Штамм streptomyces tendae - продуцент противобактериального антибиотика ина 5812

Изобретение может быть использовано в биотехнологии для производства противобактериального антибиотика ИНА 5812. Антибиотик ИНА 5812 по химическому строению является оригинальным линейно-циклическим гликопептидным соединением, активным в отношении грамположительных патогенов in vitro и высокоэффективным в опытах in vivo при экспериментальном лечении стафилококкового сепсиса у белых мышей. Предлагается новый штамм - продуцент антибиотика ИНА 55812 путем селекционного преобразования свойств почвенной культуры Streptomyces tendae. Штамм депонирован в коллекции культур БРЦ ВКПМ НИЦ «Курчатовский институт»-ГосНИИгенетика под номером ВКПМ Ас-1980. Штамм Streptomyces tendae ВКПМ Ас-1980 обладает повышенной антибиотической активностью и при глубинном культивировании накапливает 2500 мкг/мл противобактериального антибиотика ИНА 5812. 2 табл., 1 пр.

 

Область техники, к которой относится изобретение.

Изобретение относится к медицине и биотехнологической промышленности и касается нового штамма актиномицета, образующего противобактериальный антибиотик ИНА 5812.

Антибиотик ИНА S812 по химическому строению является новым природным линейно-циклическим гликопептидным соединением, обладающим высокими показателями антибактериальной активности в отношении грамположительных патогенов in vitro и химиотерапевтической эффективностью в лабораторных опытах in vivo при лечении стафилококкового сепсиса у белых мышей.

Предшествующий уровень техники

Известен штамм Streptomyces roseoflavous ИНА-Ас-5812 - продуцент антибиотика ИНА 5812 (1), принятый в качестве прототипа. Недостатком данного штамма является низкая антибиотическая активность - 10 мкг в 1 мл ферментационной жидкости.

Раскрытие изобретения

Сущность изобретения состоит в том, что получен новый штамм-продуцент антибиотика ИНА 5812 путем селекционного преобразования свойств почвенной культуры Streptomyces tendae (2) в результате последовательного многоступенчатого воздействия физических (УФ-, гамма-лучи 60Со) и химических (N-нитрозосоединения) мутагенов на споры исходной культуры и отбора высокоактивного мутантного штамма №3117 среди мутагенизированной популяции колоний актиномицета, выросших на селективном фоне устойчивости к гликопептидным антибиотикам ристомицину, эремомицину и блеомицину.

Полученный новый штамм Streptomyces tendae №3117 принят на национальное патентное депонирование в коллекции культур БРЦ ВКПМ НИЦ «Курчатовский институт»-ГосНИИгенетика под номером штамм ВКПМ Ас-1980.

Штамм Streptomyces tendae ВКПМ Ас-1980 обладает повышенной антибиотической активностью образования антибиотика ИНА 5812 (2500 мкг в 1 мл ферментационной жидкости) и характеризуется следующими таксономическими, культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими признаками.

Таксономические, культурально-морфологические и физиологические признаки штамма Streptomyces tendae ВКПМ Ас-1980

Таксономические признаки. Длительность выращивания для изучения таксономических признаков (7-21) суток при температуре 28°С. Для засева диагностических сред используется споровый посевной материал десятидневной культуры штамма, выращенной на глицерин-ниратном агаре Линденбайна или на среде №2 Гаузе. Цвет определен по таблицам Бондарцева и Праузера.

Данные приведены в таблице №1.

Морфологические признаки. Гифы воздушного мицелия извилистые, цепочки спор извитые с редкими спиралями, поверхность спор гладкая.

Физиолого-биохимические свойства. Аэроб. Растет при (24-37)°С, оптимум роста 28°С и в диапазонах значений рН (5,0-10,0) оптимум роста при рН 7,0. Желатину разжижает. Молоко пептонизирует. Сахарозу инвертирует. Крахмал гидролизует. На клетчатке не растет. Восстанавливает нитраты до нитритов. Меланоидные пигменты не образует при росте на среде Треснера с пептоном и лимонно-кислым железом.

Использование источников углерода. При росте на средах с неорганическим источником азота хорошо утилизирует глюкозу, фруктозу, мальтозу; умеренно - сахарозу, арабинозу, лактозу; слабо использует сорбат, манит, раффинозу; не использует целлюлозу.

Антагонистические свойства. Streptomyces tendae ВКПМ Ас-1980 при испытании методом штриха на глюкозо-нитратном агаре №2 Гаузе подавляет рост грамположительных бактерий и дрожжеподобных грибов и не действует на грамотрицательные бактерии. Штамм фагоустойчив. Фаг в культуре отсутствует.

