Способ определения антиокислительной активности лекарственного растительного сырья и фитопрепаратов методом дифференциальной спектрофотометрии

Изобретение относится к аналитической химии, химико-фармацевтической промышленности, и может быть использовано для контроля качества синтетических лекарственных препаратов, растительного сырья и фитопрепаратов. Способ определения антиокислительной активности лекарственного растительного сырья и фитопрепаратов методом дифференциальной спектрофотометрии включает кипячение навески измельченного сырья в воде из расчета 1,0±0,1 г навески на 30 мл воды в течение 40-50 мин, охлаждение, процеживание через несколько слоев марли и отделение аликвотной части. Отделенную аликвотную часть разводят водой в объемном соотношении 1:4, полученный раствор смешивают с растворами медиаторной системы, состоящей из 0,0002 М раствора ферроцианида калия и 0,0002 М раствора феррицианида калия, в объемном соотношении 23:1:1 и измеряют оптическую плотность методом дифференциальной спектрофотометрии при длине волны 420±2 нм относительно раствора сравнения, представляющего собой 4 мл воды очищенной, доведенные до метки в мерной колбе вместимостью 50 мл свежеприготовленным извлечением, разведенным водой в объемном соотношении 1:4. Затем рассчитывают значение антиокислительной активности извлечения в пересчете на кислоту аскорбиновую в г/мл раствора и содержание суммы БАВ, обладающих антиокислительной активностью (в пересчете на кислоту аскорбиновую и абсолютно сухое сырье) в процентах по заявленным формулам. Изобретение обеспечивает повышение точности определения, а также возможность одновременного определения как антиокислительной активности извлечения, так и содержание суммы БАВ, обладающих антиокислительной активностью. Способ также позволяет стандартизировать растительное сырье и фитопрепараты по содержанию данных БАВ-антиокислителей и выявлять антиокислительную или проокислительную активность извлечений из растительного сырья. 5 ил., 2 табл.

 

Изобретение относится к аналитической химии, химико-фармацевтической промышленности, области фармакогнозии и фармацевтической химии и может быть использовано для контроля качества синтетических лекарственных препаратов, растительного сырья и фитопрепаратов (ФП) на его основе.

Известен способ первичной оценки антиоксидантной активности водных и водно-спиртовых извлечений из растительных объектов методом титриметрии, основанный на окислении веществ-антиоксидантов (АО) перманганатом калия в кислой среде (Патент РФ 2170930, МКП G01N 33/50, G01N 33/52. опубл. 20.07.2001). Недостатком данной методики является то, что данный метод позволяет определить количественное содержание суммы всех веществ, обладающих антиоксидантной активностью (АОА) в пересчете чаще всего на рутин, кверцетин, галловую и аскорбиновую кислоты, а также пирокатехин, но не дифференцировать их по группам.

Существует амперометрический способ оценки АОА различных многокомпонентных смесей без их предварительного разделения, включающий подготовку проб анализируемого и стандартного веществ, их электрохимическое окисление в ячейке амперометрического детектора, усилении электрических сигналов, их регистрацию и расчет АОА по предложенной математической зависимости в пересчете на рутин, кверцетин, галловую или аскорбиновую кислоты или синтетический краситель кармуазин (Саввин, П.Н. Исследование антиоксидантных свойств желейного мармелада. / П.Н. Саввин, В.М. Болотов // Химия растительного сырья. - №4. - 2008. - С. 177-179). Данный способ позволяет оценить суммарную АОА с высокой точностью и воспроизводимостью, однако требует применения специфического дорогостоящего оборудования - прибора «Цвет-Яуза-01-AA».

Известен способ кулонометрического определения АОА экстрактов трав, соков ягод, плодов и овощей, различных чаев, настоев и напитков на основе природного растительного сырья, водных и водно-спиртовых извлечений с использованием в качестве реагента электрогенерированного брома или хлора (Электрогенерированный бром - реагент для определения антиоксидантной способности соков и экстрактов / И.Ф. Абдулин, Е.Н. Турова, Г.К. Будников, Г.К. Зиятдинова // «Заводская лаборатория. Диагностика материалов». - №9. - 2002. - Том 62. - С. 13-15), основанный на электро-химическом окислении хлорид или бромид - ионов на платиновом электроде в кислых средах с образованием короткоживущих радикалов брома или хлора, адсорбированных на поверхности платинового электрода, с последующим взаимодействием с биологически активными веществами (БАВ) исследуемых объектов. Способ позволяет охватить широкий круг БАВ различной структуры, обладающих антиоксидантными свойствами, но дает возможность говорить лишь о некоторой эффективной величине АОА растительных настоев, поскольку выделить вклад каждого из составляющих смесь компонента представляет чрезвычайно сложную задачу.

