Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)



Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
Модуляция экспрессии прекалликреина (пкк)
C12N2310/11 - Микроорганизмы или ферменты; их композиции (биоциды, репелленты или аттрактанты или регуляторы роста растений, содержащие микроорганизмы, вирусы, микробные грибки, ферменты, агенты брожения или вещества, получаемые или экстрагируемые из микроорганизмов или из материала животного происхождения A01N 63/00; пищевые составы A21,A23; лекарственные препараты A61K; химические аспекты или использование материалов для бандажей, перевязочных средств, впитывающих подкладок или хирургических приспособлений A61L; удобрения C05); размножение, консервирование или сохранение микроорганизмов (консервирование живых тканей или органов людей или животных A01N 1/02); мутации или генная инженерия; питательные среды (среды для микробиологических испытаний C12Q)
C12N15/113 - Получение мутаций или генная инженерия; ДНК или РНК, связанные с генной инженерией, векторы, например плазмиды или их выделение, получение или очистка; использование их хозяев (мутанты или микроорганизмы, полученные генной инженерией C12N 1/00,C12N 5/00,C12N 7/00; новые виды растений A01H; разведение растений из тканевых культур A01H 4/00; новые виды животных A01K 67/00; использование лекарственных препаратов, содержащих генетический материал, который включен в клетки живого организма, для лечения генетических заболеваний, для генной терапии A61K 48/00 пептиды вообще C07K)

Владельцы патента RU 2712559:

ИОНИС ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ, ИНК. (US)

Изобретение относится к области биотехнологии. Описана группа изобретений, включающая соединение, содержащее модифицированный олигонуклеотид для снижения мРНК и/или белка ПКК (варианты), конъюгированное антисмысловое соединение, содержащее вышеуказанное соединение для снижения экспрессии мРНК и/или белка ПКК, композицию для предупреждения, лечения или облегчения связанного с ПКК заболевания, расстройства или состояния, применение соединения и применение композиции для предупреждения, лечения или облегчения связанного с ПКК заболевания, расстройства или состояния, применение соединения и применение композиции для лечения воспалительного заболевания или тромбоэмболического заболевания. В одном из вариантов реализации соединение состоит из модифицированного олигонуклеотида согласно следующей формуле: Tes Ges mCes Aes Aes Gds Tds mCds Tds mCds Tds Tds Gds Gds mCds Aes Aes Aes mCes Ae, где A = аденин, mC = 5'-метилцитозин, G = гуанин, T = тимин, e = 2'-О-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид, d = 2'-дезоксинуклеозид и s = межнуклеозидная фосфоротиоатная связь. Изобретение расширяет арсенал средств для снижения мРНК и/или белка ПКК. 22 н. и 21 з.п. ф-лы, 2 ил., 85 табл., 22 пр.

 

Перечень последовательностей

Настоящая заявка подана вместе с Перечнем последовательностей в электронном формате. Перечень последовательностей предоставлен в виде файла под названием BIOL0172WOSEQ_ST25.txt, созданного 15 августа 2014 года, размер которого составляет около 632 Кб. Информация в электронном формате перечня последовательностей включена в данное описание посредством ссылки в полном объеме.

Область техники

Предложены соединения, композиции и способы снижения экспрессии мРНК и белка прекалликреина (ПКК) плазмы человека у животного. Такие композиции и способы пригодны для лечения, предупреждения или облегчения воспалительных и тромбоэмболических состояний.

Уровень техники

Прекалликреин плазмы (ПКК) является прекурсором калликреина плазмы (КП), который кодируется геном KLKB1. ПКК представляет собой гликопротеин, участвующий в поверхностно-зависимой активации коагуляции крови, фибринолизе, генерации кинина и воспалении. Фактор XIIa превращает ПКК в КП путем расщепления внутренней пептидной связи Arg-Ile. КП высвобождает кинины из кининогенов, а также генерирует плазмин из плазминогена. КП является членом кинин-калликреинового пути, который состоит из нескольких белков, играющих роль в воспалении, контроле кровяного давления, коагуляции и боли.

Краткое описание сущности изобретения

В данном описании предложены соединения, композиции и способы модулирования экспрессии мРНК и белка ПКК. В некоторых вариантах реализации изобретения соединения, пригодные для модуляции экспрессии мРНК и белка ПКК, представляют собой антисмысловые соединения. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения представляют собой антисмысловые олигонуклеотиды.

В некоторых вариантах реализации изобретения модуляция может происходить в клетке или ткани. В некоторых вариантах реализации изобретения клетка или ткань находится в организме животного. В некоторых вариантах реализации изобретения животное является человеком. В некоторых вариантах реализации изобретения уровни мРНК ПКК снижаются. В некоторых вариантах реализации изобретения уровни белка ПКК снижаются. Такое снижение может происходить в зависимой от времени форме или в дозозависимой форме.

Также предложены соединения, композиции и способы, пригодные для предупреждения, лечения и облегчения протекания заболеваний, расстройств и состояний, связанных с ПКК. В некоторых вариантах реализации изобретения такие связанные с ПКК заболевания, расстройства и состояния представляют собой воспалительные заболевания. В некоторых вариантах реализации изобретения воспалительное заболевание может быть острым или хроническим воспалительным заболеванием. В некоторых вариантах реализации изобретения такие воспалительные заболевания могут включать наследственный ангионевротический отек (НАО), отек, ангионевротический отек, припухлость, ангионевротический отек век, отек глаза, отек желтого пятна и отек мозга. В некоторых вариантах реализации изобретения такие связанные с ПКК заболевания, расстройства, и состояния представляют собой тромбоэмболические заболевания. В некоторых вариантах реализации изобретения такие тромбоэмболические заболевания могут включать тромбоз, эмболию, тромбоэмболию, тромбоз глубоких вен, легочную эмболию, инфаркт миокарда, инсульт и инфаркт.

В общем, таким заболеваниям, расстройствам и состояниям могут быть присущи один или более факторов риска, причин или исходов.

Некоторые факторы риска и причины развития воспалительного заболевания включают генетическую предрасположенность к воспалительному заболеванию и факторы внешней среды. В некоторых вариантах реализации изобретения у субъекта присутствует мутантный ген ингибитора комплемент 1 эстеразы (C1-INH) или мутантный ген Фактора 12. В некоторых вариантах реализации изобретения субъект принимал или принимает ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента (ингибиторы АПФ) или блокаторы рецептора ангиотензина II (БРА). В некоторых вариантах реализации изобретения у субъекта возникала аллергическая реакция, ведущая к ангионевротическому отеку. В некоторых вариантах реализации изобретения у субъекта присутствует НАО типа I. В некоторых вариантах реализации изобретения у субъекта присутствует НАО типа II. В некоторых вариантах реализации изобретения у субъекта присутствует НАО типа III.

Некоторые варианты исхода, связанные с развитием воспалительного заболевания, включают отек/припухлость различных частей тела, включая конечности (т.е., кисти, стопы, руки, ноги), кишечник (брюшная полость), лицо, половые органы, гортань (т.е., голосовой аппарат); сосудистую проницаемость; сосудистый выток; генерализованное воспаление; боль в животе; вздутие; рвоту; диарею; кожный зуд; респираторные (астматические) реакции; ринит; анафилаксию; бронхоконстрикцию; гипотензию; кому; и смерть.

Некоторые факторы риска и причины развития тромбоэмболического заболевания включают генетическую предрасположенность к тромбоэмболическому заболеванию, ограниченную подвижность, хирургическое вмешательство (особенно, ортопедическое хирургическое вмешательство), злокачественное новообразование, беременность, пожилой возраст, применение пероральных контрацептивов, мерцание предсердий, тромбоэмболическое состояние в анамнезе, хроническое воспалительное заболевание и унаследованные или приобретенные протромботические расстройства свертываемости. Некоторые варианты исхода, связанные с развитием тромбоэмболического состояния, включают уменьшение тока крови через пораженный сосуд, гибель ткани и смерть.

В некоторых вариантах реализации изобретения способы лечения включают введение антисмыслового соединения против ПКК индивидууму, который нуждается в этом. В некоторых вариантах реализации изобретения способы лечения включают введение антисмысловых олигонуклеотидов против ПКК индивидууму, нуждающемуся в этом.

Перечень фигур

Фиг. 1 иллюстрирует количественное определение методом Вестерн-блота ВМК из образцов крови, как описано в Примере 11.

Фиг. 2 иллюстрирует количественное определение методом Вестерн-блота ВМК из образцов крови, как описано в Примере 14.

Подробное описание сущности изобретения

Необходимо понимать, что как вышеизложенное общее описание, так и последующее детальное описание приведены только в качестве примера и с целью объяснения, и не ограничивают заявленного изобретения. В данном описании формы единственного числа включают множественное число, если конкретно не указано иное. В данном описании использование "или" означает "и/или", если не указано иное. Кроме того, использование термина "включая", а также других форм, таких как "включает" и "включаемый", является неограничивающим. Дополнительно, такие термины, как "элемент" или "компонент" включают элементы и компоненты, содержащие одну единицу, а также элементы и компоненты, которые содержат более чем одну субъединицу, если конкретно не указано иное.

Заголовки разделов, используемые в данном описании, приведены только для организационных целей и не должны интерпретироваться как ограничение описанного объекта изобретения. Все документы или части документов, цитируемые в данной заявке, в том числе, но не ограничиваясь этим, патенты, патентные заявки, статьи, книги и трактаты, таким образом явно включены посредством ссылки как в том, что касается части документа, обсуждаемой в данном описании, так и в полном объеме.

Определения

Если не были предложены специфические определения, то номенклатура, используемая в связи с, а также способы и методики аналитической химии, синтетической органической химии, медицинской и фармацевтической химии, описанные в данном описании, представляют собой хорошо известные и обычно применяемые в данной области техники. Стандартные методы могут применяться для химического синтеза и химического анализа. В допустимых случаях, все патенты, заявки, опубликованные заявки и другие публикации, инвентаризационные номера GENBANK и связанная информация о последовательностях, доступная через базы данных, такие как Национальный Центр Биотехнологической Информации (NCBI) и другие данные, на которые присутствует ссылка в данном описании, включены посредством ссылки в части документа, обсуждаемой в данном описании, а также в полном объеме.

Если не указано иное, следующие термины имеют следующее значение:

"2'-O-метоксиэтил" (также 2'-МОЕ и 2'-OCH2CH2-OCH3 и МОЕ) обозначает модификацию O-метоксиэтил в положении 2' фуранозного кольца. 2'-O-метоксиэтил-модифицированный сахар представляет собой модифицированный сахар.

"2'-O-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид" (также "2'-МОЕ нуклеозид") обозначает нуклеозид, содержащий модифицированный 2'-МОЕ сахарный фрагмент.

"2'-Замещенный нуклеозид" обозначает нуклеозид, содержащий заместитель в положении 2' фуранозного кольца, кроме Н или ОН. В некоторых вариантах реализации изобретения 2'-замещенные нуклеозиды включают нуклеозиды с бициклическими модификациями сахара.

"2'-Дезоксинуклеозид" обозначает нуклеозид, содержащий водород в положении 2' сахарной части нуклеозида.

"3' Сайт-мишень" обозначает нуклеотид нуклеиновой кислоты-мишени, комплементарный 3'-крайнему нуклеотиду конкретного антисмыслового соединения.

"5' Сайт-мишень" обозначает нуклеотид нуклеиновой кислоты-мишени, комплементарный 5'-крайнему нуклеотиду конкретного антисмыслового соединения.

"5-Метилцитозин" обозначает цитозин, модифицированный метильной группой, присоединенной к положению 5. 5-Метилцитозин представляет собой модифицированное нуклеиновое основание.

"Около" означает в пределах ±7% от значения. Например, если указано "соединения вызывают ингибирование ПКК по меньшей мере около 70%", это означает, что уровни ПКК ингибируются в пределах диапазона от 63% до 77%.

"Вводимый параллельно" обозначает сопутствующее введение двух фармацевтических агентов в любой форме, в которой фармакологические эффекты обоих проявляются у пациента в одно и то же время. Параллельное введение не требует введения обоих фармацевтических агентов в одной фармацевтической композиции, в одной лекарственной форме или одним и тем же способом введения. Эффекты обоих фармацевтических агентов не обязательно должны проявляться в одно и то же время. Эффекты должны только частично перекрываться в течение периода времени и не обязательно должны иметь одинаковую протяженность.

"Введение" обозначает обеспечение фармацевтического агента животному, и включает, но не ограничиваясь этим, введение медицинским работником и самостоятельное введение.

"Облегчение протекания" обозначает уменьшение, замедление, остановку или обращение по меньшей мере одного показателя тяжести состояния или заболевания. Выраженность показателей может быть определена субъективными или объективными измерениями, которые известны специалистам в данной области техники.

"Животное" обозначает человека или животное, в том числе, но не ограничиваясь этим, мышей, крыс, кроликов, собак, кошек, свиней и негуманоидных приматов, в том числе, но не ограничиваясь этим, обезьян и шимпанзе.

"Антисмысловая активность" обозначает любую обнаружимую или измеримую активность, относимую на счет гибридизации антисмыслового соединения с соответствующей нуклеиновой кислотой-мишенью. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловая активность проявляется уменьшением количества или экспрессии нуклеиновой кислоты-мишени или белка, кодируемого такой нуклеиновой кислотой-мишенью. "Антисмысловое соединение" обозначает олигомерное соединение, которое способно к гибридизации с нуклеиновой кислотой-мишенью посредством водородной связи. Примеры антисмысловых соединений включают одноцепочечные и двухцепочечные соединения, такие как антисмысловые олигонуклеотиды, миРНК, мшРНК, оцРНК и соединения, модифицированные по степени занятости.

"Антисмысловое соединение" обозначает олигомерное соединение, способное к гибридизации с нуклеиновой кислотой-мишенью посредством водородной связи. Примеры антисмысловых соединений включают одноцепочечные и двухцепочечные соединения, такие как антисмысловые олигонуклеотиды, миРНК, мшРНК, оцРНК и соединения, модифицированные по степени занятости.

"Антисмысловое ингибирование" обозначает снижение уровней нуклеиновой кислоты-мишени в присутствии антисмыслового соединения, комплементарного нуклеиновой кислоте-мишени, по сравнению с целевыми уровнями нуклеиновой кислоты или в отсутствие антисмыслового соединения. "Антисмысловые механизмы" представляют собой все механизмы, принимающие участие в гибридизации соединения с нуклеиновой кислотой-мишенью, причем результат или эффект гибридизации представляет собой разложение мишени или оккупацию мишени с сопутствующей остановкой функционирования клеточного аппарата, включая, например, транскрипцию или сплайсинг.

"Антисмысловые механизмы" представляют собой все те механизмы, которые включают гибридизацию соединения с нуклеиновой кислотой-мишенью, причем результат или эффект гибридизации представляет собой разложение мишени или оккупацию мишени с сопутствующей остановкой функционирования клеточного аппарата, включая, например, транскрипцию или сплайсинг.

"Антисмысловой олигонуклеотид" обозначает одноцепочечный олигонуклеотид, содержащий последовательность нуклеиновых оснований, которая позволяет гибридизацию с соответствующим сегментом нуклеиновой кислоты-мишени. "Комплементарность оснований" обозначает емкость точного спаривания нуклеиновых оснований антисмыслового олигонуклеотида с соответствующими нуклеиновыми основаниями нуклеиновой кислоты-мишени (т.е., гибридизации), и опосредована уотсон-криковским, хугстеновским или обратным хугстеновским образованием водородных связей между соответствующими нуклеиновыми основаниями.

"Комплементарность оснований" обозначает емкость точного спаривания нуклеиновых оснований антисмыслового олигонуклеотида с соответствующими нуклеиновыми основаниями нуклеиновой кислоты-мишени (т.е., гибридизации), и опосредована уотсон-криковским, хугстеновским или обратным хугстеновским образованием водородных связей между соответствующими нуклеиновыми основаниями.

"Бициклический сахар" обозначает фуранозное кольцо, модифицированное мостиковым соединением двух атомов. Бициклический сахар является модифицированным сахаром.

"Бициклический нуклеозид" (также бициклическая нуклеиновая кислота или BNA) обозначает нуклеозид, содержащий сахарный фрагмент, который содержит мостик, соединяющий два атома углерода сахарного кольца, с формированием таким образом бициклической системы колец. В некоторых вариантах реализации изобретения мостик соединяет 4'-углерод и 2'-углерод сахарного кольца.

"Кэп-структура" или "концевой кэп-фрагмент" обозначает химические модификации, которые введены на любом конце антисмыслового соединения.

"cEt" или "ограниченный этил" обозначает бициклический нуклеозид, содержащий сахарный фрагмент, который содержит мостик, соединяющий 4'-углерод и 2'-углерод, причем мостик представлен формулой: 4'-СН(СН3)-O-2'.

"cEt модифицированный нуклеозид" (также "ограниченный этилнуклеозид") обозначает нуклеозид, содержащий бициклический сахарный фрагмент, который содержит мостик 4'-СН(СН3)-O-2'.

"Химически отличный участок" обозначает участок антисмыслового соединения, который с химической точки зрения некоторым образом отличается от другого участка того же антисмыслового соединения. Например, участок, содержащий 2'-O-метоксиэтилнуклеозиды, с химической точки зрения отличается от участка, содержащего нуклеозиды без 2'-O-метоксиэтильных модификаций.

"Химерное антисмысловое соединение" обозначает антисмысловое соединение, которое содержит по меньшей мере два отличных с химической точки зрения участка, причем каждое положение содержит несколько субъединиц.

"Сопутствующее введение" обозначает введение двух или нескольких фармацевтических агентов индивидууму. Два или более фармацевтических агентов могут находиться в одной фармацевтической композиции или могут находиться в отдельных фармацевтических композициях. Каждый из двух или нескольких фармацевтических агентов можно вводить таким же или другим способом введения. Сопутствующее введение включает параллельное или последовательное введение.

"Комплементарность" обозначает способность к спариванию между нуклеиновыми основаниями первой нуклеиновой кислоты и второй нуклеиновой кислоты.

"Включать", "включает" и "включающий" необходимо понимать, как обозначающие включение заявленной стадии или элемента или группы стадий или элементов, но не исключение любой другой стадии или элемента или группы стадий или элементов.

"Смежные нуклеиновые основания" обозначает нуклеиновые основания, непосредственно смежные друг по отношению к другу.

"Конструирование" или "разработка" обозначает процесс создания олигомерного соединения, которое специфично гибридизуется с выбранной молекулой нуклеиновой кислоты.

"Разбавитель" обозначает ингредиент в композиции, который на обладает фармакологической активностью, но является необходимым или желательным с фармацевтической точки зрения. Например, в иъекционно вводимых лекарственных средствах разбавитель может представлять собой жидкость, например, раствор натрия хлорида.

"Доза" обозначает указанное количество фармацевтического агента, обеспечиваемое за одно введение или за указанный период времени. В некоторых вариантах реализации изобретения доза может быть введена в виде одного, двух или более болюсов, таблеток или инъекций. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения, в которых подкожное введение является желательным, желательная доза требует объема, который проблематично ввести в виде одной инъекции, таким образом, две или более инъекций можно производить, чтобы обеспечить желательную дозу. В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтический агент вводят инфузией на протяжении длительного периода времени или непрерывно. Дозы могут быть указаны, как количество фармацевтического агента в час, день, неделю или месяц.

"По ходу транскрипции" обозначает относительное направление в направлении 3' конца или С-конца нуклеиновой кислоты.

"Эффективное количество" в контексте модуляции активности или лечения или предупреждения состояния обозначает введение такого количества фармацевтического агента субъекту, нуждающемуся в такой модуляции, лечении или профилактике, в виде единой дозы или как часть серии, которое будет эффективным для модуляции указанного эффекта или для лечения или профилактики или улучшения указанного состояния. Эффективное количество может варьировать от одного индивидуума к другому, в зависимости от состояния здоровья и физического состояния индивидуума, который получает лечение, таксономической группы индивидуумов, которые получают лечение, препарата композиции, оценки медицинского состояния индивидуума и других уместных факторов.

"Эффективность" обозначает способность оказывать желательное воздействие.

"Экспрессия" включает все функции, с помощью которых кодируемая геном информация превращается в структуры, присутствующие и функционирующие в клетке. Такие структуры включают, но не ограничиваясь этим, продукты транскрипции и трансляции.

"Полностью комплементарный" или "на 100% комплементарный" означает, что каждому нуклеиновому основанию первой нуклеиновой кислоты соответствует комплементарное нуклеиновое основание во второй нуклеиновой кислоте. В некоторых вариантах реализации изобретения первая нуклеиновая кислота представляет собой антисмысловое соединение, и второй нуклеиновой кислотой является нуклеиновая кислота-мишень.

"Гэпмер" обозначает химерное антисмысловое соединение, в котором внутренний участок, содержащий несколько нуклеозидов, которые способствуют расщеплению РНКазой Н, расположен между внешними участками, содержащими один или более нуклеозидов, причем нуклеозиды, содержащие внутренний участок, с химической точки зрения являются отличными от нуклеозида или нуклеозидов, составляющих внешние участки. Внутренний участок может быть обозначен как "гэп", и внешние участки могут быть обозначены как "крылья."

"Гибридизация" обозначает отжиг комплементарных молекул нуклеиновых кислот. В некоторых вариантах реализации изобретения комплементарные молекулы нуклеиновых кислот включают, но не ограничиваясь этим, антисмысловое соединение и нуклеиновую кислоту-мишень. В некоторых вариантах реализации изобретения комплементарные молекулы нуклеиновых кислот включают, но не ограничиваясь этим, антисмысловой олигонуклеотид и нуклеиновую кислоту-мишень.

"Идентификация животного с воспалительным заболеванием" обозначает идентификацию животного, которому поставлен диагноз воспалительного заболевания, или которое склонно к развитию воспалительного заболевания. Индивидуумы, склонные к развитию воспалительного заболевания, включают тех, у которых присутствуют один или более факторов риска для развития воспалительного заболевания, включая факторы окружающей среды, личный или семейный анамнез или генетическую предрасположенность к одному или нескольким воспалительным заболеваниям. Такая идентификация может быть осуществлена любым способом, включая оценку медицинского анамнеза индивидуума и стандартные клинические анализы или оценки, такие как генетическое тестирование.

"Идентификация животного со связанным с ПКК заболеванием" обозначает идентификацию животного, которому поставлен диагноз связанного с ПКК заболевания, или которое склонно к развитию связанного с ПКК заболевания. Индивидуумы, склоненные к развитию связанного с ПКК заболевания, включают тех, у кого присутствуют один или более факторов риска развития связанного с ПКК заболевания, включая личный или семейный анамнез или генетическую предрасположенность к одному или нескольким связанным с ПКК заболеваниям. Такая идентификация может быть осуществлена любым способом, включая оценку медицинского анамнеза индивидуума и стандартные клинические анализы или оценки, такие как генетическое тестирование.

"Идентификация животного с тромбоэмболическим заболеванием" обозначает идентификацию животного, которому поставлен диагноз тромбоэмболического заболевания, или которое склонно к развитию тромбоэмболического заболевания. Индивидуумы, склоненные к развитию тромбоэмболического заболевания, включают тех, у кого присутствуют один или более факторов риска развития тромбоэмболического заболевания, включая личный или семейный анамнез или генетическую предрасположенность к одному или нескольким тромбоэмболическим заболеваниям, ограничение подвижности, хирургическое вмешательство (особенно, ортопедическое хирургическое вмешательство), злокачественное новообразование, беременность, пожилой возраст, применение пероральных контрацептивов, мерцание предсердий, тромбоэмболическое состояние в анамнезе, хроническое воспалительное заболевание и унаследованные или приобретенные протромботические расстройства свертываемости. Такая идентификация может быть осуществлена любым способом, включая оценку медицинского анамнеза индивидуума и стандартные клинические анализы или оценки, такие как генетическое тестирование.

"Непосредственно смежные" обозначает отсутствие промежуточных элементов между непосредственно смежными элементами. "Индивидуум" обозначает человека или животное, выбранное для лечения или терапии.

"Индивидуум" обозначает человека или животное, выбранное для лечения или терапии.

"Ингибирование ПКК" обозначает снижение уровня или экспрессии мРНК и/или белка ПКК. В некоторых вариантах реализации изобретения уровни мРНК и/или белка ПКК ингибируются в присутствии антисмыслового соединения, нацеленного на ПКК, включая антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на ПКК, по сравнению с экспрессией мРНК ПКК и/или уровнями белка в отсутствие антисмыслового соединения против ПКК, такого как антисмысловой олигонуклеотид.

"Ингибирование экспрессии или активности" обозначает снижение или блокаду экспрессии или активности и не обязательно указывает на полное устранение экспрессии или активности.

"Межнуклеозидная связь" обозначает химическую связь между нуклеозидами.

"Связанные нуклеозиды" обозначает смежные нуклеозиды, связанные вместе межнуклеозидной связью.

"Замкнутая нуклеиновая кислота" или "LNA" или "LNA нуклеозиды" обозначает мономеры нуклеиновой кислоты, содержащие мостик, который соединяет два атома углерода между положениями 4' и 2' сахарного фрагмента нуклеозида, с образованием таким образом бициклического сахара. Примеры такого бициклического сахара включают, не ограничиваясь этим, A) α-L-Метиленокси (4'-СН2-O-2') LNA, (В) β-D-Метиленокси (4'-CH2-O-2') LNA, (С) Этиленокси (4'-(CH2)2-O-2') LNA, (D) Аминоокси (4'-CH2-O-N(R)-2') LNA и (Е) Оксиамино (4'-CH2-N(R)-O-2') LNA, как проиллюстрировано ниже.

Как используется в данном описании, соединения LNA включают, но не ограничиваясь этим, соединения, которые содержат по меньшей мере один мостик между положениями 4' и 2' сахара, причем каждый из мостиков независимо содержит 1 или от 2 до 4 связанных групп, независимо выбранных из -[C(R1)(R2)]n-, -C(R1)=C(R2)-, -C(R1)=N-, -C(=NR1)-, -C(=O)-, -C(=S)-, -O-, -Si(R1)2-, -S(=O)x- и -N(R1)-; где: х равно 0, 1 или 2; n равно 1, 2, 3 или 4; каждый R1 и R2 независимо представляет собой Н, защитную группу, гидроксил, C112 алкил, замещенный С112 алкил, C2-C12 алкенил, замещенный С212 алкенил, C2-C12 алкинил, замещенный C2-C12 алкинил, С520 арил, замещенный C5-C20 арил, гетероциклический радикал, замещенный гетероциклический радикал, гетероарил, замещенный гетероарил, C5-C7 алициклический радикал, замещенный С57 алициклический радикал, галоген, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, ацил (С(=O)-Н), замещенный ацил, CN, сульфонил (S(=O)2-J1) или сульфоксил (S(=O)-J1); и каждый J1 и J2 независимо представляет собой Н, C1-C12 алкил, замещенный C1-C12 алкил, С212 алкенил, замещенный C2-C12 алкенил, С212 алкинил, замещенный C2-C12 алкинил, C5-C20 арил, замещенный С520 арил, ацил (С(=O)-Н), замещенный ацил, гетероциклический радикал, замещенный гетероциклический радикал, C1-C12 аминоалкил, замещенный C1-C12 аминоалкил или защитную группу.

Примеры мостиковых групп 4'-2', включенных в определение LNA, включают, но не ограничиваясь этим, одну из формул: -[C(R1)(R2)]n-, -[C(R1)(R2)]n-O-, -C(R1R2)-N(R1)-O- или -C(R1R2)-O-N(R1)-. Кроме того, другие группы, содержащие мостик и включенные в определение LNA, представляют собой мостики 4'-СН2-2', 4'-(СН2)2-2', 4'-(СН2)3-2', 4'-СН2-O-2', 4'-(СН2)2-O-2', 4'-СН2-O-N(R1)-2' и 4'-CH2-N(R1)-O-2'-, где каждый R1 и R2 независимо представляет собой Н, защитную группу или C1-C12 алкил.

Также в определение LNA согласно изобретению включены LNA, в которых 2'-гидроксильная группа рибозильного сахарного кольца соединена с 4' атомом углерода сахарного кольца, с образованием таким образом мостика метиленокси (4'-СН2-O-2'), чтобы сформировать бициклический сахарный фрагмент. Кроме того, мостик может быть метиленовой группой (-СН2-), соединяющей атом кислорода 2' и атом углерода 4', для которой используется термин метиленокси (4'-СН2-O-2') LNA. Дополнительно, в случае бициклического сахарного фрагмента, содержащего этиленовую мостиковую группу в данном положении, применяется термин этиленокси (4'-СН2СН2-O-2') LNA. α-L-метиленокси (4'-СН2-O-2'), изомер метиленокси (4'-СН2-O-2') LNA, также включен в определение LNA в данном описании.

"Рассогласование" или "некомплементарное нуклеиновое основание" относится к случаю, когда нуклеиновое основание первой нуклеиновой кислоты не способно спариваться с соответствующим нуклеиновым основанием второй нуклеиновой кислоты или нуклеиновой кислоты-мишени.

"Модифицированная межнуклеозидная связь" обозначает замену или любую модификацию природной межнуклеозидной связи (т.е. фосфодиэфирной межнуклеозидной связи).

"Модифицированное нуклеиновое основание" обозначает любое нуклеиновое основание, кроме аденина, цитозина, гуанина, тимидина (также известного как 5-метилурацил) или урацила. "Немодифицированное нуклеиновое основание" обозначает пуриновые основания аденин (А) и гуанин (G), а также тиминовые основания (Т) пиримидин, цитозин (С) и урацил (U).

"Модифицированный нуклеозид" обозначает нуклеозид, независимо содержащий модифицированный сахарный фрагмент и/или модифицированное нуклеиновое основание.

"Модифицированный нуклеотид" обозначает нуклеотид, независимо содержащий модифицированный сахарный фрагмент, модифицированную межнуклеозидную связь и/или модифицированное нуклеиновое основание.

"Модифицированный олигонуклеотид" обозначает олигонуклеотид, содержащий по меньшей мере одну модифицированную межнуклеозидную связь, модифицированный сахар и/или модифицированное нуклеиновое основание.

"Модифицированный сахар" обозначает замену и/или любую модификацию природного сахарного фрагмента.

"Мономер" обозначает единичный фрагмент олигомера. Мономеры включают, но не ограничиваясь этим, нуклеозиды и нуклеотиды, природные или модифицированные.

"Мотив" обозначает паттерн немодифицированных и модифицированных нуклеозидов в антисмысловом соединении.

"Природный сахарный фрагмент" обозначает сахарный фрагмент, найденный в ДНК (2'-Н) или РНК (2'-ОН).

"Природная межнуклеозидная связь" обозначает 3'-5' фосфодиэфирную связь.

"Некомплементарное нуклеиновое основание" обозначает пару нуклеиновых оснований, которые не образуют друг с другом водородных связей или не гибридизуются другим способом.

"Нуклеиновая кислота" обозначает молекулы, состоящие из мономерных нуклеотидов. Нуклеиновая кислота включает, но не ограничиваясь этим, рибонуклеиновые кислоты (РНК), дезоксирибонуклеиновые кислоты (ДНК), одноцепочечные нуклеиновые кислоты, двухцепочечные нуклеиновые кислоты, малые интерферирующие рибонуклеиновые кислоты (миРНК) и микроРНК (мкРНК).

"Нуклеиновое основание" обозначает гетероциклический фрагмент, способный к спариванию с основанием другой нуклеиновой кислоты.

"Комплементарность нуклеиновых оснований" ссылается на нуклеиновое основание, способное к спариванию с другим нуклеиновым основанием. Например, в ДНК, аденин (А) комплементарен тимину (Т). Например, в РНК аденин (А) комплементарен урацилу (U). В некоторых вариантах реализации изобретения комплементарное нуклеиновое основание обозначает нуклеиновое основание в антисмысловом соединении, способное спариваться с нуклеиновым основанием нуклеиновой кислоты-мишени. Например, если нуклеиновое основание в конкретном положении антисмыслового соединения способно образовывать водородную связь с нуклеиновым основанием в конкретном положении нуклеиновой кислоты-мишени, то положение водородной связи между олигонуклеотидом и нуклеиновой кислотой-мишенью рассматривается как комплементарное в указанной паре нуклеиновых оснований.

"Последовательность нуклеиновых оснований" обозначает порядок размещения смежных нуклеиновых оснований, независимо от любой модификации сахара, связи и/или нуклеинового основания.

"Нуклеозид" обозначает нуклеиновое основание, соединенное с сахаром.

"Миметик нуклеозида" включает структуры, используемые для замены сахара или сахара и основания и необязательно связи в одном или нескольких положениях олигомерного соединения, например, такие как миметики нуклеозидов, содержащие морфолино, циклогексенил, циклогексил, тетрагидропиранил, бицикло или трицикло миметики сахара, например, нефуранозные сахарные фрагменты. Миметики нуклеотидов включает структуры, используемые для замены нуклеозида и связи в одном или нескольких положениях олигомерного соединения, например, такие как пептиднуклеиновые кислоты или морфолиновые фрагменты (морфолиновые фрагменты, присоединенные с помощью -N(H)-C(=O)-O- или другой не фосфодиэфирной связи). Суррогатные сахара частично перекрываются с несколько более широким термином миметики нуклеозидов, но их роль состоит в том, чтобы указывать на замену только сахарного фрагмента (фуранозное кольцо). Тетрагидропиранильные кольца, предложенные в данном описании, являются иллюстрацией примера суррогата сахара, в котором фуранозная сахарная группа заменена системой тетрагидропиранильного кольца. "Миметик" обозначает группы, которые замещают сахар, нуклеиновое основание и/или межнуклеозидную связь. В общем, миметик используется вместо сахара или комбинации сахар-межнуклеозидная связь, а нуклеиновое основание остается для гибридизации с выбранной мишенью.

"Нуклеотид" обозначает нуклеозид, содержащий фосфорнокислую группу, ковалентно связанную с сахарной частью нуклеозида.

"Нецелевой эффект" обозначает нежелательное или вредное биологическое воздействие, связанное с модуляцией РНК или экспрессией белка для гена, не являющегося предусмотренной нуклеиновой кислотой-мишенью.

"Олигомерное соединение" или "олигомер" обозначает полимер из связанных мономерных субъединиц, которые способны к гибридизации по меньшей мере с участком молекулы нуклеиновой кислоты.

"Олигонуклеотид" обозначает полимер из связанных нуклеозидов, каждый из которых может быть модифицированным или немодифицированным, независимо от других.

"Парентеральное введение" подразумевают введение посредством инъекции (например, инъекцией болюса) или инфузии. Парентеральное введение включает подкожное введение, внутривенное введение, внутримышечное введение, внутриартериальное введение, внутрибрюшинное введение или интракраниальное введение, например, интратекальное или интрацеребровентрикулярное введение.

"Пептид" обозначает молекулу, образованную соединением по меньшей мере двух аминокислот амидными связями. Без ограничения, как используется в данном описании, пептид обозначает полипептиды и белки.

"Фармацевтический агент" обозначает субстанцию, которая обеспечивает терапевтическую пользу при введении индивидууму. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения, антисмысловой олигонуклеотид, нацеленный на ПКК, представляет собой фармацевтический агент.

"Фармацевтическая композиция" обозначает смесь субстанций, пригодных для введения субъекту. Например, фармацевтическая композиция может содержать антисмысловой олигонуклеотид и стерильный водный раствор.

"Фармацевтически приемлемое производное" включает фармацевтически приемлемые соли, конъюгаты, пролекарства или изомеры соединений, описанных в данном описании.

"Фармацевтически приемлемые соли" обозначает физиологически и фармацевтически приемлемые соли антисмысловых соединений, т.е., соли, которые сохраняют желательную биологическую активность исходного олигонуклеотида и не вызывают дополнительно нежелательных токсикологических эффектов.

"Фосфоротиоатная связь" обозначает связь между нуклеозидами, в которой фосфодиэфирная связь модифицирована путем замены одного из немостиковых атомов кислорода атомом серы. Фосфоротиоатная связь представляет собой модифицированную межнуклеозидную связь.

"ПКК" обозначает прекалликреин плазмы млекопитающих, в том числе прекалликреин плазмы человека. Прекалликреин плазмы (ПКК) является прекурсором калликреина плазмы (КП), который кодируется геном KLKB1.

"Связанное с ПКК заболевание" обозначает любое заболевание, связанное с любой нуклеиновой кислотой ПКК или продуктом ее экспрессии. Такие заболевания могут включать воспалительное заболевание или тромбоэмболическое заболевание. Такие заболевания могут включать наследственный ангионевротический отек (НАО).

"мРНК ПКК" обозначает любой продукт экспрессии последовательности ДНК, кодирующей ПКК, в форме мРНК.

"Нуклеиновая кислота ПКК" обозначает любую нуклеиновую кислоту, кодирующую ПКК. Например, в некоторых вариантах реализации изобретения, нуклеиновая кислота ПКК включает последовательность ДНК, кодирующую ПКК, последовательность РНК, транскрибированную из ДНК, кодирующей ПКК (в том числе, геномной ДНК, содержащей интроны и экзоны), и последовательность мРНК, кодирующую ПКК. "мРНК ПКК" обозначает мРНК, кодирующую белок ПКК.

"Белок ПКК" обозначает полипептидный продукт экспрессии нуклеиновой кислоты ПКК.

"Часть" обозначает определенное количество смежных (т.е., связанных) нуклеиновых оснований нуклеиновой кислоты. В некоторых вариантах реализации изобретения часть представляет собой определенное количество смежных нуклеиновых оснований нуклеиновой кислоты-мишени. В некоторых вариантах реализации изобретения часть представляет собой определенное количество смежных нуклеиновых оснований антисмыслового соединения.

"Предупреждать" или "предупреждение" обозначает отодвигание во времени или предупреждение начала или развития заболевания, расстройства или состояния в течение периода времени от минут до дней, от недель до месяцев, или на неопределенное время.

"Пролекарство" обозначает терапевтический агент, полученный в неактивной форме, которая превращается в активную форму (т.е., лекарственное средство) в организме или его клетках под действием эндогенных ферментов или других химических веществ и/или условий.

"Профилактически эффективное количество" обозначает количество фармацевтического агента, которое обеспечивает животному благоприятный профилактический или превентивный эффект.

"Участок" определяется как часть нуклеиновой кислоты-мишени, содержащая по меньшей мере одну идентифицируемую структуру, функцию или характеристику.

"Рибонуклеотид" обозначает нуклеотид, содержащий гидрокси в положении 2' сахарной части нуклеотида. Рибонуклеотиды могут быть модифицированы любым из различных заместителей.

"Соли" обозначает физиологически и фармацевтически приемлемые соли антисмысловых соединений, т.е., соли, которые сохраняют желательную биологическую активность исходного олигонуклеотида и не вызывают дополнительно нежелательных токсикологических эффектов.

"Сегменты" определяются как меньшие части или подчасти участков в пределах нуклеиновой кислоты-мишени.

"Побочные эффекты" обозначает физиологические реакции, связанные с лечением, кроме желательных эффектов. В некоторых вариантах реализации изобретения побочные эффекты включают, без ограничения, реакции в месте инъекции, аномальные результаты печеночных проб, аномальные результаты анализов функции почек, токсичность для печени, токсичность для почек, аномалии центральной нервной системы и миопатии.

"Одноцепочечный олигонуклеотид" обозначает олигонуклеотид, который не гибридизуется с комплементарной цепью.

"Сайты" в данном описании определяются как уникальные положения нуклеиновых оснований в пределах нуклеиновой кислоты-мишени.

"Способный к специфичной гибридизации" или "специфично гибридизуется" обозначает антисмысловое соединение, обладающее достаточной степенью комплементарности между антисмысловым олигонуклеотидом и нуклеиновой кислотой-мишенью, чтобы индуцировать желательный эффект, при минимальном или отсутствии влияния на нецелевые нуклеиновые кислоты в условиях, в которых специфическое связывание является желательным, т.е., в физиологических условиях в случае анализов in vivo и терапевтического лечения.

"Строгие условия гибридизации" или "строгие условия" обозначают условия, в которых олигомерное соединение гибридизуется с целевой последовательностью, но с минимальным количеством других последовательностей.

"Субъект" обозначает человека или животное, выбранное для лечения или терапии.

"Мишень" обозначает белок, модуляция которого является желательной.

"Ген мишени" обозначает ген, кодирующий мишень.

"Нацеливающий" или "нацеленный" обозначает процесс конструирования и отбора антисмыслового соединения, которое специфично гибридизуется с нуклеиновой кислотой-мишенью и вызывает желательный эффект.

"Нуклеиновая кислота-мишень", "РНК-мишень" и "транскрипт РНК-мишень" и "целевая нуклеиновая кислота" все обозначают нуклеиновую кислоту, на которую могут быть нацелены антисмысловые соединения.

"Участок-мишень" обозначает часть нуклеиновой кислоты-мишени, на которую нацелены одно или более антисмысловых соединений.

"Сегмент-мишень" обозначает последовательность нуклеотидов в нуклеиновой кислоте-мишени, на которую нацелено антисмысловое соединение. "5' сайт мишени" обозначает 5'-крайний нуклеотид сегмента-мишени. "3' сайт мишени" обозначает 3'-крайний нуклеотид сегмента-мишени.

"Терапевтически эффективное количество" обозначает количество фармацевтического агента, которое обеспечивает терапевтический эффект у индивидуума.

"Лечить" или "лечение" или "терапия" обозначают введение композиции с целью достижения улучшения при заболевании или состоянии.

"Немодифицированные нуклеиновые основания" обозначает пуриновые основания аденин (А) и гуанин (G), а также пиримидиновые основания тимин (Т), цитозин (С) и урацил (U).

"Немодифицированный нуклеотид" обозначает нуклеотид, состоящий из природных нуклеиновых оснований, сахарных фрагментов и межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения немодифицированный нуклеотид представляет собой РНК нуклеотид (например, β-D-рибонуклеозид) иди ДНК нуклеотид (например, β-D-дезоксирибонуклеозид).

"Против хода транскрипции" обозначает относительное направление в направлении 5' конца или N-конца нуклеиновой кислоты.

"Сегмент крыла" обозначает несколько нуклеозидов, модифицированных для придания олигонуклеотиду таких свойств, как, например, повышенная ингибирующая активность, повышенная аффинность связывания с нуклеиновой кислотой-мишенью или сопротивляемость разложению нуклеазами in vivo.

Некоторые варианты реализации изобретения

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, композиции и способы ингибирования экспрессии мРНК и белка прекалликреина (ПКК) в плазме. В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, композиции и способы для снижения уровней мРНК и белка ПКК.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются антисмысловые соединения, нацеленные на нуклеиновую кислоту плазменного прекалликреина (ПКК). В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновая кислота ПКК представляет собой последовательность, сформулированную в GENBANK, инвентаризационный номер нМ_000892,3 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 1), GENBANK, инвентаризационный номер DC412984.1 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 2), GENBANK, инвентаризационный номер CN265612.1 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 3), GENBANK, инвентаризационный номер AK297672.1 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 4), GENBANK, инвентаризационный номер DC413312.1 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 5), GENBANK, инвентаризационный номер AV688858.2 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 6), GENBANK, инвентаризационный номер CD652077.1 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 7), GENBANK, инвентаризационный номер ВС143911.1 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 8), GENBANK, инвентаризационный номер СВ162532.1 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 9), GENBANK, инвентаризационный номер NT_016354.19, укорочена от нуклеинового основания 111693001 до 111730000 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 10), GENBANK, инвентаризационный номер NM_008455.2 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 11), GENBANK, инвентаризационный номер ВВ598673.1 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 12), GENBANK, инвентаризационный номер NT_039460.7, укорочена от нуклеинового основания 6114001 до 6144000 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 13), GENBANK, инвентаризационный номер NM_012725.2 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 14), GENBANK, инвентаризационный номер NW_047473.1, укорочена от нуклеинового основания 10952001 до 10982000 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 15), GENBANK, инвентаризационный номер ХМ_002804276.1 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 17), и GENBANK, инвентаризационный номер NW_001118167.1, укорочена от нуклеинового основания 2358000 до 2391000 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 18).

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеиновых оснований, содержащую по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или по меньшей мере 20 последовательных нуклеиновых оснований любой из последовательностей нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 30-2226.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеиновых оснований, содержащую по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или по меньшей мере 20 последовательных нуклеиновых оснований последовательности нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 570.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеиновых оснований, содержащую по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или по меньшей мере 20 последовательных нуклеиновых оснований последовательности нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 705.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеиновых оснований, содержащую по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15 или по меньшей мере 16 последовательных нуклеиновых оснований последовательности нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 1666.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 20 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 570.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 20 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 705.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 16 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 1666.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеиновых оснований, содержащую по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15 или по меньшей мере 16 последовательных нуклеиновых оснований любой из последовательностей нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 62, 72, 103, 213, 312, 334-339, 344, 345, 346, 348, 349, 351, 369, 373, 381, 382, 383, 385, 387-391, 399, 411, 412, 414, 416, 444, 446-449, 452, 453, 454, 459, 460, 462-472, 473, 476, 477, 479, 480, 481, 484, 489-495, 497, 500, 504, 506, 522, 526, 535, 558, 559, 560, 564, 566, 568-571, 573, 576, 577, 578, 587, 595, 597-604, 607, 608, 610, 613, 615, 618, 619, 622, 623, 624, 633, 635, 636, 638, 639, 640, 642, 643, 645, 652, 655-658, 660, 661, 670, 674-679, 684, 685, 698, 704, 705, 707, 708, 713, 716, 717, 728, 734, 736, 767, 768, 776, 797, 798, 800, 802, 810, 815, 876, 880, 882, 883, 886, 891, 901-905, 908-911, 922, 923, 924, 931, 942, 950-957, 972, 974, 978, 979, 980, 987-991, 1005, 1017-1021, 1025, 1026, 1029, 1030, 1032, 1034, 1035, 1037, 1040, 1041, 1045, 1046, 1051, 1054, 1059, 1060, 1061, 1064, 1065, 1066, 1075, 1076, 1087, 1089, 1111, 1114, 1116, 1117, 1125, 1133, 1153, 1169, 1177, 1181, 1182, 1187, 1196, 1200, 1214, 1222, 1267, 1276, 1277, 1285, 1286, 1289, 1290, 1291, 1303, 1367, 1389, 1393, 1398-1401, 1406, 1407, 1408, 1411, 1419-1422, 1426, 1430, 1431, 1432, 1434-1437, 1439, 1440, 1443, 1444, 1451, 1452, 1471, 1516, 1527, 1535, 1537, 1538, 1539, 1540, 1541, 1563, 1564, 1567, 1568, 1616, 1617, 1623, 1629, 1664, 1665, 1666, 1679, 1687, 1734, 1804, 1876, 1886, 1915, 2008, 2018, 2100, 2101, 2115 и 2116. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид обеспечивает ингибирование мРНК ПКК по меньшей мере на 80%.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеиновых оснований, содержащую по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15 или по меньшей мере 16 последовательных нуклеиновых оснований любой из последовательностей нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 62, 72, 103, 213, 334-339, 344, 346, 348, 349, 351, 381, 382, 383, 385, 389, 390, 391, 446, 448, 452, 453, 454, 466-473, 476, 481, 484, 491, 492, 494, 495, 497, 504, 526, 558, 559, 566, 568-571, 576, 578, 587, 595, 597, 598, 600-604, 607, 610, 613, 618, 619, 624, 635, 638, 639, 645, 652, 656, 657, 658, 660, 674, 675, 676, 684, 698, 704, 705, 707, 713, 716, 768, 876, 880, 901-905, 908-911, 922, 923, 924, 931, 942, 951, 954-957, 972, 974, 978, 979, 987, 988, 990, 1005, 1019, 1020, 1021, 1025, 1032, 1037, 1040, 1041, 1045, 1054, 1059, 1060, 1061, 1064, 1065, 1066, 1075, 1111, 1116, 1117, 1125, 1133, 1153, 1169, 1177, 1200, 1222, 1267, 1285, 1290, 1291, 1303, 1367, 1398, 1399, 1401, 1406, 1408, 1411, 1419, 1420, 1421, 1426, 1430, 1431, 1432, 1434-1437, 1440, 1443, 1444, 1451, 1537-1540, 1563, 1616, 1679, 1687, 1804, 2008, 2101, 2115 и 2116. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид обеспечивает ингибирование мРНК ПКК по меньшей мере на 85%.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеиновых оснований, содержащую по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15 или по меньшей мере 16 последовательных нуклеиновых оснований любой из последовательностей нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 334, 346, 351, 382, 390, 391, 446, 448, 452, 453, 468, 469, 470, 471, 472, 476, 481, 491, 495, 504, 558, 566, 568, 570, 571, 578, 587, 597, 598, 600, 604, 613, 635, 638, 645, 656, 658, 660, 674, 675, 684, 704, 705, 880, 901-905, 909, 922, 931, 951, 954, 956, 990, 1005, 1020, 1032, 1037, 1040, 1041, 1045, 1054, 1075, 1111, 1125, 1133, 1153, 1200, 1267, 1291, 1303, 1398, 1399, 1401, 1406, 1420, 1426, 1430, 1431, 1434, 1435, 1436, 1440, 1443, 1451, 1537-1540, 2115 и 2116. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид обеспечивает ингибирование мРНК ПКК по меньшей мере на 90%.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеиновых оснований, содержащую по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15 или по меньшей мере 16 последовательных нуклеиновых оснований любой из последовательностей нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 334, 391, 448, 468, 469, 568, 570, 598, 635, 658, 674, 684, 705, 901, 903, 904, 922, 990, 1267, 1291, 1420, 1430, 1431, 1434, 1435, 1436, 1537, 1538 и 1540. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид обеспечивает ингибирование мРНК ПКК по меньшей мере на 95%.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеиновых оснований, содержащую по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15 или по меньшей мере 16 последовательных нуклеиновых оснований любой из последовательностей нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 334, 338, 346, 349, 382, 383, 390, 448, 452, 453, 454, 495, 526, 559, 570, 587, 598, 635, 660, 705, 901, 903, 904, 908, 923, 931, 955, 974, 988, 990, 1020, 1039, 1040, 1111, 1117, 1267, 1291, 1349, 1352, 1367, 1389, 1393, 1399, 1401, 1408, 1411, 1426, 1499, 1516, 1535, 1544, 1548, 1563, 1564, 1568, 1569, 1598, 1616, 1617, 1623, 1624, 1643, 1661, 1665, 1666, 1673, 1679, 1695, 1720, 1804, 1817, 1876, 1881, 1886, 1940, 1947, 2008, 2018, 2019, 2031, 2044, 2100, 2101, 2115 и 2116. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид обеспечивает IC50 (мкМ) 0,4 или менее.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеиновых оснований, содержащую по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15 или по меньшей мере 16 последовательных нуклеиновых оснований любой из последовательностей нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 334, 346, 349, 382, 453, 454, 495, 526, 570, 587, 598, 635, 660, 901, 903, 904, 931, 955, 990, 1020, 1111, 1267, 1349, 1352, 1367, 1389, 1399, 1408, 1411, 1426, 1516, 1535, 1544, 1548, 1563, 1564, 1568, 1569, 1598, 1616, 1617, 1623, 1643, 1661, 1665, 1666, 1673, 1695, 1804, 1876, 1881, 2019, 2044, 2100, 2101, 2115 и 2116. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид обеспечивает IC50 (мкМ) 0,3 или менее.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеиновых оснований, содержащую по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15 или по меньшей мере 16 последовательных нуклеиновых оснований любой из последовательностей нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 334, 346, 382, 453, 495, 526, 570, 587, 598, 635, 901, 904, 931, 955, 1020, 1111, 1349, 1352, 1389, 1426, 1516, 1535, 1544, 1548, 1564, 1569, 1598, 1616, 1617, 1665, 1666, 1804, 1876, 1881, 2019, 2044, 2101 и 2116. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид обеспечивает IC50 (мкМ) 0,2 или менее.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов и имеющий последовательность нуклеиновых оснований, содержащую по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15 или по меньшей мере 16 последовательных нуклеиновых оснований любой из последовательностей нуклеиновых оснований SEQ ID NO: 334, 495, 587, 598, 635, 1349, 1352, 1389, 1516, 1544, 1548, 1569, 1598, 1617, 1665, 1666, 1804, 1881 и 2019. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид обеспечивает IC50 менее чем 0,2.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов и содержащий последовательность нуклеиновых оснований, содержащую по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или по меньшей мере 20 последовательных нуклеиновых оснований, комплементарный к фрагменту равной длины из нуклеиновых оснований 27427-27466 SEQ ID NO: 10.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов и содержащий последовательность нуклеиновых оснований, содержащую по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или по меньшей мере 20 последовательных нуклеиновых оснований, комплементарный к фрагменту равной длины из нуклеиновых оснований 33183-33242 SEQ ID NO: 10.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов и содержащий последовательность нуклеиновых оснований, содержащую по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или по меньшей мере 20 последовательных нуклеиновых оснований, комплементарный к фрагменту равной длины из нуклеиновых оснований 30570-30610 SEQ ID NO: 10.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов и содержащий последовательность нуклеиновых оснований, содержащую по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или по меньшей мере 20 последовательных нуклеиновых оснований, комплементарный к фрагменту равной длины из нуклеиновых оснований 27427-27520 SEQ ID NO: 10.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов и содержащий последовательность нуклеиновых оснований, содержащую по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или по меньшей мере 20 последовательных нуклеиновых оснований, комплементарный к фрагменту равной длины из нуклеиновых оснований 33085-33247 SEQ ID NO: 10.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов и содержащий последовательность нуклеиновых оснований, содержащую по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или по меньшей мере 20 последовательных нуклеиновых оснований, комплементарный к фрагменту равной длины из нуклеиновых оснований 30475-30639 SEQ ID NO: 10.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов и содержащий последовательность нуклеиновых оснований, содержащую по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или по меньшей мере 20 последовательных нуклеиновых оснований, комплементарный к фрагменту равной длины из нуклеиновых оснований 27362-27524 SEQ ID NO: 10.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов и содержащий последовательность нуклеиновых оснований, содержащую по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или по меньшей мере 20 последовательных нуклеиновых оснований, комплементарный к фрагменту равной длины из нуклеиновых оснований 33101-33240 SEQ ID NO: 10.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов и содержащий последовательность нуклеиновых оснований, содержащую по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или по меньшей мере 20 последовательных нуклеиновых оснований, комплементарный к фрагменту равной длины из нуклеиновых оснований 30463-30638 SEQ ID NO: 10.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, содержащие модифицированный олигонуклеотид, состоящий из 12-30 связанных нуклеозидов и содержащий последовательность нуклеиновых оснований, содержащую по меньшей мере 8, по меньшей мере 9, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 13, по меньшей мере 14, по меньшей мере 15, по меньшей мере 16, по меньшей мере 17, по меньшей мере 18, по меньшей мере 19 или по меньшей мере 20 последовательных нуклеиновых оснований, комплементарный к фрагменту равной длины экзона 9, экзона 12 или экзона 14 нуклеиновой кислоты ПКК.

