Способ формирования тканевых матриц для гистологического исследования


G01N1/36 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2711621:

федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Омский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ОмГМУ Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к области гистологических исследований и представляет собой способ формирования тканевых матриц для гистологического исследования без использования блока-реципиента путем установки исследуемых образцов на адгезивную 3-компонентную основу, отличающийся тем, что в процессе формирования тканевой матрицы производится установка столбиков ткани, извлеченных с помощью панчера из реципиентных блоков на ровную 3-компонентную адгезивную поверхность, основой которой является тонкая стальная пластика толщиной 350 мкм, предотвращающая смещение и деформацию тканевой матрицы при заливке парафином установленных на адгезивную поверхность столбиков ткани. Изобретение обеспечивает предотвращение смещения и всплытия основы при заливке жидким парафином, что повышает качество и однородность получаемых тканевых матриц.

 

Метод тканевых матриц (tissue microarray) используется в практике специальности патологическая анатомия и научных исследования для одномоментного проведения изучения множественных образцов ткани (гистологических срезов), представленных на одной поверхности предметного стекла. Тканевая матрица (тканевой мастер-блок, гистологический парафиновый мультиблок) представляет собой парафиновый блок-реципиент, в который встроены множественные тканевые столбики, извлеченные из стандартных парафиновых блоков-доноров и организованные в виде упорядоченной последовательности (матрицы) [Криволапов Ю.А., Храмцов А.И. Применение тканевых матриц в иммуногистохимии / Криволапов Ю.А., Храмцов А.И.// Архив патологии. - 2005. - Т. 67, №2. - С. 48-50.][Г.Ф. Храмцова. Тканевые матрицы - современный метод патологической анатомии / Г.Ф. Храмцова, А.И. Храмцов, Н.М. Хмельницкая // Библиотека патологоанатома. - 2013. №138 - 23 С.]. Тканевая матрица позволяют упорядочено сохранять и использовать большое количество образцов тканей и более эффективно и экономично проводить традиционные гистологические, иммуногистохимические и молекулярные исследования.

Необходимость создания тканевых матриц определяется высокой значимостью соблюдения стандартов и одинаковых условий при проведении разнообразных исследований большого количества образцов. Использование тканевых матриц так же позволяет экономить дорогостоящие расходные материалы (например, моноклональные антитела при иммуногистохимических исследованиях) и значительно снизить затраты времени, в связи с одномоментным проведением исследования сразу для нескольких десятков образцов тканей. При этом появляется возможность проводить забор и подвергать исследованию только интересующие столбики ткани из первичного образца, тем самым сокращается расход реактивов и времени оценки результатов специалистом.

Традиционный метод формирования тканевых матриц, включает в себя использование для фиксации и ориентировки фрагментов блока-реципиента - специальной решетки из гистологического парафина с множественными ячейками, которые заполняются столбиками исследуемых образцов тканей. Впервые этот способ был предложен Petrosyan K. и Press M.F [K. Petrosyan. Multispecimen tissue blocks in pathology: an improved technique of preparation. Laboratory Investigation. / K. Petrosyan, M.F. Press //; A Journal of Technical Methods and Pathology. - 1997. - Vol. 77, №5. - P. 541-542.]. Выделение столбиков ткани и установление их в блок реципиент может выполняться вручную при помощи специального инструмента - панчера, либо при помощи разработанных позднее автоматизированных систем создания тканевых матриц [J. Kononen. Tissue microarrays for high-throughput molecular profiling of tumor specimens / J. Kononen, L. Bubendorf, A. Kallioniemi et al.// Nature Medicine. - 1998. - Vol. 4, №7. - P. 844-847]. В общих чертах, с незначительными модификациями данную методику применяют и в настоящее время [С.В. Fowler. Tissue microarrays: construction and uses. / C.B. Fowler, Y.G. Man, S. Zhang et. al.//. Methods Mol Biol. - 2011. - №724. - P. 23-35] [J.P. Brown. Science made simple: tissue microarrays (TMAs) / John P. Brown, A. Chandra. // BJU International. - 2014. Vol. 114, №2. - P. 294-305]. В качестве прототипа рассматривается модификация, предложенная Wan и соавт. [VOGEL U. Overview on Techniques to Construct Tissue Arrays with Special Emphasis on Tissue Microarrays// Microarrays. - 2014. - Vol. 3. - P. 103-136], где исследуемые образцы устанавливались на подложку, основой которой являлась рентгеновская пленка. Недостатками вышеописанных технологий является:

