Способ сравнительного исследования эффективности локальных кровоостанавливающих средств в эксперименте in vitro


G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)
G01N2500/00 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2709517:

федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу сравнительного исследования эффективности локальных кровоостанавливающих средств (ЛКС) в эксперименте in vitro, отличающемуся тем, что из полотна ЛКС с помощью Dermo-Punch получают цилиндр диаметром, равным внутреннему сечению Dermo-Punch и вакутайнера, образцы ЛКС и вакутайнеры выдерживают в термостате при +37°С 10 минут, после чего забирают кровь вакуумным способом и в течение 15 секунд на дно вакутайнера погружают локальные кровоостанавливающие средства, пробирки закупоривают и инкубируют 30 минут при +37°С, затем центрифугируют для получения сыворотки крови, исследуют концентрацию кальция в плазме крови и сравнивают значения в контрольной группе, в которой не производилось погружение образца в кровь донора, и группах исследования, и если значения концентрации кальция в группе исследования меньше, чем в контрольной и других группах, то это свидетельствует о выраженной эффективности локального кровоостанавливающего средства. Изобретение обеспечивает повышение точности и объективизацию исследований при разработке экспериментальных образов гемостатических средств локального действия. 1 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к сравнительному исследованию эффективности локальных кровоостанавливающих средств в эксперименте in vitro.

Наиболее близким к предлагаемому способу является «Способ оценки гемостатического эффекта жидких кровоостанавливающих средств» (Патент РФ №2286569 от 30.03.2005). Способ заключается в том, что для оценки гемостатического эффекта жидких кровоостанавливающих средств в лабораторных условиях берут стабилизированный 3,8%-ным раствором цитрата натрия 1 мл крови пациента. Далее вводят по каплям 0,1-0,2 мл жидкого кровоостанавливающего средства и при помощи стеклянной палочки все перемешивают. Включают секундомер и отмечают наличие гемостатического эффекта при по явлении сгустков крови в течение не более одной минуты.

Основными недостатками предлагаемого способа является высокая погрешность метода, возникающая в результате визуальной регистрации результатов исследования, отсутствия использования в методике аппаратов, позволяющих выполнить точную регистрацию времени свертывания крови, а также значительное влияние внешних факторов (скорость вращения стеклянной палочки, степень очистки палочки, температура внешней среды, влажность и пр.).

Техническим результатом изобретения является разработка способа сравнительного исследования эффективности локальных кровоостанавливающих средств в эксперименте in vitro, обладающего технической простотой, точностью, объективностью и возможностью использования в скрининговых исследованиях при разработке экспериментальных образов гемостатических средств локального действия.

Технический результат достигается тем, что для сравнительного исследования эффективности локальных кровоостанавливающих средств в эксперименте in vitro используется исследование концентрации кальция в плазме крови до и после погружения в кровь тестируемых материалов с помощью набора реактивов и автоматического биохимического анализатора.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Подготовку исследуемых материалов и стандартизацию их размеров производят с помощью инструмента для биопсии кожи - Dermo-Punch. Из полотна локального кровоостанавливающего средства с помощью Dermo-Punch получают цилиндр диаметром, равным внутреннему сечению Dermo-Punch и вакутайнера соответственно. Образцы и вакутайнеры раздельно выдерживают в термостате при температуре +37°С в течение 10 минут перед началом эксперимента для достижения уровня средней температуры тела человека.

В стерильных условиях, при комнатной температуре, натощак, в утренние часы у здоровых доноров-добровольцев (юноши 19-23 года), не имеющих в анамнезе заболеваний системы гемостаза, с письменного согласия, соблюдая правила асептики и антисептики забирают кровь из локтевой вены вакуумным способом в вакутайнеры, содержащие активатор свертывания.

В течение 15 секунд с момента взятия крови на дно вакутайнера (для максимального контакта крови донора и образца) погружают тестируемый образец. Далее пробирки вновь закупоривают и помещают в термостат, где инкубируют в течение 30 минут при температуре +37°С, что соответствует времени образования и организации сгустка крови согласно данным литературы.

