Жидкие составы белков, содержащие средства для снижения вязкости

Группа изобретений относится к концентрированным с низкой вязкостью малообъемным жидким фармацевтическим составам белков. Жидкий фармацевтический состав для инъекции содержит 174-230 мг/мл моноклонального антитела, имеющего молекулярную массу 120-250 кДа, прокаин или его фармацевтически приемлемую соль в концентрации 0,15-0,25 М и фармацевтически приемлемый растворитель, где указанный состав, находясь в объеме, подходящем для инъекции, имеет абсолютную вязкость 1-100 сП при 25°C, как измеряют, используя вискозиметр с конусом и плоскостью или микрожидкостный вискозиметр, и абсолютная вязкость указанного состава является меньшей, чем абсолютная вязкость контрольной композиции, содержащей указанное антитело и указанный фармацевтически приемлемый растворитель, но не содержащей прокаин или его фармацевтически приемлемую соль, и где абсолютная вязкость является экстраполированной вязкостью при нулевой скорости сдвига. Также раскрыты способ введения субъекту терапевтически эффективного количества моноклонального антитела, способ получения жидкого фармацевтического состава и лиофилизированная композиция. Группа изобретений обеспечивает быстрое и удобное введение посредством подкожной или внутримышечной инъекции вместо длительной внутривенной инфузии. 4 н. и 16 з.п. ф-лы, 9 ил., 40 табл., 28 пр.

 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

По данной заявке испрашивается приоритет и преимущества в соответствии с Предварительной заявкой на патент США № 62/030,521, поданной 29 июля 2014 г., озаглавленной “Low-Viscosity Protein Formulations Containing Hydrophobic Salts”; Предварительной заявкой на патент США № 62/026,497, поданной 18 июля 2014 г., озаглавленной “Low-Viscosity Protein Formulations Containing GRAS Viscosity-Reducing Agents”; Предварительной заявкой на патент США № 62/008,050, поданной 5 июня 2014 г., озаглавленной “Low-Viscosity Protein Formulations Containing Ionic Liquids”; Предварительной заявкой на патент США № 61/988005, поданной 2 мая 2014 г., озаглавленной “Low-Viscosity Protein Formulations Containing Organophosphates;” Предварительной заявкой на патент США № 61/946436, поданной 28 февраля 2014 г., озаглавленной “Concentrated, Low-Viscosity Infliximab Formulations”; Предварительной заявкой на патент США № 61/943197, поданной 21 февраля 2014 г., озаглавленной “Concentrated, Low-Viscosity, High-Molecular-Weight-Protein Formulations”; Предварительной заявкой на патент США № 61/940,227, поданной 14 февраля 2014 г., озаглавленной “Concentrated, Low-Viscosity High-Molecular-Weight Protein Formulations”; и Предварительной заявкой на патент США № 61876621, поданной 11 сентября 2013 г., озаглавленной “Concentrated, Low-Viscosity, High-Molecular-Weight Protein Formulations”, раскрытия которых явным образом включены в данное описание посредством ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Изобретение, в целом, относится к области инъекционных, имеющих низкую вязкость, фармацевтических композиций высококонцентрированных белков и способов их получения и применения.

ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Моноклональные антитела (mAbs) являются важными терапевтическими средствами на белковой основе для лечения различных заболеваний человека, таких как злокачественные новообразования, инфекционные заболевания, воспаление и аутоиммунные заболевания. Более 20 продуктов-моноклональных антител получили разрешение на применение от Администрации США по пищевым продуктам и лекарственным веществам (FDA), и примерно 20% всех биофармацевтических препаратов, оцениваемых в настоящее время в клинических испытаниях, составляют моноклональные антитела (Daugherty et al., Adv. Drug Deliv. Rev, 58:686-706, 2006; и Buss et al., Curr. Opinion in Pharmacol. 12:615-622, 2012).

Терапии, основанные на моноклональных антителах, обычно назначают повторно в течение продолжительного периода времени, и они требуют дозирования в нескольких мг/кг. Растворы или суспензии антитела могут вводиться через парентеральные пути, таким образом, как посредством внутривенных (ВВ) инфузий, и подкожной (ПК) или внутримышечной (ВМ) инъекции. ПК или ВМ пути снижают затраты на лечение, увеличивают исполнительность пациента и улучшают удобство для пациентов и медицинских работников во время введения в сравнении с ВВ путем. Чтобы быть эффективными и фармацевтически приемлемыми, композиции для парентерального введения должны предпочтительно быть стерильными, стабильными, инъекционными (например, через шприц), и нераздражающими на участке инъекции, в соответствии с руководством FDA. Вследствие небольших объемов, требуемых для подкожной (обычно ниже приблизительно 2 мл) и внутримышечной (обычно ниже приблизительно 5 мл) инъекции, для этих путей введения высокодозовых белковых терапий требуются концентрированные белковые растворы. Эти высокие концентрации часто приводят к очень вязким композициям, которые трудно вводить посредством инъекции, вызывают боль на участке инъекции, часто являются неточными и/или могут иметь пониженную химическую и/или физическую стабильность.

Эти характеристики приводят к требованиям к производству, хранению и применению, достижение которых может быть проблематичным, в частности, для композиций, имеющих высокие концентрации высокомолекулярных белков, таких как моноклональные антитела. Все белковые лекарственные средства в некоторой степени подвержены физической и химической нестабильности, такой как агрегация, денатурация, сшивка, деамидирование, изомеризация, окисление и клипирование (Wang et al., J. Pharm. Sci. 96:1-26, 2007). Таким образом, разработка оптимальной композиции является первостепенной задачей при создании промышленно перспективных белковых фармацевтических препаратов.

Высокие концентрации белков создают проблемы, относящиеся к физической и химической стабильности белка, а также трудности с производством, хранением и доставкой белковой композиции. Одной проблемой является тенденция белков к агрегации и образованию частиц во время обработки и/или хранения, что создает трудности при манипуляциях во время дополнительной обработки и/или доставки. Концентрационно-зависимые деградация и/или агрегация являются главными проблемами при разработке белковых композиций с более высокими концентрациями. В дополнение к потенциальным для ненативного белка агрегации и образованию частиц, может происходить обратимая самоассоциация в водных растворах, которая способствует, среди прочего, увеличенной вязкости, которая осложняет доставку посредством инъекции. (См., например, Steven J. Shire et al., J. Pharm. Sci. 93:1390-1402, 2004.) Увеличенная вязкость является одной из основных проблем, связанной с концентрированными белковыми составами, воздействующей как на процессы получения, так и способность к легкой доставке таких составов общепринятыми средствами. (См., например, J. Jezek et al., Advanced Drug Delivery Reviews 63:1107–1117, 2011.)

Высоковязкие жидкие композиции трудно производить, забирать в шприц и инъекционно вводить подкожно или внутримышечно. Приложение усилия при операциях с вязкими композициями может приводить к избыточному вспениванию, которое может в дальнейшем денатурировать и инактивировать терапевтически активный белок. Для растворов с высокой вязкостью также требуются иглы с более крупными диаметрами для инъекции, и они производят больше боли на участке инъекции.

Доступные в настоящее время промышленные продукты моноклональных антител, вводимые посредством ПК или ВМ инъекции, обычно составляют в водных буферах, таких как фосфатный или L-гистидиновый буфер, с эксципиентами или поверхностно-активными веществами, такие как маннит, сахароза, лактоза, трегалоза, ПОЛОКСАМЕР^® (неионные триблоксополимеры, состоящие из центральной гидрофобной цепи полиоксипропилена (поли(пропиленоксида)), с примыкающими двумя гидрофильными цепями полиоксиэтилена (поли(этиленоксида))), или ПОЛИСОРБАТ^® 80 (ПЭГ(80)сорбитанмонолаурат), для предотвращения агрегации и улучшения стабильности. Приведенные в литературе концентрации антитела, составленного, как описано выше, обычно составляют до приблизительно 100 мг/мл (Wang et al., J. Pharm. Sci. 96:1-26, 2007).

Патент США № 7758860 описывает снижение вязкости в композициях низкомолекулярных белков, с использованием буфера и снижающей вязкость неорганической соли, такой как хлорид кальция или хлорид магния. Эти же самые соли, однако, показали небольшое воздействие на вязкость композиции высокомолекулярного антитела (IMA-638). Как описано в Патенте США № 7666413, вязкость водных композиций высокомолекулярных белков была снижена посредством добавления таких солей, как гидрохлорид аргинина, тиоцианат натрия, аммония тиоцианат, аммония сульфат, аммония хлорид, кальция хлорид, хлорид цинка или ацетат натрия в концентрации большей, чем приблизительно 100 мМ, или, как описано в Патенте США № 7740842, посредством добавления органических или неорганических кислот. Однако эти соли не снижают вязкость до желательного уровня, и в некоторых случаях делают композицию такой кислой, что она, вероятно, будет вызывать боль на участке инъекции.

Патент США № 7666413 описывает композиции с пониженной вязкостью, содержащие конкретные соли, и восстановленное моноклональное антитело против IgE, но с максимальной концентрацией антитела, равной только до приблизительно 140 мг/мл. Патент США № 7740842 описывает композиции моноклональных антител E25 против IgE, содержащие буфер ацетат/уксусная кислота с концентрациями антител до 257 мг/мл. Было показано, что добавление солей, таких как NaCl, CaCl₂ или MgCl₂, снижает динамическую вязкость в условиях высокой скорости сдвига; однако, при низкой скорости сдвига соли производили нежелательное и резкое увеличение динамической вязкости. Дополнительно, неорганические соли, такие как NaCl, могут понижать вязкость раствора и/или уменьшать агрегацию (EP 1981824).

Также были описаны неводные композиции антител или белков. WO2006/071693 описывает неводную суспензию, содержащую 100 мг/мл моноклонального антитела в композиции, имеющей усилитель вязкости (поливинилпирролидон, ПВП) и растворитель (бензилбензоат или ПЭГ 400). WO2004/089335 описывает неводные суспензионные композиции лизоцима с концентрацией 100 мг/мл, содержащие ПВП, глюкофурол, бензилбензоат, бензиловый спирт или ПЭГ 400. US2008/0226689A1 описывает неводные, вязкие композиции 100 мг/мл человеческого гормона роста (hGH), имеющие одну фазу и три компонента несущей среды (полимер, поверхностно-активное вещество и растворитель). Патент США № 6730328 описывает неводные, гидрофобные, неполярные несущие среды с низкой реакционной способностью, такие как перфтордекалин, для белковых композиций. Эти композиции являются неоптимальными и имеют высокую вязкость, которая затрудняют обработку, производство и инъекцию; ведет к наличию множества компонентов несущей среды в композициях; и имеются потенциальные регуляторные проблемы, связанные с использованием полимеров, еще не получивших разрешение на применение от FDA.

Были описаны альтернативные неводные композиции белков или антител с использованием органических растворителей, таких как бензилбензоат (Miller et al., Langmuir 26:1067-1074, 2010), бензилацетат, этанол или метилэтилкетон (Srinivasan et al., Pharm. Res. 30:1749-1757, 2013). В обоих случаях, достигали вязкости композиции меньшей, чем 50 сантипуаз (сП) при концентрации белков, равной по меньшей мере приблизительно 200 мг/мл. Патент США № 6252055 описывает композиции моноклональных антител с концентрациями в интервале от 100 мг/мл до 257 мг/мл. Композиции с концентрациями большими, чем приблизительно 189 мг/мл, демонстрировали резко увеличенные вязкости, низкую воспроизводимость, и трудность при обработке. Опубликованная заявка на патент США № 2012/0230982 описывает композиции антитела с концентрациями от 100 мг/мл до 200 мг/мл. Ни одна из этих композиций не имела достаточно низкой вязкости для простоты инъекции.

Du и Klibanov (Biotechnology and Bioengineering 108:632-636, 2011) описали пониженную вязкость концентрированных водных растворов альбумина бычьей сыворотки с максимальной концентрацией до 400 мг/мл и бычьего гамма-глобулина с максимальной концентрацией до 300 мг/мл. Guo et al. (Pharmaceutical Research 29:3102-3109, 2012) описали водные растворы четырех модельных моноклональных антител с низкой вязкостью, достигаемой с использованием гидрофобных солей. Композиция моноклонального антитела, используемая Guo имела первоначальную вязкость, перед добавлением солей, не больше, чем 73 сП. Вязкости многих фармацевтически важных моноклональных антител, с другой стороны, могут превышать 1000 сП при терапевтически уместных концентрациях.

Не является простым контролировать агрегацию и вязкость в высококонцентрированных растворах моноклональных антител (EP 2538973). Это подтверждается несколькими продуктами моноклональных антител, представленных в настоящее время на рынке в виде высококонцентрированных композиций (> 100 мг/мл) (EP 2538973).

Ссылки, цитируемые выше, демонстрируют, что в то время как многие группы пытались получить низковязкие композиции моноклональных антител и других терапевтически важных белков, все еще не удалось достичь действительно применимой композиции для многих белков. А именно, во многих из приведенных выше отчетов использовали средства, для которых профили безопасности и токсичности не были полностью установлены. Эти композиции, следовательно, могут столкнуться с более высокой регуляторной нагрузкой перед получением разрешения на применение, чем композиции, содержащие соединения, известные как безопасные. Несомненно, даже если было показано, что соединения значительно снижают вязкость, соединение может, в конечном счете, оказаться неподходящим для применения в композиции, предназначенной для инъекции человеку.

Многие фармацевтически важные высокомолекулярные белки, такие как моноклональные антитела, в настоящее время вводят посредством ВВ инфузии, чтобы доставить терапевтически эффективные количества белка, вследствие проблем с высокой вязкостью и другими свойствами концентрированных растворов крупных белков. Например, чтобы обеспечить терапевтически эффективное количество многих высокомолекулярных белков, таких как моноклональные антитела, в объемах, меньших, чем приблизительно 2 мл, часто требуются концентрации белка большие, чем 150 мг/мл.

Следовательно, целью настоящего изобретения является предоставление концентрированных низковязких жидких составов фармацевтически важных белков, в особенности, высокомолекулярных белков, таких как моноклональные антитела.

Дополнительной целью настоящего изобретения является предоставление концентрированныех низковязких жидких составов белков, в особенности, высокомолекулярных белков, таких как моноклональные антитела, способные к доставке терапевтически эффективных количеств этих белков в объемах, применимых для ПК и ВМ инъекции.

Дополнительной целью настоящего изобретения является предоставление концентрированных жидких составов белков, в особенности, высокомолекулярных белков, таких как моноклональные антитела, с низкой вязкостью, которая может улучшить способность проходить через иглу при введении препарата и/или исполнительность, удобство и комфорт пациента.

Также целью настоящего изобретения является предоставление способов получения и хранения концентрированных, низковязких композиций белков, в особенности, высокомолекулярных белков, таких как моноклональные антитела.

Дополнительной целью настоящего изобретения является предоставление способов введения низковязких, концентрированных жидких композиций белков, в особенности, высокомолекулярных белков, таких как моноклональные антитела.

Дополнительной целью настоящего изобретения является предоставление способов обработки высококонцентрированных биологических препаратов с пониженной вязкостью с использованием методов концентрирования и фильтрации, известных специалистам в области.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Разработаны концентрированные низковязкие малообъемные жидкие фармацевтические составы белков. Такие составы могут быстро и удобно вводиться посредством подкожной (ПК) или внутримышечной (ВМ) инъекции вместо длительной внутривенной инфузии. Эти составы включают низкомолекулярные и/или высокомолекулярные белки, такие как моноклональные антитела, и средства для снижения вязкости, которые представляют собой обычно объемные полярные органические соединения, такие как многие из GRAS (Списка соединений, обычно считающихся безопасными, Администрации США по пищевым продуктам и лекарственным веществам), неактивные инъекционные ингредиенты и терапевтические средства, разрешенные FDA для применения.

Концентрация белков находится между приблизительно 10 мг/мл и приблизительно 5000 мг/мл, более предпочтительно от приблизительно 100 мг/мл до приблизительно 2000 мг/мл. В нескольких вариантах осуществления концентрация белков находится между приблизительно 100 мг/мл до приблизительно 500 мг/мл, более предпочтительно от приблизительно 300 мг/мл до приблизительно 500 мг/мл. Составы, содержащие белки и средства для снижения вязкости, являются стабильными при хранении при температуре, равной 4°C, в течение периода, равного по меньшей мере одному месяцу, предпочтительно по меньшей мере двум месяцам, и наиболее предпочтительно по меньшей мере трем месяцам. Вязкость композиции составляет менее чем приблизительно 75 сП, предпочтительно ниже 50 сП, и наиболее предпочтительно ниже 20 сП при приблизительно 25°C. В нескольких вариантах осуществления вязкость составляет менее чем приблизительно 15 сП или даже менее чем или приблизительно 10 сП при приблизительно 25°C. В некоторых вариантах осуществления вязкость композиции равна приблизительно 10 сП. Составы, содержащие белки и средства для снижения вязкости, обычно подвергают измерению при скоростях сдвига от приблизительно 0,6 с^-1 до приблизительно 450 с^-1, и предпочтительно от приблизительно 2 с^-1 до приблизительно 400 с^-1, когда измерение проводят, используя вискозиметр с конусом и плоскостью. Составы, содержащие белки и средства для снижения вязкости, обычно подвергают измерению при скоростях сдвига от приблизительно 3 с^-1 до приблизительно 55000 с^-1, и предпочтительно от приблизительно 20 с^-1 до приблизительно 2000 с^-1, когда измерение проводят, используя микрожидкостный вискозиметр.

Вязкость белковой композиции снижается посредством присутствия одного или нескольких средств для снижения вязкости. Если особенным образом не установлено иначе, термин “средство для снижения вязкости” включает как одиночные соединения, так и смеси из двух или более соединений. Предпочтительно, когда средство для снижения вязкости присутствует в композиции при концентрации менее чем приблизительно 1,0 M, предпочтительно менее чем приблизительно 0,50 M, более предпочтительно менее чем приблизительно 0,30 M, и наиболее предпочтительно менее чем приблизительно 0,15 M. В нескольких вариантах осуществления средство для снижения вязкости присутствует в композиции в концентрациях всего лишь 0,01 M. Композиции могут иметь вязкость, которая по меньшей мере приблизительно на 30% меньше, предпочтительно по меньшей мере приблизительно на 50% меньше, наиболее предпочтительно по меньшей мере приблизительно на 75% меньше, чем вязкость соответствующей композиции в таких же условиях, за исключением замены средства для снижения вязкости на соответствующие буфер или соль с приблизительно одинаковой концентрацией. В нескольких вариантах осуществления предоставлена низковязкая композиция, где вязкость соответствующей композиции без средства для снижения вязкости составляет больше чем приблизительно 200 сП, больше чем приблизительно 500 сП, или даже выше приблизительно 1000 сП. В предпочтительном варианте осуществления скорость сдвига композиции равна по меньшей мере приблизительно 0,5 с^-1, когда измерение проводят, используя вискозиметр с конусом и плоскостью, или по меньшей мере приблизительно 1,0 с^-1, когда измерение проводят, используя микрожидкостный вискозиметр.

Для вариантов осуществления, в которых белок представляет собой “высокомолекулярный белок”, белок с высокой молекулярной массой может иметь молеклярную массу между приблизительно 100 кДа и приблизительно 1000 кДа, предпочтительно между приблизительно 120 кДа и приблизительно 500 кДа, и наиболее предпочтительно между приблизительно 120 кДа и приблизительно 250 кДа. Высокомолекулярный белок может представлять собой антитело, такое как моноклональное антитело или пегилированное антитело, или иначе, его дериватизированную форму. Предпочтительные моноклональные антитела включают натализумаб (TYSABRI^®), цетуксимаб (ERBITUX^®), бевацизумаб (AVASTIN^®), трастузумаб (HERCEPTIN^®), инфликсимаб (REMICADE^®), ритуксимаб (RITUXAN^®), панитумумаб (VECTIBIX^®), офатумумаб (ARZERRA^®), и их биоаналоги. Высокомолекулярный белок, необязательно пегилированный, может являться ферментом. Другие белки и смеси белков могут также быть составлены для снижения их вязкости.

В нескольких вариантах осуществления белок и средство для снижения вязкости предоставляют в лиофилизированной дозированной единице, имеющей размер для восстановления с использованием стерильной водной фармацевтически приемлемой несущей среды, чтобы получить на выходе концентрированные низковязкие жидкие композиции. Присутствие средства (средств) для снижения вязкости облегчает и/или ускоряет восстановление лиофилизированных дозированных единиц в сравнении с лиофилизированной дозированной единицей, не содержащей средства для снижения вязкости.

В данном описании предоставлены способы получения концентрированных, низковязких жидких композиций высокомолекулярных белков, таких как моноклональные антитела, а также способы хранения низковязких, высококонцентрированных белковых композиций, и их введения пациентам. В еще одном варианте осуществления средство для снижения вязкости добавляют для облегчения обработки (например, подачи насосом, концентрирования и/или фильтрации) посредством снижения вязкости белковых растворов.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фигура 1 изображает вязкость в сП как функцию концентрации белка (в мг/мл) для растворов биоаналога цетуксимаба (ERBITUX^®) в 0,25 M фосфатном буфере (ФБ; ромбы), и раствора, содержащего 0,25 M камфорсульфоновой кислоты-L-лизина (CSAL; квадраты) при 25°C и конечном pH 7,0. Точки на графике включают стандартные отклонения, которые, однако, часто являются меньшими, чем символы.

Фигура 2 изображает вязкость в сП как функцию концентрации белка (в мг/мл) для растворов биоаналога бевацизумаба (AVASTIN^®) в 0,25 M фосфатном буфере (ФБ; ромбы) и 0,25 M CSAL (квадраты) при 25°C и конечном pH 7,0. Точки на графике включают стандартные отклонения, которые, однако, часто являются меньшими, чем символы.

Фигура 3 представляет собой график вязкости (сП) водных растворов 200±9 мг/мл биоаналога бевацизумаба (AVASTIN^®) как функцию pH вдоль x-оси, содержащих либо фосфат-цитратный буфер или камфорсульфоновую кислоту-аргинин (CSAA) при концентрации, равной 0,25 M.

Фигура 4 представляет собой гистограмму сравнения кратности снижения вязкости как функции pH для водных растворов, содержащих биоаналог бевацизумаба (AVASTIN^®; при примерно 200 мг/мл или 226 мг/мл) и 0,25 M камфорсульфоновой кислоты-аргинина (CSAA). Кратность снижения вычисляют как отношение вязкости (сП) в фосфат-цитратном буфере к вязкости (сП) в 0,25 M растворе CSA.

Фигура 5 представляет собой график вязкости (сП) водных растворов биоаналога цетуксимаба (ERBITUX^®; при 202±5 мг/мл, 229±5 мг/мл, или 253±4 мг/мл), содержащих 0,25 M CSAA, как функции от pH вдоль x-оси при 25°C.

Фигура 6 представляет собой запись гель-фильтрационной хроматографии, изображающую интенсивность поглощения (при 280 нм) как функцию времени элюирования (в минутах) для водного раствора REMICADE^® с концентрацией 220 мг/мл, хранимого при 4°C в течение 100 дней включительно, в сравнении со свежевосстановленным промышленным лекарственным продуктом.

Фигура 7 изображает вязкость (сП) как функцию концентрации белка (мг/мл) водных растворов биоаналога бевацизумаба (AVASTIN^®) в 0,25 M фосфатном буфере, 0,10 M или 0,25 M APMI*2HCl ((1-(3-аминопропил)-2-метил-1H-имидазол бис-HCl).

Фигура 8 изображает вязкость (сП) как функцию концентрации белка (мг/мл) водных растворов биоаналога бевацизумаб (AVASTIN^®) в 0,25 M фосфатном буфере, 0,10 M тиамина пирофосфата (TPP) или 0,10 M TPP1-(3-аминопропил)-2-метил-1H-имидазола (APMI).

Фигура 9 изображает вязкость (сП) водных растворов голимумаб (SIMPONI ARIA^®), как функцию концентрации белка (мг/мл), с 0,15 M фосфатным буфером или 0,15 M тиамином HCl.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

I. ОПРЕДЕЛЕНИЯ

Термин "белок", как обычно используют в данном описании, относится к полимеру аминокислот, связанных друг с другом посредством пептидных связей с образованием полипептида, для которого длина цепи является достаточной для получения по меньшей мере обнаруживаемой третичной структуры. Белки, имеющие молекулярную массу (выражаемую в кДа где “Да” обозначает “Дальтоны” и 1 кДа = 1000 Да), большую, чем приблизительно 100 кДа могут обозначаться как “высокомолекулярные белки”, в то время, как белки, имеющие молекулярную массу меньшую, чем приблизительно 100 кДа могут обозначаться как “низкомолекулярные белки”. Термин “низкомолекулярный белок” исключает короткие пептиды, у которых отсутствует обязательная по меньшей мере третичная структура, необходимая, чтобы считаться белком. Молекулярную массу белка можно определить, используя стандартные методы, известные специалисту в данной области, включающие, но не ограниченные приведенными, масс-спектрометрию (например, ЭРИ, MALDI) или вычисление, исходя из известных аминокислотных последовательностей и гликозилирования. Белки могут быть природными или неприродными синтетическими, или полусинтетическими.

Выражения “по существу чистые белок(белки)” и “по сути чистые белок(белки)” применяют в данном описании взаимозаменяемо и относят к композиции, содержащей по меньшей мере приблизительно 90% масс. чистого белка, предпочтительно по меньшей мере приблизительно 95% масс. чистого белка. Выражения “по существу гомогенная” и “по сути гомогенная” применяют в данном описании взаимозаменяемо и относят к композиции, где по меньшей мере приблизительно 90% масс. белка присутствуют в комбинации мономеров и обратимых ди- и олигомерных ассоциатов (необратимых агрегатов), предпочтительно, по меньшей мере приблизительно 95%.

Термин “антитело”, как обычно используют в данном описании, широко охватывает моноклональные антитела (включая непроцессированные антитела, которые имеют Fc область иммуноглобулина), композиции антител с полиэпитопной специфичностью, биспецифические антитела, диатела, и одноцепочечные молекулы антител, а также фрагменты антител (например, Fab, Fab’, F(ab′)2 и Fv), однодоменные антитела, мультивалентные однодоменные антитела, Fab гибридные белки и их гибриды.

Термин “моноклональное антитело” или “mAb,” как обычно используют в данном описании, относится к антителу, полученному из популяции по существу гомогенных антител, т.е., индивидуальные антитела, составляющие популяцию, являются идентичными, за исключением возможных природных мутаций, которые могут присутствовать в минорных количествах. Моноклональные антитела являются высокоспецифичными, будучи направленными против единственного эпитопа. Их обычно синтезируют посредством культивирования клеток гибридомы, как описано Kohler et al. (Nature 256: 495, 1975), или их можно получать посредством методов рекомбинантной ДНК (см., например, Патент США № 4,816,567), или изолировать из фаговых библиотек антител, используя методы, описанные в Clackson et al. (Nature 352: 624-628, 1991) и Marks et al. (J. Mol. Biol. 222: 581-597, 1991), например. Как используют в данном описании, “моноклональные антитела” конкретно включают дериватизированные антитела, конъюгаты антитело-лекарственное средство, и “химерные” антитела, в которых часть тяжелой и/или легкой цепи является идентичной или гомологичной соответствующим последовательностям в антителах, полученных из конкретных видов или принадлежащих конкретному классу или подклассу антител, в то время как остальная часть цепи(цепей) является (являются) идентичными или гомологичными соответствующим последовательностям в антителах, полученных из еще одного вида или принадлежащих к еще одному другому классу или подклассу антител, а также фрагменты таких антител, постольку, поскольку они проявляют желательную биологическую активность (Патент США № 4816567; Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855, 1984).

“Фрагмент антитела” содержит часть интактного антитела, включающую антигенсвязывающую и/или вариабельную область интактного антитела. Примеры фрагментов антител включают фрагменты Fab, Fab′, F(ab′)2, и Fv; диатела; линейные антитела (см. Патент США № 5,641,870; Zapata et al., Protein Eng. 8:1057-1062, 1995); молекулы одноцепочечного антитела; мультивалентные однодоменные антитела; и мультиспецифические антитела, образованные из фрагментов антител.

“Гуманизированными” формами нечеловеческих (например, мышиных) антител являются химерные иммуноглобулины, иммуноглобулиновые цепи или их фрагменты (такие как Fv, Fab, Fab′, F(ab′)2, или другие антигенсвязывающие субпоследовательности антител) наибольшего числа человеческих последовательностей, которые содержат мнимальные последовательности, являющиеся производными нечеловеческого иммуноглобулина. (См., например, Jones et al., Nature 321:522-525, 1986; Reichmann et al., Nature 332:323-329, 1988; и Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596, 1992.)

“Реология” относится к исследованию деформации и потока вещества.

“Вязкость” относится к сопротивлению вещества (обычно жидкости) потоку. Вязкость относится к понятию усилия сдвига; ее можно понимать как эффект различных слоев текучей среды, проявляющих усилие сдвига друг к другу или на других поверхностях, по мере того, как они движутся друг против друга. Существует несколько мер вязкости. Единицами вязкости являются Нс/м², известные как Паскаль-секунды (Па-с). Вязкость может быть "кинематической" или "абсолютной". Кинематическая вязкость является мерой скорости, при которой движущая сила передается через текучую среду. Ее измеряют в Стоксах (Ст). Кинематическая вязкость является мерой резистивного потока текучей среды под влиянием силы тяжести. Когда две текучих среды равного объема и различающейся вязкости помещают в идентичные капиллярные вискозиметры и позволяют течь под действием силы тяжести, более вязкой текучей среде требуется больше времени, чем менее вязкой текучей среде, чтобы протечь через капилляр. Если, например, для одной текучей среды требуется 200 секунд (с), чтобы завершить ее течение, а для еще одной другой текучей среды требуется 400 с, вторую текучую среду называют дважды более вязкой, чем первая, по шкале кинематической вязкости. Размерностью кинематической вязкости является длина²/время. Обычно кинематическую вязкость выражают в сантистоксах (сСт). Единицей в системе СИ для кинематической вязкости является мм²/с, которая равна 1 сСт. "Абсолютная вязкость", иногда именуемая "динамическая вязкость" или "простая вязкость", является продуктом кинематической вязкости и плотности текучей среды. Абсолютную вязкость выражают в единицах сантипуазах (сП). Единицей в системе СИ для абсолютной вязкости является миллиПаскаль-секунда (мПа-с), где 1 сП = 1 мПа-с.

Вязкость можно измерять, используя, например, вискозиметр при данной скорости сдвига или множестве скоростей сдвига. “Экстраполированную для нулевой скорости сдвига” вязкость можно определить посредством создания наилучшей эмпирической кривой четырех точек с наивысшей скоростью сдвига на графике зависимости абсолютной вязкости от скорости сдвига, и линейной экстраполяции вязкости обратно к нулевой скорости сдвига. Альтернативно, для Ньютоновской жидкости, вязкость можно определить посредством усреднения значений вязкости при множестве скоростей сдвига. Вязкость можно также измерить, используя микрожидкостный вискозиметр при единственной или многих скоростях сдвига (также называемых скоростями потока), где абсолютную вязкость производят из изменения давления по мере того, как жидкость протекает через канал. Вязкость выравнивает напряжение сдвига по скорости сдвига. Вязкость, измеренная с помощью микрожидкостных вискозиметров, может, в нескольких вариантах осуществления, напрямую сравниваться с экстраполированными для нулевой скорости сдвига значениями вязкости, например, экстраполированными, исходя из вязкости, измеренной при многих скоростях сдвига, с использованием вискозиметра с конусом и плоскостью.

“Скорость сдвига” относится к скорости изменения линейной скорости, при которой один слой текучей среды проходит над примыкающим слоем. Градиент линейной скорости является скоростью изменения линейной скорости при расстоянии от пластин. Этот простой случай показывает однородный градиент линейной скорости со скоростью сдвига (v₁ - v₂)/ч в единицах (см/сек)/(см) = 1/сек. Следовательно, единицы скорости сдвига являются обратными секундами или, в общем случае, обратным времени. Для микрожидкостного вискозиметра, изменение давления и объемная скорость потока относятся к скорости сдвига. "Скорость сдвига" является скоростью, с которой материал деформируется. Составы, содержащие белки и средства для снижения вязкости, обычно измеряют при скоростях сдвига в интервале от приблизительно 0,5 с^-1 до приблизительно 200 с^-1, когда измерение проводят, используя вискозиметр с конусом и плоскостью, и шпиндель, соответствующим образом подобранный специалистом в данной области, чтобы точно измерить вязкость в интервале вязкости интересующего образца (т.е., образец с 20 сП наиболее точно измеряют на шпинделе сПE40, прикрепленном к вискозиметру DV2T (Брукфилда)); больше чем приблизительно 20 с^-1 до приблизительно 3000 с^-1, когда измерение проводят, используя микрожидкостный вискозиметр.

Для классических “Ньютоновских” жидкостей, как обычно используют в данном описании, вязкость по существу не зависит от скорости сдвига. Для “неньютоновских жидкостей”, однако, вязкость либо уменьшается или увеличивается при увеличении скорости сдвига, например, жидкие среды являются "снижающими вязкость" или "загущающими", соответственно. В случае концентрированных (т.е., с высокой концентрацией) белковых растворов, это может проявляться как псевдопластическое снижающее вязкость поведение, т.е., уменьшение вязкости вместе со скоростью сдвига.

Термин "химическая стабильность", как обычно используют в данном описании, относится к способности белковых компонентов в композиции сопротивляться разрушению посредством химических механизмов, таких как окисление, деамидирование или гидролиз. Белковую композицию обычно считают химически стабильной, если менее чем приблизительно 5% компонентов разрушаются через 24 месяца при 4°C.

Термин "физическая стабильность", как обычно используют в данном описании, относится к способности белковой композиции сопротивляться физическому повреждению, такому как агрегация. Состав, который является физически стабильным, образует только приемлемый процент необратимых агрегатов (например, димеров, тримеров или других агрегатов) биоактивного белкового средства. Присутствие агрегатов можно оценить несколькими способами, включающими измерение среднего размера частиц белков в композиции посредством динамического светорассеяния. Состав считается физически стабильным, если менее чем приблизительно 5% необратимых агрегатов образуется через 24 месяца при 4°C. Приемлемые уровни агрегированных загрязнителей идеально могли бы составлять менее чем приблизительно 2%. Достижимыми являются уровни всего лишь приблизительно 0,2%, хотя уровень приблизительно 1% является более типичным.

Термин "стабильный состав", как его обычно используют в данном описании, означает, что состав является как химически стабильным, так и физически стабильным. Стабильный состав может являться составом, в котором более чем приблизительно 95% молекул биоактивного белка сохраняют биоактивность в составе через 24 месяца хранения при 4°C, или для эквивалентного раствора при условиях повышенной температуры, таких как один месяц хранения при 40°C. Различные аналитические методы для измерения стабильности белков являются доступными в данной области, и их обзор представлен, например, в Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee, Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y. (1991) и Jones, A., Adv. Drug Delivery Revs. 10:29-90, 1993. Стабильность можно измерить при выбранной температуре в течение определенного периода времени. Для быстрого скрининга, например, состав можно содержать при 40°C, в течение от 2 недель до одного месяца, причем в это время остаточную биологическую активность измеряют и сравнивают с первоначальным состоянием для оценки стабильности. Когда состав подлежит хранению при 2°C-8°C, как правило, состав должен быть стабилен при 30°C или 40°C в течение по меньшей мере одного месяца и/или стабилен при 2°C-8°C в течение по меньшей мере 2 лет. Когда состав подлежит хранению при комнатной температуре, приблизительно 25°C, как правило, состав должен быть стабилен в течение по меньшей мере 2 лет при приблизительно 25°C и/или стабилен при 40°C в течение по меньшей мере приблизительно 6 месяцев. Степень агрегации после лиофилизации и хранения можно использовать как показатель стабильности белка. В нескольких вариантах осуществления стабильность оценивают посредством измерения размера частиц белков в композиции. В нескольких вариантах осуществления стабильность можно оценить посредством измерения активности композиции с использованием стандартных аналитических тестов на биологическую активность или связывание, что находится в пределах квалификации рядового специалиста в данной области.

