Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль



Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль
Пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль

Владельцы патента RU 2712269:

ТАЙХО ФАРМАСЬЮТИКАЛ КО., ЛТД. (JP)

Изобретение относится к новому соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. Соединение обладает свойствами селективного ингибитора JAK3, проявляет высокую активность при подавлении роста человеческих моноцитов периферической крови и пероральную всасываемость, а также проявляет активность при ингибировании продуцирования IFN-γ in vivo. Соединение может быть использовано для лечения заболеваний, вовлекающих JAK3, где заболевание, вовлекающее JAK3, выбирают из группы, состоящей из псориаза, реакции «трансплантат против хозяина», рассеянного склероза, воспалительного заболевания кишечника, системной красной волчанки и ревматоидного артрита. В общей формуле (I)

X означает -CH=CH-, атом серы или атом кислорода; и n означает целое число от 0 до 2.

5 н. и 11 з.п. ф-лы, 2 ил., 5 табл., 31 пр.

 

Область техники

[0001]

Настоящее изобретение относится к новому пирроло[2,3-d]-пиримидиновому соединению или его соли, обладающему селективным JAK3-ингибирующим действием, и к фармацевтической композиции, содержащей пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение или его соль в качестве активного ингредиента.

Уровень техники

[0002]

Известно, что JAK3, также как JAK1, JAK2 и TYK2, представляет собой нерецепторную тирозинкиназу, принадлежащую к семейству JAK, и что JAK3 вовлечена в активацию сигнального пути различных цитокинов.

JAK1, JAK2 и TYK2 экспрессируют в широком спектре тканей, тогда как экспрессия JAK3 ограничена преимущественно лимфоцитами, такими как T-клетки, B-клетки и естественные клетки-киллеры. JAK1- и JAK2-дефицитные мыши погибают в эмбриональном состоянии или умирают вскоре после рождения. С другой стороны, JAK3-дефицитные мыши или люди проявляют тяжелый комбинированный иммунодефицит вследствие дисфункции лимфоцитов.

[0003]

Полагают, что ингибиторы JAK3 будут ингибировать сигналы шести типов цитокинов (то есть, IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 и IL-21) так, что специфически подавляют функцию лимфоцитов, таких как Т-клетки или B-клетки, которые играют важную роль в иммунной системе. Таким образом, такой ингибитор JAK3, как ожидают, является эффективным терапевтическим агентом в случае заболеваний, связанных с активацией вышеупомянутых клеток, который имеет минимальное проявление побочных эффектов (непатентные документы 1 и 2).

Сообщалось, что примеры заболевания, которое можно лечить с помощью ингибитора JAK3, включают аутоиммунное заболевание (ревматоидный артрит, рассеянный склероз, системная красная волчанка, склеродермия, полимиозит-дерматомиозит, Синдром Шегрена, болезнь Бехчета и т.д.), аллергическое заболевание (бронхиальная астма, аллергический ринит/поллиноз, атопический дерматит, пищевая аллергия, анафилаксия, лекарственная аллергия, крапивница, конъюнктивит и др.), заболевание нервной системы (рассеянный склероз, Болезнь Альцгеймера и т.д.), воспалительное заболевание кишечника (язвенный колит, болезнь Крона), псориаз, контактный дерматит, диабет, глютеновая болезнь, вирусное инфекционное заболевание, синдром острой дыхательной недостаточности (ARDS), реакция «трансплантат против хозяина» (GVHD), отторжение трансплантата, гематологическая злокачественная опухоль (лимфома, лейкемия) и другие злокачественные новообразования (Непатентные документы 3-6).

[0004]

Клинически, тофацитиниб (Pfizer), который представляет собой ингибитор JAK3, используют в качестве терапевтического агента для ревматоидного артрита. Однако сообщается, что тофацитиниб имеет низкую селективность относительно JAK3 и что этот агент, следовательно, проявляет побочные эффекты (повышение липидного уровня, анемия, нейтропения, иммуносупрессия и др.), которые обусловлены ингибированием JAK1 и JAK2 этим агентом (Непатентный документ 7).

Более того, уже сообщалось, что пирролопиримидиновое соединение, имеющее циклический заместитель в положении 4 (Патентный документ 1), пирролопиримидиновое соединение, имеющее циклогексен в положении 4 (Патентный документ 2), и пирролопиримидиновое соединение, имеющее ароматическую группу, замещенную акриламидом, в положении 4 (Патентный документ 3), проявляют JAK-ингибирующую активность.

Список цитирования

Патентный документ

[0005]

Патентный документ 1: публикация США № 2004/0058922;

Патентный документ 2: международная публикация № WO 2006/096270;

Патентный документ 3: международная публикация № WO 2013/085802;

Патентный документ 4: международная публикация № WO 2015/054572;

Непатентный документ

[0006]

Непатентный документ 1: Immunol. Rev., 2009, vol. 228(1), p. 273-287;

Непатентный документ 2: Int. J. Biochem. Cell. Biol., 2009, vol. 41(12), p. 2376-2379;

Непатентный документ 3: Trends Pharmacol. Sci., 2004, vol. 25(11), p.558-562;

Непатентный документ 4: J. Clin. Immunol., 2013, vol. 33(3), p. 586-594;

Непатентный документ 5: PLoS One., 2012, vol. 7(2), e31721;

Непатентный документ 6: Cancer Discov., 2012, vol. 2(7), p.591-597;

Непатентный документ 7: J. Med. Chem., 2010, vol. 53(24), p.8468-8484.

Сущность изобретения

Задача, решаемая изобретением

[0007]

Однако, что касается соединения, описанного в патентном документе 1, то атом азота непосредственно связан с положением 4 пирроло[2,3-d]пиримидинового соединения, и патентный документ 1 не описывает циклоалкенильную группу, замещенную акриламидом, в положении 4. Более того, что касается соединения, описанного в патентном документе 2, то эта публикация не описывает замещенную акриламидом циклоалкенильную группу в положении пирроло[2,3-d]-пиримидинового соединения. Кроме того, соединение, описанное в патентном документе 2, имеет низкую селективность относительно JAK3 и его ингибирующая активность также недостаточна. Кроме того, патентный документ 3 не описывает пирроло[2,3-d]-пиримидиновое соединение, к положению 4 которого присоединена замещенная акриламидом циклоалкенильная группа.

С другой стороны, пирроло[2,3-d]пиримидиновое соединение, имеющее пиперазин в положении 4, представлено как ингибитор онкогена KRAS, имеющего мутацию G12C (Патентный документ 4). Однако патентный документ 4 не описывает ингибирующую активность на JAK3.

[0008]

Таким образом, цель настоящего изобретения состоит в разработке нового соединения, которое селективно и сильно ингибирует JAK3, проявляет прекрасную активность в случае подавления роста моноцитов периферической крови человека (далее называемых как «PBMC») и прекрасной пероральной всасываемостью, а также проявляет активность при ингибировании IL-2-индуцированного продуцирования IFN-γ in vivo, или его соли и содержащей его фармацевтической композиции.

Средства решения задачи

[0009]

В результате интенсивных исследований, направленных на достижение вышеупомянутого объекта, заявителями настоящего изобретения установлено, что группа соединений, содержащих пирроло[2,3-d]пиримидин в качестве базовой структуры, имеющих замешенную акриламидом циклоалкенильную группу в положении 4 и дополнительно имеющую ограниченный циклический заместитель в положении 5, проявляет селективную ингибирующую активность на JAK3. Более того, заявителями установлено, что соединение настоящего изобретения проявляет прекрасную активность в случае подавления роста человеческих PBMC, и также установили, что настоящее соединение может быть использовано в качестве фармацевтического агента для лечения различных заболеваний, вовлекающих JAK3, в частности, аутоиммунного заболевания. Кроме того, заявители подтвердили, что соединение настоящего изобретения имеет прекрасную пероральную всасываемость и может быть использовано в качестве перорального фармацевтического продукта. Кроме того, заявителями настоящего изобретения установлено, что соединение настоящего изобретения проявляет активность при ингибировании IL-2-индуцированного продуцирования IFN-γ in vivo, и в результате реализовали настоящее изобретение.

[0010]

Настоящее изобретение предлагает следующие пункты от [1] до [19].

[1] Соединение, представленное приведенной ниже формулой (I) или его соль:

[0011]

,

[0012]

в которой X представляет собой -CH=CH-, -NH-, атом серы или атом кислорода; и n означает целое число от 0 до 2.

[0013]

[2] Соединение в соответствии с пунктом [1] или его соль, в котором X представляет собой -CH=CH-, атом серы или атом кислорода, и n равно 0 или 1.

[0014]

[3] Соединение в соответствии с пунктом [1] или [2] или его соль, в котором в формуле (I) представленная ниже структура

,

[0015]

представляет собой любую структуру из числа следующих структур:

[0016]

,

[0017]

и в формуле (I) приведенная ниже структура

,

[0018]

представляет собой любую структуру из числа следующих структур:

[0019]

.

[0020]

[4] Соединение в соответствии с любым из пунктов от [1] до [3] или его соль, в котором соединение представляет собой N-(3-(5-(фуран-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид или (S)-N-(3-(5-(фуран-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]-пиримидин-4-ил)циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид.

[5] Ингибитор JAK3, содержащий в качестве активного ингредиента соединение в соответствии с любым из пунктов от [1] до [4] или его соль.

[6] Фармацевтическая композиция, содержащая соединение в соответствии с любым из пунктов от [1] до [4] или его соль.

[7] Фармацевтическая композиция в соответствии с пунктом [6], в которой фармацевтическая композиция представляет собой фармацевтическую композицию для лечения заболевания, вовлекающего JAK3.

[8] Агент для лечения ревматоидного артрита или рассеянного склероза, содержащий в качестве активного ингредиента соединение в соответствии с любым из пунктов от [1] до [4] или его соль.

[9] Применение соединения в соответствии с любым из пунктов от [1] до [4] или его соли для производства ингибитора JAK3.

[10] Применение соединения в соответствии с любым из пунктов от [1] до [4] или его соли для производства фармацевтической композиции.

[11] Применение в соответствии с пунктом [10], в котором фармацевтическая композиция представляет собой фармацевтическую композицию для лечения заболеваний, вовлекающих JAK3.

[12] Применение соединения в соответствии с любым из пунктов от [1] до [4] или его соли для производства терапевтического агента для ревматоидного артрита или рассеянного склероза.

[13] Соединение в соответствии с любым из пунктов от [1] до [4] или его соль для применения при ингибировании JAK3.

[14] Соединение в соответствии с любым из пунктов от [1] до [4] или его соль для применения в качестве фармацевтического агента.

[15] Соединение в соответствии с пунктом [14] или его соль, в котором фармацевтический агент представляет собой фармацевтический агент для лечения заболеваний, вовлекающих JAK3.

[16] Соединение в соответствии с любым из пунктов от [1] до [4] или его соль для применения при лечении ревматоидного артрита или рассеянного склероза.

[17] Способ ингибирования JAK3, который включает введение эффективного количества соединения в соответствии с любым из пунктов от [1] до [4] или его соли субъекту, нуждающемуся в этом.

[18] Способ лечения заболеваний, вовлекающих JAK3, который включает введение эффективного количества соединения в соответствии с любым из пунктов от [1] до [4] или его соли субъекту, нуждающемуся в этом.

[19] Способ лечения ревматоидного артрита или рассеянного склероза, который включает введение эффективного количества соединения в соответствии с любым из пунктов от [1] до [4] или его соли субъекту, нуждающемуся в этом.

Эффект изобретения

[0021]

В соответствии с настоящим изобретением предложено новое пирроло[2,3-d]пиримидиновое производное, полезное в качестве селективного ингибитора JAK3, которое представлено выше формулой (I), или его соль.

Обнаружено, что соединение настоящего изобретения или его соль проявляет прекрасную селективную JAK3-ингибирующую активность и подавляют рост человеческих РВМС на основе сигнальных путей JAK3. Более того, соединение настоящего изобретения обладает прекрасной пероральной всасываемостью и соединение полезно в качестве фармацевтического агента, особенно в случае перорального введения. Таким образом, соединение настоящего изобретения или его соль могут лечить заболевания, вовлекающие JAK3, такие как аутоиммунное заболевание, при отсутствии серьезных побочных эффектов, вызываемых JAK1 и JAK2 (например, повышение липидного уровня, анемия, нейтропения, иммуносупрессия и др.).

Краткое описание чертежей

[0022]

[Фигура 1] Фиг. 1 показывает подавляющие продуцирование IFN-γ эффекты, полученные, когда соединение 7 и соединение сравнительного примера 12 вводят перорально мышам.

[Фигура 2] Фиг. 2 иллюстрирует показатели бальной оценки клинических симптомов, полученных, когда соединение 7, тофацитиниб и преднизолон вводят перорально мышиной модели ревматоидного артрита.

Подробное описание изобретения

[0023]

Соединение настоящего изобретения, показанное приведенной выше формулой (I), представляет собой соединение, которое содержит пирроло[2,3-d]пиримидин в качестве базовой структуры, имеет циклоалкенильную группу в положении 4 и дополнительно имеет циклический заместитель в положении 5, и оно является новым соединением, которое не описано в каком-либо из вышеупомянутых документов предшествующего уровня техники.

[0024]

В настоящем описании «C1-C6-алкильная группа» представляет собой линейную или разветвленную, насыщенную углеводородную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, и конкретные примеры C1-C6-алкильной группы включают метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу, изопропильную группу, н-бутильную группу, изобутильную группу, втор-бутильную группу, трет-бутильную группу, н-пентильную группу и н-гексильную группу.

[0025]

В соединении, представленном формулой (I), настоящего изобретения X означает -CH=CH-, -NH-, атом серы или атом кислорода. Предпочтительно X представляет собой -CH=CH-, атом серы или атом кислорода, более предпочтительно -CH=CH- или атом кислорода и особенно предпочтительно атом кислорода.

[0026]

В соединении, представленном формулой (I), настоящего изобретения n означает целое число от 0 до 2. Предпочтительно n равно 0 или 1 и особенно предпочтительно равно 1.

[0027]

В соединении, представленном формулой (I), настоящего изобретения конкретные структуры приведенной ниже структуры

[0028]

,

[0029]

предпочтительно представляют собой следующие структуры от (1) до (5):

[0030]

.

[0031]

Из числа приведенных выше структур от (1) до (5) структуры (1), (2) и (3) более предпочтительны, и структура (2) особенно предпочтительна.

[0032]

В соединении, представленном формулой (I), настоящего изобретения конкретные структуры приведенной ниже циклоалкенильной части

[0033]

[0034]

предпочтительно представляют собой следующие структуры от (1) до (10):

[0035]

.

[0036]

Из числа приведенных выше структур от (1) до (10) структуры (1), (3), (5), (6) и (10) более предпочтительны, структуры (1), (3), (5) и (6) даже более предпочтительны, структуры (1) и (3) также предпочтительны, и структура (3) особенно предпочтительна.

[0037]

В соединении, представленном формулой (I), настоящего изобретения предпочтительным соединением является соединение, в котором в формуле (I) X представляет собой -CH=CH-, атом серы или атом кислорода и n равно 0 или 1.

[0038]

В соединении, представленном формулой (I), настоящего изобретения более предпочтительным соединением является соединение, в котором в формуле (I) приведенная ниже структура

[0039]

[0040]

представляет собой любую структуру из следующих структур:

[0041]

,

[0042]

и в формуле (I) приведенная ниже структура

[0043]

представляет собой любую структуру из следующих структур:

[0044]

.

[0045]

В соединении, представленном формулой (I), настоящего изобретения другим предпочтительным соединением является соединение, в котором в формуле (I) X представляет собой атом кислорода и n равно 1.

[0046]

В соединении, представленном формулой (I), настоящего изобретения особенно предпочтительным соединением является соединение, в котором в формуле(I) приведенная ниже структура

[0047]

,

[0048]

представляет собой следующую структуру:

[0049]

,

[0050]

и в формуле (I) приведенная ниже структура

[0051]

представляет собой следующую структуру:

[0052]

.

[0053]

Конкретные примеры предпочтительного соединения настоящего изобретения включают следующие соединения:

(1) N-(3-(5-фенил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 1)

(2) N-(3-(5-(тиофен-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 2)

(3) N-(3-(5-(тиофен-3-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 3)

(4) N-(3-(5-(фуран-3-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 4)

(5) N-(3-(5-(фуран-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 5)

(6) (R)-N-(3-(5-(фуран-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 6)

(7) (S)-N-(3-(5-(фуран-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 7)

(8) N-(3-(5-(фуран-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклопент-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 8)

(9) N-(3-(5-фенил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклопент-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 9)

(10) N-(3-(5-фенил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклопент-2-ен-1-ил)акриламид (Соединение 10)

(11) N-(3-(5-фенил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогепт-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 11)

(12) N-(3-(5-фенил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-2-ен-1-ил)акриламид (Соединение 12)

(13) N-(3-(5-(тиофен-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклогекс-2-ен-1-ил)акриламид (Соединение 13)

(14) N-(3-(5-(тиофен-3-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклогекс-2-ен-1-ил)акриламид (Соединение 14)

(15) N-(3-(5-(фуран-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-2-ен-1-ил)акриламид (Соединение 15) и

(16) N-(3-(5-(фуран-3-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-2-ен-1-ил)акриламид (Соединение 16).

[0054]

В числе прочих соединения 2, 5, 7, 8, 9, 13 и 14 предпочтительны, соединения 5 и 7 более предпочтительны и соединение 7 особенно предпочтительно.

[0055]

Далее описан способ получения соединения в соответствии с настоящим изобретением.

Соединение, представленное формулой (I), настоящего изобретения может быть получено, например, следующим способом производства.

Способ производства

[0056]

,

[0057]

где L1 и L2, которые являются одинаковыми или разными, каждая представляет собой уходящую группу; P1 и P2 каждая представляет собой защитную группу; R1, R2, R3, R4 и R5, которые являются одинаковыми или разными, каждый представляет собой атом водорода или C1-C6-алкильную группу, где R1 и R2, и R3 и R4 могут образовывать кольцо вместе с атомами кислорода и бора, соседними с ними; и другие символы имеют те самые значения, как и описанные выше.

[0058]

Символ NP1, показанный в формуле 2, в формулах от 3 до 5, формуле 8 и формуле 9, указывает на состояние, при котором атом азота защищен защитной группой P1. Например, когда трет-бутил-оксикарбонильную группу (Boc группа) используют в качестве защитной группы, это означает, что атом азота защищен одной или двумя Boc группами, или это означает, что образуется имид, такой как фталевый имид, и в результате защищают атом азота.

[0059]

Стадия 1

Данная стадия представляет собой способ введения соединения, представленного формулой 1, и соединения, представленного формулой 2, которое является коммерчески доступным продуктом или может быть произведено в соответствии с известным способом, в реакцию сочетания с получением соединения, представленного формулой 3.

Данную стадию обычно проводят в соответствии с известным способом (например, Chemical Reviews, Vol. 95, p. 2457, 1995), и она может быть проведена, например, в присутствии катализатора на основе переходного металла и основания в растворителе, который не оказывает вредного влияния на реакцию.

[0060]

Бороновая кислота или сложный эфир бороновой кислоты, представленные формулой 2, могут быть использованы в количестве от 1 до 10 эквивалентов и предпочтительно от 1 до 3 эквивалентов из расчета на количество соединения, представленного формулой 1 (1 моль).

