Способы лечения или профилактики мигренозной головной боли

Авторы патента:

ВАРГАС, Габриель (US)

ДУНАЕВИЧ, Эдуардо (US)

СУНЬ, Хун (US)

ЛЕНЦ, Роберт А. (US)

A61P25/06 - средства против мигрени

A61M5/20 - автоматические шприцы, например с автоматически приводимым в движение штоком поршня, с автоматической инъекцией через иглу, с автоматическим наполнением (A61M 5/142 имеет преимущество)

A61K39/395 - антитела (агглютинины A61K 38/36); иммуноглобулины; иммунные сыворотки, например антилимфоцитные сыворотки

Владельцы патента RU 2707745:

ЭМДЖЕН ИНК. (US)

Предложенная группа изобретений относится к области медицины, в частности неврологии. Предложен способ предупреждения или снижения частоты возникновения мигренозной головной боли у пациента и способ профилактического лечения пациента от мигрени, включающий введение пациенту антитела против рецептора CGRP или его антигенсвязывающего фрагмента в дозе от 35 мг до 210 мг один раз в месяц. Предложен предварительно заполненный автоинъектор или шприц для профилактического лечения мигрени, включающий фармацевтическую композицию, содержащую 70 или 140 мг антитела против рецептора CGRP, ацетатный буфер, сахарозу и полисорбат. Предложенная группа изобретений обеспечивает эффективное снижение частоты, тяжести и/или продолжительности мигренозной головной боли у пациентов, имеющих для этого показания, без каких-либо или с минимальными нежелательными побочными эффектами. 3 н. и 25 з.п. ф-лы, 9 ил., 11 табл., 5 пр.

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

[1] Данная заявка заявляет приоритет по предварительной заявке № 62/152708, поданной 24 апреля 2015 года, полное содержание которой включено в данный документ посредством ссылки.

ОПИСАНИЕ ФАЙЛА, ПРЕДСТАВЛЕННОГО В ЭЛЕКТРОННОМ ВИДЕ

[2] Данная заявка содержит Перечень последовательностей, представленный в электронном виде в формате ASCII и полностью включенный в данный документ посредством ссылки. Копия Перечня последовательностей в машиночитаемом формате, которая была создана 3 августа 2015 года, называется A-1945-WO-PCT_ST25.txt и имеет размер 134 килобайта.

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[3] Данное изобретение относится к неврологии и биофармацевтическим препаратам. В частности, изобретение относится к профилактике мигрени с применением антитела, которое избирательно ингибирует рецептор пептида, кодируемого геном кальцитонина (CGRP) человека.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[4] Мигрень представляет собой комплексное, распространенное патологическое неврологическое состояние, которое характеризуется тяжелыми эпизодическими приступами головной боли и связанными с ними симптомами, которые могут включать тошноту, рвоту, чувствительность к свету, звуку или движению. У некоторых пациентов головную боль предваряют или сопровождают предупреждающие признаки или симптомы со стороны органов чувств (так называемая аура). Головная боль может быть сильной и у некоторых пациентов может быть односторонней. Приступы мигрени нарушают повседневную активность жизни, обуславливают ежегодные финансовые потери за пропущенные рабочие дни, насчитывающие миллиарды долларов, и снижают работоспособность (Modi and Lowder, Am. Fam. Physician, Vol. 73: 72-78, 2006).

[5] Мигрень является широко распространенной болезнью во всем мире, от приступов которой страдают около 15% населения Европы и 12% населения США (Lipton et al, Neurology, Vol. 68: 343-349, 2007). Кроме того, установлено, что мигрень ассоциирована с рядом психических и соматических сопутствующих заболеваний, таких как депрессия и патологии сосудов (Buse et al., Neurol. Neurosurg. Psychiatry, Vol. 81: 428-432, 2010; Bigal et al., Neurology, Vol. 72: 1864-1871, 2009).

[6] При приступе головной боли, обусловленном мигренью, лечение, как правило, назначают сразу же, в первую очередь - анальгетики и класс препаратов, называемых триптанами (Humphrey et al. Ann NY Acad Sci., Vol. 600: 587-598, 1990; Houston and Vanhoutte, Drugs, Vol. 31: 149-163 1986). Триптаны (селективные агонисты серотонина 5-HT1B/1D) являются эффективными препаратами для лечения острой мигрени и обычно хорошо переносятся, но противопоказаны при наличии сердечно-сосудистых заболеваний из-за возможной коронарной вазоконстрикции, обуславливаемой их приемом. Кроме того, во многих пациентов с мигренью триптаны не проявляют надлежащей эффективности. В метаанализе 53 исследований до трети всех пациентов с мигренью и 40% всех приступов мигрени «не отвечали» на лечение триптанами (Ferrari et al., Lancet, Vol. 358: 1668-1675, 2001).

[7] Профилактика мигрени представляет собой область медицины с большой неудовлетворенной потребностью. Для около 40% пациентов, страдающих мигренью, профилактическое лечение было бы эффективным (Lipton et al., Neurology, Vol. 68: 343-349, 2007). Тем не менее, при доступности профилактических способов воздействия, только около 12% пациентов получают профилактическую терапию, частично из-за ее ограниченной эффективности и значимости аспектов переносимости и безопасности. Топирамат, противосудорожный препарат, который блокирует потенциалзависимые натриевые каналы и некоторые глутаматные рецепторы (AMPA-каинат), представляет собой лекарственное средство, наиболее часто применяемое для профилактики мигрени в Соединенных Штатах. Топирамат является единственным средством для профилактики мигрени с доказанной эффективностью у рандомизированных плацебо-контролируемых исследованиях как для пациентов с эпизодической, так и хронической мигренью (Diener et al., Cephalalgia, Vol. 27: 814-823, 2007; Silberstein et al., Headache, Vol. 47: 170-180, 2007). Однако, у около 50% пациентов топирамат не проявляет должной эффективности и плохо переносится. Распространенные нежелательные явления, ассоциированные с лечением топираматом, включают парестезию, анорексию и когнитивные нежелательные явления, включая психомоторную заторможенность, сонливость, нарушения речи, памяти и концентрации внимания (Brandes et al., JAMA, Vol. 291: 965-973, 2004; Adelman et al., Pain Med., Vol. 9: 175-185 2008; Silberstein et al., Arch Neurol., Vol. 61: 490-495, 2004). В открытом исследовании с адаптируемой дозой у 20% пациентов топирамат был отменен из-за развития нежелательных эффектов (Nelles et al., Headache, Vol. 49: 1454-1465, 2009).

[8] Таким образом, актуальной является необходимость разработки более эффективных и/или переносимых способов лечения для пациентов, страдающих мигренью.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[9] Данное изобретение основано, в частности, на определении терапевтического режима для эффективного снижения частоты, тяжести и/или продолжительности мигренозной головной боли у пациентов, имеющих для этого показания, без каких-либо или с минимальными нежелательными побочными эффектами. Соответственно, в одном варианте реализации данного изобретения предлагается способ предотвращения или снижения частоты возникновения мигренозной головной боли у пациента, имеющего для этого показания, включающий введение пациенту антитела против рецептора CGRP или его антигенсвязывающего фрагмента в дозе от около 35 мг до около 210 мг в месяц. В некоторых вариантах реализации данного изобретения предлагается способ профилактики мигрени у пациента, включающий введение пациенту антитела против рецептора CGRP или его антигенсвязывающего фрагмента в дозе от около 35 мг до около 210 мг в месяц.

[10] В некоторых вариантах реализации указанных способов антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент вводят пациенту в дозе, достаточной для уменьшения количества дней в месяц с мигренозной головной болью у пациента, по сравнению с количеством дней в месяц с мигренозной головной болью до лечения, или количеством дней в месяц с мигренозной головной болью у пациента, не получающего антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент. В некоторых вариантах реализации данного изобретения доза антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, вводимая пациенту, является достаточной для уменьшения количества дней в месяц с мигренозной головной болью по меньшей мере на 50% по сравнению с количеством дней с головной болью до лечения, или количеством дней с головной болью у пациента, не получающего антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент.

[11] В некоторых вариантах реализации указанных способов антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент вводят пациенту в дозе, достаточной для уменьшения количества часов в месяц с мигренозной головной болью у пациента, по сравнению с количеством часов в месяц с мигренозной головной болью до лечения, или количеством часов в месяц с мигренозной головной болью у пациента, не получающего антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент. В некоторых других вариантах реализации указанных способов антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент вводят пациенту в дозе, достаточной для уменьшения количества дней в месяц с применением пациентом препарата против мигрени, по сравнению с количеством дней в месяц с применением пациентом препарата против мигрени, до лечения, или количеством дней в месяц с применением препарата против мигрени пациентом, не получающим антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент.

[12] В некоторых вариантах реализации указанных способов антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент вводят пациенту в дозе, достаточной для уменьшения количества дней ухудшения общего физического состояния пациента из-за мигренозной головной боли по сравнению с количеством дней ухудшения общего состояния до лечения, или количеством дней ухудшения общего состояния у пациента, не получающего антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент вводят пациенту в дозе, достаточной для уменьшения влияния мигренозной головной боли на повседневную активность, по сравнению с влиянием до лечения, или влиянием у пациента, не получающего антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент. Нарушения общего физического состояния, связанные с мигренозной головной болью, и влияние мигренозной головной боли на повседневную активность можно оценить с применением ряда утвержденных вопросников, как описано в данном документе.

[13] В некоторых вариантах реализации указанных способов, доза, достаточная для уменьшения количества дней в месяц с мигренозной головной болью количества часов в месяц с мигренозной головной болью количества дней в месяц с применением препарата против мигрени, нарушения общего физического состояния из-за мигрени, и/или влияния мигрени на повседневную активность у пациента, имеющего для этого показания, составляет от около 35 мг до около 210 мг в месяц. В некоторых вариантах реализации данного изобретения достаточная доза составляет от около 70 мг до около 140 мг в месяц. В одном конкретном варианте реализации данного изобретения достаточная доза составляет около 70 мг в месяц. В другом конкретном варианте реализации данного изобретения достаточная доза составляет около 140 мг в месяц. В этих и других вариантах реализации данного изобретения дозу антитела против рецептора CGRP или его антигенсвязывающего фрагмента вводят один раз в месяц (1 р/мес).

[14] В некоторых вариантах реализации указанных способов введение антитела против рецептора CGRP или его антигенсвязывающего фрагмента в дозах, описанных в данном документе, по существу не вызывает нежелательного побочного эффекта у пациента. В частности, введение антитела против рецептора CGRP или его антигенсвязывающего фрагмента в дозах, описанных в данном документе, по существу не вызывает нежелательного побочного эффекта, ассоциированного с другими способами профилактики мигрени, включая нежелательные побочные эффекты, ассоциированные с противоэпилептическими препаратами, бета-блокаторами и антидепрессантами. В некоторых вариантах реализации данного изобретения количество и тип нежелательных побочных эффектов, ассоциированных с введением антитела против рецептора CGRP или связывающего фрагмента, статистически не отличается от количества и типа нежелательных побочных эффектов, ассоциированных с введением плацебо.

[15] В некоторых вариантах реализации, описанных в данном документе способов антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент вводят пациенту парентерально. В конкретных вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент вводят пациенту путем подкожной инъекции. В одном варианте реализации данного изобретения подкожная инъекция представляет собой болюсную инъекцию, вводимую пациенту один раз в месяц. Подкожную инъекцию можно осуществлять пациенту с помощью предварительно заполненного шприца или автоинъектора, содержащего месячную дозу антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента.

[16] В некоторых вариантах реализации данного изобретения пациенты, которым необходимо вводить антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент согласно способам по данному изобретению, имеют эпизодическую мигрень или эпизодическая мигрень у них была диагностирована ранее. Эпизодической мигренью может быть эпизодическая мигрень с низкой частотой приступов или эпизодическая мигрень с высокой частотой приступов. В других вариантах реализации данного изобретения пациенты, которым необходимо вводить антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент согласно способам по данному изобретению, имеют хроническую мигрень или хроническая мигрень у них была диагностирована ранее.

[17] В некоторых вариантах реализации способов по данному изобретению, пациенты, которым необходимо вводить антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент, ранее не получали каких-либо препаратов с целью профилактики головной боли, обусловленной мигренью (т.е. пациенты были «наивными» относительно лечения). В других вариантах реализации способов по данному изобретению, у пациентов, которым необходимо вводить антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент, отмечали неэффективность или непереносимость по меньшей мере одного другого препарата, назначаемого с целью профилактики мигрени. Таким образом, у пациентов, которым необходимо вводить антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент, в некоторых вариантах реализации данного изобретения отмечали неэффективность или непереносимость по меньшей мере одного агента, выбранного из группы, состоящей из противоэпилептического средства (например, топирамат, вальпроевая кислота), трициклического антидепрессанта (например, амитриптилин), бета-блокатора (например, пропранолол, тимолол) или ботулинического токсина А. В одном варианте реализации данного изобретения у пациента ранее отмечали неэффективность или непереносимость двух агентов, назначаемых с целью профилактики мигрени. В другом варианте реализации данного изобретения у пациента ранее отмечали неэффективность или непереносимость трех агентов, назначаемых с целью профилактики мигрени.

[18] В любых вариантах реализации описанных в данном документе способов антитело против рецептора CGRP или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связывается с эпитопом, образованным из аминокислот как в CRLR человека, так и в полипептидных компонентах RAMP1 человека рецептора CGRP человека и избирательно ингибирует рецептор CGRP человека по сравнению с рецепторами AM1, AM2 и/или амилина человека. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связывается с рецептором CGRP человека с K_D ≤ 100 нМ. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его антигенсвязывающий фрагмент специфически связывается с рецептором CGRP человека с K_D ≤ 10 нМ.

[19] В одном варианте реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его антигенсвязывающий фрагмент, вводимый пациенту согласно способам по данному изобретению, содержит CDRH1, имеющую последовательность SEQ ID NO: 14, CDRH2, имеющую последовательность SEQ ID NO: 23, CDRH3, имеющую последовательность SEQ ID NO: 34, CDRL1, имеющую последовательность SEQ ID NO: 44, CDRL2, имеющую последовательность SEQ ID NO: 55, и CDRL3, имеющую последовательность SEQ ID NO: 65. В другом варианте реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его антигенсвязывающий фрагмент, вводимый пациенту согласно способам по данному изобретению, содержит CDRH1, имеющую последовательность SEQ ID NO: 15, CDRH2, имеющую последовательность SEQ ID NO: 29, CDRH3, имеющую последовательность SEQ ID NO: 35, CDRL1, имеющую последовательность SEQ ID NO: 45, CDRL2, имеющую последовательность SEQ ID NO: 61, и CDRL3, имеющую последовательность SEQ ID NO: 66.

[20] Антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент, пригодный для применения в способах по данному изобретению, может содержать вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий последовательность SEQ ID NO: 92 и вариабельный участок легкой цепи, содержащий последовательность SEQ ID NO: 80. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент, применяемый в способах по данному изобретению, содержит вариабельный участок тяжелой цепи, содержащий последовательность SEQ ID NO: 98 и вариабельный участок легкой цепи, содержащий последовательность SEQ ID NO: 84. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP имеет константную область IgG1 человека или константную область IgG2 человека. В одном варианте реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 105, и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 123. В другом варианте реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 111, и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 127.

[21] Любые из специфических антител, описанных в Таблице 7, или их антигенсвязывающие фрагменты, могут применяться в способах по данному изобретению. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент, вводимый пациенту согласно способам по данному изобретению, представляет собой антитело 4E4 или его связывающий фрагмент. В других вариантах данного изобретения антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент, вводимый пациенту согласно способам по данному изобретению, представляет собой антитело 9F5 или его связывающий фрагмент.

[22] В данном изобретении также предлагаются фармацевтические композиции антител против рецептора CGRP или их связывающие фрагменты для применения в описанных в данном документе способах. Фармацевтические композиции могут содержать один или более фармацевтически приемлемых разбавителей, носителей или вспомогательных веществ, включая буферы, поверхностно-активные вещества и стабилизирующие агенты. В некоторых вариантах реализации данного изобретения фармацевтические композиции содержат антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент, буфер, поверхностно-активное вещество и стабилизирующий агент. В одном варианте реализации данного изобретения фармацевтическая композиция содержит антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент, ацетатный буфер, полисорбат 20 или полисорбат 80, а также сахарозу. Любая из описанных в данном документе фармацевтических композиций может быть помещена в устройства для самостоятельного введения, такие как предварительно заполненные шприцы или автоинъекторы, для введения (например, подкожного введения) пациенту в соответствии с описанными в данном документе способами.

[23] Таким образом, данное изобретение также включает предварительно заполненный шприц или автоинъектор для применения с целью профилактики мигренозной головной боли у пациента, имеющего для этого показания, включающей введение фармацевтической композиции, содержащей антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент, ацетатный буфер, сахарозу и полисорбат. В некоторых вариантах реализации данного изобретения предварительно заполненный шприц или автоинъектор содержит фармацевтическую композицию, содержащую от около 70 мг/мл до около 140 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, от около 10 мМ до около 15 мМ ацетата натрия, от около 0,008% до около 0,012% вес/об. полисорбата и от около 8% до около 9% вес/об. сахарозы при рН от около 4,8 до около 5,5. В некоторых вариантах реализации данного изобретения объем инъекции предварительно заполненного шприца или автоинъектора составляет около 1 мл или менее.

[24] В некоторых вариантах реализации данного изобретения также предлагаются наборы, содержащие фармацевтическую композицию или устройство для самостоятельного введения, описанные в данном документе, и инструкции для применения фармацевтической композиции или устройства для самостоятельного введения для доставки терапевтически эффективной дозы, например, путем подкожной инъекции с целью профилактики мигренозной головной боли у пациента, имеющего для этого показания. В вариантах реализации данного изобретения, в которых фармацевтическая композиция представлена в лиофилизированной или сухой порошкообразной форме, набор может содержать разбавитель и инструкции для восстановления фармацевтической композиции перед введением.

[25] Особое внимание уделено применению антител против рецептора CGRP или их связывающих фрагментов в любом из способов, описанных в данном документе, или приготовлению лекарственных средств для введения по любому из способов, описанных в данном документе. Например, в данном изобретении предлагается антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент для применения в способе предотвращения или уменьшения частоты возникновения мигренозной головной боли у пациента, имеющего для этого показания, при этом указанный способ включает введение пациенту антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента в дозе от около 35 мг до около 210 мг в месяц. В данном изобретении также предлагается антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент для применения в способе профилактики у пациента мигренозной головной боли, при этом указанный способ включает введение пациенту антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента в дозе от около 35 мг до около 210 мг в месяц.

[26] В данном изобретении также предлагается применение антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента для приготовления препарата, назначаемого с целью предотвращения или уменьшения частоты возникновения мигренозной головной боли у пациента, имеющего для этого показания, при этом антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент применяют в дозе от около 35 мг до около 210 мг в месяц. В данном изобретении дополнительно предлагается применение антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента для приготовления препарата, назначаемого с целью профилактики мигренозной головной боли у пациента, при этом антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент применяют в дозе от около 35 мг до около 210 мг в месяц.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

[27] Фигура 1 показывает процент ингибирования, индуцированного капсаицином кровотока в дерме (КД) у здоровых людей и у пациентов с мигренью в зависимости от концентрации моноклонального антитела AMG 334 в сыворотке.

[28] Фигура 2 показывает процент ингибирования, индуцированного капсаицином кровотока в дерме (КД) и концентрацию моноклонального антитела AMG 334 в сыворотке в динамике после подкожного (п/к) введения однократной дозы и повторной дозы (один раз каждые четыре недели, 1 р/4 нед) AMG 334 здоровым субъектам-людям и пациентам с мигренью. Продолжительность максимального ингибирования КД согласуется с отношением «концентрация дозы-КД».

[29] Фигура 3A показывает средние профили «концентрация AMG 334 - время» в сыворотке здоровых субъектов-людей (ЗС) и пациентов с мигренью (ПМ), получающих однократные, возрастающие дозы AMG 334 или соответствующее плацебо либо подкожно (п/к), либо внутривенно (в/в).

[30] Фигура 3B показывает средние профили «концентрация AMG 334 - время» в сыворотке здоровых субъектов-людей (ЗС) и пациентов с мигренью (ПМ), получающих подкожно (п/к) множественные дозы AMG 334 или плацебо в дни 1, 29 и 57.

[31] Фигура 4A показывает процент ингибирования индуцированного капсаицином кровотока в дерме через четыре дня после подкожного (п/к) введения однократной дозы AMG 334 или плацебо у здоровых субъектов и пациентов с мигренью в исследовании с однократными нарастающими дозами.

[32] Фигура 4B показывает процент ингибирования индуцированного капсаицином кровотока в дерме через восемь дней после подкожного (п/к) введения первой дозы из трех AMG 334 или плацебо у здоровых субъектов и у пациентов с мигренью в исследовании с множественными дозами.

[33] Фигура 5 показывает изменение от исходного уровня среднего количества дней с мигренью в месяц у пациентов с эпизодической мигренью, которые получали плацебо или одну из трех месячных подкожных доз (7 мг, 21 мг или 70 мг) AMG 334, моноклонального антитела человека против рецептора CGRP.

[34] Фигура 6 показывает изменение от исходного уровня количества дней с применением препаратов против острой мигрени (например, триптаны, эрготамины) пациентами с эпизодической мигренью, которые получали плацебо или одну из трех ежемесячных подкожных доз (7 мг, 21 мг или 70 мг) моноклонального антитела человека против рецептора CGRP (AMG 334).

[35] Фигура 7A показывает изменение от исходного уровня среднего количества дней с мигренью у пациентов, страдающих эпизодической мигренью с низкой частотой приступов (менее 8 дней с мигренозной головной болью на исходном уровне), и у пациентов, страдающих эпизодической мигренью с высокой частотой приступов (8 или более дней с мигренозной головной болью на исходном уровне), которые получали подкожные инъекции плацебо или 70 мг антитела против рецептора CGRP (AMG 334) один раз в месяц.

[36] Фигура 7B показывает изменение от исходного уровня среднего количества дней с мигренью у пациентов, страдающих эпизодической мигренью, которые либо не получали ранее лечения, либо медикаментозная профилактика мигрени у них оказалась неээфективной, и получали путем подкожной инъекции либо плацебо, либо 70 мг антитела против рецептора CGRP (AMG 334) один раз в месяц.

[37] Фигура 8 показывает изменение от исходного уровня среднего количества дней с мигренью в месяц у пациентов с эпизодической мигренью, которые получали плацебо или одну из трех месячных подкожных доз (7 мг, 21 мг или 70 мг) антитела против рецептора CGRP (AMG 334). После 12-недельной, двойной слепой фазы исследования, пациенты в каждой из четырех групп лечения ежемесячно получали путем подкожной инъекции антитело против рецептора CGRP в дозе 70 мг во время исследования открытой фазы дополнительного лечения. Данные показаны как средние значения, полученные методом наименьших квадратов, и стандартная ошибка - во время двойной слепой фазы, а также средняя и стандартная ошибка - во время фазы открытого продленного лечения.

[38] Фигура 9A показывает изменение от исходного уровня количества дней с головной болью в месяц у пациентов с эпизодической мигренью, которые получали плацебо или одну из трех месячных подкожных доз (7 мг, 21 мг или 70 мг) антитела против рецептора CGRP (AMG 334). После 12-недельной, двойной слепой фазы исследования, пациенты в каждой из четырех групп лечения ежемесячно получали путем подкожной инъекции антитело против рецептора CGRP в дозе 70 мг во время исследования открытой фазы дополнительного лечения. Данные показаны как средние значения, полученные методом наименьших квадратов, и стандартная ошибка - во время двойной слепой фазы, а также средняя и стандартная ошибка - во время открытой фазы дополнительного лечения.

[39] Фигура 9B показывает изменение от исходного уровня количества дней с применением препаратов против мигрени (например, триптаны, эрготамины) пациентами с эпизодической мигренью, которые получали плацебо или одну из трех ежемесячных подкожных доз (7 мг, 21 мг или 70 мг) антитела против рецептора CGRP (AMG 334). После 12-недельной, двойной слепой фазы исследования, пациенты в каждой из четырех групп лечения ежемесячно получали путем подкожной инъекции антитело против рецептора CGRP в дозе 70 мг во время исследования открытой фазы дополнительного лечения. Данные показаны как средние значения, полученные методом наименьших квадратов, и стандартная ошибка - во время двойной слепой фазы, а также средняя и стандартная ошибка - во время открытой фазы дополнительного лечения.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[40] Существующие в данное время методы лечения мигренозной головной боли у пациентов-людей характеризуются ненадлежащим профилем «польза - риск» из-за нежелательных побочных эффектов, которые многие пациенты не могут или отказываются переносить. Данное изобретение направлено на решение этой проблемы, в частности, путем разработки новой схемы с применением антител против рецептора CGRP, которая обеспечивает эффективную профилактику мигрени без каких-либо побочных эффектов или с развитием минимальных побочных эффектов. С помощью способов по изобретению, описанных в данном документе, можно эффективно снижать частоту, тяжесть и/или уменьшать продолжительность мигренозной головной боли у пациентов с эпизодической мигренью, а также хронической мигренью.

[41] Мигренозные головные боли - это повторяющиеся головные боли, длительностью от 4 до 72 часов, которые характеризуются односторонней, пульсирующей, и/или умеренной или сильной болью, и/или болью, которая усиливается при физической активности. Мигренозные головные боли часто сопровождаются тошнотой, рвотой и/или чувствительностью к свету (фотофобия), звуку (фонофобия) или запаху. У некоторых пациентов, страдающих мигренью, началу приступа головной боли предшествует аура. Аура обычно представляет собой визуальное, сенсорное, речевое или двигательное нарушение, которое сигнализирует о скором начале приступа головной боли. С помощью способов, описанных в данном документе, у пациентов-людей предотвращают, лечат или ослабляют один или более симптомов мигренозной головной боли с аурой и без нее.

[42] В одном варианте реализации данного изобретения предлагается способ предотвращения или снижения частоты возникновения мигренозной головной боли у пациента, имеющего для этого показания, включающий введение пациенту фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество антитела против рецептора CGRP или его антигенсвязывающего фрагмента. Термин «пациент» включает пациентов-людей. В данном контексте термин «предотвращение или снижения частоты возникновения мигренозной головной боли» относится к уменьшению частоты, продолжительности или тяжести мигренозной головной боли по сравнению с частотой, продолжительностью или тяжестью мигренозной головной боли до введения композиции или по сравнению с частотой, продолжительностью или тяжестью мигренозной головной боли у пациента, не получавшего композицию (т.е. контрольного субъекта). Таким образом, в некоторых вариантах реализации данного изобретения предлагается способ профилактики мигренозной головной боли у пациента, включающий введение пациенту фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество антитела против рецептора CGRP или его антигенсвязывающего фрагмента. Термин «профилактика» относится к воздействию, которое должно быть осуществлено перед приступом мигрени с целью уменьшения частоты, тяжести и/или продолжительности приступов мигренозной головной боли у пациента. В некоторых вариантах реализации данного изобретения профилактика может повысить эффективность или ответ пациента на препараты, применяемые для лечения острой мигрени.

[43] В некоторых вариантах реализации указанных способов по данному изобретению введение антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента уменьшает количество дней с мигренозной головной болью, наблюдаемых у пациента в течение месяца, по сравнению с количеством дней с головной болью до введения антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента (т.е. исходный уровень до лечения), и/или по сравнению с количество дней с головной болью у пациента, не получающего антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент. Термин «день с мигренозной головной болью» включает любой календарный день, в течение которого пациент испытывает начало, продолжение или повторение «мигренозной головной боли» с аурой или без нее длительностью более 30 минут. Термин «мигренозная головная боль» означает головную боль, сопровождающуюся тошнотой или рвотой или чувствительностью к свету или звуку и/или головную боль, характеризующуюся по меньшей мере двумя из следующих характеристик боли: односторонняя боль, пульсирующая боль, бол умеренной или сильной интенсивности или боль, усугубляемая физической активностью. Исходный уровень до лечения может быть установлен путем определения соответствующего параметра (например, количества дней с мигренозной головной болью) в течение одного, двух, трех, четырех, пяти или шести или более месяцев до введения антитела против рецептора CGRP или связывающего фрагмента. В некоторых вариантах реализации данного изобретения исходный уровень до лечения устанавливается на основе измерения конкретного параметра за три месяца до введения антитела против рецептора CGRP или связывающего фрагмента.

[44] В некоторых вариантах реализации данного изобретения количество дней в месяц с мигренозной головной болью у пациента снижается на около 10%, около 15%, около 20%, около 25%, около 30%, около 35%, около 40%, около 45% около 50%, около 55% или около 60% после введения антитела против рецептора CGRP или связывающего фрагмента по сравнению с исходным уровнем до лечения и/или контрольным субъектом (т.е. пациентом, не получающим антитело или связывающий фрагмент). В некоторых вариантах реализации данного изобретения количество дней в месяц с мигренозной головной болью у пациента снижается на 65% или более, например, по меньшей мере на около 70%, по меньшей мере на около 75% или по меньшей мере на около 80% после введения антитела против рецептора CGRP или связывающего фрагмента по сравнению с исходным уровнем до лечения и/или контрольным субъектом. В одном варианте реализации данного изобретения количество дней в месяц с мигренозной головной болью у пациента снижается по меньшей мере на 50% после введения антитела против рецептора CGRP или связывающего фрагмента. В другом варианте реализации данного изобретения количество дней в месяц с мигренозной головной болью у пациента снижается по меньшей мере на 75% после введения антитела против рецептора CGRP или связывающего фрагмента.

[45] Снижение частоты возникновения мигренозной головной боли также можно оценить как уменьшение количества часов мигренозной головной боли у пациента в течение месяца, по сравнению с исходным уровнем до лечения и/или количеством часов головной боли у пациента, не получающего антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент. Термин «час мигренозной головной боли» означает любой час, в течение которого пациент испытывает начало, продолжение или повторение приступа «мигренозной головной боли» с аурой или без нее. В некоторых вариантах реализации данного изобретения введение антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента уменьшает количество часов а месяц с мигренозной головной болью у пациента, по меньшей мере на около 20%, по меньшей мере на около 30%, по меньшей мере на около 40%, по меньшей мере на около 50%, по меньшей мере на около 60% или по меньшей мере на около 70% по сравнению с исходным уровнем до лечения и/или количеством часов а месяц с головной болью у контрольного субъекта, не получающего антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент.

