Способ определения и обнаружения в моче фторсодержащих лекарственных средств в комбинированных сочетаниях

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в химико-токсикологических и контрольно-аналитических лабораториях для разделения, идентификации и анализа офлоксацина, линезолида и эфавиренза в комбинированных сочетаниях. Способ определения и обнаружения в моче офлоксацина, линезолида и эфавиренза в комбинированных сочетаниях путем хроматографирования в тонком слое сорбента раствора определяемых веществ и стандартных образцов веществ-свидетелей отличается тем, что готовят испытуемый раствор путем изолирования определяемых веществ из мочи дихлорметаном и насыщенным раствором натрия хлорида при рН 4,0, проводят хроматографирование в тонком слое сорбента на пластинках «Сорбфил» в системе растворителей диэтиловый эфир - хлороформ - 25% раствор аммиака в соотношении 15:2:1,5 и обнаружение зон веществ на хроматограмме в УФ-свете. 1 пр.

 

Предлагаемое изобретение относится к области медицины и может быть использовано в химико-токсикологических и контрольно-аналитических лабораториях для разделения, идентификации и анализа офлоксацина, линезолида и эфавиренза в комбинированных сочетаниях.

Исследуемые фторсодержащие лекарственные средства применяются для лечения бактериальных и вирусных инфекций, но различаются механизмами действия. Так, офлоксацин относится к группе антибактериальных препаратов, является представителем фторхинолонов II поколения. Линезолид - синтетический антибиотик группы оксазолидинонов. Эфавиренз - антиретровирусный препарат. По механизму действия представляет собой селективный ненуклеозидный ингибитор обратной транскриптазы (ННИОТ) вируса иммунодефицита человека тип 1 (ВИЧ-1). Возникновение острых отравлений лекарственными препаратами, в том числе антибактериальными и противовирусными, часто связано с ошибочным приемом неправильно подобранной дозировки, превышающей требуемую, длительным применением препаратов, повышенной чувствительностью к ним отдельных лиц, сочетанием их с другими лекарственными средствами, а также с суицидальной целью при намеренном приеме более высокой дозы.

Наиболее часто встречаются случаи отравления офлоксацином, линезолидом и эфавирензом в сочетании с антидепрессантами, анальгетиками, седативными, антигистаминными, противотуберкулезными лекарственными средствами -амитриптилином, мелипрамином, новокаином, морфином, фенобарбиталом, димедролом, рифампицином.

Одной из актуальных проблем химико-токсикологического и фармацевтического анализа является разработка новых и усовершенствование существующих способов идентификации комбинированных сочетаний лекарственных средств. Для химико-токсикологического и аналитического контроля целесообразно использовать простые, но надежные и производительные экспрессные методики анализа.

Среди современных методов химико-токсикологического и фармацевтического анализа важное место занимает хроматография в тонком слое сорбента, которая широко применяется как для целей разделения, так и для идентификации лекарственных средств в комбинированных сочетаниях.

Наиболее близким является способ определения циннаризина в комбинированных сочетаниях с психотропными лекарственными средствами, путем приготовления растворов испытуемых веществ с последующим хроматографированием на хроматографических пластинках «Армсорб» в системе растворителей н-гептан - этанол 95%-25% раствор аммиака (6:2:2) и идентификацией в УФ-свете при длине волны 254 нм и реактивом Драгендорфа (Чмелевская Н.В., Илларионова Е.А., Цыренов Б.М. Разработка методик обнаружения циннаризина в комбинированных сочетаниях с психотропными лекарственными средствами // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. трудов. - Пятигорск, 2012. - Вып.67. - С. 290-291). В этой работе предложен способ хроматографирования в тонком слое сорбента для разделения и идентификации циннаризина в сочетании с амитриптилином, аминазином, азалептином, галоперидолом, трифтазином и неулептилом, который оказался неселективным для определения офлоксацина, линезолида и эфавиренза в сочетании с антидепрессантами, анальгетиками, седативными, антигистаминными, противотуберкулезными лекарственными средствами -амитриптилином, мелипрамином, новокаином, морфином, фенобарбиталом, димедролом, рифампицином. Предложенные автором условия хроматографирования не позволяют разделить исследуемые комбинированные сочетания фторсодержащих лекарственных средств после изолирования их из мочи.

