Создание профиля контролируемого высвобождения лекарственного вещества при использовании липосомной композиции в водных и безводных растворах



Создание профиля контролируемого высвобождения лекарственного вещества при использовании липосомной композиции в водных и безводных растворах
Создание профиля контролируемого высвобождения лекарственного вещества при использовании липосомной композиции в водных и безводных растворах
Создание профиля контролируемого высвобождения лекарственного вещества при использовании липосомной композиции в водных и безводных растворах
Создание профиля контролируемого высвобождения лекарственного вещества при использовании липосомной композиции в водных и безводных растворах
Создание профиля контролируемого высвобождения лекарственного вещества при использовании липосомной композиции в водных и безводных растворах

Владельцы патента RU 2712157:

ТиЭлСи БИОФАРМАСЬЮТИКАЛС, ИНК. (US)
ТАЙВАНЬ ЛИПОСОМ КОМПАНИ, ЭлТэДэ (TW)

Группа изобретений относится к фармацевтической промышленности, в частности к вариантам фармацевтической композиции для ингибирования роста раковых клеток. В одном из вариантов композиция включает компонент, формирующий частицу, выбранный из фосфолипида и смеси по меньшей мере одного фосфолипида и холестерина; 0,1-10 мМ иона сульфата декстрана или его фармацевтически приемлемой соли; 100-500 мМ сульфата аммония; амфипатическое терапевтическое средство или его фармацевтически приемлемую соль. В другом варианте композиции количество сульфата аммония составляет 150-450 мМ, а амфипатическое терапевтическое средство представляет собой алкалоид барвинка розового. Также предложены: липосома для доставки амфипатического терапевтического средства и способ ингибирования роста раковых клеток путем введения эффективного количества указанной фармацевтической композиции. Группа изобретений обеспечивает оптимальную терапевтическую эффективность и снижение токсического воздействия на кожу. 4 н. и 12 з.п. ф-лы, 4 ил., 11 табл., 10 пр.

 

Ссылка на родственные заявки

По настоящей заявке испрашивается приоритет в соответствии с заявкой на выдачу патента США с серийным №61/792850, поданной 15 марта 2013 года, полное раскрытие которой включено в настоящий документ посредством ссылки.

Область техники, к которой относится настоящее изобретение

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одну липосому, по меньшей мере один донор многовалентных противоионов или его фармацевтически приемлемую соль, по меньшей мере один донор одновалентных противоионов или его фармацевтически приемлемую соль и терапевтическое средство.

Предшествующий уровень техники настоящего изобретения

Липосомы широко использовались в качестве переносчика различных терапевтических средств in vivo. Желательно, чтобы такие липосомы обладали высокой эффективностью инкапсуляции и профилем продолжительного удержания (т.е., до достижения места приложения действия лекарственное вещество должно высвобождаться в минимальной степени).

Препарат NanoVNB® представляет собой липосомальный винорелбин, в котором используются липосомы для усиления удержания винорелбина до достижения им места приложения действия. В фазе I клинических испытаний препарата NanoVNB® действительно было выявлено его усиленное противораковое действие, но продолжительное удержание винорелбина in vivo также приводило к повышенной токсичности.

Таким образом, существует необходимость в получении липосомальной композиции, которую можно использовать для доставки терапевтического средства с регулируемым профилем удержания для достижения баланса между оптимальным противораковым действием и минимальным побочным действием. Настоящее изобретение направлено на решение этой задачи, а также других важных задач.

Краткое раскрытие настоящего изобретения

Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одну липосому, по меньшей мере один донор многовалентных противоионов или его фармацевтически приемлемую соль, по меньшей мере один донор одновалентных противоионов или его фармацевтически приемлемую соль и терапевтическое средство, его производное или фармацевтически приемлемую соль. Эта фармацевтическая композиция преимущественно обеспечивает регулируемый профиль удержания и регулируемое процентное содержание инкапсулированного терапевтического средства.

Согласно другому варианту осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одну липосому, содержащую компонент, формирующий частицу, выбранный из фосфолипида или смеси по меньшей мере одного фосфолипида и холестерина; от 0,1 мМ до 10 мМ донора многовалентных противоионов или его фармацевтически приемлемой соли; от 150 мМ до 450 мМ донора одновалентных противоионов или его фармацевтически приемлемой соли; и алкалоид барвинка розового.

Согласно третьему варианту осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одну липосому, содержащую компонент, формирующий частицу, выбранный из фосфолипида или смеси по меньшей мере одного фосфолипида и холестерина; от 1 миллиэквивалента (мэкв.) до 320 мэкв. донора многовалентных противоионов или его фармацевтически приемлемой соли; от 150 мМ до 450 мМ донора одновалентных противоионов или его фармацевтически приемлемой соли; и амфипатическое терапевтическое средство.

Настоящее изобретение также относится к способам ингибирования роста клеток злокачественной опухоли у субъекта, который в этом нуждается. Способ предусматривает стадию введения фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе, причем у субъекта снижается выраженность симптомов и признаков злокачественной опухоли. Этот способ преимущественно способствует усилению ингибирования роста клеток злокачественной опухоли и снижению токсичности.

Утверждения, содержащие эти термины, следует толковать таким образом, чтобы не ограничить настоящее изобретение, описанное в настоящем документе, или не ограничить значение или объем охраны приведенной ниже патентной формулы. Варианты осуществления настоящего изобретения, которые охватываются в данной патентной заявке, определяются приведенной ниже формулой изобретения, а не этим кратким раскрытием. Это краткое раскрытие представляет собой обобщенный обзор различных аспектов настоящего изобретения, и в нем рассматриваются некоторые концепции, которые дополнительно описаны в приведенном ниже разделе подробного раскрытия настоящего изобретения. Это краткое раскрытие не предназначено для установления ключевых или существенных признаков заявляемого изобретения, равно как и не предназначено для применения отдельно для определения объема охраны настоящего изобретения. Предмет изобретения следует понимать со ссылкой на соответствующие разделы полного описания, любые или все графические материалы и каждый пункт формулы изобретения.

Настоящее изобретение станет более понятным при рассмотрении текста заявки вместе с прилагаемыми графическими материалами и подробным описанием, которые приведены ниже.

Краткое описание фигур

На фиг. 1 показана преципитация натриевой соли сульфата декстрана и винорелбина в липосоме.

На фиг. 2 показан средний объем опухоли в группе, получавшей NanoVNB, в группе, получавшей LV304, и группе (контрольной), получавшей физиологический раствор.

На фиг. 3 показано среднее время выживания в группе, получавшей NanoVNB, в группе, получавшей LV304, и группе (контрольной), получавшей физиологический раствор.

На фиг. 4 показан показатель кожной токсичности в группе, получавшей NanoVNB, и в группе, получавшей LV304.

Подробное раскрытие настоящего изобретения

Определения

Следует понимать, что термины, приведенные выше и по всему раскрытию, если не указано иное, имеют приведенные ниже значения.

Используемые в настоящем документе формы единственного числа охватывают ссылку на множественное число, если из контекста явно не следует обратное.

Используемый в настоящем документе термин «эффективное количество», охватывает дозу фармацевтической композиции, которой достаточно для снижения выраженности симптомов и признаков злокачественной опухоли, которые включают, без ограничений, снижение массы тела, боль и массу опухоли, которую можно выявить либо клинически как пальпируемое образование, либо с помощью различных средств лучевой диагностики.

Используемый в настоящем документе термин «проведение лечения», «получающий лечение» или «лечение» охватывает превентивное (например, профилактическое), паллиативное и терапевтическое применение или результаты.

Термин «ингибирование» и «подавление» охватывает замедление или предотвращение роста.

Термин «субъект» может обозначать позвоночное животное, имеющее злокачественную опухоль, или позвоночное животное, которое, как считается, нуждается в лечении злокачественной опухоли. Субъекты включают теплокровных животных, таких как млекопитающие, такие как примат, и более предпочтительно, человек. Низшие приматы также относятся к субъектам. Термин «субъект» охватывает одомашненных животных, таких как кошки, собаки и т.д., сельскохозяйственных животных (например, крупный рогатый скот, лошади, свиньи, овцы, козы и т.д.) и лабораторных животных (например, мышь, кролик, крыса, песчанка, морская свинка и т.д.). Следовательно, в настоящем документе предусмотрено применение препаратов в ветеринарии и медицине.

