг/мл;

v - общий объем исходного раствора пробы чая, мл;

к - степень разведения исходного раствора пробы чая;

m - масса навески анализируемой пробы чая, г.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к упаковке и хранению сельскохозяйственной продукции с ограничением по условиям и сроку хранения, а именно к способу компьютерного контроля их состояния при хранении.

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано для контроля качества пчелиного меда путем определения термического воздействия на мед. Способ включает приготовление водных растворов меда, последующую съемку 1Н – спектров на ЯМР-спектрометре с использованием стандартной импульсной последовательности zgpr с подавлением сигнала растворителя, фазирование спектров в автоматическом режиме, проведение коррекции базовой линии, интегрирование в составе меда дублетного сигнала аномерных протонов β-глюкозы при 4,45 м.д.

Изобретение относится к контрольно-измерительным процессам при хранении зерна в зерновой насыпи в складах напольного хранения. Устройство для выявления физиологических параметров зерна в насыпи содержит жесткую в виде штанги и полужесткую в виде зонда части.

Настоящее изобретение относится к способу и зонду для контроля предрасположенных к ферментации сельскохозяйственных продуктов, таких как заготовленное сено, солома, корм, силос, зерно, семена и ядра.

Изобретение относится к области аналитической химии, а именно к способу определения содержания иодат-ионов, и может быть использовано для точного количественного и полуколичественного экспрессного, визуально-тестового определения иодата в пищевой соли.

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для определения ртути в рыбе и рыбных продуктах. Для этого гомогенизируют мясо рыбы или рыбных продуктов и помещают образец в смесь 1% раствора перманганата калия, азотной, хлорной и серной кислот, деионизированной воды в соотношении 1:10:10:50:200.

Изобретение относится к сахарной промышленности, в частности к способам экспертизы качества сахара. Способ органолептической оценки запаха сахара заключается в применении массива восьми сенсоров на основе пьезокварцевых резонаторов с пленками поливинилпирролидона, пчелиного клея, дициклогексан-18-краун-6, бромкрезолового зеленого, полиэтиленгликольсукцината, полиэтиленгликоля ПЭГ-2000, Tween-40, триоктилфосфиноксида, массой 10-20 мкг, отборе в пробоотборник 5-10 г сахара, закрытии его герметично для получения равновесной газовой фазы над пробой, отборе 3 см3 газовой фазы и внесении в ячейку детектирования с прикрепленными в ней сенсорами, регистрации изменения сигналов всех сенсоров ∆F (Гц) в течение 120 секунд, формировании «визуального отпечатка» запаха в виде круговой диаграммы, расчете площади его фигуры S (Гц⋅с), расчете параметра подобия для анализируемой пробы и пробы стандарта по формуле; при значении ε более 0,10 делают вывод о значимом отличии запаха пробы и стандарта.

Изобретение относится к биохимии, сельскому хозяйству и пищевой промышленности. Способ определения ингибитора трипсина в соевых бобах и продуктах их переработки, включающий отбор и подготовку анализируемой пробы, экстракцию ингибитора сои в раствор, измерение и расчет трипсинингибирующей активности, отличается тем, что экстракцию ингибитора трипсина в исследуемый раствор выполняют в процессе гомогенизации, центрифугирования и фильтрации исследуемого образца в течение 10-15 минут, для определения активности трипсина кинетическим методом смешивают экстракт сои, реактив 1 (буфер рН 8,2) и контрольный раствор трипсина, инкубируют в течение 4 минут, добавляют субстрат-реактив BAPNA, расчет трипсинингибирующей активности (ТИА) выполняют по формуле: ТИА=((Ит×0,025):100)×10000:4, где Ит - количество ингибитора трипсина, %, рассчитанное по формуле: Ит=((К-О):К)×100%; К - активность трипсина в контрольной пробе, ед/л; О - активность трипсина в исследуемой пробе, ед/л; 0,025 - коэффициент перевода ингибитора трипсина из процентов в количественное выражение в мг; 100 - коэффициент перевода из процентов в мг; 10000 - коэффициент перевода из 1/10000 к 1 г; 4 - время инкубации раствора при 37°С, мин.

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к оценке питательной ценности и наличия опасных примесей в кормах для пчел и шмелей и продуктов пчеловодства. Для этого проводят количественную оценку состояния искусственных микроколоний земляных шмелей, получающих корма с тестируемыми субстратами.

Изобретение относится к оценке безопасности пищевой продукции, а именно к методу количественного определения содержания окадаиковой кислоты (диарейного токсина моллюсков) в морепродуктах методом ВЭЖХ-МС с использованием жидкостного хроматографа Agilent 1200 HPLC System и масс-спектрометра высокого разрешения Thermo Scientific Orbitrap Elite.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложены антитела к рецептору инсулиноподобного фактора роста 1 (IGF-1R) и их антигенсвязывающие фрагменты.