Известны также способы определения АОА некоторых групп БАВ растений методом тонкослойной хроматографии (ТСХ), в которых зоны индивидуальных веществ, обладающих АОА, после разделения непосредственно на пластине обрабатывали подкисленным раствором калия перманганата, выступающим в данном случае в качестве проявителя (зоны индивидуальных АО обесцвечивали раствор калия перманганата на пластине, проявляясь в виде белых пятен на розовом фоне) (Чистякова, А.С. Изучение антиоксидантной активности некоторых групп БАВ методом ТСХ / А.С. Чистякова, Т.А. Брежнева, А.А. Мальцева // Сборник научных трудов: «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции». - Пятигорск. - 2012. - Вып. 67. - С. 289-290), или 2,2-дифенил-1-пикрилгидразином, детектирующим зоны, ответственные за проявление антирадикальной активности (Олейников, Д.Н. Химический состав и антирадикальная активность эфирного масла российских образцов Mentha piperita / Д.Н. Олейников, Л.В. Дударева // Химия растительного сырья. - 2011. - №4. - С. 109-114). Данные способы позволяет лишь судить о присутствии АО различной природы в лекарственном растительном сырье (ЛРС) и не дают представления об их количественном содержании. Кроме того, разделить все БАВ, присутствующие в ЛРС и проявляющие АОА, в одной хроматографической системе не представляется возможным.

Спектрофотометрические методы, несмотря на невысокую селективность, по-прежнему находят широкое применение в анализе лекарственных препаратов благодаря сравнительной доступности, дешевизне, простоте в сочетании с хорошей точностью. Большинство лекарственных веществ обладает собственным светопоглощением в УФ-области.

Описано огромное количество способов определения АОА спектрофотометрическими методами различных объектов. Наиболее известными среди них являются: метод ТАС (Total Antioxidant Capacity) и его модификация метод (Хасанов, В.В. Методы исследования антиоксидантов / В.В. Хасанов, Г.Л. Рыжова, Е.В. Мальцева // Химия растительного сырья. - №3. -2004. - С. 63-75), заключающийся в том, что кроцин окисляется 2,2'-азобис-(2-амидинопропан)гидрохлоридом (ААРН) в присутствии испытуемого образца и без (контрольный опыт) при термостатировании при 37°С в течение 60-75 минут с последующим измерением оптической плотности при 450 им. Методы основанные на способности ингибировать образование ТБК-активных продуктов (TBARP) заключаются в измерении оптической плотности ТБК-активных продуктов при длине волны 532±2 нм после Fe2+-индуцированного перекисного окисления липидов в липосомальной системе в опытных образцах по отношению к контрольным (Изучение антиоксидантного действия гесперидина, диосмина, флавицина и кверцетина in vitro / Е.О. Сергеева, Е.Г. Доркина, Л.А. Саджая и др. // Сборник научных трудов: «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции». - Пятигорск. - 2012. - Вып. 67. - С. 372-374). Метод FRAP (ferric reducing/antioxidant power), основанный на введении избытка ионов Fe3+ и фотометрического реагента - трипиридилтриазина, 1,10-фенантролина, 2,2'-дипиридила и др., которые под действием АО образуются интенсивно окрашенный комплекс железа(II) с реагентом, что сопровождается появлением интенсивной окраски (Определение суммарного содержания антиоксидантов методом FRAP / Т.Г. Цюпко, И.С. Петракова, Н.С. Бриленок и др. // Аналитика и контроль. - 2011. - Т. 15.-№3.- С. 287-298). Методы, основанные на способности ингибировать ауто-окисление адреналина in vitro и тем самым предотвращать образование активных форм кислорода в щелочной среде в присутствии и без исследуемого объекта. Фотометрирование осуществляется при длине волны 347 нм (Новый подход в оценке антиоксидантной активности растительного сырья при исследовании процесса аутоокисления адреналина / Е.И. Рябинина, Е.Е. Зотова, Е.Н. Ветрова и др. // Химия растительного сырья. - 2011. - №3. - С. 117-121). Метод DPPH представляет собой колориметрический метод, основанная на реакции DPPH (2,2-дифенил-1-пикрилгидразил), растворенного в метаноле, с образцом АО, что сопровождается снижением пурпурно-синяя окраска DPPH, а реакция контролируется по изменению оптической плотности при 514 нм спектрофотометрически. Недостатком данных способов является применение, в некоторых случаях, токсичных органических растворителей (метанол), а также использование цветных реакции, в частности с Fe(III), продуктом которых являются нестабильные по окраске во времени окрашенные соединения (Федосеева, А.А. Антиоксидантная активность настоев чая / А.А. Федосеева, О.С. Лебедкова, Л.В. Каниболоцкая // Химия растительного сырья. - 2008. - №3. - С. 123-127).