В предлагаемом способе авторы используют в качестве растворителя для изолирования испытуемых растворов из мочи - дихлорметан и насыщенный раствор натрия хлорида при рН 4, чувствительность определения в 3 раз выше, чем в прототипе, показана возможность хроматографирования на пластинках «Сорбфил» в системе растворителей диэтиловый эфир - хлороформ - 25% раствор аммиака в соотношении 15:2:1,5 и идентификацией в УФ-свете при длине волны 254 нм.

Использование в качестве растворителя дихлорметана и насыщенного раствора натрия хлорида при рН 4 и системы растворителей диэтиловый эфир - хлороформ - 25% раствор аммиака (15:2:1,5) позволяет четко разделить пятна определяемых веществ, что повышает селективность, объективность и чувствительность анализа, которая составила 0,01 мкг/мл.

Технический результат достигается путем изолирования из мочи определяемых веществ и приготовления растворов стандартных образцов сравнения с последующим их хроматографированием и обнаружением УФ-светом.

Новым в достижении технического результата является то, что изолирование испытуемых веществ из мочи осуществляют дихлорметаном и насыщенным раствором натрия хлорида при рН 4,0.

Новым является также то, что в качестве подвижной фазы используют систему растворителей диэтиловый эфир - хлороформ - 25% раствор аммиака в соотношении 15:2:1,5.

Исследуемые лекарственные вещества характеризуются наличием в молекулах различных функциональных групп и поэтому отличаются физико-химическими свойствами. Исходя из этого, оптимальным методом их разделения следует считать метод хроматографии в тонком слое сорбента, который характеризуется экспрессностью, селективностью, высокой чувствительностью, несложным аппаратурным оснащением, простотой выполнения.

Тонкослойная хроматография (ТСХ) является наиболее распространенным методом анализа лекарственных, наркотических веществ и их метаболитов в биологических объектах и на этапе скрининга служит преобладающим источником информации. Данный метод применяется в общем и частном скрининге.

Для выбора условий разделения исследуемых веществ методом ТСХ использовали пластины на основе силикагеля «Сорбфил», которые имеют высокую степень активности, стандартизированную толщину сорбента.

Детекцию пятен проводили путем просмотра пластин в УФ-свете при длине волны 254 нм.

Предварительно нами была определена хроматографическая подвижность исследуемых веществ в общих системах растворителей, наиболее часто применяемых для веществ основного характера в химико-токсикологическом анализе. В качестве общих систем использовали: I. Бензол - диоксан - 25% раствор аммиака (12:7:1); П. Этилацетат - хлороформ - 25% раствор аммиака (17:2:1);

III. Хлороформ - этанол - 25% раствор аммиака (30:30:1);

IV. Толуол - ацетон - 25% раствор аммиака (50:50:1);

V. Этилацетат - ацетон - этанол - 25% раствор аммиака (50:45:4:1);

VI. Этанол - 25% раствор аммиака (49,25:0,75);

VII. Этилацетат - метанол - 25% раствор аммиака (17:2:1).

Система этилацетат - хлороформ - 25% раствор аммиака (17:2:1) является наиболее подходящей из вышеперечисленных сочетаний для разделения исследуемых лекарственных веществ. Данная система может быть рекомендована в скрининге при проведении ненаправленного анализа. В остальных общих системах, разделение исследуемых веществ идет недостаточно четко, наблюдается размытие зон адсорбции, а также наличие «хвостов».

Для увеличения значения ΔRf между зонами исследуемых веществ провели варьирование количеством частей подвижной фазы этилацетат - хлороформ - 25% раствор аммиака (17:2:1) (базовая система).