В некоторых вариантах реализации изобретения последовательность нуклеиновых оснований модифицированного олигонуклеотида по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 81%, по меньшей мере на 82%, по меньшей мере на 83%, по меньшей мере на 84%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 86%, по меньшей мере на 87%, по меньшей мере на 88%, по меньшей мере на 89%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% комплементарна SEQ ID NO: 10.

В некоторых вариантах реализации изобретения соединение состоит из одноцепочечного модифицированного олигонуклеотида.

В некоторых вариантах реализации изобретения по меньшей мере одна межнуклеозидная связь в модифицированном олигонуклеотиде представляет собой модифицированную межнуклеозидную связь.

В некоторых вариантах реализации изобретения по меньшей мере одна модифицированная межнуклеозидная связь в модифицированном олигонуклеотиде представляет собой фосфоротиоатную межнуклеозидную связь.

В некоторых вариантах реализации изобретения каждая межнуклеозидная связь в модифицированном олигонуклеотиде представляет собой фосфоротиоатную связь.

В некоторых вариантах реализации изобретения по меньшей мере один нуклеозид в модифицированном олигонуклеотиде содержит модифицированное нуклеиновое основание.

В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированное нуклеиновое основание представляет собой 5-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид содержит по меньшей мере один модифицированный сахар.

В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный сахар представляет собой 2' модифицированный сахар, BNA или ТНР.

В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный сахар представляет собой любой из 2'-O-метоксиэтила, 2'-O-метила, ограниченного этила, LNA или 3'-фтор-HNA.

В некоторых вариантах реализации изобретения соединение содержит по меньшей мере один нуклеозид 2'-O-метоксиэтил, нуклеозид 2'-O-метил, ограниченный этилнуклеозид, нуклеозид LNA или нуклеозид 3'-фтор-HNA.

В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид содержит:

гэп-сегмент, состоящий из 10 связанных дезоксинуклеозидов;

5' сегмент крыла, состоящий из 5 связанных нуклеозидов; и

3' сегмент крыла, состоящий из 5 связанных нуклеозидов;

причем гэп-сегмент размещен между 5' сегментом крыла и 3' сегментом крыла, и, при этом, каждый нуклеозид каждого сегмента крыла содержит модифицированный сахар.

В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид состоит из 20 связанных нуклеозидов.

В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид состоит из 19 связанных нуклеозидов.

В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный олигонуклеотид состоит из 18 связанных нуклеозидов.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, состоящие из модифицированного олигонуклеотида согласно следующей формуле: Tes Ges mCes Aes Aes Gds Tds mCds Tds mCds Tds Tds Gds Gds mCds Aes Aes Aes mCes Ae; где

A = аденин,

mC = 5'-метилцитозин

G = гуанин,

Т = тимин,

e = 2'-O-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид,

d = 2'-дезоксинуклеозид, и

s = межнуклеозидная фосфоротиоатная связь.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, состоящие из модифицированного олигонуклеотида согласно следующей формуле: mCes mCes mCes mCes mCes Tds Tds mCds Tds Tds Tds Ads Tds Ads Gds mCes mCes Aes Ges mCe; где

A = аденин,

mC = 5'-метилцитозин;

G = гуанин,

Т = тимин,

e = 2'-O-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид,

d = 2'-дезоксинуклеозид, и

s = межнуклеозидная фосфоротиоатная связь.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения, состоящие из модифицированного олигонуклеотида согласно следующей формуле: mCes Ges Aks Tds Ads Tds mCds Ads Tds Gds Ads Tds Tds mCks mCks mCe; где

A = аденин,

mC = 5'-метилцитозин;

G = гуанин,

Т = тимин,

e = 2'-O-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид,

k = модифицированный cEt нуклеозид,

d = 2'-дезоксинуклеозид, и

s = межнуклеозидная фосфоротиоатная связь.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения согласно следующей формуле:

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения согласно следующей формуле:

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются соединения согласно следующей формуле:

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются композиции, содержащие соединение по любому из предшествующих пунктов или его соль и по меньшей мере один из фармацевтически приемлемого носителя или разбавителя.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются способы, включающие введение животному соединения или композиции по любому из предшествующих пунктов.

В некоторых вариантах реализации изобретения животное является человеком.

В некоторых вариантах реализации изобретения введение соединения предупреждает, лечит или облегчает связанное с ПКК заболевание, расстройство или состояние.

В некоторых вариантах реализации изобретения связанное с ПКК заболевание, расстройство или состояние представляет собой наследственный ангионевротический отек (НАО), отек, ангионевротический отек, припухлость, ангионевротический отек век, отек глаза, отек желтого пятна, отек мозга, тромбоз, эмболию, тромбоэмболию, тромбоз глубоких вен, легочную эмболию, инфаркт миокарда, инсульт или инфаркт.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагается применение соединения или композиции по любому из предыдущих пунктов для производства лекарственного средства для лечения воспалительного заболевания или тромбоэмболического заболевания.

Антисмысловые соединения

Олигомерные соединения включают, но не ограничиваясь этим, олигонуклеотиды, олигонуклеозиды, аналоги олигонуклеотидов, миметики олигонуклеотидов, антисмысловые соединения, антисмысловые олигонуклеотиды и миРНК. Олигомерное соединение может быть "антисмысловым" по отношению к нуклеиновой кислоте-мишени, и это означает, что оно способно гибридизоваться с нуклеиновой кислотой-мишенью посредством водородной связи.

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловое соединение содержит последовательность нуклеиновых оснований, которая, при написании в направлении от 5' к 3', содержит обратный комплемент сегменту-мишени нуклеиновой кислоты-мишени, на которую нацелено соединение. В некоторых из таких вариантов реализации изобретения, антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность нуклеиновых оснований, которая, при написании в направлении от 5' к 3', содержит обратный комплемент сегменту-мишени нуклеиновой кислоты-мишени, на которую нацелен олигонуклеотид.

В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 12-30 субъединиц. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 12-25 субъединиц. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 12-22 субъединицы. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 14-20 субъединиц. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 15-25 субъединиц. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 18-22 субъединицы. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 19-21 субъединицу. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения составляет 8-80, 12-50, 13-30, 13-50, 14-30, 14-50, 15-30, 15-50, 16-30, 16-50, 17-30, 17-50, 18-30, 18-50, 19-30, 19-50 или 20-30 связанных субъединиц.

В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 12 субъединиц. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 13 субъединиц. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 14 субъединиц. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 15 субъединиц. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 16 субъединиц. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 17 субъединиц. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 18 субъединиц. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 19 субъединиц. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 20 субъединиц. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 21 субъединицу. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 22 субъединицы. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 23 субъединицы. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 24 субъединицы. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 25 субъединиц. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 26 субъединиц. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 27 субъединиц. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 28 субъединиц. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 29 субъединиц. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 30 субъединиц. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, составляет 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79 или 80 связанных субъединиц или находится в диапазоне, определенном любыми двумя из упомянутых выше значений. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловое соединение представляет собой антисмысловой олигонуклеотид, и связанные субъединицы представляют собой нуклеозиды.

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на нуклеиновую кислоту ПКК, могут быть сокращенными или укороченными. Например, одна субъединица может быть удалена на 5' конце (5' укорачивание) или, в качестве альтернативы, на 3' конце (3' укорачивание). В сокращенном или укороченном антисмысловом соединении, нацеленном на нуклеиновую кислоту ПКК, две субъединицы могут быть удалены на 5' конце или, в качестве альтернативы, две субъединицы могут быть удалены на 3' конце антисмыслового соединения. В качестве альтернативы, удаленные нуклеозиды могут быть распределены в антисмысловом соединении, например, антисмысловое соединение, в котором один нуклеозид удален на 5' конце, и один нуклеозид удален на 3' конце.

Если одна дополнительная субъединица присутствует в удлиненном антисмысловом соединении, дополнительная субъединица может быть размещена на 5' или 3' конце антисмыслового соединения. Если присутствуют две или более дополнительных субъединиц, то дополнительные субъединицы могут быть смежными друг по отношению к другу, например, в антисмысловом соединении, содержащем две субъединицы, добавленные на 5' конце (5' добавление) или, в качестве альтернативы, на 3' конце (3' добавление) антисмыслового соединения. В качестве альтернативы, дополнительные субъединицы могут быть распределены в антисмысловом соединении, например, в антисмысловом соединении, содержащем одну субъединицу, добавленную на 5' конце и одну субъединицу, добавленную на 3' конце.

Можно увеличить или уменьшить длину антисмыслового соединения, такого как антисмысловой олигонуклеотид, и/или ввести рассогласованные основания без исчезновения активности. Например, в Woolfet al. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 7305-7309, 1992), серия антисмысловых олигонуклеотидов длиной 13-25 нуклеиновых оснований была протестирована на предмет их способности индуцировать расщепление РНК-мишени в модели инъекции ооцита. Антисмысловые олигонуклеотиды длиной 25 нуклеиновых оснований с 8 или 11 рассогласованными основаниями около концов антисмысловых олигонуклеотидов были способны направлять специфическое расщепление мРНК-мишени, хотя и в меньшей степени, чем антисмысловые олигонуклеотиды, которые не содержали рассогласованных оснований. Подобным образом, специфическое расщепление мишени достигалось с применением антисмысловых олигонуклеотидов длиной 13 нуклеиновых оснований, в том числе, содержащих 1 или 3 рассогласованных основания.

Gautschi et al (J. Natl. Cancer Inst. 93: 463-471, March 2001) продемонстрировали способность олигонуклеотида, обладающего 100% комплементарностью мРНК bcl-2 и содержащего 3 рассогласованных основания по отношению к мРНК bcl-xL, уменьшать экспрессию как bcl-2, так и bcl-xL in vitro и in vivo. Кроме того, данный олигонуклеотид продемонстрировал высокую противоопухолевую активность in vivo.

Maher and Dolnick (Nuc. Acid. Res. 16: 3341-3358, 1988) тестировали серию 14 тандемных антисмысловых олигонуклеотидов длиной 14 нуклеиновых оснований и антисмысловых олигонуклеотидов длиной 28 и 42 нуклеиновых основания, содержащих последовательность двух или трех из тандемных антисмысловых олигонуклеотидов, соответственно, на предмет их способности останавливать трансляцию ДГФР человека в анализе на ретикулоцитах кролика. Каждый из трех антисмысловых нуклеотидов длиной 14 нуклеиновых оснований в отдельности мог ингибировать трансляцию, хотя и на более низком уровне, чем антисмысловые олигонуклеотиды длиной 28 или 42 нуклеиновых оснований.

Мотивы антисмысловых соединений

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения, нацеленные на нуклеиновую кислоту ПКК, содержат химически модифицированные субъединицы, организованные в паттерны или мотивы, для придания антисмысловым соединениям таких свойств, как например усиленная ингибирующая активность, повышенная аффинность связывания с нуклеиновой кислотой-мишенью или сопротивление разложению нуклеазами in vivo.

Химерные антисмысловые соединения обычно содержат по меньшей мере один участок, модифицированный таким образом, чтобы обеспечить повышение сопротивления разложению нуклеазой, увеличение захвата клеткой, повышение аффинности связывания с нуклеиновой кислотой-мишенью и/или повышение ингибирующей активности. Второй участок антисмыслового химерного соединения необязательно может служить субстратом для клеточной эндонуклеазы РНКазы Н, которая отщепляет цепь РНК от дуплекса РНК:ДНК.

Антисмысловые соединения, содержащие мотив гэпмера, считаются антисмысловыми химерными соединениями. В гэпмере внутренний участок, содержащий множество нуклеотидов, который поддерживает расщепление РНКазой Н, расположен между внешними участками, содержащими множество нуклеотидов, которые с химической точки зрения отличаются от нуклеозидов внутреннего участка. В случае антисмыслового олигонуклеотида, содержащего мотив гэпмера, гэп-сегмент в общем служит субстратом для расщепления эндонуклеазой, тогда как сегменты крыла содержат модифицированные нуклеозиды. В некоторых вариантах реализации изобретения участки гэпмера дифференцированы видами сахарных фрагментов, содержащих каждый из различных участков. Виды сахарных фрагментов, которые применяются для дифференциации участков гэпмера, в некоторых вариантах реализации изобретения могут включать β-D-рибонуклеозиды, β-D-дезоксирибонуклеозиды, 2'-модифицированные нуклеозиды (такие 2'-модифицированные нуклеозиды, среди прочего, могут включать 2'-МОЕ и 2'-O-СН3) и модифицированные бициклическими сахарами нуклеозиды (такие модифицированные бициклическими сахарами нуклеозиды могут включать содержащие мостик 4'-(СН2)n-O-2', где n=1 или n=2 и 4'-СН2-O-СН2-2'). В некоторых вариантах реализации изобретения крылья могут содержать несколько модифицированных сахарных фрагментов, в том числе, например, 2'-МОЕ. В некоторых вариантах реализации изобретения крылья могут содержать несколько модифицированных и немодифицированных сахарных фрагментов. В некоторых вариантах реализации изобретения крылья могут содержать различные комбинации нуклеозидов 2'-МОЕ и 2'-дезоксинуклеозидов.

Каждый из различных участков может содержать общепринятые сахарные фрагменты, вариант или чередующиеся сахарные фрагменты. Мотив крыло-гэп-крыло часто описывается как "X-Y-Z", где "X" представляет длину 5' крыла, "Y" представляет длину гэпа, и "Z" представляет длину 3' крыла. "X" и "Z" могут включать одинаковые, варианты или чередующиеся сахарные фрагменты. В некоторых вариантах реализации изобретения "X" и "Y" могут содержать один или более 2'-дезоксинуклеозидов. "Y" может содержать 2'-дезоксинуклеозиды. Как используется в данном описании, гэпмер, описанный как "X-Y-Z", содержит такую конфигурацию, что гэп располагается непосредственно смежно к каждому из 5' крыла и 3' крыла. Таким образом, промежуточные нуклеотиды между 5' крылом и гэпом или гэпом и 3' крылом отсутствуют. Любое из антисмысловых соединений, описанных в данном описании, может содержать мотив гэпмера. В некоторых вариантах реализации изобретения "X" и "Z" одинаковые; в других вариантах они различны.

В некоторых вариантах реализации изобретения гэпмеры, предложенные в данном описании, включают, например, 20-меры, содержащие мотив 5-10-5.

Нуклеиновые кислоты-мишени, участки-мишени и нуклеотидные последовательности-мишени

Нуклеотидные последовательности, которые кодируют прекалликреин (ПКК) плазмы человека, включают, без ограничения, следующие: GENBANK, инвентаризационный номер NM_000892.3 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 1), GENBANK, инвентаризационный номер DC412984.1 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 2), GENBANK, инвентаризационный номер CN265612.1 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 3), GENBANK, инвентаризационный номер AK297672.1 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 4), GENBANK, инвентаризационный номер DC413312.1 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 5), GENBANK, инвентаризационный номер AV688858.2 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 6), GENBANK, инвентаризационный номер CD652077.1 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 7), GENBANK, инвентаризационный номер ВС143911.1 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 8), GENBANK, инвентаризационный номер СВ162532.1 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 9), GENBANK, инвентаризационный номер NT_016354.19, укорочена от нуклеинового основания 111693001 до 111730000 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 10), GENBANK, инвентаризационный номер NM_008455.2 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 11), GENBANK, инвентаризационный номер ВВ598673.1 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 12), GENBANK, инвентаризационный номер NT_039460.7, укорочена от нуклеинового основания 6114001 до 6144000 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 13), GENBANK, инвентаризационный номер NM_012725.2 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 14), GENBANK, инвентаризационный номер NW_047473.1, укорочена от нуклеинового основания 10952001 до 10982000 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 15), GENBANK, инвентаризационный номер ХМ_002804276.1 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 17), и GENBANK, инвентаризационный номер NW_001118167.1, укорочена от нуклеинового основания 2358000 до 2391000 (включена в данное описание как SEQ ID NO: 18).

Необходимо понимать, что последовательность сформулированная в каждой SEQ ID NO в Примерах, содержащихся в данном описании, является независимой от любой модификации сахарного фрагмента, межнуклеозидной связи или нуклеиновых оснований. Как таковые, антисмысловые соединения, определенные SEQ ID NO, могут независимо содержать одну или более модификаций сахарного фрагмента, межнуклеозидной связи или нуклеиновых оснований. Антисмысловые соединения, описанные номером Isis (Isis №), указывают на комбинацию последовательности нуклеиновых оснований и мотива.

В некоторых вариантах реализации изобретения участок-мишень представляет собой структурно определенный участок нуклеиновой кислоты-мишени. Например, участок-мишень может содержать 3' UTR, 5' UTR, экзон, интрон, соединение экзон/интрон, кодирующий участок, участок инициации трансляции, участок терминации трансляции или другой определенный участок нуклеиновой кислоты. Структурно определенные участки для ПКК могут быть получены по номеру доступа из баз данных последовательностей, таких как NCBI, и такая информация включена в данное описание посредством ссылки. В некоторых вариантах реализации изобретения участок-мишень может содержать последовательность от 5' сайта-мишени одного сегмента-мишени в пределах участка-мишени до 3' сайта-мишени другого сегмента-мишени в пределах того же участка-мишени.

Нацеливание включает определение по меньшей мере одного сегмента-мишени, с которым антисмысловое соединение гибридизуется таким образом, что осуществляется желательное воздействие. В некоторых вариантах реализации изобретения желательное воздействие представляет собой снижение уровней мРНК нуклеиновой кислоты-мишени. В некоторых вариантах реализации изобретения желательное воздействие представляет собой снижение уровней белка, кодируемого нуклеиновой кислотой-мишенью или уменьшение фенотипического изменения, связанного с нуклеиновой кислотой-мишенью.

Участок-мишень может содержать один или несколько сегментов-мишеней. Множественные сегменты-мишени в пределах участка-мишени могут частично перекрываться. В качестве альтернативы, они могут быть не перекрывающимися. В некоторых вариантах реализации изобретения сегменты-мишени в пределах участка-мишени отделены не более чем около 300 нуклеотидами. В некоторых вариантах реализации изобретения, сегменты-мишени в пределах участка-мишени отделены количеством нуклеотидов, которое равно, составляет около, составляет не более чем, составляет не более чем около 250, 200, 150, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 или 10 нуклеотидов на нуклеиновой кислоте-мишени или представляет собой диапазон, определенный любыми двумя из предшествующих значений. В некоторых вариантах реализации изобретения сегменты-мишени в пределах участка-мишени отделяются не более чем или не более чем около 5 нуклеотидами на нуклеиновой кислоте-мишени. В некоторых вариантах реализации изобретения сегменты-мишени являются смежными. Включены участки-мишени, определенные диапазоном, который содержит стартовую нуклеиновую кислоту, соответствующую любому из 5' сайтов-мишеней или 3' сайтов-мишеней, перечисленных в данном описании.

Подходящие сегменты мишени можно найти в пределах 5' UTR, кодирующего участка, 3' UTR, интрона, экзона или соединения экзон/интрон. Кроме того, сегменты-мишени, содержащие старт-кодон или стоп-кодон, являются подходящими сегментами-мишенями. Подходящий сегмент-мишень может специфично исключать конкретный структурно определенный участок, такой как старт-кодон или стоп-кодон.

Определение подходящих сегментов-мишеней может включать сравнение последовательности нуклеиновой кислоты-мишени с другими последовательностями генома. Например, алгоритм BLAST может быть применен для идентификации участков сходства между различными нуклеиновыми кислотами. Данное сравнение может предупредить отбор последовательностей антисмысловых соединений, которые могут гибридизоваться неспецифическим образом с другими последовательностями, кроме выбранной нуклеиновой кислоты-мишени (т.е., ложными мишенями или нецелевыми последовательностями).

Может присутствовать вариация активности (например, по данным процентного снижения уровней нуклеиновой кислоты-мишени) антисмысловых соединений в пределах активного участка-мишени. В некоторых вариантах реализации изобретения снижение уровней мРНК ПКК является индикатором ингибирования экспрессии ПКК. Снижение уровней белка ПКК также указывает на подавление экспрессии мРНК-мишени. Дополнительно, фенотипические изменения указывают на подавление экспрессии ПКК. Например, уменьшение выраженности или предупреждение воспаления может быть индикатором подавления экспрессии ПКК. В другом примере, уменьшение выраженности или предупреждение отека/опухания может быть индикатором подавления экспрессии ПКК. В другом примере, уменьшение или предупреждение сосудистой проницаемости может быть индикатором подавления экспрессии ПКК. В другом примере, уменьшение или предупреждение сосудистого вытока может быть индикатором подавления экспрессии ПКК. В некоторых вариантах реализации изобретения сосудистую проницаемость измеряют путем количественного определения красителя, такого как Evans Blue.

Гибридизация

В некоторых вариантах, гибридизация происходит между антисмысловым соединением, раскрытым в данном описании, и нуклеиновой кислотой-мишенью. Наиболее распространенный механизм гибридизации включает образование водородной связи (например, уотсон-криковское, хугстеновское или модифицированное хугстеновское образование водородной связи) между комплементарными нуклеиновыми основаниями молекул нуклеиновых кислот.

Гибридизация может происходить в различных условиях. Строгие условия зависят от последовательности и определяются природой и составом молекул нуклеиновых кислот, которые гибридизуются.

Способы определения того, будет ли последовательность специфично гибридизоваться с нуклеиновой кислотой-мишенью, хорошо известны из уровня техники. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения, предложенные в данном описании, способны специфично гибридизоваться с нуклеиновой кислотой-мишенью.

Комплементарность

Антисмысловое соединение и нуклеиновая кислота-мишень комплементарны друг другу, если достаточное количество нуклеиновых оснований антисмыслового соединения может образовывать водородную связь с соответствующими нуклеиновыми основаниями нуклеиновой кислоты-мишени, таким образом, что будет достигаться желательный эффект (например, антисмысловое ингибирование нуклеиновой кислоты-мишени, такой как нуклеиновая кислота ПКК).

Некомплементарные нуклеиновые основания между антисмысловым соединением и нуклеиновой кислотой ПКК могут быть допустимыми при условии, что антисмысловое соединение сохраняет способность специфично гибридизоваться с нуклеиновой кислотой-мишенью. Кроме того, антисмысловое соединение может гибридизоваться с одним или несколькими сегментами нуклеиновой кислоты ПКК таким образом, что промежуточные или смежные сегменты не участвуют в гибридизации (например, петлевая структура, рассогласование или структура шпильки).

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения, предложенные в данном описании или указанная их часть, являются или по меньшей мере являются на 70%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% комплементарными нуклеиновой кислоте ПКК, участку-мишени, сегменту-мишени или указанной их части. Процент комплементарности антисмыслового соединения нуклеиновой кислоте-мишени может быть определен с применением шаблонных способов.

Например, антисмысловое соединение, в котором 18 из 20 нуклеиновых оснований антисмыслового соединения комплементарны участку-мишени, и таким образом могут специфично гибридизоваться, представляет 90-процентную комплементарность. В данном примере, остальные некомплементарные нуклеиновые основания могут быть сгруппированы или разбросаны среди комплементарных нуклеиновых оснований, и не обязательно должны быть смежными друг относительно друга или комплементарных нуклеиновых оснований. Таким образом, антисмысловое соединение, длина которого составляет 18 нуклеиновых оснований, содержащее четыре некомплементарных нуклеиновых основания, фланкированных двумя участками полной комплементарности с нуклеиновой кислотой-мишенью, обладало бы общей комплементарностью с нуклеиновой кислотой-мишенью 77,8%, и таким образом, находилось бы в пределах объема настоящего изобретения. Процент комплементарности антисмыслового соединения участку-мишени нуклеиновой кислоты может быть определен шаблонным применением программ BLAST (основные инструменты поиска для локального выравнивания) и программ PowerBLAST, известных из уровня техники (Altschul et al., J. Mol. Biol., 1990, 215, 403 410; Zhang и Madden, Genome Res., 1997, 7, 649 656). Процент гомологии, идентичность или комплементарность последовательностей, может быть определен, например, с помощью программы Gap (Wisconsin Sequence Analysis Package, Version 8 for Unix, Genetics Computer Группа, University Research Park, Мэдисон, Висконсин), с применением значений, которые используются по умолчанию в алгоритме Smith и Waterman (Adv.. Math., 1981, 2, 482 489).

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения, предложенные в данном описании, или указанные их части полностью комплементарны (т.е., на 100% комплементарны) нуклеиновой кислоте-мишени или указанной ее части. Например, антисмысловое соединение может быть полностью комплементарным нуклеиновой кислоте прекалликреина плазмы или ее участку-мишени или сегменту-мишени или последовательности-мишени. В данном описании "полностью комплементарный" означает, что каждое из нуклеиновых оснований антисмыслового соединения способно точно спариваться с соответствующими нуклеиновыми основаниями нуклеиновой кислоты-мишени. Например, антисмысловое соединение размером 20 нуклеиновых оснований является полностью комплементарным последовательности-мишени размером 400 нуклеиновых оснований до тех пор, пока в нуклеиновой кислоте-мишени присутствует соответствующая часть размером 20 нуклеиновых оснований, которая полностью комплементарна антисмысловому соединению. Кроме того, полностью комплементарный может применяться для обозначения указанной части первой и/или второй нуклеиновой кислоты. Например, часть размером 20 нуклеиновых оснований антисмыслового соединения размером 30 нуклеиновых оснований может быть "полностью комплементарна" последовательности-мишени размером 400 нуклеиновых оснований. Часть размером 20 нуклеиновых оснований олигонуклеотида размером 30 нуклеиновых оснований полностью комплементарна последовательности-мишени, если последовательность-мишень содержит соответствующую часть размером 20 нуклеиновых оснований, причем каждое нуклеиновое основание комплементарно части антисмыслового соединения размером 20 нуклеиновых оснований. В то же время, целое антисмысловое соединение размером 30 нуклеиновых оснований может быть или не быть полностью комплементарным последовательности-мишени, в зависимости от того, будут ли остальные 10 нуклеиновых оснований антисмыслового соединения также комплементарными последовательности-мишени.

Некомплементарное нуклеиновое основание может находиться на 5' конце или 3' конце антисмыслового соединения. В качестве альтернативы, некомплементарное нуклеиновое основание или нуклеиновые основания могут находиться во внутреннем положении антисмыслового соединения. Если присутствуют два или несколько некомплементарных нуклеиновых оснований, они могут быть смежными (т.е. связанными) или не смежными. В одном варианте реализации изобретения некомплементарное нуклеиновое основание расположено в сегменте крыла гэпмерного антисмыслового олигонуклеотида.

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения, длина которых равна или составляет до 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нуклеиновых оснований, содержат не более 4, не более 3, не более 2 или не более 1 некомплементарного нуклеинового основания относительно нуклеиновой кислоты-мишени или указанной ее части.

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения, длина которых равна или составляет до 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 или 30 нуклеиновых оснований, содержат не более 6, не более 5, не более 4, не более 3, не более 2 или не более 1 некомплементарного нуклеинового основания относительно нуклеиновой кислоты-мишени или указанной ее части.

Предложенные антисмысловые соединения дополнительно включают комплементарные части нуклеиновой кислоты-мишени. В данном описании "часть" обозначает определенное количество смежных (т.е., связанных) нуклеиновых оснований в пределах участка или сегмента нуклеиновой кислоты-мишени. Кроме того, "часть" может обозначать определенное число смежных нуклеиновых оснований антисмыслового соединения. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения комплементарны по меньшей мере части сегмента-мишени размером 8 нуклеиновых оснований. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения комплементарны по меньшей мере части сегмента-мишени размером 9 нуклеиновых оснований. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения комплементарны по меньшей мере части сегмента-мишени размером 10 нуклеиновых оснований. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения комплементарны по меньшей мере части сегмента-мишени размером 11 нуклеиновых оснований. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения комплементарны по меньшей мере части сегмента-мишени размером 12 нуклеиновых оснований. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения комплементарны по меньшей мере части сегмента-мишени размером 13 нуклеиновых оснований. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения комплементарны по меньшей мере части сегмента-мишени размером 14 нуклеиновых оснований. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения комплементарны по меньшей мере части сегмента-мишени размером 15 нуклеиновых оснований. Дополнительно включены антисмысловые соединения, комплементарные по меньшей мере по меньшей мере части сегмента-мишени размером 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 или более нуклеиновых оснований или в диапазоне, определенном любыми двумя из этих значений.

Идентичность

Дополнительно, антисмысловые соединения, предложенные в данном описании, могут обладать определенным процентом идентичности конкретной нуклеотидной последовательности, SEQ ID NO или соединения, представленного конкретным номером Isis или его частью. В данном описании антисмысловое соединение идентично последовательности, раскрытой в данном описании, если оно обладает такой же способностью нуклеиновых оснований к спариванию. Например, РНК, которая содержит урацил вместо тимидина в раскрытой последовательности ДНК, считалась бы идентичной последовательности ДНК, поскольку и урацил, и тимидин спариваются с аденином. Также включены укороченные и удлиненные версии антисмысловых соединений, описанных в данном описании, а также соединения, содержащие неидентичные основания относительно антисмысловых соединений, предложенных в данном описании. Неидентичные основания могут быть смежными по отношению друг к другу или разбросанными по антисмысловому соединению. Процент идентичности антисмыслового соединения вычисляют в соответствии с количеством оснований с идентичным спариванием оснований относительно последовательности, с которой его сравнивают.

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения или их части являются по меньшей мере на 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или 100% идентичными одному или нескольким антисмысловым соединениям или SEQ ID NO или их частям, раскрытым в данном описании.

В некоторых вариантах реализации изобретения часть антисмыслового соединения сравнивают с частью нуклеиновой кислоты-мишени равной длины. В некоторых вариантах реализации изобретения часть размером 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 нуклеиновых оснований сравнивают с частью нуклеиновой кислоты-мишени равной длины.

В некоторых вариантах реализации изобретения часть антисмыслового олигонуклеотида сравнивают с частью нуклеиновой кислоты-мишени равной длины. В некоторых вариантах реализации изобретения часть размером 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 нуклеиновых оснований сравнивают с частью нуклеиновой кислоты-мишени равной длины.

Модификации

Нуклеозид представляет собой комбинацию основание-сахар. Нуклеиновое основание в составе нуклеозида (также известное как основание) в норме представляет собой фрагмент гетероциклического основания. Нуклеотиды представляют собой нуклеозиды, которые содержат фосфатную группу, ковалентно соединенную с сахарной частью нуклеозида. Для тех нуклеозидов, которые содержат пентофуранозильный сахар, фосфатная группа может быть соединена с 2', 3' или 5' гидроксильным фрагментом сахара. Олигонуклеотиды образуются посредством ковалентной связи между смежными нуклеозидами, с образованием линейного полимерного олигонуклеотида. В пределах структуры олигонуклеотида, фосфатные группы обычно называют образующими межнуклеозидные связи олигонуклеотида.

Модификации антисмысловых соединений включают замены или модификации межнуклеозидных связей, сахарных фрагментов или нуклеиновых оснований. Модифицированные антисмысловые соединения часто предпочтительны по сравнению с природными формами из-за желательных свойств, таких как, например, увеличение захвата клеткой, повышенная аффинность к нуклеиновой кислоте-мишени, повышенная стабильность в присутствии нуклеаз или повышенная ингибирующая активность.

Кроме того, химически модифицированные нуклеозиды могут применяться для увеличения аффинности связывания сокращенного или укороченного антисмыслового олигонуклеотида с нуклеиновой кислотой-мишенью. Таким образом, сравнимые результаты могут часто быть получены с применением более коротких антисмысловых соединений, содержащих такие химически модифицированные нуклеозиды.

Модифицированные межнуклеозидные связи

Встречающаяся в природе межнуклеозидная связь в РНК и ДНК представляет собой 3'-5' фосфодиэфирную связь. Часто выбор делается в пользу антисмысловых соединений, содержащих одну или более модифицированных, т.е., не встречающихся в природе межнуклеозидных связей, по сравнению с антисмысловыми соединениями, содержащими природные межнуклеозидные связи, из-за желательных свойств, например, таких как увеличение захвата клеткой, повышенная аффинность к нуклеиновым кислотам-мишеням и повышенная устойчивость в присутствии нуклеаз.

Олигонуклеотиды с модифицированными межнуклеозидными связями содержат межнуклеозидные связи, в которых атом фосфора сохраняется, а также межнуклеозидные связи, которые не содержат атома фосфора. Характерные фосфорсодержащие межнуклеозидные связи, включают, но не ограничиваясь этим, фосфодиэфиры, фосфотриэфиры, метилфосфонаты, фосформамидат и фосфоротиоаты. Способы получения фосфорсодержащих и не фосфорсодержащих соединений хорошо известны.

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения, нацеленные на нуклеиновую кислоту прекалликреина плазмы, включают одну или более модифицированных межнуклеозидных связей. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированные межнуклеозидные связи представляют собой фосфоротиоатные связи. В некоторых вариантах реализации изобретения каждая межнуклеозидная связь антисмыслового соединения представляет собой фосфоротиоатную межнуклеозидную связь.

Модифицированные сахарные фрагменты

Антисмысловые соединения необязательно могут содержать один или более нуклеозидов с модифицированной сахарной группой. Такие нуклеозиды с модифицированным сахаром могут придавать антисмысловым соединениям повышенную устойчивость к действию нуклеаз, повышенную аффиность связывания или некоторое другое предпочтительное биологическое свойство. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеозиды включают химически модифицированные остатки рибофуранозного кольца. Примеры химически модифицированных рибофуранозных колец включают, но не ограничиваясь этим, введение групп заместителей (в том числе, групп заместителей 5' и 2', соединение мостиком негеминальных атомов кольца с образованием бициклических нуклеиновых кислот (BNA), замену кислородного атома в рибозильном кольце на S, N(R) или C(R1)(R2) (каждый R, R1 и R2 независимо представляет собой Н, C1-C12 алкил или защитную группу) и их комбинации. Примеры химически модифицированных сахаров включают 2'-F-5'-метил-замещенный нуклеозид (см. Международную заявку РСТ WO 2008/101157, опубликованную 8/21/08 относительно других раскрытых 5',2'-бисзамещенных нуклеозидов) или замену кислородного атома в рибозильном кольце на S, с дополнительным замещением в положении 2' (см. опубликованную патентную заявку США US 2005-0130923, опубликованную 16 июня, 2005) или, в качестве альтернативы, замещение BNA в положении 5' (см. Международную Заявку РСТ WO 2007/134181, опубликованную 11/22/07, где LNA замещена, например, 5'-метильной или 5'-винильной группой).

Примеры нуклеозидов, содержащих модифицированные сахарные фрагменты, включают, но не ограничиваясь этим, нуклеозиды, содержащие группы заместителей 5'-винил, 5'-метил (R или S), 4'-S, 2'-F, 2'-ОСН3, 2'-ОСН2СН3, 2'-OCH2CH2F и 2'-O(СН2)2ОСН3. Кроме того, заместитель в положении 2' может быть выбран из аллила, амино, азидо, тио, О-аллила, O-С110 алкила, OCF3, OCH2F, O(CH2)2SCH3, O(CH2)2-O-N(Rm)(Rn), O-CH2-C(=O)-N(Rm)(Rn) и O-CH2-C(=O)-N(R1)-(CH2)2-N(Rm)(Rn), где каждый R1, Rm и Rn независимо представляет собой Н или замещенный или незамещенный С110 алкил.

В данном описании "бициклические нуклеозиды" обозначают модифицированные нуклеозиды, содержащие бициклический сахарный фрагмент. Примеры бициклических нуклеозидов включают, но не ограничиваясь этим, нуклеозиды, содержащие мостик между 4' и 2' атомами рибозильного кольца. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения, предложенные в данном описании, содержат один или более бициклических нуклеозидов, содержащих мостик 4'-2'. Примеры таких соединенных мостиком 4'-2' бициклических нуклеозидов включают, но не ограничиваясь этим, одну из формул: 4'-(СН2)-O-2'(LNA); 4'-(CH2)-S-2'; 4'-(СН2)2-O-2'(ЭНК); 4'-СН(СН3)-O-2' (также носит название ограниченного этила или cEt) и 4'-СН(СН2ОСН3)-O-2' (и ее аналоги, см. патент США 7399845, выданный 15 июля 2008 года); 4'-С(СН3)(СН3)-O-2' (и ее аналоги, см. PCT/US 2008/068922, опубликованную как WO/2009/006478, опубликованную 8 января 2009 года); 4'-CH2-N(OCH3)-2' (и ее аналоги, см. PCT/US 2008/064591, опубликованную как WO/2008/150729, опубликованную 11 декабря 2008 года); 4'-CH2-O-N(CH3)-2' (см. опубликованную патентную заявку США US 2004-0171570, опубликованную 2 сентября 2004 года); 4'-CH2-N(R)-O-2', где R представляет собой Н, С112 алкил или защитную группу (см. патент США 7427672, выданный 23 сентября, 2008); 4'-СН2-С(Н)(СН3)-2' (см. Chattopadhyaya et al., J. Org. Chem., 2009, 74, 118-134); и 4'-СН2-С(=СН2)-2' (и ее аналоги, см. PCT/US 2008/066154, опубликованную как WO 2008/154401, опубликованную 8 декабря 2008 года).

Дополнительно, другие отчеты касательно бициклических нуклеозидов могут быть найдены в опубликованной литературе (см. например: Frieden et al., Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372; Singh et al., Chem. Commun., 1998, 4, 455-456; Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630; Wahlestedt et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2000, 97, 5633-5638; Kumar et al, Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222; Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039; Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc, 2007, 129(26) 8362-8379; Elayadi et al., Curr. Opinion Invest. Drugs, 2001, 2, 558-561; Braasch et al., Chem. Biol, 2001, 8, 1-7; и Orum et al., Curr. Opinion Mol. Ther., 2001, 3, 239-243; патенты США №6268490; 6525191; 6670461; 6770748; 6794499; 7034133; 7053207; 7399845; 7547684; и 7696345; публикации патентов США №№ US 2008-0039618; US 2009-0012281; US 2007-0287831; US 2004-0171570; патентные заявки США с серийными номерами 12/129154; 60/989574; 61/026995; 61/026998; 61/056564; 61/086231; 61/097787; и 61/099844; опубликованные Международные заявки РСТ WO 1994/014226; WO 2004/106356; WO 2005/021570; WO 2007/134181; WO 2008/150729; WO 2008/154401; и WO 2009/006478. Каждый из вышеупомянутых бициклических нуклеозидов может быть получен в одной или нескольких стереохимических конфигурациях сахара, включая, например, α-L-рибофуранозу и β-D-рибофуранозу (см. международную заявку PCT/DK 98/00393, опубликованную 25 марта 1999 года как WO 99/14226).

В некоторых вариантах реализации изобретения бициклические сахарные фрагменты нуклеозидов BNA включают, но не ограничиваясь этим, соединения, содержащие по меньшей мере один мостик между положениями 4' и 2' пентофуранозильного сахарного фрагмента, причем такие мостики независимо содержат 1 или от 2 до 4 связанных групп, независимо выбранных из -[C(Ra)(Rb)]n-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -С(=O)-, -C(=NRa)-, -C(=S)-, -О-, -Si(Ra)2-, -S(=O)x- и -N(Ra)-;

где:

x равно 0, 1 или 2;

n равно 1, 2, 3 или 4;

каждый Ra и Rb независимо представляет собой Н, защитную группу, гидроксил, C1-C12 алкил, замещенный C1-C12 алкил, С212 алкенил, замещенный С212 алкенил, С212 алкинил, замещенный C2-C12 алкинил, С520 арил, замещенный С520 арил, гетероциклический радикал, замещенный гетероциклический радикал, гетероарил, замещенный гетероарил, С57 алициклический радикал, замещенный С57 алициклический радикал, галоген, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, COOJ1, ацил (C(=O)-H), замещенный ацил, CN, сульфонил (S(=O)2-J1) или сульфоксил (S(=O)-J1); и

каждый J1 и J2 независимо представляет собой Н, C1-C12 алкил, замещенный С112 алкил, С2-C12 алкенил, замещенный С212 алкенил, C2-C12 алкинил, замещенный С212 алкинил, С520 арил, замещенный С520 арил, ацил (С(=O)-Н), замещенный ацил, гетероциклический радикал, замещенный гетероциклический радикал, C1-C12 аминоалкил, замещенный C1-C12 аминоалкил или защитную группу.

В некоторых вариантах реализации изобретения мостик бициклического сахарного фрагмента представляет собой -[C(Ra)(Rb)]n-, -[C(Ra)(Rb)]n-O-, -C(RaRb)-N(R)-O- или -C(RaRb)-O-N(R)-. В некоторых вариантах реализации изобретения мостик представляет собой 4'-СН2-2', 4'-(СН2)2-2', 4'-(СН2)3-2', 4'-СН2-O-2', 4'-(СН2)2-O-2', 4'-CH2-O-N(R)-2' и 4'-CH2-N(R)-O-2'-, где каждый R независимо представляет собой Н, защитную группу или С112 алкил.

В некоторых вариантах реализации изобретения бициклические нуклеозиды дополнительно определяются изомерной конфигурацией. Например, нуклеозид, содержащий мостик 4'-2' метиленокси, может находиться в α-L конфигурации или β-D конфигурации. Ранее, α-L-метиленокси (4'-СН2-O-2') BNA были введены в антисмысловые олигонуклеотиды, которые продемонстрировали антисмысловую активность (Frieden et al., Nucleic Acids Research, 2003, 21, 6365-6372).

В некоторых вариантах реализации изобретения бициклические нуклеозиды включают, не ограничиваясь этим, (А) α-L-метиленокси (4'-СН2-O-2') BNA, (В) β-D-метиленокси (4'-СН2-O-2') BNA, (С) этиленокси (4'-(СН2)2-O-2') BNA, (D) аминооокси (4'-CH2-O-N(R)-2') BNA, (Е) оксиамино (4'-CH2-N(R)-O-2') BNA, и (F) метил(метиленокси) (4'-СН(СН3)-O-2') BNA, (G) метилен-тио (4'-СН2-S-2') BNA, (Н) метилен-амино (4'-CH2-N(R)-2') BNA, (I) метилкарбоциклические (4'-СН2-СН(СН3)-2') BNA, (J) пропиленкарбоциклические (4'-(СН2)3-2') BNA и (K) винил BNA, как проиллюстрировано ниже:

где Вх представляет собой остаток основания, и R независимо представляет собой Н, защитную группу, С112 алкил или C1-C12 алкокси.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются бициклические нуклеозиды Формулы I:

где:

Вх представляет собой остаток гетероциклического основания;

-Qa-Qb-Qc- представляет собой -CH2-N(Rc)-CH2-, -C(=O)-N(Rc)-CH2-, -CH2-O-N(Rc)-, -СН2-N(Rc)-O- или -N(Rc)-O-CH2;

Rc представляет собой C1-C12 алкил или защитную группу для аминогруппы; и

каждый Та и Tb независимо представляет собой Н, защитную группу для гидроксигруппы, группу конъюгата, реакционноспосообную фосфорную группу, остаток фосфора или ковалентную связь с подложкой.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются бициклические нуклеозиды Формулы II:

где:

Вх представляет собой остаток гетероциклического основания;

каждый Та и Tb независимо представляет собой Н, защитную группу для гидроксигруппы, группу конъюгата, реакционноспособную фосфорную группу, фрагмент фосфора или ковалентную связь с подложкой;

Za представляет собой C1-C6 алкил, С26 алкенил, С26 алкинил, замещенный С16 алкил, замещенный С26 алкенил, замещенный С26 алкинил, ацил, замещенный ацил, замещенный амид, тиол или замещенный тио.

В одном варианте реализации изобретения каждый из заместителей независимо замещен одним или несколькими заместителями, независимо выбранными из галогена, оксо, гидроксила, OJc, NJcJd, SJc, N3, OC(=X)Jc, и NJeC(=X)NJcJd, где каждый Jc, Jd и Je независимо представляет собой Н, С16 алкил или замещенный С16 алкил, и x равно О или NJc.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются бициклические нуклеозиды Формулы III:

где:

Вх представляет собой остаток гетероциклического основания;

каждый Та и Tb независимо представляет собой Н, защитную группу для гидроксигруппы, группу конъюгата, реакционноспособную фосфорную группу, фрагмент фосфора или ковалентную связь с подложкой;

Zb представляет собой С16 алкил, С26 алкенил, С26 алкинил, замещенный С16 алкил, замещенный С26 алкенил, замещенный С26 алкинил или замещенный ацил (С(=O)-).

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются бициклические нуклеозиды Формулы IV:

где:

Вх представляет собой остаток гетероциклического основания;

каждый Та и Tb независимо представляет собой Н, защитную группу для гидроксигруппы, группу конъюгата, реакционноспособную фосфорную группу, фрагмент фосфора или ковалентную связь с подложкой;

Rd представляет собой С16 алкил, замещенный С16 алкил, С26 алкенил, замещенный С26 алкенил, С26 алкинил или замещенный С26 алкинил;

каждый qa, qb, qc и qd независимо представляет собой Н, галоген, C1-C6 алкил, замещенный С16 алкил, С26 алкенил, замещенный С26 алкенил, С26 алкинил или замещенный С26 алкинил, С16 алкоксил, замещенный С16 алкоксил, ацил, замещенный ацил, С16 аминоалкил или замещенный C1-C6 аминоалкил.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются бициклические нуклеозиды Формулы V:

где:

Вх представляет собой остаток гетероциклического основания;

каждый Та и Tb независимо представляет собой Н, защитную группу для гидроксигруппы, группу конъюгата, реакционноспособную фосфорную группу, фрагмент фосфора или ковалентную связь с подложкой;

каждый qa, qb,, qe и qf независимо представляет собой водород, галоген, С112 алкил, замещенный С112 алкил, C2-C12 алкенил, замещенный С212 алкенил, С212 алкинил, замещенный С212 алкинил, С112 алкокси, замещенный C1-C12 алкокси, OJj, SJj, SOJj, SO2Jj, NJjJk, N3, CN, C(=O)OJj, C(=O)NJjJk, C(=O)Jj, O-C(=O)NJjJk, N(H)C(=NH)NJjJk, N(H)C(=O)NJjJk или N(H)C(=S)NJjJk;

или qe и qf вместе представляют собой =C(qg)(qh);

каждый qg и qh независимо представляет собой Н, галоген, C1-C12 алкил или замещенный С112 алкил.