Термин "размер частиц" белка, как обычно используют в данном описании, означает средний диаметр преобладающей популяции взвешенных частиц биоактивных молекул, или их распределение частиц по размерам, в композиции, как определяют, используя хорошо известные приборы для определения распределения частиц по размерам, посредством, например, динамического светорассеяния, ГФХ (гель-фильтрационной хроматографии), или других методов, известных рядовому специалисту в данной области.

Термин “концентрированная” или "высококонцентрированная", как обычно используют в данном описании, описывает жидкие составы, имеющие конечную концентрацию белка более чем приблизительно 10 мг/мл, предпочтительно более чем приблизительно 50 мг/мл, более предпочтительно более чем приблизительно 100 мг/мл, еще более предпочтительно более чем приблизительно 200 мг/мл, или наиболее предпочтительно более чем приблизительно 250 мг/мл.

“Восстановленный состав”, как обычно используют в данном описании, относится к составу, который получали растворением сухого порошка, лиофилизированного, высушенного распылением или осажденного растворителем белка в разбавителе, таким образом, что белок растворяется или диспергируется в водном растворе для введения.

“Лиопротектор” представляет собой вещество, которое, когда его комбинируют с белком, значительно снижает химическую и/или физическую нестабильность белка при лиофилизации и/или последующем хранении. Иллюстративные лиопротекторы включают сахара и их соответствующие сахароспирты, такие как сахароза, лактоза, трегалоза, декстран, эритрит, арабит, ксилит, сорбит и маннит; аминокислоты, такие как аргинин или гистидин; лиотропные соли, такие как сульфат магния; полиолы, такие как пропиленгликоль, глицерин, поли(этиленгликоль) или поли(пропиленгликоль); и их комбинации. Дополнительные иллюстративные лиопротекторы включают желатин, декстрины, модифицированный крахмал, и карбоксиметилцеллюлозу. Предпочтительные сахароспирты представляют собой такие соединения, которые получают восстановлением моно- и ди-сахаридов, таких как лактоза, трегалоза, мальтоза, лактулоза и мальтулоза. Дополнительными примерами сахароспиртов являются глюцитол, мальтит, лактит и изомальтулоза. Лиопротектор обычно добавляют к предварительно лиофилизированной композиции в “лиопротекторном количестве”. Это означает, что после лиофилизации белка в присутствии лиопротекторного количества лиопротектора, белок по существу сохраняет его физическую и химическую стабильность и целостность.

“Разбавитель” или “носитель”, как обычно используют в данном описании, представляет собой фармацевтически приемлемый (т.е., безопасный и нетоксичный для введения человеку или другому животному) и применимый ингредиент для получения жидкого состава, такого как водный состав, восстановленный после лиофилизации. Иллюстративные разбавители включают стерильную воду, бактериостатическую воду для инъекции (BWFI), раствор с забуференным рН (например, забуферeнный фосфатом физраствор), стерильный физраствор, раствор Рингера или раствор декстрозы и их комбинации.

“Консервант” представляет собой соединение, которое можно добавлять к составам данного описания, чтобы снизить загрязнение бактериями, грибками или другим инфекционным агентом и/или их действие. Добавление консерванта может, например, способствовать получению многоцелевой (многодозовой) композиции. Примеры потенциальных консервантов включают хлорид октадецилдиметилбензиламмония, хлорид гексаметония, хлорид бензалкония (смесь хлоридов алкилбензилдиметиламмония, в которых алкильные группы являются длинноцепочечными), и бензетония хлорид. Другие типы консервантов включают ароматические спирты, такие как фенол, бутиловый и бензиловый спирт, алкилпарабены, такие как метил- или пропилпарабен, катехин, резорцин, циклогексанол, 3-пентанол, и м-крезол.

“Объемообразующий агент”, как обычно используют в данном описании, представляет собой соединение, которое добавляет массу к лиофилизированной смеси и способствует физической структуре лиофилизированной таблетки (например, облегчает получение по существу однородной лиофилизированной таблетки, которая поддерживает структуру с открытыми порами). Иллюстративные объемообразующие агенты включают маннит, глицин, лактозу, модифицированный крахмал, поли(этиленгликоль) и сорбит.

“Терапевтически эффективное количество” является наименьшей концентрацией, требуемой для оказания измеряемого улучшения или предотвращения любого симптома или конкретного состояния или нарушения, для оказания измеряемого удлинения продолжительности жизни или улучшения в, целом, качества жизни пациента. Терапевтически эффективное количество зависит от конкретной биологически активной молекулы и конкретного состояния или нарушения, подлежащего лечению. Терапевтически эффективные количества многих белков, таких как моноклональные антитела, описанные в данном документе, являются хорошо известными в данной области. Терапевтически эффективные количества белков, еще не установленные, или для лечения конкретных расстройств с использованием известных белков, таких как моноклональные антитела, для клинического применения для лечения дополнительных расстройств, могут быть определены стандартными методами, которые охватываются профессиональными знаниями квалифицированного специалиста в области, такого как терапевт.

Термин "способность проходить через иглу при введении препарата" или “возможность введения через шприц”, как обычно используют в данном описании, относится к характериститке инъекции фармацевтической композиции через шприц, оборудованный иглой 18-32 калибра, необязательно тонкостенной. Способность проходить через иглу при введении препарата зависит от факторов, таких как давление или усилие, требуемые для инъекции, равномерность потока, качество аспирации и отсутствие засорения. Способность проходить через иглу при введении препарата жидких фармацевтических составов можно оценить посредством сравнения усилия при инъекции для состава с пониженной вязкостью с усилием для стандартного состава без добавленного средства для снижения вязкости. Снижение усилия при инъекции состава, содержащего средство для снижения вязкости, отражает улучшенную способность проходить через иглу при введении препарата такого состава. Составы с пониженной вязкостью имеют улучшенную способность проходить через иглу при введении препарата когда усилие при инъекции снижается по меньшей мере на 10%, предпочтительно по меньшей мере на 30%, более предпочтительно по меньшей мере на 50%, и наиболее предпочтительно по меньшей мере на 75%, при сравнении со стандартным составом, имеющим такую же концентрацию белка при иных одинаковых условиях, за исключением замены средства для снижения вязкости на соответствующий буфер с приблизительно такой же концентрацией. Альтернативно, способность проходить через иглу при введении препарата жидких фармацевтических составов можно оценить посредством сравнения времени, требуемого для инъекции такого же объема, такого как 0,5 мл, или, более предпочтительно, приблизительно 1 мл, различных жидких белковых составов, когда шприц продавливают с таким же усилием.

Термин “усилие при инъекции", как обычно используют в данном описании, относится к усилию, требуемому для продавливания данного жидкого состава через данный шприц, снабженный иглой данного калибра при заданной скорости инъекции. Усилие при инъекции обычно выражают в Ньютонах. Например, усилие при инъекции можно измерить, как усилие, требуемое для продавливания жидкого состава через 1-мл пластиковый шприц, имеющий внутренний диаметр, равный 0,25 дюйма (0,635 см), снабженный 0,50-дюймовой (1,27 см) иглой 27 калибра при скорости инъекции 250 мм/мин. Для измерения усилия при инъекции можно использовать оборудование для тестирования. Когда измерения проводят при одинаковых условиях, для состава с более низкой вязкостью, в общем, будет требоваться более низкое усилие при инъекции.

“Градиент вязкости”, как используют в данном описании, относится к скорости изменения вязкости белкового раствора по мере увеличения концентрации белка. Градиент вязкости можно аппроксимировать, исходя из графика функциональной зависимости вязкости от концентрации белка для ряда составов, которые являются по другим характеристикам одинаковыми, но имеют различные концентрации белка. Вязкость увеличивается примерно экспоненциально с увеличением концентрации белка. Градиент вязкости при конкретной концентрации белка можно апроксимировать исходя из угла наклона линий, касательных к графику функциональной зависимости вязкости от концентрации белка. Градиент вязкости можно апроксимировать по линейной апроксимации графика вязкости как функции любой концентрации белка или в узком интервале концентраций белка. В нескольких вариантах осуществления указано, что состав имеет пониженный градиент вязкости, если, когда вязкость как функцию концентрации белка апроксимируют как экспоненциальную функцию, экспонента экспоненциальной функции является более мелкой, чем экспонента, полученная для другого такого же состава без средства для снижения вязкости. Аналогичным образом, можно говорить, что состав имеет более низкий/более высокий градиент вязкости, когда его сравнивают со вторым составом, если экспонента для состава является более низкой/более высокой, чем экспонента для второго состава. Градиент вязкости может быть численно аппроксимирован из графика функциональной зависимости вязкости от концентрации белка другими методами, известными квалифицированным исследователям составов.

Термин “состав с пониженной вязкостью”, как обычно используют в данном описании, относится к жидкому составу, имеющему высокую концентрацию высокомолекулярного белка, такого как моноклональное антитело или низкомолекулярного белка, которую модифицируют присутствием одной или нескольких добавок для снижения вязкости, в сравнении с соответствующим составом, который не содержит понижающих вязкость добавки(добавок).

Термин “осмолярность”, как обычно используют в данном описании, относится к общему числу растворенных компонентов на литр. Осмолярность является аналогичной молярности, но включает общее число молей растворенных молекул в растворе. Осмолярность, равная 1 Осм/л означает, что присутствует 1 моль растворенных компонентов на литр раствора. Некоторые растворенные вещества, такие как ионные растворенные вещества, которые диссоциируют в растворе, будут обеспечивать более чем 1 моль растворенных компонентов на моль растворенного вещества в растворе. Например, NaCl диссоциирует на Na⁺ и Cl^- в растворе и, таким образом, предоставляет 2 моля растворенных компонентов на 1 моль растворенного NaCl в растворе. Физиологическая осмолярность обычно находится в интервале от приблизительно 280 мОсм/л до приблизительно 310 мОсм/л.

Термин “тоничность”, как обычно используют в данном описании, относится к градиенту осмотического давления, являющегося результатом разделения двух растворов посредством полупроницаемой мембраны. В частности, термин “тоничность” применяют для описания осмотического давления, создаваемого через клеточную мембрану, когда клетку подвергают воздействию внешнего раствора. Растворенные вещества, которые могут пересекать клеточную мембрану, не обеспечивают конечный градиент осмотического давления. Только те растворенные молекулы, которые не пересекают клеточную мембрану, будут обеспечивать различия осмотического давления и, таким образом, тоничность.

Термин “гипертонический”, как обычно используют в данном описании, относится к раствору с более высокой концентрацией растворенных веществ, чем концентрация, присутствующая внутри клетки. Когда клетку погружают в гипертонический раствор, вода имеет тенденцию вытекать из клетки, чтобы уравновесить концентрацию растворенных веществ.

Термин “гипотонический”, как обычно используют в данном описании, относится к раствору с более низкой концентрацией растворенных веществ, чем концентрация, присутствующая внутри клетки. Когда клетку погружают в гипотонический раствор, вода поступает в клетку, чтобы уравновесить концентрацию растворенных веществ.

Термин “изотонический”, как обычно используют в данном описании, относится к раствору, в котором градиент осмотического давления через клеточную мембрану является по существу уравновешенным. Изотонический состав является составом, который имеет по существу такое же осмотическое давление, как человеческая кровь. Изотонические составы будут, как правило, иметь осмотическое давление от приблизительно 250 мОсм/кг до 350 мОсм/кг.

Термин “жидкий состав”, как используют в данном описании, обозначает белок, который либо поставляют в приемлемом фармацевтическом разбавителе, или белок, который восстанавливают в приемлемом фармацевтическом разбавителе перед введением пациенту.

Термины “маркированный” и “эталонный”, когда их применяют по отношению к белку или биологическому препарату, используют в данном описании взаимозаменяемо для обозначения единого биологического продукта, лицензированного в соответствии с разделом 351(a) Закона о Службе здравоохранения США (42 U.S.C. § 262).

Термин “биоаналог” как используют в данном описании, обычно используют взаимозаменяемо с термином “генерический эквивалент” или “аналогичный препарат”. Например, “биоаналог моноклонального антитела” относится к последующей версии оригинального моноклонального антитела, обычно производимой другой компанией. “Биоаналог”, когда используют по отношению к маркированному белку или маркированному биологическому препарату, может относиться к биологическому продукту, оцениваемому в сравнении с маркированным белком или маркированным биологическим препаратом, лицензированным в соответствии с разделом 351(k) Закона о Службе здравоохранения США (42 U.S.C. § 262). Биоаналог моноклонального антитела может представлять собой моноклональное тело, которое удовлетворяет требованиям одного или нескольких правил, принятых 30 мая 2012 г. Комитетом по лекарственным препаратам для медицинского применения (CHMP) Европейского агентства по лекарственным средствам, и опубликованным в Европейском Союзе как “Руководство по аналогичным биологическим медицинским продуктам, содержащим моноклональные антитела–неклинические и клинические проблемы” (Ссылка на документ EMA/CHMP/BMWP/403543/2010).

Биоаналоги препаратов могут продуцироваться микробными клетками (прокариотными, эукариотными), клеточными линиями человеческого или животного происхождения (например, млекопитающих, пернатых, насекомых), или тканями, полученными из животных или растений. Экспрессирующая конструкция для предлагаемого биоаналога продукта будет обычно кодировать такую же первичную аминокислотную последовательность, как и ее эталонный продукт. Могут присутствовать минорные модификации, такие как N- или C-концевые усечения, которые не будут оказывать воздействия на безопасность, чистоту или активность.

Биоаналог моноклонального антитела является сходным с эталонным моноклональным антителом физико-химически или биологически, с позиций, как безопасности, так и эффективности действия. Биоаналог моноклонального антитела можно оценить в сравнении с эталонным моноклональным антителом, используя одно или несколько исследований in vitro, включающие аналитические тесты, конкретизирующие связывание с целевыми антигеном(антигенами); связывание с изоформами Fc гамма рецепторов (FcγRI, FcγRII, и FcγRIII), FcRn, и комплементом (C1q); Fab-ассоциированные функции (например, нейтрализацию растворимого лиганда, активацию или блокаду рецептора); или Fc-ассоциированные функции (например, антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность, комплементзависимую цитотоксичность, активацию комплемента). Сравнения in vitro могут комбинироваться с данными in vivo, демонстрирующими сходство фармакокинетики, фармакодинамики и/или безопасности. Клинические оценки биоаналога моноклонального антитела в сравнении с эталонным моноклональным антителом могут включать сравнения фармакокинетических свойств (например, AUC_0-inf, AUC_0-t, C_max, t_max, C_trough); фармокодинамических конечных показателей; или сходств клинической эффективности действия (например, с использованием рандомизированных, с параллельными группами, сравнительных клинических испытаний). Сравнение качества между биоаналогом моноклонального антитела и эталонным моноклональным антителом можно оценить, используя установленные методики, включающие методики, описанные в “Руководстве по аналогичным биологическим медицинским продуктам, содержащим биотехнологически полученные белки в качестве активного вещества: Проблемы качества” (EMEA/CHMP/BWP/49348/2005), и в “Руководстве по разработке, получению, характеризации и описаниям для моноклональных антител и родственных веществ” (EMEA/CHMP/BWP/157653/2007).

Различия между биоаналогом моноклонального антитела и эталонным моноклональным антителом могут включать посттрансляционную модификацию, например, посредством присоединения к моноклональному антителу других биохимических групп, таких как фосфат, различные липиды и углеводы; посредством пртеолитического расщепления после трансляции; посредством изменения химической природы аминокислоты (например, формилирования); или посредством многих других механизмов. Другие посттрансляционные модификации могут являться следствием операций процесса производства, например, гликозилирование может происходить при воздействии на продукт восстанавливающих сахаров. В других случаях, условия хранения могут быть допустимыми для некоторых путей деградации, таких как окисление, деамидирование или агрегация. Все из этих относящихся к продукту вариантов могут быть включены в биоаналог моноклонального антитела.

Термин “средство для снижения вязкости” как используют в данном описании, относится к соединению, которое снижает вязкость раствора относительно вязкости раствора без средства для снижения вязкости. Средство для снижения вязкости может являться единственным соединением, или может представлять собой смесь одного или нескольких соединений. Когда средство для снижения вязкости является смесью двух или нескольких соединений, приведенная концентрация относится к каждому индивидуальному средству, если не установлено иначе. В качестве примера, состав, содержащий приблизительно 0,25 M камфорсульфоновой кислоты-аргинина в качестве средства для снижения вязкости является раствором, содержащим камфорсульфоновую кислоту при концентрации 0,25 M, и аргинин при концентрации 0,25 M.

Некоторые средства для снижения вязкости содержат кислотные или основные функциональные группы. Являются ли или не являются эти функциональные группы полностью или частично ионизированными, зависит от pH состава, в котором они находятся. Если не установлено иначе, ссылка на состав, содержащий средство для снижения вязкости, имеющее ионизируемую функциональную группу, включает как родительское соединение, так и любые возможные ионизированные состояния.

Как используют в данном описании, термин “донор водородной связи” относится к атому водорода, соединенному с относительно электроотрицательным атомом, который создает частичный положительный заряд на атоме водорода.

Как используют в данном описании, термин “акцептор водородной связи” относится к относительно электроотрицательному атому или функциональной группе, способным к взаимодействию с атомом водорода, несущим частичный положительный заряд.

Как используют в данном описании, термин “свободно вращающаяся связь” относится к любой соединенной простой связью паре атомов, не являющихся атомами водорода.

Как используют в данном описании, термин “молекулярная площадь полярной поверхности” относится к общей экспонированной полярной площади на поверхности молекулы, представляющей интерес.

Как используют в данном описании, термин “молярный объем” относится к общему объему, который один моль молекулы, представляющей интерес, занимает в его нативном состоянии (т.е. твердом, жидком).

Как используют в данном описании, термин “поляризуемость” относится к индуцируемому дипольному моменту, когда молекулу, представляющую интерес, помещают в электрическое поле единичной интенсивности.

Как используют в данном описании, термин “фармацевтически приемлемые соли” относится к солям, полученным из фармацевтически приемлемых нетоксичных кислот и оснований, включающих неорганические кислоты и основания, и органические кислоты и основания. Подходящие нетоксичные кислоты включают неорганические и органические кислоты, такие как уксусная, бензолсульфоновая, бензойная, камфорсульфоновая, лимонная, этансульфоновая, фумаровая, глюконовая, глутаминовая, бромистоводородная, хлористоводородная, изэтионовая, молочная, малеиновая, яблочная, миндальная, метансульфоновая, муциновая, азотная, памоевая, пантотеновая, фосфорная, янтарная, серная, винная кислота, п-толуолсульфоновая и т.п. Подходящие положительно заряженные противоионы включают натрий, калий, литий, кальций и магний.

Как используют в данном описании, термин "ионная жидкость” относится к кристаллической или аморфной соли, цвиттериону или их смеси, которые являются жидкостями при температурах или примерно при температурах, при которых большинство общепринятых солей являются твердыми веществами: при менее чем 200°C, предпочтительно менее чем 100°C, или более предпочтительно менее чем 80°C. Некоторые ионные жидкости имеют температуры плавления около комнатной температуры, например, между 10°C и 40°C, или между 15°C и 35°C. Термин "цвиттерион" применяют в настоящем документе для описания в целом нейтрально заряженной молекулы, которая несет формальные положительные и отрицательные заряды на различных химических группах в молекуле. Примеры ионных жидкостей описаны в Riduan et al., Chem. Soc. Rev., 42:9055-9070, 2013; Rantwijk et al., Chem. Rev., 107:2757-2785, 2007; Earle et al., Pure Appl. Chem., 72(7):1391-1398, 2000; и Sheldon et al., Green Chem., 4:147-151, 2002.

Как используют в данном описании, термин “фосфороорганическое” относится к соединению, содержащему одну или несколько фосфорильных групп, по меньшей мере одна из которых является ковалентно связанной с органической группой через фосфоэфирную связь.

Как используют в данном описании, “водорастворимый органический краситель” представляет собой органическую молекулу, имеющую молярную растворимость, равную по меньшей мере 0,001 M при 25°C и pH 7, и которая поглощает некоторые длины волн света, предпочтительно в диапазоне от видимой до инфракрасной части электромагнитного спектра, в то же время возможно пропуская или отражая другие длины волн света.

Как используют в данном описании, термин “халькоген” относится к Группе 16 элементов, включающей кислород, серу и селен, в любом состоянии окисления. Например, если не указано иначе, термин “халькоген” также включает SO₂.

Как используют в данном описании, термин “алкильная группа” относится к прямоцепочечной, с разветвленной цепью и циклической углеводородной группе. Если не указано иначе, термин алкильная группа охватывает углеводородные группы, содержащие одну или несколько двойных или тройных связей. Алкильная группа, содержащая по меньшей мере одну кольцевую систему является “циклоалкильной” группой. Алкильная группа, содержащая по меньшей мере одну двойную связь, является “алкенильной группой”, и алкильная группа, содержащая по меньшей мере одну тройную связь является “алкинильной группой”.

Термин “Арил”, используемый в данном описании, относится к ароматическим углеродным кольцевым системам, включающим конденсированные кольцевые системы. В “арильной” группе каждый из атомов, которые образуют кольцо, является углеродным атомом.

Термин “Гетероарил”, используемый в данном описании, относится к ароматическим кольцевым системам, включающим конденсированные кольцевые системы, в которых по меньшей мере один из атомов, которые образуют кольцо, является гетероатомом.

Термин “Гетероцикл”, используемый в данном описании, относится к кольцевым системам, которые, включая системы с конденсированными кольцами, не являются ароматическими, где по меньшей мере один из атомов, который образует кольцо, является гетероатомом.

Термин “гетероатом”, используемый в данном описании, относится к любому неуглеродному или неводородному атому. Предпочтительные гетероатомы включают кислород, серу и азот. Иллюстративные гетероарильные и гетероциклильные кольца включают: бензимидазолил, бензофуранил, бензотиофуранил, бензотиофенил, бензоксазолил, бензоксазолинил, бензтиазолил, бензтриазолил, бензтетразолил, бензизоксазолил, бензизотиазолил, бензимидазолинил, карбазолил, 4aH карбазолил, карболинил, хроманил, хроменил, циннолинил, декагидрохинолинил, 2H,6H-1,5,2-дитиазинил, дигидрофуро[2,3b]тетрагидрофуран, фуранил, фуразанил, имидазолидинил, имидазолинил, имидазолил, 1H-индазолил, индоленил, индолинил, индолизинил, индолил, 3H-индолил, изатиноил, изобензофуранил, изохроманил, изоиндазолил, изоиндолинил, изоиндолил, изохинолинил, изотиазолил, изоксазолил, метилендиоксифенил, морфолинил, нафтиридинил, октагидроизохинолинил, оксадиазолил, 1,2,3-оксадиазолил, 1,2,4-оксадиазолил, 1,2,5-оксадиазолил, 1,3,4-оксадиазолил, оксазолидинил, оксазолил, оксиндолил, пиримидинил, фенантридинил, фенантролинил, феназинил, фенотиазинил, феноксатинил, феноксазинил, фталазинил, пиперазинил, пиперидинил, пиперидонил, 4-пиперидонил, пиперонил, птеридинил, пуринил, пиранил, пиразинил, пиразолидинил, пиразолинил, пиразолил, пиридазинил, пиридооксазол, пиридоимидазол, пиридотиазол, пиридинил, пиридил, пиримидинил, пирролидинил, пирролинил, 2H-пирролил, пирролил, хиназолинил, хинолинил, 4H-хинолизинил, хиноксалинил, хинуклидинил, тетрагидрофуранил, тетрагидроизохинолинил, тетрагидрохинолинил, тетразолил, 6H-1,2,5-тиадиазинил, 1,2,3-тиадиазолил, 1,2,4-тиадиазолил, 1,2,5-тиадиазолил, 1,3,4-тиадиазолил, тиантренил, тиазолил, тиенил, тиенотиазолил, тиенооксазолил, тиеноимидазолил, тиофенил и ксантенил.

II. СОСТАВЫ

Биосовместимые, низковязкие белковые растворы, такие как растворы моноклональных антител, могут применяться для доставки терапевтически эффективных количеств белков в объемах, применимых для подкожной (ПК) и внутримышечной (ВМ) инъекции, обычно меньших чем или приблизительно равных 2 мл для ПК, и меньших чем или приблизительно равных 5 мл для ВМ, более предпочтительно меньших чем или приблизительно равных 1 мл для ПК, и меньших чем или приблизительно равных 3 мл для ВМ. Белки могут, в общем случае, иметь любую молекулярную массу, хотя, в нескольких вариантах осуществления, высокомолекулярные белки являются предпочтительными. В других вариантах осуществления белки представляют собой низкомолекулярные белки.

Составы могут иметь концентрации белка между приблизительно 10 мг/мл и приблизительно 5000 мг/мл. Составы, включающие составы моноклональных антител, могут иметь концентрацию белка большую чем 100 мг/мл, предпочтительно большую чем 150 мг/мл, более предпочтительно большую чем приблизительно 175 мг/мл, даже более предпочтительно большую чем приблизительно 200 мг/мл, даже более предпочтительно большую чем приблизительно 225 мг/мл, даже более предпочтительно большую чем приблизительно 250 мг/мл, и наиболее предпочтительно большую чем или приблизительно равную 300 мг/мл. В отсутствие средства для снижения вязкости вязкость белковой композиции увеличивается экспоненциально, по мере увеличения концентрации. Такие белковые составы, в отсутствие средства для снижения вязкости, могут иметь вязкость большую чем 100 сП, большую чем 150 сП, большую чем 200 сП, большую чем 300 сП, большую чем 500 сП, или даже большую чем 1000 сП, когда измерение проводят при 25°C. Такие составы часто оказываются неподходящими для ПК или ВМ инъекции. Применение одного или нескольких средств для снижения вязкости обеспечивает получение составов, имеющих вязкость, меньшую чем или приблизительно равную 100 сП, предпочтительно меньшую чем или приблизительно равную 75 сП, более предпочтительно меньшую чем или приблизительно равную 50 сП, даже более предпочтительно меньшую чем или приблизительно равную 30 сП, даже более предпочтительно меньшую чем или приблизительно равную 20 сП, или наиболее предпочтительно меньшую чем или приблизительно равную 10 сП, когда измерения проводят при 25°C.

Несмотря на то, что средства для снижения вязкости могут применяться для понижения вязкости концентрированных белковых составов, они также могут использоваться в менее концентрированных составах. В нескольких вариантах осуществления составы могут иметь концентрации белков между приблизительно 10 мг/мл и приблизительно 100 мг/мл. Составы могут иметь концентрацию белка более чем приблизительно 20 мг/мл, более чем приблизительно 40 мг/мл или более чем приблизительно 80 мг/мл.

Для некоторых белков, составы, не имеющие средства для снижения вязкости, могут иметь значения вязкости более чем приблизительно 20 сП, более чем приблизительно 50 сП или более чем приблизительно 80 сП. Применение одного или нескольких средств для снижения вязкости обеспечивает получение составов, имеющих вязкость меньшую чем или приблизительно равную 80 сП, предпочтительно меньшую чем или приблизительно равную 50 сП, даже более предпочтительно меньшую чем или приблизительно равную 20 сП, или наиболее предпочтительно меньшую чем или приблизительно равную 10 сП, когда измерения проводят при 25°C.

В нескольких вариантах осуществления водные белковые составы имеют вязкость, которая по меньшей мере приблизительно на 30% меньше, чем у аналогичного состава без средств(а) для снижения вязкости, когда измерения проводят при одинаковых условиях. В других вариантах осуществления составы имеют вязкость, которая на 40% меньше, на 50% меньше, на 60% меньше, на 70% меньше, на 80% меньше, на 90% меньше, или даже более чем на 90% меньше, чем вязкость аналогичного состава без средств(а) для снижения вязкости. В предпочтительном варианте осуществления состав содержит терапевтически эффективное количество одного или нескольких высокомолекулярных белков, таких как моноклональные антитела, в объеме меньшем чем приблизительно 2 мл, предпочтительно меньшем чем приблизительно 1 мл или более предпочтительно меньшем чем приблизительно 0,75 мл.

Составы с пониженной вязкостью имеют улучшенную способность проходить через иглу при введении препарата, и для них требуется меньшее усилие при инъекции по сравнению с аналогичным составом без средства для снижения вязкости (например, в фосфатном буфере) при одинаковых в других отношениях условиях. В нескольких вариантах осуществления усилие при инъекции снижается на более чем приблизительно 20%, более чем приблизительно 30%, более чем приблизительно 40%, более чем приблизительно 50% или более чем приблизительно в 2 раза, в сравнении со стандартными составами без средств(а) для снижения вязкости при одинаковых в других отношениях условиях инъекции. В нескольких вариантах осуществления составы обладают “характеристиками ньютоновского потока”, определяемые, как имеющие вязкость, которая по существу не зависит от скорости сдвига. Белковые составы могут легко инъекционно вводиться через иглы, имеющие приблизительно калибры 18-32. Предпочтительные калибры игл для доставки низковязких составов включают 27, 29, и 31 калибр, необязательно для тонкостенных игл.

Составы могут содержать один или несколько дополнительных эксципиентов, таких как буферы, поверхностно-активные вещества, сахара и сахароспирты, другие полиолы, консерванты, антиоксиданты и хелатирующие агенты. Составы имеют pH и осмолярность, подходящие для введения и не вызывающие значительных неблагоприятных побочных эффектов. В нескольких вариантах осуществления концентрированные низковязкие составы имеют pH между 5 и 8, между 5,5 и 7,6, между 6,0 и 7,6, между 6,8 и 7,6 или между 5,5 и 6,5.

Низковязкие белковые составы могут обеспечить более высокую гибкость при разработке составов. Низковязкие составы могут проявлять изменения вязкости, которые меньше зависят от концентрации белка в сравнении с иным таким же составом без средства для снижения вязкости. Низковязкие белковые составы могут обеспечить увеличенные концентрации и уменьшенную частоту дозировки белка. В нескольких вариантах осуществления низковязкие белковые составы содержат 2 или более, 3 или более или 4 или более различных белков. Например, комбинации из 2 или более моноклональных антител могут быть обеспечены в единственном низковязком белковом составе.

Поскольку составы белков (таких как моноклональные антитела) могут вводиться пациентам при более высоких концентрациях белка, чем аналогичные в других отношениях белковые составы, не содержащие средства для снижения вязкости, частота дозировки белка может быть снижена. Например, белки, для которых прежде требовалось однократное суточное введение, могут вводиться однократно каждые два дня, каждые три дня или даже менее часто, когда белки составляют вместе со средствами для снижения вязкости. Белки, для которых в настоящее время требуется множество введений в один и тот же день (либо в одно и то же время или в различное время дня) могут вводиться при меньшем количестве инъекций в день. В некоторых случаях, частота может быть снижена до единственной инъекции один раз в день. Посредством увеличения дозировки, вводимой за инъекцию, многократность частоты дозирования может быть уменьшена, например от одного раза каждые 2 недели до одного раза каждые 6 недель.

В нескольких вариантах осуществления жидкие составы имеют физиологическую осмолярность, например, между приблизительно 280 мОсм/л до приблизительно 310 мОсм/л. В нескольких вариантах осуществления жидкие составы имеют осмолярность большую чем приблизительно 250 мОсм/л, большую чем приблизительно 300 мОсм/л, большую чем приблизительно 350 мОсм/л, большую чем приблизительно 400 мОсм/л или большую чем приблизительно 500 мОсм/л. В нескольких вариантах осуществления составы имеют осмолярность, равную от приблизительно 200 мОсм/л до приблизительно 2000 мОсм/л или от приблизительно 300 мОсм/л до приблизительно 1000 мОсм/л. В нескольких вариантах осуществления жидкие составы являются по существу изотоническими с человеческой кровью. Жидкие составы могут, в некоторых случаях, являться гипертоническими.

Добавки, включая средства для снижения вязкости, могут быть включены в любом количестве для достижения желательных уровней вязкости жидкого состава, постольку, поскольку количества не являются токсичными или иным образом вредными, и не препятствуют существенно химической и/или физической стабильности составов. Средство(средства) для снижения вязкости в нескольких вариантах осуществления могут независимо присутствовать в концентрации, меньшей чем приблизительно 1,0 M, предпочтительно меньшей чем приблизительно 0,50 M, меньшей чем или равной приблизительно 0,30 M или меньшей чем или равной 0,15 M. Особенно предпочтительные концентрации включают приблизительно 0,15 M и приблизительно 0,30 M. Для нескольких вариантов осуществления имеющих два или более средства для снижения вязкости, средства предпочтительно, но необязательно, присутствуют при одинаковой концентрации.

Средства для снижения вязкости обеспечивают более быстрое восстановление лиофилизированной дозированной единицы. Дозированная единица представляет собой лиофилизированную таблетку белка, средства для снижения вязкости и других эксципиентов, к которым добавляют воду, физраствор или еще одну другую фармацевтически приемлемую жидкую среду. В отсутствии средства для снижения вязкости, часто требуются периоды по 10 минут или более, чтобы полностью растворить лиофилизированную таблетку при высокой концентрации белка. Когда лиофилизированная таблетка содержит одно или несколько средств для снижения вязкости, период, требуемый для полного растворения таблетки, часто снижается в два, пять или даже десять раз. В некоторых вариантах осуществления требуется менее одной минуты, чтобы полностью растворить лиофилизированную таблетку, содержащую более чем или приблизительно 150, 200 или даже 300 мг/мл белка.

Низковязкие белковые составы обеспечивают более высокую гибкость при разработке составов. Низковязкие составы проявляют вязкость, которая меньше изменяется с увеличением концентрации белка в сравнении с иным таким же составом без средств(а) для снижения вязкости. Низковязкие белковые составы проявляют пониженный градиент вязкости в сравнении с иным таким же составом без средства для снижения вязкости.

Градиент вязкости белкового состава может быть в 2 раза меньше, 3 раза меньше или даже более чем в 3 раза меньше, чем градиент вязкости иного такого же белкового состава без средств(а) для снижения вязкости. Градиент вязкости белкового состава может составлять менее чем 2,0 сП мл/мг, менее чем 1,5 сП мл/мг, менее чем 1,0 сП мл/мг, менее чем 0,8 сП мл/мг, менее чем 0,6 сП мл/мг или менее чем 0,2 сП мл/мг для белковых составов, имеющих концентрацию белка между 10 мг/мл и 2000 мг/мл. При снижении градиента вязкости состава концентрация белка может увеличиваться в большей степени перед тем, как наблюдают экспоненциальное увеличение вязкости.