[0061]

Примеры катализатора на основе переходного металла, используемого в данном случае, включают палладиевые катализаторы (например, ацетат палладия, хлорид палладия и тетракис-(трифенилфосфин)палладий) и никелевые катализаторы (например, хлорид никеля). При необходимости к катализатору добавляют лиганд (например, трифенилфосфин и три-трет-бутилфосфин), и оксид металла (например, оксид меди и оксид серебра) и т.п. может быть использован в качестве со-катализатора.

Количество используемого катализатора на основе переходного металла меняют в зависимости от типа катализатора, и катализатор на основе переходного металла используют в количестве обычно приблизительно от 0,0001 до 1 моль и предпочтительно приблизительно от 0,01 до 0,5 моль из расчета на количество соединения, представленного формулой 1 (1 моль). Лиганд используют в количестве обычно приблизительно от 0,0001 до 4 моль и предпочтительно приблизительно от 0,01 до 2 моль из расчета на количество соединения, представленного формулой 1 (1 моль), и со-катализатор используют в количестве обычно приблизительно от 0,0001 до 4 моль и предпочтительно приблизительно от 0,01 до 2 моль из расчета на количество соединения, представленного формулой 1 (1 моль).

[0062]

Примеры основания включают органические амины (например, триметиламин, триэтиламин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5,4,0]ундец-7-ен, пиридин и N,N-диметиланилин), соли щелочных металлов (например, гидрокарбонат натрия, гидрокарбонат калия, карбонат натрия, карбонат калия, карбонат цезия, фосфат натрия, фосфат калия, гидроксид натрия и гидроксид калия), гидриды металлов (например, гидрид калия и гидрид натрия), алкоксиды щелочных металлов (например, метоксид натрия, этоксид натрия, трет-бутоксид натрия и трет-бутоксид калия) и дисилазиды щелочных металлов (например, дисилазид лития, дисилазид натрия и дисилазид калия).

Основание используют в количестве обычно от 0,1 до 10 моль и предпочтительно приблизительно от 1 до 5 моль из расчета на количество соединения, представленного формулой 1 (1 моль).

[0063]

Растворитель не имеет особенных ограничений, пока он не оказывает вредного влияния на реакцию. Примеры растворителя включают углеводороды (например, бензол, толуол и ксилол), галогенированные углеводороды (например, хлороформ и 1,2-дихлорэтан), нитрилы (например, ацетонитрил), простые эфиры (например, 1,4-диоксан, диметоксиэтан и тетрагидрофуран), спирты (например, метанол и этанол), апротонные полярные растворители (например, диметилформамид, диметилсульфоксид и гексаметилфосфорамид), воду и их смеси.

[0064]

Время реакции составляет от 0,1 до 100 час и предпочтительно от 0,5 до 24 час. Температура реакции составляет от 0°C до температуры кипения растворителя и предпочтительно от 0 до 150°C.

[0065]

Полученное таким образом соединение, представленное формулой 3, может быть подвергнуто последующей стадии после его выделения и очистки в соответствии с известными методами разделения и очистки, которые описаны позднее, или без такого выделения и очистки.

[0066]

Стадия 2

Данная стадия представляет собой способ галогенирования соединения, представленного формулой 3, с получением соединения, представленного формулой 4. Галогенирование может быть проведено, например, способом с использованием фтора, хлора, брома, йода и др. или способом с использованием N-хлорсукцинимида, N-бромсукцинимида или N-йодсукцинимида. В рассматриваемой реакции способ с использованием N-хлорсукцинимида, N-бромсукцинимида, N-йодсукцинимида и т.д. является предпочтительным.

[0067]

Такие N-хлорсукцинимид, N-бромсукцинимид, N-йодсукцинимида и т.д. могут быть использованы в количестве от 1 до 10 эквивалентов и предпочтительно от 1 до 3 эквивалентов из расчета на количество соединения, представленного формулой 3 (1 моль).

[0068]

Растворитель не имеет особенных ограничений, пока он не влияет на реакцию. Примеры растворителя включают углеводороды (например, бензол, толуол и ксилол), галогенированные углеводороды (например, хлороформ и 1,2-дихлорэтан), нитрилы (например, ацетонитрил), простые эфиры (например, диметоксиэтан и тетрагидрофуран), спирты (например, метанол и этанол), апротонные полярные растворители (например, диметилформамид, диметилсульфоксид и гексаметилфосфорамид), воду и их смеси.

[0069]

Время реакции составляет от 0,1 до 100 час и предпочтительно от 0,5 до 24 час. Температура реакции составляет от 0°C до температуры кипения растворителя и предпочтительно от 0 до 100°C.

[0070]

Полученное таким образом соединение, представленное формулой 4, может быть выделено и очищено известными методами разделения и очистки, описанными позднее, или оно может быть подвергнуто последующей стадии без такого выделения и очистки.

[0071]

Стадия 3

Данная стадия представляет собой способ введения защитной группы P2 в соединение, представленное формулой 4, с получением соединения, представленного формулой 5.

Защита может быть проведена с помощью в целом известного способа, например, способом, описанным в публикации «Protective Groups in Organic Synthesis», T.W. Greene, John Wiley & Sons (1981), или эквивалентным ему способом. В рассматриваемой реакции защитная группа P2 предпочтительно представляет собой толуолсульфонатную группу, бензолсульфонатную группу, метансульфонатную группу, метоксиметильную группу, тритильную группу и т.п.

Примеры реагента с защитной группой, используемого в рассматриваемой реакции, включают толуолсульфонилхлорид, бензолсульфонилхлорид, метансульфонилхлорид, хлор(метокси)метан и тритилхлорид. Такой реагент с защитной группой используют в количестве обычно приблизительно от 1 до 100 моль и предпочтительно приблизительно от 1 до 10 моль из расчета на количество соединения, представленного формулой 4 (1 моль).

[0072]

Примеры основания включают органические амины (например, триметиламин, триэтиламин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5,4,0]ундец-7-ен, пиридин и N,N-диметиланилин), соли щелочных металлов (например, гидрокарбонат натрия, гидрокарбонат калия, карбонат натрия, карбонат калия, карбонат цезия, фосфат натрия, фосфат калия, гидроксид натрия и гидроксид калия), гидриды металлов (например, гидрид калия и гидрид натрия), алкоксиды щелочных металлов (например, метоксид натрия, этоксид натрия, трет-бутоксид натрия и трет-бутоксид калия) и дисилазиды щелочных металлов (например, дисилазид лития, дисилазид натрия и дисилазид калия).

Основание используют в количестве обычно от 0,1 до 100 моль и предпочтительно приблизительно от 1 до 10 моль из расчета на количество соединения, представленного формулой 4 (1 моль).

[0073]

Растворитель не имеет особенных ограничений, пока он не влияет на реакцию. Примеры растворителя включают углеводороды (например, бензол, толуол и ксилол), галогенированные углеводороды (например, хлороформ и 1,2-дихлорэтан), нитрилы (например, ацетонитрил), простые эфиры (например, диметоксиэтан и тетрагидрофуран), спирты (например, метанол и этанол), апротонные полярные растворители (например, диметилформамид, диметилсульфоксид и гексаметилфосфорамид), воду и их смеси.

[0074]

Время реакции составляет от 0,1 до 100 час и предпочтительно от 0,5 до 24 час. Температура реакции составляет от 0°C до температуры кипения растворителя и предпочтительно от 0 до 100°C.

[0075]

Полученное таким образом соединение, представленное формулой 5, может быть выделено и очищено известными методами разделения и очистки, описанными позднее, или оно может быть подвергнуто последующей стадии без такого выделения и очистки.

[0076]

Стадия 4

Данная стадия представляет собой способ введения соединения, представленного формулой 5, и бороновой кислоты или сложного эфира бороновой кислоты, представленных формулой 6, которые являются коммерчески доступным продуктом или могут быть произведены известным способом, в реакцию сочетания, или введения соединения, представленного формулой 5, и органического соединения олова, представленного формулой 7, которое является коммерчески доступным продуктом или может быть произведено известным способом, в реакцию сочетания, с тем, чтобы получить соединение, представленное формулой 8.

Данная стадия может быть проведена тем же способом, что и стадия 1.

[0077]

Стадия 5

Данная стадия представляет собой способ снятия защитной группы P2 соединения, представленного формулой 8, с получением соединения, представленного формулой 9. Снятие защиты может быть проведено в целом известным способом, например, способом, описанным в публикации «Protective Groups in Organic Synthesis», T.W. Greene, John Wiley & Sons (1981), или эквивалентным ему способом.

[0078]

Например, когда группу п-толуолсульфоновой кислоты используют в качестве защитной группы P2, предпочтительно использовать такой реагент для удаления защитной группы, как гидроксид лития, гидроксид натрия, гидроксид калия или тетрабутиламмонийфторид. Такой реагент для снятия защитной группы используют в количестве обычно от 0,5 до 100 моль и предпочтительно приблизительно от 1 до 10 моль из расчета на количество соединения, представленного формулой 8 (1 моль).

[0079]

Более того, когда тритильную группу используют в качестве защитной группы P2, предпочтительно использовать такой реагент для снятия защитной группы, как гидроксид лития, гидроксид натрия, гидроксид калия, тетрабутиламмонийфторид, кислота (например, соляная кислота, трифторуксусная кислота, уксусная кислота и серная кислота). Такой реагент для снятия защитной группы используют в количестве обычно от 0,5 до 100 моль и предпочтительно приблизительно от 1 до 10 моль из расчета на количество соединения, представленного формулой 8 (1 моль).

[0080]

Растворитель, используемый в реакции, не имеет особенных ограничений, пока он не оказывает вредного влияния на реакцию. Примеры растворителя, используемого в данном случае, включают спирты (например, метанол), углеводороды (например, бензол, толуол и ксилол), галогенированные углеводороды (например, метиленхлорид, хлороформ и 1,2-дихлорэтан), нитрилы (например, ацетонитрил), простые эфиры (например, диметоксиэтан и тетрагидрофуран), апротонные полярные растворители (например, N,N-диметилформамид, диметилсульфоксид и гексаметилфосфорамид) и их смеси.

[0081]

Время реакции составляет от 0,1 до 100 час и предпочтительно от 0,5 до 24 час. Температура реакции составляет от 0°C до температуры кипения растворителя и предпочтительно от 0 до 100°C.

[0082]

Полученное таким образом соединение формулы 9 может быть выделено и очищено известными методами разделения и очистки, описанными позднее, или оно может быть подвергнуто последующей стадии без такого выделения и очистки.

[0083]

Стадия 6

Данная стадия представляет собой способ снятие защитной группы P1 для аминогруппы соединения, представленного формулой 9, с получением соединения, представленного формулой 10. Снятие защиты может быть проведено в целом известным способом, например, способом, описанным в публикации «Protective Groups in Organic Synthesis», T.W. Greene, John Wiley & Sons (1981), или эквивалентным ему способом.

[0084]

При использовании трет-бутилоксикарбонильной группы в качестве защитной группы P1 снятие защиты предпочтительно проводят в кислых условиях. Примеры кислоты включают соляную кислоту, уксусную кислоту, трифторуксусную кислоту, серную кислоту и п-толуолсульфоновую кислоту. Кислоту используют в количестве предпочтительно приблизительно от 1 до 100 эквивалентов из расчета на количество соединения, представленного формулой 9 (1 моль).

[0085]

Растворитель, используемый в реакции, не имеет особенных ограничений, пока он не влияет на реакцию. Примеры растворителя, используемого в данном случае, включают спирты (например, метанол), углеводороды (например, бензол, толуол и ксилол), галогенированные углеводороды (например, метиленхлорид, хлороформ и 1,2-дихлорэтан), нитрилы (например, ацетонитрил), простые эфиры (например, диметоксиэтан и тетрагидрофуран), апротонные полярные растворители (например, N,N-диметилформамид, диметилсульфоксид и гексаметилфосфорамид) и их смеси.

[0086]

Время реакции составляет от 0,1 до 100 час и предпочтительно от 0,5 до 24 час. Температура реакции составляет от 0 до 100°C и предпочтительно от 0 до 50°C.

[0087]

Полученное таким образом соединение, представленное формулой 10, может быть выделено и очищено известными методами разделения и очистки, описанными позднее, или оно может быть подвергнуто последующей стадии без такого выделения и очистки.

[0088]

Стадия 7

Данная стадия представляет собой способ проведения реакции амидирования аминогруппы соединения, представленного формулой 10, акриловой кислотой или галогенангидридом акриловой кислоты с тем, чтобы получить соединение, представленное формулой (I), настоящего изобретения.

[0089]

При использовании акриловой кислоты ее используют в количестве обычно от 0,5 до 10 моль и предпочтительно приблизительно от 1 до 5 моль из расчета на количество соединения, представленного формулой 10 (1 моль), в присутствии конденсирующего реагента.

[0090]

Примеры конденсирующего реагента включают N,N'-дициклогексилкарбодиимид (DCC), N,N'-диизопропилкарбодиимид (DIC), гидрохлорид 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид (WSC), дифенилфосфорилазид (DPPA), гексафторфосфат бензотриазол-1-ил-окситрисдиметиламинофосфония (BOP), гексафторфосфат бензотриазол-1-ил-окситриспирролидинфосфония (PyBOP), фосфат 7-азабензотриазол-1-илокситриспирролидинфосфония (PyAOP), гексафторфосфат бромтриспирролидинфосфония (BroP), гексафторфосфат хлортрис(пирролидин-1-ил)фосфония (PyCroP), 3-(диэтоксифосфорилокси)-1,2,3-бензтриазин-4(3H)-он (DEPBT), гексафторфосфат O-(7-азабензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония (HATU) и гидрохлорид 4-(5,6-диметокси-1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолина (DMTMM). Примеры используемых вспомогательных добавок включают 1-гидроксибензотриазол (HOBt), 1-гидрокси-7-азабензотриазол (HOAt) и N-гидроксисукцинимид (HOSu).

Такое вещество используют в количестве обычно от 1 до 100 моль и предпочтительно приблизительно от 1 до 10 моль из расчета на количество соединения, представленного формулой 10 (1 моль).

[0091]

Кроме того, при необходимости может быть добавлено основание.

Примеры такого основания включают органические амины (например, триметиламин, триэтиламин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5,4,0]ундец-7-ен, пиридин и N,N-диметиланилин), соли щелочных металлов (например, гидрокарбонат натрия, гидрокарбонат калия, карбонат натрия, карбонат калия, карбонат цезия, фосфат натрия, фосфат калия, гидроксид натрия и гидроксид калия), гидриды металлов (например, гидрид калия и гидрид натрия) и алкоксиды щелочных металлов (например, метоксид натрия, этоксид натрия, трет-бутоксид натрия и трет-бутоксид калия).

Основание используют в количестве обычно от 1 до 100 моль и предпочтительно приблизительно от 1 до 10 моль из расчета на количество соединения, представленного формулой 10 (1 моль).

[0092]

Растворитель, используемый в реакции, не имеет особенных ограничений, пока он не влияет на реакцию. Примеры растворителя, используемого в данном случае, включают спирты (например, метанол), углеводороды (например, бензол, толуол и ксилол), галогенированные углеводороды (например, метиленхлорид, хлороформ и 1,2-дихлорэтан), нитрилы (например, ацетонитрил), простые эфиры (например, диметоксиэтан и тетрагидрофуран), апротонные полярные растворители (например, N,N-диметилформамид, диметилсульфоксид и гексаметилфосфорамид) и их смеси.

[0093]

Время реакции составляет от 0,1 до 100 час и предпочтительно от 0,5 до 24 час. Температура реакции составляет от 0°C до температуры кипения растворителя и предпочтительно от 0 до 100°C.

[0094]

Когда используют галогенангидрид акриловой кислоты, галогенангидрид используют в количестве обычно от 0,5 до 10 моль и предпочтительно приблизительно от 1 до 5 моль из расчета на количество соединения, представленного формулой 10 (1 моль). Следует отметить, что галогенангидрид представляет собой коммерчески доступный продукт или может быть получен в соответствии с известным способом.

[0095]

Кроме того, при необходимости может быть добавлено основание. Примеры такого основания включают органические амины (например, триметиламин, триэтиламин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, 1,8-диазабицикло[5,4,0]ундец-7-ен, пиридин и N,N-диметиланилин), соли щелочных металлов (например, гидрокарбонат натрия, гидрокарбонат калия, карбонат натрия, карбонат калия, карбонат цезия, фосфат натрия, фосфат калия, гидроксид натрия и гидроксид калия), гидриды металлов (например, гидрид калия и гидрид натрия), и алкоксиды щелочных металлов (например, метоксид натрия, этоксид натрия, трет-бутоксид натрия и трет-бутоксид калия).

Основание используют в количестве обычно от 1 до 100 моль и предпочтительно приблизительно от 1 до 10 моль из расчета на количество соединения, представленного формулой 10 (1 моль).

[0096]

Растворитель, используемый в реакции, не имеет особенных ограничений, пока он не влияет на реакцию. Примеры растворителя, используемого в данном случае, включают спирты (например, метанол), углеводороды (например, бензол, толуол и ксилол), галогенированные углеводороды (например, метиленхлорид, хлороформ и 1,2-дихлорэтан), нитрилы (например, ацетонитрил), простые эфиры (например, диметоксиэтан и тетрагидрофуран), апротонные полярные растворители (например, N,N-диметилформамид, диметилсульфоксид, гексаметилфосфорамид) и их смеси.

[0097]

Время реакции составляет от 0,1 до 100 час и предпочтительно от 0,5 до 24 час. Температура реакции составляет от 0°C до температуры кипения растворителя и предпочтительно от 0 до 100°C.

[0098]

В описанном выше способе производства «присоединение пирролопиримидинового каркаса к соединению, представленному формулой 2» (стадия 1) и «введение соединения, представленного формулой 6 или формулой 7, в пирролопиримидиновый каркас» (стадия 4), проводят последовательно. Однако этот порядок может быть изменен.

Другими словами, соединение также может быть синтезировано в порядке «введение соединения, представленного формулой 6 или формулой 7, в пирролопиримидиновый каркас» (стадия 4) и затем «присоединение пирролопиримидинового каркаса к соединению, представленному формулой 2» (стадия 1).

Говоря конкретнее, соединение, представленное формулой 1, подвергают отдельным стадиям в таком порядке - стадия 2, стадия 3, стадия 4 и стадия 1 - с тем, чтобы соединение могло быть приведено к соединению, представленному формулой 8. Условия, применяемые на каждой стадии, являются такими же, как описанные выше условия.

[0099]

Полученное таким образом соединение, представленное формулой (I), настоящего изобретения, и его промежуточные соединения могут быть легко выделены и очищены в соответствии с известными методами разделения и очистки. Примеры таких методов разделения и очистки включают концентрирование, концентрирование в вакууме, экстракцию растворителем, перекристаллизацию, переосаждение, препаративную обращенно-фазную высокоэффективную жидкостную хроматографию, колоночную хроматографию и препаративную тонкослойную хроматографию.

[0100]

Когда соединение настоящего изобретения имеет оптический изомер, стереоизомер, таутомер или ротационный изомер, все такие изомеры и их смеси включают в соединение настоящего изобретения. Более того, соединение настоящего изобретения также включает рацемат или оптически активное вещество, отделенное от рацемата.