Термин «донор противоионов» охватывает донора противоионов, способного к образованию соли с терапевтическим средством и не уменьшающего активность терапевтического средства. Согласно одному варианту осуществления терапевтическое средство представляет собой амфипатическую кислоту с суммарным отрицательным зарядом, донор противоионов представляет собой донор катионов или молекулу, соединенную ковалентной связью с одной или несколькими катионными функциональными группами. Согласно другому варианту осуществления терапевтическое средство представляет собой амфипатическое основание с суммарным положительным зарядом, донор противоионов представляет собой донор анионов или молекулу, соединенную ковалентной связью с одной или несколькими анионными функциональными группами. Донор противоионов обладает высокой растворимостью в компоненте, несущем средство в составе липосомы, но низкой проницаемостью через липосомальную мембрану (бислой). Таким образом, донор противоионов удерживается в компоненте, несущем средство, на протяжении нагрузки терапевтического средства и на протяжении хранения.

Все числа в настоящем документе можно понимать с учетом термина «приблизительно».

Используемый в настоящем документе термин «алкил» обозначает линейный или разветвленный, насыщенный, алифатический радикал, имеющий от 1 до приблизительно 10 углеродных атомов. Алкил может включать любое число атомов углерода, как, например, C1-2, С1-3, С1-4, С1-5, C1-6, С1-7, C1-8, С1-9, С1-10, С2-3, С2-4, С2-5, С2-6, С3-4, С3-5, С3-6, С4-5, С4-6 и С5-6. Например, С1-6 алкил включает, без ограничений, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил, изопентил, гексил и т.д. Алкил также может обозначать алкильные группы, имеющие вплоть до 20 атомов углерода, такие как, без ограничений, гептил, октил, нонил и децил.

Используемый в настоящем документе термин «арил» обозначает ароматическую кольцевую систему, имеющую любое подходящее число атомов в кольце и любое подходящее число колец. Арильные группы могут включать любое подходящее число атомов в кольце, как, например, 6, 7, 8, 9,10, 11, 12, 13,14, 15 или 16 атомов в кольце, а также от 6 до 10, от 6 до 12 или от 6 до 14 элементов цикла. Арильные группы могут представлять собой моноциклические группы из 15 атомов, которые конденсируются с образованием бициклических или трициклических групп, или соединяются посредством связи с образованием биарильной группы. Типичные арильные группы включают фенил, нафтил и бифенил. Другие арильные группы включают бензил, имеющий метиленовую связывающую группу. Некоторые арильные группы имеют от 6 до 12 элементов цикла, таких как фенил, нафтил или бифенил. Другие арильные группы имеют от 6 до 10 элементов цикла, таких как фенил или нафтил. Некоторые другие арильные группы имеют от 6 до 20 элементов цикла, таких как фенил. «Замещенные арильные» группы могут быть замещены одной или несколькими группами, выбранными из галогено-, гидрокси-, амино-, алкиламино-, амидо-, ацил-, нитро-, циано- и алкоксигрупп.

«Фармацевтически приемлемые соли» амфипатической кислоты по настоящему изобретению представляют собой соли, образующиеся с основаниями, а именно катионные соли, такие как соли щелочных и щелочноземельных металлов, таких как натрий, литий, калий, кальций, магний, а также соли четвертичного аммония, как, например, соли аммония, триметиламмония, диэтиламмония и трис-(гидроксиметил)-метил-аммония.

Сходные кислотно-аддитивные соли, такие как соли минеральных кислот, органических карбоновых и органических сульфоновых кислот, например, соляной кислоты, метансульфоновой кислоты, малеиновой кислоты, также, возможно, вводят в состав основного терапевтического средства с компонентом, таким как пиридил, входящим в составе структуры.

Липосома

Используемый в настоящем документе термин «липосома» означает мультивезикулярную липосому (MVL), мультиламеллярные везикулы (MLV) или небольшие или большие моноламеллярные везикулы (ULV). Липосомы имею размер наночастиц и содержат компонент, формирующий частицу, и компонент-носитель вещества. Компонент, формирующий частицу, образует закрытый липидный барьер, а компонент-носитель вещества представляет собой среду, окруженную компонентом, формирующим частицу.

Компонент, формирующий частицу, можно получить из фосфолипида или смеси по меньшей мере одного фосфолипида и холестерина. Примеры фосфолипида, используемого в настоящем изобретении, включают, без ограничений, фосфатидилхолин (PC), фосфатидилглицерин (PG), фосфатидилэтаноламин (РЕ), фосфатидилсерин (PS), фосфатидную кислоту (РА), фосфатидилинозитол (PI), яичный фосфатидилхолин (ЕРС), яичный фосфатидилглицерин (EPG), яичный фосфатидилэтаноламин (ЕРЕ), яичный фосфатидилсерин (EPS), яичную фосфатидную кислоту (ЕРА), яичный фосфатидилинозитол (EPI), соевый фосфатидилхолин (SPC), соевый фосфатидилглицерин (SPG), соевый фосфатидилэтаноламин (SPE), соевый фосфатидилсерин (SPS), соевую фосфатидную кислоту (SPA), соевый фосфатидилинозитол (SPI), дипальмитоилфосфатидилхолин (DPPC), 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфатидилхолин (DOPC), димиристоилфосфатидилхолин (DMPC), дипальмитоилфосфатидилглицерин (DPPG), диолеоилфосфатидилглицерин (DOPG), димиристоилфосфатидилглицерин (DMPG), гексадецилфосфохолин (НЕРС), гидрогенизированный соевый фосфатидилхолин (HSPC), дистеароилфосфатидилхолин (DSPC), дистеароилфосфатидилглицерин (DSPG), диолеоилфосфатидилэтаноламин (DOPE), пальмитоилстеарилфосфатидилхолин (PSPC), пальмитоилстеароилфосфатидилглицерин (PSPG), моноолеоилфосфатидилэтаноламин (МОРЕ), 1-пальмитоил-2-олеоил-sn-глицеро-3-фосфатидилхолин (РОРС), дистеарилфосфатидилэтаноламин (DSPE), дипальмитоилфосфатидилсерин (DPPS), 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфатидилсерин (DOPS), димиристоилфосфатидилсерин (DMPS), дистеарилфосфатидилсерин (DSPS), дипальмитоилфосфатидную кислоту (DPPA), 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфатидную кислоту (DOPA), димиристоилфосфатидную кислоту (DMPA), дистеарилфосфатидную кислоту (DSPA), дипальмитоилфосфатидилинозитол (DPPI), 1,2-диолеил-sn-глицеро-3-фосфатидилинозитол (DOPI), димиристоилфосфатидилинозитол (DMPI), дистеарилфосфатидилинозитол (DSPI) и их смесь.

Согласно одному варианту осуществления компонент, формирующий частицу, не содержит жирную кислоту или катионный липид (т.е., липид, имеющий суммарный положительный заряд при физиологическом рН).

Согласно другому варианту осуществления компонент, формирующий частицу, включает гидрофильный полимер, представляющий собой длинноцепочечный высокогидратированный нейтральный полимер с гибкой структурой, который присоединен к молекуле фосфолипида. Не ограничиваясь какой-либо теорией, предполагается, что гидрофильный полимер стабилизирует липосому и увеличивает время полужизни в циркуляторном русле in vivo. Примеры гидрофильного полимера включают, без ограничений, полиэтиленгликоль (ПЭГ) с молекулярной массой от приблизительно 2000 до приблизительно 5000 дальтон, метокси-ПЭГ (мПЭГ), ганглиозид GMi, полисиаловую кислоту, полимолочную кислоту (также называется полилактидом), полигликолиевую кислоту (также называется полигликолидом), сополимер полимолочной и полигликолевой кислот, поливиниловый спирт, поливинилпирролидон, полиметоксазолин, полиэтилоксазолин, полигидроксиэтилоксазолин, полигидроксипропилоксазолин, полиаспартамид, полигидроксипропилметакриламид, полиметакриламид, полидиметилакриламид, поливинилметилэфир, полигидроксиэтилакрилат, дериватизированные виды целлюлозы, такие как гидроксиметилцеллюлоза или гидроксиэтилцеллюлоза и синтетические полимеры.

Согласно одной группе вариантов осуществления фосфолипиды выбраны из DSPC и DSPE-ПЭГ, причем молекулярная масса ПЭГ составляет приблизительно 2000 дальтон (в дальнейшем в настоящем документе используется обозначение DSPE-ПЭГ2000).

Согласно другой группе вариантов осуществления молярное соотношение DSPC, холестерина и DSPE- ПЭГ2000 составляет приблизительно 3:2:0,45.