[46] Эффективность терапевтических схем, описанных в данном документе, также можно оценить на основании количества дней, в течение которых пациент нуждается в неотложном лечении с применением препаратов против мигрени, количества дней, в течение которых пациент испытывает физические или функциональные нарушения из-за мигрени, или количества приступов мигрени у пациента. Например, в некоторых вариантах реализации данного изобретения введение антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента уменьшает количество дней в месяц, в течение которых пациент нуждается в неотложном лечении с применением препаратов против мигрени, по сравнению с исходным уровнем до лечения и/или соответствующим количеством дней у пациента, не получающего антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент. В данном контексте термин «день, в течение которого была потребность в лечении препаратами против острой мигрени» или «день, в течение которого была потребность в неотложном лечении с применением препаратов против мигрени» относится к календарному дню, в течение которого пациент принимал лекарственное средство против мигрени. Лекарственные средства против острой мигрени, включают, но не ограничиваются ими, триптаны (например, алмотриптан, фроватриптан, ризатриптан, суматриптан, наратриптан, элетриптан и золмитриптан), эрготамины (например, дигидроэрготамин и эрготамин с кофеином), нестероидные противовоспалительные препараты (например, ацетилсалициловая кислота, ибупрофен, напроксен, индометацин и диклофенак) и опиоиды (например, кодеин, морфин, гидрокодон, фентанил, меперидин и оксикодон). Количество дней в месяц, в течение которых существует потребность лечения препаратами против острой мигрени может быть уменьшено по меньшей мере на около 25%, по меньшей мере на около 30%, по меньшей мере на около 40%, по меньшей мере на около 50%, по меньшей мере на около 60%, по меньшей мере на около 70%, по меньшей мере на около 75%, по меньшей мере на около 80% или по меньшей мере на около 85% после введения антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента. В некоторых вариантах реализации данного изобретения введение антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента полностью исключает необходимость применения препаратов против острой мигрени.

[47] В некоторых вариантах реализации данного изобретения введение антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента в соответствии с описанными в данном документе способами может снизить степень влияния на общее физическое состояние или качество жизни, о чем сообщают сами пациенты, по сравнению с исходным уровнем до лечения и/или по сравнению с пациентом, не получающим антитело против рецептора CGRP. Мигренозные головные боли часто влияют на качество жизни пациентов, не позволяют наслаждаться досугом, нарушают повседневную деятельностью, а также обуславливают снижение продуктивности работы. Это влияние можно оценить с помощью утвержденных анкет и опросников, таких как модифицированный опросник для оценки потери трудоспособности при мигрени (MIDAS), тест-6 для оценки влияния головной боли (HIT-6), опросник для оценки качества жизни при мигренью (MSQ), опросник для оценки функционального влияния мигрени (MFIQ) и дневник влияния мигрени на физическую активность (MPFID). Таким образом, способы по данному изобретению улучшают один или более аспектов качества жизни пациента и/или уменьшают влияние мигрени на один или более аспектов физической, социальной или эмоциональной функции пациента, оцениваемых с помощью одного или более из этих опросников.

[48] MIDAS представляет собой опросник, заполняемый самим пациентом, состоящий из 5 пунктов, в котором суммируется количество рабочих дней за последний месяц, в течение которых пациент не смог выполнять работу на рабочем месте и дома. MIDAS также оценивает нетрудоспособность в семейных, социальных и досуговых мероприятиях. Шкала MIDAS представляет собой сумму дней, в течение которых пациент из-за головной боли был нетрудоспособен на оплачиваемой работе, работе по дому и в нерабочей (семейной, социальной, досуговой) деятельности; и сумму дней на оплачиваемой работе или работе по дому, в течение которых производительность труда снижалась не менее чем наполовину. Шкала классифицируется по 4 степеням тяжести: I степень=0-5 (определяется как минимальная или непостоянная нетрудоспособность), II степень=6-10 (легкая или непостоянная нетрудоспособность), III степень=11-20 (умеренная нетрудоспособность), и IV степень=21 и больше (тяжелая нетрудоспособность). В некоторых вариантах реализации данного изобретения введение антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента согласно способам по данному изобретению уменьшает балл по шкале MIDAS у пациента (т.е. уменьшает степень тяжести/снижает частоту или тяжесть нетрудоспособности, вызванную мигренью) по сравнению с баллом пациента до лечения или по сравнению с баллом пациента, не получающего антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент.

[49] MSQ представляет собой опросник, заполняемый самим пациентом, состоящий из 14 пунктов, с помощью которого анализируют (i) как мигрень ограничивает повседневную социальную и трудовую деятельность пациента (ролевая функция - ограничение), (ii) как мигрень препятствует этой деятельности (ролевая функция - препятствие) и (iii) эмоции, связанные с мигренью, у пациента (эмоциональная функция). Пациенты отвечают на каждый пункт опросника по 6-балльной шкале: «ни разу», «незначительное количество времени», «некоторое время», «значительное количество времени», «большая часть времени» и «все время», которым присваивается балл от 1 до 6, соответственно. Первичные баллы вычисляли как сумму ответов на пункты и шкалировали от 0 до 100, в результате чего более высокие баллы указывали на лучшее качество жизни. В некоторых вариантах реализации данного изобретения введение антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента согласно способам по данному изобретению повышает балл пациента по шкале MSQ (т.е. качество жизни пациента улучшается) по сравнению с баллом пациента до лечения или баллом пациента, не получающего антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент.

[50] MFIQ представляет собой опросник, заполняемый самим пациентом, состоящий из 26 пунктов, с помощью которого анализируют влияние мигрени на более широкий спектр функций пациента. В частности, с помощью MFIQ измеряют влияние мигрени пациента на физическое функционирование, повседневную деятельность, социальное функционирование и эмоциональное функционирование. Субъекты отвечают на пункты по 5-балльной шкале, при этом каждому ответу присваивается балл от 1 до 5, причем балл 5 представляет наибольшую нагрузку. Баллы рассчитываются как сумма ответов на пункт, после этого сумма пересчитывается в шкалу 0-100, причем более высокие баллы представляют большую нагрузку. В некоторых вариантах реализации данного изобретения введение антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента согласно способам по данному изобретению снижает балл пациента по шкале MFIQ (т.е. влияние мигрени на функционирование пациента снижается) по сравнению с баллом пациента до лечения или баллом пациента, не получающего антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент.

[51] MPFID представляет собой опросник, заполняемый самим пациентом, состоящий из 13 пунктов, с помощью которого анализируют физическое функционирование. С помощью MPFID оценивают влияние мигрени на повседневную активность и общее физическое состояние здоровья. Субъекты отвечают на пункты по 5-балльной шкале, указывая степень сложности, ранжированную от: «без каких-либо трудностей» до «невозможно выполнить» и степень частоты, ранжированную от: «ни разу» до «все время». Каждому ответу присваивается балл от 1 до 5, причем балл 5 представляет наибольшую нагрузку. Баллы рассчитываются как сумма ответов на пункт, после этого сумма пересчитывается в шкалу 0-100, причем более высокие баллы представляют большее влияние мигрени (т. е. более высокую нагрузку). В некоторых вариантах реализации данного изобретения введение антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента согласно способам по данному изобретению снижает балл пациента по шкале MPFID(т. е. влияние мигрени на физическое функционирование пациента или повседневную активность снижается) по сравнению с баллом пациента до лечения или баллом пациента, не получающего антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент. В одном конкретном варианте реализации данного изобретения введение антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента пациенту снижает балл нарушения общего физического состояния пациента по меньшей мере на 50% по сравнению с баллом пациента до лечения или балом контрольного субъекта (т.е. субъекта, не получающего антитело против рецептора CGRP или связывающего фрагмента). В некоторых вариантах реализации данного изобретения среднее количество дней в месяц с нарушением общего физического состояния пациента, измеренное с помощью шкалы MPFID, уменьшается после введения антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, по сравнению с количеством дней в месяц с нарушением общего физического состояния до лечения пациента или средним количеством дней в месяц с нарушением общего физического состояния у контрольного субъекта. В другом конкретном варианте реализации данного изобретения введение антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента пациенту снижает влияние мигрени на балл повседневной активности пациента, измеряемый с помощью шкалы MPFID, по меньшей мере на около 50% по сравнению с баллом пациента до лечения или баллом контрольного субъекта. В некоторых вариантах реализации данного изобретения среднее количество дней в месяц с влиянием на повседневную активность пациента, измеряемое с помощью шкалы MPFID, уменьшается после введения антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, по сравнению с количеством дней в месяц с влиянием на повседневную активность до лечения пациента или средним количеством дней в месяц с влиянием на повседневную активность контрольного субъекта.

[52] В некоторых вариантах реализации способов по данному изобретению количество приступов мигрени, испытываемых пациентом, снижается после введения антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента по сравнению с количеством приступов мигрени, испытываемых пациентом до лечения, или количеством приступов мигрени, испытываемых контрольным субъектом. В данном контексте термин «приступ мигрени» относится к эпизоду любой мигренозной головной боли, как определено в данном документе. Приступ мигрени, который прерывается сном или временно ослабляется, а затем повторяется в течение 48 часов, обычно считается одним приступом. Точно так же, приступ мигрени, который успешно купируется препаратом против острой мигрени, но рецидивирует в течение 48 часов, также считается одним приступом. В некоторых вариантах реализации данного изобретения количество приступов мигрени снижается у пациента по меньшей мере на около 25%, по меньшей мере на около 30%, по меньшей мере на около 40%, по меньшей мерена около 50%, по меньшей мере на около 60%, по меньшей мере на около 70%, или по меньшей мере на около 75% после введения антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента по сравнению с количеством приступов до лечения или количеством приступов у контрольного субъекта.

[53] В некоторых вариантах реализации данного изобретения посредством применения терапевтических схем по изобретению ослабляют один или более симптомов, ассоциированных с мигренью у пациента, имеющего для этого показания. Например, введение антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента пациенту согласно описанным в данном документе способам уменьшает частоту проявления или купирует один или более симптомов у пациентов по сравнению с контрольным субъектом (т.е. субъектом, не получающим антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент). Симптомы, которые могут быть ослаблены или купированы с помощью способов по данному изобретению, включают, но не ограничиваются ими, вазомоторные симптомы (например, приливы жара, покраснение лица, потоотделение и ночная потливость), светобоязнь (чувствительность к свету), звукобоязнь (чувствительность к звуку), чувствительность к запахам, вертиго, головокружение, тошнота, рвота и головная боль.

[54] В некоторых аспектах способы по данному изобретению включают введение пациенту фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество антитела против рецептора CGRP или его антигенсвязывающего фрагмента. Термин «терапевтически эффективное количество» относится к количеству, достаточному для устранения мигренозной головной боли или симптомов, особенно патологического состояния или симптомов, ассоцированных с мигренозной головной болью, или иного предотвращения, препятствования, замедления или устранения прогрессирования мигренозной головной боли или любого другого нежелательного симптома, ассоциированного с мигренозной головной болью, каким-либо образом. В некоторых вариантах реализации данного изобретения терапевтически эффективное количество представляет собой количество, достаточное для предотвращения или задержки возникновения или повторения приступа мигренозной головной боли или снижения вероятности возникновения или повторения мигренозной головной боли или ее симптомов.

[55] Таким образом, в некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его антигенсвязывающий фрагмент вводят пациенту в общей дозе от около 35 мг до около 210 мг в месяц. Например, доза антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента может составлять около 40 мг, около 50 мг, около 60 мг, около 70 мг, около 80 мг, около 90 мг, около 100 мг, около 110 мг, около 120 мг, около 130 мг, около 140 мг, около 150 мг, около 160 мг, около 170 мг, около 180 мг, около 190 мг, около 200 мг или около 210 мг в месяц. Также предполагаются диапазоны между любыми и всеми этими конечными точками, например, от около 35 до около 70 мг, от около 40 до около 90 мг, от около 50 мг до около 80 мг, от около 35 до около 140 мг, от около 70 мг до около 140 мг, от около 50 мг до около 100 мг, от около 70 мг до около 210 мг, от около 140 мг до около 210 мг или от около 150 мг до около 200 мг в месяц. В некоторых таких вариантах реализации данного изобретения месячная доза антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента является подобной между пациентами независимо от веса тела. Другими словами, в этих вариантах реализации данного изобретения месячная доза антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента представляет собой общую дозу и не корректируется на вес тела пациента. В одном варианте реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент вводят пациенту в общей дозе от около 70 мг до около 140 мг в месяц. В некоторых вариантах реализации описанных в данном документе способов антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент вводят пациенту общей дозе около 70 мг в месяц. В других вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент вводят пациенту в общей дозе около 140 мг в месяц.

[56] В некоторых вариантах реализации данного изобретения месячная доза антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента может зависеть от веса тела пациента. Например, в некоторых вариантах реализации данного изобретения месячная доза антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента может составлять от около 0,3 до около 3,5 мг/кг веса тела от около 0,5 мг/кг до около 3 мг/кг веса тела или от около 1 мг/кг до около 2,5 мг/кг веса тела. Например, месячная доза антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента может составлять около 0,3 мг/кг, около 0,4 мг/кг, около 0,5 мг/кг, около 0,6 мг/кг, около 0,7 мг/кг, около 0,8 мг/кг, около 0,9 мг/кг, около 1 мг/кг, около 1,1 мг/кг, около 1,2 мг/кг, около 1,3 мг/кг, около 1,4 мг/кг, около 1,5 мг/кг, около 1,6 мг/кг, около 1,7 мг/кг, около 1,8 мг/кг, около 1,9 мг/кг, около 2 мг/кг, около 2,1 мг/кг, около 2,2 мг/кг, около 2,3 мг/кг, около 2,4 мг/кг, около 2,5 мг/кг, около 2,6 мг/кг, около 2,7 мг/кг, около 2,8 мг/кг, около 2,9 мг/кг, около 3 мг/кг, около 3,2 мг/кг, около 3,3 мг/кг, около 3,4 мг/кг или около 3,5 мг/кг веса тела. В одном варианте реализации данного изобретения месячная доза антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента составляет от около 0,8 до около 1,2 мг/кг веса тела. В другом варианте реализации данного изобретения месячная доза антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента составляет от около 1,6 до около 2,2 мг/кг веса тела.

[57] Дозу антитела против рецептора CGRP или его антигенсвязывающего фрагмента можно вводить за одно введение или разделять между несколькими введениями в течение периода введения доз препарата. Например, в некоторых вариантах реализации данного изобретения терапевтически эффективную дозу антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента вводят за одно введение в течение каждого периода введения доз препарата. Таким образом, в некоторых вариантах реализации данного изобретения любую из доз антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, описанного в данном документе, можно вводить пациенту один раз в месяц (введение дозы 1 р/мес). Пациентам в режиме введения 1 р/мес обычно вводят антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент каждые 24-36 дней, предпочтительно каждые 28-35 дней, более предпочтительно каждые 28-31 день или еще более предпочтительно каждые 28 дней или каждые 30 дней. В этих и других вариантах реализации данного изобретения месячную дозу вводят пациенту в виде болюсной инъекции, например, с применением устройства для самостоятельной инъекции, как описано в данном документе. Например, месячную дозу 70 мг можно вводить пациенту в виде единственной болюсной инъекции 70 мг, в некоторых случаях с помощью автоинъектора, шприца-ручки или предварительно заполненного шприца, содержащего дозу 70 мг. В некоторых вариантах реализации данного изобретения месячную дозу вводят в двух или более последовательных инъекциях. Например, месячную дозу 70 мг можно вводить пациенту в двух последовательных инъекциях 35 мг, в некоторых случаях с помощью двух инъекционных устройств (например, автоинъекторов, шприц-ручек или предварительно заполненных шприцов), содержащих дозу 35 мг. Аналогично, месячную дозу 140 мг можно вводить пациенту в двух последовательных инъекциях 70 мг, в некоторых случаях с помощью двух инъекционных устройств (например, автоинъекторов, шприц-ручек или предварительно заполненных шприцов), содержащих дозу 70 мг. Последовательные инъекции, полученные пациентом в течение одного дня, считаются одним введением. Другими словами, в качестве примера, одна болюсная инъекция 70 мг и две последовательные инъекции по 35 мг в течение одного дня считались одним введением дозы 70 мг.

[58] В альтернативных вариантах реализации данного изобретения дозы антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента разделяют на два или более введения в течение циклического периода введения доз препарата. Например, для циклического периода введения препарата, составляющего один месяц, месячную дозу можно разделить на четыре дозы и вводить еженедельно или разделить на две дозы и вводить каждые две недели. Любую из доз антитела против рецептора CGRP или связывающего фрагмента, описанного в данном документе, можно разделить на два или более введения. Количество введений и интервал между введениями можно скорректировать для конкретного пациента в зависимости от типа и тяжести мигрени (например, эпизодическая или хроническая мигрень), возраста пациента, физического состояния пациента, сопутствующего лечения другими препаратами и/или наличия других патологических состояний.

[59] В некоторых вариантах реализации данного изобретения циклический период введения доз антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, которые описаны в данном документе, составляет один месяц. Другими словами, дозы антител против рецептора CGRP или их связывающих фрагментов являются месячными дозами, но могут вводиться в одно введение (т.е. один раз в месяц, введение дозы 1 р/мес) или разделяться на несколько введений в течение месяца (например, ½ месячной дозы вводят каждые две недели). В некоторых вариантах реализации данного изобретения частота введения доз составляет один раз каждые 2 месяца (введение дозы 1 р/2 мес). В других вариантах реализации данного изобретения частота введения доз составляет один раз каждые 3 месяца (введение дозы 1 р/3 мес).

[60] В некоторых вариантах реализации способов по данному изобретению антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент вводят пациенту в течение заданного периода лечения. «Период лечения» начинается после введения первой дозы антитела против рецептора CGRP или связывающего фрагмента и заканчивается при введении последней дозы антитела против рецептора CGRP или связывающего фрагмента. Период лечения может составлять от около 1 месяца до около 36 месяцев, например, около 2 месяцев, около 3 месяцев, около 4 месяцев, около 5 месяцев, около 6 месяцев, около 7 месяцев, около 8 месяцев, около 9 месяцев, около 10 месяцев, около 11 месяцев, около 12 месяцев, около 13 месяцев, около 14 месяцев, около 15 месяцев, около 18 месяцев, около 21 месяца, около 24 месяцев, около 27 месяцев, около 30 месяцев или около 33 месяцев. В некоторых вариантах реализации данного изобретения период лечения составляет около 6 месяцев. В других вариантах реализации данного изобретения период лечения составляет около 7 месяцев. В других вариантах реализации данного изобретения период лечения составляет около 12 месяцев. В некоторых вариантах реализации данного изобретения период лечения может составлять более 36 месяцев, например, 48 или 60 или 64 месяца или более. В одном конкретном варианте реализации данного изобретения период лечения составляет по меньшей мере около 6 месяцев и вызывает статистически значимое уменьшение частоты, продолжительности или тяжести мигренозной головной боли у пациента по сравнению с субъектами, не получавшими лечение.

[61] Введение антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента согласно способам по данному изобретению предпочтительно вызывает небольшое количество или вообще не вызывает нежелательных побочных эффектов у пациента. В данном контексте термин «нежелательный побочный эффект» относится к любой аномалии, дефекту, мутации, поражению, дегенерации, вредной или нежелательной реакции, симптому или повреждению, которые могут быть обусловлены приемом препарата. В некоторых вариантах реализации данного изобретения введение антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента по существу не вызывает одного или более нежелательных побочных эффектов, ассоциированных с другими препаратами для профилактики мигрени (например, амитриптилин, дивальпрокс, вальпроевая кислота, пропранолол, тимолол, топирамат и ботулинический токсин А). Побочные эффекты, ассоциированные с другими препаратами для профилактики мигрени, включают, но не ограничиваются ими, усталость, тошноту, головокружение, бессонницу, депрессию, снижение переносимости физических нагрузок, тремор, парестезию, тератогенность и когнитивные нарушения. В других вариантах реализации данного изобретения введение антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента ассоциируется с более низкой частотой или количеством нежелательных побочных эффектов по сравнению частотой или количеством нежелательных побочных эффектов, ассоциированных с другими препаратами для профилактики мигрени. В других вариантах реализации данного изобретения введение антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента ассоциируется c более низкой частотой отмены препарата из-за нежелательных побочных эффектов по сравнению с частотой отмены препарата из-за нежелательных побочных эффектов, ассоциированных с другими препаратами для профилактики мигрени. В некоторых вариантах реализации данного изобретения количество и тип нежелательных побочных эффектов, ассоциированных с введением антитела против рецептора CGRP или связывающего фрагмента, статистически не отличается от количества и типа нежелательных побочных эффектов, ассоциированных с введением плацебо. В некоторых вариантах реализации данного изобретения введение антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента не ассоциируется с нежелательным явлением выше уровня 2, которое оценивается с помощью стандартных терминологических критериев нежелательных явлений v4. 0 (CTCAE). В других вариантах реализации данного изобретения введение антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента не ассоциируется с нежелательным явлением выше уровня 1, которое оценивается согласно CTCAE.

[62] В некоторых вариантах реализации данного изобретения пациенты, у которых определяются показания для лечения согласно способам по изобретению, имеют эпизодическую мигрень, страдают от этой патологии или она у них диагностирована. Эпизодическая мигрень диагностируется, когда пациенты с мигренью в анамнезе (например, по меньшей мере пять приступов мигренозной головной боли за период жизни) отмечают 14 или менее дней с мигренозной головной болью в месяц, как определено в данном документе. В некоторых вариантах реализации данного изобретения пациенты, которые имеют эпизодическую мигрень, страдают от этой патологии или она у них диагностирована, отмечают в среднем по меньшей мере четыре, но менее чем 15 дней в месяц с мигренозной головной болью. В связанных вариантах реализации данного изобретения пациенты, которые имеют эпизодическую мигрень, страдают от этой патологии или она у них диагностирована, отмечают в среднем менее чем 15 дней в месяц с головной болью. В данном контексте термин «день с головной болью» представляет собой любой календарный день, в течение которого пациента беспокоит мигренозная головная боль, как определено в данном документе, или любая головная боль, которая длится более 30 минут или требует соответствующего лечения острой головной боли. В некоторых вариантах реализации данного изобретения пациент может быть классифицирован как имеющий или страдающий от эпизодической мигрени с высокой частотой приступов. Эпизодическая мигрень с высокой частотой приступов может характеризоваться количеством дней с мигренозной головной болью в месяц, составляющем 8-14 дней. В других вариантах реализации данного изобретения пациент может быть классифицирован как имеющий или страдающий от эпизодической мигрени с низкой частотой приступов. Эпизодическая мигрень с низкой частотой приступов может характеризоваться количеством дней с мигренозной головной болью в месяц, составляющем менее чем 8 дней.

[63] В некоторых вариантах реализации данного изобретения пациенты, у которых определяются показания для лечения согласно способам по изобретению, имеют хроническую мигрень, страдают от этой патологии или она у них диагностирована. Хроническая мигрень диагностируется, когда пациенты с мигренью в анамнезе (например, по меньшей мере пять приступов мигренозной головной боли за период жизни) отмечают 15 или более дней с головной болью в месяц, и по меньшей мере 8 из этих дней с головной болью являются днями с мигренозной головной болью. В некоторых вариантах реализации данного изобретения пациенты, которые имеют хроническую мигрень, страдают от этой патологии или она у них диагностирована, отмечают в среднем 15 или более дней в месяц с мигренозной головной болью. В некоторых вариантах реализации описанных в данном документе способов введение антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента предотвращает, уменьшает или замедляет прогрессирование эпизодической мигрени у пациента до хронической мигрени.

[64] В некоторых вариантах реализации описанных в данном документе способов пациент является «наивным» относительно лечения. В одном варианте реализации данного изобретения пациент является «наивным» относительно лечения, если пациент ранее не получал лечения по поводу мигренозных головных болей. В другом варианте реализации данного изобретения пациент является «наивным» относительно лечения, если пациенту не вводили терапевтический агент с целью лечения мигренозных головных болей. В некоторых вариантах реализации данного изобретения пациент является «наивным» относительно лечения, если пациент ранее не получал препараты с целью профилактики мигренозных головных болей. Например, в некоторых вариантах реализации данного изобретения «наивный» относительно лечения пациент ранее не получал лечения или терапевтического агента с целью профилактики эпизодической мигрени. В некоторых других вариантах реализации данного изобретения «наивный» относительно лечения пациент ранее не получал лечения или терапевтического агента с целью профилактики хронической мигрени.

[65] В некоторых вариантах реализации способов, описанных в данном документе, у пациента отмечали неэффективность или непереносимость по меньшей мере одного другого препарата, назначаемого с целью профилактики мигренозной головной боли. Например, в одном конкретном варианте реализации данного изобретения у пациента отмечали неэффективность предыдущей терапии с применением по меньшей мере одного агента, назначаемого с целью профилактики мигренозной головной боли. В данном контексте термин «отсутствие эффективности» или «отсутствие ответа» относится к отсутствию эффективности профилактического агента, применяемого в стандартной терапевтической схеме для уменьшения частоты, продолжительности и/или тяжести мигренозной головной боли у пациента. Например, в одном варианте реализации данного изобретения пациент с неэффективностью предшествующей профилактики с применением агента против мигрени, представляет собой пациента, который имел такое же или большее количество дней с мигренозной головной болью в месяц после введения профилактического агента против мигрени, по сравнению с количеством дней с мигренозной головной болью до применения указанного агента. В другом варианте реализации данного изобретения пациент с неэффективностью предшествующей профилактики с применением агента против мигрени, представляет собой пациента, который имел такое же или большее количество дней в месяц с приемом препаратов для лечения острой мигрени после введения профилактического агента против мигрени, по сравнению с количеством дней в месяц с приемом препаратов для лечения острой мигрени до применения указанного агента. В еще одном варианте реализации данного изобретения пациент с неэффективностью предшествующей профилактики с применением агента против мигрени, представляет собой пациента, который имел такое же или большее количество приступов мигрени после введения профилактического агента против мигрени, по сравнению с количеством приступов мигрени до применения указанного агента. В еще одном варианте реализации данного изобретения пациент с неэффективностью предшествующей профилактики с применением агента против мигрени, представляет собой пациента, который имел такую же или большую степень ухудшения общего состояния здоровья (например, среднее количество дней в месяц с ухудшением общего состояния здоровья), что измеряется с помощью шкалы MPFID, после введения профилактического агента против мигрени, по сравнению со степенью ухудшения общего состояния здоровья до применения указанного агента.

[66] Неэффективность предшествующей профилактики с применением агента против мигрени также может включать невозможность переносить профилактический агент против мигрени. Например, в некоторых вариантах реализации данного изобретения пациент с неэффективностью предшествующей профилактики с применением агента против мигрени, представляет собой пациента, который не может переносить побочные эффекты, ассоциированные с указанным агентом. В таких вариантах реализации данного изобретения побочные эффекты, ассоциированные с агентом, могут усугубляться или могут быть несовместимы с другим патологическим состоянием, которое имеет пациент. В качестве примера, агенты для профилактики мигрени, характеризующиеся таким побочным эффектом, как тератогенность, будут противопоказаны при беременности. В некоторых вариантах реализации данного изобретения пациент с неэффективностью предшествующей профилактики с применением агента против мигрени, представляет собой пациента, который прекращает прием агента для профилактики мигрени из-за ассоциированных с ним побочных эффектов. В этих и других вариантах реализации данного изобретения пациент с неэффективностью предшествующей профилактики с применением агента против мигрени, представляет собой пациента, который решает прекратить прием, изменить схему приема или начать прием другого профилактического агента, поскольку воздействие побочных эффектов сильнее, чем терапевтическая польза агента для профилактики мигрени.

[67] Агенты для профилактики мигрени включают, но не ограничиваются ими, бета-блокаторы (например, пропранолол, тимолол, атенолол, метопролол и надолол), противоэпилептические средства (например, дивальпрокс, вальпроат натрия, вальпроевая кислота, топирамат и габапентин), трициклические антидепрессанты (например, амитриптилин, нортриптилин, доксепин и флуоксетин) и ботулинический токсин типа А. Таким образом, в некоторых вариантах реализации данного изобретения у пациентов, получавших лечение согласно способам по данному изобретению, отмечали неэффективность или непереносимость одного или более из указанных агентов для профилактики мигрени. В некоторых вариантах реализации данного изобретения у пациента отмечали неэффективность или непереносимость по меньшей мере двух агентов для профилактики мигрени. В других вариантах реализации данного изобретения у пациента отмечали неэффективность или непереносимость по меньшей мере трех агентов для профилактики мигрени. В некоторых вариантах реализации данного изобретения у пациента отмечали неэффективность или непереносимость профилактики одним или более агентом, выбранным из группы, состоящей из пропранолола, тимолола, дивальпрокса, вальпроевой кислоты, топирамата, амитриптилина или ботулинического токсина типа А. В одном конкретном варианте реализации данного изобретения у пациента отмечали неэффективность или непереносимость лечения топираматом. В другом конкретном варианте реализации данного изобретения у пациента отмечали неэффективность или непереносимость лечения пропранололом. В еще одном конкретном варианте реализации данного изобретения у пациента отмечали неэффективность или непереносимость лечения амитриптилином.

[68] В некоторых вариантах реализации данного изобретения у пациента отмечали неэффективность или непереносимость двух различных классов агентов для профилактики мигрени. Например, в одном варианте реализации данного изобретения у пациента может отмечаться неэффективность или непереносимость лечения противоэпилептическим средством (например, топираматом) и бета-блокатором (например, пропранололом). В другом варианте реализации данного изобретения у пациента может отмечаться неэффективность или непереносимость лечения противоэпилептическим средством (например, топираматом) и антидепрессантом (например, амитриптилином). В еще одном варианте реализации данного изобретения у пациента может отмечаться неэффективность или непереносимость лечения бета-блокатором (например, пропранололом) и антидепрессантом (например, амитриптилином). В некоторых вариантах реализации данного изобретения у пациента отмечали неэффективность или непереносимость трех различных классов агентов для профилактики мигрени. В таких вариантах реализации данного изобретения у пациента отмечали неэффективность или непереносимость лечения противоэпилептическим средством (например, топираматом), бета-блокатором (например, пропранололом) и антидепрессантом (например, амитриптилином).

[69] Способы, описанные в данном документе, также применимы к другим типам головной боли, таким как головные боли напряжения, кластерные головные боли, гемиплегическая мигрень и ретинальная мигрень. Соответственно, данное изобретение также относится к способам лечения, включая профилактическое воздействие или предотвращение любой из вышеупомянутых типов головной боли путем введения антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента пациенту, имеющего для этого показания, с помощью любой из схем введения, описанных в данном документе.

[70] Способы, описанные в данном документе, включают введение пациенту антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента. В данном контексте термин «антитело» относится к интактному иммуноглобулину любого изотипа или его антигенсвязывающему фрагменту, который может конкурировать с интактным антителом относительно специфического связывания с целевым антигеном и включает, например, химерные, гуманизированные, полностью человеческие, биспецифические и многовалентные антитела. Структурные единицы антител обычно содержат один или более тетрамеров, каждый из которых состоит из двух идентичных пар полипептидных цепей, хотя некоторые виды млекопитающих также продуцируют антитела, имеющие только одну тяжелую цепь. В типовом антителе каждая пара или куплет включает одну полноразмерную «легкую» цепь (в некоторых вариантах реализации изобретения около 25 кДа) и одну полноразмерную «тяжелую» цепь (в некоторых вариантах реализации изобретения около 50-70 кДа). Каждая отдельная цепь иммуноглобулина состоит из нескольких «доменов иммуноглобулина», каждый из которых содержит примерно от 90 до 110 аминокислот и характеризуется характерным профилем складчатости. Эти домены являются основными элементами, из которых состоят полипептиды антител. Амино-терминальная часть каждой цепи обычно включает вариабельный домен, который отвечает за распознавание антигена. Карбокси-терминальная часть является эволюционно более консервативной, чем другой конец цепи, и упоминается как «константная область» или «C-область». Легкие цепи человека обычно классифицируются как легкие цепи каппа и лямбда, при этом каждая из них содержит один вариабельный домен и один константный домен. Тяжелые цепи обычно классифицируются как цепи мю, дельта, гамма, альфа или эпсилон, при этом цепи определяют изотип антитела как IgM, IgD, IgG, IgA и IgE соответственно. IgG имеет несколько подтипов, включая, но не ограничиваясь ими, IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. Подтипы IgM включают IgM и IgM2. Подтипы IgA включают IgA1 и IgA2. У людей изотипы IgA и IgD содержат четыре тяжелые цепи и четыре легких цепи; изотипы IgG и IgE содержат две тяжелые цепи и две легкие цепи; и изотип IgM содержит пять тяжелых цепей и пять легких цепей. С-область тяжелой цепи обычно содержит один или более доменов, которые могут быть ответственны за эффекторную функцию. Число доменов константной области тяжелой цепи будет зависеть от изотипа. Например, тяжелые цепи IgG содержат три домена C-области, известные как CH1, CH2 и CH3. Антитела, которые можно применять в способах по данному изобретению, могут иметь любой из этих изотипов и подтипов. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP относится к подтипу IgG1, IgG2 или IgG4. В одном конкретном варианте реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP представляет собой антитело IgG2 (например, содержит константный домен IgG2 человека). В другом конкретном варианте реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP представляет собой антитело IgG1 (например, содержит константный домен IgG1 человека).