[0101]

Более того, соединение настоящего изобретения также включает следующие таутомеры:

[0102]

[0103]

Соединение настоящего изобретения или его соль могут представлять собой кристалл. Даже если кристаллическая форма представляет собой единственную форму или полиморфную смесь, кристалл включают в соединение настоящего изобретения или его соль. Такой кристалл может быть произведен кристаллизацией настоящего соединения в соответствии с известным способом кристаллизации. Соединение настоящего изобретения или его соль могут представлять собой или сольват (например, гидрат) или не-сольват, и оба из них включают в соединение настоящего изобретения или его соль. Соединения, меченные изотопами (например, дейтерием, 3H, 13C, 14C, 35S и 125I) или т.п., включают в соединение настоящего изобретения или его соль.

[0104]

Пролекарство соединения настоящего изобретения или его соли также включено в настоящее изобретение. Пролекарство означает соединение, которое преобразуют в соединение настоящего изобретения или его соль в результате реакции с ферментом, желудочным соком или т.п. в физиологических условиях in vivo; то есть, соединение, которое инициирует ферментативное окисление, восстановление, гидролиз или т.п., так что это меняет пролекарство до соединения настоящего изобретения или его соли, или соединение, которое подвергается гидролизу или т.п. за счет действия желудочного сока или т.п., так что оно меняется до соединения настоящего изобретения или его соли. Более того, такое пролекарство соединения настоящего изобретения или его соли также может представлять собой соединение, которое меняется до соединения настоящего изобретения или его соли при физиологических условиях, как описано в публикации «Iyakuhin no Kaihatsu (Development of Pharmaceutical Products)» Vol. 7, Bunshi Sekkei (Molecular Designing), pp. 163-198, опубликованной Hirokawa Shoten, 1990.

[0105]

Соль соединения настоящего изобретения не имеет особенных ограничений пока она представляет собой фармацевтически приемлемую соль, и это означает соль, обычно используемую в области органической химии. Примеры такой соли включают такие соли, как основно-аддитивная соль по карбоксильной группе, когда настоящее соединение имеет карбоксильную группу, или кислотно-аддитивную соль по аминогруппе или основной гетероциклической группе, когда настоящее соединение имеет аминогруппу или основную гетероциклическую группу.

Примеры основно-аддитивной соли включают: соли щелочных металлов, такие как натриевая соль или калиевая соль; соли щелочноземельных металлов, такие как кальциевая соль или магниевая соль; аммонийные соли; и соли органических аминов, такие как триметиламинная соль, триэтиламинная соль, дициклогексиламинная соль, этаноламинная соль, диэтаноламинная соль, триэтаноламинная соль, прокаиновая соль и N,N'-дибензил-этилендиаминная соль.

Примеры кислотно-аддитивной соли включают соли неорганических кислот, такие как гидрохлорид, сульфат, нитрат, фосфат или перхлорат; соли органических кислот, такие как ацетат, формиат, малеат, фумарат, тартрат, цитрат, аскорбат или трифторацетат; и сульфонаты, такие как метансульфонат, изетионат, бензолсульфонат или п-толуолсульфонат.

[0106]

Соединение настоящего изобретения или его соль проявляют более высокую селективную ингибирующую активность на JAK3, чем на JAK1 и JAK2. Кроме того, соединение настоящего изобретения или его соль обладают прекрасной способностью подавлять рост человеческих РВМС. Более того, соединение настоящего изобретения или его соль проявляют ингибирующую активность на IL-2-индуцируемое продуцирование IFN-γ in vivo.

Так как соединение настоящего изобретения или его соль проявляют прекрасную JAK3-ингибирующую активность, оно полезно в качестве фармацевтического агента для лечения заболевания, вовлекающего JAK3. Более того, так как соединение настоящего изобретения или его соль имеют прекрасную селективность относительно JAK3, оно полезно в качестве фармацевтического агента с пониженными побочными эффектами, которые обусловлены JAK1 и JAK2 (то есть, увеличение липидного уровня, анемия, нейтропения, иммуносупрессия и др.).

«Заболевание, вовлекающее JAK3» представляет собой представляет собой заболевание, распространенность которого снижают и симптомы которого достигают ослабления и ремиссии, смягчают и/или полностью излечивают за счет удаления, подавления и/или ингибирования функции JAK3. Примеры такого заболевания, вовлекающего JAK3, включают аутоиммунное заболевание (ревматоидный артрит, рассеянный склероз, системная красная волчанка, склеродермия, полимиозит/дерматомиозит, синдром Шегрена, болезнь Бехчета и др.), аллергическое заболевание (бронхиальная астма, аллергический ринит/поллиноз, атопический дерматит, пищевая аллергия, анафилаксия, лекарственная аллергия, крапивница, конъюнктивит и др.), заболевание нервной системы (рассеянный склероз, болезнь Альцгеймера и др.), воспалительное заболевание кишечника (язвенный колит, болезнь Крона), псориаз, контактный дерматит, диабет, глютеновая болезнь, вирусное инфекционное заболевание, синдром острой дыхательной недостаточности (ARDS), реакция «трансплантат против хозяина» (GVHD), отторжение трансплантата, гематологическая злокачественная опухоль (лимфома, лейкемия) и другие злокачественные новообразования. Из числа этих заболеваний псориаз, реакция «трансплантат против хозяина», рассеянный склероз, воспалительное заболевание кишечника, системная красная волчанка и ревматоидный артрит предпочтительны, а ревматоидный артрит или рассеянный склероз более предпочтительны.

[0107]

В настоящем описании «лечение» включает предупреждение и/или лечение описанных выше заболеваний, вовлекающих JAK3, а также ослабление симптомов и/или поддерживающее лечение для предупреждения рецидива.

[0108]

Когда соединение настоящего изобретения или его соль используют в качестве фармацевтического агента, при необходимости фармацевтический носитель может быть смешан с настоящим соединением, и различные дозированные формы могут быть приняты для использования в зависимости от цели лечения. В качестве такой дозированной формы может быть одобрена любая дозированная форма из числа перорального средства, инъекции, свечи, мази, ингалятора, пластыря и т.п. Так как соединение настоящего изобретения или его соль проявляют прекрасную пероральную всасываемость, предпочтительно выбирают пероральное средство. Такие дозированные формы могут быть произведены обычно используемыми способами составления рецептур, которые известны специалисту в данной области техники.

В качестве таких фармацевтических носителей используют различные типы органических или неорганических носителей, которые обычно используют в качестве материалов препарата. Такой носитель смешивают в качестве наполнителя, связующего вещества, разрыхлителя или смазывающего вещества в твердом препарате, и также смешивают в качестве растворителя, солюбилизатора, суспендирующего агента, регулятора тоничности, буфера, успокаивающего средства и т.п. в жидком препарате. Кроме того, препаративные вспомогательные добавки, такие как антисептик, антиоксидант, красящий агент, подсластитель или стабилизатор, могут быть использованы при необходимости.

[0109]

В случае приготовления твердого препарата для перорального применения к соединению настоящего изобретения добавляют наполнитель и при необходимости наполнитель, связующее вещество, разрыхлитель, смазывающее вещество, красящий агент, вкусовой агент и т.п. и после этого могут быть произведены таблетка, таблетка с покрытием, гранула, порошковое средство, капсула и т.п. с помощью обычного метода.

[0110]

В случае приготовления инъекции к соединению настоящего изобретения добавляют регулятор pH, буфер, стабилизатор, регулятор тоничности, местный анестетик и т.п. и после этого могут быть произведены подкожные, внутримышечные и внутривенные инъекции с помощью обычного способа.

[0111]

Количество соединения настоящего изобретения, которое смешивают в каждой из вышеупомянутых стандартных дозированных лекарственных форм, не является постоянным и зависит от симптомов пациента, в случае которого настоящее соединение должно быть применено, или от дозированной формы или т.п. В общем случае соединение настоящего изобретения желательно использовать в дозе приблизительно от 0,05 до 1000 мг на стандартную дозированную форму в случае перорального агента, в дозе приблизительно от 0,01 до 500 мг в случае инъекции и в дозе приблизительно от 1 до 1000 мг в случае свечи.

[0112]

Примененная доза лекарства, имеющая упомянутую выше дозированную форму, отличается в зависимости от симптомов, массы тела, возраста, пола и т.п. пациента и не может быть определена однозначно. Соединение настоящего изобретения обычно может быть применено в дозе приблизительно от 0,05 до 5000 мг и предпочтительно от 0,1 до 1000 мг для взрослого (вес тела: 50 кг) в день. Такую дозу предпочтительно вводят пациенту один раз в день или поделенной на 2 или 3 назначения.

ПРИМЕРЫ

[0113]

Далее настоящее изобретение описано подробно в приведенных ниже примерах. Однако эти примеры не предназначены для ограничения объема настоящего изобретения. Различные типы реагентов, используемые в примерах, представляют собой коммерчески доступные продукты, если не указано иное. В случае хроматографии на силикагеле используют картридж Biotage SNAP Cartridge Ultra, производимый компанией Biotage, и в случае хроматографии на основном силикагеле используют картридж Biotage SNAP Cartridge KP-NH, производимый компанией Biotage.

В случае препаративной тонкослойной хроматографии используют Kieselgel TM60F254, Art. 5744, производимый компанией Merck, или NH2 Silica Gel 60F254 Plate Wako, производимый компанией Wako Pure Chemical Industries, Ltd.

В случае спектроскопии 1H ЯМР используют прибор AL400 (400 МГц), производимый компанией JEOL, Mercury (400 МГц), производимый компанией Varian, или Inova (400 МГц), производимый компанией Varian, и измерения проводят с использованием тетраметилсилана в качестве стандарта. Кроме того, для масс-спектров используют Micromass ZQ или SQD производства компании Waters, и измерения проводят в соответствии с методом ионизации электроспрея (ESI) или методом химической ионизации при атмосферном давлении (APCI). Реакцию при микроволновом облучении проводят с использованием устройства Initiator, производимого компанией Biotage.

Отдельные сокращения имеют приведенные ниже значения.

с: синглет

д: дублет

т: триплет

кв: квартет

дд: дублет дублета

дт: дублет триплета

тд: триплет дублета

тт: триплет триплета

ддд: дублет дублета дублета

ддт: дублет дублета триплета

дтд: дублет триплета дублета

тдд: триплет дублета дублета

м: мультиплет

уш.: уширенный

Boc: трет-бутоксикарбонил

ДМСО-d6: дейтерированный диметилсульфоксид

CDCl3: дейтерированный хлороформ

CD3OD: дейтерированный метанол

ТГФ: тетрагидрофуран

ДМФА: N,N-диметилформамид

ДМСО: диметилсульфоксид

Pd(PPh3)4: тетракис(трифенилфосфин)палладий

PdCl2(dppf)CH2Cl2: [1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]-дихлорпалладий (II), комплекс с дихлорметаном

PdCl2(PPh3)2: дихлорбис(трифенилфосфин)палладий(II)

[0114]

Справочный пример 1

Справочный пример 1(1a)

5-((трет-Бутоксикарбонил)амино)циклогекс-1-ен-1-ил-трифтор-метансульфонат

Справочный пример 1(1b)

3-((трет-Бутоксикарбонил)амино)циклогекс-1-ен-1-ил-трифтор-метансульфонат

трет-Бутил-(3-оксоциклогексил)карбамат (5,0 г) и N-фенил-бис(трифторметансульфонимид) (11,0 г) растворяют в ТГФ (100 мл) и полученный раствор затем охлаждают до -78°C. Затем 2,0 M раствор в ТГФ (26,0 мл) диизопропиламида лития добавляют к реакционному раствору, температуру смешанного раствора повышают до 0°C и смешанный раствор затем перемешивают 30 мин. После этого к реакционной смеси добавляют 0,5 M водный раствор гидросульфата калия для разбавления и полученный раствор затем экстрагируют этилацетатом. Собранный органический слой промывают насыщенным рассолом, сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат), получают соединение (4,39 г, выход 54%) справочного примера 1(1a) и соединение (2,00 г, выход 25%) справочного примера 1(1b).

Справочный пример 1(1a): спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 5,84-5,74 (м, 1H), 4,74-4,46 (м, 1H), 4,06-3,85 (м, 1H), 2,77-2,63 (м, 1H), 2,38-2,18 (м, 3H), 1,90-1,80 (м, 1H), 1,66-1,53 (м, 1H), 1,45 (с, 9H).

ESI-MS: m/z 346(MH+).

Справочный пример 1(1b): спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 5,79-5,72 (м, 1H), 4,70-4,50 (м, 1H), 4,47-4,33 (м, 1H), 2,40-2,25 (м, 2H), 1,94-1,67 (м, 3H), 1,56-1,49 (м, 1H), 1,45 (с, 9H).

ESI-MS: m/z 346(MH+).

[0115]

Справочный пример 1(2a)

трет-Бутил-(3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)циклогекс-3-ен-1-ил)карбамат

Добавляют ДМФА (90 мл) к соединению (9,25 г) справочного примера 1(1a), 4,4,4',4',5,5,5',5'-октаметил-2,2'-би(1,3,2-диоксаборолану) (10,2 г) и ацетату калия (3,95 г), после чего атмосферу замещают азотом. Затем к полученному продукту добавляют PdCl2(dppf)CH2Cl2 (980 мг) и полученную смесь перемешивают при 80°C в течение 14 час. Затем реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и к смеси добавляют этилацетат и воду. После этого полученную таким образом смесь фильтруют через Celite. Фильтрат экстрагируют этилацетатом и собранный органический слой промывают водой и затем насыщенным рассолом. Полученный продукт сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат), получают требуемый продукт (6,51 г, выход 75%).

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 6,56-6,51 (м, 1H), 4,58-4,41 (м, 1H), 3,80-3,62 (м, 1H),2,58-2,41 (м, 1H), 2,31-2,13 (м, 2H), 1,98-1,77 (м, 2H), 1,54-1,47 (м, 1H), 1,44 (с, 9H), 1,25 (с, 12H).

ESI-MS: m/z 324(MH+).

[0116]

Справочный пример 1(2b)

трет-Бутил-(3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)циклогекс-2-ен-1-ил)карбамат

Интересующий продукт получают в соответствии со справочным примером 1(2a) за исключением того, что соединение справочного примера 1(1b) используют вместо соединения справочного примера 1(1a).

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 6,40-6,32 (м, 1H), 4,53 (д, J=7,3 Гц, 1H), 4,27-4,14 (м, 1H), 2,11-2,02 (м, 2H), 1,97-1,83 (м, 1H), 1,68-1,52 (м, 2H), 1,49-1,44 (м, 1H), 1,44 (с, 9H), 1,26 (с, 12H).

ESI-MS: m/z 324(MH+).

[0117]

Справочный пример 2

Справочный пример 2(1a)

4-((трет-Бутоксикарбонил)амино)циклопент-1-ен-1-ил-трифтор-метансульфонат

Справочный пример 2(1b)

3-((трет-Бутоксикарбонил)амино)циклопент-1-ен-1-ил-трифтор-метансульфонат

В атмосфере азота 1,0 M раствор в ТГФ (114 мл) гексаметилдисилазида лития добавляют в ТГФ (100 мл) и полученную смесь затем охлаждают до -78°C. Раствор в ТГФ (100 мл) трет-бутил-(3-оксоциклопентил)карбамата (9,0 г) добавляют к реакционному раствору за 10 мин. После этого к смеси добавляют N-фенил-бис(трифторметансульфонимид) (19,4 г) и температуру полученной смеси повышают до 0°C, после чего перемешивают 10 мин. После этого воду, толуол и 5 M водный раствор гидроксида натрия добавляют к реакционной смеси и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре 30 мин. Затем реакционную смесь экстрагируют толуолом. Собранный органический слой промывают последовательно 0,5 M водным раствором гидросульфата калия, насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и насыщенным рассолом и затем сушат над безводным сульфатом натрия, после чего концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат), получают соединение (8,61 г, выход 58%) справочного примера 2(1a) и соединение (4,31 г, выход 29%) справочного примера 2(1b).

Справочный пример 2(1a): спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 5,62-5,56 (м, 1H), 4,87-4,67 (м, 1H), 4,49-4,23 (м, 1H), 3,07-2,76 (м, 2H), 2,50-2,40 (м, 1H), 2,32-2,20 (м, 1H), 1,45 (с, 9H).

ESI-MS: m/z 332(MH+).

Справочный пример 2(1b): спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 5,68-5,61 (м, 1H), 4,89-4,70 (м, 1H), 4,69-4,48 (м, 1H), 2,75-2,43 (м, 3H), 1,84-1,66 (м, 1H), 1,45 (с, 9H).

ESI-MS: m/z 332(MH+).

[0118]

Справочный пример 2(2a)

трет-Бутил-(3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)циклопент-3-ен-1-ил)карбамат

Интересующий продукт получают в соответствии со справочным примером 1(2a) за исключением того, что соединение справочного примера 2(1a) используют вместо соединения справочного примера 1(1a).

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 6,50-6,45 (м, 1H), 4,76-4,58 (м, 1H), 4,37-4,19 (м, 1H), 2,86-2,70 (м, 2H), 2,37-2,22 (м, 2H), 1,43 (с, 9H), 1,27 (с, 12H).

ESI-MS: m/z 310(MH+).

[0119]

Справочный пример 2(2b)

трет-Бутил-(3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)циклопент-2-ен-1-ил)карбамат

Интересующий продукт получают в соответствии со справочным примером 1(2a) за исключением того, что соединение справочного примера 2(1b) используют вместо соединения справочного примера 1(1a).

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 6,42-6,32 (м, 1H), 4,84-4,69 (м, 1H), 4,58-4,39 (м, 1H), 2,58-2,46 (м, 1H), 2,44-2,25 (м, 2H), 1,55-1,47 (м, 1H), 1,44 (с, 9H), 1,27 (с, 12H).

ESI-MS: m/z 310(MH+).

[0120]

Справочный пример 3

(S)-трет-Бутил-(3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)циклогекс-3-ен-1-ил)карбамат

Справочный пример 3(1)

трет-Бутил-((1S,3R)-3-гидроксициклогексил)карбамат

(1R,3S)-3-Аминоциклогексанол (13,7 г) растворяют в 2-метил-тетрагидрофуране (140 мл) и затем к полученному раствору добавляют насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия (70 мл). После этого ди-трет-бутилдикарбонат (27,5 г) добавляют к реакционной смеси при 0°C и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре 16 час. Затем к реакционной смеси добавляют воду для разбавления и полученную смесь экстрагируют 2-метилтетрагидрофураном. Собранный органический слой промывают насыщенным водным раствором хлорида аммония, насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия и насыщенным рассолом и затем сушат над безводным сульфатом натрия, после чего концентрируют в вакууме. Полученное твердое вещество промывают гептаном, получают требуемый продукт (22,7 г, выход 89%).

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 4,82-4,58 (м, 1H), 3,82-3,66 (м, 1H), 3,63-3,40 (м, 1H), 2,25-2,11 (м, 1H), 1,93-1,74 (м, 3H), 1,62-1,55 (м, 1H), 1,44 (с, 9H), 1,39-1,04 (м, 4H).

ESI-MS: m/z 216(MH+).