Известен флуориметрический метод «Oxygen Radical Absorption Capacity»-ORAC, основанный на измерении интенсивности флуоресценции при длине волны λвозб. 490 нм и λисп. 530 нм на флюориметре флуоресцеина, в присутствии ААРН в качестве источника перекисных радикалов, и ее изменении от времени протекания реакции в присутствии АО, связывающих кислородные радикалы и увеличивающих время флуоресценции вследствие защитного действия (Макарова, М.Н, Антирадикальная активность флавоноидов и их комбинаций с другими антиоксидантами / М.Н. Макарова, В.Г. Макаров, И.Г. Зенкевич // Фармация. - 2004.- №2.- С. 30-32).

Существуют хемилюминесцентные методы определения АОА, основанные на измерении подавления люминесценции люминола после взаимодействия со свободными радикалами, генерирующимися в системе постоянно в результате инициируемого теплом распада ААРН, при добавлении образца АО (Оценка уровня антиоксидантной активности перспективных дикорастущих и культивируемых лекарственных растений республики Башкортостан / А.Р. Ахметьянова, Т.В. Булгаков, Э.Х. Галиахметова и др. // Медицинский вестник Башкортостана. - 2016. - Т. 11, №4 (64). - С. 68-71).

Описан метод микрокалориметрии, основанный на регистрации теплового эффекта радикальных реакций окисления или полимеризации, позволяющий по периоду индукции рассчитать эффективное содержание ингибиторов в сложных природных смесях (Сизова, Н.В. Оценка антиокислительной активности эфирных масел методом микрокалориметрии / Н.В. Сизова, О.Ю. Веретнова, А. Ефремов // Химия растительного сырья. - №3. - 2002. - С. 57-60).

Недостатками данных методов является необходимость дорогостоящего оборудования, реактивов и материалов, длительность процедуры определения, а также невозможность раздельного определения АО в сложных многокомпонентных смесях.

Известен способ определения АОА растворов потенциометрическим методом основано на химическом взаимодействии АО с медиаторной системой, в качестве которой используется смесь K3[Fe(CN)6]/K4[Fe(CN)6]. Добавление растворов, содержащих вещества, проявляющие АОА, в ячейку, приводит к изменению окислительно-восстановительного потенциала среды в результате взаимодействия АО с окисленным компонентом K3[Fe(CN)6] медиаторной системы (Потенциометрический метод определения антиоксидантной активности пищевых объектов и объектов фармации с использованием комплексов металлов / Е.Р. Газизуллина, Я.А. Окулова, К.Г. Попова и др. // В книге: XX Менделеевский съезд по общей и прикладной химии. Тезисы докладов в 5 томах. Уральское отделение Российской академии наук, 2016. - С. 251). Недостатком данного способа является относительно большое количества образца и времени для анализа. Кроме того, как и в любом подобном электрохимическом методе, разброс показаний прибора при идентичных измерениях является достаточно высоким. Данный способ не дает возможность раздельно определить содержание каждого АО в сложных многокомпонентных смесях, таких как извлечения из растительных объектов, что также можно отнести к недостаткам данных способов-аналогов.

Прототипом является способ (Некрасова Л.П. Определение антиоксидантной активности электрохимически активированной воды потенциометрическим и спектрофотометрическим методами / Л.П. Некрасова, Р.Н. Михайлова, И.Н. Рыжова // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2016. - №5. - С. 559-563), в котором 10 мл раствора эквимолярной медиаторной системы [Fe(CN)6]4-/[Fe(CN)6]3-, концентрацией 0,001 М помещают в мерные колбы вместимостью 50 мл и доводят до метки исследуемой электрохимически активированной водой, перемешивают, выдерживают 40-60 минут и измеряют оптическую плотность при 420 нм в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1-5 см; параллельно готовят холостую пробу на дистиллированной воде и определяют разность оптических плотностей исследуемого и холостого опытов, рассчитывают концентрацию окислителя (восстановителя), выраженную в моль-экв/л, по определенной формуле с использованием коэффициента молярного поглощения K3[Fe(CN)6]. Недостатком способа являются, во-первых, невозможность применения прямой спектрофотомерии для ЛРС и ФП, имеющих собственное поглощение в диапазоне 400-440 нм; во-вторых, использование в качестве стандартного образца для установления линейности методики гидрохинона - вещества нераспространенного в объектах растительного происхождения, а также расчет концентрации окислителя (восстановителя) в моль-экв/л, что трудно связать с суммарным содержанием биологически активных веществ-АО в пересчете на какую-либо определенную группу БАВ в сырье, что является одной из задач определения АОА растительных объектов, и сопоставить с результаты исследования БАВ-АО в ЛРС другими широко применяемыми методами.