[71] В полноразмерных легких и тяжелых цепях вариабельная и константная области соединяются посредством области «J», состоящей из около двенадцати или более аминокислот, причем тяжелая цепь также включает область «D», состоящую еще из около 10 десяти аминокислот. См., например, Fundamental Immunology, 2nd ed., Ch. 7 (Paul, W., ed.) 1989, New York: Raven Press (что включено в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте для всех целей). Вариабельные области каждой пары легкой/ тяжелой цепи, как правило, образуют антигенсвязывающий участок. Вариабельные области цепей иммуноглобулина, как правило, имеют одинаковую общую структуру, включающую относительно консервативные каркасные области (FR), соединенные тремя гипервариабельными областями, чаще называемыми «областями, определяющими комплементарность» или CDR. CDR из двух цепей каждой пары тяжелой цепи и легкой цепи, как правило, выровниваются с помощью каркасных областей для образования структуры, которая специфически связывается с специфическим эпитопом на целевом белке (например, рецепторе CGRP). От N-конца до C-конца встречающиеся в природе вариабельные области легкой и тяжелой цепи, как правило, соответствуют следующему порядку этих элементов: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 и FR4. Разработана система нумерации для присвоения чисел аминокислотам, которые занимают положения в каждом из этих доменов. Эта система нумерации определена в Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (1987 и 1991, NIH, Bethesda, MD) или Chothia & Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-917; Chothia et al., 1989, Nature 342: 878-883.

[72] В данном контексте термин «связывающий фрагмент» применяется взаимозаменяемо с термином «антигенсвязывающий фрагмент» и относится к части (независимо от того, как эта часть получена или синтезирована) антитела, которое не содержит по меньшей мере некоторых из аминокислот, присутствующих в полноразмерной тяжелой цепи и/или легкой цепи, но которое способно специфически связываться с антигеном. Такие фрагменты являются биологически активными поскольку они специфически связываются с целевым антигеном и могут конкурировать с другими антигенсвязывающими белками, включая интактные антитела, относительно специфического связывания с данным эпитопом. В одном аспекте такой фрагмент сохранит по меньшей мере одну CDR, присутствующую в полноразмерной легкой или тяжелой цепи, и в некоторых вариантах реализации данного изобретения будет содержать одну тяжелую цепь и/или легкую цепь или ее часть. Эти биологически активные фрагменты могут быть получены с помощью методов рекомбинантной ДНК или могут быть получены путем ферментативного или химического расщепления антигенсвязывающих белков, включая интактные антитела. Иммунологически функциональные фрагменты иммуноглобулина включают, но не ограничиваются ими, Fab, Fab', F(ab')₂, Fv, доменные антитела и одноцепочечные антитела, и могут быть получены из любого источника млекопитающих, включая, но не ограничиваясь ими, человека, мышь, крысу, верблюда или кролика.

[73] Связывающий фрагмент антитело может быть синтетическим или генетически модифицированным белком. Например, связывающие фрагменты антитела включают выделенные фрагменты, состоящие из вариабельной области легкой цепи, фрагменты «Fv», состоящие из вариабельных областей тяжелой и легкой цепей, и рекомбинантные одноцепочечные полипептидные молекулы, в которых легкие и тяжелые вариабельные области соединены посредством пептидного линкера (scFv-белки). Другой формой связывающего фрагмента антитела является пептид, содержащий одну или более областей антитела, определяющих комплементарность (CDR). CDR (также называемые «минимальными распознающими компонентами» или «гипервариабельной областью») получают, например, путем конструирования полинуклеотидов, которые кодируют CDR, представляющую интерес. Такие полинуклеотиды получают, например, с помощью полимеразной цепной реакции для синтеза вариабельной области с применением мРНК клеток, продуцирующих антитела, в качестве матрицы (см., например, Larrick et al., Methods: A Companion to Methods in Enzymology, 2: 106 (1991); Courtenay-Luck, «Genetic Manipulation of Monoclonal Antibodies,» в Monoclonal Antibodies Production, Engineering и Clinical Application, Ritter et al. (eds.), стр. 166, Cambridge University Press (1995); and Ward et al., «Genetic Manipulation and Expression of Antibodies» в Monoclonal Antibodies: Principles and Applications, Birch et al., (eds.), стр. 137, Wiley-Liss, Inc. (1995)).

[74] Антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент, применяемый в способах по данному изобретению, специфически связывается с рецептором CGRP человека. Рецептор CGRP человека представляет собой гетеродимер, который содержит полипептид рецептороподобного рецептора кальцитонина (CRLR) человека и полипептид белка 1, модифицирующего активность рецептора (RAMP1) человека. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент специфически связывается с областями внеклеточных доменов CRLR и RAMP1. Аминокислотные последовательности для типовых внеклеточных доменов и полноразмерных белков для CRLR и RAMP1 человека представлены в таблице ниже.

Таблица 1. Последовательности полипептидов CRLR человека и RAMP1 человека

Полипептиды	Последовательность
CRLR человека	MLYSIFHFGLMMEKKCTLYFLVLLPFFMILVTAELEESPEDSIQLGVTRNKIMTAQYECYQKIMQDPIQQAEGVYCNRTWDGWLCWNDVAAGTESMQLCPDYFQDFDPSEKVTKICDQDGNWFRHPASNRTWTNYTQCNVNTHEKVKTALNLFYLTIIGHGLSIASLLISLGIFFYFKSLSCQRITLHKNLFFSFVCNSVVTIIHLTAVANNQALVATNPVSCKVSQFIHLYLMGCNYFWMLCEGIYLHTLIVVAVFAEKQHLMWYYFLGWGFPLIPACIHAIARSLYYNDNCWISSDTHLLYIIHGPICAALLVNLFFLLNIVRVLITKLKVTHQAESNLYMKAVRATLILVPLLGIEFVLIPWRPEGKIAEEVYDYIMHILMHFQGLLVSTIFCFFNGEVQAILRRNWNQYKIQFGNSFSNSEALRSASYTVSTISDGPGYSHDCPSEHLNGKSIHDIENVLLKPENLYN (SEQ ID NO: 1)
RAMP1 человека	MARALCRLPRRGLWLLLAHHLFMTTACQEANYGALLRELCLTQFQVDMEAVGETLWCDWGRTIRSYRELADCTWHMAEKLGCFWPNAEVDRFFLAVHGRYFRSCPISGRAVRDPPGSILYPFIVVPITVTLLVTALVVWQSKRTEGIV (SEQ ID NO: 2)
Внеклеточный домен CRLR человека	ELEESPEDSIQLGVTRNKIMTAQYECYQKIMQDPIQQAEGVYCNRTWDGWLCWNDVAAGTESMQLCPDYFQDFDPSEKVTKICDQDGNWFRHPASNRTWTNYTQCNVNTHEKVKTA (SEQ ID NO: 3)
Внеклеточный домен RAMP1 человека	CQEANYGALLRELCLTQFQVDMEAVGETLWCDWGRTIRSYRELADCTWHMAEKLGCFWPNAEVDRFFLAVHGRYFRSCPISGRAVRDPPGS (SEQ ID NO: 4)

[75] По общему признанию, антитело или связывающий фрагмент «специфически связывается» с мишенью, если константа диссоциации (K_D) составляет ≤10^-6 M. Антитело или связывающий фрагмент специфически связывается с целевым антигеном с «высокой аффинностью», если K_D составляет ≤1×10^-8 M. В одном варианте реализации данного изобретения антитела или связывающие фрагменты связываются с рецептором CGRP человека с K_D≤5×10^-7 M. В другом варианте реализации данного изобретения антитела или связывающие фрагменты связываются с рецептором CGRP человека с K_D≤1×10^-7 M. В еще одном варианте реализации данного изобретения антитела или связывающие фрагменты связываются с рецептором CGRP человека с K_D≤ 5×10^-8 M. В другом варианте реализации данного изобретения антитела или связывающие фрагменты связываются с рецептором CGRP человека с K_D≤1×10^-8 M. В другом варианте реализации данного изобретения антитела или связывающие фрагменты связываются с рецептором CGRP человека с K_D≤5×10^-9 M. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитела или связывающие фрагменты связываются с рецептором CGRP человека с K_D≤1×10^-9 M. В других вариантах реализации данного изобретения антитела или связывающие фрагменты связываются с рецептором CGRP человека с K_D≤5×10^-10 M. В других вариантах осуществления антитела или связывающие фрагменты связываются с рецептором CGRP человека с K_D≤1×10^-10 M. Аффинность определяют с помощью различных методов, примером которых является анализ аффинности ELISA. В различных вариантах реализации данного изобретения аффинность определяют с помощью анализа BIAcore. В некоторых вариантах реализации данного изобретения аффинность определяют кинетическим методом. В других вариантах реализации данного изобретения аффинность определяют методом равновесного раствора. В некоторых вариантах реализации данного изобретения аффинность определяют с помощью анализа связывания FACS. В WO 2010/075238, которая полностью включена в настоящий документ посредством ссылки, описаны пригодные анализы аффинности для определения аффинности антител против рецептора CGRP.

[76] В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент, применяемый в описанных в данном документе способах, специфически связывается с остатками или последовательностями остатков или областями в полипептидах как CRLR человека, так и RAMP1 человека. В одном конкретном варианте осуществления антитело против CGRP-рецептора или его связывающий фрагмент специфически связывается с эпитопом, образованным из аминокислот как в человеческих CRLR, так и в человеческих RAMP1-полипептидах. Термин «эпитоп» относится к любому детерминанту, способному специфически связываться с антителом или его связывающим фрагментом или с рецептором Т-клеток. Эпитоп может быть смежным или несмежным (например, (i) в одноцепочечном полипептиде, аминокислотных остатках, которые не смежны друг с другом в полипептидной последовательности, но которые в пределах молекулы связаны посредством антигенсвязывающего белка или (ii) в мультимерном белке, например, содержащем два или более отдельных компонента, аминокислотных остатках, присутствующих на двух или более отдельных компонентах, но которые в пределах мультимерного белка связаны посредством антитела или связывающего фрагмента). В некоторых вариантах реализации данного изобретения эпитоп, образованный из аминокислот в полипептидах как CRLR человека, так и RAMP1 человека, содержит один или более участков расщепления для AspN-протеазы, которая расщепляет пептиды после остатков аспарагиновой кислоты и некоторых остатков глутаминовой кислоты на амино-конце.

[77] В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент, применяемый в способах по изобретению, специфически связывается с внеклеточным доменом полипептида CRLR человека, содержащим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3. В альтернативном или дополнительном варианте антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент, применяемый в способах по изобретению, специфически связывается с внеклеточным доменом полипептида RAMP1 человека, содержащим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент специфически связывается по меньшей мере с одной последовательностью внутри полипептида CRLR человека, выбранной из SEQ ID NO: 5 (DSIQLGVTRNKIMTAQY, соответствующей аминокислотам 8-24 из SEQ ID NO: 3), SEQ ID NO: 6 (DVAAGTESMQLCP, соответствующей аминокислотам 55-67 из SEQ ID NO: 3), SEQ ID NO: 7 (DGNWFRHPASNRTWTNYTQCNVNTH), соответствующей аминокислотам 86-110 из SEQ ID NO: 3), SEQ ID NO: 8 (ECYQKIMQ, соответствующей аминокислотам 25-32 из SEQ ID NO: 3) или SEQ ID NO: 9 (DGWLCWN, соответствующей аминокислотам 48-54 из SEQ ID NO: 3). Например, в некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP связывается с субобластью полипептида CRLR человека SEQ ID NO: 3, содержащей SEQ ID NO: 5-9, в некоторых случаях в его нативной трехмерной конформации. В альтернативном или дополнительном варианте антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент специфически связывается по меньшей мере с одной последовательностью внутри полипептида RAMP1 человека, выбранной из SEQ ID NO: 10 (RELADCTWHMAE, соответствующей аминокислотам 41-52 из SEQ ID NO: 4), SEQ ID NO: 11 (DWGRTIRSYRELA, соответствующей аминокислотам 32-44 из SEQ ID NO: 4), SEQ ID NO: 12 (ELCLTQFQV, соответствующей аминокислотам 12-20 из SEQ ID NO: 4), или SEQ ID NO: 13 (DCTWHMA, соответствующей аминокислотам 45-51 из SEQ ID NO: 4). В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP связывается с субобластью полипептида RAMP1 человека SEQ ID NO: 4, содержащей SEQ ID NO: 10-13, в некоторых случаях в его нативной трехмерной конформации.

[78] В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент специфически связывается с полипептидом CRLR человека, имеющим аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 9, причем SEQ ID NO: 6 и 7 соединены дисульфидной связью в положениях аминокислот 66 и 105 относительно SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 8 и 9 соединены дисульфидной связью в положениях аминокислот 26 и 52 относительно SEQ ID NO: 3, в некоторых случаях при этом полипептид сохраняет третичную структуру соответствующей полипептидной области CRLR человека SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент специфически связывается с полипептидом RAMP1 человека, имеющим аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 13, при этом последовательности соединены дисульфидной связью в положениях аминокислот 14 и 46 относительно SEQ ID NO: 4, в некоторых случаях при этом полипептид сохраняет третичную структуру соответствующей полипептидной области RAMP1 человека SEQ ID NO: 4. В конкретных вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент специфически связывается с полипептидом CRLR человека и полипептидом RAMP1 человека, при этом полипептид CRLR человека имеет аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8 и SEQ ID NO: 9, причем SEQ ID NO: 6 и 7 соединены дисульфидной связью в положениях аминокислот 66 и 105 относительно SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 8 и 9 соединены дисульфидной связью в положениях аминокислот 26 и 52 относительно SEQ ID NO: 3, и при этом полипептид RAMP1 человека имеет аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 12 и SEQ ID NO: 13, при этом SEQ ID NO: 12 и 13 соединены дисульфидной связью в положениях аминокислот 14 и 46 относительно SEQ ID NO: 4. В таких вариантах реализации данного изобретения полипептиды CRLR человека и RAMP1 человека сохраняют третичную структуру соответствующих областей полипептидов CRLR человека и RAMP1 человека SEQ ID NO: 3 и 4 соответственно. В соответствующих вариантах реализации данного изобретения полипептиды CRLR человека и RAMP1 человека образуют гетеродимер.

[79] Антитела против рецептора CGRP или связывающие фрагменты, пригодные для применения в способах по изобретению, предпочтительно ингибируют, препятствуют или модулируют одну или более биологических активностей рецептора CGRP человека. Биологическая активность рецептора CGRP человека включает, но не ограничивается этим, индукцию путей преобразования сигнала рецептора CGRP, индукцию вазодилатации, ингибирование вазоконстрикции и индукцию воспаления, например, нейрогенного воспаления. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его антигенсвязывающий фрагмент по существу ингибирует связывание рецептора CGRP человека с лигандом CGRP. «Существенное ингибирование связывания» происходит, когда избыток антитела или его связывающего фрагмента уменьшает количество рецептора CGRP человека, связанного с CGRP, что, в свою очередь, например, в конкурентном анализе связывания in vitro определяется снижением на около 20%, около 30%, около 40%, около 50%, около 60%, около 70%, около 80%, около 85%, около 90%, около 95%, около 97%, около 99% или более.

[80] В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитела против рецептора CGRP или связывающие фрагменты для применения в описанных в данном документе способах, избирательно ингибируют рецептор CGRP человека по сравнению с рецепторами адреномедуллина 1 (AM1), адреномедуллина 2 (AM2) или амилина (например, рецептором AMY1 человека) человека). AM1-рецептор человека состоит из полипептида CRLR и полипептида RAMP2 человека, тогда как AM2-рецептор человека состоит из полипептида CRLR и полипептида RAMP3 человека. Таким образом, не ожидается, что антитело или другой связывающий белок, который связывает только CRLR (а не RAMP1), будет выборочно ингибировать рецептор CGRP, поскольку полипептид CRLR также является компонентом AM1- и AM2-рецепторов. Рецепторы амилина (AMY) человека состоят из полипептида рецептора кальцитонина (CT) человека и одной из субъединиц RAMP1, RAMP2 или RAMP3. В частности, AMY1-рецептор человека состоит из полипептида CT и полипептида RAMP1, AMY2 -рецептор человека состоит из полипептида CT и полипептида RAMP2, а AMY3-рецептор человека состоит из полипептида CT и полипептида RAMP3. Таким образом, не ожидается, что антитело или другой связывающий белок, который связывает только RAMP1 (а не CRLR), будет выборочно ингибировать рецептор CGRP, поскольку полипептид RAMP1 также является компонентом AMY1-рецептора человека.

[81] Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент «избирательно ингибирует» специфический рецептор по сравнению с другими рецепторами, если IC50 антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в анализе ингибирования специфического рецептора по меньшей мере в 50 раз ниже, чем IC50 в анализе ингибирования другого «эталоннного» рецептора. «IC50» представляет собой количество лекарственного средства или вещества, которое необходимо для ингибирования данного биологического процесса наполовину. IC50 любого конкретного вещества или антагониста можно определить, построив кривую зависимости «доза-эффект» и исследуя влияние различных концентраций лекарственного средства или антагониста на обратную активность агониста в конкретном функциональном анализе. Значения IC50 могут быть рассчитаны для данного антагониста или лекарственного средства путем определения концентрации, необходимой для ингибирования половины максимального биологического ответа агониста. Таким образом, значение IC50 для любого антитела против CGRP или связывающего фрагмента может быть рассчитано путем определения концентрации антитела или связывающего фрагмента, необходимой для ингибирования половины максимального биологического ответа лиганда CGRP при активации рецептора CGRP в любом функциональном анализе.

[82] «Индекс избирательности» представляет собой значение IC50 эталонного рецептора, деленное на значение IC50 специфического рецептора. Антитело против рецептора CGRP или его антигенсвязывающий фрагмент избирательно ингибирует рецептор CGRP человека, если значение IC50 антитела или его антигенсвязывающий фрагмент в анализе функционального рецептора CGRP, таком как анализ циклического AMФ (цAMФ), является по меньшей мере в 50 раз ниже чем значение IC50 того же самого антитела или его антигенсвязывающего фрагмента в анализе ингибирования рецептора AM1, AM2 или амилина (например, AMY1). В качестве неограничивающего примера, если значение IC50 специфического антитела против рецептора CGRP в анализе цАМФ рецептора CGRP человека составляет, например, от 0,1 нМ до 20 нМ, и значение IC50 того же антитела в анализе цАМФ рецептора AM1 человека, AM2 человека или AMY1 человека составляет 1000 нМ или более, это антитело будет считаться таким, которое избирательно ингибирует рецептор CGRP человека. Степень избирательного ингибирования может быть определена с помощью любого пригодного функционального анализа рецептора CGRP, такого как анализ цАМФ, как описано в примере 4 заявки WO 2010/075238, которая полностью включена в данное описание посредством ссылки. Антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который избирательно ингибирует специфический рецептор, также расценивается как нейтрализующее антитело или антигенсвязывающий фрагмент по отношению к этому рецептору. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент могут избирательно ингибировать рецептор CGRP человека по отношению к рецепторам AM1, AM2 и/или AMY1 человека, например, с индексом избирательности 100 или более, 250 или более, 500 или более, 750 или более, 1000 или более, 2500 или более, 5000 или более или 10000 или более. В одном варианте реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент избирательно ингибирует рецептор CGRP человека по отношению к рецепторам AM1, AM2 и/или AMY1 человека с индексом избирательности 100 или более. В другом варианте реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент избирательно ингибирует рецептор CGRP человека по отношению к рецепторам AM1, AM2 и/или AMY1 человека с индексом избирательности 500 или более.

[83] В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент специфически связывается с полипептидами как СRLR человека, так и RAMP1 человека и не связывается специфически с рецептором AM1 человека, AM2 человека и/или рецептором амилина человека (например, AMY1 или AMY2). Например, антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент может специфически связывается с рецептором CGRP человека с K_D ≤ 1 мкМ, ≤ 100 нМ, ≤ 10 нМ или ≤ 5 нМ. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент специфически связывается с рецептором CGRP человека с K_D ≤ 100 нМ, ≤ 10 нМ или ≤ 5 нМ, как определено с помощью анализа связывания FACS и проанализировано, например, с помощью методов, описанных в работе Rathanaswami, et al., Biochemical and Biophysical Research Communications 334 (2005) 1004-1013. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент специфически связывается с рецептором CGRP человека с K_D ≤ 100 нМ. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент специфически связывается с рецептором CGRP человека с K_D ≤ 10 нМ.

[84] В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент характеризуется значением Ki ≤ 100 нМ, ≤ 10 нМ, ≤ 1 нМ, ≤ 0,5 нМ или ≤ 0,1 нМ в анализе конкурентного связывания CGRP. «Ki» относится к равновесной константе диссоциации лиганда, определяемой в анализах ингибирования. Значение Ki для данного лиганда, как правило, определяют в анализе конкурентного связывания радиоактивно меченного лиганда, измеряя ингибирование связывания эталонного радиоактивно меченного лиганда конкурирующими веществами, представляющими интерес, в равновесных условиях. Анализы конкурентного связывания для характеристики ингибиторов взаимодействия лиганд/рецептор известны специалистам в данной области техники и могут включать анализы с применением радиоактивно меченных лигандов (например, радиоактивно меченного CGRP) и клеток, экспрессирующих рецептор (например, рецептор CGRP человека). В некоторых вариантах реализации данного изобретения значение Ki антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента определяют с помощью анализа конкурентного связывания CGRP, меченного радиоактивным изотопом ¹²⁵I, в котором оценивали связывание радиоактивно меченного лиганда с мембранами клеток, экспрессирующих рецептор CGRP человека. Типовый протокол для проведения такого типа анализа описан в примере 5 заявки WO 2010/075238, которая полностью включена в данное описание посредством ссылки. В одном варианте реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент характеризуется значением Ki менее 10 нМ в анализе конкурентного связывания CGRP. В другом варианте реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент характеризуется значением Ki менее 1 нМ в анализе конкурентного связывания CGRP.

[85] Примеры антител против рецептора CGRP или их связывающих фрагментов, пригодных для применения в способах по данному изобретению, описаны в заявке WO 2010/075238, которая полностью включена в данное описание посредством ссылки. В одном варианте реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент, применяемый в описанных в данном документе способах, перекрестно блокирует связывание по меньшей мере одного из антител 1E11, 1H7, 2E7, 3B6, 3C8, 4E4, 4H6, 5F5, 9D4, 9F5, 10E4, 11D11, 11H9, 12E8, 12G8, 13H2 и 32H7 (все из которых описаны в данном документе и в заявке WO 2010/075238) с рецептором CGRP человека. В альтернативном или дополнительном варианте антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент перекрестно блокирует связывание с рецептором CGRP человека по меньшей мере одного из антител 1E11, 1H7, 2E7, 3B6, 3C8, 4E4, 4H6, 5F5, 9D4, 9F5, 10E4, 11D11, 11H9, 12E8, 12G8, 13H2 и 32H7 (все из которых описаны далее в данном документе). Все эти антитела были определены как нейтрализующие антитела рецептора CGRP человека и связывались по существу с той же областью рецептора CGRP человека, при этом эта область отличалась от области рецептора, связанной не нейтрализующими антителами. См. Пример 7 заявки WO 2010/075238. В данном контексте термины «перекрестное блокирование», «перекрестная блокировка» и «перекрестно блокирует» применяются взаимозаменяемо для обозначения способности антитела препятствовать связыванию других антител или связывающих фрагментов с рецептором CGRP человека. Степень, в которой антитело или связывающий фрагмент может препятствовать связыванию другого антитела с рецептором CGRP человека и, следовательно, данные о том, способно ли антитело к перекрестной блокировке, можно определить с помощью анализов конкурентного связывания. В некоторых вариантах реализации данного изобретения перекрестно блокирующее антитело или его связывающий фрагмент уменьшает связывание рецептора CGRP человека с эталонным антителом от около 40 до 100%, например, от около 60% до около 100%, в частности, от около 70 до 100% и более конкретно от около 80% до 100%. В особенно пригодном количественном анализе для обнаружения перекрестного блокирования используется устройство Biacore, которое измеряет степень взаимодействия с применением метода поверхностного плазмонного резонанса. В другом пригодном количественном анализе перекрестного блокирования применяется принцип на основе FACS для измерения конкуренции между антителами относительно их связывания с рецептором CGRP человека.

[86] Антитела против рецептора CGRP и их связывающие фрагменты для применения в описанных в данном документе способах могут содержать одну CDR1 тяжелой цепи («CDRH1») и/или одну CDR2 тяжелой цепи («CDRH2») и/или одну CDR3 тяжелой цепи («CDRH3») и/или одну CDR1 легкой цепи («CDRL1») и/или одну CDR2 легкой цепи («CDRL2») и/или одну CDR3 легкой цепи («CDRL3»). В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент содержит по меньшей мере одну вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDRH1, CDRH2 и CDRH3, и по меньшей мере одну вариабельную область легкой цепи, содержащую CDRL1, CDRL2 и CDRL3. Специфические CDR тяжелой и легкой цепи приведены в Таблицах 2 и 3 соответственно.

[87] Области определения комплементарности (CDR) и каркасные области (FR) данного антитела можно идентифицировать с помощью системы, описанной Kabat et al. в Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., US Dept. of Health and Human Services, PHS, NIH, NIH Publication no. 91-3242, 1991. Определенные антитела и связывающие фрагменты, которые описаны в настояящем документе, включают одну или более аминокислотных последовательностей, которые идентичны или характеризуются существенной идентичностью последовательности с аминокислотными последовательностями одной или более CDR, представленных в Таблице 2 (CDR тяжелой цепи, т. е. CDRH) и в Таблице 3 (CDR легкой цепи, т. е. CDRL).

Таблица 2. Типовые аминокислотные последовательности CDR тяжелой цепи

SEQ ID NO:	Обозначение	Последовательность
14	CDRH 1-1	SFGMH
15	CDRH 1-2	NAWMS
16	CDRH 1-3	SYAMS
17	CDRH 1-4	GYYMH
18	CDRH 1-5	SYGMH
19	CDRH 1-6	DYAMS
20	CDRH 1-7	DYYMY
21	CDRH 1-8	TYSMN
22	CDRH 1-9	SYGMH
23	CDRH 2-1	VISFDGSIKYSVDSVKG
24	CDRH 2-2	RIKSTTDGGTTDYAAPVKG
25	CDRH 2-3	AISGSGGRTYYADSVKG
26	CDRH 2-4	WINPNSGGTNYAQKFQG
27	CDRH 2-5	VISYDGSHESYADSVKG
28	CDRH 2-6	FIRSRAYGGTPEYAASVKG
29	CDRH 2-7	RIKSKTDGGTTDYTAPVKG
30	CDRH 2-8	WISPNSGGTNYAQKFQG
31	CDRH 2-9	RIKSKTDGGTTDYAAPVKG
32	CDRH 2-10	SISSSSSYRYYADSVKG
33	CDRH 2-11	VIWYDGSNKYYADSVKG
34	CDRH 3-1	DRLNYYDSSGYYHYKYYGMAV
35	CDRH 3-2	DRTGYSISWSSYYYYYGMDV
36	CDRH 3-3	DQREVGPYSSGWYDYYYGMDV
37	CDRH 3-4	DQMSIIMLRGVFPPYYYGMDV
38	CDRH 3-5	ERKRVTMSTLYYYFYYGMDV
39	CDRH 3-6	GRGIAARWDY
40	CDRH 3-7	GGYSGYAGLYSHYYGMDV
41	CDRH 3-8	DRLNYYDSSGYYHYKYYGLAV
42	CDRH 3-9	EGVSGSSPYSISWYDYYYGMDV
43	CDRH 3-10	AGGIAAAGLYYYYGMDV

Таблица 3. Типовые аминокислотные последовательности CDR легкой цепи

SEQ ID NO:	Обозначение	Последовательность
44	CDRL 1-1	SGSSSNIGNNYVS
45	CDRL 1-2	SGSSSNIGSNYVY
46	CDRL 1-3	RASQGIRNDLG
47	CDRL 1-4	QGDSLRSFYAS
48	CDRL 1-5	KSSQSLLHSAGKTYLY
49	CDRL 1-6	RSSQSLLHSFGYNYLD
50	CDRL 1-7	KSSQSLLHSDGKTYLY
51	CDRL 1-8	SGSSSNIGSNTVN
52	CDRL 1-9	KSSQSLLHSDGRNYLY
53	CDRL 1-10	RASQGIRKDLG
54	CDRL 1-11	RASQSVSSGYLT
55	CDRL 2-1	DNNKRPS
56	CDRL 2-2	RSNQRPS
57	CDRL 2-3	AASSLQS
58	CDRL 2-4	GKNNRPS
59	CDRL 2-5	EVSNRFS
60	CDRL 2-6	LGSNRAS
61	CDRL 2-7	RNNQRPS
62	CDRL 2-8	TNNQRPS
63	CDRL 2-9	GASSLQS
64	CDRL 2-10	GASSRAT
65	CDRL 3-1	GTWDSRLSAVV
66	CDRL 3-2	AAWDDSLSGWV
67	CDRL 3-3	LQYNIYPWT
68	CDRL 3-4	NSRDSSVYHLV
69	CDRL 3-5	MQSFPLPLT
70	CDRL 3-6	MQALQTPFT
71	CDRL 3-7	AARDESLNGVV
72	CDRL 3-8	LQYNSFPWT
73	CDRL 3-9	QQYGNSLCR
74	CDRL 3-10	QQYGNSLSR

[88] В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитела против рецептора CGRP или их связывающие фрагменты содержат одну или более CDR тяжелой цепи, выбранных из (i) CDRH1, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 14-22; (ii) CDRH2, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 23-33; (iii) CDRH3, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 34-43; и (iv) CDRH (i), (ii) и (iii), которая содержит одну или более, например, одну, две, три, четыре или более аминокислотных замен (например, консервативные аминокислотные замены), делеций или вставок не более пяти, четырех, трех, двух или одной аминокислоты. В этих и других вариантах реализации данного изобретения антитела против рецептора CGRP или их связывающие фрагменты содержат одну или более CDR легкой цепи, выбранных из (i) CDRL1, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 44-54; (ii) CDRL2, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 55-64; (iii) CDRL3, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 65-74; и (iv) CDRL (i), (ii) и (iii), которая содержит одну или более, например, одну, две, три, четыре или более аминокислотных замен (например, консервативные аминокислотные замены), делеций или вставок не более пяти, четырех, трех, двух или одной аминокислоты.