Компонент, формирующий частицу, может дополнительно включать липидный конъюгат антитела или пептид, который действует как адресная группа для обеспечения специфического связывания липосомы с клеткой-мишенью, в которой содержится молекула-мишень. Примеры молекул-мишеней включают, без ограничений, рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), рецептор фактора роста эндотелия сосудов (VEGFR), раково-эмбриональный антиген (СЕА) и erbB-2/neu (HER2).

Липосомы имеют средний диаметр частиц от приблизительно 30 нм до приблизительно 200 нм, более предпочтительно от приблизительно 50 нм до приблизительно 150 нм.

Липосомы, получаемые в настоящем изобретении, можно приготовить с помощью общепринятых способов, используемых для получения везикул. Эти способы включают способ впрыскивания эфирного раствора липидов (Deamer el al, Acad. Sci. (1978) 308:250), способ с применением поверхностно-активного вещества (Brunner elal, Biochim. Biophys. Acta (1976) 455: 322), способ замораживания-оттаивания (Pick el al, Arch. Biochim. Biophys. (1981) 212: 186), способ обращенно-фазового выпаривания (Szoka el al, Biochim. Biophys. Ada. (1980) 601: 559 71), способ обработки ультразвуком (Huang el al, Biochemistry (1969) 8: 344), способ впрыскивания этанольного раствора липидов (Kremer el al, Biochemistry (1977) 16: 3932), экструзионный способ (Hope el al, Biochim. Biophys. Acta (1985) 812:55 65), способ с применением френч-пресса (Barenholz etal, FEBSLett. (1979) 99:210) и способы, подробно описанные в Szoka, F., Jr., el al, Ann. Rev. Biophys. Bioeng. 9:467 (1980). Все описанные выше способы относятся к основным технология для формирования липосомальных везикул и эти способы включены в настоящий документ посредством ссылки.

Терапевтическое средство

Терапевтическое средство может представлять собой любое подходящее терапевтическое средство. Согласно одному варианту осуществления терапевтическое средство представляет собой противораковое средство. Неограничивающие примеры противоракового средства включают алкалоид барвинка розового, ингибитор топоизомеразы, таксановое соединение, его производное или фармацевтически приемлемую соль.

Примеры алкалоида барвинка розового включают, без ограничений, винорелбин, винкристин, винбластин и виндестин.

Примеры ингибитора топоизомеразы включают, без ограничений, топотекан, камптотецин, иринотекан, этопозид и доксорубицин.

Примеры таксанового соединения включают, без ограничений, паклитаксел.

Донор одновалентных противоионов

Согласно одному варианту осуществления терапевтические средства представляют собой амфипатические основания с суммарным положительным зарядом, донор одновалентных противоионов в составе липосомы можно выбрать из аниона или молекулы, которая ковалентно связана с анионной функциональной группой. Анион или анионная функциональная группа имеет валентность -1, -2 или -3.

Неограничивающие примеры донора одновалентных противоионов включают бензолсульфоновую кислоту и 4-гидроксибензолсульфоновую кислоту, которые проиллюстрированы ниже:

бензолсульфоновая кислота, и

4-гидроксибензолсульфоновая кислота.

Согласно другому варианту осуществления фармацевтически приемлемая соль донора одновалентных противоионов включает а) анион или молекулу, которая ковалентно связана с анионной функциональной группой; и б) один или несколько катионов, причем анион или анионная функциональная группа образует ионные пары с катионами.

Анион или анионную функциональную группу можно выбрать из одного или нескольких из следующих ионов: цитрата, сульфата, сульфоната, фосфата, пирофосфата, тартрата, сукцината, малеата, бората, карбоксилата, глюкуроната, хлорида, гидроксида, нитрата, цианата или бромида. Согласно одному варианту осуществления анион и анионная функциональная группа выбрана из одного или нескольких из следующих ионов: цитрата, сульфата, сульфоната, фосфата, пирофосфата или карбоксилата.

Согласно еще одному варианту осуществления молекула, связанная с анионной функциональной группой, может представлять собой природное или синтетическое, органическое или неорганическое соединение. Примеры такой молекулы включают, без ограничений, молекулу неполимерной природы, как, например, бензол, олигонуклеотид и моносахарид или полимер, такой как поливинил, многоатомный спирт, такой как глицерин, сорбит и маннит, полисахарид, полипептиды, гликопротеины и полинуклеотид.

Катион фармацевтически приемлемой соли можно выбрать из одного или нескольких из следующих ионов: иона кальция, иона магния, иона натрия, иона калия, иона марганца или NR4+, где R представляет собой Н или органический остаток, такой как алкил или арил, или их смесь. Согласно одному варианту осуществления катион представляет собой аммоний.

Второй вариант осуществления настоящего изобретения относится к амфипатическиму терапевтическому средству, обладающему кислотными свойствами, и донор одновалентных противоионов в составе липосомы может быть выбран из или включает катион или молекулу, которая ковалентно связана с катионной функциональной группой. Катион или катионная функциональная группа имеет валентность +1, +2 или +3.

Фармацевтически приемлемая соль донора одновалентных противоионов включает а) катион или молекулу, которая ковалентно связана с катионной функциональной группой; и б) один или несколько анионов, причем катион или катионная функциональная группа образует ионные пары с одним или несколькими анионами.

Согласно одному варианту осуществления донор одновалентных противоионов представляет собой сульфат аммония. Согласно другому варианту осуществления концентрация донора одновалентных противоионов составляет приблизительно от 100 до приблизительно 500 мМ, или включает любое значение или диапазоны в этих пределах с шагом 10 мМ (например, 80 мМ, 320 мМ). Согласно еще одному варианту осуществления концентрация донора одновалентных противоионов составляет от приблизительно 50 до приблизительно 450 мМ. Согласно еще одному варианту осуществления концентрация донора одновалентных противоионов составляет от приблизительно 200 мМ до приблизительно 400 мМ. Согласно еще одному варианту осуществления концентрация донора одновалентных противоионов составляет приблизительно 300 мМ.

Многовалентный противоион

Согласно одному варианту осуществления терапевтическое средство представляет собой амфипатическое основание, и по меньшей мере один донор многовалентных противоионов или его фармацевтически приемлемая соль образует нерастворимую соль в составе липосомы.

Согласно другому варианту осуществления донор многовалентных противоионов включает молекулу, которая ковалентно связана с несколькими анионными функциональными группами, причем анионная функциональная группа имеет валентность -1, -2 или -3. Фармацевтически приемлемая соль донора многовалентных противоионов включает а) молекулу, ковалентно связанную с несколькими анионными функциональными группами; и б) один или несколько катионов, причем анионная функциональная группа образует ионные пары с катионами.

Анионную функциональную группу многовалентного противоиона выбирают из одного или нескольких из следующих ионов: цитрата, сульфата, сульфоната, фосфата, пирофосфата, тартрата, сукцината, малеата, бората, карбоксилата, глюкуроната, хлорида, гидроксида, нитрата, цианата или бромида. Согласно одному варианту осуществления анионная функциональная группа выбрана из одного или нескольких из следующих ионов: цитрата, сульфата, сульфоната, фосфата, пирофосфата или карбоксилата. Каждая из анионных функциональных групп донора многовалентных противоионов может отличаться от другой. Например, хондроитинсульфат представляет собой донор многовалентных противоионов с разными анионными функциональными группами на одной и той же молекуле, как проиллюстрировано ниже:

Катион можно выбрать из одного или нескольких из следующих ионов: иона кальция, иона магния, иона натрия, иона калия, иона марганца, NR4, где R представляет собой Н или органический остаток, такой как алкил или арил, и их смесей. Согласно одному варианту осуществления катион представляет собой аммоний.

Другой вариант осуществления настоящего изобретения относится амфипатическиму терапевтическому средству, обладающему кислотными свойствами, и донор многовалентных противоионов в составе липосомы включает молекулу, которая ковалентно связана с несколькими катионными функциональными группами, и указанная катионная группа имеет валентность +1, +2 или +3. Амфипатическая кислота образует нерастворимую соль с донором многовалентных противоионов и заключена в липосому.

Фармацевтически приемлемая соль донора многовалентных противоионов включает а) молекулу, которая ковалентно связана с одной или несколькими катионными функциональными группами; и б) один или несколько анионов, причем катионная функциональная группа образует ионные пары с анионами.

Молекула донора многовалентных противоионов может представлять собой молекулу природного или синтетического, органического или неорганического соединения. Неограничивающие примеры такой молекулы включают молекулу неполимерной природы, такую как олигонуклеотид и моносахарид, или полимер, такой как поливинил, многоатомные спирты, такие как глицерин, сорбит и маннит, полисахариды, такие как декстран и хитозан, полипептиды, гликопротеины и полинуклеотиды.