В научно-фармацевтической, медицинской и патентной литературе способов, позволяющих проводить оценку антиокислительной активности ЛРС и ФП и суммарное содержание в них БАВ-АО в пересчете на кислоту аскорбиновую методом дифференцированной спектрофотометрии, не обнаружено.

Задача изобретения заключается в разработке спектрофотометрического способа оценки антиокислительной активности ЛРС и ФП и суммарного содержания в них БАВ-АО в пересчете на кислоту аскорбиновую методом дифференцированной спектрофотометрии.

Технический результат заключается в разработке спектрофотометрического способа одновременного определения антиокислительной активности и суммарного содержания БАВ-антиоксидантов в лекарственном растительном сырье и фитопрепаратах, отличающегося чувствительностью (1×10-5 г/мл), доступностью и экспрессностью.

Технический результат достигается тем, что кипячение навески измельченного сырья в воде из расчета 1,0±0,1 г навески на 30 мл воды осуществляют в течение 40-50 мин., проводят охлаждение, процеживание через несколько слоев марли и отделение аликвотной части, измерение оптической плотности смеси растворов аликвоты и медиаторной системы 0,0002 М раствора ферроцианида калия и 0,0002 М раствора феррицианида калия, согласно изобретению, отделенную аликвотную часть разводят водой в объемном соотношении 1:4, полученный раствор смешивают с растворами медиаторной системы в объемном соотношении 23:1:1, измерение оптической плотности проводят методом дифференциальной спектрофотометрии при длине волны 420±2 нм относительно раствора сравнения, представляющего

собой 4 мл воды очищенной, доведенные до метки в мерной колбе вместимостью 50 мл свежеприготовленным извлечением, разведенным водой в объемном соотношении 1:4, вычисление антиокислительной активности проводится в пересчете на кислоту аскорбиновую и абсолютно сухое сырье по формуле:

где А - оптическая плотность исследуемого раствора в максимуме поглощения, а суммарное содержание БАВ-АО в пересчете на кислоту аскорбиновую и абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле

где АОА - вычисленная ранее по формуле 1, г/мл; а - точная навеска сырья, г; W - объем мерной колбы, взятой для разведения, мл; Р - общий объем приготовленного извлечения, мл; В - потеря в массе при высушивании исследуемого сырья, %; Va - объем аликвоты извлечения, взятый для разведения, мл.

На фиг. 1 показан вид спектров поглощения водных растворов 1 - ферроцианида калия; 2 - феррицианида калия и 3 - их смеси в соотношении 1:1. На фиг.2 - график зависимости величины оптической плотности растворов, содержащих медиаторную пару, от концентрации кислоты аскорбиновой и его аппроксимация при у=-0.1076х+0.8145, R2=0.9816. На фиг. 3 - вид спектров поглощения 0,001% водного раствора кислоты аскорбиновой 1 и извлечения из плодов облепихи крушиновидной высушенных 2. Вид спектра поглощения водного раствора медиаторной пары 1 и дифференциального спектра водного раствора медиаторной пары в присутствии извлечения из плодов облепихи крушиновидной высушенных 2 приведен на фиг.4. Фиг. 5 демонстрирует зависимость оптической плотности водного раствора медиаторной пары с 0,001% водным раствором кислоты аскорбиновой 1 и извлечением из

плодов облепихи крушиновидной высушенных 2 от времени проведения измерений. В таблице 1 приведены экспериментальные результаты определения содержания суммы БАВ, обладающих антиокислительной активностью (в пересчете на кислоту аскорбиновую и абсолютно сухое сырье). Метрологическая оценка результатов определения содержания суммы БАВ, обладающих антиокислительной активностью (в пересчете на кислоту аскорбиновую и абсолютно сухое сырье) (на примере плодов облепихи крушиновидной сорта «Нивелена») представлена таблице 2.

Способ определения антиокислительной активности ЛРС и ФП методом дифференциальной спектрофотометрии реализуется следующим образом.