А. Белки

В составе может быть любой белок, включая рекомбинантные, изолированные или синтетические белки, гликопротеины или липопротеины. Белки могут представлять собой антитела (включая фрагменты антител и рекомбинантные антитела), ферменты, факторы роста или гормоны, иммуномодуляторы, противоинфекционные препараты, антипролиферативные средства, вакцины или другие терапевтические, профилактические или диагностические белки. В некоторых вариантах осуществления белок имеет молекулярную массу большую чем приблизительно 150 кДа, большую чем 160 кДа, большую чем 170 кДа, большую чем 180 кДа, большую чем 190 кДа или даже большую чем 200 кДа.

В некоторых вариантах осуществления белок может представлять собой пегилированный белок. Термин “пегилированный белок”, как используют в данном описании, относится к белку, имеющему одну или несколько поли(этиленгликолевых) или других маскирующих полимерных групп, присоединенных к нему ковалентно, необязательно через химический линкер, который может отличаться от одной или нескольких полимерных групп. Пегилированные белки характеризуются их обычно сниженной почечной фильтрацией, уменьшенным захватом ретикулоэндотелиальной системой и пониженной ферментативной деградацией, приводящими, например, к пролонгированным периодам полужизни и увеличенной биодоступности. Маскирующие полимеры включают поли(этиленгликоль); поли(пропиленгликоль); поли(аминокислотные) полимеры, такие как поли(глутаминовая кислота), поли(гидроксиэтил-L-аспарагин), и поли(гидроксиэтил-L-глутамин); поли(глицерин); поли(2-оксазолиновые) полимеры, такие как поли(2-метил-2-оксазолин) и поли(2-этил-2-оксазолин); поли(акриламид); поли(винилпирролидон); поли(N-(2-гидроксипропил)метакриламид); и coполимеры и их смеси. В предпочтительных вариантах осуществления маскирующий полимер в пегилированном белке представляет собой поли(этиленгликоль) или его coполимер. Пегилированные белки могут быть разупорядоченно пегилированными, т.е. имеющими один или несколько маскирующих полимеров, ковалентно присоединенных к неспецифичным сайту(сайтам) на белке, или могут быть пегилированными сайт-специфичным образом посредством ковалентного присоединения маскирующего полимера к специфичным сайту(сайтам) на белке. Сайт-специфичное пегилирование может выполняться, например, с использованием активированных маскирующих полимеров, имеющих одну или несколько реакционноспособных функциональных групп. Примеры описаны, например, в Hoffman et al., Progress in Polymer Science, 32:922-932, 2007.

В предпочтительном варианте осуществления белок является высокомолекулярным и представляет собой антитело, наиболее предпочтительно, моноклональное антитело, и имеет высокую вязкость в забуференном водном растворе, когда он сконцентрирован достаточно, для проведения инъекции терапевтически эффективного количества в объеме, не превышающем от 1,0 до 2,0 мл для ПК и от 3,0 до 5,0 мл для ВМ введения. Высокомолекулярные белки могут включать белки, описанные в Scolnik, mAbs 1:179-184, 2009; Beck, mAbs 3:107-110, 2011; Baumann, Curr. Drug Meth. 7:15-21, 2006; или Federici, Biologicals 41:131-147, 2013. Белки для использования в составах, описанных в данном документе, являются предпочтительно чистыми по существу и по существу гомогенными (т.е., не содержащими по существу загрязняющих белков и/или их необратимых агрегатов).

Предпочтительные моноклональные антитела в настоящем описании включают натализумаб (TYSABRI^®), цетуксимаб (ERBITUX^®), бевацизумаб (AVASTIN^®), трастузумаб (HERCEPTIN^®), инфликсимаб (REMICADE^®), ритуксимаб (RITUXAN^®), панитумумаб (VECTIBIX^®), офатумумаб (ARZERRA^®) и их биоаналоги. Иллюстративные высокомолекулярные белки могут включать тоцилизумаб (ACTEMRA^®), алемтузумаб (представленное на рынке под несколькими торговыми наименованиями), бродалумаб (разработанное Amgen, Inc (“Amgen”)), деносумаб (PROLIA^® и XGEVA^®) и их биоаналоги.

Иллюстративные молекулярные мишени для антител, описанных в данном документе, включают CD-белки, такие как CD3, CD4, CD8, CD19, CD20 и CD34; члены семейства HER-рецепторов, такие как рецептор EGF, рецептор HER2, HER3 или HER4; молекулы клеточной адгезии, такие как LFA-1, Mo1, p150,95, VLA-4, ICAM-1, VCAM и αv/β3 интегрин, включая их либо α- или β-субъединицы (например, антитела против-CD11a, против-CD18, или против-CD11b); факторы роста, такие как VEGF; IgE; антигены групп крови; рецептор flk2/flt3; рецептор ожирения (OB); белок C; PCSK9; и т.д.

Терапевтические средства на основе моноклональных антител, представленные в настоящее время на рынке

Многие белковые терапевтические средства, представленные в настоящее время на рынке, в особенности, антитела, определенные в настоящем описании, вводят посредством ВВ инфузии вследствие высоких требований к дозированию. Составы могут включать одно из терапевтических средств на основе антител, представленных в настоящее время на рынке, или его биоаналог. Некоторые белковые терапевтические средства, представленные в настоящее время на рынке, не являются высокомолекулярными, но все еще вводятся посредством ВВ инфузии, поскольку для терапевтической эффективности действия требуются высокие дозы. В нескольких вариантах осуществления предоставлены жидкие составы этих низкомолекулярных белков, определенных в настоящем описании, с концентрациями для доставки терапевтически эффективных количеств для ПК или ВМ инъекции.

Терапевтические средства на основе моноклональных антител, представленные в настоящее время на рынке, включают белимумаб (BENLYSTA^®), голимумаб (SIMPONI ARIA^®), абциксимаб (REOPRO^®), комбинацию тозитумомаб и йод-131 тозитумомаб, представленные на рынке, как BEXXAR^®, алемтузумаб (CAMPATH^®), паливизумаб (SYNAGIS^®), базиликсимаб (SIMULECT^®), адо-трастузумаб эмтансин (KADCYLA^®), пертузумаб (PERJETA^®), капромаб пендетид (PROSTASCINT KIT^®), каклизумаб (ZENAPAX^®), ибритумомаб тиуксетан (ZEVALIN^®), экулизумаб (SOLIRIS^®), ипилимаб (YERVOY^®), муромонаб-CD3 (ORTHOCLONE OKT3^®), раксибакумаб, нимотузумаб (THERACIM^®), брентуксимаб ведотин (ADCETRIS^®), адалимумаб (HUMIRA^®), голимумаб (SIMPONI^®), паливизумаб (SYNAGIS^®), омализумаб (XOLAIR^®), и устекинумаб (STELARA^®).

Натализумаб, гуманизированное моноклональное антитело против молекулы клеточной адгезии α4-интегрина, применяют при лечении рассеянного склероза и болезни Крона. Ранее представленное на рынке под торговым наименованием ANTEGREN^®, натализумаб в настоящее время реализуется совместно как TYSABRI^® от Biogen Idec (“Биоген”) и Elan Corp. (“Элан”). TYSABRI^® продуцируется в клетках мышиной миеломы. Каждые 15 мл дозы содержат 300 мг натализумаб; 123 мг хлорида натрия, USP; 17,0 мг натрия фосфата, моноосновного, моногидрата, USP; 7,24 мг натрия фосфата, двухосновного, гептагидрата, USP; 3,0 мг полисорбата 80, USP/NF, в воде для ВВ инъекции, USP при pH 6,1. Натализумаб типовым образом вводят посредством ежемесячной внутривенной (ВВ) инфузиии, и его эффективность была доказана при лечении симптомов как рассеянного склероза, так и болезни Крона, а также для профилактики рецидивов, потери зрения, снижения когнитивных способностей и значительного улучшения качества жизни пациента.

Как используют в данном описании, термин “натализумаб” включает моноклональное антитело против молекулы клеточной адгезии, α4-интегрина, известное под Международным непатентованным наименованием “НАТАЛИЗУМАБ”, или его антигенсвязывающую часть. Натализумаб включает антитела, описанные в Патенте США № 5840299, Патенте США № 6033665, Патенте США № 6602503, Патенте США № 5168062, Патенте США № 5385839 и Патенте США № 5730978. Натализумаб включает активное средство в продуктах, представленных на рынке под торговым наименованием TYSABRI^® от Biogen Idec и Elan Corporation или их биоаналогичный продукт.

Цетуксимаб представляет собой ингибитор рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), применяемый для лечения метастатического колоректального рака и рака головы и шеи. Цетуксимаб представляет собой химерное (мышиное/человеческое) моноклональное антитело, обычно вводимое посредством ВВ инфузии. Цетуксимаб представлен на рынке для ВВ применения только под торговым наименованием ERBITUX^® от Bristol-Myers Squibb Company (North America; “Bristol-Myers Squibb”), Eli Lilly and Company (North America; “Eli Lilly”), и Merck KGaA. ERBITUX^® продуцируется в культуре клеток млекопитающего (мышиной миеломы). Каждый флакон ERBITUX^® объемом 50 мл для однократного применения, содержит 100 мг цетуксимаб при концентрации, равной 2 мг/мл и составлен в не содержащем консерванта растворе, содержащем 8,48 мг/мл хлорида натрия, 1,88 мг/мл двухосновного гептагидрата фосфата натрия, 0,42 мг/мл моногидрата моноосновного фосфата натрия и воды для ВВ инъекции, USP.

Цетуксимаб назначают для лечения пациентов с экспрессирующим рецептор эпидермального фактора роста, (EGFR)-экспрессирующим, KRAS дикого типа, метастатическим колоректальным раком (mCRC), в комбинации с химиотерапией, и в качестве единственного средства у пациентов, безуспешно прошедших терапию на основе оксалиплатина и иринотекана, или пациентов с непереносимостью иринотекана. Цетуксимаб назначают для лечения пациентов с плоскоклеточным раком области головы и шеи в комбинации с химиотерапией на основе соединений платины в качестве терапии первой линии рецидивирующего и/или метастатического заболевания, и в комбинации с лучевой терапией для лечения местно прогрессирующего заболевания. Примерно 75% пациентов с метастатическим колоректальным раком имеют EGFR-экспрессирующую опухоль и, следовательно, считаются удовлетворяющими критериям для лечения с использованием цетуксимаб или панитумумаб, в соответствии с руководством FDA.

Как используют в данном описании, термин “цетуксимаб” включает моноклональное антитело, известное под Международным непатентованным наименованием “ЦЕТУКСИМАБ” или его антигенсвязывающую часть. Цетуксимаб включает антитела, описанные в Патенте США № 6217866. Цетуксимаб включает активное средство в продуктах, представленных на рынке под торговым наименованием ERBITUX^® и их биоаналогичных продуктах. Биоаналоги ERBITUX^® могут включать средства, в настоящее время разрабатываемые Amgen, AlphaMab Co., Ltd. (“Альфамаб”), и Actavis plc (“Актавис”).

Бевацизумаб, гуманизированное моноклональное антитело, которое ингибирует фактор роста A сосудистого эндотелия (VEGF-A), действует как антиангиогенное средство. Оно представлено на рынке под торговым наименованием AVASTIN^® от Genentech, Inc. (“Genentech”) и F. Hoffmann-La Roche, LTD (“Roche”). Оно лицензировано для лечения различных злокачественных новообразований, включающих колоректальные, легких, молочной железы (за пределами США), глиобластому (только США), почек и яичника. AVASTIN^® получил разрешение FDA на применение в 2004 г. для лечения метастатического колоректального рака, при использовании вместе со стандартным химиотерапевтическим лечением (в качестве терапии первой линии) и с терапией на основе 5-фторурацила для терапии второй линии метастатического колоректального рака. В 2006 г FDA разрешила AVASTIN^® для применения при терапии первой линии прогрессирующего несквамозного немелкоклеточного рака легких в комбинации с химиотерапией карбоплатином/паклитакселом. AVASTIN^® вводят в виде ВВ инфузии каждые три недели при дозе, равной либо 15 мг/кг или 7,5 мг/кг. Более высокую дозу обычно назначают вместе с химиотерапией на основе карбоплатина, в то время как более низкую дозу назначают вместе с химиотерапией на основе цисплатина. В 2009 г. FDA разрешила AVASTIN^® для применения для лечения метастатической почечно-клеточной карциномы (формы рака почки). FDA также выдало разрешение по ускоренной процедуре на применение AVASTIN^® для лечения рецидивирующей мультиформной глиобластомы в 2009 г. Лечение на стадии первоначального роста еще находится на фазе III клинических испытаний.

Национальная комплексная онкологическая сеть США (“NCCN”) рекомендует бевацизумаб в качестве стандартной терапии первой линии в комбинации с любой химиотерапией на основе соединений платины, с последующим поддержанием бевацизумаб до прогрессирования заболевания. NCCN обновил свое Руководство по клинической практике в онкологии (Руководство NCCN) для лечения рака молочной железы в 2010 г., для подтверждения рекомендации, касающейся применения бевацизумаб (AVASTIN^®, Genentech/Roche) при лечении метастатического рака молочной железы.

Как используют в данном описании, термин “бевацизумаб” включает моноклональное антитело, которое ингибирует фактор роста A сосудистого эндотелия (VEGF-A), известное под Международным непатентованным наименованием/Общепринятым наименованием “БЕВАЦИЗУМАБ”, или его антигенсвязывающую часть. Бевацизумаб описан в патенте США № 6054297. Бевацизумаб включает активное средство в продуктах, представленных на рынке под торговым наименованием AVASTIN^®, и его биоаналогичных продуктах. Биоаналоги AVASTIN^® могут включать средства, разрабатываемые в настоящее время Amgen, Actavis, Alphamab и Pfizer, Inc (“Pfizer”). Биоаналоги AVASTIN^® могут включать биоаналог, известный как BCD-021, производимый как Biocad и проходящий в настояшее время клинические испытания в США.

Трастузумаб представляет собой моноклональное антитело, которое препятствует работе рецептора HER2/neu. Трастузумаб представлен на рынке под торговым наименованием HERCEPTIN^® от Genentech, Inc. HERCEPTIN^® продуцируется линий клеток млекопитающего (яичника китайского хомяка (CHO)). HERCEPTIN^® представляет собой стерильный, с цветом от белого до бледно-желтого, не содержащий консервантов лиофилизированный порошок для ВВ введения. Каждый флакон HERCEPTIN^® содержит 440 мг трастузумаб, 9,9 мг L-гистидина HCl, 6,4 мг L-гистидина, 400 мг дигидрата a,a-трегалозы и 1,8 мг полисорбата 20, USP. Восстановление с 20 мл воды позволяет получить многодозовый раствор, содержащий 21 мг/мл трастузумаб. HERCEPTIN^® в настоящее время вводят посредством ВВ инфузии каждый раз ежендельно и при дозировке в интервале от приблизительно 2 мг/кг до приблизительно 8 мг/кг.

Трастузумаб в основном применяют для лечения некоторых злокачественных новообразований молочной железы. Ген HER2 амплифицируется в 20-30% случаев ранней стадии злокачественных новообразований молочной железы, что заставляет его сверхэкспрессировать рецепторы эпидермального фактора роста (EGF) в клеточной мембране. Трастузумаб обычно вводят в качестве поддерживающей терапии для пациентов с HER2-положительным раком молочной железы, в типовом случае, в течение одного года после химиотерапии. Трастузумаб в настоящее время вводят посредством ВВ инфузии каждый раз еженедельно и при дозировке в интервале от приблизительно 2 мг/кг до приблизительно 8 мг/кг.

Как используют в данном описании, термин “трастузумаб” включает моноклональное антитело, которое препятствует работе рецептора HER2/neu, известное под Международным непатентованным наименованием/Общепринятым наименованием “ТРАСТУЗУМАБ”, или его антигенсвязывающую часть. Трастузумаб описан в патенте США № 5821337. Трастузумаб включает активное средство в продуктах, представленных на рынке под торговым наименованием HERCEPTIN^® и их биоаналогах. Термин “трастузумаб” включает активное средство в биоаналогичных HERCEPTIN^® продуктах, представленных на рынке под торговыми наименованиями HERTRAZ^® от Mylan, Inc. (“Mylan”) и CANMAB^® от Biocon, Ltd. (“Biocon”). Трастузумаб может включать активное средство в биоаналогичных HERCEPTIN^® продуктах, разрабатываемых Amgen и PlantForm Corporation, Канада

Инфликсимаб представляет собой моноклональное антитело против фактора некроза опухоли альфа (ФНОα), применяемое для лечения аутоиммунных заболеваний. Оно представлено на рынке под торговым наименованием REMICADE^® от Janssen Global Services, LLC (“Janssen”) в США, Mitsubishi Tanabe Pharma в Японии, Xian Janssen в Китае и Merck & Co (“Merck”); в других странах. Инфликсимаб является химерным мышиным/человеческим моноклональным антителом с молекулярной массой, равной примерно 144 кДа. В нескольких вариантах осуществления, композиции содержат биоаналог REMICADE^®, такой как REMSIMA™ или INFLECTRA™. Как REMSIMA^TM, разработанная Celltrion, Inc. (“Celltrion”), так и INFLECTRA^TM, разработанная Hospira Inc, Великобритания, были рекомендованы для регистрации регуляторными органами в Европе. Celltrion представило заявку на REMSIMA^TM в FDA. Инфликсимаб в настоящее время вводят посредством ВВ инфузии при дозах в интервале от приблизительно 3 мг/кг до приблизительно 10 мг/кг.

Инфликсимаб содержит примерно 30% аминокислотной последовательности мышиной вариабельной области, которая придает антигенсвязывающую специфичность человеческому ФНОα. Остальные 70% соответствуют константной области тяжелой цепи человеческого IgG1 и константной области человеческой каппа легкой цепи. Инфликсимаб имеет высокую аффинность к человеческому ФНОα, который является цитокином с множественным биологическим действием, включающим опосредование воспалительных ответов и модуляцию иммунной системы.

Инфликсимаб представляет собой рекомбинантное антитело, обычно продуцируемое и секретируемое клетками мышиной миеломы (клетками SP2/0). Антитело в настоящее время производят посредством непрерывного перфузионного культивирования клеток. Моноклональное антитело инфликсимаб экспрессируют, используя гены химерного антитела, состоящие из последовательностей вариабельной области, клонированных из мышиной гибридомы A2 против-ФНОα, и последовательностей константной области человеческого антитела, поставляемых векторами экспрессии плазмиды. Генерацию мышиной гибридомы против-ФНОα выполняют посредством иммунизации мышей BALB/c очищенным рекомбинантным человеческим ФНОα. Конструкции вектора тяжелой и легкой цепи линеаризуют и трансфицируют в клетки Sp2/0 посредством электропорации. Стандартные стадии очистки могут включать хроматографическую очистку, инактивацию вирусов, нанофильтрацию и ультрафильтрацию/диафильтрацию.

Как используют в данном описании, термин “инфликсимаб” включает химерное мышиное/человеческое моноклональное антитело, известное под Международным непатентованным наименованием “ИНФЛИКСИМАБ”, или его антигенсвязывающую часть. Инфликсимаб нейтрализует биологическую активность ФНОα посредством высокоаффинного связывания с растворимой и трансмембранной формами ФНОα и ингибирует свяызывание ФНОα с его рецепторами. Инфликсимаб описан в патенте США № 5698195. Термин “Инфликсимаб” включает активное средство в продуктах, представленных на рынке или предложенных для представления на рынке под торговыми наименованиями REMICADE^® многими компаниями; REMSIMA™ от Celltrion и INFLECTRA™ от Hospira, Inc (“Hospira”). Инфликсимаб поставляют в виде стерильной лиофилизированной таблетки для восстановления и разбавления. Каждый флакон инфликсимаб содержит 100 мг инфликсимаб и эксципиенты, такие как моногидрат моноосновного фосфата натрия, дигидрат двухосновного фосфата натрия, сахароза и полисорбат 80.

Деносумаб (PROLIA^® и XGEVA^®) представляет собой человеческое моноклональное антитело - и первый ингибитор RANKL – получивший разрешение на применение для лечения женщин в постменопаузе с риском остеопороза и пациентов с метастазами в костной ткани от солидных опухолей. Деносумаб проходит Фазу II клинических испытаний для лечения ревматоидного артрита.

Панитумумаб представляет собой полностью человеческое моноклональное антитело, получившее разркшение FDA для лечения EGFR-экспрессирующего метастатического рака с прогрессированием заболевания. Панитумумаб представлен на рынке под торговым наименованием VECTIBIX^® от Amgen. VECTIBIX^® пакуют в виде концентрата панитумумаб с 20 мг/мл во флаконах объемом 5 мл, 10 мл и 15 мл для ВВ инфузии. При получении в соответствии с инструкциями в упаковке, конечная концентрация панитумумаб не превышает 10 мг/мл. VECTIBIX^® вводят при дозировке, равной 6 мг/кг, каждые 14 дней в виде внутривенной инфузии. Как используют в данном описании, термин “панитумумаб” включает антитело против рецептора человеческого эпидермального фактора роста, известное под Международным непатентованным наименованием “ПАНИТУМУМАБ.” Термин “панитумумаб” включает активное средство в продуктах, представленных на рынке под торговым наименованием VECTIBIX^® by Amgen и их биоаналоги. термин “панитумумаб” включает моноклональные антитела, описанные в Патенте США № 6235883. Термин “панитумумаб” включает активное средство в биоаналогичных VECTIBIX^® продуктах, включающих биоаналог VECTIBIX^®, разрабатываемый BioXpress, SA (“BioXpress”).

Белимумаб (BENLYSTA^®) представляет собой человеческое моноклональное антитело с молекулярной массой, равной приблизительно 151,8 кДа, которое ингибирует фактор активации В-лимфоцитов (BAFF). Белимумаб имеет разрешение на применение в Соединенных Штатах, Канаде и Европе для лечения системной красной волчанки. Белимумаб в настоящее время вводят пациентам с волчанкой посредством ВВ инфузии при дозировке 10 мг/кг. Высокомолекулярные, низковязкие белковые композиции могут включать Белимумаб, предпочтительно в концентрации, равной от приблизительно 400 мг/мл до приблизительно 1000 мг/мл. Предпочтительные интервалы рассчитывают, исходя из массы тела, равной 40-100 кг (примерно 80-220 фунтов) в объеме 1 мл.

Абциксимаб (REOPRO^®) производится Janssen Biologics BV и распространяется Eli Lilly & Company (“Eli Lilly”). Абциксимаб представляет собой Fab фрагмент химерного человеческого-мышиного моноклонального антитела 7E3. Абциксимаб связывается с гликопротеином (GP) IIb/IIIa рецептора человеческих тромбоцитов и ингибирует агрегацию тромбоцитов посредством предотвращения связывания фибриногена, фактора фон Виллебранда и других адгезивных молекл. Оно также связывается с витронектиновым (ανβ3) рецептором, обнаруженным на тромбоцитах, и эндотелиальных клетках и клетках гладкой мускулатуры сосудистой стенки. Абциксимаб представляет собой ингибитор агрегации, в основном, применяемый во время и после операций на коронарных артериях. Абциксимаб вводят посредством ВВ инфузии, первоначально в виде болюса 0,25 мг/кг и с последующей непрерывной ВВ инфузии 0,125 мкг/кг/минуту в течение 12 часов.

Тозитумомаб (BEXXAR^®) представляет собой лекарственное средство для лечения фолликулярной лимфомы. Оно является моноклональным антителом IgG2a против CD20, полученным из иммортализованных мышиных клеток. Тозитумомаб вводят в виде последовательной инфузии: холодное моноклональное антитело с последующим йод(¹³¹I)-тозитумомаб, таким же антителом, ковалентно связанным с радионуклидом йодом-131. Клинические испытания установили эффективность действия режима тозитумомаб/йод-тозитумомаб у пациентов с рецидивирующей рефрактерной фолликулярной лимфомой. BEXXAR^® в настоящее время вводят при дозе, равной 450 мг, посредством ВВ инфузии.

Алемтузумаб (представленный на рынке как CAMPATH^®, MABCAMPATH^® или CAMPATH-1H^®, и находящийся в настоящее время в дополнительной разработке как LEMTRADA^®) представляет собой моноклональное антитело, используемое при лечении хронической лимфоцитарной лейкемии (CLL), кожной Т-клеточной лимфомы (CTCL) и Т-клеточной лимфомы. Его также применяют по протоколам клинических испытаний для лечения некоторых аутоиммунных заболеваний, таких как рассеянный склероз. Алемтузумаб имеет массу, равную примерно 145,5 кДа. Его вводят в виде ежесуточной ВВ инфузии по 30 мг для пациентов с B-клеточной хронической лимфоцитарной лейкемией.

Паливизумаб (SYNAGIS^®) представляет собой гуманизированное моноклональное антитело, направленное против эпитопа в A антигенном участке белка F респираторно-синцитиального вируса. В двух клинических испытаниях на Фазе III у пациентов детского возраста, паливизумаб снижал риск госпитализации вследствие инфекции респираторно-синцитиального вируса на 55% и 45%. Паливизумаб дозируют один раз в месяц посредством ВМ инъекции 15 мг/кг.

Офатумумаб представляет собой человеческое моноклональное антитело против-CD20, которое, по-видимому, ингибирует раннюю стадию активации В-лимфоцитов. Офатумумаб представлен на рынке под торговым наименованием ARZERRA^® от GlaxoSmithKline, акционерное общество (“GlaxoSmithKline”). ARZERRA^® распространяют во флаконах для однократного применения, содержащих 100 мг/5 мл и 1000 мг/50 мл офатумумаб для ВВ инфузии. Офатумумаб разрешен FDA для применения при лечении хронической лимфоцитарной лейкемии и имеет также показанный потенциал при лечении фолликулярной неходжкинской лимфомы, диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы, ревматоидного артрита и рецидивирующе-ремиттирующего рассеянного склероза. Офатумумаб имеет молекулярную массу, равную приблизительно 149 кДа. Его в настоящее время вводят посредством ВВ инфузии при первоначальной дозе, равной 300 мг, с последующей еженедельной инфузией по 2000 мг. Как используют в данном описании, термин “офатумумаб” включает моноклональное антитело против CD20, известное под Международным непатентованным наименованием “ОФАТУМУМАБ”. Термин “офатумумаб” включает активное средство в продуктах, представленных на рынке под торговым наименованием ARZERRA^®, и их биоаналогах. Термин “офатумумаб” включает активное средство в биоаналогичных ARZERRA^® продуктах, разрабатываемых BioExpress. Высокомолекулярные, низковязкие жидкие белковые композиции могут включать офатумумаб, предпочтительно в концентрации, равной от приблизительно 300 мг/мл до приблизительно 2000 мг/мл.

Трастузумаб эмтансин (в США, адо-трастузумаб эмтансин, представленный на рынке как KADCYLA^®) представляет собой конъюгат антитело-лекарственное средство, состоящий из моноклонального антитела трастузумаб, связанного с цитотоксическим средством мертансином (DM1^®). Трастузумаб, описанный выше, останавливает рост раковых клеток посредством связывания с рецептором HER2/neu, в то время как мертансин попадает в клетки и разрушает их посредством связывания с тубулином. В Соединенных Штатах, трастузумаб эмтансин получил разрешение на применения конкретно для лечения рецидивирующего HER2-положительного метастатического рака молочной железы. Множество клинических испытаний трастузумаб эмтансин на Фазе III планируются или уже проводятся в 2014 г. Трастузумаб эмтансин в настоящее время вводят посредством ВВ инфузии 3,6 мг/кг. Высокомолекулярные, низковязкие жидкие композиции могут включать трастузумаб эмтансин, предпочтительно в концентрации, равной от приблизительно 144 мг/мл до приблизительно 360 мг/мл.

Пертузумаб (PERJETA^®) представляет собой моноклональное антитело, которое ингибирует димеризацию HER2. Пертузумаб получил разрешение FDA для лечения HER2-положительного метастатического рака молочной железы в 2012 г. В настоящее время рекомендуемая дозировка Пертузумаб составляет от 420 мг от 840 мг посредством ВВ инфузии. Высокомолекулярные, низковязкие жидкие композиции могут включать пертузумаб, предпочтительно в концентрации, равной от приблизительно 420 мг/мл до приблизительно 840 мг/мл.

Даклизумаб представляет собой гуманизированное моноклональное антитело против CD25 и применяется для предотвращения отторжения при пересадке органов, особенно, в случае почечных трансплантатов. Лекарственное средство также проходит исследования для лечения рассеянного склероза. Даклизумаб имеет молекулярную массу, равную приблизительно 143 кДа. Даклизумаб был представлен на рынке в США от Hoffmann-La Roche, Ltd. (“Roche”) как ZENAPAX^® и вводится посредством ВВ инфузии 1 мг/кг. Даклизумаб High-Yield Process (DAC HYP; BIIB019; Biogen Idec (“Biogen”) и AbbVie, Inc. (“AbbVie”)) находится на фазе III клинических испытаний в виде ежемесячной подкожной инъекции 150 мг для лечения рецидивирующе-ремиттирующего рассеянного склероза. Высокомолекулярные, низковязкие жидкие композиции могут включать даклизумаб, предпочтительно в концентрации, равной от приблизительно 40 мг/мл до приблизительно 300 мг/мл.

Экулизумаб (SOLIRIS^®) представляет собой гуманизированное моноклональное антитело, разрешенное для лечения редких заболеваний крови, таких как пароксизмальная ночная гемоглобинурия и атипичный гемолитико-уремический синдром. Экулизумаб, с молекулярной массой, равной приблизительно 148 кДа, разрабатывается Alexion Pharmaceuticals, Inc (“Alexion”). Его вводят посредством ВВ инфузии в количестве от приблизительно 600 мг до приблизительно 1200 мг. Высокомолекулярные, низковязкие жидкие композиции могут включать экулизумаб, предпочтительно в концентрации, равной от приблизительно 500 мг/мл до приблизительно 1200 мг/мл.

Тоцилизумаб (ACTEMRA^®) представляет собой гуманизированное моноклональное антитело против рецептора интерлейкина-6. Он является иммуносупрессорным лекарственным средством, в основном, для лечения ревматоидного артрита (РА) и системного ювенильного идиопатического артрита, тяжелой формы РА у детей. Тоцилизумаб обычно вводят посредством ВВ инфузии в дозах от приблизительно 6 мг/кг до приблизительно 8 мг/кг. Высокомолекулярные, низковязкие жидкие композиции могут включать тоцилизумаб, предпочтительно в концентрации, равной приблизительно 240 мг/мл до приблизительно 800 мг/мл.

Ритуксимаб (RITUXAN^®) представляет собой химерное моноклональное антитело против CD20, применямое для лечения разнообразных заболеваний, характеризуемых избыточными количествами В-клеток, сверхактивных В-клеток или дисфункциональных В-клеток. Ритуксимаб применяют для лечения злокачественных новообразований лейкоцитарной системы, таких как лейкемии и лимфомы, включающих лимфому Ходжкин и ее лимфоцитарный-преобладающий подтип. Была показана его эффективность при лечении ревматоидного артрита. Ритуксимаб широко применяют вне зарегистрированных показаний для лечения сложных случаев рассеянного склероза, системной красной волчанки и аутоиммунных анемий.

Ритуксимаб представлен на рынке в США под торговым наименованием RITUXAN^® совместно Biogen и Genentech и за пределами США под торговым наименованием MABTHERA^® от Roche. RITUXAN^® распространяют во флаконах для однократного применения, содержащих 100 мг/10 мл и 500 мг/50 мл. RITUXAN^® обычно вводят посредством ВВ инфузии приблизительно 375 мг/м². Термин “ритуксимаб”, как используют в данном описании, включает моноклональное антитело против CD20, известное под Международным непатентованным наименованием/Общепринятым наименованием “РИТУКСИМАБ.” Ритуксимаб включает моноклональные антитела, описанные в Патенте США № 5736137. Ритуксимаб включает активное средство в продуктах, представленных на рынке под торговым наименованием RITUXAN^® и MABTHERA^®, и их биоаналогах.

Высокомолекулярные, низковязкие жидкие композиции могут включать ритуксимаб, предпочтительно в концентрации, равной от приблизительно 475 мг/мл до приблизительно 875 мг/мл (приблизительно расчитанной с использованием площади поверхности тела в интервале от 1,3 до 2,3 квадратных метров, выведенной из формулы Мостеллера для субъектов в интервале от 5 футов, 40 кг до 6 футов, 100 кг). Концентрации рассчитывают для композиции объемом 1 мл.

Ипилимаб представляет собой человеческое моноклональное антитело, разработанное компанией Bristol-Myers Squibb (“Bristol-Myers Squibb”). Представленное на рынке как YERVOY^®, оно применяется для лечения меланомы и также проходит клинические испытания для лечения немелкоклеточной карциномы легких (NSCLC), мелкоклеточного рака легкого (SCLC), и метастатического гормонально-рефрактерного рака простаты. Ипилимаб в настоящее время вводят посредством ВВ инфузии 3 мг/кг. Высокомолекулярные, низковязкие жидкие композиции могут включать ипилимаб, предпочтительно в концентрации, равной от приблизительно 120 мг/мл до приблизительно 300 мг/мл.

Раксибакумаб (ABthrax^®) представляет собой человеческое моноклональное антитело, предназначенное для профилактики и лечения вдыхаемой сибирской язвы. В настоящее время его вводят посредством ВВ инфузии. Предлагаемая дозировка у взрослых и детей свыше 50 кг составляет 40 мг/кг. Высокомолекулярные, низковязкие жидкие композиции могут включать раксибакумаб, предпочтительно в концентрации, равной от приблизительно 1000 мг/мл до приблизительно 4000 мг/мл.

Нимотузумаб (THERACIM^®, BIOMAB EGFR^®, THERALOC^®, CIMAher^®) представляет собой гуманизированное моноклональное антитело с молекулярной массой, равной приблизительно 151 кДа, применяемое для лечения плоскоклеточной карциномы головы и шеи, рецидивирующей или рефрактерной злокачественной глиомы высокой степени злокачественности, анапластических астроцитом, глиобластом и диффузной истинной понтинной глиомы. Нимотузумаб обычно вводят посредством ВВ инфузии приблизительно 200 мг еженедельно. Высокомолекулярные, низковязкие жидкие композиции могут включать нимотузумаб, предпочтительно в концентрации, равной приблизительно 200 мг/мл.

Брентуксимаб ведотин (ADCETRIS^®) представляет собой конъюгат антитело-лекарственное средство, направленный на белок CD30, экспрессируемый при классической лимфоме Ходжкин и системной анапластической крупноклеточной лимфоме. Его вводят посредством ВВ инфузии приблизительно 1,8 мг/кг. Высокомолекулярные, низковязкие жидкие композиции могут включать брентуксимаб ведотин, предпочтительно в концентрации, равной от приблизительно 80 мг/мл до приблизительно 200 мг/мл.

Итолизумаб (ALZUMAB^®) представляет собой гуманизированное IgG1 моноклональное антитело, разработанное Biocon. Итолизумаб прошел полностью успешные исследования на Фазе III у пациентов с псориазом, от умеренной до тяжелой формы. Итолизумаб получил разрешение на маркетинг в Индии; заявка на разрешение FDA не представлена.

Обинутузумаб (GAZYVA^®), первоначально разработанное Roche, и в дальнейшем разрабатываемое в соответствии с соглашением о сотрудничестве с Biogen, представляет собой гуманизированное моноклональное антитело против CD20, разрешенное для лечения хронической лимфоцитарной лейкемии. Оно также проходит исследования на Фазе III клинических испытаний для пациентов с различными лимфомами. Дозировки, равные приблизительно 1000 мг, вводят посредством ВВ инфузии.