[89] В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитела против рецептора CGRP или их связывающие фрагменты могут содержать 1, 2, 3, 4, 5 или 6 вариантных форм CDR, перечисленных в Таблицах 2 и 3, каждая из которых характеризуется по меньшей мере 80%, 85% 90% или 95% идентичностью последовательности с последовательностью CDR, приведенной в Таблицах 2 и 3. Некоторые антитела против рецептора CGRP или их связывающие фрагменты включают 1, 2, 3, 4, 5 или 6 CDR, перечисленных в Таблицах 2 и 3, каждая из которых отличается не более чем на 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислот от CDR, перечисленных в этих таблицах.

[90] В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитела против рецептора CGRP или связывающие фрагменты содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDRH1, CDRH2 и CDRH3, при этом:

(a) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 14, 23 и 34 соответственно;

(b) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 15, 24 и 35 соответственно;

(с) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 16, 25 и 36 соответственно;

(d) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 17, 26 и 37 соответственно;

(е) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 18, 27 и 38 соответственно;

(f) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 15, 29 и 35 соответственно;

(g) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 20, 30 и 40 соответственно;

(h) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 15, 31 и 35 соответственно;

(i) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 14, 23 и 41 соответственно;

(j) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 21, 32 и 42 соответственно;

(k) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 22, 33 и 43 соответственно; или

(l) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 19, 28 и 39 соответственно.

[91] В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитела против рецептора CGRP или связывающие фрагменты содержат вариабельную область легкой цепи, содержащую CDRL1, CDRL2 и CDRL3, при этом:

(a) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 44, 55 и 65 соответственно;

(b) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 45, 56 и 66 соответственно;

(d) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 47, 58 и 68 соответственно;

(е) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 48, 59 и 69 соответственно;

(f) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 49, 60 и 70 соответственно;

(g) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 50, 59 и 69 соответственно;

(h) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 45, 61 и 66 соответственно;

(i) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 51, 62 и 71 соответственно;

(j) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 52, 59 и 69 соответственно;

(k) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 53, 63 и 72 соответственно;

(l) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 54, 64 и 73 соответственно; или

(m) CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 54, 64 и 74 соответственно.

[92] В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитела против рецептора CGRP или связывающие фрагменты содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDRH1, CDRH2 и CDRH3, и вариабельную область легкой цепи, содержащую CDRL1, CDRL2 и CDRL3, при этом:

(a) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 14, 23 и 34 соответственно, а CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 44, 55 и 65 соответственно;

(b) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 14, 23 и 41 соответственно, а CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 44, 55 и 65 соответственно;

(с) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 15, 24 и 35 соответственно, а CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 45, 56 и 66 соответственно;

(d) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 15, 29 и 35 соответственно, а CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 45, 61 и 66 соответственно;

(е) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 15, 31 и 35 соответственно, а CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 45, 61 и 66 соответственно;

(f) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 16, 25 и 36 соответственно, а CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 46, 57 и 67 соответственно;

(g) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 17, 26 и 37 соответственно, а CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 47, 58 и 68 соответственно;

(h) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 18, 27 и 38 соответственно, а CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 48, 59 и 69 соответственно;

(i) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 18, 27 и 38 соответственно, а CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 50, 59 и 69 соответственно;

(j) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 19, 28 и 39 соответственно, а CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 49, 60 и 70 соответственно;

(k) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 20, 30 и 40 соответственно, а CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 51, 62 и 71 соответственно;

(l) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 21, 32 и 42 соответственно, а CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 53, 63 и 72 соответственно;

(m) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 22, 33 и 43 соответственно, а CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 54, 64 и 73 соответственно; или

(n) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 22, 33 и 43 соответственно, а CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 54, 64 и 74 соответственно; или

(o) CDRH1, CDRH2 и CDRH3 имеют последовательность SEQ ID NO: 18, 27 и 38 соответственно, а CDRL1, CDRL2 и CDRL3 имеют последовательность SEQ ID NO: 52, 59 и 69 соответственно.

[93] В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент, применяемый в способах по данному изобретению, содержит CDRH1, имеющую последовательность SEQ ID NO: 14, CDRH2, имеющую последовательность SEQ ID NO: 23, CDRH3, имеющую последовательность SEQ ID NO: 34, CDRL1, имеющую последовательность SEQ ID NO: 44, CDRL2, имеющую последовательность SEQ ID NO: 55, и CDRL3, имеющую последовательность SEQ ID NO: 65. В других вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент, применяемый в способах по данному изобретению, содержит CDRH1, имеющую последовательность SEQ ID NO: 15, CDRH2, имеющую последовательность SEQ ID NO: 29, CDRH3, имеющую последовательность SEQ ID NO: 35, CDRL1, имеющую последовательность SEQ ID NO: 45, CDRL2, имеющую последовательность SEQ ID NO: 61, и CDRL3, имеющую последовательность SEQ ID NO: 66.

[94] В некоторых вариантах реализации описанных в данном документе способов антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент включает вариабельную область тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из V_H1, V_H2, V_H3, V_H4, V_H5, V_H6, V_H7, V_H8, V_H9, V_H10, V_H11, V_H12 и V_H13, и/или вариабельную область легкой цепи, выбранную из группы, состоящей из V_L1, V_L2, V_L3, V_L4, V_L5, V_L6, V_L7, V_L8, V_L9, V_L10, V_L11, V_L12, V_L13, V_L14, V_L15, V_L16 и V_L17, как показано в Таблице 4 ниже, а также иммунологически функциональные фрагменты, производные, мутеины и варианты этих вариабельных областей легкой цепи и тяжелой цепи.

Таблица 4. Типовые аминокислотные последовательности V_L- и V_H-цепи

Обозначение	SEQ ID NO.	Аминокислотная последовательность
Вариабельные области легкой цепи
V_L1	75	QSVLTQPPSVSEAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSRLSAVVFGGGTKLTVL
V_L2	76	QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGAAPKLLIFRSNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTKLTVL
V_L3	77	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWFQQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDLATYYCLQYNIYPWTFGQGTKVEIK
V_L4	78	SSELTQDPTVSVALGQTVKITCQGDSLRSFYASWYQQKPGQAPVLVFYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSVYHLVLGGGTKLTVL
V_L5	79	DIILAQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLLHSAGKTYLYWYLQKPGQPPQLLIYEVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCMQSFPLPLTFGGGTKVEIK
V_L6	80	QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSTTLGITGLQTGDEADYYCGTWDSRLSAVVFGGGTKLTVL
V_L7	81	DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSFGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPFTFGPGTKVDIK
V_L8	82	DIILTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLLHSDGKTYLYWYLQKPGQPPQLLIYEVSNRFSGEPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGTYYCMQSFPLPLTFGGGTKVEIK
V_L9	83	QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQFPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSRLSAVVFGGGTKLTVL
V_L10	84	QSVLTQSPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGAAPKLLILRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLTISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTKLTVL
V_L11	85	QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADFYCAARDESLNGVVFGGGTKLTVL
V_L12	86	QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGAAPKLLIFRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTKLTVL
V_L13	87	DITLTQTPLSLSVSPGQPASISCKSSQSLLHSDGRNYLYWYLQKPGQPPQLLIYEVSNRFSGLPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCMQSFPLPLTFGGGTKVEIK
V_L14	88	QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSRLSAVVFGGGTKLTVL
V_L15	89	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRKDLGWYQQKPGKAPKRLIYGASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQYNSFPWTFGQGTKVEIK
V_L16	90	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSGYLTWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGNSLCRFGQGTKLEIK
V_L17	91	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSGYLTWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGNSLSRFGQGTKLEIK
Вариабельные области тяжелой цепи
V_H1	92	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAVISFDGSIKYSVDSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDRLNYYDSSGYYHYKYYGMAVWGQGTTVTVSS
V_H2	93	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSTTDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTDRTGYSISWSSYYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
V_H3	94	EVQLLESGGGLVQPGESLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDQREVGPYSSGWYDYYYGMDVWGQGTTVTVSS
V_H4	95	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCARDQMSIIMLRGVFPPYYYGMDVWGQGTTVTVSS
V_H5	96	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSHESYADSVKGRFTISRDISKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCARERKRVTMSTLYYYFYYGMDVWGQGTTVTVSS
V_H6	97	EVQLVESGGGLVKPGRSLRLSCTASGFTFGDYAMSWFRQAPGKGLEWIGFIRSRAYGGTPEYAASVKGRFTISRDDSKTIAYLQMNSLKTEDTAVYFCARGRGIAARWDYWGQGTLVTVSS
V_H7	98	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTDYTAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKAEDTAVYYCTTDRTGYSISWSSYYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
V_H8	99	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMYWVRQAPGQGLEWMGWISPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCVRGGYSGYAGLYSHYYGMDVWGQGTTVTVSS
V_H9	100	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFGNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYFCTTDRTGYSISWSSYYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
V_H10	101	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFGNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTDRTGYSISWSSYYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
V_H11	102	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAVISFDGSIKYSVDSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDRLNYYDSSGYYHYKYYGLAVWGQGTTVTVSS
V_H12	103	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGYTFSTYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYRYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMSSLRAEDTAVYYCAREGVSGSSPYSISWYDYYYGMDVWGQGTTVTVSS
V_H13	104	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFIISRDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAGGIAAAGLYYYYGMDVWGQGTTVTVSS

[95] Каждая из вариабельных областей тяжелой цепи, перечисленных в Таблице 4, может быть объединена с любой из вариабельных областей легкой цепи, показанной в Таблице 4, с образованием антитела против рецептора CGRP или связывающего фрагмента, пригодного для применения в способах по данному изобретению. Примеры таких комбинаций включают V_H1 в сочетании с любым из V_L1, V_L2, V_L3, V_L4, V_L5, V_L6, V_L7, V_L8, V_L9, V_L10, V_L11, V_L12, V_L13, V_L14, V_L15, V_L16, или V_L17; V_H2 в сочетании с любым из V_L1, V_L2, V_L3, V_L4, V_L5, V_L6, V_L7, V_L8, V_L9, V_L10, V_L11, V_L12, V_L13, V_L14, V_L15, V_L16, или V_L17; V_H3 в сочетании с любым из V_L1, V_L2, V_L3, V_L4, V_L5, V_L6, V_L7, V_L8, V_L9, V_L10, V_L11, V_L12, V_L13, V_L14, V_L15, V_L16, или V_L17; и так далее.

[96] В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент включает по меньшей мере одну вариабельную область тяжелой цепи и/или одну вариабельную область легкой цепи из тех, которые перечислены в Таблице 4. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент включает по меньшей мере две различные вариабельные области тяжелой цепи и/или вариабельные области легкой цепи из тех, которые перечислены в Таблице 4. Пример такого антитела против рецептора CGRP или связывающего фрагмента включает (a) одну V_H1, и (b) одну из V_H2, V_H3, V_H4, V_H5, V_H6, V_H7, V_H8, V_H9, V_H10, V_H11, V_H12, или V_H13. Другой пример включает (a) одну V_H2, и (b) одну из V_H1, V_H3, V_H4, V_H5, V_H6, V_H7, V_H8, V_H9, V_H10, V_H11, V_H12, или V_H13. Еще один пример включает (a) одну V_H3 и (b) одну из V_H1, V_H2, V_H4, V_H5, V_H6, V_H7, V_H8, V_H9, V_H10, V_H11, V_H12, или V_H13, и т. д. Еще один пример такого антитела против рецептора CGRP или связывающего фрагмента включает (a) одну V_L1, и (b) одну из V_L2, V_L3, V_L4, V_L5, V_L6, V_L7, V_L8, V_L9, V_L10, V_L11, V_L12, V_L13, V_L14, V_L15, V_L16, или V_L17, V_L18, V_L19, V_L20, или V_L21. Еще один пример такого антитела против рецептора CGRP или связывающего фрагмента включает (a) одну V_L2, и (b) одну из V_L1, V_L3, V_L4, V_L5, V_L6, V_L7, V_L8, V_L9, V_L10, V_L11, V_L12, V_L13, V_L14, V_L15, V_L16, V_L17, V_L18, V_L19, V_L20, или V_L21. Еще один пример такого антитела против рецептора CGRP или связывающего фрагмента включает (a) одну V_L3, и (b) одну из V_L1, V_L2, V_L4, V_L5, V_L6, V_L7, V_L8, V_L9, V_L10, V_L11, V_L12, V_L13, V_L14, V_L15, V_L16, V_L17, V_L18, V_L19, V_L20, или V_L21, и т. д. Различные комбинации вариабельных областей тяжелой цепи могут быть объединены с любой из различных комбинаций вариабельных областей легкой цепи, что очевидно для специалиста в данной области техники.

[97] В других вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент две идентичные вариабельные области легкой цепи и/или две идентичные вариабельные области тяжелой цепи. В качестве примера антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент включает две вариабельные области легкой цепи и две вариабельные области тяжелой цепи в комбинациях пар вариабельных областей легкой цепи и пар вариабельных областей тяжелой цепи, перечисленных в Таблице 4.

[98] В некоторых вариантах реализации описанных в данном документе способов антитела против рецептора CGRP или их связывающие фрагменты содержат вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий последовательность аминокислот, которая отличается от последовательности вариабельного домена тяжелой цепи, выбранного из V_H1, V_H2, V_H3, V_H4, V_H5, V_H6, V_H7, V_H8, V_H9, V_H10, V_H11, V_H12 и V_H13 только в 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 аминокислотных остатках, при этом каждая такая разность последовательностей независимо представляет собой либо делецию или вставку, либо замену одной аминокислоты, с делециями, вставками и/или заменами, что приводит к изменению не более 15 аминокислот по сравнению с предшествующими последовательностями вариабельных доменов. Вариабельная область тяжелой цепи в некоторых антителах против рецептора CGRP или их связывающих фрагментах содержит последовательность аминокислот, которая характеризуется по меньшей мере 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% или 99% идентичностью последовательности с аминокислотными последовательностями вариабельной области тяжелой цепи V_H1, V_H2, V_H3, V_H4, V_H5, V_H6, V_H7, V_H8, V_H9, V_H10, V_H11, V_H12 и V_H13.

[99] В некоторых вариантах реализации описанных в данном документе способов антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент включает вариабельный домен легкой цепи, содержащий последовательность аминокислот, которая отличается от последовательности вариабельного домена легкой цепи, выбранного из V_L1, V_L2, V_L3, V_L4, V_L5, V_L6, V_L7, V_L8, V_L9, V_L10, V_L11, V_L12, V_L13, V_L14, V_L15, V_L16, или V_L17 только в 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 аминокислотных остатках, при этом каждая такая разность последовательностей независимо представляет собой либо делецию или вставку, либо замену одной аминокислоты, с делециями, вставками и/или заменами, что приводит к изменению не более 15 аминокислот по сравнению с предшествующими последовательностями вариабельных доменов. Вариабельная область легкой цепи в некоторых антителах против рецептора CGRP или их связывающих фрагментах содержит последовательность аминокислот, которая характеризуется по меньшей мере 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% или 99% идентичностью последовательности с аминокислотными последовательностями вариабельной области легкой цепи V_L1, V_L2, V_L3, V_L4, V_L5, V_L6, V_L7, V_L8, V_L9, V_L10, V_L11, V_L12, V_L13, V_L14, V_L15, V_L16 или V_L17.

[100] В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент, пригодный для применения в способах по данному изобретению, содержит вариабельную область легкой цепи (V_L) и вариабельную область тяжелой цепи (V_H), при этом:

(a) V_L содержит последовательность SEQ ID NO: 75, а V_H содержит последовательность SEQ ID NO: 92;

(b) V_L содержит последовательность SEQ ID NO: 76, а V_H содержит последовательность SEQ ID NO: 93;

(d) V_L содержит последовательность SEQ ID NO: 78, а V_H содержит последовательность SEQ ID NO: 95;

(e) V_L содержит последовательность SEQ ID NO: 79, а V_H содержит последовательность SEQ ID NO: 96;

(f) V_L содержит последовательность SEQ ID NO: 80, а V_H содержит последовательность SEQ ID NO: 92;

(g) V_L содержит последовательность SEQ ID NO: 81, а V_H содержит последовательность SEQ ID NO: 97;

(h) V_L содержит последовательность SEQ ID NO: 82, а V_H содержит последовательность SEQ ID NO: 96;

(i) V_L содержит последовательность SEQ ID NO: 83, а V_H содержит последовательность SEQ ID NO: 92;

(j) V_L содержит последовательность SEQ ID NO: 84, а V_H содержит последовательность SEQ ID NO: 98;

(k) V_L содержит последовательность SEQ ID NO: 85, а V_H содержит последовательность SEQ ID NO: 99;

(l) V_L содержит последовательность SEQ ID NO: 86, а V_H содержит последовательность SEQ ID NO: 100;

(m) V_L содержит последовательность SEQ ID NO: 86, а V_H содержит последовательность SEQ ID NO: 101;

(n) V_L содержит последовательность SEQ ID NO: 87, а V_H содержит последовательность SEQ ID NO: 96;

(o) V_L содержит последовательность SEQ ID NO: 88, а V_H содержит последовательность SEQ ID NO: 102;

(p) V_L содержит последовательность SEQ ID NO: 89, а V_H содержит последовательность SEQ ID NO: 103;

(q) V_L содержит последовательность SEQ ID NO: 90, а V_H содержит последовательность SEQ ID NO: 104; или

(r) V_L содержит последовательность SEQ ID NO: 91, а V_H содержит последовательность SEQ ID NO: 104.

[101] В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитела против рецептора CGRP или связывающие фрагменты могут содержать аминокислотные последовательности, которые характеризуются 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% или 99% идентичностью последовательностей с указанными вариабельными доменами в приведенных выше парах. В одном конкретном варианте реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент, применяемый в способах, описанных в данном документе, содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO: 92 и вариабельный участок легкой цепи, содержащий последовательность SEQ ID NO: 80. В другом конкретном варианте реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент, применяемый в способах, описанных в данном документе, содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность SEQ ID NO: 98 и вариабельный участок легкой цепи, содержащий последовательность SEQ ID NO: 84.

[102] Конкретные примеры некоторых полноразмерных легких и тяжелых цепей аантител против рецептора CGRP, пригодных для применения в способах по данному изобретению, и их соответствующих аминокислотных последовательностей, приведены в Таблицах 5 и 6. В Таблице 5 приведены типовые последовательности тяжелой цепи, а в Таблице 6 приведены типовые последовательности легкой цепи.

Таблица 5. Типовые аминокислотные последовательности тяжелой цепи антитела

SEQ ID NO:	Обозначение	Последовательность
105	H1	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAVISFDGSIKYSVDSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDRLNYYDSSGYYHYKYYGMAVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
106	H2	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSTTDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTDRTGYSISWSSYYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
107	H3	EVQLLESGGGLVQPGESLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKDQREVGPYSSGWYDYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
108	H4	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYFCARDQMSIIMLRGVFPPYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
109	H5	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVISYDGSHESYADSVKGRFTISRDISKNTLYLQMNSLRAEDTAVYFCARERKRVTMSTLYYYFYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
110	H6	EVQLVESGGGLVKPGRSLRLSCTASGFTFGDYAMSWFRQAPGKGLEWIGFIRSRAYGGTPEYAASVKGRFTISRDDSKTIAYLQMNSLKTEDTAVYFCARGRGIAARWDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
111	H7	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTDYTAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKAEDTAVYYCTTDRTGYSISWSSYYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
112	Н8	QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTDYYMYWVRQAPGQGLEWMGWISPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCVRGGYSGYAGLYSHYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
113	H9	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFGNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYFCTTDRTGYSISWSSYYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
114	H10	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFGNAWMSWVRQAPGKGLEWVGRIKSKTDGGTTDYAAPVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLKTEDTAVYYCTTDRTGYSISWSSYYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
115	H11	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSFGMHWVRQAPGKGLEWVAVISFDGSIKYSVDSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCARDRLNYYDSSGYYHYKYYGLAVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
116	H12	EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGYTFSTYSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSSSSYRYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMSSLRAEDTAVYYCAREGVSGSSPYSISWYDYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
117	H13	QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSNKYYADSVKGRFIISRDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAGGIAAAGLYYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK

Таблица 6. Типовые аминокислотные последовательности легкой цепи антитела

SEQ ID NO:	Обозначение	Последовательность
118	L1	QSVLTQPPSVSEAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSRLSAVVFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
119	L2	QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGAAPKLLIFRSNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
120	L3	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRNDLGWFQQKPGKAPKRLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDLATYYCLQYNIYPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
121	L4	SSELTQDPTVSVALGQTVKITCQGDSLRSFYASWYQQKPGQAPVLVFYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSVYHLVLGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
122	L5	DIILAQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLLHSAGKTYLYWYLQKPGQPPQLLIYEVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCMQSFPLPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
123	L6	QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSTTLGITGLQTGDEADYYCGTWDSRLSAVVFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
124	L7	DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSFGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPFTFGPGTKVDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
125	L8	DIILTQTPLSLSVTPGQPASISCKSSQSLLHSDGKTYLYWYLQKPGQPPQLLIYEVSNRFSGEPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGTYYCMQSFPLPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
126	L9	QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQFPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSRLSAVVFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
127	L10	QSVLTQSPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGAAPKLLILRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLTISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
128	L11	QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADFYCAARDESLNGVVFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
129	L12	QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGAAPKLLIFRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
130	L13	DITLTQTPLSLSVSPGQPASISCKSSQSLLHSDGRNYLYWYLQKPGQPPQLLIYEVSNRFSGLPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGIYYCMQSFPLPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
131	L14	QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSRLSAVVFGGGTKLTVLGQPKANPTVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADGSPVKAGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
132	L15	DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGIRKDLGWYQQKPGKAPKRLIYGASSLQSGVPSRFSGSGSGTEFTLTISSLQPEDFATYYCLQYNSFPWTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
133	L16	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSGYLTWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGNSLCRFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
134	L17	EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSGYLTWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGNSLSRFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC

[103] Сигнальные пептидные последовательности, например, для облегчения экспрессии последовательностей тяжелой и легкой цепи в определенных типах клеток-хозяев, могут быть добавлены/слиты с амино-концом любой из последовательностей тяжелой и легкой цепи, перечисленных в Таблицах 5 и 6. Например, в некоторых вариантах реализации данного изобретения сигнальный пептид, имеющий аминокислотную последовательность MDMRVPAQLLGLLLLWLRGARC (SEQ ID NO: 135) слит с амино-концом любой из последовательностей тяжелой и легкой цепи из Таблиц 5 и 6. В других вариантах реализации данного изобретения сигнальный пептид, имеющий аминокислотную последовательность METPAQLLFLLLLWLPDTTG (SEQ ID NO: 136) слит с амино-концом любой из последовательностей тяжелой и легкой цепи из Таблиц 5 и 6. Другие сигнальные пептиды известны специалистам в данной области техники и могут быть слиты с любой из тяжелых цепей и/или легких цепей, перечисленных в Таблицах 5 и 6, например, для облегчения или оптимизации экспрессии в конкретных клетках-хозяевах.

[104] Каждая из типовых тяжелых цепей (H1, H2, H3 и т. д.), перечисленных в Таблице 5, может быть объединена с любой из типовых легких цепей, приведенных в Таблице 6, с образованием антитела против рецептора CGRP, пригодного для применения в способах, описанных в данном документе. Примеры таких комбинаций включают H1 в сочетании с любым из L1-L17; H2 в сочетании с любой из L1-L17; H3 в сочетании с любой из L1-L17 и так далее. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитела против рецептора CGRP включают по меньшей мере одну тяжелую цепь и одну легкую цепь из тех, которые перечислены в Таблицах 5 и 6. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитела против рецептора CGRP содержат две различные тяжелые цепи и две различные легкие цепи, перечисленные в Таблицах 5 и 6. В других вариантах реализации данного изобретения антитела против рецептора CGRP содержат две идентичные легкие цепи и две идентичные тяжелые цепи. В качестве примера антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент может включать две тяжелые цепи H1 и две легкие цепи L1 или две тяжелые цепи H2 и две легкие цепи L2, или две тяжелые цепи H3 и две легкие цепи L3 и другие аналогичные комбинации пар легких цепей и пар тяжелых цепей, как указано в Таблицах 5 и 6.

[105] Антитела против рецептора CGRP, применяемые в способах по данному изобретению, могут быть вариантами антител, образованных комбинацией тяжелых и легких цепей, приведенных в Таблицах 5 и 6, и содержат легкие и/или тяжелые цепи, каждая из которых имеет по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 97% или 99% идентична аминокислотным последовательностям этих цепей. В некоторых случаях такие антитела включают по меньшей мере одну тяжелую цепь и одну легкую цепь, тогда как в других случаях вариантные формы содержат две идентичные легкие цепи и две идентичные тяжелые цепи.

[106] В некоторых вариантах реализации описанных в данном документе способов антитело против рецептора CGRP содержит:

(а) тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 105, и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 118;

(b) тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 106, и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 119;

(с) тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 107, и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 120;

(d) тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 108, и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 121;

(е) тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 109, и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 122;

(f) тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 105, и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 123;

(g) тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 110, и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 124;

(h) тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 109, и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 125;

(i) тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 105, и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 126;

(j) тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 111, и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 127;

(k) тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 112, и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 128;

(l) тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 113, и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 129;

(m) тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 114, и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 129;

(n) тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 109, и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 130;

(о) тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 115, и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 131;

(p) тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 116, и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 132;

(q) тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 117, и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 133; или

(r) тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 117, и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 134.

[107] В одном конкретном варианте реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP, применяемое в способах по данному изобретению, содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 105, и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 123. В другом конкретном варианте реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP, применяемое способах по данному изобретению, содержит, содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 111, и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 127.

[108] Типовые антитела против рецептора CGRP для применения в способах по данному изобретению включают, но не ограничиваются ими, антитела 1E11, 1H7, 2E7, 3B6, 3C8, 4E4, 4H6, 5F5, 9D4, 9F5, 10E4, 11D11, 11H9, 12E8, 12G8, 13H2 и 32H7. В Таблице 7 приведены структурные характеристики каждого из этих антител.

Таблица 7. Типовые антитела против рецептора CGRP

Антитело	Полная тяжелая цепь	Вариабельная область тяжелой цепи	CDR тяжелой цепи	Полная легкая цепь	Вариабельная область легкой цепи	CDR легкой цепи
1E11	H1 (SEQ ID NO: 105)	V_H1 (SEQ ID NO: 92)	CDRH 1-1 (SEQ ID NO: 14) CDRH 2-1 (SEQ ID NO: 23) CDRH 3-1 (SEQ ID NO: 34)	L1 (SEQ ID NO: 118)	V_L1 (SEQ ID NO: 75)	CDRL 1-1 (SEQ ID NO: 44) CDRL 2-1 (SEQ ID NO: 55) CDRL 3-1 (SEQ ID NO: 65)
1H7	H2 (SEQ ID NO: 106)	V_H2 (SEQ ID NO: 93)	CDRH 1-2 (SEQ ID NO: 15) CDRH 2-2 (SEQ ID NO: 24) CDRH 3-2 (SEQ ID NO: 35)	L2 (SEQ ID NO: 119)	V_L2 (SEQ ID NO: 76)	CDRL 1-2 (SEQ ID NO: 45) CDRL 2-2 (SEQ ID NO: 56) CDRL 3-2 (SEQ ID NO: 66)
2E7	H3 (SEQ ID NO: 107)	V_H3 (SEQ ID NO: 94)	CDRH 1-3 (SEQ ID NO: 16) CDRH 2-3 (SEQ ID NO: 25) CDRH 3-3 (SEQ ID NO: 36)	L3 (SEQ ID NO: 120)	V_L3 (SEQ ID NO: 77)	CDRL 1-3 (SEQ ID NO: 46) CDRL 2-3 (SEQ ID NO: 57) CDRL 3-3 (SEQ ID NO: 67)
3B6	H4 (SEQ ID NO: 108)	V_H4 (SEQ ID NO: 95)	CDRH 1-4 (SEQ ID NO: 17) CDRH 2-4 (SEQ ID NO: 26) CDRH 3-4 (SEQ ID NO: 37)	L4 (SEQ ID NO: 121)	V_L4 (SEQ ID NO: 78)	CDRL 1-4 (SEQ ID NO: 47) CDRL 2-4 (SEQ ID NO: 58) CDRL 3-4 (SEQ ID NO: 68)
3C8	H5 (SEQ ID NO: 109)	V_H5 (SEQ ID NO: 96)	CDRH 1-5 (SEQ ID NO: 18) CDRH 2-5 (SEQ ID NO: 27) CDRH 3-5 (SEQ ID NO: 38)	L5 (SEQ ID NO: 122)	V_L5 (SEQ ID NO: 79)	CDRL 1-5 (SEQ ID NO: 48) CDRL 2-5 (SEQ ID NO: 59) CDRL 3-5 (SEQ ID NO: 69)
4E4	H1 (SEQ ID NO: 105)	V_H1 (SEQ ID NO: 92)	CDRH 1-1 (SEQ ID NO: 14) CDRH 2-1 (SEQ ID NO: 23) CDRH 3-1 (SEQ ID NO: 34)	L6 (SEQ ID NO: 123)	V_L6 (SEQ ID NO: 80)	CDRL 1-1 (SEQ ID NO: 44) CDRL 2-1 (SEQ ID NO: 55) CDRL 3-1 (SEQ ID NO: 65)
4H6	H6 (SEQ ID NO: 110)	V_H6 (SEQ ID NO: 97)	CDRH 1-6 (SEQ ID NO: 19) CDRH 2-6 (SEQ ID NO: 28) CDRH 3-6 (SEQ ID NO: 39)	L7 (SEQ ID NO: 124)	V_L7 (SEQ ID NO: 81)	CDRL 1-6 (SEQ ID NO: 49) CDRL 2-6 (SEQ ID NO: 60) CDRL 3-6 (SEQ ID NO: 70)
5F5	H5 (SEQ ID NO: 109)	V_H5 (SEQ ID NO: 96)	CDRH 1-5 (SEQ ID NO: 18) CDRH 2-5 (SEQ ID NO: 27) CDRH 3-5 (SEQ ID NO: 38)	L8 (SEQ ID NO: 125)	V_L8 (SEQ ID NO: 82)	CDRL 1-7 (SEQ ID NO: 50) CDRL 2-5 (SEQ ID NO: 59) CDRL 3-5 (SEQ ID NO: 69)
9D4	H1 (SEQ ID NO: 105)	V_H1 (SEQ ID NO: 92)	CDRH 1-1 (SEQ ID NO: 14) CDRH 2-1 (SEQ ID NO: 23) CDRH 3-1 (SEQ ID NO: 34)	L9 (SEQ ID NO: 126)	V_L9 (SEQ ID NO: 83)	CDRL 1-1 (SEQ ID NO: 44) CDRL 2-1 (SEQ ID NO: 55) CDRL 3-1 (SEQ ID NO: 65)
9F5	H7 (SEQ ID NO: 111)	V_H7 (SEQ ID NO: 98)	CDRH 1-2 (SEQ ID NO: 15) CDRH 2-7 (SEQ ID NO: 29) CDRH 3-2 (SEQ ID NO: 35)	L10 (SEQ ID NO: 127)	V_L10 (SEQ ID NO: 84)	CDRL 1-2 (SEQ ID NO: 45) CDRL 2-7 (SEQ ID NO: 61) CDRL 3-2 (SEQ ID NO: 66)
10E4	Н8 (SEQ ID NO: 112)	V_H8 (SEQ ID NO: 99)	CDRH 1-7 (SEQ ID NO: 20) CDRH 2-8 (SEQ ID NO: 30) CDRH 3-7 (SEQ ID NO: 40)	L11 (SEQ ID NO: 128)	V_L11 (SEQ ID NO: 85)	CDRL 1-8 (SEQ ID NO: 51) CDRL 2-8 (SEQ ID NO: 62) CDRL 3-7 (SEQ ID NO: 71)
11D11	H9 (SEQ ID NO: 113)	V_H9 (SEQ ID NO: 100)	CDRH 1-2 (SEQ ID NO: 15) CDRH 2-9 (SEQ ID NO: 31) CDRH 3-2 (SEQ ID NO: 35)	L12 (SEQ ID NO: 129)	V_L12 (SEQ ID NO: 86)	CDRL 1-2 (SEQ ID NO: 45) CDRL 2-7 (SEQ ID NO: 61) CDRL 3-2 (SEQ ID NO: 66)
11H9	H10 (SEQ ID NO: 114)	V_H10 (SEQ ID NO: 101)	CDRH 1-2 (SEQ ID NO: 15) CDRH 2-9 (SEQ ID NO: 31) CDRH 3-2 (SEQ ID NO: 35)	L12 (SEQ ID NO: 129)	V_L12 (SEQ ID NO: 86)	CDRL 1-2 (SEQ ID NO: 45) CDRL 2-7 (SEQ ID NO: 61) CDRL 3-2 (SEQ ID NO: 66)
12E8	H5 (SEQ ID NO: 109)	V_H5 (SEQ ID NO: 96)	CDRH 1-5 (SEQ ID NO: 18) CDRH 2-5 (SEQ ID NO: 27) CDRH 3-5 (SEQ ID NO: 38)	L13 (SEQ ID NO: 130)	V_L13 (SEQ ID NO: 87)	CDRL 1-9 (SEQ ID NO: 52) CDRL 2-5 (SEQ ID NO: 59) CDRL 3-5 (SEQ ID NO: 69)
12G8	H11 (SEQ ID NO: 115)	V_H11 (SEQ ID NO: 102)	CDRH 1-1 (SEQ ID NO: 14) CDRH 2-1 (SEQ ID NO: 23) CDRH 3-8 (SEQ ID NO: 41)	L14 (SEQ ID NO: 131)	V_L14 (SEQ ID NO: 88)	CDRL 1-1 (SEQ ID NO: 44) CDRL 2-1 (SEQ ID NO: 55) CDRL 3-1 (SEQ ID NO: 65)
13H2	H12 (SEQ ID NO: 116)	V_H12 (SEQ ID NO: 103)	CDRH 1-8 (SEQ ID NO: 21) CDRH 2-10 (SEQ ID NO: 32) CDRH 3-9 (SEQ ID NO: 42)	L15 (SEQ ID NO: 132)	V_L15 (SEQ ID NO: 89)	CDRL 1-10 (SEQ ID NO: 53) CDRL 2-9 (SEQ ID NO: 63) CDRL 3-8 (SEQ ID NO: 72)
32H7	H13 (SEQ ID NO: 117)	V_H13 (SEQ ID NO: 104)	CDRH 1-9 (SEQ ID NO: 22) CDRH 2-11 (SEQ ID NO: 33) CDRH 3-10 (SEQ ID NO: 43)	L16 (SEQ ID NO: 133)	V_L16 (SEQ ID NO: 90)	CDRL 1-11 (SEQ ID NO: 54) CDRL 2-10 (SEQ ID NO: 64) CDRL 3-9 (SEQ ID NO: 73)

[109] Антитела против рецептора CGRP, применяемые в описанных в данном документе способах, могут представлять собой моноклональные антитела, поликлональные антитела, рекомбинантные антитела, человеческие антитела, гуманизированные антитела, химерные антитела, мультиспецифические антитела или их антигенсвязывающие фрагменты. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP представляет собой моноклональное антитело. В таких вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP может быть моноклональным антителом человека. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP представляет собой антитело человека и может являться IgG1-, IgG2-, IgG3- или IgG4. Таким образом, антитело против рецептора CGRP может в некоторых вариантах реализации данного изобретения иметь константный домен IgG1 человека или IgG2 человека. В одном варианте реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP представляет собой моноклональное антитело IgG1. В другом варианте реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP представляет собой моноклональное антитело IgG2.