Описаны синтез и получение аденинметиленокси (4'-СН2-O-2') мономеров BNA цитозина, гуанина, 5-цитозина, тимина и урацила, наряду с их олигомеризацией, и свойства распознавания нуклеиновых кислот (Koshkin et al., Tetrahedron, 1998, 54, 3607-3630). Кроме того, BNA и их получение описаны в WO 98/39352 и WO 99/14226.

Дополнительно, были получены аналоги метиленокси (4'-СН2-O-2') BNA и 2'-тио-BNA (Kumar et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8, 2219-2222). Кроме того, описано получение замкнутых аналогов нуклеозида, содержащих олигодезоксирибонуклеотидные дуплексы, как субстраты для полимераз нуклеиновых кислот (Wengel et al., WO 99/14226). Синтез 2'-амино-BNA, нового конформационно ограниченного олигонуклеотидного аналога с высокой аффинностью, также описан в уровне техники (Singh et al., J. Org. Chem., 1998, 63, 10035-10039). Кроме того, получены 2'-амино- и 2'-метиламино-BNA, и ранее сообщалось о термической стабильности их дуплексов с комплементарными цепями РНК и ДНК.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются бициклические нуклеозиды Формулы VI:

где:

Вх представляет собой остаток гетероциклического основания;

каждый Та и Тb независимо представляет собой Н, защитную группу для гидроксигруппы, группу конъюгата, реакционноспособную фосфорную группу, фрагмент фосфора или ковалентную связь с подложкой;

каждый qi, qj, qk и ql независимо представляет собой Н, галоген, С112 алкил, замещенный C212 алкил, С212 алкенил, замещенный С212 алкенил, C2-C12 алкинил, замещенный C2-C12 алкинил, С112 алкоксил, замещенный С112 алкоксил, OJj, SJj, SOJj, SO2Jj, NJjJk, N3, CN, C(=O)OJj, C(=O)NJjJk, C(=O)Jj, O-C(=O)NJjJk, N(H)C(=NH)NJjJk, N(H)C(=O)NJjJk или N(H)C(=S)NJjJk; и

qi и qj или ql и qk вместе представляют собой =C(qg)(qh), где каждый из qg и qh независимо представляет собой Н, галоген, C1-C12 алкил или замещенный C1-C12 алкил.

Описан один бициклический карбоциклический нуклеозид, содержащий мостик 4'-(СН2)3-2' и аналог с алкенильным мостиком 4'-СН=СН-СН2-2' (Freier et al., Nucleic Acids Research, 1997, 25(22), 4429-4443 и Albaek et al., J. Org. Chem., 2006, 71, 7731-7740). Кроме того, описаны синтез и получение бициклических карбоциклических нуклеозидов, наряду с их олигомеризацией и биохимическими исследованиями (Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc, 2007, 129(26), 8362-8379).

В данном описании бициклический "нуклеозид 4'-2'" или "4'-2' бициклический нуклеозид" обозначает бициклический нуклеозид, содержащий фуранозное кольцо, которое содержит мостик, соединяющий два углеродных атома фуранозного кольца, который соединяет атом углерода 2' и атом углерода 4' сахарного кольца.

В данном описании "моноциклические нуклеозиды" обозначает нуклеозиды, содержащие модифицированные сахарные фрагменты, которые не являются бициклическими сахарными фрагментами. В некоторых вариантах реализации изобретения сахарный фрагмент или аналог сахарного фрагмента в нуклеозиде может быть модифицированным или замещенным в любом положении.

В данном описании "2'-модифицированный сахар" обозначает фуранозильный сахар, модифицированный в положении 2'. В некоторых вариантах реализации изобретения такие модификации включают заместители, выбранные из: галогенида, включая, но не ограничиваясь этим, замещенный и незамещенный алкокси, замещенный и незамещенный тиоалкил, замещенный и незамещенный аминоалкил, замещенный и незамещенный алкил, замещенный и незамещенный аллил и замещенный и незамещенный алкинил. В некоторых вариантах реализации изобретения 2' модификации выбраны из заместителей, включая, но не ограничиваясь этим: O[(CH2)nO]mCH3, O(CH2)nNH2, O(CH2)nCH3, O(CH2)nF, O(CH2)nONH2, OCH2C(=O)N(H)CH3, и O(CH2)nON[(CH2)nCH3]2, где n и m равны от 1 до около 10. Кроме того, другие 2'-заместители могут быть выбраны из: C1-C12 алкила, замещенного алкила, алкенила, алкинила, алкарила, аралкила, О-алкарила или О-аралкила, SH, SCH3, OCN, Cl, Br, CN, F, CF3, OCF3, SOCH3, SO2CH3, ONO2, NO2, N3, NH2, гетероциклоалкила, гетероциклоалкарила, аминоалкиламино, полиалкиламино, замещенного силила, РНК расщепляющей группы, репортерной группы, интеркалятора, группы для улучшения фармакокинетических свойств или группы для улучшения фармакодинамических свойств антисмыслового соединения, и других заместителей с подобными свойствами. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированные нуклеозиды содержат боковую цепь 2'-МОЕ (Baker et al., J. Biol. Chem., 1997, 272, 11944-12000). Такое 2'-MOE замещение описано как улучшающее аффинность связывания, по сравнению с немодифицированными нуклеозидами и другими модифицированными нуклеозидами, такими как 2'-О-метил, О-пропил и О-аминопропил. Кроме того, показано, что олигонуклеотиды, содержащие 2'-МОЕ заместитель, являются антисмысловыми ингибиторами экспрессии гена с многообещающими характеристиками для применения in vivo (Martin, Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486-504; Altmann et al., Chimia, 1996, 50, 168-176; Altmann et al., Biochem. Soc. Trans., 1996, 24, 630-637; и Altmann et al., Nucleosides Nucleotides, 1997, 16, 917-926).

В данном описании "модифицированный тетрагидропирановый нуклеозид" или "модифицированный ТНР нуклеозид" обозначает нуклеозид, содержащий 6-членный тетрагидропирановый "сахар", заменяющий пентофуранозильный остаток в обычных нуклеозидах (суррогат сахара). Модифицированные ТНР нуклеозиды включают, но не ограничиваясь этим, известные из уровня техники как гекситолнуклеиновая кислота (HNA), анитолнуклеиновая кислота (АНК), маннитолнуклеиновая кислота (МНК) (см. Leumann, Bioorg. Med. Chem., 2002, 10, 841-1954) или фтор HNA (F-HNA), содержащие систему тетрагидропиранового кольца, как проиллюстрировано ниже:

В некоторых вариантах реализации изобретения выбраны суррогаты сахара Формулы VII:

причем в каждом из указанного по меньшей мере одного тетрагидропиранового аналога нуклеозида Формулы VII независимо:

Вх представляет собой остаток гетероциклического основания;

каждый Та и Tb независимо представляет собой межнуклеозидную линкерную группу, соединяющую аналог тетрагидропиранового нуклеозида с антисмысловым соединением, или один из Та и Tb представляет собой межнуклеозидную линкерную группу, соединяющую тетрагидропирановый аналог нуклеозида с антисмысловым соединением, а другой из Та и Tb представляет собой Н, защитную группу для гидроксигруппы, присоединенную группу конъюгата или 5'- или 3'-концевую группу;

каждый q1, q2, q3, q4, q5, q6 и q7 независимо представляет собой H, C1-C6 алкил, замещенный С16 алкил, С26 алкенил, замещенный С26 алкенил, С26 алкинил или замещенный С26 алкинил; и каждый из R1 и R2 выбран из водорода, гидроксила, галогена, замещенного или незамещенного алкокси, NJ1J2, SJ1, N3, OC(=X)J1, OC(=X)NJ1J2, NJ3C(=X)NJ1J2 и CN, где x равно О, S или NJ1, и каждый J1, J2 и J3 независимо представляет собой Н или С16 алкил.

В некоторых вариантах реализации изобретения предложены модифицированные ТНР нуклеозиды Формулы VII, где каждый q1, q2, q3, q4, q5, q6 и q7 представляет собой H. В некоторых вариантах реализации изобретения по меньшей мере один из q1, q2, q3, q4, q5, q6 и q7 не является H. В некоторых вариантах реализации изобретения по меньшей мере один из q1, q2, q3, q4, q5, q6 и q7 представляет собой метил. В некоторых вариантах реализации изобретения предложены ТНР нуклеозиды Формулы VII, где один из R1 и R2 представляет собой фтор. В некоторых вариантах реализации изобретения R1 представляет собой фтор, a R2 представляет собой H; R1 представляет собой метокси, a R2 представляет собой H, и R1 представляет собой метоксиэтокси, a R2 представляет собой H.

В некоторых вариантах реализации изобретения суррогаты сахара содержат кольца, содержащие более 5 атомов и более одного гетероатома. Например, сообщалось о нуклеозидах, содержащих морфолиносахарные фрагменты, и их применении в олигомерных соединениях (см. например: Braasch et al., Biochemistry, 2002, 41, 4503-4510; и патенты США 5698685; 5166315; 5185444; и 5034506). В данном описании термин "морфолино" обозначает

суррогат сахара следующей формулы:

В некоторых вариантах реализации изобретения морфолиновые фрагменты могут быть модифицированными, например, введением или модификацией различных заместителей, по сравнению с упомянутой выше структурой морфолино. Такие суррогаты сахара здесь и в дальнейшем носят название "модифицированных морфолино".

Кроме того, предложены комбинации модификаций, такие как, но не ограничиваясь этим, 2'-F-5'-метилзамещенные нуклеозиды (см. Международную Заявку РСТ WO 2008/101157, опубликованную 8/21/08, относительно других раскрытых 5',2'-бисзамещенных нуклеозидов) и замена кислородного атома в рибозильном кольце на S с дальнейшей заменой в положении 2' (см. опубликованную патентную заявку США US 2005-0130923, опубликованную 16 июня 2005 года), или, в качестве альтернативы, 5'-замещение бициклической нуклеиновой кислоты (см. Международную Заявку РСТ WO 2007/134181, опубликованную 11/22/07, где 4'-СН2-О-бициклический нуклеозид дополнительно замещен в положении 5' группой 5'-метил или 5'-винил). Дополнительно описан синтез и получение бициклических карбоциклических нуклеозидов, наряду с их олигомеризацией и биохимическими исследованиями (см., например, Srivastava et al., J. Am. Chem. Soc. 2007, 129(26), 8362-8379).

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения содержат один или более модифицированных циклогексенилнуклеозидов, которые представляют собой нуклеозид, содержащий 6-членный циклогексенил вместо пентофуранозильного остатка во встречающихся в природе нуклеозидах. Модифицированные циклогексенилнуклеозиды включают, но не ограничиваясь этим, описанные в уровне техники (см. например, опубликованную заявку того же заявителя РСТ WO 2010/036696, опубликованную 10 апреля 2010 года, Robeyns et al., J. Am. Chem. Soc., 2008, 130(6), 1979-1984; et al., Tetrahedron Letters, 2007, 48, 3621-3623; Nauwelaerts et al., J. Am. Chem. Soc., 2007, 129(30), 9340-9348; Gu et al., Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids, 2005, 24(5-7), 993-998; Nauwelaerts et al., Nucleic Acids Research, 2005, 33(8), 2452-2463; Robeyns et al., Acta Crystallographica, Section F: Structural Biology and Crystallization Communications, 2005, F61(6), 585-586; Gu et al., Tetrahedron, 2004, 60(9), 2111-2123; Gu et al., Oligonucleotides, 2003, 13(6), 479-489; Wang et al., J. Org. Chem., 2003, 68, 4499-4505; Verbeure et al., Nucleic Acids Research, 2001, 29(24), 4941-4947; Wang et al., J. Org. Chem., 2001, 66, 8478-82; Wang et al., Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids, 2001, 20(4-7), 785-788; Wang et al., J. Am. Chem., 2000, 122, 8595-8602; опубликованную заявку РСТ WO 06/047842; и опубликованную заявку РСТ WO 01/049687; текст каждой включен в данное описание в полном объеме посредством ссылки). Некоторые модифицированные циклогексенилнуклеозиды представлены Формулой X.

где для каждого из указанного по меньшей мере одного циклогексенилнуклеозидного аналога Формулы X независимо:

Вх представляет собой остаток гетероциклического основания;

каждый Т3 и Т4 независимо представляет собой межнуклеозидную линкерную группу, соединяющую циклогексенилнуклеозидный аналог с антисмысловым соединением, или один из Т3 и Т4 представляет собой межнуклеозидную линкерную группу, соединяющую тетрагидропираннуклеозидный аналог с антисмысловым соединением, а другой из Т3 и Т4 представляет собой Н, защитную группу для гидроксигруппы, присоединенную группу конъюгата или 5'- или 3'-концевую группу; и

каждый q1, q2, q3, q4, q5, q6, q7, q8 и q9 независимо представляет собой H, С16 алкил, замещенный С16 алкил, С26 алкенил, замещенный С26 алкенил, С26 алкинил, замещенный С26 алкинил или другую группу заместителя в сахаре.

В данном описании "2'-модифицированный" или "2'-замещенный" обозначает нуклеозид, содержащий сахар, который содержит заместитель в положении 2', кроме Н или ОН. 2'-Модифицированные нуклеозиды включают, но не ограничиваясь этим, бициклические нуклеозиды, в которых мостик, соединяющий два углеродных атома сахарного кольца, соединяет атом углерода 2' и другой атом углерода сахарного кольца; и нуклеозиды с несоединенными мостиком 2'-заместителями, такими как аллил, амино, азидо, тио, О-аллил, O-C1-C10 алкил, -OCF3, О-(СН2)2-О-СН3, 2'-О(CH2)2SCH3, О-(CH2)2-О-N(Rm)(Rn) или О-CH2-C(=О)-N(Rm)(Rn), где каждый Rm и Rn независимо представляет собой Н или замещенный или незамещенный С110 алкил. 2'-Модифицированные нуклеозиды могут дополнительно содержать другие модификации, например, в других положениях сахара и/или в нуклеиновом основание.

В данном описании "2'-F" обозначает нуклеозид, содержащий сахар, который содержит фтор в положении 2' сахарного кольца.

В данном описании каждый из "2'-ОМе" или "2'-ОСН3" или "2'-О-метил" обозначает нуклеозид, содержащий сахар, который содержит группу -ОСН3 в положении 2' сахарного кольца.

В данном описании каждый из "МОЕ" или "2'-МОЕ" или "2'-ОСН2СН2ОСН3" или "2'-O-метоксиэтил" обозначает нуклеозид, содержащий сахар, который содержит группу -ОСН2СН2ОСН3 в положении 2' сахарного кольца.

В данном описании "олигонуклеотид" обозначает соединение, содержащее несколько связанных нуклеозидов. В некоторых вариантах реализации изобретения один или более из связанных нуклеозидов модифицированы. В некоторых вариантах реализации изобретения олигонуклеотид содержит один или более рибонуклеозидов (РНК) и/или дезоксирибонуклеозидов (ДНК).

Кроме того, множество других моноцикло, бицикло и трицикло систем колец суррогатных Сахаров известны из уровня техники и могут применяться для модификации нуклеозидов с целью введения в антисмысловые соединения, как предусмотрено в данном описании (см. например обзорную статью: Leumann, Bioorg. Med. Chem., 2002, 10, 841-1954). В такие системы колец могут быть введены различные дополнительные заместители, чтобы увеличить активность.

Способы получения модифицированных cахаров хорошо известны специалистам из уровня техники. Некоторые характерные патенты США, в которых раскрыто получение таких модифицированных Сахаров, включают, но не ограничиваясь этим, США: 4981957; 5118800; 5319080; 5359044; 5393878; 5446137; 5466786; 5514785; 5519134; 5567811; 5576427; 5591722; 5597909; 5610300; 5627053; 5639873; 5646265; 5670633; 5700920; 5792847 и 6600032 и Международную заявку PCT/US 2005/019219, поданную 2 июня 2005 года и опубликованную как WO 2005/121371 22 декабря 2005 года, каждый из которых включен в данное описание посредством ссылки в полном объеме.

В нуклеотидах, содержащих модифицированные сахарные фрагменты, фрагменты нуклеиновых оснований (природные, модифицированные или их комбинацию) сохраняют способность гибридизоваться с подходящей нуклеиновой кислотой-мишенью.

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые соединения содержат один или более нуклеозидов, содержащих модифицированные сахарные фрагменты. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный сахарный фрагмент представляет собой 2'-МОЕ. В некоторых вариантах реализации изобретения 2'-МОЕ модифицированные нуклеозиды организованы в мотив гэпмера. В некоторых вариантах реализации изобретения модифицированный сахарный фрагмент представляет собой бициклический нуклеозид, содержащий мостиковую группу (4'-СН(СН3)-O-2'). В некоторых вариантах реализации изобретения (4'-СН(СН3)-O-2') модифицированные нуклеозиды организованы в крылья мотива гэпмера.

Конъюгированные антисмысловые соединения

Антисмысловые соединения могут быть ковалентно соединены с одним или несколькими фрагментами или конъюгатами, увеличивающими активность, распределение в клетке или захват клеткой полученных антисмысловых олигонуклеотидов. Типичные конъюгатные группы включают холестериновые фрагменты и липидные фрагменты. Дополнительные конъюгатные группы включают углеводы, фосфолипиды, биотин, феназин, фолат, фенантридин, антрахинон, акридин, флуоресцеины, родамины, кумарины и красители.

Кроме того, антисмысловые соединения могут быть модифицированы таким образом, чтобы содержать одну или более стабилизирующих групп, которые в общем присоединяются к одному или обоим концам антисмысловых соединений для усиления таких свойств, как, например, устойчивость к нуклеазе. Стабилизирующие группы включают кэп-структуры. Такие концевые модификации защищают антисмысловое соединение, содержащее концевую нуклеиновую кислоту, от разложения экзонуклеазой и могут способствовать доставке и/или локализации в пределах клетки. Кэп может присутствовать на 5'-конце (5'-кэп) или 3'-конце (3'-кэп) или может присутствовать на обеих концах. Кэп-структуры хорошо известны из уровня техники и включают, например, инвертированные дезоксикэпы с удаленными азотистыми основаниями. Другие 3' и 5'-стабилизирующие группы, которые могут использоваться для кэппирования одного или обоих концов антисмыслового соединения, чтобы обеспечить устойчивость к нуклеазе, включают раскрытые в WO 03/004602, опубликованной 16 января 2003 года.

Культура клеток и обработка антисмысловыми соединениями

Влияние антисмысловых соединений на уровень, активность или экспрессию нуклеиновых кислот ПКК может быть протестировано in vitro на различных типах клеток. Типы клеток, применяемые для таких анализов, доступны от коммерческих продавцов (например, Американская коллекция типовых культур, Манассас, Вирджиния; Zen-bio, Inc., Треугольник науки, Северная Каролина; Clonetics Corporation, Уолкерсвилль, Мериленд) и культивируются согласно инструкциям продавца, с применением коммерчески доступных реактивов (например, Life Technologies, Карлсбад, Калифорния). Иллюстративные типы клеток включают, но не ограничиваясь этим, клетки HepaRG™T и первичные гепатоциты мыши.

Тестирование антисмысловых олигонуклеотидов in vitro

В данном описании описаны способы обработки клеток антисмысловыми олигонуклеотидами, которые могут быть соответствующим образом модифицированы для обработки другими антисмысловыми соединениями.

Клетки можно обрабатывать антисмысловыми олигонуклеотидами, если клетки достигают слияния около 60-80% в культуре.

Один из реактивом, обычно применяемый для введения антисмысловых олигонуклеотидов в клетки культуры, включает катионный липидный реактив трансфекции LIPOFECTIN (Life Technologies, Карлсбад, Калифорния). Антисмысловые олигонуклеотиды могут быть смешаны с LIPOFECTDM в OPTI-MEM 1 (Life Technologies, Карлсбад, Калифорния) до достижения желательной конечной концентрации антисмыслового олигонуклеотида и концентрации ЛИПОФЕКТИНА, которая может варьировать от 2 до 12 мкг/мл на 100 нМ антисмыслового олигонуклеотида.

Другой реактив, применяемый для введения антисмысловых олигонуклеотидов в клетки культуры, включает LIPOFECTAMPWE (Life Technologies, Карлсбад, Калифорния). Антисмысловой олигонуклеотид смешивают с LIPOFECTAMINE в среде OPTI-MEM 1 со сниженным содержанием сыворотки (Life Technologies, Карлсбад, Калифорния) до достижения желательной концентрации антисмыслового олигонуклеотида и концентрации LIPOFECTAMINE, которая может варьировать от 2 до 12 мкг/мл на 100 нМ антисмыслового олигонуклеотида.

Другая техника, применяемая для введения антисмысловых олигонуклеотидов в клетки культуры, включает электропорацию.

Еще одна техника, применяемая для введения антисмысловых олигонуклеотидов в клетки культуры, включает свободный захват олигонуклеотидов клетками.

Клетки обрабатывают антисмысловыми олигонуклеотидами шаблонными способами. Клетки могут быть собраны через 16-24 часа после обработки антисмысловыми олигонуклеотидами, и в этой точке времени уровни РНК или белка для нуклеиновых кислот-мишеней измеряют способами, известными из уровня техники и описанными в данном описании. В общем, если обработку проводят в нескольких параллельных экспериментах, данные представляют как среднее значение для параллельных экспериментов.

Концентрация применяемого антисмыслового олигонуклеотида варьирует от одной линии клеток к другой. Способы определения оптимальной концентрации антисмыслового олигонуклеотида для конкретной линии клеток хорошо известны из уровня техники. При трансфекции LIPOFECTAMINE антисмысловые олигонуклеотиды обычно применяются в концентрациях, варьирующих от 1 нМ до 300 нМ. При трансфекции с применением электропорации антисмысловые олигонуклеотиды применяются в более высоких концентрациях, варьирующих от 625 до 20000 нМ.

Выделение РНК

Анализ РНК может выполняться на общей клеточной РНК или поли(А)+ мРНК. Способы выделения РНК хорошо известны из уровня техники. РНК получают с применением способов, хорошо известных из уровня техники, например, с применением реактива TRIZOL (Life Technologies, Карлсбад, Калифорния) согласно рекомендованным производителем протоколам.

Анализ ингибирования уровней мишени или экспрессии

Ингибирование уровней или экспрессии нуклеиновой кислоты ПКК может быть определено в различных анализах, известных из уровня техники. Например, уровни нуклеиновой кислоты-мишени могут быть количественно определены, например, Нозерн-блоттингом, конкурентной полимеразной цепной реакцией (ПНР) или количественной ПЦР в реальном времени. Анализ РНК может выполняться на общей клеточной РНК или поли(А)+ мРНК. Способы выделения РНК хорошо известны из уровня техники. Нозерн-блоттинг также шаблонно применяется в уровне техники. Количественная ПЦР в реальном времени может быть надлежащим образом проведена с применением коммерчески доступной системы обнаружения последовательностей ABI PRISM 7600, 7700 или 7900, доступной от PE-Applied Biosystems, Фостер-Сити, Калифорния, согласно инструкциям производителя.

Анализ уровней РНК-мишени количественной ПЦР в реальном времени

Количественная оценка уровней РНК-мишени может быть осуществлена методом количественной ПЦР в реальном времени с применением обнаружения последовательностей ABI PRISM 7600, 7700 или 7900 (PE-Applied Biosystems, Фостер-Сити, Калифорния) согласно инструкциям производителя. Способы количественной ПЦР в реальном времени хорошо известны из уровня техники.

До проведения ПЦР в реальном времени, выделенную РНК вводят в реакцию с обратной транскриптазой (ОТ), которая продуцирует комплементарную ДНК (кДНК), в дальнейшем применяемую в качестве субстрата для ПЦР амплификации в реальном времени. Реакции с ОТ и ПЦР в реальном времени выполняются последовательно на одной и той же лунке с образцом. Реактивы для реакции с ОТ и ПЦР в реальном времени могут быть получены от Life Technologies (Карлсбад, Калифорния). Реакции с ОТ и ПЦР в реальном времени осуществляют способами, хорошо известными специалистам из уровня техники.

Количества целевого гена (или РНК), полученные ПЦР в реальном времени, нормализуют с применением уровня экспрессии гена, экспрессия которого является постоянной, такого как циклофилин А, или посредством количественного определения общей РНК с помощью RIBOGREEN (Life Technologies, Inc. Карлсбад, Калифорния). Экспрессию Циклофилина А количественно определяют ПЦР в реальном времени, проводя анализ одновременно с мишенью, мультиплексно или по отдельности. Количество общей РНК определяют, используя реактив RIBOGREEN для количественного определения РНК (Invetrogen, Inc. Юджин, Орегон). Способы количественного определения РНК с помощью RIBOGREEN изложены в Jones, L.J. и др. (Analytical Biochemistry, 1998, 265, 368-374). Прибор CYTOFLUOR 4000 (РЕ Applied Biosystems) применяют для измерения флуоресценции RIBOGREEN.

Сконструированы зонды и праймеры, гибридизующиеся с нуклеиновой кислотой ПКК. Способы конструирования зондов и праймеров для ПЦР в реальном времени хорошо известны из уровня техники и могут включать применение программного обеспечения, такого как программное обеспечение PRIMER EXPRESS (Applied Biosystems, Фостер-Сити, Калифорния).

Анализ уровней белка

Антисмысловое ингибирование нуклеиновых кислот ПКК может быть оценено путем измерения уровней белка ПКК. Уровни белка ПКК могут быть оценены или количественно определены различными путями, хорошо известными из уровня техники, такими как иммунопреципитация, Вестер-блоттинг (иммуноблоттинг), твердофазный иммуноферментный анализ (ТИФА), количественное определение белка, анализы активности белка (например, анализы активности каспазы), иммуногистохимия, иммуноцитохимия или сортировка клеток с активированной флуоресценцией (СКАФ). Антитела, нацеленные на мишень, могут быть идентифицированы и получены из различных источников, таких как каталог антител MSRS (Aerie Corporation, Бирмингем, Мичиган) или могут быть получены обычными способами генерации моноклональных или поликлональных антител, хорошо известными из уровня техники.

Тестирование антисмысловых соединений in vivo

Антисмысловые соединения, например, антисмысловые олигонуклеотиды, тестируют на животных, чтобы оценить их способность подавлять экспрессию ПКК и вызывать фенотипические изменения.

В некоторых вариантах реализации изобретения такие фенотипические изменения включают связанные с воспалительным заболеванием, например, уменьшение воспаления, отека, сосудистой проницаемости и сосудистого вытока. В некоторых вариантах реализации изобретения выраженность воспаления измеряют путем измерения увеличения или уменьшения отека, температуры, боли, цвета ткани и абдоминальной функции у животного.

В некоторых вариантах реализации изобретения такие фенотипические изменения включают связанные с тромбоэмболическим заболеванием, такие как пролонгированное АЧТВ, пролонгированное АЧТВ в сочетании с нормальным ПТ, снижение количества Фактора тромбоцитов 4 (PF-4) и снижение образования тромба или увеличение времени образования тромба.

Тестирование может проводиться на нормальных животных или на экспериментальных моделях заболевания. Для введения животным, антисмысловые олигонуклеотиды разбавляют фармацевтически приемлемым разбавителем, таким как фосфатно-солевой буфер. Введение включает парентеральные способы введения, такие как внутрибрюшинный, внутривенный и подкожный. Расчет дозы антисмыслового олигонуклеотида и частоты введения находятся в пределах компетенции специалистов в данной области техники, и зависит от таких факторов, как способ введения и масса тела животного. После периода лечения антисмысловыми олигонуклеотидами, выделяют РНК из ткани печени, и измеряют изменения экспрессии нуклеиновой кислоты ПКК.

Некоторые показания

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются способы лечения индивидуума, включающие введение одной или нескольких фармацевтических композиций, как описано в данном описании.

В некоторых вариантах реализации изобретения у индивидуума присутствует воспалительное заболевание. В некоторых вариантах реализации изобретения у индивидуума присутствует риск развития воспалительного состояния, включая, но не ограничиваясь этим, наследственный ангионевротический отек (НАО), отек, ангионевротический отек, припухлость, ангионевротический отек век, отек глаза, отек желтого пятна и отек мозга. Это включает индивидуумов с приобретенной проблемой, заболеванием или расстройством, которые ведут к риску воспаления, например, генетическая предрасположенность к воспалительному состоянию, факторы окружающей среды и воздействие некоторых лекарственных средств, в том числе, например, ингибиторов АПФ и БРА. В некоторых вариантах реализации изобретения индивидуум идентифицирован как нуждающийся в противовоспалительной терапии. Примеры таких индивидуумов включают, но не ограничиваясь этим, тех, у кого присутствует мутация в генетическом коде для ингибитора эстеразы комплемента 1 (т.е., C1-INH) или Фактора 12. В некоторых вариантах реализации изобретения аномальный код может приводить к дефициту C1-INH (т.е., тип I НАО), неспособности существующего C1-INH функционировать должным образом (тип II НАО) или гиперфункциональному Фактору 12 (т.е., тип III НАО).

В некоторых вариантах реализации изобретения у индивидуума присутствует тромбоэмболическое заболевание. В некоторых вариантах реализации изобретения у индивидуума присутствует риск расстройства свертываемости крови, в том числе, но не ограничиваясь этим, инфаркта, тромбоза, эмболии, тромбоэмболии, например, тромбоза глубоких вен, легочной эмболии, инфаркта миокарда и инсульта. Это включает индивидуумов с приобретенной проблемой, заболеванием или расстройством, которое приводит к риску тромбоза, например, хирургическим вмешательством, раком, ограничением подвижности, сепсисом, атеросклерозом, мерцанием предсердий, а также генетической склонностью, например, антифосфолипидным синдромом и аутосомальным доминирующим состоянием, Фактором V Лейдена. В некоторых вариантах реализации изобретения индивидуум идентифицирован как нуждающийся в антикоагулянтной терапии. Примеры таких индивидуумов включают, но не ограничиваясь этим, тех, кто подвергается обширному ортопедическому хирургическому вмешательству (например, замена тазобедренного/коленного сустава или хирургическое лечение перелома бедра), и больных, нуждающихся в хроническом лечении, например, страдающих от мерцания предсердий, для предупреждения инсульта.

В некоторых вариантах реализации изобретения предлагаются способы профилактического снижения экспрессии ПКК у индивидуума. Некоторые варианты реализации изобретения включают лечение индивидуума, нуждающегося в этом, введением индивидууму терапевтически эффективного количества антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК.

В одном варианте реализации изобретения введение терапевтически эффективного количества антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, сопровождается мониторингом уровней ПКК в сыворотке индивидуума, чтобы определить реакцию индивидуума на введение антисмыслового соединения. Реакция индивидуума на введение антисмыслового соединения используется врачом для определения объема и продолжительности терапевтического вмешательства.

В некоторых вариантах реализации изобретения введение антисмыслового соединения, нацеленного на нуклеиновую кислоту ПКК, ведет к уменьшению экспрессии ПКК по меньшей мере на 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 или 99%, или в диапазоне, определенном любыми двумя из этих значений. В некоторых вариантах реализации изобретения фармацевтические композиции, содержащие антисмысловое соединение, нацеленное на ПКК, применяются для получения лекарственного средства для лечения пациента, страдающего или подверженного воспалительному заболеванию или тромбоэмболическому заболеванию.

Некоторые композиции

1. ISIS 546254

В некоторых вариантах реализации изобретения ISIS 546254 характеризуется как 5-10-5 МОЕ гэпмер, содержащий последовательность (от 5' к 3') (включена в данное описание как SEQ ID NO: 570), причем каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфоротиоатную связь, каждый цитозин представляет собой 5'-метилцитозин, каждый из нуклеозидов 1-5 и 16-20 представляет собой 2'-O-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид, и каждый из нуклеозидов 6-15 представляет собой 2'-дезоксинуклеозид.

В некоторых вариантах реализации изобретения ISIS 546254 описан следующей химической формулой: ; где

A = аденин,

mC = 5'-метилцитозин

G = гуанин,

T = тимин,

e = 2'-O-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид,

d = 2'-дезоксинуклеозид, и

s = межнуклеозидная фосфоротиоатная связь.

В некоторых вариантах реализации изобретения ISIS 546254 описан следующей химической структурой:

Структура 1. ISIS 546254

В некоторых вариантах реализации изобретения, как описано в Примере 2 (ниже), ISIS 546254 обеспечивает 95% ингибирование мРНК ПКК человека в культивируемых клетках HepaRG™ ((плотность 20000 клеток на лунку), при трансфекции 5000 нМ антисмыслового олигонуклеотида с применением электропорации после периода обработки 24 часа и измерения количественной ПЦР в реальном времени с применение набора зонда праймера RTS3454 человека и коррекции в соответствии с содержанием общей РНК, по данным RIBOGREEN®.

В некоторых вариантах реализации изобретения, как описано в Примере 5 (см. Табл. 34 и 41 ниже), ISIS 546254 обеспечивает IC50 0,2 мкМ и 0,3 мкМ на 4-точечной кривой «доза-реакция» (0,19 мкМ, 0,56 мкМ, 1,67 мкМ и 5,0 мкМ) в культивируемых клетках HepaRG™ (плотность 20000 клеток на лунку), при трансфекции с применением электропорации после периода обработки 16 и измерения количественной ПЦР в реальном времени с применением набора зонда праймера RTS3454 человека и коррекции в соответствии с содержанием общей РНК, по данным RIBOGREEN®.

В некоторых вариантах реализации изобретения, как описано в Примере 7 (ниже), ISIS 546254 обеспечивает ингибирование мРНК ПКК человека на 31%, 55%, 84% и 83% и ингибирование белка ПКК человека на 0%, 36%, 51% и 76% у трансгенных мышей, несущих последовательность гена ПКК человека, после подкожной инъекции ISIS 546254 2 раза в неделю в течение 3 недель в дозе 2,5 мг/кг/неделю, 5,0 мг/кг/неделю, 10 мг/кг/неделю или 20 мг/кг/неделю.

В некоторых вариантах реализации изобретения, как описано в Примере 8 (ниже), ISISI 546254 эффективно ингибировал мРНК ПКК и экспрессию белка и переносился приматами.

2. ISIS 546343

В некоторых вариантах реализации изобретения ISIS 546343 характеризуется как 5-10-5 МОЕ гэпмер, содержащий последовательность (от 5' к 3') (включена в данное описание как SEQ ID NO: 705), причем каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфоротиоатную связь, каждый цитозин представляет собой 5'-метилцитозин, каждый из нуклеозидов 1-5 и 16-20 представляет собой 2'-O-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид, и каждый из нуклеозидов 6-15 представляет собой 2'-дезоксинуклеозид.

В некоторых вариантах реализации изобретения ISIS 546343 описан следующей химической формулой: ; где

A = аденин,

mC = 5'-метилцитозин;

G = гуанин,

T = тимин,

e = 2'-O-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид,

d = 2'-дезоксинуклеозид, и

s = межнуклеозидная фосфоротиоатная связь.

В некоторых вариантах реализации изобретения ISIS 546343 описан следующей химической структурой:

Структура 2. ISIS 546343

В некоторых вариантах реализации изобретения, как описано в Примере 2 (см. Табл. 9 и 10 ниже), ISIS 546343 обеспечивает ингибирование мРНК ПКК человека на 97% и 91% в культивируемых клетках HepaRG™ (плотность 20000 клеток на лунку), при трансфекции 5000 нМ антисмыслового олигонуклеотида с применением электропорации после периода обработки 24 часа и измерения количественной ПЦР в реальном времени с применение набора зонда праймера RTS3454 человека и коррекции в соответствии с содержанием общей РНК, по данным RIBOGREEN®.

В некоторых вариантах реализации изобретения, как дважды описано в Примере 5 (см. Табл. 34 и 41 ниже), ISIS 546343 обеспечивает IC50 0,4 мкМ на 4-точечной кривой «доза-реакция» (0,19 мкМ, 0,56 мкМ, 1,67 мкМ и 5,0 мкМ) в культивируемых клетках HepaRG™ (плотность 20000 клеток на лунку), при трансфекции с применением электропорации после периода обработки 16 и измерения количественной ПЦР в реальном времени с применением набора зонда праймера RTS3454 человека и коррекции в соответствии с содержанием общей РНК, по данным RIBOGREEN®.

В некоторых вариантах реализации изобретения, как описано в Примере 7 (ниже), ISIS 546343 обеспечивает ингибирование мРНК ПКК человека на 46%, 66% и 86% и ингибирование белка ПКК человека на 0%, 38% и 79% у трансгенных мышей, несущих последовательность гена ПКК человека, после подкожной инъекции ISIS 546343 2 раза в неделю в течение 3 недель в дозе 2,5 мг/кг/неделю, 5,0 мг/кг/неделю, 10 мг/кг/неделю или 20 мг/кг/неделю.

В некоторых вариантах реализации изобретения, как описано в Примере 8 (ниже), ISISI 546343 эффективно ингибировал мРНК ПКК и экспрессию белка и переносился приматами.

3. ISIS 548048

В некоторых вариантах реализации изобретения ISIS 548048 характеризуется как модифицированный антисмысловой олигонуклеотид, содержащий последовательность нуклеиновых оснований (от 5' к 3') (включена в данное описание как SEQ ID NO: 1666), состоящий из комбинации шестнадцати 2'-дезоксинуклеозидов, 2'-O-метоксиэтил-модифицированных нуклеозидов и модифицированных cEt нуклеозидов, причем каждый из нуклеозидов 1, 2 и 16 представляет собой 2'-O-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид, и, при этом, каждый из нуклеозидов 3, 14 и 15 представляет собой модифицированный cEt нуклеозид, притом, что каждый из нуклеозидов 4-13 представляет собой 2'-дезоксинуклеозид, причем каждая межнуклеозидная связь представляет собой фосфоротиоатную межнуклеозидную связь, и, при этом, каждый цитозин представляет собой 5'-метилцитозин.

В некоторых вариантах реализации изобретения ISIS 548048 описан следующей химической формулой: ; где

A = аденин,

mC = 5'-метилцитозин;

G = гуанин,

T = тимин,

e = 2'-O-метоксиэтил-модифицированный нуклеозид,

k = модифицированный cEt нуклеозид,

d = 2'-дезоксинуклеозид, и

s = межнуклеозидная фосфоротиоатная связь.

В некоторых вариантах реализации изобретения ISIS 548048 описан следующей химической структурой:

Структура 3. ISIS 548048

В некоторых вариантах реализации изобретения, как описано в Примере 3 (ниже), ISIS 548048 обеспечивает ингибирование мРНК на 84% в культивируемых клетках HepaRG™ (плотность 20000 клеток на лунку), при трансфекции 1000 нМ антисмыслового олигонуклеотида с применением электропорации после периода обработки 24 часа и измерения количественной ПЦР в реальном времени с применение набора зонда праймера RTS3454 человека и коррекции в соответствии с содержанием общей РНК, по данным RIBOGREEN®.

В некоторых вариантах реализации изобретения, как описано в Примере 6 (ниже), ISIS 548048 обеспечивает IC50 0,1 мкМ на 4-точечной кривой «доза-реакция» (0,11 мкМ, 0,33 мкМ, 1,00 мкМ и 3,00 мкМ) в культивируемых клетках HepaRG™ (плотность 20000 клеток на лунку), при трансфекции с применением электропорации после периода обработки 16 и измерения количественной ПЦР в реальном времени с применением набора зонда праймера RTS3454 человека и коррекции в соответствии с содержанием общей РНК, по данным RIBOGREEN®.

В некоторых вариантах реализации изобретения, как описано в Примере 7 (ниже), ISIS 548048 обеспечивает ингибирование мРНК ПКК человека на 7%, 77%, 72% и 80% и ингибирование белка ПКК человека на 23%, 70%, 89% и 98% у трансгенных мышей, несущих последовательность гена ПКК человека, после подкожной инъекции ISIS 548048 2 раза в неделю в течение 3 недель в дозе 2,5 мг/кг/неделю, 5,0 мг/кг/неделю, 10 мг/кг/неделю или 20 мг/кг/неделю.

В некоторых вариантах реализации изобретения, как описано в Примере 8 (ниже), ISISI 548048 эффективно ингибировал мРНК ПКК и экспрессию белка и переносился приматами.

Некоторые гипервариабельные участки

1. Нуклеиновые основания 27427-27466 SEP ID NO: 10

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые олигонуклеотиды сконструированы таким образом, что они нацелены на нуклеиновые основания 27427-27466 SEQ ID NO: 10 (GENBANK, инвентаризационный номер NT_016354.19, укорочена от нуклеинового основания 111693001 до 111730000). В некоторых вариантах реализации изобретения на нуклеиновые основания 27427-27466 SEQ ID NO: 10 представляют собой гипервариабельный участок. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновые основания 27427-27466 SEQ ID NO: 10 служат мишенью антисмысловых олигонуклеотидов. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмысловых олигонуклеотидов составляет 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нуклеиновых оснований. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые олигонуклеотиды представляют собой гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения гэпмеры представляют собой 5-10-5 МОЕ гэпмеры, 4-9-4 МОЕ гэпмеры, 4-10-4 МОЕ гэпмеры, 4-10-3 МОЕ гэпмеры, 3-10-4 МОЕ гэпмеры или 3-10-3 МОЕ гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения гэпмеры представляют собой 5-10-5 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-9-4 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-10-4 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-10-3 МОЕ и cEt гэпмеры, 3-10-4 МОЕ и cEt гэпмеры или 3-10-3 МОЕ и cEt гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеозиды антисмысловых олигонуклеотидов соединены фосфоротиоатными межнуклеозидными связями.

В некоторых вариантах реализации изобретения на нуклеиновые основания 27427-27466 SEQ ID NO: 10 нацелены следующие номера ISIS 530993, 530994, 530995, 546251, 546252, 546253, 546254, 546255, 546256, 547410, 547411, 547978, 547979, 547980 и 547981.

В некоторых вариантах реализации изобретения на нуклеиновые основания 27427-27466 SEQ ID NO: 10 нацелены следующие SEQ ID NO: 94, 95, 96, 566, 567, 568, 569, 570, 571, 572, 573, 1597, 1598, 1599 и 1600.

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на нуклеиновые основания 27427-27466 SEQ ID NO: 10, обеспечивают снижение уровней ПКК и/или белка in vitro и/или in vivo по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 31%, по меньшей мере на 32%, по меньшей мере на 33%, по меньшей мере на 34%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 36%, по меньшей мере на 37%, по меньшей мере на 38%, по меньшей мере на 39%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 41%, по меньшей мере на 42%, по меньшей мере на 43%, по меньшей мере на 44%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 46%, по меньшей мере на 47%, по меньшей мере на 48%, по меньшей мере на 49%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 51%, по меньшей мере на 52%, по меньшей мере на 53%, по меньшей мере на 54%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 56%, по меньшей мере на 57%, по меньшей мере на 58%, по меньшей мере на 59%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 61%, по меньшей мере на 62%, по меньшей мере на 63%, по меньшей мере на 64%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 66%, по меньшей мере на 67%, по меньшей мере на 68%, по меньшей мере на 69%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 71%, по меньшей мере на 72%, по меньшей мере на 73%, по меньшей мере на 74%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 76%, по меньшей мере на 77%, по меньшей мере на 78%, по меньшей мере на 79%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 81%, по меньшей мере на 82%, по меньшей мере на 83%, по меньшей мере на 84%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 86%, по меньшей мере на 87%, по меньшей мере на 88%, по меньшей мере на 89%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%.

2. Нуклеиновые основания 33183-33242 SEP ID NO: 10

В некоторых вариантах реализации изобретения сконструированы антисмысловые олигонуклеотиды нацеленные на нуклеиновые основания 33183-33242 SEQ ID NO: 10 (GENBANK, инвентаризационный номер NT_016354.19, укорочена от нуклеинового основания 111693001 до 111730000). В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновые основания 33183-33242 SEQ ID NO: 10 представляют собой гипервариабельный участок. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновые основания 33183-33242 SEQ ID NO: 10 служат мишенью антисмысловых олигонуклеотидов. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмысловых олигонуклеотидов составляет 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нуклеиновых оснований. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые олигонуклеотиды представляют собой гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения гэпмеры представляют собой 5-10-5 МОЕ гэпмеры, 4-9-4 МОЕ гэпмеры, 4-10-4 МОЕ гэпмеры, 4-10-3 МОЕ гэпмеры, 3-10-4 МОЕ гэпмеры или 3-10-3 МОЕ гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения гэпмеры представляют собой 5-10-5 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-9-4 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-10-4 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-10-3 МОЕ и cEt гэпмеры, 3-10-4 МОЕ и cEt гэпмеры или 3-10-3 МОЕ и cEt гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеозиды антисмысловых олигонуклеотидов соединены фосфоротиоатными межнуклеозидными связями.

В некоторых вариантах реализации изобретения на нуклеиновые основания 33183-33242 SEQ ID NO: 10 нацелены следующие номера ISIS 531052, 531053, 531054, 531055, 531056, 531057, 531158, 546343, 546345, 547480, 547481, 547482 и 547483.

В некоторых вариантах реализации изобретения на нуклеиновые основания 33183-33242 SEQ ID NO: 10 нацелены следующие SEQ ID NO: 155, 156, 157, 158, 159, 160, 261, 702, 703, 704, 705 706 и 707.

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на нуклеиновые основания 33183-33242 SEQ ID NO: 10 обеспечивают снижение уровней мРНК и/или белка ПКК in vitro и/или in vivo по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 31%, по меньшей мере на 32%, по меньшей мере на 33%, по меньшей мере на 34%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 36%, по меньшей мере на 37%, по меньшей мере на 38%, по меньшей мере на 39%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 41%, по меньшей мере на 42%, по меньшей мере на 43%, по меньшей мере на 44%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 46%, по меньшей мере на 47%, по меньшей мере на 48%, по меньшей мере на 49%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 51%, по меньшей мере на 52%, по меньшей мере на 53%, по меньшей мере на 54%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 56%, по меньшей мере на 57%, по меньшей мере на 58%, по меньшей мере на 59%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 61%, по меньшей мере на 62%, по меньшей мере на 63%, по меньшей мере на 64%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 66%, по меньшей мере на 67%, по меньшей мере на 68%, по меньшей мере на 69%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 71%, по меньшей мере на 72%, по меньшей мере на 73%, по меньшей мере на 74%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 76%, по меньшей мере на 77%, по меньшей мере на 78%, по меньшей мере на 79%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 81%, по меньшей мере на 82%, по меньшей мере на 83%, по меньшей мере на 84%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 86%, по меньшей мере на 87%, по меньшей мере на 88%, по меньшей мере на 89%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%.

3. Нуклеиновые основания 30570-30610 SEP ID NO: 10

В некоторых вариантах реализации изобретения сконструированы антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на нуклеиновые основания 30570-30610 SEQ ID NO: 10 (GENBANK, инвентаризационный номер NT_016354.19, укорочена от нуклеинового основания 111693001 до 111730000). В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновые основания 30570-30610 SEQ ID NO: 10 представляют собой гипервариабельный участок. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновые основания 30570-30610 SEQ ID NO: 10 служат мишенью антисмысловых олигонуклеотидов. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмысловых олигонуклеотидов составляет 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нуклеиновых оснований. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые олигонуклеотиды представляют собой гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения гэпмеры представляют собой 5-10-5 МОЕ гэпмеры, 4-9-4 МОЕ гэпмеры, 4-10-4 МОЕ гэпмеры, 4-10-3 МОЕ гэпмеры, 3-10-4 МОЕ гэпмеры или 3-10-3 МОЕ гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения гэпмеры представляют собой 5-10-5 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-9-4 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-10-4 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-10-3 МОЕ и cEt гэпмеры, 3-10-4 МОЕ и cEt гэпмеры или 3-10-3 МОЕ и cEt гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеозиды антисмысловых олигонуклеотидов соединены фосфоротиоатными межнуклеозидными связями.

В некоторых вариантах реализации изобретения на нуклеиновые основания 30570-30610 SEQ ID NO: 10 нацелены следующие номера ISIS 531026, 546309, 546310, 546311, 546313, 547453, 547454, 547455,547456, 547457, 547458, 548046, 548047, 548048, 548049 и 548050.

В некоторых вариантах реализации изобретения на нуклеиновые основания 30570-30610 SEQ ID NO: 10 нацелены следующие SEQ ID NO: 129, 652, 653, 654, 655, 656, 657, 658, 659, 660, 661, 1664, 1665, 1666, 1667 и 1668.

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на нуклеиновые основания 30570-30610 SEQ ID NO: 10, обеспечивают снижение уровней мРНК и/или белка ПКК in vitro и/или in vivo по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 31%, по меньшей мере на 32%, по меньшей мере на 33%, по меньшей мере на 34%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 36%, по меньшей мере на 37%, по меньшей мере на 38%, по меньшей мере на 39%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 41%, по меньшей мере на 42%, по меньшей мере на 43%, по меньшей мере на 44%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 46%, по меньшей мере на 47%, по меньшей мере на 48%, по меньшей мере на 49%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 51%, по меньшей мере на 52%, по меньшей мере на 53%, по меньшей мере на 54%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 56%, по меньшей мере на 57%, по меньшей мере на 58%, по меньшей мере на 59%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 61%, по меньшей мере на 62%, по меньшей мере на 63%, по меньшей мере на 64%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 66%, по меньшей мере на 67%, по меньшей мере на 68%, по меньшей мере на 69%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 71%, по меньшей мере на 72%, по меньшей мере на 73%, по меньшей мере на 74%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 76%, по меньшей мере на 77%, по меньшей мере на 78%, по меньшей мере на 79%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 81%, по меньшей мере на 82%, по меньшей мере на 83%, по меньшей мере на 84%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 86%, по меньшей мере на 87%, по меньшей мере на 88%, по меньшей мере на 89%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%.

4. Нуклеиновые основания 27427-27520 SEP ID NO: 10

В некоторых вариантах реализации изобретения сконструированы антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на нуклеиновые основания 27427-27520 SEQ ID NO: 10 (GENBANK, инвентаризационный номер NT_016354.19, укорочена от нуклеинового основания 111693001 до 111730000). В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновые основания 27427-27520 SEQ ID NO: 10 представляют собой гипервариабельный участок. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновые основания 27427-27520 SEQ ID NO: 10 служат мишенью антисмысловых олигонуклеотидов. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмысловых олигонуклеотидов составляет 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нуклеиновых оснований. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые олигонуклеотиды представляют собой гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения гэпмеры представляют собой 5-10-5 МОЕ гэпмеры, 4-9-4 МОЕ гэпмеры, 4-10-4 МОЕ гэпмеры, 4-10-3 МОЕ гэпмеры, 3-10-4 МОЕ гэпмеры или 3-10-3 МОЕ гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения гэпмеры представляют собой 5-10-5 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-9-4 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-10-4 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-10-3 МОЕ и cEt гэпмеры, 3-10-4 МОЕ и cEt гэпмеры или 3-10-3 МОЕ и cEt гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеозиды антисмысловых олигонуклеотидов соединены фосфоротиоатными межнуклеозидными связями.