[0121]

Справочный пример 3(2)

(S)-трет-Бутил-(3-оксоциклогексил)карбамат

Соединение (21,5 г) справочного примера 3(1) растворяют в этилацетате (200 мл) и затем к полученному раствору последовательно добавляют 1-метил-2-азаадамантан-N-оксил (166 мг), 5 M водный раствор бромида натрия (6 мл) и насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия (100 мл). После этого к раствору при перемешивании при 0°C добавляют 10%-ный водный раствор гипохлорита натрия (100 мл) и полученную смесь затем перемешивают 1 час. После этого к реакционной смеси при 0°C добавляют 10%-ный водный раствор гидросульфита натрия и полученную смесь разбавляют 10%-ным водным раствором карбоната калия и экстрагируют этилацетатом. Собранный органический слой промывают 1 M соляной кислотой, насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия, водой и насыщенным рассолом, затем сушат над безводным сульфатом натрия, после чего концентрируют в вакууме. Полученное твердое вещество промывают смесью (диизопропиловый эфир)-гептан, получают требуемый продукт (19,4 г, выход 91%).

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 4,67-4,35 (м, 1H), 4,05-3,77 (м, 1H), 2,76-2,64 (м, 1H), 2,43-2,19 (м, 3H), 2,14-1,92 (м, 2H), 1,79-1,64 (м, 2H), 1,44 (с, 9H).

ESI-MS: m/z 214(MH+).

[0122]

Справочный пример 3(3)

(S)-5-((трет-Бутоксикарбонил)амино)циклогекс-1-ен-1-ил-трифторметансульфонат

Раствор в ТГФ (160 мл) соединения (32,3 г) справочного примера 3(2) добавляют по каплям к раствору в ТГФ (780 мл) бис(триметилсилил)амида натрия (60,5 г), который был охлажден до -78°C, и реакционную смесь перемешивают 30 мин. К реакционной смеси при -78°C добавляют N-фенил-бис(трифторметансульфонимид) (64,3 г) и полученную смесь перемешивают 30 мин. После этого температуру реакционной смеси повышают до 0°C и смесь перемешивают еще 2 час. После этого к реакционной смеси добавляют воду и 1 M водный раствор гидроксида натрия, температуру полученной смеси повышают до комнатной температуры, и смесь экстрагируют толуолом. Собранный органический слой промывают 1 M водным раствором гидросульфата калия, насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия, водой и насыщенным рассолом, затем сушат над безводным сульфатом натрия, после чего концентрируют в вакууме. Добавляют гептан к полученному остатку, осажденное твердое вещество отфильтровывают и затем промывают гептаном, получают требуемый продукт (41,6 г, выход 79%).

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 5,84-5,74 (м, 1H), 4,74-4,46 (м, 1H), 4,06-3,85 (м, 1H), 2,77-2,63 (м, 1H), 2,38-2,18 (м, 3H), 1,90-1,80 (м, 1H), 1,66-1,53 (м, 1H), 1,45 (с, 9H).

ESI-MS: m/z 346(MH+).

[0123]

Справочный пример 3(4)

(S)-трет-Бутил-(3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)циклогекс-3-ен-1-ил)карбамат

К раствору в толуоле (450 мл) соединения (32,8 г) справочного примера 3(3) последовательно добавляют бис(пинаколато)дибор (26,5 г), ацетат калия (28,0 г), трифенилфосфин (2,49 г) и PdCl2(PPh3)2 (3,33 г). Температуру полученной смеси повышают до 60°C и смесь затем перемешивают в атмосфере азота 4 час. После этого реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, затем к смеси добавляют толуол и полученную таким образом смесь фильтруют через Celite. Фильтрат промывают 1 M водным раствором гидроксида натрия, 1 M соляной кислотой, насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия, водой и насыщенным рассолом, затем сушат над безводным сульфатом натрия, после чего концентрируют в вакууме. К полученному остатку добавляют смесь этилацетат-гептан и активированный уголь, полученную смесь оставляют на 1 час и затем фильтруют через Celite. Фильтрат концентрируют при пониженном давлении и к полученному остатку добавляют смесь циклогексан-гептан. Осажденное твердое вещество отфильтровывают и промывают смесью циклогексан-гептан, получают требуемый продукт (21,3 г, выход 69%).

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 6,56-6,51 (м, 1H), 4,58-4,41 (м, 1H), 3,80-3,62 (м, 1H), 2,58-2,41 (м, 1H), 2,31-2,13 (м, 2H), 1,98-1,77 (м, 2H), 1,54-1,47 (м, 1H), 1,44 (с, 9H), 1,25 (с, 12H).

ESI-MS: m/z 324(MH+).

[0124]

Справочный пример 4

(R)-трет-Бутил-(3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)циклогекс-3-ен-1-ил)карбамат

Интересующий продукт получают в соответствии со справочным примером 3 за исключением того, что (1S,3R)-3-амино-циклогексанол используют вместо (1R,3S)-3-аминоциклогексанола.

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 6,56-6,51 (м, 1H), 4,58-4,41 (м, 1H), 3,80-3,62 (м, 1H), 2,58-2,41 (м, 1H), 2,31-2,13 (м, 2H), 1,98-1,77 (м, 2H), 1,54-1,47 (м, 1H), 1,44 (с, 9H), 1,25 (с, 12H).

ESI-MS: m/z 324 (MH+).

[0125]

Справочный пример 5

трет-Бутил-(3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)циклогепт-3-ен-1-ил)карбамат

Интересующий продукт получают в соответствии со справочным примером 1 за исключением того, что трет-бутил-(3-оксо-циклогептил)карбамат используют вместо трет-бутил-(3-оксо-циклогексил)карбамата.

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 6,91-6,84 (м, 1H), 4,66-4,43 (м, 1H), 3,77-3,58 (м, 1H), 2,52-2,37 (м, 2H), 2,30-2,12 (м, 2H), 2,02-1,90 (м, 1H), 1,61 (уш.с, 3H), 1,43 (с, 9H), 1,26 (с, 12H).

ESI-MS: m/z 338 (MH+).

[0126]

Таблица 1

Структурная формула Структурная формула
Справочный пример 1(2a) Справочный пример 1(2b)
Справочный пример 2(2a) Справочный пример 2(2b)
Справочный пример 3 Справочный пример 4
Справочный пример 5

[0127]

Пример 1

N-(3-(5-фенил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 1)

Пример 1(1)

трет-Бутил-(3-(5-йод-7-тозил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклогекс-3-ен-1-ил)карбамат (Соединение 1(1))

К 4-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидину (2,97 г), соединению (9,39 г) справочного примера 1(2a) и трикалийфосфату (10,2 г) добавляют 1,4-диоксан (66 мл) и воду (11 мл), после чего атмосферу замещают азотом и к реакционной смеси добавляют PdCl2(dppf)CH2Cl2 (1,41 г). Полученную в результате смесь перемешивают при 100°C в течение 14 час. После этого реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и к смеси добавляют этилацетат и воду. После этого полученную в результате смесь фильтруют через Celite. Фильтрат затем экстрагируют этилацетатом, а собранный органический слой промывают водой и затем насыщенным рассолом. Полученный продукт сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (хлороформ:метанол), получают трет-бутил-(3-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклогекс-3-ен-1-ил)карбамат. Полученное соединение используют в последующей реакции без дополнительной очистки.

[0128]

Добавляют ДМФА (100 мл) к полученному соединению и полученную смесь затем охлаждают до 0°C. Далее к смеси добавляют N-йодсукцинимид (6,21 г) и полученную смесь перемешивают при 0°C в течение 30 мин. После этого к реакционной смеси добавляют 0,5 M водный раствор гидросульфита натрия и полученную смесь экстрагируют этилацетатом. Собранный органический слой промывают водой и затем насыщенным рассолом. Полученный продукт сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (хлороформ:метанол), получают 3-(5-йод-7H-пирроло-[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклогекс-3-ен-1-ил)карбамат. Полученный йодсодержащий продукт подвергают последующей реакции без дополнительной очистки.

[0129]

Добавляют ДМФА (80 мл) к полученному йодсодержащему продукту и полученную смесь затем охлаждают до 0°C. После этого 60%-ный гидрид натрия (1,72 г) и затем п-толуолсульфонилхлорид (4,46 г) добавляют к реакционной смеси и полученную смесь перемешивают при 0°C в течение 30 мин. После этого к реакционной смеси добавляют ледяную воду и водный слой экстрагируют этилацетатом. Собранный органический слой промывают водой и затем насыщенным рассолом. Полученный продукт сушат над безводным сульфатом натрия, затем концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат), получают требуемый продукт (7,29 г, выход 63%).

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,92 (с, 1H), 8,12 (д, J=8,3 Гц, 2H), 7,89 (с, 1H), 7,34 (д, J=8,3 Гц, 2H), 6,05-5,92 (м, 1H), 4,76-4,60 (м, 1H), 4,14-3,97 (м, 1H), 2,90-2,75 (м, J=15,9 Гц, 1H), 2,41 (с, 3H), 2,49-2,29 (м, 3H), 2,06-1,94 (м, 1H), 1,80-1,64 (м, 1H), 1,44 (с, 9H).

ESI-MS: m/z 595 (MH+).

[0130]

Пример 1(2)

N-(3-(5-Фенил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 1)

К соединению 1(1) (100 мг), фенилбороновой кислоте (41 мг) и трикалийфосфату (89,2 мг) добавляют 1,4-диоксан (1,8 мл) и воду (0,3 мл), после чего атмосферу замещают азотом. После этого к реакционной смеси добавляют PdCl2(dppf)CH2Cl2 (12,3 мг) и полученную смесь перемешивают при 100°C в течение 2 час. После этого реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и к смеси добавляют этилацетат и воду. После этого полученную в результате смесь фильтруют через Celite. Фильтрат экстрагируют этилацетатом и собранный органический слой промывают водой и затем насыщенным рассолом. Полученный продукт сушат над безводным сульфатом натрия, затем концентрируют при пониженном давлении.

[0131]

ТГФ (1,0 мл) и 1,0 M раствор в ТГФ (1,0 мл) тетрабутил-аммонийфторида добавляют к полученному остатку и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре 4 час. Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении и затем очищают хроматографией на силикагеле (хлороформ:метанол), получают трет-бутил-(3-(5-фенил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклогекс-3-ен-1-ил)карбамат. Полученное соединение подвергают последующей реакции без дополнительной очистки.

[0132]

Метанол (1 мл) и 4 M раствор в 1,4-диоксане (1 мл) соляной кислоты добавляют к полученному соединению и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре 30 мин. После этого реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении. Атмосферу переводят на атмосферу азота, затем к реакционной смеси добавляют дихлорметан (3 мл) и диизопропилэтиламин (1 мл) и полученную смесь охлаждают до 0°C. После этого к реакционной смеси добавляют акрилоилхлорид (0,1 мл) и полученную смесь перемешивают 30 мин. После этого к реакционной смеси последовательно добавляют водный раствор аммиака, хлороформ и метанол и полученную в результате смесь перемешивают при комнатной температуре 1 час. После этого реакционную смесь экстрагируют хлороформом, собранный органический слой промывают насыщенным рассолом, затем сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (хлороформ:метанол), получают названное соединение (34,2 мг, выход 59%).

Спектр 1H ЯМР (CDCl3-CD3OD), δ: 8,77 (с, 1H), 7,43-7,27 (м, 6H), 6,29 (дд, J=1,7, 16,8 Гц, 1H), 6,16 (дд, J=10,2, 16,8 Гц, 1H), 5,63 (дд, J=1,7, 10,2 Гц, 1H), 5,50-5,44 (м, 1H), 4,28-4,17 (м, 1H), 2,69-2,46 (м, 2H), 1,94-1,54 (м, 4H).

ESI-MS: m/z 345 (MH+).

[0133]

Пример 2

N-(3-(5-(Тиофен-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 2)

Названное соединение получают в соответствии с примером 1(2) за исключением того, что тиофен-2-илбороновую кислоту используют вместо фенилбороновой кислоты.

Спектр 1H ЯМР (ДМСО-d6), δ: 12,48-12,41 (м, 1H), 8,74 (с, 1H), 8,11 (д, J=7,7 Гц, 1H), 7,73 (д, J=2,2 Гц, 1H), 7,52 (дд, J=1,1, 5,1 Гц, 1H), 7,10 (дд, J=3,3, 5,1 Гц, 1H), 6,94 (дд, J=1,1, 3,3 Гц, 1H), 6,26 (дд, J=10,1, 17,0 Гц, 1H), 6,10 (дд, J=2,2, 17,0 Гц, 1H), 5,59 (дд, J=2,2, 10,1 Гц, 1H), 5,43-5,39 (м, 1H), 4,02-3,87 (м, 1H), 2,95-2,81 (м, 1H), 2,47-2,36 (м, 1H), 1,98-1,74 (м, 3H), 1,53-1,36 (м, 1H).

ESI-MS: m/z 351 (MH+).

[0134]

Пример 3

N-(3-(5-(Тиофен-3-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 3)

Названное соединение получают в соответствии с примером 1(2) за исключением того, что тиофен-3-илбороновую кислоту используют вместо фенилбороновой кислоты.

Спектр 1H ЯМР (ДМСО-d6), δ: 12,42-12,14 (м, 1H), 8,72 (с, 1H), 8,10 (д, J=7,3 Гц, 1H), 7,67 (д, J=2,6 Гц, 1H), 7,55 (дд, J=2,9, 5,1 Гц, 1H), 7,33 (дд, J=1,1, 2,9 Гц, 1H), 7,07 (дд, J=1,1, 5,1 Гц, 1H), 6,27 (дд, J=10,3, 16,9 Гц, 1H), 6,10 (дд, J=2,2, 16,9 Гц, 1H), 5,59 (дд, J=2,2, 10,3 Гц, 1H), 5,36-5,31 (м, 1H), 4,02-3,89 (м, 1H), 2,99-2,88 (м, 1H), 2,47-2,40 (м, 1H), 1,91-1,72 (м, 3H), 1,54-1,41 (м, 1H).

ESI-MS: m/z 351 (MH+).

[0135]

Пример 4

N-(3-(5-(Фуран-3-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 4)

Названное соединение получают в соответствии с примером 1(2) за исключением того, что фуран-3-илбороновую кислоту используют вместо фенилбороновой кислоты.

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,74 (с, 1H), 7,51-7,49 (м, 1H), 7,48-7,46 (м, 1H), 7,35 (с, 1H), 6,43-6,41 (м, 1H), 6,29 (дд, J=1,7, 17,1 Гц, 1H), 6,19 (дд, J=10,0, 17,1 Гц, 1H), 5,78-5,72 (м, 1H), 5,65 (дд, J=1,7, 10,0 Гц, 1H), 4,33-4,22 (м, 1H), 2,71-2,61 (м, 1H), 2,56-2,45 (м, 1H), 2,18-1,96 (м, 2H), 1,91-1,73 (м, 2H).

ESI-MS: m/z 335 (MH+).

[0136]

Пример 5

N-(3-(5-(Фуран-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 5)

Добавляют ДМФА (6,2 мл) к соединению 1(1) (740 мг) и трибутил(фуран-2-ил)олову (890 мг), после чего атмосферу замещают азотом. После этого к реакционной смеси добавляют PdCl2(PPh3)2 (87 мг) и полученную смесь перемешивают при нагревании при 100°C в течение 2 час. После этого к реакционной смеси добавляют насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия и этилацетат, полученную смесь перемешивают и затем фильтруют через Celite. Фильтрат экстрагируют этилацетатом, собранный органический слой промывают насыщенным рассолом, сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении.

[0137]

Полученный остаток растворяют в ТГФ (5 мл) и к полученному раствору добавляют 1,0 M раствор в ТГФ (5 мл) тетрабутиламмоний-фторида. Полученную в результате смесь перемешивают при комнатной температуре 1 час. После этого к реакционной смеси добавляют 0,067 M фосфатный буфер (pH 7,4) и полученную смесь экстрагируют этилацетатом. Собранный органический слой промывают насыщенным рассолом, сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат), получают трет-бутил-(3-(5-(фуран-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]-пиримидин-4-ил)циклогекс-3-ен-1-ил)карбамат.

Полученное соединение подвергают последующей реакции без дополнительной очистки.

[0138]

Метанол (3 мл) и 4 M раствор в 1,4-диоксане (4 мл) соляной кислоты добавляют к полученному продукту реакции сочетания и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре 30 мин. После этого реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении. Атмосферу замещают атмосферой азота, затем к реакционной смеси добавляют дихлорметан (6,2 мл) и диизопропилэтиламин (2,21 мл) и полученную смесь охлаждают до 0°C. После этого к реакционной смеси добавляют акрилоилхлорид (0,20 мл) и полученную смесь затем перемешивают 30 мин. После этого к реакционной смеси последовательно добавляют водный раствор аммиака, хлороформ и метанол и полученную в результате смесь затем перемешивают при комнатной температуре 1 час. После этого реакционную смесь экстрагируют хлороформом и собранный органический слой промывают насыщенным рассолом, сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (хлороформ:метанол), получают названное соединение (348 мг, выход 84%).

Спектр 1H ЯМР (ДМСО-d6), δ: 8,76 (с, 1H), 7,54-7,44 (м, 2H), 6,51-6,12 (м, 4H), 5,73-5,57 (м, 2H), 4,39-4,27 (м, 1H), 2,80-2,68 (м, 1H), 2,56-2,47 (м, 1H), 2,17-1,60 (м, 4H).

ESI-MS: m/z 335 (MH+).

[0139]

Пример 6

(R)-N-(3-(5-(Фуран-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 6)

Пример 6(1)

(R)-трет-Бутил-(3-(5-йод-7-тозил-7H-пирроло[2,3-d]-пиримидин-4-ил)циклогекс-3-ен-1-ил)карбамат (Соединение 6(1))

Названное соединение получают в соответствии с примером 1(1) за исключением того, что соединение справочного примера 4 используют вместо соединения справочного примера 1(2a).

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,92 (с, 1H), 8,12 (д, J=8,3 Гц, 2H), 8,12 (д, J=8,3 Гц, 2H), 7,89 (с, 1H), 7,34 (д, J=8,0 Гц, 1H), 6,02-5,96 (м, 1H), 4,76-4,63 (м, 1H), 4,12 (с, 1H), 2,90-2,76 (м, 1H), 2,41 (с, 3H), 2,51-2,27 (м, 3H), 2,06-1,95 (м, 1H), 1,81-1,67 (м, 1H), 1,44 (с, 9H).

ESI-MS: m/z 595 (MH+).

[0140]

Пример 6(2)

(R)-N-(3-(5-(Фуран-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 6)

Названное соединение получают в соответствии с примером 5 за исключением того, что соединение 6(1) используют вместо соединения 1(1).

Спектр 1H ЯМР (ДМСО-d6), δ: 12,53-12,38 (м, 1H), 8,74 (с, 1H), 8,13 (д, J=7,6 Гц, 1H), 7,79 (д, J=2,7 Гц, 1H), 7,69 (дд, J=0,7, 2,0 Гц, 1H), 6,56 (дд, J=2,0, 3,2 Гц, 1H), 6,39 (дд, J=0,7, 3,2 Гц, 1H), 6,27 (дд, J=10,0, 17,1 Гц, 1H), 6,11 (дд, J=2,4, 17,1 Гц, 1H), 5,59 (дд, J=2,4, 10,0 Гц, 1H), 5,52-5,46 (м, 1H), 4,08-3,93 (м, 1H), 2,94-2,83 (м, 1H), 2,47-2,33 (м, 1H), 2,06-1,96 (м, J=5,9 Гц, 2H), 1,88-1,79 (м, 1H), 1,59-1,43 (м, 1H).