[110] Моноклональные антитела могут быть получены с помощью любого метода, известного в данной области техники, например, путем иммортализации клеток селезенки, полученных от трансгенного животного после завершения схемы иммунизации. Клетки селезенки могут быть иммортализированы с помощью любого метода, известного в данной области техники, например, путем слияния их с клетками миеломы для получения гибридом. Клетки миеломы для применения в технологиях слияния с целью получения гибридом, предпочтительно являются такими, которые не продуцируют антитела, обладают высокой эффективностью слияния и дефицитом ферментов, которые делают их неспособными расти в определенных селективных средах, поддерживающих рост только желаемых слитых клеток (гибридомы). Примеры пригодных линий клеток для применения с целью слияния у мышей включают Sp-20, P3-X63/Ag8, P3-X63-Ag8. 653, NS1/1. Ag 4 1, Sp210-Ag14, FO, NSO/U, MPC-11, MPC11-X45-GTG 1. 7 и S194/5XXO Bul; примеры линий клеток, применяемых с целью слияния у крыс, включают R210. RCY3, Y3-Ag 1. 2. 3, IR983F и 4B210. Другими клеточными линиями, пригодными для слияния клеток, являются U-266, GM1500-GRG2, LICR-LON-HMy2 и UC729-6.

[111] В некоторых случаях линию клеток гибридомы получают путем иммунизации животного (например, трансгенного животного, имеющего последовательности иммуноглобулина человека) иммуногеном рецептора CGRP; отбора клеток селезенки у иммунизированного животного; слияния собранных клеток селезенки с линией клеток миеломы, тем самым генерируя клетки гибридомы; формирования линий клеток гибридомы из клеток гибридомы и определения линии клеток гибридомы, которая продуцирует антитело, связывающееся с рецептором CGRP.

[112] Моноклональные антитела, секретируемые линией клеток гибридомы, могут быть очищены с помощью любого метода, известного в данной области техники. Гибридомы или mAb могут быть дополнительно скринированы для идентификации mAb с определенными свойствами, такими как способность связывать клетки, экспрессирующие рецептор CGRP, способность блокировать или препятствовать связыванию лиганда CGRP или пептида CGRP_8-37, или способность функционально блокировать рецептор, что определяют, например, с помощью анализа цАМФ, например, как описано в данном документе.

[113] В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитела против рецептора CGRP, применяемый в способах по данному изобретению, представляют собой химерные или гуманизированные антитела на основе вышеуказанных последовательностей. Химерное антитело представляет собой антитело, состоящее из белковых сегментов из разных антител, которые ковалентно соединены для получения функциональных легких или тяжелых цепей иммуноглобулина или их иммунологически функциональных частей. Как правило, часть тяжелой цепи и/или легкой цепи идентична или гомологична соответствующей последовательности в антителах, полученных из определенного вида, или принадлежащих к определенному классу или подклассу антитела, тогда как остальная часть цепи(ей) идентичны или гомологичны соответствующей последовательности в антителах, полученных из другого вида, или принадлежащих к другому классу или подклассу антитела. Для получения более детальной информации о способах, относящихся к получению химерных антител, см., например, патент США № 4816567; and Morrison et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855, которые включены в данное описание посредством ссылки. «Прививание» CDR описано, например, в патентах США № 6180370, № 5693762, № 5693761, № 5585089 и № 5530101.

[114] Как правило, целью создания химерного антитела является создание химеры, в которой максимизируется количество аминокислот от предопределенного вида. Одним из примеров является «CDR-привитое» антитело, в котором антитело содержит одну или более CDR от определенного вида или принадлежащих к определенному классу или подклассу антитела, в то время как остальная часть цепи(ей) антитела идентична или гомологична соответствующей последовательности в антителах, полученных от другого вида, или принадлежащих к другому классу или подклассу антитела. Для применения у людей вариабельная область или выбранные CDR из антитела грызунов часто прививаются в антитело человека, заменяя природные вариабельные области или CDR антитела человека.

[115] Одним из пригодных типов химерных антител является «гуманизированное» антитело. Как правило, гуманизированное антитело получают из моноклонального антитела, первоначально полученного от животного, не являющегося человеком. Определенные аминокислотные остатки в этом моноклональном антителе, как правило, состоящие из частей, не распознающих антиген, модифицируют с целью гомологичного соответствия остаткам в антителе человека соответствующего изотипа. Гуманизация может быть осуществлена, например, с помощью различных способов путем замещения по меньшей мере части вариабельной области грызуна на соответствующие области антитела человека (см., например, патенты США № 5585089 и № 5693762; Jones et al.,1986, Nature 321: 522-525; Riechmann et al., 1988, Nature 332: 323-27; Verhoeyen et al., 1988, Science 239: 1534-1536).

[116] В одном аспекте, CDR вариабельных областей легкой и тяжелой цепи антител, представленные в данном документе (см. Таблицы 2 и 3), привиты к каркасным областям (FR) из антител аналогичного или других филогенетических видов. Например, CDR вариабельных областей тяжелой и легкой цепей V_H1, V_H2, V_H3, V_H4, V_H5, V_H6, V_H7, V_H8, V_H9, V_H10, V_H11, V_H12, и V_H13, и/или V_L1, V_L2, V_L3, V_L4, V_L5, V_L6, V_L7, V_L8, V_L9, V_L10, V_L11, V_L12, V_L13, V_L14, V_L15, V_L16, и V_L17 могут быть привиты к консенсусным FR человека. Чтобы создать консенсусные FR человека, FR из нескольких аминокислотных последовательностей тяжелой цепи или легкой цепи человека можно выровнять для идентификации консенсусной аминокислотной последовательности. В других вариантах реализации данного изобретения FR тяжелой цепи или легкой цепи, описанные в данном документе, заменяют на FR из другой тяжелой цепи или легкой цепи. В одном аспекте редкие аминокислоты в FR тяжелых и легких цепей антитела против рецептора CGRP не заменяют, тогда как остальные аминокислоты в FR заменяют. «Редкая аминокислота» представляет собой специфическую аминокислоту, которая находится в положении, в котором эту конкретную аминокислоту обычно не обнаруживают в FR. В альтернативном варианте привитые вариабельные области из одной тяжелой или легкой цепи могут применяться с константной областью, которая отличается от константной области этой конкретной тяжелой или легкой цепи, как описано в данном документе. В других вариантах реализации данного изобретения привитые вариабельные области являются частью одноцепочечного Fv-антитела.

[117] В конкретных вариантах реализации данного изобретения антитела против рецептора CGRP, или их антигенсвязывающие фрагменты, применяемые в способах по данному изобретению, являются полностью человеческими антителами. Существуют способы получения полностью человеческих антител, специфичных для данного антигена, без воздействия на антиген человека («полностью человеческие антитела»). Одним из конкретных способов, обеспечивающих продукцию полностью человеческих антител, является «гуманизация» гуморальной иммунной системы мыши. Введение локусов иммуноглобулина человека (Ig) в мышей, в которых инактивированы гены эндогенного Ig, является одним из способов получения полностью человеческих моноклональных антител (mAbs) у мыши, животного, которого можно иммунизировать любым желаемым антигеном. Применение полностью человеческих антител может минимизировать иммуногенные и аллергические реакции, которые иногда могут быть вызваны введением мышиных или производных от мыши mAb людям в качестве терапевтических агентов.

[118] Полностью человеческие антитела можно получить путем иммунизации трансгенных животных (обычно мышей), которые способны продуцировать репертуар человеческих антител в отсутствие продукции эндогенного иммуноглобулина. Антигены для этой цели обычно имеют шесть или более смежных аминокислот и в некоторых случаях конъюгированы с носителем, таким как гаптен. См., например, Jakobovits et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA90: 2551-2555; Jakobovits et al., 1993, Nature362: 255-258; and Bruggermann et al., 1993, Year in Immunol. 7: 33. В одном примере такого способа трансгенных животных получают путем нейтрализации эндогенных локусов иммуноглобулина мыши, кодирующих тяжелые и легкие цепи иммуноглобулина мыши, и вставки в геном мыши больших фрагментов ДНК генома человека, содержащих локусы, которые кодируют белки человека тяжелой и легкой цепи. Частично модифицированных животных, которые имеют меньше, чем полный набор локусов иммуноглобулина человека, затем перекрестно скрещивают для получения животного, имеющего все желаемые модификации иммунной системы. При введении иммуногена эти трансгенные животные продуцируют антитела, которые являются иммуноспецифическими для иммуногена, но имеют аминокислотные последовательности человека, а не мыши, включая вариабельные области. Для получения дополнительной информации о таких способах, см., например, WO96/33735 и WO94/02602. Дополнительные способы, относящиеся к получению антител человека с помощью трансгенных мышей, описаны в патентах США № 5545807; № 6713610; № 6673986; № 6162963; № 5545807; № 6300129; № 6255458; № 5877397; № 5874299 и № 5545806; в публикациях PCT WO91/10741, WO90/04036 и в ЕР 546073B1 и ЕР 546073A1.

[119] Трансгенные мыши, описанные выше, называемые в данном документе «мышами HuMab», содержат минилокус гена иммуноглобулина человека, который кодирует неупорядоченные тяжелые ([мю] и [гамма]) и легкие [каппа] последовательности иммуноглобулина человека вместе с целевыми мутациями, которые инактивируют эндогенные локусы [мю] и [каппа] цепи (Lonberg et al., 1994, Nature 368: 856-859). Соответственно, у мышей отмечают пониженную экспрессию мышиного IgM или [каппа] в ответ на иммунизацию, а введенные трансгены тяжелой и легкой цепи человека подвергают переключению класса и соматической мутации с целью получения высокоаффинных человеческих моноклональных антител IgG [каппа] (Lonberg et al., выше. Lonberg and Huszar, 1995, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93; Harding and Lonberg, 1995, Ann. N. Y Acad. Sci. 764: 536-546). Получение мышей HuMab подробно описано в работах Taylor et al., 1992, Nucleic Acids Research 20: 6287-6295; Chen et al., 1993, International Immunology5: 647-656; Tuaillon et al., 1994, J. Immunol. 152: 2912-2920; Lonberg et al., 1994, Nature368: 856-859; Lonberg, 1994, Handbook of Exp. Pharmacology 113: 49-101; Taylor et al., 1994, International Immunology 6: 579-591; Lonberg and Huszar, 1995, Intern. Rev. Immunol. 13: 65-93; Harding and Lonberg, 1995, Ann. N. Y Acad. Sci. 764: 536-546; Fishwild et al., 1996, Nature Biotechnology14: 845-851; вышеупомянутые работы включены в данное описание посредством ссылки во всей их полноте для всех целей. См. дополнительно в патентах США № 5545806; № 5569825; № 5625126; № 5633425; № 5789650; № 5877397; № 5661016; № 5814318; № 5874299 и № 5770429; а также патент США № 5545807; международные публикации № № WO 93/1227; WO 92/22646; и WO 92/03918, описания которых полностью включены в настоящий документ посредство ссылки во всей их полноте для всех целей. Методики, применяемые для получения антител человека у этих трансгенных мышей, описаны также в WO 98/24893, и Mendez et al., 1997, Nature Genetics15: 146-156, которые включены в данное описание посредством ссылки. Например, штаммы трансгенных мышей HCo7 и HCo12 можно применять для получения антител против рецептора CGRP.

[120] Некоторые антитела против рецептора CGRP или связывающие фрагменты, которые можно применять в описанных в данном документе способах, представляют собой разновидности антител против рецептора CGRP, описанных выше (например, антител, которые имеют последовательности, перечисленные в Таблицах 2-7). Например, антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент может иметь одну или более консервативных аминокислотных замен в одной или более тяжелых или легких цепях, вариабельных областях или CDR, перечисленных в Таблицах 2-7. Консервативные аминокислотные замены могут включать обмен аминокислоты на другую аминокислотой, которая обладает общим свойством боковой цепи (например, гидрофобным, нейтральным гидрофильным, кислотным, основным и ароматическим). Например, консервативная замена включает замену гидрофобной аминокислоты (например, норлейцина, метионина, аланина, валина, лейцина или изолейцина) на другую гидрофобную аминокислоту. Консервативные аминокислотные замены могут включать не встречающиеся в природе аминокислотные остатки, которые, как правило, встраивают с помощью химического пептидного синтеза, в отличие от синтеза в биологических системах. К ним относятся пептидомиметики и другие реверсированные или инвертированные формы аминокислотных остатков.

[121] При внесении таких изменений, согласно некоторым вариантам реализации изобретения, можно принимать во внимание индекс гидрофобности аминокислот. Профиль гидрофобности белка рассчитывается путем присваивания каждой аминокислоте числового значения («индекс гидрофобности»), с последующим повторным усреднением этих значений вдоль пептидной цепи. Индекс гидрофобности присваивается каждой аминокислоте на основании ее гидрофобности и характеристик заряда. Аминокислоты имеют следующие индексы гидрофобности: изолейцин (+4,5); валин (+4,2); лейцин (+3,8); фенилаланин (+2,8); цистеин/цистин (+2,5); метионин+1,9); аланин (+1,8); глицин (-0,4); треонин (-0,7); серин (-0,8); триптофан (-0,9); тирозин (-1,3); пролин (-1,6); гистидин (-3,2); глутамат (-3,5); глутамин (-3,5); аспартат (-3,5); аспарагин (-3,5); лизин (-3,9); и аргинин (-4,5).

[122] Специалисты в данной области техники понимают важность профиля гидрофобности при сопоставлении интерактивной биологической функции на белке (см., например, Kyte et al., 1982, J. Mol. Biol. 157: 105-131). Известно, что некоторые аминокислоты можно заменить другими аминокислотами, имеющими аналогичный индекс или балл гидрофобности, при этом такие аминокислоты будут сохранять аналогичный уровень биологической активности. При внесении изменений, основанных на индексе гидрофобности, в некоторых вариантах реализации данного изобретения осуществляют замены аминокислот, индексы гидрофобности которых находятся в пределах ± 2. В некоторых аспектах изобретения осуществляют замены аминокислот, индексы гидрофобности которых находятся в пределах ± 1, в других аспектах осуществляют замены аминокислот, индексы гидрофобности которых находятся в пределах ± 0,5.

[123] Специалистам в данной области техники также будет понятно, что замена подобных аминокислот может быть эффективно осуществлена на основании гидрофильности, особенно в тех случаях, когда полученный таким образом биологически функциональный белок или пептид предназначен для применения в иммунологических вариантах реализации изобретения, как в данном случае. В некоторых вариантах реализации данного изобретения наибольшая локальная средняя гидрофильность белка, определяемая гидрофильностью соседних аминокислот, коррелирует с его иммуногенностью и антигенсвязывающей активностью или иммуногенностью, т.е. с биологическим свойством белка.

[124] Этим аминокислотным остаткам были присвоены следующие показатели гидрофильности: аргинин (+3,0); лизин (+3,0); аспартат (+3,0 ± 1); глутамат (+3,0 ± 1); серин (+0,3); аспарагин (+0,2); глутамин (+0,2); глицин (0); треонин (-0,4); пролин (-0,5 ± 1); аланин (-0,5); гистидин (-0,5); цистеин (-1,0); метионин (-1,3); валин (-1,5); лейцин (-1,8); изолейцин (-1,8); тирозин (-2,3); фенилаланин (-2,5) и триптофан (-3,4). При внесении изменений, основанных на аналогичных значениях гидрофильности, в некоторых вариантах реализации данного изобретения осуществляют замены аминокислот, показатели гидрофильности которых находятся в пределах ±2, в других вариантах реализации данного изобретения осуществляют замены аминокислот, показатели гидрофильности которых находятся в пределах ± 1, а в дополнительных вариантах вариантах реализации данного изобретения осуществляют замены аминокислот, показатели гидрофильности которых находятся в пределах ± 0,5. В некоторых случаях можно также идентифицировать эпитопы из первичных аминокислотных последовательностей на основании гидрофильности. Эти области также называются «основными областями эпитопа».

[125] Типовые консервативные аминокислотные замены приведены в Таблице 8.

Таблица 8. Консервативные аминокислотные замены

Исходный остаток	Типовые замены
Ala	Ser
Arg	Lys
Asn	Gln, His
Asp	Glu
Cys	Ser
Gln	Asn
Glu	Asp
Gly	Pro
His	Asn, Gln
Ile	Leu, Val
Leu	Ile, Val
Lys	Arg, Gln, Glu
Met	Leu, Ile
Phe	Met, Leu, Tyr
Ser	Thr
Thr	Ser
Trp	Tyr
Tyr	Trp, Phe
Val	Ile, Leu

[126] Специалист в данной области техники сможет определить пригодные варианты антител против рецептора CGRP, как изложено в данном документе, с помощью хорошо известных методов. Специалист в данной области техники сможет идентифицировать пригодные участки молекулы, которые можно изменить без нарушения активности, путем нацеливания областей, которые не считаются значимыми для активности. Специалист в данной области техники также сможет идентифицировать остатки и части молекул, которые сохраняются среди аналогичных полипептидов. В других вариантах реализации данного изобретения даже участки, которые могут быть значимыми для биологической активности или для структуры, могут быть подвержены консервативным аминокислотным заменам без нарушения биологической активности или без отрицательного влияния на полипептидную структуру.

[127] Кроме того, специалист в данной области техники сможет ознакомиться с исследованиями структуры и функций, идентифицирующие остатки в аналогичных полипептидах, которые являются значимыми для активности или структуры. С учетом такого сравнения можно спрогнозировать значение аминокислотных остатков в белке, которые соответствуют аминокислотным остаткам, значимым для активности или структуры в аналогичных белках. Специалист в данной области техники сможет выбрать химически подобные аминокислотные замены для таких спрогнозированных значимых аминокислотных остатков.

[128] Специалист в данной области техники сможет также проанализировать трехмерную структуру и аминокислотную последовательность по отношению к этой структуре в аналогичных полипептидах. Принимая во внимание такую информацию, специалист в данной области техники сможет спрогнозировать выравнивание аминокислотных остатков антитела по отношению к его трехмерной структуре. Специалист в данной области техники может решить не осуществлять радикальных изменений аминокислотных остатков, прогнозируемо существующих на поверхности белка, поскольку такие остатки могут участвовать в значимых взаимодействиях с другими молекулами. Кроме того, специалист в данной области техники может создавать тестовые варианты, содержащие одну аминокислотную замену в каждом желаемом аминокислотном остатке. Эти варианты затем могут быть подвергнуты скринингу с применением анализов нейтрализации активности рецептора CGRP, что дает информацию о том, какие аминокислоты могут быть изменены, и какие не должны быть изменены. Другими словами, на основе информации, полученной в результате таких обычных экспериментов, специалист в данной области техники может легко определить положения аминокислот, в которых следует избегать дальнейших замен либо отдельно, либо в сочетании с другими мутациями.

[129] Дополнительные предпочтительные варианты антител включают варианты цистеина, в которых один или более остатков цистеина в исходной или нативной аминокислотной последовательности удаляются или замещаются другой аминокислотой (например, серином). Варианты цистеина пригодны, в частности, когда антитела необходимо переструктурировать в биологически активную конформацию. Варианты цистеина могут содержать меньше остатков цистеина, чем нативные антитела, и, как правило, характеризуются четным количеством, что минимизирует взаимодействия, возникающие из-за непарного количества остатков цистеина.

[130] Антитела против рецептора CGRP или их связывающие фрагменты, которые относятся к одному подклассу, можно изменить на антитела или связывающие фрагменты из другого подкласса с помощью способов переключения подкласса. Таким образом, антитела IgG могут быть получены, например, из антитела IgM и наоборот. Такие технологии позволяют получать новые антитела, которые обладают антигенсвязывающими свойствами данного антитела (исходное антитело), а также обладают биологическими свойствами, ассоциированными с изотипом или подклассом антитела, отличающегося от изотипа или подкласса исходного антитела. Можно применять технологию рекомбинантной ДНК. В таких методах можно применять клонированную ДНК, кодирующую специфические полипептиды антител, например, ДНК, кодирующую константный домен антитела желаемого изотипа. См., например, Lantto et al., 2002, Methods Mol. Biol. 178: 303-316.

[131] Соответственно, антитела против рецептора CGRP, описанные в данном документе, включают антитела, содержащие, например, описанные выше комбинации с вариабельными доменами, имеющими желаемый изотип (например, IgA, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgE и IgD), а также из Fab- или F(ab')2-фрагменты. Кроме того, если желательным является IgG4, также может потребоваться ввести в шарнирную область точечную мутацию (CPSCP -> CPPCP), как описано в работе Bloom et al., 1997, Protein Science 6: 407, включенной в настоящий документ посредством ссылки), чтобы облегчить возможность образования дисульфидных связей внутри H-цепи, которые могут приводить к гетерогенности в антителах IgG4.

[132] Кроме того, известны также способы получения антител, обладающих различными свойствами (т.е. с различной аффинностью относительно антигена, с которым они связываются). Один из таких методов, называемый перестановкой цепей, включает отображение репертуаров гена вариабельной области иммуноглобулина на поверхности нитевидного бактериофага, часто называемого фаговым дисплеем. Перестановку цепей применяли для получения антител с высокой аффинностью к гаптен-2-фенилоксазол-5-один, как описано Marks et al., 1992, BioTechnology 10: 779.

[133] Консервативные модификации могут быть внесены в вариабельные области тяжелой и легкой цепей, описанные в Таблице 4, или CDR, описанные в Таблицах 2 и 3 (и соответствующие модификации кодирующих нуклеиновых кислот) с целью получения антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, имеющего определенные желаемые функциональные и биохимические характеристики. Способы осуществления таких модификаций описаны выше.

[134] Антитела против рецептора CGRP или их связывающие фрагменты для применения в способах по данному изобретению могут быть получены с помощью любого из многих обычных методов. Например, антитела против рецептора CGRP, описанные в данном документе, могут быть получены с помощью рекомбинантных экспрессионных системам с применением любого метода, известного в данной области техники. См., например, Monoclonal Antibodies, Hybridomas: A New Dimension in Biological Analyses, Kennet et al. (eds.) Plenum Press, New York (1980); и Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow and Lane (eds.),Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (1988).

[135] Антитела против рецептора CGRP или их связывающие фрагменты могут быть экспрессированы в линиях клеток гибридомы (например, в частности, антитела могут быть экспрессированы в гибридомах) или в линиях клеток, отличных от гибридом. Экспрессионные конструкции, кодирующие антитела, могут применяться для трансформации клетки-хозяина млекопитающего, насекомого или микроорганизма. Трансформацию можно осуществлять с помощью любого известного способа введения полинуклеотидов в клетку-хозяина, включая, например, упаковку полинуклеотида в вирус или бактериофаг и трансдукцию клетки-хозяина конструкцией с помощью методов трансфекции, известных в данной области техники, как описано в патентах США № 4399216; № 4912040; № 4740461; № 4959455. Оптимальный метод трансформации будет зависеть от того, какой тип клетки-хозяина будет трансформироваться. Способы введения гетерологичных полинуклеотидов в клетки млекопитающих хорошо известны в данной области техники и включают, но не ограничиваются ими, опосредованную декстраном трансфекцию, осаждение фосфатом кальция, опосредованную полибреном трансфекцию, слияние протопластов, электропорацию, инкапсуляцию полинуклеотида (ов) в липосомы, смешивание нуклеиновой кислоты с положительно заряженными липидами и прямую микроинъекцию ДНК в ядра.

[136] Рекомбинантные экспрессирующие конструкции обычно содержат молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую полипептид, содержащий один или более из следующих элементов: одну или более CDR, представленных в данном изобретении; константную область легкой цепи; вариабельную область легкой цепи; константную область тяжелой цепи (например, CH1, CH2 и/или CH3); вариабельную область тяжелой цепи; и/или другую каркасную часть антитела против рецептора CGRP. Эти последовательности нуклеиновой кислоты вводят в соответствующий экспрессионный вектор с помощью стандартных методов лигирования. В одном варианте реализации данного изобретения константную область тяжелой или легкой цепи добавляют к С-концу специфической к рецептору CGRP вариабельной области тяжелой или легкой цепи, и лигируют в экспрессионный вектор. Вектор обычно выбирают так, чтобы он был функциональным в конкретной применяемой клетке-хозяине (т.е. вектор должен быть совместим со структурой клетки-хозяина, что позволяет амплифицировать и/или экспрессировать ген). В некоторых вариантах реализации данного изобретения применяются векторы, которые задействованы в анализах комплементации «белок-фрагмент» с применением репортеров белка, таких как дигидрофолатредуктаза (см., например, патент США№ 6270964, который включен в данное описание посредством ссылки). Пригодные экспрессионные векторы можно приобрести, например, в компании Invitrogen Life Technologies или BD Biosciences (ранее «Clontech»). Другими пригодными векторами для клонирования и экспрессии антител и фрагментов являются векторы, которые описаны в работе Bianchi and McGrew, 2003, Biotech. Biotechnol. Bioeng. 84: 439-44, которая включена в данное описание посредством ссылки. Дополнительные пригодные экспрессионные векторы обсуждаются, например, в Methods Enzymol., Vol. 185 (D. V. Goeddel, ed.),1990, New York: Academic Press.

[137] Как правило, экспрессионные векторы, применяемые в любой из клеток-хозяев, будут содержать последовательности для сохранения плазмиды, а также для клонирования и экспрессии экзогенных нуклеотидных последовательностей. Такие последовательности, которые в совокупности называются «фланкирующими последовательностями» в некоторых вариантах реализации данного изобретения, как правило, включают одну или более из следующих нуклеотидных последовательностей: промотор, одну или более энхансерных последовательностей, источник репликации, последовательность терминации транскрипции, полную интронную последовательность, содержащую донорный и акцепторный участок сплайсинга, последовательность, кодирующую лидерную последовательность для секреции полипептида, участок связывания рибосом, последовательность полиаденилирования, полилинкерную область для введения нуклеиновой кислоты, кодирующей экспрессируемый полипептид, и селектрируемый маркерный элемент. Все эти элементы рассматриваются ниже.

[138] В некоторых случаях вектор может содержать «тег»-кодирующую последовательность, т.е. олигонуклеотидную молекулу, расположенную на 5'- или 3'-конце последовательности, кодирующей антитело против рецептора CGRP; олигонуклеотидную последовательность, кодирующую полиHis (такой как гексаHis), или другой «тег», такой как FLAG®, HA (гемаглютинин вируса гриппа) или myc, для которых существуют коммерчески доступные антитела. Как правило, этот тег является слитым с полипептидом с момента экспрессии полипептида и может служить средством для аффинной очистки или детектирования антитела против рецептора CGRP из клетки-хозяина. Аффинную очистку можно осуществлять, например, с помощью колоночной хроматографии с использованием антител против тега в качестве аффинной матрицы. В некоторых случаях тег можно впоследствии удалить из очищенного антитела против рецептора CGRP различными способами, такими как применение определенных пептидаз для расщепления.

[139] Фланкирующие последовательности могут быть гомологичными (т.е. из того же вида и/или штамма, что и клетка-хозяин), гетерологичными (т.е. из вида, отличающегося от вида или штамма клетки-хозяина), гибридными (т.е. комбинацией фланкирующих последовательностей из более чем одного источника), синтетическими или нативными. Таким образом, источником фланкирующей последовательности может быть любой прокариотический или эукариотический организм, любой позвоночный или беспозвоночный организм или любое растение при условии, что фланкирующая последовательность функционирует и может быть активирована структурой клетки-хозяина.