Хранение штамма. Штамм Streptomyces tendae ВКПМ Ас-1980 хранится в виде спор на стерильной почве с кварцевым песком или на зернах пшена, а также в виде зрелой культуры на агаровых средах под вазелиновым маслом.

Определение антибиотической активности в ферментационной жидкости

Антибиотическая активность штамма Streptomyces tendae ВКПМ Ас-1980 при глубинном культивирвании определяется луночным методом диффузии в агар (среда №2 Гаузе) с использованием в качестве теста микроорганизма Bacillus subtilis АТСС6633 и сравнением диаметров зон подавления бактериального роста образцами ферментационной жидкости с калибровочной кривой стандарта субстанции антибиотика ИНА 5812 (6,25-50 мкг/мл). Биологическая активность получаемой биосинтезом и химически очищенной субстанции антибиотика определяется трехдозным вариантом метода (ГФХ, стр. 949).

Streptomyces tendae ВКПМ Ас-1980 поясняется следующим примером.

Пример. Для получения спорового материала культуру Streptomyces tendae штамм ВКПМ Ас-1980 выращивают в течение 7 суток при 37°С на агаровой среде №2 Гаузе следующего состава, %

Триптон 0,3

Глюкоза 1,0

Пептон 0,5

Агар 3,0

NaCl 0,5

Вода водопроводная рН до стерилизации 7,0-7,2

Среда стерилизуется в течение 30 мин при давлении 0,6 атм и температуре 120°С.

Споровым материалом с мицелием засевают посевную жидкую питательную среду (100 мл в колбах Эрленмейера объемом 0,75 л) и культивируют при 28°С в течение 24-48 часов на круговой качалке со скоростью вращения 220-240 об/мин. Выросшим посевным мицелием засевают ферментационную питательную среду (100 мл колбах Эрленмейера объемом 0,75 л) следующего состава, %:

Соевая мука 3,0

Глюкоза 3,0

NaCl 0,3

CaCo3 0,3

Вода водопроводная

рН до стерилизации 7,0-7,2

Стерилизация течение 30 мин при давлении 0,6 атм и температуре 120°С.

Количество посевного материала для инокуляции - (5-7)%

Ферментационное культивирование проводят при 28°С в течение 144 час на круговой качалке (скорость вращения 220-240 об/мин). Антибиотик ИНА 5812 накапливается в культуральной жидкости продуцента. Антибиотически активность штамма Streptomyces tendae ВКПМ Ас-1980, определенная биологическим методом диффузии в агар, составляет к окончанию ферментации 2500 мкг/мл. Выделение антибиотика проводят сорбционным методом, описанным в патенте РФ (1).

Таким образом, получен новый мутантный штамм Streptomyces tendae ВКПМ Ас-1980, отличающийся от известного по способности антибиотикообразования, которая в 200 раз превосходит активность продуцента-прототипа Streptomyces roseoflavus ИНА Ас-5812. (Таблица 2).

Использование нового штамма Streptomyces tendae ВКПМ Ас-1980 позволит значительно увеличить выход целевого продукта для детального и всестороннего экспериментального изучения его физико-химических и химиотерапевтических свойств.

Источники информации

1. Патент RU 2572341 от 11.2015 г.

2. Г.Ф. Гаузе, Т.П. Преображенская, М.А. Свешникова и др., «Определение актиномицетов», М., 1983, стр. 42.

(+++) - хороший; (++) - умеренный; (+) - слабый

Штамм Streptomyces tendae ВКПМ Ac-1980 - продуцент противобактериального антибиотика ИНА 5812.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к санитарной микробиологии. Питательная среда для выделения бактерий Pseudomonas aeruginosa из водных объектов содержит мясо-пептонный агар, глюкозу, глицерин и сульфат меди (CuSO4×5H2O) при заданном содержании компонентов.

Изобретение относится к фотобиотехнологии. Предложен штамм микроводоросли Bracteacoccus aggregatus (syn.

Изобретение относится к ассоциации микроорганизмов для снижения эмиссии аммиака и/или метана в почве или удобрении и ее применению. Предложенная ассоциация микроорганизмов депонирована в CBS под депозитарным номером NR CBS 134115.

Изобретения относятся к биотехнологии. Предложены реакционная смесь для получения по меньшей мере одного высшего спирта в водной среде, способ получения по меньшей мере одного высшего спирта в водной среде, применение указанной реакционной среды для получения по меньшей мере одного высшего спирта.

Изобретение относится к микробиологии, в частности к способам физической стерилизации в лабораториях и ветеринарных клиниках. Предложен способ обработки культуры Staphylococcus aureus кислородсодержащим газом из портативного озонатора.