Точную навеску (около 2,0±0,1 г) измельченного сырья помещают в коническую колбу вместимостью 100 мл, заливают водой очищенной в количестве 60 мл и кипятят с обратным холодильником на водяной бане при периодическом перемешивании в течение 45 минут. Извлечение охлаждают и процеживают через несколько слоев марли в коническую колбу так, чтобы частицы сырья не попали в колбу. Извлечение разводят водой очищенной в мерной колбе в объемном соотношении 1:4 (исследуемый раствор). Измеряют оптическую плотность смеси, состоящей из 2 мл 0,0002 М раствора ферроцианида калия и 2 мл 0,0002 М раствора феррицианида калия, доведенной до метки в мерной колбе вместимостью 50 исследуемым раствором, относительно раствора сравнения (4 мл воды очищенной, доведенные до метки в мерной колбе вместимостью 50 исследуемым раствором) при длине волны 420±2 нм (фиг. 4), так как извлечения, в отличие от кислоты аскорбиновой, использованной в качестве стандартного образца, обладают собственной оптической активностью в диапазоне длин волн 400-440 нм (фиг. 3). Данные спектров поглощения ЛРС свидетельствуют о присутствии в извлечениях суммы БАВ, обладающих антиокислительной активностью (в пересчете на кислоту аскорбиновую), так как значение оптической плотности меньше холостого опыта (фиг. 4). В результате взаимодействия восстановителя с ферро-

или феррицианидом калия изменяется соотношение [Fe(CN)6]4-/[Fe(CN)6]3- и, соответственно, оптическая плотность раствора (фиг. 1), содержащего медиаторную пару. Уменьшение оптической плотности при добавлении к системе исследуемого извлечения свидетельствует о том, что анализируемый раствор обладает восстановительными свойствами.

В начале при помощи уравнения градуировочной зависимости, выведенного из данных калибровочного графика (фиг. 2), построенного с применением серии стандартных растворов кислоты аскорбиновой, добавляемых к раствору медиаторной пары, на основании полученного значения оптической плотности исследуемого раствора после добавления к медиаторной паре вычисляют антиокислительную активность извлечения в пересчете на кислоту аскорбиновую в г/мл раствора по формуле 1, а затем содержание суммы БАВ, обладающих антиокислительной активностью (в пересчете на кислоту аскорбиновую и абсолютно сухое сырье) в процентах по приведенной формуле 2.

Способ позволяет проводить оценку антиокислительной активности ЛРС и ФП и суммарного содержания в них БАВ-АО в пересчете на кислоту аскорбиновую методом дифференцированной спектрофотометрии и стандартизировать ЛРС и ФП по содержанию данных БАВ и отличается достаточной чувствительностью (1×10-5 г/мл), экономичностью, доступностью и экспрессностью.

Пример 1. Разработанный способ был апробирован на ЛРС листьев крапивы двудомной.

Получение извлечения: Около 2,0±0,1 г измельченного сырья, проходящего через сито с размером отверстий 0,5 мм, помещают в коническую колбу вместимостью 100 мл, заливают водой очищенной в количестве 60 мл и кипятят с обратным холодильником на водяной бане при периодическом перемешивании в течение 40 минут. Извлечение охлаждают и процеживают через несколько слоев марли в коническую колбу так, чтобы частицы сырья не попали в колбу. 20 мл извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят водой очищенной до метки (исследуемый раствор). Измеряют

оптическую плотность смеси, состоящей из 2 мл раствора ферроцианида калия и 2 мл раствора феррицианида калия, доведенной до метки в мерной колбе вместимостью 50 исследуемым раствором, относительно раствора сравнения (4 мл воды очищенной, доведенные до метки в мерной колбе вместимостью 50 исследуемым раствором при длине волны 420±2 нм. Полученное значение оптической плотности используют для вычисления антиокислительной активности извлечения в пересчете на кислоту аскорбиновую в г/мл раствора по формуле 1, а затем содержания суммы БАВ, обладающих антиокислительной активностью (в пересчете на кислоту аскорбиновую и абсолютно сухое сырье), в сырье в процентах по формуле 2. Результаты определения антиокислительной активности извлечения из листьев крапивы двудомной в пересчете на кислоту аскорбиновую и содержания суммы БАВ-антиоксидантов в пересчете на кислоту аскорбиновую и абсолютно сухое сырье представлены в табл. 1. Метрологическая оценка результатов определения представлена табл. 2.

Пример 2. Разработанный способ был апробирован на ЛРС плодов облепихи крушиновидной различных сортов.