1. неполная однородность блока-реципиента и столбиков тканей при которой необходимо использование специальных адгезивных лент, для предотвращения выпадения отдельных исследуемых фрагментов из гистологических срезов, что усложняет процесс;

2. необходимость затрат на приобретения блоков реципиентов или форм для их самостоятельного изготовления;

3. ограничение в выборе размеров и формы блока-реципиента, количества исследуемых фрагментов, связанные с имеющейся формой или приобретенным блоком, а также использование блока-реципиента является дополнительным этапом в проведении исследования, увеличивающим его длительность.

4. при использовании в качестве основы полимерной пленки (в т.ч. рентгеновской) возникает высокая вероятность искривления плоскости основы и риск частичного/полного всплытия тканевой матрицы в жидком парафине из-за недостаточной плотности и жесткости пленки.

Для преодоления недостатков традиционных методов в серии собственных наблюдений и экспериментов был разработан собственный способ формирования тканевых матриц. Он заключается в установке столбиков ткани, извлеченных с помощью панчера из реципиентных блоков на ровную 3-х компонентную стальную основу с последующим изготовлением мультиблока без использования парафиновой матрицы-реципиента путем прямой заливки парафином столбиков ткани, установленных на адгезивную поверхность с металлической основой. Отказ от приобретения или самостоятельного изготовления блока-реципиента позволяет снизить себестоимость и продолжительность проведения исследования, при этом неподвижность и сохранение заданной позиции столбиком ткани обеспечивается адгезивными свойствами поверхностного слоя основы. Адгезия столбиков исследуемых тканей к матричной основе также позволяет проводить переплавку тканевой матрицы без смещения позиции фрагментов, что упрощает изготовление гистологических срезов с мультиблока на микротоме и повышает их качество. Также существует возможность свободного выбора наиболее подходящего количества и конфигурации расположения столбиков исследуемых тканей в зависимости от конкретной ситуации и задачи исследования. Использование в качестве 1 слоя основы тонкой стальной пластинки толщиной 350 мкм обеспечивает расположение исследуемых фрагментов на одном уровне и предотвращает смещение и всплытие основы при заливке жидким парафином. Быстрое и простое отделение основы от готовой тканевой матрицы выполняется за счет промежуточного слоя вощеной бумаги с направляющими ярлычками толщиной 150 мкм. Поверхностный адгезивный слой основы представляет собой полипропиленовую пленку общей толщиной 45 мкм с равномерно нанесенным на нее акриловым клеем, что обеспечивает ориентировку и сохранение заданных позиций столбиками исследуемых материалов в ходе всех этапов изготовления тканевых матриц.

При проведении серии экспериментов с формированием 15 тканевых матриц (общее количество образцов составило 238) с использованием опытного образца разработанной адгезивной основы удалось добиться устойчивой высокой эффективности: при изготовлении тканевых матриц потери и смещения исследуемых столбиков ткани не наблюдалось, структура и взаиморасположение фрагментов тканей сохранялась на этапе изготовления гистологических срезов.

Способ формирования тканевых матриц для гистологического исследования без использования блока-реципиента путем установки исследуемых образцов на адгезивную 3-компонентную основу, отличающийся тем, что в процессе формирования тканевой матрицы производится установка столбиков ткани, извлеченных с помощью панчера из реципиентных блоков на ровную 3-компонентную адгезивную поверхность, основой которой является тонкая стальная пластика толщиной 350 мкм, предотвращающая смещение и деформацию тканевой матрицы при заливке парафином установленных на адгезивную поверхность столбиков ткани.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области мониторинга концентрации радионуклидов в газовых потоках и атмосферном воздухе, в частности к способу отбора проб тритированной воды из газовой среды, и может быть использовано при создании промышленных пробоотборников трития.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии. Предложены антитела и их антиген-связывающие фрагменты против ИЛ-1-бета.