Изобретение относится к санитарной и клинической микробиологии. Питательная среда для выделения бактерий Pseudomonas aeruginosa содержит панкреатический гидролизат рыбной муки, калий сернокислый, магний сернокислый 7-водный, калий фосфорнокислый однозамещенный, калий фосфорнокислый двузамещенный, фенозан-кислоту, бутилгидрокситолуол, N-цетилпиридиний хлористый 1 водный (ЦГГХ), натрий углекислый, агар бактериологический и дистиллированную воду при заданном содержании компонентов.

Изобретение относится к области биотехнологии, микробиологии, экологии, охране окружающей среды. Предложен микробный препарат для утилизации углеводородных загрязнений в водной среде при температуре от +20 до -2,5°С и солености 30±10 г/л.

Изобретение относится к птицеводству и может быть использовано при выращивании цыплят-бройлеров. Способ сохранения продуктивных качеств и жизнеспособности цыплят-бройлеров предусматривает введение в состав рациона птицы комплекса СибМОС ПРО в дозе 1,5 кг/т корма и введение фитобиотика Концентрат витаминный хвойный в воду в дозе 1 мл/л воды.
Изобретение относится к микробиологии. Питательная среда для культивирования Yersinia pestis EV, содержащая пермеат из ретентанта ферментативного гидролизата кукурузной патоки жидкой, разбавленный дистиллированной водой до показания аминного азота 0,12%, натрий хлористый, натрий фосфорнокислый 2-замещенный 12-водный, натрий сернистокислый, агар микробиологический и дистиллированную воду при заданном содержании компонентов.

Изобретение относится к микробиологии и предназначено для моделирования дормантного статуса М. tuberculosis в условиях in vitro.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при производстве ценного антибиотика эремомицина сульфата. Штамм Amycolatopsis umgeniensis, обладающий способностью продуцировать эремомицин, депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ Ас-1978.

Предложена группа изобретений, относящихся к биотехнологии - штамм Streptomyces hygroscopicus ВКПМ Ас-2079 - продуцент антибиотиков астолидов А и В и способ получения антибиотиков астолида А и астолида В с применением указанного штамма.

Изобретение относится к биотехнологии и спиртовой промышленности. Штамм дрожжей Torulaspora delbrueckii Б-1, обладающий способностью продуцировать этиловый спирт, депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ Y-4279.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен штамм микроорганизма Streptomyces virginiae - продуцент антибиотика вирджиниамицина, депонированный в ВКМ под регистрационным номером ВКМ Ac-2738D и способ получения антибиотика вирджиниамицина.

Заявлена группа изобретений, которая может быть использована при производстве антибактериального антибиотика диметилванкомицина сульфата, эффективного при лечении инфекций, вызываемых грамположительными возбудителями, в том числе метициллинустойчивыми и анаэробами.

Группа изобретений относится к биотехнологии и может быть использована для производства антибиотика эремомицина. Предложены штамм Amycolatopsis orientalis и способ получения антибиотика эремомицина.

Изобретение относится к способу комплексной экстракции биологически активных веществ из лекарственного растительного сырья. Указанный способ заключается в том, что воздушно-высушенное измельченное сырье предварительно подвергают микроволновому воздействию в среде Чапека при мощности 300-350 Вт и температуре 100-105°С, а затем засеивают культурой актиномицетов Streptomyces sp.
Изобретение относится к области биохимии, в частности к биологически активным соединениям, проявляющим антибактериальную активность. Заявлен природный гликопептидный антибиотик ИНА 5812, который может быть применен в качестве лекарственного препарата в медицинской практике.
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к производству антибиотика, эффективного при лечении инфекционных заболеваний, вызываемых грамотрицательными и грамположительными микроорганизмами.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к микроорганизму для продуцирования O-ацетилгомосерина с высокой эффективностью и к способу получения O-ацетилгомосерина и L-метионина с использованием этого микроорганизма.

Изобретение может быть использовано в биотехнологии для производства противобактериального антибиотика ИНА 5812. Антибиотик ИНА 5812 по химическому строению является оригинальным линейно-циклическим гликопептидным соединением, активным в отношении грамположительных патогенов in vitro и высокоэффективным в опытах in vivo при экспериментальном лечении стафилококкового сепсиса у белых мышей. Предлагается новый штамм - продуцент антибиотика ИНА 55812 путем селекционного преобразования свойств почвенной культуры Streptomyces tendae. Штамм депонирован в коллекции культур БРЦ ВКПМ НИЦ «Курчатовский институт»-ГосНИИгенетика под номером ВКПМ Ас-1980. Штамм Streptomyces tendae ВКПМ Ас-1980 обладает повышенной антибиотической активностью и при глубинном культивировании накапливает 2500 мкгмл противобактериального антибиотика ИНА 5812. 2 табл., 1 пр.

Наверх