Согласно одному варианту осуществления донор многовалентных противоионов выбирают из одного или нескольких из следующих веществ: сульфатированного гепарина, каррагенана, муцина, сульфатированной гиалуроновой кислоты, хондроитинсульфатов, кератинсульфатов, дерматансульфатов или сульфатированного полисахарида. Неограничивающий пример сульфатированного полисахарида включает сульфат декстрана с молекулярной массой от приблизительно 1600 дальтон до приблизительно 8000 дальтон.

Согласно одному варианту осуществления фармацевтически приемлемую соль сульфата декстрана выбирают из аммониевой соли сульфата декстрана или натриевой соли сульфата декстрана.

Фармацевтическая композиция

Согласно одному варианту осуществления фармацевтическая композиция настоящего изобретения содержит по меньшей мере одну липосому, содержащую: компонент, формирующий частицу, выбранный из фосфолипида или смеси по меньшей мере одного фосфолипида и холестерина; по меньшей мере одного донора многовалентных противоионов или его фармацевтически приемлемой соли; по меньшей мере одного донора одновалентных противоионов или его фармацевтически приемлемой соли; и амфипатического терапевтического средства, его производного или его фармацевтически приемлемой соли.

Согласно другому варианту осуществления фармацевтическая композиция настоящего изобретения содержит по меньшей мере одну липосому, содержащую: компонент, формирующий частицу, выбранный из смеси одного или нескольких фосфолипидов и холестерина; по меньшей мере одного донора многовалентных противоионов или его фармацевтически приемлемой соли с концентрацией от приблизительно 0,1 мМ до приблизительно менее чем 10 мМ; по меньшей мере одного донора одновалентных противоионов или его фармацевтически приемлемой соли с концентрацией от приблизительно 150 мМ до приблизительно 450 мМ; и алкалоида барвинка розового. Согласно еще одному варианту осуществления компонент, формирующий частицу, дополнительно содержит гидрофильный полимер.

Преимущественно путем комбинирования донора многовалентных противоионов или его фармацевтически приемлемой соли и донора одновалентных противоионов или его фармацевтически приемлемой соли можно регулировать эффективность инкапсуляции и/или профиль удержания терапевтического средства для обеспечения терапевтической эффективности, при этом минимизируя токсичность.

Согласно одной группе вариантов осуществления анионные функциональные группы донора многовалентных противоионов или его фармацевтически приемлемой соли имеют общий эквивалент валентности на литр от приблизительно 1 до приблизительно 160 миллиэквивалентов (мэкв.), от приблизительно 3 до 160 мэкв., от приблизительно 1 до приблизительно 320 мэкв., от приблизительно 1 до приблизительно 250 мэкв., от приблизительно 3 до приблизительно 250 мэкв., от приблизительно 160 до приблизительно 250 мэкв., от приблизительно 160 до приблизительно 320 или любое значение или диапазоны от 1 до 320 мэкв. с шагом 1 мэкв. (например, 23 мэкв., 233 мэкв.). Согласно другому варианту осуществления анионная функциональная группа донора многовалентных противоионов или его фармацевтически приемлемой соли представляет собой сульфатную группу.

Согласно другой группе вариантов осуществления концентрация донора многовалентных противоионов или его фармацевтически приемлемой соли составляет от приблизительно 2 мМ до менее чем 8 мМ, от приблизительно 0,1 мМ до менее чем 8 мМ, от приблизительно 0,1 мМ до менее чем приблизительно 10 мМ, от приблизительно 2 мМ до менее чем 10 мМ или включает любое значение или диапазоны в пределах от 0,1 мМ до 10 мМ с шагом 0,1 мМ (например, 1,5 мМ, 8,3 мМ).

Фармацевтическую композицию готовят с учетом любых подходящих путей введения, включая внутричерепной, внутримозговой, внутрижелудочковый, внутриоболочечный, внутрипозвоночный, пероральный, местный, ректальный, внутрикожный, подкожный, внутривенный, внутримышечный, интраназальный, внутрибрюшинный, внутрь опухоли и тому подобное.

Дозировку фармацевтической композиции по настоящему изобретению может определить специалист в данной области согласно вариантам реализации. Предусмотрены лекарственные формы в виде однократных или многократных доз, причем каждая обладает преимуществами в определенных клинических ситуациях. Согласно настоящему изобретению фактическое количество фармацевтической композиции, которое необходимо ввести, можно изменять в соответствии с возрастом, массой, общим состоянием здоровья субъекта, который должен пройти лечение, видом злокачественной опухоли, токсичностью и зависит от усмотрения медицинских работников.

Согласно некоторым вариантам осуществления по меньшей мере часть терапевтического средства (такого как винорелбин) образует соль с фармацевтически приемлемой солью донора многовалентных противоионов и преципитирует во внутрилипосомальном водном ядре, как видно из фиг. 1.

Способ ингибирования роста клеток злокачественной опухоли Настоящее изобретение относится к способам ингибирования роста клеток злокачественной опухоли у субъекта, который предусматривает стадию введения эффективного количества фармацевтической композиции, описанной в настоящем документе, субъекту, который в этом нуждается, в результате чего у субъекта снижается выраженность симптомов и признаков злокачественной опухоли и/или снижается токсичность.

Фармацевтическую композицию можно вводить отдельно или в качестве вспомогательного лекарственного средства при оперативном вмешательстве, например, до оперативного вмешательства для уменьшения размера опухоли и/или после оперативного вмешательства для уменьшения вероятности метастазов, например, за счет ингибирования роста и миграции циркулирующих опухолевых клеток через кровоток.

Фармацевтическую композицию можно вводить до, после или одновременно с одним или несколькими противораковыми средствами. Противораковое средство включает общепринятое химиотерапевтическое средство, целевую терапию злокачественной опухоли или радиотерапию.

Общепринятое химиотерапевтическое средство включает ингибитор синтеза ДНК, алкилирующее средство, антифолатное средство, ингибитор метаболизма или их комбинацию.

Целевая терапия злокачественной опухоли включает применение лекарственных средств, которые ингибируют рост клеток злокачественной опухоли путем воздействия на конкретные молекулы-мишени, принимающие участие в канцерогенезе и росте злокачественной опухоли, в отличие от простого воздействия на быстро делящиеся клетки (например, как в случае с общепринятым химиотерапевтическим средством). Целевая терапия злокачественной опухоли включает применение ингибитора киназ, ингибитора ангиогенеза, ингибитора рецептора эпидермального фактора роста (EGFR), ингибитора рецептора HER2/neu или их комбинации.

В радиотерапии применяют высокоэнергетическое излучение для уменьшения опухоли и уничтожения клеток злокачественной опухоли. Примеры радиотерапии включают рентгеновское излучение, гамма-излучение и заряженные частицы.

Следующие примеры дополнительно иллюстрируют настоящее изобретение. Эти примеры приведены лишь с целью иллюстрации настоящего изобретения и не должны толковаться как ограничивающие объем охраны настоящего изобретения.

Пример 1: получение липосом

Липосомы получали по способу впрыскивания раствора липидов. Липиды, включая DSPC, DSPE-ПЭГ2000 и холестерин, комбинировали в молярном соотношении 3:0,045:2 и растворяли в 99,9% этаноле приблизительно при 60°С во флаконе. Для растворения липидов использовали настольную ультразвуковую ванну.

Раствор растворенных липидов добавляли в 1,0 мМ раствор фосфата натрия при 100 мл/минуту с использованием перистальтического насоса, и два раствора смешивали. Затем липидную смесь пропускали 6-10 раз через поликарбонатную мембрану с размером пор 0,2 мкм и 0,1 мкм, соответственно. Образовались липосомы (или большие мультиламеллярные везикулы), и средний диаметр везикул составлял приблизительно 100-120 нм (измеренный с помощью Malvern ZetaSizer Nano ZS - 90).

Смесь липосом диализировали и концентрировали с применением системы для тангенциальной поточной фильтрации против 0,9% (масс/масс.) хлорида натрия и 9% (масс/масс.) раствора сахарозы с использованием Millipore Pellicon 2 Mini Ultrafiltration Module Biomax-100С (0,1 м), и затем стерилизовали с применением 0,2 мкм стерильного фильтра.

