Способ определения заселенности почв грибами родов pythium, fusarium и helminthosporium с использованием модифицированного метода флотации

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для определения уровня заселенности почв грибами родов Pythium, Fusarium и Helminthosporium возбудителей питиозной, фузариозной и обыкновенной корневых и прикорневых гнилей сельскохозяйственных культур. Способ предусматривает отбор проб почвы, увлажнение ее дистиллированной водой. К полученной пробе добавляют вазелиновое масло, перемешивают, добавляют 0,1%-ный раствор пирофосфата калия, встряхивают и отстаивают до расслоения жидкостей. Из масляной фазы суспензии отбирают пробу и наносят на предметное стекло с последующим микроскопированием и подсчетом количества ооспор, конидий и склероциев грибов pp. Pythium, Fusarium и Helminthosporium в образце почвы. Изобретение позволяет повысить точность определения заселенности почвы грибами рода Pythium, Fusarium и Helminthosporium. 3 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к области сельского хозяйства и может быть использовано для определения уровня заселенности почв грибами родов Pythium, возбудителей питиозной корневой гнили, Fusarium возбудителей фузариозной корневой тили и Helminthosporium возбудителей обыкновенной корневой гнили сельскохозяйственных культур. Это позволит заблаговременно планировать защитные мероприятия или отменить их.

Известен способ определения в почве конидий гриба Bipolaris sorokiniana - возбудителя корневых гнилей с применением метода флотации. Способ определения предусматривает отбор проб почвы, извлечение конидий гриба из почвы путем приготовления из образца почвы водно-масляной эмульсии, его встряхивания с последующим микроскопированием капель масла из поверхностного слоя эмульсии с последующим подсчетом конидий (Под ред. СОКОЛОВА М.С., ЧУЛКИНОЙ В.А., Интегрированная защита растений: Фитосанитарные системы и технологии, М, Колос, 2009, с. 580-583). Основным недостатком данного способа является то, что с его помощью невозможно точно определить заселенность почв грибами родов Pythium, Fusarium и Helminthosporium.

Техническая задача изобретения - обеспечение точности определения заселенности почв грибами Pythium, Fusarium и Helminthosporium. Техническим результатом изобретения является повышение точности определения спор данных грибов в почве. Для достижения данной технической задачи были поставлены специальные опыты, выведена формула для расчета количества ооспор, конидий и склероциев родов Pythium, Fusarium и Helminthosporium в образце почвы.

Поставленная задача решается описываемым способом определения заселенности почв грибами родов Pythium, Fusarium и Helminthosporium, включающим отбор проб почвы, добавление дистиллированной воды, перемешивание, добавление к пробам вазелинового масла, перемешивание, добавление 0,1% раствора пирофосфата калия, встряхивание, отстаивание до четкого расслоения жидкостей, отбор пробы из масляной фазы суспензии и нанесение ее в виде капель на предметное стекло с последующим микроскопированием и подсчетом количества ооспор, конидий и склероциев грибов родов Pythium, Fusarium и Helminthosporium и определением их численности в 1 г воздушно-сухой почвы по формуле:

где: N - количество ооспор, конидий и склероциев в 1 г воздушно-сухой почвы (шт.);

ncp - среднее количество ооспор, конидий и склероциев в одной капле (шт.);

Vэм - общий объем эмульсии вазелинового масла (мл);

Vк - объем одной капли (мл);

Мп - масса навески почвы (г).

Пример. Опыты проводили следующим образом: из отобранных и просеянных образцов почвы отвешивают навеску в 10 г, помещают ее в фарфоровую ступку, увлажняют 1 мл дистиллированной воды и затем тщательно перемешивают. После добавления 5 мл вазелинового масла содержимое ступки снова тщательно перемешивают. Затем почву переносят в пробирку 20×200 мм с притертой пробкой, приливают 29 мл 0,1% раствора пирофосфата калия (К4Р2O7) и интенсивно встряхивают вертикальными движениями руки в течение 5 мин. Встряхивание пробирок возможно проводить на электрической качалке в течение 15 минут (с частотой 120 колебаний в минуту). После встряхивания почвенную суспензию оставляют на 1,5-3 часа до четкого расслоения раствора пирофосфата калия и вазелинового масла. Затем из слоя масла отбирают пипеткой по 0,1 мл суспензии и наносят на два предметных стекла по три капли. Капли просматривают под микроскопом, подсчитывают количество ооспор, конидий и склероциев грибов pp. Pythium, Fusarium и Helminthosporium.

