Способ нерегламентированного замораживания клеток-предшественников периферической крови при температуре минус 80ос под защитой диметилсульфоксида


A01N1/02 - Консервирование тел людей или животных, или растений или их частей; биоциды, например дезинфектанты, пестициды, гербициды (препараты для медицинских,стоматологических или гигиенических целей A61K; способы или устройства для дезинфекции или стерилизации вообще, или для дезодорации воздуха A61L); репелленты или аттрактанты (приманки A01M 31/06; лекарственные препараты A61K); регуляторы роста растений (соединения вообще C01,C07,C08; удобрения C05; вещества, улучшающие или стабилизирующие состояние почвы C09K 17/00)

Владельцы патента RU 2707921:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" (RU)

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к нерегламентирорванному замораживанию клеток-предшественников периферической крови. Способ включает приготовление раствора криоконсерванта, для чего берут раствор Dimethylsulfoxide («Sigma-Aldrich», France) высокой степени очистки (≥99,99%) с ПП 0,200-0,220, в условиях гипотермии добавляют его в раствор для инфузий из натрия хлорида 2,25 г и воды для инъекций до 250 мл в пластиковом контейнере до получения концентрации DMSO 10% и производят смешивание его с концентратом аферезных клеток-предшественников периферической крови в равных пропорциях, замораживание от плюс 17÷ плюс 25°С до минус 80°С в режиме трехступенчатой программы в электрических рефрижераторах с установленной контрольной температурой изотермической холодовой адаптации на каждом этапе замораживания. На первом этапе биообъект выдерживают 10 мин в электрическом холодильнике с установленной температурой плюс 4±1°С, на втором этапе биообъект переносят в электроморозильник с заданной температурой холодовой адаптации минус 28±1°С и выдерживают в этих условиях в течение 25 мин., на третьем этапе биообъект переносят в морозильник-хранилище с заданной температурой минус 80±2°С для окончательного замораживания и длительной криоконсервации КППК. Изобретение позволяет повысить эффективность замораживания взвеси клеток-предшественников переферической крови. 1 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к медицине - трансфузиологии, а именно к технологии криоконсервирования клеток-предшественников периферической крови (КППК) при температуре минус 80°С под защитой криоконсерванта на основе 10% диметилсульфоксида (10% ДМСО). Первоначально при температуре плюс 4°С проводят разбавление 100% раствора ДМСО до 10% концентрации. При тех же условиях проводят добавление криоконсерванта во взвесь аферезных ядросодержащих клеток с КППК, размещенными в криопакете, перемешивают, криопакет запаивают, маркируют и помещают в алюминиевый пенал-холдер. Осуществляют нерегламентированное многоэтапное замораживание клеточной взвеси от плюс 17÷ плюс 25°С до минус 80°С в электрических рефрижераторах с установленной температурой изотермической холодовой адаптации (TA) в режиме трехступенчатой программы, на первом этапе которой биообъект выдерживают 10 мин при плюс 4°С, на втором этапе биообъект быстро переносят в морозильник с Та минус 28±1°С, t=25 мин., по завершении которого биообъект незамедлительно переносят в морозильник-хранилище с заданной температурой минус 80±2°С для окончательного замораживания и длительной криоконсервации КППК. Замороженные КППК отогревают покачиванием криопакета в водной среде при температуре плюс 38 плюс 43°С до достижения температуры в клеточной взвеси плюс 2 плюс 4°С. Изобретение позволяет повысить выход устойчивых к действию факторов криоповреждения клеток-предшественников периферической крови и их приживаемость при трансплантации реципиентам.

Способ нерегламентированного замораживания клеток-предшественников периферической крови при температуре минус 80°С под защитой диметилсульфоксида относится к медицине, в частности к трансфузиологии.

В нашей стране и за рубежом все активнее разрабатываются новые и совершенствуются известные способы сохранения КППК при отрицательных температурах для клинических целей. Достигнуты успехи в трансплантации криоконсервированных аутологичных, сингенных и аллогенных гемопоэтическихз стволовых клеток (ГСК). Клеточные взвеси активно используются при лечении лейкозов, апластической анемии, сепсиса, миелодиспластического синдрома, некоторых солидных опухолей, иммунных, радиационных поражений и других патологий у людей и животных. Ключевыми вопросами в криомедицине являются разработка и изучение новых нетоксичных или малотоксичных криоконсервантов, повышающих эффективность криоконсервирования клеток крови и костного мозга.