ESI-MS: m/z 335 (MH+).

[0141]

Пример 7

(S)-N-(3-(5-(Фуран-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 7)

Пример 7(1)

4-Хлор-5-йод-7-тритил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин (Соединение 7(1))

Тритилхлорид (134 г) добавляют к раствору в хлороформе (1 л) 4-хлор-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидина (111 г) и триэтиламина (84 мл) при охлаждении льдом. Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре 1 час и затем реакционную смесь концентрируют. К полученному остатку добавляют метанол (400 мл), после этого отфильтровывают твердое вещество, промывают метанолом и сушат, получают названное соединение (204 г, выход 98%).

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,27 (с, 1H), 7,39 (с, 1H), 7,31-7,28 (м, 9H), 7,15-7,11 (м, 6H).

ESI-MS: m/z 522 (MH+).

[0142]

Пример 7(2)

4-Хлор-5-(фуран-2-ил)-7-тритил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин (Соединение 7(2))

В атмосфере азота раствор в 1,4-диоксане (750 мл) соединения 7(1) (78,3 г) и Pd(PPh3)4 (8,7 г) нагревают до 90°C и после этого к реакционному раствору добавляют за 6 час 1 M водный раствор карбоната натрия (180 мл) с 2-фурилбороновой кислотой (21,4 г). Реакционную смесь дополнительно перемешивают при 90°C в течение 3 час и реакционный растворитель отгоняют при пониженном давлении. После этого к остатку добавляют воду (1 л) и полученную смесь экстрагируют этилацетатом. Собранный органический слой промывают насыщенным рассолом, сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении. К полученному остатку добавляют метанол. Твердое вещество отфильтровывают, промывают метанолом и сушат, получают названное соединение (59,8 г, выход 86%).

Спектр 1H-ЯМР (CDCl3), δ: 8,31 (с, 1H), 7,52 (с, 1H), 7,45 (д, J=1,8 Гц, 1H), 7,31-7,28 (м, 9H), 7,19-7,15 (м, 6H), 6,72 (д, J=3,3 Гц, 1H), 6,48 (дд, J=3,3, 1,8 Гц, 1H).

ESI-MS: m/z 462 (MH+).

[0143]

Пример 7(3)

(S)-трет-Бутил-(3-(5-(фуран-2-ил)-7-тритил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклогекс-3-ен-1-ил)карбамат (Соединение 7(3))

В атмосфере азота раствор в 1,4-диоксане (150 мл) соединения 7(2) (13,4 г), Pd(PPh3)4 (1,68 г), соединения справочного примера 3 (10.32 г) и 2 M водного раствора карбоната натрия (32 мл) перемешивают при 105°C в течение ночи. После этого реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и добавляют этилацетат и воду. После этого полученную смесь распределяют и органический слой промывают насыщенным рассолом, сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат), получают названное соединение (15,69 г, выход 87%).

Спектр 1H-ЯМР (CDCl3), δ: 8,52 (с, 1H), 7,53 (с, 1H), 7,36 (с, 1H), 7,32-7,26 (м, 9H), 7,22-7,17 (м, 6H), 6,43 (дд, J=2,9, 1,8 Гц, 1H), 6,29 (д, J=3,3 Гц, 1H), 5,72-5,69 (м, 1H), 4,85 (д, J=8,1 Гц, 1H), 4,04 (с, 1H), 2,98-2,90 (м, 1H), 2,47-2,37 (м, 1H), 2,11-1,94 (м, 2H), 1,86-1,78 (м, 1H), 1,72-1,64 (м, 1H), 1,46 (с, 9H).

ESI-MS: m/z 623 (MH+).

[0144]

Пример 7(4)

(S)-3-(5-(Фуран-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-3-енамин (Соединение 7(4))

Смешанный раствор соединения 7(3) (12,3 г), 2-пропанола (120 мл) и 2 M водный раствор метансульфоновой кислоты (50 мл) перемешивают при 85°C в течение 3 час. После этого реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, добавляют воду и органический растворитель отгоняют при пониженном давлении. Водный слой промывают этилацетатом и затем водный слой превращают в основный слой с помощью 5 M гидроксида натрия. Этот слой экстрагируют смешанным растворителем хлороформ-этанол (4/1). Экстракт сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении. Полученное твердое вещество собирают, промывают этилацетатом и сушат, получают названное соединение (4,32 г, выход 78%).

Спектр 1H-ЯМР (CD3OD), δ: 8,69 (с, 1H), 7,62 (с, 1H), 7,56 (дд, J=1,8, 0,7 Гц, 1H), 6,49 (дд, J=3,1, 2,0 Гц, 1H), 6,39 (д, J=3,3 Гц, 1H), 5,64-5,61 (м, 1H), 3,11-3,03 (м, 1H), 2,85-2,78 (м, 1H), 2,30-2,21 (м, 1H), 2,11-2,05 (м, 2H), 1,90-1,83 (м, 1H), 1,53-1,43 (м, 1H).

ESI-MS: m/z 281 (MH+).

[0145]

Пример 7(5)

(S)-N-(3-(5-(Фуран-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 7)

Раствор (2 M) в ацетонитриле (5,17 мл) акрилоилхлорида добавляют к раствору соединения 7(4) (2,76 г), этанола (100 мл) и диизопропилэтиламина (2,01 мл) при охлаждении льдом за 10 мин. После этого к реакционному раствору добавляют воду и органический растворитель отгоняют при пониженном давлении. Осажденное твердое вещество отфильтровывают, промывают водой и этилацетатом. Полученный продукт сушат, получают названное соединение (3,03 г, выход 92%).

Спектр 1H-ЯМР (ДМСО-d6), δ: 12,46 (с, 1H), 8,73 (с, 1H), 8,12 (д, J=7,3 Гц, 1H), 7,78 (д, J=2,6 Гц, 1H), 7,68 (дд, J=1,8, 0,7 Гц, 1H), 6,55 (дд, J=3,3, 1,8 Гц, 1H), 6,38 (д, J=3,3 Гц, 1H), 6,25 (дд, J=17,2, 9,9 Гц, 1H), 6,09 (дд, J=17,0, 2,4 Гц, 1H), 5,58 (дд, J=10,1, 2,4 Гц, 1H), 5,50-5,47 (м, 1H), 4,04-3,94 (м, 1H), 2,86 (дд, J=16,9, 5,1 Гц, 1H), 2,46-2,38 (м, 1H), 2,02-1,96 (м, 2H), 1,86-1,79 (м, 1H), 1,55-1,44 (м, 1H).

ESI-MS: m/z 335 (MH+).

[0146]

Пример 8

N-(3-(5-(Фуран-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклопент-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 8)

Пример 8(1)

трет-Бутил-(3-(5-йод-7-тозил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклопент-3-ен-1-ил)карбамат (Соединение 8(1))

Названное соединение получают в соответствии с примером 1(1) за исключением того, что соединение справочного примера 2(2a) используют вместо соединения справочного примера 1(2a).

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,94 (с, 1H), 8,12 (д, J=8,3 Гц, 2H), 7,34 (д, J=8,3 Гц, 2H), 7,27 (с, 1H), 6,19-6,14 (м, 1H), 4,97-4,86 (м, 1H), 4,63-4,46 (м, 1H), 3,29-3,19 (м, 1H), 3,15-3,01 (м, 1H), 2,72 (д, J=16,3 Гц, 1H), 2,58-2,48 (м, 1H), 2,41 (с, 3H), 1,45 (с, 9H).

ESI-MS: m/z 581 (MH+).

[0147]

Пример 8(2)

N-(3-(5-(Фуран-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклопент-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 8)

Названное соединение получают в соответствии с примером 5 за исключением того, что соединение 8(1) используют вместо соединения 1(1).

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,78 (с, 1H), 7,54 (с, 1H), 7,47-7,44 (м, 1H), 6,47 (дд, J=2,0, 3,2 Гц, 1H), 6,34-6,26 (м, 2H), 6,15 (дд, J=10,2, 17,1 Гц, 1H), 5,65 (дд, J=1,6, 10,1 Гц, 1H), 5,63-5,60 (м, 1H), 4,75-4,65 (м, 1H), 3,22-3,08 (м, 1H), 2,87-2,76 (м, 2H), 2,46-2,36 (м, 1H).

ESI-MS: m/z 321 (MH+).

[0148]

Пример 9

N-(3-(5-Фенил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклопент-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 9)

Пример 9(1)

4-Хлор-5-йод-7-тозил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин (Соединение 9(1))

Добавляют ДМФА (100 мл) к 4-хлор-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]-пиримидину (10 г) и полученную смесь охлаждают до 0°C. После этого к реакционной смеси добавляют 60%-ный гидрид натрия (2,15 г) и затем п-толуолсульфонилхлорид (8,19 г), полученную в результате смесь перемешивают при 0°C в течение 1 час. После этого к реакционной смеси добавляют ледяную воду и водный слой экстрагируют этилацетатом. Собранный органический слой промывают водой и затем насыщенным рассолом. Полученный продукт сушат над безводным сульфатом натрия, затем концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат), получают требуемый продукт (14,1 г, выход 91%).

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,75 (с, 1H), 8,10 (д, J=8,5 Гц, 2H), 7,95 (с, 1H), 7,35 (д, J=8,5 Гц, 2H), 2,42 (с, 3H).

ESI-MS: m/z 434 (MH+).

[0149]

Пример 9(2)

4-Хлор-5-фенил-7-тозил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин (Соединение 9(2))

1,4-Диоксан (18 мл) и воду (3 мл) добавляют к соединению 9(1) (1,71 г), фенилбороновой кислоте (530 мг) и трикалийфосфату (1,67 г), после чего атмосферу замещают азотом. После этого к реакционной смеси добавляют PdCl2(dppf)CH2Cl2 (280 мг) и полученную смесь перемешивают при 60°C в течение 3 час. После этого реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, добавляют этилацетат и воду, полученную смесь фильтруют через Celite. Фильтрат экстрагируют этилацетатом. Собранный органический слой промывают водой и затем насыщенным рассолом. Полученный продукт сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат), получают требуемый продукт (1,21 г, 84%).

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,79 (с, 1H), 8,14 (д, J=8,5 Гц, 2H), 7,76 (с, 1H), 7,50-7,41 (м, 5H), 7,36 (д, J=8,5 Гц, 2H), 2,43 (с, 3H).

ESI-MS: m/z 384 (MH+).

[0150]

Пример 9(3)

N-(3-(5-Фенил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклопент-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 9)

1,4-Диоксан (1,8 мл) и воду (0,3 мл) добавляют к соединению 9(2) (125 мг), соединению справочного примера 2(2a) (127 мг) и трикалийфосфату (181 мг), после чего атмосферу замещают азотом. После этого к реакционной смеси добавляют PdCl2(dppf)CH2Cl2 (25 мг) и полученную смесь перемешивают при 100°C в течение 4 час. После этого реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, добавляют этилацетат и воду, полученную смесь фильтруют через Celite. Фильтрат экстрагируют этилацетатом. Собранный органический слой промывают водой и затем насыщенным рассолом. Полученный продукт сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении.

ТГФ (1 мл) и 1,0 M раствор в ТГФ (1 мл) тетрабутиламмоний-фторида добавляют к полученному остатку и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре 1 час. Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении, затем очищают хроматографией на силикагеле (хлороформ:метанол), получают трет-бутил-(3-(5-фенил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклопент-3-ен-1-ил)карбамат.

[0151]

Добавляют метанол (2 мл) и 4 M раствор в 1,4-диоксане (2 мл) соляной кислоты к полученному выше соединению и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре 30 мин. После этого реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении. Атмосферу преобразуют в атмосферы азота и затем к реакционной смеси добавляют дихлорметан (3,0 мл) и диизопропилэтиламин (1,0 мл). Полученную смесь охлаждают до 0°C. К реакционной смеси добавляют акрилоилхлорид (0,1 мл) и полученную смесь затем перемешивают 30 мин. После этого к реакционной смеси последовательно добавляют водный раствор аммиака, хлороформ и метанол и полученную в результате смесь перемешивают при комнатной температуре 1 час. Затем реакционную смесь экстрагируют хлороформом и собранный органический слой промывают насыщенным рассолом. Полученный продукт сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (хлороформ:метанол), получают названное соединение (74,7 мг, выход 60%).

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,78 (с, 1H), 7,42-7,23 (м, 6H), 6,30-6,21 (м, 1H), 6,18-6,04 (м, 1H), 5,68-5,59 (м, 1H), 5,41-5,34 (м, 1H), 4,63-4,51 (м, 1H), 3,03-2,92 (м, 1H), 2,81-2,71 (м, 1H), 2,58-2,46 (м, 1H), 2,28-2,17 (м, 1H).

ESI-MS: m/z 331 (MH+).

[0152]

Пример 10

N-(3-(5-Фенил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклопент-2-ен-1-ил)акриламид (Соединение 10)

Названное соединение получают в соответствии с примером 9(3) за исключением того, что соединение справочного примера 2(2b) используют вместо соединения справочного примера 2(2a).

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,79 (с, 1H), 7,59-7,18 (м, 6H), 6,23 (дд, J=1,5, 17,1 Гц, 1H), 6,01 (дд, J=10,5, 17,1 Гц, 1H), 5,65 (дд, J=1,5, 10,5 Гц, 1H), 5,41-5,34 (м, 1H), 4,95-4,75 (м, 1H), 2,87-2,65 (м, 2H), 2,47-2,31 (м, 1H), 1,72-1,57 (м, 1H).

ESI-MS: m/z 331 (MH+).

[0153]

Пример 11

N-(3-(5-Фенил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклогепт-3-ен-1-ил)акриламид (Соединение 11)

Названное соединение получают в соответствии с примером 9(3) за исключением того, что соединение справочного примера 5 используют вместо соединения справочного примера 2(2a).

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,75 (с, 1H), 7,44-7,26 (м, 6H), 6,24-6,16 (м, 2H), 5,90-5,82 (м, 1H), 5,65-5,58 (м, 1H), 4,18-4,08 (м, 1H), 2,66-2,59 (м, 2H), 2,14-1,76 (м, 4H), 1,49-1,38 (м, 2H).

ESI-MS: m/z 359 (MH+).

[0154]

Пример 12

N-(3-(5-Фенил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклогекс-2-ен-1-ил)акриламид (Соединение 12)

Пример 12(1)

трет-Бутил-(3-(5-йод-7-тозил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклогекс-2-ен-1-ил)карбамат (Соединение 12(1))

1,4-Диоксан (78 мл) и воду (13 мл) добавляют к 4-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидину (3,89 г), справочному примеру 1(2b) (12,3 г) и трикалийфосфату (13,4 г), после чего атмосферу замещают азотом. После этого к реакционной смеси добавляют PdCl2(dppf)CH2Cl2 (1,85 г) и полученную смесь перемешивают при 100°C в течение 14 час. После этого реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, добавляют этилацетат и воду, и полученную смесь фильтруют через Celite. Фильтрат экстрагируют этилацетатом и собранный органический слой промывают водой и затем насыщенным рассолом. Полученный продукт сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (хлороформ:метанол), получают трет-бутил-(3-(7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклогекс-2-ен-1-ил)карбамат.

[0155]

Добавляют ДМФА (50 мл) к полученному выше соединению и полученную смесь затем охлаждают до 0°C. После этого к реакционной смеси добавляют N-йодсукцинимид (4,03 г) и полученную смесь перемешивают при 0°C в течение 30 мин. После этого к реакционной смеси добавляют 0,5 M водный раствор гидросульфита натрия и полученную смесь экстрагируют этилацетатом. Собранный органический слой промывают водой и затем насыщенным рассолом. Полученный продукт сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (хлороформ:метанол), получают трет-бутил-(3-(5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклогекс-2-ен-1-ил)карбамат.

[0156]

Добавляют ДМФА (50 мл) к полученному выше йодсодержащему продукту и полученную смесь затем охлаждают до 0°C. К реакционной смеси добавляют 60%-ный гидрид натрия (1,01 г) и затем п-толуолсульфонилхлорид (2,63 г), полученную в результате смесь перемешивают при 0°C в течение 30 мин. После этого к реакционной смеси добавляют ледяную воду и водный слой экстрагируют этилацетатом. Собранный органический слой промывают водой и затем насыщенным рассолом. Полученный продукт сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат), получают требуемый продукт (2,41 г, выход 16%).

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,94 (с, 1H), 8,12 (д, J=8,3 Гц, 2H), 7,90 (с, 1H), 7,34 (д, J=8,3 Гц, 2H), 5,88-5,79 (м, 1H), 4,78-4,64 (м, 1H), 4,54-4,36 (м, 1H), 2,58-2,28 (м, 5H), 2,11-1,97 (м, 1H), 1,89 (уш.с, 2H), 1,77-1,64 (м, 1H), 1,43 (с, 9H).

ESI-MS: m/z 595 (MH+).

[0157]

Пример 12(2)

N-(3-(5-Фенил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклогекс-2-ен-1-ил)акриламид (Соединение 12)

1,4-Диоксан (1,8 мл) и воду (0,3 мл) добавляют к соединению 12(1) (30 мг), фенилбороновой кислоте (10 мг) и трикалийфосфату (32 мг), после чего атмосферу замещают азотом. После этого к реакционной смеси добавляют PdCl2(dppf)CH2Cl2 (7,4 мг) и полученную смесь перемешивают при 100°C в течение 2 час. После этого реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, добавляют этилацетат и воду, и полученную смесь фильтруют через Celite. Фильтрат экстрагируют этилацетатом и собранный органический слой промывают водой и затем насыщенным рассолом. Полученный продукт сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении.

ТГФ (1,0 мл) и 1,0 M раствор в ТГФ (1,0 мл) тетрабутил-аммонийфторида добавляют к полученному остатку и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре 4 час. После этого реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении и затем очищают хроматографией на силикагеле (хлороформ:метанол), получают трет-бутил-(3-(5-фенил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклогекс-2-ен-1-ил)карбамат.

[0158]

Метанол (1 мл) и 4 M раствор в 1,4-диоксане (1 мл) соляной кислоты добавляют к полученному выше соединению и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре 30 мин. После этого реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении. Атмосферу преобразуют в атмосферу азота и затем к реакционной смеси добавляют дихлорметан (1 мл) и диизопропилэтиламин (0,1 мл). Полученную в результате смесь охлаждают до 0°C. К реакционной смеси добавляют акрилоилхлорид (0,012 мл) и полученную смесь затем перемешивают 30 мин. После этого к реакционной смеси последовательно добавляют водный раствор аммиака, хлороформ и метанол и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре 1 час. После этого реакционную смесь экстрагируют хлороформом. Собранный органический слой промывают насыщенным рассолом, сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (хлороформ:метанол), получают названное соединение (18 мг).