Получение извлечения: Около 2,0±0,1 г высушенного измельченного сырья, помещают в коническую колбу вместимостью 100 мл, заливают водой очищенной в количестве 60 мл и кипятят с обратным холодильником на водяной бане при периодическом перемешивании в течение 50 минут. Извлечение охлаждают и процеживают через несколько слоев марли в коническую колбу так, чтобы частицы сырья не попали в колбу. 20 мл извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят водой очищенной до метки. Измеряют оптическую плотность смеси, состоящей из 2 мл раствора ферроцианида калия и 2 мл раствора феррицианида калия, доведенной до метки в мерной колбе вместимостью 50 исследуемым раствором, относительно раствора сравнения (4 мл воды очищенной, доведенные до метки в мерной колбе вместимостью 50 исследуемым раствором) при длине волны 420±2 нм (фиг. 4). Полученное значение оптической плотности используют для вычисления антиокислительной активности извлечения в пересчете на

кислоту аскорбиновую в г/мл раствора по формуле 1, а затем содержания суммы БАВ, обладающих антиокислительной активностью (в пересчете на кислоту аскорбиновую и абсолютно сухое сырье), в сырье в процентах по формуле 2. Результаты определения антиокислительной активности извлечений из плодов облепихи крушиновидной различных сортов в пересчете на кислоту аскорбиновую и содержания суммы БАВ-антиоксидантов в пересчете на кислоту аскорбиновую и абсолютно сухое сырье представлены в табл. 1. Метрологическая оценка результатов определения представлена табл. 2.

Способ определения антиокислительной активности лекарственного растительного сырья и фитопрепаратов методом дифференциальной спектрофотометрии, включающий кипячение навески измельченного сырья в воде из расчета 1,0±0,1 г навески на 30 мл воды в течение 40-50 мин, охлаждение, процеживание через несколько слоев марли и отделение аликвотной части, измерение оптической плотности смеси растворов аликвоты и медиаторной системы 0,0002 М раствора ферроцианида калия и 0,0002 М раствора феррицианида калия, отличающийся тем, что отделенную аликвотную часть разводят водой в объемном соотношении 1:4, полученный раствор смешивают с растворами медиаторной системы в объемном соотношении 23:1:1, измерение оптической плотности проводят методом дифференциальной спектрофотометрии при длине волны 420±2 нм относительно раствора сравнения, представляющего собой 4 мл воды очищенной, доведенные до метки в мерной колбе вместимостью 50 мл свежеприготовленным извлечением, разведенным водой в объемном соотношении 1:4, вычисление антиокислительной активности проводится в пересчете на кислоту аскорбиновую и абсолютно сухое сырье по формуле:

,

где А - оптическая плотность исследуемого раствора в максимуме поглощения, а суммарное содержание БАВ-АО в пересчете на кислоту аскорбиновую и абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле

,

где АОА - вычисленная ранее по формуле 1, г/мл; а - точная навеска сырья, г; W - объем мерной колбы, взятой для разведения, мл; Р - общий объем приготовленного извлечения, мл; В - потеря в массе при высушивании исследуемого сырья, %; Va - объем аликвоты извлечения, взятый для разведения, мл.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины, в частности к кардиологии, педиатрии, акушерству и гинекологии. Предложен способ прегравидарного прогнозирования риска формирования спорадических септальных врожденных пороков сердца без хромосомных заболеваний в последующих поколениях.

Группа изобретений относится к биотехнологии и может быть использована в медицинской диагностике и биохимических исследованиях для количественного обнаружения катехоламинов и их метаболитов в биологических жидкостях.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для диагностики и терапии в урологии при заболевании почек. Предложен способ дифференциальной диагностики форм пиелонефрита и оценки степени их тяжести, заключающийся в проведении лабораторных исследований крови, определяются показатели оксидантного статуса крови в составе признаков: малоновый диальдегид – X1, ацилгидроперекись – X2, супероксиддисмультаза – X3, каталаза – Х4, цитокиновый спектр плазмы крови в составе признаков: IFNα – X5, IL – Iα – X6, IL – 6 – X7, IL – 8 – X8; IFNα- X9; IL – 10 – X10; IL – IRA – X11; функционально-метаболическая активность нейтрофилов периферической крови в составе признаков: активность и интенсивность фагоцитоза Х12, активность кислородозависимых систем – Х13, по которым определяются функции принадлежности к классам серозный пиелонефрит гнойный пиелонефрит и класс переходной формы из серозного в гнойный пиелонефрит.
Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, и может быть использовано для диагностики стадий ВИЧ-инфекции. В плазме или сыворотке крови определяют соотношение содержания общего холестерина к триглицеридам (ОХ/ТГ).