Для определения количества ооспор, конидий и склероциев в образце почвы вели подсчет по вышеприведенной формуле:

где: N - количество ооспор и склероциев в 1 г воздушно-сухой почвы (шт.);

ncp - среднее количество ооспор, конидий и склероциев в одной капле (шт.);

Vэм - общий объем эмульсии (вазелинового масла, мл);

Vк - объем одной капли (мл);

Мп - масса навески почвы (г).

Пример расчета. Сначала определяют nср из нескольких значений (например, n1, n2, n3). Для этого просматривают три капли под микроскопом и подсчитывают в каждой число ооспор, конидий и склероциев питиевых, фузариевых и гельминтоспориозных грибов. Например, получено: в первой капле, то есть, n1=2 шт., во второй - n2=0 шт., третьей - n3=6 шт. Среднее количество ооспор, конидий и склероциев грибов pp. Pythium, Fusarium и Helminthosporium в одной капле будет равно:

Общий объем эмульсии (VЭM) в экспериментах составлял 5 мл, объем одной капли (VК) - 0,025 мл, масса навески почвы (МП) - 10 г. Подставляя данные величины в формулу (1) получаем:

В результате проведенных нами многолетних исследований была определена пороговая численность возбудителей питиозной, фузариозной и гельминтоспориозной корневых гнилей, результаты которых представлены в таблицах 1-3.

1. - Шкала классификации почв по их заселенности возбудителями питиозной корневой гнили

2. - Шкала классификации почв по их заселенности возбудителями фузариозной корневой и прикорневой гнили

3. - Шкала классификации почв по их заселенности возбудителями обыкновенной корневой гнили

Таким образом, модифицированным методом флотации определена заселенность почвы возбудителями питиозной, обыкновенной и фузариозной прикорневой и корневой гнили, выявлена их пороговая численность, рекомендованы способы расчета количества ооспор, конидий и склероциев в 1 г воздушно - сухой почвы.

Эффективность применения данного способа выражается в более точном определении заселенности почвы грибами родов Pythium, Fusarium и Helminthosporium по сравнению с традиционным методом флотации и использовании оценочной шкалы.

Список литературы

1. Чулкина В.А. и др. Агротехнический метод защиты растений. Учебное пособие. - М.: ИВЦ «МАРКЕТИНГ», Новосибирск. - 2000.

2. Чулкина В.А. и др. Интегрированная защита растений: фитосанитарные системы и технологии. - М.; Колос. - 2009.

Способ определения заселенности почв грибами родов Pythium, Fusarium и Helminthosporium, включающий отбор проб почвы, добавление дистиллированной воды, перемешивание, добавление к пробам вазелинового масла, перемешивание, добавление 0,1% раствора пирофосфата калия, встряхивание, отстаивание до четкого расслоения жидкостей, отбор пробы из масляной фазы суспензии и нанесение ее в виде капель на предметное стекло с последующим микроскопированием и подсчетом количества ооспор, конидий и склероциев грибов родов Pythium, Fusarium и Helminthosporium и определением их численности в 1 г воздушно-сухой почвы по формуле:

где: N - количество ооспор, конидий и склероциев в 1 г воздушно-сухой почвы (шт.);

ncp - среднее количество ооспор, конидий и склероциев в одной капле (шт.);

Vэм - общий объём эмульсии вазелинового масла (мл);

Vк - объем одной капли (мл);

Мп - масса навески почвы (г).



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к агрохимии, предназначено для использования в растениеводстве при расчете оптимальных доз калийных удобрений, вносимых в почвы под сельскохозяйственные культуры.

Изобретение относится к экологии и может быть использовано в системе мониторинга окружающей среды в зоне освоения нефтегазовых месторождений в районах Крайнего Севера.