Несмотря на то, что замораживание и хранение в жидком азоте с контролируемой скоростью охлаждения являются стандартной процедурой для криоконсервации КППК, в трансфузиологии получили развитие технологии замораживания КППК при температуре минус 80°С в электрических рефрижераторах без контроля скорости охлаждения КППК под защитой 10% ДМСО (А.А. Цуцаева и соавт. Криоконсервирование клеточных суспензий. - Киев, Наук, думка. - 1983; Е.А. Гордиенко, Н.С. Пушкарь. Физические основы низкотемпературного консервирования клеточных суспензий. - Киев, Наук, думка, - 1994. - С. 68-76; Е.П. Сведенцов. Криоконсерванты для живых клеток. - Сыктывкар, 2010. - 80 с. (Коми научный центр УрО РАН) и др.).

Недостатками таких технологий замораживания КППК являются: недостаточная технологичность, испытаны в лаборатории на стадии эксперимента, в качестве криоконсервантов используется 10% ДМСО с показателем поглощения (ПП) в УФ-диапазоне при длине волны 275 нм в пределах порядка 0,325 (что значит вещество токсичное), а дальнейшее разведение криоконсерванта сопряжено с риском контаминации биообъекта, разработаны технологии, где в качестве хладоагентов используются инфицированный тающий лед, дефицитный и опасный для здоровья жидкий азот или токсичные для организма обслуживающего персонала растворы этилового спирта-ректификата с заданной TA (см. пат. РФ №2569834 A01N 1/02. «Способ криоконсервирования гемопоэтических стволовых клеток», опубл. 27.11. 2015 г., Бюл. №33; см. пат. РФ №2195111, A01N 1/02, «Способ криоконсервирования клеточных суспензий», опубл. 27.12.2002 г., Бюл. №36). (Е.П. Сведенцов. Криоконсерванты для живых клеток. - Сыктывкар, 2010. - 80 с. (Коми научный центр УрО РАН) и др.).

В качестве прототипа нами использована технология неконтролируемого замораживания образцов периферической крови при температуре минус 80°С (Uncontrolled-rate freezing and storage at - 80oC, with only 3.5% DMSO in cryoprotective solution for 109 autologous peripheral blood progenitor cell transplantations / P. Halle, O. Tournilhac, W. Knopinska-Posluzny et al. // Transfusion.- 2001.- Vol. 41.- P. 467-473). В работе дана оценка 109 аутологичных трансплантаций. Криоконсервант содержал 1% человеческого сывороточного альбумина, 2,5% гидроксиэтилкрахмала и 3,5% ДМСО с ПП в пределах 0,325 в конечной концентрации (это токсичное вещество). После смешивания криоконсерванта с суспензией КППК в равных пропорциях биообъект переносили непосредственно в камеру морозильника-хранилища при температуре минус 80°С. Продолжительность криоконсервации в среднем составляла 7 недель, способствовала успешному приживлению трансплантата из расчета средней величины на 1 кг массы тела: NC в среднем 6,34×108 (диапазон 0,02-38,3×108), CD34+ клеток (0,23-58,5×104), CFU-GM (1,38-405,7) и была сравнимой с той, которая была получена при стандартной процедуре контролируемого замораживания КППК. Подбор температуры замораживания КППК был подобран эмпирически лабораторным путем.

Недостатком такого способа замораживания КППК являются: способ не отработан для промышленного производства, недостаточно технологичен, использует ДМСО с ПП порядка 0,325, обеспечивает сохранность недостаточного количества полноценных консервированных КППК для трансплантации.

Техническим результатом предложенного решения является: повышение эффективности замораживания взвеси клеток-предшественников периферической крови с использованием криоконсерванта на основе диметилсульфоксида низкой токсичности и современных технических средств.