В некоторых вариантах реализации изобретения на нуклеиновые основания 27427-27520 SEQ ID NO: 10 нацелены следующие номера ISIS 530993-530999, 546251-546256, 546258-546260, 546263, 546265-546268, 547410-547417 и 547978-547992.

В некоторых вариантах реализации изобретения на нуклеиновые основания 27427-27520 SEQ ID NO: 10 нацелены следующие SEQ ID NO: 94-100, 566-587 и 1597-1611.

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на нуклеиновые основания 27427-27520 SEQ ID NO: 10, обеспечивают снижение уровней ПКК и/или белка in vitro и/или in vivo по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 31%, по меньшей мере на 32%, по меньшей мере на 33%, по меньшей мере на 34%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 36%, по меньшей мере на 37%, по меньшей мере на 38%, по меньшей мере на 39%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 41%, по меньшей мере на 42%, по меньшей мере на 43%, по меньшей мере на 44%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 46%, по меньшей мере на 47%, по меньшей мере на 48%, по меньшей мере на 49%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 51%, по меньшей мере на 52%, по меньшей мере на 53%, по меньшей мере на 54%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 56%, по меньшей мере на 57%, по меньшей мере на 58%, по меньшей мере на 59%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 61%, по меньшей мере на 62%, по меньшей мере на 63%, по меньшей мере на 64%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 66%, по меньшей мере на 67%, по меньшей мере на 68%, по меньшей мере на 69%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 71%, по меньшей мере на 72%, по меньшей мере на 73%, по меньшей мере на 74%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 76%, по меньшей мере на 77%, по меньшей мере на 78%, по меньшей мере на 79%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 81%, по меньшей мере на 82%, по меньшей мере на 83%, по меньшей мере на 84%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 86%, по меньшей мере на 87%, по меньшей мере на 88%, по меньшей мере на 89%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%.

5. Нуклеиновые основания 33085-33247 SEP ID NO: 10

В некоторых вариантах реализации изобретения сконструированы антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на нуклеиновые основания 33085-33247 SEQ ID NO: 10 (GENBANK, инвентаризационный номер NT_016354.19, укорочена от нуклеинового основания 111693001 до 111730000). В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновые основания 33085-33247 SEQ ID NO: 10 представляют собой гипервариабельный участок. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновые основания 33085-33247 SEQ ID NO: 10 служат мишенью антисмысловых олигонуклеотидов. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмысловых олигонуклеотидов составляет 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нуклеиновых оснований. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые олигонуклеотиды представляют собой гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения гэпмеры представляют собой 5-10-5 МОЕ гэпмеры, 4-9-4 МОЕ гэпмеры, 4-10-4 МОЕ гэпмеры, 4-10-3 МОЕ гэпмеры, 3-10-4 МОЕ гэпмеры или 3-10-3 МОЕ гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения гэпмеры представляют собой 5-10-5 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-9-4 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-10-4 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-10-3 МОЕ и cEt гэпмеры, 3-10-4 МОЕ и cEt гэпмеры или 3-10-3 МОЕ и cEt гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеозиды антисмысловых олигонуклеотидов соединены фосфоротиоатными межнуклеозидными связями.

В некоторых вариантах реализации изобретения на нуклеиновые основания 33085-33247 SEQ ID NO: 10 нацелены следующие номера ISIS 531041-531158, 546336, 546339, 546340, 546343, 546345, 547474.547483, 547778, 548077-548082 и 548677-548678.

В некоторых вариантах реализации изобретения на нуклеиновые основания 33085-33247 SEQ ID NO: 10 нацелены следующие SEQ ID NO: 144-160, 261, 693-707, 1256, 1320-1325, 2214 и 2215.

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на нуклеиновые основания 33085-33247 SEQ ID NO: 10, обеспечивают снижение уровней ПКК и/или белка in vitro и/или in vivo по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 31%, по меньшей мере на 32%, по меньшей мере на 33%, по меньшей мере на 34%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 36%, по меньшей мере на 37%, по меньшей мере на 38%, по меньшей мере на 39%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 41%, по меньшей мере на 42%, по меньшей мере на 43%, по меньшей мере на 44%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 46%, по меньшей мере на 47%, по меньшей мере на 48%, по меньшей мере на 49%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 51%, по меньшей мере на 52%, по меньшей мере на 53%, по меньшей мере на 54%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 56%, по меньшей мере на 57%, по меньшей мере на 58%, по меньшей мере на 59%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 61%, по меньшей мере на 62%, по меньшей мере на 63%, по меньшей мере на 64%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 66%, по меньшей мере на 67%, по меньшей мере на 68%, по меньшей мере на 69%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 71%, по меньшей мере на 72%, по меньшей мере на 73%, по меньшей мере на 74%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 76%, по меньшей мере на 77%, по меньшей мере на 78%, по меньшей мере на 79%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 81%, по меньшей мере на 82%, по меньшей мере на 83%, по меньшей мере на 84%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 86%, по меньшей мере на 87%, по меньшей мере на 88%, по меньшей мере на 89%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%.

6. Нуклеиновые основания 30475-30639 SEP ID NO: 10

В некоторых вариантах реализации изобретения сконструированы антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на нуклеиновые основания 30475-30639 SEQ ID NO: 10 (GENBANK, инвентаризационный номер NT_016354.19, укорочена от нуклеинового основания 111693001 до 111730000). В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновые основания 30475-30639 SEQ ID NO: 10 представляют собой гипервариабельный участок. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновые основания 30475-30639 SEQ ID NO: 10 служат мишенью антисмысловых олигонуклеотидов. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмысловых олигонуклеотидов составляет 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нуклеиновых оснований. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые олигонуклеотиды представляют собой гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения гэпмеры представляют собой 5-10-5 МОЕ гэпмеры, 4-9-4 МОЕ гэпмеры, 4-10-4 МОЕ гэпмеры, 4-10-3 МОЕ гэпмеры, 3-10-4 МОЕ гэпмеры или 3-10-3 МОЕ гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения гэпмеры представляют собой 5-10-5 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-9-4 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-10-4 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-10-3 МОЕ и cEt гэпмеры, 3-10-4 МОЕ и cEt гэпмеры или 3-10-3 МОЕ и cEt гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеозиды антисмысловых олигонуклеотидов соединены фосфоротиоатными межнуклеозидными связями.

В некоторых вариантах реализации изобретения на нуклеиновые основания 30475-30639 SEQ ID NO: 10 нацелены следующие номера ISIS 531021-531029, 531146, 546297, 546299-546304, 546306-546311, 546313, 546316-546319, 547444-547462, 548031, 548032 и 548034-548056.

В некоторых вариантах реализации изобретения на нуклеиновые основания 30475-30639 SEQ ID NO: 10 нацелены следующие SEQ ID NO: 124-132, 249, 633-669 и 1650-1674.

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на нуклеиновые основания 30475-30639 SEQ ID NO: 10, обеспечивают снижение уровней ПКК и/или белка in vitro и/или in vivo по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 31%, по меньшей мере на 32%, по меньшей мере на 33%, по меньшей мере на 34%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 36%, по меньшей мере на 37%, по меньшей мере на 38%, по меньшей мере на 39%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 41%, по меньшей мере на 42%, по меньшей мере на 43%, по меньшей мере на 44%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 46%, по меньшей мере на 47%, по меньшей мере на 48%, по меньшей мере на 49%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 51%, по меньшей мере на 52%, по меньшей мере на 53%, по меньшей мере на 54%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 56%, по меньшей мере на 57%, по меньшей мере на 58%, по меньшей мере на 59%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 61%, по меньшей мере на 62%, по меньшей мере на 63%, по меньшей мере на 64%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 66%, по меньшей мере на 67%, по меньшей мере на 68%, по меньшей мере на 69%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 71%, по меньшей мере на 72%, по меньшей мере на 73%, по меньшей мере на 74%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 76%, по меньшей мере на 77%, по меньшей мере на 78%, по меньшей мере на 79%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 81%, по меньшей мере на 82%, по меньшей мере на 83%, по меньшей мере на 84%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 86%, по меньшей мере на 87%, по меньшей мере на 88%, по меньшей мере на 89%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%.

7. Нуклеиновые основания 27362-27524 SEQ ID NO: 10

В некоторых вариантах реализации изобретения сконструированы антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на нуклеиновые основания 27362-27524 SEQ ID NO: 10 (GENBANK, инвентаризационный номер NT_016354.19, укорочена от нуклеинового основания 111693001 до 111730000). В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновые основания 27362-27524 соответствуют экзону 9 ПКК (GENBANK, инвентаризационный номер NT_016354.19, укорочена от нуклеинового основания 111693001 до 111730000). В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновые основания 27362-27524 SEQ ID NO: 10 представляют собой гипервариабельный участок. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновые основания 27362-27524 SEQ ID NO: 10 служат мишенью антисмысловых олигонуклеотидов. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмысловых олигонуклеотидов составляет 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нуклеиновых оснований. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые олигонуклеотиды представляют собой гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения гэпмеры представляют собой 5-10-5 МОЕ гэпмеры, 4-9-4 МОЕ гэпмеры, 4-10-4 МОЕ гэпмеры, 4-10-3 МОЕ гэпмеры, 3-10-4 МОЕ гэпмеры или 3-10-3 МОЕ гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения гэпмеры представляют собой 5-10-5 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-9-4 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-10-4 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-10-3 МОЕ и cEt гэпмеры, 3-10-4 МОЕ и cEt гэпмеры или 3-10-3 МОЕ и cEt гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеозиды антисмысловых олигонуклеотидов соединены фосфоротиоатными межнуклеозидными связями.

В некоторых вариантах реализации изобретения на нуклеиновые основания 27361-27524 SEQ ID NO: 10 нацелены следующие номера ISIS 530985-530999, 546244, 546247-546256, 546258-546260, 546263, 546265-546268, 547403-547417, 547723, 547968-547970 и 547972-547992.

В некоторых вариантах реализации изобретения на нуклеиновые основания 27361-27524 SEQ ID NO: 10 нацелены следующие SEQ ID NO: 86-100, 554-587, 1217 и 1588-1611.

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на нуклеиновые основания 27362-27524 SEQ ID NO: 10, обеспечивают снижение уровней ПКК и/или белка in vitro и/или in vivo по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 31%, по меньшей мере на 32%, по меньшей мере на 33%, по меньшей мере на 34%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 36%, по меньшей мере на 37%, по меньшей мере на 38%, по меньшей мере на 39%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 41%, по меньшей мере на 42%, по меньшей мере на 43%, по меньшей мере на 44%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 46%, по меньшей мере на 47%, по меньшей мере на 48%, по меньшей мере на 49%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 51%, по меньшей мере на 52%, по меньшей мере на 53%, по меньшей мере на 54%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 56%, по меньшей мере на 57%, по меньшей мере на 58%, по меньшей мере на 59%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 61%, по меньшей мере на 62%, по меньшей мере на 63%, по меньшей мере на 64%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 66%, по меньшей мере на 67%, по меньшей мере на 68%, по меньшей мере на 69%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 71%, по меньшей мере на 72%, по меньшей мере на 73%, по меньшей мере на 74%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 76%, по меньшей мере на 77%, по меньшей мере на 78%, по меньшей мере на 79%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 81%, по меньшей мере на 82%, по меньшей мере на 83%, по меньшей мере на 84%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 86%, по меньшей мере на 87%, по меньшей мере на 88%, по меньшей мере на 89%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%.

8. Нуклеиновые основания 33101-33240 SEP ID NO: 10

В некоторых вариантах реализации изобретения сконструированы антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на нуклеиновые основания 33101-33240 SEQ ID NO: 10 (GENBANK, инвентаризационный номер NT_016354.19, укорочена от нуклеинового основания 111693001 до 111730000). В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновые основания 33101-33240 соответствуют экзону 14 ПКК (GENBANK, инвентаризационный номер NT_016354.19, укорочена от нуклеинового основания 111693001 до 111730000). В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновые основания 33101-33240 SEQ ID NO: 10 представляют собой гипервариабельный участок. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновые основания 33101-33240 SEQ ID NO: 10 служат мишенью антисмысловых олигонуклеотидов. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмысловых олигонуклеотидов составляет 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нуклеиновых оснований. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые олигонуклеотиды представляют собой гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения гэпмеры представляют собой 5-10-5 МОЕ гэпмеры, 4-9-4 МОЕ гэпмеры, 4-10-4 МОЕ гэпмеры, 4-10-3 МОЕ гэпмеры, 3-10-4 МОЕ гэпмеры или 3-10-3 МОЕ гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения гэпмеры представляют собой 5-10-5 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-9-4 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-10-4 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-10-3 МОЕ и cEt гэпмеры, 3-10-4 МОЕ и cEt гэпмеры или 3-10-3 МОЕ и cEt гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеозиды антисмысловых олигонуклеотидов соединены фосфоротиоатными межнуклеозидными связями.

В некоторых вариантах реализации изобретения на нуклеиновые основания 33101-33240 SEQ ID NO: 10 нацелены следующие номера ISIS 531041-531158, 546336, 546339, 546340, 546343, 546345, 547474-547483, 548077-548082 и 548678-548678.

В некоторых вариантах реализации изобретения на нуклеиновые основания 33101-33240 SEQ ID NO: 10 нацелены следующие SEQ ID NO: 144-160, 261, 693-707, 1320-1325 и 2215.

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на нуклеиновые основания 33101-33240 SEQ ID NO: 10, обеспечивают снижение уровней ПКК и/или белка in vitro и/или in vivo по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 31%, по меньшей мере на 32%, по меньшей мере на 33%, по меньшей мере на 34%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 36%, по меньшей мере на 37%, по меньшей мере на 38%, по меньшей мере на 39%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 41%, по меньшей мере на 42%, по меньшей мере на 43%, по меньшей мере на 44%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 46%, по меньшей мере на 47%, по меньшей мере на 48%, по меньшей мере на 49%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 51%, по меньшей мере на 52%, по меньшей мере на 53%, по меньшей мере на 54%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 56%, по меньшей мере на 57%, по меньшей мере на 58%, по меньшей мере на 59%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 61%, по меньшей мере на 62%, по меньшей мере на 63%, по меньшей мере на 64%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 66%, по меньшей мере на 67%, по меньшей мере на 68%, по меньшей мере на 69%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 71%, по меньшей мере на 72%, по меньшей мере на 73%, по меньшей мере на 74%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 76%, по меньшей мере на 77%, по меньшей мере на 78%, по меньшей мере на 79%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 81%, по меньшей мере на 82%, по меньшей мере на 83%, по меньшей мере на 84%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 86%, по меньшей мере на 87%, по меньшей мере на 88%, по меньшей мере на 89%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%.

9. Нуклеиновые основания 30463-30638 SEP ID NO: 10

В некоторых вариантах реализации изобретения сконструированы антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на нуклеиновые основания 30463-30638 SEQ ID NO: 10 (GENBANK, инвентаризационный номер NT_016354.19, укорочена от нуклеинового основания 111693001 до 111730000). В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновые основания 30463-30638 соответствуют экзону 12 ПКК (GENBANK, инвентаризационный номер NT_016354.19, укорочена от нуклеинового основания 111693001 до 111730000). В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновые основания 30463-30638 SEQ ID NO: 10 представляют собой гипервариабельный участок. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеиновые основания 30463-30638 SEQ ID NO: 10 служат мишенью антисмысловых олигонуклеотидов. В некоторых вариантах реализации изобретения длина антисмысловых олигонуклеотидов составляет 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нуклеиновых оснований. В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые олигонуклеотиды представляют собой гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения гэпмеры представляют собой 5-10-5 МОЕ гэпмеры, 4-9-4 МОЕ гэпмеры, 4-10-4 МОЕ гэпмеры, 4-10-3 МОЕ гэпмеры, 3-10-4 МОЕ гэпмеры или 3-10-3 МОЕ гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения гэпмеры представляют собой 5-10-5 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-9-4 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-10-4 МОЕ и cEt гэпмеры, 4-10-3 МОЕ и cEt гэпмеры, 3-10-4 МОЕ и cEt гэпмеры или 3-10-3 МОЕ и cEt гэпмеры. В некоторых вариантах реализации изобретения нуклеозиды антисмысловых олигонуклеотидов соединены фосфоротиоатными межнуклеозидными связями.

В некоторых вариантах реализации изобретения на нуклеиновые основания 30463-30638 SEQ ID NO: 10 нацелены следующие номера ISIS 531021-531029, 531146, 546297, 546299-546304, 546306-546311, 546313, 546316-546319, 547444-547462, 548031, 548032 и 548034-548056.

В некоторых вариантах реализации изобретения на нуклеиновые основания 30463-30638 SEQ ID NO: 10 нацелены следующие SEQ ID NO: 124-132, 249, 633-669 и 1650-1674.

В некоторых вариантах реализации изобретения антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на нуклеиновые основания 30463-30638 SEQ ID NO: 10, обеспечивают снижение уровней ПКК и/или белка in vitro и/или in vivo по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 31%, по меньшей мере на 32%, по меньшей мере на 33%, по меньшей мере на 34%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 36%, по меньшей мере на 37%, по меньшей мере на 38%, по меньшей мере на 39%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 41%, по меньшей мере на 42%, по меньшей мере на 43%, по меньшей мере на 44%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 46%, по меньшей мере на 47%, по меньшей мере на 48%, по меньшей мере на 49%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 51%, по меньшей мере на 52%, по меньшей мере на 53%, по меньшей мере на 54%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 56%, по меньшей мере на 57%, по меньшей мере на 58%, по меньшей мере на 59%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 61%, по меньшей мере на 62%, по меньшей мере на 63%, по меньшей мере на 64%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 66%, по меньшей мере на 67%, по меньшей мере на 68%, по меньшей мере на 69%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 71%, по меньшей мере на 72%, по меньшей мере на 73%, по меньшей мере на 74%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 76%, по меньшей мере на 77%, по меньшей мере на 78%, по меньшей мере на 79%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 81%, по меньшей мере на 82%, по меньшей мере на 83%, по меньшей мере на 84%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 86%, по меньшей мере на 87%, по меньшей мере на 88%, по меньшей мере на 89%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%.

ПРИМЕРЫ

Неограничивающее раскрытие и включение посредством ссылки

Хотя некоторые соединения, композиции и способы, описанные в данном описании, описаны конкретно в соответствии с некоторыми вариантами реализации изобретения, следующие примеры служат только целям иллюстрации соединений, описанных в данном описании, и не предназначены для ограничения. Каждая из ссылок, цитируемых в настоящей заявке, включена в данное описание посредством ссылки в полном объеме.

Пример 1: Антисмысловое ингибирование ПКК человека в клетках антисмысловыми олигонуклеотидами с 2'-МОЕ модификациями сахара

Были сконструированы антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на нуклеиновую кислоту ПКК, и было протестировано их влияние на мРНК ПКК in vitro. Для скрининга применяли клетки HepaRG™, которые представляют собой терминально дифференцированные печеночные клетки, полученные от линии печеночных клеток-прекурсоров человека, и сохраняют многие характеристики первичных гепатоцитов человека (Lubberstedt М. et al., J. Pharmacol. Toxicol. Methods 2011 63: 59-68).

Химерные антисмысловые олигонуклеотиды в таблицах ниже были сконструированы как 5-10-5 МОЕ гэпмеры. Длина гэпмеров составляет 20 нуклеозидов, причем центральный гэп-сегмент содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов и фланкирован сегментами крыла в 5' направлении и 3' направлении, содержащими по пять нуклеозидов каждый. Каждый нуклеозид в 5' сегменте крыла и каждый нуклеозид в 3' сегменте крыла содержит 2'-O-метоксиэтил модификацию. Межнуклеозидные связи в каждом гэпмере представляют собой фосфоротиоатные связи. Все остатки цитозина в каждом гэпмере представляют собой 5-метилцитозин. "Старт-сайт" указывает на 5'-крайний нуклеозид, на который нацелен гэпмер в последовательности гена человека. "Стоп-сайт" указывает на 3'-крайний нуклеозид, на который нацелен гэпмер в последовательности гена человека. Каждый гэпмер, перечисленный в таблицах ниже, нацелен на мРНК ПКК человека, обозначенную в данном описании как SEQ ID NO: 1 (GENBANK, инвентаризационный номер нМ_000892.3) или геномную последовательность ПКК человека, обозначенную в данном описании как SEQ ID NO: 10 (GENBANK, инвентаризационный номер NT_016354.19, укорочена от нуклеотида 111693001 до 111730000). «Нет» указывает на то, что антисмысловой олигонуклеотид не нацелен на данную конкретную последовательность гена.

Культивированные клетки HepaRG™ с плотностью 20000 клеток на лунку трансфицируют 3000 нМ антисмыслового олигонуклеотида с применением электропорации. После периода обработки длительностью около 24 часов, РНК выделяют из клеток, и уровни мРНК ПКК измеряют количественной ПЦР в реальном времени. Набор зонда праймера RTS3454 человека (прямая последовательность , обозначенная в данном описании как SEQ ID NO: 20; обратная последовательность , обозначенная в данном описании как SEQ ID NO: 21; последовательность зонда , обозначенная в данном описании как SEQ ID NO: 22) применяют для измерения уровней мРНК. Уровни мРНК ПКК корректируют в соответствии с общим содержанием РНК, согласно данным RIBOGREEN®. Антисмысловые олигонуклеотиды тестируют в сериях экспериментов со сходными условиями культивирования. Результаты каждого эксперимента представлены в отдельных таблицах ниже. Результаты представлены как процент ингибирования ПКК, относительно необработанных контрольных клеток.

Пример 2: Антисмысловое ингибирование ПКК человека в клетках HepaRG™ антисмысловыми олигонуклеотидами с 2'-МОЕ модификациями сахара

Были сконструированы дополнительные антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на нуклеиновую кислоту ПКК, и было протестировано их влияние на мРНК ПКК in vitro.

Химерные антисмысловые олигонуклеотиды в таблицах ниже были сконструированы как 5-10-5 МОЕ гэпмеры, 4-9-4 МОЕ гэпмеры, 4-10-4 МОЕ гэпмеры, 4-10-3 МОЕ гэпмеры, 3-10-4 МОЕ гэпмеры или 3-10-3 МОЕ гэпмеры. Длина 5-10-5 МОЕ гэпмеров составляет 20 нуклеозидов, причем центральный гэп-сегмент содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов и фланкирован сегментами крыла в 5' направлении и 3' направлении, содержащими по пять нуклеозидов каждый. Длина 4-9-4 МОЕ гэпмеров составляет 17 нуклеозидов, причем центральный гэп-сегмент содержит девять 2'-дезоксинуклеозидов и фланкирован сегментами крыла на 5' направлении и 3' направлении, содержащими по четыре нуклеозида каждый. Длина 4-10-4 МОЕ гэпмеров составляет 18 нуклеозидов, причем центральный гэп-сегмент содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов и фланкирован сегментами крыла на 5' направлении и 3' направлении, содержащими по четыре нуклеозида каждый. Длина 4-10-3 МОЕ гэпмеров составляет 17 нуклеозидов, причем центральный гэп-сегмент содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов и фланкирован сегментами крыла на 5' направлении и 3' направлении, содержащими по четыре и три нуклеозида, соответственно. Длина 3-10-4 МОЕ гэпмеров составляет 17 нуклеозидов, причем центральный гэп-сегмент содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов и фланкирован сегментами крыла на 5' направлении и 3' направлении, содержащими по три и четыре нуклеозида, соответственно. Длина 3-10-3 МОЕ гэпмеров составляет 16 нуклеозидов, причем центральный гэп-сегмент содержит десять 2'-дезоксинуклеозидов и фланкирован сегментами крыла на 5' направлении и 3' направлении, содержащими по три нуклеозида каждый. Каждый нуклеозид в 5' сегменте крыла и каждый нуклеозид в 3' сегменте крыла содержит 2'-О-метоксиэтил модификацию. Межнуклеозидные связи в каждом гэпмере представляют собой фосфоротиоатные связи. Все остатки цитозина в каждом гэпмере представляют собой 5-метилцитозин. "Старт-сайт" указывает на 5'-крайний нуклеозид, на который нацелен гэпмер в последовательности гена человека. "Стоп-сайт" указывает на 3'-крайний нуклеозид, на который нацелен гэпмер в последовательности гена человека. Каждый гэпмер, перечисленный в таблицах ниже, нацелен на SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 10. «Нет» указывает на то, что антисмысловой олигонуклеотид не нацелен на данную конкретную последовательность гена.

Культивированные клетки HepaRG™ с плотностью 20000 клеток на лунку трансфицируют 5000 нМ антисмыслового олигонуклеотида с применением электропорации. После периода обработки длительностью около 24 часов, РНК выделяют из клеток, и уровни мРНК ПКК измеряют количественной ПЦР в реальном времени. Набор зонда праймера RTS3454 человека применяют для измерения уровней мРНК. Уровни мРНК ПКК корректируют в соответствии с общим содержанием РНК, согласно данным RIBOGREEN®. Антисмысловые олигонуклеотиды тестируют в сериях экспериментов со сходными условиями культивирования. Результаты каждого эксперимента представлены в отдельных таблицах ниже. Результаты представлены как процент ингибирования ПКК, относительно необработанных контрольных клеток.

Пример 3: Антисмысловое ингибирование ПКК человека в клетках HepaRG™ антисмысловыми олигонуклеотидами с МОЕ, дезокси и cEt модификациями сахара

Сконструированы дополнительные антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на нуклеиновую кислоту ПКК, и протестировано их влияние на мРНК ПКК in vitro.

Химерные антисмысловые олигонуклеотиды в таблицах ниже были сконструированы как дезокси, МОЕ и cEt гэпмеры. Длина гэпмеров составляет 16 нуклеозидов, причем нуклеозид содержит модификацию сахара МОЕ, модификацию сахара cEt или дезокси модификацию. В колонке «Химия» описаны модификации сахара для каждого олигонуклеотида. "k" указывает на модификацию сахара cEt; число показывает количество дезоксинуклеозидов; в противоположном случае, "d" показывает дезоксинуклеозид; и "е" указывает на модификацию 2'-O-метоксиэтил. Межнуклеозидные связи в каждом гэпмере представляют собой фосфоротиоатные связи. Все остатки цитозина в каждом гэпмере представляют собой 5-метилцитозин. "Старт-сайт" указывает на 5'-крайний нуклеозид, на который нацелен гэпмер в последовательности гена человека. "Стоп-сайт" указывает на 3'-крайний нуклеозид, на который нацелен гэпмер в последовательности гена человека. Каждый гэпмер, перечисленный в таблицах ниже, нацелен на мРНК ПКК человека, обозначенную в данном описании как SEQ ID NO: 1, или на геномную последовательность ПКК человека, обозначенную в данном описании как SEQ ID NO: 10. «Нет» указывает на то, что антисмысловой олигонуклеотид не нацелен на данную конкретную последовательность гена.

Культивированные клетки HepaRG™ с плотностью 20000 клеток на лунку трансфицируют 1000 нМ антисмыслового олигонуклеотида с применением электропорации. После периода обработки длительностью около 24 часов, РНК выделяют из клеток, и уровни мРНК ПКК измеряют количественной ПЦР в реальном времени. Набор зонда праймера RTS3454 человека применяют для измерения уровней мРНК. В данный анализ также включают ISIS 531231. Уровни мРНК ПКК корректируют в соответствии с общим содержанием РНК, согласно данным RIBOGREEN®. Антисмысловые олигонуклеотиды тестируют в сериях экспериментов со сходными условиями культивирования. Результаты каждого эксперимента представлены в отдельных таблицах ниже. Результаты представлены как процент ингибирования ПКК, относительно необработанных контрольных клеток.

Пример 4: Дозозависимое антисмысловое ингибирование ПКК человека в клетках HepaRG™

Гэпмеры из описанных выше исследований, демонстрирующие значительное ингибирование мРНК ПКК in vitro, были отобраны и протестированы в различных дозах на клетках HepaRG™.

Клетки помещают на планшет с плотностью 20000 клеток на лунку и трансфицируют с применением электропорации 0,12 мкМ, 0,37 мкМ, 1,11 мкМ, 3,33 мкМ и 10,00 мкМ антисмысловых олигонуклеотидов. После периода обработки около 16 часов, РНК выделяют из клеток и уровни мРНК ПКК измеряют количественной ПЦР в реальном времени. Набор зонда праймера ПКК человека RTS3454 применяют для измерения уровней мРНК. Уровни мРНК ПКК корректируют в соответствии с общим содержанием РНК по данным RIBOGREEN®. Антисмысловые олигонуклеотиды тестируют в сериях экспериментов со сходными условиями культивирования. Результаты каждого эксперимента представлены в отдельных таблицах ниже. Результаты представлены как процент ингибирования ПКК, относительно необработанных контрольных клеток.

Для каждого олигонуклеотида дополнительно приведена концентрация, обеспечивающая ингибирование на уровне 50% от максимального (IC50). Уровни мРНК ПКК были существенно снижены дозозависимым образом в обработанных антисмысловым олигонуклеотидом клетках.

Пример 5: Дозозависимое антисмысловое ингибирование ПКК человека в клетках HepaRG™

Гэпмеры из описанных выше исследований, демонстрирующие значительное ингибирование мРНК ПКК in vitro, были отобраны и протестированы в различных дозах на клетках HepaRG™. Клетки помещают на планшет с плотностью 20000 клеток на лунку и трансфицируют 0,19 мкМ, 0,56 мкМ, 1,67 мкМ и 5,00 мкМ антисмысловых олигонуклеотидов с применением электропорации. После периода обработки около 16 часов, РНК выделяют из клеток и уровни мРНК ПКК измеряют количественной ПЦР в реальном времени. Набор зонда праймера ПКК человека RTS3454 применяют для измерения уровней мРНК. Уровни мРНК ПКК корректируют в соответствии с общим содержанием РНК по данным RIBOGREEN®. Антисмысловые олигонуклеотиды тестируют в сериях экспериментов со сходными условиями культивирования. Результаты каждого эксперимента представлены в отдельных таблицах ниже. Результаты представлены как процент ингибирования ПКК, относительно необработанных контрольных клеток. "Н/о" указывает на то, что измерения для конкретного антисмыслового олигонуклеотида и данной конкретной дозы не проводились.

Для каждого олигонуклеотида дополнительно приведена концентрация, обеспечивающая ингибирование на уровне 50% от максимального (IC50). Уровни мРНК ПКК были существенно снижены дозозависимым образом в обработанных антисмысловым олигонуклеотидом клетках.

Пример 6: Дозозависимое антисмысловое ингибирование ПКК человека в клетках HepaRG™

Гэпмеры из описанных выше исследований, демонстрирующие значительное ингибирование мРНК ПКК in vitro, были отобраны и протестированы в различных дозах на клетках HepaRG™. Клетки помещают на планшет с плотностью 20000 клеток на лунку и трансфицируют 0,11 мкМ, 0,33 мкМ, 1,00 мкМ и 3,00 мкМ антисмысловых олигонуклеотидов с применением электропорации. После периода обработки около 16 часов, РНК выделяют из клеток и уровни мРНК ПКК измеряют количественной ПЦР в реальном времени. Набор зонда праймера ПКК человека RTS3454 применяют для измерения уровней мРНК. Уровни мРНК ПКК корректируют в соответствии с общим содержанием РНК по данным RIBOGREEN®. Антисмысловые олигонуклеотиды тестируют в сериях экспериментов со сходными условиями культивирования. Результаты каждого эксперимента представлены в отдельных таблицах ниже. Результаты представлены как процент ингибирования ПКК, относительно необработанных контрольных клеток. "Н/о" указывает на то, что измерения для конкретного антисмыслового олигонуклеотида и данной конкретной дозы не проводились.

Для каждого олигонуклеотида дополнительно приведена концентрация, обеспечивающая ингибирование на уровне 50% от максимального (IC50). Уровни мРНК ПКК были существенно снижены дозозависимым образом в обработанных антисмысловым олигонуклеотидом клетках.

Пример 7: Эффективность антисмысловых олигонуклеотидов, нацеленных на ПКК человека, у трансгенных мышей

Трансгенных мышей, несущих фрагмент последовательности гена KLKB1 человека размером 37390 пар оснований (хромосома 4: положение 187148672-187179625, инвентаризационный номер: NC_000004.11), лечили антисмысловыми олигонуклеотидами ISIS, отобранными в описанных выше исследованиях, и их эффективность оценивали на данной модели.

Лечение

Группам трансгенных мышей 2 раза в неделю на протяжении 3 недель вводили подкожной инъекцией 2,5 мг/кг/неделю, 5,0 мг/кг/неделю, 10 мг/кг/неделю или 20 мг/кг/неделю ISIS 546232, ISIS 546251, ISIS 546254, ISIS 546343, ISIS 546828, ISIS 547455, ISIS 547457, ISIS 547927 и ISIS 548048. Одной группе трансгенных мышей 2 раза в неделю на протяжении 3 недель вводили подкожной инъекцией PBS. Мышей умерщвляли эвтаназией через 48 часов после введения последней дозы; органы и плазму собирали для дальнейшего анализа.

Анализ РНК

Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на снижение уровня мишени, РНК извлекали из ткани печени для анализа ПКК человека ПЦР в реальном времени. Результаты представлены как процент ингибирования мРНК ПКК, относительно контроля PBS. Как показано в Табл. 48, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами ISIS приводило к существенному снижению мРНК ПКК, по сравнению с контролем PBS.

Анализ белка

Уровни белка ПКК в плазме были оценены во всех группах. Результаты представлены как процент ингибирования белка ПКК, относительно контроля PBS. Как показано в Табл. 49, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами ISIS приводило к существенному снижению уровней белка ПКК, по сравнению с контролем PBS.

Пример 8: Влияние антисмысловых олигонуклеотидов ISIS, нацеленных на ПКК человека, у яванских макак

Яванских макак лечили антисмысловыми олигонуклеотидами ISIS, отобранными в исследованиях, описанных выше. Была оценена эффективность и переносимость антисмысловых олигонуклеотидов. Протестированные человеческие антисмысловые олигонуклеотиды перекрестно реагируют с геномной последовательностью макаки резус (GENBANK, инвентаризационный номер NW_001118167.1, укороченная от нуклеотида 2358000 до 2391000 и обозначенная в данном описании как SEQ ID NO: 18). Старт-сайт мишени каждого олигонуклеотида к SEQ ID NO: 18 представлен в Табл. 50. "Рассогласование" указывает на количество нуклеотидов в олигонуклеотиде, рассогласованных с последовательностью макаки резус. Чем выше комплементарность между человеческим олигонуклеотидом и последовательностью макаки резус, тем вероятнее, что человеческий олигонуклеотид может перекрестно реагировать с последовательностью макак резус. "Н/с" указывает на то, что олигонуклеотид содержит более чем 3 рассогласованных основания с последовательностью гена макаки резус.

Лечение

До исследования обезьян содержали на карантине в течение 30-дневного периода, в течение которого общее состояние здоровья животные оценивали ежедневно. Возраст обезьян составлял 2-4 года, и масса тела - от 2 до 4 кг. Десять групп, по четыре выбранных случайным образом самца яванских макак в каждой, получали подкожной инъекцией олигонуклеотидом ISIS или PBS. Раствор PBS или олигонуклеотиды ISIS в дозе 40 мг/кг вводили сначала в режиме нагрузки, состоящем из четырех доз в течение первой недели исследования (дни 1, 3, 5, и 7), и зам в поддерживающем режиме, состоящем из еженедельного введения, начиная с 14-го дня (недели 2-13). Подкожные инъекции осуществляли со сдвигом по часовой стрелке в 4 места на спине; по одному месту на дозу. Места инъекции были очерчены татуировкой при седации кетамином и отстояли друг от друга по меньшей мере на 3 см.

В течение периода исследования состояние обезьян оценивали по меньшей мере один раз в день на предмет признаков заболевания или нарушений. О любом животном с более чем мгновенной или слабой болью или нарушением в результате лечения, травмы или заболевания, немедленно сообщали ответственному ветеринару и директору исследования. Любое животное в плохом состоянии или возможном предсмертном состоянии идентифицировали для дальнейшего мониторинга и возможной эвтаназии. Например, две обезьяны, получавшие ISIS 547445, были подвергнуты эвтаназии вследствие подавленного поведения, положения на боку, отсутствия реакции на стимулы и ослабленного дыхания. Протоколы, описанные в Примере, были одобрены Институциональным комитетом по содержанию и использованию животных (ИКСИЖ).

Снижение уровня мишени

Анализ РНК

В 87-й или 88-й день, через 48 часов после введения последней дозы, извлекали РНК из ткани печени для анализа ПКК ПЦР в реальном времени с применением набора зонд праймера RTS3455 (прямая последовательность CCTGTGTGGAGGGTCACTCA, обозначенная в данном описании как SEQ ID NO: 23; обратная последовательность CCACTATAGATGCGCCAAACATC, обозначенная в данном описании как SEQ ID NO: 24; последовательность зонда CCCACTGCTTTGATGGGCTTCCC, обозначенная в данном описании как SEQ ID NO: 25). Результаты нормализовали к конститутивному гену, Циклофилину. Результаты представлены как процент ингибирования мРНК ПКК, относительно контроля PBS. Как проиллюстрировано в Табл. 51, лечение антисмысловыми олигонуклеотидами ISIS приводило к значительному снижению уровня мРНК ПКК, по сравнению с контролем PBS.

Анализ белка

Приблизительно 0,9 мл крови отбирали каждый раз у всех доступных животных до введения дозы, на 17-й день, 31-й день, 45-й день, 59-й день и 73-й день и помещали в пробирки, содержащие 3,2% натрия цитрата. Пробирки центрифугировали (3000 об/мин в течение 10 минут при комнатной температуре), чтобы получить плазму. Уровни белка ПКК измеряли в плазме методом ТИФА. Результаты представлены в Табл. 52 и выражены, как процент ингибирования, по сравнению с контрольными уровнями PBS. Результаты показывают, что олигонуклеотид ISIS значительно снижал уровни белка ПКК.

Исследование переносимости

Функция печени

Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на печеночную функцию, обезьяны голодали на протяжении ночи. Образцы крови объемом приблизительно 1,5 мл отбирали во всех группах исследования. Кровь собирали в пробирки без антикоагулянта для отделения сыворотки. Пробирки выдерживали при комнатной температуре в течение по меньшей мере 90 минут, а затем центрифугировали при 3000 об/мин в течение 10 минут. Уровни различных маркеров функции печени измеряли с помощью химического анализатора Toshiba 120FR NEO (Toshiba Co., Япония). Результаты представлены в Табл. 53 и показывают, что антисмысловые олигонуклеотиды не оказывали влияния на функцию печени за пределами ожидаемого для антисмысловых олигонуклеотидов диапазона.

Гематология

Чтобы оценить влияние олигонуклеотидов ISIS на гематологические параметры яванских макак, образцы крови объемом около 1,2 мл крови отбирали до введения дозы и на 87-й день или 88-й день у каждого из доступных животных исследования в пробирки, содержащие K2-ЭДТА. Образцы анализировали для подсчета красных кровяных клеток (ККК), подсчета белых кровяных клеток (БКК), подсчета тромбоцитов, определения содержания гемоглобина и гематокрита с помощью гематологического анализатора ADVIA2120i (SIEMENS, США). Данные представлены в Табл. 54.

Данные показывают, что лечение большинством олигонуклеотидов не вызывало каких-либо изменений гематологических параметров за пределами ожидаемого диапазона для антисмысловых нуклеотидов в этой дозе.

Почечная функция

Для оценки влияния олигонуклеотидов ISIS на почечную функцию, обезьяны голодали на протяжении ночи. Образцы крови объемом приблизительно 1,5 мл отбирали во всех группах исследования. Кровь собирали в пробирки без антикоагулянта для отделения сыворотки. Пробирки выдерживали при комнатной температуре в течение по меньшей мере 90 минут, а затем центрифугировали при 3000 об/мин в течение 10 минут. Уровни АМК и креатинина измеряли с помощью химического анализатора Toshiba 120FR NEO (Toshiba Co., Япония). Результаты представлены в Табл. 55, выраженные в мг/дл. Данные химического анализа плазмы показывают, что большинство олигонуклеотидов ISIS не оказывало какого-либо влияния на почечную функцию за пределами ожидаемого для антисмысловых олигонуклеотидов диапазона. Конкретно, лечение ISIS 546254 хорошо переносилось с точки зрения почечной функции обезьян.

Кроме того, почечную функцию оценивали посредством анализа мочи. Свежую мочу всех животных собирали, используя чистую кастрюлю для клеток на мокром льду. Пищу исключали на протяжении ночи накануне сбора свежей мочи, но вода была доступна. Уровни общего белка и креатинина измеряли с помощью автоматизированного химического анализатора Toshiba 120FR NEO (Toshiba Co., Япония), и вычисляли соотношение белка к креатинину. Результаты представлены в Табл. 56.

Анализ уровня С-реактивного белка

Для оценки провоспалительного влияния олигонуклеотидов ISIS у яванских макак, обезьяны голодали на протяжении ночи. Образцы крови объемом приблизительно 1,5 мл отбирали во всех группах исследования. Кровь собирали в пробирки без антикоагулянта для отделения сыворотки. Пробирки выдерживали при комнатной температуре в течение по меньшей мере 90 минут, а затем центрифугировали при 3000 об/мин в течение 10 минут. Уровни С-реактивного белка (CRP), который синтезируется в печени и служит маркером воспаления, измеряли с помощью химического анализатора Toshiba 120FR NEO (Toshiba Co., Япония). Дополнительно, подобным образом измеряли уровень комплемента С3, и данные представлены как процент от базовых значений. Результаты представлены в Табл. 57 и показывают, что лечение олигонуклеотидами ISIS не вызывало воспаления у обезьян.

Пример 9: Антисмысловое ингибирование мРНК ПКК мыши в первичных гепатоцитах мыши

Сконструированы антисмысловые олигонуклеотиды, нацеленные на нуклеиновую кислоту ПКК мыши, и протестировано их влияние на мРНК ПКК in vitro. Первичные гепатоциты мыши, культивируемые с плотностью 10000 клеток на лунку, трансфицируют 12,5 нМ, 25,0 нМ, 50,0 нМ, 100,0 нМ и 200,0 нМ антисмыслового олигонуклеотида с применением реактива Cytofectin. После периода обработки около 24 часов, РНК выделяют из клеток и уровни мРНК ПКК мыши измеряют количественной ПЦР в реальном времени с применением набора зонда праймера RTS3313 мыши (прямая последовательность TGCCTGCTGTTCAGCTTTCTC, обозначенная в данном описании как SEQ ID NO: 2228; обратная последовательность TGGCAAAGTCCCTGTAATGCT, обозначенная в данном описании как SEQ ID NO: 2229; последовательность зонда CGTGACTCCACCCAAAGAGACAAATAAACG, обозначенная в данном описании как SEQ ID NO: 2230). Уровни мРНК ПКК корректируют в соответствии с общим содержанием РНК, по данным RIBOGREEN.

Химерные антисмысловые олигонуклеотиды сконструированы как 5-10-5 МОЕ гэпмеры. Длина гэпмеров составляет 20 нуклеотидов, причем центральный гэп-сегмент состоит из десяти 2'-дезоксинуклеозидов, и с обеих сторон (в 5' и 3' направлениях) фланкирован крыльями, содержащими по 5 нуклеозидов каждое. Каждый нуклеозид в 5' сегменте крыла и каждый нуклеозид в 3' сегменте крыла содержит 2'-O-метоксиэтил модификацию. Межнуклеозидные связи в каждом гэпмере представляют собой фосфоротиоатные связи. Все остатки цитозина в каждом гэпмере представляют собой 5-метилцитозин. Результаты демонстрируют, что уровни мРНК ПКК значительно снижались дозозависимым образом.

В одном конкретном примере, ISIS 482584 (GGCATATTGGTTTTTGGAAT; SEQ ID NO: 2244) снижал уровень мРНК ПКК дозозависимым образом, обеспечивая концентрацию, которая дает ингибирование на уровне 50% от максимального (IC50) 84 нМ (см. Табл. 58). ISIS 482584 нацелен на SEQ ID NO: 11 (GENBANK, инвентаризационный номер NM_008455.2), и нацелен на старт-сайт мишени 1586 и стоп-сайт мишени 1605. "Старт-сайт мишени" указывает 5'-крайний нуклеотид, на который нацелен гэпмер. "Стоп-сайт" мишени указывает 3'-крайний нуклеотид, на который нацелен гэпмер.

Пример 10: Антисмысловое ингибирование мРНК ПКК у мышей BALB/c

Было протестировано влияние ISIS 482584 на мРНК ПКК мыши in vivo.

Лечение

Каждую из шести групп мышей-самцов BALB/c лечили 2,5 мг/кг, 5,0 мг/кг, 10,0 мг/кг, 20,0 мг/кг, 40,0 мг/кг или 80,0 мг/кг ISIS 482584, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель (еженедельные дозы 5,0 мг/кг, 10,0 мг/кг, 20,0 мг/кг, 40,0 мг/кг, 80,0 мг/кг или 160,0 мг/кг). Контрольную группу мышей BALB/c лечили PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель. Через два дня после введения последней дозы антисмыслового олигонуклеотида или PBS, мышей из всех групп анестезировали 150 мг/кг кетамина в смеси с 10 мг/кг ксилазина, которые вводили внутрибрюшинной инъекцией. Печень извлекали для анализа РНК.

Анализ РНК

РНК извлекали из ткани печени для анализа ПКК ПЦР в реальном времени. Уровни мРНК ПКК измеряли с применением набора зонда праймера мыши (прямая последовательность ACAAGTGCATTTTACAGACCAGAGTAC, обозначенная в данном описании как SEQ ID NO: 2231; обратная последовательность GGTTGTCCGCTGACTTTATGCT, обозначенная в данном описании как SEQ ID NO: 2232; последовательность зонда AAGCACAGTGCAAGCGGAACACCC, обозначенная в данном описании как SEQ ID NO: 2233). Результаты представлены как процент ингибирования ПКК относительно контроля PBS. Как проиллюстрировано в Табл. 59, лечение ISIS 482584 приводило к значительному дозозависимому снижению мРНК ПКК, по сравнению с контролем PBS.

Анализ белка

Плазму собирали в пробирки, содержащие натрия цитрат в качестве антикоагулянта. Образцы анализировали на НДС-полиакриламидном геле с градиентом 4-12% (Invitrogen), с последующим иммуноблоттингом с антителом против ПКК мыши (R&D Systems). Блоты инкубировали со вторичными, мечеными флуорофором антителами (LI-COR) и визуализировали на приборе Odyssey Imager (LI-COR). Результаты представлены как процент ингибирования ПКК относительно контроля PBS. Как проиллюстрировано в Табл. 60, лечение ISIS 482584 приводило к значительному дозозависимому снижению белка ПКК плазмы, по сравнению с контролем PBS.

н/д = данные отсутствуют

Пример 11: Влияние антисмыслового ингибирования ПКК мыши на модели ангионевротического отека у мышей in vivo

Наследственный ангионевротический отек (НАО) характеризуется местным опуханием и повышением сосудистой проницаемости в подкожных тканях (Morgan, В.Р. N. Engl. J. Med. 363: 581-83, 2010). Это вызвано дефицитом ингибитора С1, белка системы комплемента. Две модели на мышах применялись в данном исследовании, включая хорошо изученную мышиную модель дефицита С1-INH и модель индуцированного каптоприлом отека, в обеих из которых возникает сосудистая проницаемость, отличительный признак НАО. Купирование сосудистой проницаемости сопровождается повышенными уровнями высокомолекулярного кининогена (ВМК) в плазме.

В первой модели, ангионевротический отек индуцируют лечением каптоприлом, известным антигипертензивным агентом, который повышает сосудистую проницаемость у мышей и воспроизводит патогенез наследственного ангионевротического отека.

Во второй модели, ангионевротический отек индуцируют лечением ISIS 461756, антисмысловым олигонуклеотидом, который нацелен на мРНК мышиного ингибитора С1, что увеличивает сосудистую проницаемость у мышей и воспроизводит патологию наследственного ангионевротического отека. ISIS 461756 (SEQ ID NO: 2245; AAAGTGGTTGATACCCTGGG) представляет собой 5-10-5 МОЕ гэпмер, нацеленный на нуклеозиды 1730-1749 NM_009776.3 (SEQ ID NO: 2243).

Влияние НОЕ-140 и ISIS 482584, антисмыслового олигонуклеотида, ингибирующего ПКК, было оценено на моделях индуцированной каптоприлом и ISIS 461756 сосудистой проницаемости у мышей. Некоторые из групп мышей лечили НОЕ-140, селективным антагонистом рецептора брадикинина В2, который купирует вазодилатацию и сосудистую проницаемость (Cruden and Newby, Expert Opin. Pharmacol. 9: 2383-90, 2008). Других мышей лечили ISIS 482584, который препятствует экспрессии мРНК ПКК. Влияние лечения НОЕ-140 сравнивали с влиянием лечения ISIS 482584.

Лечение

Различные группы лечения для данного испытания представлены в Табл. 61.

Группа 1 состояла из 4 мышей C57BL/6J-Tyrc-2J, получавших PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 4 недель. Другого лечения для Группы 1, которая служила контрольной группой для измерения базового уровня сосудистой проницаемости, не проводилось.

Группа 2 состояла из 8 мышей C57BL/6J-Tyrc-2J, получавших PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 4 недель. В конце лечения, мышам вводили внутрибрюшинно 20 мкг каптоприла. Группа 2 служила контрольной группой PBS для индуцированной каптоприлом сосудистой проницаемости.

Группа 3 состояла из 8 мышей C57BL/6J-Tyrc-2J, получавших PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 4 недель. На 14-й день мыши получали 50 мг/кг антисмыслового олигонуклеотида, нацеленного на ингибитор C1, ISIS 461756, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 2 недель. В конце периода лечения мышам вводили внутрибрюшинно 20 мкг каптоприла. Группа 3 служила контрольной группой PBS для индуцированной каптоприлом и ISIS 461756 сосудистой проницаемости.

Группа 4 состояла из 8 мышей C57BL/6J-Tyrc-2J m, получавших PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 4 недель. На 14-й день мыши получали 50 мг/кг антисмыслового олигонуклеотида, нацеленного на ингибитор C1, ISIS 461756, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 2 недель. В конце периода лечения мышам вводили внутрибрюшинно 20 мкг каптоприла. Затем мышам вводили, также внутрибрюшинно, 30 мкг НОЕ-140. Группа 4 служила положительным контролем ингибирования сосудистой проницаемости с помощью НОЕ-140.