Способ агрохимического обследования земель сельскохозяйственного назначения относится к сельскому хозяйству, а именно к агрохимическому картографированию земель сельскохозяйственного назначения.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к земледелию и растениеводству. В способе последовательно формируют, по меньшей мере, два образца семян зерновых культур: опытный и контрольный вариант образцов семян зерновых культур, обеспечивают контакт опытного образца семян с почвой с добавлением воды до достижения наименьшей влагоемкости почвы; обеспечивают контакт контрольного образца семян с песком с добавлением воды до достижения наименьшей влагоемкости песка; осуществляют выдержку указанных опытных и контрольных образцов семян до проращивания, удаляют почву и песок с пророщенных семян и помещают очищенные опытные и контрольные образцы пророщенных семян в идентичные прозрачные емкости с водой, уплотняют пророщенные семена в емкостях посредством вибрационного воздействия в вертикальной плоскости и последующего ударного воздействия на дно емкости.

Изобретение относится к области исследований свойств пород сланцевых толщ. При осуществлении способа определяют литологические типы пород в интервалах глубин сланцевой толщи.

Изобретение относится к области сельского хозяйства. В способе формируют, по меньшей мере, один обработанный раствором пестицида опытный образец семян зерновых культур и один необработанный контрольный образец семян зерновых культур, обеспечивают контакт опытного обработанного образца семян с почвой с добавлением воды до достижения наименьшей влагоемкости почвы; обеспечивают контакт контрольного образца семян с песком с добавлением воды до достижения наименьшей влагоемкости песка; осуществляют выдержку указанных опытных и контрольных образцов семян до проращивания, удаляют почву и песок с пророщенных семян и помещают очищенные опытные и контрольные образцы пророщенных семян в идентичные прозрачные емкости с водой, уплотняют пророщенные семена в емкостях посредством вибрационного воздействия в вертикальной плоскости и последующего ударного воздействия на дно емкости, при этом после вибрационного воздействия на образцы семян в емкости помещают идентичные по массе грузы, определяют насыпные объемы опытного (V2) и контрольного (V3) образцов пророщенных семян по высоте размещения груза от дна емкости, по которым определяют величину суммарного ингибирования семян опытного образца токсикозом почв и пестицидом (Иi) по формуле: Иi=((V3-V2i)/(V3-V1))*100%, где V1 - поправочный коэффициент, характеризующий насыпной объем набухших семян злаковых колосовых зерновых культур, проращивание которых осуществлялось в течение 24 часов; V2i - насыпной объем проросших семян опытного образца; V3 - насыпной объем проросших семян контрольного образца, i - порядковый номер опытного образца; по значениям насыпных объемов V2i, где i - порядковый номер опытного образца, строят кинетические зависимости изменения длины проростков для выбранной культуры при проращивании обработанных семян этой культуры на исследуемой почве от времени (toi, мин); определяют величину временного сдвига (%) для каждого образца и выбранной почвы (Ti) Ti=[(toi-tпi)/tпi]*100%, где Ti - временной сдвиг (%), tпi - время прорастания семян в песке, мин, tоi - время прорастания семян в почве до той же длины проростков, что и в песке, мин; формируют зависимость временного сдвига (Ti) от величины суммарного ингибирования (Иi) при развитии семян, определенную по насыпному объему (V2i); определяют время задержки прорастания опытного образца семян в почве по формуле Δto=1080*Ti/100, где Δto - время задержки прорастания обработанных семян в почве (мин), Ti - временной сдвиг, который определили при помощи экспериментальной кривой для величины найденного суммарного ингибирования (%).

Изобретение относится к отрасли сельского хозяйства, а именно к области исследования состояния почвы, может использоваться в сельском хозяйстве для отбора проб почвы с различной глубины и проведения исследований по некоторым ее физико-механическим и химическим свойствам.

Изобретение относится к экологии и может быть использовано для идентификации источника и времени загрязнения окружающей среды дихлордифенилтрихлорэтаном (ДДТ) в регионах Крайнего Севера.