[140] Фланкирующие последовательности, пригодные для применения в векторах, можно получить с помощью любого из нескольких способов, хорошо известных в данной области техники. Как правило, фланкирующие последовательности, применяемые в данном изобретении, будут предварительно идентифицированы с помощью картирования и/или с помощью расщепления рестрикционной эндонуклеазой, и поэтому могут быть выделены из соответствующего тканевого источника с помощью пригодных рестрикционных эндонуклеаз. В некоторых случаях может быть известна полная нуклеотидная последовательность фланкирующей последовательности. В данном изобретении фланкирующую последовательность можно синтезировать с помощью способов, описанных в данном документе, с целью синтеза или клонирования нуклеиновых кислот.

[141] Независимо от того, известна вся или только часть фланкирующей последовательности, она может быть получена с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) и/или путем скрининга геномной библиотеки с применением пригодного зонда, такого как олигонуклеотид и/или фрагмент фланкирующей последовательности из того же или другого вида. Если фланкирующая последовательность неизвестна, фрагмент ДНК, содержащий фланкирующую последовательность, можно выделить из большей части ДНК, которая может содержать, например, кодирующую последовательность или даже другой ген или гены. Выделение можно осуществить путем расщепления рестрикционной эндонуклеазой с получением соответствующего фрагмента ДНК с последующим выделением с помощью очистки агарозным гелем, колоночной хроматографии Qiagen® (Чатсворт, штат Калифорния) или с помощью других способов, известных специалисту в данной области техники. Для обычного специалиста в данной области техники выбрать пригодные ферменты для достижения этой цели будет не сложно.

[142] Участком начала репликации обычно является часть коммерчески приобретенных прокариотических экспрессионных векторов, при этом участок начала репликации способствует амплификации вектора в клетке-хозяине. Если вектор выбора не содержит участка начала репликации в сайте репликации, то его можно химически синтезировать на основании известной последовательности и лигировать в вектор. Например, участок начала репликации, полученный из плазмиды pBR322 (New England Biolabs, Беверли, штат Массачусетс), пригоден для большинства грамотрицательных бактерий, а участки начала репликации, полученные из различных вирусов (например, SV40, полиома, аденовирус, вирус везикулярного стоматита (VSV) или папилломавирусы, такие как HPV или BPV) пригодны для клонирования векторов в клетках млекопитающих. Как правило, участок начала репликации не нужен для экспрессионный векторов млекопитающих (например, участок начала репликации SV40 часто применяется только потому, что он также содержит ранний промотор вируса).

[143] Последовательность терминации транскрипции обычно расположена от 3' до конца области кодирования полипептида и служит для терминации транскрипции. Как правило, последовательность терминации транскрипции в прокариотических клетках представляет собой G-C-обогащенный фрагмент, за которым следует последовательность поли-Т. Несмотря на то, что последовательность легко клонировать из библиотеки или даже коммерчески приобрести как часть вектора, ее также можно легко синтезировать с помощью известных способов синтеза нуклеиновых кислот.

[144] Селектрируемый маркерный ген кодирует белок, необходимый для выживания и роста клетки-хозяина, выращенной в селективной культуральной среде. Типовые гены маркеров селекции кодируют белки, которые (а) придают устойчивость к антибиотикам или другим токсинам, например, ампициллину, тетрациклину или канамицину для прокариотических клеток-хозяев; (b) дополняют ауксотрофные дефициты клетки; или (c) обеспечивают критически важные нутриенты, недоступные из комплексных или определенных сред. Конкретными селектрируемыми маркерами являются ген устойчивости к канамицину, ген устойчивости к ампициллину и ген устойчивости к тетрациклину. Предпочтительно ген устойчивости к неомицину можно также применять для отбора как в прокариотических, так и в эукариотических клетках-хозяевах.

[145] Для амплификации гена, который будет экспрессироваться, можно применять другие селектрируемымые гены. Амплификация представляет собой процесс, в котором гены, которые необходимы для продукции белка, критически значимого для роста или выживаемости клеток, повторяются в тандеме внутри хромосом последовательных поколений рекомбинантных клеток. Примеры пригодных селектируемых маркеров для клеток млекопитающих включают гены дигидрофолатредуктазы (DHFR) и непромоторной тимидинкиназы. Трансформанты клеток млекопитающих помещают под давлением отбора, при этом только трансформанты характеризуются уникальной адаптацией к выживанию за счет селектируемого гена, присутствующего в векторе. Давление отбора устанавливают путем культивирования трансформированных клеток в условиях, когда концентрация селекционного агента в среде последовательно увеличивается, что приводит к амплификации как селектируемого гена, так и ДНК, которая кодирует другой ген, такой как антитело против рецептора CGRP. В результате, з амплифицированной ДНК синтезируются увеличенные количества полипептида, такого как антитело против рецептора CGRP.

[146] Участок связывания рибосомы, как правило, является необходимым для инициации трансляции мРНК и характеризуется последовательностью Шайна-Дальгарно (Shine-Dalgarno) (прокариоты) или последовательностью Козак (Kozak) (эукариоты). Указанный элемент обычно расположен 3' до промотора и 5' до кодирующей последовательности экспрессируемого полипептида.

[147] В некоторых случаях, например, когда в системе экспрессии эукариотических клеток-хозяев желаемым является гликозилирование, можно оперировать различными пре- или про-последовательностями для улучшения гликозилирования или продуктивности. Например, можно изменить участок расщепления пептидазой в конкретном сигнальном пептиде или добавить про-последовательности, которые также могут влиять на гликозилирование. Конечный белковый продукт может иметь в положении -1 (относительно первой аминокислоты зрелого белка) одну или более дополнительных аминокислот, подходящих для экспрессию, которые, возможно, не были полностью удалены. Например, конечный белковый продукт может иметь один или два аминокислотных остатка, обнаруженных в участке расщепления пептидазой, присоединенном к аминоконцу. В альтернативном варианте, применение некоторых участков ферментативного расщепления может приводить к несколько усеченной форме желаемого полипептида, если фермент разрезает в такой области в пределах зрелого полипептида.

[148] Экспрессия и клонирование обычно содержат промотор, который распознается организмом хозяина и функционально связан с молекулой, кодирующей антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент. Промоутеры представляют собой нетранскрибируемые последовательности, расположенные против хода транскрипции (т. е. 5') к стартовому кодону структурного гена (обычно в пределах от 100 до 1000 п. о.), которые контролируют транскрипцию структурного гена. Промоутеры условно сгруппированы в один из двух классов: индуцируемые промоторы и конститутивные промоторы. Индуцируемые промоторы инициируют повышенные уровни транскрипции из ДНК под своим контролем в ответ на некоторое изменение условий в культуре, такое как наличие или отсутствие нутриента или изменение температуры. С другой стороны, конститутивные промоторы равномерно транскрибируют ген, с которым они функционально связаны, т.е. с минимальным контролем или без контроля над экспрессией генов. Известно большое количество промоторов, распознаваемых множеством потенциальных клеток-хозяев. Пригодный промотор функционально связан с ДНК, кодирующей тяжелую цепь или легкую цепь, содержащую антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент, удаляя промотор из исходной ДНК путем расщепления рестрикционным ферментом и вставляя желаемую промоторную последовательность в вектор.

[149] Пригодные промоторы для применения с дрожжевыми клетками-хозяевами также хорошо известны в данной области техники. Энхансеры дрожжей преимущественно применяются с промоторами дрожжей. Пригодные промоторы для применения с клетками-хозяевами млекопитающих хорошо известны и включают, но не ограничиваются ими, промоторы, которые получены из геномов вирусов, таких как вирус полиомы, вирус оспы кур, аденовирус (такой как аденовирус 2), вирус папилломы крупного рогатого скота, вирус саркомы птиц, цитомегаловирус, ретровирусы, вирус гепатита B и вирус обезьян 40 (SV40). Другие пригодные промоторы млекопитающих включают гетерологичные промоторы млекопитающих, например промоторы теплового шока и промотор актина.

[150] Дополнительные промоторы, которые могут представлять интерес, включают, но не ограничиваются: ранний промотор SV40 (Benoist and Chambon, 1981, Nature 290: 304-310); CMV-промотор (Thornsen et al., 1984, Proc. Natl. Acad. U. S. A. 81: 659-663); промотор, содержащийся в 3'-длинном концевом повторе вируса саркомы Рауса (Yamamoto et al., 1980, Cell 22: 787-797); промотор тимидинкиназы вируса герпеса (Wagner et al., 1981, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 78: 1444-1445); промотор и регуляторные последовательности из гена металлотионина (Prinster et al., 1982, Nature 296: 39-42); и прокариотические промоторы, такие как промотор бета-лактамазы (Villa-Kamaroff et al., 1978, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 75: 3727-3731); или промотор tac (DeBoer et al., 1983, Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 80: 21-25). Также представляют интерес следующие области контроля транскрипции животных, которые проявляют тканевую специфичность и применялись у трансгенных животных: область контроля генов эластазы I, которая активна в ацинарных клетках поджелудочной железы (Swift et al., 1984, Cell 38: 639-646; Ornitz et al., 1986, Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 50: 399-409; MacDonald, 1987, Hepatology 7: 425-515); область контроля гена инсулина, которая активна в бета-клетках поджелудочной железы (Hanahan, 1985, Nature 315: 115-122); область контроля гена иммуноглобулина, которая активна в лимфоидных клетках (Grosschedl et al., 1984, Cell 38: 647-658; Adames et al., 1985, Nature 318: 533-538; Alexander et al., 1987, Mol. Cell. Biol. 7: 1436-1444); область контроля вируса опухоли молочной железы мыши, которая активна в клетках яичек, молочной железы, лимфоидных и тучных клетках (Leder et al., 1986, Cell 45: 485-495); область контроля гена альбумина, которая активна в печени (Pinkert et al., 1987, Genes and Devel. 1: 268-276); область контроля гена альфа-фето-белка, которая активна в печени (Krumlauf et al., 1985, Mol. Cell. Biol. 5: 1639-1648; Hammer et al., 1987, Science 253: 53-58); область контроля альфа-1-антитрипсина, которая активна в печени (Kelsey et al., 1987, Genes and Devel. 1: 161-171); область контроля гена бета-глобина, которая активна в миелоидных клетках (Mogram et al., 1985, Nature 315: 338-340; Kollias et al., 1986, Cell 46: 89-94); область контроля гена основного белка миелина, которая активна в клетках олигодендроцитов в головном мозге (Readhead et al., 1987, Cell 48: 703-712); область контроля гена миозина легкой цепи-2, которая активна в скелетных мышцах (Sani, 1985, Nature 314: 283-286); и область контроля гена гонадотропного релизинг-гормона, которая активна в гипоталамусе (Mason et al., 1986, Science 234: 1372-1378).

[151] Энхансерную последовательность можно вводить в вектор для повышения уровня транскрипции ДНК-кодирующей легкой цепи или тяжелой цепи, содержащей антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент высшими эукариотами. Энхансеры представляют собой цис-активные элементы ДНК, обычно около 10-300 п. о., которые действуют на промотор с целью повышения уровня транскрипции. Энхансеры являются независимыми относительно ориентации и положения, и обнаруживаются в положениях как 5', так и 3' к единице транскрипции. Известны несколько энхансерных последовательностей, доступных из генов млекопитающих (например, глобин, эластаза, альбумин, альфа-фето-белок и инсулин). Тем не менее, как правило, применяется энхансер, производный от вируса. Энхансер SV40, энхансер раннего промотора цитомегаловируса, энхансер полиомы и энхансер аденовируса, известные в данной области техники, являются типовыми энхансерными элементами для активации эукариотических промоторов. Хотя энхансер может быть помещен в вектор либо 5', либо 3' к кодирующей последовательности, он, как правило, расположен на участке 5' от промотора. Последовательность, кодирующую соответствующую нативную или гетерологичную сигнальную последовательность (лидерную последовательность или сигнальный пептид), можно встроить в экспрессионный вектор, чтобы способствовать внеклеточной секреции антитела. Выбор сигнального пептида или лидера зависит от типа клеток-хозяев, в которых необходимо продуцировать антитело, при этом гетерологичная сигнальная последовательность может заменить нативную сигнальную последовательность. Примеры сигнальных пептидов, которые являются функциональными в клетках-хозяевах млекопитающих, включают следующие: сигнальная последовательность для интерлейкина 7 (IL-7), описанная в патенте США № 4965195; сигнальная последовательность для рецептора интерлейкина-2, описанная в работе Cosman et al., 1984, Nature 312: 768; сигнальный пептид рецептора интерлейкина-4, описанный в патенте EP № 0367 566; сигнальный пептид рецептора интерлейкина-1 типа I, описанный в патентеСША № 4968607; сигнальный пептид рецептора интерлейкина-1 типа II, описанный в патенте EP № 0 460 846. Другими пригодными сигнальными пептидами для экспрессии антител против рецептора CGRP-или связывающих фрагментов, описанных в данном документе, являются сигнальные пептиды, имеющие последовательность, представленную в SEQ ID NO: 135 или SEQ ID NO: 136.

[152] Экспрессирующие векторы для рекомбинантного продуцирования антител против рецептора CGRP или их связывающих фрагментов, описанных данном документе, могут быть сконструированы из исходного вектора, такого как коммерчески доступный вектор. Такие векторы могут содержать или не содержать все желаемые фланкирующие последовательности. Когда одна или более фланкирующих последовательностей, описанных данном документе, еще не присутствуют в векторе, их можно отдельно получить и лигировать в вектор. Способы, применяемые для получения каждой из фланкирующих последовательностей, хорошо известны специалистам в данной области техники.

[153] После того, как вектор сконструирован и молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая легкую цепь, тяжелую цепь или легкую цепь и тяжелую цепь, содержащие антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент, вставлена в надлежащий участок вектора, укомплектованный вектор можно вставить в пригодную клетку-хозяина для амплификации и/или экспрессии полипептида. Трансформацию экспрессионного вектора для антигенсвязывающего белка в выбранную клетку-хозяина можно осуществить с помощью известных способов, включая трансфицирование, инфицирование, совместное осаждение фосфатом кальция, электропорацию, микроинъекцию, липофекцию, трансфицирование, опосредуемое DEAE-декстраном, или с помощью других известных методов. Выбранный способ будет отчасти зависеть от типа клетки-хозяина, который будет применяться. Эти способы и другие пригодные способы хорошо известны специалисту в данной области техники и представлены, например, в работе Sambrook et al., 2001, выше.

[154] Клетка-хозяин при культивировании в соответствующих условиях синтезирует антигенсвязывающий белок (например, антитело или связывающий фрагмент), который затем можно собрать из культуральной среды (если клетка-хозяин выделяет его в среду) или непосредственно из клетки-хозяина, продуцирующей его (если он не секретируется). Выбор пригодной клетки-хозяина будет зависеть от различных факторов, таких как желаемые уровни экспрессии, модификации полипептидов, которые являются желаемыми или необходимыми для активности (такие как гликозилирование или фосфорилирование) и легкости складывания в биологически активную молекулу.

[155] Линии клеток млекопитающих, доступные в качестве хозяев для экспрессии, хорошо известны в данной области техники и включают, но не ограничиваются ими, иммортализованные линии клеток, доступные из Американской коллекции типовых культур (АТСС), включая, но не ограничиваясь ими, клетки яичника китайского хомячка (СНО), клетки HeLa, клетки почки детеныша хомяка (BHK), клетки почек обезьян (COS), клетки гепатоцеллюлярной карциномы человека (например, Hep G2) и ряд других линий клеток. В некоторых вариантах реализации данного изобретения линии клеток могут быть выбраны путем определения линий клеток, характеризующихся высоким уровнем экспрессии и конститутивной продукцией антител или связывающих фрагментов с свойствами связывания рецептора CGRP. В другом варианте реализации данного изобретения линия клеток может быть выбрана из линии В-клеток, которая не продуцирует своего собственного антитела, но обладает способностью продуцировать и секретировать гетерологичное антитело.

[156] Как правило, антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент вводят пациенту в фармацевтической композиции, которая может включать фармацевтически приемлемые носители, вспомогательные вещества или разбавители. Термин «фармацевтически приемлемый» относится к молекулам, соединениям и композициям, которые нетоксичны для реципиентов-людей в применяемых дозах и концентрациях, и/или не вызывают аллергические или нежелательные реакции при введении людям. В некоторых вариантах реализации данного изобретения фармацевтическая композиция может содержать в своем составе материалы для модификации, поддержания или сохранения, например, рН, осмолярности, вязкости, прозрачности, цвета, изотоничности запаха, стерильности, стабильности, скорости растворения или высвобождения, адсорбции или проникновения композиции. В таких вариантах реализации данного изобретения пригодные материалы в составе включают, но не ограничиваются ими, аминокислоты (такие как глицин, глутамин, аспарагин, аргинин или лизин); противомикробные агенты; антиоксиданты (такие как аскорбиновая кислота, сульфит натрия или гидросульфит натрия); буферы (такие как борат, бикарбонат, трис-HCl, цитраты, фосфаты или другие органические кислоты); объемообразующие агенты (такие как маннит или глицин); хелатирующие агенты (такие как этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТК)); комплексообразователи (такие как кофеин, поливинилпирролидон, бета-циклодекстрин или гидроксипропил-бета-циклодекстрин); наполнители; моносахариды; дисахариды; и другие углеводы (такие как глюкоза, манноза или декстрины); белки (такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины); красители, ароматизаторы и разбавители; эмульгаторы; гидрофильные полимеры (такие как поливинилпирролидон); полипептиды с низкой молекулярной массой; солеобразующие противоионы (такие как натрий); консерванты (такие как хлорид бензалкония, бензойная кислота, салициловая кислота, тимеросал, фенэтиловый спирт, метилпарабен, пропилпарабен, хлоргексидин, сорбиновая кислота или перекись водорода); растворители (такие как глицерин, пропиленгликоль или полиэтиленгликоль); сахарные спирты (такие как маннит или сорбит); суспендирующие агенты; поверхностно-активные вещества или смачивающие агенты (такие как плюроники, ПЭГ, сложные эфиры сорбитана, полисорбаты, такие как полисорбат 20, полисорбат 80, тритон, трометамин, лецитин, холестерин, тилоксапал); стабилизирующие агенты (такие как сахароза или сорбит); агенты для повышения тоничности (такие как галогениды щелочных металлов, предпочтительно хлорид натрия или калия, маннит, сорбит); средства доставки; разбавители; вспомогательные вещества и/или фармацевтические адъюванты. Способы и пригодные материалы для составления молекул для терапевтического применения известны в фармацевтике и описаны, например, в REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18th Edition, (A. R. Genrmo, ed.), 1990, Mack Publishing Company.

[157] В некоторых вариантах реализации данного изобретения выбор носителей и вспомогательных веществ для включения в фармацевтические композиции влияет на физическое состояние, стабильность, скорость высвобождения in vivo и скорость клиренса in vivo антител против рецептора CGRP или их связывающих фрагментов. В некоторых вариантах реализации данного изобретения первичная несущая среда или носитель в фармацевтической композиции может быть либо водным, либо неводным по своей природе. Например, пригодной несущей средой или носителем может быть вода для инъекций, физиологический солевой раствор или искусственная спинномозговая жидкость, возможно, дополненная другими материалами, часто применяемыми в композициях для парентерального введения.

[158] В некоторых вариантах реализации описанных в данном документе способов антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент вводят пациенту парентерально. Парентеральное введение включает внутрибрюшинное, внутримышечное, внутривенное, внутриартериальное, внутрикожное, подкожное, внутримозговое, внутричерепное, в область желудочков головного мозга и интратекальное введение. В одном конкретном варианте реализации данного изобретения фармацевтическую композицию, содержащую терапевтически эффективное количество антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, вводят пациенту подкожно. В этих и других вариантах реализации данного изобретения фармацевтическую композицию вводят посредством парентеральной инъекции, при этом фармацевтическую композицию можно вводить пациенту с помощью шприца. В некоторых вариантах реализации данного изобретения шприц предварительно заполняют фармацевтической композицией. В других вариантах реализации данного изобретения, в которых фармацевтическую композицию вводят пациенту путем парентеральной инъекции, такой как подкожная инъекция, фармацевтическую композицию вводят с помощью устройства для инъекций, включая устройства для самостоятельного введения. Такие устройства являются коммерчески доступными и включают, но не ограничиваются ими, автоинъекторы, дозирующие шприцы-ручки, микроинфузионные насосы и предварительно заполненные шприцы. Типичные устройства для введения фармацевтической композиции, содержащие терапевтически эффективное количество антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента согласно способам по данному изобретению, включают автоинъекторы (например, SureClick®, EverGentle®, Avanti®, DosePro®, Molly® и Leva®), устройства по типу шприц-ручки (например, шприц-ручка Madie®, шприц-ручка DCP™, одноразовая шприц-ручка BD Vystra™, шприц-ручка для многоразового использования BD™), и предварительно заполненные шприцы (BD Sterifill™, BD Hypak™, предварительно заполненные шприцы от компании Baxter). В некоторых вариантах реализации данного изобретения фармацевтическую композицию, содержащую терапевтически эффективное количество антитела против рецептора CGRP или связывающего фрагмента, вводят пациенту с помощью предварительно заполненного шприца. В других вариантах реализации данного изобретения фармацевтическую композицию, содержащую терапевтически эффективное количество антитела против рецептора CGRP или связывающего фрагмента, вводят пациенту с помощью автоинъектора. В некоторых связанных вариантах реализации данного изобретения объем инъекции составляет около 1 мл или меньше.

[159] В одном варианте реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент вводят пациенту в дозе около 70 мг в месяц для предотвращения или снижения частоты возникновения мигренозной головной боли у пациента, причем дозу вводят с помощью одной подкожной инъекции. В соответствующих вариантах реализации данного изобретения одну подкожную инъекцию выполняют с помощью предварительно заполненного шприца. В других соответствующих вариантах реализации данного изобретения одну подкожную инъекцию выполняют с помощью автоинъектора. В некоторых вариантах реализации данного изобретения пациент может иметь эпизодическую мигрень или указанную патологию у пациента можно диагностировать. В других вариантах реализации данного изобретения пациент может иметь хроническую мигрень или указанную патологию у пациента можно диагностировать.

[160] В другом варианте реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент вводят пациенту в дозе около 140 мг в месяц для предотвращения или снижения частоты возникновения мигренозной головной боли у пациента, причем дозу вводят с помощью одной подкожной инъекции. В таких вариантах реализации данного изобретения одну подкожную инъекцию можно выполнить с помощью предварительно заполненного шприца или автоинъектора. В одном варианте реализации данного изобретения 140 мг ежемесячной дозы антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента вводят пациенту с помощью двух последовательных инъекций, каждая из которых содержит дозу 70 мг. В таких вариантах реализации данного изобретения две последовательные инъекции можно выполнить с применением двух предварительно заполненных шприцев или двух аутоинъекторов, каждый из которых содержит дозу 70 мг. В некоторых вариантах реализации данного изобретения пациент может иметь эпизодическую мигрень или указанную патологию у пациента можно диагностировать. В других вариантах реализации данного изобретения пациент может иметь хроническую мигрень или указанную патологию у пациента можно диагностировать.

[161] Иллюстративные фармацевтические формы, пригодные для парентеральной инъекции, включают стерильные водные растворы или дисперсии и стерильные порошки для немедленного приготовления стерильных растворов или дисперсий для инъекций. Предпочтительно, фармацевтическая форма является стерильной и является достаточно текучей, чтобы обеспечить введение с помощью шприца (т.е. состав не является чрезмерно вязким, что затрудняло бы прохождение через шприц). Стерилизацию можно осуществлять путем фильтрации через мембраны для стерильной фильтрации. Если композиция лиофилизирована, стерилизацию с помощью этого метода можно проводить либо до, либо после лиофилизации и восстановления. Композиции для парентерального введения могут храниться в лиофилизированной форме или в растворе. Парентеральные композиции можно помещать в контейнер, имеющий стерильное входное отверстие, например, мешок с раствором для внутривенного введения или флакон, содержащий пробку, прокалываемую иглой для подкожной инъекции. Парентеральные композиции также можно хранить в шприцах, устройствах для автоинъекций или устройствах для инъекций по типу шприц-ручек или в картриджах, приспособленных для применения с такими устройствами для инъекций.

[162] В некоторых вариантах реализации данного изобретения приготовление фармацевтической композиции, которую следует вводить согласно способам по данному изобретению, может включать соединение антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента с агентом, таким как пригодные для инъекций микросферы, биоразлагаемые частицы, полимерные соединения (такие как полимолочная кислота или полигликолевая кислота), гранулы или липосомы, которые могут обеспечивать контролируемое или замедленное высвобождение антитела или связывающего фрагмента, который может быть введен с помощью инъекции с замедленным всасыванием. В некоторых вариантах реализации данного изобретения может также применяться гиалуроновая кислота, которая оказывает влияние на длительное циркуляцию препарата в кровяном русле. В некоторых вариантах реализации данного изобретения для введения антитела против рецептора CGRP или связывающего фрагмента могут применяться имплантируемые устройства доставки лекарственного средства.

[163] В некоторых вариантах реализации данного изобретения фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента для введения пациенту согласно способам по данному изобретению, дополнительно содержит буфер. Буферы применяются для поддержания композиции в диапазоне физиологического рН или при несколько более низком рН, обычно в диапазоне рН от около 4,5 до около 6,5. Пригодные буферы включают, но не ограничиваются ими, глутамат, ацетат, трис, цитрат, гистидин, сукцинат и фосфатные буферы. В некоторых вариантах реализации данного изобретения фармацевтическая композиция для введения согласно описанным в данном документе способам, содержит ацетатный буфер. Ацетатный буфер можно получить из ацетатной соли, например ацетата натрия. Можно применять другие соли, например, такие как ацетат калия, аммония, кальция или магния. Фармацевтические композиции, содержащие ацетатный буфер, как правило, имеют рН от около 4,5 до около 5,5 или рН от около 4,8 до около 5,2, включая рН около 4,5, около 4,6, около 4,7, около 4,8, около 4,9, около 5,0, около 5,1, около 5,2, около 5,3, около 5,4 и около 5,5.

[164] Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, может дополнительно содержать поверхностно-активное вещество. В данном контексте термин «поверхностно-активное вещество» относится к веществу, которое функционирует для уменьшения поверхностного натяжения жидкости, в которой оно растворяется. Поверхностно-активные вещества могут быть включены в фармацевтические композиции для различных целей, включая, например, предотвращения или контроль агрегации, образование частиц и/или поверхностная адсорбция в жидких композициях или предотвращение или контроль этих явлений в процессе лиофилизации и/или восстановления в лиофилизированных составах. Поверхностно-активные вещества включают, например, амфипатические органические соединения, которые проявляют частичную растворимость как в органических растворителях, так и в водных растворах. Общие характеристики поверхностно-активных веществ включают их способность уменьшать поверхностное натяжение воды, уменьшать межфазное натяжение между маслом и водой, а также образовывать мицеллы. Поверхностно-активные вещества, которые могут быть включены в фармацевтические композиции, применяемые в способах по данному изобретению, включают как неионные, так и ионные поверхностно-активные вещества. Пригодные неионные поверхностно-активные вещества включают, но не ограничиваются ими, алкил поли (этиленоксид), алкилполиглюкозиды, такие как октилглюкозид и децилмалтозид, жирные спирты, такие как цетиловый спирт и олеиловый спирт, кокамид MEA, кокамид DEA и кокамид TEA. Конкретные примеры неионных поверхностно-активных веществ включают полисорбаты, включающие, например, полисорбат 20, полисорбат 28, полисорбат 40, полисорбат 60, полисорбат 65, полисорбат 80, полисорбат 81, полисорбат 85 и тому подобное; полоксамеры, включая, например, полоксамер 188, также известный как поликсалкол или поли (этиленоксид)-поли (пропиленоксид), полоксамер 407 или полиэтилен-полипропиленгликоль и тому подобное, и полиэтиленгликоль (ПЭГ). Пригодные ионные поверхностно-активные вещества включают, например, анионные, катионные и цвиттерионные поверхностно-активные вещества. Анионные поверхностно-активные вещества включают, но не ограничиваются ими, поверхностно-активные вещества на основе сульфоната и карбоксилата, такие как мыла, соли жирных кислот, додецилсульфат натрия (SDS), лаурилсульфат аммония и другие алкилсульфатные соли. Катионные поверхностно-активные вещества включают, но не ограничиваются ими, поверхностно-активные вещества на основе четвертичного аммония, такие как цетилтриметиламмонийбромид (CTAB), другие алкилтриметиламмониевые соли, цетилпиридинийхлорид, полиэтоксилированный таловый амин (POEA) и хлорид бензалкония. Цвиттерионные или амфотерные поверхностно-активные вещества включают, например, додецилбетаин, додецилдиметиламиноксид, кокамидопропилбетаин и кокоамфоглицинат. В некоторых вариантах реализации данного изобретения фармацевтические композиции для введения согласно описанным в данном документе способам, содержат неионогенное поверхностно-активное вещество. В одном варианте реализации данного изобретения неионное поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 20. В другом варианте реализации данного изобретения неионогенное поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80.

[165] В некоторых вариантах реализации данного изобретения фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, дополнительно содержит стабилизирующий агент. В данном контексте термин «стабилизирующий агент» относится к вспомогательному веществу, которое стабилизирует нативную конформацию полипептида или антитела и/или предотвращает или уменьшает физическую или химическую деградацию полипептида или антитела. Пригодные стабилизирующие агенты включают, но не ограничиваются ими, полиолы (например, сорбит, глицерин, маннит, ксилит, мальтит, лактит, эритрит и треитол), сахара (например, фруктоза, глюкоза, глицеральдегид, лактоза, арабиноза, манноза, ксилоза, рибоза, рамноза, галактоза, мальтоза, сахароза, трегалоза, сорбоза, сукралоза, мелезитоза и раффиноза) и аминокислоты (например, глицин, метионин, пролин, лизин, аргинин, гистидин или глутаминовая кислота). В некоторых вариантах реализации данного изобретения фармацевтическая композиция в качестве стабилизирующего агента содержит сахар. В этих и других вариантах реализации данного изобретения сахар представляет собой сахарозу.

[166] В некоторых вариантах реализации данного изобретения фармацевтическая композиция, пригодная для профилактического лечения мигренозной головной боли согласно описанным в данном документе способам, включает от около 35 до около 210 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, от около 8 мМ до около 20 мМ ацетата натрия, от около 0,002% до около 0,015% вес/объем (вес/об.) полисорбата и от около 7% до около 10% вес/об. сахарозы. В других вариантах реализации данного изобретения фармацевтическая композиция содержит от около 70 мг/мл до около 140 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, от около 10 мМ до около 15 мМ ацетата натрия, от около 0,008% до около 0,012% вес/об. полисорбата и от около 8% до около 9% вес/об. сахарозы. РН этих композиций находится в диапазоне от около 4,8 до около 5,5 (например, рН около 4,8, около 5,0, около 5,2 или около 5,4).