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,81 (с, 1H), 7,50-7,28 (м, 6H), 6,22 (дд, J=1,2, 17,0 Гц, 1H), 5,92 (дд, J=10,4, 17,0 Гц, 1H), 5,63 (дд, J=1,3, 10,4 Гц, 1H), 5,36-5,26 (м, 1H), 4,41-4,30 (м, 1H), 2,74-2,56 (м, 1H), 2,46-2,27 (м, 1H), 1,98-1,32 (м, 4H).

ESI-MS: m/z 345 (MH+).

[0159]

Пример 13

N-(3-(5-(Тиофен-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-2-ен-1-ил)акриламид (Соединение 13)

Названное соединение получают в соответствии с примером 12(2) за исключением того, что тиофен-2-илбороновую кислоту используют вместо фенилбороновой кислоты.

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,83-8,53 (м, 1H), 7,47-6,76 (м, 4H), 6,28-5,84 (м, 2H), 5,68-5,28 (м, 2H), 4,46-4,16 (м, 1H), 2,58-2,11 (м, 2H), 1,93-1,26 (м, 4H).

ESI-MS: m/z 351 (MH+).

[0160]

Пример 14

N-(3-(5-(Тиофен-3-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-2-ен-1-ил)акриламид (Соединение 14)

Названное соединение получают в соответствии с примером 12(2) за исключением того, что тиофен-3-илбороновую кислоту используют вместо фенилбороновой кислоты.

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,76 (с, 1H), 7,43 (дд, J=2,9, 4,9 Гц, 1H), 7,40 (д, J=6,6 Гц, 1H), 7,24-7,22 (м, 1H), 7,08 (дд, J=1,0, 4,9 Гц, 1H), 6,28-6,21 (м, 1H), 6,15-6,06 (м, 1H), 5,68-5,62 (м, 1H), 5,53-5,48 (м, 1H), 4,46-4,34 (м, 1H), 2,52-2,24 (м, 2H), 2,05-1,39 (м, 4H).

ESI-MS: m/z 351 (MH+).

[0161]

Пример 15

N-(3-(5-(Фуран-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-2-ен-1-ил)акриламид (Соединение 15)

Названное соединение получают в соответствии с примером 5 за исключением того, что соединение 12(1) используют вместо соединения 1(1).

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,78 (с, 1H), 7,54 (дд, J=0,7, 1,9 Гц, 1H), 7,52 (с, 1H), 6,55 (дд, J=1,9, 2,9 Гц, 1H), 6,39 (дд, J=0,7, 2,9 Гц, 1H), 6,25 (дд, J=1,6, 17,0 Гц, 1H), 6,09 (дд, J=10,5, 17,1 Гц, 1H), 5,64 (дд, J=1,5, 10,2 Гц, 1H), 5,57-5,53 (м, 1H), 4,57-4,46 (м, 1H), 2,54-2,40 (м, 2H), 2,03-1,72 (м, 3H), 1,67-1,52 (м, 1H).

ESI-MS: m/z 335 (MH+).

[0162]

Пример 16

N-(3-(5-(Фуран-3-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-2-ен-1-ил)акриламид (Соединение 16)

Названное соединение получают в соответствии с примером 9 за исключением того, что фуран-3-илбороновую кислоту используют вместо фенилбороновой кислоты и что соединение справочного примера 1(2b) используют вместо соединения справочного примера 2(2a).

ESI-MS: m/z 335(MH+).

[0163]

Сравнительный пример 1

N-(3-(5-Фенил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклогекс-3-ен-1-ил)метакриламид

Названное соединение получают в соответствии с примером 1(2) за исключением того, что метакрилоилхлорид используют вместо акрилоилхлорида.

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,76 (с, 1H), 7,46-7,21 (м, 6H), 5,73-5,64 (м, 1H), 5,49-5,40 (м, 1H), 5,38-5,32 (м, 1H), 4,29-4,11 (м, 1H), 2,79-2,45 (м, 2H), 2,01-1,93 (м, 3H), 1,92-1,77 (м, 1H), 1,76-1,55 (м, 3H).

ESI-MS: m/z 359 (MH+).

[0164]

Сравнительный пример 2

(E)-N-(3-(5-Фенил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-3-ен-1-ил)бут-2-енамид

Метанол (1 мл) и 4 M раствор в 1,4-диоксане (1 мл) соляной кислоты добавляют к трет-бутил-(3-(5-фенил-7H-пирроло[2,3-d]-пиримидин-4-ил)циклогекс-3-ен-1-ил)карбамату (50 мг), полученному в примере 1(2), и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре 30 мин. После этого реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении. Атмосферу преобразуют в атмосферу азота и к реакционной смеси добавляют дихлорметан (2 мл) и диизопропилэтиламин (0,2 мл). Полученную в результате смесь охлаждают до 0°C. После этого к реакционной смеси добавляют (E)-бут-2-еноилхлорид (0,02 мл) и полученную смесь затем перемешивают 30 мин. После этого к реакционной смеси последовательно добавляют водный раствор аммиака, хлороформ и метанол. Полученную в результате смесь перемешивают при комнатной температуре 1 час. После этого реакционную смесь экстрагируют хлороформом и собранный органический слой промывают насыщенным рассолом. Полученный продукт сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (хлороформ:метанол), получают названное соединение (41,1 мг, выход 90%).

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,82-8,70 (м, 1H), 7,50-7,21 (м, 6H), 6,95-6,70 (м, 1H), 5,94-5,79 (м, 1H), 5,53-5,39 (м, 1H), 4,30-4,07 (м, 1H), 2,75-2,41 (м, 2H), 1,97-1,53 (м, 7H).

ESI-MS: m/z 359 (MH+).

[0165]

Сравнительный пример 3

N-(3-(5-(3-Цианофенил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид

Названное соединение получают в соответствии с примером 1(2) за исключением того, что (3-цианофенил)бороновую кислоту используют вместо фенилбороновой кислоты.

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,80 (с, 1H), 7,70-7,43 (м, 5H), 6,34-6,09 (м, 2H), 5,65 (д, J=10,0 Гц, 1H), 5,51-5,38 (м, 1H), 4,35-4,14 (м, 1H), 2,82-2,66 (м, 1H), 2,62-2,47 (м, 1H), 2,01-1,59 (м, 4H).

ESI-MS: m/z 370 (MH+).

[0166]

Сравнительный пример 4

N-(3-(5-(п-Толил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид

Названное соединение получают в соответствии с примером 1(2) за исключением того, что п-толилбороновую кислоту используют вместо фенилбороновой кислоты.

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,75 (с, 1H), 7,36 (с, 1H), 7,25-7,12 (м, 4H), 6,29 (дд, J=1,9, 17,1 Гц, 1H), 6,17 (дд, J=10,2, 17,1 Гц, 1H), 5,64 (дд, J=1,9, 10,2 Гц, 1H), 5,49 (уш.с, 1H), 4,27-4,09 (м, 1H), 2,67-2,43 (м, 2H), 2,40 (с, 3H), 1,99-1,50 (м, 4H).

ESI-MS: m/z 359 (MH+).

[0167]

Сравнительный пример 5

N-(3-(5-(3-Фторфенил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид

Названное соединение получают в соответствии с примером 1(2) за исключением того, что (3-фторфенил)бороновую кислоту используют вместо фенилбороновой кислоты,

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,77 (с, 1H), 7,44 (с, 1H), 7,44-7,35 (м, 1H), 7,17-6,98 (м, 3H), 6,34-6,15 (м, 2H), 5,70-5,63 (м, 1H), 5,56-5,48 (м, 1H), 4,28-4,16 (м, 1H), 2,77-2,46 (м, 2H), 2,02-1,61 (м, 4H).

ESI-MS: m/z 363 (MH+).

[0168]

Сравнительный пример 6

N-(3-(5-(Пиридин-3-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид

Названное соединение получают в соответствии с примером 1(2) за исключением того, что 3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин используют вместо фенилбороновой кислоты.

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,81 (с, 1H), 8,54-8,49 (м, 2H), 7,72-7,67 (м, 1H), 7,48 (с, 1H), 7,43-7,39 (м, 1H), 6,31 (дд, J=2,2, 17,1 Гц, 1H), 6,23 (дд, J=9,5, 17,1 Гц, 1H), 5,65 (дд, J=2,2, 9,5 Гц, 1H), 5,42-5,36 (м, 1H), 4,33-4,23 (м, 1H), 2,89-2,78 (м, 1H), 2,57-2,47 (м, 1H), 1,86-1,65 (м, 4H).

ESI-MS: m/z 346 (MH+).

[0169]

Сравнительный пример 7

N-(3-(5-(1-Метил-1H-пиразол-4-ил)-7H-пирроло[2,3-d]-пиримидин-4-ил)циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид

Названное соединение получают в соответствии с примером 1(2) за исключением того, что 1-метил-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол используют вместо фенилбороновой кислоты.

Спектр 1H ЯМР (ДМСО-d6), δ: 12,23-12,19 (м, 1H), 8,69 (с, 1H), 8,10 (д, J=7,3 Гц, 1H), 7,62 (с, 1H), 7,55 (д, J=2,6 Гц, 1H), 7,37 (с, 1H), 6,27 (дд, J=9,9, 16,9 Гц, 1H), 6,11 (дд, J=2,2, 16,9 Гц, 1H), 5,59 (дд, J=2,2, 9,9 Гц, 1H), 5,44-5,36 (м, 1H), 4,04-3,92 (м, 1H), 3,87 (с, 3H), 2,94-2,83 (м, 1H), 2,47-2,38 (м, 1H), 2,05-1,78 (м, 3H), 1,59-1,43 (м, 1H).

ESI-MS: m/z 349 (MH+).

[0170]

Сравнительный пример 8

N-(3-(5-(Пиримидин-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид

Названное соединение получают в соответствии с примером 5 за исключением того, что 2-(трибутилстаннил)пиримидин используют вместо трибутил(фуран-2-ил)станнана.

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,82 (с, 1H), 8,82 (д, J=5,1 Гц, 2H), 8,04 (с, 1H), 7,26 (т, J=5,1 Гц, 1H), 6,31 (дд, J=2,2, 17,1 Гц, 1H), 6,22 (дд, J=9,8, 17,1 Гц, 1H), 5,66 (дд, J=2,2, 9,8 Гц, 1H), 5,53-5,47 (м, 1H), 4,41-4,32 (м, 1H), 3,02-2,93 (м, 1H), 2,65-2,55 (м, 1H), 2,09-1,77 (м, 4H).

ESI-MS: m/z 347 (MH+).

[0171]

Сравнительный пример 9

N-(3-(5-(Бензофуран-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид

Названное соединение получают в соответствии с примером 1(2) за исключением того, что бензофуран-2-илбороновую кислоту используют вместо фенилбороновой кислоты.

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,81 (с, 1H), 7,73 (с, 1H), 7,63-7,55 (м, 1H), 7,51 (д, J=8,1 Гц, 1H), 7,38-7,22 (м, 2H), 7,19 (д, J=7,3 Гц, 1H), 6,74 (с, 1H), 6,31 (дд, J=1,6, 17,0 Гц, 1H), 6,16 (дд, J=10,1, 17,0 Гц, 1H), 5,79-5,75 (м, 1H), 5,64 (дд, J=1,6, 10,1 Гц, 1H), 4,41-4,32 (м, 1H), 2,92-2,82 (м, 1H), 2,66-2,54 (м, 1H), 2,02-1,91 (м, 1H), 1,89-1,61 (м, 3H).

ESI-MS: m/z 385 (MH+).

[0172]

Сравнительный пример 10

4-(Циклогекс-1-ен-1-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин

1,4-Диоксан (2,0 мл) и воду (0,3 мл) добавляют к 4-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидину (30 мг), 2-(циклогекс-1-ен-1-ил)-4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолану (48,8 мг) и трикалийфосфату (124 мг), после чего атмосферу замещают азотом. После этого к реакционной смеси добавляют PdCl2(dppf)CH2Cl2 (28,5 мг) и полученную смесь перемешивают при 100°C в течение 14 час. После этого реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, добавляют этилацетат и воду, полученную смесь фильтруют через Celite. Фильтрат экстрагируют этилацетатом и собранный органический слой промывают водой и затем насыщенным рассолом. Полученный продукт сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат), получают требуемый продукт (15 мг, выход 38%).

Спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 9,90-9,64 (м, 1H), 8,83 (с, 1H), 7,31 (дд, J=2,4, 3,7 Гц, 1H), 6,91-6,85 (м, 1H), 6,74 (дд, J=2,0, 3,7 Гц, 1H), 2,80-2,64 (м, 2H), 2,43-2,27 (м, 2H), 1,93-1,71 (м, 4H).

ESI-MS: m/z 200 (MH+).

[0173]

Сравнительный пример 11

Сравнительный пример 11(1a)

трет-Бутил-((1S,3R)-3-(5-(фуран-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]-пиримидин-4-ил)циклогексил)карбамат

Сравнительный пример 11(1b)

трет-Бутил-((1S,3S)-3-(5-(фуран-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]-пиримидин-4-ил)циклогексил)карбамат

1,4-Диоксан (72 мл) и воду (12 мл) добавляют к 4-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидину (2,0 г), соединению справочного примера 3 (5,1 г) и трикалийфосфату (6,9 г), после чего атмосферу замещают азотом. После этого к реакционной смеси добавляют PdCl2(dppf)CH2Cl2 (1,4 г) и полученную смесь перемешивают при 100°C в течение 14 час. После этого реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, добавляют хлороформ и воду, и полученную смесь фильтруют через Celite. Фильтрат экстрагируют хлороформом и собранный органический слой промывают водой и затем насыщенным рассолом. Полученный продукт сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (гексан:ацетон), получают соответствующий продукт реакции сочетания. Полученный продукт реакции сочетания используют в последующей реакции без дополнительной очистки.

ТГФ (200 мл) и катализатор 10%-ный палладий на угле (2,0 г) добавляют к полученному продукту реакции сочетания. Атмосферу преобразуют в атмосферу водорода и смесь затем перемешивают при комнатной температуре 14 час. После этого реакционную смесь фильтруют через Celite и промывают ТГФ. Фильтрат концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (гексан:ацетон), получают соответствующий продукт реакции сочетания (3,12 г, выход 76%).

ESI-MS: m/z 317(MH+).

Добавляют ДМФА (30 мл) к полученному продукту реакции сочетания (3,04 г) и полученную смесь затем охлаждают до 0°C. Затем к реакционной смеси добавляют N-йодсукцинимид (2,59 г) и полученную смесь перемешивают при 0°C в течение 30 мин. После этого к реакционной смеси добавляют 0,5 M водный раствор гидросульфита натрия и полученную смесь экстрагируют этилацетатом. Собранный органический слой промывают водой и затем насыщенным рассолом. Полученный продукт сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (гексан:ацетон), получают соответствующий йодсодержащий продукт. Полученный йодсодержащий продукт используют в последующей реакции без дополнительной очистки.

Добавляют ДМФА (36 мл) к полученному йодсодержащему продукту и полученную смесь затем охлаждают до 0°C. К реакционной смеси добавляют 60%-ный гидрид натрия (0,72 г) и затем п-толуол-сульфонилхлорид (1,86 г) и полученную в результате смесь перемешивают при 0°C в течение 30 мин. После этого к реакционной смеси добавляют ледяную воду и водный слой экстрагируют этилацетатом. Собранный органический слой промывают водой и затем насыщенным рассолом. Полученный продукт сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат), получают соответствующий тозил-содержащий продукт (4,22 г, выход 74%).

ESI-MS: m/z 597(MH+).

Добавляют ДМФА (42 мл) к тозил-содержащему продукту (4,20 г) и трибутил(фуран-2-ил)станнану (5,03 г), после чего атмосферу замещают азотом. После этого к реакционной смеси добавляют PdCl2(PPh3)2 (494 мг) и полученную смесь перемешивают при нагревании при 100°C в течение 30 мин. После этого к реакционной смеси добавляют насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия и этилацетат, полученную в результате смесь перемешивают и затем фильтруют через Celite. Фильтрат экстрагируют этилацетатом. Собранный органический слой промывают насыщенным рассолом, сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (гексан:этилацетат), получают соединение сравнительного примера 11(1a) (1,71 г, выход 45%) и соединение сравнительного примера 11(1b) (1,99 г, выход 53%), соответственно.

Сравнительный пример 11(1a), спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,94 (с, 1H), 8,13 (д, J=8,3 Гц, 2H), 7,80 (с, 1H), 7,63 (с, 1H), 7,34 (д, J=8,3 Гц, 2H), 6,55-6,51 (м, 2H), 4,43 (д, J=7,6 Гц, 1H), 3,55-3,37 (м, 1H), 3,09 (тт, J=3,2, 11,7 Гц, 1H), 2,41 (с, 3H), 2,15-1,94 (м, 2H), 1,88-1,53 (м, 3H), 1,42 (с, 9H), 1,50-1,20 (м, 2H), 1,18-1,02 (м, 1H).

ESI-MS: m/z 537 (MH+).

Сравнительный пример 11(1b), спектр 1H ЯМР (CDCl3), δ: 8,96 (с, 1H), 8,15 (д, J=8,3 Гц, 2H), 7,81 (с, 1H), 7,70 (с, 1H), 7,35 (д, J=8,3 Гц, 2H), 6,61-6,54 (м, 2H), 4,57 (д, J=6,3 Гц, 1H), 4,06-3,90 (м, 1H), 3,25-3,03 (м, 1H), 2,42 (с, 3H), 1,99-1,88 (м, 1H), 1,47 (с, 9H), 1,88-1,39 (м, 7H).

ESI-MS: m/z 537 (MH+).

[0174]

Сравнительный пример 11(a)

N-((1S,3R)-3-(5-(Фуран-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклогексил)акриламид

Соединение сравнительного примера 11(1a) (1,70 г) растворяют в ТГФ (8,5 мл) и затем к раствору добавляют 1,0 M раствор в ТГФ (6,3 мл) тетрабутиламмонийфторида. Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре 1 час. После этого к реакционной смеси добавляют 0,067 M фосфатный буфер (pH 7,4) и смесь затем экстрагируют этилацетатом. Собранный органический слой промывают насыщенным рассолом, сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (гексан:ацетон), получают соответствующий детозилированный продукт. Полученный детозилированный продукт используют в последующей реакции без дополнительной очистки.

Метанол (10 мл) и 4 M раствор в 1,4-диоксане (10 мл) соляной кислоты добавляют к полученному детозилированному продукту и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре 40 мин. После этого реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении. Атмосферу преобразуют в атмосферу азота и затем к реакционной смеси добавляют дихлорметан (20 мл) и диизопропилэтиламин (5,28 мл). После этого смесь охлаждают до 0°C. К смеси добавляют акрилоилхлорид (0,49 мл) и полученную смесь затем перемешивают 30 мин. После этого к реакционной смеси последовательно добавляют водный раствор аммиака, хлороформ и метанол и полученную в результате смесь перемешивают при комнатной температуре 1 час. После этого реакционную смесь экстрагируют хлороформом. Собранный органический слой промывают насыщенным рассолом, сушат над безводным сульфатом натрия и затем концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (хлороформ:метанол), получают названное соединение (657 мг, выход 62%).