Группа 5 состояла из 8 мышей C57BL/6J-Tyrc-2J, получавших 40 мг/кг контрольного олигонуклеотида ISIS 141923, 5-10-5 МОЕ гэпмера без известной мишени у мышей (CCTTCCCTGAAGGTTCCTCC; SEQ ID NO: 2246), который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 4 недель. На 14-й день мыши получали 50 мг/кг антисмыслового олигонуклеотида, нацеленного на ингибитор C1, ISIS 461756, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 2 недель. В конце периода лечения мышам вводили внутрибрюшинно 20 мкг каптоприла. Группа 5 служила контрольной группой для индуцированной каптоприлом и ISIS 461756 сосудистой проницаемости.

Группа 6 состояла из 8 мышей C57BL/6J-Tyrc-2J, получавших 40 мг/кг ISIS 482584, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 4 недель. В конце периода лечения мышам вводили внутрибрюшинно 20 мкг каптоприла. Группа 6 служила экспериментальной группой лечения для исследования влияния АСО ПКК на индуцированную каптоприлом сосудистую проницаемость.

Группа 7 состояла из 8 мышей C57BL/6J-Tyrc-2J, получавших 40 мг/кг ISIS 482584, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 4 недель. На 14-й день мыши получали 50 мг/кг антисмыслового олигонуклеотида, нацеленного на ингибитор C1, ISIS 461756, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 2 недель. В конце периода лечения мышам вводили внутрибрюшинно 20 мкг каптоприла. Группа 7 служила экспериментальной группой лечения для исследования влияния АСО ПКК на индуцированную каптоприлом и ISIS 461756 сосудистую проницаемость.

Далее всем группам вводили инъекционно 30 мг/кг раствора Evans Blue в хвостовую вену. Мышей умерщвляли через 30 минут после введения раствора Evans Blue, и извлекали ободочную кишку, стопы, уши и кишечник. Образцы крови получали пункцией сердца.

Количественное определение сосудистой проницаемости

Собранные ткани стоп, ободочной кишки, ушей и кишечника по отдельности помещали на ночь в раствор формамида для выщелачивания красителя Evans Blue. Раствор формамида, содержащий ткань уха и стопы, нагревали до 55°С и оставляли на ночь. Затем интенсивность окрашивания раствора формамида с инфундировавшим красителем измеряли на длине волны OD600нм, и результаты приведены в Табл. 62. Мыши, демонстрирующие проявления ангионевротического отека, захватывают больше красителя и, таким образом, демонстрируют более высокие значения OD.

Как представлено в Табл. 62, лечение ISIS 482584 предупреждает возникновение сосудистой проницаемости у мышей, получавших каптоприл (Группа 6), и у мышей, получавших каптоприл и ISIS 461756 (Группа 7), по сравнению с соответствующими контрольными группами PBS (Группы 2 и 3). Кроме того, показатели сосудистой проницаемости у мышей из Групп 6 и 7 были снижены в большинстве тканей, по сравнению с мышами, леченными контрольным олигонуклеотидом, ISIS 141923 (Группа 5), где сосудистая проницаемость была индуцирована каптоприлом и ISIS 461756. Показатели сосудистой проницаемости в тканях ободочной кишки и стоп обоих групп лечения (Группы 6 и 7) были сравнимы с базовыми уровнями, которые наблюдались у мышей, получавших только PBS (Группа 1). Уменьшение сосудистой проницаемости у мышей, получавших ISIS 482584, было сравнимо с наблюдаемым у мышей, получавших антагонист рецептора брадикинина 2, НОЕ 140, который служил в данном испытании положительным контролем.

Таким образом, антисмысловое ингибирование мРНК ПКК может быть благоприятным для лечения и предотвращения сосудистой проницаемости, которая является симптоматической при НАО.

Количественное определение высокомолекулярного кининогена (ВМК)

Количественное определение Вестерн-блотингом ВМК из образцов крови проиллюстрировано на Фиг. 1.

Как проиллюстрировано на Фиг. 1, образцы от Групп 1 и 2 содержат низкие уровни ВМК по сравнению с Группами 6 и 7, указывающими, что сосудистая проницаемость изменена в Группах 6 и 7. Кроме того, как проиллюстрировано на Фиг. 1, в образцах Групп 1 и 2 повышено содержание продукта расщепления ВМК, по сравнению с Группами 6 и 7. Таким образом, отсутствие ВМК вызвано расщеплением ВМК под действием ПКК до продуктов расщепления (в том числе, брадикинина и НКа).

Пример 12: Влияние антисмыслового ингибирования ПКК мыши на базовую проницаемость и индуцированную каптоприлом проницаемость у мышей in vivo

Базовая проницаемость представляет собой уровень сосудистой проницаемости, присутствующий в тканях наивных, не получавших лечения мышей. Было оценено влияние ISIS 482584 с точки зрения предотвращения сосудистой проницаемости, базовой или индуцированной каптоприлом.

Лечение

Различные группы лечения для данного испытания представлены в Табл. 63.

Группа 1 состояла из 8 мышей и получала PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 4 недель. Другого лечения для Группы 1, которая служила контрольной группой для измерения базовых уровней сосудистой проницаемости, не проводилось.

Группа 2 состояла из 8 мышей и получала PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 4 недель. В конце периода лечения мышам вводили внутрибрюшинно 20 мкг каптоприла. Группа 2 служила группой отрицательного контроля для индуцированной каптоприлом сосудистой проницаемости.

Группа 3 состояла из 8 мышей и получала PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 4 недель. В конце периода лечения мышам вводили внутрибрюшинно 30 мкг НОЕ-140. Группа 3 служила группой положительного контроля для ингибирования базовой сосудистой проницаемости.

Группа 4 состояла из 8 мышей и получала PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 4 недель. В конце периода лечения мышам вводили внутрибрюшинно 20 мкг каптоприла. Мышам также внутрибрюшинно вводили 30 мкг НОЕ-140. Группа 4 служила положительным контролем ингибирования индуцированной каптоприлом сосудистой проницаемости.

Группа 5 состояла из 8 мышей и получала 40 мг/кг ISIS 482584, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 4 недель. Группа 5 служила экспериментальной группой лечения для исследования влияния ISIS 482584 на базовую сосудистую проницаемость.

Группа 6 состояла из 8 мышей и получала 40 мг/кг ISIS 482584, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 4 недель. В конце периода лечения мышам вводили внутрибрюшинно 20 мкг каптоприла. Группа 6 служила экспериментальной группой лечения для исследования влияния ISIS 482584 на индуцированную каптоприлом сосудистую проницаемость.

Далее всем группам вводили инъекционно 30 мг/кг раствора Evans Blue. Мышей умерщвляли через 30 минут после введения раствора Evans Blue, и извлекали ободочную кишку, стопы, уши и кишечник.

Количественное определение сосудистой проницаемости

Собранные ткани стоп, ободочной кишки, ушей и кишечника по отдельности помещали на ночь в раствор формамида для выщелачивания красителя Evans Blue. Раствор формамида, содержащий ткань уха и стопы, нагревали до 55°С и оставляли на ночь. Затем интенсивность окрашивания раствора формамида с инфундировавшим красителем измеряли на длине волны OD600нм, и результаты приведены в Табл. 64. Мыши, демонстрирующие проявления ангионевротического отека, захватывают больше красителя и, таким образом, демонстрируют более высокие значения OD.

Как представлено в Табл. 64, мыши, леченные ISIS 482584, продемонстрировали сниженную базовую сосудистую проницаемость, по сравнению с контролем PBS (Группа 5 против Группы 1). Уменьшение базовой сосудистой проницаемости при лечении ISIS 482584 было сравнимо с вызванным лечением НОЕ-140 (Группа 3, которая служила положительным контролем). Мыши, леченные ISIS 482584, также продемонстрировали снижение индуцированной каптоприлом сосудистой проницаемости в большинстве тканей, по сравнению с контролем PBS (Группа 6 против Группы 2). Уменьшение индуцированной каптоприлом сосудистой проницаемости при лечении ISIS 482584 было сравнимо с вызванным лечением НОЕ-140 (Группа 4, которая служила положительным контролем).

Пример 13: Дозозависимое влияние антисмыслового ингибирования ПКК мыши на индуцированную каптоприлом сосудистую проницаемость

Было оценено влияние различных доз ISIS 482584 на индуцированную каптоприлом сосудистую проницаемость.

Лечение

Различные группы лечения для данного испытания представлены в Табл. 65.

Группа 1 состояла из 4 мышей и получала PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель. Другого лечения для Группы 1, которая служила контрольной группой для измерения базовых уровней сосудистой проницаемости, не проводилось.

Группа 2 состояла из 8 мышей и получала PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель. В конце периода лечения мышам вводили внутрибрюшинно 20 мкг каптоприла. Группа 2 служила контрольной группой для индуцированной каптоприлом сосудистой проницаемости.

Группа 3 состояла из 4 мышей и получала PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель. В конце периода лечения мышам вводили внутрибрюшинно 20 мкг каптоприла. Мышам также внутрибрюшинно вводили 30 мкг Icatibant (HOE-140). Группа 4 служила положительным контролем ингибирования индуцированной каптоприлом сосудистой проницаемости.

Группы 4, 5, 6, 7, 8, и 9 состояли из 8 мышей каждая и получали 2,5 мг/кг, 5 мг/кг, 10 мг/кг, 20 мг/кг, 40 мг/кг или 80 мг/кг ISIS 482584 (что соответствовало 5 мг/кг, 10 мг/кг, 20 мг/кг, 40 мг/кг, 80 мг/кг или 160 мг/кг в неделю), соответственно, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель. В конце периода лечения мышам всех групп внутрибрюшинно вводили 20 мкг каптоприла. Группы 4-9 служили экспериментальными группами лечения для исследования влияния различных доз ISIS 482584 на индуцированную каптоприлом сосудистую проницаемость.

Далее всем группам вводили инъекционно 30 мг/кг раствора Evans Blue в хвостовую вену. Мышей умерщвляли через 30 минут после введения раствора Evans Blue, и извлекали ободочную кишку, стопы, уши и кишечник. Образцы крови получали пункцией сердца.

Количественное определение сосудистой проницаемости

Собранные ткани помещали на ночь в раствор формамида для выщелачивания красителя Evans Blue. Раствор формамида, содержащий ткань уха и стопы, нагревали до 55°С и оставляли на ночь. Затем интенсивность окрашивания раствора формамида с инфундировавшим красителем измеряли на длине волны OD600нм, и результаты приведены в Табл. 66. Мыши, демонстрирующие проявления ангионевротического отека, захватывают больше красителя и, таким образом, демонстрируют более высокие значения OD.

Как представлено в Табл. 66, у мышей, леченных более высокими дозами ISIS 482584 (Группы 4, 5 и 6), уровни индуцированной каптоприлом сосудистой проницаемости были снижены, по сравнению с соответствующей контрольной группой PBS (Группа 2). Уменьшение сосудистой проницаемости у мышей из этих групп лечения (Группы 4 и 5) было сравнимым с уровнями базовой сосудистой проницаемости (как проиллюстрировано для Группы 1), а также с показателями мышей, получавших НОЕ-140 (Группа 3).

Количественное определение сосудистого вытока

Кровь, полученную пункцией сердца, немедленно смешивали с 3-кратным объемом ледяного этанола. Раствор центрифугировали при 15000 g в течение 20 минут при 4°С, чтобы удалить обломки клеток и осажденные белки плазмы. Далее этанольные экстракты дополнительно очищали ультрафильтрацией через НОММ фильтр 10 кДа. После этого, интенсивность окрашивания экстрагированного этанолом раствора плазмы измеряли на длине волны OD600нм. Результаты представлены в Табл. 67, как процент возрастания или уменьшения значений OD относительно показателей контрольной Группы 1 PBS. Ожидалось, что в ткани мышей, демонстрирующих проявления ангионевротического отека, будет вытекать больше красителя из плазмы и, таким образом, значения OD будут более низкими, тогда как группы лечения могут демонстрировать более высокие значения OD за счет уменьшения сосудистого вытока. Мыши, леченные 160 мг/кг/неделю и 80 мг/кг/неделю ISIS 482584 (Группы 4 и 5), продемонстрировали меньший сосудистый выток, по сравнению с отрицательным контролем PBS, получавшим каптоприл (Группа 2). Результаты Групп 4 и 5 были сравнимы с положительным контролем, получавшим НОЕ-140 (Группа 3).

Пример 14: Дозозависимое влияние антисмыслового ингибирования ПКК мыши на базовую проницаемость у мышей

Было оценено влияние различных доз ISIS 482584 на базовую сосудистую проницаемость.

Лечение

Различные группы лечения для данного испытания представлены в Табл. 68.

Группа 1 состояла из 8 мышей и получала PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель. Другого лечения для Группы 1, которая служила контрольной группой для измерения базовых уровней сосудистой проницаемости, не проводилось.

Группа 2 состояла из 4 мышей и получала PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель. В конце периода лечения мышам вводили внутрибрюшинно 30 мкг НОЕ-140. Группа 2 служила положительным контролем для ингибирования базовой сосудистой проницаемости.

Группы 3, 4, 5, 6, 7 и 8 состояли из 8 мышей каждая и получали 2,5 мг/кг, 5 мг/кг, 10 мг/кг, 20 мг/кг, 40 мг/кг или 80 мг/кг ISIS 482584 (что соответствовало 5 мг/кг, 10 мг/кг, 20 мг/кг, 40 мг/кг, 80 мг/кг или 160 мг/кг в неделю), соответственно, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель. Группы 4-9 служили экспериментальными группами лечения для исследования влияния различных доз ISIS 482584 на базовую сосудистую проницаемость.

Далее всем группам вводили инъекционно 30 мг/кг раствора Evans Blue в хвостовую вену. Мышей умерщвляли через 30 минут после введения раствора Evans Blue, извлекали ободочную кишку, стопы и уши и исследовали на предмет нарушений проницаемости. Образцы крови получали пункцией сердца.

Количественное определение сосудистой проницаемости

Собранные ткани стоп, ободочной кишки и ушей помещали на ночь в раствор формамида для выщелачивания красителя Evans Blue. Раствор формамида, содержащий ткань уха и стопы, нагревали до 55°С и оставляли на ночь. Затем интенсивность окрашивания раствора формамида с инфундировавшим красителем измеряли на длине волны OD600нм, и результаты приведены в Табл. 69. Более высокие значения OD связаны с более высокими уровнями проницаемости.

Как представлено в Табл. 10, большинство тканей мышей, леченных ISIS 482584 во всех дозах (Группы 3-8), продемонстрировали сниженную базовую сосудистую проницаемость, по сравнению с контролем PBS (Группа 1). Уменьшение базовой сосудистой проницаемости леченных олигонуклеотидом ISIS групп было сравнимым с показателями в группе положительного контроля, леченной НОЕ-140 (Группа 2).

Количественное определение сосудистого вытока

Кровь, полученную пункцией сердца, немедленно смешивали с 3-кратным объемом ледяного этанола. Раствор центрифугировали при 15000 g в течение 20 минут при 4°С, чтобы удалить обломки клеток и осажденные белки плазмы. Далее этанольные экстракты дополнительно очищали ультрафильтрацией через НОММ фильтр 10 кДа. После этого, интенсивность окрашивания экстрагированного этанолом раствора плазмы измеряли на длине волны OD600нм. Результаты представлены в Табл. 70, как процент возрастания или уменьшения значений OD относительно показателей контрольной Группы 1 PBS. Ожидалось, что группы лечения могут демонстрировать более высокие значения OD за счет уменьшения сосудистого вытока. Все мыши в леченных олигонуклеотидом ISIS группах продемонстрировали значительно уменьшенный сосудистый выток, по сравнению с отрицательным контролем PBS.

Количественное определение высокомолекулярного кининогена (ВМК)

Количественное определение Вестерн-блотингом ВМК из образцов крови проиллюстрировано на Фиг. 2 и в Табл. 71 и 72.

Как проиллюстрировано в Табл. 71, в Группах, леченных 482584, наблюдались более высокие уровни ВМК, по сравнению с PBS контролем, возрастающие дозозависимым образом. Лечение антисмысловым олигонуклеотидом против ПКК приводит к стабилизации ВМК. Таким образом, сосудистая проницаемость снижалась в леченных ISIS 482584 группах дозозависимым образом. Как проиллюстрировано в Табл. 72, в Группах, леченных ISIS 482584, наблюдается более низкий уровень продукта расщепления ВМК, по сравнению с контролем PBS, снижающийся дозозависимым образом. Таким образом, снижение уровня ВМК вызвано расщеплением ВМК под действием ПКК до продуктов расщепления (в том числе, брадикинина и НКа). Данные представлены в Единицах интенсивности, по результатам измерения денситометром.

Пример 15: Комбинированная терапия антисмысловыми олигонуклеотидами, нацеленными на ПКК и Фактор 12, при индуцированной каптоприлом сосудистой проницаемости у мышей

Мышей лечили различными дозами ISIS 410944, 5-10-5 МОЕ гэпмера, нацеленного на Фактор 12 (GCATGGGACAGAGATGGTGC; SEQ ID NO: 2247), и ISIS 482584 в модели индуцированной каптоприлом сосудистой проницаемости.

Лечение

Различные группы лечения для данного испытания представлены в Табл. 73.

Группа 1 состояла из 4 мышей и получала PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель. Другого лечения для Группы 1, которая служила контрольной группой для измерения базовых уровней сосудистой проницаемости, не проводилось.

Группа 2 состояла из 8 мышей и получала PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель. В конце периода лечения мышам вводили внутрибрюшинно 20 мкг каптоприла. Группа 2 служила контрольной группой для индуцированной каптоприлом сосудистой проницаемости.

Группа 3 состояла из 4 мышей и получала PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель. В конце периода лечения мышам вводили внутрибрюшинно 20 мкг каптоприла. Мышам также внутрибрюшинно вводили 30 мкг НОЕ-140. Группа 3 служила группой положительного контроля для ингибирования индуцированной каптоприлом сосудистой проницаемости.

Группы 4, 5, 6, 7, и 8 состояли из 8 мышей каждая и получали 2,5 мг/кг, 5 мг/кг, 10 мг/кг, 20 мг/кг или 40 мг/кг ISIS 482584 и ISIS 410944 (что соответствовало 5 мг/кг, 10 мг/кг, 20 мг/кг, 40 мг/кг или 80 мг/кг в неделю), соответственно, каждый из которых вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель. В конце периода лечения мышам всех групп внутрибрюшинно вводили 20 мкг каптоприла. Группы 4-8 служили экспериментальными группами лечения для исследования влияния ISIS 410944 и ISIS 482584 на индуцированную каптоприлом сосудистую проницаемость.

Далее всем группам вводили инъекционно 30 мг/кг раствора Evans Blue в хвостовую вену. Мышей умерщвляли через 30 минут после введения раствора Evans Blue, и извлекали ободочную кишку, стопы, уши и кишечник.

Количественное определение сосудистой проницаемости

Собранные ткани стоп, ободочной кишки и ушей помещали на ночь в раствор формамида для выщелачивания красителя Evans Blue. Раствор формамида, содержащий ткань уха и стопы, нагревали до 55°С и оставляли на ночь. Затем интенсивность окрашивания раствора формамида с инфундировавшим красителем измеряли на длине волны OD600нм, и результаты приведены в Табл. 74. Более высокие значения OD связаны с более высокими уровнями проницаемости.

Как представлено в Табл. 74, большинство тканей мышей, леченных комбинацией ISIS 482584 и ISIS 410944 во всех дозах, продемонстрировали сниженную сосудистую проницаемость (Группы 3-8), по сравнению с контролем PBS (Группа 1). Уменьшение сосудистой проницаемости в леченных олигонуклеотидами ISIS группах было сравнимым с показателями базового контроля PBS (Группа 1), а также группы положительного контроля, леченной НОЕ 140 (Группа 2). Комбинация антисмысловых олигонуклеотидов против ПКК и Фактора 12 приводит к синергетическому уменьшению проницаемости. Как и ожидалось, наблюдалось также соответствующее синергетическое уменьшение сосудистого вытока.

Пример 16: Комбинированная терапия антисмысловыми олигонуклеотидами, нацеленными на ПКК и Фактор 12, при базовой сосудистой проницаемости у мышей

Мышей лечили различными дозами ISIS 410944, антисмыслового олигонуклеотида, нацеленного на Фактор 12, и ISIS 482584 в модели базовой сосудистой проницаемости.

Лечение

Различные группы лечения для данного испытания представлены в Табл. 75.

Группа 1 состояла из 8 мышей и получала PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель. Другого лечения для Группы 1, которая служила контрольной группой для измерения базовых уровней сосудистой проницаемости, не проводилось.

Группа 2 состояла из 4 мышей и получала PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель. В конце периода лечения мышам вводили внутрибрюшинно 30 мкг НОЕ-140. Группа 2 служила положительным контролем для ингибирования базовой сосудистой проницаемости.

Группы 3, 4, 5, 6, и 7 состояли из 8 мышей каждая и получали 2,5 мг/кг, 5 мг/кг, 10 мг/кг, 20 мг/кг или 40 мг/кг ISIS 482584 и ISIS 410944 (что соответствовало 5 мг/кг, 10 мг/кг, 20 мг/кг, 40 мг/кг или 80 мг/кг в неделю), соответственно, каждый из которых вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель. Группы 3-7 служили экспериментальными группами лечения для исследования влияния ISIS 410944 и ISIS 482584 на базовую сосудистую проницаемость.

Далее всем группам вводили инъекционно 30 мг/кг раствора Evans Blue в хвостовую вену. Мышей умерщвляли через 30 минут после введения раствора Evans Blue, и извлекали ободочную кишку, стопы, уши и кишечник.

Количественное определение сосудистой проницаемости

Собранные ткани стоп, ободочной кишки, кишечника и ушей помещали на ночь в раствор формамида для выщелачивания красителя Evans Blue. Раствор формамида, содержащий ткань уха и стопы, нагревали до 55°С и оставляли на ночь. Затем интенсивность окрашивания раствора формамида с инфундировавшим красителем измеряли на длине волны OD600нм, и результаты приведены в Табл. 76. Более высокие значения OD связаны с более высокими уровнями проницаемости.

Как представлено в Табл. 76, большинство тканей мышей, леченных комбинацией ISIS 482584 и ISIS 410944 во всех дозах (Группы 2-7), продемонстрировало уменьшение сосудистой проницаемости, по сравнению с контролем PBS (Группа 1). Уменьшение сосудистой проницаемости леченных олигонуклеотидами ISIS групп было сравнимым с показателями, наблюдающимися в группе положительного контроля, леченной НОЕ 140 (Группа 2). Комбинация анти смысловых олигонуклеотидов против ПКК и Фактора 12 приводит к синергетическому уменьшению проницаемости. Как и ожидалось, наблюдалось также соответствующее синергетическое уменьшение сосудистого вытока.

Пример 17: Ингибирование активации белка Фактора 12 ISIS 482584

Было оценено влияние антисмыслового ингибирования мРНК ПКК на активацию белка Фактора 12.

Лечение

Различные группы лечения для данного испытания представлены в Табл. 77.

Группа 1 состояла из 8 мышей и получала PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель. Другого лечения для Группы 1, которая служила контрольной группой для измерения активации Фактора 12, не проводилось.

Группы 2, 3, 4, 5 и 6 состояли из 8 мышей каждая и получали 2,5 мг/кг, 5 мг/кг, 10 мг/кг, 20 мг/кг или 40 мг/кг ISIS 482584 (что соответствовало 5 мг/кг, 10 мг/кг, 20 мг/кг, 40 мг/кг или 80 мг/кг в неделю), соответственно, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель. Группы 2-6 служили группами лечения для измерения влияния ISIS 482584 на активацию Фактора 12.

В конце периода лечения плазму мышей собирали для амидолитического анализа Фактора 12 в плазме, базирующегося на Факторе 12а Spectrozyme®.

Анализ активации Фактора 12 в плазме

Плазму (5 мкл) добавляли к 85 мкл PBS, содержащего 1 мкг/мл декстрана сульфата (500 кДа) в 96-луночном полипропиленовом микропланшете, и раствор инкубировали в течение 5 минут при комнатной температуре. Добавляли Spectrozyme® FXIIa (10 мкл 2 мМ раствора) и 0,2 мМ раствор KALLISTOP™, и кинетику поглощения измеряли на длине волны 405 нм. Активацию Фактора 12 измеряли в линейной фазе аккумуляции поглощения. Результаты представлены в Табл. 78, как процент относительно активации Фактора 12, измеренной в контрольной выборке PBS. Как можно видеть из Табл. 78, ингибирование ПКК ISIS 482584 приводит к уменьшению активации Фактора 12 его субстратом, подразумевая, что указанный ПКК требуется для надлежащей активации фактора 12.

Пример 18: Влияние антисмыслового ингибирования ПКК мыши на индуцированную антисмысловым олигонуклеотидом C1-INH сосудистую проницаемость in vivo Сосудистая проницаемость, индуцированная антисмысловым олигонуклеотидом ISIS 461756, который нацелен на ингибитор мРНК мышиного С1, увеличивает сосудистую проницаемость у мышей и воспроизводит патогенез наследственного ангионевротического отека. Было оценено влияние ISIS 482584 на данной модели.

Лечение

Одна группа из 8 мышей получала 40 мг/кг ISIS 482584, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель (еженедельная доза 80 мг/кг). Вторая группа из 8 мышей получала 40 мг/кг контрольного олигонуклеотида, ISIS 141923, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель (еженедельная доза 80 мг/кг). Третья группа из 8 мышей получала PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель. На 14-й день все группы получали 12,5 мг/кг ISIS 461756, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель (еженедельная доза 25 мг/кг). Контрольная группа мышей получала PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель, но не получала ISIS 461756.

В конце периода лечения всем группам вводили инъекционно 30 мг/кг раствора Evans Blue в хвостовую вену. Мышей умерщвляли через 30 минут после введения раствора Evans Blue, и извлекали ободочную кишку, стопы, уши и кишечник. Кроме того, извлекали печень для анализа РНК.

Анализ РНК

РНК выделяют из печени для анализа ОТ-ПЦР мРНК С1-INH и ПКК. Набор зонда праймера для C1-INH, представляет собой RTS3218 (прямая последовательность GAGTCCCCCAGAGCCTACAGT, обозначенная в данном описании как SEQ ID NO: 2234; обратная последовательность TGTCATTTGTTATTGTGATGGCTACA, обозначенная в данном описании как SEQ ID NO: 2235; последовательность зонда CTGCCCTCTACCTGGCCAACAACCA, обозначенная в данном описании как SEQ ID NO: 2236). Набор зонда праймера для ПКК представляет собой RTS3287 (прямая последовательность ACAAGTGCATTTTACAGACCAGAGTAC, обозначенная в данном описании как SEQ ID NO: 2237; обратная последовательность GGTTGTCCGCTGACTTTATGCT, обозначенная в данном описании как SEQ ID NO: 2238;

последовательность зонда AAGCACAGTGCAAGCGGAACACCC, обозначенная в данном описании как SEQ ID NO: 2239). Результаты представлены в Табл. 79 как процент ингибирования, по сравнению с контролем PBS, нелеченным ISIS 461756. Данные показывают, что ISIS 461756 значительно снижает экспрессию мРНК С1-INH, и что лечение ISIS 482584 значительно снижает экспрессию ПКК.

Количественное определение сосудистой проницаемости

Собранные ткани стоп, ободочной кишки и кишечника помещали на ночь в раствор формамида для выщелачивания красителя Evans Blue. Раствор формамида, содержащий ткань стопы, нагревали до 55°С и оставляли на ночь. Затем интенсивность окрашивания раствора формамида с инфундировавшим красителем измеряли на длине волны OD600нм. Данные приведены в Табл. 80 как процент увеличения или уменьшения, по сравнению с контролем PBS, не леченным ISIS 461756. Данные показывают, что лечение ISIS 482584 предупреждало возникновение сосудистой проницаемости, индуцированной ISIS 461756.

Пример 19: Влияние антисмыслового ингибирования ПКК мыши in vivo на модели индуцированного FeCl3 тромбоза нижней полой вены

ISIS 482584, который продемонстрировал значительное ингибирование ПКК in vitro и in vivo, оценивали на модели индуцированного FeCl3 тромбоза нижней полой вены у мышей.

Лечение

Три группы по 8 мышей-самцов BALB/c получали 10 мг/кг, 20 мг/кг или 40 мг/кг ISIS 482584, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель (еженедельные дозы 20 мг/кг, 40 мг/кг или 80 мг/кг). Две контрольные группы по 12 мышей BALB/c в каждой, получали PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель. Через два дня после введения последней дозы антисмыслового олигонуклеотида или PBS, мышей из всех групп анестезировали 150 мг/кг кетамина в смеси с 10 мг/кг ксилазина, которые вводили внутрибрюшинной инъекцией. Образование тромба индуцировали FeCl3 во всех группах анестезированных мышей, кроме первой контрольной группы.

У мышей в группах FeCl3 образование тромба вызвали наложением кусочка фильтровальной бумаги (2×4 мм), предварительно насыщенной 10% раствором FeCl3, непосредственно на полую вену. После трехминутного контакта фильтровальную бумагу удаляли. Через 30 минут после наложения фильтровальной бумаги, фиксированный участок вены, содержащий тромб, иссекали для анализа тромбоцитов. Печень извлекали для анализа РНК.

Количественное определение состава тромбоцитов

Количественное определение ПЦР в реальном времени фактора-4 тромбоцитов (PF-4) применяли для определения количества тромбоцитов в полой вене как индикатор образования тромба. Уровни мРНК PF-4 измеряли с применением набора зонда праймера mPF4_LTS_00086 мыши (прямая последовательность AGACCCATTTCCTCAAGGTAGAACT, обозначенная в данном описании как SEQ ID NO: 2240; обратная последовательность CGCAGCGACGCTCATG, обозначенная в данном описании как SEQ ID NO: 2241; последовательность зонда TCTTTGGGTCCAGTGGCACCCTCTT, обозначенная в данном описании как SEQ ID NO: 2242). Результаты представлены как процент PF-4 у леченных олигонуклеотидом ISIS мышей, по сравнению с двумя леченными контрольными группами, которые получали PBS. Как проиллюстрировано в Табл. 81, лечение ISIS 482584 приводило к значительному снижению уровня PF-4, по сравнению с контролем PBS. Таким образом, снижение уровня ПКК соединением, предложенным в данном описании, является пригодным для подавления образования тромба.

Пример 20: Влияние антисмыслового ингибирования ПКК мыши в испытании с хвостовым кровотечением in vivo

Хвостовое кровотечение измеряли, чтобы определить, вызывает ли лечение ISIS 482584 избыточное кровотечение или кровоизлияние у мышей.

Лечение

Группы из 10 мышей-самцов BALB/c получали 10 мг/кг, 20 мг/кг или 40 мг/кг ISIS 482584, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель (еженедельные дозы 20 мг/кг, 40 мг/кг или 80 мг/кг). Контрольная группа из 8 мышей BALB/c получала PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель.

Испытание с хвостовым кровотечением

Через два дня после введения последней дозы олигонуклеотида ISIS или PBS, мышей помещали в камере для испытания с хвостовым кровотечением. Мышей в камере анестезировали изофлураном. Затем небольшой кусочек хвоста (около 4 мм от кончика) отрезали стерильными ножницами. Обрезанный хвост немедленно помещали в пробирку фирмы Falcon емкостью 15 мл, содержащую около 10 мл буферизованного 0,9% раствора NaCl, нагретого до 37°С. Кровь собирали на протяжении 40 минут. Заполненные раствором натрия хлорида пробирки взвешивали до и после кровотечения. Результаты приведены в Табл. 82.

Лечение ISIS 482584 не оказывало значительного влияния на кровотечение. Эти данные свидетельствуют о низком геморрагическом потенциале соединений, предложенных в данном описании. Указанные данные, вместе с результатами, предложенными в Примере 19, наводят на мысль о пригодности ингибирования ПКК соединениями, описанными в данном описании, для обеспечения антитромботической активности без сопутствующего риска кровотечения.

Пример 21: Влияние антисмыслового ингибирования ПКК мыши in vivo на модели индуцированного FeCl3 тромбоза брыжеечной вены

ISIS 482584 оценивали на модели индуцированного FeCl3 тромбоза брыжеечной вены у мышей.

Лечение

Группа из 6-8 швейцарских мышей Вебстер получала 40 мг/кг ISIS 482584, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель (еженедельная доза 80 мг/кг). Контрольная группа из 6 швейцарских мышей Вебстер получала PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель. Через два дня после введения последней дозы антисмыслового олигонуклеотида или PBS, мышей из всех групп анестезировали 75 мг/кг кетамина в смеси с 25 мг/кг ксилазина, которые вводили подкожной инъекцией.

Краситель родаминовый 6G в дозе 5 мг/кг вводили подкожной инъекцией для окрашивания тромбоцитов. Alexa-647-меченое антитело против фибриногена в дозе 1 мг/кг вводили инъекцией в хвостовую вену для окрашивания фибрина. Брюшную полость вскрывали срединным надрезом. Висцеральную брыжейку распределяли на покровном стекле, и брыжеечные артериолы (70-120 мкм) располагали для наблюдения под микроскопом. Образование тромба индуцировали наложением хлопковых нитей (2×0,3 мм), предварительно насыщенных 6% раствором FeCl3, непосредственно на целевой сосуд. После трехминутного контакта, нить удаляли, и интенсивность окрашивания для обоих красителей регистрировали с помощью флуоресцентной микроскопии (конфокальный лазерный сканирующий микроскоп Olympus FluoView 1000) с подходящими фильтрами в течение 70 минут.

Результаты для агрегации тромбоцитов в контрольной и леченных группах представлены в Табл. 83, выраженные в произвольных единицах (п.е.). Агрегация тромбоцитов была снижена у мышей, получавших ISIS 482584 в дозе 80 мг/кг/неделю, по сравнению с мышами, получавшими PBS. Результаты для образования фибрина в контрольной и леченных группах представлены в Табл. 84, также выраженные в произвольных единицах (п.е.). Образование фибрина было снижено у мышей, получавших ISIS 482584 в дозе 80 мг/кг/неделю, по сравнению с мышами, получавшими PBS. Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о подавлении ISIS 482584 образования тромба.

Пример 22: Влияние антисмыслового ингибирования ПКК мыши на модели индуцированного стенозом тромбоза нижней полой вены in vivo

ISIS 482584 оценивали на модели индуцированного стенозом тромбоза нижней полой вены (НПВ). Сниженный кровоток и повреждение эндотелия являются характерными признаками данной модели, также известной как модель св. Томаса.

Лечение

Четыре группы по 6-8 мышей BALB/c получали 5 мг/кг, 10 мг/кг, 20 мг/кг или 40 мг/кг ISIS 482584, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель (еженедельные дозы 10 мг/кг, 20 мг/кг, 40 мг/кг или 80 мг/кг). Контрольная группа из 8 мышей BALB/c получала PBS, который вводили подкожно 2 раза в неделю в течение 3 недель. Через два дня после введения последней дозы антисмыслового олигонуклеотида или PBS, мышей из всех групп анестезировали 2,5% ингаляционным изофлураном. НПВ мышей обнажали посредством срединного надреза брюшины ниже левой почечной вены, и отделяли от брюшной аорты тупой диссекцией. Шелковый шнур 6-0 (Ethicon, Великобритания) накладывали позади кровеносного сосуда непосредственно ниже левой почечной вены, и металлический шов 4-0 (Ethicon, Великобритания) накладывали продольно над НПВ, чтобы замкнуть шелковый жгут. Затем металлический шов удаляли. Два нейрососудистых хирургических зажима (Braun Medical Inc, Пенсильвания) размещали в двух отдельных положениях ниже лигатуры на 20 секунд каждый, после чего их удаляли. Далее содержимое брюшной полости заменяли и брюшную полость закрывали. Через 24 часа НПВ обнажали и проверяли наличие тромбов. Все образовавшиеся тромбы извлекали и фиксировали в 10% формалине на 24 часа.

Тромбы взвешивали, и результаты представлены в Табл. 85, выраженные в миллиграммах. Полученные результаты продемонстрировали, что лечение повышенными дозами ISIS 482584 приводило к соответствующему уменьшению массы тромба. Результаты показывают, что антисмысловое ингибирование ПКК пригодно для подавления образования тромба.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Isis Pharmaceuticals, Inc.

<120> МОДУЛЯЦИЯ ЭКСПРЕССИИ ПРЕКАЛЛИКРЕИНА (ПКК)

<130> BIOL0172WO

<150> 61/871175

<151> 2013-08-28

<160> 2247

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 2252

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 1

agaacagctt gaagaccgtt catttttaag tgacaagaga ctcacctcca agaagcaatt 60

gtgttttcag aatgatttta ttcaagcaag caacttattt catttccttg tttgctacag 120

tttcctgtgg atgtctgact caactctatg aaaacgcctt cttcagaggt ggggatgtag 180

cttccatgta caccccaaat gcccaatact gccagatgag gtgcacattc cacccaaggt 240

gtttgctatt cagttttctt ccagcaagtt caatcaatga catggagaaa aggtttggtt 300

gcttcttgaa agatagtgtt acaggaaccc tgccaaaagt acatcgaaca ggtgcagttt 360

ctggacattc cttgaagcaa tgtggtcatc aaataagtgc ttgccatcga gacatttata 420

aaggagttga tatgagagga gtcaatttta atgtgtctaa ggttagcagt gttgaagaat 480

gccaaaaaag gtgcaccagt aacattcgct gccagttttt ttcatatgcc acgcaaacat 540

ttcacaaggc agagtaccgg aacaattgcc tattaaagta cagtcccgga ggaacaccta 600

ccgctataaa ggtgctgagt aacgtggaat ctggattctc actgaagccc tgtgcccttt 660

cagaaattgg ttgccacatg aacatcttcc agcatcttgc gttctcagat gtggatgttg 720

ccagggttct cactccagat gcttttgtgt gtcggaccat ctgcacctat caccccaact 780

gcctcttctt tacattctat acaaatgtat ggaaaatcga gtcacaaaga aatgtttgtc 840

ttcttaaaac atctgaaagt ggcacaccaa gttcctctac tcctcaagaa aacaccatat 900

ctggatatag ccttttaacc tgcaaaagaa ctttacctga accctgccat tctaaaattt 960

acccgggagt tgactttgga ggagaagaat tgaatgtgac ttttgttaaa ggagtgaatg 1020

tttgccaaga gacttgcaca aagatgattc gctgtcagtt tttcacttat tctttactcc 1080

cagaagactg taaggaagag aagtgtaagt gtttcttaag attatctatg gatggttctc 1140

caactaggat tgcgtatggg acacaaggga gctctggtta ctctttgaga ttgtgtaaca 1200

ctggggacaa ctctgtctgc acaacaaaaa caagcacacg cattgttgga ggaacaaact 1260

cttcttgggg agagtggccc tggcaggtga gcctgcaggt gaagctgaca gctcagaggc 1320

acctgtgtgg agggtcactc ataggacacc agtgggtcct cactgctgcc cactgctttg 1380

atgggcttcc cctgcaggat gtttggcgca tctatagtgg cattttaaat ctgtcagaca 1440

ttacaaaaga tacacctttc tcacaaataa aagagattat tattcaccaa aactataaag 1500

tctcagaagg gaatcatgat atcgccttga taaaactcca ggctcctttg aattacactg 1560

aattccaaaa accaatatgc ctaccttcca aaggtgacac aagcacaatt tataccaact 1620

gttgggtaac cggatggggc ttctcgaagg agaaaggtga aatccaaaat attctacaaa 1680

aggtaaatat tcctttggta acaaatgaag aatgccagaa aagatatcaa gattataaaa 1740

taacccaacg gatggtctgt gctggctata aagaaggggg aaaagatgct tgtaagggag 1800

attcaggtgg tcccttagtt tgcaaacaca atggaatgtg gcgtttggtg ggcatcacca 1860

gctggggtga aggctgtgcc cgcagggagc aacctggtgt ctacaccaaa gtcgctgagt 1920

acatggactg gattttagag aaaacacaga gcagtgatgg aaaagctcag atgcagtcac 1980

cagcatgaga agcagtccag agtctaggca atttttacaa cctgagttca agtcaaattc 2040

tgagcctggg gggtcctcat ctgcaaagca tggagagtgg catcttcttt gcatcctaag 2100

gacgaaaaac acagtgcact cagagctgct gaggacaatg tctggctgaa gcccgctttc 2160

agcacgccgt aaccaggggc tgacaatgcg aggtcgcaac tgagatctcc atgactgtgt 2220

gttgtgaaat aaaatggtga aagatcaaaa aa 2252

<210> 2

<211> 578

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 2

atgctctctc tctctcctgc tgccttgtga agaaggtacc tgcttcccct tcaccttcca 60

ccataattct gaacacggat aggatgttca tggaatatgt tgacaggaca aaaagttgaa 120

actgttggca gaaacccaaa gtcaatattg aagccaagca aaatattgcc tgcagtgcca 180

cattagaaca gcttgaagac cgttcatttt taagtgacaa gagactcacc tccaagaagc 240

aattgtgttt tcagaatgat tttattcaag caagcaactt atttcatttc cttgtttgct 300

acagtttcct gtggatgtct gactcaactc tatgaaaacg ccttcttcag aggtggggat 360

gtagcttcca tgtacacccc aaatgcccaa tactgccaga tgaggtgcac attccaccca 420

aggtgtttgc tattcagttt tcttccagca agttcaatca atgacatgga gaaaaggttt 480

ggttgcttct tgaaagatag tgttacagga accctgccaa aagtacatcg aacaggtgca 540

gtttctggac attccttgaa gcaatgtggt catcaaat 578

<210> 3

<211> 681

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 3

ggaagccatt cactagtcag attgaccaga gattgttggt gggctgtctg ttggggtcta 60

tgcacaggat ttctgctgga gttctaagga caaaaagttg aaactgttgg cagaaaccca 120

aagtcaatat tgaagccaag caaaatattg cctgcagtgc cacattagaa cagcttgaag 180

accgttcatt tttaagtgac aagagactca cctccaagaa gcaattgtgt tttcagaatg 240

attttattca agcaagcaac ttatttcatt tccttgtttg ctacagtttc ctgtggatgt 300

ctgactcaac tctatgaaaa cgccttcttc agaggtgggg atgtagcttc catgtacacc 360

ccaaatgccc aatactgcca gatgaggtgc acattccacc caaggtgttt gctattcagt 420

tttcttccag caagttcaat caatgacatg gagaaaaggt ttggttgctt cttgaaagat 480

agtgttacag gaaccctgcc aaaagtacat cgaacaggtg cagtttctgg acattccttg 540

aagcaatgtg gtcatcaaat aagtgcttgc catcgagaca tttataaagg agttgatatg 600

agaggagtca attttaatgt gtctaaggtt agcagtgttg aagaatgcca aaaaaggtgc 660

accagtaaca ttcgctgcca g 681

<210> 4

<211> 2175

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 4

agaacagctt gaagaccgtt catttttaag tgacaagaga ctcacctcca agaagcaatt 60

gtgttttcag tttcctgtga gggagttttc tctgtgtccc cacaaggcat gattctgggt 120

ctatggtgac ttaagagggc cacacaacaa tgagtattta attttcctca gatgtatggc 180

tacaataaac atctatagga tgtctgactc aactctatga aaacgccttc ttcagaggtg 240

gggatgtagc ttccatgtac accccaaatg cccaatactg ccagatgagg tgcacattcc 300

acccaaggtg tttgctattc agttttcttc cagcaagttc aatcaatgac atggagaaaa 360

ggtttggttg cttcttgaaa gatagtgtta caggaaccct gccaaaagta catcgaacag 420

gtgcagtttc tggacattcc ttgaagcaat gtggtcatca aataagtgct tgccatcgag 480

acatttataa aggagttgat atgagaggag tcaattttaa tgtatctaag gttagcagtg 540

ttgaagaatg ccaaaaaagg tgcaccaatg acattcgctg ccagtttttt tcatatgcca 600

cgcaaacatt tcacaaggca gagtaccgga acaattgcct attaaagtac agtcccggag 660

gaacacctac cgctataaag gtgctgagta acgtggaatc tggattctca ctgaagccct 720

gtgccctttc agaaattggt tgccaaatga acatcttcca gcatcttgcg ttctcagatg 780

tggatgttgc cagggttctc actccagatg cttttgtgtg tcggaccatc tgcacctatc 840

accccaactg cctcttcttt acattctata caaatgtatg gaaaatcgag tcacaaagaa 900

atgtttgtct tcttaaaaca tctgaaagtg gcacaccaag ttcctgtact cctcaagaaa 960

acaccatatc tggatatagc cttttaacct gcaaaagaac tttacctgaa ccctgccatt 1020

ctaaaattta cccgggagtt gactttggag gagaagaatt gaatgtgact tttgttaaag 1080

gagtgaatgt ttgccaagag acttgcacaa agatgattcg ctgtcagttt ttcacttatt 1140

ctttactccc agaagactgt aaggaagaga agtgtaagtg tttcttaaga ttatctatgg 1200

atggttctcc aactaggatt gcgtatggga cacaagggag ctctggttac tctttgagat 1260

tgtgtaacac tggggacaac tctgtctgca caacaaaaac aagcacacgc attgttggag 1320

gaacaaactc ttcttgggga gagtggccct ggcaggtgag cctgcaggtg aagctgacag 1380

ctcagaggca cctgtgtgga gggtcactca taggacacca gtgggtcctc actgctgccc 1440

actgctttga tgggcttccc ctgcaggatg tttggcgcat ctatagtggc attttaaatc 1500

tgtcagacat tacaaaagat acacctttct cacaaataaa agagattatt attcaccaaa 1560

actataaagt ctcagaaggg aatcatgata tcgccttgat aaaactccag gctcctttga 1620

attacactga attccaaaaa ccaatatgcc taccttccaa aggtgacaca agcacaattt 1680

ataccaactg ttgggtaacc ggatggggct tctcgaagga gaaagggaga ttcaggtggt 1740

cccttagttt gcaaacacaa cggaatgtgg cgtttggtgg gcatcaccag ctggggtgaa 1800

ggctgtgccc gcagggagca acctggtgtc tacaccaaag tcgctgagta catggactgg 1860

attttagaga aaacacagag cagtgatgga aaagctcaga tgcagtcacc agcatgagaa 1920

gcagtccaga gtctaggcaa tttttacaac ctgagttcaa gtcaaattct gagcctgggg 1980

ggtcctcatc tgcaaagcat ggagagtggc atcttctttg catcctaagg acgaaagaca 2040

cagtgcactc agagctgctg aggacaatgt ctggctgaag cccgctttca gcacgccgta 2100

accaggggct gacaatgcga ggtcgcaact gagatctcca tgactgtgtg ttgtgaaata 2160

aaatggtgaa agatc 2175

<210> 5

<211> 569

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 5

agtgccacat tagaacagct tgaagaccgt tcatttttaa gtgacaagag actcacctcc 60

aagaagcaat tgtgttttca gtttcctgtg gatgtctgac tcaactctat gaaaacgcct 120

tcttcagagg tggggatgta gcttccatgt acaccccaaa tgcccaatac tgccagatga 180

ggtgcacatt ccacccaagg tgtttgctat tcagttttct tccagcaagt tcaatcaatg 240

acatggagaa aaggtttggt tgcttcttga aagatagtgt tacaggaacc ctgccaaaag 300

tacatcgaac aggtgcagtt tctggacatt ccttgaagca atgtggtcat caaataagtg 360

cttgccatcg agacatttat aaaggagttg atatgagagg agtcaatttt aatgtgtcta 420

aggttagcag tgttgaagaa tgccaaaaaa ggtgcaccaa taacattcgc tgccagtttt 480

tttcatatgc cacgcaaaca tttcacaagg cagagtaccg gaacaattgc ctattaaagt 540

acagtcccgg aggaacacct accgctata 569

<210> 6

<211> 392

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<222> (379)..(379)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 6