Цертолизумаб пегол (CIMZIA^®) представляет собой Fab' фрагмент рекомбинантного, гуманизированного антитела, со специфичностью для человеческого фактора некроза опухоли альфа (ФНОα), конъюгированный с примерно 40 кДа полиэтиленгликолем (PEG2MAL40K). Молекулярная масса цертолизумаб пегол равна примерно 91 кДа.

Другие терапевтические средства на основе моноклональных антител, которые могут быть составлены со средствами для снижения вязкости, включают CT-P6 от Celltrion, Inc. (Celltrion).

Терапевтические средства на основе антител, находящиеся на последней стадии испытаний разработки

Продвижение терапевтических средств на основе антител до поздней стадии клинической разработки и регуляционного тестирования проходят быстрыми темпами. В 2014 г. более чем 300 моноклональных антител проходили клинические испытания, и 30 коммерчески спонсируемых терапевтических средств на основе антител проходили оценку на поздней стадии исследований. Первые заявки на регистрацию для двух моноклональных антител (ведолизумаб и рамуцирумаб) были недавно поданы в FDA. Amgen в настоящее время финансирует многие проходящие Фазу III испытания по применению бродалумаб у пациентов с бляшковидным псориазом, причем дополнительные испытания запланированы или для них проводится набор пациентов. XBiotech, Inc. спонсировала две Фазы I клинических испытаний MABp1 (Xilonix) для пациентов с прогрессирующим злокачественным новообразованием или диабетом второго типа. Для дополнительных испытаний MABp1 проводится набор пациентов. Многие испытания финансируются MedImmune, LLC (“MedImmune”) и находятся в процессе исполнения или набора пациентов для лечения лейкемии с использованием моксетумомаб пасудотокс. В процессе исполнения находятся долговременные исследования безопасности и эффективности действия для применения тилдракизумаб для лечения хронического бляшковидного псориаза. Недавно были завершены многие испытания на фазе II по применению рилотумумаб для лечения различных злокачественных новообразований.

По меньшей мере 28 моноклональных антител представляют собой высокомолекулярные белки, проходящие в настоящее время или имеющие недавно завершенную Фазу III исследований для лечения воспалительных или иммунологических расстройств, злокачественных новообразований, высокого уровня холестерина, остеопороза, болезни Альцгеймера и инфекционных заболеваний. Моноклональные антитела, проходящие или имеющие недавно завершенную Фазу III испытаний, включают AMG 145, элотузумаб, эпратузумаб, фарлетузумаб (MORAb-003), гантенерумаб (RG1450), гевокизумаб, инотузумаб озогамицин, итолизумаб, иксекизумаб, лебрикизумаб, меполизумаб, наптумомаб эстафенатокс, нецитумумаб, ниволумаб, окрелизумаб, онартузумаб, ракотумомаб, рамуцирумаб, реслизумаб, ромосозумаб, сарилумаб, сецукинумаб, сирукумаб, соланезумаб, табалумаб и ведолизумаб. Смесь моноклональных антител (актоксумаб и безлотоксумаб) также оценивают на Фазе III испытаний. См., например, Reichert, MAbs 5:1-4, 2013.

Ведолизумаб представляет собой моноклональное антитело, разработанное Millennium Pharmaceuticals, Inc (“Millennium”; дочерняя компания Takeda Pharmaceuticals Company, Ltd. (“Takeda”)). Было обнаружено, что ведолизумаб является безопасным и высокоэффективным для индуцирования и поддержания клинической ремиссии у пациентов с умеренной до тяжелой степенью язвенного колита. Фаза III клинических испытаний показала, что оно позволяет достичь целей индуцирования клинического ответа и поддержания ремиссии у пациентов с болезнью Крона и язвенным колитом. Исследования, оценивающие долговременные клинические результаты, показали близкое к 60% количество пациентов, достигающих клинической ремиссии. Общепринятая доза ведолизумаб составляет 6 мг/кг посредством ВВ инфузии.

Рамуцирумаб представляет собой человеческое моноклональное антитело разработанное для лечения солидных опухолей. Фаза III клинических испытаний проводится для лечения рака молочной железы, метастатической аденокарциномы желудка, немелкоклеточного рака легкого, и других типов рака. Рамуцирумаб, при некоторых испытаниях на Фазе III вводят при приблизительно 8 мг/кг посредством ВВ инфузии.

Рилотумумаб представляет собой человеческое моноклональное антитело, которое ингибирует действие фактора роста/рассеяния гепатоцитов. Разработанное Amgen, оно проходит Фазу III испытаний в качестве терапии для солидных опухолей. На открытой Фазе III исследования лечения рилотумумаб у пациентов с распространенным или метастатическим раком пищевода рилотумумаб будет вводиться при приблизительно 15 мг/кг посредством ВВ инфузии.

Эволоцумаб (AMG 145), также разработанное Amgen, представляет собой моноклональное антитело, которое связывается с PCSK9. Эволоцумаб показан при гиперхолестеринемии и гиперлипидемии.

Алироцумаб (REGN727) представляет собой человеческое моноклональное антитело от Regeneron Pharmaceuticals, Inc. (“Regeneron”) и Sanofi-Aventis U.S. LLC (“Sanofi”), показанное при гиперхолестеринемии и остром коронарном синдроме.

Наптумомаб эстафенатокс, ABR-217620 от Active Biotech AB (“Active Biotech”) представляет собой моноклональное антитело, показанное при почечно-клеточной карциноме.

Ракотумомаб от CIMAB, SA (“CIMAB”); Laboratorio Elea S.A.C.I.F.y A. представляет собой моноклональное антитело, показанное при немелкоклеточном раке легкого.

Другие антитела, которые могут быть составлены вместе со средствами для снижения вязкости, включают бокоцизумаб (PF-04950615) и танезумаб; ганитумаб, блинатумомаб, требананиб от Amgen; иммуноглобулин против сибирской язвы от Cangene Corporation; теплизумаб от MacroGenics, Inc.; MK-3222, MK-6072 от Merck & Co (“Merck”); гирентуксимаб от Wilex AG; RIGScan от Navidea Biopharmaceuticals (“Navidea”); PF-05280014 от Pfizer; SA237 от Chugai Pharmaceutical Co. Ltd. (“Chugai”); гуселкумаб от Janssen/Johnson and Johnson Services, Inc. (“J&J”); Антитромбин Гамма (KW-3357) от Kyowa; и CT-P10 от Celltrion.

Антитела, находящиеся на ранней стадии клинических испытаний

Многие моноклональные антитела недавно начали проходить или проходят клинические испытания. Они могут включать белки, в настоящее время вводимые посредством ВВ инфузии, предпочтительно белки, имеющие молекулярную массу большую чем приблизительно 120 кДа, обычно от приблизительно 140 кДа до приблизительно 180 кДа. Они могут также включать такие высокомолекулярные белки, такие как конъюгированные с альбумином лекарственные средства или пептиды, которые также начинают проходить клинические испытания или были разрешены FDA к применению. Многие моноклональные антитела от Amgen в настоящее время проходят клинические испытания. Они могут являться высокомолекулярными белками, например, AMG 557, которое представляет собой человеческое моноклональное антитело, разработанное совместно Amgen и AstraZeneca и в настоящее время проходящее Фазу I испытаний для лечения волчанки. Аналогично, AMG 729 представляет собой гуманизированное моноклональное антитело, разработанное Amgen и в настоящее время проходящее Фазу I испытаний для лечения волчанки и ревматоидного артрита. Дополнительно, AMG 110 представляет собой моноклональное антитело для эпителиальных молекул клеточной адгезии; AMG 157, совместно разработанное Amgen и AstraZeneca, представляет собой человеческое моноклональное антитело, в настоящее время проходящее Фазу I для лечения астмы; AMG 167 представляет собой гуманизированное моноклональное антитело, которое оценивали на Фазе I многих испытаний для лечения остеопении; AMG 334, прошедшее Фазу I исследований по дозировке, и в настоящее время проходящее Фазу II исследований для лечения мигреней и приливов, представляет собой человеческое моноклональное антитело, которое ингибирует кальцитонин-ген-связанный пептид; AMG 780 представляет собой моноклональное антитело против ангиопоэтина, которое ингибирует взаимодействие между селективным к эндотелиальным клеткам рецептором Tie2 и его лигандами Ang1 и Ang2, и недавно прошедшее Фазу I испытаний в качестве терапии злокачественного новообразования; AMG 811 представляет собой человеческое моноклональное антитело, которое ингибирует интерферон гамма, проходящее исследование в качестве терапии для системной красной волчанки; AMG 820 представляет собой человеческое моноклональное антитело, котор ингибирует c-fms и снижает функцию опухоль-ассоциированных макрофагов (TAM) и исследуется в качестве терапии злокачественного новообразования; AMG 181, совместно разработанное Amgen и AstraZeneca, представляет собой человеческое моноклональное антитело, которое ингибирует действие альфа4/бета7, и проходит Фазу II испытаний в качестве терапии язвенного колита и болезни Крона.

Многие моноклональные антитела в настоящее время проходят клинические испытания для лечения аутоиммунных нарушений. Эти моноклональные антитела могут быть включены в низковязкие высокомолекулярные жидкие составы. RG7624 представляет собой полностью человеческое моноклональное антитело, сконструированное для специфического и селективного связывания с человеческим интерлейкином-17 из семейства цитокинов. Проводится Фаза I клинического испытания по оценке RG7624 для лечения аутоиммунного заболевания. BIIB033 представляет собой моноклональное антитело против LINGO-1 от Biogen, в настоящее время проходяшее Фазу II испытаний для лечения рассеянного склероза.

Высокомолекулярные белки также могут включать AGS-009, моноклональное антитело, нацеленное на IFN-альфа, разработанное Argos Therapeutics, Inc., которое недавно прошло фазу I испытаний для лечения волчанки. Пациентам вводят до 30 мг/кг AGS-009 посредством ВВ инфузии. BT-061, разработанное AbbVie, проходит Фазу II испытаний для пациентов с ревматоидным артритом. Цертолизумаб пегол (CIMZIA^®) представляет собой моноклональное антитело на Фазе II испытаний для анкилозирующего спондилоартрита и ювенильного ревматоидного артрита. Клазакизумаб от Bristol-Myers Squibb, моноклональное антитело против IL6, проходит Фазу II испытаний.

CNTO-136 (сирукумаб) и CNTO-1959 представляют собой антитела, недавно прошедшие Фазу II и Фазу III испытаний, от Janssen. Даклизумаб (прежде представленный на рынке как ZENAPAX^® от Roche) от AbbVie в настоящее время проходит или недавно прошло многие испытания на Фазе III для лечения рассеянного склероза. Эпратузумаб представляет собой гуманизированное антитело проходящее Фазу III испытаний для лечения волчанки. Цанакинумаб (ILARIS^®) представляет собой человеческое моноклональное антитело, нацеленное на интерлейкин-1 бета. Оно было разрешено для лечения криопирин-ассоциированных периодических синдромов. Цанакинумаб проходит Фазу I испытаний в качестве возможной терапии для хронического обструктивного заболевания легких, подагры и коронарной болезни сердца. Маврилимумаб представляет собой человеческое моноклональное антитело, сконструированное для лечения ревматоидного артрита. Открытое, как CAM-3001 Cambridge Antibody Technology, маврилимумаб разработывается MedImmune.

MEDI-546 и MEDI-570 представляют собой антитела, в настоящее время проходящие Фазу I и Фазу II испытаний от AstraZeneca для лечения волчанки. MEDI-546 вводят на Фазе II исследования посредством регулярной ВВ инфузии 300-1000 мг. MEDI-551, еще одно моноклональное антитело, разработанное AstraZeneca для многочисленных показаний, в настоящее время также вводят посредством ВВ инфузии. NN8209, моноклональное антитело, бблокирующее C5aR рецептор, разработанное Novo Nordisk A/S (“Novo Nordisk”), прошло Фазу II исследования дозировки для лечения ревматоидного артрита. NN8210 является еще одним моноклональным антителом против C5aR, разработанное Novo Nordisk и в настоящее время проходящее Фазу I испытаний. IPH2201 (NN8765) представляет собой гуманизированное моноклональное антитело, нацеленное на NKG2A, разработанное Novo Nordisk для лечения пациентов с воспалительными состояниями и аутоиммунными заболеваниями. NN8765 недавно прошло Фазу I испытаний.

Олокизумаб представляет собой гуманизированное моноклональное антитело, которое эффективно целенаправленно действует на цитокин IL-6. IL-6 включен в несколько аутоиммунных и воспалительных механизмов. Олокизумаб прошел Фазу II испытаний для лечения ревматоидного артрита. Отеликсизумаб, также известный как TRX4, представляет собой моноклональное антитело, которое разрабатывается для лечения диабета типа 1, ревматоидного артрита и других аутоиммунных заболеваний. Озорализумаб представляет собой гуманизированное моноклональное антитело, которое прошло Фазу II испытаний.

Pfizer в настоящее время проводит Фазу I испытаний для моноклональных антител PD-360324 и PF-04236921 для лечения волчанки. Биоаналог ритуксимаб, PF-05280586, было разработанно Pfizer и проходит Фазу I/Фазу II испытаний для ревматоидного артрита.

Ронтализумаб представляет собой гуманизированное моноклональное антитело, разрабатываемое Genentech. Оно недавно прошло Фазу II испытаний для лечения волчанки. SAR113244 (против CXCR5) представляет собой моноклональное антитело от Sanofi на Фазе I испытаний. Сифалимумаб (моноклональное тело против IFN-альфа) представляет собой моноклональное антитело, проходящее Фазу II испытаний для лечения волчанки.

Высокомолекулярные низковязкие жидкие составы могут включать одно из моноклональных антител, проходящих раннюю стадию клинической разработки для лечения различных заболеваний крови. Например, Белимумаб (BENLYSTA^®) недавно прошло Фазу I испытаний для пациентов с васкулитом. Другие моноклональные антитела, проходящие раннюю стадию испытаний для заболеваний крови, включают BI-655075 от Boehringer Ingelheim GmbH “Boehringer Ingelheim”, моноклональное антитело ферропортин и моноклональное антитело гепцидин от Eli Lily, и SelG1 от Selexys Pharmaceuticals, Corp. (“Selexys”).

Одно или более антител на ранней стадии разработки для лечения различных злокачественных новообразований и родственных состояний могут быть включены в низковязкие высокомолекулярные жидкие составы. United Therapeutics Corporation имеет два моноклональных антитела на Фазе I испытаний, моноклональное тело 8H9 и моноклональное тело ch14.18. Моноклональные антитела ABT-806, энаватузумаб, и волоциксимаб от AbbVie, находятся на ранней стадии разработки. Actinium Pharmaceuticals, Inc провела раннюю стадию испытаний моноклональных антител Актимаб-A (моноклонального тела M195), моноклонального тела против CD45, и Илмаб-B. Seattle Genetics, Inc. (“Seattle Genetics”) проводит раннюю стадию испытаний нескольких моноклональных антител для лечения злокачественных новообразований и родственных состояний, включающих ADC против CD22 (RG7593; пинатузумаб ведотин), ADC против CD79b (RG7596), ADC против STEAP1 (RG7450), ASG-5ME и ASG-22ME от Agensys, Inc. (“Agensys”) конъюгат антитело-лекарственное средство RG7458, и ворсетузумаб мафодотин. Проходящие раннюю стадию испытаний противораковые терапевтические средства от Genentech могут быть включены в низковязкие композиции, включающие ALT-836, конъюгаты антитело-лекарственное средство RG7600 и DEDN6526A, ADC против CD22 (RG7593), моноклональное тело против EGFL7 (RG7414), моноклональное тело против HER3/EGFR DAF (RG7597), моноклональное тело против PD-L1 (RG7446), DFRF4539A, MINT1526A. Bristol-Myers Squibb разрабатывает на ранней стадии моноклональные антитела для противораковых терапевтических средств, включающие антитела, идентифицированные как антитела против CXCR4, против PD-L1, IL-21 (BMS-982470), лирилумаб и урелумаб (против-CD137). Другие моноклональные антитела, проходящие раннюю стадию испытаний в качестве противораковых терапевтических средств, включают APN301(hu14,18-IL2) от Apeiron Biologics AG, AV-203 от AVEO Pharmaceuticals, Inc. (“AVEO”), AVX701 и AVX901 от AlphaVax, BAX-69 от Baxter International, Inc. (“Baxter”), BAY 79-4620 и BAY 20-10112 от Bayer HealthCare AG, BHQ880 от Novartis AG, 212-Pb-TCMCтрастузумаб от AREVA Med, AbGn-7 от AbGenomics International Inc, и ABIO-0501 (TALL-104) от Abiogen Pharma S.p.A.

Другие терапевтические средства на основе антител, которые могут быть составлены вместе со средствами для снижения вязкости, включают алзумаб, GA101, даратумумаб, силтуксимаб, ALX-0061, ALX-0962, ALX-0761, бимагумаб (BYM338), CT-011 (пидилизумаб), актоксумаб/безлотоксумаб (MK-3515A), MK-3475 (пембролизумаб), далотузумаб (MK-0646), икруцумаб (IMC-18F1, LY3012212), AMG 139 (MEDI2070), SAR339658, дупилумаб (REGN668), SAR156597, SAR256212, SAR279356, SAR3419, SAR153192 (REGN421, энотикумаб), SAR307746 (несвакумаб), SAR650984, SAR566658, SAR391786, SAR228810, SAR252067, SGN-CD19A, SGN-CD33A, SGN-LIV1A, ASG 15ME, против-LINGO, BIIB037, ALXN1007, тепротумумаб, концизумаб, анрукинзумаб (IMA-638), понезумаб (PF-04360365), PF-03446962, PF-06252616, этролизумаб (RG7413), квилизумаб, ранибизумаб, лампализумаб, онклацумаб, гентенерумаб, кренезумаб (RG7412), IMC-RON8 (нарнатумаб), тремелимумаб, вантиктумаб, эемцизумаб, озанезумаб, мапатумумаб, тралокинумаб, XmAb5871, XmAb7195, циксутумумаб (LY3012217), LY2541546 (блосозумаб), оларатумаб (LY3012207), MEDI4893, MEDI573, MEDI0639, MEDI3617, MEDI4736, MEDI6469, MEDI0680, MEDI5872, PF-05236812 (AAB-003), PF-05082566, BI 1034020, RG7116, RG7356, RG7155, RG7212, RG7599, RG7636, RG7221, RG7652 (MPSK3169A), RG7686, HuMaxTFADC, MOR103, BT061, MOR208, OMP59R5 (против-нотч 2/3), VAY736, MOR202, BAY94-9343, LJM716, OMP52M51, GSK933776, GSK249320, GSK1070806, NN8828, CEP-37250/KHK2804 AGS-16M8F, AGS-16C3F, LY3016859, LY2495655, LY2875358, и LY2812176.

Другие моноклональные антитела, проходящие раннюю стадию испытаний, которые могут быть составлены вместе со средствами для снижения вязкости, включают бенрализумаб, MEDI-8968, анифролумаб, MEDI7183, сифалимумаб, MEDI-575, тралокинумаб от AstraZeneca и MedImmune; BAN2401 от Biogen Idec/Eisai Co. LTD (“Eisai”)/ BioArctic Neuroscience AB; CDP7657 моновалентный пегилированный Fab фрагмент антитела против CD40L, моноклональное антитело STX-100 против avB6, BIIB059, против-TWEAK (BIIB023), и BIIB022 от Biogen; фулранумаб от Janssen и Amgen; BI-204/RG7418 от BioInvent International/Genentech; BT-062 (индатуксимаб равтансин) от Biotest Pharmaceuticals Corporation; XmAb от Boehringer Ingelheim/Xencor; против-IP10 от Bristol-Myers Squibb; J 591 Lu-177 от BZL Biologics LLC; CDX-011 (глембатумумаб ведотин), CDX-0401 от Celldex Therpeutics; форавирумаб от Crucell; тигатузумаб от Daiichi Sankyo Company Limited; MORAb-004, MORAb-009 (аматуксимаб) от Eisai; LY2382770 от Eli Lilly; DI17E6 от EMD Serono Inc; занолимумаб от Emergent BioSolutions, Inc.; FG-3019 от FibroGen,Inc.; катумаксомаб от Fresenius SE & Co. KGaA; патеклизумаб, ронтализумаб от Genentech; фрезолимумаб от Genzyme & Sanofi; GS-6624 (симтузумаб) от Gilead; CNTO-328, бапинеузумаб (AAB-001), карлумаб, CNTO-136 от Janssen; KB003 от KaloBios Pharmaceuticals, Inc.; ASKP1240 от Kyowa; RN-307 от Labrys Biologics Inc.; экромексимаб от Life Science Pharmaceuticals; LY2495655, LY2928057, LY3015014, LY2951742 от Eli Lilly; MBL-HCV1 от MassBiologics; AME-133v от MENTRIK Biotech, LLC; абитузумаб от Merck KGaA; MM-121 от Merrimack Pharmaceuticals, Inc.; MCS110, QAX576, QBX258, QGE031 от Novartis AG; HCD122 от Novartis AG и XOMA Corporation (“XOMA”); NN8555 от Novo Nordisk; бавитуксимаб, котара от Peregrine Pharmaceuticals, Inc.; PSMA-ADC от Progenics Pharmaceuticals, Inc.; ореговомаб от Quest Pharmatech, Inc.; фасинумаб (REGN475), REGN1033, SAR231893, REGN846 от Regeneron; RG7160, CIM331, RG7745 от Roche; ибализумаб (TMB-355) от TaiMed Biologics Inc.; TCN-032 от Theraclone Sciences; TRC105 от TRACON Pharmaceuticals, Inc.; UB-421 от United Biomedical Inc.; VB4-845 от Viventia Bio, Inc.; ABT-110 от AbbVie; Каплацизумаб, Озорализумаб от Ablynx; PRO 140 от CytoDyn, Inc.; GS-CDA1, MDX-1388 от Medarex, Inc.; AMG 827, AMG 888 от Amgen; ублитуксимаб от TG Therapeutics Inc.; TOL101 от Tolera Therapeutics, Inc.; huN901-DM1 (лорвотузумаб мертансин) от ImmunoGen Inc.; комбинация эпратузумаб Y-90/велтузумаб (IMMU-102) от Immunomedics, Inc.; моноклональное антитело против фибрина/3B6/22 Tc-99m от Agenix, Limited; ALD403 от Alder Biopharmaceutics, Inc.; RN6G/ PF-04382923 от Pfizer; CG201 от CG Therapeutics, Inc.; KB001-A от KaloBios Pharmaceuticals/Sanofi; KRN-23 от Kyowa.; Y-90 hPAM 4 от Immunomedics, Inc.; Тарекстумаб от Morphosys AG & OncoMed Pharmacetuicals, Inc.; LFG316 от Morphosys AG & Novartis AG; CNTO3157, CNTO6785 от Morphosys AG & Jannsen; RG6013 от Roche & Chugai; MM-111 от Merrimack Pharmaceuticals, Inc. (“Merrimack”); GSK2862277 от GlaxoSmithKline; AMG 282, AMG 172, AMG 595, AMG 745, AMG 761 от Amgen; BVX-20 от Biocon; CT-P19, CT-P24, CT-P25, CT-P26, CT-P27, CT-P4 от Celltrion; GSK284933, GSK2398852, GSK2618960, GSK1223249, GSK933776A от GlaxoSmithKline; анетумаб равтансин от Morphosys AG & Bayer AG; BI-836845 от Morphosys AG & Boehringer Ingelheim; NOV-7, NOV- 8 от Morphosys AG & Novartis AG; MM-302, MM-310, MM-141, MM-131, MM-151 от Merrimack, RG7882 от Roche & Seattle Genetics; RG7841 от Roche/Genentech; PF-06410293, PF-06438179, PF-06439535, PF-04605412, PF-05280586 от Pfizer; RG7716, RG7936, гентенерумаб, RG7444 от Roche; MEDI-547, MEDI-565, MEDI1814, MEDI4920, MEDI8897, MEDI-4212, MEDI-5117, MEDI-7814 от Astrazeneca; улокуплумаб, PCSK9 аднектин от Bristol-Myers Squibb; FPA009, FPA145 от FivePrime Therapeutics, Inc.; GS-5745 от Gilead; BIW-8962, KHK4083, KHK6640 от Kyowa Hakko Kirin; MM-141 от Merck KGaA; REGN1154, REGN1193, REGN1400, REGN1500, REGN1908-1909, REGN2009, REGN2176-3, REGN728 от Regeneron; SAR307746 от Sanofi; SGN-CD70A от Seattle Genetics; ALX-0141, ALX-0171 от Ablynx; милатузумаб-DOX, милатузумаб, TF2, от Immunomedics, Inc.; млN0264 от Millennium; ABT-981от AbbVie; AbGn-168H от AbGenomics International Inc.; фиклатузумаб от AVEO; BI-505 от BioInvent International; CDX-1127, CDX-301 от Celldex Therapeutics; CLT-008 от Cellerant Therapeutics Inc.; VGX-100 от Circadian; U3-1565 от Daiichi Sankyo Company Limited; DKN-01 от Dekkun Corp.; фланвотумаб (белок TYRP1), IL-1 β-антитело, IMC-CS4 от Eli Lilly; моноклональное тело VEGFR3, IMC-TR1 (LY3022859) от Eli Lilly и ImClone, LLC; Anthim от Elusys Therapeutics Inc.; HuL2G7 от Galaxy Biotech LLC; IMGB853, IMGN529 от ImmunoGen Inc.; CNTO-5, CNTO-5825 от Janssen; KD-247 от Kaketsuken; KB004 от KaloBios Pharmaceuticals; MGA271, MGAH22 от MacroGenics, Inc.; Xмаб5574 от MorphoSys AG/Xencor; энситуксимаб (NPC-1C) от Neogenix Oncology, Inc.; LFA102 от Novartis AG и XOMA; ATI355 от Novartis AG; SAN-300 от Santarus Inc.; SelG1 от Selexys; HuM195/rGel от Targa Therapeutics, Corp.; VX15 от Teva Pharmaceuticals, Industries Ltd. (“Teva”) и Vaccinex Inc.; TCN-202 от Theraclone Sciences; XmAb2513, XmAb5872 от Xencor; XOMA 3AB от XOMA и National Institute for Allergy и Infectious Diseases; вакцина антител против нейробластомы от МабVax Therapeutics; Cytolin от CytoDyn, Inc.; Thravixa от Emergent BioSolutions Inc.; и FB 301 от Cytovance Biologics; моноклональные антитела против бешенства от Janssen и Sanofi; моноклональное антитело против гриппа от Janssen и частично финансируемое Национальными институтами здравоохранения; MB-003 и ZMapp от Mapp Biopharmaceutical, Inc.; и ZМаб от Defyrus Inc.

Другие белковые терапевтические средства

Белок может представлять собой фермент, гибридный белок, маскированный или пегилированный белок, вакцину или иной биологически активный белок (или смесь белков). Термин “фермент”, как используют в данном описании, относится к белку или его функциональному фрагменту, который катализирует биохимическое превращение целевой молекулы в желательный продукт.

Ферменты как лекарственные средства имеют по меньшей мере два важных признака, а именно i) часто связываются со своими мишенями и действуют на них с высокой аффинностью и специфичностью, и ii) являются каталитическими и преобразуют множество целевых молекул в желательные продукты. В некоторых вариантах осуществления белок может быть пегилированным, как определено в настоящем описании.

Термин “гибридный белок”, как используют в данном описании, относится к белку, который создается двумя различными генами, кодирующими два раздельных белка. Гибридные белки обычно продуцируются посредством технологий рекомбинантных ДНК, известных специалистам в области. Два белка (или белковых фрагмента) сливаются вместе ковалентно и проявляют свойства двух родительских белков.

Существует ряд гибридных белков, которые представлены на рынке.

ENBREL^® (Этанерцепт) представляет собой гибридный белок, поставляемый на рынок от Amgen, который конкурентно ингибирует ФНО.

ELOCTATE^®, Антигемофильный Фактор (Рекомбинантный), Fc гибридный белок, представляет собой производный от рекомбинантной ДНК, антигемофильный фактор, показанный для взрослых и детей и с Гемофилией A (врожденным отсутствием Фактора VIII) для борьбы с эпизодами кровотечения и их предотвращения, периоперационного ведения, рутинной профилактики для предотвращения или снижения частоты эпизодов кровотечения.

EYLEA^® (афлиберцепт) представляет собой рекомбинантный гибридный белок, состоящий из частей человеческих рецепторов VEGF 1 и 2 внеклеточных доменов, гибридизированных с Fc частью человеческого IgG1, составляемый в виде изоосмотического раствора для интравитреального введения. EYLEA (афлиберцепт) представляет собой рекомбинантный гибридный белок, состоящий из частей человеческих рецепторов VEGF 1 и 2 внеклеточных доменов, гибридизированных с Fc частью человеческого IgG1, составляемый в виде изоосмотического раствора для интравитреального введения. Афлиберцепт представляет собой димерный гликопротеин с молекулярной массой белка, равной 97 килодальтон (кДа), и содержит гликозилирование, составляющее дополнительные 15% общей молекулярной массы, что приводит к общей молекулярной массе, равной 115 кДа. Афлиберцепт продуцируется в рекомбинантных клетках яичника китайского хомяка (CHO), поставляемых Regeneron.

ALPROLIX™, Фактор Коагуляции IX (Рекомбинантный), Fc Гибридный белок, представляет собой рекомбинантный, производный от ДНК, концентрат Фактора Коагуляции IX, который назначают взрослым и детям с гемофилией B для борьбы с эпизодами кровотечения и их предотвращения, периоперационного ведения, рутинной профилактики для предотвращения или снижения частоты эпизодов кровотечения.

Пеглотиказа (KRYSTEXXA^®) представляет собой лекарственное средство для лечения тяжелой, рефрактерной к лечению, хронической подагры, разработанное Savient Pharmaceuticals, Inc. и является первым лекарственным средством, разрешенным для лечения данного показания. Пеглотиказа представляет собой пегилированную рекомбинантную подобную свиной уриказу с молекулярной массой, равной приблизительно 497 кДа. Пеглотиказу в настоящее время вводят посредством ВВ инфузии приблизительно 8 мг/кг. Высокомолекулярные, низковязкие жидкие композиции могут включать пеглотиказу, предпочтительно в концентрации, равной от приблизительно 300 мг/мл до приблизительно 800 мг/мл.

Альтеплаза (ACTIVASE^®) представляет собой тканевой активатор плазминогена, продуцируемый посредством технологии рекомбинантной ДНК. Она является очищенным гликопротеином, содержащим 527 аминокислот, и синтезируется с использованием комплементарной ДНК (кДНК) для природного человеческого активатора плазминогена тканевого типа, полученного из клеточной линии меланомы человека. Альтеплазу вводят посредством ВВ инфузии приблизительно 100 мг немедленно после появления симптомов инсульта. В нескольких вариантах осуществления, предоставлены низковязкие композиции, содержащие альтеплазу, предпочтительно в концентрации, равной приблизительно 100 мг/мл.

Глюкарпидаза (VORAXAZE^®) представляет собой разрешенное FDA к прменению лекарственное средство для лечения повышенных уровней метотрексата (определенных, как по меньшей мере 1 микромоль/л) во время лечения пациентов со злокачественным новообразованием, которые имеют нарушенную функцию почек. Глюкарпидазу вводят посредством ВВ введения в однократной дозе, равной приблизительно 50 МЕ/кг. В нескольких вариантах осуществления, предоставлены низковязкие композиции, содержащие глюкарпидазу.

Альглюкозидаза альфа (LUMIZYME^®) представляет собой орфанный препарат ферментозаместительной терапии для лечения болезни Помпе (заболевания накопления гликогена типа II), редкой лизосомальной болезни накопления. Она имеет молекулярную массу, равную приблизительно 106 кДа, и в настоящее время ее вводят посредством ВВ инфузии приблизительно 20 мг/кг. В нескольких вариантах осуществления, предоставлена низковязкая фармацевтическая композиция альглюкозидазы альфа, предпочтительно, с концентрацией от приблизительно 100 мг/мл до приблизительно 2000 мг/мл.

Пегдамаза бычья (ADAGEN^®) представляет собой фермент, применяемый для ферментозаместительной терапии для лечения синдрома тяжелого комбинированного иммунодефицита (SCID), ассоциированного с отсутствием аденозиндеаминазы. Пегдамаза бычья представляет собой конъюгат многочисленных цепей монометоксиполиэтиленгликоля (ПЭГ), с молекулярной мссой 5000 Да, ковалентно присоединенных к ферменту аденозиндеаминазе, который получают из бычьего кишечника.

α-Галактозидаза представляет собой лизосомальный фермент, который катализирует гидролиз гликолипида, глоботриосилцерамида (GL-3), до галактозы и церамиддигексозида. Болезнь Фабри является редким наследственным лизосомальной заболеванием накопления, характеризуемой субнормальными ферментативной активностью α-Галактозидазы и полученным в результате накоплением GL-3. Агалсидаза альфа (REPLAGAL^®) представляет собой человеческий фермент α-галактозидазу A, продуцируемый клеточной линией человека. Агалсидаза бета (FABRAZYME^®) является рекомбинантной человеческой α-галактозидазой, экспрессируемой в клеточной линии CHO. Реплагал вводят при дозе, равной 0,2 мг/кг, один раз в две недели посредством внутривенной инфузии для лечения болезни Фабри и, вне зарегистрированных показаний, для лечения болезни Гоше. FABRAZYME^® вводят при дозе, равной 1,0 мг/кг массы тела один раз в две недели посредством ВВ инфузии. Могут также применяться другие лизосомальные ферменты. Например, белок может являться лизомомальным ферментом, как описано в US 2012/0148556.

Расбуриказа (ELITEK^®) представляет собой рекомбинантную урат-оскидазу, показанную для первоначального регулирования уровней мочевой кислоты в плазме у пациентов детского и взрослого уровня с лейкемией, лимфомой и злокачественными новообразованиями в виде солидных опухолей, получающих курс противоопухолевой терапии с ожидаемым лизисом опухоли и последующим повышением плазменной мочевой кислоты. ELITEK^® вводят посредством ежесуточной ВВ инфузии при дозировке, равной 0,2 мг/кг.

Имиглюцераза (CEREZYME^®) представляет собой рекомбинантный аналог человеческой β-глюкоцереброзидазы. Первоначальные дозировки находятся в интервале от 2,5 Ед/кг массы тела 3 раза в неделю до 60 Ед/кг однократно каждые 2 недели. CEREZYME^® вводят посредством ВВ инфузии.

Абраксан, паклитаксел-конъюгированный альбумин, разрешен для применения при метастатическом раке молочной железы, немелкоклеточным раке легкого и поздней стадии рака поджелудочной железы.

Талиглюцераза альфа (ELEYSO^®) представляет собой гидролитический лизосомальный глюкоцереброзид-специфичный фермент, показанный для долговременной ферментозаместительной терапии Типа 1 болезни Гоше. Рекомендованная доза составляет 60 Ед/кг массы тела, вводимые однократно каждые 2 недели посредством внутривенной инфузии.

Ларонидаза (ALDURAZYME^®) представляет собой полиморфный вариант человеческого фермента α-L-идуронидазы, которая продуцируется посредством клеточной линии CHO. Рекомендованный режим дозирования ALDURAZYME^® составляет 0,58 мг/кг, вводимые однократно еженедельно в виде внутривенной инфузии.