Пример 2: влияние донора одновалентных противоионов на эффективность инкапсуляции и профиль удержания

Фармацевтическую композицию готовили путем смешивания липосом, полученных в Примере 1, с сульфатом аммония, донором одновалентных противоионов. Был установлен градиент через липидную бислойную мембрану липосомы с применением 300 мМ и 600 мМ сульфата аммония для дистанционной нагрузки винорелбина. Эффективность инкапсуляции (нагрузки) и профиль удержания липосомального винорелбина оценивали in vitro с применением способа на основе высвобождения в плазму крови, и результаты суммированы в Таблице 1.

Результаты: данные показывают, что сульфат аммония способствовал нагрузке или инкапсуляции винорелбина в липосому. Однако сульфат аммония в меньшей степени способствовал удержанию винорелбина в липосоме, причем менее 30% винорелбина оставалось инкапсулированным в липосоме через 24 часа после инкубации с плазмой крови.

Таблица 1
Характеристики фармацевтических композиций, содержащих доноры одновалентных противоионов
Фармацевтическая композиция Донор одновалентных противоионов Размер частиц [нм] Эффективность инкапсуляции [%] % инкапсулированного винорелбина, оставшегося через 24 часа после инкубации с плазмой крови
LV001 300 мМ сульфата аммония 93,3 93 28,7
LV006 600 мМ сульфата аммония 93,6 93 24,7

Пример 3: влияние донора многовалентных противоионов на эффективность инкапсуляции и профиль удержания

Из натриевой соли сульфата декстрана с молекулярной массой 8000 (8K) Дальтон получали аммониевую соль сульфата декстрана (фармацевтически приемлемую соль сульфата декстрана) с применением ионообменной колонки DOWEX. Две фармацевтические композиции получали путем смешивания липосом, полученных в Примере 1, с 4 мМ и 8 мМ аммониевой соли сульфата декстрана, соответственно, с последующей дистанционной нагрузкой приблизительно 2 мг Винорелбина, инкубированного приблизительно при 60°С.

Эффективность инкапсуляции и профиль удержания липосомального винорелбина в этих двух фармацевтических композициях оценивали in vitro с применением способа на основе высвобождения в плазму крови, и результаты суммированы в Таблице 2.

Результаты: для 8 мМ аммониевой соли сульфата декстрана эффективность инкапсуляции составляла 93%, тогда как эффективность инкапсуляции для 4 мМ аммониевой соли сульфата декстрана была ниже 90%. Аналогичным образом, состав LV009, приведенный в Таблице 4, включал только донор многовалентных противоионов и характеризовался эффективностью инкапсуляции менее 90%, и уровнем удержания 98,74% через 24 часа после инкубации в плазме крови.

Таблица 2
Характеристики фармацевтических композиций, содержащих доноры многовалентных противоионов.
Фармацевтическая композиция Соль донора многовалентных противоионов Размер частиц Эффективность инкапсуляции
Аммониевая соль сульфата декстрана (MW=8K) (нм) (%)
LV702 4 мМ 114 84
LV703 8 мМ 114 93

Пример 4: влияние комбинации доноров одно- и многовалентных противоионов Для оценки влияния комбинации доноров одно- и многовалентных противоионов на профиль удержания липосомального винорелбина проводили исследование in vitro.

Липосомы, полученные согласно Примеру 1, смешивали с 300 мМ сульфата аммония (донор одновалентных противоионов) и различными концентрациями натриевой соли сульфата декстрана (соль донора многовалентных противоионов).

Эффективность инкапсуляции и профиль удержания для различных видов липосомального винорелбина оценивали in vitro с применением способа на основе высвобождения в плазму крови через 24 часа, и результаты суммированы в Таблице 3.

Результаты: данные демонстрируют, что различные комбинации доноров одно- и многовалентных противоионов позволяют сохранить эффективность инкапсуляции винорелбина, при этом размер липосом составлял приблизительно 100 нм. В дополнение к этому, профиль удержания липосомального винорелбина зависит от концентрации донора многовалентных противоионов. Применение 8 мМ натриевой соли сульфата декстрана ассоциировано с более высоким процентом удержания винорелбина через 24 часа (78,9%), чем применение 2 мМ натриевой соли сульфата декстрана (51,8%).

Таблица 3
Характеристики липосомального винорелбина в комбинации с донором одно- и многовалентных противоионов
Фармацевтическая композиция Виды и концентрация донора противоионов (мМ) Размер частиц Эффективность инкапсуляции % инкапсулированного винорелбина, оставшегося через 24 часа после инкубации с плазмой крови
Сульфат аммония Натриевая соль сульфата декстрана нм % %
LV301 300 2 106,2 101,6 51,8
LV302 300 4 104,5 106,3 67,3
LV303 300 8 101,5 104,6 78,9

Пример 5: влияние различных солей донора многовалентных противоионов Для оценки влияния разных солей донора многовалентных противоионов на профиль удержания липосомального винорелбина проводили исследование in vitro.

Липосомы, полученные согласно Примеру 1, смешивали с 300 мМ сульфата аммония (AS) и двумя разными солями донора многовалентных противоионов: натриевой солью сульфата декстрана (DS) и аммониевой солью DS.

Эффективность инкапсуляции и профиль удержания липосомального винорелбина оценивали in vitro с применением способа на основе высвобождения в плазму крови через 24 часа, и результаты суммированы в Таблице 4.

Результаты: данные показывают, что натриевая соль и аммониевая соль сульфата декстрана в равной степени способствовали удержанию винорелбина в липосоме через 24 часа после инкубации в плазме крови. В дополнение к этому, когда концентрация донора многовалентных противоионов или его соли составляет 10 мМ. профиль удержания, характерный для комбинации одно- и донора многовалентных противоионов (100% и 94,2% винорелбина, оставшегося в липосоме через 24 часа), был сходным с профилем удержания, характерным для композиции донора многовалентных противоионов (98,7% винорелбина, оставшегося в липосоме через 24 часа). Эти данные отличаются от данных, приведенных в Таблице 3, причем когда концентрация донора многовалентных противоионов составляла менее 10 мМ, профиль удержания липосомального винорелбина зависел от концентрации донора многовалентных противоионов.

Таблица 4
Характеристики липосомального винорелбина в комбинации с донором одно- и многовалентных противоионов
Фармацевтическая композиция Комбинация доноров противоионов Размер частиц (нм) Эффективность инкапсуляции % инкапсулированного винорелбина, оставшегося через 24 часа после инкубации с плазмой крови
LV007 300 мМ AS/10 мМ натриевой соли DS 112,7 85,1% 100
LV008 300 мМ AS/10 мМ аммониевой соли DS 114,1 83,7% 94,2
LV009 10 мМ 108,8 89,4% 98,7

аммониевой соли DS

Пример 6: влияние различий в молекулярной массы донора многовалентных противоионов

Оценивали влияние молекулярной массы донора многовалентных противоионов на профиль удержания липосомального винорелбина. Липосомы, полученные согласно Примеру 1, смешивали с сульфатом аммония и сульфатом декстрана с молекулярной массой 5K и 8K, соответственно.

Эффективность инкапсуляции и профиль удержания для различных видов липосомального винорелбина оценивали in vitro с применением способа на основе высвобождения в плазму крови через 24 часа, и результаты суммированы в Таблице 5.

Результаты: общая валентность донора многовалентных противоионов влияет на профиль удержания липосомального винорелбина. Данные свидетельствуют о том, что применение донора многовалентных противоионов с большей валентностью ассоциировано с увеличением количества инкапсулированного винорелбина через 24 часа.

Таблица 5
Характеристики липосомального винорелбина, использованного с донором многовалентных противоионов с разной молекулярной массой.
Фармацевтическая композиция Концентрация сульфата аммония (мМ) Концентрация сульфата декстрана (мМ)/молекулярная масса (К) Размер частиц (нм) Общая валентность (мэкв.) % инкапсулированного винорелбина, оставшегося через 24 часа после инкубации с плазмой крови
LV108 300 3 мМ/5K 110,0 73,68 55,9
LV102 300 6 мМ/5K 114,5 147,36 67,7
LV301 300 2 мМ/8K 106,2 78,64 51,8
Фармацевтическая композиция Концентрация сульфата аммония (мМ) Концентрация сульфата декстрана (мМ)/молекулярная Размер частиц (нм) Общая валентность (мэкв.) % инкапсулированного винорелбина, оставшегося через 24

масса (K) часа после инкубации с плазмой крови
LV302 300 4 мМ/8K 104,5 157,28 67,3

Пример 7: регуляция профиля удержания с применением комбинации одно- и донора многовалентных противоионов

Были получены различные фармацевтические композиции путем смешивания липосом, полученных в Примере 1, с различными концентрациями сульфата аммония и различными концентрациями сульфата декстрана с последующей дистанционной нагрузкой винорелбина. Эффективность инкапсуляции и профиль удержания липосомального винорелбина оценивали in vitro с применением способа на основе высвобождения в плазму крови через 24 часа, и результаты суммированы в Таблицах 6-8.