Увеличение количества этилацетата в системе до двадцати частей привело к росту подвижности только эфавиренза, подвижность офлоксацина и рифампицина при этом не изменилась, а у других лекарственных веществ уменьшилась. Уменьшение количества этилацетата от семнадцати частей до десяти, восьми и пяти соответственно увеличило подвижность эфавиренза и офлоксацина (кроме уменьшения до пяти частей, в случае которого подвижность не изменилась). Подвижность рифампицина не изменилась, а у остальных лекарственных веществ уменьшилась. Изменение в системе количества хлороформа от двух до трех частей не приводит к увеличению подвижности всех исследуемых лекарственных веществ. Подвижность эфавиренза, офлоксацина и рифампицина при этом не меняется, у остальных лекарственных веществ уменьшается. Уменьшение в системе количества хлороформа от двух частей до одной увеличивает подвижность эфавиренза. Подвижность офлоксацина и рифампицина остается на прежнем уровне, у всех остальных исследуемых веществ уменьшается.

Таким образом, варьирование количеством этилацетата и хлороформа в системе не привело к существенному увеличению ΔRf между зонами, а в некоторых случаях даже уменьшило разделяющую способность исследуемых соединений. В связи с этим провели замену этилацетата на диэтиловый эфир и варьировали количеством диэтилового эфира от 17 до 5 частей. Наилучшее разделение компонентов наблюдалось в системе диэтиловый эфир -хлороформ - 25% раствор аммиака (15:2:1).

Учитывая тот факт, что исследуемые нами лекарственные препараты обладают основными свойствами, в ходе дальнейших исследований провели варьирование количеством аммиака в системе. Изменение количества 25% раствора аммиака в системе по-разному сказывается на хроматографической подвижности исследуемых лекарственных веществ. Хроматографическая подвижность линезолида, морфина, амитриптилина, новокаина, мелипрамина, димедрола и фенобарбитала снижается при уменьшении количества аммиака до 0,7 и 0,5 частей в системе, а эфавиренза и рифампицина, наоборот, увеличивается. Подвижность офлоксацина не изменяется. Подвижность фенобарбитала при уменьшении до 0,7 частей не изменяется. Лучшей разделяющей способностью обладает система, в которой количество аммиака составляет 1,5. В результате проведенных экспериментов найдена подвижная фаза диэтиловый эфир - хлороформ - 25% раствор аммиака (15:2:1,5), позволяющая разделить комбинированные сочетания офлоксацина, линезолида, эфавиренза с антидепрессантами, анальгетиками, седативными, антигистаминными, противотуберкулезными лекарственными средствами, наиболее часто применяемых совместно, и получить зоны веществ правильной формы.

Сопоставительный анализ с прототипом показывает, что заявляемое техническое решение отличается тем, что в качестве растворителя для изолирования офлоксацина, линезолида и эфавиренза используют дихлорметан и насыщенный раствор натрия хлорида при рН 4,0 соответственно, хроматографирование проводят в системе диэтиловый эфир - хлороформ - 25% раствор аммиака в соотношении 15:2:1,5, что соответствует критерию изобретения «новизна».

Новая совокупность признаков обеспечивает повышение селективности, объективности и чувствительности анализа, что соответствует критерию «промышленная применимость».

При анализе известных решений было выявлено, что в них отсутствуют сведения о влиянии отличительных признаков на достижение поставленного технического результата, следовательно, изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».

Способ осуществляют следующим образом: 10 мл мочи, содержащей смесь исследуемых веществ, переносят в делительную воронку, добавляют 25% раствор аммиака до рН 4,0, 10 мл насыщенного раствора натрия хлорида, 30 мл дихлорметана и затем проводят экстракцию трехкратно в течение 7 минут. Извлечения переносят в фарфоровую чашку и оставляют при комнатной температуре до удаления органического растворителя. Полученный сухой остаток растворяют в 2 мл хлороформа и перемешивают.

На линию старта пластинки «Сорбфил» размером 10×10 см микропипеткой наносят по 0,4 мл раствора смеси. Рядом наносят по 0,4 мл растворов стандартных образцов веществ-свидетелей (СОВС) в хлороформе, содержащихся в смеси. Пластинку сушат на воздухе в течение 5 минут, а затем помещают в хроматографическую камеру со смесью растворителей: диэтиловый эфир - хлороформ - 25% раствор аммиака (15:2:1,5) и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт растворителя пройдет почти до конца пластинки, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 20 минут и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм.