Элосульфаза альфа (VIMIZIM^®) представляет собой человеческую N-ацетилгалактозамин-6-сульфатазу, продуцируемую клеточной линией CHO от BioMarin Pharmaceuticals Inc (“BioMarin”). Она получила разркшение FDA на применение 14 февраля 2014 г. для лечения мукополисахаридоза типа IVA. Ее вводят еженедельно посредством внутривенной инфузии при дозировке, равной 2 мг/кг.

Другие биопрепараты, которые могут быть составлены вместе со средствами для снижения вязкости, включают аспарагиназу эрвиния хризантеми (ERWINAZE^®), инкоботулинумтоксин A (XEOMIN^®), EPOGEN^® (эпоэтин Альфа), PROCRIT^® (эпоэтин Альфа), ARANESP^® (дарбепоэтин альфа), ORENCIA^® (абатацепт), BATASERON^® (интерферон бета-1b), NAGLAZYME^® (гальсульфазу); ELAPRASE^® (Идурсульфазу); MYOZYME^® (LUMIZYME^®, алгукозидазу альфа); VPRIV^® (велаглюцеразу), абоботулинумтоксин A (DYSPORT^®); BAX-326, Октоког альфа от Baxter; Syncria от GlaxoSmithKline; липротамазу от Eli Lilly; Xiaflex (коллагеназу клостридиум гистолитикум) от Auxilium и BioSpecifics Technologies Corp.; анакинра от Swedish Orphan Biovitrum AB; метрелептин от Bristol-Myers Squibb; Авонекс, Плегриди (BIIB017) от Biogen; NN1841, NN7008 от Novo Nordisk; KRN321 (дарбепоэтин альфа), AMG531 (ромиплостим), KRN125 (пегфилграстим), KW-0761 (могамулизумаб) от Kyowa; IB1001 от Inspiration Biopharmaceuticals; Иприваск от Canyon Pharmaceuticals Group.

Разрабатываемые белковые терапевтические средства

VRS-317 от Versartis, Inc. представляет собой гибридный белок рекомбинантного человеческого гормона роста (hGH) с использование технологии XTEN увеличения периода полужизни. Он нацелен на снижение частоты инъекций hGH, необходимых для пациентов с отсутствием hGH. VRS-317 прошел Фазу II исследований, при сравнении его эффективности действия с ежесуточной инъекцией недериватизированного hGH, с положительными результатами. Фаза III исследований запланирована.

Вибриолизин представляет собой протеолитический фермент, секретируемый Грам-отрицательным морским микрорганизмом, Vibrio proteolyticus. Эта эндопротеаза имеет специфичную аффинность для гидрофобных областей белков и обладает способностью к расщеплению белков, примыкающим к гидрофобным аминокислотам. Вибриолизин в настоящее время исследуется Biomarin для очистки и/или лечения ожогов. Составы вибриолизина описаны в патенте WO 02/092014.

ПЭГ-PAL (Пегилированная рекомбинантная фенилаланинаммиаклиаза или “PAL”) представляет собой исследовательскую ферментзаместительную терапию для лечения фенилкетонурии (PKU), наследственного метаболического заболевания, вызываемого отсутствием фермента фенилаланин гидроксилазы (PAH). ПЭГ-PAL разрабатывается в качестве потенциальной терапии для пациентов, уровни фенилаланина (Phe) в крови которых не в достаточной мере управляются KUVAN^®. ПЭГ-PAL сейчас проходит Фазу 2 клинической разаботки для лечения пациентов, которые не в достаточной степени реагируют на KUVAN^®.

Другие белковые терапевтические средства, которые могут быть составлены вместе со средствами для снижения вязкости, включают Алпроликс/rFIXFc, Элоктат/rFVIIIFc, BMN-190; BMN-250; Ламазим; Галазим; ZA-011; Себелипаза альфа; SBC-103; и HGT-1110. Дополнительно, гибридные белки, содержащие технологию XTEN увеличения периода полужизни, включающие, но не ограниченные приведенными: VRS-317 GH-XTEN; Фактор VIIa, Фактор VIII, Фактор IX; PF05280602, VRS-859; Эксенатид-XTEN; AMX-256; GLP2-2G/XTEN; и AMX-179 Фолат-XTEN-DM1, могут быть составлены вместе со средствами для снижения вязкости.

Другие белковые терапевтические средства, проходящие позднюю стадию испытаний, которые могут быть составлены вместе со средствами для снижения вязкости, включают CM-AT от CureMark LLC; NN7999, NN7088, Лираглютид (NN8022), NN9211, Семаглютид (NN9535) от Novo Nordisk; AMG 386, Филграстим от Amgen; CSL-654, Фактор VIII от CSL Behring; LA-EP2006 (биоаналог пегфилграстим) от Novartis AG; Мультикин (лейкоцитарный интерлейкин) от CEL-SCI Corporation; LY2605541, Терипаратид (рекомбинантный PTH 1-34) от Eli Lilly; NU-100 от Nuron Biotech, Inc.; Каласпаргаза Пегол от Sigma-Tau Pharmaceuticals, Inc.; ADI-PEG-20 от Polaris Pharmaceuticals, Inc.; BMN-110, BMN-702 от BioMarin; NGR-TNF от Molmed S.p.A.; рекомбинантный ингибитор человеческой C1 эстеразы от Pharming Group/Santarus Inc.; биоаналог соматропина от LG Life Sciences LTD; Натпара от NPS Pharmaceuticals, Inc.; ART123 от Asahi Kasei Corporation; BAX-111 от Baxter; OBI-1 от Inspiration Biopharmaceuticals; Вилат от Octapharma AG; Талактоферрин альфа от Agennix AG; Десмотеплаза от Lundbeck; Цинризе от Shire; RG7421 и Roche и Exelixis, Inc.; Midostaurin (PKC412) от Novartis AG; Дамактоког альфа пегол, BAY 86-6150, BAY 94-9027 от Bayer AG; Пегинтерферон лямбда-1a, Nulojix (Белатацепт) от Bristol-Myers Squibb; Перговерис, Корифоллитропин альфа (MK-8962) от Merck KGaA; рекомбинантный Fc гибридный белок Фактора коагуляции IX (rFIXFc; BIIB029) и рекомбинантный Fc гибридный белок Фактора коагуляции VIII (rFVIIIFc; BIIB031) от Biogen; и Миалепт от AstraZeneca.

Другие белковые биопрепараты на ранней стадии испытаний, которые могут быть составлены вместе со средствами для снижения вязкости, включают Алферон LDO от Hemispherx BioPharma, Inc.; SL-401 от Stemline Therapeutics, Inc.; PRX-102 от Protalix Biotherapeutics, Inc.; KTP-001 от Kaketsuken/Teijin Pharma Limited; Vericiguat от Bayer AG; BMN-111 от BioMarin; ACC-001 (PF-05236806) от Janssen; LY2510924, LY2944876 от Eli Lilly; NN9924 от Novo Nordisk; пептид INGAP от Exsulin; ABT-122 от Abbvie; AZD9412 от AstraZeneca; НЕУБЛАСТИН (BG00010) от Biogen; Люспатерцепт (ACE-536), Сотатерцепт (ACE-011) от Celgene Corporation; иммунотерапевтическое средство PRAME от GlaxoSmithKline; Пловамер ацетат (PI-2301) от Merck KGaA; PREMIPLEX (607) от Shire; BMN-701 от BioMarin; Ontak от Eisai; rHuPH20/инсулин от Halozyme, Inc.; PB-1023 от PhaseBio Pharmaceuticals, Inc.; ALV-003 от Alvine Pharmaceuticals Inc. и Abbvie; NN8717 от Novo Nordisk; PRT-201 от Proteon Therapeutics Inc.; PEGPH20 от Halozyme, Inc.; Амевив^® алефацепт от Astellas Pharma Inc.; F-627 от Regeneron; AGN-214868 (сенреботаза) от Allergan, Inc.; BAX-817 от Baxter; PRT4445 от Portola Pharmaceuticals, Inc.; VEN100 от Ventria Bioscience; Онконаза/ранприназа от Tamir Biotechnology Inc.; инфузию интерферон альфа-2b от Medtronic,Inc; себелипаза альфа от Synageva BioPharma; IRX-2 от IRX Therapeutics, Inc; GSK2586881 от GlaxoSmithKline; SI-6603 от Seikagaku Corporation; ALXN1101, асфотаза альфа от Alexion; SHP611, SHP609 (Элапраза, идурсульфаза) от Shire; PF-04856884, PF-05280602 от Pfizer; ACE-031, Далантерцепт от Acceleron Pharma; ALT-801 от Altor BioScience Corp.; BA-210 от BioAxone Biosciences, Inc.; иммунотерпевтическое средство WT1 от GlaxoSmithKline; GZ402666 от Sanofi; MSB0010445, Атацицепт от Merck KGaA; Лейкин (сарграмостим) от Bayer AG; KUR-211 от Baxter; фактор роста-1 фибробластов от CardioVascular BioTherapeutics Inc.; SPI-2012 от Hanmi Pharmaceuticals Co., LTD/Spectrum Pharmaceuticals; FGF-18 (Сприфермин) от Merck KGaA; MK-1293 от Merck; интерферон-альфа-2b от HanAll Biopharma; CYT107 от Cytheris SA; RT001 от Revance Therapeutics, Inc.; MEDI6012 от AztraZeneca; E2609 от Biogen; BMN-190, BMN-270 от BioMarin; ACE-661 от Acceleron Pharma; AMG 876 от Amgen; GSK3052230 от GlaxoSmithKline; RG7813 от Roche; SAR342434, Лантус от Sanofi; AZ01 от Allozyne Inc.; ARX424 от Ambrx, Inc.; FP-1040, FP-1039 от FivePrime Therapeutics, Inc.; ATX-MS-1467 от Merck KGaA; гибридные белки XTEN от Amunix Operating Inc.; энтолимод (CBLB502) от Cleveland BioLabs, Inc.; HGT2310 от Shire; HM10760A от Hanmi Pharmaceuticals Co., LTD; ALXN1102/ ALXN1103 от Alexion; CSL-689, CSL-627 от CSL Behring; глиальный фактор роста 2 от Acorda Therapeutics, Inc.; NX001 от Nephrx Corporation; NN8640, NN1436, NN1953, NN9926, NN9927, NN9928 от Novo Nordisk;NHS-IL 12 от EMD Serono; 3K3A-APC от ZZ Biotech LLC; PB-1046 от PhaseBio Pharmaceuticals, Inc.; RU-101 от R-Tech Ueno, Ltd.; инсулин лиспро/BC106 от Adocia; hl-con1 от Iconic Therapeutics, Inc.; PRT-105 от Protalix BioTherapeutics, Inc.; PF-04856883, CVX-096 от Pfizer; ACP-501 от АльфаCore Pharma LLC; BAX-855 от Baxter; CDX-1135 от Celldex Therapeutics; PRM-151 от Promedior, Inc.; TS01 от Thrombolytic Science International; TT-173 от Thrombotargets Corp.; QBI-139 от Quintessence Biosciences, Inc.; Вателизумаб, GBR500, GBR600, GBR830, и GBR900 от Glenmark Pharmaceuticals; и CYT-6091 от Cytimmune Sciences, Inc.

Другие биологические средства

Другие биологические лекарственные средства, которые могут быть составлены вместе со средствами для снижения вязкости, включают PF-05285401, PF-05231023, RN317 (PF-05335810), PF-06263507, PF-05230907, Декавил, PF-06342674, PF06252616, RG7598, RG7842, RG7624d, OMP54F28, GSK1995057, BAY1179470, IMC-3G3, IMC-18F1, IMC-35C, IMC-20D7S, PF-06480605, PF-06647263, PF-06650808, PF-05335810 (RN317) PD-0360324, PF-00547659 от Pfizer; MK-8237 от Merck; BI033 от Biogen; GZ402665, SAR438584/ REGN2222 от Sanofi; IMC-18F1; и Икруцумаб, IMC-3G3 от ImClone LLC; Ризодег, Тресиба, Ксултофи от Novo Nordisk; Туджео (U300), ЛиксиЛан, Люксимиа (ликсисенатид) от Sanofi; MAGE-A3, иммунотерапевтическое средство от GlaxoSmithKline; Тецемотид от Merck KGaA; Серелеаксин (RLX030) от Novartis AG; Эритропоэтин; Пегфилграстим; LY2963016, Дулаглютид (LY2182965) от Eli Lilly; и Инсулин гларгин от Boehringer Ingelheim.

B. Средства для снижения вязкости

Вязкость жидких белковых составов, включающих низкомолекулярные и/или высокомолекулярные белки, снижают посредством добавления одного или нескольких средств для снижения вязкости. Фармацевтические составы могут быть преобразованы из неньютоновских в ньютоновские жидкости посредством добавления эффективного количества одного или нескольких средств для снижения вязкости.

При использовании в составе, предназначенном для введения человеку или другому млекопитающему, средства для снижения вязкости, как и сам состав, должны быть фармацевтически приемлемыми. Средства для снижения вязкости представляют собой обычно органические соединения, содержащие по меньшей мере один неуглеродный, неводородный атом. Предпочтительно, средства для снижения вязкости содержат водород, углерод, кислород и по меньшей мере один другой тип атома. В некоторых вариантах осуществления, средства для снижения вязкости характеризуются по меньшей мере одним признаком из следующих:

1) органические соединения, имеющие по меньшей мере четыре атома углерода и четыре атома водорода, и по меньшей мере один атом серы, кислорода, азота или фосфора;

2) молекулярная масса между приблизительно 85 и 1000 Да;

3) присутствие по меньшей мере одного заряженного или другого гидрофильного фрагмента;

4) присутствие по меньшей мере одного, предпочтительно, двух, и, более предпочтительно, трех, свободно вращающихся связей;

5) присутствие по меньшей мере одного замещенного кольца;

6) молекулярная площадь полярной поверхности равна по меньшей мере 24 Ų, предпочтительно, по меньшей мере 50 Ų, и, более предпочтительно, по меньшей мере 80 Ų;

7) молярный объем, равный по меньшей мере 75 см³, предпочтительно, по меньшей мере 85 см³, более предпочтительно, по меньшей мере 100 см³, и, наиболее предпочтительно, по меньшей мере 120 см³;

8) поляризуемость, равная по меньшей мере 10 см³, предпочтительно, по меньшей мере 15 см³, более предпочтительно, по меньшей мере 20 см³, и, наиболее предпочтительно, по меньшей мере 25 см³; и

9) присутствие по меньшей мере одного, предпочтительно, двух, и, более предпочтительно, трех доноров и/или акцепторов водородной связи.

В некоторых вариантах осуществления средство для снижения вязкости характеризуется по меньшей мере двумя, тремя, четырьмя, пятью, шестью, семью, восемью или всеми девятью из выше перечисленных признаков. В некоторых вариантах осуществления средство для снижения вязкости дополнительно отличается тем, что оно не содержит функциональной группы альдегида или углерод-углеродной тройной связи.

В других вариантах осуществления средство для снижения вязкости представляет собой комбинацию из двух или более соединений, каждое из которых характеризуется по меньшей мере двумя, тремя, четырьмя, пятью, шестью, семью, восемью или всеми девятью из выше перечисленных признаков.

В нескольких вариантах осуществления средства для снижения вязкости перечислены в виде GRAS от Администрации США по пищевым продуктам и лекарственным веществам (“FDA”), как от 11 сентября 2014 г. "GRAS" является сокращенным вариантом фразы Generally Recognized As Safe (Общепризнанные как безопасные). В соответствии с разделами 201(s) и 409 Федерального закона о пищевых продуктах, лекарственных средствах и косметике (Закона), любое вещество, которое намернно добавляют в пищу, является пищевой добавкой, и является предметом предпродажного рассмотрения и утверждения FDA, если вещество является общепризнанным, по мнению квалифицированных экспертов, как имеющее соответствующим образом продемонстрированную безопасность в условиях его предназначенного применения, или, если применение вещества иным образом исключено из определения пищевой добавки. Еще одним источником соединений является Справочник по неактивным компонентам FDA (IIG), и эквивалентные документы, перечисленные Международным Советом производителей, распределителей и потребителей фармацевтических эксципиентов (IPEC) и Европейским агентством по лекарственным средствам (EMA), как от 11 сентября 2014 г. Вещества, применяемые в составах, должны быть безопасными для инъекции. Предпочтительно, приведенное в GRAS средство для снижения вязкости характеризуется по меньшей мере двумя, тремя, четырьмя, пятью, шестью, семью, восемью или всеми девятью из выше перечисленных признаков.

В других вариантах осуществления средство для снижения вязкости представляет собой лекарственный продукт, разрешенный к применению FDA или EMA, как от 11 сентября 2014 г. Как и в случае соединений, взятых из списков GRAS и IIG, профили токсичности и безопасности лекарственных продуктов, разрешенных к применению FDA или EMA, являются хорошо установленными. В дополнение к понижению вязкости раствора белка, применение лекарственного продукта, разрешенного к применению FDA или EMA, предоставляет возможность для комбинированных терапий. Предпочтительно, лекарственный продукт, разрешенный к применению FDA или EMA, содержащий средство для снижения вязкости, характеризуется по меньшей мере двумя, тремя, четырьмя, пятью, шестью, семью, восемью или всеми девятью из перечисленных выше особенностей.

В нескольких вариантах осуществления средство для снижения вязкости включает по меньшей мере одно соединение Формулы (I):

Формула (1),

или его фармацевтически приемлемую соль;

где представляет либо одинарную или двойную связь, A выбирают из O, S, SO₂, NR³, C(R³)₂ или:

,

где R³ независимо выбирают из водорода, R², -OH, NH₂, -F, -Cl, -Br, -I, -NO₂, -CN, -C(=O)R^4a, -C(=NR^4a)R⁴, -C(=O)OH, -C(=O)OR⁴, -OC(=O)R⁴, -OC(=O)OR⁴, -SO₃H, -SO₂N(R^4a)₂, -SO₂R⁴, -SO₂NR^4aC(=O)R⁴, -PO₃H₂, -R^4aC(=NR^4a)N(R^4a)₂, -NHC(=NR^4a)NH-CN, -NR^4aC(=O)R⁴, -NR^4aSO₂R⁴, -NR^4aC(=NR^4a)NR^4aC(=NR^4a)N(R^4a)₂, -NR^4aC(=O)N(R^4a)₂, -C(=O)NH₂, -C(=O)N(R^4a)₂, -OR⁴, -SR^4a, и -N(R^4a)₂;

где R² независимо выбирают из C_1-12алкила, C_3-12циклоалкила, C_6-12арила, C_1-12гетероарила и C_2-12гетероциклила;

где каждый C_1-12алкил может быть замещен один или несколько раз C_3-12циклоалкилом, C_6-12арилом, C_1-12гетероарилом, C_2-12гетероциклилом, -OH, NH₂, (=O), (=NR^4a), -F, -Cl, -Br, -I, -NO₂, -CN, -C(=O)R^4a, -C(=NR^4a)R⁴, -C(=O)OH, -C(=O)OR⁴, -OC(=O)R⁴, -OC(=O)OR⁴, -SO₃H, -SO₂N(R^4a)₂, -SO₂R⁴, -SO₂NR^4aC(=O)R⁴, -PO₃H₂, -R^4aC(=NR^4a)N(R^4a)₂, -NHC(=NR^4a)NH-CN, -NR^4aC(=O)R⁴, -NR^4aSO₂R⁴, -NR^4aC(=NR^4a)NR^4aC(=NR^4a)N(R^4a)₂, -NR^4aC(=O)N(R^4a)₂, -C(=O)NH₂, -C(=O)N(R^4a)₂, -OR⁴, -SR^4a, или -N(R^4a)₂;

где каждый C_3-12циклоалкил может быть замещен один или несколько раз C_1-12алкилом, C_6-12арилом, C_1-12гетероарилом, C_2-12гетероциклилом, -OH, NH₂, -F, -Cl, -Br, -I, -NO₂, -CN, -C(=O)R^4a, -C(=NR^4a)R⁴, -C(=O)OH, -C(=O)OR⁴, -OC(=O)R⁴, -OC(=O)OR⁴, -SO₃H, -SO₂N(R^4a)₂, -SO₂R⁴, -SO₂NR^4aC(=O)R⁴, -PO₃H₂, -R^4aC(=NR^4a)N(R^4a)₂, -NHC(=NR^4a)NH-CN, -NR^4aC(=O)R⁴, -NR^4aSO₂R⁴, -NR^4aC(=NR^4a)NR^4aC(=NR^4a)N(R^4a)₂, -NR^4aC(=O)N(R^4a)₂, -C(=O)NH₂, -C(=O)N(R^4a)₂, -OR⁴, -SR^4a, или -N(R^4a)₂;

где каждый C_6-12арил может быть замещен один или несколько раз C_1-12алкилом, C_3-12циклоалкилом, C_1-12гетероарилом, C_2-12гетероциклилом, -OH, NH₂, -F, -Cl, -Br, -I, -NO₂, -CN, -C(=O)R^4a, -C(=NR^4a)R⁴, -C(=O)OH, -C(=O)OR⁴, -OC(=O)R⁴, -OC(=O)OR⁴, -SO₃H, -SO₂N(R^4a)₂, -SO₂R⁴, -SO₂NR^4aC(=O)R⁴, -PO₃H₂, -R^4aC(=NR^4a)N(R^4a)₂, -NHC(=NR^4a)NH-CN, -NR^4aC(=O)R⁴, -NR^4aSO₂R⁴, -NR^4aC(=NR^4a)NR^4aC(=NR^4a)N(R^4a)₂, -NR^4aC(=O)N(R^4a)₂, -C(=O)NH₂, -C(=O)N(R^4a)₂, -OR⁴, -SR^4a или -N(R^4a)₂;

где каждый C_1-12гетероарил может быть замещен один или несколько раз C_1-12алкилом, C_3-12циклоалкилом, C_6-12арилом, C_2-12гетероциклилом, -OH, NH₂, -F, -Cl, -Br, -I, -NO₂, -CN, -C(=O)R^4a, -C(=NR^4a)R⁴, -C(=O)OH, -C(=O)OR⁴, -OC(=O)R⁴, -OC(=O)OR⁴, -SO₃H, -SO₂N(R^4a)₂, -SO₂R⁴, -SO₂NR^4aC(=O)R⁴, -PO₃H₂, -R^4aC(=NR^4a)N(R^4a)₂, -NHC(=NR^4a)NH-CN, -NR^4aC(=O)R⁴, -NR^4aSO₂R⁴, -NR^4aC(=NR^4a)NR^4aC(=NR^4a)N(R^4a)₂, -NR^4aC(=O)N(R^4a)₂, -C(=O)NH₂, -C(=O)N(R^4a)₂, -OR⁴, -SR^4a, или -N(R^4a)₂;

где каждый C_2-12гетероциклил может быть замещен один или несколько раз C_1-12алкилом, C_3-12циклоалкилом, C_6-12арилом, C_1-12гетероарилом, -OH, NH₂, -F, -Cl, -Br, -I, -NO₂, -CN, -C(=O)R^4a, -C(=NR^4a)R⁴, -C(=O)OH, -C(=O)OR⁴, -OC(=O)R⁴, -OC(=O)OR⁴, -SO₃H, -SO₂N(R^4a)₂, -SO₂R⁴, -SO₂NR^4aC(=O)R⁴, -PO₃H₂, -R^4aC(=NR^4a)N(R^4a)₂, -NHC(=NR^4a)NH-CN, -NR^4aC(=O)R⁴, -NR^4aSO₂R⁴, -NR^4aC(=NR^4a)NR^4aC(=NR^4a)N(R^4a)₂, -NR^4aC(=O)N(R^4a)₂, -C(=O)NH₂, -C(=O)N(R^4a)₂, -OR⁴, -SR^4a или -N(R^4a)₂;

где R⁴ независимо выбирают из C_1-12алкила, C_3-12циклоалкила, C_6-12арила, C_1-12гетероарила и C_2-12гетероциклила, каждый из которых может быть замещен один или несколько раз -OH, -NH₂, -F, -Cl, -Br, -I, -NO₂, -CN, -C(=O)OH, -SO₃H, -PO₃H₂, или -C(=O)NH₂;

где R^4a может представлять собой R⁴ или водород;

где любые две или более из групп R², R³, R⁴ и R^4a могут вместе образовывать кольцо;

где, когда две R³ группы связаны с одним и тем же атомом углерода, две группы R³ могут вместе образовывать (=O), (=NR^4a), или (=C(R^4a)₂);

где z в каждом случае независимо выбирают из 1 или 2, при условии, что когда заместитель (R³)_z соединен с sp²-гибридизированным углеродом, z равен 1, и, когда заместитель (R³)_z соединен с sp³-гибридизированным углеродом, z равен 2.

Когда присутствует заместитель -NR^4aC(=NR^4a)NR^4aC(=NR^4a)N(R^4a)₂, является предпочтительным, чтобы R^4a выбирали таким образом, чтобы обеспечивать -NHC(=NH)NHC(=NH)NH₂.

В некоторых вариантах осуществления, соединение Формулы (1) содержит по меньшей мере один заместитель, выбранный из -C(=O)OH, -SO₃H, -SO₂NHC(=O)R⁴ и -PO₃H₂. В нескольких вариантах осуществления, соединение Формулы (1) содержит по меньшей мере одну группу –SO₃H.

В некоторых вариантах осуществления, один или более из заместителей R³ могут представлять собой:

, или , где R^3a и R^3b независимо выбирают из водорода, C_1-12алкила, C_3-12циклоалкила, C_6-12арила, C_1-12гетероарила и C_2-12гетероциклила, C(=O)R^4a, -C(=O)OH, -C(=O)OR⁴, -SO₃H, -SO₂N(R^4a)₂, -SO₂R⁴, -SO₂NHC(=O)R⁴, C(=O)NH₂, -C(=O)N(R^4a)₂, -OR⁴, -SR⁴, и -N(R^4a)₂, и, когда любые два R^3b связаны с одним и тем же атомом углерода, две группы R^3b могут вместе образовывать (=O), (=NR^4a), или (=C(R^4a)₂);

где каждый C_1-12алкил, C_3-12циклоалкил, C_6-12арил, C_1-12гетероарил и C_2-12гетероциклил может быть замещен один или несколько раз with -OH, NH₂, -F, -Cl, -Br, -I, -NO₂, -CN, -C(=O)R^4a, -C(=NR^4a)R⁴, -C(=O)OH, -C(=O)OR⁴, -OC(=O)R⁴, -OC(=O)OR⁴, -SO₃H, -SO₂N(R^4a)₂, -SO₂R⁴, -SO₂NR^4aC(=O)R⁴, -PO₃H₂, -R^4aC(=NR^4a)N(R^4a)₂, -NHC(=NR^4a)NH-CN, -NR^4aC(=O)R⁴, -NR^4aSO₂R⁴, -NR^4aC(=NR^4a)NR^4aC(=NR^4a)N(R^4a)₂, -NR^4aC(=O)N(R^4a)₂, -C(=O)NH₂, -C(=O)N(R^4a)₂, -OR⁴, -SR^4a, или -N(R^4a)₂;

где R^{4 и} R^4a являются такими, как определено выше;

где x выбирают из 1, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9 или 10; и

где любые две или более из групп R³, R^3a, R⁴ и R^4a могут вместе образовывать кольцо.

В некоторых вариантах осуществления, соединение Формулы (1) может быть представлено либо соединением Формулы (1a) или (1b):

Формула (1a) Формула (1b)

где R³ имеет значения, данные выше.

В некоторых вариантах осуществления, соединение Формулы (1a) может быть представлено соединениями Формул (1a-i-iv):

Формула (1a-i)

Формула (1a-ii),

Формула (1a-iii),

Формула (1a-iv)

где R³ независимо выбирают из водорода, NH₂, CH₃, Cl, OR⁴ и NHR⁴;

где x равно 1 или 2;

где R^{3a и} R^3b независимо выбирают из водорода и C_1-12 алкила;

где указанный C_1-12алкил может быть замещен один или несколько раз C_3-12циклоалкилом, C_6-12арилом, C_1-12гетероарилом, C_2-12гетероциклилом, -OH, NH₂, -F, -Cl, -Br, -I, -NO₂, -CN, -C(=O)R^4a, -C(=NR^4a)R⁴, -C(=O)OH, -C(=O)OR⁴, -OC(=O)R⁴, -OC(=O)OR⁴, -SO₃H, -SO₂N(R^4a)₂, -SO₂R⁴, -SO₂NR^4aC(=O)R⁴, -PO₃H₂, -R^4aC(=NR^4a)N(R^4a)₂, -NHC(=NR^4a)NH-CN, -NR^4aC(=O)R⁴, -NR^4aSO₂R⁴, -NR^4aC(=NR^4a)NR^4aC(=NR^4a)N(R^4a)₂, -NR^4aC(=O)N(R^4a)₂, -C(=O)NH₂, -C(=O)N(R^4a)₂, -OR⁴, -SR^4a, или -N(R^4a)₂;

R⁴ и R^4a являются такими, как определено выше; и

где любые два или более из R^3a, R^3b, R⁴, R^4a могут вместе образовывать кольцо.

Соединение Формулы (1) может быть представлено соединением Формулы (1a-v, vi или vii):

(1a-v), (1a-vi),

(vii)

где R^3f выбирают из -C(=O)OH, -SO₃H, -SO₂NHC(=O)R⁴, и -PO₃H₂, и R³ такой, как определено выше. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления, R³ независимо выбирают из водорода, OH, NH₂, C_1-6алкила и COOH.

В других вариантах осуществления, соединение Формулы (1) может быть представлено любыми соединениями Формул (1c), (1d), (1e) или (1f):

Формула (1c) Формула (1d)

Формула (1e) Формула (1f),

где R³ имеет значения, данные выше.

В других вариантах осуществления, соединение Формулы (1) может быть представлено соединением Формулы (1g):

Формула (1g),

где R^3c независимо выбирают из водорода и R², где R² имеет значения, данные выше;

где R^3d независимо выбирают из водорода, OH, NH₂, NH(C_1-6алкил), N(C_1-6алкил)₂; NHC(=O)(C_1-6алкил), COOH и CH₂OH;

или любые две группы R^3c и R^3d, соединенные с одним и тем же углеродом, могут вместе образовывать оксо (=O), имино (=NR^4a), или олефин (=C(R^4a)₂), где R^4a имеет значения, данные выше;

где R^3e выбирают из водорода, -OH или OR⁴; и

где R⁴ имеет значения, данные выше.

В некоторых вариантах осуществления, средство для снижения вязкости включает соединение Формулы (1g-i):

Формула (1g-i),

где R^3e выбирают из OH и -OC_1-12алкила, который дополнительно замещен по меньшей мере одной OH и по меньшей мере одной COOH; и

где R^3d выбирают из COOH и CH₂OH.

В нескольких вариантах осуществления, средство для снижения вязкости включает соединение Формулы (2):

Формула (2),

или его фармацевтически приемлемую соль;

где представляет одинарную или двойную связь;

X независимо выбирают из халькогена, N(R³)_z и C(R³)_z;

X¹ отсутствует, или является халькогеном, N(R³)_z, C(R³)_z или:

;

где R³ имеет значения, данные для соединения Формулы (1);

при условии, что когда заместитель (R³)_z соединен с sp²-гибридизированным азотом, z равен 0 или 1, когда (R³)_z заместитель соединен с sp²-гибридизированным углеродом или sp³-гибридизированным азотом, z равен 1, и когда заместитель (R³)_z соединен с sp³-гибридизированным углеродом, z равен 2;

где по меньшей мере один из X или X¹ является халькогеном или N(R³)_z.

В некоторых вариантах осуществления, соединение может представлять собой ароматическое кольцо. Иллюстративные ароматические кольца включают соединения Формул (2a-e):

Формула (2a), Формула (2b), Формула (2c), Формула (2d), Формула (2e),

где R³ и X имеют значения, данные выше, и X² выбирают из N(R³)_z и C(R³)_z.

В некоторых вариантах осуществления, средство для снижения вязкости представляет собой соединение Формулы (2a-i):

(Формула 2a-i),

где R⁴ такой, как определено выше, и представляет собой предпочтительно водород или CH₃;

где R⁶ представляет собой C_1-12гетероарил, который может быть замещен один или несколько раз C_1-6алкилом;

где указанный C_1-6алкил может быть замещен один или несколько раз OH, -NH₂, -F, -Cl, -Br, -I, -NO₂, -CN, -C(=O)R⁴, -C(=NR^4a)R⁴, -C(=O)OH, -C(=O)OR⁴, -SO₃H, -SO₂NR⁴-, -SO₂R₄, -PO₃H₂, -NHC(=O)R⁴, -NHC(=O)N(R⁴)₂, -C(=O)NH₂, -C(=O)N(R⁴)₂, -OR^4b, -SR^4b, -N(R^4b)₂, где R⁴ имеет значения, данные выше; или

где R⁴ такой, как определено выше, и R⁷ выбирают из SR⁴ и –C(=O)R⁴. Двойная связь в группе, приведенной выше, может иметь либо E или Z геометрию.

В предпочтительных вариантах осуществления, R⁶ представляет собой гетероцикл, имеющий структуру:

,

где X⁴ представляет собой халькоген и R^6a является водородом или C_1-6алкилом, где C_1-6алкил может быть замещен один или несколько раз -OH, -NH₂, -F, -Cl, -Br, -I, -NO₂, -CN, -C(=O)OH. В даже более предпочтительном варианте осуществления, R⁶ представляет собой гетероцикл, имеющий структуру:

,

где R^6a выбирают из незамещенного C_1-6алкила и C_1-6алкила, замещенного один или несколько раз -OH.

Средство для снижения вязкости может представлять собой имидазол Формулы (2b-i) Формула (2b-i),

где R³ такой, как определено выше. В некоторых вариантах осуществления, R³ независимо выбирают из водорода, NO₂ и R⁴. В некоторых предпочтительных вариантах осуществления, соединение Формулы (2b-i) имеет структуру:

,

где R³ независимо выбирают из C_1-6алкила, который может быть незамещенным или замещенным один или несколько раз группой, выбранной из OH, NH₂, SR⁴, F,Cl, Br и I; и

R^3g является либо водородом, либо NO₂.

В других вариантах осуществления, средство для снижения вязкости имеет структуру Формулы (2a-ii) или Формулы (2c-i):

Формула (2a-ii), Формула (2c-i),

где R³ независимо выбирают из OH, Cl, Br, F, I, N(R^4a)₂, C(=O)OH, C(=O)NH₂.

В дополнительных вариантах осуществления, по меньшей мере один заместитель R³ представляет собой NHR⁴, где R⁴ представляет собой C_1-6алкил, необязательно замещенный одной или несколькими группами, выбранными из Cl, Br, F, I, OH, C(=O)OH, NH₂, NH(C_1-6алкил) и N(C_1-6алкил)₂.

В других вариантах осуществления, средство для снижения вязкости представляет собой соль пиридиния Формулы (2a-iii):

,

где R³ и R⁴ являются такими, как определено выше.

В других вариантах осуществления, гетероциклическое кольцо не является гетероарильным кольцом. Иллюстративные неароматические кольца включают соединения Формул (2f-k):

Формула (2f)Формула (2g), Формула (2h) Формула (2i), Формула (2j) Формула (2k)

где R⁵ и X имеют значения, приведеные выше, и X³ является халькогеном или N(R³)_z.

В некоторых вариантах осуществления, соединение Формулы (2f) представляет собой бета-лактам Формулы (2f-i),

Формула (2f-i).