Этот результат достигается тем, что в способе нерегламентированного замораживания клеток-предшественников периферической крови при температуре минус 80°С под защитой диметилсульфоксида, включающем приготовление раствора криоконсерванта, добавление его с концентрацию взвеси аферезных клеток-предшественников периферической крови со стволовыми клетками в равных пропорциях, подготовку к замораживанию, включающую охлаждение взвеси с клетками-предшественниками периферической крови в камере охлаждения до температуры плюс 4°С и замораживание взвеси с клетками-предшественниками периферической крови в режиме трехступенчатой программы в электрических рефрижераторах с установленной на каждом этапе контрольной температурой изотермической холодовой адаптации, при этом в качестве криоконсерванта используют 10% раствор Dimethylsulfoxide («Sigma-Aldrich», France) высокой степени очистки (≥99,99%) с 1111 в пределах 0,200-0,220 при длине волны 275 нм, который в условиях гипотермии добавляют в ареактогенный раствор для инфузий из натрия хлорида 2,25 г и воды для инъекций до 250 мл в пластиковом контейнере до получения концентрации DMSO 10%, перемешивают при плюс 4°С, выпускают избыточный воздух и часть клеточной взвеси из криопакета, запаивают, маркируют, помещают в алюминиевый пенал-холдер и осуществляют нерегламентированное замораживание клеток-предшественников периферической крови в режиме трехступенчатой программы, на первом этапе которой биообъект выдерживают 10 мин при плюс 4°С, на втором этапе биообъект быстро переносят в морозильник с TA минус 28±1°С, t=25 мин., по завершении которого биообъект незамедлительно переносят в морозильник-хранилище с заданной температурой минус 80±2°С для окончательного замораживания и длительной криоконсервации КППК. Замороженные КППК отогревают интенсивным покачиванием криопакета в водной среде при температуре плюс 38 ÷ плюс 43°С до достижения температуры в клеточной взвеси плюс 2 ÷ плюс 4°С.

Сущность изобретения заключается в совокупности существенных признаков, достаточной для достижения обеспечиваемого изобретением технического результата.

Существенными признаками предложенного способа, совпадающими с известными признаками, являются: А - приготовление криоконсерванта в камере охлаждения при плюс 4±1°С; Б - добавление криоконсерванта в концентрат клеток-предшественников периферической крови в равных пропорциях в условиях гипотермии плюс 4±1°С; В - многоэтапное замораживание взвеси с КППК от плюс 17÷ плюс 25°С до минус 80°С для окончательного замораживания и длительной криоконсервации КППК с использованием электрорефрижераторов с установленной контрольной температурой на каждом этапе замораживания.

Существенными отличительными признаками способа нерегламентированного замораживания КППК при температуре минус 80°С под защитой 10% DMSO являются: Г - низкая токсичность криоконсерванта: в известном способе использовали ДМСО с ПП порядка 0,325 (это вещество токсичное), в заявляемом способе используют раствор Dimethylsulfoxide («Sigma-Aldrich», France) высокой степени очистки (≥99,99%) с ПП порядка 0,200-0,220 (это очень чисто); в известном способе 100% ДМСО разбавляли 1% раствором человеческого альбумина с риском развития аллергических реакций в виде крапивницы, анафилактического шока и других жизнеугрожающих осложнений; в заявляемом способе ДМСО разводят аректогенным раствором для инфузий из натрия хлорида 2,25 г и воды для инъекций до 250 мл в пластиковом контейнере до получения концентрации DMSO 10%, который медленно добавляют в концентрат аферезных КППК в равных пропорциях, постоянно перемешивая в пластиковом криопакете, удаляют из него избыточный воздух и часть клеточной взвеси для лабораторных исследований, после чего криопакет герметизируют, маркируют и помещают в алюминиевый пенал-холдер. Д - осуществляют нерегламентированное замораживание, на первом этапе которого биообъект выдерживают 10 мин в электрическом холодильнике марки Sanyo MBR-506D с установленной температурой плюс 4±1°С, на втором этапе биообъект переносят в электроморозильник марки Sanyo MDF-U5411 с заданной ТА минус 28±1°С и выдерживают в этих условиях в течение 25 мин., на третьем этапе биообъект переносят в морозильник-хранилище марки Sanyo MDF-U53 с заданной температурой минус 80±2°С для окончательного замораживания и длительной криоконсервации КППК.