Изобретение относится нефтегазодобывающей промышленности, в частности к неразрушающим способам контроля скважинных труб. Образец содержит тело из контролируемого материала, содержащего искусственный дефект.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии. Предложено антитело против пресепсина, а также антигенсвязывающий фрагмент антитела, полинуклеотид, экспрессирующий вектор, трансформированный штамм, способы получения антитела и его антигенсвязывающего фрагмента.

Изобретение относится к устройствам подготовки проб пульповидных материалов на обогатительных фабриках черной или цветной металлургии. Автоматический комплекс пробоподготовки включает раму (1), бак (2), вакуумный насос (3), датчик (5) уровня фильтрата, клапан (4) сброса фильтрата и несколько идентичных секций фильтрации, каждая из которых включает станцию (6) приема и деаэрации проб, динамический сократитель (7) проб, стакан (8), основание, сетку, фильтровальную бумагу, шланг (13) подачи пульпы.

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, фтизиатрии и терапии. Раскрыт способ прогнозирования летального исхода при клиническом течении коинфекции ВИЧ-туберкулез, при котором у пациентов с выявленной множественной лекарственной устойчивостью Mycobacterium tuberculosis и известным количеством CD4-лимфоцитов проводят забор образцов венозной крови, выделение плазмы крови и иммуноферментный анализ с целью определения концентрации неспецифических общих иммуноглобулинов IgE в МЕ/мл, IgM в мг/мл, IgA в мг/мл и секреторного IgA в мг/л в плазме крови, вычисляют коэффициент предикции летального исхода (КП), равный отношению произведения их концентраций к количеству CD4-лимфоцитов в 1 мкл крови и при превышении этим коэффициентом значения 200 прогнозируют летальный исход с 56,7-кратным относительным риском.

Изобретение может быть использовано при получении проб наплавляемого сварочными электродами металла для определения его химического состава. Электродный металл расплавляют сварочной дугой на токе из диапазона, рекомендуемого техническими условиями, дугой косвенного действия между двумя электродами.

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Предложен способ поиска молекулярных маркеров патологического процесса для дифференциальной диагностики, мониторинга и таргетной терапии.

Изобретение относится к энергетике, а точнее к контрольным устройствам для исследования образования отложений на стенках топки котла при сжигании топлива. Устройство для исследования образования отложений на стенках топки котла при сжигании топлива включает жаропрочную трубку, введенную через отверстие в топку котла и установленную неподвижно в исследуемой точке факела, всасывающий насос и исследовательскую подложку.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу сравнительного исследования эффективности локальных кровоостанавливающих средств (ЛКС) в эксперименте in vitro, отличающемуся тем, что из полотна ЛКС с помощью Dermo-Punch получают цилиндр диаметром, равным внутреннему сечению Dermo-Punch и вакутайнера, образцы ЛКС и вакутайнеры выдерживают в термостате при +37°С 10 минут, после чего забирают кровь вакуумным способом и в течение 15 секунд на дно вакутайнера погружают локальные кровоостанавливающие средства, пробирки закупоривают и инкубируют 30 минут при +37°С, затем центрифугируют для получения сыворотки крови, исследуют концентрацию кальция в плазме крови и сравнивают значения в контрольной группе, в которой не производилось погружение образца в кровь донора, и группах исследования, и если значения концентрации кальция в группе исследования меньше, чем в контрольной и других группах, то это свидетельствует о выраженной эффективности локального кровоостанавливающего средства.

Изобретение относится к области гистологических исследований и представляет собой способ формирования тканевых матриц для гистологического исследования без использования блока-реципиента путем установки исследуемых образцов на адгезивную 3-компонентную основу, отличающийся тем, что в процессе формирования тканевой матрицы производится установка столбиков ткани, извлеченных с помощью панчера из реципиентных блоков на ровную 3-компонентную адгезивную поверхность, основой которой является тонкая стальная пластика толщиной 350 мкм, предотвращающая смещение и деформацию тканевой матрицы при заливке парафином установленных на адгезивную поверхность столбиков ткани. Изобретение обеспечивает предотвращение смещения и всплытия основы при заливке жидким парафином, что повышает качество и однородность получаемых тканевых матриц.

Наверх