Бета-лактам Формулы (2f-i) включает соединения пенициллинового типа, а также соединения цефалоспоринового типа и цефамицинового типа Формулы (2f-ii) и (2f-iii):

Формула (2f-ii) Формула (2f-iii),

где X и R3 являются такими, как определено выше. В предпочтительных вариантах осуществления, X представляет собой серу.

В некоторых вариантах осуществления, соединение Формулы (2i) представляет собой соединение Формулы (2i-i):

Формула (2i-i)

где X и R³ являются такими, как определено выше. В некоторых вариантах осуществления, X в обоих случаях представляет собой NR⁴, где R⁴ имеет значения, данные выше, и R³ в обоих случаях представляет собой водород.

В других вариантах осуществления, соединени Формулы (2) представлено соединением Формулы (2i-ii):

Формула (2i-ii),

где X, X¹ и R³ являются такими, как определено выше.

Соединение Формулы (2j) может быть представлено соединением Формулы (2j-i):

(Формула (2j-i),

где X³ и R³ являются такими, как определено выше, и R⁸ выбирают из NHC(=O)R² и OC(=O)R². В предпочтительных вариантах осуществления, X³ представляет собой N⁺(CH₃)₂, оба R³ представляют собой водород, или R³ вместе образуют эпоксид или двойную связь.

Соединение Формулы (2k) может быть представлено соединением Формулы (2k-i):

Формула (2k-i),

где X³ и R⁸ являются такими, как определено выше.

В других вариантах осуществления, средство для снижения вязкости включает соединение структуры Формулы (3):

Формула (3),

или его фармацевтически приемлемую соль;

где R⁵ в каждом случае независимо выбирают из водорода, и R², R^5’ являются либо R⁵ или отсутствуют;

при условии, что по меньшей мере один заместитель R⁵ не является водородом, где R² иметт те же самые значения, данные для соединения или Формулы (1).

В некоторых вариантах осуществления средство для снижения вязкости является смесью двух или более соединений, выбранных из соединений Формулы (1), Формулы (2) и Формулы (3).

В предпочтительных вариантах осуществления средство для снижения вязкости представляет собой камфорсульфоновую кислоту (CSA), или ее фармацевтически приемлемые соли, такие как соль щелочного или щелочноземельного металла. Камфорсульфоновую кислоту или ее соль комбинируют с одним или несколькими соединениями Формулы (1), (2) или (3) с получением смесей таких как CSA-пиперазин, CSA-ТРИС, CSA-4-аминопиридин, CSA-1-(o-толил)бигуанид, CSA-прокаин, CSA-Na-аминоциклогексанкарбоновая кислота, CSA-Na-креатинин и CSA-Na-орнидазол. Другие предпочтительные средства для снижения вязкости включают тиамин, прокаин, биотин, креатинин, метоклопрамид, скополамин, циметидин, хлорохина фосфат, мепивакаин, гранисетрон, сукралоза, HEPES-трис, никотинамид, лактобионовая кислота-ТРИС, глюкуроновая кислота-ТРИС, сульфацетамид, CSA-4-аминопиридин, CSA-пиперазин и цефазолин. Любые два или более из средств для снижения вязкости, перечисленных выше, могут дополнительно комбинироваться в том же составе.

В других вариантах осуществления средство для снижения вязкости представляет собой органосульфоновую кислоту. Иллюстративные органосульфоновые кислоты включают, но не ограничены перечисленными, камфорсульфоновую кислоту, нафталин-2-сульфоновую кислоту, бензолсульфоновую кислоту, толуолсульфоновую кислоту, циклогексилсульфоновую кислоту, ксилолсульфоновые кислоты (включая п-ксилол-2-сульфоновую кислоту, м-ксилол-2-сульфоновую кислоту, м-ксилол-4-сульфоновую кислоту и о-ксилол-3-сульфоновую кислоту), метансульфоновую кислоту, 1,2-этандисульфоновую кислоту, 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновую кислоту, 2-гидроксиэтан-1-сульфоновую кислоту, 3-гидроксипропан-1-сульфоновую кислоту, цимолсульфоновую кислоту, 4-гидроксибутан-1-сульфоновую кислоту и их фармацевтически приемлемые соли. Органосульфоновая кислота может находиться в форме соли щелочного или щелочноземельного металла, такой как литиевая, натриевая, калиевая, магниевая и кальциевая соль. Органосульфоновая кислота (или ее соль) могут комбинироваться с одним или несколькими соединениями Формулы (2) или Формулы (3).

В некоторых вариантах осуществления средство для снижения вязкости содержит по меньшей мере одну карбоновую кислоту. Карбоновая кислота может находиться в форме соли щелочного или щелочноземельного металла, такой как литиевая, натриевая, калиевая, магниевая и кальциевая соль. Иллюстративные соединения карбоновых кислот включают лактобионовую кислоту, глюкуроновую кислоту, 1-аминоциклогексанкарбоновую кислоту, биотин, брокринат, циклопентанпропионовую кислоту, гидроксинафтойную кислоту, фенилпропионовую кислоту, гентизиновую кислоту, салициловую кислоту, камфорную кислоту, миндальную кислоту, сульфосалициловую кислоту, гидроксибензоилбензойную кислоту, фенилуксусную кислоту, ацетилсалициловую кислоту, коричную кислоту, трет-бутилуксусную кислот, фталевую кислоту, триметилуксусную кислоту, антраниловую кислоту и их фармацевтически приемлемые соли. Карбоновая кислота (или ее соль) могут комбинироваться с одним или несколькими соединениями Формулы (2) или Формулы (3).

Следующие соединения могут также применяться в качестве средства для снижения вязкости: колистин, артикаин, тетракаин, проксиметакаин, метоклопрамид, прокаин, лидокаин, циклометилкаин, пиперокаин, хлорпрокаин, этидокаин, бензокаин, фенилэфрин, бупивакаин, мепивакаин, цинхокаин, их смеси и их фармацевтически приемлемые соли.

Другие средства, которые могут использоваться в качестве средства для снижения вязкости, включают 1-аминоциклогексанкарбоновую кислоту, 1-(o-толил)бигуанид, бензетония хлорид, бензойную кислоту, брокринат, кальция каррагинан, кальция цикламат, калкобутрол, калоксетиновую кислоту, камфорсульфоновую кислоту, креатинин, далфампридин, дегидроуксусную кислоту, диазолидинилмочевину, дихлорбензиловый спирт, диметил изосорбид, эпитетрациклин, этилмальтол, этилванилин, орнидазол, гентизиновой кислоты этаноламид, HEPES (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновую кислоту), гентизиновую кислоту, глюкуроновую кислоту, йодоксамовую кислоту, ментол, галактозу, медроновую кислоту, м-крезол, глутатион, лактобионовую кислоту, мальтит, октисалат, оксихинолин, диэтилентриамин-пентауксусную кислоту, пиперазин, пропенил гваэтол, пропилгаллат, пропиленкарбонат, пропилпарабен, протаминсульфат, КВАТЕРНИЙ-15, КВАТЕРНИЙ-52, сатиалгин H, натрия 1,2-этандисульфонат, натрия кокоилсаркозинат, натрия лауроилсаркозинат, натрия полиметафосфат, натрия пирофосфат, пироглутаминовую кислоту, натрия триметафосфат, натрия триполифосфат, сорбитан, винную кислоту, молочную кислоту, йофетамин, сукралозу, 1-(4-пиридил)пиридиния хлорид, аминобензойную кислоту, сульфацетамид натрия, нафталин-2-сульфоновую кислоту, трет-бутилгидрохинон, тимеросал, троламин, тромантадин, ванилин, версетамид, ниоксим, ниацинамид, метилизотиазолинон, маннозу D, мальтозу, лидофенин, лактозу, лактит, изомальт, имидомочевину, глюконолактон, метансульфоновую кислоту, ксилолсульфоновую кислоту, сульфобутиловый эфир β-цикложелатина и их фармацевтически приемлемые соли.

В некоторых вариантах осуществления, средство для снижения вязкости включает органическое основание. Иллюстративные органические основания включают N-метилглюкамин, морфолин, пиперидин, и первичные, вторичные, третичные и четвертичные амины, замещенные амины и циклические амины. Например, они могут представлять собой изопропиламин, триметиламин, диэтиламин, триэтиламин, трипропиламин, этаноламин, 2-диэтиламиноэтанол, триметамин, дициклогексиламин, лизин, аргинин, гистидин, кофеин, прокаин, лидокаин, гидрабамин, холины, бетаины, холин, бетаин, этилендиамин, теобромин, пурины, пиперазин, N-этилпиперидин, N-метилпиперидинполиамин. Особенно предпочтительными органическими основаниями являются аргинин, гистидин, лизин, этаноламин, тиамин, 2-амино-2-гидроксиметил-пропан-1,3-диол (ТРИС), 4-аминопиридин, аминоциклогексанкарбоновая кислота, 1-о-толилбигуанид, орнидазол, мочевину, никотинамид, бензетония хлорид, 5-амино-1-пентанол, 2-(2-аминоэтокси)этанол, транс-циклогексан-1,4-диамин, транс-циклогексан-1R, 2R-диамин, этилендиамин, пропан-1,3-диамин, бутан-1,4-диамин, пентан-1,5-диамин, гексан-1,6-диамин, октан-1,8-диамин, 5-амино-1-пентанол, 2-(2-аминоэтокси)этанамин, 2-(2-(2-аминоэтокси)-этокси)этанамин, 3-(4-(3-аминопропокси)-бутокси)пропан-1-амин, 3-(2-(2-(3-аминопропокси)-этокси)-этокси)пропан-1-амин, N-(2-(2-аминоэтиламино)этил)этан-1,2-диамин, N-(2-аминоэтил)этан-1,2-диамин, N-1-(2-(2-(2-аминоэтиламино)этиламино)-этил)этан-1,2-диамин, N,N-диметилгексан-1,6-диамин, N,N,N,N-тетраметилбутан-1,4-диамин, соли фенилтриметиламмония, изопропиламин, диэтиламин, этаноламин, триметамин, холин, 1-(3-аминопропил)-2-метил-1H-имидазол, пиперазин, 1-(2-аминоэтил)пиперазин, 1-[3-(диметиламино)пропил]пиперазин, 1-(2-аминоэтил)пиперидин, 2-(2-аминоэтил-1-метилпирролидин, их смеси и их фармацевтически приемлемые соли.

Иллюстративные бета-лактамы включают бензилпенициллин (пенициллин G), феноксиметилпенициллин (пенициллин V), клоксациллин, диклоксациллин, флуклоксациллин, метициллин, нафциллин, оксациллин, темоциллин, амоксициллин, ампициллин, мециллинам, карбенициллин, тикарциллин, азлоциллин, мезлоциллин, пиперациллин, цефокситин, цефазолин, цефалексин, цефалоспорин C, цефалотин, цефаклор, цефамандол, цефуроксим, цефотетан, цефиксим, цефотаксим, цефподоксим, цефтазидим, цефтриаксон, цефепим, цефпиром, цефтобипрол, биапенем, дорипенем, эртапенем, фаропенем, имипенем, меропенем, панипенем, разупенем, тебипенем, тиенамицин, азтреонам, тигемонам, нокардицин А, табктоксинин, клавулановую кислоту, тазобактам, сульбактам и их фармацевтически приемлемые соли.

Другие средства для снижения вязкости включают тропановые N-гетероциклы, такие как атропин, гиосциамин, скополамин и их соли, а также соли тиотропия и ипратропия, тиамин, аллитиамин, просультиамин, фурсультиамин, бенфотиамин, сульбутиамин, кватерний 15; 1-(3-аминопропил)-2-метил-1H-имидазола дигидрохлорид; креатинин; биотин, циметидин, пиперокаин, циклометилкаин, гранисетрон, моксифлоксацин, хлорохин, мепивакаин, леветирацетам, бупивакаин, цинхокаин, клиндамицин и их фармацевтически приемлемые соли. Тиамин является особенно предпочтительным средством для снижения вязкости.

В некоторых составах следующие соединения не являются предпочтительными: креатинин, кадаверин, лидокаин, аргинин и лизин, и их исключают из объема вышеприведенных формул и определений применимых средств для снижения вязкости.

C. Эксципиенты

Квалифицированным специалистам в данной области известно широкое разнообразие фармацевтических эксципиентов, применимых для жидких белковых составов. Они включают одну или несколько добавок, таких как жидкие растворители или сорастворители; сахара или сахароспирты, такие как маннит, трегалоза, сахароза, сорбит, фруктоза, мальтоза, лактоза или декстраны; поверхностно-активные вещества, такие как ТВИН^® 20, 60, или 80 (полисорбат 20, 60, или 80); буферные агенты; консерванты, такие как бензалкония хлорид, бензетония хлорид, соли третичного аммония и хлоргексидиндиацетат; носители, такие как поли(этиленгликоль) (ПЭГ); антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, метабисульфит натрия, и метионин; хелатирующие агенты, такие как ЭДТА или лимонная кислота; или биодеградируемые полимеры, такие как водорастворимые сложные полиэфиры; криопротекторы; лиопротекторы; объемообразующие агенты; и стабилизаторы.

Другие фармацевтически приемлемые носители, эксципиенты, или стабилизаторы, такие, как описаны в Remington: “The Science and Practice of Pharmacy”, 20th edition, Alfonso R. Gennaro, Ed., Lippincott Williams & Wilkins (2000) могут также быть включены в белковый состав, описанный в данном документе, при условии, что они не оказывают неблагоприятного воздействия на желательные характеристики состава.

Средства для снижения вязкости, описанные в данном документе, могут комбинироваться с одним или несколькими другими типами средства для снижения вязкости, например, фосфороорганическими соединениями, описанными в поданной одновременно с рассматриваемой заявкой заявке PCT, озаглавленной “LIQUID PROTEIN FORMULATIONS CONTAINING ORGANOPHOSPHATES” от Arsia Therapeutics; водороастворимыми красителями, описанными в поданной одновременно с рассматриваемой заявкой заявке PCT, озаглавленной “LIQUID PROTEIN FORMULATIONS CONTAINING WATER-SOLUBLE ORGANIC DYES” от Arsia Therapeutics; ионными жидкостями, описанными в поданной одновременно с рассматриваемой заявкой заявке PCT, озаглавленной “LIQUID PROTEIN FORMULATIONS CONTAINING IONIC LIQUIDS” от Arsia Therapeutics.

III. Способы получения

Белок, такой как моноклональное антитело, подлежащий включению в состав, может быть получен любым известным методом, таким как культивирование клеток, трансформированных или трансфицированных вектором, содержащим одну или несколько последовательностей нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, как хорошо известно в данной области, или посредством синтетических методов (таких как рекомбинантные методы и пептидный синтез или комбинация этих методов), или может быть изолирован из эндогенного источника белка.

Очистка белка, подлежащего включению в состав, может проводиться любым подходящим методом, известным в данной области, таким как, например, осаждение этанолом или сульфатом аммония, обращенно-фазовая ВЭЖХ, хроматография на оксиде кремния или катионообменной смоле (например, ДЭАЭ-целлюлозе), диализ, хроматофокусирование, гель-фильтрация с использованием колонок СЕФАРОЗА® с белком А (например, СЕФАДЕКС® G-75) для удаления загрязнений, колонки, хелатирующие металлы, для связывания эпитоп-меченых форм, и ультрафильтрация/диафильтрация (неограничивающие примеры включают центрифужную фильтрацию и тангенциальную поточную фильтрацию (ТПФ)).

Включение средства для снижения вязкости при снижающих вязкость концентрациях, таких как от 0,010 M до 1,0 M, предпочтительно от 0,050 M до 0,50 M, наиболее предпочтительно от 0,10 M до 0,30 M, позволяет проводить очистку и/или концентрирование раствора фармацевтически активного моноклонального антитела при более высоких концентрациях моноклонального антитела, используя обычные методы, известные специалистам в области, включая, но не ограничиваясь перечисленным, тангенциальную поточную фильтрацию, центрифужное концентрирование и диализ.

В нескольких вариантах осуществления предоставлены лиофилизированные композиции белков и/или они применяются при получении и производстве концентрированных белковых составов с низкой вязкостью. В нескольких вариантах осуществления предварительно лиофилизированный белок в форме порошка восстанавливают посредством растворения в водном растворе. В данном варианте осуществления жидким составом заполняют специальный контейнер для единицы дозирования, такой как флакон или предварительно заполненный смешивающий шприц, лиофилизируют, необязательно вместе с лиопротекторами, консервантами, антиоксидантами и другими обычными фармацевтически приемлемыми эксципиентами, затем хранят в условиях стерильного хранения до времени незадолго перед использованием, в которое состав восстановливают с определенным объемом разбавителя, чтобы привести жидкость к желательной концентрации и вязкости.

Ссотавы, описанные в данном документе, могут храниться посредством любого подходящего метода, известного специалисту в данной области. Неограничивающие примеры методов получения белковых составов для хранения включают замораживание, лиофилизацию, и распылительную сушку жидкого белкового состава. В некоторых случаях, лиофилизированный состав замораживают для хранения при температурах ниже нуля, таких как при приблизительно -80°C или в жидком азоте. В некоторых случаях лиофилизированный или водный состав хранят при 2-8°C.

Неограничивающие примеры разбавителей, применимых для восстановления лиофилизированного состава перед инъекцией, включают стерильную воду, бактериостатическую воду для инъекций (BWFI), раствор с забуференным pH (например, забуференный фосфатом физраствор), стерильный физраствор, раствор Рингера, раствор декстрозы или водные растворы солей и/или буферов. В некоторых случаях состав сушат распылением и затем хранят.

IV. Введение субъекту, нуждающемуся в лечении

Белковые составы, включающие, но не ограниченные восстановленными составами, вводят субъекту, нуждающемуся в лечении, посредством внутримышечной, внутрибрюшинной (т.е., в полость тела), интрацереброспинальной или подкожной инъекции, используя 18-32 калибр игл (необязательно тонкостенной иглы), в объеме приблизительно 5 мл, меньшем чем приблизительно 3 мл, предпочтительно меньшем чем приблизительно 2 мл, более предпочтительно меньшем чем приблизительно 1 мл.

Соответствующая дозировка (“терапевтически эффективное количество”) белка, такого как моноклональное антитело, будет зависеть от состояния, подлежащего лечению, тяжести и протекания заболевания или состояния, независимо от того вводят ли белок с превентивными или терапевтическими целями, предшествующей терапии, клинической истории пациента и реакции на белок, типа используемого белка, и решения лечащего врача. Белок подходящим образом вводят в одно время в виде единственной или множественной инъекци, или в течение ряда терапий, как единственную терапию, или в сочетании с другими лекарственными средствами или терапиями.

оставы для дозировки разрабатывают так, что инъекция не вызывает никаких существенных признаков раздражения на участке инъекции, например, где индекс первичного раздражения является меньше 3, когда оценку проводят с использованием системы оценки в баллах по Дрейзу. В альтернативном варианте осуществления инъекция вызывает макроскопически сходные уровни раздражения, при сравнении с инъекцией эквивалентных объемов физиологического раствора. В еще одном варианте осуществления биодоступность белка является более высокой при сравнении с такой же по другим характеристикам составов без средств(а) для снижения вязкости, вводимой таким же образом. В еще одном варианте осуществления состав является по меньшей мере примерно таким же эффективным фармацевтически, как приблизительно такая же доза белка, вводимая посредством внутривенной инфузии.

В предпочтительном варианте осуществления состав инъекционно вводят, чтобы получить увеличенные уровни терапевтического белка. Например, значение AUC может составлять по меньшей мере на 10%, предпочтительно по меньшей мере на 20%, больше чем такое же значение, вычисленное для другого такого же состава без средств(а) для снижения вязкости, вводимой таким же образом.

Средство для снижения вязкости может также воздействовать на биодоступность. Например, процент биодоступности белка может превышать по меньшей мере в 1,1 раза, предпочтительно, по меньшей мере в 1,2 раза, процент биодоступности для такого же по другим характеристикам состава без средств(а) для снижения вязкости, вводимого таким же образом.

Средство для снижения вязкости может также воздействовать на фармакокинетику. Например, C_MAX после ПК или ВМ инъекции может быть по меньшей мере на 10%, предпочтительно по меньшей мере на 20%, меньше, чем C_MAX для примерно эквивалентной фармацевтически эффективной внутривенно вводимой дозы.

В нескольких вариантах осуществления белки вводят при более высокой дозировке и с более низкой частотой, чем для такого же по другим характеристикам состава без средств(а) для снижения вязкости.

Для составов с более низкой вязкостью требуется меньшее усилие при инъекции. Например, усилие при инъекции может составлять по меньшей мере на 10%, предпочтительно по меньшей мере на 20%, меньше, чем усилие при инъекции для другого такого же состава без средств(а) для снижения вязкости, вводимого таким же образом. В одном варианте осуществления инъекцию вводят с использованием иглы 27 калибра, и усилие при инъекции составляет меньше, чем 30 Н. Составы могут вводиться в большинстве случаев с использованием иглы очень малого калибра, например, между 27 и 31 калибром, обычно калибра 27, 29 или 31.

Средство для снижения вязкости может применяться для получения дозированной единицы состава, подходящего для восстановления, чтобы получить жидкий фармацевтический состав для подкожной или внутримышечной инъекци. Единица дозирования может содержать сухой порошок одного или нескольких белков; одно или несколько средств для снижения вязкости; и другие эксципиенты. Белки присутствуют в единице дозирования таким образом, что после восстановления в фармацевтически приемлемом растворителе, полученный в результате состав имеет концентрацию белка от приблизительно 100 мг до приблизительно 2000 мг на 1 мл (мг/мл). Такие восстановленные составы могут иметь абсолютную вязкость от приблизительно 1 сП до приблизительно 50 сП при 25°C.

Состав с низкой вязкостью может быть предоставлен в виде раствора или в форме единицы дозирования, где белок лиофилизирован в одном флаконе вместе со средством или без средства для снижения вязкости и другими эксципиентами, а растворитель, вместе со средством или без средства для снижения вязкости и другими эксципиентами предоставляют во втором флаконе. В данном варианте осуществления растворитель добавляют к белку незадолго до или во время инъекции, чтобы обеспечить однородное смешивание и растворение.

Средство(средства) для снижения вязкости присутствуют в составе в концентрациях, которые не вызывают никаких существенных признаков токсичности и/или никаких необратимых признаков токсичности, когда введение проводят посредством подкожной, внутримышечной или других типов инъекции. Как используют в данном описании, “существенные признаки токсичности” включают интоксикацию, летаргию, модификации поведения, таки как модификации поведения, которые происходят при повреждении центральной нервной системы, бесплодие, признаки серьезной кардиотоксичности, таки как сердечная аритмия, кардиомопатия, инфаркты миокарда и сердечная или застойная недостаточность кровообращения, почечная недостаточность, печеночная недостаточность, затрудненное дыхание и смерть.

В предпочтительных вариантах осуществления составы не вызывают никакого существенного раздражения, когда введение проводят не более, чес дважды ежесуточно, однократно ежесуточно, дважды еженедельно, один раз еженедельно или один раз ежемесячно. Белковые составы могут вводиться, не вызывая никаких существенных признаков раздражения на участке инъекции, как измеряют по индексу первичного раздражения, меньшем 3, меньшем 2 или меньшем чем 1, когда оценку проводят, используя систему оценки в баллах по Дрейзу. Как используют в данном описании, “существенные признаки раздражения” включают эритему, красноту и/или опухание на участке инъекции, имеющие диаметр, больший чем 10 см, больший чем 5 см или больший чем 2,5 см, некроз на участке инъекции, эксфолиативный дерматит на участке инъекции, и сильную боль, которая препятствует ежедневной активности и/или требует медицинского участия или госпитализации. В нескольких вариантах осуществления, инъекции белковых составов вызывают макроскопически сходные уровни раздражения, когда проводят сравнение с инъекцией эквивалентных объемов физиологического раствора.

Белковые составы могут проявлять увеличенную биодоступность в сравнении с одинаковыми по другим характеристикам белковыми составами без средств(а) для снижения вязкости, когда введение проводят посредством подкожной или внутримышечной инъекции. “Биодоступность” относится к той степени и скорости, при которых биоактивная молекула, такая как моноклональное антитело, достигает кровообращения или участка действия. Общая биодоступность может быть увеличена для ПК или ВМ инъекции в сравнении с одинаковыми по другим характеристикам составами без средств(а) для снижения вязкости. “Процент биодоступности” относится к той фракции введенной дозы биоактивных молекул, которая попадает в кровообращение, как определяют по отношению к внутривенно введенной дозе. Одним путем измерения биодоступности является сравнение “площади под кривой” (AUC) на графике плазменной концентрации, как функции от времени. AUC может быть рассчитана, например, с использованием правила линейной трапеции. “AUC_∞”, как используют в данном описании, относится к площади под кривой плазменной концентрации от нулевой отметки времени до отметки времени, где плазменная концентрация возвращается к исходным уровням. “AUC_0-t”, как используют в данном описании, относится к площади под кривой плазменной концентрации от нулевой отметки времени до отметки времени, t, более позднего, например, по отношению к времени достижения исходного уровня. Время будет обычно измеряться в днях, хотя могут также использоваться часы, что будет ясно по контексту. Например, AUC может увеличиваться на более, чем 10%, 20%, 30%, 40% или 50% в сравнении с иным таким же составом без средств(а) для снижения вязкости и вводимым таким же образом.

Как используют в данном описании, “t_max” относится к времени после введения, при котором плазменная концентрация достигает максимального значения.

Как используют в данном описании, “C_max” относится к максимальной плазменной концентрации после введения дозы, и перед введением последующей дозы.

Как используют в данном описании, "C_min" или "C_trough" относится к минимальной плазменной концентрации после введения дозы, и перед введением последующей дозы.

C _max после ПК или ВМ инъекции может быть меньше, например, по меньшей мере на 10%, более предпочтительно, по меньшей мере на 20%, чем C_max внутривенно введенной дозе. Это снижение C_max может также приводить к уменьшенной токсичности.

Фармакокинетические и фармакодинамические параметры могут быть аппроксимированы в ряду молекул, с использованием подходов которые известны квалифицированному специалисту. Фармакокинетика и фармакодинамика терапевтических средств на основе антител может заметно различаться с учетом конкретного антитела. Было показано, что разрешенные к применению мышиные моноклональные антитела имеют период полужизни у людей, равный ~ 1 дню, в то время как человеческие моноклональные антитела будут обычно иметь период полужизни ~ 25 дням (Waldmann et al., Int. Immunol., 2001, 13:1551-1559). Фармакокинетика и фармакодинамика терапевтических средств на основе антител может заметно различаться в зависимости от пути введения. Время до достижения максимальной плазменной концентрации после ВМ или ПК инъекции IgG обычно находится в интервале от 2 до 8 дней, хотя могут иметь место меньшие или большие значения времени (Wang et al., Clin. Pharm. Ther., 2008, 84(5):548-558). Фармакокинетика и фармакодинамика терапевтических средств на основе антител может заметно различаться в зависимости от состава.

Низковязкие белковые составы могут обеспечить более высокую гибкость при дозировании и уменьшенную частоту дозирования в сравнении с такими же белковыми составами без средств(а) для снижения вязкости. Например, посредством увеличения дозировки, вводимой на инъекцию при многократном введении, частота дозирования может в нескольких вариантах осуществления быть снижена от одного раза каждые 2 недели до одного раза каждые 6 недель.

Белковые композиции, включающие, но не ограниченные восстановленными составами, могут вводиться с использованием нагретого и/или самосмешивающего шприца или автоматического шприца. Белковые составы также могут быть предварительно нагреты в отдельном блоке нагрева перед заполнением шприца.

i. Нагретые шприцы

Нагретый шприц может представлять собой стандартный шприц, который предварительно нагревают с использованием нагревателя шприца. Нагреватель шприца обычно будет иметь одно или несколько отверстий, каждое из которых способно принимать шприц, содержащий белковый состав, и средство для нагрева и поддержания шприца при конкретной (обычно выше окружающей) температуре перед применением. Данный шприц будет именоваться в данном описании как предварительно нагретый шприц. Подходящие нагреватели для нагретых шприцев включают нагреватели, доступные от Vista Dental Products и Inter-Med. Нагрватели приспособлены к шприцам различных размеров и нагреву, типично с интервалом 1°C, до любой температуры до приблизительно 130°C. В нескольких вариантах осуществления шприц предварительно нагревают в нагревающей ванне, такой как водяная баня, поддерживаемая при желательной температуре.

Нагретый шприц может представлять собой самонагревающий шприц, т.е. способный к нагреву и поддержанию жидкого состава внутри шприца при конкретной температуре. Самонагревающий шприц может также представлять собой стандартный медицинский шприц, присоединенный к устройству для нагрева. Подходящие устройства для нагрева, способные к присоединению шприца, включают нагреватели шприцев или нагревательную ленту для шприцев, доступную от Watlow Electric Manufacturing Co. of St. Louis, MO, и блоки нагрева шприца, ступенчатые нагреватели, и встроенные перфузионные нагреватели, доступные от Warner Instruments of Hamden, CT, такие как нагреватель шприцев модели SW-61. Нагреватель может управляться через центральный контроллер, например, терморегуляторы модели TC-324B или TC-344B, доступные от Warner Instruments.

Нагретый шприц поддерживает жидкий белковый состав при установленной температуре или в пределах 1°C, в пределах 2°C или в пределах 5°C от установленной температуры. Нагретый шприц может поддерживать белковые составы при любой температуре от комнатной температуры до приблизительно 80°C, до приблизительно 60°C, до приблизительно 50°C или до приблизительно 45°C постольку, поскольку белковый состав является достаточно стабильным при этой температуре. Нагретый шприц может поддерживать белковый состав при температуре между 20°C и 60°C, между 21°C и 45°C, между 22°C и 40°C, между 25° C и 40° C, или между 25°C и 37°C. При поддержании белковых составов при повышенной температуре во время инъекции, вязкость жидкого состава уменьшается, растворимость белка в составе увеличивается, или происходит и то, и другое.

ii. Самосмешивающие шприцы

Шприц может быть самосмешивающим или может иметь присоединенный миксер. Миксер может являться статическим миксером или динамическим миксером. Примеры статических миксеров включают миксеры, раскрытые в Патентах США №№ 5819988, 6065645, 6394314, 6564972 и 6698622. Примеры некоторых динамических миксеров могут включать миксеры, раскрытые в Патентах США №№ 6443612 и 6457609, а также Опубликованной заявке на патент США № US 2002/0190082. Шприц может включать множество емкостей для смешивания компонентов жидкого белкового состава. Патент США № 5819998 описывает шприцы с двумя емкостями и смешивающий наконечник для смешивания двухкомпонентных вязких веществ.

iii. Автоматические медицинские шприцы и шприцы, предварительно заполненные белковыми композициями

Жидкие белковые составы могут вводиться с использованием предварительно заполненного шприца, автоматического шприца или устройства для безыгольной инъекции. Автоматические медицинские шприцы включают портативный, часто напоминающий ручку, держатель картриджа для удерживания сменных предварительно заполненных картриджей и пружинный или аналогичный механизм для подкожной или внутримышечной инъекции дозировок жидкого лекарственного средства из предварительно заполненного картриджа. Автоматические медицинские шприцы обычно конструируют для самовведения или введения необученным персоналом. Являются доступными автоматические медицинские шприцы для распределения либо разовых дозировок или множества дозировок из предварительно заполненного картриджа. Автоматические медицинские шприцы обеспечивают различные установки для пользователя, включающие, среди прочего, глубину инъекции, скорость инъекции и т.п. Другие инъекционные системы могут включать системы, описанные в Патенте США № 8500681.

Лиофилизированные белковые составы могут предоставляться в предварительно заполненных шприцах или шприцах-тюбиках. Патенты США №№ 3682174; 4171698; и 5569193 описывают стерильные шприцы, содержащие два отсека, которые могут быть предварительно заполнены сухим составом и жидкостью, которые могут смешиваться непосредственно перед инъекцией. Патент США № 5779668 описывает шприцевую систему для лиофилизации, восстановления и введения фармацевтической композиции. В нескольких вариантах осуществления белковый состав предоставляется в лиофилизированной форме в предварительно заполненном шприце или шприце-тюбике, восстанавливается в шприце перед введением, и вводится в виде однократной подкожной или внутримышечной инъекции. Автоматические медицинские шприцы для доставки дозовой единицы лиофилизированных лекарственных средств описаны в WO 2012/010,832. Автоматические медицинские шприцы такие как Safe Click Lyo™ (представленные на рынке Future Injection Technologies, Ltd., Oxford, U.K.) могут применяться для введения дозовой единицы белкового состава, где состав хранят в лиофилизированной форме и восстанавливают непосредственно перед введением. В нескольких вариантах осуществления белковый состав предоставляют в картриджах с единицей дозирования для лиофилизированных лекарственных средств (иногда именуемых картриджами Веттера). Примеры подходящих картриджей могут включать картриджи, описанные в Патентах США №№ 5334162 и 5454786.

V. Методы очистки и концентрирования

Средства для снижения вязкости могут также применяться, чтобы способствовать очистке и концентрированию белков. Средство(средства) для снижения вязкости и эксципиенты добавляют к белку в эффективном количестве, чтобы снизить вязкость раствора белка. Например, средство для снижения вязкости добавляют до достижения концентрации между приблизительно 0,01 M и приблизительно 1,0 M, предпочтительно, между приблизительно 0,01 M и приблизительно 0,50 M, и, наиболее предпочтительно, между приблизительно 0,01 M и приблизительно 0,25 M.

Раствор средства для снижения вязкости, содержащий белок, затем очищают или концентрируют с использованием метода, выбранного из группы, состоящей из ультрафильтрации/диафильтрации, тангенциальной поточной фильтрации, центрифужного концентрирования и диализа.

Примеры

Вышеизложенное будет дополнительно понято посредством следующих неограничивающих примеров.

Все вязкости хорошо смешанных водных растворов моноклональных антител измеряли, используя либо микрожидкостный вискозиметр mVROC (RheoSense) или вискозиметр DV2T с конусом и плоскостью (Брукфилда; “C & P”) через 5 минут уравновешивания при 25°C (если не указано иначе). Вискозиметр mVROC был оборудован чипом “A” или “B”, каждый из которых был изготовлен с 50-микронным канальцем. Обычно, 0,10 мл раствора белка забирают обратно в микролабораторный инструментальный шприц газонепроницаемый шприц (Hamilton; 100 мкл), прикрепленный к чипу, и измерения проводят при многих скоростях потока, примерно при 20%, 40% и 60% от максимального давления для каждого чипа. Например, образец с вязкостью примерно 50 сП будет измеряться при около 10, 20 и 30 мкл/мин (примерно 180, 350 и 530 с^-1, соответственно, на чипе “A”) до стабилизации вязкости, обычно через по меньшей мере 30 секунд. Среднюю абсолютную вязкость и стандартное отклонение затем рассчитывали по результатам по меньшей мере этих трех измерений. C & P вискозиметр был оборудован шпинделем сПE40 или сПE52 (угол конуса, равный 0,8° и 3,0°, соответственно) и образцы по 0,50 мл измеряли при многих скоростях сдвига между 2 и 400 с^-1. Конкретно, образцы измеряли в течение 30 секунд каждый при 22,58, 24,38, 26,25, 28,13, 30, 31,88, 45, 67,5, 90, 112,5, 135, 157,5, 180, 202,5, 247, 270, 292,5, 315, 337,5, 360, 382, 400 с^-1, начиная при скорости сдвига, которая давала по меньшей мере крутящий момент 10%, и продолжая до достижения крутящего момента прибора, равного 100%. Экстраполированную вязкость при нулевом сдвиге затем определяли по графику зависимости динамической вязкости от скорости сдвига для образцов, измеряемых на вискозиметре DV2T с конусом и плоскостью. Приведены экстраполированные для нулевой скорости сдвига средние значения вязкости и стандартное отклонение для по меньшей мере трех измерений.