Затем пробирки с образцами центрифугируют 10 минут со скоростью 3000 об/мин для получения сыворотки крови. Полуавтоматической пипеткой отбирают полученную таким образом сыворотку и выполняют исследования с помощью набора реактивов и автоматического биохимического анализатора. Оценивают концентрацию кальция, который является одним из ключевых факторов свертывания. Согласно каскадной теории механизмов коагуляции (Davie E.W., Ratnoff O.D., Macfarlane R.G., 1964 г.) кальций вступает в реакцию превращения протромбина в тромбин, а также участвует в активации X фактора (Стюарта-Прауэра) и тем самым играет важную роль в процессе свертывания крови. При сравнении значений концентрации кальция в плазме крови с контрольной группой, в которой не производилось погружение образца в кровь донора, и между группами исследования результаты интерпретируют следующим образом: о выраженной эффективности, иными словами кровоостанавливающей активности, локального кровоостанавливающего средства, говорят в случае, если значения концентрации кальция меньше, чем у остальных сравниваемых средств.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

Апробацию способа проводили на образцах, обладающих, согласно данным производителя, гемостатическим эффектом (обусловленным физико-механическими и химическими свойствами образца): губка гемостатическая коллагеновая (состав: коллаген, субстанция - раствор 2% - 49 г (0,98 г сухого коллагена) нитрофурал (фурацилин) - 0,0075 г, борная кислота - 0,0125; размеры 50×50×7 мм; производитель: ОАО «Лужский завод «Белкозин», г. Луга, Россия); а также на материалах, априори не обладающих кровоостанавливающей активностью (гемостатическая активность которых может быть обусловлена лишь структурными, а не химическими, особенностями образца): губка бытовая (состав: поролон; размеры 130 мм × 90 мм × 50 мм, производитель: ООО «Поролон-Техно», г. Москва, Россия).

Подготовку материалов и стандартизацию их размеров производили с помощью инструмента для биопсии кожи - Dermo-Punch (диаметр - 0,9 см). Из полотна хирургического материала с помощью Dermo-Punch получали цилиндр диаметром 0,9 см равный внутреннему сечению Dermo-Punch и вакутайнера соответственно.

Образцы и вакутайнеры раздельно выдерживали в термостате при температуре +37°С в течение 10 минут перед началом эксперимента.

Исследование проводили в трех экспериментальных группах:

1 группа - цельная кровь донора, без тестируемого образца (контрольная группа);

2 группа - губка поролоновая + цельная кровь донора;

3 группа - губка гемостатическая коллагеновая + цельная кровь донора.

Исследования проводили в стерильных условиях операционного блока лаборатории экспериментальной хирургии и онкологии Научно-исследовательского института экспериментальной медицины ФГБОУ ВО КГМУ Минздрава России (г. Курск) при комнатной температуре. Натощак в утренние часы у 10 здоровых доноров-добровольцев (юноши 19-23 года), не имеющих в анамнезе заболеваний системы гемостаза, с письменного согласия, соблюдая правила асептики и антисептики забирали кровь объемом 4 мл из локтевой вены вакуумным способом в вакутайнеры, содержащие активатор свертывания.

Для каждой серии тестов от одного донора кровь забирали в 3 пробирки (согласно количеству групп исследования). В каждой экспериментальной группе выполняли по 10 гематологических исследований (согласно числу доноров). В течение 15 секунд с момента взятия крови на дно пробирки погружали тестируемый образец, далее пробирки вновь закупоривали и помещали в термостат, где инкубировали в течение 30 минут при температуре +37°С.

Затем пробирки с образцами центрифугировали 10 минут со скоростью 3000 об/мин для получения сыворотки крови. Полуавтоматической пипеткой отбирали полученную таким образом сыворотку и выполняли исследования с помощью набора реактивов и автоматического биохимического анализатора ACCENT 200. Оценивали концентрацию кальция.