Способ нерегламентированного замораживания клеток-предшественников периферической крови при температуре -80оС под защитой DMSO заключается в следующем (пример выполнения):

- производят заготовку концентрата КППК. Концентрат КППК получают методом сепарации на аппарате Amicus в объеме от 80,0 до 150,0 (96,30±7,3) мл в стандартную эластичную полимерную упаковку, откуда закрытым способом переводят в пластиковые криопакеты;

- готовят криоконсервирующий раствор, для чего берут раствор Dimethylsulfoxide («Sigma-Aldrich», France) высокой степени очистки (≥99,99%) без запаха с ПП в пределах 0,200-0,220 и в условиях гипотермии плюс 4°С медленно добавляют его в плазмозамещающий ареактогенный раствор для инфузий из натрия хлорида 2,25 г и воды для инъекций до 250 мл в пластиковом контейнере до получения конечной концентрации DMSO 10%, постоянно перемешивая, герметизируют, маркируют и помещают его для охлаждения в электрический холодильник до температуры плюс 4°С;

- производят подготовку полученной клеточной взвеси к замораживанию: для этого охлажденный до температуры плюс 4°С 10% раствор DMSO медленно добавляют в концентрат аферезных КППК в равных пропорциях, постоянно перемешивая в пластиковом криопакете, удаляют из него избыточный воздух, разливают по пробиркам для криоконсервации по 1,5 мл в каждую, герметизируют, маркируют и через порт-луер берут пробу одноразовым шприцем для количественной и качественной оценки клеточного материала, криопакет помещают в алюминиевый пенал-холдер;

- производят нерегламентированное замораживание КППК от плюс 17÷ плюс 25°С до минус 80°С. Криобиологическую технологию осуществляют в режиме трехступенчатой программы в электрических рефрижераторах с установленной температурой изотермической холодовой адаптации (TA), на первом этапе которого биообъект выдерживают 10 мин в электрическом холодильнике Sanyo MBR-506D с установленной температурой плюс 4±1°С, на втором этапе биообъект переносят в электроморозильник Sanyo MDF-U5411 с заданной TA минус 28±1°С и выдерживают в этих условиях в течение 25 мин., на третьем этапе биообъект переносят в морозильник-хранилище Sanyo MDF-U53 с заданной температурой минус 80±2°С для окончательного замораживания и длительной криоконсервации КППК;

- замороженные КППК отогревают интенсивным покачиванием криопакета в водной среде при температуре плюс 38 ÷ плюс 43°С до достижения температуры в клеточной взвеси плюс 2 ÷ плюс 4°С.

После замораживания КППК известным способом в режиме Та минус 28±1°С, t=25 мин количество МКЦ (миелокариоцитов) составляло 89,85±7,8%, мононуклеаров (в т.ч. бласты, промиелоциты, миелоциты, лимфоцитф, моноциты) - 82,3±11,8%, из них жизнеспособных (устойчивых к витальному красителю) - 87,5±19,8%, CD34+клеток - 73,93±17,6%, КОЕс (колониеобразующих единиц) - 54,2±2,7%, КлОЕ (кластерообразующих единиц) - 30,60±16,5%.

После замораживания КППК предлагаемым способом в режиме Та минус 28±1°С, t=25 мин количество МКЦ (миелокариоцитов) составляло 89,85±7,8%, мононуклеаров (в т.ч. бласты, промиелоциты, миелоциты, лимфоцитф, моноциты) - 82,3±11,8%, из них жизнеспособных (устойчивых к витальному красителю) - 87,5±19,8%,

CD34+клеток - 73,93±17,6%, КОЕс (колониеобразующих единиц) - 54,2±2,7%, КлОЕ (кластерообразующих единиц) - 30,60±16,5%.

Сравнительный анализ результатов криоконсервирования КППК, замороженных известным и заявляемым способами предоставлен в табл.1.

Примечание: выделенные жирным петитом цифры имеют p<0,05 к известному способу замораживания КППК.

Использование технического решения «Способ нерегламентированного замораживания клеток-предшественников периферической крови при температуре минус 80°С под защитой диметилсульфоксида» по сравнению с прототипом позволяет повысить сохранность клеток-предшественников периферической крови, жизнеспособность при криоконсервации благодаря тому, что в качестве криоконсерванта используют 10% Dimethylsulfoxide («Sigma-Aldrich», France) высокой степени очистки (≥99,9%) с ПП в пределах 0,200-0,220, который разбавляют в плазмозамещающем ареактогенном растворе для инфузий из натрия хлорида 2,25 г и воды для инъекций (заменитель 1% альбумина и аутоплазмы), что позволяет снизить токсичность криоконсервирующего раствора и риски посттрансфузионных осложнений. Использование современных лицензионных электрических рефрижераторов иностранного производства (Франции) позволяет повысит технологичность процесса нерегламентированного замораживания, провести охлаждение биообъектов согласно контрольных режимов температуры холодовой адаптации, повысить в конечном итоге получение более качественного продукта.