Результаты, приведенные в Таблице 6: через 72 часа 72,2% инкапсулированного винорелбина все еще оставалось в составе композиции NanoVNB (эта фармацевтическая композиция содержит только донор многовалентных противоионов - октасульфат триэтиламина), и этот высокий уровень удержания через 72 часа мог приводить к токсичности, прежде всего кожной токсичности. С другой стороны, все количество инкапсулированного винорелбина высвобождалось из композиции LV005 (эта фармацевтическая композиция содержит только донор одновалентных противоионов) через 72 часа, и это ассоциировано с низкой терапевтической эффективностью. Путем комбинирования доноров одно- и многовалентных противоионов, был получен целый ряд профилей удержания липосомального винорелбина. Было отмечено, что общий эквивалент валентности донора многовалентных противоионов или фармацевтически приемлемой соли составляет от приблизительно 1 до приблизительно 240 мэкв.

Таблица 6
характеристики фармацевтических композиций, содержащих 100 мМ и 300 мМ донора одновалентных противоионов и различные концентрации донора многовалентных противоионов
Фармацевтическая композиция Сульфат декстрана Общая валентность Сульфат аммония % оставшегося инкапсулированного винорелбина

MW мМ мэкв. мМ Через 24 часа Через 72 часа
LV005 - - 300 19,8 не обнаружено
LV305 8K 0,3 11,79 300 44,1 27,1
LV306 0,6 23,59 Не исследовали 31,6
LV301 2 78,62 59,2 44,4
LV304 3 117,93 65,1 Не исследовали
Фармацевтическая композиция Сульфат декстрана Общая валентность Сульфат аммония % оставшегося инкапсулированного винорелбин
MW мМ мэкв. мМ Через 24 часа Через 72 часа
LV302 4 157,24 77,1 58,6
LV303 8 314,48 90,1 Неисследовали
LV402 1,6K 0,25 1,97 47,4 16,5
LV403 0,5 3,93 53,5 20,7
LV404 1 7,86 53,3 24,3
LV40I 1,5 11,79 39 20
NanoVNB 1,2K 75 мМ октасульфата триэтиламина 600 - 82,2 72,2
LV307 8K 6 235,86 300 49,1 19,6
LV801 8K 4 157,2 100 55,8 15,3
Таблица 7
характеристики фармацевтических композиций, содержащих различные концентрации донора одновалентных противоионов и фиксированную концентрацию (0,3 мМ) донора многовалентных противоионов

Фармацевтическая композиция Виды и концентрация донора противоионов (мМ) Размер частиц Эффективность инкапсуляции
Сульфат аммония Натриевая соль сульфата декстрана нм %
LV801 50 0,3 102,3 44,4
LV802 100 0,3 101,2 72.4
LV803 200 0,3 106,9 102,8
LV305 300 0,3 122,1 102,6
LV804 400 0,3 106,1 87,9
LV805 500 0,3 111,2 70,4
LV806 600 0,3 106,5 48,3

Результаты, приведенные в Таблице 7: эффективность инкапсуляции винорелбина была выше 70% в случае применения от 100 мМ до 500 мМ сульфата аммония.

Таблица 8
характеристики фармацевтических композиций, содержащих различные концентрации донора одновалентных противоионов и фиксированную концентрацию (0,3 мМ) донора многовалентных противоионов
Фармацевтическая композиция Виды и концентрация донора противоионов (мМ) Размер частиц Эффективность инкапсуляции % инкапсулированного винорелбина, оставшегося через 24 часа после инкубации с плазмой крови
Сульфат аммония Натриевая соль сульфата декстрана нм % %
NanoVNB 97,2 100,9 80,3
LV803 200 0,3 106,9 102,8 32,0

LV305 300 0,3 122,1 102,6 44,1
LV804 400 0,3 106,1 87,9 37,4

Результаты, приведенные в Таблице 8: отмечено удержание более 30% липосомального винорелбина после 24-часовой инкубации с применением 200-400 мМ сульфата аммония (донор одновалентных противоионов).

Пример 8: оценка противоракового действия in vivo с применением клеток рака толстой кишки человека НТ-29

Была проведена оценка in vivo противоракового действия фармацевтической композиции LV304 на модели ортотопической опухоли с использованием клеток рака толстой кишки человека НТ-29 у мышей.

Мыши имели свободный доступ к питьевой воде и пище на протяжении всего этого исследования.

В план исследования были включены 3 исследуемые группы, которые указаны ниже:

группа, получающая NanoNVB: 6 мышам путем внутривенной инъекции один раз в сутки вводили 25 мг/кг винорелбина в виде NanoVNB на 0-, 3-, 6- и 9-е сутки.

группа, получающая LV304: 6 мышам путем внутривенной инъекции один раз в сутки вводили 25 мг/кг винорелбина в виде фармацевтической композиции LV304 на 0-, 3-, 6- и 9-е сутки.

Контрольная группа: 6 мышам производили один раз в сутки внутривенную инъекцию физиологического раствора на 0-, 3-, 6- и 9-е сутки.

На протяжении периода исследований измеряли следующие показатели:

- процент изменения скорости роста опухоли (Т/С). Этот показатель рассчитывали по следующей формуле:

(масса опухоли день х- масса опухоли день 0)после терапевтического воздействия/масса опухали день х- масса опухоли день 0)контроль ×100%.

- максимальное изменение массы тела по сравнению с массой тела на 0-е сутки.

- среднее время удвоения объема опухоли (TDT). Этот показатель часто используют для количественной оценки роста опухоли и рассчитывают по следующей формуле:

(день х - день 0)

- день х - это время, необходимое для удвоения объема опухоли, по сравнению с размером на момент определения стадии злокачественной опухоли.

- показатель кожной токсичности оценивали и дифференцировали на основе параметров, перечисленных в Таблице 9.

Таблица 9
Показатель кожной токсичности
Степень Признаки и выраженность признаков
Выпадение волос и отек вокруг века Выпадение волос вокруг паховой области
0 Не обнаружено Не обнаружено
1 Незначительное Незначительное
2 Умеренное Умеренное
3 Сильное Сильное
4 Очень сильное Очень сильное

Результат:

В таблице 10 показано, что процент изменения скорости роста опухоли (% Т/С) на 8-е сутки был сходным между группами, получавшими NanoVNB и LV304 (-41,0% для NanoVNB и -42,4% для LV304). Среднее время удвоения объема опухоли (среднее TDT) составляло>78 суток в группе, получавшей NanoVNB, 67,1 суток в группе, получавшей LV304, и 7,6 суток в контрольной группе. В дополнение к этому, у мышей, получавших LV304, отмечалось меньше побочных эффектов (меньшее снижение массы тела и более низкий показатель кожной токсичности) по сравнению с мышами, получавшими NanoVNB.

На фиг. 2 показан средний объем опухоли в группе, получавшей NanoVNB, в группе, получавшей LV304, и группе (контрольной), получавшей физиологический раствор. Результаты свидетельствуют о том, что средний объем опухоли в группах, получавших NanoVNB и LV 304, был менее 200 мм на протяжении периода исследований, тогда как средний объем опухоли в контрольной группе превышал 3000 мм3 на 40-е сутки.

Эти результаты свидетельствуют о том, что LV304 представляет собой эффективное противораковое терапевтическое средство по сравнению с NanoVNB, при этом данное средство характеризовалось меньшим количеством побочных эффектов.

Таблица 10
Оценка противоракового действия NanoVNB, LV304 и физиологического раствора на модели с применением клеток рака толстой кишки человека НТ-29
Группа лечения % Т/С (сутки)* Макс, изменение массы тела, %(сутки)* Показатель кожной токсичности (сутки)* Среднее TDT
Физиологический раствор - -10,3 (34) - 7,0±2,4
NanoVNB -41,0±15,4(8) -20,8(13) 37(17) >78
LV304 -42,4±13,1(8) -4,7(13) 20(15) 67,1±5,4
* количество дней после дня 0

Пример 9: оценка противоракового действия in vivo на модели ортотопической опухоли с использованием клеток аденокарциномы легких человека PC14PE6/AS2

Была проведена оценка in vivo противоракового действия фармацевтической композиции LV304 на модели ортотопической опухоли легких у мышей с использованием клеток PC14PE6/AS2.