Статистическую обработку полученных данных проводили с применением методик описательной и вариационной статистики - Me [25;75]). Достоверность отличия средних величин определяли с помощью критерия Краскела-Уоллиса (U), при допустимом для медико-биологических исследований значений р≤0,05.

Согласно полученным результатам, представленным в таблице, следует, что значение Са плазмы крови в группе 1 в 1,5 раза больше, чем в группе 2, и в 2 раза больше группы 3, при этом во 2 экспериментальной группе на 0,6 больше, чем в 3. Отметим, что статистически значимыми являлись изменения показателей Са плазмы крови во 2 и 3 группе. Таким образом, при внесении в кровь хирургических материалов отмечается изменение значения концентрации Са плазмы крови.

Примечание. Знаком «*» отмечены статистически значимые значения (при р≤0,05)

р (1-2) - достоверность отличия средних значений между значениями исследуемых показателей 1 (контрольная группа) и 2 (губка поролоновая + цельная кровь донора) экспериментальных групп.

р (1-3) - достоверность отличия средних значений между значениями исследуемых показателей 1 (контрольная группа) и 3 (губка гемостатическая коллагеновая + цельная кровь донора) донора экспериментальных групп.

р (2-3) - достоверность отличия средних значений между значениями исследуемых показателей 2 (губка поролоновая + цельная кровь донора) и 3 (губка гемостатическая коллагеновая + цельная кровь донора) донора экспериментальных групп.

Таким образом, разработан способ сравнительного исследования эффективности локальных кровоостанавливающих средств в эксперименте in vitro, обладающего технической простотой, точностью, объективностью и возможностью использования в скрининговых исследованиях при разработке экспериментальных образов гемостатических средств локального действия.

Способ сравнительного исследования эффективности локальных кровоостанавливающих средств в эксперименте in vitro, включающий воздействие на кровь испытуемых средств, отличающийся тем, что из полотна локального кровоостанавливающего средства с помощью Dermo-Punch получают цилиндр диаметром, равным внутреннему сечению Dermo-Punch и вакутайнера, образцы локальных кровоостанавливающих средств и вакутайнеры раздельно выдерживают в термостате при температуре +37°С в течение 10 минут перед началом эксперимента, после чего забирают кровь вакуумным способом и в течение 15 секунд с момента взятия крови на дно вакутайнера погружают локальные кровоостанавливающие средства, пробирки закупоривают и помещают в термостат, где инкубируют в течение 30 минут при температуре +37°С, далее пробирки с образцами центрифугируют для получения сыворотки крови, затем в сыворотке исследуют концентрацию кальция и сравнивают значения концентрации кальция в плазме крови в контрольной группе, в которой не производилось погружение образца в кровь донора, и группах исследования, и если значения концентрации кальция в группе исследования меньше, чем в контрольной и других группах, то это свидетельствует о выраженной эффективности локального кровоостанавливающего средства.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины и может найти применение в диагностике стадии фиброза печени у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С (ХВГС). Согласно предлагаемому способу определяют методом ДНК комет степень повреждений ДНК лимфоцитов периферической крови, осуществляют клинический и общетерапевтический биохимический анализ крови, с использованием предсказательной математической модели по результатам анализов пациентов с ХВГС находят коэффициенты порядковой логистической регрессии с регуляризацией, с помощью которых рассчитывают значение вспомогательных показателей es1 и es2 по формулам es1=exp(-0,933-0.0498*Возраст+0,410*Эритроциты-0,0128*АСТ-0,014*АЛТ-0,053*Глобулины-0,023*%ДНК в хвосте кометы+0,0278*Гемоглобин); es2=exp(-6,497-0,043*Возраст+2,417*Эритроциты-0,012*АСТ-0,014*АЛТ-0,053*Глобулины-0,023*%ДНК в хвосте кометы+0,0,27*Гемоглобин), где ехр - экспоненциальная функция; возраст - возраст пациента (в годах); Эритроциты – содержание эритроцитов; ACT – аспартатаминотрансфераза; АЛТ – аланинаминотрансфераза; Глобулин – содержание глобулина в периферической крови, г/л; %ДНК в хвосте кометы – содержание ДНК в хвосте кометы лимфоцитов периферической крови у i-того пациента (%).
Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии, и применяется для диагностики мембранодеструктивного эффекта противотуберкулезной химиотерапии. Для этого проводят хроматографическое исследование липидного спектра плазмы крови.
Изобретение относится к способу оценки состояния мононуклеаров периферической крови, включающий определение фосфолипидного спектра мембран мононуклеаров периферической крови.
Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для прогнозирования исхода проникающего ранения глазного яблока у взрослого населения в момент его первичного обращения к врачу-офтальмологу.
Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторной диагностике, ревматологии, ортопедии и травматологии, и может быть использовано для диагностики молекулярных фенотипов остеоартрита.
Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии. Предложен способ комбинированного лечения немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ) IB - III стадии.