При использовании фондов научно-технической литературы эквивалентных решений не обнаружено, что подтверждает новизну предлагаемого способа криоконсервирования КППК.

Использование простых приемов и доступного оборудования подтверждает промышленную применимость.

Неочевидность и оригинальный подход к решению проблемы подтверждает изобретательский уровень.

Исследования выполнены на базе лаборатории клеточных технологий ФГБУН «Кировский НИИ гематологии и переливания крови ФМБА России».

Способ нерегламентированного замораживания клеток-предшественников периферической крови при температуре минус 80°С под защитой диметилсульфоксида, включающий приготовление раствора криоконсерванта, смешивание его с концентратом аферезных клеток-предшественников периферической крови в равных пропорциях, замораживание от плюс 17÷ плюс 25°С до минус 80°С в режиме трехступенчатой программы в электрических рефрижераторах с установленной контрольной температурой изотермической холодовой адаптации на каждом этапе замораживания, отличающийся тем, что для приготовления криоконсерванта берут раствор Dimethylsulfoxide («Sigma-Aldrich», France) высокой степени очистки (≥99,99%) с ПП 0,200-0,220, в условиях гипотермии добавляют его в раствор для инфузий из натрия хлорида 2,25 г и воды для инъекций до 250 мл в пластиковом контейнере до получения концентрации DMSO 10%, на первом этапе биообъект выдерживают 10 мин в электрическом холодильнике с установленной температурой плюс 4±1°С, на втором этапе биообъект переносят в электроморозильник с заданной температурой холодовой адаптации минус 28±1°С и выдерживают в этих условиях в течение 25 мин, на третьем этапе биообъект переносят в морозильник-хранилище с заданной температурой минус 80±2°С для окончательного замораживания и длительной криоконсервации КППК.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии. Описан способ получения концентрата вакцины от гриппа, содержащей ВПЧ, где гены гемагглютинина, нейраминидазы и M1 белка получены из штамма A/California/04/2009; ген гемагглютинина получен из штамма A/Michigan/45/2015, а гены нейраминидазы и M1 белка получены из штамма A/California/04/2009; ген гемагглютинина получен из штамма A/Novosibirsk/01/2014, а гены нейраминидазы и M1 белка получены из штамма A/California/04/2009; ген гемагглютинина получен из штамма A/HongKong/4801/2014, а гены нейраминидазы и M1 белка получены из штамма A/California/04/2009; ген гемагглютинина получен из штамма B/Phuket/3073/13, а гены нейраминидазы и M1 белка получены из штамма A/California/04/2009 или ген гемагглютинина получен из штамма B/Brisbane/60/2008, а гены нейраминидазы и M1 белка получены из штамма A/California/04/2009.