В план исследования были включены 3 исследуемые группы, которые указаны ниже:

Группа, получающая NanoVNB: 6 мышам вводили 50% максимально переносимой дозы (МПД) NanoVNB (1/2 МПД=7,5 мг/кг винорелбина) в виде однократной внутривенной инъекции на 0-е сутки.

Группа, получающая LV304: 6 мышам вводили 50% МПД фармацевтической композиции LV304 (1/2 МПД=10 мг/кг винорелбина) в виде однократной внутривенной инъекции на 0-е сутки.

Контрольная группа: 6 мышам производили однократную внутривенную инъекцию физиологического раствора на 0-е сутки.

На протяжении периода исследований измеряли следующие показатели:

- Максимальное изменение массы тела, по сравнению с массой тела на 0-е сутки.

- Среднее время выживания.

Результаты: ссылаясь на Таблицу 11, среднее время выживания для мышей составляло 33,8 суток после однократной инъекции NanoVNB, 34,2 суток после однократной инъекции LV304 и 21,4 суток после однократной инъекции физиологического раствора. На фиг. 3 показано, что группа, получавшая NanoVNB, и группа, получавшая LV304, характеризовались намного более продолжительным временем выживания по сравнению с группой (контрольной), получавшей физиологический раствор (р<0,01).

Таблица 11
Оценка противоракового действия в группах, получающих NanoVNB, LV304 и физиологический раствор, на модели ортотопической опухоли с использованием клеток аденокарциномы легких человека PC14PE6/AS2.
Группа лечения Макс, изменение массы тела (сутки)* Среднее время выживания ±SD (сутки)
Физиологический раствор -3,6(18) 21,4±2,0
NanoVNB -12,6(9) 33,8±6,6
LV304 -17,0(9) 34,2±4,8
* сутки после введения лекарственного вещества в день 0

Пример 10: оценка кожной токсичности in vivo на модели с использованием мышей линии SCID

Была проведена оценка in vivo кожной токсичности фармацевтической композиции LV304 с использованием мышей линии BALB/c. Мыши имели свободный доступ к питьевой воде и пище на протяжении всего этого исследования и были рандомизированы в 3 исследуемые группы, которые указаны ниже:

Группа, получающая NanoNVB: 6 мышей путем внутривенной инъекции один раз в сутки получали 7,5 мг/кг винорелбина в виде NanoVNB на 0-е сутки и 9, 5 мг/кг на 3-й и 6-е сутки.

Группа, получающая LV304: 6 мышей путем внутривенной инъекции один раз в сутки получали 7,5 мг/кг винорелбина в виде LV304 на 0-е сутки и 9, 5 мг/кг на 3-й и 6-е сутки.

Контрольная группа: 6 мышам один раз в сутки производили внутривенную инъекцию физиологического раствора на 0-, 3-, 6- и 9-е сутки.

На протяжении периода исследований оценивали кожную токсичность и дифференцировали на основе бальной шкалы, приведенной в Таблице 9.

Результаты: на фиг. 4 показаны показатели кожной токсичности в группе, получавшей NanoVNB, и группе, получавшей LV304. Кожная токсичность в группе, получавшей LV304, была значительно меньшей по сравнению с группой, получавшей NanoVNB, на протяжении 60-дневного периода исследований.

В случаях, когда в настоящем документе используются диапазоны для характеристики физических свойств, как, например, молекулярная масса, или химических свойств, как, например, химические формулы, подразумевается, что в настоящий документ включены все комбинации и подкомбинации диапазонов для конкретных вариантов осуществления.

Раскрытия каждого патента, патентной заявки и публикации, цитированных или описанных в настоящем документе, включены в настоящий документ в полном объеме.

Специалисту в данной области понятно, что в предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения можно вносить многочисленные изменения и модификации, и что такие изменения и модификации могут быть внесены, не отклоняясь от сущности настоящего изобретения. Таким образом, подразумевается, что прилагаемая формула изобретения охватывает все такие эквивалентные вариации, которые входят в пределы фактической сущности и объема охраны настоящего изобретения.

1. Фармацевтическая композиция для ингибирования роста раковых клеток, содержащая по меньшей мере одну липосому, содержащую:

компонент, формирующий частицу, выбранный из группы, состоящей из фосфолипида и смеси по меньшей мере одного фосфолипида и холестерина;

от 0,1 мМ до 10 мМ донора многовалентных противоионов или его фармацевтически приемлемой соли, причем донором многовалентных противоионов является ион сульфата декстрана;

от 100 мМ до 500 мМ донора одновалентных противоионов, причем донором одновалентных противоионов является сульфат аммония; и

амфипатическое терапевтическое средство или его фармацевтически приемлемую соль.

2. Фармацевтическая композиция по п. 1, причем фармацевтически приемлемая соль донора многовалентных противоионов состоит из: (i) иона сульфата декстрана; и (ii) катиона, причем ион сульфата декстрана образует ионные пары с катионами.

3. Фармацевтическая композиция по п. 2, причем катион включает по меньшей мере один катион, выбранный из группы, состоящей из иона кальция, иона магния, иона натрия, иона калия, иона марганца и NR4+, где R представляет собой Н, алкильный или арильный остаток.

4. Фармацевтическая композиция по п. 3, причем катион представляет собой аммоний.

5. Фармацевтическая композиция по п. 2, причем ион сульфата декстрана содержит сульфат в количестве от 1 мэкв до 320 мэкв на литр.

6. Фармацевтическая композиция по п. 2, причем ион сульфата декстрана содержит сульфат в количестве от от 1 мэкв до 250 мэкв на литр.

7. Фармацевтическая композиция по п. 1, причем фармацевтически приемлемая соль донора многовалентных противоионов представляет собой натриевую соль сульфата декстрана или аммониевую соль сульфата декстрана.

8. Фармацевтическая композиция по п. 1, причем ион сульфата декстрана имеет молекулярную массу от 1600 дальтон до 8000 дальтон.

9. Фармацевтическая композиция по п. 1, причем концентрация донора одновалентных противоионов составляет от 150 мМ до 450 мМ.

10. Фармацевтическая композиция по п. 1, причем амфипатическое терапевтическое средство представляет собой алкалоид барвинка розового.

11. Фармацевтическая композиция по п. 1, причем амфипатическое терапевтическое средство представляет собой ингибитор топоизомеразы.

12. Фармацевтическая композиция для ингибирования роста раковых клеток, содержащая по меньшей мере одну липосому, содержащую:

компонент, формирующий частицу, выбранный из фосфолипида или смеси по меньшей мере одного фосфолипида и холестерина;

от 0,1 мМ до 10 мМ иона сульфата декстрана или его фармацевтически приемлемой соли;

от 150 мМ до 450 мМ сульфата аммония; и

алкалоид барвинка розового.

13. Фармацевтическая композиция по п. 12, причем липосома дополнительно содержит гидрофильный полимер.

14. Способ ингибирования роста раковых клеток, включающий введение эффективного количества фармацевтической композиции по любому из пп. 1-13.

15. Липосома для доставки амфипатического терапевтического средства, содержащая:

компонент, формирующий частицу, выбранный из группы, состоящей из фосфолипида или смеси по меньшей мере одного фосфолипида и холестерина;

от 0,1 мМ до 10 мМ иона сульфата декстрана или его фармацевтически приемлемой соли; и

от 150 мМ до 450 мМ сульфата аммония.

16. Липосома по п. 15, причем ион сульфата декстрана имеет молекулярную массу от 1600 дальтон до 8000 дальтон.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к фармацевтике, в частности к средствам для лечения местных радиационных поражений кожи. Лекарственное средство по изобретению в виде липосом включает водный раствор рекомбинантного человеческого альфа-фетопротеина (рчАФП) с содержанием его в количестве не менее 1,0 мг/мл, раствор фосфолипидов Lipoid S80 в пропиленгликоле, консерванты - метилпарабен и пропилпарабен, и бутилгидрокситолуол, в указанных в формуле изобретения количествах.

Настоящее изобретение относится к носителю для доставки вещества в продуцирующие внеклеточный матрикс клетки в почке, причем носитель содержит ретиноид в качестве нацеливающего агента.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для лечения онкологических заболеваний. Для этого вводят водосодержащую суспензию липосом одинакового диаметра с инкапсулированным противоопухолевым лекарственным препаратом.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, молекулярной биологии и медицины. Описан фермент нуклеаза PaCas9 и применение данного фермента нуклеазы.