ttgaagaccg ttcattttta agtgacaaga gactcacctc caagaagcaa ttgtgttttc 60

agaatgattt tattcaagca agcaacttat ttcatttcct tgtttgctac agtttcctgt 120

ggatgtctga ctcaactcta tgaaaacgcc ttcttcagag gtggggatgt agcttccatg 180

tacaccccaa atgcccaata ctgccagatg aggtgcacat tccacccaag gtgtttgcta 240

ttcagttttc ttccagcaag ttcaatcaat gacatggagg gtttggttgc ttcttgaaag 300

atagtgttac aggaaccctg cctcaaataa gtgcttgcca tcgagacatt tatggagttg 360

atatgagagg agtcaattnt atgtgtctgg tt 392

<210> 7

<211> 802

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<220>

<221> misc_feature

<222> (760)..(760)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<220>

<221> misc_feature

<222> (775)..(775)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<220>

<221> misc_feature

<222> (796)..(796)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<220>

<221> misc_feature

<222> (800)..(800)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<220>

<221> misc_feature

<222> (802)..(802)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 7

gggtaatcct cttcagttac ttcaggtcat ctagatgtat acgtgcaggc ctgggcccag 60

aggcgacatt cctgtcttct tatattaata agaaaaagaa aacgaaatag tggttgccac 120

atgaacatct tccagcatct tgcgttctca gatgtggatg ttgccagggc tctcactcca 180

gatgcttttg tgtgtcggac catctgcacc tatcacccca actgcctctt ctttacattc 240

tatacaaatg tatggaaaat cgagtcacaa aggcgagtat gcatggaaaa tcgcatcaca 300

aaggcgagta tgcatgggga gcacttgctg ctgtactttc atcactttta tagtctgagt 360

tcttaaaagt ttcgttcatt tccctcaaaa cacttgaacc tgcagtttca gtaggtactg 420

ttctgccagg tgcagattag ttaagagatt agcagacttc tctgcctatc ttctcttact 480

ttaaaacaaa tgttaccatt gaatcaagga agcaatagcc atgagaaaaa agaaggatct 540

gacgcctttg aatgaagatt caaaacatga tcttcatgtt ttgtattagc ttggagtaaa 600

atccacttgc tggcaatata gcccttaagc ttgttgcctc ttctctttgt ttcagaaact 660

agagccctgt ttattctgat caaggctctg gcccactgtc tttatctcag ataacccacc 720

ctcttctgca cacagcatgg agctaagaga aggtgtctan gtatgtatat catcngcagc 780

ataaatccca gaattngtcn tn 802

<210> 8

<211> 2058

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 8

tcacctccaa gaagcaattg tgttttcaga atgattttat tcaagcaagc aacttatttc 60

atttccttgt ttgctacagt ttcctgtgga tgtctgactc aactctatga aaacgccttc 120

ttcagaggtg gggatgtagc ttccatgtac accccaaatg cccaatactg ccagatgagg 180

tgcacattcc acccaaggtg tttgctattc agttttcttc cagcaagttc aatcaatgac 240

atggagaaaa ggtttggttg cttcttgaaa gatagtgtta caggaaccct gccaaaagta 300

catcgaacag gtgcagtttc tggacattcc ttgaagcaat gtggtcatca aataagtgct 360

tgccatcgag acatttataa aggagttgat atgagaggag tcaattttaa tgtgtctaag 420

gttagcagtg ttgaagaatg ccaaaaaagg tgcaccaata acattcgctg ccagtttttt 480

tcatatgcca cgcaaacatt tcacaaggca gagtaccgga acaattgcct attaaagtac 540

agtcccggag gaacacctac cgctataaag gtgctgagta acgtggaatc tggattctca 600

ctgaagccct gtgccctttc agaaattggt tgccacatga acatcttcca gcatcttgcg 660

ttctcagatg tggatgttgc cagggttctc actccagatg cttttgtgtg tcggaccatc 720

tgcacctatc accccaactg cctcttcttt acattctata caaatgtatg gaaaatcgag 780

tcacaaaggc gagtatgcat ggaaaatcgc atcacaaaga aatgtttgtc ttcttaaaac 840

atctgaaagt ggcacaccaa gttcctctac tcctcaagaa aacaccatat ctggatatag 900

ccttttaacc tgcaaaagaa ctttacctga accctgccat tctaaaattt acccgggagt 960

tgactttgga ggagaagaat tgaatgtgac ttttgttaaa ggagtgaatg tttgccaaga 1020

gacttgcaca aagatgattc gctgtcagtt tttcacttat tctttactcc cagaagactg 1080

taaggaagag aagtgtaagt gtttcttaag attatctatg gatggttctc caactaggat 1140

tgcgtatggg acacaaggga gctctggtta ctctttgaga ttgtgtaaca ctggggacaa 1200

ctctgtctgc acaacaaaaa caagcacacg cattgttgga ggaacaaact cttcttgggg 1260

agagtggccc tggcaggtga gcctgcaggt gaagctgaca gctcagaggc acctgtgtgg 1320

agggtcactc ataggacacc agtgggtcct cactgctgcc cactgctttg atgggcttcc 1380

cctgcaggat gtttggcgca tctatagtgg cattttaaat ctgtcagaca ttacaaaaga 1440

tacacctttc tcacaaataa aagagattat tattcaccaa aactataaag tctcagaagg 1500

gaatcatgat atcgccttga taaaactcca ggctcctttg aattacactg aattccaaaa 1560

accaatatgc ctaccttcca aaggtgacac aagcacaatt tataccaact gttgggtaac 1620

cggatggggc ttctcgaagg agaaaggtga aatccaaaat attctacaaa aggtaaatat 1680

tcctttggta acaaatgaag aatgccagaa aagatatcaa gattataaaa taacccaacg 1740

gatggtctgt gctggctata aagaaggggg aaaagatgct tgtaagggag attcaggtgg 1800

tcccttagtt tgcaaacaca atggaatgtg gcgtttggtg ggcatcacca gctggggtga 1860

aggctgtgcc cgcagggagc aacctggtgt ctacaccaaa gtcgctgagt acatggactg 1920

gattttagag aaaacacaga gcagtgatgg aaaagctcag atgcagtcac cagcatgaga 1980

agcagtccag agtctaggca atttttacaa cctgagttca agtcaaattc tgagcctggg 2040

gggtcctcat ctgcaaag 2058

<210> 9

<211> 577

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 9

gttaccattc taaaatttac ccgggagttg actttggagg agaagaattg aatgtgactt 60

ttgttaaagg agtgaatgtt tgccaagaga cttgcacaaa gatgattcgc tgtcagtttt 120

tcacttattc tttactccca gaagactgta aggaagagaa gtaaaggaaa ttttattttt 180

caaagacagt tgacatgacc atttcatatt ctctttcccc ctgtgaaggc ttactctttc 240

tactgttcat ttcatctagg tgtaagtgtt tcttaagatt atctatggat ggttctccaa 300

ctaggattgc gtatgggaca caagggagct ctggttactc tttgagattg tgtaacactg 360

gggacaactc tggtgagtaa cctcactttt tcgtggacct gtcagggatg tctgtcatgt 420

tgatagtttg cttagtctta aggaattatg tgtcttgttc tccttggtta gaagggactt 480

tgattcactt ctaattccaa ccattagcgt caacgctctc ttttcagtct gcacaacaaa 540

aacaagcaca cgcattgttg gaggaacaaa ctcttct 577

<210> 10

<211> 37000

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 10

agagcctctg cctagatttc acaggatgtg tggaaacacc tggctgtcca ggcagaagcc 60

tgctgcaggg acccagccct catggagaac ctctattagg gcagtgcaga ggtgaactgt 120

ggggttggag cccacacaca gagaccccac tggagcactg cccagtggag ctgtgaaaag 180

agttccccca tcttccagat gccagaatgg tagatccact gactggaaag ttgcaggcac 240

tcagtgccgg cccatgaagg cagccgtagg ggctgtaccc tgcaaagcca cagggacaga 300

gctgcccaag gccttaacag cccacacctt gcatcagcat gccctgggtg tgagacaggg 360

gctccaagga gattattttg gagctttaaa atttaatgac ttccctgcta ggttttgcat 420

atgcttggga cctgtggccc ctttattttg gccaatttct cccatttgga atgggaacat 480

ttacccaatt cctgtaccca cattgtgttt tggaagtaac taacttgttt tttattttaa 540

aggctcattg agggaaggga cttgccttgt ctcaaatgag actttggact cggacttttg 600

ggttactgtg gaatgagtta agactttggg ggactgttgg aaagacatca ttggttttga 660

aatctgaaaa ggacatgaga tttgggaaag gccaggggaa gaatgatatg gtttggctct 720

gtgtcctcat ccaaatctcg tcttgaattg taatccccac atgggattac atgggagggg 780

cctggtgaga ggtgattgga tcatggaggt ggtttcccct gtgctgtgat ctcatgatag 840

tgagggattt aaaagtgaca gtttcccctg cacatacaca ctctctctct cgtatcacct 900

tgtgaagaag gtgtctgctt cccctctgcc ttccatcgtg attataagtt tcctgaggcc 960

tccccagcca tgggtaactg tgagtcagtt aaacctcttt tgtttataaa ttacccagtc 1020

tcaggtagta tctttacagc agtgtgaaac tggactaata catctgggaa attctttttg 1080

tctccttcct ttctgaagga cagctttgcc tgatattata ttcttggttg ccaggttttg 1140

tactttcaat actttgaata tatcatccca ctctctcttg gcctacatga tttctgctga 1200

gaaatccacc aataatctta tgaagcttcc cttgtatgtg aagaattgct tttctcttgc 1260

ttctttgaaa attctctctt tgtcatggtg aggatttctt tttttttttt ttttttttag 1320

atggagtcta gctctgttgt ccaggctgga gtgcagtgtg cagtggcgca atctcggctc 1380

actgcaagct ccgtctcctg ggttcacacc attttcctgt ctcagcctct ggagtagctg 1440

agactacagg tgcccaccac cacgcctggc taaatttttt ttgtattttt agtagagatg 1500

gggtttcact gtgttagcca ggatggtctc gatctcctga cctcatgatc cacccatctt 1560

ggcctcccaa agtgctggga ttacaggcat gagccactgc acctggccga ggatctcttt 1620

atatttaatc tatttggagt tcttttgggc ttcataaatc tggatgttta tttcatttat 1680

gtctccaaat tttgagagtt ttctattctt atttttttaa ataagtttct gcaactttct 1740

ctttctctac ttcttctgga actcttctaa tgcatattaa ttttcttaac agtgtcctat 1800

aagtcttgtc agctttctgc aatttttatc attcctttta ttactctgac tgggtaattt 1860

caaatgacct gtatctgagc atgctgattc tttctcctgc ttgatctagt ctgctgctga 1920

agctgtttgt gaattttttc aattcagtca ttttgttctt tagctccaga atttctgttt 1980

cattcttttt tatggttcct atctatcttt ttgttgaact tctaattttg ctcatgtatt 2040

gttttcctga ttttgtttac tgtctatcta tattgttttg tagcttattg agctttctta 2100

aggcaattat ttttagctct tgtcatgcag taaagatctc catttcttta gggtcacctc 2160

ctgctgcttt atttccttcc tttggtggtt tcttgtttcc ccgattattt gtgatcagtg 2220

tggccttgca ctgaagtagg cacctatttc agtctttaca tactagcttc agcagagaaa 2280

gccattcact agtcagattg accagagatt gttggtgggc tgtctgttgg ggtctatgca 2340

caggatttct gctggagttc taaggtggga agggctggat tctgggttca ttcactgtgg 2400

ttgtctgtat tctgtgcaca aggactggct tgaagcatgg atccttgggg gctgacttgg 2460

cactgaaatg agccttaagc ctgcgtctgc aggggccagc ctaacatggg gatcacctgg 2520

cacctgagtt catggggata ggcctgttcc tgagtttatt caggctgtcc tgggaacaag 2580

gtccactggg gtgagcccag catctgggtc cacatggccc agcatggagc caagatctct 2640

ggaggctgac ctggtgctgg atctgcaggg gatggcctgg attctaggcc catgggtgcc 2700

aacttggagc ctggggttgc tggggctaac gtggaggcta gatagagtct tgggggccag 2760

gctagagctg gagcaggcct gaagtctagg ttttgtgtgg ccatcttgga gcctgaagcc 2820

ccaggggctg acctggtctg gggtgagcat ggggctgagg ccacagaggc tggtctggcc 2880

tgtggcaggc ctgaatcctg gtgctggggt ttactggagt gggcttggtg cttgggatct 2940

gtggtgaagt taggttctat cttaactgtc cctcctccat gcaagagggc atctctctcc 3000

atactgtgct gcccaggctt gaaggtgaga tgacaccggt aatgtgaaat tgtccttcct 3060

atacacttct atgtgtcttt tcttatttct gtgctgcaac caggtggcat aacctctcac 3120

ctgattcctt agctctagtg aagttatttt cgtgcatgga tacttgttcg aattgatgtt 3180

tctgcaaggg atgagcgcta gaaactcctg ttctgacaaa ctcctattcc tattcttgct 3240

gacatcactc cctgaaatag ttaatatact taacagctga acacggatag gatgttcatg 3300

gaatatgttg acaggacaaa aagttgaaac tgttggcaga aacccaaagt caatattgaa 3360

gccaagcaaa atattgcctg cagtgccaca ttagaacagc ttgaagaccg ttcattttta 3420

agtgacaaga gactcacctc caagaagcaa ttgtgttttc aggtagcaaa tttttattat 3480

tctgattgtt tccaaataaa ctataatttt taagtataat tttttacttt atgagaaaat 3540

taatcattta tattctaatt tcctgagtat gtagagagta tagataatgt tcctttatgt 3600

agaaatattt aaatgtaaga tgattttaaa tcagaaagaa tatttgattg atttaaaatt 3660

tttaaatggg ctttaatatt ttcagaggtt ttctttactt agggattttt ggactgacat 3720

tattgccatt atttattaat tttgtttttg cccaaatcaa gaggtttcat aattgtttac 3780

tctctctcta ccaattccct ttccaacatt actagccaca gagttggcca atgaacaata 3840

aacacaacag tagtctggag gtctcaattt gtatcttggg aagcattata aattttccaa 3900

ctccctagac acaaatgtac caaaaaaaaa cccttgtttt ctataccagt aattgtgtgc 3960

tttgtcttgc aattcagaca tttacaagaa aatctaaatc accttaaatt aagatttatg 4020

ttaaatgtgg tctaaaacca gcagagttat gtattgtttt cttttttaga atgattttat 4080

tcaagcaagc aacttatttc atttccttgt ttgctacagt ttcctgtggt aagtgaatta 4140

tctataaaac atggaattca ggctaagaca ggagtagcca agcaagtggc accacccctg 4200

gagaaagcta ttgaacatac agcttcgggg gtggagattg tccctgatga ttcaggacac 4260

gtgtctattt aatgttccac aacaaggacc acttgtcagg tatattgctg tagacatatg 4320

ttgcagacca gaggaaggag ctcagaagta ggaatgtctt gggacttgtg ttaacaaaaa 4380

cttctgttcg cagatgacac tctgcaaagc aaaacttgaa acaaaaaaaa attagtcctc 4440

tatttttatt atcaacagta aaaaattaaa ctttatctga aaattcaaaa gagtgctagg 4500

cattttatag tgtctgggtc caatccaagt atctgttagg aacaccatac atagttttac 4560

tctggaccgc tagggaacca tttcaaaaat gaaagtaact ggtttaaatt taacttagca 4620

aaccatgcat ttggatagtt ctaggtgaat agctttcaac accagattta gatctcattt 4680

ctctattaat ttcattaatt tttggagaat aaaaatgatt ctggacattt cattaatcat 4740

tacagaggga gttttctctg tgtccccaca aggcatgatt ctgggtctat ggtgacttaa 4800

gagggccaca caacaatgag tatttaattt tcctcagatg tatggctaca ataaacatct 4860

ataggtaagg tttacattca taaagagacc tttttttttc caggaaaaaa gacttttatt 4920

ccccctaaat cacaactccc ctgtgtctgt ccctcaaccc tgatttctct tctaaaccgt 4980

aatttacaaa cccatgtgca aacccactga aaggtgagaa ggagcataag ccagagacac 5040

tgggaaccac agccaactac agggggtttt tcattttttt gttttgtttt gttttttggc 5100

aaaataaatc atgattatgg ctaggaaaat cagggatgta agtaagcaaa aatttagaaa 5160

ctacatattg catgtagtcc ccaaattcag aaacagtcat cgttaaacat cttttattta 5220

gtctttcaga tatttttcta catataccta tttgcacatt tcacaaaaaa gagttattaa 5280

ctgtggacac tctttgactt gcattttcca cttatagcta tcttttggtg caaataagta 5340

atatattttg gagcttgcta ttcttctctt tttatggtat ttttgtgtgc acattcttat 5400

gctcttattc agttatttct gtagaataca atttttgaaa taaaaatact agattcaaag 5460

gtgtgaatat ttttgaaggt tttgtggtgt ggtatcatga aattaggttt cagaaagttt 5520

actccatagt tgactttttc taccagctaa taagagtgct catttacccc acttaggcca 5580

actctaacag gcttctgttg ctttgcatcc tgacatattt atctttctgg aaacagtgtc 5640

ctaatttatt tctgcagagc tactgcctct cagttttggt ccatgtggtt ctggtgaccc 5700

tgattcttct gctgaaccag aaagtgcaca catcctcctg gctgtggtga cccaatcaga 5760

gccaacgtct tgcaatgaag cttttcttta gacatctaga aataagactc ttatgttttt 5820

tttttccaat ttgacttgaa acttaagaca atacacaggc ctgagttgtt ggtactattt 5880

tgctactacg tggagcttga gagtaatggt aacaccaaga ctggagcaag tggaaggaga 5940

catattgtcc actgatgcta tcagttgagc acaatgtgca gttacttttt aagccagatt 6000

caccatgggc tttttggctc ctgaaccaat agatttcatt tgttttcaag ccactttgta 6060

ctaggttttc catcatttgc aatcaaaacc agtatacaaa cactggttat ttaatttttc 6120

atttttgcta atctcaggga taaaatggct tctagttgtt ttaacttggc tatatttgtg 6180

attcttccca ttttcatata cttactaatc acttctattt cttttgtaaa ttatcttttc 6240

atatttgtta tctaattctt taaaatttga gtactttaat tctcattatt gtttgtggaa 6300

ttgttaaaca agactgaata atctgcccaa agtccatgga catgggggcc catgtaaaag 6360

ctttgaaagc caccatcatt atgagataaa ttatataata gtactttaca taggctccaa 6420

aatacagcac agacacagct atcattgtca tggtcatcat tatcatcatg atcaccaact 6480

tatgaggata agcaagaaca cctactagaa gtttctttcc attcagcaac aaaattggtg 6540

tctttctagt cactcccttc cctgactgtc acatagcagt tcacagaggc tcagttgcag 6600

aatgagaagc tctgggccag gacctgccat tgtatgcatc cttgcatggg aactgggggc 6660

tggaagagga gtgactgctt gataattatg agtcagtcaa aaccaccaac tgtctgaaaa 6720

aaataggcct ttttgtaact agtattgtca ctaaaccaac tcctccatgt tttgtgcata 6780

catgaaatct aggcaataca cttgtattcc caaaagcttc cacttgaaga gatctgtgct 6840

ctttccaaat ataaacctta cccgagaggt ggtcatcttg gccacacctc agagagggag 6900

agaggcagtc ttgttgggtt gggtggtcat aatggggctc agggccaaat ccccaggggg 6960

taggatagtg cagagaagat ggcactctcc agtgcttaat aaaatgcacg tggtctaagc 7020

tgcccactcc ctcaaaggca ataaaaaata ggtactattt aaattgaaga gtaactactg 7080

ccccagggaa tggacaggtt gtcattggaa tagccatggt taatggtccc agttgacaac 7140

tgaaatgaat gtgctacctg aacaggaaag cttattaacc agatttcaaa gacagtcttt 7200

cccggtaaat ccaaatttac aaattaaagc cagtaaagac accgaattct ctaataatat 7260

gtggggtgca gtatatttta gagctgggaa taattccaaa cagcaaatag ttcaaaattt 7320

attttcaatt tagcatatgc atgcatttgc ttaaactgtc ttaaaaatga gtaaaaaata 7380

ctgtcagttt gtttcaatca tactgagatg aggaacaatg tttagcattg catgctagaa 7440

aaggacacag gattgggagt cagggctggg tgaccgtcac aggactttca ctaactgtgt 7500

ggatcttggg caagtctgtg tgccctgaga ctcagttatt taactttctt ttaaaaaaca 7560

tagtccagat gcagataaca aagcctgcct ctaatttccc ttacagaatt gtgagaagct 7620

ggtggagatg tttgttacaa aagtgttttg aaaatagagc aaatattatt ctttttaagg 7680

catgatgttt tcatagcatg tcaggcaaca ggaaaaaact aagttaggat tttattttat 7740

tgtggggaat ttatgtgcaa attattgtgc aatttaatga aaataagcca atgttttata 7800

cagaagtacc cagaaaatta aataacacta tacattgttc aaatagttgc cttaatatat 7860

tttattttct cagcataatt agagttgtat tatacaggtc tttgagtagt cagtcagtgg 7920

gagaagttaa gacaacagat atctttttat taaaattatt atatgaatta tcgcaaatta 7980

atttttatgg ttctgtcaca ggatgtctga ctcaactcta tgaaaacgcc ttcttcagag 8040

gtggggatgt agcttccatg tacaccccaa atgcccaata ctgccagatg aggtgcacat 8100

tccacccaag gtgtttgcta ttcagttttc ttccagcaag ttcaatcaat gacatggaga 8160

aaaggtaaaa gttggtattt cattattgga gaagctgttt ttcaaaactg aatcagtttt 8220

gtgcagaaag gtgtagtata actgagagtt cttcctcaca cggggttcaa ggaccagctt 8280

cagcaaaatc ccgtcaagtg gttcttacaa atgcagattc ctaggccaca acccagatct 8340

gctgaaccaa agtttcttgt gaccaggaat ctgcatttta aacaatcact gtgtttcttt 8400

aaagtagtag aagctagtca ttttctattc aaagcctcaa aatgcttgaa tatcattggg 8460

ctaagggatt gtctcaagaa agagtctaac aggtgcacat ttcatctgaa taaagaaaca 8520

gatttaactg tgtgacccat gatcacatta gcggatagca cagtccaaag aaaataacat 8580

aagacaagca ttttgctgag aatgtaattg agaaagatct agaacttgtg attttgggac 8640

agggcagttc taaatggggc ctatagtgag ccagtttggg cacctgtggc atgatgctat 8700

gtatggtgtg tgtgtgtatg tgtgcttgtg cttgtgtgaa tatgtattat taactggaaa 8760

tttgtaaaag tattggaaaa atagtactta cgattttgtg tgtgtgtgtg atggagtctc 8820

gctttgtagc ccaggctgga gtgcagtggc gtgatctcgg ctcactgcaa cttccacctc 8880

ccaggttcaa gcgattctcc tgcctcagcc tcccaagtag ctgggattac aggcacgcac 8940

caccacgtcc agctaatttt tgtagtttta gtagagacgg ggtttcacca cattggccag 9000

gctggccttg aactcctgac ctcgtgatcc acctgcctct acctcctaat gtgctgggat 9060

tacaggcatg agccaccgca cccagcggta attacaattt ttattaggtc agagagatgc 9120

ttattaatca cgagccacag tttcatctta atgatttttc cttttgatta atatccagag 9180

taagcttttc tttgttgttc ccatttccat gttcataact ctttactcat cttcactcta 9240

tgtgagttta ccaactagaa attggatagt cattctctga tcccacatgt taaacttgta 9300

gagaaaactc agattgtatg tgaggatcat catattaaaa gtggaggaag gttctagaat 9360

tcttataaat aatgaaatta acatgaaggt ggacatctaa gacagaggga agtcttccat 9420

taagtgcaga ctacaaggag ttaataagca agatgaacac gatatacaaa tccagctctt 9480

atcactaagt taacttttta agtaaatgaa agtatttgca aaaataatta ccaattgaga 9540

acatagttgc ctgaaagttt aagaacacag gaaaaatcat taactcttta atatggttga 9600

tttcctgtac ttaaaaaatg tgagtgtaaa gaaaacgcag tgatggagtt agatattatg 9660

gggtgttata aaattagctc taagagtgtt ctttccagca agtattgggg aagctatatt 9720

attttcctta ttcctggttt tatttgttag tgtgtagaaa atgctagaca tttcctcaat 9780

gtatgtttat tattctactt cctaagtaaa gctactttta aaataggttt ggttgcttct 9840

tgaaagatag tgttacagga accctgccaa aagtacatcg aacaggtgca gtttctggac 9900

attccttgaa gcaatgtggt catcaaataa gtggtaagtt gtgaatttct tagctacatt 9960

tgagttaata ttggatctcg cttagaacag cttttgctca aagtttgtac tgctacagct 10020

ttttggaagg catcactcat aaagatagga gatggggcag tattctggac acaaaagagg 10080

gacccatatt catctggaca cttctattgt ctttataaat caacacatac ttaatgagcc 10140

tctattattt atgaggttag cgctcaagtg taagatttgc agaaaatgaa tccaaataat 10200

tgtgtctcgt ttccagataa gaatttttaa gaaaacacaa gggaacatct ctctcaagtt 10260

cacttgaggg taatttttac atcagtgatt ctcaaccagc agtgattttg tctcttccac 10320

tggggacatt tgacaatgtc tggagacatt tttggtggct acaactaggg aggatgctat 10380

tagcatttac taagtagagg ccagaatgtt tgaatgctga ccaacattct acaaggcaca 10440

gggcagtcgt ccacagcaaa taattttctg gcccaaaacg tcaacagtgc tgacatcaag 10500

aaactctgtg atataccact aggcccaaat tgaagaactg agttctgcaa atcttgctaa 10560

gaataatact tcctaaagga aacttgagga ctaggatgct agagaacttt gattctgaca 10620

tctgaagcta ctgatgtctt gggaaacagt ttccaatgct atcctaataa atttaagaca 10680

aatgaactat ttctcaaaca tgactgggac tgataagaaa gtgaaaagtg ctgaaaagat 10740

tcaactgatg ggttgtcaga atcttaaaat aactgctgtt attctatgta tgactatata 10800

tcattactat tttattttca ttatgcacaa ttaattttgt aggttcaaat ttcagatgtt 10860

tttaaatttg tcatcctttc ctccctcatt gatatcacct cttcaatacg tacacacttt 10920

gagcctgctg tttgcatttt aaccagttat caaaggatgg caatgccttc attataaatg 10980

tgggcctgac ttagccagta taataggtgt agtctacgtg aggtggagta catttcctat 11040

tttaaaagat caatttttat gttaatccaa tttggtataa attattcgag taagtgctat 11100

ttctgattgt tgtatcttgt agcaaaattt aaagaaaaag taatttgtgc ctttctcaat 11160

attcctgtta ttgttcatgt attctaaaac tcactgttac tcacttagct tgcttttaat 11220

gttttttaaa gtgaaaaatt gttcccaagt acataaaatc tctacactca agaacaattc 11280

tagtcaaaag catttagagc ttccgtatga acacttaaag agtttttatt tgtaagagtc 11340

gcatcccaac tcttagcctg ttcttttctc acatgcagaa aaataggaaa gagacttcgt 11400

ttccacagtc tgcaaattcc tgtgtttaag aaccacagtg aataatccac ctccctgccc 11460

aactcatcgt actgtcatat agttttcctg acagtttgtg tattttctgt ctttcccacc 11520

cttaaattta gttttatgac ttcaaccata cttcttagga gtggaaaggt atctgtagta 11580

gattatggtt tattccacat aatcttgggg aataaaactt taaaaaagta tacagtttat 11640

acttctggtt acattacttc cttaaccaaa agtctaacca agaaatttga atctttaaaa 11700

aaaaaagagg ccgggcgcgg tggctcacgc ctgtaatccc agcactttgg gaggccgaga 11760

cgggcggatc acgaggtcag gagatcgaga ccatcctggc tgacacggtg aaaccccgtc 11820

tctactaaaa atacaaaaat tagccgggcg tggtggcgcg cgcctgtagt cccagctact 11880

cgggaggctg aggcaggaga atggcgtgaa cccgggaggc ggagcttgca gtgagtcgag 11940

atcgcgccac tgcgctccag cctgggcgac agagcgagac tccgtctcaa aaaaaaaaaa 12000

aaaaaaaaga gcctaatttt gcttcactgt ctgtgaaaag aattatctgt atcttttgca 12060

tgtaagacaa atctcaatga aaagggtgct taaatagaag ttaacactat tttaaagcaa 12120

gaatggaagt ggtttcatca tgcgtaaaca acaactctcc acattttgta atgattgatc 12180

tggatgcaat ttgtcatcag acaggagaag tcgaaagcaa agaaataaca ctgggagata 12240

gagaagctct ttcattcaat gcgaaaggtc aaaggcacat cagtttcttt aataatgcaa 12300

acctcagcac acattatcag tgtcctcatt attattgcct tgtttatttc ccactgctca 12360

ttgataattt caacgtgaaa tttacctgta ttgctgcatg catcttgcag tttaagaagt 12420

gaagtaaccc aatttcaaag ctagtgcttt agggaaaata ttggattgta tttacttcaa 12480

gcagagttcg ataatttatg tacataataa aaattttaaa tcccttagtt aatatagcag 12540

ttgccaaaac tgggctatta tcattctaaa ctaccaaccc aaatggtagt gggtatctaa 12600

tctacctcta gaaagaaaat ggactgtatt tgctctatgt atttttcttg tacagcttgc 12660

catcgagaca tttataaagg agttgatatg agaggagtca attttaatgt gtctaaggtt 12720

agcagtgttg aagaatgcca aaaaaggtgc accagtaaca ttcgctgcca gtttttttca 12780

tatgccacgc aaacatttca caaggcagag taccggtgag tacaattcaa ggtgtgtgtt 12840

ctttgtattg gtgcctccag gatttcactg tattcttctt aacctctttt gttcccaaac 12900

taaaaaccaa acagggcttt tattctaacc actttcctca tttacttact ctattttatt 12960

tttttatctt ttatttattt atttatttat tgagatggag tcgcgctctg tcgcccaggc 13020

tagagtgcag tggcgtaatc tcgactcact acaacctccg cttcccgggt tcaagcgatt 13080

ctcctgcctc agcctcccga gtagctggga ttacaggcgt ccgccaccat gcctggctaa 13140

tttttgtatt tttagtagag tcggggtttt actatgttgg tcaggctggt ctcgaactcc 13200

tgatcttgtg atccacccac ctcagcctcc caaagcgctg ggattacagg catgagccac 13260

tgcgcctcgc ccttcatttt ttaattaaat aattcattta atttcatttg tttctctact 13320

cttttcccct ggcatgtaat tgtaccgcat cttcaaagcc tgacatcctc ttcccctact 13380

tctccaaagc tgattcttgc aggtctttcc tcaaataccg tcccctccaa aagcccattt 13440

ctgagcattc tcttttaagt cacactcagc tctgtttatt tcattcatag agctaatcac 13500

aatttgatat taacttgtga tttttttcct tatttttaaa tcttattttt atttgcatag 13560

atgtatgggg tacaagtgta attttgttac tttgatgtat tttacagtgg taaagtctgg 13620

gcttttggta tatccatcac tggagtcatg tacattgtac ccactaagct atttttcaac 13680

gcccgccccc ttcccacctc tctgtcacct tcccagtctc tactgtctat cgctccatgc 13740

tctactcaat tttggtgtca ttttttcctg aagcaaaatt ttggtgtcat tttttctgaa 13800

gtcattttct gaagtctgtg tcatttttcg ctttcctgaa gcgaattttg gtgtcatttt 13860

tcctgaagtt ccgtttgccc cacacatagg ccttgcttat agaatgaggg tttagtgtca 13920

cggagtctcc tgcctcattc tcaccctaac ttttccttta cccctttgcg aggggaagga 13980

tgtccattag gttaataatg cagaccccta acccactcat tatcagggtc attgtttttc 14040

cactgtgcat tttaatacta actgttacct gcactgctcc ctgcccctca aagtgcagaa 14100

agcaaagtaa cctcttttct tcccattcag gaacaattgc ctattaaagt acagtcccgg 14160

aggaacacct accgctataa aggtgctgag taacgtggaa tctggattct cactgaagcc 14220

ctgtgccctt tcagaaattg gtaattgtag gactacttca ctttgtgatt gtggtaggtg 14280

gaataggagc ccccagagac gtccctgtgc tgagccctgg gacctgtgcg tgtgttccca 14340

tagctggcaa aagcgtttct gtcaatggca tgcagttacg ggcttcgaga tggggagttt 14400

actctggatt ttctgaatgg gcccaatgta ctcacagggt tgagtgctca caaggctcat 14460

aagaaaaaga gagaggcgga aggctcagag ccagagagag aggtttgaag gtattacact 14520

gctggctttg aagatgaagg tccgtgagcc aaggaatgca ggcggcctct agaagttgaa 14580

aagggcgagg aaagagtttc cctgtggagc gtcctggagg aagaagccct gctgatgtct 14640

tgattttagc ccagtaagac ccaatctcta gaacagtaag ataattaatt tgtgttgttt 14700

ttaaccacta agtttgtggt tatgccccta gagcagcagt tataggaaac tagtacagtg 14760

atactgttag agttatagga cagtgatata ggacagtgat actgttatag ttataggaaa 14820

ctagtacagt gatactgtta gagttatagg acagtgatat aggacagtga tattgttata 14880

gttataggaa actagtacag tgatactgtt agagttatag gtacagtgat attgttatag 14940

ttataggaaa ctagtacagt gatactgtta caggtacagt gatataggac agtgatactg 15000

ttataggaaa ctagtacagt gatactgtta gagttatagg tacagtgaca taggacagtg 15060

atactgttat agttatagga aactagtaca gtgatactgt tagagttata ggtagagtga 15120

tataggacag tgatactgtt atagttatag aaaactagta cagtgatact gttatagtta 15180

taggacagtg atataggaca gtgatattgt tatagttata ggaaactagt acagtgatac 15240

tgttagagtt ataggtacag tgatatagga cagtgatatt gttatagtta taggaaacta 15300

gtacagtgat actgttagag ttataggtac agtgatattg ttatagttat aggaaactag 15360

tacagtgata ctgttatagg tacagtgata taggacagtg atactgttat aggaaactag 15420

tacagtgata ctgttagagt tataggtaca gtgacatagg acagtgatac tgttatagtt 15480

ataggaaact agtacagtga tactgttaga gttataggta cagtgatata ggacagtgat 15540

actgttatag ttataggaaa ctagtacagt gatactgtta tagttatagg acagtgatat 15600

tgttatagtt ataggaaact agtacagtga tactgttaga gttataggta cagtgatata 15660

ggacagtgat attgttatag ttataggaaa ctagtacagt gatactgtta tagttatagg 15720

acagtgatat aggacagtga tattgttata gttataggaa actagtacgg tgatactgtt 15780

atagttatag gtacagtgat attgttatag ttataggaaa ctagtacagt gatactgtta 15840

gagttatagg tacagtgata taggacagtg atattgttat agttatagga aactagtaca 15900

gtgatactgt tatagttgta ggacagtgat attgttatag ttataggaaa ctagtacagt 15960

gatactgtta gagttatagg tacagtgata taggacagtg atactgttat agttatagga 16020

cagtgatatt cttatagtta ccgtggtata gttatagtta aaggtacagt gatattgtta 16080

tagttatagg acagtgatat tgttatagtt ataggacagt gatgtagtta cagtgatata 16140

ggtacagtga tattgttata gttataggac agtgatatag ttataggaca gtgatattgt 16200

tacagttata ggtacagtga cgttgtaata gttataggac agtgatattg ttatagttat 16260

aggtacagtg atgttgtagc aaaactgtaa ggtcattcct tggttgtgtc cctatctagt 16320

gaaatgactc taccaggggt agggaaataa aactctgtcg tttcacacat aaaggtaatt 16380

tcaatggaat tatccagaaa attgccatga cattccacct catttagcat gtcaggatgt 16440

taatgacaag atgttactaa aagcaaatcc cttacggcca gttttccgca gtactgggtg 16500

ctggctctgt gcctggccct gtattgggtg ctgggctagg atttccctgt ggaagattgg 16560

gaaggttggt tacaaggtgg ctattttcct gtctcctctt tgcgacagca caccttctcc 16620

atggtgtgtg ccaggttcac gtgtactggt gatttaattt taacgttcat attatttttt 16680

tctgggagag tttttgaagg ctgccaggag gcaggactcg atgcaaacat gctccattct 16740

gtacccagcc ctgttgctgg aaggatttgc tgcacttacc cagggaacag gcaagctcgt 16800

gctgtggctc tgggctgtca cagctgctgt ccacacctgg gagagcaccc tggatggctc 16860

atctgtgtac ttgctttctt gttaaattgc agtgagttca catgtgattt aatcggatca 16920

aatggccttt acagactgat aaaaatatgg ctgtttcagg tggtgttttg agctgctaag 16980

ggcgtggctt ttcactgagt acgtggtccc cgttcctcag ggaacaccca gtagccacat 17040

gcctcctaaa cctagagtag ggctgtctcc tggcctaact gcccaaatga gattcataag 17100

ttagggatga tctgtagtta tcactacaga tttgtccttg gtttcaccaa ggattttcct 17160

aattttacaa acaaaacccc taaggctcct ggaaggaggg tagaagtgaa ggtgctccgg 17220

gggcaacaca gctgatgagc tgaaccagaa ctcgaccctt gggtcacaca catttcacag 17280

tgctcactcc accttttgtt tttttaatgg atttaatggt gttttaaagc ctcctgcctc 17340

tcaacacata tgaattcatt atatttacag atttccttct cttgtggtcc atcttcctgc 17400

atagatcttg agagatgtca ggctaaccac gtttcctcag ttaatttaac aaaaccattt 17460

gcaactctga catggaaaat tcctaccatg tgacttatta atttatcaat tgagatggta 17520

cacatatttt caagccaaaa ggaggaaaac ataaattgga aaaaaaaggt ttttttattt 17580

ttatcacctc tggggaagaa agtctgataa acgaagctgg ttgataaaat tgcaattagg 17640

ggaagcaaca tcatggtttc tgttcggagg ctaaccagat ggcatacttg aaatagagaa 17700

tgtcctagaa atcaactggt tgcttggcca aaatatctat aaatagtgcc caacatatta 17760

gataggaaaa gcaaagtaaa aacaatttta acaggttagg acattgggct gaagtattgc 17820

atatatttaa tgtcatgtgc gtccgtgtga agagaccact aaacaggctt tgtgtgagca 17880

agaaagcttt ttaatcacct gggtgcaggc aggctgagtc cgaaaagaga gtcagtgaag 17940

ggagatgggg tggggacgtt ttataggatt tgggtaggta gtggaaaatt acagtcaaag 18000

ggggttgttc tctggcgggc agcggtgggg ggtcacaagg tgctcagtgg gggagcttct 18060

gagccaggag aaggaatttc acaaggtaac gtcatcagtt aaggcaggaa ccggccattt 18120

tcacttcttt tgtctttctt cagttacttc aggtcatcta gatgtatacg tgcaggcctg 18180

ggcccagagg cctgacattc ctgtcttctt atattaataa gaaaaagaaa acgaaatagt 18240

ggtaaagtgt tggggtggcg aaagtttttg ggggtggtat ggagagataa tgggcgatgt 18300

ttctcagggc tgcttcgagc gggattaggg gcggcgtggg aacctacagt gggagagatg 18360

aagctgaagg aatattttat ggtaaggggt gatattgtgg ggttgttaga agcagcattt 18420

gtcatataga atgattggtg atggcctgga tatggttttg tgtgaaatga gaaactaaat 18480

ggaagacaca aggtctgaat aagagaagga gaaaaacagg tgttaaagga ctaagaattg 18540

ggaggaccca ggacatctaa ttagagagtg cctaaggggg ttcagtgtaa ttacttgctt 18600

ggttggtgag tttttgggct ctatccttga cagagtcctc ctttttaagt tggaggctga 18660

gcttggtgag gtgtgttttt aaaagaccat tagtctgttc tacctttcct gaagattgag 18720

gatggtgagg ggtatgaagg ttttactgaa taccaagagc ctgagaaact gcttgggtga 18780

tttgactaat aaaggccggt ctgttatcgg attgtataga gatggaaagg ccaaactgag 18840

gaattatgtc tgacagaagg gaagaaatga ccacggtggc cttctcagac cctgtgggaa 18900

aggcctctac ccatccagtg aaagtgtcta cccagaccaa gaggtatttt agtttcctga 18960

ctccgggtat gtgagtaaag tcaatctgcc agtcctgggc gggggcaaat ccccgagctt 19020

gatgtgtagg gaagggaggg ggcctgagca atccctgagg aggagtggag tagcagatgg 19080

aacactgagc agttattttt tgaggataga tttttacgac ggaaaggaaa agtgaggttt 19140

taagaggtgg gttagtggct tgtaacttac atggaagagt ttatgaaatg atgacagaat 19200

agaatgggcc tgtgaggctg gaggagatat tttccttggt ccaagaatta tttgccttgt 19260

gtgggaagag attgataggt ggaagtttca atgggggagt agatgggagt gacagatgag 19320

gaagaaaaaa actggctgtg agggatagaa gttggaatgc tcgctgcttt tttagctacc 19380

ttatcagcat aggcattgtc ctgagcagtg ggatctgatg ccttttggtg gcccttgcag 19440

tgaatggctt cagcttcctt tggaagtaaa gtggccttga gaggagtttt tattaaagag 19500

gcattaagat ggagaaccct tgtgtagtga ggaaacctcc ttcagcccat ataaccgcat 19560

ggtggtgcag aatatggaag gcatatttag agtcagtata aatattgaca cgtagtccct 19620

ttgcaagagt gagggcctga gttaaggcaa tgagttcagc ttgctgagag gtagtggagc 19680

ggggcagagc agtagcctca gtgatagatg tggaagatac tacagcatag cctgcctttg 19740

ctggtgagtg gtgattaggc ctggtggaac tgccatcaat aaaccaagtg tgatcagggt 19800

aaggaacagg aaagaaggaa atatggggaa atggagtgga tgtcaggtgg atcagagaga 19860

tacagtcatg ggggtggggg ccagcctaaa acagtaaggt caagttgttt gaacagaaag 19920

gctacagggc gtggtcctgg ctcttgtgta agaattttga ctgcgcagcc ctgcacttcg 19980

gctgtgtgta atgaaaaggg ttgggatgag ttagggagag ctagtgtggg agcagtttct 20040

agggctgttt ttaaggaatg gcaagaggag tggctaaagg atttaggatc tttggggtca 20100

gctagctttg cttttgtgag tttatataat ggtttagtca ggatggtaaa acttagtatc 20160

caaaggcgga agtacttaac catacctagg aagaaaagga gttgttttgt agaaggggtt 20220

ggggtttggg agatgagcca gacacaatca gcagggagag cacatgtgtt ttcatgaaga 20280

attatgccga gataggtaat ggatgaggaa gaaatttggg cttgactgaa gtaatggggg 20340

ctgtcctcga agccttgtgg cagtacagcc caagtaagtt gctgaggctg acgggtgtca 20400

gggtcagtcc aagtgaaagc gaagagaggc tgggatgaag ggtgcaaagg aatagtaaag 20460

aaagcatgtt tgagatccag aacagaataa tgggttgtgg agggaggtat tgaggatagg 20520

agagtatatg gctttggtac catggggtga ataggcaaga caatttggtt aatgaggcac 20580

agatcctgaa ctaacctgta aggcttgtcc ggtttttgga caggtaaaat gggggaattg 20640

taaggagagt ttataggctt caaaaggcca cgctgtaaca ggtgagtgat aacaggcttt 20700

aatcctttta aagcatgctg tgggatggga tattggcatt gagcggggta agtgtgatta 20760

ggttttaatg ggatggtaag gggtgcacga taggttgcca aggagggagc agaggtgtcc 20820

tatacttgtg gattaaggtg gggacacaca aggggaggat gtgaaggagg ctttgaactg 20880

gggaaagggt ggcattgagg tgtggctgtg gcctaagaac agtcagggaa gcggataatt 20940

gagttaaaat gcctcgacct agtaagggag ctgggcaggt ggtgataact aaaaaggagt 21000

gcataaaaga atgttgtcca agttggcacc agagttgggg agttttaaga ggtttagaag 21060

cctggcggtc aatacctaca acagttatgg aggcaaggga aacaggccct tgaaaagaac 21120

gtaatgtgga gtgggtagcc tctgtattaa ttaagaaggg gatggattta ccctccactg 21180

taagagttac ctaaagcatc tgtgatggtc caggaggctt ctaaggtgat cgggcagcgt 21240

cagtcttcag ccgctaagcc aagaagatct gggaagcagt cagtcagaga gccttgggcc 21300

agagttccag gggctctggg agtggcagcc aggccagtta gacagtccga tttctagtgg 21360

ggtcccacac agatgagaca cagcttagga ggaatcccag gctgcgggca ttccttggcc 21420

cattggccag atttctggca cttgaaacaa gatcctgatg gaggaggtcc tgtaggaatg 21480

cttgaccact gcagtttagg cattttgaag tttttgtgtg tgctggagat gtggctgggt 21540

tttgtctcac agcagaggca aggaatcgca actcagaaat acattgctac ttggctgcct 21600

ctattattgt acatcttgaa ggcgaggtta attaagtcct cttgtggggt ttgagggctg 21660

gaatctaatt tttggagttt ttttttgttt gttttttggt tttttttttt taatgtcagg 21720

agctgactgg gtgataaaat gcatattgag aataagaggc cttctgaccc ttctgggtct 21780

agggctgtaa agcgtctcag ggttgctgcc aaacgggcca tgaactgggc tgggtttttc 21840

atatttgatg aaaaagagcc taaacgctaa ctgatttggg agaggtcgga taaataaaaa 21900

ggaacattaa tcttgactat gcctttagct ccaaccacct ctttaagagg aaattgttgg 21960

gcaggtgggg gagggctagt cgtggaatga aactgtaagc tggaccgggt gtgaggaggg 22020

gaggtgatag aaggattata gggtggagga gcagaggctg aggaagaatt gggatctggc 22080

ttggcctggc aaggagcagc ctggggagga ggggagaggt cagatgggtc catagaaaag 22140