Изобретение относится к биотехнологии. Описана поливалентная вакцина от гриппа, содержащая ВПЧ, где гены гемагглютинина, нейраминидазы и M1 белка получены из штамма A/California/04/2009; ген гемагглютинина получен из штамма A/Michigan/45/2015, а гены нейраминидазы и M1 белка получены из штамма A/California/04/2009; ген гемагглютинина получен из штамма A/Novosibirsk/01/2014, а гены нейраминидазы и M1 белка получены из штамма A/California/04/2009; ген гемагглютинина получен из штамма A/HongKong/4801/2014, а гены нейраминидазы и M1 белка получены из штамма A/California/04/2009; ген гемагглютинина получен из штамма B/Phuket/3073/13, а гены нейраминидазы и M1 белка получены из штамма A/California/04/2009 или ген гемагглютинина получен из штамма B/Brisbane/60/2008, а гены нейраминидазы и M1 белка получены из штамма A/California/04/2009.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к получению одногормональных инсулинположительных клеток. Способ, за исключением способа, в котором клетки поджелудочной железы передней кишки и клетки энтодермы поджелудочной железы получены с использованием человеческих эмбрионов, включает дифференцировку клеток поджелудочной железы передней кишки, экспрессирующих PDX-1 и NKX6.1, в клетки энтодермы поджелудочной железы путем обработки клеток поджелудочной железы передней кишки, экспрессирующих PDX-1 и NKX6.1, ингибитором shh, низкой дозой ретиноевой кислоты и аскорбиновой кислотой.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к бессывороточной питательной среде, и включает основной компонентный состав питательной среды Игла MEM, а также дополнительно содержит микроэлементы (соли кадмия, кобальта, цинка, никеля, селена, молибдена) в концентрации 0,00001-4,0 г/л, пируват натрия в концентрации 0,04-4,0 г/л, витамины B12 и Е в концентрации 0,0001-0,1 г/л, олеиновую кислоту в концентрации 0,000005-0,5 г/л, цистеин, глютатион, пролин, аланин, аспарагин, аспарагиновую кислоту в концентрации 0,001-1,5 г/л, (всего 45 компонентов), рекомбинантный инсулин человека в концентрации 0,000025-0,025 г/л, а также увеличена концентрация лейцина, фенилаланина, триптофана, лизина до 0,035-0,072 г/л.

Изобретение относится к биотехнологии. Конкретно к способу контроля получения вакцины от гриппа.

Изобретение относится к биотехнологии. Конкретно изобретение относится к способу получения поливалентной вакцины от гриппа, содержащей ВПЧ, где гены гемагглютинина, нейраминидазы и M1 белка получены из штамма A/California/04/2009; ген гемагглютинина получен из штамма A/Michigan/45/2015, а гены нейраминидазы и M1 белка получены из штамма A/California/04/2009; ген гемагглютинина получен из штамма A/Novosibirsk/01/2014, а гены нейраминидазы и M1 белка получены из штамма A/California/04/2009; ген гемагглютинина получен из штамма A/HongKong/4801/2014, а гены нейраминидазы и M1 белка получены из штамма A/California/04/2009; ген гемагглютинина получен из штамма B/Phuket/3073/13, а гены нейраминидазы и M1 белка получены из штамма A/California/04/2009 или ген гемагглютинина получен из штамма B/Brisbane/60/2008, а гены нейраминидазы и M1 белка получены из штамма A/California/04/2009.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к созданию линии крысиных эмбриональных стволовых клеток, получению генетически модифицированной крысы и композиции для культивирования и поддержания плюрипотентности крысиных эмбриональных стволовых клеток.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к получению трехмерных клеточных кластеров и их дифференцировке. Способ включает обработку плюрипотентных стволовых клеток, которые являются индуцированными плюрипотентными стволовыми клетками, клетками, полученными из ткани пуповины человека, партенотами, клетками, полученными из амниотической жидкости, или эмбриональными стволовыми клетками человека линии H1, H7, H9, SA002 или BG01v, культивированных в плоской адгезивной культуре вместе с хелатирующим агентом или ферментом, с высвобождением клеточных агрегатов из плоской адгезивной культуры.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к подготовке аутологичных моноцитов человека для терапии ожоговых ран. Способ включает выделение моноцитов венозной крови методами градиентного центрифугирования (на градиенте фиколла и двойном градиенте перколла).

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен биореактор для культивирования мультипотентных мезенхимальных стволовых клеток (ММСК).

Изобретение относится к области биотехнологии. Данный способ витрификации ооцитов млекопитающих может быть успешно применён к сельскохозяйственным животным, в частности для крупного рогатого скота (КРС).