Изобретение относится к технологии доставки лекарственного средства. Описан кавитационный зародыш, чтобы вызвать кавитацию для создания полости около эпидермиса живого организма, содержащий: оболочку, которая образует его наружную поверхность для поддержания его внешней формы в жидкости; и ядро, которое находится внутри оболочки и которое определяет плавучесть кавитационного зародыша в жидкости, причем кавитационный зародыш вызывает кавитацию под воздействием ультразвуковых волн, излучаемых в жидкость, причем ядро содержит газ на основе перфторуглерода, причем жидкость представляет собой водный раствор, содержащий лекарственное вещество, а оболочка образована объединением (i) по меньшей мере одного нейтрального фосфолипида, выбранного из первой группы, включающей DLPC (1,2-дилауроил-sn-глицеро-3-фосфохолин), DMPC (1,2-димиристоил-sn-глицеро-3-фосфохолин), DPPC (1,2-дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфохолин), DSPC (1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфохолин), DOPC (1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфохолин), DMPE (1,2-димиристоил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин), DPPE (1,2-дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин), DOPE (1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин), и (ii) по меньшей мере одного отрицательного полярного фосфолипида, выбранного из второй группы, включающей DMPA-Na (1,2-димиристоил-sn-глицеро-3-фосфат), DPPA-Na (1,2-дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфат), DOPA-Na (1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфат), DMPG-Na (1,2-димиристоил-sn-глицеро-3-фосфоглицерин), DPPG-Na (1,2-дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфоглицерин), DOPG-Na (1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфоглицерин), DMPS-Na (1,2-димиристоил-sn-глицеро-3-фосфосерин), DPPS-Na (1,2-дипальмитоил-sn-глицеро-3-фосфосерин), DOPS-Na (1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфосерин), DOPE-глутарил-(Na)2 (1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин), тетрамиристоилкардиолипин-(Na)2, DSPE-mPEG-2000-Na (1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфоэтаноламин), DSPE-mPEG-5000-Na, DSPE-малеинимид PEG-2000-Na и DOTAP-Cl (1,2-диолеоил-3-триметиламмония пропан).

Изобретение относится к области биохимии, в частности к двухцепочечной рибонуклеиновой кислоте (dsRNA) для ингибирования экспрессии TMPRSS6, а также к композиции ее содержащей.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения магнитных липосом. Способ получения магнитных липосом включает получение суспензии, включающей фосфатидилхолин и магнитные наночастицы, ее обработку ультразвуком и последующую повторяющуюся процедуру ее замораживания-оттаивания, в качестве магнитных наночастиц используют наночастицы магнетита в форме водного золя, где повторяющаяся процедура замораживания-оттаивания включает замораживание указанной суспензии при температуре жидкого азота, последующее ее плавное оттаивание при комнатной температуре и дополнительно включает ее последующую обработку ультразвуком мощностью 70 Вт и частотой 40 кГц при температуре 20-30°С в течение 5-15 мин, при этом указанную процедуру повторяют не менее трех раз.

Изобретение относится к процессам ранозаживления и регенерации тканей, а именно к ранозаживляющему гелю. Ранозаживляющий гель с липосомами включает метронидазол (метрогил), лидокаин, желатин, гиалуроновую кислоту, карбомер 940 и липосомы.
Изобретение относится к медицине, а именно к ее разделу эндокринология, и к фармации, а именно к созданию субстанций для лекарственных препаратов содержащих тиреоидные гормоны.

Изобретение относится к биотехнологии. Описан способ получения микровезикул, содержащих трансгенный продукт и/или лентивирусную РНК, содержащую трансген.

Изобретение относится к области фармакологии и раскрывает способ получения термостабильной лиофилизованной иммуногенной композиции. Способ включает получение предварительно сформированных везикул, содержащих липидный компонент, который содержит неионогенное ПАВ, представляющее собой 1-монопальмитоилглицерин (MPG), стероид, представляющий собой холестерин (CHO), и ионогенное амфифильное вещество, представляющее собой дифосфатидилглицерин (DPPG), комбинирование предварительно сформированных везикул с водным раствором, который содержит термолабильное лекарственное средство, с образованием смеси, гомогенизацию смеси с образованием гомогената и лиофилизацию гомогената.

Изобретение относится к медицине, в частности к рН-чувствительному носителю для доставки лекарственного средства, способу получения рН-чувствительного носителя, рН-чувствительному лекарственному средству и композиции, и способу обработки клеток заявленным лекарственным средством и/или композицией.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу лечения нерубцовой алопеции. Способ лечения нерубцовой алопеции включает введение в мезодермальный слой кожи в зоне облысения клеточного материала, полученного путем выдергивания волос из волосистой части головы взрослого донора, помещения в раствор Хенкса с антибиотиком и антимикотиком, отбирают волосы в стадии анагена и отсекают от них волосяные фолликулы, промывают раствором Хенкса с антибиотиком и антимикотиком и переносят в раствор коллагеназы, инкубируют и переносят во флаконы с коллагеновым покрытием, содержащие DMEM:F12 и фетальную телячью сыворотку в растворе гентамицина, стрептомицина и глутамина, через 21 день клеточный материал диссоциируют, переносят в суспензию с использованием раствора трипсина с версеном, клеточный материал промывают физиологическим раствором путем центрифугирования, переносят в стерильной среде в вакуумную пробирку, вводят в мезотермальный слой кожи при определенном угле наклона иглы.

Изобретение относится к области офтальмологии и представляет собой офтальмологическую композицию для цвиттерионных мягких контактных линз, содержащую пранопрофен и/или его фармацевтически пригодную соль, и глицирризиновую кислоту и/или ее фармацевтически пригодную соль, отличающуюся тем, что рН указанной офтальмологической композиции составляет 5,5 или выше.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к биотехнологии, и может быть использована для получения биорезорбируемого биологического матрикса для замещения дефектов костной ткани из ксеногенной или аллогенной костной ткани.

Настоящее изобретение относится к медицине, в частности к фармацевтическим композициям, содержащим каротиноид, триглицерид, фосфолипид и фитостерол. Осуществление изобретения позволяет увеличить биодоступность фармацевтической композиции каротиноида по сравнению с биодоступностью свободного каротиноида.

Изобретение относится к дисульфидному поликатионному амфифилу 1,32-бис(холест-5-ен-3β-илоксикарбониламино)-8,25-диоксо-3,4,21,22-тетратиа-7,10,14,19,23,26-гексаазадотриаконтан тетрагидрохлорида: .Изобретение также относится к композиции для доставки протяженных и коротких нуклеиновых кислот в клетки млекопитающих и к способу получения композиции для доставки протяженных и коротких нуклеиновых кислот.

Группа изобретений относится к фармацевтике. Описывается липосомальная композиция, полученная путем смешивания водорастворимого органического раствора с раствором первой водной фазы и получением эмульсии.

Изобретение относится к фармацевтической композиции и применению материалов, обладающих эффективностью в усилении поглощения макромолекул из кишечной полости через стенки кишок и их направлении к другим частям организма в ходе приготовления лекарственных средств.

Изобретение относится к фармацевтике, в частности к средствам для лечения местных радиационных поражений кожи. Лекарственное средство по изобретению в виде липосом включает водный раствор рекомбинантного человеческого альфа-фетопротеина (рчАФП) с содержанием его в количестве не менее 1,0 мг/мл, раствор фосфолипидов Lipoid S80 в пропиленгликоле, консерванты - метилпарабен и пропилпарабен, и бутилгидрокситолуол, в указанных в формуле изобретения количествах.

Группа изобретений относится к фармацевтической промышленности, в частности к вариантам фармацевтической композиции для ингибирования роста раковых клеток. В одном из вариантов композиция включает компонент, формирующий частицу, выбранный из фосфолипида и смеси по меньшей мере одного фосфолипида и холестерина; 0,1-10 мМ иона сульфата декстрана или его фармацевтически приемлемой соли; 100-500 мМ сульфата аммония; амфипатическое терапевтическое средство или его фармацевтически приемлемую соль. В другом варианте композиции количество сульфата аммония составляет 150-450 мМ, а амфипатическое терапевтическое средство представляет собой алкалоид барвинка розового. Также предложены: липосома для доставки амфипатического терапевтического средства и способ ингибирования роста раковых клеток путем введения эффективного количества указанной фармацевтической композиции. Группа изобретений обеспечивает оптимальную терапевтическую эффективность и снижение токсического воздействия на кожу. 4 н. и 12 з.п. ф-лы, 4 ил., 11 табл., 10 пр.

Наверх