Изобретение относится к области медицины, а именно к гинекологии и репродуктологии, и касается прогнозирования готовности эндометрия к успешной имплантации эмбриона у женщин с маточной формой бесплодия.

Изобретение относится к патологической анатомии и может быть использовано для полуколичественной визуальной оценки синтеза регуляторного белка PDCD4 в гистологических срезах ткани иммуногистохимическим методом с детекцией в ядре и цитоплазме.
Группа изобретений относится к фармации и медицине. Предложено применение композиции в получении жидкого продукта для профилактики или лечения индивидуума, имеющего нарушенные уровни в плазме одного или нескольких полярных липидов: фосфатидилхолина (РС) PC aa C36:6, PC aa C38:0, PC aa C38:6, PC aa C40:6, PC ae C40:6 и ряда других, причём указанная композиция включает по меньшей мере один витамин группы В, выбранный из витамина B6, витамина B12 и витамина B9 (варианты).

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии и инфектологии, и касается прогнозирования развития неспецифических осложнений острых кишечных инфекций с синдромом гемоколита у детей.

Представлен вибрационный измеритель (5), содержащий многоканальную расходомерную трубку (130). Вибрационный измеритель (5) содержит измерительный электронный прибор (20) и измерительный узел (10), соединенный с возможностью передачи данных с измерительным электронным прибором (20).

Устройство относится к измерительной технике для физических исследований свойств жидкостей. Устройство позволяет измерять поверхностное натяжение химически агрессивных расплавов тугоплавких веществ с высокими (больше 0,1 МПа) давлениями собственных паров над жидкой фазой, находящихся в инертной атмосфере.

Изобретение относится к измерительным приборам, в частности к приборам для измерения запыленности воздуха, а именно к измерителям массовой концентрации пылевых частиц и системам для измерения массовой концентрации пылевых частиц.
Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии и онкологии, и может быть использовано для дооперационного определения объема хирургического лечения высокодифференцированного рака щитовидной железы.

Изобретение относится к горному делу, в частности к нефтегазодобывающей промышленности, и касается устройств для подготовки керна с целью определения их трещиностойкости.

Изобретение относится к нефтегазодобывающей промышленности, в частности к устройствам высечного типа для отбора проб из напорных трубопроводов. Техническим результатом является повышение достоверности отбираемой пробы при одновременном устранении обратного клапана как отдельного устройства.
Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Раскрыта универсальная среда высушивания для стабилизации эритроцитарных диагностикумов туляремийных, используемая также в качестве разводящей жидкости, состоящая из 50 мл полиглюкина с добавлением 1,6 мл 2,0% раствора твин-80, приготовленного в 0,9% растворе натрия хлорида, и 5 мг азида натрия с последующим перемешиваем до полного растворения компонентов при температуре (22±4)°С.

Изобретение относится к устройствам для взятия проб газожидкостной среды, в том числе и нефти из трубопроводов и отстойников для нефти. Устройство для отбора проб газожидкостной среды, включающее в себя основную и вспомогательную сообщающиеся емкости для сбора соответственно жидкости и газа и входной патрубок для отбора продукции.