Для приготовления растворов стандартных образцов веществ-свидетелей (СОВС) берут 0,1 мкг СОВС и растворяют в 10 мл хлороформа.

Предлагаемый способ поясняется следующими примерами.

Пример 1. Готовят растворы извлечения из мочи и растворы веществ-свидетелей описанным выше способом. Хроматографируют испытуемые растворы, используя оптимальную систему растворителей. Далее обнаруживают зоны веществ на хроматограмме УФ-светом.

На хроматограмме обнаружены зоны веществ со следующими значениями Rf офлоксацин 0,01±0,01; линезолид 0,29±0,01; эфавиренз 0,72±0,03; амитриптилин 0,52±0,01; мелипрамин 0,59±0,01; новокаин 0,65±0,02; фенобарбитал 0,35±0,01; морфин 0,10±0,02; димедрол 0,45±0,02; рифампицин 0,23±0,01.

Данные примеры подтверждают, что предлагаемый способ может быть использован для химико-токсикологического и фармацевтического анализа офлоксацина, линезолида и эфавиренза в комбинированных сочетаниях с антидепрессантами, анальгетиками, седативными, антигистаминными, противотуберкулезными лекарственными средствами - амитриптилином, мелипрамином, новокаином, морфином, фенобарбиталом, димедролом, рифампицином.

Таким образом, предлагаемый способ определения и обнаружения офлоксацина, линезолида и эфавиренза в комбинированных сочетаниях после извлечения их из мочи с использованием тонкослойной хроматографии позволяет повысить селективность, объективность и чувствительность анализа.

Способ определения и обнаружения в моче офлоксацина, линезолида и эфавиренза в комбинированных сочетаниях путем хроматографирования в тонком слое сорбента раствора определяемых веществ и стандартных образцов веществ-свидетелей, отличающийся тем, что готовят испытуемый раствор путем изолирования определяемых веществ из мочи дихлорметаном и насыщенным раствором натрия хлорида при рН 4,0, проводят хроматографирование в тонком слое сорбента на пластинках «Сорбфил» в системе растворителей диэтиловый эфир - хлороформ - 25% раствор аммиака в соотношении 15:2:1,5 и обнаружение зон веществ на хроматограмме в УФ-свете.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к устройству и способу анализа, предоставляющим пользователю индикацию того, что используется достаточное количество анализируемого образца для точного результата.

Изобретение относится к области хроматографического анализа веществ и может быть использовано при разделении, идентификации и количественном определении серо- и азотсодержащих соединений органических соединений.
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в химико-токсикологических и контрольно-аналитических лабораториях для разделения, идентификации и анализа лекарственных средств.

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам стандартизации лекарственных препаратов, лекарственного растительного сырья, фитопрепаратов и биологически активных добавок по содержанию моносахаридов (глюкозы, ксилозы и рамнозы), и может быть использовано в фармацевтическом анализе, в химико-фармацевтической промышленности.

Изобретение относится к ветеринарной токсикологии и может быть использовано при определении содержания левомицетина в кормах животного происхождения. Заявленный способ определения левомицетина в кормах животного происхождения с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии включает отбор пробы корма массой от 200 до 500 мг, гомогенизацию, экстракцию 95% этанолом, фильтрацию экстракта, обезвоживание сернокислым натрием, упаривание, растворение сухого остатка в этилацетате, введение растворенного сухого остатка в жидкостный хроматограф с детектором спектрофотометрическим UVV 104М и колонкой Диасфер-110С-16 (150×4) мм, с размером частиц сорбента 5 мкм, с использованием элюента: смеси ацетонитрил-вода-диэтиламин в соотношении 30:70:0,1, обработку результатов анализа.