Изобретение относится к области сельского хозяйства. Способ количественной оценки эрозионных потерь почвы с применением наземного лазерного сканера заключается в том, что устанавливают не менее трех опорных реперных точек с известными координатами для идентификации координат их размещения на местности и обеспечения повторности наблюдений либо определяют эти координаты топографо-геодезической съемкой с точностью ±1 мм; устанавливают сканирующее оборудование таким образом, чтобы лазерный сканер находился на самой нижней точке исследуемого подверженного эрозии участка; обрабатывают полученные сканы, а именно сделанные в разное время сканы размещают в единую систему координат, очищают сканы от нежелательных объектов, для каждого скана с помощью встроенных в используемую компьютерную программу алгоритмов строят цифровую трехмерную модель рельефа с шагом сетки, равным шагу сканирования, определяют объём V и толщину слоя i потери почвы от эрозии (i–) и аккумуляции (i+) смытого материала на всем выбранном участке путем вычитания разновременных цифровых моделей рельефа с помощью алгоритмов программы, поставляемой с используемым сканирующим оборудованием; выполняют вычисление показателей почвенной эрозии и аккумуляции на исследуемой территории, для чего рассчитывают слой эрозии почвы и аккумуляции почв на участке площадью S в миллиметрах по объему смыва почв V и объему аккумуляции почв V+ по экспериментально выведенным формулам i– = V–/S × 1000; i+ = V+/S × 1000; выполняют расчёт преобладающего эрозионного процесса Δi: Δi = (V+ – V–/S) × 1000; выполняют расчёт объема смыва аккумуляции почвы на единицу площади, получают интегрированный удельный показатель E: E = (V+ – V–/S) × 10000.

Изобретение относится к грунтоведению и может быть использовано при проектировании искусственных оснований фундаментов зданий и сооружений из насыпного глинистого грунта.

Генотерапевтический днк-вектор на основе генотерапевтического днк-вектора vtvaf17, несущий целевой ген, выбранный из группы генов col1a1, col1a2, bmp2, bmp7, для повышения уровня экспрессии этих целевых генов, способ его получения и применения, штамм escherichia coli scs110-af/vtvaf17- col1a1 или escherichia coli scs110-af/vtvaf17- col1a2 или escherichia coli scs110-af/vtvaf17- bmp2 или escherichia coli scs110-af/vtvaf17- bmp7, несущий генотерапевтический днк-вектор, способ его получения, способ производства в промышленных масштабах генотерапевтического днк-вектора // 2707537
Изобретение относится к генной инженерии. Описан генотерапевтический ДНК-вектор на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущий целевой ген, выбранный из группы генов COL1A1, COL1A2, ВМР2, ВМР7, для повышения уровня экспрессии этого целевого гена в организме человека и животных, при этом генотерапевтический ДНК-вектор VTvaf17-COL1A1, или VTvaf17- COL1A2, или VTvaf17- ВМР2, или VTvaf17-ВМР7 имеет нуклеотидную последовательность SEQ ID №1 или SEQ ID №2 или SEQ ID №3 или SEQ ID №4 соответственно.

Изобретение относится к области биотехнологии. Штамм Rhodococcus ruber ИЭГМ 346, обладающий способностью полностью деструктировать диклофенак натрия, депонирован в Национальном биоресурсном центре - Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (НБЦ ВКПМ) ФГБУ ГосНИИгенетика НИЦ «Курчатовский институт» под регистрационным номером ВКПМ Ас-2106.

Изобретение относится к биотехнологии, генной инженерии, медицинской микробиологии. Предложена рекомбинантная плазмида pHFQ2.21, экспрессирующая клонированный ген hfq (шаперона) Vibrio cholerae 01 биовара El Tor, встроенный по сайтам Bam HI-PstI в полилинкер векторной плазмиды pQE30, под контролем Т5-промотора.

Изобретение относится к области биотехнологии и генной инженерии. Предложен способ получения штамма Е.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ повышения продуктивности бактерий Escherichia coli.

Изобретение относится к биотехнологии. Микробный препарат содержит смесь предварительно высушенных до влажности не более 10% штаммов Rhodococcus erythropolis BKM Ас-2784D, Acinetobacter guillouiae B-3216D, Acinetobacter guillouiae B-3217D в равных объемах с содержанием каждого компонента не менее 1×107 KOE/г.

Группа изобретений относится к биотехнологии и сельскому хозяйству. Предложены выделенный штамм вида Mycosphaerella sp.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм лактобактерий Enterococcus hirae Т-8 13-2018, обладающий способностью продуцировать молочную кислоту и высокой антагонистической активностью по отношению к условно-патогенной и патогенной микрофлоре депонированный под регистрационным номером ВКПМ В-13055.