Изобретение относится к области медицины, а именно к способам выявления опухолевых клеток, находящихся в стадии эпителиально-мезенхимального перехода в асцитических жидкостях.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу определения антагонистической активности штаммов бактерий в отношении Pseudomonas aeruginosa, включающему культивирование Pseudomonas aeruginosa и тестируемых штаммов на питательных средах, отличающемуся тем, что выявление антагонистической активности тестируемых штаммов осуществляют путем оценки продукции оксифеназинов P.

Изобретение относится к области медицинских исследований методами проточной цитометрии или иммунофлуоресцентного анализа с применением суспензионных микрочипов.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для оценки содержания пероксида водорода в опухолевых клетках. Для этого изучают воздействие на опухолевые клетки противоопухолевого препарата, в качестве которого используют генетически кодируемый белок HyPer.

Изобретние относится к области медицины и представляет собой способ неинвазивной диагностики эндогенного гиперкортицизма, включающий забор слюны с последующим определением концентрации кортизола и степени подавления его уровня на фоне проведения пробы с дексаметазоном, при этом слюну отбирают вечером в 23:00±30 минут, с последующим приемом 1 мг дексаметазона, через 9-10 часов проводят повторный забор слюны с определением концентрации кортизола, при этом определение кортизола осуществляют электрохемилюминисцентным методом, в случае содержания кортизола в вечерней пробе слюны <9,4 нмоль/л и в утренней пробе слюны <12,0 нмоль/л делают вывод об отсутствии эндогенного гиперкортицизма, в случае содержания кортизола в вечерней пробе слюны ≥9,4 нмоль/л и в утренней пробе слюны ≥12,0 нмоль/л делают вывод о присутствии эндогенного гиперкортицизма, в остальных случаях требуется проведение дополнительного исследования.

Изобретение относится к химической промышленности, а именно к производству тест-полосок для экспресс-определения присутствия и/или концентрации оксипролина в биологическом материале на предмет наличия заболевания или для самоконтроля состояния здоровья.

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки взаимодействия лекарственных препаратов с катионами магния. Для этого рассчитывают коэффициент комплексообразующей активности (Kка), составные компоненты которого определяются турбидимитрическим методом как результат изменения светопропускания в системе, содержащей гетерогенную фазу гидрофосфатов и фосфатов магния в отсутствие органических лигандов - контрольный опыт, в присутствии анализируемого лекарственного препарата - основной опыт и в присутствии стандартного комплексообразователя - трилона Б - опыт со стандартом, при этом для получения гетерогенной фазы используют фосфатный буфер со значением рН в диапазоне 8,2-8,3 и учитывают содержание общего органического углерода (ООУ) в системе.

Изобретение относится к области исследования и анализа фармацевтических препаратов, а именно к способу определения величины адсорбции винпоцетина липосомами, который включает количественное определение винпоцетина методом спектрофотометрии и заключается в том, что проводится диализ при температуре 37°С в течение 12 ч в диализаторе с 12 мл коллоидного раствора липосом из соевого лецитина или водным раствором кислоты хлористо-водородной 0,01 М, куда помещается диализная пробирка, заполненная 3 мл водного раствора кислоты хлористо-водородной 0,01 М, содержащего винпоцетин в концентрации 0,24 мг/мл, для проведения диализа используется мембрана, характеристика пропускания которой 14 кДа; после достижения выравнивания концентрация винпоцетина измеряется в диализной пробирке, погруженной в диализатор с раствором липосом и диализатор, заполненный раствором кислоты хлористо-водородной 0,01 М; определение величины адсорбции винпоцетина липосомами осуществляется по разности концентраций винпоцетина, вышедшего в диализную среду диализатора с водным раствором хлористо-водородной 0,01 М кислоты и диализатора с раствором липосом.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для отбора противовоспалительных средств, что позволяет осуществлять поиск биологически активных веществ с противовоспалительным действием в рядах производных антраниловой кислоты: N-замещенные антраниловые кислоты (1 ряд); гидразиды и амиды N-ацилантраниловых кислот (2 ряд); ариламиды N-ацил-М-алкенилантраниловых кислот (3 ряд).

Изобретение относится к медицине, а именно к фармацевктике, и может быть использовано для отбора производных антраниловой кислоты, обладающих противовоспалительным действием.