Пример 1: Эффект средства для снижения вязкости, камфорсульфоновой кислоты-лизина (CSAL), на вязкость растворов биоаналога ERBITUX^®

Материалы и методы

Приобретенный биоаналог ERBITUX^® (100-400 мг), содержащий фармацевтические эксципиенты (Полисорбат 80, фосфатный буфер, и NaCl) очищали. Сначала Полисорбат 80 удаляли, используя колонки Medi DETERGENT-OUT^® TWEEN^® (G-Biosciences). Далее, в полученных растворах тщательно проводили замену буфера на 20 мМ натрийфосфатный буфер (PB; pH 7,0) или 20 мМ CSAL (pH 7,0) и концентрировали до конечного объема, меньшего 10 мл, на центрифужных концентраторах Jumbosep (Pall Corp.). Собранный белковый раствор лиофилизировали. Высушенные белковые лиофилизаты, содержащие белок и буферные соли или средство, восстанавливали до конечного объема, равного 0,15-1,3 мл. Эти образцы восстанавливали, используя дополнительный PB (pH 7,0) или CSAL (pH 7,0), в достаточном количестве, чтобы привести конечную концентрацию PB или CSAL до 0,25 M. Конечную концентрацию моноклонального антитела в растворе определяли по поглощению света при 280 нм. Приведенные концентрации белков представляют интервал всех белковых образцов, включенных в каждую Таблицу или Фигуру. Конкретно, приведенные значения являются медианой плюс или минус половину интервала. Экстраполированные для нулевой скорости сдвига с использованием экспериментально определенного коэффициента экстинкции, равного 1,4 л/г·см, приведенные значения вязкости измеряли на вискозиметре DV2T с конусом и плоскостью.

Результаты

Данные на Фигуре 1 демонстрируют эффект CSAL на снижение вязкости водных растворов биоаналога ERBITUX^®. вязкость раствора биоаналога ERBITUX^® в фосфатном буфере (PB) увеличивается экспоненциально с увеличением концентрации моноклонального антитела. Видно, что вязкость раствора биоаналога ERBITUX^® в присутствии CSAL увеличивается экспоненциально с увеличением концентрации моноклонального антитела, но в меньшей степени, чем для состава в PB, т.е. градиент вязкости снижается. Данные на Фигуре 1 показывают, что чем выше концентрация моноклональных антител, тем значительнее эффект снижения вязкости. Величина эффектов снижения вязкости, получаемая при замене PB на CSAL изменяется от 1,1 раза при 100±5 мг/мл дл 10,3 раз при 227±5 мг/мл моноклонального антитела.

Пример 2: Эффект снижения вязкости средства для снижения вязкости, камфорсульфоновой кислоты-лизина (CSAL), как функция концентрации биоаналога AVASTIN^®

Материалы и методы

Биоаналог AVASTIN^®, полученный путем приобретения и содержащий фармацевтические эксципиенты (Полисорбат 20, фосфатный буфер, цитратный буфер, маннит и NaCl) очищали, проводили замену буфера, концентрировали, сушили, восстанавливали и анализировали, как описано в Примере 1 выше (используя коэффициент экстинкции, равный 1,7 л/г·см при 280 нм). Белок составляли с содержанием либо 0,25 M фосфатного буфера или 0,25 M CSAL.

Результаты

Фигура 2 изображает вязкость водных растворов моноклональных антител как функцию концентрации моноклонального антитела в водном забуференном растворе и вместе с CSAL. Вязкость биоаналога AVASTIN^® в водном фосфатном буфере и в присутствии CSAL увеличивается экспоненциально с увеличением концентрации; однако, как и в случае биоаналога ERBITUX^®, данное увеличение возрастает значительно меньше отмеченного для CSAL-содержащего состава, т.е. градиент вязкости снижается. В целом, чем выше концентрация моноклонального антитела, тем значительнее наблюдаемый эффект снижения вязкости. Величина эффектов снижения вязкости, получаемых при замене РВ на CSAL, изменялась от 2,1 раза при 80 мг/мл до 3,7 раз при 230±5 мг/мл моноклонального антитела.

Пример 3: Эффект снижения вязкости как функция концентрации CSAL для водных растворов биоаналога ERBITUX^®

Материалы и методы

Образцы очищали, буфер в них заменяли, концентрировали, сушили, восстанавливали и анализировали аналогично Примеру 1 выше. Конечная концентрация CSAL при восстановлении в водный раствор CSAL находилась в интервале от 0,25 M до 0,50 M.

Результаты

Таблица 1 показывает вязкость растворов биоаналога ERBITUX^®, составленного в 0,25 M фосфатном буфере (отсутствие CSAL в качестве контроля) и при изменяющихся концентрациях CSAL. Видно, что эффект снижения вязкости CSAL повышается от 8,4 до 12,1 раз с увеличением концентрации средства для снижения вязкости. Данные в Таблице 1 показывают, что чем выше концентрация CSAL, тем значительнее эффект снижения вязкости, по меньшей мере в пределах интервала тестируемых концентраций средства.

Таблица 1

Вязкости водных растворов биоаналога ERBITUX® (155±5 мг/мл, pH 7,0) в присутствии различных концентраций CSAL при 25°C
[CSAL], M	Вязкость, сП	Кратность снижения вязкости (в сравнении с отсутствием CSAL)
0	154±0	1
0,25	18,3±0,0	8,4
0,38	14,9±0,1	10,3
0,50	12,7±0,1	12,1

Пример 4: Вязкости растворов биоаналога ERBITUX^® как функция температуры в присутствии различных средств для снижения вязкости

Материалы и методы

Водные растворы биоаналога ERBITUX^®, содержащие различные средства для снижения вязкости, получали, как описано в Примере 1. Конкретно, 20 мМ растворы средств для снижения вязкости, представляющих интерес, применяли для замены буфера, и лиофилизированные таблетки восстанавливали до 0,25 M каждого средства для снижения вязкости. Для образца, содержащего CSA-APMI, биоаналогу ERBITUX^® проводили тщательную замену буфера на 2 мМ PB (pH 7,0), и концентрировали до конечного объема, меньшего 10 мл, на центрифужных концентраторах Jumbosep (Pall Corp.). Образец сначала разделяли на аликвоты. Затем, соответствующее количество раствора CSAAPMI (pH 7,0) добавляли к каждой аликвоте таким образом, что при восстановлении водой, конечная концентрация эксципиента составляла 0,25 M. Белковые растворы затем лиофилизировали. Высушенные белковые лиофилизаты, содержащие белок и средство для снижения вязкости (и незначительное количество буферных солей), восстанавливали до конечного объема, равного примерно 0,10 мл, и концентрации средства для снижения вязкости, как описано ранее.

Результаты

Таблица 2 показывает данные по вязкости для биоаналога ERBITUX^® в присутствии шести средств для снижения вязкости - камфорсульфоновой кислоты-лизина (CSAL), камфорсульфоновой кислоты-аргинина (CSAA), бензолсульфоновой кислоты-лизина (BSAL), бензолсульфоновой кислоты-аргинина (BSAA), нафталинсульфоновой кислоты-аргинина (NSAA), и камфорсульфоновой кислоты-1-(3-аминопропил)-2-метил-1H-имидазола (CSAAPMI). Данные в Таблице 2 показывают снижение вязкости по меньшей мере приблизительно в 9 раз для всех шести средств для снижения вязкости в сравнении с раствором биоаналога ERBITUX^® в фосфатном буфере при одинаковых других условиях. Наиболее эффективное средство для снижения вязкости – CSAAPMI –понижало вязкость более чем в 40 раз.

Дополнительно, данные в Таблице 3 показывают, что при многих температурах в интервале от 20°C до 30°C, раствор биоаналога ERBITUX^® с концентрацией 225 мг/мл, полученный с 0,25 M CSAA, имел самую низкую вязкость из пяти средств для снижения вязкости. Таким образом, наблюдаемые тенденции у вязкости при 25°C, по-видимому, являются предвосхищающими такие тенденции при температурах, равных по меньшей мере 20°C и 30°C.

Таблица 2

Снижение вязкости водных растворов биоаналога ERBITUX® (226±6 мг/мл, pH 7,0), составленных с различными 0,25 M средствами для снижения вязкости, в сравнении со снижением вязкости в 0,25 M натрийфосфатном буфере (PB) при 25°C
Средство	Вязкость, сП	Кратность снижения
PB	1130±7	1
CSAL	109±1	10,4
CSAA	58,0±0,3	19,5
BSAL	126±1	9,0
BSAA	61,3±0,9	18,4
NSAA	69,4±0,6	16,3
CSAAPMI	25,7±1,5	44,0

Таблица 3

Вязкости водных растворов биоаналога ERBITUX®(225±5 мг/мл, pH 7,0), составленного с различными 0,25 M средствами для снижения вязкости
Темп.	Вязкость, сП
	Средство
PB	CSAL	CSAA	BSAL	BSAA	NSAA
20°C	1810±10	166±2	79,6±0,9	193±0	85,2±0,6	103±0
25°C	1130±7	109±1	58,0±0,3	126±1	61,3±0,9	69,4±0,6
30°C	723±0	78,4±1,5	46,9±0,6	89,8±0,8	50,5±1,9	60,9±4,3

Пример 5: Влияние температуры на вязкость водных растворов биоаналога AVASTIN^®, составленного с различными средствами для снижения вязкости

Материалы и методы

Растворы биоаналога AVASTIN^®, содержащие различные средства для снижения вязкости, получали, как описано в Примере 1 выше. В частности, 20 мМ растворы средств для снижения вязкости, представляющих интерес, применяли для замены буфера, и лиофилизированные таблетки восстанавливали до 0,15 или 0,25 M средства для снижения вязкости.

Результаты

Как видно в Таблице 4, 0,25 M CSAL понижал вязкость раствора биоаналога AVASTIN^® с концентрацией 230±5 мг/мл при всех трех температурах между 20 и 30°C. Кроме того, 0,15 M CSAL снижал вязкость до примерно одинакового абсолютного значения, как и 0,25 M CSAL при 20 и 25°C и в равной степени является эффективным при 30°C.

Данные в Таблице 5 позволяют сравнить эффекты CSAL и BSAL при концентрации, равной 0,15 M. CSAL является превосходящим средством для снижения вязкости в сравнении с BSAL при всех трех температурах.

Таблица 4

Вязкости водных растворов биоаналога AVASTIN® (230±5 мг/мл, pH 7,0), составленных с 0,25 и 0,15 M CSAL при различных температурах
	Вязкость, сП
Температура	0,25 M PB	0,25 M CSAL	0,15 M CSAL
20°C	563±2	152±0	157±0
25°C	397±2	107±4	113±0
30°C	311±4	95,5±5,4	91,7±3,3

Таблица 5

Вязкости водных растворов биоаналога AVASTIN® (230±5 мг/мл, pH 7,0), составленных с 0,15 M CSAL и BSAL at различных температурах
	Вязкость, сП
Температура	0,25 M PB	0,15 M CSAL	0,15 M BSAL
20°C	563±2	157±0	395±3
25°C	397±2	113±0	227±5
30°C	311±4	91,7±3,3	175±7

Пример 6: Удаление CSAL обращает эффект снижения вязкости в растворах моноклонального антитела

Материалы и методы

Получали три образца каждого из биоаналога ERBITUX^® и биоаналога AVASTIN^®. Сначала из приобретенных растворов моноклональных антител удаляли Полисорбат. Полученный в результате раствор с оставшимися фармацевтическими эксципиентами либо (i) концентрировали на центрифужном устройстве с пределом удаления молекулярной массы, равным 100 кДа (MWCO) (Pall Corp.) в качестве контрольного образца (исходные эксципиенты), (ii) проводили замену буфера на 0,25 M CSAL, как описано в Примере 1, или (iii) проводили замену буфера на 0,25 M CSAL, как описано в Примере 1, восстанавливали, и затем дополнительно проводили замену на 0,25 M PB. В этои третьем случае, замену на 0,25 M фосфатный буфер проводили первоначально посредством диализа в течение ночи против 20 мМ PB (50-кДа MWCO, Spectrum Labs). Частично диализованные образцы затем разбавляли до 60 мл в 0,25 M PB и подвергали центрифужному концентрированию (30-кДа MWCO Jumbosep (Pall Corp.), с последующим концентрированием на устройстве Macrosep с 100-кДа MWCO (Pall Corp.)). Вязкости этих трех водных растворов определяли, как описано в Примере 1 выше.

Результаты

Вязкости водных растворов как биоаналога ERBITUX^®, так и биоаналога AVASTIN^® снижались в присутствии CSAL – в 2,7 и 1,5 раза, соответственно – но затем увеличивались, когда CSAL удаляли (см. Таблицы 6 и 7). Кроме того, при удалении CSAL, вязкость раствора моноклонального антитела возвращалась примерно к такому же уровню, как у исходных растворов, позволяя предположить, что CSAL не повреждает белок и показыая, что оно является необходимым для наблюдаемого снижения вязкости.

Таблица 6

Вязкости водных растворов биоаналога ERBITUX®(80±5 мг/мл, pH 7,0) при 25°C
Состав		Вязкость, сП
Исходные эксципиенты		8,30±0,04
0,25 M CSAL		3,08±0,18
0,25 M CSAL, замененный на 0,25 M PB		9,43±0,04

Таблица 7

Вязкости водных растворов биоаналога AVASTIN® (101±5 мг/мл, pH 7,0) при 25°C
Состав		Вязкость, сП
Исходные эксципиенты		6,08±0,19
0,25 M CSAL		4,03±0,24
0,25 M CSAL, замененный на 0,25 M PB		6,61±0,08

Пример 7: Средства для снижения вязкости, содержащие камфорсульфоновую кислоту обеспечивают значительные снижения вязкости в водных растворах AVASTIN^® и биоаналога AVASTIN^®

Материалы и методы

AVASTIN^® и биоаналог AVASTIN^®, полученные путем приобретения и содержащие фармацевтические эксципиенты (AVASTIN^®: трегалозу, натрийфосфатный буфер, и Полисорбат 20; биоаналог AVASTIN^®: Полисорбат 20, фосфатный буфер, цитратный буфер, маннит и NaCl) очищали, проводили в них замену буфера, концентрировали, лиофилизировали и восстанавливали, как описано выше. Образцы в Таблице 8 получали, как описано в Примере 1 выше (используя коэффициент экстинкции для белка, равный 1,7 л/г·см при 280 нм) и измерения проводили на C&P вискозиметре. Образцы со сниженной вязкостью в Таблице 9 получали, как описано в Примере 4 выше, но для моноклонального антитела проводили тщательную замену буфера на 2 мМ PB. Впоследствии добавляли соответствующее количество средства для снижения вязкости, чтобы получить в результате конечную концентрацию средства для снижения вязкости, равнуюю 0,15-0,35 M при восстановлении. Вязкости измеряли, используя микрожидкостный вискозиметр RheoSense mVROC, оборудованный чипом “A” или “B”.

Результаты

Данные в Таблицах 8 и 9 демонстрируют эффект снижения вязкости различных средства для снижения вязкости на водные растворы биоаналога AVASTIN^®. Снижения вязкости до 2,5-кратного (в сравнении с растворами моноклонального антитела в PB) наблюдают для водных растворов биоаналога AVASTIN^® в присутствии средств для снижения вязкости, содержащих CSA.

Таблица 8

Вязкости водных растворов биоаналога AVASTIN® (200±5 мг/мл, pH 7,0) при 25°C с различными средствами для снижения вязкости
Средство	[Соль] (M аниона)	Вязкость (сП)
PB	0,25	96,8±0,9
NaCl	0,25	121±8
Аргинин·HCl	0,25	83,2±2,8
Аргинин·HCl	0,3	71,8±2,2
Лизин·HCl	0,25	137±2
BSA натриевая соль	0,25	133±3
CSA натриевая соль	0,25	55,7±0,2
BSAA	0,25	75,3±0,4
Бензойная кислота аргинин	0,15	52,2±0,5
Бензойная кислота аргинин	0,25	51,4±0,5
CSAA	0,25	48,5±1,9
CSA бетаин*	0,25	66,0±0,7
диCSA кадаверин	0,25	85,5±5,2
диCSA кадаверин	0,35	65,6±1,6
CSA канаванин	0,15	60,5±0,6
CSA канаванин	0,25	75,6±3,0
CSA карнитин*	0,25	72,4±1,7
CSA диметилпиперазин	0,25	47,4±1,3
CSA диметилпиперазин	0,35	51,7±0,9
CSAL	0,25	54,9±0,9
Хлортеофиллин аргинин	0,25	104,5±6,5
Этандисульфонат диаргинин*	0,15	77,1±0,3
Этандисульфонат диаргинин*	0,25	105±4
MSA аргинин	0,25	93,1±0,9
Толуолсульфоновая кислота аргинин	0,25	159±5
Толуолсульфоновая кислота лизин	0,25	118±1
* Содержит эквимолярный NaCl; CSA = Камфорсульфоновая кислота, BSA = Бензолсульфоновая кислота, MSA = Метансульфоновая кислота, PB = Фосфатный буфер

Таблица 9

Вязкости водных растворов биоаналога AVASTIN® (pH 7,0) при 25°C с 0,15 M средствами для снижения вязкости (если не отмечено иначе)
Средство	[биоаналог AVASTIN] (мг/мл)	Вязкость (сП)
0,25 M PB	220	213±10
0,25 M PB	200	96,8±0,9
CSA-пиперазин	212	64,5±13,1
Лактобионовая кислота-ТРИС	219	109±5
CSA-4-аминопиридин	229	86,4±1,1
Глюкуроновая кислота-ТРИС	221	151±5

Вязкость водного раствора биоаналога AVASTIN^® с концентрацией 200±9 мг/мл вместе с CSAA измеряли как функцию pH, как изображено на Фигуре 3. По мере увеличения pH, величина эффекта снижения вязкости, являющегося результатом присутствия CSAA в водных растворах биоаналога AVASTIN^® также увеличивается, достигая минимальной вязкости и максимального эффекта снижения вязкости около pH 7. Снижение вязкости от CSAA сравнивали как функцию pH для двух различных концентраций биоаналога AVASTIN^®. Фигура 4 демонстрирует, что 0,25 M CSAA приводит в результате к большему снижению вязкости с увеличением (i) концентрации биоаналога AVASTIN^® и (ii) pH.

В Таблице 10 сравнивают снижение вязкости биоаналога AVASTIN^® со снижением вязкости для маркированного AVASTIN^® с CSAL и без него. Раствор маркированного AVASTIN^® имел гораздо более высокую вязкость, чем раствор биоаналога моноклонального антитела в отсутствии средства. Однако, присутствие 0,25 M CSAL приводит в результате к 1,8- и 3,3-кратному снижению вязкости биоаналога и маркированного AVASTIN^® соответственно; вязкости биоаналога и маркированного AVASTIN^®, по-видимому, являются сходными в присутствии 0,25 M CSAL.

Таблица 10

Вязкости водных растворов, содержащих 205±5 мг/мл биоаналога AVASTIN® или маркированного AVASTIN® с 0,25 M CSAL или без него, измеренные при 25°C и pH 7,0
Соль	Биоаналог AVASTIN® (сП)	Маркированный AVASTIN® (сП)
Фосфатный буфер	96,8±0,9	154±4
0,25 M CSAL	54,9±0,9	46,7±0,9
CSAL = камфорсульфоновая кислота лизин

Как показано в Таблице 11, CSA 1-(3-аминопропил)-2-метил-1H-имидазол (CSAAPMI) с HCl обеспечивает превосходящее снижение вязкости, чем CSAL, снижая вязкость более, чем 5-кратно в сравнении с контролем PB для раствора с 210 мг/мл биоаналога AVASTIN^®.

Таблица 11

Вязкости водных растворов биоаналога AVASTIN® с различными средствами для снижения вязкости при 25°C и pH 7,0
Средство	[Средство], M	[Белок], мг/мл	Вязкость, сП
PB	0,25	220	213±10
CSAL	0,25	210	63,0±1,8
CSAAPMI-2HCl	0,25	210	40,9±0,5
APMI=1-(3-аминопропил)-2-метил-1H-имидазол

Для раствора, содержащего ~ 230 мг/мл биоаналога AVASTIN^®, Таблица 12 демонстрирует примерно 5-кратное снижение вязкости со средствами для снижения вязкости, содержащими сульфосалициловую кислоту, а также для CSAAPMI и CSA тиамина.

Таблица 12

Вязкости водных растворов, содержащих 228±5 мг/мл биоаналога AVASTIN® вместе со средствами для снижения вязкости при 25°C и pH 7,0
Средство	Концентрация средства [M]	Вязкость (сП)
PB	0,25	397±2
CSAA	0,25	116±2
CSAL	0,25	113±0
Сульфосалициловая кислота диаргинин	0,15	81,6±1,7
Сульфосалициловая кислота дилизин	0,25	73,4±0,4
CSAAPMI-2HCl	0,25	71,8±3,2
CSAтиамин-2NaCl	0,15	83,7±2,2
APMI=1-(3-аминопропил)-2-метил-1H-имидазол; CSA = камфорсульфоновая кислота

Пример 8. Эффект средств для снижения вязкости на водные растворы ERBITUX^® и биоаналога ERBITUX^®

Материалы и методы

Водные растворы биоаналога ERBITUX^® и маркированного ERBITUX^®, содержащие различные средства для снижения вязкости, получали как описано в Примере 1. Конкретно, 20 мМ растворы солей, представляющих интерес, применяли для замены буфера, и лиофилизированные таблетки восстанавливали дл содержания 0,25 M каждого средства. Вязкости измеряли, используя либо микрожидкостный вискозиметр RheoSense mVROC, оборудованный чипом “A” или “B”, или вискозиметр DV2T с конусом и плоскостью.

Результаты

Таблица 13 показывает данные для биоаналог ERBITUX^® (222±5 мг/мл) в присутствии пяти средств для снижения вязкости: CSAA, CSAL, BSAA, BSAL, и NSAA. В Таблице 14 сравнивают снижение вязкости растворов биоаналога ERBITUX^®, используя CSAA и CSAL с аргинином или лизином по отдельности.

Таблица 13

Вязкости водных растворов биоаналога ERBITUX® (222±5 мг/мл, pH 7,0) вместе с 0,25 M средствами для снижения вязкости при 25°C
Средство	Вязкость (сП)	Кратность снижения
Фосфатный буфер	1130±7	1,0
CSA Аргинин	52,5±1,0	21,5
CSA Лизин	109±1	10,4
BSA Аргинин	53,4±5,5	21,2
BSA Лизин	126±1	9,0
NSA Аргинин	69,4±0,6	16,3

Таблица 14

Вязкости водных растворов биоаналога ERBITUX® (222±5 мг/мл, pH 7,0) вместе с 0,25 M средствами для снижения вязкости при 25°C
Средство	Вязкость (сП)	Кратность снижения
Фосфатный буфер	1130±7	1,0
CSAA	52,5±1,0	21,5
CSA Натрия	393±14	2,9
Аргинин HCl	45,3±0,5	24,9
CSAL	109±1	10,4
Лизин HCl	128±2	8,8

Данные в Таблице 13 показывают по меньшей мере 9,0-кратное снижение вязкости для всех пяти средств для снижения вязкости в сравнении с водным раствором биоаналога ERBITUX^® в фосфатном буфере при одинаковых иных условиях. Наиболее эффективные средства для снижения вязкости, CSAA и BSAA, понижали вязкость раствора почти в 21 раз.

Вязкости водных растворов биоаналога ERBITUX^®, содержащих 0,25 M CSAA сравнивали как функцию pH при изменяющихся концентрациях белка. Фигура 5 демонстрирует, что минимальную вязкость наблюдают около pH 7,0 для всех концентраций белка. Эффект pH на вязкость является наиболее выраженным для более высоких концентраций белка (253 мг/мл в примере).

Как видно из Таблицы 15, водные растворы биоаналога ERBITUX^® и маркированного ERBITUX^® имеют сходные вязкости в присутствии аргининовой соли BSAA при 0,25 M.

Таблица 15

Вязкости 224±4 мг/мл водных растворов биоаналога ERBITUX® или маркированного ERBITUX® с 0,25 M BSAA или без него при 25°C и pH 7,0
Средство	Вязкость биоаналога ERBITUX® (сП)	Вязкость маркированного ERBITUX® (сП)
Фосфатный буфер	1130±7	556±20
0,25 M BSAA	53,4±5,5	44,1±0,5

Воздействие средств для снижения вязкости на образование необратимых белковых агрегатов исследовали для биоаналога ERBITUX^®. Водные жидкие составы получали из (i) биоаналога ERBITUX^® и (ii) биоаналога ERBITUX^®, содержащего 0,25 M CSAL. Эти растворы хранили в течение 90 дней при 4°C и pH 5,4 и 7,0, соответственно. Сохраняемые образцы исследовали, используя гель-фильтрационную хроматографию (колонка: Tosoh TSKgel UltraSW Aggregate; подвижная фаза: 0,1 M фосфат калия/0,1 M сульфат натрия, pH 6,8 при 0,8 мл/мин; инъекция: 20 мкл 5 мг/мл раствора моноклонального антитела). Данные в Таблице 16 не отображают существенного образования агрегатов либо в промышленном лекарственном продукте или высококонцентрированном составе с пониженной вязкостью.

Таблица 16

Процент образование агрегатов белка через 90 дней хранения при 4°C по данным измерений посредством гель-фильтрационной хроматографии для водных растворов, содержащих биоаналог ERBITUX® с 0,25 M CSAL или без 0,25 M CSAL
Образец	% Миономера	% Димера	% Агрегата
Биоаналог ERBITUX® 5 мг/мл	99,0	1,0	0,0
Биоаналог ERBITUX® 210 мг/мл с 0,25 M CSAL	98,4	0,9	0,7

Пример 9. Эффект средств для снижения вязкости на водные растворы REMICADE^®

Материалы и методы

Приобретенный REMICADE^®, содержащий фармацевтические эксципиенты (сахарозу, Полисорбат 80, натрийфосфатный буфер) получали по инструкциям в листовке-вкладыше по медицинскому применению препарата. Впоследствии водный продукт лекарственного средства очищали, проводили в нем замену буфера, концентрировали, сушили, восстанавливали и анализировали, как описано в Примере 1 выше (используя коэффициент экстинкции, равный 1,4 Л/г*cm при 280 нм). Вязкости измеряли, используя микрожидкостный вискозиметр RheoSense mVROC, оборудованный чипом “A” или “B”.

Результаты

Данные для водных растворов REMICADE^® в Таблице 17 демонстрируют, что (i) средства для снижения вязкости, содержащие объемообразующую циклическую группу обеспечивают более чем 15-кратное снижение вязкостей, и (ii) CSAA, CSAAPMI, и сульфосалициловая кислота-диаргинин (SSA DiArg) обеспечивают наибольшее снижение вязкости приблизительно в 29 раз. Вязкость раствора в присутствии только ArgHCl является значительно более высокой, чем значения вязкости для объемообразующих циклических групп.

Таблица 17

Вязкости водных растворов REMICADE®, содержащих 0,25M средства для снижения вязкости при 25°C и pH 7,0
[REMICADE®] (мг/мл)	Вязкость (сП)
PB	ArgHCl	CSAA	CSA APMI	BSAA	CSAL	SSA DiArg
222±6	1557±22	486±34	53,7±9,3	56,3±2,7	92,3±1,4	95,3±1,1	55,9±1,8
166±4	513±15	110±1	19,1±0,2	31,7±0,3	26,7±1,2	27,4±0,2	27,1±0,3
PB = фосфатный буфер; ArgHCl = аргинин HCl; CSAA = камфорсульфоновая кислота аргинин; CSA APMI = камфорсульфоновая кислот 1-(3-аминопропил)-2-метил-1H-имидазол; BSAA = бензол сульфоновая кислота-аргинин; CSAL = камфорсульфоновая кислота-лизин; SSA DiArg = сульфосалициловая кислота-ди-аргинин.

Зависимость снижения вязкости от концентрации средства исследовали для водных растворов REMICADE^® в присутствии CSAA. Результаты, представленные в Таблице 18, демонстрируют, что снижение вязкости увеличивается с увеличением концентрации средства. Снижение вязкости, например, является более чем в два раза выше (вязкость меньше половинной) с 0,35 M средством в сравнении с 0,20 M средством.

Таблица 18

Вязкость водных растворов REMICADE® (215±5 мг/мл) в присутствии различных концентраций CSAA, измеренная при 25°C и pH 7,0
[CSAA], (M)	Вязкость (сП)
0	1557±22
0,20	81,3±1,0
0,25	53,7±9,3
0,35	38,2±0,9

Биофизические свойства растворов REMICADE^®, составленных с 0,25 M CSAA, оценивали в течение 90 дней. Образцы REMICADE^®, составленные с 0,25 M CSAA, получали, как описано в Примере 1 выше. Как видно в Таблице 19 и на Фигуре 6, содержание мономера в концентрированных растворах REMICADE^® в 0,25 M CSAA, определенное посредством гель-фильтрационной хроматографии (колонка Tosoh TSKgel UltraSW Aggregate; буфер 0,1 M фосфат калия/0,1 M сульфат натрия pH 6,8 при 0,8 мл/мин; 20 мкл инъекция ~4,5 мг/мл растворов), является аналогичным с продуктом лекарственного средства для всех временных отметок, и никакую обнаруживаемую агрегацию не наблюдали после хранения в течение 100 дней при 4°C. Было показано, что вязкость, измеренная с помощью микрожидкостного вискозиметра, остается стабильной после хранения в течение 30 дней при 4°C (Таблица 20). Дополнительно, связывание антигена этим обработанным белком REMICADE^® измеряли с использованием REMICADE^®-специфичного аналтитческого теста ELISA, и никакого снижения связывания не наблюдали между днями 0 и 100 (Таблица 20). Аналогично, содержание мономера (Таблица 21) и связывание антигена (нормализованное к связыванию для лекарственного продукта, Таблица 22) в концентрированных растворах REMICADE^® в 0,25 M CSAA являются сравнимыми с показателями лекарственного продукта через 1 неделю хранения при комнатной температуре. Окончательно, Таблица 23 демонстрирует, что хранение лиофилизированной таблетки, содержащей CSAA, при 4°C в течение 75 дней не оказывает никаких отрицательных эффектов на вязкость раствора или степень агрегации белка, когда образец является восстановленным. Результаты в Таблицах 19-23 и Фигуры 6 демонстрируют биофизическую стабильность REMICADE^®, составленного с CSAA, до и после хранения в течение по меньшей мере 100 дней при 4°C.

Таблица 19

Никакой увеличенной агрегации (в сравнении с лекарственным продуктом) не наблюдают в водном растворе REMICADE® (227 мг/мл, pH 7) после составления с 0,25 M CSAA и хранения при 4°C
День	% мономера
Лек. продукт	99,9±0,03
0	99,7±0,07
30	99,7±0,04
100	99,9±0,1

Таблица 20

Пониженная вязкость и связывание антигена сохраняются с течением времени в водном растворе REMICADE® (227 мг/мл, pH 7) после составления с 0,25 M CSAA и хранения при 4°C
День	Вязкость (сП)	% связывания (ELISA)
0	65,2±0,7	105±14
30	62,2±1,4	98±12
100	н.о.	101±5

Таблица 21

Никакой увеличенной агрегации (в сравнении с лекарственным продуктом) не наблюдают в водном растворе REMICADE® (219 мг/мл, pH 7) после составления с 0,25 M CSAA и хранения при комнатной температуре
День	% мономера
Лек. Продукт	0,25 M CSAA
0	99,7±0,1	99,9±0,1
4	99,9±0,1	97,9±0
7	100±0	100±0

Таблица 22

Связывание антигена является устойчивым в водном растворе REMICADE® (219 мг/мл, pH 7) после составления с 0,25 M CSAA и хранения при комнатной температуре
День	% связывания (нормализован по лек. продукту)
Лек. продукт	0,25 M CSAA
0	100±12	88,6±5,2
7	100±28	114±2,4

Таблица 23

REMICADE®, хранимый в виде лиофилизированного порошка сохраняет низкую вязкость и содержание мономера при восстановлении после хранения при 4°C в течение 75 дней
Время хранения (дни)	Вязкость, сП	% мономера (SEC)
0	65,2±0,7	99,7±0,1
75	59,3±1,0	98,9±0,1

Пример 10. Эффект средств для снижения вязкости на водные растворы HERCEPTIN^®

Материалы и методы

Приобретенный HERCEPTIN^®, содержащий фармацевтические эксципиенты (гистидиновый буфер, трегалозу, Полисорбат 20) получали по инструкциям в листовке-вкладыше по медицинскому применению препарата. Последовательно, водный лекарственный продукт очищали, проводили замену буфера, концентрировали, сушили, восстанавливали и анализировали, как описано в Примере 1 выше (используя коэффициент экстинкции, равный 1,5 Л/г*cm при 280 нм). Вязкости измеряли, используя микрожидкостный вискозиметр RheoSense mVROC, оборудованный чипом “A” или “B”.

Результаты

Данные, представленные в Таблице 24, показывают, что вязкость водного раствора HERCEPTIN^®, содержащего средства для снижения вязкости - в сравнении с раствором, содержащим PB - является самой низкой в присутствии CSAA. При более высоких концентрацях белков (т.е. >250 мг/мл) Аргинин HCl по отдельности значительно снижает вязкость и CSA дополнительно усиливает эффект.

Таблица 24

Вязкости водных растворов HERCEPTIN®, содержащих 0,25 M солей при 25°C и pH 7,0
[HERCEPTIN®] (мг/мл)	Вязкость (сП)
PB	ArgHCl	CSAA	BSAA
270±6	400±4	179±17	96,7±4,7	115±6
254±3	172±5	116±24	78,0±8,7	75,4±5,0
216±0	н.о.	44,8±1,1	55,7±2,3	н.о.
PB = фосфатный буфер; ArgHCl = аргинин HCl; н.о. = не определено

Пример 11. Эффект средств для снижения вязкости на водные растворы TYSABRI^®

Материалы и методы

Приобретенный TYSABRI^®, содержащий фармацевтические эксципиенты (натрийфосфатный буфер, хлорид натрия, Полисорбат 80) очищали, проводили в нем замену буфера, концентрировали, сушили, восстанавливали и анализировали, как описано в Примере 1 выше (используя коэффициент экстинкции, равный 1,5 л/г*cm при 280 нм). Вязкости измеряли, используя микрожидкостный вискозиметр RheoSense mVROC, оборудованный чипом “A” или “B”.

Результаты

Данные, представленные в Таблице 25, показывают, что снижение вязкости водного раствора TYSABRI^®, содержащего средства для снижения вязкости является примерно 2,5-кратным (в сравнении с раствором, содержащим PB) при около 276 мг/мл белка.