Изобретение относится к способу определения подлинности сиропа пижмы обыкновенной. Указанный способ предполагает определение в сиропе методом тонкослойной хроматографии доминирующего компонента цветков пижмы обыкновенной - флавоноида тилианина, который предварительно извлекают путем обработки сиропа равным количеством ацетона.

Изобретение относится к способам стандартизации лекарственных препаратов, биологически активных добавок, премиксов, лекарственного растительного сырья, растительных масел, масляных экстрактов, изделий пищевой, химической и косметологической отраслей промышленности по содержанию основных жирорастворимых витаминов и может быть использовано в фармацевтической, химической, косметологической и пищевой отраслях промышленности для определения подлинности и степени чистоты жирорастворимых витаминов A, D2, E и β-каротина при совместном присутствии в одно- и многокомпонентных препаратах.
Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано для обнаружения и количественного определения кодеина в различных объектах, в частности в лекарственных препаратах.

Настоящее изобретение относится к области биохимии и описывает способ количественного определения классов липидов и подклассов фосфолипидов в биологических материалах, заключающийся в том, что методом тонкослойной хроматографии разделяют общие липиды на классы и фосфолипиды на подклассы, проявляют их на хроматограмме и количество определяют с использованием денситометрии, причем липиды, остающиеся на старте после разделения общих липидов на классы, сдвигают на 0,5 см выше, проявляют классы липидов и подклассы фосфолипидов на хроматограмме парами йода и рассчитывают площади пиков, соответствующие интенсивности окраски треков на хроматограмме с помощью денситометра, а количество общих фосфолипидов, других классов липидов и подклассов фосфолипидов определяют расчетным методом, выделяя линиями каждый трек отдельно и производят суммарный расчет площадей треков, берут эту цифру за 100% и определяют процент каждого класса липидов от общих липидов или каждого подкласса фосфолипидов от общих фосфолипидов, составляя пропорцию.

Изобретение относится к области аналитической химии и предназначено для выделения монослоя вещества для целей последующего анализа свойств вещества. Способ выделения монослоя вещества включает нанесение жидкой пробы с растворенным в ней веществом на линию старта на хроматографическую пластину, содержащую слой сорбента.

Изобретение относится к области аналитической химии. Способ контроля содержания противотуберкулезных препаратов (ПТП) основного ряда и их токсичных метаболитов в плазме крови заключается в подготовке плазмы крови к хроматографическому анализу путем добавления антиоксиданта, в качестве которого берут аскорбиновую кислоту, осаждении белков органическим растворителем, разбавлении пробы деионизированной водой в соотношении 1:10, проведении анализа методом обращенно-фазовой жидкостной хроматографии в режиме градиентного элюирования, детектировании сигналов ПТП с использованием тройного квадрупольного тандемного масс-спектрометрометра с ионизацией электрораспылением, в качестве контролируемых ПТП определяют пиразинамид, изониазид, этамбутол и рифампицин, в качестве токсичных метаболитов - пиразиноевую кислоту, 25-О-деацетилрифампицин, ацетилизониазид и изоникотиновую кислоту, измерении аналитических параметров анализируемого образца и, сравнивая их с аналитическими параметрами хроматографического анализа раствора стандартов ПТП с известными концентрациями, осуществление качественного и количественного определения ПТП и их метаболитов в плазме крови для контроля их допустимых доз.

Изобретение относится к области аналитической химии, а именно к газохроматографическому анализу карбоновых кислот. Способ количественного газохроматографического анализа паров пропионовой кислоты в зараженном воздухе, включающий анализ пробы воздуха, зараженного парами пропионовой кислоты, на газовом хроматографе с пламенно-ионизационным детектором, отличается тем, что в поглотительном приборе со стеклянной пористой пластиной в качестве поглотительного раствора используется смесь этилового спирта и воды в соотношении по объему 1:1.