gaggattgga aagactcagc aacacttggg gttgggattg agaggacaga tgggttggga 22200

ttgaggggac agatgggagg gaaagaagga agatttggga caagttgcat tgggaacaga 22260

gactagggag ggaccaatgt gtaaaagaat gcctggacgt caggcacctc agaccgtttg 22320

cccattttat gacaagaatt atctagatct tgtaggatgg aaaaatcgaa agtgccgttt 22380

tctggctatt tggaaccatt gtcgagtttg tattggggtt aagcagcatt gcagaagaaa 22440

ataaggcatt taggttttag gtcaggtgtg agttgaagag gttttaagtt cttgagaaca 22500

taggctaagg gagaagaagg aggaatggag ggtggaaagt tgcctatagt gaaggaggca 22560

agcccagaga aaagagaggg tagagacatg gagagaaggg gtgggggggt gcttgccccc 22620

aggaaagtgg ttcttgccac taagggtgaa ggatcaaggc aggcattcgc gcggtgatca 22680

gatacctctg aaacgtgggt gaataatcaa gcaggtgtcc ctgcagtgat taaacagcaa 22740

ggaaagacta tcttcccaag tccatgacca gtgccagagt tttgggttca tggataaaac 22800

gcgtctcctc tgtctctacc agaaaatgaa aggaattgaa attaagagaa gggagagatt 22860

gaaggatggc gccaagattg aaaggaaaaa gaggttgagg gatagggaga gaggttggat 22920

aagagagtaa aaagaggctg cttacccaat ttaaaatcgg tgagatgttc cttgggcttg 22980

ttggtctgag gaccagaggt catgggtgga tctttctcat ggagcaaaga gcagggggac 23040

aggggattga tttcccaagg gaggtcccct gatctgagtc acagcaccaa atatcacgtg 23100

tgtccatgcg aagagaccac caaacaggct ttgtgtgagc aagaaagctt tttaatcacc 23160

tgggtgcagg cgggctgagt ccaaaaagag agtcagtgaa gggagatagg ggtggggacg 23220

ttttatagga tttgggtagg tagtggaaaa ttacagtcaa agggggttgt tctctggcgg 23280

gcaggggtgg ggggtcacaa ggtgctcagt gggggagctt ctgagccagg agaaggaatt 23340

tcacaaggta acgtcatcag ttaaggcagg aaccggccat tttcacttct tttgtcattc 23400

ttcagttact tcaggccatc tggatgtatg catgtaggct tgggcccaga ggcctgacat 23460

ttaacatgga taaatgtaaa gttcttagaa tcatacatac actttggaaa agatggggct 23520

taatcgcact ttataagact tgaaggatgt ttgagaatca ctatgaaact gctgaaaata 23580

ccaagaaaat ttaattctta tgtatataaa taatgtgtct gttttacatg aatcccttct 23640

acaagcttgg tatttaatat ggcatatatt gttttttcat agtagattta aaatttttga 23700

tatctaattt agataacata aaattaaccc tttgaaagtg tacaactccg tggtttttag 23760

tatatccacc tgattgcaca acgatcacca ctgtctagtt ccagaacatt tttatcacca 23820

caaaagaaag gctgtatcca ggccgggcac ggtggctcac gcctgtaatc ccagcacttt 23880

gggaggccga ggcgggcgga tcacggggtc aggagattga aaccatcctg ggtaacacgg 23940

tgaagcccta tctgtactaa agatacaaaa aaattagctg ggcatgatgg cagatgcctg 24000

tagtcccagc tactcaggag gctgaggcag gagaatggcc tgaacccagg aagcggagct 24060

tgcagtgagc caagattgcg ccactgcact ccagcctggg cgacagagca agactccatc 24120

tcacaaaaaa ataataaaaa taaaataaaa aaaaaaaaga aaggctgtct ttctcctttc 24180

ccattggccg tctttctcca ttccctactc ctccaatccc ctggcaacca ctaaatctac 24240

tttccatgtc tgtggacttg actcttcggg acattttaca taaatggaat catgcaatgc 24300

agcacatttt gcatctggct tttttcacct ggcgtgtttt caaggctcat tcgtattcta 24360

gcatatatca atactttgtt cctatttagg actaaataag attctattgt atgaataaaa 24420

catattttgt ttatatactt agtttgatga acatttgagt tgtttctgga tttttttttt 24480

tttttttttg cctcttatga ataatgctgc tatggacaac agtttttggg taggcatgca 24540

ttttaaattc tcttatgtat atacttagga ttaaaattgc tggatcacag agtaactcca 24600

tgtttaactt tttgatgaat tgccaaactg tttttgagag cagctacaca atgttacatt 24660

cttaccagca acaattgagg gcttcagtct ctctacaacc ttaacaacac ttgttattgt 24720

ctttgtaatt attgcctttc taggcagtgt gaagtggtgt ctcactgtgg ttttgatatg 24780

catttcccta atgactaaca atgttgtgta tcttttcgtg tgctcatttt caatttgaat 24840

acattctttg ggaaaatctc tgtttaaatc ttttggccat taaaaataat tgggttattt 24900

tcattgttga gttgtatgaa ctctttatat actctggata ctacactctt atgacatata 24960

ttattttcaa aaattttctg tgcatctgca ggtcatcttt tcactttact gatggtgttc 25020

tttgaagcac caaagttttt aaacttgatg aaatccagtc tggctttatt cttgcacgtg 25080

ctttacctaa aacgccaaaa cctaattcat ggttttgaag atttttgctt atgatttgtt 25140

cttagaggtt tatagtttta gctcttacat ttaggcattt gatgcatttt aaattaaatt 25200

ttgtatatgg tgtaaagtag caatccaact taattcttgc atgtgggtat tcagttattc 25260

cattgtcttg aaaccctttt caaaatcaat tgtctataaa tgtaagagtt tatttttgga 25320

ccatcagttc tatcctgttg acctatatat gcctatccta atgccagtta cacacagtct 25380

tgattaccat aactttgcag taagttttga actcagacag tctgagtgct tttattttgt 25440

cctttttcaa gattaatttg gttattccgg atcttttgca tttccatatg aattttagga 25500

tggttgtcaa tttctgcaat agaaaagcag caggattttg atagagagtg cattgaatct 25560

gtagaccaat gagtatcaat ggaattatgt gttatcaaat ttagtaaact acataaacga 25620

tatgtacaca actaaaacaa aactaagata taagatcata ttaatgtaat gataataaaa 25680

gtggattgtc tcctgttcta attttaatag gcacaaggca tttttgttaa tcacttctta 25740

ttaaagaatt ttttataata ttcaggaaaa tacaacaaaa aaacccttac attcctaagg 25800

cctcagagtc agagtaatat aaaggaaatg taaacacatg ctgagtaatg caagcatttg 25860

gcaatggtgg tgactggagc tgggagcaca gcttttattt ctctgaaata ggaatttgcc 25920

ccttagagtt agaccaattt tgccttcctc taaatggcaa acagtttgga gatactttaa 25980

aggacatttt ttcacttagg atgtttagta ctatgaataa taaatagtca caatttcctt 26040

aactatggtg acaaaataca agcaaattta gcctcatgtc atttcctaag gaacatcttc 26100

tctctgtgag ttcacaggtt gccacatgaa catcttccag catcttgcgt tctcagatgt 26160

ggatgttgcc agggttctca ctccagatgc ttttgtgtgt cggaccatct gcacctatca 26220

ccccaactgc ctcttcttta cattctatac aaatgtatgg aaaatcgagt cacaaaggcg 26280

agtatgcatg gaaaatcgca tcacaaaggc gagtatgcat ggggagcact tgctgctgta 26340

ctttcatcac ttttatagtc tgagttctta aaagtttcgt tcatttccct caaaacactt 26400

gaacctgcag tttcagtagg tactgttctg ccaggtgcag attagttaag agattagcag 26460

acttctctgc ctatcttctc ttactttaaa acaaatgtta ccattgaatc aaggaagcaa 26520

tagccatgag aaaaaagaag gatctgacgc ctttgaatga agattcaaaa catgatcttc 26580

atgttttgta ttagcttgga gtaaaatcca cttgctggca atatagccct taagcttgtt 26640

gcctcttctc tttgtttcag aaactagagc cctgtttatt ctgatcaagg ctctggccca 26700

ctgtctttat ctcagataac ccaccctctt ctgcacacag catggagcta agagaagggt 26760

gtctagttat gtaatatcat cggcagcata aattcccaga atttgttctt tgattttttt 26820

gtttgttttt ccagttagaa ggtggaactt catcattgtc ctcttttcag gttgtctgtg 26880

cctattagtt ttctccagag ggagaggtgg cttgatttac atttaatctc tgcaatttat 26940

tagagtcctg tagttggatt tactttgaag agagtttccc agaagaataa aatttgctgc 27000

gttgcttttt gggtgtgagc tgcttttgta tttgcctaat gcctttaatg caaatttctt 27060

tctttctctc ttgctttttt ttaaaaaaaa tagaaatgtt tgtcttctta aaacatctga 27120

aagtggcaca ccaagttcct ctactcctca agaaaacacc atatctggat atagcctttt 27180

aacctgcaaa agaactttac ctggtaatgt gatttgataa taatattaca taaaatgtaa 27240

cctatttcat gacttttaac agcaacagtg atgaaacaat cctcaaggta acagaaactt 27300

gtgtaaatgt cgttcattgc ttttcccatc tgatatcttt ttgtgtttat aattgacaca 27360

gaaccctgcc attctaaaat ttacccggga gttgactttg gaggagaaga attgaatgtg 27420

acttttgtta aaggagtgaa tgtttgccaa gagacttgca caaagatgat tcgctgtcag 27480

tttttcactt attctttact cccagaagac tgtaaggaag agaagtaaag gaaattttat 27540

ttttcaaaga cagttgacat gaccatttca tattctcttt ccccctgtga aggcttactc 27600

tttctactgt tcatttcatc taggtgtaag tgtttcttaa gattatctat ggatggttct 27660

ccaactagga ttgcgtatgg gacacaaggg agctctggtt actctttgag attgtgtaac 27720

actggggaca actctggtga gtaacctcac tttttcgtgg acctgtcagg gatgtctgtc 27780

atgttgatag tttgcttagt cttaaggaat tatgtgtctt gttctccttg gttagaaggg 27840

actttgattc acttctaatt ccaaccatta gcgtcaacgc tctcttttca gtctgcacaa 27900

caaaaacaag cacacgcatt gttggaggaa caaactcttc ttggggagag tggccctggc 27960

aggtgagcct gcaggtgaag ctgacagctc agaggcacct gtgtggaggg tcactcatag 28020

gacaccagtg ggtcctcact gctgcccact gctttgatgg gtaagtgttg gatgcatctc 28080

atccagagtc ttatcttggc ttttcatttt gaaggatcta tgatcagctg cttcaccgcc 28140

atgtgacttt atgaatagag acgtgttaaa gcggggatgg tattcacaac atttaactta 28200

tagggtccaa gcactgacca acctgaccat tagaacagag tgtggtctct gtacagggca 28260

gatggcgctg agtgggtatt ctccacagaa agagaaacga agacagtacc ccactcctcc 28320

aacccaccac ccaccaccaa tcccaccacc aattccacca ccaatcctgc cacccaccac 28380

caatctcacc accaatccca ccaccaatcc taccacccac catcaatctc agcaccaatc 28440

ccaccaccaa tcccaccacc aatcccacca cctaccccac caccaatccc gccacccacg 28500

accaatccca ccaccgatcc cgccaccaat cccaccacca atcccaccac ctaccccacc 28560

accaatcccg ccacccacga ccaatcccac caccgatccc gccaccaacc accaatccca 28620

ccaccaatcc caccaccaat ccctgatgtg ttcttcaaag acttatttgt caggcccata 28680

gaaatgttac ttcttgctct ttgattcata aatatactaa gtcataataa tttttaaaag 28740

tgagagtttc gtactctgta tatttcaatg tatataattt gatctatttc aatttattgg 28800

tcaaatagta gacatgttag gtaagtctta aaatactgag gctttggagt tagacagaac 28860

atggcttaag tgacagcttt gctgcttatt agaggtgtgg ccctagaaga tttgtaaatc 28920

cctctgagct ttatttgatc taaaatatga atagtaatag tcccgaattt gtaacgttgt 28980

tgggaagatt aagtgacaca tttaaaatgc ttagtactgt gtgtagaaca taaacacttc 29040

aaaaaatgta aactgtgatt tctatattca ataagaaatg tagaaatgga caaagcatat 29100

aaaaagcaaa agaaatacta gaagacactt gatttttctc aaaaataaac acaccaagta 29160

tttttgtttt agtgaaattc atgcttacat gctgtatact aggattgaac atactgccac 29220

caaaatatag cagtcggtgg tacatgtggg tggagcaaga cccctccacc ttgtcatcgt 29280

gtgaaggggc tctgccatac atgaccttgc atgtgacttt aaggtggttg gcctggaaga 29340

aaagtcccaa gatgggaaat agtaggtgtc ttttttacta aatgcactcc aatttgggac 29400

caaaaatttt cattcttgaa ggctcagtat tgtgagttta taagagataa tagacataaa 29460

agtgtaatga tttcattgca aataaaaaaa ggcccctttg cacctgatat ctccatcatt 29520

tttctagaat tttgtgcaca catgccttgc actacttggt gatgataaag atttccagat 29580

ctttgcacag aataaggctt tgctttagat cagaattttg gatgtactta gtatacattc 29640

atcttttaaa taatctattt acattttcat actttccaaa atacagatat attttatttt 29700

atttatatat ttatttaatt tattttttga gatggagtct ctctctgttg cccagagtag 29760

agtgcagtgg cacaatcttg gttcactgca gcctctgcct cccgggttca agcgattctc 29820

ctgcctcagc ctcctgagta gctgggatta caggcgcgcg ccacacctgg ctaatttttg 29880

tatttttagt agagacgagg tttcatcatg ttggtcaggc tggtctcgaa ctcctggcct 29940

caagggatcc acccacctcg gcctcccgaa gtgctgggat tacaggtgtg ggccactgtg 30000

cccagctgta tagagatatt ttaaacaaca ctaaagtcct cctactttga ctaattagaa 30060

gagcattaga agatcagcct gacttcttga cagttctgaa tttagtggag caatgaggtt 30120

cagctttggt gaatgagctt aatttttcca tgataaactg ctagtttctt cccactacag 30180

tgtctctcaa aaatgggaca gcaacattct ttttgttttc acttgcagta agcatgatgc 30240

aattacataa atgtacactt ttcaatttgt taaatagaat cttcagagat tcactactgc 30300

cgctattggt gatgaaaaat taccagaagg aggaattagg taggagaaaa tgtgtcctat 30360

gtatttcctt cccagttctt tgaaagagag tgataggaaa aaggaacact attgaaggaa 30420

ggactgccca gtttcaaaca ggtatttatt tttctctcct aggcttcccc tgcaggatgt 30480

ttggcgcatc tatagtggca ttttaaatct gtcagacatt acaaaagata cacctttctc 30540

acaaataaaa gagattatta ttcaccaaaa ctataaagtc tcagaaggga atcatgatat 30600

cgccttgata aaactccagg ctcctttgaa ttacactggt atgtagcata tgtaagaagg 30660

tggagagcag aattgcgctg gttgatattt tcatatcagt ttgaacaaga gggcagacct 30720

agagagactg tcgtcgtttt ctgactggtg gagttgaggg aaacgtgagg gttgctggga 30780

agtgaagacc ccgcgacttg ccgtgaaatc tcttctactt aaagagcaag acatgtgaat 30840

taattctttc agggagggat acaactgcat gcaggtgatg gaaataatgg gcgtgggaaa 30900

tgtctgtgcc gtctgagagg cactgggctt gctttgacaa gagtagcaga actgtcattg 30960

ctttgggctt agggatattc gaatgtgtga gggcaagtgg gatcagatat ctacttccag 31020

gtataatttg ggtaggaaag agactcatgc agaaagaagc cctggaaggc cagagcatcg 31080

tggtcagagg tgttgccttt ggagggtcat tgctgccagg agccgaatac ccactgtatc 31140

caataacatt catggtcagg aatggtggct cacacctgta atcccaacac tttgggatgc 31200

ccaggtggga ggattgcttg aggccaggag tttgagacca gcctgggcaa cacagtgaga 31260

ccccgtctct acataaaatt agaaaaaaac aattaactgg gtgtggtggt gtgcacctgt 31320

agtcccagct agtcaagagg ctgagacaag aggatctctt gagcccagga gctcaaggct 31380

gtagtgagcc aagatcgtgc cactgcacac aaacaattat gtgacctcgg gcaagttgct 31440

ttacctcttt acacctctta atttccttat ctgtaaaatg aggatgataa tttcttcctg 31500

ggtctgttgt aataattaat acatcaaagc acttcatgtc tggaacagtg aagataccct 31560

gctatgacta ttaaggatag tatacatgga ataagacaca ggaacttcta aatgcttttg 31620

accatagatt taggttctga gttttaagaa tttaactcag gaaattgtaa caccaaaaat 31680

gtcatgtgaa aaatggtggt gacaaatttt cttgaatcat tagccttaga ggttgggcag 31740

aaagcaaaaa attattcttg atgctactct atagaaagag aagacagaaa aagagaaaga 31800

tgtattttta aagtctatat ccataacttt atttgaccaa actctaattt aaaaattatg 31860

tttcagaatt ccaaaaacca atatgcctac cttccaaagg tgacacaagc acaatttata 31920

ccaactgttg ggtaaccgga tggggcttct cgaaggagaa aggtaagcat gacgctttaa 31980

atattgcttc tagagtaagt ctcacatgtt gaaatacatg gagtgggtcg ttttaatcgg 32040

tttctgtctg aaattatatc taaactcttt atctttccta tctatttatt cccaaatatt 32100

tattcagtta ttcttaaaaa atgtattttt gctttggctt gaaaaaaaat tttagggaga 32160

cttttaagca tcttacttca ttataaagat cagttgcttg actttgcatg aagcagattg 32220

ggcccttcta gggctgacaa gcccgtgcaa gaccacccgc tcctcagtgt tagtagcgtt 32280

cccgtctccc aaaaccatgt tctcccttga tgctaatggc cgggagcaca ggcaggtgtg 32340

tcgtctcact atggagaata atatttgtgt cattctttac agaagaaggt agcttgccaa 32400

actgtctcca tctttcccga ttcagtcttt tgttcaagta attcacattt ttagattttt 32460

tattggtaat ctgagacaag aagaaattta aagtaatctt cactaagcca tgaaagctcc 32520

caacattgtt ctccatgaga gatgctggcc tgcatttatt caaaaacaaa agacccctct 32580

gttgccaaag ctcggagggc ttttcagaaa cgatatagtt gtaaattata attttgaata 32640

tataaagcaa aaaaatgaaa agtgagaact tccaggcttt ggattgttgt aggtgataaa 32700

tataaaatgg gatttctggg gggctgctac tgagatgagg ggatggcaga aaacatggaa 32760

gcaaggtctc tggtcagccc agggtgctgg gcttgtccca acaccacgta ggcaataaga 32820

ggacagtaca gggtgccgtc tctctccctc ttcctctctc tgtctctctc tctctgtgtg 32880

tgtgtgtgtg tgtgtgtgta acactacctt cccaattttt actgtctatt tgtattcaaa 32940

gataaggtcc ttatgaaaaa tacactgctc tgattcactt taaaacttat ttccatattt 33000

attatttatt gtgggaataa taatattccc aatattatta tttattattt aagttattat 33060

tattaacttc cctctgaggt tatatattgg ttactcacag gtgaaatcca aaatattcta 33120

caaaaggtaa atattccttt ggtaacaaat gaagaatgcc agaaaagata tcaagattat 33180

aaaataaccc aacggatggt ctgtgctggc tataaagaag ggggaaaaga tgcttgtaag 33240

gtaactcatg agattatgaa aaacacaata ggctgcttga gaaaattcat ttcaaaatat 33300

attttccaat agcataattc aatcatagtt tttaaaaaaa ttcagagaca aatgatctga 33360

taaattgata agcaactttt aacaaattga atatacataa tatatattta tattatttat 33420

gatatatgtc acaatctatg catgtgctat ttaagagggg caaatataca tgcaataatt 33480

gtgctagaat ataaaaacat tagacttcat cattgggatg atgatatcaa gatttctttg 33540

ttagatttat ttcagataga aaaggggata cgaaaaatgc aggcacatga gatacttgga 33600

gaactttaag aaagagtgag tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtctggc 33660

aagcaaggtc ttgcacacac acagcacttt gggaggccaa tgcaggtgga tcacttgagc 33720

ctaggaattt gagaccagtc tgggcaatgt gatgaaaccc atctctacaa aaaaatatga 33780

aagtatctgt gtgtgtgtgt tgctgtgtag tggactacag aactttagag gcagtcactt 33840

atttgaatcc cattgtcgta actttctact attttatttt tccactgtga ctcagggaga 33900

ttcaggtggt cccttagttt gcaaacacaa tggaatgtgg cgtttggtgg gcatcaccag 33960

ctggggtgaa ggctgtgccc gcagggagca acctggtgtc tacaccaaag tcgctgagta 34020

catggactgg attttagaga aaacacagag cagtgatgga aaagctcaga tgcagtcacc 34080

agcatgagaa gcagtccaga gtctaggcaa tttttacaac ctgagttcaa gtcaaattct 34140

gagcctgggg ggtcctcatc tgcaaagcat ggagagtggc atcttctttg catcctaagg 34200

acgaaaaaca cagtgcactc agagctgctg aggacaatgt ctggctgaag cccgctttca 34260

gcacgccgta accaggggct gacaatgcga ggtcgcaact gagatctcca tgactgtgtg 34320

ttgtgaaata aaatggtgaa agatcacgat tagcaagtgt tttcttctgg ttgtgaaaca 34380

gaactgaaag taagtggttg aggttccagc acagttcctg ggatccctct aattgcactg 34440

cttcctctgg aactcagtat atctcaaaga tgtaatttcc tctccgtgct gcacctggtc 34500

ggccactgaa acccactatt gcctgcttca cgtgtggcaa agagctagcg ggcttgggtt 34560

ttgttctgcc gagaggaagg gagaacaccc acttttataa gaaagagatg ggttacctga 34620

acccatgggc acctttgcct cttggcctcc taactttgct accagggcat ggctaggagg 34680

gtccaggctg cgcgtgctga ggagctcgag gggctgcagc attgcacagc cttcatggca 34740

ggcaaggaat ctgctttgca aggggcatta gccctggagg ctcagtggat atgggctatt 34800

gcaatagtaa ttcaaggagc atttttaggc ctggcgtggt ggctcacgcc tgtaattcca 34860

acagtttagg agatcaaggc aggtggatca cttgagcata ggagttcgag actagcctgg 34920

ccaatgtgac gaaaccccat ctccacaaaa attagctggg catggtggtg cgcacctgta 34980

atcccagctc ccccagaagc tgaggcagga ggaccgcttg agcccgggga tgtcgtggct 35040

gcagtgagct gagatggcac cactgcatca ctgcattcca gcctgggcaa cagagtgaga 35100

ctgtctcaaa aaaaggaagc attgttaggt ataaattatt attattatta ttattagtag 35160

tagtagtagt agtagtagta ctgagacgga gtcttgctct gttgcccagg ctggagtgca 35220

gtggtgcaat cttggctcac tgcaatctct gcctcccggg ttcacgccat tctcctgcct 35280

cagcctccgg agtagctggg actacaggca cccgccactg tgcttggcta attttttgta 35340

tttttagtag agacgggttt caccatgtta gccagaatgg tctcgatctg ctgaccttgt 35400

gatccacccg cctcggcctc ccaaagtgct gggattacag gcttgagcca ccacacccag 35460

ccctgttagg tataaattat ttcataaaat tcagacttgt aaatttatgg tagcctttgg 35520

aatgggtgat agatgtccta tgccacacaa attcctcaca tgccgaggct caccgtaact 35580

gataccagct cgcttgattc agttcagtta aactgaacaa catttacaca gaattggcga 35640

tttacaaaat cttatgtaag ttaagtagaa aaacagaaaa aagttttctg aaagagtttg 35700

ggtttttcct tcaatgctca agacagaggt ccccaacctt tttggcacca gggaccagtt 35760

ttgtggaaga cagtttttcc atggaccagc atggtggtgg gggatgattc tggaatgatt 35820

caagtgcatg acatttatta tgcactttat ttctattatt actacattgt aatatataat 35880

gaaataatta tgcaactcac cataatgtag aatcagtggg agctctgagc ttgttttcct 35940

gcaactagac agtcccatct gagggtgatg ggagacagtg acagatcatc aggcattaga 36000

ttctcataag gagcctagat ccctcacatg tgcagttcat aacagggttt gagctcctat 36060

gagagtctca tgctgctgcg gatctggcag gaggcagagc tcaggcggtt atgcttgctg 36120

gcctgccact cacctcctgc tgtgcggcct ggctgctaac aggccatgga ccaggtactg 36180

ttctgggccc cgggggttgg gaacccctgc tcagagacac accgggtggt aggaggagct 36240

aaaggtggag agggtgaagg aaaatatgag gtctgggcta tccacaaacc agatagcagg 36300

aaactgaaga gttaaacatt tacttcagaa ttgaatggct tttgtaaaat ctggctagat 36360

tccatgaaac gattttaaaa atgcactatt taaattttgc ctttgcatgc gatgaagaca 36420

ttagtctttg ttcatgtgga tgttttttta tgtttaaaag ggaaaaaatg gtttgcaatg 36480

aaacttttat ctcagtcttt gagtattgat catggggtgt tggaacagga ctttggaatg 36540

cttgcagggt aaacctttgg cctctgttag tcagggaatg acctagtttg gcaaaacaga 36600

ggagagtttt gaaatatgga actttcccga ggcatacatt gtcattttaa agtggtcaat 36660

caaagcccag taggactggg ctggtgtctt ggtgactcac tgtgtgctca tatacagggg 36720

taactgagga gcccttcaca caggtctagc ctcgtgggac taaaaagtgt gacatgggct 36780

aggaaaatgc gaggctggga tgccttcact cccatgagga agcgtgacgg gaggaggcgt 36840

gggccactgg cagttctact tcacaaaggc tgctggcagt gtcaatcctg caagctggcc 36900

ttgccctcct gtggcggcag tgtacacgtg gcatgcaagc acatgcacaa gccacctggc 36960

tccaaggtca gccaagggct ccaacatctg tctcagtccc 37000

<210> 11

<211> 2472

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 11

agaccgccct cggtgccata ttcagagggc ttgaagacca tcttcatgtg aagactccct 60

ctcctccaga accacaacgt gaccatcctt ccaggatgat tttattcaac cgagtgggtt 120

attttgtttc cttgtttgct accgtctcct gtgggtgtat gactcaactg tataaaaata 180

ccttcttcag aggtggggat ctagctgcca tctacacccc agatgcccag tactgtcaga 240

agatgtgcac ttttcacccc aggtgcctgc tgttcagctt tctcgccgtg actccaccca 300

aagagacaaa taaacggttt ggttgcttca tgaaagagag cattacaggg actttgccaa 360

gaatacaccg gacaggggcc atttctggtc attctttaaa gcagtgtggc catcaaataa 420

gtgcttgcca ccgagacata tacaaaggac ttgatatgag agggtccaac tttaatatct 480

ctaagaccga caatattgaa gaatgccaga aactgtgcac aaataatttt cactgccaat 540

ttttcacata tgctacaagt gcattttaca gaccagagta ccggaagaag tgcctgctga 600

agcacagtgc aagcggaaca cccaccagca taaagtcagc ggacaacctg gtgtctggat 660

tctcactgaa gtcctgtgcg ctttcggaga taggttgccc catggatatt ttccagcact 720

ctgcctttgc agacctgaat gtaagccagg tcatcacccc cgatgccttt gtgtgtcgca 780

ccatctgcac cttccatccc aactgccttt tcttcacgtt ctacacgaat gaatgggaga 840

cagaatcaca gagaaatgtt tgttttctta agacgtctaa aagtggaaga ccaagtcccc 900

ctattcctca agaaaacgct atatctggat atagtctcct cacctgcaga aaaactcgcc 960

ctgaaccctg ccattccaaa atttactctg gagttgactt tgaaggggaa gaactgaatg 1020

tgaccttcgt gcaaggagca gatgtctgcc aagagacttg tacaaagaca atccgctgcc 1080

agttttttat ttactcctta ctcccccaag actgcaagga ggaggggtgt aaatgttcct 1140

taaggttatc cacagatggc tccccaacta ggatcaccta tggcatgcag gggagctccg 1200

gttattctct gagattgtgt aaacttgtgg acagccctga ctgtacaaca aaaataaatg 1260

cacgtattgt gggaggaaca aacgcttctt taggggagtg gccatggcag gtcagcctgc 1320

aagtgaagct ggtatctcag acccatttgt gtggagggtc catcattggt cgccaatggg 1380

tactgacagc tgcccattgc tttgatggaa ttccctatcc agatgtgtgg cgtatatatg 1440

gcggaattct tagtctgtcc gagattacga aagaaacgcc ttcctcgaga ataaaggagc 1500

ttattattca tcaggaatac aaagtctcag aaggcaatta tgatattgcc ttaataaagc 1560

ttcagacgcc cctgaattat actgaattcc aaaaaccaat atgcctgcct tccaaagctg 1620

acacaaatac aatttatacc aactgttggg tgactggatg gggctacacg aaggaacaag 1680

gtgaaacgca aaatattcta caaaaggcta ctattccttt ggtaccaaat gaagaatgcc 1740

agaaaaaata cagagattat gttataaaca agcagatgat ctgtgctggc tacaaagaag 1800

gcggaacaga cgcttgtaag ggagattccg gtggcccctt agtctgtaaa cacagtggac 1860

ggtggcagtt ggtgggtatc accagctggg gtgaaggctg cgcccgcaag gaccaaccag 1920

gagtctacac caaagtttct gagtacatgg actggatatt ggagaagaca cagagcagtg 1980

atgtaagagc tctggagaca tcttcagcct gaggaggctg ggtaccaagg aggaagaacc 2040

cagctggctt taccacctgc cctcaaggca aactagagct ccaggattct cggctgtaaa 2100

atgttgataa tggtgtctac ctcacatccg tatcattgga ttgaaaattc aagtgtagat 2160

atagttgctg aagacagcgt tttgctcaag tgtgtttcct gccttgagtc acaggagctc 2220

caatgggagc attacaaaga tcaccaagct tgttaggaaa gagaatgatc aaagggtttt 2280

attaggtaat gaaatgtcta gatgtgatgc aattgaaaaa aagaccccag attctagcac 2340

agtccttggg accattctca tgtaactgtt gactctggac ctcagcagat ctcagagtta 2400

cctgtccact tctgacattt gtttattaga gcctgatgct attctttcaa gtggagcaaa 2460

aaaaaaaaaa aa 2472

<210> 12

<211> 260

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 12

gagtgtaaac actggagcca agcaaagacc gccctcggtg ccatattcag aggggttgaa 60

gaacatcttc atgtgaagaa tccctctcct ccagaagcac aacgtgacca tccttccagg 120

atgaatttat tcgaccgagt gggttatttt gtttccttgt ttggtactgt ctcctgtggg 180

tgtatgagtg gactgttaaa taatacctct gcagaggtgg ggatctagtt ggcatctaga 240

cccctgagga cgagtagtga 260

<210> 13

<211> 30000

<212> ДНК

<213> Mus musculus

<400> 13

atgagaagtt attttaaatt taatttttta aagtttattt attcacccct tgccacgctc 60

tccagtcgag tcagtttgac aagcagaagc ttggaagctg gccgtgagga aaagagtttc 120

atggaagctc cctcctggag tctggcactc tctttaatct ctttaaccca tacattaatt 180

ttccactccc atgttagtct agtgtatgga tccacgtgcc ctctattaag cattacccta 240

ttataagtgc catttaagat tgaattctga catagctaaa gcctctccca gtgttccaag 300

atcccagttt acagcaaggt agtttaacct attcagtaac taattaagca ttacaataga 360

cagagccatt aactcagttg tctgcagaaa gagcctggga atctcactga gatagaaatc 420

tttactacag gctacattcc atgccaagag caagttgata tactatactg atatatgggg 480

aattcttcag acaagataag attttacaag acctaggaat ttaggggtcc atgacactac 540

attattcttg aggcctgtca agagttaaaa ccccctggtg ctattaacac taaagtgtga 600

aactcttgcc tggcattagc ctgatcctag gcagggctgg taatttctat tgtaaacatt 660

tatctagttc ctgcaaattc ctttcttgct tgtatctggt aaatttcagt gtaccttgtc 720

ttattgtgat ttgtagctcc tgataattcg ttgtaatata aaatagtcta atgttcgacc 780

agagattaca ttcagattca acacctctct tgtgtgcatc tgtttgtcaa tttaatccta 840

agctttgccc acctactcta gagacccgtt ctacacagac acagggaccc agagggtctg 900

cagcaacctc ttgcatggtt atgtgtgcac acacagaaga agtataggtg tggtggtcaa 960

aggacacttt tagggggttg ccttactccc tccactgtgc aggttctggg gatagaactc 1020

cagtcattag gcttgacagt aaatgccttt gaccccctga gatatcctgc aagctccacc 1080

atgattttag gctttaaaaa catgcaaacc tattagtcat ttatctcttc aatagattct 1140

gggttagcca actgtgcagt tagagttgaa tgtgcaaggc tgtttgaatc tcgggtccat 1200

agaaaatagc ctggcatcag ggtccattgc aattacattg atgattgagt ccctgggctc 1260

atgcttggat acccagttca atggggccag tatcttatga tcgaggactg gcttaaagtg 1320

cagatgttga aatgagccta gaaactgagc ctccagaggc aatgtccaaa ctcaagccca 1380

cgggcatgag tttgttccca aatctacaat tacagtcctg gaaaagattc tacgggggta 1440

gtagacccgg tgactgggcc tgaggttaac atcctggagc ctgggtctgc agggtctggc 1500

cggatactgg aatttcctgg gatgggcttg ttttcagacc cgtgaaaagt aatgtttaca 1560

tcactcttct tcatgcattt ggaacacatc tccttgctgc gctgcttagg attggtagga 1620

gggtttcacg gttaatgtga aaagtctaac attcctcaat gcatattcac taggtccaca 1680

ttttcaaccg gggttggggg gtgcaaccta tcatctggat tccttaacaa ctcggaaggc 1740

attttttttt gtgcacagag aattgttccc atggattctt ctgcaaaggg acccattttg 1800

gagcctccag ctctgtcatc gtgtttatat gacttcttga aattggtaac atattaagta 1860

gctgaacctg gactgggatg tccgtggact atattgacag gttaaacagt tgaaactgat 1920

gccagaaacc cagtgtaaac actggagcca agcaaagacc gccctcggtg ccatattcag 1980

agggcttgaa gaccatcttc atgtgaagac tccctctcct ccagaaccac aacgtgacca 2040

tccttccagg tagctgcttt ctaccggtct tgttatttcc tgtgtcttgg gttttttttt 2100

ttcaatataa ctatttctgc atgaacaaaa gctcactggt ataatgcact aatttcctga 2160

gtttttagaa aatctacaag gagttgtttt tctttctata caaatatatt aatgtaaaat 2220

attttaaaac caagaataag tttttgattc ttttcaaaga tgtcctttct gtgaaggttg 2280

tgggtgatat tattgtcctt attcataata attttgcatt aatctggaaa tttaataagt 2340

gtttttaatt atttgtatta actctttaca aaattattag aaataaatct tcaaaattaa 2400

caataaatac actaatacac actgatagta atctagaggt ctcaatttgg atcttgggaa 2460

gcatgataaa tattttaatt ttctatatac aaaatatccc acagccaaat cttccttctc 2520

ctggtgatta tgtgctgtga tttgcaactt agacatttat caaaaaggtg aagtctacat 2580

gaagttaaat tgtctattaa atacatggta aacatgatct caacctagta gttatatgta 2640

tatttttttc tttcaaagga tgattttatt caaccgagtg ggttattttg tttccttgtt 2700

tgctaccgtc tcctgtggta agtattagtt taaggagttc aaattaatag tgtgtgagag 2760

aggaatggtc ttgcaatcta taccactcct ggaggaagcc tttaactgta cagctttggg 2820

ggacaaggca gctgttgata ctccaaggca agaacttaga tacattaccc caaacacaga 2880

tgaacagggg gaggaactta gagacatcac tgcacctgtt agcagaaata tctgttttga 2940

gtttactctt taacagagcc tctcccaccc ccgcagagtt gtttgtcttt ataatatcag 3000

ccttctaaat aaaaactcta cctgaaaatt ggaaataata tcagatattg cataatgatt 3060

tgagtctaat ccaggtatct gattagtata tagtattttt aatataagac atacagagcc 3120

atttctaaac tgaaagtacc tgctttgggt ttcacaagta tagtatccct ttggcagtct 3180

ggagggacag ctttcaacac tcgatgtcag tgctctttcc ctgtttattc ctttgctttt 3240

caggatatga gcatggatgg ccctgaacag cccctctcaa cagtcattat agagggagat 3300

ttccctgggt ataacatgtc aggtgtattc tgagtcaaag ctgacttaga tatagccaca 3360

cgcaaggatt gttttcttct tctttttttt tttttttttt tttttttggt tttttggttt 3420

tttggttttt caagacaggg tttctctgtg tagccctggc tgtcctggaa ctcactctgt 3480

agaccaggct ggcctcgaac tcagaaatcc acctgcctct acctcctgag tgctgggatt 3540

aaaggcgtgt gccaccacgc ctggcaagga ttgttttctt gactttcaag tatatggcaa 3600

agataggctt gtccttgtaa gtagaagtca tttctctagg taagctcttt tttcccatcc 3660

ctctctgctc cctacatctg gcccatcatc tgtaactgct ctcctgtacc ataactactg 3720

ccatgttcaa accaactaaa cacgaatagt gataaccaga gatgctatgg gccatggcta 3780

taaaattcat aatcatgaca ggaaaatgag acatgggaat acatataata cttgaaaaca 3840

aatactttat ataatcctaa agtacaaaat aatgatcgcc aattttttct ttagtctttc 3900

atatttttcc gcatgaatct atctgttgta taaagtgtta ttcatgaata ataattttaa 3960

ttaaaaatta tgaacactaa tgaaaaataa ttttaactta cctttggtat ttatagctaa 4020

tgttaatgca aatgaacatt tatgttattt gttcttcttc atggatattt tgtaagtatg 4080

gacattctct gcacatatcc aattatttct atagattaaa tttttggaaa taaagatttt 4140

agatagagga gtatgaatac ctttgaaggc tttatagcat gcattatggt attagcttct 4200

agacaggcat tctctgtttg gttttcccca caagcatgtg gaagtgaatt aacaatacaa 4260

tctcttagaa atgagatgtc aatattaaat acgttttatg ttaaaaaata aaatttacag 4320

gttcacaaca ctggtttaaa cagctaggtt aacaaagatt aaatttgaaa caatcaatat 4380

ttgtgcgctg gctttgatca caaatgaaag aaaatcaagc agtacagctt taatataaat 4440

gagtttaaga gttcagaaat ccatgtgccc agtgaatggc ttctggagta cttagacact 4500

gcccaatgat ggcacccgca catagtgtgt ctgcattgct ttactgcatt gtacgctgct 4560

gccttcatct caggatgcac aatagcaagg caggaccagc agcccaagtc gccttggaaa 4620

caaaagtaaa tcggagcctt ttcctaagtc tgagaacaag cctgttacag actagctctg 4680

gtcaggtcat tgtaccagct ctgtgtgcag ttctggctct ggtctgattg gctggagcat 4740

caacagcaga agcatcacct ccagcaacat atggaccacc acttgtagat ggttcctcag 4800

gaggaaatct ggatgccaat tcagcaaggt ggctctatgc caggctacaa agtaacagat 4860

gcctattgga gctcactgtt ctaagtgggc aggcatggtg caggaggagc tgagagttct 4920

acatcttcat caaaaggctg ctagcagaat actgagttcc aggcagatag gatgagggtc 4980

ttataggcca cacccacagt gacacaccta ctcctacaag cacacctact cccacagggc 5040

cacaccttct aatagtgtca ctccctgaga tgaacacata caaaccatca cagtgcccat 5100

ttgctgcaaa gagaggcttc gttgatgtgg gacagtcact acagttatct agggaaggtg 5160

gtcatctcac tgttagcagc tttcatatac ttacagttat ttacactcct ttggtaaatt 5220

atcttttcat atctgacatt gaatgtttaa aacattttag catttatcta tttttgtatc 5280

tatgtctgca cacgcatgtg cacatataca catgtgctgt ggagcacgtg tggagatgaa 5340

ggggcatctt gtggaggtca agaggtcaat ttgaaaactg aagggcctca ttacaggttg 5400

tttaggttaa ataaactctg tacaaataat gctgttgtta taatcattac caccaccttc 5460

gttatcattg ctgccgttat cattgcaact gaggaggata agcagtccca cagttagaat 5520

gtgtctagtc actctttttc attgcctgag tcacatgtta gtttaccaac attcaattgc 5580

aggatagaaa cttccaggct atcagcggat cacagtttgt gtttgtgttt gtgtacgtct 5640

ctgtgcaatg ggatggcaag ggagcctctg cttgataatt atgagatgct aaccacataa 5700

aaaaacaagt ctctttatag ctatcctcac cactgggcct actattcagt gcattgtgca 5760

aatgggacac cttagggtat acacttggga acatatattc ctaggagaat ttacccagga 5820

atatctgttc tttccaaata taaacctgac ttaagaggta ggcatggtga cacctctctg 5880

ataagaagaa aaacaatatt gctaggttgg ttcatccaaa cttgtctcag tggcaggatc 5940

cccatataga tagaacatag aaactcttac ctctttagtg cttattaaaa gacatgttgt 6000

ctagacaacc attccttgaa aagtaaggac aatgtgggca atgttgccac tggagtattc 6060

cataattaat gaaaacctga ctggtgaaaa cagacaggct gcctaaggtg gaaagctaag 6120

tacaaagatt tgaacggaat cttttcaggg agatcccagt tcttcaatgg atttaaagag 6180

ctgctctcta atgatatgtg gggtgcagga tacccacatg atggagtcag cagaagcgat 6240

gtatctcagt ttattttcaa gttagcttac tttaattttt tttttaattt gaaaggtatt 6300

agcctttttt tctgatttat tgaaaatatt cttttctcat gccatatatc ctgattatat 6360

attttccttc cctctactcc tccaagttcc tccccagctc ccatcttctc cccatccact 6420

ccctttctgc ctctcattag ataagaacaa ggtttctaag agacaacacc tatacagaac 6480

aacataaaat ataataagat gaagcaaaaa ccaccacagc aaagttggac aaggcaagtc 6540

aacagaagga gaagagcccc caagagaagg gacaagagtc agagacccat tcaggagtgc 6600

catgaaaatt ctcaggggaa ggctacaaaa tatacgtaga ggaccctgtg cagatctgtg 6660

taggccctgg tgcttcagtc tctgtttgct cacaggagcc ttacttagtt ggttcagagg 6720

accttgtttt cttggtgtcc tctggcccct ctagctctga gactccttct gtctcctctt 6780

tcacagggat ggatctctca gctctgagag gaaggatttg atgaagacat accactcaga 6840

gctgtgtgtc ctaaggactc tgactctccc ctctccgttc tcctctctct actcttctcc 6900

ctctctctcc cctcttctct ttcttctctc ctctctcatc tctcctccct cccctcccca 6960

ctctgtaaaa tgtctgagtg tgggtttctg caaatacatt ttctttatca agaaatgagc 7020

aacagaaaaa cagtacccaa tacttattat tttgcttaaa taaggctggc taaacatcaa 7080

catgcaacat tgcatgttag aaaaagggga cagacaggat tgagagtcag aaagagtaag 7140

tttatgtccc aggatatcta ttcactgtgt gatattagcc acatttgaac tctgagactc 7200

agttattgac ttctttcatg aaaaaagggg gaaaagagag gtgcaactaa tggtcctgac 7260

ctcaagttgc cctccaagtg ttgtcctaaa aagcattttg aaaaaaatgc tgtattttca 7320

tttctaaggt gagatgtttt cacagcatgt tagacagcag gcagaaaaaa attatactgt 7380

attttagtag ataatttatg taaaaattat tatataggta ataaaagagt caacttctat 7440

gcataaatgt tcataagatg actttaaata gcatgctgta ttgtttgaca gttgtcagac 7500

ccgtgaagtt gtaatgacta ttaggataaa taaaacagga atgtcaaaac agatgcattt 7560

ctattaaaat ggttacactt tcccccaaaa tcaactttta aatcacaggg tgtatgactc 7620

aactgtataa aaataccttc ttcagaggtg gggatctagc tgccatctac accccagatg 7680

cccagtactg tcagaagatg tgcacttttc accccaggtg cctgctgttc agctttctcg 7740

ccgtgactcc acccaaagag acaaataaac ggtaagatgt gatggtttgt cattgccagg 7800

ttagatgtta cttaaactgc ttccagttat atgccaaaat agtgccatgt ttctcagagt 7860

gttcaaagac tctttgcatc agaagctcct aggctgggtc ttttcaatgc agacccaaag 7920

tactgaaccc agagacagac tctaaacagc cacaacactt gttcacagtg ataggaggta 7980

gtgatgctac agccaaggcc tgaagacaga gcatgtgaca agaaagggtc cttcctcaca 8040

ctgcaatact tagccttttt tcactttcaa catgttattc tgtccccaca tgtacatctg 8100

ttatgtatat aaatgttatt agctgggtta tgcatatgag ggagaacctg agggtttttt 8160

ttctttctga gattatatgg cttcccttaa tattaaaaat actaagtcca tccattttcc 8220

tacaattttt gtgatttcat ttctcttcag cgcataatag cattgcatta catattttct 8280

gttttattca tttgtgtatt aattaattta ttataaatgc tgcaaataaa acaatcacag 8340

aaccaaatta accagactca gagactgtgc aactcagtga acttctatcc agttacagta 8400

attgtttgaa aaggaagcca gggaatgtca caatgcactt gatactttca ctatcaaatt 8460

tatattttaa tcatatatat tgctttctaa taaatggtga caatttcacc tgcatagaga 8520

aatatattta attgctttac tagctaccat atttataggg agcaaagttg agaaagtata 8580

agccaggaat tttgttgata ataaatttga gacccagtag gcaagtctca atagtgcctg 8640

cagtggacca gtttacactt ttagaatatg cattttctct ctctctctct ctctccctct 8700

ctctctctcc ctctctctct ctccctctct ctctctctct ctctctctct ctctctctgt 8760

gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtat gtgtgtgtgt tttattaggt ggtaattttg 8820