[167] В одном варианте реализации данного изобретения фармацевтическая композиция для введения согласно способам по данному изобретению, содержит около 70 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 10 мМ ацетата натрия, около 0,004% вес/об. полисорбата 20 и около 9% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В другом варианте реализации данного изобретения фармацевтическая композиция содержит около 70 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 10 мМ ацетата натрия, около 0,004% вес/об. полисорбата 80 и около 9% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В другом варианте реализации данного изобретения фармацевтическая композиция содержит около 140 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 10 мМ ацетата натрия, около 0,004% вес/об. полисорбата 20 и около 9% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В еще одном варианте реализации данного изобретения фармацевтическая композиция содержит около 140 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 10 мМ ацетата натрия, около 0,004% вес/об. полисорбата 80 и около 9% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В другом варианте реализации данного изобретения фармацевтическая композиция содержит около 70 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 10 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 20 и около 9% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В еще одном варианте реализации данного изобретения фармацевтическая композиция содержит около 70 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 10 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 80 и около 9% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В одном отдельном варианте реализации данного изобретения фармацевтическая композиция содержит около 140 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 10 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 20 и около 9% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В другом варианте реализации данного изобретения фармацевтическая композиция содержит около 140 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 10 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 80 и около 9% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2.

[168] В некоторых вариантах реализации данного изобретения фармацевтическая композиция для введения согласно способам по данному изобретению, содержит около 70 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 15 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 20 и около 8,2% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В одном отдельном варианте реализации данного изобретения фармацевтическая композиция содержит около 70 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 15 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 80 и около 8,2% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В другом отдельном варианте реализации данного изобретения фармацевтическая композиция содержит около 140 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 15 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 80 и около 8,2% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В другом варианте реализации данного изобретения фармацевтическая композиция содержит около 140 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 15 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 20 и около 8,2% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В еще одном варианте реализации данного изобретения фармацевтическая композиция содержит около 70 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 15 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 80 и около 8,5% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В еще одном варианте реализации данного изобретения фармацевтическая композиция содержит около 140 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 15 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 80 и около 8,5% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В некоторых вариантах реализации данного изобретения фармацевтическая композиция содержит около 70 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 15 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 20 и около 8,5% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В других вариантах реализации данного изобретения фармацевтическая композиция содержит около 140 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 15 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 20 и около 8,5% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2.

[169] В некоторых вариантах реализации данного изобретения фармацевтическая композиция для введения согласно способам по данному изобретению, содержит около 70 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 20 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 20 и около 8,2% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В одном варианте реализации данного изобретения фармацевтическая композиция содержит около 140 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 20 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 20 и около 8,2% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В другом варианте реализации данного изобретения фармацевтическая композиция содержит около 70 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 20 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 80 и около 8,2% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В другом варианте реализации данного изобретения фармацевтическая композиция содержит около 140 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 20 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 80 и около 8,2% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В другом варианте реализации данного изобретения фармацевтическая композиция содержит около 70 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 20 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 80 и около 8,5% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В другом варианте реализации данного изобретения фармацевтическая композиция содержит около 140 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 20 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 80 и около 8,5% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В еще одном варианте реализации данного изобретения фармацевтическая композиция содержит около 70 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 20 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 20 и около 8,5% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В другом варианте реализации данного изобретения фармацевтическая композиция содержит около 140 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 20 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 20 и около 8,5% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2.

[170] Любые антитела против рецептора CGRP или связывающие фрагменты, описанные в данном документе, включая специфические антитела против рецептора CGRP, описанные в Таблице 7, могут быть включены в любую из описанных выше фармацевтических композиций и введены пациенту согласно описанным в данном документе способам. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP представляет собой антитело 4E4, описанное в Таблице 7, или его связывающий фрагмент. В других конкретных вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP представляет собой антитело 9F5, описанное в Таблице 7, или его связывающий фрагмент.

[171] Любая из вышеописанных фармацевтических композиций может быть помещена в устройства для самостоятельного проведения инъекций. Таким образом, данное изобретение также включает устройства для инъекционого введения, пригодные для профилактики мигренозной головной боли у пациента, имеющего для этого показания. В некоторых вариантах реализации данного изобретения предлагается предварительно заполненный шприц, содержащий фармацевтическую композицию, содержащую антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент, ацетатный буфер, сахарозу и полисорбат. В одном варианте реализации данного изобретения предварительно заполненный шприц содержит фармацевтическую композицию, содержащую 70 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 15 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 80 и около 8,2% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В другом варианте реализации данного изобретения предварительно заполненный шприц содержит фармацевтическую композицию, содержащую 140 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 15 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 80 и около 8,2% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В другом варианте реализации данного изобретения предварительно заполненный шприц содержит фармацевтическую композицию, содержащую 70 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 15 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 80 и около 8,5% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В еще одном варианте реализации данного изобретения предварительно заполненный шприц содержит фармацевтическую композицию, содержащую 140 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 15 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 80 и около 8,5% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В некоторых вариантах реализации данного изобретения объем инъекции предварительно заполненного шприца составляет около 1 мл или меньше (например, 0,5 мл).

[172] В некоторых вариантах реализации данного изобретения предлагается автоинъектор, содержащий фармацевтическую композицию, содержащую антитело против рецептора CGRP или его связывающий фрагмент, ацетатный буфер, сахарозу и полисорбат. В одном варианте реализации данного изобретения автоинъектор содержит фармацевтическую композицию, содержащую 70 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 15 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 80 и около 8,2% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В другом варианте реализации данного изобретения автоинъектор содержит фармацевтическую композицию, содержащую 140 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 15 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 80 и около 8,2% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В другом варианте реализации данного изобретения автоинъектор содержит фармацевтическую композицию, содержащую 70 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 15 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 80 и около 8,5% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В еще одном варианте реализации данного изобретения автоинъектор содержит фармацевтическую композицию, содержащую 140 мг/мл антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента, около 15 мМ ацетата натрия, около 0,010% вес/об. полисорбата 80 и около 8,5% вес/об. сахарозы при рН 5,2 ± 0,2. В некоторых вариантах реализации данного изобретения объем инъекции автоинъектора составляет около 1 мл или меньше (например. 0,5 мл).

[173] Изобретение также включает введение пациенту антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента в комбинации с одним или более агентами, пригодными для неотложного или профилактического лечения мигренозной головной боли или другого вида головной боли, описанного в данном документе. В данном контексте термин «комбинированная терапия» включает введение двух соединений (например, антитела против рецептора CGRP или связывающего фрагмента и дополнительного агента) последовательным образом (т.е. каждое соединение вводят в другое время в любом порядке), а также введение двух соединений, по существу, одновременно. По существу одновременное введение включает совместное введение и может быть осуществлено путем введения одного состава, содержащего оба соединения (например, одну капсулу или другой состав, содержащий фиксированное соотношение обоих соединений или предварительно заполненный шприц с фиксированным соотношением каждого соединения), или совместное введение отдельных составов, содержащих каждое из соединений.

[174] В некоторых вариантах реализации данного изобретения способы по изобретению включают введение антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента со вторым агентом, который модулирует передачу сигналов рецептора CGRP. Например, антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент можно вводить в комбинации со вторым антагонистом рецептора CGRP с целью профилактики мигренозной головной боли мигрени у пациента, имеющего для этого показания. Другие антагонисты рецепторов CGRP включают низкомолекулярные ингибиторы рецептора CGRP, такие как описанные в патентной публикации № 20060142273 и патентах США № № 7842808; 7772244; 7754732; 7569578; 8685965; 8569291; 8377955; 8372859; 8143266; 7947677; и 7625901, все из которых включены в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте. Антагонисты рецептора CGRP также могут включать пептидные антагонисты рецептора, такие как описанные в патенте США № 8168592, который включен в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте. В некоторых вариантах реализации данного изобретения антитело против рецептора CGRP или связывающий фрагмент можно вводить в комбинации с агентом, который препятствует связыванию лиганда CGRP с рецептором CGRP с целью профилактики мигренозной головной боли у пациента, имеющего для этого показания. Агент, который препятствует связыванию лиганда CGRP с рецептором CGRP, может быть ловушкой или растворимым рецептором CGRP или другим белком, который связывается с лигандом CGRP, таким как антитело против CGRP. Антитела против CGRP известны в данной области техники и описаны, например, в WO 2007/054809; WO 2007/076336; WO 2011/156324; и WO 2012/162243, все из которых включены в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте.

[175] В некоторых вариантах реализации данного изобретения способы по изобретению включают введение антитела против рецептора CGRP или его связывающего фрагмента со вторым агентом против мигрени. Второй агент против мигрени может быть агентом, применяемым для неотложного лечения мигрени, таким как триптаны (например, алмотриптан, фроватриптан, ризатриптан, суматриптан, наратриптан, элетриптан и золмитриптан), эрготамины (например, дигидроэрготамин и эрготамин с кофеином), нестероидные противовоспалительные препараты (например, ацетилсалициловая кислота, ибупрофен, напроксен, индометацин и диклофенак) и опиоиды (например, кодеин, морфин, гидрокодон, фентанил, меперидин и оксикодон). В некоторых вариантах реализации данного изобретения второй агент против мигрени представляет собой агент, применяемый для профилактики мигрени, такой как противоэпилептический агент (например, топирамат), бета-блокатор (например, пропранолол) или антидепрессант (например, амитриптилин). В других вариантах реализации данного изобретения второй агент против мигрени представляет собой агент, который модулирует активность рецептора I типа пептида, активирующего аденилатциклазу гипофиза (рецептор PAC1). Агент, модулирующий активность рецептора PAC1, включает антитела или другие связывающие белки, связывающиеся с рецептором PAC1, такие как те, что описаны в заявке WO 2014/144632, которая включена в данное описание посредством ссылки во всей своей полноте.

[176] Данное изобретение также включает наборы для профилактики мигренозной головной боли у пациента, имеющего для этого показания. В одном варианте реализации данного изобретения набор содержит фармацевтическую композицию антитела против рецептора CGRP или связывающего фрагмента, описанного в данном документе, и упаковочный материал, который содержит инструкции относительно применения фармацевтических композиций. Фармацевтическая композиция набора может присутствовать в контейнере, таком как флакон или шприц. Фармацевтическая композиция может быть представлена в форме раствора, суспензии, геля, эмульсии, твердого вещества, кристалла или в виде обезвоженного или лиофилизированного порошка. В вариантах реализации данного изобретения, в которых фармацевтическая композиция представлена в форме порошка, набор может также содержать разбавители (например, воду, физиологический раствор, фосфатно-буферный солевой раствор), необходимый для восстановления фармацевтической композиции, а также инструкции для приготовления композиции для введения. В некоторых вариантах реализации данного изобретения наборы содержат инъекционное устройство для самостоятельного введения (например, предварительно заполненный шприц или автоинъектор), предварительно заполненный фармацевтической композицией, как описано в данном документе. Любой из предварительно заполненных шприцев и автоинъекторов, описанных выше, может быть включен в наборы.

[177] Следующие примеры, включая проведенные эксперименты и полученные результаты, приведены только для иллюстративных целей и не должны рассматриваться как ограничивающие объем прилагаемой формулы изобретения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. Фармакокинетическое/фармакодинамическое моделирование моноклонального антитела AMG 334 для определения концентрационной зависимости с индуцированным капсаицином увеличением кровотока в дерме у здоровых субъектов и пациентов с мигренью

[178] AMG 334 (также упоминаемый в данном документе как антитело 4E4) представляет собой полностью человеческое моноклональное антитело IgG2, которое связывается с рецептором CGRP человека с высокой силой in vitro. Ингибирование индуцированного капсаицином (CAP) увеличения кровотока в дерме (КД) широко применялось в качестве трансляционной модели для характеристики фармакологического эффекта антагонистов рецептора CGRP. Эту валидированную модель применяли для характеристики фармакологического эффекта AMG 334 и для количественного определения ингибирующего эффекта AMG 334 на CAP-индуцированное увеличение КД у здоровых субъектов (ЗС) и пациентов с мигренью (ПМ) после однократного и множественного введения доз AMG 334.

[179] Набор данных для анализа включал 52 субъекта (40 ЗС, 12 ПМ), которые получали одну подкожную (п/к) дозу AMG 334 (1, 7, 21, 70, 140 или 210 мг) или плацебо, и 40 субъектов (24 ЗС, 16 ПМ), которые получали 3 последовательных п/к дозы AMG 334 (21, 70 или 140 мг) или плацебо каждые 4 недели. См. Таблицу 9 ниже. Повторные введения CAP и измерения КД проводили одним и тем же субъектам с помощью лазерной доплеровской визуализации на нескольких визитах для изучения ингибирующего эффекта AMG 334 на КД до и после введения CAP. Концентрации AMG 334 в сыворотке определяли в соответствующие моменты времени для измерений КД с дополнительными образцами, собранными в другие моменты времени, для фармакокинетической характеристики. Для оценки соотношения «концентрация AMG 334 - КД» применяли принцип популяционного фармакокинетически-фармакодинамического (ФК-ФД) моделирования. В модели оценивали влияние веса тела (44,6-104 кг), пола (мужчины и женщины), возраста (18-53 года) и наличия заболевания (ПМ против ЗС) на параметры ФК и ФД.

[180] ФК AMG 334 лучше всего характеризовалась с помощью модели распределения лекарственного средства, опосредованного рецептором, которая объясняла зависимость клиренса и распределения AMG 334 от концентрации/дозы. Полная п/к абсорбция происходила примерно через 10 дней после введения дозы. Для типичного субъекта (70 кг), который получил п/к дозу 70 мг, расчетный период полужизни препараты составлял 21 день, что типично для моноклонального антитела. Период полужизни AMG 334 сокращался (т. е. составлял < 21 дня) с быстрой элиминацией антитела, когда его концентрация составляла около < 700 нг/мл, предположительно, потому что большая часть AMG 334 связывалась целевым рецептором, оставляя циркулирующего в меньшем количестве и несвязанного AMG 334 доступным для элиминации. AMG 334 существенно ингибировал пост-CAP КД, но не оказывал существенного влияния на пре-CAP КД. С помощью модели ФК-ФД оценивали среднее исходное, CAP-индуцированное увеличение КД 390 AU и максимальное ингибирование КД на 90%. Концентрации AMG 334, необходимые для 50% (EC50) и 99% (EC99) максимального ингибирования, составляли 218 нг/мл и 1140 нг/мл соответственно. См. Фигуру 1. Следовательно, все дозы > 7 мг обуславливали концентрации в плазме выше EC99 или максимальное ингибирование КД; при этом длительность максимального ингибирования увеличивалась с повышением дозы и поддерживалась после повторного введения дозы. См. Фигуру 2. Площадь под фармакокинетической кривой AMG 334, но не КД, уменьшалась с увеличением веса тела. Каких-либо различий в ФК и ФД между ЗС и ПМ не отмечали после коррекции на вес тела.

[181] AMG 334 обуславливает мощное и воспроизводимое ингибирование CAP-индуцированного КД, что указывает на полную периферическую блокаду рецептора CGRP у ЗС и ПМ. Вес тела был единственным ковариатором, влияющим на ФК, но не влияющим на ФД. Длительный период полужизни AMG 334 и стойкое соотношение «концентрация-КД» указывают на длительное ингибирование рецепторов CGRP.

Таблица 9. Характеристики субъектов, включенных в популяционную модель ФК/ФД

	Разовая доза N=52	Повторная доза N=40
	Здоровые N=40	Мигрень N=12	Здоровые N=24	Мигрень N=16
Схема введения	плацебо, 1, 7, 21, 70, 140 или 210 мг п/к	плацебо или 140 мг п/к	плацебо, 21, 70 или 140 мг п/к 1 р/4 нед × 3 дозы	плацебо, 21 или 140 мг п/к 1 р/4 нед × 3 дозы
Вес (кг)*	80,3 (9,28)	64,5 (11)	75,5 (11,5)	69,2 (14,1)
Возраст (лет)*	26,8 (6,48)	26,2 (9,56)	30,1 (10,3)	32,9 (11,3)
Муж/Жен (N)	40/0	3/9	23/1	4/12

*Среднее значение (СО); п/к = подкожно; 1р/4 нед = 1 раз в 4 недели

Пример 2. Рандомизированное, двойное слепое, плацебо-контролируемое исследование фазы 1 с введением одной и множества доз AMG 334 у здоровых субъектов и пациентов с мигренью

[182] Мигрень сопровождается головными болями, ограничивающими трудоспособность, в патогенезе которых, как считается, играет роль пептид, кодируемый геном кальцитонина (CGRP). AMG 334 (антитело 4E4) является полностью человеческим моноклональным антителом против рецептора CGRP. В этом рандомизированном, плацебо-контролируемом исследовании фазы 1 с применением одной дозы (ОД) и множества доз (МД) оценивали фармакокинетику (ФK), фармакодинамику (ФД) и безопасность AMG 334 у здоровых субъектов и пациентов с мигренью.

[183] В исследовании ОД субъекты получали одиночные, возрастающие дозы AMG 334 (n=42) от 1 до 210 мг п/к, 140 мг в/в или соответствующее плацебо (n=18). В исследовании МД субъекты получали множественные дозы AMG 334 (n=35) от 21 до 280 мг п/к или плацебо (n=12) в дни 1, 29 и 57. ФК и безопасность оценивали в обоих исследованиях; измерения ФK включали максимальную концентрацию (C_max), площадь под кривой «концентрация-время» от нулевого момента времени до последней измеряемой концентрации (AUC_last), и времени до максимальной концентрации (t_max). Ингибирование индуцированного капсаицином кровотока в дерме (КД) посредством AMG 334 использовали для измерения антагонизма рецептора CGRP в обоих исследованиях; значение E_max представляло максимальное процентное ингибирование. В исследовании ОД для анализа соотношения между концентрацией AMG 334 в сыворотке и ингибированием индуцированного капсаицином увеличения КД применяли сигмоидальную E_max модель ФК/ФД. Непрерывный 24-часовой амбулаторный мониторинг артериального давления (АМАД) проводили в исследовании МД, приблизительно через 7 дней после введения каждой дозы.

[184] В исследовании ОД 42 пациента получали AMG 334 (36 здоровых субъектов и 6 пациентов с мигренью); 18 получали плацебо (12 здоровых субъектов и 6 пациентов с мигренью). Обнаруживаемые уровни AMG 334 в сыворотке наблюдались от 30 до 160 дней после введения, при дозах 70 мг и выше, что приводило к обнаруживаемым уровням в течение 100 дней или более после введения. См. Фигуру 3A. После однократного п/к введения антитело AMG 334 демонстрировало нелинейную ФК; площадь под фармакокинетической кривой AMG 334 увеличивалась более чем пропорционально дозе от 1 до 70 мг и приблизительно пропорционально дозе от 70 до 210 мг. См. Таблицу 10 ниже. Среднее значение AUC_last увеличивалось в 3,8 раза от 171 до 652 мкг • сут/мл, а среднее значение C_max увеличивалось в 2,4 раза от 6,25 до 15,2 мкг/мл, после 3-кратного увеличения дозы от 70 до 210 мг (Таблица 10). Медианное значение t_max варьировалось от 4 до 11 дней во всем диапазоне доз (Таблица 10). Относительная площадь под кривой «концентрация-время» (AUC) при п/к введении по сравнению с в/в введением составляла около 54% для дозы AMG 334, составляющей 140 мг. Каких-либо явных различий в ФК между здоровыми субъектами и пациентами с мигренью не отмечали.

Таблица 10. Характеристики фармакокинетических параметров после однократного введения AMG 334 по когортах

Лечение	C_max (μг/мл)	T_max (сут)	AUC_last (сут X μг/мл)	AUC_inf(сут X μг/мл)
Здоровые субъекты
1 мг п/к; n=3	0,008 (0,004)	4,0 (2,0-7,0)	0,085 (0,017)	НС
7 мг п/к; n=3	0,302 (0,145)	7,0 (4,0-7,0)	4,01 (2,07)	4,13 (2,04)
21 мг п/к; n=6	1,17 (0,646)	7,0 (3,0-10)	23,5 (15,5)	24,5 (17,0)
70 мг п/к; n=4-6	6,25 (2,03)	6,0 (3,0-11)	171 (60,9)	174 (78,6)
140 мг п/к; n=6	9,18 (1,97)	5,5 (4,0-21)	332 (57,9)	333 (57,9)
210 мг п/к; n=6	15,2 (4,78)	8,5 (4,0-11)	652 (221)	653 (222)
140 мг в/в; n=6	47,8 (4,09)	0,069 (0,069-0,38)	614 (112)	615 (112)
Пациенты с мигренью
140 мг п/к; n=6	9,93 (3,42)	11 (7,0-14)	367 (102)	367 (103)

Данные выражены как среднее значение (СО или диапазон). AUC_inf - площадь под кривой «концентрация-время» от нуля до бесконечности; AUC_last - площадь под кривой «концентрация-время» от нулевого момента времени до времени последней измеряемой концентрации; C_max- максимальная концентрация; в/в - внутривенно; НС - не сообщается; п/к - подкожно; СО - стандартное отклонение; t_max - время достижения C_max.

[185] День 4 был первым моментов времени, когда оценивали ингибирование индуцированной капсаицином КД в исследовании ОД. На день 4 процентное ингибирование индуцированного капсаицином увеличения КД по сравнению с плацебо для п/к доз ≥ 21 мг варьировалось от 75% до 95% диапазона доз у здоровых людей (91% у субъектов с мигренью). См. Фигуру 4A. В результате применения сигмоидальной E_max модели ФК/ФД, анализирующей взаимосвязь между концентрацией AMG 334 в сыворотке и ингибированием индуцированного капсаицином увеличения КД, получено значение E_max, составляющее 94,2% (со стандартной ошибкой 2,85%), и показатель концентрации AMG 334 в сыворотке, ассоциированной с половинным максимальным эффектом (EC₅₀), составляющий 286 нг/мл (со стандартной ошибкой 37,2).

[186] В исследовании МД 36 пациентов (24 здоровых субъектов, 12 пациентов с мигренью) получили в общей сложности 3 дозы AMG 334 (от 21 до 280 мг); 12 пациентов (8 здоровых, 4 пациента с мигренью) получали плацебо. После 3 однократных п/к доз, накопление AMG 334 варьировалось от 1,42 до 1,69 раза после введения дозы у здоровых субъектов и 1,50 до 1,78 раза после введения дозы у пациентов с мигренью. См. Фигуру 3B. Значения T_max варьировались от ~ 3 до 13 дней после первой п/к дозы и от 6 до 14 дней после третьей дозы для всех диапазонов доз (Фигура 3B). Как и результаты исследования ОД, в параметрах ФК между здоровыми субъектами и пациентами с мигренью очевидных отличий не наблюдали.

[187] День 8 был первым моментов времени, когда оценивали ингибирование индуцированной капсаицином КД в исследовании МД. Существенное ингибирование по сравнению с плацебо на день 8 наблюдали во всех когортах здоровых пациентов и пациентов с мигренью, получавших AMG 334, без существенной разницы в эффекте препарата между популяциями пациентов. См. Фигуру 4B. В группе, получавшей AMG 334, независимо от популяции пациентов, не наблюдали явной зависимости от дозы. Результаты на дни 57 и 85 (здоровые субъекты) или дни 57, 86 и 169 (пациенты с мигренью) соответствовали результатам дня 8. Более поздние моменты времени (113 дней или более) не продемонстрировали существенного ингибирования в группе, получавшей AMG 334, по сравнению с плацебо. Ингибирование КД в исследовании МД соответствовало результатам ОД КД, при этом максимальное ингибирование поддерживалось в течение повторных интервалов введения дозы.

[188] 24-часовой AМАД не выявил изменений в суточном ритме АД, а также увеличения АД с повышением дозы AMG 334. Какой-либо статистически значимой разницы в средних параметрах по методу наименьших квадратов не отмечали при мониторинге 24-часового и ночного АД во всех группах, получавших AMG 334, по сравнению с плацебо у здоровых субъектов. Также не было статистически значимой разницы в средних параметрах по методу наименьших квадратов при мониторинге 24-часового диастолического и ночного диастолического АД во всех группах, получавших AMG 334, по сравнению с плацебо у пациентов с мигренью. Нежелательные явление, возникшие после начала лечения, были сходными по типу и частоте между группами лечения и между здоровыми субъектами и пациентами с мигренью. Между дозами AMG 334 и общей частотой нежелательных явлений, возникших после начала лечения, четкой взаимосвязи не было. Также не наблюдали клинически значимых различий в показателях жизненно важных функций или лабораторных данных.

[189] ФК-профиль AMG 334 согласуется с профилем других антител IgG2 человека. Площадь под ФК-кривой увеличивалась более чем пропорционально дозе от 1 до 70 мг и приблизительно пропорционально дозе от 70 до 210 мг после однократного введения без явных различий между здоровыми субъектами и пациентами с мигренью. После введения трех однократных п/к доз наблюдались аналогичные тенденции в ФК по всему диапазону доз в обеих популяциях. Введение AMG 334 приводило к значительному ингибированию индуцированного капсаицином увеличения КД по сравнению с плацебо как у здоровых субъектов, так и у пациентов с мигренью, что указывает на антагонизм рецептора CGRP. Ингибирование индуцированного капсаицином увеличения КД было сходным между здоровыми субъектами и пациентами с мигренью. Одиночные и множественные дозы AMG 334 хорошо переносились, и между концентрацией AMG 334 в сыворотке и артериальным давлением какой-либо связи не отмечали.

Пример 3. Результаты рандомизированного, двойного слепого, плацебо-контролируемого исследования фазы 2 для оценки эффективности и безопасности AMG 334 с целью предотвращения эпизодической мигрени

[190] В этом двойном слепом плацебо-контролируемом исследовании фазы 2 оценивали эффекты AMG 334 (т. е. антитела 4E4) для предотвращения приступов эпизодической мигрени.

[191] Пациенты с эпизодической мигренью (≥4 и ≤ 14 дней с мигренью в месяц) были рандомизированы для п/к введения 1 раз в месяц (1 р/мес) плацебо или AMG 334 (7 мг, 21 мг или 70 мг) в соотношении 3: 2: 2: 2, соответственно. Основным критерием оценки было изменение от исходного уровня количества дней с мигренью в месяц на неделе 12. Вторичные критерии оценки включали долю субъектов с уменьшением на ≥ 50% количества дней с мигренью в месяц (т. е. 50% уровень ответа), снижение количества приступов мигрени в месяц и профиль безопасности/переносимости. Ключевыми поисковыми критериями были сокращение количества дней с головной болью в месяц и сокращение количества дней в месяц с применением препаратов против острой мигрени (например, триптанов, эрготаминов).

[192] 483 пациента были рандомизированы на получение плацебо (n=160), AMG 334 7 мг (n=108), 21 мг (n=108) или 70 мг (n=107). Субъектами были в основном женщины (80,5%); средний (СО) возраст составил 41,1 (10,8) лет. Статистически значимое снижение среднего количества дней с мигренью в месяц наблюдали при применении AMG 334 70 мг (-3,40) против плацебо (-2,28). См. Фигуру 5. Ретроспективный анализ продемонстрировал значительный эффект от лечения уже на неделе 2. Сокращение количества дней с мигренью в месяц при более низких дозах AMG 334 (7 мг: -2,18 и 21 мг: -2,39) не было статистически значимым по сравнению с группой плацебо (-2,28). См. Фигуру 5. На неделе 12 50%-ный уровень ответа на лечение составил 46,5% для 70 мг против 29,9% для плацебо (Р=0,011). Также отмечали статистически значимое сокращение количества дней с головной болью (70 мг: -3,54 против плацебо: -2,39; P=0,022) и сокращение количества дней в месяц с применением препаратов против острой мигрени (70 мг: -1,64 против плацебо: -0,69; P=0,004; Фигура 6). Изменение количества приступов мигрени в месяц не было статистически значимым. Анализ по подгруппам показал, что эффективность AMG 334 была одинаковой независимо от пола (данные не приведены), частоты приступов мигрени на исходном уровне (Фигура 7A) или предшествующего применения профилактических препаратов (Фигура 7B). Совокупные данных при применении дозы 70 мг AMG 334 и плацебо относительно различных критериев оценки приведены в Таблице 11. О каких-либо важных данных относительно безопасности не сообщалось. Профиль безопасности/переносимости у AMG 334 и плацебо был аналогичным. Также не наблюдали явного отличия в показателях частоты нежелательных явлений в группах лечения AMG 334 по сравнению с плацебо. Не наблюдали какой-либо зависимости частоты возникновения нежелательных явлений от дозы AMG 334. Шесть (1,9%) субъектов, которые получали AMG 334, против 2 (1,3%), которые получали плацебо, прекратили применение исследуемого препарата из-за нежелательных эффектов во время фазы двойного слепого лечения.

Таблица 11. Эффективность AMG 334 при эпизодической мигрени^a

	Плацебо	AMG 334 70 мг	Отличие (95% ДИ)	р-значение^b
Основной критерий оценки
Дни с мигренью в месяц^с	-2,28 (0,31)	-3,40 (0,37)	-1,12 (-2,06, -0,17)	0,021
Вторичные критерии оценки:
50%-ный уровень ответа	30%	47%	17%	0,011
Приступы мигрени в месяц^с	-1,44 (0,17)	-1,84 (0,20)	-0,40 (-0,92, 0,12)	0,130
Основные поисковые критерии оценки
Дни с мигренью в месяц^c	-2,39 (0,32)	-3,54 (0,39)	-1,16 (-2,14, -0,17)	0,022
Дни приема препаратов против мигрени в месяц^с	-0,69 (0,21)	-1,64 (0,26)	-0,96 (-1,61, -0,30)	0,004
Тест-6 для оценки влияния головной боли (HIT-6)	-2,95 (0,5)	-4,1 (0,59)	-1,16 (-2,68, 0,35)	0,130
Общий балл оценки потери трудоспособности при мигрени (MIDAS)	-43,50 (1,8)	-8,80 (2,2)	-5,30 (-10,9, 0,3)	0,064
Балл выхода на работу MIDAS	-1,20 (1,1)	-4,50 (1,3)	-3,30 (-6,5, 0,0)	0,047

^aДанные приведены на неделю 12

^bОтсутствие корректировок на множественность

^cДанные изменяются от исходного среднего по методу наименьших квадратов (стандартная ошибка)

[193] После 12-недельной двойной слепой (ДС) фазы лечения в исследовании пациенты могли получать AMG 334 70 мг один раз в месяц (1 р/мес) в течение фазы открытого продленного лечения (ОПЛ) на срок до 256 недель. Во время фазы ОПЛ пациенты продолжали ежедневно заполнять дневник до недели 64. Для этого промежуточного анализа пациенты получали AMG 334 70 мг 1 р/мес до недели 76. Безопасность и переносимость оценивали ежемесячно. Критерии оценки эффективности анализировали в двух группах до недели 64: Группа 1: пациенты, которые перешли на AMG 334 70 мг 1 р/мес после приема плацебо, AMG 334 7 мг или AMG 334 21 мг в фазе ДС (т.е., ДС неэффективные дозы); Группа 2: пациенты, которые продолжали получать AMG 334 70 мг 1 р/мес во время фазы ОПЛ (т.е., ДС эффективная доза). Критериями эффективности были: изменение от исходного уровня количества дней с мигренью в месяц, 50%-ный уровень ответа, 75%-ный уровень ответа, 100%-ный уровень ответа, количество приступов мигрени в месяц, количество дней в месяц с применением препаратов против мигрени (например, триптанов, эрготаминов) и количество дней с головной болью в месяц.