Раскрыты системы и способы (варианты) для измерения параметров твердых частиц в выпускной системе транспортного средства. В одном примере система содержит первую наружную трубку с некоторым количеством впускных отверстий на расположенной выше по потоку поверхности, вторую внутреннюю трубку с некоторым количеством впускных отверстий на расположенной ниже по потоку поверхности и датчик твердых частиц, расположенный внутри второй внутренней трубки.

Изобретение относится к сельскохозяйственному приборостроению. Полевой бесконтактный профилограф содержит массивное основание, на которое установлен стержень.

Группа изобретений относится к биотехнологии, а именно к способу получения В-клеток, секретирующих антиген-специфические антитела. Для получения B-клеток проводят следующие этапы: получение B-клеток из крови кролика; мечение IgG+-B-клеток и/или CD138+-B-клеток; инкубацию B-клеток при температуре 37°C в течение одного часа в среде для совместного культивирования перед размещением меченых B-клеток в виде одиночных клеток с последующим совместным культивированием с фидерными клетками в среде для совместного культивирования; выбор B-клетки, пролиферирующей на этом этапе; получение B-клетки. Способ также может включать этап центрифугирования размещенных по отдельности В-клеток перед совместным культивированием. Фидерными клетками являются мышиные клетки EL-4 B5, а фидерная смесь содержит интерлейкин-1-бета, фактор некроза опухоли альфа, клетки золотистого стафилококка штамма Cowan, BAFF, интерлейкин-2, и/или интерлейкин-10, и/или интерлейкин-6, и/или интерлейкин-4. Для получения антител берут популяцию зрелых B-клеток, полученную из крови кролика; проводят мечение IgG+-B-клеток и/или CD138+-B-клеток по меньшей мере одной флуоресцентной меткой; инкубируют B-клетки при температуре 37°C в течение одного часа в среде для совместного культивирования перед размещением одиночных клеток из популяции меченых B-клеток в отдельные контейнеры; культивируют размещенные по отдельности B-клетки в присутствии фидерных клеток и фидерной смеси; определяют специфичность связывания антител и аминокислотную последовательность вариабельных доменов легкой и тяжелой цепей специфически связывающихся антител путем ПЦР с обратной транскрипцией; вводят нуклеиновую кислоту, кодирующую вариабельные домены легкой и тяжелой цепей моноклонального антитела для экспрессии антитела; вводят нуклеиновую кислоту в клетку; культивируют клетку и выделяют антитело из клетки или клеточного супернатанта. Группа изобретений позволяет быстро охарактеризовать специфичность связывания моноклональных антител, полученных из отдельных В-клеточных клонов, полученных из крови кролика. 2 н. и 5 з.п. ф-лы, 13 табл., 22 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу сравнительного исследования эффективности локальных кровоостанавливающих средств в эксперименте in vitro, отличающемуся тем, что из полотна ЛКС с помощью Dermo-Punch получают цилиндр диаметром, равным внутреннему сечению Dermo-Punch и вакутайнера, образцы ЛКС и вакутайнеры выдерживают в термостате при +37°С 10 минут, после чего забирают кровь вакуумным способом и в течение 15 секунд на дно вакутайнера погружают локальные кровоостанавливающие средства, пробирки закупоривают и инкубируют 30 минут при +37°С, затем центрифугируют для получения сыворотки крови, исследуют концентрацию кальция в плазме крови и сравнивают значения в контрольной группе, в которой не производилось погружение образца в кровь донора, и группах исследования, и если значения концентрации кальция в группе исследования меньше, чем в контрольной и других группах, то это свидетельствует о выраженной эффективности локального кровоостанавливающего средства. Изобретение обеспечивает повышение точности и объективизацию исследований при разработке экспериментальных образов гемостатических средств локального действия. 1 табл., 1 пр.

Наверх