Изобретение относится к области медицины, в частности к определению лекарственного препарата метформин в смешанной слюне пациента, страдающего сахарным диабетом. Для этого 100 мкл интактной слюны переносится в микропробирки объемом 1,2 мл, добавляется 10 мкл раствора внутреннего стандарта в концентрации 1000 нг/мл, затем перемешивается на шейкере при 1200 об/мин в течение 2 мин, после чего проводится осаждение белков добавлением 300 мкл охлажденного до -20°С ацетонитрила, затем производится перемешивание на шейкере при 1200 об/мин в течение 4 мин, полученную смесь центрифугируют при 4000 об/мин при температуре +4°С в течение 15 минут, после чего надосадочная жидкость в количестве 50 мкл смешивается со 150 мкл воды и помещается в планшеты для определения концентрации метформина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, при этом линейный диапазон определения лекарственного препарата метформина составляет от 5 до 1600 нг/мл.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к способу количественного определения флавоноидов в листьях тополя черного. Способ количественного определения флавоноидов в листьях тополя черного, заключающийся в предварительном получении водно-спиртового извлечения из растительного сырья путем экстракции 1 г точной навески измельченного до размера частиц 1 мм растительного сырья 70%-ным этиловым спиртом, в пересчете на вещество флавоноидной природы, методом дифференциальной спектрофотометрии в отношении «сырье-экстрагент» - 1:30, при этом определение флавоноидов проводят при длине волны 414 нм в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье рассчитывают по формуле где х - содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин, %; D - оптическая плотность испытуемого раствора; Dо - оптическая плотность раствора Государственного стандартного образца рутина; m - масса сырья, г; mо - масса Государственного стандартного образца рутина, г; W - потеря в массе при высушивании, %; в случае отсутствия стандартного образца рутина целесообразно использовать теоретическое значение его удельного показателя поглощения, равное 240, где х - содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин, %; D - оптическая плотность испытуемого раствора; m - масса сырья, г; 240 - удельный показатель поглощения Государственного стандартного образца рутина при 414 нм; W - потеря в массе при высушивании, %.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к иммуногенным эпитопам URLC10, и может быть использовано в медицине для лечения пациента, страдающего раком.

Группа изобретений относится к фармацевтике и может быть использована для определения количественного содержания аскорбиновой кислоты (АК) в лекарственных средствах (ЛС).

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано в центрах контроля качества лекарственных средств и контрольно-аналитических лабораториях при проведении количественного определения суммы флавоноидов в траве монарды дудчатой ( fisiulosa L.).

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано для определения влажности воздушно-сухого лекарственного растительного сырья плодов расторопши пятнистой.

Изобретение относится к области измерительной техники, позволяющей измерять концентрации взвешенных в жидкости частиц, а более конкретно к когерентным флюктуационным нефелометрам (далее - КФН), в частности к сконструированным на их основе микробиологическим анализаторам, позволяющим измерять рост микробиологической флоры в том числе в биологических образцах в широком интервале значений мутности, в том числе с целью диагностики, и оценивать морфологический состав взвешенных микробных частиц.

Изобретение относится к аналитической химии, химико-фармацевтической промышленности, и может быть использовано для контроля качества синтетических лекарственных препаратов, растительного сырья и фитопрепаратов. Способ определения антиокислительной активности лекарственного растительного сырья и фитопрепаратов методом дифференциальной спектрофотометрии включает кипячение навески измельченного сырья в воде из расчета 1,0±0,1 г навески на 30 мл воды в течение 40-50 мин, охлаждение, процеживание через несколько слоев марли и отделение аликвотной части. Отделенную аликвотную часть разводят водой в объемном соотношении 1:4, полученный раствор смешивают с растворами медиаторной системы, состоящей из 0,0002 М раствора ферроцианида калия и 0,0002 М раствора феррицианида калия, в объемном соотношении 23:1:1 и измеряют оптическую плотность методом дифференциальной спектрофотометрии при длине волны 420±2 нм относительно раствора сравнения, представляющего собой 4 мл воды очищенной, доведенные до метки в мерной колбе вместимостью 50 мл свежеприготовленным извлечением, разведенным водой в объемном соотношении 1:4. Затем рассчитывают значение антиокислительной активности извлечения в пересчете на кислоту аскорбиновую в гмл раствора и содержание суммы БАВ, обладающих антиокислительной активностью в процентах по заявленным формулам. Изобретение обеспечивает повышение точности определения, а также возможность одновременного определения как антиокислительной активности извлечения, так и содержание суммы БАВ, обладающих антиокислительной активностью. Способ также позволяет стандартизировать растительное сырье и фитопрепараты по содержанию данных БАВ-антиокислителей и выявлять антиокислительную или проокислительную активность извлечений из растительного сырья. 5 ил., 2 табл.

Наверх