Изобретение относится к медицине, а именно к способу обнаружения циркулирующей опухолевой клетки и/или циркулирующей опухолевой стволовой клетки из биологической циркулирующей жидкости организма.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к получению популяции человеческих индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (hiPSC), поддержанию hiPSC, модификации целевого геномного локуса в hiPSC и композиции для культивирования и поддержания hiPSC.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к клеточному сфероиду, его получению и оценке эффекта воздействия на функциональную активность меланоцитов.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к получению одногормональных инсулинположительных клеток. Способ, за исключением способа, в котором клетки поджелудочной железы передней кишки и клетки энтодермы поджелудочной железы получены с использованием человеческих эмбрионов, включает дифференцировку клеток поджелудочной железы передней кишки, экспрессирующих PDX-1 и NKX6.1, в клетки энтодермы поджелудочной железы путем обработки клеток поджелудочной железы передней кишки, экспрессирующих PDX-1 и NKX6.1, ингибитором shh, низкой дозой ретиноевой кислоты и аскорбиновой кислотой.
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к обратимому ингибированию в опухолевых клетках гепатоцеллюлярной карциномы экспрессии гена, кодирующего синтез аполипопротеина В.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложена композиция для активации роста дифференцированных эндотелиальных клеток роговицы, содержащая эффективное количество, по меньшей мере, одного из ламинина 511, и/или ламинина 521, и/или его функционального фрагмента Е8, которые экспрессируются в эндотелиальных клетках роговицы.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к бессывороточной питательной среде, и включает основной компонентный состав питательной среды Игла MEM, а также дополнительно содержит микроэлементы (соли кадмия, кобальта, цинка, никеля, селена, молибдена) в концентрации 0,00001-4,0 г/л, пируват натрия в концентрации 0,04-4,0 г/л, витамины B12 и Е в концентрации 0,0001-0,1 г/л, олеиновую кислоту в концентрации 0,000005-0,5 г/л, цистеин, глютатион, пролин, аланин, аспарагин, аспарагиновую кислоту в концентрации 0,001-1,5 г/л, (всего 45 компонентов), рекомбинантный инсулин человека в концентрации 0,000025-0,025 г/л, а также увеличена концентрация лейцина, фенилаланина, триптофана, лизина до 0,035-0,072 г/л.

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ выявления генома возбудителя бруцеллезной инфекции (Brucella spp.) у сельскохозяйственных животных, включающий выделение ДНК из биологического материала от инфицированных животных сорбционным методом, постановку одноэтапной полимеразной цепной реакции - с одновременным проведением циклов амплификации с детекцией в реальном времени с использованием специфичных для участка генома (Brucella spp.) олигонуклеотидных праймеров, зондов, красителей и контрольных образцов в виде внутреннего и положительного, измерение специфического сигнала и сигнала контроля по каналам соответствующих красителей и интерпретацию результатов, где проводят флуоресцентную детекцию, измеряют по каналу JOE(HEX)/Yellow накопление флуоресцентного сигнала для специфического сигнала тестирования наличия генома возбудителя бруцеллезной инфекции (Brucella spp.), а по каналу FAM/Green - сигнал внутреннего контрольного образца, если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считается положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции - отрицательный, а интерпретацию результатов проводят на основании наличия/отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией, при этом для внутреннего контрольного образца используют суспензию бактериофага Т4 с концентрацией 5×103 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, а для положительного контрольного образца используют смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома ДНК Brucella spp.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к идентификации гетерогенной популяции клеток почек, пригодной для обеспечения регенеративного стимула для почки, и лечению болезни почек у человека.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к безопасному хранению и транспортировке трансплантируемого охлажденного сердца животных под давлением консервирующей газовой среды и мобильному устройству для этого.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к нерегламентирорванному замораживанию клеток-предшественников периферической крови. Способ включает приготовление раствора криоконсерванта, для чего берут раствор Dimethylsulfoxide высокой степени очистки с ПП 0,200-0,220, в условиях гипотермии добавляют его в раствор для инфузий из натрия хлорида 2,25 г и воды для инъекций до 250 мл в пластиковом контейнере до получения концентрации DMSO 10 и производят смешивание его с концентратом аферезных клеток-предшественников периферической крови в равных пропорциях, замораживание от плюс 17÷ плюс 25°С до минус 80°С в режиме трехступенчатой программы в электрических рефрижераторах с установленной контрольной температурой изотермической холодовой адаптации на каждом этапе замораживания. На первом этапе биообъект выдерживают 10 мин в электрическом холодильнике с установленной температурой плюс 4±1°С, на втором этапе биообъект переносят в электроморозильник с заданной температурой холодовой адаптации минус 28±1°С и выдерживают в этих условиях в течение 25 мин., на третьем этапе биообъект переносят в морозильник-хранилище с заданной температурой минус 80±2°С для окончательного замораживания и длительной криоконсервации КППК. Изобретение позволяет повысить эффективность замораживания взвеси клеток-предшественников переферической крови. 1 табл., 1 пр.

Наверх