Спектр 1H ЯМР (ДМСО-d6), δ: 12,38 (уш.с, 1H), 8,71 (с, 1H), 8,07 (д, J=7,8 Гц, 1H), 7,84 (дд, J=0,7, 1,8 Гц, 1H), 7,74 (д, J=2,7 Гц, 1H), 6,62 (дд, J=1,8, 3,3 Гц, 1H), 6,58 (дд, J=0,7, 3,3 Гц, 1H), 6,18 (дд, J=10,0, 16,8 Гц, 1H), 6,06 (дд, J=2,4, 16,8 Гц, 1H), 5,55 (дд, J=2,4, 10,0 Гц, 1H), 3,75-3,56 (м, 1H), 3,24-3,10 (м, 1H), 2,02-1,62 (м, 5H), 1,47 (дт, J=9,4, 12,3 Гц, 1H), 1,34-1,06 (м, 2H).

ESI-MS: m/z 337 (MH+).

[0175]

Сравнительный пример 11(b)

N-((1S,3S)-3-(5-(Фуран-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклогексил)акриламид

Названное соединение получают в соответствии со сравнительным примером 11(a) за исключением того, что соединение сравнительного примера 11(1b) используют вместо соединения сравнительного примера 11(1a).

Спектр 1H ЯМР (ДМСО-d6), δ: 12,39 (уш.с, 1H), 8,72 (с, 1H), 7,78 (д, J=6,1 Гц, 1H), 7,72 (д, J=2,4 Гц, 1H), 7,70 (дд, J=0,7, 1,8 Гц, 1H), 6,54 (дд, J=1,8, 3,2 Гц, 1H), 6,52 (дд, J=0,7, 3,2 Гц, 1H), 6,35 (дд, J=10,1, 17,1 Гц, 1H), 6,04 (дд, J=2,3, 17,1 Гц, 1H), 5,56 (дд, J=2,3, 10,1 Гц, 1H), 4,19-4,03 (м, 1H), 3,76-3,56 (м, 1H), 2,03-1,85 (м, 2H), 1,73-1,46 (м, 6H).

ESI-MS: m/z 337 (MH+).

[0176]

Сравнительный пример 12

N-(3-(5-Фенил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)фенил)-акриламид

Названное соединение получают в соответствии со способом, описанным в международной публикации № WO 2013/085802.

ESI-MS: m/z 341(MH+).

[0177]

Таблица 2-1

Соединение, № Структурная формула Соединение, № Структурная формула
1 2
3 4
5 6
7 8
9 10

[0178]

Таблица 2-2

Соединение, № Структурная формула Соединение, № Структурная формула
11 12
13 14
15 16

[0179]

Таблица 3-1

Соединение, № Структурная формула Соединение, № Структурная формула
Сравнительный пример 1 Сравнительный пример 2
Сравнительный пример 3 Сравнительный пример 4
Сравнительный пример 5 Сравнительный пример 6
Сравнительный пример 7 Сравнительный пример 8
Сравнительный пример 9 Сравнительный пример 10

[0180]

Таблица 3-2

Соединение, № Структурная формула Соединение, № Структурная формула
Сравнительный пример 11(а) Сравнительный пример 11(b)
Сравнительный пример 12

[0181]

Примеры испытаний

Соединение в соответствии с настоящим изобретением оценивают с помощью приведенных ниже методов испытаний.

[0182]

Пример испытания 1

Испытание, относящееся к действию по ингибированию различных JAK киназных активностей ( in vitro )

1) Измерение ингибирующей JAK1 киназу активности

Измеряют активность соединения настоящего изобретения относительно ингибирования активности JAK1 киназы.

Из материалов для измерения такой ингибирующей активности приобретают пептидный субстрат и протеинкиназу, указанные ниже. В связи с этим приобретают пептидный субстрат, пептидный субстрат для набора для анализа QSS AssistTM JAK1-MSA (Carna Biosciences, Inc.). Также приобретают протеинкиназу, очищенный рекомбинантный человеческий JAK1 белок (Carna Biosciences, Inc.).

Метод измерения ингибирующей активности состоит в следующем. Во-первых, каждое из соединений настоящего изобретения растворяют в диметилсульфоксиде (ДМСО (DMSO)) и затем с использованием ДМСО проводят последовательное разбавление. Затем раствор последовательного разбавления соединения (конечная концентрация ДМСО на основе киназной реакции: 5,0%) или ДМСО (конечная концентрация: 5,0%) смешивают с раствором, содержащим пептидный субстрат (конечная концентрация: 1 мкМ), хлорид магния (конечная концентрация: 5 мМ) и АТФ (ATP) (конечная концентрация: 75 мкМ) в буфере для киназной реакции (20 мМ HEPES (pH 7,5), 2 мМ дитиотреитол и 0,01% Triton X-100). После этого к смешанному раствору также добавляют JAK1 белок и полученную смесь инкубируют при 25°C в течение 120 мин для проведения киназной реакции. К реакционному раствору добавляют ЭДТУ (EDTA) до конечной концентрации 30 мМ, чтобы остановить реакцию. И, наконец, используя ридер LabChip EZ Reader II (Perkin Elmer Corp.), нефосфорилированный пептидный субстрат (S) и фосфорилированный пептид (P) подвергают микроканальному капиллярному электрофорезу с тем, чтобы два пептида отделить друг от друга и затем обнаружить. Степень реакции фосфорилирования получают на основании высот пиков S и P, и концентрацию соединения, способную ингибировать 50% реакции фосфорилирования, определяют, как значение IC50 (нМ). Полученные данные представлены ниже в таблице.

[0183]

2) Измерение ингибирующей JAK2 киназу активности

Измеряют активность соединения настоящего изобретения относительно ингибирования активности JAK2 киназы.

Из материалов для измерения этой ингибирующей активности приобретают пептидный субстрат и протеинкиназу, как указано ниже. В этой связи покупают пептидный субстрат FL-Peptide 22 (Perkin Elmer Corp.). Также приобретают протеинкиназу, очищенный рекомбинантный человеческий JAK2 белок (Carna Biosciences, Inc.).

Метод измерения ингибирующей активности состоит в следующем. Во-первых, готовят последовательное разбавление соединения настоящего изобретения тем же способом, который описан выше в разделе, касающемся JAK1. Раствор такого последовательного разбавления (конечная концентрация ДМСО на основании киназной реакции: 5,0%) или ДМСО (конечная концентрация: 5,0%) смешивают с раствором, содержащим пептидный субстрат (конечная концентрация: 1 мкМ), хлорид магния (конечная концентрация: 10 мМ) и АТФ (конечная концентрация: 10 мкМ) в буфере для киназной реакции (15 мМ Tris (pH 7,5), 2 мМ дитиотреитол и 0,01% Tween 20). После этого к смешанному раствору также добавляют JAK2 белок и полученную смесь инкубируют при 25°C в течение 80 мин для проведения киназной реакции. К реакционному раствору добавляют ЭДТУ до конечной концентрации 30 мМ с тем, чтобы остановить реакцию. После остановки реакции измерение и анализ данных проводят теми же методами, которые описаны выше в разделе, относящемся к JAK1.

[0184]

3) Измерение ингибирующей JAK3 киназу активности

Измеряют активность соединения настоящего изобретения относительно ингибирования активности JAK3 киназы.

Из материалов для измерения этой ингибирующей активности приобретают пептидный субстрат и протеинкиназу, как указано ниже. В этой связи приобретают пептидный субстрат для набора для анализа QSS AssistTM JAK3-MSA (Carna Biosciences, Inc.). Также приобретают протеинкиназу, очищенный рекомбинантный человеческий JAK3 белок (Carna Biosciences, Inc.).

Способ измерения ингибирующей активности состоит в следующем. Во-первых, проводят последовательное разбавление соединения настоящего изобретения тем же способом, который описан в разделе, относящемся к JAK1. Раствор такого последовательно разбавления (конечная концентрация ДМСО на основании киназной реакции: 5,0%) или ДМСО (конечная концентрация: 5,0%) смешивают с раствором, содержащим пептидный субстрат (конечная концентрация: 1 мкМ), хлорид магния (конечная концентрация: 5 мМ) и АТФ (конечная концентрация: 5 мкМ) в буфере для киназной реакции (20 мМ HEPES (pH 7,5), 2 мМ дитиотреитол и 0,01% Triton X-100). После этого к смешанному раствору также добавляют JAK3 белок и полученную смесь затем инкубируют при 25°C в течение 80 мин для проведения киназной реакции. К реакционному раствору добавляют ЭДТУ до конечной концентрации 30 мМ с тем, чтобы остановить реакцию. После остановки реакции измерение и анализ данных проводят теми же методами, которые описаны выше в разделе, относящемся к JAK1.

Результаты представлены в приведенной ниже таблице.

[0185]

Таблица 4

Пример, № JAK1: IC50 (нМ) JAK2: IC50 (нМ) JAK3: IC50 (нМ)
1 880 470 <0,30
2 900 480 <0,30
3 1500 850 <0,30
4 2900 1300 0,42
5 720 430 <0,30
7 440 330 <0,30
8 1400 430 <0,30
9 2100 880 <0,30
10 НИ (NT) 660 0,68
12 3200 870 0,35
13 3200 490 <0,30
14 5600 1200 <0,30
15 2600 450 0,33
16 4900 1000 0,77
Сравнительный пример 1 880 1100 44
Сравнительный пример 2 730 600 27
Сравнительный пример 8 НИ >10000 21,36
Сравнительный пример 10 414 166 125
Сравнительный пример 11(а) >10000 2440 21
Сравнительный пример 11(b) >10000 880 19
Сравнительный пример 12 >1000 >1000 0,09

НИ - не испытан

[0186]

На основании приведенных выше результатов установлено, что соединение настоящего изобретения проявляет исключительно сильную JAK3-ингибирующую активность и что оно обладает селективностью к JAK3, которая в 100 раз или более выше, чем селективность относительно JAK1 или JAK2 в единицах значения IC50. Напротив, соединения сравнительных примеров 1, 2 и 8 проявляют JAK3-ингибирующую активность, которая в 20 раз или более ослаблена в сравнении с соединением настоящего изобретения. Аналогично, соединение сравнительного примера 10 также проявляет JAK3-ингибирующую активность, которая в 100 раз или более ослаблена в сравнении с активностью соединения настоящего изобретения, а селективность соединения сравнительного примера 10 к JAK1 или JAK2 не наблюдают.

[0187]

Пример испытания 2

Испытание, относящееся к росту человеческих мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC)

Измеряют активность соединения настоящего изобретения по ингибированию реакции IL-2-зависимого роста человеческих PBMC, которая вызвана JAK3 (Arthritis Rheum, 2010; 62(8): 2283-93).

С использованием среды, содержащей 10 мкг/мл ФГА-М (PHA-M) (Sigma) (которая представляет собой среду RPMI-1640 (Sigma), содержащую 10% сыворотки человека типа AB (MP Biomedicals)), человеческие PBMC (C.T.L.) (плотность клеток: 1×106 клеток/мл) культивируют при 37°C в сосуде для культивирования, содержащем 5% диоксида углерода, 3 дня. После этого культуру промывают с помощью среды RPMI-1640 четыре раза и затем к полученной культуре добавляют среду (среда RPMI-1640, содержащая 10% сыворотки человека типа AB) для приготовления суспензии клеток. Клетки (1×104 клеток на лунку) и последовательно разбавленное соединение настоящего изобретения добавляют в каждую лунку 96-луночного микропланшета с U-образным дном лунок и полученную в результате смесь культивируют при 37°C в сосуде для культивирования, содержащем 5% диоксида углерода, 30 мин. По окончании культивирования к культуре добавляют рекомбинантный человеческий IL-2 (Peprotech) до конечной концентрации 2 нг/мл и полученную смесь перемешивают при 37°C в сосуде для культивирования, содержащем 5% диоксида углерода, 2 дня (1×104 клетки/100 мкл/каждая лунка). По окончании культивирования полученный продукт оставляют при комнатной температуре на 30 мин, затем к нему добавляют 100 мкл реагента CellTiter-Glo для люминесцентного анализа жизнеспособных клеток (Promega), после чего перемешивают. После этого реакционную смесь оставляют на 10 мин и величину люминесценции, полученной от жизнеспособных клеток, измеряют с использованием ридера для микропланшетов (TECAN). Рассчитывают степень ингибирования настоящим изобретением клеточного роста, вызванного стимуляцией IL-2, и концентрацию соединения, способную ингибировать 50% клеточного роста, определяют в виде значения IC50 (нМ). Полученные данные представлены ниже в таблице.

[0188]

Таблица 5

Соединение, № PBMC: IC50 (нМ)
2 110
5 38
7 18
8 83
9 99
13 110
14 110
Сравнительный пример 3 >1000
Сравнительный пример 4 >1000
Сравнительный пример 9 >1000
Сравнительный пример 11(а) >3000
Сравнительный пример 11(b) 1942
Сравнительный пример 12 546

[0189]

На основании приведенных выше результатов установлено, что соединение настоящего изобретения проявляет исключительно сильную рост-ингибирующую активность, имея значение IC50, относящееся к подавлению роста человеческих PBMC, которое составляет приблизительно 100 нМ или меньше. Напротив, значения IC50 соединений сравнительных примеров уменьшены (1000 нМ или больше).

[0190]

Пример испытания 3

Оценка пероральной всасываемости

Соединение настоящего изобретения суспендируют или растворяют в 0,1 н. HCl и 0,5%-ном водном растворе HPMC и затем полученные суспензию или раствор вводят перорально мышам BALB/cA. Кровь отбирают из глазного дна через 0,5, 1, 2, 4 и 6 час после окончания перорального введения и из собранной крови затем готовят плазму. Концентрацию соединения в полученной плазме измеряют с помощью ЖХ-МС (LCMS) и получают величину площади под кривой (концентрация в крови)-время (AUC). По полученным результатам соединение настоящего изобретения проявляет хорошую пероральную всасываемость.

[0191]

Пример испытания 4

Испытание на мышах IL-2-индуцированного продуцирования IFN-γ

Измеряют ингибирующую активность соединения настоящего изобретения и соединений сравнительных примеров на мышах IL-2-индуцированного продуцирования IFN-γ, вызванного JAK3 (Arthritis Rheum, 2010; 62 (8): 2283-93, Inflammation Research 2015; 64 (1): 41-51).

Самцов мышей BALB/c в возрасте семи недель (Charles River Japan) делят на пять групп (по 6 мышей на группу), а именно: группа растворителя, группа соединения 7 (1 мг/кг массы тела), группа соединения 7 (3 мг/кг массы тела), группа сравнительного примера 12 (1 мг/кг массы тела) и группа сравнительного примера 12 (3 мг/кг массы тела). Соединение 7 и соединение сравнительного примера 12 каждое вводят группе 1 мг/кг и группе 3 мг/кг посредством перорального введения в дозах 1 мг/кг и 3 мг/кг, соответственно. Через тридцать минут смешанный раствор IFN-γ-захватывающего антитела (BD Biosciences, 10 мкг/мышь) и рекомбинантного человеческого IL-2 (Peprotech, 10 мкг/мышь) вводят внутрибрюшинно в объеме 200 мкл группе растворителя, группе соединения 7 (1 мг/кг), группе соединения 7 (3 мг/кг) group, группе сравнительного примера 12 (1 мг/кг) и группе сравнительного примера 12 (3 мг/кг). Через три часа после введения IL-2 собирают кровь из всех пяти групп и измеряют концентрацию IFN-γ в сыворотке с использованием BD метода оценки In Vivo с захватом для мышиного IFN-γ (BD Biosciences). Относительное количество IFN-γ, генерированного с помощью стимуляции IL-2, рассчитывают в соответствии со следующей формулой расчета:

Относительное количество IFN-γ (%)=(концентрация IFN-γ каждой группы)×100/(концентрация IFN-γ группы растворителя),

и результаты показаны Фиг. 1 ((среднее значение)±(стандартная ошибка)): относительно растворителя, критерий Даннетта, *: p<0,05, ***: p<0,001; относительно сравнительного примера 12 (3 мг/кг массы тела), t-критерий Стьюдента, ##: p<0,01),

[0192]

С учетом приведенных выше результатов соединение настоящего изобретения проявляет статистически значимое подавление продуцирования IFN-γ in vivo. С другой стороны, соединение сравнительного примера 12 не показывает такого значительного подавляющего продуцирование IFN-γ действия, которое наблюдают для соединения настоящего изобретения.

[0193]

Пример испытания 5

Терапевтический эффект при ревматоидном артрите

Используют коллаген-индуцированный артрит, который представляет собой мышиную экспериментальную модель ревматоидного артрита. Клинические симптомы артрита оценивают по баллам и, используя полученные баллы в качестве показателя, подтверждают действие соединения настоящего изобретения путем перорального введения. Самцам мышей DBA/1 в возрасте семи недель (Charles River Laboratories Japan, Inc.) вводят 10 мкл/тело раствора (эмульсии), который получен путем смешения 4 мг/мл раствора коллагена 2 бычьего типа (Collagen Research Center) с полным адъювантом Фрейнда (DIFCO) в равных количествах, посредством дорсальной внутрикожной инъекции (первичная иммунизация). Через двадцать один день после первичной иммунизации мышам вводят 10 мкл/тело раствора (эмульсии), который получен путем смешения 4 мг/мл раствора коллагена 2 бычьего типа (Collagen Research Center) с полным адъювантом Фрейнда (DIFCO) в равных количествах, посредством внутрикожной инъекции у основания хвоста (повторная иммунизация) с тем, чтобы индуцировать артритную реакцию (Arthritis Rheum 2010; 62 (8): 2283-93). Соединение настоящего изобретения и тофацитиниб непрерывно вводят мышам в дозе 50 мг/кг (50 мг/кг массы тела) в день посредством перорального введения в течение 15 дней от 8 дня после для проведения повторной иммунизации (который определяют как «день 0»), тогда как преднизолон непрерывно вводят мышам в дозе 0,3 мг/кг (3 мг/кг массы тела) один раз в день посредством перорального введения в течение 15 дней от 8 дня после проведения повторной иммунизации. На день 8, день 11, день 14, день 17 и день 22 проводят бальную оценку симптомов артрита путем изучения невооруженным глазом, и затем подтверждают действие соединения настоящего изобретения. Клинические симптомы для каждой конечности оценивают в баллах (0: нет изменений, 1: один опухший палец, 2: два или несколько опухших пальца, 3: опухшая стопа, 4: все пальцы опухшие, и также опухшие запястье и голеностоп), и суммарный балл по всем четырем конечностям определяют, как балл для отдельной мыши (наивысший балл: 16).

В результате установлено, что соединение настоящего изобретения показывает прекрасный терапевтический эффект при ревматоидном артрите.

Среднее значение баллов клинических симптомов (сумма по четырем конечностям) рассчитывают в соответствии со следующей формулой расчета:

Среднее значение баллов клинических симптомов (сумма по четырем конечностям)=среднее значение баллов клинических симптомов правой передней конечности+среднее значение баллов клинических симптомов левой передней конечности+среднее значение баллов клинических симптомов правой задней конечности+среднее значение баллов клинических симптомов левой задней конечности. Результаты показаны на Фиг. 2.