Генотерапевтический днк-вектор на основе генотерапевтического днк-вектора vtvaf17, несущий целевой ген, выбранный из группы генов ski, tgfb3, timp2, fmod для повышения уровня экспрессии этих целевых генов, способ его получения и применения, штамм escherichia coli scs110-af/vtvaf17-ski или escherichia coli scs110-af/vtvaf17-tgfb3 или escherichia coli scs110-af/vtvaf17-timp2 или escherichia coli scs110-af/vtvaf17-fmod, несущий генотерапевтический днк-вектор, способ его получения, способ производства в промышленных масштабах генотерапевтического днк-вектора // 2705256
Изобретение относится к генной инженерии. Описан генотерапевтический ДНК-вектор на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17 для лечения заболеваний, характеризующихся развитием фиброза тканей, формированием рубцов, повреждением соединительной ткани и для ускорения заживления ран, реэпителизации, для увеличения образования грануляционной ткани и ингибирования образования рубцовой ткани, путем повышения уровня экспрессии целевого гена SKI в организме человека и животных, при этом генотерапевтический ДНК-вектор содержит кодирующую часть целевого гена SKI, клонированную в генотерапевтический ДНК-вектор VTvaf17, с получением генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17-SKI, с нуклеотидной последовательностью SEQ ID №1.

Генотерапевтический днк-вектор на основе генотерапевтического днк-вектора vtvaf17, несущий целевой ген cftr, или nos1, или aq1, или aq3, или aq5, для лечения заболеваний, связанных с необходимостью повышения уровня экспрессии этих целевых генов, способ его получения и использования, штамм escherichia coli scs110-af/vtvaf17-cftr, или escherichia coli scs110-af/vtvaf17-nos1, или escherichia coli scs110-af/vtvaf17-aq1, или escherichia coli scs110-af/vtvaf17-aq3, или escherichia coli scs110-af/vtvaf17-aq5, несущий генотерапевтический днк-вектор, способ его получения, способ производства в промышленных масштабах генотерапевтического днк-вектора // 2705252
Изобретение относится к генной инженерии, биотехнологии, медицине и представляет собой генотерапевтический ДНК-вектор на основе генотерапевтического ДНК-вектора VTvaf17, несущий целевой ген CFTR, или NOS1, или AQ1, или AQ3, или AQ5, для лечения заболеваний, связанных с необходимостью повышения уровня экспрессии этих целевых генов, представляющий собой группу генотерапевтических ДНК-векторов, каждый из которых содержит кодирующую часть по крайней мере одного целевого гена, выбранного из CFTR, или NOS1, или AQ1, или AQ3, или AQ5, клонированную в генотерапевтический ДНК-вектор VTvaf17, при этом группу генотерапевтических ДНК-векторов составляют генотерапевтический ДНК-вектор VTvaf17-CFTR, размером 7606 п.н., или VTvaf17-NOS1, размером 7468 п.н., или VTvaf17-AQ1 размером 3982 п.н., или VTvaf17-AQ3, размером 4024 п.н., или VTvaf17-Q5, размером 3943 п.н., с нуклеотидной последовательностью SEQ ID №1, или SEQ ID №2, или SEQ ID №3, или SEQ ID №4, или SEQ ID №5 соответственно или их сочетание.

Изобретение относится к области медицины и медицинской диагностики. Раскрыт способ микроскопической диагностики качества спермы после седиментации эякулята, включающий отбор клеток из осадка эякулята (ОЭ), подготовку цитологических препаратов из отобранных клеток ОЭ с размещением на предметные стекла, высушивание и окрашивание препаратов, последующий подсчет количества, оценку различных типов клеток и сравнение с данными контрольной группы для получения заключения.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для определения уровня заселенности почв грибами родов Pythium, Fusarium и Helminthosporium возбудителей питиозной, фузариозной и обыкновенной корневых и прикорневых гнилей сельскохозяйственных культур. Способ предусматривает отбор проб почвы, увлажнение ее дистиллированной водой. К полученной пробе добавляют вазелиновое масло, перемешивают, добавляют 0,1-ный раствор пирофосфата калия, встряхивают и отстаивают до расслоения жидкостей. Из масляной фазы суспензии отбирают пробу и наносят на предметное стекло с последующим микроскопированием и подсчетом количества ооспор, конидий и склероциев грибов pp. Pythium, Fusarium и Helminthosporium в образце почвы. Изобретение позволяет повысить точность определения заселенности почвы грибами рода Pythium, Fusarium и Helminthosporium. 3 табл., 1 пр.

Наверх