Изобретение относится к области иммунологии. Предложены антитела к рецептору инсулиноподобного фактора роста 1 (IGF-1R) и их антигенсвязывающие фрагменты.
Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторной диагностике, ревматологии, ортопедии и травматологии, и может быть использовано для диагностики молекулярных фенотипов остеоартрита.
Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии. Предложен способ комбинированного лечения немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ) IB - III стадии.

Изобретение относится к онкологии и неврологии. Способ ранней молекулярно-биологической иммуноспецифической диагностики злокачественных заболеваний (ЗНО) или бокового амиотрофического склероза (БАС) включает в себя иммунофенотипирование мембранных антигенов гемопоэтической стволовой клетки (ГСК) обследуемого субъекта с последующим картированием и профилированием основных белковых маркеров мембранной поверхности (БММП) ГСК этого субъекта и сравнительный анализ показателей экспрессии белков полученного профиля (исследуемого профиля) с аналогичными параметрами протеомного профиля БММП ГСК (нормального профиля), если в результате сравнительного анализа исследуемого и нормального профилей устанавливают гиперэкспрессию CD81+ маркера и гипоэкспрессию CD 38+, CD33+, CD71+, CD90+, CD56+, CD19+, CD28+, CD300+ и CD2+ маркеров в исследуемом профиле по сравнению с нормальным профилем, то диагностируют онкоспецифический профиль БММП ГСК у обследуемого субъекта; если в результате сравнительного анализа исследуемого и нормального профилей устанавливают гипоэкспрессию HLA DR+, CD38+, CD13+, CD71+, CD117+, CD90+, CD50+, CD19+ маркеров и гиперэкспрессию CD56+, CD61+, CD2+, CD7+ и CD81+ маркеров в исследуемом профиле по сравнению с нормальным профилем, то диагностируют БАС-специфический профиль БММП ГСК у обследуемого субъекта.

Изобретение относится к областям биотехнологии, молекулярной биологии и медицинской микробиологии. Описан набор олигонуклеотидных праймеров для реакции петлевой изотермической амплификации (LAMP), который позволяет амплифицировать специфические для бактерий вида Francisella tularensis фрагменты ДНК из целевого гена, имеющего нуклеотидную последовательность SEQ ID №1.

Изобретение относится к областям биотехнологии, молекулярной биологии и медицинской микробиологии. Описан набор олигонуклеотидных праймеров для реакции петлевой изотермической амплификации (LAMP), который позволяет амплифицировать специфические для бактерий вида Francisella tularensis фрагменты ДНК из целевого гена, имеющего нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1.

Изобретение относится к области информационно-измерительной техники. Предложено устройство для определения содержания воды в потоке нефтепродукта, включающее отрезок трубы, усилитель и первичный преобразователь.

Изобретение относится к аналитической химии растворов и может быть использовано для определения искусственных ароматизаторов в спиртосодержащих растворах. Способ определения искусственных ароматизаторов в спиртосодержащих растворах включает пробоотбор, определение наличия искусственных ароматизаторов, при котором пробу раствора помещают в герметично закрытый бюкс, выдерживают не менее 15 мин, получают равновесную газовую фазу, которую инжектируют в ячейку детектирования с установленными в ней двумя пьезокварцевыми резонаторами (пьезосенсорами) объемных акустических волн, на электроды одного из которых нанесена тонкая пленка из раствора дициклогексана-18-краун-6 (18К6) в этаноле, а другого - поливинилпирролидона (ПВП) в ацетоне, фиксируют изменение частоты колебания ΔF каждого пьезосенсора в течение не менее 60 с, определяют максимальное значение ΔF(18К6) на пьезосенсоре с пленкой 18К6 и ΔF(ПВП) - с пленкой ПВП, вычисляют параметр эффективности сорбции легколетучих веществ А, как отношение ΔF(18К6)/ ΔF(ПВП), решение о наличии искусственного ароматизатора в спиртосодержащем растворе принимают по результату сравнения параметра А с заданным значением.
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для диагностики контроля бронхиальной астмы (БА) у детей с атопическим дерматитом. Проводят обследование ребенка, определение его возраста и факторов наследственности.

Изобретение относится к пищевой промышленности, в частности к производству чая, и может быть использовано при анализе черного, зеленого и других видов чая. Способ определения антиокислительной активности чая включает взаимодействие разбавленного экстракта чая, полученного в режиме дегустационного заваривания, с реагентом-окислителем - 2,6-дихлорфенолиндофенолятом натрия, определение величины изменения оптической плотности реакционного раствора колориметрическим методом при длине волны 500-520 нм, расчет антиокислительной активности чая в пересчете на кверцетин по предложенной формуле. Использование способа обеспечивает получение достоверных данных о величине антиокислительной активности веществ чая, переходящих в водный экстракт при заваривании для дегустационного анализа или пищевого потребления этого напитка. 1 табл., 1 пр.

Наверх