Таблица 25

Вязкости водных растворов TYSABRI®,содержащих 0,25 M средства для снижения вязкости при 25°C и pH 7,0
[TYSABRI®] (мг/мл)	Вязкость (сП)
PB	ArgHCl	CSAA	BSAA
276±8	255±5	97,2±5,7	92,9±2,6	н.о.
237±4	182±6	52,3±4,5	47,1±2,1	н.о.
230±2	н.о.	37,0±0,1	н.о.	34,9±1,3
PB = фосфатный буфер; ArgHCl = аргинин HCl; н.о. = не определено

Пример 12. Эффект средств для снижения вязкости на водные растворы биоаналога RITUXAN^®

Материалы и методы

Приобретенный биоаналог RITUXAN^®, содержащий фармацевтические эксципиенты (цитратный буфер, хлорид натрия, и TWEEN^® 80) очищали, проводили замену буфера, концентрировали, сушили, восстанавливали и анализировали, как описано в Примере 1 выше (используя коэффициент экстинкции, равный 1,7 л/г*cm при 280 нм). Вязкости измеряли, используя микрожидкостный вискозиметр RheoSense mVROC, оборудованный чипом “A” или “B”.

Результаты

Данные, представленные в Таблице 26, показывают, что снижение вязкости для водного раствора биоаналога RITUXAN^®, содержащего средства для снижения вязкости превышает 13 раз при примерно 213 мг/мл белка и превышает 5 раз при примерно 202 мг/мл, в сравнении с моноклональным антителом, составленным в PB.

Таблица 26

Вязкости водных растворов биоаналога RITUXAN® со средствами для снижения вязкости при 25°C и pH 7,0
[RITUXAN®] (мг/мл)	PB	Arg HCl	Arg HCl	SSA diArg	SSA diAPMI	CSA Na	CSAA	CSA APMI	CSA DMP
0,25 M	0,25 M	0,45 M	0,25 M	0,25 M	0,25 M	0,25 M	0,25 M	0,25 M
213±4	636±32	99,9±5,0	86,8±1,8*	68,3±0,8*	46,6±1,9	211±2	103±0	78,6±2,0	161±4
202±2	251±1	н.о.	46,9±0,8	44,1±0,1	н.о.	76,1±1,3	78,4±0,3	38,7±0,7	н.о.
*[RITUXAN®] составляет 220 мг/мл DMP = диметилпиперазин

Пример 13. Эффект средств для снижения вязкости на водные растворы VECTIBIX^®

Материалы и методы

Приобретенный VECTIBIX^®, содержащмй фармацевтические эксципиенты, очищали, проводили замену буфера, концентрировали, сушили, восстанавливали и анализировали, как описано в Примере 1 выше (используя коэффициент экстинкции, равный 1,25 л/г*cm при 280 нм). Вязкости измеряли, используя микрожидкостный вискозиметр RheoSense mVROC, оборудованный чипом “A” или “B”.

Результаты

Данные, представленные в Таблице 27, показывают, что снижение вязкости водного раствора VECTIBIX^®, содержащего средства для снижения вязкости является примерно 2-х кратным при 291 мг/мл и 3-х кратным при 252 мг/мл, в сравнении с растворами с PB, но без средства для снижения вязкости.

Таблица 27

Вязкости водных растворов VECTIBIX® с 0,25 M средствами для снижения вязкости при 25°C и pH 7,0
[VECTIBIX®] (мг/мл)	Вязкость (сП)
PB	ArgHCl	CSAA
291±3	328±12	н.о.	162±1
264	н.о.	н.о.	44,3±2,3
252±3	80,3±3,3	36,2±1,0	27,4±1,2
233±4	38,7±1,8	24,7±1,3	26,2±6,5

Пример 14. Эффект средств для снижения вязкости на водные растворы ARZERRA^®

Материалы и методы

Приобретенный ARZERRA^®, содержащий фармацевтические эксципиенты, очищали, проводили замену буфера, концентрировали, сушили, восстанавливали и анализировали, как описано в Примере 1 выше (используя коэффициент экстинкции, равный 1,5 л/г*cm при 280 нм). Вязкости измеряли, используя микрожидкостный вискозиметр RheoSense mVROC, оборудованный чипом “A” или “B”.

Результаты

Данные, представленные в Таблице 28, показывают, что снижение вязкости водного раствора ARZERRA^®, содержащего средства для снижения вязкости, является примерно 3-х кратным при 274 мг/мл и 2-х кратным при 245 мг/мл, в сравнении с растворами с PB, но без средства для снижения вязкости.

Таблица 28

Вязкости водных растворов ARZERRA® с 0,25 M средствами для снижения вязкости при 25°C и pH 7,0
[ARZERRA®] (мг/мл)	Вязкость (сП)
PB	CSAA	CSAAPMI
274±10	349±2	125±7	98,9±0,7
245±4	120±4	н.о.	53,6±0,6

Пример 15. Сравнение различных методов измерения вязкости

Материалы и методы

Водные растворы, содержащие 220 мг/мл REMICADE^® и 0,25 M CSAA, получали как описано выше в Примере 1. Вязкости при 25°C и pH 7,0 приведены в Таблице 29 как экстраполированные для нулевой скорости сдвига вязкости по измерениям вискозиметром с конусом и плоскостью, и как абсолютные вязкости, измеренные микрожидкостным вискозиметром. Для измерений с конусом и плоскостью применяли вискозиметр DV2T с конусом и плоскостью (Брукфилда), оборудованный шпинделем сПE40 или сПE52, для измерений при множестве скоростей сдвига между 2 и 400 с^-1. Экстраполированную вязкость при нулевом сдвиге определяли по графику зависимости абсолютной вязкости от скорости сдвига. Измерения на микрожидкостном вискозиметре проводили, используя микрожидкостный вискозиметр RheoSense mVROC, оборудованный чипом “A” или “B” при многих скоростях потока (примерно 20%, 40%, и 60% от максимального давления для каждого чипа).

Результаты

Данные в Таблице 29 демонстрирует, что абсолютная вязкость по показаниям микрожидкостного вискозиметра может быть непосредственно определена в сравнении с экстраполированной для нулевой скорости сдвига вязкости, определенной по показаниям вискозиметра с конусом и плоскостью.

Таблица 29

Вязкости водных растворов REMICADE® (220 мг/мл) с 0,25 M CSAA при 25°C и pH 7,0, измереннык на двух различных вискозиметрах
Прибор	Вязкость (сП)
Вискозиметр с конусом и плоскостью (C&P)	62,3±0,1
Микрожидкостный вискозиметр на чипе (mVROC)	53,7±9,3

Чтобы сравнить более широкий интервал вязкостей и концентраций белков, водные растворы модельного антитела, бычьего гамма-глобулина, получали с 0,25 M CSAL и без него. Вязкости измеряли, как описано выше, при концентрациях белка в интервале от 110 мг/мл до 310 мг/мл. Данные, представленные в Таблице 30, демонстрирует, что абсолютная вязкость по показаниям микрожидкостного вискозиметра может быть определена непосредственно, в сравнении с экстраполированной для нулевой скорости сдвига вязкости для белковых растворов как с низкой, так и высокой вязкостью.

Таблица 30

Вязкости водных растворов гамма-глобулина с 0,25 M CSAL и без 0,25 M CSAL при 25°C и pH 7,0, измеренные на двух различных вискозиметрах
[гамма-глобулин] (мг/мл)	Вязкость (сП)
	без CSAL	без CSAL
C&P	микрожидкостный	C&P	микрожидкостный
110	3,81±0,19	2,66±0,01	н.о.	н.о.
170	12,0±0,6	11,0±0,1	10,3±1,0	10,6±0,1
260	167±1	161±1	93,5±1,2	85,3±0,3
310	399±1	377±2	223±1	203±2

Пример 16. Средства для снижения вязкости не проявляют признаков токсичности при подкожных инъекциях

Материалы и методы

Тридцать крыс линии Спраг-Доули в возрасте 11 недель разделяли на 6 групп по 5 крыс каждая (3 контрольные группы с физраствором и 3 группы CSAA). Крысам проводили подкожные инъекции 0,5 мл либо не содержащего эндотоксина забуференного фосфатом физраствора или не содержащего эндотоксина 0,25 M CSAA в соответствии со следующей схемой: Одной группе от каждого состояния проводили однократую инъекцию в день 1 и затем животных умерщвляли через 1 час; одной группе от каждого состояния проводили однократую инъекцию в день 1 и однократно в день 2 и затем животных умерщвляли через 24 часа после второй инъекции; и одной группе от каждого состояния проводили однократую инъекцию в день 1, однократно в день 2, и однократно в день 3, и затем животных умерщвляли через 24 часа после третьей инъекции.

Клинические наблюдения регистрировали для любых фармако-токсикологических признаков перед дозированием, сразу после дозирования, через 1 и 4 часа (±15 минут) после дозирования, и затем ежедневно. Раздражение, если наблюдали, на участках инъекции оценивали в баллах, используя балльную оценку по Драйзе, перед дозированием, сразу после дозирования, через 1 час (± 15 минут) после дозирования и перед умерщвлением.

Результаты

Общие, наблюдаемые последствия инъекции физраствора и CSAA были макроскопически сходными на всем протяжении хода исследования. Обе не индуцировали раздражения или индуцировали легкое раздражение при балльных оценках отеков 0-2 для различных временных отметок. Микроскопическое обследование участков инъекции предполагает очень слабое, клинически незначительное, раздражающее воздействие в случае CSAA, которое более не проявлялось в день 4.

Пример 17. Концентрированные водные растворы REMICADE^®, составленные вместе со средствами для снижения вязкости проявляли низкие усилия выдавливания через шприц и высокое содержание мономера при вытеснении из игл различного калибра.

Материалы и методы

Приобретенную REMICADE^®, содержащую фармацевтические эксципиенты (сахароза, Полисорбат 80, натрийфосфатный буфер) получали по инструкциям в листовке-вкладыше. Последовательно, водный лекарственный продукт очищали, проводили замену буфера, концентрировали, сушили, восстанавливали и анализировали, как описано в Примере 1 выше (с использованием коэффициента экстинкции, равного 1,4 л/г*см при 280 нм). 20 мМ растворы либо фосфатного буфера, CSAAPMI или CSAA применяли для замены буфера, и лиофилизированные таблетки восстановливали до 0,25 M каждого средства для снижения вязкости. После восстановления вязкость каждого раствора измеряли, используя микрожидкостный вискозиметр, как описано в предыдущих примерах. Растворы затем набирали обратно в 1 мл BD инсулиновые шприцы с фиксируемыми иглами 27, 29 или 31 калибра. Усилие, требуемое для выдавливания концентрированных растворов REMICADE^®, затем измеряли, используя Instron при скорости вытеснения, эквивалентной скорости потока жидкости, равной 3 мл/мин. Выдавленный раствор собирали из шприца и анализировали посредством гель-проникающей хроматографии.

Результаты

Все растворы REMICADE^®, содержащие средства для снижения вязкости, обладали способностью к вытеснению через шприцы при относительно низких усилиях выдавливания (Таблица 31). Раствор, содержащий фосфатный буфер, не мог быть вытеснен вследствие высокой вязкости. Оба раствора, содержащие средства для снижения вязкости, сохраняли высокое содержание мономера после выдавливания независимо от калибра иглы, как указано в Таблице 31.

Таблица 31

Возможность введения через шприц концентрированных водных растворов REMICADE®, выдавливаемых через иглы различного калибра
Средство	[REMICADE®] (мг/мл) (вязкость в сП)	Калибр иглы	% Мономера	Усилие для шприца (Н)
0,25 M Фосфатный Буфер	220 (1500)	наполн.шприц	98,8±0,0	но
		27	невозможно выдавить	но
		29
31
0,25 M CSAAPMI	230 (90,8±8,4)	наполн. шприц	99,2±0,32	но
		27	99,1±0,0	21,9
		29	99,0±0,0	30,4
31	99,0±0,0	38,4
0,25 M CSAA	224 (60,9±1,1)	наполн. шприц	99,7±0,3	но
		27	99,5±0,1	18,4
		29	99,4±0,2	24,9
31	99,5±0,2	33,0

Пример 18: Средства для снижения вязкости снижают вязкость концентрированных водных растворов биоаналога AVASTIN^®

Материалы и методы

Приобретенный биоаналог AVASTIN^®, содержащий фармацевтические эксципиенты (Полисорбат 20, фосфатный и цитратный буферы, маннит, и NaCl) очищали. Сначала Полисорбат 20 удаляли, используя колонки среднего размера с DETERGENT-OUT^® TWEEN (G-Biosciences). Далее, в полученных растворах проводили тщательную замену буфера с получением 20 мМ натрийфосфатного буфера (PB) для PB образцов и 2 мМ PB для образцов со средством для снижения вязкости, и концентрировали до конечного объема меньше 10 мл на центрифужных концентраторах Jumbosep (Pall Corp.). Средство для снижения вязкости затем добавляли к образцам с 2 мМ PB, как описано в Примере 4 выше. Средство(средства) для снижения вязкости добавляли в количестве, достаточном для получения концентрации при восстановлении, как приведено ниже. В случаях комбинаций средств, концентрация каждого компонента составляет 0,15 M. Белковые растворы затем лифилизировали. Высушенные белковые лиофилизаты восстанавливали в фосфатном буфере (для образцов с PB) или воде (для образцов, содержащих средства для снижения вязкости) до конечного объема, равного примерно 0,10 мл. Конечную концентрацию моноклонального антитела в растворе определяли либо посредством аналитического количественного определения белка с Кумасси, сравнивая неизвестные концентрации образцов со стандартной кривой для биоаналога AVASTIN^®, или по A280, используя коэффициент экстинкции, равный 1,7 L/г*см, когда возможно. Приведенные значения вязкости, измеряли на микрожидкостном вискозиметре RheoSense mVROC. Результаты приведены в Таблице 32.

Результаты

Многие GRAS, IIG, и API соединения способны к снижению вязкости концентрированных растворов биоаналога AVASTIN^® относительно забуференных фосфатом образцов. Из этих соединений, включенных в Таблицу 32, местные анестетики, такие как прокаин и лидокаин, а также средства GRAS, такие как биотин, находятся в ряду наиболее эффективных снижающих вязкость эксципиентов.

Таблица 32

Эффект средств для снижения вязкости на растворы биоаналога AVASTIN®
Средство	[Биоаналог AVASTIN®], мг/мл	Вязкость, сП
0,25 M Фосфатный Буфер	235	397	±	2
	220	213	±	10
200	96,8	±	0,9
CSA-1-о-толилбигуанид	228	121	±	1
HEPES-ТРИС	214	90,5	±	1,8
CSA-Na-Креатинин	202	38,4	±	0,9
CSA-Na-аминоциклогексанкарбоновая кислота	182	51,4	±	0,1
225	69,2	±	3,7
Этандисульфонат-диТРИС-2Na	219		>150
CSA-пиперазин†	212 ± 0	64,5	±	13,1
Сульфацетамид-Na	214	113	±	1
Триметафосфат-3Na	211	121	±	6
CSA-ТРИС	206	64,4	±	1,4
197	50	±	1
Креатинин (0,6 M)	243	50,8	±	0,5
Креатинин (0,3 M)	192	24,5	±	0,7
Креатинин	232	72,7	±	0,8
	218	53,4	±	1,0
194	36,1	±	0,2
Лактобионовая кислота-ТРИС	219	109	±	5
CSA-4-аминопиридин	229	86,4	±	1,1
Сукралоза	230	147	±	4
Кватерний 15	232	172	±	4
Глюкуроновая кислота-ТРИС	221	151	±	5,0
Биотин-Na	189	45,1	±	0,9
213	60,7	±	0,6
Прокаин HCl	188	40,8	±	0,9
222	65,8	±	0,8
Лидокаин HCl	237	97,3	±	1,8
N-(4-Пиридил)пиридиния Cl HCl	221	68,5	±	1,1
Креатинин Тиамин HCl	228	59,6	±	0,5
Пиридоксин	227	107	±	0
Рибофлавин-5-фосфат	225	131	±	4
CSA Триэтаноламин	238	144	±	1
Лидокаин HCl	218	147	±	15
Хлорохина Фосфат (0,10 M)	200	27,9	±	0,6
	219	58,6	±	1,6
228	71,8	±	0,9
Скополамин HBr	210	35,3	±	1,1
	223	64,0	±	0,8
238	87,8	±	1,5
Леветирацетам	195	31,8	±	0,3
	192	37,1	±	1,3
215	85,5	±	3,7
Циметидин HCl	203	53,8	±	2,4
Метоклопрамид HCl	230	64,4	±	1,6
Суматриптана Сукцинат (0,25 M)	212	93,2	±	2,7
Фенилэфрин HCl	201	108	±	1
Цидофовира гидрат (0,02 M)	210	121	±	2
Мепивакаин HCl	223	129	±	3
Клиндамицина Фосфат	200	164	±	17
Пиперaциллина натриевая соль	206	197	±	5
Колистина сульфатная соль	240	261	±	58
Цефтриаксона натриевая соль	198	301	±	5
Цефазолин	229	60,6	±	1
Гранисетрон HCl	168	37,9	±	0,6
237	308	±	34
†Среднее значение для двух биологических повторов CSA = камфорсульфоновая кислота

Пример 19. Снижение вязкости является эффектом, зависимым от концентрации средства

Материалы и методы

Водные растворы приобретенного биоаналога AVASTIN^® получали, как описано в Примере 4. Высушенные белковые лиофилизаты восстанавливали в фосфатном буфере или воде до конечного объема, равного приблизительно 0,10 мл, и конечной концентрации 1-(3-аминопропил)-2-метил-1H-имидазола дигидрохлорида (APMI*2HCl), равной либо 0,10 или 0,25 M. Конечную концентрацию моноклонального антитела в растворе определяли посредством аналитического количественного определения белка с Кумасси, сравнивая неизвестные концентрации образцов со стандартной кривой для биоаналога AVASTIN^®. Приведенные значения вязкости, измеряли на микрожидкостном вискозиметре RheoSense mVROC.

Результаты

Как изображено на Фигуре 7, эффект снижения вязкости возрастал по мере увеличения концентрации APMI*2HCl.

Пример 20. Одно средство для снижения вязкости понижает вязкость многих терапевтически значимых моноклональных антител

Материалы и методы

Водные растворы приобретенного биоаналога AVASTIN^® получали, как описано в Примере 4. Высушенные белковые лиофилизаты восстанавливали в фосфатном буфере или воде до конечного объема, равного приблизительно 0,10 мл и конечной концентрации тиамина HCl, равной 0,10 или 0,25 M. Конечную концентрацию моноклонального антитела в растворе определяли посредством аналитического количественного определения белка с Кумасси, сравнивая неизвестные концентрации образцов со стандартной кривой для биоаналога AVASTIN^®.

Приобретенный TYSABRI^®, содержащий фармацевтические эксципиенты (натрийфосфатный буфер, NaCl, Полисорбат 80) очищали, производили замену буфера, концентрировали, сушили, восстанавливали и анализировали таким же образом. Приобретенный HERCEPTIN^®, содержащий фармацевтические эксципиенты (натрийфосфатный буфер, NaCl, Полисорбат 80), очищали, производили замену буфера, концентрировали, сушили, восстанавливали и анализировали таким же образом. Приобретенный биоаналог ERBITUX^®, содержащий фармацевтические эксципиенты (Полисорбат 80, фосфатный буфер, и NaCl), очищали, производили замену буфера, концентрировали, сушили, восстанавливали и анализировали таким же образом. Приобретенный REMICADE^®, содержащий фармацевтические эксципиенты (сахароза, Полисорбат 80, натрийфосфатный буфер), получали по инструкциям в листовке-вкладыше. Впоследствии, водный лекарственный продукт очищали, производили замену буфера, концентрировали, сушили, восстанавливали и анализировали, как описано, таким же образом. Приведенные значения вязкости, измеряли на микрожидкостном вискозиметре RheoSense mVROC.

Результаты

Данные в Таблице 33 демонстрируют, что тиамин HCl может понижать вязкость концентрированных водных растворов многих терапевтически существенных моноклональных антител. Тиамин HCl может производить более чем 4-х-кратное снижение вязкости для каждого моноклонального антитела.

Таблица 33

Влияние Тиамина HCl на вязкость раствора
Моноклональное антитело	Средство	[Эксципиент], M	[Белок], мг/мл	Вязкость, сП
Биоаналог AVASTIN®	PB	0,25	220	213±10
	195	96,8±0,9
	Тиамин HCl	0,25	225	53,3±6,8
0,1	190	31,5±1,7
TYSABRI®	PB	0,25	237	182±6
Тиамин HCl	0,1	244	43,4±0,7
HERCEPTIN®	PB	0,25	253	172±4
Тиамин HCl	0,1	218	41,6±0,5
Биоаналог ERBITUX®	PB	0,25	235	1370±3
Тиамин HCl	0,15	245	29,5±0,9
REMICADE®	PB	0,25	176	432±30
Тиамин HCl	0,15	178	40,7±0,3

Примеры 21-24. Средства для снижения вязкости снижают вязкость водных растворов многих терапевтически существенных моноклональных антител

Материалы и методы

Водные растворы приобретенных биоаналогов RITUXAN^®, TYSABRI^®, HERCEPTIN^®, биоаналога ERBITUX^® и REMICADE^® получали, как описано в Примерах 18 и 19. Таблицы 34-38 демонстрируют, что средства для снижения вязкости могут преимущественно использоваться для многих различных моноклональных антител.

Результаты

Таблица 34

Вязкости водных растворов биоаналога RITUXAN® в присутствии 0,15 M средств для снижения вязкости
Средство	[биоаналог RITUXAN®], мг/мл	Вязкость, сП
0,25 M Фосфатный Буфер	240	1270	±	153
	215	636	±	32
199	251	±	1
CSA-1-о-толубигуанид	190	40,4	±	1,9
HEPES-ТРИС	191	50,0	±	3,8
CSA-Na-Креатинин (0,3 M)	190	33,3	±	1,1
CSA-Na-аминоциклогексанкарбоновая кислота	191	61,3	±	2,5
Этандисульфонат-диТРИС-2Na	191	80,3	±	16,0
CSA-пиперазин	191	57,5	±	0,4
Сульфацетамид-Na	181	64,1	±	1,6
Триметафосфат-3Na	199	126	±	3,3
CSA-ТРИС	191	59,1	±	0,7
Креатинин (0,6 M)	197	28,4	±	0,2
Креатинин	203	71,8	±	0,8
Лактобионовая кислота-ТРИС	211	130	±	1
CSA-4-аминопиридин	233	66,5	±	0,8
195	47,0	±	1,4
Сукралоза	234	111	±	8
Кватерний 15	221	135	±	5
Глюкуроновая кислота-ТРИС	207	149	±	13
CSA-Na-Орнидазол	242	63,0	±	3,5
188	40,7	±	0,5
Биотин-Na†	191 ± 3	96,8	±	12,2
Прокаин HCl	222	46,2	±	1,1
195	33,4	±	1,2
Метоклопрамид HCl	194	39,3	±	0,4
Скополамин HBr	197	42,3	±	1,0
Мепивакаин HCl	185	46,8	±	0,6
Циметидин HCl	215	49,5	±	1,2
Гранисетрон HCl	204	51,2	±	0,8
Фенилэфрин HCl	193	57,1	±	2,8
Хлорохин Фосфат (0,10 M)	210	67,1	±	1,1
Пенициллина G натриевая соль	207	114	±	7
пиперaциллина натриевая соль	194	127	±	2
Леветирацетам	205	130	±	2
Моксифлоксацин HCl	193	152	±	8
Цефтриаксона натриевая соль	222	198	±	17
Клиндамицина Фосфат	203	199	±	8
Колистина сульфатная соль	230	228	±	19
Цефазолин	206	65,1	±	1,8
†Среднее значение двух биологических повторов

Таблица 35

Вязкости водных растворов TYSABRI® в присутствии 0,15 M средств для снижения вязкости (если не указано иначе)
Средство	[TYSABRI®], мг/мл	Вязкость, сП
PB	310	715	±	106
	278	255	±	5
237	182	±	6
Креатинин (0,30 M)	219	40,8	±	1,8
Прокаин HCl	228	45,1	±	1,5
Биотин Na	233	75,8	±	0,4
Тиамин HCl (0,10 M)	244	43,4	±	0,7

Таблица 36

Вязкости водных растворов HERCEPTIN® в присутствии 0,15 M средств для снижения вязкости (Если не указано иначе)
Средство	[HERCEPTIN®], мг/мл	Вязкость, сП
PB	272	400	±	4
	253	172	±	5
	239	122	±	17
218	71,6	±	3,9
Креатинин (0,3 M)	222	45,7	±	0,3
Прокаин HCl	222	41,8	±	0,6
CSA пиперазин	236	50,3	±	0,6
CSA-Na Орнидазол	232	60,1	±	0,6
Биотин-Na	230	69,9	±	2,3
Тиамин HCl (0,10 M)	245	41,5	±	0,5

Таблица 37

Вязкости водных растворов ERBITUX® в присутствии 0,15 M средств для снижения вязкости (Если не указано иначе)
Средство	[ERBITUX®], мг/мл	Вязкость, сП
PB	235	1370	±	3
228	1130	±	7
Креатинин (0,30 M)	240	131	±	4
Прокаин HCl	230	35,9	±	0,3
Лидокаин HCl	223	33,8	±	0,4
Никотинамид	232	292	±	10
Рибофлавин-5-Фосфат (0,10 M)	237	492	±	9
Циметидин HCl	183	19,7	±	0,2
Метоклопрамид HCl	172	23,0	±	0,2
Гранисетрон HCl	180	23,0	±	0,2
Скополамин HBr	173	23,4	±	0,6
Мепивакаин HCl	182	27,8	±	0,2
Клиндамицина Фосфат	209	36,5	±	0,0
Хлорохина Фосфат (0,10 M)	179	37,4	±	0,9
199	54,8	±	0,2
Фенилэфрин HCl	183	54,1	±	2,9
Моксифлоксацин HCl	186	66,7	±	1,0
Пиперaциллина натриевая соль	182	75,3	±	1,6
Пенициллина G натриевая соль	178	82,1	±	3,6
Леветирацетам	176	103	±	3
199	178	±	2
Фосфенитоина динатриевая соль	188	119	±	2
Цефтриаксона натриевая соль	190	120	±	2
Колистина сульфатная соль	203	138	±	4
Цефокситина натриевая соль	194	166	±	8
Азтреонам (0,02 M)	179	256	±	4
Цидофовира гидрат (0,02 M)	189	284	±	5

Таблица 38

Вязкости водных растворов REMICADE® в присутствии 0,15 M средств для снижения вязкости (Если не указано иначе)
Средство	[REMICADE®], мг/мл	Вязкость, сП
PB	176	432	±	30
Креатинин	144	37,1	±	0,5
Прокаин HCl	174	23,4	±	0,2
Тиамин HCl	178	40,7	±	0,3

Пример 25. Эффект снижения вязкости отTPP и TPPAPMI, как функция концентрации биоаналога AVASTIN^®

Водные растворы приобретенного биоаналога AVASTIN^® получали, как описано в Примере 1 выше. Белок составляли для содержания либо 0,25 M фосфатного буфер, 0,10 M тиамина пирофосфата (TPP), или 0,10 M TPP-1-(3-аминопропил)-2-метил-1H-имидазола (TPPAPMI).

Фигура 8 изображает вязкость водных растворов биоаналога AVASTIN^®, как функцию концентрации моноклонального антитела вместе с либо фосфатным буфером, TPP или TPPAPMI. Вязкость биоаналога AVASTIN^® в фосфатном буфере увеличивается экспоненциально в интервале тестируемой концентрации белка. В присутствии TPP-содержащих эксципиентов, увеличение вязкости ослабляется, т.е. градиент вязкости снижается.

Пример 26: Эффект понижения вязкости средства для снижения вязкости, тиамина HCl, как функция концентрации биоаналога SIMPONI ARIA^®

Материалы и методы

SIMPONI ARIA^®, полученный путем приобретения и содержащий фармацевтические эксципиенты (Гистидин, Сорбит, Полисорбат 80), очищали, проводили замену буфера, концентрировали, сушили, восстанавливали и анализировали, как описано в Примере 1 выше (с использованием коэффициента экстинкции, равного 1,4 л/г⋅см при 280 нм). Белок составляли в состав с содержанием либо 0,15 M фосфатного буфера или 0,15 M Тиамина HCl.

Результаты

Фигура 9 отображает вязкость водных растворов SIMPONI ARIA^® как функцию концентрации моноклонального антитела либо с фосфатным буфером или тиамином HCl. Вязкость SIMPONI ARIA^® в фосфатном буфере увеличивается экспоненциально в интервале тестируемых концентраций белка. В присутствии тиамина HCl, увеличение вязкости ослабляется, т.е. градиент вязкости снижается.

Пример 27. Эффект снижения вязкости Тиамина HCl, как функция концентрации ENBREL^®

Материалы и методы

ENBREL^®, полученный путем приобретения, и содержащий фармацевтические эксципиенты (Маннит, Сахарозу, Трометамин) очищали, проводили замену буфера, концентрировали, сушили, восстанавливали и анализировали, как описано в Примере 1 выше (используя коэффициент экстинкции, равный 0,96 л/г⋅см при 280 нм). Белок составляли в состав с содержанием либо 0,15 M фосфатного буфера или 0,15 M Тиамина HCl.

Результаты

Таблица 39 отображает вязкость водных растворов ENBREL^® либо с фосфатным буфером или тиамином HCl. Добавление тиамина HCl снижает вязкость ENBREL^® приблизительно в 2 раза.

Таблица 39

Вязкости водных растворов ENBREL® в присутствии 0,15 M PB или Тиамина HCl
[ENBREL], мг/мл	0,15 M PB	0,15 M Тиамин HCl
271 ± 0	1120±26	626±32
250 ± 3	439±11	305±7
212 ± 7	316±11	141±3

Пример 28. Изотонические растворы снижающих вязкость эксципиентов снижают вязкость концентрированных растворов REMICADE^®

Материалы и методы

Полученный путем приобретения REMICADE^®, содержащий фармацевтические эксципиенты (сахароза, Полисорбат 80, буфер фосфата натрия) получали по указаниям в инструкции-вкладыше по медицинскому применению препарата. Впоследствии, водный лекарственный продукт очищали, проводили замену буфера, концентрировали, сушили, восстанавливали и анализировали, как описано в Примере 1, за исключением того, что добавляли изотонические количества заряженных гидрофобных соединений.

Результаты

Как показано в Таблице 40, изотонические количества как CSAA, так и CSAAPMI, способны значительно снижать вязкость концентрированных растворов REMICADE^®, в некоторых случаях приблизительно 10-кратно.

Таблица 40

Вязкости растворов REMICADE® в присутствии изотонических (0,3 моляльных) снижающих вязкость эксципиентов
Соль	[REMICADE®] (мг/мл)	Вязкость (сП)
PB	171	432±30
CSAAPMI	167	41,4±0,7
PB	131	175±15
CSAAPMI	124	16,4±1,2
CSAA	128	25,8±0,8

Если выше явным образом не определено иначе, все технические и научные термины, используемые в данном описании, имеют такие же значения, какие общепринято являются понятными специалисту в данной области. Специалисты в области смогут понять или будут в состоянии установить, используя всего лишь рутинное экспериментирование, много эквивалентов для конкретных вариантов осуществления изобретения, описанных в данном документе. Подразумевают, что такие эквиваленты охватываются следующей формулой изобретения.

1. Жидкий фармацевтический состав для инъекции, содержащий:

(i) от 174 мг/мл до 230 мг/мл моноклонального антитела, имеющего молекулярную массу от 120 кДа до 250 кДа;

(ii) прокаин или его фармацевтически приемлемую соль в концентрации от 0,15 M до 0,25 М; и

(iii) фармацевтически приемлемый растворитель;

где указанный жидкий фармацевтический состав, когда находится в объеме, подходящем для инъекции, имеет абсолютную вязкость от 1 сП до 100 сП при 25°C, как измеряют, используя вискозиметр с конусом и плоскостью или микрожидкостный вискозиметр; и абсолютная вязкость указанного жидкого фармацевтического состава является меньшей, чем абсолютная вязкость контрольной композиции, содержащей указанное антитело и указанный фармацевтически приемлемый растворитель, но не содержащей прокаин или его фармацевтически приемлемую соль; и

где абсолютная вязкость является экстраполированной вязкостью при нулевой скорости сдвига.

2. Жидкий фармацевтический состав по п. 1, где фармацевтически приемлемый растворитель является водным.

3. Жидкий фармацевтический состав по п. 1, дополнительно содержащий один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов, один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов содержат сахар, сахароспирт, буферный агент, консервант, носитель, антиоксидант, хелатирующий агент, природный полимер, синтетический полимер, криопротектор, лиопротектор, поверхностно-активное вещество, объемообразующий агент и стабилизатор, или любую их комбинацию.

4. Жидкий фармацевтический состав по п. 3, где один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов содержат полисорбат, полоксамер 188, лаурилсульфат натрия, полиол, поли(этиленгликоль), глицерин, пропиленгликоль и поли(виниловый спирт).

5. Жидкий фармацевтический состав по п. 3, где сахароспирт представляет собой маннит или сорбит.

6. Жидкий фармацевтический состав по п. 1, где жидкий фармацевтический состав находится во флаконе с однократной дозой, во флаконе с множеством доз, картридже или предварительно заполненном шприце.

7. Жидкий фармацевтический состав по п. 1, где жидкий фармацевтический состав восстановлен из лиофилизированной композиции.

8. Жидкий фармацевтический состав по п. 1, где жидкий фармацевтический состав является изотоническим сыворотке крови человека.

9. Жидкий фармацевтический состав по п. 1, где абсолютную вязкость измеряют при скорости сдвига, равной по меньшей мере 0,5 с^-1, когда измерение проводят, используя вискозиметр с конусом и плоскостью.

10. Жидкий фармацевтический состав по п. 1, где абсолютную вязкость измеряют при скорости сдвига, равной по меньшей мере 1,0 с^-1, когда измерение проводят, используя микрожидкостный вискозиметр.

11. Способ введения субъекту терапевтически эффективного количества моноклонального антитела, указанный способ включает подкожное или внутримышечное инъецирование жидкого фармацевтического состава по любому из пп. 1-10 указанному субъекту.

12. Способ по п. 11, где инъецирование выполняют с использованием шприца.

13. Способ по п. 12, где шприц представляет собой нагретый шприц, самосмешивающий шприц, автоматический инъектор, предварительно заполненный шприц и их комбинации.

14. Способ по п. 13, где шприц представляет собой нагретый шприц и жидкий фармацевтический состав имеет температуру между 25°C и 40°C.

15. Способ по п. 11, где способ производит индекс первичного раздражения менее 3, когда оценку проводят, используя

систему оценки в баллах по Дрейзу.

16. Способ по п. 11, где способ осуществляют с усилием при инъекции, которое является по меньшей мере на 10% меньшим, чем усилие при инъекции контрольной композиции, содержащей указанное антитело и указанный фармацевтически приемлемый растворитель, но не содержащей прокаин или его фармацевтически приемлемую соль, при введении таким же образом.

17. Способ по п. 11, где способ осуществляют с усилием при инъекции, которое является по меньшей мере на 20% меньшим, чем усилие при инъекции контрольной композиции, содержащей указанное антитело и указанный фармацевтически приемлемый растворитель, но не содержащей прокаин или его фармацевтически приемлемую соль, при введении таким же образом.

18. Способ по п. 11, где способ выполняют с помощью иглы диаметром между 27 и 31 калибром, при этом способ выполняют с усилием при инъекции, которое составляет менее 30 Н с использованием иглы 27 калибра.

19. Способ получения жидкого фармацевтического состава по п. 1, включающий стадию объединения антитела, фармацевтически приемлемого растворителя и прокаина или его фармацевтически приемлемой соли.

20. Лиофилизированная композиция, представляющая собой лиофилизированный фармацевтический состав по пп. 1-10.