[0194]

Пример испытания 6

Терапевтический эффект при рассеянном склерозе

Используют экспериментальный аутоиммунный энцефаломиелит, который представляет собой мышиную экспериментальную модель рассеянного склероза. Самцам мышей SJL/J в возрасте восьми недель (Charles River Laboratories Japan, Inc.) вводят смешанный раствор (эмульсию), который получен путем смешения физиологического водного раствора (1 мг/мл) пептида (Toray Research Center, Inc.), соответствующего 139-151 остаткам протеолипидного белка, с полным адъювантом Фрейнда (DIFCO), содержащим 4 мг/мл убитых Mycobacterium tuberculosis (H37Ra), в равных количествах, посредством внутрикожной инъекции в количестве 100 мкл каждая в два сайта спинной части каждой мыши с тем, чтобы индуцировать энцефаломиелит. На седьмой день после проведения иммунизации (который определяют, как день 0) соединение настоящего изобретения непрерывно вводят мышам в течение 4 недель посредством перорального введения дважды в день. На день 0, день 2, день 5 и дни от 7 до 35 оценивают клинические симптомы энцефаломиелита невооруженным глазом, и затем подтверждают действие соединения настоящего изобретения. Наблюдаемые клинические симптомы оценивают по баллам (0: нет симптомов, 1: ослабленный хвост, 1,5: полное опущение хвоста, 2: атаксия, 3: легкий паралич задних конечностей, 3,5: паралич задних конечностей, 4: полный паралич задних конечностей, 4,5: паралич всех конечностей, отмирание, 5: смерть).

В результате установлено, что соединение настоящего изобретения проявляет прекрасный терапевтический эффект при рассеянном склерозе.

1. Соединение, представленное следующей формулой (I), или его фармацевтически приемлемая соль:

,

в которой X означает -CH=CH-, атом серы или атом кислорода; и n означает целое число от 0 до 2.

2. Соединение по п. 1 или его фармацевтически приемлемая соль, где X представляет собой -CH=CH-, атом серы или атом кислорода, и n принимает значение 0 или 1.

3. Соединение по п. 1 или его фармацевтически приемлемая соль, где в формуле (I) приведенная ниже структура

представляет собой любую структуру из следующих структур:

,

и в формуле (I) приведенная ниже структура, содержащая циклоалкенильную часть

представляет собой любую структуру из следующих структур:

.

4. Соединение по п. 1 или его фармацевтически приемлемая соль, где соединение представляет собой N-(3-(5-(фуран-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид или (S)-N-(3-(5-(фуран-2-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)-циклогекс-3-ен-1-ил)акриламид.

5. Соединение по любому из пп. 1-4 или его фармацевтически приемлемая соль, обладающее свойствами селективного ингибитора JAK3.

6. Фармацевтическая композиция, обладающая свойствами селективного ингибитора JAK3 и свойствами ингибитора продуцирования IFN-γ, содержащая эффективное количество соединения по любому из пп. 1-4 или его фармацевтически приемлемой соли.

7. Фармацевтическая композиция по п. 6, где фармацевтическая композиция представляет собой фармацевтическую композицию для лечения заболевания, вовлекающего JAK3, где заболевание, вовлекающее JAK3, выбирают из группы, состоящей из псориаза, реакции «трансплантат против хозяина», рассеянного склероза, воспалительного заболевания кишечника, системной красной волчанки и ревматоидного артрита.

8. Соединение по любому из пп. 1-4 или его фармацевтически приемлемая соль, обладающее свойствами селективного ингибитора JAK3, в качестве активного ингредиента для лечения ревматоидного артрита или рассеянного склероза.

9. Применение соединения по любому из пп. 1-4 или его фармацевтически приемлемая в качестве селективного ингибитора JAK3.

10. Применение соединения по любому из пп. 1-4 или его фармацевтически приемлемая соль для получения фармацевтической композиции, обладающей свойствами селективного ингибитора JAK3.

11. Применение по п. 10, где фармацевтическая композиция представляет собой фармацевтическую композицию для лечения заболеваний, вовлекающих JAK3, где заболевание, вовлекающее JAK3, выбирают из группы, состоящей из псориаза, реакции «трансплантат против хозяина», рассеянного склероза, воспалительного заболевания кишечника, системной красной волчанки и ревматоидного артрита.

12. Применение соединения по любому из пп. 1-4 или его фармацевтически приемлемая соль для получения лекарственного средства для лечения ревматоидного артрита или рассеянного склероза, опосредованного JAK3.

13. Соединение по любому из пп. 1-4 или его фармацевтически приемлемая соль для применения при ингибировании JAK3.

14. Соединение по любому из пп. 1-4 или его фармацевтически приемлемая соль для применения в качестве фармацевтического агента для лечения заболевания, вовлекающего JAK3.

15. Соединение по п. 14 или его фармацевтически приемлемая соль, где фармацевтический агент представляет собой фармацевтический агент для лечения заболеваний, вовлекающих JAK3, где заболевание, вовлекающее JAK3, выбирают из группы, состоящей из псориаза, реакции «трансплантат против хозяина», рассеянного склероза, воспалительного заболевания кишечника, системной красной волчанки и ревматоидного артрита.

16. Соединение по любому из пп. 1-4 или его фармацевтически приемлемая соль для применения при лечении ревматоидного артрита или рассеянного склероза, опосредованного JAK3.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к соединениям формулы I и их фармацевтически приемлемым композициям. Технический результат: получены новые соединения, пригодные в качестве ингибиторов тирозинкиназы Брутона, которые могут применяться для получения лекарственных средств для профилактического или терапевтического лечения опосредованного расстройства.

Изобретение относится к соединениям формулы (I). Технический результат: получены новые соединения, пригодные в качестве ингибиторов PDE1, которые могут применяться в качестве лекарственного препарата, в частности, для лечения нейродегенеративных расстройств и психических расстройств.

Изобретение относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. В формуле (I) W представляет собой CH2; X представляет собой C; цикл A представляет собой фенил или 5- или 6-членный гетероарил, где указанный гетероарил содержит 1, 2, 3 или 4 гетероатома, выбранных из N, O и S; m равен целому числу от 0 до 2; каждый R1 выбирают независимо из (C1-C6)алкила, необязательно замещенного одним или несколькими атомами галогена, R2O, галогена, R5C(O)N(R6), R9S(O)2, R10S(O)2N(H), -O и R14R15NS(O)2; и когда m равен по меньшей мере 2, два R1, присоединенные к соседним атомам цикла A, могут образовывать, вместе с атомами, к которым они присоединены, 5- или 6-членный гетероцикл или карбоцикл; где гетероцикл содержит 1 или 2 гетероатома, выбранных из кислорода; каждый R2, R5, R6, R9, R10 и R14 выбирают независимо из H и (C1-C6)алкила, при этом любой алкил необязательно замещен одним или несколькими атомами галогена; R15 выбирают из H, (C1-C6)алкила, R16C(O) и R17OC(O); и каждый R16 и R17 выбирают независимо из H и (C1-C6)алкила, при этом любой алкил необязательно замещен одним или несколькими атомами галогена.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к соединению формулы (I) или его стереоизомерной форме, или таутомеру, или его фармацевтически приемлемой соли.

Изобретение относится к органической химии и касается новой кристаллической модификации 1-[(3R)-3-[4-амино-3-(4-феноксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]-1-пиперидил]-2-пропенил-1-она (ибрутиниб - международное непатентованное название).

Изобретение относится к соединению химической формулы (1) или его фармацевтически приемлемой соли, в которой X представляет собой CH или N; Z представляет собой O или S; R1 представляет собой фенил, необязательно замещенный одним или более заместителями, выбранными из галогена, гидрокси, С1-С5 алкила, С1-С5 алкокси, С1-С5 алкилтио, амино, ди(С1-С5)алкиламино, циано, формила, галоген-С1-С5 алкила, гидрокси-С1-С5 алкила, С1-С5 алкоксиС1-С5 алкила, карбамоилоксиС1-С5 алкила, С1-С5 алкил-C(O)O-С1-С5 алкила, ди(С1-С5)алкиламино-С1-С5 алкила и 5-членного гетероциклоС1-С5 алкила, где гетероциклоалкил имеет 1 гетероатом, выбранный из N; или 9-членный ненасыщенный гетероциклил, имеющий 2 гетероатома, выбранных из О, который необязательно замещен одним или более заместителями, выбранными из галогена; 5-10-членный гетероарил, имеющий 1 или 2 гетероатома, выбранных из N или S, который необязательно замещен одним или более заместителями, выбранными из галогена, гидрокси, С1-С5 алкила, С1-С5 алкокси, галогенС1-С5 алкила и ди(С1-С5)алкиламино, и R2 представляет собой фенил, необязательно замещенный одним или более заместителями, выбранными из галогена, дейтерия и гидрокси, или 6-10-членный гетероарил, имеющий 1 или 2 гетероатома, выбранных из N, который необязательно замещен одним или более заместителями, выбранными из галогена и С1-С5 алкила.

Изобретение относится к новому соединению формулы I, обладающему свойствами ингибитора PDE2. Соединение может найти применение при лечении заболевания, расстройства или состояния опосредованного PDE2, таких как тревожность, депрессия, расстройство аутического спектра, шизофрения, тревожность и/или депрессия у аутичных и/или больных шизофренией, и когнитивные нарушения, связанные с шизофренией или деменцией и др.

Изобретение относится к новым соединениям общей формулы I или их фармацевтически приемлемой соли. Соединения обладают свойствами ингибитора Trk и могут быть использованы для лечения TRK-опосредованного заболевания, выбранного из группы, состоящей из папиллярной карциномы щитовидной железы, рака поджелудочной железы, рака легких, рака толстой кишки, карциномы молочной железы, нейробластомы, боли, кахексии, дерматита и астмы, В соединении формулы I Формула IR1 представляет собой фенильное кольцо, замещенное одним или несколькими заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из фтора, метокси и этокси; R2 представляет собой Н; X выбран из группы, состоящей из -CH2- и -CH(Z)-, где Z представляет собой галоген; и Q выбран из группы, состоящей из -CH=CR3C(O)NR4R5, -C≡CC(O)NR4R5 и ; где R3 представляет собой H, где -NR4R5 либо образует 4-7-членное гетероциклическое кольцо или не образует кольцевую структуру, причем гетероциклическое кольцо представляет собой 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо, где когда -NR4R5 образует 4-7-членное гетероциклическое кольцо, то 4-7-членное гетероциклическое кольцо включает необязательное второй гетероатом, выбранный из N или O в дополнение к азоту в -NR4R5, и оно необязательно замещено одним или несколькими заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из линейного C1-C6 алкила, разветвленного C1-C6 алкила, гидроксила, где когда -NR4R5 не образует кольцевую структуру, то R4 выбирают из группы, состоящей из водорода, линейного C1-C6 алкила и разветвленного C1-C6 алкила, линейного C1-C6 гидроксиалкила и разветвленного C1-C6 гидроксиалкила, и R5 выбирают из H, метила, этила, изопропила, циклопропила, трет-бутила, метоксиэтила и гидроксиэтила, где каждый Y1, Y2, Y3 и Y4 независимо выбран из группы, состоящей из -CH, N, O, S, -CR6 и -NR6, при условии, что три из Y1, Y2, Y3 и Y4 выбраны из N или NR6, или один из Y1, Y2, Y3 и Y4 представляет собой O или S, и один или два из Y1, Y2, Y3 и Y4 представляют собой N или NR6, где R6 выбран из группы, состоящей из водорода, линейного С1-С4 алкила, разветвленного С1-С4 алкила, 5-членного гетероарильного кольца, имеющего 2 атома азота в кольце, 5-7-членного гетероциклоалкильного кольца, имеющего 1-2 атома азота и/или кислорода в кольце, 3-7-членного циклоалкильного кольца, -NHCO-(фенильное кольцо) и -CH2CO-(6-членное гетероциклическое кольцо, имеющее 1-2 гетероатома, выбранных из азота и кислорода);или R1 представляет собой пиридиновое кольцо, замещенное по меньшей мере одним заместителем, выбранным из группы, состоящей из фтора и метокси; R2 представляет собой Н; X выбран из группы, состоящей из -CH2- и -CH(Z)-, где Z представляет собой галоген; и Q выбран из группы, состоящей из -CH=CR3C(O)NR4R5, -CCC(O)NR4R5 и , где R3 представляет собой H, где -NR4R5 либо образует 4-7-членное гетероциклическое кольцо или не образует кольцевую структуру, причем гетероциклическое кольцо представляет собой 4-7-членное гетероциклоалкильное кольцо, где когда -NR4R5 образует 4-7-членное гетероциклическое кольцо, то 4-7-членное гетероциклическое кольцо включает необязательный второй гетероатом, выбранный из N или O, в дополнение к азоту в -NR4R5, и оно необязательно замещено одним или несколькими заместителями, независимо выбранными из группы, состоящей из линейного C1-C6 алкила, разветвленного C1-C6 алкила, гидроксила, где когда -NR4R5 не образует кольцевой структуры, то R4 выбирают из группы, состоящей из водорода, линейного C1-C6 алкила и разветвленного C1-C6 алкила, линейного C1-C6 гидроксиалкила и разветвленного C1-C6 гидроксиалкила, и R5 выбран из группы, состоящей из H, метила, этила, изопропила, циклопропила, трет-бутила, метоксиэтила и гидроксиэтила, при условии, что R4 и R5 не являются одновременно водородом, где каждый Y1, Y2, Y3 и Y4 независимо выбран из группы, состоящей из -CH, N, O, S, -CR6 и -NR6, при условии, что три из Y1 , Y2, Y3 и Y4 выбраны из N или NR6, или один из Y1, Y2, Y3 и Y4 представляет собой O или S, и один или два из Y1, Y2, Y3 и Y4 представляют собой N или NR6, где R6 выбран из группы, состоящей из водорода, линейного С1-С4 алкила, разветвленного С1-С4 алкила, 5-членного гетероарильного кольца с 2 атомами азота в кольце, 5-7-членного гетероциклоалкильного кольца, имеющего от 1 до 2 атомов азота и/или кислорода в цикле, 3-7-членного циклоалкильного кольца, -NHCO-(фенильное кольцо) и -CH2CO-(6-членное гетероциклическое кольцо, имеющее 1-2 гетероатома, выбранных из азота и кислорода); или соединение представляет собой (R,E)-4-(3-(5-(2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-ил)акрилоил)пиперазин-2-он (химическое соединение 51) или (E)-3-(5-((R)-2-(2,5-дифторфенил)пирролидин-1-ил)пиразоло[1,5-a]пиримидин-3-ил)-1-(3-(2-гидроксипропан-2-ил)пиперазин-1-ил)проп-2-ен-1-он (химическое соединение 52).

Изобретение относится к конкретным соединениям, представляющим собой (S)-4-(1-акрилоилпиперидин-3-ил)-1Н-индол-7-карбоксамид, (R)-4-(1-акрилоилпиперидин-3-ил)-1Н-индол-7-карбоксамид, 4-(1-акрилоилпиперидин-3-ил)-2-(1-метил-1Н-пиразол-4-ил)-1Н-индол-7-карбоксамид, 4-((1-акрилоилазетидин-3-ил)(метил)амино)-1Н-индол-7-карбоксамид, 4-(3-акриламидофенил)-2-(2-гидроксиэтил)-1Н-индол-7-карбоксамид, 4-(3-акриламидофенил)-2-этил-1Н-индол-7-карбоксамид, или их фармацевтически приемлемой соли.

Изобретение относится к новым производным 6,7-дигидропиразоло[1,5-а]пиразин-4(5Н)-она формулы (I), а также к фармацевтическим композициям, содержащим такие соединения. Технический результат: получены новые соединения, которые могут быть использованы в виде отрицательных аллостерических модуляторов (NAM) метаботропных глутаматных рецепторов подтипа 2 ("mGluR2") и могут быть пригодны для профилактики или лечения расстройств, в которых участвует подтип mGluR2.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к соединению указанной ниже структуры и к его фармацевтически приемлемой соли. Технический результат: получено новое гетероциклическое соединение, полезное для лечения различных патологических состояний, опосредованных аномальной активностью киназ семейства JAK, и, в частности, для лечения ревматоидного артрита.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к антителу против Igβ. Также раскрыты полинуклеотид, кодирующий указанное антитело, экспрессионный вектор, содержащий указанный полинуклеотид, клетка-хозяин для получения указанного антитела, фармацевтическая композиция, содержащая указанное антитело.

Изобретение относится к вариантам улучшенного нового способа получения соединения 7Н-пирроло[2,3-d]пиримидина формулы 1 и его ветеринарно приемлемой соли. Соединение формулы 1 является ингибитором JAK и может найти применение при лечении заболеваний, связанных с активностью JAK, таких как рак, астма и др.

Изобретение относится к применению диаминопиримидинового соединения формулы I или IB, или его фармацевтически приемлемой соли, или его дейтерированной формы. Соединения обладают свойствами ингибитора JNK1, JNK2, IL2 или TNFα и предназначены для получения лекарственного средства для лечения или предотвращения неалкогольного стеатогепатита, фиброза почек, воспаления, гиперплазии, некроза или волчанки.

Настоящее изобретение относится к ингибированию прогрессирования структурных повреждений у пациентов с псориатическим артритом. Описан способ такого ингибирования, в котором ежемесячно подкожно вводят примерно 150 мг или примерно 300 мг анти-IL-17 антитела с соответствующими аминокислотными последовательностями VH и VL.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использована для получения наночастиц из оксида железа, функционализированных ПЭГ. Способ получения наночастиц включает термическое разложение ацетилацетоната железа в присутствии функционализированных молекул ПЭГ или в присутствии функционализированных молекул ПЭГ и бензилового эфира, и при этом температура термического разложения составляет от 80 до 300°С.

Изобретение относится к новому соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, обладающими свойствами ингибитора LTA-4-гидролазы. Соединения могут найти применение для лечения заболевания и расстройства, которое облегчается посредством ингибирования активности LTA4-h.

Изобретение относится к медицине, а именно к ревматологии и кардиологии, и касается коррекции вазомоторной дисфункции эндотелия и артериальной ригидности у больных ревматоидным артритом.
Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантологии, и может быть использовано для профилактики отторжения трансплантата трупной почки. Для этого проводят обследование реципиента при генетическом HLA типировании на высоком разрешении.

Изобретение относится к области биохимии. Описана группа изобретений, включающая в себя аптамер, связывающийся с FGF2; комплекс для связывания аптамера с FGF2; лекарственные средства для лечения или профилактики заболевания, сопровождаемого ангиогенезом; заболевания костей и суставов; боли; способ лечения или профилактики вышеперечисленных заболеваний, применение вышеуказанного аптамера или комплекса в получении лекарственного средства для лечения или профилактики вышеперечисленных заболеваний.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой противовоспалительное лекарственное средство для интраназального применения в форме водного раствора при терапии постгриппозных осложнений, содержащее в 100,0 мл воды: 0,001-0,500 г гликозилированных полипептидов, выделяемых из свежих, замороженных или сушеных внутренностей морских ежей Strongylocentrotus droebachiensis с молекулярной массой 5,5-7,0 кДа, 0,05-0,20 г биоадгезивного компонента-поликарбофила, 1,0-2,5 г глицерина, 0,025-0,15 г динатрия эдетат дигидрата, 0,005-0,02 г бензалкония хлорида и раствора натрия гидроксида, обеспечивающего рН 6-7.
Наверх