[194] В общей сложности 383 из 395 (97%) пациентов, которые, соответствовали критериям вхождения в фазу ОПЛ, получали открытое лечение AMG 334 70 мг 1 р/мес. Средняя продолжительность воздействия AMG 334 70 мг в фазе ОПЛ составила 239 дней (34,1 недели), при этом показатель общего воздействия составил 263,7 пациенто-лет. Фигура 8 демонстрирует изменение от исходного уровня количества дней с мигренью в месяц для фазы ДС и первые десять месяцев фазы ОПЛ. Результаты показывают, что препарат AMG 334 в дозе 70 мг, вводимый ежемесячно, уменьшал количество дней с мигренью в месяц у пациентов, которые ранее получали плацебо, AMG 334 в дозе 7 мг или AMG 334 в дозе 21 мг. В частности, по сравнению с неделей 12 фазы ДС (основной критерий оценки), дальнейшее снижение количества дней с мигренью в месяц по сравнению с исходным уровнем наблюдалось в течение фазы ОПЛ (от недели 16 до недели 64) независимо от полученного лечения в фазе ДС (группа 1: -2,4 дня на неделе 12 против -4,0 дней на неделе 16; Группа 2: -3,5 дня на неделе 12 против -3,9 дня на неделе 16). Эффект лечения поддерживался во время фазы ОПЛ (недели 16-64) с изменением количества дней с мигренью в месяц от исходного уровня от -4,0 до -6,2 дней в группе 1 и от -3,7 до -4,9 дней в группе 2. Аналогичные результаты наблюдали относительно 50%-ого уровня ответа, 75%-ого уровня ответа, 100%-ого уровня ответа, количества приступов мигрени в месяц, количества дней в месяц с применением препаратов против мигрени. На неделе 52 у 62% пациентов регистрировали сокращение количества дней с мигренью на 50% или более, у 38% пациентов регистрировали сокращение количества дней с мигренью на 75% или более, и у 19% пациентов регистрировали сокращение количества дней с мигренью на 100%. По сравнению с неделей 12 фазы ДС, дальнейшее сокращение по сравнению с исходным уровнем количества дней с головной болью в месяц (Фигура 9A) и количества дней применения препаратов против мигрени (Фигура 9B) регистрировали в течение фазы ОПЛ.

[195] Нежелательные явления (НЯ) отмечали у 243 из 383 (63%) пациентов. Наиболее распространенными НЯ (≥3%) были назофарингит, инфекция верхних дыхательных путей, артралгия, грипп, боли в спине и синусит. Большинство НЯ согласно CTCAE классифицировались как НЯ 1 или 2 степени. Серьезные НЯ зарегистрированы у 13 пациентов (3%), из которых 1 (<1%) НЯ было расценено как связанное с лечением (по мнению исследователя). Одиннадцать пациентов (2%) прекратили участие в фазе ОПЛ из-за НЯ. Клинически значимых отклонений в параметрах жизненно важных функций или лабораторных исследований (включая функциональные тесты печени) обнаружено не было.

[196] Результаты исследования фазы 2 продемонстрировали, что AMG 334 при введении при ежемесячной дозе 70 мг эффективен для предотвращении эпизодической мигрени, при этом AMG 334 характеризуется профилем безопасности/переносимости, который является аналогичный плацебо. У пациентов, которые продолжали участие в фазе ОПЛ, получая 70 мг AMG 334 1 р/мес, отмечалось клинически значимое и устойчивое сокращение количества дней с мигренью. Профили безопасности и переносимости соответствовали профилям, которые наблюдались в фазе ДС, при этом о каких-либо новых сигналах относительно безопасности не сообщалось.

Пример 4. Рандомизированное, двойное слепое, плацебо-контролируемое исследование фазы 2 для оценки эффективности и безопасности AMG 334 с целью предотвращения хронической мигрени

[197] В этом исследовании фазы 2 оценивали эффекты AMG 334 (т. е. 4E4) по сравнению с плацебо для профилактики хронической мигрени.

[198] Пациенты с хронической мигренью (≥15 дней с головной болью в месяц и ≥ 8 дней с мигренью в месяц) были рандомизированы 3: 2: 2 для приема плацебо, 70 мг AMG 334 подкожно (п/к) 1 раз в месяц (1 р/мес) или 140 мг AMG 334 п/к 1 р/мес на протяжении 12-недельной фазы двойного слепого лечения. Основным критерием оценки было изменение от исходного уровня количества дней с мигренью в месяц на неделе 12. Вторичные критерии оценки включали долю субъектов с уменьшением на ≥ 50% количества дней с мигренью в месяц (т. е. 50% уровень ответа), снижение количества приступов мигрени в месяц и профиль безопасности/переносимости. Ключевые поисковые критерии включали сокращение количества дней с головной болью в месяц, изменение от исходного уровня количества совокупных часов с головной болью в месяц, снижение от исходного уровня средней тяжести мигренозной боли и сокращение количества дней в месяц с применением препаратов против острой мигрени (например, триптанов, эрготаминов).

[199] После подписания информированного согласия субъекты вошли в фазу скрининга (до 3 недель), в ходе которой оценивали возможность участия субъектов в исследовании. Подходящие субъекты включали взрослых лиц в возрасте от 18 до 65 лет с известными по меньшей мере 5 приступами мигрени с аурой или без нее и с известными по меньшей мере 15 днями с головной боли в месяц, из которых по меньшей мере 8 дней в каждом из трех месяцев до скрининга пациента беспокоила мигренозная головная боль. Субъекты с сопутствующим чрезмерным применением (ЧП) триптанов, производных алкалоидов спорыньи, анальгетиков и употреблением комбинированных препаратов могли брать участие в исследовании.

[200] Все подходящие субъекты после фазы скрининга входили в 4-недельную исходную фазу. Субъекты, которые соответствовали критериям включения во время исходной фазы, переходили в фазу лечения. Критерии включения в исходную фазу включали:

- ≥ 15 дней с головной болью, из которых ≥ 8 дней с головной болью, соответствующей критериям мигренозной головной боли, в течение исходной фазы;

- ≥ 4 различных эпизода головной боли, длительность которых составляет ≥ 4 часа ИЛИ если они короче, то ассоциированы с применением триптана или производных алкалоидов спорыньи в тот же календарный день в течение исходной фазы; а также

- Продемонстрировано не менее 80% соответствия eDiary (например, необходимо заполнять пункты eDiary по меньшей мере 23 из 28 дней в течение исходной фазы).

[201] На визите в день 1 подходящие субъекты с исходной фазы были рандомизированы в 12-недельную фазу двойного слепого лечения и начали получать двойной слепой исследуемый продукт п/к 1 р/мес. Подходящие и включенные в исследование субъекты были рандомизированы в соотношении 3: 2: 2 на получение плацебо, AMG 334 70 мг или AMG 334 140 мг: около 210 субъектов - в группу плацебо, около 140 субъектов - в группу AMG 334 70 мг и около 140 субъектов - в группу AMG 334 140 мг. Рандомизация была стратифицирована по регионам (Северная Америка против других регионов) и чрезмерному применению препаратами на исходном уровне (ЧП против не-ЧП). Двойное слепое лечение с применением AMG 334 70 мг, AMG 334 140 мг или плацебо вводили в течение 12-недельной фазы двойного слепого лечения (т.е. в день 1 и на неделях 4 и 8). В ходе фазы двойного слепого лечения субъекты получали 2 п/к инъекции каждого исследуемого продукта (т.е. в день 1, на неделе 4 и на неделе 8). Последующий визит с целью оценки безопасности осуществляют через 12 недель после завершения исследования или досрочного прекращения участия в исследовании (т.е. через 16 недель после введения последней дозы исследуемого продукта).

[202] Цель заключительного анализа - оценить эффективность и безопасность AMG 334 70 мг и AMG 334 140 мг у пациентов с хронической мигренью. Заключительный анализ проводится в конце исследования. Данные эффективности и безопасности за весь период исследования анализируются с учетом данных группы, получающих двойное слепое лечение. Предположительно результаты исследования демонстрируют, что у пациентов с хронической мигренью при применении AMG 334 дозозависимо сокращается от исходного уровня количество дней с мигренью в месяц по сравнению с плацебо, а профиль нежелательных явлений, вызванных AMG 334, аналогичен плацебо.

[203] После 12-недельной фазы двойного слепого лечения в исследовании начиналась открытая фаза. Все субъекты, получившие 12-недельный курс двойного слепого лечения, являются подходящими для включения в открытую фазу, в ходе которой субъекты получают AMG 334 п/к 1 р/мес в течение 13 месяцев, с последующим 12-недельным визитом наблюдения с целью оценки безопасности. Субъекты ежедневно заполняют электронный дневник (eDiary) между визитами в день 1 и месяц 3, между визитами в месяц 5 и 6, между визитами в месяц 9 и 10, а также между визитами в месяц 12 и 13, с целью сообщения информации о мигренозных и немигренозных головных болях и применении препаратов по поводу острой боли.

[204] Цели фазы открытого лечения - охарактеризовать профиль безопасности, переносимости и эффективности долгосрочного применения AMG 334. Ключевые критерии оценки включают:

- изменение от исходного уровня количества дней с мигренью в месяц у субъектов с хронической мигренью;

- доля субъектов с уменьшением количества дней с мигренью в месяц по меньшей мере на ≥ 50% от исходного уровня;

- сокращение от исходного уровня количества приступов мигрени в месяц у субъектов с хронической мигренью;

- изменение физического состояния в динамике, измеряемое с помощью дневника влияния мигрени на физическую активность (MPFID); а также

- изменение влияния на повседневную активность в динамике, измеряемое с помощью MPFID.

[205] Предположительно, результаты открытого исследования подтверждают, что долгосрочное воздействие AMG 334 является безопасным и хорошо переносится у пациентов с хронической мигренью, а однократная п/к ежемесячная доза 70 мг эффективно уменьшает количество дней с мигренью у пациентов с хронической мигренью.

Пример 5. Рандомизированное, двойное слепое, плацебо-контролируемое исследование фазы 3 для оценки эффективности и безопасности AMG 334 для предотвращения мигрени

[206] Основная цель этого исследования - оценить эффект AMG 334 (т. е. 4E4) на изменение среднего количества дней с мигренью в месяц от исходного уровня по сравнению с плацебо у субъектов с эпизодической мигренью. Вторичные цели исследования включают долю субъектов с сокращением среднего количества дней с мигренью в месяц от исходного уровня по меньшей мере на 50%, изменение среднего количества дней с применением препаратов против острой мигрени от исходного уровня, изменение нарушения общего физического состояния, измеряемое с помощью дневника влияния мигрени на физическую активность (MPFID) от исходного уровня и изменение влияния на повседневную активность от исходного уровня, измеряемое с помощью MPFID.

[207] В данном исследовании оценивали две дозы AMG 334, составляющие 70 и 140 мг. Субъекты получали либо AMG 334 140 мг, AMG 334 70 мг, либо плацебо один раз в месяц (1 р/мес) подкожно (п/к) в течение 24 недель в фазе двойного слепого лечения, за которым следовала 28-недельная фаза активного лечения, в ходе которой субъекты получали AMG 334 140 мг или AMG 70 мг 1 р/мес п/к около 852 субъектов с эпизодической мигренью (от 4 до < 15 дней с мигренью в месяц) были рандомизированы в соотношении 1:1:1 для получения плацебо, AMG 334 70 мг или AMG 334 140 мг. Рандомизация стратифицировалась по региону (Северная Америка против другого региона) и предшествующему применению профилактических лекарственных средств против мигрени (предшествующее применение лекарственных средств с целью профилактики мигрени против отсутствия предшествующего применения лекарственных средств с целью профилактики мигрени).

[208] После подписания информированного согласия субъекты входили в фазу скрининга. Фаза скрининга состояла из фазы первичного скрининга (до 3 недель), за которой следовала 4-недельная исходная фаза. Во время фазы скрининга и/или исходной фазы субъектов оценивали на предмет соответствия критериям для участия в исследовании. Подходящие субъекты включали взрослых лиц от 18 до 65 лет с анамнезом мигрени с аурой или без нее в течение ≥ 12 месяцев, и которые отмечали от ≥ 4 до <15 дней с мигренью в месяц при < 15 дней с головной болью в месяц в среднем за 3 месяца до скрининга.

[209] На визите в день 1 подходящие субъекты включались (т.е. рандомизировались) в 24-недельную фазу двойного слепого лечения и начинали получать двойное слепое лечения исследуемым препаратом 1 р/мес п/к. На визите на неделе 24 субъекты в каждой группе лечения были повторно рандомизированы 1: 1 для получения AMG 334 70 мг или AMG 334 140 мг в течение 28-недельной фазы активного лечения и начали получать исследуемый препарат 1 р/мес п/к, который оставался заслепленным только относительно уровня дозы. Повторная рандомизация стратифицировалась по группе лечения, определенной во время двойной слепой фазы. Двойное слепое лечение с применением AMG 334 70 мг, AMG 334 140 мг или плацебо вводили в течение 24-недельной фазы двойного слепого лечения (то есть в день 1 и на неделях 4, 8, 12, 16 и 20), а активное лечение AMG 334 70 мг или AMG 334 140 мг вводили в течение 28-недельной фазы активной лечения (т.е. на неделях 24, 28, 32, 36, 40, 44 и 48). В течение фазы двойного слепого лечения и фазы активного лечения вводили 2 п/к инъекции каждого исследуемого препарата.

[210] Последующий визит с целью оценки безопасности осуществляли через 12 недель после последней дозы исследуемого препарата. Субъекты ежедневно заполняют электронный дневник (eDiary) в течение всей исходной фазы, фазы двойного слепого лечения и фазы активного лечения, с целью сообщения информации о мигренозных и немигренозных головных болях и применении препаратов по поводу острой головной боли. Для субъектов запланированы ежемесячные визиты в клинику, начиная от недели 4 до конца фазы активного лечения.

[211] Предположительно результаты исследования фазы 3 демонстрируют, что у пациентов с эпизодической мигренью при применении AMG 334 отмечается большее снижение от исходного уровня среднего количества дней с мигренью в месяц по сравнению с плацебо. Ожидаемый лечебный эффект AMG 334 по сравнению с плацебо выражается в снижении среднего количества дней с мигренью в месяц на 1,12 и 1,30 дней от исходного уровня для доз 70 и 140 мг соответственно.

[212] Все публикации, патенты и патентные заявки, обсуждаемые и цитируемые в данном документе, включены в данное описание посредством ссылки во всей полноте. Следует понимать, что данное изобретение не ограничивается описанной конкретной методологией, протоколами и материалами, поскольку таковые могут варьироваться. Также следует понимать, что терминология, используемая в данном документе, приводится в целях описания конкретных вариантов реализации изобретения и не предназначена для ограничения объема прилагаемой формулы изобретения.

[213] Специалистам в данной области будет понятно или они смогут установить, используя не более чем рутинные эксперименты, многочисленные эквиваленты конкретных вариантов реализации данного изобретения, описанных в данном документе. Такие эквиваленты охватываются объемом следующей формулы изобретения.

1. Способ предупреждения или снижения частоты возникновения мигренозной головной боли у пациента, имеющего для этого показания, включающий введение пациенту антитела против рецептора пептида, кодируемого геном кальцитонина (CGRP), или его антигенсвязывающего фрагмента в дозе от 35 мг до 210 мг один раз в месяц, где антитело против рецептора CGRP или его антигенсвязывающий фрагмент содержит CDRH1, имеющую последовательность SEQ ID NO: 14, CDRH2, имеющую последовательность SEQ ID NO: 23, CDRH3, имеющую последовательность SEQ ID NO: 34, CDRL1, имеющую последовательность SEQ ID NO: 44, CDRL2, имеющую последовательность SEQ ID NO: 55, и CDRL3, имеющую последовательность SEQ ID NO: 65.

2. Способ профилактического лечения пациента от мигрени, включающий введение пациенту антитела против рецептора CGRP или его антигенсвязывающего фрагмента в дозе от 35 мг до 210 мг один раз в месяц, где антитело против рецептора CGRP или его антигенсвязывающий фрагмент содержит CDRH1, имеющую последовательность SEQ ID NO: 14, CDRH2, имеющую последовательность SEQ ID NO: 23, CDRH3, имеющую последовательность SEQ ID NO: 34, CDRL1, имеющую последовательность SEQ ID NO: 44, CDRL2, имеющую последовательность SEQ ID NO: 55, и CDRL3, имеющую последовательность SEQ ID NO: 65.

3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что доза составляет от 70 мг до 140 мг один раз в месяц.

4. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что доза составляет 70 мг один раз в месяц.

5. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что доза составляет 140 мг один раз в месяц.

6. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что антитело против рецептора CGRP или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожной инъекцией.

7. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что антитело против рецептора CGRP или его антигенсвязывающий фрагмент вводят пациенту с помощью автоинъектора или шприца, предварительно заполненного антителом против рецептора CGRP или его антигенсвязывающим фрагментом.

8. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что у пациента есть или диагностирована эпизодическая мигрень.

9. Способ по п. 8, в котором у пациента, страдающего эпизодической мигренью или диагностированного с ней, имеется по меньшей мере четыре, но менее пятнадцати дней головной боли из-за мигрени в месяц.

10. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что у пациента есть или диагностирована хроническая мигрень.

11. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что пациент ранее не получал препараты с целью профилактики мигренозных головных болей.

12. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что у пациента регистрировали неэффективность или непереносимость по меньшей мере одного другого препарата, назначаемого с целью профилактики мигренозной головной боли.

13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что другой препарат, назначаемый с целью профилактики мигренозной головной боли, представляет собой противоэпилептическое средство, трициклический антидепрессант или бета-блокатор.

14. Способ по п. 13, в котором противоэпилептическое средство представляет собой дивалпроекс, вальпроат натрия, вальпроевую кислоту, топирамат или габапентин.

15. Способ по п. 13, в котором трициклический антидепрессант представляет собой амитриптилин, нортриптилин, доксепин или флуоксетин.

16. Способ по п. 13, в котором бета-блокатор представляет собой пропранолол, тимолол, атенолол, метопролол или надолол.

17. Способ по п. 12, в котором у пациентов отмечали неэффективность или непереносимость одного или нескольких способов лечения препаратом, выбранным из пропранолола, тимолола, дивалпроeкса, вальпроевой кислоты, топирамата, амитриптилина или ботулинического токсина типа А.

18. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что антитело против рецептора CGRP или его антигенсвязывающий фрагмент включает вариабельную область тяжелой цепи (V_H), содержащую последовательность SEQ ID NO: 92, и вариабельную область легкой цепи (V_L), содержащую последовательность SEQ ID NO: 80.

19. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что антитело против рецептора CGRP содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 105, и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 123.

20. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что антитело против рецептора CGRP представляет собой моноклональное антитело IgG1 или моноклональное антитело IgG2.

21. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что антитело против рецептора CGRP или его антигенсвязывающий фрагмент вводится в фармацевтической композиции, содержащей буфер, поверхностно-активное вещество и стабилизирующий агент.

22. Способ по п. 21, отличающийся тем, что буфер представляет собой ацетатный буфер, поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 20 или полисорбат 80 и стабилизирующий агент представляет собой сахарозу.

23. Способ по п. 1 или 2, где антитело против рецептора CGRP или его антигенсвязывающий фрагмент вводят пациенту одной подкожной инъекцией.

24. Способ по п. 23, в котором объем инъекции составляет 1 мл или менее.

25. Предварительно заполненный автоинъектор или шприц для профилактического лечения мигрени, включающий фармацевтическую композицию, содержащую 70 или 140 мг антитела против рецептора CGRP, ацетатный буфер, сахарозу и полисорбат, где антитело против рецептора CGRP содержит CDRH1, имеющую последовательность SEQ ID NO: 14, CDRH2, имеющую последовательность SEQ ID NO: 23, CDRH3, имеющую последовательность SEQ ID NO: 34, CDRL1, имеющую последовательность SEQ ID NO: 44, CDRL2, имеющую последовательность SEQ ID NO: 55 и CDRL3, имеющую последовательность SEQ ID NO: 65.

26. Предварительно заполненный автоинъектор или шприц по п. 25, в котором полисорбат представляет собой полисорбат 20 или полисорбат 80.

27. Предварительно заполненный автоинъектор или шприц по п. 25, в котором антитело против рецептора CGRP содержит вариабельную область тяжелой цепи (VH), содержащую последовательность SEQ ID NO: 92, и вариабельную область легкой цепи (VL), содержащую последовательность SEQ ID NO: 80.

28. Предварительно заполненный автоинъектор или шприц по п. 25, в котором антитело против рецептора CGRP содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 105, и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 123.

Похожие патенты:

Новые антагонисты 5-нт2 // 2706229

Настоящее изобретение относится к производным 1-амидино-3-арил-2-пиразолина общей формулы I, в которой циклическая группа AR и заместители R1-R10 и Х имеют определения, приведенные в формуле изобретения.

Ацилгидразон (2,3,4-триметокси-n'-(8-метил-8-азабицикло[3.2.1.] октан-3-илиден) бензогидразид гидрохлорид), обладающий противомигреневой и анксиолитической активностью // 2699658

Изобретение относится к ацилгидразон (2,3,4-триметокси-N'-(8-метил-8-азабицикло[3.2.1.]октан-3-илиден) бензогидразид гидрохлорид) структурной формулы (I), который может быть использован в медицине: .Предложено новое соединение с противомигреневой и анксиолитической активностью.

Композиция для предотвращения головных болей // 2698196

Настоящее изобретение относится к фармакологии и раскрывает нетоксичную твердую фармацевтическую композицию для перорального введения, содержащую L-цистеин в сочетании с одним или более дополнительными активными агентами, по меньшей мере один из которых выбран из цистина, глутатиона и метионина, а также нетоксичный носитель.

Фармацевтическая композиция противомигренозного действия в твердой лекарственной форме в виде таблеток // 2696866

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, медицине, фармакологии и касается производства средств противомигренозного действия. Фармацевтическая композиция, представляющая собой твердую дозированную лекарственную форму, выполненную в виде таблеток, обладает антисеротониновым действием и может применяться как противомигренозное средство.

Интраназальные композиции дексмедетомидина и способы их применения // 2692245

Изобретение относится к медицине, а именно к терапии и неврологии, и может быть использовано для лечения боли у взрослого человека. Для этого интраназально в одну ноздрю вводят фармацевтическую композицию, содержащую дексмедетомидин или его фармацевтически приемлемую соль в дозе 35±10% мкг, 40±10% мкг, 45±10% мкг, 50±10% мкг, 55±10% мкг или 60±10% мкг дексмедетомидина или его фармацевтически приемлемой соли, посредством чего дексмедетомидин или его фармацевтически приемлемая соль создает Cplasma 0,1±10% нг/мл в пределах от 15±10% минут до 20±10% минут после введения и оказывает анальгетический эффект в течение часа непосредственно после введения дексмедетомидина или его фармацевтически приемлемой соли.

Композиции антагонистов рецепторов cgrp // 2690006

Группа изобретений относится к области фармацевтики, а именно: к жидкой фармацевтической композиции для лечения головной боли при мигрени, включающей (S)-N-((3S,5S,6R)-6-метил-2-оксо-5-фенил-1-(2,2,2-трифторэтил)пиперидин-3-ил)-2'-оксо-1',2',5,7-тетрагидроспиро[циклопента[b]пиридин-6,3'-пирроло[2,3-b]пиридин]-3-карбоксамид, или его фармацевтически приемлемую соль или гидрат в количестве от 0,01 до 3,0% масс.% композиции и фармацевтически приемлемый носитель, включающий по меньшей мере одно водорастворимое поверхностно-активное вещество, выбранное из группы, состоящей из VitE-TPGS, полоксамера, Tween 20, Tween 80 или Span 20 и комбинаций двух или более из перечисленного; а также к способам лечения головной боли при мигрени.

Пирролохинолиновые производные в качестве 5-нт6 антагонистов, способ их получения и применение // 2688161

Изобретение относится к области органической химии, а именно к производному пирролохинолина формулы (XIV) или к его стереоизомеру или фармакологически приемлемой соли или гидрату, где R1, R2 независимо представляют собой водород, алкокси(C1-C3) группу или независимо группу, выбранную из: циано, нитро, амино; T представляет собой CO, CH2, SO2; Ar представляет собой арил (6-членный), необязательно замещенный одним или двумя заместителями, выбранными из алкил(C1-C3) группы, алкил(C1-C3) группы, замещенной тремя атомами галогена, алкокси(C1-C3) группы, галогена, циано и амино; незамещенный биарил (10-членный); гетероарил (5-членный), содержащий 1 атом S и необязательно замещенный одним атомом галогена; гетероарил (9-10-членный), содержащий 1 гетероатом, выбранный из группы, состоящей из N и S, и необязательно замещенный одним или двумя заместителями, выбранными из алкил(C1-C3) группы и галогена; R3 представляет собой заместитель, выбранный из группы циклических или линейных, замещенных или незамещенных аминов, состоящей из структур (XV)-(XVIII), где A представляет собой NH, O, CH2, NR5; BR4 представляет собой NH, O; R5 представляет собой алкил(C1-C3) группу или бензил; R6 представляет собой алкил(C1-C3) группу; n выбирают из 0, 1, 2; m выбирают из 1, 2; l равно 1.

Способ получения средства, способного блокировать развитие экспериментального паркинсонизма // 2675697

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения средства, способного блокировать развитие экспериментального паркинсонизма.

Кетопрофеновая композиция для местного применения // 2652345

Изобретение относится к медицине, в частности к композиции для местного применения, способу лечения боли и способу лечения мигрени. Композиция для местного применения для лечения боли является эмульсией «масло в воде» и содержит кетопрофен и оксибензон в физиологически приемлемом носителе для местного применения.

Терапевтическое применение соединений // 2640596

Изобретение относится к применению соединения формулы (I), где R1 представляет собой алкильную группу, имеющую основную цепь из 7-11 атомов углерода, возможно разветвленную в любом положении атома углерода в основной цепи, где разветвление представляет собой боковую C1-6 алкильную группу, причем алкильная группа основной цепи и/или боковые алкильные группы возможно содержат один или более гетероатомов, причем указанное соединение выбрано из 4-этилоктановой кислоты, 2-бутилоктановой кислоты, 4-метилнонановой кислоты и 3-метилундекановой кислоты или его фармацевтически приемлемая соль, амид или эфир, для лечения или профилактики заболевания или биомедицинского состояния, выбранного из расстройств, связанных с судорогами.

Инъекционное устройство // 2698606

Инъекционное устройство для автоматического выдавливания дозы инъекционной жидкости из контейнера, содержащее корпус (2, 102) с продольной центральной осью (50, 150), дозирующий поршень (11, 111) и регулирующую часть (16, 116) инъекционного устройства, причем дозирующий поршень (11, 111) и регулирующая часть (16, 116) инъекционного устройства выполнены с возможностью — при выдавливании инъекционной жидкости — перемещения относительно друг друга, и инъекционную пружину (9, 109), причем при выдавливании инъекционной жидкости из контейнера (5, 105) предусмотрена возможность по меньшей мере частичного высвобождения запасенной в инъекционной пружине (9, 109) энергии, приводящего к выдавливанию дозы инъекционной жидкости из контейнера (5, 105), при этом инъекционное устройство (1, 101) содержит регулирующее устройство (41, 141) для регулирования скорости инъецирования, с которой предусмотрена возможность выдавливания инъекционной жидкости из контейнера (5, 105), выполненное с возможностью воздействия на энергию, необходимую для перемещения регулирующей части (16, 116) инъекционного устройства относительно дозирующего поршня (11, 111), отличающееся тем, что дозирующий поршень (11, 111) и регулирующая часть (16, 116) инъекционного устройства выполнены с возможностью — при выдавливании инъекционной жидкости — перемещения относительно друг друга в направлении продольной центральной оси (50, 150), причем регулирующее устройство (41, 141) выполнено с возможностью — при регулировании скорости инъецирования — воздействия на положение поворота дозирующего поршня (11, 111) относительно регулирующей части (16, 116) инъекционного устройства.

Автоматический инъектор для медицинских шприцов // 2697226

Устройство относится к медицинской технике, а именно к устройствам для внутримышечной и подкожной инъекции. Автоматический инъектор для стандартных медицинских шприцов состоит из корпуса, установленного в нем держателя шприца и в верхней части толкателя поршня, установленного в корпусе подъемника шприца, кнопки спуска, взаимодействующей с пружиной ввода иглы и пружиной выдавливания инъекционной жидкости, подъемной пружины, предохранителя и динамического тормоза в виде демпферного механизма, замедляющего толкатель поршня.

Носимое устройство для автоматической инъекции для управляемой подачи терапевтических агентов // 2695703

Изобретение относится к области медицины, а именно к носимому устройству для автоматической инъекции, которое может быть наклеено на кожу или на одежду пациента и может подавать терапевтический агент в тело пациента при подкожной инъекции с медленной, управляемой скоростью инъекции.

Снятие кожухов иглы со шприцов и автоматических инъекционных устройств // 2695566

Изобретение относится к медицинской технике, а именно к устройству для удаления кожуха иглы со шприца. Устройство содержит: трубчатый элемент для заключения в него кожуха иглы, соединенного со шприцом; один или более механизмов зацепления с колпачком, предусмотренных на дистальном конце трубчатого элемента и выполненных с возможностью зацепления с колпачком, предусмотренным для закрывания дистального конца шприца; два механизма зацепления с кожухом иглы, предусмотренных на проксимальном конце трубчатого элемента и выполненных с возможностью зацепления с кожухом иглы.

Устройства и способы для ручного инъектирования с усилием // 2689761

Группа изобретений относится к медицинской технике. Устройство для инъекции средства содержит шприц, содержащий полость шприца, поршневой элемент, принимаемый в полости шприца с возможностью скольжения, и полую иглу в сообщении по текучей среде с полостью шприца, причем поршневой элемент выполнен с возможностью перемещения из проксимального положения в дистальное положение.

Автоинъектор с дозирующим устройством // 2688806

Изобретение относится к медицинской технике, а именно к инъекционным устройствам. Инъекционное устройство содержит корпус (2) и выполненный с возможностью вращения и жестко удерживаемый в корпусе (2) от перемещения в направлении продольной центральной оси (50) дозатор (18).

Инъекционное устройство // 2687576

Изобретение относится к медицинской технике, а именно к инъекционное устройствам. Инъекционное устройство (1) содержит корпус (2), продольную центральную ось (50), управляющий элемент (6) и дозатор (18), выполненный с возможностью вращения и закрепленный в корпусе (2) от перемещения в направлении продольной центральной оси (50).

Активатор для автоматического инжектора // 2678410

Изобретение относится к медицинской технике, а именно к узлу активатора для автоматического инжектора и автоматическому инжектору, содержащему узел активатора. Узел активатора содержит цилиндрический корпус (3) и упругий элемент.

Активатор для автоматического инжектора // 2678410

Автоматическое инъекционное устройство // 2678374

Автоматическое инъекционное устройство, содержащее: корпус, выполненный с возможностью удерживания емкости для лекарственных средств, имеющей иглу; кожух для иглы, присоединенный с возможностью выдвижения к корпусу и выполненный с возможностью перемещения между первым выдвинутым положением относительно корпуса, в котором игла закрыта, и втянутым положением относительно корпуса, в котором игла открыта, и поршень, расположенный с возможностью поворота и скольжения в корпусе, при этом поршень выполнен с возможностью поворота относительно корпуса между первым положением поворота, в котором поршень зацеплен с корпусом, и вторым положением поворота, в котором поршень расцеплен с корпусом, приводную пружину, выполненную с возможностью смещения поршня в дистальном направлении относительно корпуса.

Антитело, специфически связывающееся с erbb3, и его применение // 2707121

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложены антитело и его антигенсвязывающий фрагмент, которое специфически связывается с ErbB3, а также фармацевтическая композиция для профилактики или лечения заболевания, связанного с активацией или сверхэкспрессией белка ErbB3.