Изобретение относится к устройству и способу исследования термической, термоокислительной и гидролитической деструкции полимерных материалов. Устройство для реализации способа исследования термической, термоокислительной и гидролитической деструкции полимерных материалов, состоящее из камеры для проведения процессов пиролиза, соединенной с хроматографом через кран-дозатор и снабженной пробкой-заглушкой с держателем тигля для образцов, линией подачи газа вне ячейки на детектор хроматографа, второй линией подачи газа через кран-дозатор в ячейку с последующей подачей образовавшихся продуктов деструкции полимера в хроматограф и третьей газовой линией предназначенной для постоянной продувки ячейки с минимальным расходом с целью исключения влияния продуктов разложения на деструкцию полимера.

Изобретение относится к способу определения парафина в нефтесодержащих отложениях, включающий осаждение асфальтенов растворителем, отстаивание реакционной смеси в темном месте и ее последующую фильтрацию, удаление растворителя из полученного фильтрата и адсорбцию смолистых веществ оксидом алюминия Al2O3, согласно которому из обессмоленной фракции удаляют растворитель, остаток растворяют в нагретой смеси толуола и ацетона, охлаждают, выдерживают при минусовой температуре, обеспечивающей кристаллизацию парафинов, отфильтровывают на холодном фильтре кристаллизовавшийся осадок парафинов и промывают смесью толуола и ацетона, сохраняя температуру кристаллизации, после чего смывают осадок горячим толуолом, упаривают, сушат до постоянного веса и взвешивают.

Изобретение относится к картриджу для пассивной адсорбции углеводородов и может быть использовано для адсорбции углеводородов из газовоздушной смеси почвогрунта с последующим определением их массовой концентрации методом хромато-масс-спектрометрии.

Настоящее изобретение относится к области анализа небиологических материалов физическими и химическими методами. Способ оценки термостойкости фосфорорганических пестицидов путем определения степени разложения дисперсной фракции аэрозоля фосфорорганического соединения состоит из разделения аэрозоля на дисперсные фракции с помощью импактора и определения в экстрактах проб изменения доли «рабочего» фосфора в общем, отличающийся тем, что общий фосфор определяют по площади неразделенного хроматографического пика всех фосфорорганических компонентов пробы газохроматографическим методом с пламенно-фотометрическим детектированием, используя вместо хроматографической колонки полый капилляр, в условиях минимальной скорости азота через капилляр, равной 0,1 см3/мин, и постоянной температуры термостата капилляра 250°С, равной температуре детектора.

Изобретение относится к газохроматографическим методам анализа нефтерастворимых малолетучих полярных соединений и может быть использовано в нефтяной и других отраслях промышленности для их количественного определения.

Изобретение относится к области экспериментальной медицины и микробиологии и описывает способ определения наличия газовых сигнальных молекул в метаболитах микробиоты человека.

Изобретение относится к фармации, фармакологии и клинической фармакологии. Способ количественного определения дабигатрана в сыворотке крови человека включает приготовление калибровочных и анализируемых образцов путем добавления прометазина в качестве внутреннего стандарта, осаждение белков метанолом, перемешивание, центрифугирование с дальнейшим отбором супернатанта, его разбавление деионизированной водой, перемешивание с последующим хроматографическим разделением компонентов пробы, регистрацию сигнала масс-спектрометрического детектора, полученного в режиме мониторинга множественных реакций при положительной ионизации.

Изобретение относится к аналитической химии, а именно методам исследования качественного состава и анализа количественного содержания многокомпонентных газовых смесей в технологическом потоке.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в химико-токсикологических и контрольно-аналитических лабораториях для разделения, идентификации и анализа офлоксацина, линезолида и эфавиренза в комбинированных сочетаниях. Способ определения и обнаружения в моче офлоксацина, линезолида и эфавиренза в комбинированных сочетаниях путем хроматографирования в тонком слое сорбента раствора определяемых веществ и стандартных образцов веществ-свидетелей отличается тем, что готовят испытуемый раствор путем изолирования определяемых веществ из мочи дихлорметаном и насыщенным раствором натрия хлорида при рН 4,0, проводят хроматографирование в тонком слое сорбента на пластинках «Сорбфил» в системе растворителей диэтиловый эфир - хлороформ - 25 раствор аммиака в соотношении 15:2:1,5 и обнаружение зон веществ на хроматограмме в УФ-свете. 1 пр.

Наверх