gcaagaacaa ttattaaaaa tatatttgga aattttacct taattttctt tcatttgatc 8880

aagagccaaa tgtaaatttt tgcttctttt tccatacaca taactttcat cttcaactat 8940

gtgaatttaa gaattagaat tttaaaactc attctctgat ccctacatgc taatctgtac 9000

caaaaaaaac ccaaacaaac aaacaaacaa acaaaaaaac ccagaccata tgtgagattt 9060

acatttttaa aaaaattgaa ccaggttcta agattcttat aaatagcaac gttaacatag 9120

cgttgatatt gaagacagaa aaagcctccc attacatgga cactaccggg aatcaataca 9180

ccagatgaac atcacatgca gacctaactc atagctgagt cagttttttt aaaagtaaat 9240

taaaatcttt ataacaataa tcaccatttt agaaaatgtg gatgtttcag acaggagaat 9300

cgtaagttta aagtcagctt gtgtaagtta acaagatcct ttgtcaaagc aaactaagta 9360

aaagcttggg gtggcatggg gggaggaaaa ggctggtgat aattattagg atttgattag 9420

catatttgaa gcccaggctc tcctcctcag taccacataa actaagaaca aaaccaatga 9480

tcttttggaa agaggagcca gcgacgttca gaatgagaaa agaatcatca acccttcagt 9540

gtggttggct ctccgcactt gcagcgtaaa cagtaagaaa aacaacgcta tagagagcat 9600

ggacttgtcg caagaacgtt ctcttcagca agtgacaagg ccatgttatt agtttcctga 9660

ccctgggctt tatttattaa catgtacaaa atactgcatc atttcttaat gtgtgtttgt 9720

tcaattccgc ttttaaaatg tgttttttta aaaaacaggt ttggttgctt catgaaagag 9780

agcattacag ggactttgcc aagaatacac cggacagggg ccatttctgg tcattcttta 9840

aagcagtgtg gccatcaaat aagtggtaag atgtggattt tttttcccaa ctaaatttga 9900

gttaataaca ctcaaactca gagtagcttt tgctgcaagt ttatactatg atggactttt 9960

agacgagacc accaagaaag ataatagagc tgaggcagca tcatggctgt aagaaggggg 10020

tactttcacc ttgataatgt tcacatcttt atcagttata gtgctcagcc ttaacgggcc 10080

tctattacct atggtattca cacacaatgt aagatttgtg ggaaatgaat atgcacccag 10140

ataataggcc ttccctgttt ccgcaacaga ctttttaggt aagactcggg gacatctcat 10200

cccaaagtgg attttggggt aattggtggt cacccccaga actgactttg ccctctccat 10260

gtcaaagaac agctgaaaat gtctggagac agtttagatt gttaaaattg gggaaaatgg 10320

tactttacgg taatgctcag agttggtgca gtcagactca gcagaaaaca ttctggccac 10380

cacggggcca ttgataaggg attaagactg tggttctcag ccttcctaat gctgcagctc 10440

tttaatacag attctcttgt ggtggaggtt accagctata cacttttcat cgccacctca 10500

taactgtaat tttgctactc taataaatca tagttgtaaa catttgtgtt ttccaatggt 10560

cttaggcgac ccctgtgaaa gggtcttgca acccctccaa aatgggttgt gacccacggg 10620

ttgagcaatg ccggtttaag aaatcttatt tttgccactc ggtccagact gaaagactga 10680

gttctgtcca tcttgctaag cgtaatattt cttacaagga atgtgaacgc taggatgtta 10740

gagcgctttc tctgtgactg ctgttgcaac tgatgtctta gaacacacca tcttaattct 10800

cagaccatct taaaggctta ggataaagaa ggcattttta taagatgaca gggactgtta 10860

gaaagtgaaa gtgctaaaaa agaatgaggc ggtgagttcg attatattgc tttgttttta 10920

cgtccttcat tccgtaggtt caaatttcaa atgttctcat tttgctccag taataataac 10980

agccctctca ccacataaac attcagtgtc tgcagtttaa attttaggca atgaatgaag 11040

aatgacaatg gcttagctat aaatccatat atttatatgt acatatattt aacctgaagt 11100

gaactacatc aagatcaatc cataaactaa cttgctgtat attgcttgat gaagtgtcta 11160

attactgtga ccaacgacaa cattttaaaa aatagaacta ttgtgacttc cccaaagctg 11220

cttagttgtc tttttctccc cctaactttg taactttttt ccaaatactt tcaagaaaga 11280

tcttcaagtt aaaaagggat ctcaaggagc cagttttagt aaaaactatt gagaggtggg 11340

cttaaagtgt acagataatc attaagaaaa tattttattt gtttctacct tatcccaacc 11400

ctcagctcat ttcttttctt atctgaagca aatttaaaag aaccttattt ttacaattta 11460

cagtttccta ccctgtaaac tgctgggagt ttaggacccc tacaccctaa cataatgctt 11520

tccttttttt ttattggata gtttctttat ttacatttca aatgttataa cctttcctgg 11580

ttccctcccc caccccaagt cccctatccc atccccctct ctctgcttct attaggctac 11640

tcccccaccc acccacccac tcccgcctcc ccacccaggc attctcctac actggggcat 11700

caagccttca caggaccaaa ggcctttcct cccattgatg cctgacaagg ccatcctctg 11760

ctatatattc ggctagagcc atgggtccct ccatgtgtac tctttggttg gtgatttagt 11820

ccctgggagc tctggggggt ctggttggtt gatattgttg ttcttcctat ggggttgcaa 11880

accccttcag ctcctttcta ttagtttgta tatgcatagt gtctcctgtg tttaattaat 11940

ttcacaattt ttagaaactt atagttatgt acaatagaat attgtttgtg ctaacacaca 12000

cacacacaca cacacacaca cacacactgc ttgcttaact aagtatctaa ttaaaacaaa 12060

acgtaagagc ttaatttggc ttaatttctg ttaaaagaat caactatttt caatatataa 12120

gataaattcc agtaaaagga tgcttaaata gaattgaaga aacctttaaa aactggtgtg 12180

ctagcacatg gctatcatct cagtaccagg gaagcagagg caaagaacat tttaagttca 12240

aagccagtct ggtctgaaat tcgagattgc cacattcagc atggcttggg ggctggaaaa 12300

ctgagtaaga acattaaggg aagaaaggac agacacacag acccatgtgc agggaagctg 12360

gaatagtgtg agttatgaga ctgaacccct aacccccaga atgcttgtta catacacagg 12420

ggaagggtta aatagtctca gagggcggtc aggcaatctc tcctcttggt ctataatcat 12480

cttggagtag aaggtgaagt tgctggtcat tgtgcacact ggtcaattgc tcctaaacac 12540

tactgctgag acccagggat atctctgccc ttttcccatg ggtctgagcc actgatcctt 12600

cacatgtggt cctcagacta cagaccacag acttcacctg ctcctttcac atttactggg 12660

gtttcccatg gttaccacag gagttccaaa ccagccaggc tagaaaggac aaggaaggat 12720

gcagtggctg cggtggtggc cagtggtggt ggtggtggtg gtcatagaac ttaagagagg 12780

tttaaagcaa gaagggaaat gatttcactg tgcgtataaa taaattgaga cagtctgtta 12840

aaagatttga cacaggcatc agtgttgtga ctaatagtca caaatagcaa tcagacctga 12900

ataggcgaag gaagagaaac tgatgcagat catgattttg ttttgttttg tttttttggt 12960

tgtttgcatt gttggtggtg gttgttggtt tgggtttttt tttttgcgta tttgtttttt 13020

gttttgtttt tgacccagaa gtcaaaggtt cgccgtttgt caaatacttt gtgtctctgg 13080

cacacactat caggacccct gttgctgttg ccttccttgc ttatcagtgc ctctgctagc 13140

ttccatgtgg aagtgcattg ttttgtattg ttgcatactc gttgcagttt aagaggcaaa 13200

ataacctgtt tttaatgctg gggccaggta aacacacccg aggtgagcta atgtccagca 13260

gtgtttgata atttagacat gcaaaaaaca ttttaattcc tgtacttacc agggaagtca 13320

ccaaaatggg ataccaacct tcaaaaatga ctctgaggga agagcagttt atttgtgtct 13380

aaaaagaagt ttggtcgaac gtctctgtgt ttcctttcag cttgccaccg agacatatac 13440

aaaggacttg atatgagagg gtccaacttt aatatctcta agaccgacaa tattgaagaa 13500

tgccagaaac tgtgcacaaa taattttcac tgccaatttt tcacatatgc tacaagtgca 13560

ttttacagac cagagtaccg gtgagtgagg cacagatccg agaggacact ccagggatgt 13620

gttagcatga aaaaaaaaat cttccctcca gtcaaggtgc aaggggcatg caatccccag 13680

ccctgcccct attttattcc ttatttacat agttaatttc aatgtaattt cctcctaaag 13740

gtagcaaact ccctgtagtc aactgatagg ctgtgtatgg gcatagtgtc agacaatggt 13800

gtctgccact ccattcgcag aagggaaaag catctgttga ttgatgttgc ccaactgtgc 13860

ccctctgtgg ttatcaattc gataacgaat attatccgca cgtctttgtg cgccccaaca 13920

aaggaagcat aacaacatct tttgtgacat ccaggaagaa gtgcctgctg aagcacagtg 13980

caagcggaac acccaccagc ataaagtcag cggacaacct ggtgtctgga ttctcactga 14040

agtcctgtgc gctttcggag ataggtaact agatgacgat tattccactg tgattgcgat 14100

gccctaaaca agagtgccaa gaaataccca cgtgccattc ccagggacct ggggaatatg 14160

atgccttttt atagatgtga ttgcatggaa atacttggca atcggaatga tgttgggtta 14220

ccagaatatg cccctgccca ggctcaaggg ttcttatatg ataaagagag aaacagaggg 14280

gtcagtgtca gagtagaaag acttgaatgg tctatattgc tgcctttaaa gatggaagaa 14340

gagtccaaaa gcaaagggta gcagaaatta aaaagggcac agaacaggtc tccctgttaa 14400

ttatataaat atattatatt tatcttccaa aggactataa aggcagaaac cacaacatga 14460

taattttggg aagccaaatt cactcatatc ctatttgggt gtgggcaagg cttgattttg 14520

caatatacat ccagcaggtg cctcagtcgt ccaagcaagc aagcgtttca cacaaaatcg 14580

gaacttagca actagcctgt taaatctttg ccccgttacc ttgcaagaat agctgaggcc 14640

gtggcatatt ttgtaacact caggcaattt tattttttgc ccagctgtac caggaagtgg 14700

tccatcaatg gacagggtac attcaatgta agaacaactt cttcatggct tatatgagct 14760

taaaggaaca ttttgttttt acaagccgag cagagtaaac gtatcctcta attatattgt 14820

tcccaatcat cggaccttat gctgtgctgt agcgtggtag aaaatcacag gtcaatgtgc 14880

atgtgtggaa gatacagaga acaaacagag gccttggttt agagcaacct gcccttgtgg 14940

ggtaactgac ctagtccagt gagagcagga acaggtatta cccaattcac gtggaatgca 15000

acttcacgac tttgcactag gccatactgc caccttggga agcaagcgtc accaggattt 15060

ttgctgcggg caaagcacac tccagccaga acagcacact gctgcaaggg tgttttaaac 15120

acaggtttaa agacaaggtt tttttttgtt ttgtttttgt tttttttttt gtttttgttt 15180

tttttctgcc tcaagtgctg tccacagtct caacaagtga ggtctgctag cattctgtct 15240

aaactccacc cccacagtta cctggcaaca gccaggtagg ctccttcctc tcttaccctc 15300

ttgggctctc ccctactctc cccccctccc tactcccttc cctcctctct ccacatgctc 15360

atggctagac tctacttctc tactctcttc ttctctctgc ctttctctgc ctctactact 15420

ctcttaactc tccccccccc ccatgccctg aataaactct attctattct ataccttcta 15480

taccttcgtg tagctggtcc ccagggggaa aggctgcctt ggcatggacc tgcagagata 15540

tccccttccc ccacacttca ccataccccc atagaacata tcttaatatc tctatatctt 15600

ttttataatc acaacattgg ttaaaggctt gttttcagag tttaggcatg gactttgaaa 15660

gctttggaga taatcatagt tgccctgtta atggatcaat actatttaca attctaatta 15720

aaaggactcc tcttttcctg ttgtaggttt ggcatttgcc ctgatctgta ttttcatctt 15780

aggaggcaga tgtcatgtcc cataatcacc aggatccatt gcttctcccc accttcccct 15840

ctctcttttt cccctcctat ccctcctcct ttgtaccccg tctccttctc cctctccttc 15900

ccctccctct ctccccctcc tcctctcttc ctcccccttt cccccttccc ctctctcttc 15960

ctcccccttt ccctctctcc gtcccctcct cctccccctc cgtctctctt ttgtctttct 16020

ccctcctttc ttccttcttc ctctttctgt agacacatgc tctcaaggaa agggctggaa 16080

acactaggca aaacaggagt caggtctgat aaacttaagc cctgtgagca gaattttcca 16140

gggagcttct tgacaaaccg agtgatgatt gttgtctggg aacgagggac agtggctttg 16200

gaggtgctcc aaccattctg acatgttgat tttcagcaca tccatggggc tgttttccag 16260

gtctctatgg atctgagaaa ggggcacaaa tataaggcag ttcaacccca cacagctctt 16320

gctgaaggtc agccatttgt ttctatctca ggattagtct caattgtgtg tccctttggt 16380

taatttctag ggattaaaaa aaaagtgact tgactcattt tactagtatt taacatagtt 16440

ataaaagaag acgaatgcag gctggtggta acatttgcct ttaatcccag tgttcaggag 16500

gtaaaggctg agttcaaggc tagcccggtc tacagagtga gttccagaac aaccagggct 16560

acacagagaa agcctatatt gaaaacaaac aaacaaacaa acaaacaaga tggattctgg 16620

gcacttgtat tctctcagcc tcgctaacat tctgtaacac ttttaattaa cagagtgacc 16680

cacttagggt tattgttgtt gtgatgaaac accataacca aagcaactca gggaggaaag 16740

gtttagttca gtttatactt ctggataaca gtgaagaaag tccaggaggg tgggacctca 16800

aacagggcaa gaacacggag gcaggagctg atgcagaggg ggtggaagaa tgctgcttac 16860

tgccttgctc atcatggctt gctcagcctg ctttcttata gaacccagga ccaccagcct 16920

atggatggca ctacctacca tggactgggc ccaactctga tcactaatta agaaaatgcc 16980

ctataggctt gccttcagct ggatcctatg gaggcattga tgctccctct tctctgatga 17040

ctctagcttc tgtcaagttg acataaaacc agccaggtca tatagctaac aacctaacgt 17100

tggagtggaa aatgtctttg gaaagccaga tgctcatctt gcctgggtca ggttctgcat 17160

tttgtgtgga acaataggaa gctggagtat agccaactag ggcaaccatc ttgacggaat 17220

tcttagaagt aatggaaaat ttagaaacca gtaaaggaag atgttaagta tattcaactt 17280

gaacagaaga ctgccttggc gtttggcgaa gtctcctctg ttctgaaagg ctgtcattag 17340

ggactgggtc agtacacaat cccgtagggt tgttttagaa aggtaggact ttgtagaaag 17400

taattttttg aagtccctaa catcttcagc ggtccagaaa agaagttgac tttgtcacat 17460

ggtggtgaac tccttttcaa ctacaaatgt cccaggaaag ttgtaaagtg acatgccagg 17520

gatgtcttgg agatacagtt gtaggttggc atggttacct gaacattctc ttccagtagc 17580

aaggctcttc atgatttttt tttttaattc aagtggtaga atcagcttcc aagactacac 17640

aagtgggatg tgagctctct tgatccaact gtcttgagtt tgactggcct atcgttattc 17700

ttaagtgtcc attttattag tatggaatca aattgattct tacatgctat cgaattgagc 17760

aactcatgta aatagcataa ataaaaatag atgaaaaata aaatgatata aggggggatg 17820

aaaatgaagc ttttctgttc tcatcgaagg gcatgcttgt tagccctttg gaatttatgt 17880

taatgtcttt tcattaaaat gcttctcaca atactcagaa acaaagcatg aaacagcatg 17940

ttcccaaggc ttagtcataa tacaagggaa actcgagtca tctaatgtcc tattagaaat 18000

gacagtgctg cttattctac agcacccagt tgctgtcttt cccagtagaa caacttttac 18060

ttttttagca aagaacaaac tacaaattct gagataagtt aacaggcttt cctcctctta 18120

ttgaaatgga ttctctctct ctctctctct ctctctctct ctctctctct ctctctctct 18180

ctctcacaca cacacacaca cacacacaca cacacacaca caatatatcc tgatcccggt 18240

ttccactccc attactcctc ccacaacacc tcccctccat ttctatcatt agaaaagaaa 18300

caggcttcta agtaataaaa caaggcaaaa atgaaacaag aaaacaaaac cgaacacatt 18360

gaacttgaac aaattgaaga aacaaacgag agaaggcaca agattcagag agctacacac 18420

acgtccgcac actcaggaat ccccattaaa aatagtcaag tggaagctat acccagggga 18480

cctcttgcag accagtgcag ccccagtgca tgctgcctca gtctctcaac gggcagtttt 18540

taacacaggg tgctgattcc cgccaatatc aattgtcata atcaccttag ttactatgtt 18600

gaaacaaaca caagcaaact cgggcattgt gtcactgagg aatgttcacc gctgagttca 18660

caggttgccc catggatatt ttccagcact ctgcctttgc agacctgaat gtaagccagg 18720

tcatcacccc cgatgccttt gtgtgtcgca ccatctgcac cttccatccc aactgccttt 18780

tcttcacgtt ctacacgaat gaatgggaga cagaatcaca gaggtgagtg tgagcggcgt 18840

gcgccccctt ctagcccttt ccgttccttg cgagggtctt gctcgttgcc ctaacagcgc 18900

tggagcctgt ggtttaaccg gatgcttttc agccaggtgc aggttacttc acagattaac 18960

aaattcttcc cttccataaa acaagcctac tatttagtca aaccacagcg gcagaggcag 19020

aagggagcag gaagcattct cactggcatt aaggtttggg attggcttgg gttacagctg 19080

ctcatgcaaa ctgtccttta atcttgtgag aaaccagagc cctgcttatc cagatctagg 19140

gtctagtctg acctcttcat ctttacacag catttccttt atgtacgccg tggggcctgc 19200

agaaggatgt gtgtggacat aataccatgg gtagcataaa tccaaaccaa cagtcttttg 19260

atgccttctc tttttccttt ttctaattag aaggtggact ttaatcctct gtcctctttt 19320

ctggatgtct gtacctacca ggtatttttt gccagaggga gaggtgactc tacttacatt 19380

taagccctgt gatatttttg gagtcttgca gtctgactga ctgaaaataa tttctcagaa 19440

gaataccatt tatggagttg cttagagagg aaggaaggaa ggaaggaagg aaggaaggaa 19500

ggaaggaagg aaggaaggaa ggaaggaagg aaagaaggaa ggagagagag agagagagag 19560

agagagaaag agaaagagaa agaaagaaag aaagaaagaa agaaagaaag aaagaaagaa 19620

agaaagaaag aaaggaagga aggaaggtag gtctgtctag tgcttctaat gctgtcttct 19680

tcttctttct catttatttt taatagaaat gtttgttttc ttaagacgtc taaaagtgga 19740

agaccaagtc cccctattcc tcaagaaaac gctatatctg gatatagtct cctcacctgc 19800

agaaaaactc gccctggtaa tgactcaatc ttagtggcac atggcatgtg tccgggtttg 19860

gttcttggtt gcttgataaa tactatgacc aaaagcaagt tgggagagaa aggagtttgt 19920

tttgttcaca tgtcccagtc atagctgatt cctgagggaa gtcaggctag aaactcaagc 19980

agaagcagag gcagggactg ggcagagacc atggagaaat gttgcttctt agcttgcttc 20040

tgtgaatata tatatatata tatatatatt catgctacct gcccagaatt gacactgacc 20100

tggttagacg gaccctcttc catccatcat taatccaaag aacatcccac agacatgcct 20160

ataagttagt ctgaggaaga cgattctcag actgatggtc catcttttca ggtgactcta 20220

ttttgtatca agttgacaaa cactaacagc cacatggtgc agcacatctt ggggtcctct 20280

aagagttaat gaaatggttc tcacgactct agaaactttg ccaatgtgac tcgtttcctg 20340

acttgtgata tatcctttga tatttgtgta tggtgcagaa ccctgccatt ccaaaattta 20400

ctctggagtt gactttgaag gggaagaact gaatgtgacc ttcgtgcaag gagcagatgt 20460

ctgccaagag acttgtacaa agacaatccg ctgccagttt tttatttact ccttactccc 20520

ccaagactgc aaggaggagg ggtaaggaaa cctttctttg atgatcagca aggtaattgt 20580

tttctagttt tctccctgtg tgggggttta attttagact gttcatttat ttccaggtgt 20640

aaatgttcct taaggttatc cacagatggc tccccaacta ggatcaccta tggcatgcag 20700

gggagctccg gttattctct gagattgtgt aaacttgtgg acagccctgg tgagtgaggt 20760

tcgtttgtta cggaactgca tggctggctt ggctgttgtg attaatgtct tggtcttatg 20820

tgatgggatt gtttatatgg tttctgttat ggtttgtata tgggagtggc actatcagaa 20880

ggtgtgaccc tgttggagta ggtgtgtcac tgtgggtgtg ggctttaaga ccctcatcct 20940

agctgtctgg aagtcagtat tctgctagca gccttcagat taaggtgtag aattctcagc 21000

tcctcctgaa ccaagtctgc ctgcatgctg ccatgttccc accttgatga tagtggactg 21060

aacctctgaa acctgtaagc cagccccaat taaaacttgt ccttggtcat ggtgtctgtt 21120

cacagccgtg aaaccctaac taagacagtt tccttggata aagggaaaga atgcttatct 21180

gtgtctaatc ctgccacatc tcaacacttt tcagactgta caacaaaaat aaatgcacgt 21240

attgtgggag gaacaaacgc ttctttaggg gagtggccat ggcaggtcag cctgcaagtg 21300

aagctggtat ctcagaccca tttgtgtgga gggtccatca ttggtcgcca atgggtactg 21360

acagctgccc attgctttga tgggtaagtt tcagggtcat cttattatac caatgtgtgt 21420

gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgcatgt agaggttaat 21480

ctcgggtatc tacttgtact gcttgttcat cttatttgtt gagatagggt aattcactga 21540

acctagtgct aacctttttg actagacaga taggtatctg cctgtctctg tctcctggta 21600

catccttagc cctagttctg ggttggggat ctgaacttga atcctcaggt ttgagaacca 21660

agccctttgc ccactctgcc atctccttgg ccctgagata tttgttttta ggacaagaaa 21720

agtttcaaag tccttgccta gaaaatatta taattttaaa ttcagcctgt atatccttta 21780

cgtggttaat ttaaaattca aaggaaaggt aggtagattt ttaagcaaca aaataccttt 21840

aattcctgct ggggcttatt ttaatcagta cagctacatg aaggctcgga taatgagagc 21900

aactgttttt ggggttggta gactgaacct gattctccca aaggttcttc aaaaggcaca 21960

gaagcactcc tgtgctctta cttgaaataa acagaaagta atttttaagt acgtcttgag 22020

tgtttccagc cacagcgttt atactgtgaa ctgtaatcct ttaggaacac agtgcaacag 22080

aatatgagcg tcttccaaga ttttagcaac agtaaagggt ccctgaaggg acactgataa 22140

aaatgaatcc acaataaaaa gtatgacaaa cccgaggcat tctgagagcc ctctcctgtg 22200

ctgtgtctga ggattcctct gcagcctttg ttcctgacac acaacatcat gcttactgtg 22260

cactgtgcat atcgccaggc tgcgtagtac cagcagatgg taccctaaac ccaatcaatc 22320

agactgagga ttctttaatg gtgtgaaact ggtgtgtgtg gtatgtgtgc cttaggattt 22380

ctgctcttac aggaacataa cagtataatt ttaaacaatt taaaaaaaaa cattaagatg 22440

tctcttgtca cagtgtgtct ttggattgta cagtgttaaa ctctgatttt cagtgttgct 22500

ccagctggtt agttgagttt cataaaaact cattgaatga acttgggctt ggatattaga 22560

gtttccaaaa ctttctaaac cgtccttaat ctaagactat catttggttc tccacattta 22620

tgtgaagtgg tgcttctcag ctttatcagt tataaaagta aaaaattaag gaactcctaa 22680

aaacattgag gttgttcttc gtcttttagt atgaaatact tagacatgtt ttaattattt 22740

atgtggaaat aaacaagccc attattctat taatatgagc gtttgctaat aagtggtaaa 22800

aattctccat acatcaaaaa ttgtcttgca gtaaatttct ttataatata ttaccagtaa 22860

atgtttaata tgtgtacctg cttcatatag tcacacacag agacataaaa ataaaatctt 22920

ttcaggcaaa agggagtctt aaatggaaga aagttttatt acaaactaaa tcttcaaagt 22980

ccaatacgac tgctgtaagc aatgacaggt tgccttgcca ggaaaaggtg actaggtcat 23040

atggaatgtt gtctttcttt tctctccacc ccttcaagaa aatgtgctaa gaaaaaggag 23100

cggaggaagg atgccaacgt tactttgttt ccctcctaga attccctatc cagatgtgtg 23160

gcgtatatat ggcggaattc ttagtctgtc cgagattacg aaagaaacgc cttcctcgag 23220

aataaaggag cttattattc atcaggaata caaagtctca gaaggcaatt atgatattgc 23280

cttaataaag cttcagacgc ccctgaatta tactggtatg cagcatattt aagaggaacc 23340

tgcacaactc aatggtattg gtgtcaattt ccacttcagt ttgcatgaga agagagatct 23400

gcagcaattg tctttgtgtc ctggttggtg aggctgaggg agagatgagg ccacctgggc 23460

agtagaaatc ccgtgtcttc ccatacattc actgctatct gaggggcaaa aaagcttcat 23520

tactttctca gagtggcatg caactgagtg tatggtattg gtctaggaaa gattttgaca 23580

tctggggaca ttgggcatct tctgacaaga ttggcagaat gactatggct taggaatata 23640

caaccatatg aaagtgaacg ggactagatg ttagtgccca agaataccct ggttgacaat 23700

ggggggacac ggagcatgga gctgctttgg aggcacatca ctccacagga atggaatgtc 23760

tgccaacacc attacctgca agtgtctgtg aacagtcatg agaccttaga cagcttggct 23820

ttcctccttc cacctctaat atctgctgca cgcgtgctga tctccgtgtt gcttccttgc 23880

aatcattaag caacgtattc aaataaagcc ctgggagagt atggctattt ttgctctgtt 23940

tctgaattct gctacagtgt atattaaaca agacataaga aagtagacat atgtttgcca 24000

ataaattttg gttgaagagt ccctcttccc catagaaatt tcgttccaaa atgccataca 24060

gaatgtgaga attgtcttga attgtgggct ttagaaattg ctcagaaagc tggagggtcg 24120

ttctttttag ttttagtaat gggtttcatt atatttcata catatgcata gtatgatgta 24180

attgtattca catccttcac tctctcttgt cattttcact cctgcagttc tccctgctcc 24240

tcccaagtag tcccagactg gtcattcttg ctttgttgct ttgtagaaaa agaataagag 24300

aaaaagatag atactaattt ttgaagttcc catctatggt ttcaattagt ccaaatctat 24360

tcatgaaatt ttctttcaga attccaaaaa ccaatatgcc tgccttccaa agctgacaca 24420

aatacaattt ataccaactg ttgggtgact ggatggggct acacgaagga acaaggtaca 24480

gtatggcatg tgaaatgttc ctgtcttaca tgctaaagta catagagtag atccactcaa 24540

caagccttac tcatgacctt tctgttcatt ccaaactatt ggtcctctga ttcccaagaa 24600

tgtgaatttt tttacattaa acatcaatga gctaatcctt taagaatatt actcataata 24660

gagattattt ttatgagtct gcattaagaa ctgtggccct atgatactat caagtccact 24720

gaatcccatg tggtcctcag tacttactgt gtccctgttt gctaagttct cccttggtat 24780

caatagctaa ggtgccagca tctctcttga agaacagttc ttaatattta tttaaatgcc 24840

ttcttgtaaa aaatctgaca tttcctctaa ttatgccatt aaatccttat gtaaaataca 24900

tagattcata aagagagaaa agtagattgc agtacagtta ccaacatttg ttaatagaat 24960

tttacatagt gatgatcata tttgattatt agtgtactca gttgcaaatt gttttaaaat 25020

ctaccataat gttgaagtag ttatgggcat aaacaacatt ttcctttctg tcgtaactac 25080

aattcaaagt atctgtgacc cttacactac agtgctgcca acaatatcac attcctgcat 25140

tagttatctg aacttaaaac tgaagggcgt ctgcagcttt atttgaaagg ttgagaatat 25200

agaggcgagt ttttcgcttt cccttccgct gagtgtatgg atgcctcgat tgtgtggctc 25260

tgaactcaag acccctgtgt gctgagactt gagctatttc tctagaaata agaatgcttt 25320

ctttctagac tgagtgccag ataaccagca ttagacatat ttgagtgatt ttttttaaag 25380

gagatgattg gctgtgtctt ctttatattt cctgaaccag tcagtactgt attcaattag 25440

ttcccatttt ccactacatt tacttggcta cctatatgtg gacacacaca tatatacatg 25500

catatacata catacataca tacaaacata catacaaaca tctgagaaat atagacatgg 25560

gtagacatta agttatctgt aaatgtatca tttattgcag aacaaaatac tactctgctg 25620

tcagatgttt gggatgtatt ctcataaatt gtacatttta ttataatttg aatttctaaa 25680

acaatgaaag gcaagaacat cctttaaagg tacaaatgtg tgagacaaca ttttttgagg 25740

ggggcatcgg ttgatatagg aggatgcctg agatcataga aacaagtctg cagaggcttg 25800

ggtgctagcg agtctgaaat atgtcactag aaggaaggca gcacggatca ctgctccttc 25860

atctccttct cccccttctc cttctccctc tcccggtctc tcttctccct ccacctcttg 25920

cttcccttct ccctcccttt ccctctgccc tatttattga acttcctctc cttaaaggca 25980

cttcttgatt gcttcatagg tgaaacgcaa aatattctac aaaaggctac tattcctttg 26040

gtaccaaatg aagaatgcca gaaaaaatac agagattatg ttataaacaa gcagatgatc 26100

tgtgctggct acaaagaagg cggaacagac gcttgtaagg taatggggaa aaaatacaca 26160

atagttccat gaagacagtt cattcaaaaa cgaatctcca aagttatatt tcattagttt 26220

tggttctgaa gttccagagt taaacgattt gaaggctatt tgaaacgata gcctttaaca 26280

aattaaacac acatagtgca tattatatgt tacttataat agttatgcta gaatatgtat 26340

tgctgtgaca ggtatgtcac agtgaggaca ggggcatgcc aaatttaagg acaattttta 26400

catgccatgg tcatgctaaa atacaagaaa agtagattta tttgaacttg gagtaaagat 26460

gctaagtctg ttgggtttat ctgagaatgg gagagggaat aaattggcct tgtaaccatt 26520

cacttatttt ttttttcatg gctaatggga tgcacagaaa ttgagaggct ccgtggtggt 26580

gtgtaaagtg tgactgccaa atattaaaga catctgtcta tgagcaaggg gctccttatt 26640

tgcatcatca ccattacccc tctctacctt tgtatttctc taccctctgt gacccaggga 26700

gattccggtg gccccttagt ctgtaaacac agtggacggt ggcagttggt gggtatcacc 26760

agctggggtg aaggctgcgc ccgcaaggac caaccaggag tctacaccaa agtttctgag 26820

tacatggact ggatattgga gaagacacag agcagtgatg taagagctct ggagacatct 26880

tcagcctgag gaggctgggt accaaggagg aagaacccag ctggctttac cacctgccct 26940

caaggcaaac tagagctcca ggattctcgg ctgtaaaatg ttgataatgg tgtctacctc 27000

acatccgtat cattggattg aaaattcaag tgtagatata gttgctgaag acagcgtttt 27060

gctcaagtgt gtttcctgcc ttgagtcaca ggagctccaa tgggagcatt acaaagatca 27120

ccaagcttgt taggaaagag aatgatcaaa gggttttatt aggtaatgaa atgtctagat 27180

gtgatgcaat tgaaaaaaag accccagatt ctagcacagt ccttgggacc attctcatgt 27240

aactgttgac tctggacctc agcagatctc agagttacct gtccacttct gacatttgtt 27300

tattagagcc tgatgctatt ctttcaagtg gagcaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 27360

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaactgaga aagaggtaga aatctttgta acatttcatt 27420

tagaataaaa agagtctcta cttgaacctg atgggacatc taaaccacct ttctggccat 27480

tgctgcagag ttctgcatgg tcatgactgc atgaggtttc ctacccctgg agcagagcca 27540

tctgggcatg agggttgctt gtataaactt catgttcctc cctcaggaaa taacctctct 27600

gcctaggtta ttgaggaata tcctctctgc caggacagcc cttaagactg tgggaaagaa 27660

ctcttaaaac ataagttcaa gaatatataa tttctcagct atgtaaaata taaggataca 27720

atatgaattg tataaggaga ttcgattcgt ggacctaaaa gaacaaaggc agctgcacta 27780

tgagccagct tgtcagaaag atactactga aggagataaa gagataaaga gatttaggga 27840

gtggtgataa cagggcaaga tcccagccag ctaagtttat tatttgtgct tacataggca 27900

ggcagagtcc tgagttcaag atcagcctgg gacagagcta gtttagaccc agggttggtg 27960

ggaatcccac ccagctagct tgttgtctat gctaagaaag acaggcagat ctctgaattc 28020

atttggcatg tttttttttt ttaaaaaaag tacctgatgt cttttcttaa gaatcaagag 28080

gctagagtca tggaatgctg actcatgggt taaacaaaag ggaatctaga gtaagtgact 28140

gagttgatat gtaaataaaa gactgggctt tagtctgcaa gagctgagct acctggatga 28200

gctgtctgga gatctctgta gagcagaata ctagtctcta atttttttag attttttttt 28260

tttctagtag ctactcagag agaactgctt agagaatgaa atgaacattg ctattttagt 28320

tgtgttgttt tgtttttttt tttttctaga aaatccaaaa atattttata gaagcttctc 28380

tgactctagt cagaaaaccc atgagctagc cagagagctt ttggattttt ttttcctagc 28440

aagagaaagc tgtctcaaga agagacagct gtctcaagca aaagagctgc cttgagcaga 28500

aagctatctc tatcagactg catagccaag agctatctgc agaaagctgt ccagctgtct 28560

agactacaag gctgtcagct tgcaacccat catatgactt tgagttgttt ctttcaccgc 28620

tcccagacac cccttctcgc aggaacctcc ctccaagcca aggctggtcc tgggcacctt 28680

gccacatggt cttggctaca gatgtgtgca agacctgtaa ggctatattt ttcttcttgt 28740

gtgcagctcc tgcaataggc ctatcacaca gtactcacac agggcaaggg atctgatgag 28800

aacctcctgg ggaaccctcg gggttcagct gatgctgtat tctgcaatag taattcatgt 28860

aatgtcattg ggtgtaaagt gttgtataaa attcaagctt ccaattgagt tgaaagtgaa 28920

aagcaatctt ggaatggatg acattaatcc tcatgcaaga caaatttcca gcttcccatt 28980

gattcataaa gtgggtcatc tgtgcttaac tccatttagt taacctggtt aatatttaga 29040

cagaattagc catttacgaa ctactgtgca agttaaacag acaaatagaa aagtgaaatt 29100

tcctaaagaa gattaaactt ttccttgcat atataaaggc ttgttgagta gtgcagaggg 29160

ttaaatatgg aagatcctgt gggttatcta cagagttcac catgggaagt gtaagaggtg 29220

gaagcaaatg gctttggaaa aatcttccaa gcacacaact tcaactttta attttgtaca 29280

ccatttcatc ttaatctgtg tggcagttgt tttatattta aaaagaaaga agtggttctc 29340

aatgaaaatc ttgtatctca aggtttcata ttaataaccc taacaggtat ttacacaagg 29400

tgtcacagta cttactgggt aaactttggg ctttggtttc tcaaggaatg gcctcatttg 29460

agcaaaacag agttttgaaa tgagggattt ccctatggcg taaagtacca tgatcacgtt 29520

gccagctgga gtccagctgg gctggaatgc tctgcttttc attgtgtgtt cctgcacaaa 29580

gtagcccgtc ttccactcga agccttaaga ggctgagaaa atgagagggc cggataacat 29640

cacttttaca agacaaagtg gaggcaggag gccctagatc tttggcaggt ccatccaaga 29700

aagggagtgt cacctctgga atggaacaat gccggcactg ttcttcctgg gccgcacgtg 29760

gagagcacac agcacaccac taacacttct agagctcaac gggaagctca aagggctgtc 29820

tgatctctat ctattttttt tcttgtagtt cttgcttatg gctaccagcc ctacaaactg 29880

tcaacaactc tgaaggatgc tcttgcatct ctgcctctct ctttcatcag tacttcatgt 29940

gaataggaat gtggcaaata ggagagattt gggtttgctg ttattatttt tgttgctgtg 30000

<210> 14

<211> 2513

<212> ДНК

<213> Rattus norvegicus

<400> 14

tgaagactag cttcatgtga agactccttc tcctccagca gcacaaagca accatccttc 60

caggatgatt ttattcaaac aagtgggtta ttttgtttcc ttgttcgcta cagtttcctg 120

tgggtgtctg tcacaactgt atgcaaatac cttcttcaga ggtggggatc tggctgccat 180

ctacaccccg gatgcccagc actgtcagaa gatgtgcacg tttcacccca ggtgcctgct 240

cttcagcttc cttgccgtga gtccaaccaa ggagacagat aaaaggtttg ggtgcttcat 300

gaaagagagc attacaggga ctttgccaag aatacaccgg acaggggcca tttctggtca 360

ttctttaaaa cagtgtggcc atcaattaag tgcttgccac caagacatat acgaaggact 420

ggatatgaga gggtccaact ttaatatatc taagaccgac agtattgaag aatgccagaa 480

actgtgcaca aataatattc actgccaatt tttcacatat gctacaaaag catttcacag 540

accagagtac aggaagagtt gcctgctgaa gcgcagttca agtggaacgc ccaccagtat 600

aaagccagtg gacaacctgg tgtctggatt ctcactgaag tcctgtgctc tctcagagat 660

cggttgcccc atggatattt tccagcactt tgcctttgca gacctgaatg taagccatgt 720

cgtcaccccc gatgccttcg tgtgtcgcac cgtttgcacc ttccatccca actgcctctt 780

cttcacattc tacacgaatg agtgggagac ggaatcacag aggaatgttt gttttcttaa 840

gacatctaaa agtggaagac caagtccccc tattattcaa gaaaatgctg tatctggata 900

cagtctcttc acctgcagaa aagctcgccc tgaaccctgc catttcaaga tttactctgg 960

agttgccttc gaaggggaag aactgaacgc gaccttcgtg cagggagcag atgcgtgcca 1020

agagacttgt acaaagacca tccgctgtca gttttttact tactcattgc ttccccaaga 1080

ctgcaaggca gaggggtgta aatgttcctt aaggttatcc acggatggct ctccaactag 1140

gatcacctat gaggcacagg ggagctctgg ttattctctg agactgtgta aagttgtgga 1200

gagctctgac tgtacgacaa aaataaatgc acgtattgtg ggaggaacaa actcttcttt 1260

aggagagtgg ccatggcagg tcagcctgca agtaaagttg gtttctcaga atcatatgtg 1320

tggagggtcc atcattggac gccaatggat actgacggct gcccattgct ttgatgggat 1380

tccctatcca gacgtgtggc gtatatatgg cgggattctt aatctgtcag agattacaaa 1440

caaaacgcct ttctcaagta taaaggagct tattattcat cagaaataca aaatgtcaga 1500

aggcagttac gatattgcct taataaagct tcagacaccg ttgaattata ctgaattcca 1560

aaaaccaata tgcctgcctt ccaaagctga cacaaataca atttatacca actgctgggt 1620

gactggatgg ggctacacaa aggaacgagg tgagacccaa aatattctac aaaaggcaac 1680

tattcccttg gtaccaaatg aagaatgcca gaaaaaatat agagattatg ttataaccaa 1740

gcagatgatc tgtgctggct acaaagaagg tggaatagat gcttgtaagg gagattccgg 1800

tggcccctta gtttgcaaac atagtggaag gtggcagttg gtgggtatca ccagctgggg 1860

cgaaggctgt gcccgcaagg agcaaccagg agtctacacc aaagttgctg agtacattga 1920

ctggatattg gagaagatac agagcagcaa ggaaagagct ctggagacat ctccagcatg 1980

aggaggctgg gtactgatgg ggaagagccc agctggcacc agctttacca cctgccctca 2040

agtcctacta gagctccaga gttctcttct gcaaaatgtc gatagtggtg tctacctcgc 2100

atccttacca taggattaaa agtccaaatg tagacacagt tgctaaagac agcgccatgc 2160

tcaagcgtgc ttcctgcctt gagcaacagg aacgccaatg agaactatcc aaagattacc 2220

aagcctgttt ggaaataaaa tggtcaaagg atttttatta ggtagtgaaa ttaggtagtt 2280

gtccttggaa ccattctcat gtaactgttg actctggacc tcagcagatc acagttacct 2340

tctgtccact tctgacattt gtgtactgga acctgatgct gttcttccac ttggagcaaa 2400

gaactgagaa acctggttct atccattggg aaaaagagat ctttgtaaca tttcctttac 2460

aataaaaaga tgttctactt ggacttgaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 2513

<210> 15

<211> 30000

<212> ДНК

<213> Rattus norvegicus

<400> 15

attcctccag cccctgtatc acgtcaaact cgaaactcca gctccaggac tagctgcagg 60

cattgatgct tctgcgctgt ttccattctg tgatcatgtc ttctccatac ctacctctaa 120

gttttccatg aggtctcaaa gtaaaagctt taagaagaaa aaaaaagtgt tgtccagcag 180

gtttcagtaa gctttgctgg agaggaccag ataataaaat cttagtttgc ttgtttgttt 240

tgttgttgtt actgaagacc gttctataat cataggaagt aggcaggcat acatcgtgca 300

gcagtgaatg gacatggttg tgttccatta aaacttcagc tagaaggaca aatcccaagc 360

aagatttgtt ctgtaaacag tggattatta actcagtact gggtggatct gaacatgaac 420

ttccagtgta ataaaaaggt agaaaagcag aagtgtgaag aatcccgaga gctcagggga 480

gaccactgct tctgctcaca ttcctggccc aagaggactc cccctggaga cctctggaca 540

caagaaccga ggagcagtct ggttcctgcc tgtacccaga actgacactg taacacatct 600

acacagtgga gtattactca gctattaaaa acaatgactt catgaaattt ataggcaaat 660

ggatggaagt agaaaatatc gtgagtgagg tcacccaatc acaaaagacc cacacggtat 720

gccctcactg ataagtggat attagcccaa aagctcggat tacccaagat acaatccaca 780

gaccacagga agctcaagaa gaaggaccac caaagatgca gatgcttcag tccttcttag 840

aagggggaca aaaatattca taggagaaga taaggagaca aagtttggag cagagactca 900

atgaatggtc attcagagct gccccacctg gtgatccagc ccacatgcat acagccacca 960

aacccagaca gtatttctca tgccaagaaa tgcatgctga caggagcctg atatagttgt 1020

ctccagagag actttgccag ctcatgacaa aaacagaaga gaatgtttgc agccaatcat 1080

tgaactgaaa ccagggtccc tgttggagga gttagtgaaa agattgatgc aaccccgtaa 1140

gaacaacaat accaaccaac cagagctccc agggactaaa ctaacttcca aagagtactc 1200

atgaacaggc caatgtctcc agctgtatgt atgtagcaca ggatggcctt tctgggcacc 1260

agaggaagaa gcccctggtc ctgccaaggc tggaccctcc cccagtgtag gggaatgtca 1320

agatggagag gtgggaagag gtaggttttt gggttgggaa aaggtgataa catttgaaat 1380

gtaaatttta aaaatccaat ttaaaaaagg tagaaaacca ataccttgct ttgattctcc 1440

tataggagct gtctacccca cccccacatt gaggtgtgcc tccaggaaat ttcaatagaa 1500

gtatacacac acacacacac acacacacac acacacacac acacacacac acttgtaaag 1560

gcaaataggt aagaatcaag ctgttagtcc ccaaataaag agatatgacc attttcaaaa 1620

tgggagacct atgcctgaat tgtgtgtccc tagtataaag cacttctctt tcttcagcat 1680

aagcacttaa acgcatttcc catgtataat ttatttaaaa tgggttcttg atatgcttgt 1740

aatataatga tatcttggta tacatgaaca ctgtaacatt atttccactc taaagttact 1800

taacacagtc accatctcag acaattatta tgtatgttac gaatacctgc ataccagggt 1860

acagtgtgta cacctataat ccagcactct gaagatctag attcagtggt tctcaacctg 1920

gggagagggg tcacatatca gatatttaca attcataaaa gcagcaaaat tacaattatg 1980

acgtagcaac aaaatacctt tatggttggg gatcactata catgaggaac tatattaagt 2040

cgcagcttag aaaggttgag aactactgct ctataggatg caaagacagc tcaggggtgc 2100

tcttgaagag aacccaagct cagttcccag caaccacatc aggtggctca caaggacctg 2160

tgtctccagc tccaggggac ctgattccct ctgtcggtct gcaacgtgca tgcatttgca 2220

gtgaaagaga cacatcatta gaaataaaat aaatggttaa aatttaacta atgttgctat 2280

tgctgggcat gggatcttgc agtctattag ttctaaaagc tgaaattttg tatcctttca 2340

caaacaccac ccatgacacc aagtttcaga tcctgacact caccatccca cttgtttcta 2400

gggcttgcct ttttcaaatg ccacatgtaa gtatagctct tcaaatggcc atatgttttt 2460

atatctccac cagttttgca tcactgcaat ccaatacctt gagcccctat gtcgaattta 2520

taatctgccc atcagttgac tttaatttat ttagggttgc ttataagttc ctaatttttt 2580

tcttttggtg attttgtttt tcttttctga ttatttgtga tcttctggct ttgtgttggt 2640

gtttgcactt ttagataaga ggctatttta aatttaattt ttaaaaattt atttattcac 2700

ccattgcaag gctatgtgtg tgtgttctgt gcaggttctg gggattggac tcaggtcatc 2760

aggcttgatg gcaaatgctt ttgacctact gagatgtctt gtaagctcca cgatgatttt 2820

agacttttaa agcttgcttc actgggcaaa cctagtagtc atgtatctca tcaatggatt 2880

ctgggttagc caactgtgta gttagagttg gatatgcaag gctaggtttg aatcttgggt 2940

ccacagaaaa gagcattgca tcagggtcca ccgtgattac attgatgact gaattcctag 3000

agcccatgct tgaatcctca gatcagtggg gccacgatct tatgattgag gactgcctta 3060

acatgttgat attgaaatga acctgaaaac tgagcctcca gtggccatgt taacgaactc 3120

aagcccgtgg gcatgggttt gttcctgaat ctacaatcgc tgtcctggaa atgagccctg 3180

gaaatgggac aatctggtgg ctggcctgag gtatcatcct ggagcctggg tctgcagggt 3240

cagcctgata actgggattt cctggaatgg acttgtttac atctgtcttt attcataggg 3300

aacacatcgc cattctgtgc tgcccaggct tagtagcagg gttttatggt taaagtgaag 3360

gatcgaacac tcttcaatgc ctattcacta tgtccacagt ttcaccgggg gctgtaacct 3420

atcatctggc tttcttaaca cttggaaagg catggggaat tgttcccatg gattcttctg 3480

caaagggatg cgtggtggag attccaattt tgtcatggtg tttacatgac tttctggaat 3540

cggtaacata ttaagtactt gaacctggac tggaaggtcc atggactgta ttgacaggtc 3600

aaacagaaga cactgatgcc agaagcccag tgtcaacact ggagccaagc agagaccaac 3660

ctcagtgcca tattcggaga gcttgaagac tagcttcatg tgaagactcc ttctcctcca 3720

gcagcacaaa gcaaccatcc ttccaggtag ctactctcca ccattctcat tgtagcctat 3780

gtcttaggaa tttatttttt taaaaaagta taactatatc tgcatgaaaa agtctattgg 3840

tgtaatgcac taatttcctg agggtttaga aaatctacaa ggaattgttt ttctttgtac 3900

agctatatta atgtaaaata ttttaaagcc aaggataagc ttttgattct tttcaaagat 3960

gctctttatg tgggggttgt gggtgatatt attgtactca ttcataataa ttttgcataa 4020

atctagaaat ttaataagtg tttaattatt tgtatcaact ctctttacaa aattaataga 4080

aataattctt caaaattaac aataaataca ctaatacaca ctaattgtag tctagaggtc 4140

tcaatttgta tcttggggag catgataaat attttaattt tctatatcca aaatgtcccc 4200

tcctccaaat cctctttctc ctggtgatta tgtgttgtga tttgcaattt agacatttac 4260

caaaaaggtg aagtgtacat taaattaaat tgtctattaa atacatggta aacatgatct 4320

caacctagta gtagctaaat ttattttttt ctttcaaagg atgattttat tcaaacaagt 4380

gggttatttt gtttccttgt tcgctacagt ttcctgtggt aagtattagc ctgggagttc 4440

aaattaagtt agtgtgtgaa actataccac tcctggagaa agcctttaaa agctttgggg 4500

aagaaggcag ctgctgatag tccaaggcaa gaacctctcc ttagatacat tactcctgac 4560

acagaacggg gtgggggggg aacttagaag cttcaatgct tctgctagca gaaatttctg 4620

tatcaagatt tctctctagc agagtcctcc caccccaaag atttgcttgt gtttattacc 4680

agccctctaa ataaaaactc tacctgaaaa tcggaaagaa tatcagatat tgcataatga 4740

ttgagtccaa tccaagcttc tgattagtat atggtatttt taatataagg catagagagc 4800

catttctgaa ctgaaaacac ctgctttgga tttaatgagt gtagtaaccc tttggtagtg 4860

tggatggaca gctttaacac tagatgtcag tgttctttct ctgtgaattc cattacggtt 4920

cagaatgtga gcatggccct ggacaccccc ttctcaatag tcattataga gtgagatttc 4980

cctgggcata tcatagtatt ccgatcaaag ctgactttgt ctagccacac ctcaagggct 5040

gatcttgact ctcaagtatt tggcaaagat gagcttatcc ttgtcaatag aagccatttc 5100

tctgggtaaa ctcattgttt tccctctctg ctccctccat ctggcccatc aactgtaact 5160

gcttttctgt gccacaacta ctgccatgat caaaccaatt aaacacgagc agtggtagtc 5220

agagatgcta tgggccatgg ctataaaatt tacgatcatg acaggaacgt gagacatgga 5280

aatacattta atacttgaga acaagtactt tacatagtcc taaagtacaa aataatgatt 5340

gcttgctttt ctttagtctt tcttattttt ctgcatgaat ctgttgtata aaagtgttat 5400

tcgtgaataa taattttaat gagaaattat gactattaat gacaaatcat ttttgactta 5460

cctttgctat ttatagctaa tgttaacaca aacaagcact tttgtcattc gttcttcttc 5520

acgctattct gtatgcatgt gacattctat gcacacattc aattatttct actgattcaa 5580

attttagaaa taaaaatttt tagatacaaa catgtgaata cctttgaagg ttttatggca 5640

tgcattatgg tattagcttc cagaaaggca tcctctgttt ggttttccct acgagcatgt 5700

gggagtgttc aaccatccca gttagagtga gccctaacag gcatctgtta ctttgtagtc 5760

tggcgtagga tcaccgttct aaaatagcat ccagatttct tcctgaggaa ccatctccaa 5820

cggatggccc acatggtact ggagatgatt ctcctgctgc agtcagacca gaactgcaga 5880

cagtgctggt gtgatgacct gaccagagct agtcttgtaa caggcttttt ctcagactta 5940

gaaaaaggct cagatttatt tttatttcca actcaacttg agctgctggt cctgccttac 6000

tagtgtgcat cttgagatga aggcagcatc acacaataga gtaaatcaac gctgacacac 6060

tgtgcatgga tgccattcct gagcagtgtc tagtgctcca taagccattg gctgtggaca 6120

catgggtttc tgaactgtta aactcattta tattcaaact gctctgattg attttctttt 6180

atttgtgaac aaagccagca cacaaatatt gtttcaagtt taatctttgt taacctggct 6240

gtttaaccca gtgttctgag tctgagactc ttacattttg tttttttaac ataaaatgta 6300

tttaatattg acatatcatt tctaagagat tatattgtta attcagaaaa agaatgtgtt 6360

atctacattc ttaaaatatc ataaagattt agacaatgat ttctttttta gaaagttatc 6420

taaattatca ctaatatgaa atatcaggtg gaatatcgtg tatttgtttt tctagtttag 6480

aaagaattaa tctgtagctt gtatgtattg actttgtgaa tgatgatagt ttttaaatgt 6540

ttttaattga cactaggatt ataccacccc tttcctccct ctagtttctc ctaggaacac 6600

ttccttgagc ttctcccatg ttcccctcac tctgaagctg attgcctctc ttttcattta 6660

gtattaatgc tacatatgta catatgtaca cagagatgta tgaatgcaac ttgttgagtc 6720

catttttgtt tgtgggtata tggtttgtgt gtgcttgtgc atattgaaca actagtaagt 6780

gggctcagct ctggaaaagg ttaattctct ttctccaaaa ggtcattagc tgcctatagt 6840

tctttgtcta aggtggggcc ccatgaaatt cccccttcca tgttactaca tccattgata 6900

ttgccatcgt tctggtccct tctgggaggg actgtttcac agcaaacttc ctgatattct 6960

ggctatcatt acctttctgt gttctctttc atgatatccc tcgagccata ggtttgggat 7020

atgagatgta gatatatcga ctggggctgg gagccccaca gtatgttgac ctccgcattg 7080

tgtccagttg tggatttttg tgatggtgtc tgtcttagtt agggttttac tgctgtgaac 7140

agacaccatg accaagataa gtcttataaa ggacagcatt taattggggc tggcttacac 7200

attcagaggt tcagcccatt atcatcaagg caggaacatg gtagtgtcca aggcaggcgt 7260

tgttcaggca gagctgagag ttctgtcttc atctgaaagc tactagcaga atgctgagtt 7320

ccaggcagtt aggatgaggg tcttaaagcc cacacccaca gtggcacatc tactccaaca 7380

gggccacacc ttcgaatcat gctaatccct gagttgagca aatacaaacc atcagtgtcc 7440

atttgctacc aagagaggct tctttgatga gagagagtag ctacctttat ctaggaaggg 7500

tggctcctgc actgttagca gcttttatac acatatagtt acttttatta attcggtaaa 7560

ttatcttttc atatctgatg ctgaatttta aaagttttag catttattta tttttactct 7620

atatctgcac atgcgtatac atatatacac atgtgctgtg gagcacatgt ggagatgaga 7680

ggacaacatg tggaggctca gttttctctc tgccactcac ctagagtttt gagttaagat 7740

gcttcattta tctatggaat ttttcctttt ctttcttttt gattatgtac atttttaata 7800

tgactaaata actcagtcat ggtccatgga cctgcagttt attgaaagac atcattatag 7860

atcaattagg tcatacagac tctgtgcaaa caaggctgtc attgttctaa tcattactgc 7920

tcaccatcgt tatcattgct gccatcatca actgaggagg ataatccatt ctccagttag 7980

aatgtttcga ctcattcatt ctcattgact gagtcacgtg ttagtttacc aacactcaac 8040

tgcaggatag aaacttctag gctgccactc gatgatggtt tgtgattttg tatgtgtctg 8100

tgcaatggga tagtgaggga gtctctgctc aataattatg agatgctaac acattaaaaa 8160

aaaaagcaag tctctttata gctactgtca gcactgggcc tgctactcag tgtgttgtgc 8220

aaatgggaca gcctgggttg tacacttggg aacatatatt cctaggagca attacccagg 8280

aaaatctcct ctttccaaat ataaatctga cttaagaagg taggcatggc aacacccctc 8340

tgataagaag aaaaacagta ttgcaaggtt gcctcatcca aattggactc agtggcagga 8400

tctccatata agtagaacat agaaactctt aactttccgg ttcttattga aaaacgtatt 8460

gtctagatag ctattcctta acaaacaatg gcaacatgga caacactgcc actggagtat 8520

tgcataatta atgaaaactt gactgctgaa aatggacagg ctgcctgttg gaaagctaag 8580

taaaatgatt tgaactgaat cttttcaggg aaatccgaat tcttcaatgg atttaaagac 8640

agttctctaa tgatatatgg ggtgcaggat acccacataa tggagttgtg agtcagcaca 8700

agcagtgtat cttattttca agttagctta ctttcatttt tgtaataatt tgaaaattat 8760

ttagcctttc cccattatat tgaaaataga gtcttttctc atgcaatata ttctgattat 8820

gacttcccct cttcttcccc ttccagttcc acccccacct cccatcttct cctggtctaa 8880

tccctttctg cctctcatta gataagaaca aaacttctaa gagatagcaa tcagacacaa 8940

caaaataaaa tataataaaa cagaaaccat cacatgaaag ttgtacaagg caacccaaca 9000

gaaggaaaag agcctaagag aaggcacaag aatcggagac ccattcagga gtcccataaa 9060

aatactcagc tgaaagctat aaaatatatg tagaggaccc tgtgcagacc tgtctaggcc 9120

ctggttcttc agtctctgct catatgagcc tgacttagtg gaatcacagg actttgtttt 9180

cttggtgtcc tccatcccct ctaggtctta gagtctttct ccctcctctt tcacaggaat 9240

ccctcagctc tgaggggagg gatttgatgg agacacacca tcagagctat gtgtcctaag 9300

gactctgact cttccttctc ttcccctccc cccatctctc tctctctctc tctctctctc 9360

tctctctctc tctgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtaat gtctgaatgt 9420

gggtctctac aaatacaatt ttattaagaa atgagctagt aggaaatcag tactcaatat 9480

ttattatttt atttaagtaa ggctgggtaa acagcatcat gggacagcac ctgctgtgct 9540

ggaaaaaagg acagaaaagg attgtgagtc aggaaggatg agtttatgtc cgaggatatt 9600

tattcactgt gtggtactaa tgacatctga actctgagac tcagttattg acttccttca 9660

tggaaaaaaa aaaggaaaaa acaaaaaaaa agaaatgcaa ataatagtcc tgacctcaag 9720

tcgcccttaa agcgctgagg aatctaggga gattgttgtc ctaaaagcgt tttgaaaaaa 9780

tgctgtattt ccatttttaa ggtgagatgt ttccccagcc tgttagacag caggcagaaa 9840

aaatatattt taacagatac tttatgtaaa attatatagg caataaaaat tttattgcat 9900

aaatttattc aattttatgc ataaatgtcc ataggatgac tttatttatt tttttttttt 9960

acgccccgcg ggggcccata ggatgacttt aaatagcgtg ctgtattgtt taaacagttg 10020

tcatatgttt cattctacct gtgtggttgt atatatcttt gggtagtcat tgggataaat 10080

aaaaaggaaa aacaacatag atgtatttct actaaaatgg ttacactttc tccggaatca 10140

acttttatat cacagggtgt ctgtcacaac tgtatgcaaa taccttcttc agaggtgggg 10200

atctggctgc catctacacc ccggatgccc agcactgtca gaagatgtgc acgtttcacc 10260

ccaggtgcct gctcttcagc ttccttgccg tgagtccaac caaggagaca gataaaaggt 10320

aagatgtccg tgagtccaac caaggagaca gataaaaggt aagatgtccg tgagtccaat 10380

caaggagaca gataaaaggt aagatgtgct gttttatcac tgccgggtga gacgtttctc 10440

aaatagcttc ctgtcgtatg caaaattggt gtcatagttc tcagagtgtt cacagactga 10500

ttgcatcaga agctcctagg ctgggttttc tccaatgcaa actactagag tgctgaaccc 10560

agagacggag attctaaacg accacggcat ttgttcacac agcataggag ggagtgatgc 10620

ttcagccaag gcctgaagac agagcgtgta acaagaacgg gtccttcctc acgctgtaat 10680

acttagcttt cttcttcact ttcaacacgc tatactgtcc ccacgtgtac acttgttatg 10740

tgtataaata tgttattagt caggttctgc atctgaggga gaacatgagt tttttccttt 10800

ctgagattat gtggcttcac ttaatatcac acattctaag tccatccatt ttcatacagt 10860

ttttgtgatt tgatttttct tcagcactaa atagcattcc tttatatatt ttctgtttta 10920

ttcatgattt attatgcatt aattataatt tactacaaat gctacaaatg aaacaatcac 10980

acacccaaat taaccagatc cagagactgt acaattcagg gaccttctat ccagttacag 11040

tagtcatttg aaaaggaagc atggaacttc gcaaggattc tatactttat caaatatata 11100

tatatatata tatattttaa tcatatatat atattgcttg ctgatagaag gtgaaaattt 11160

cacctgcata aagaaatata tttgttttac ttgttaccgt atttatgggg agcaaagttg 11220

aagatgtaca aaccaggaat tttgttgata atagatttga aatccagcag gcaagcctca 11280

atggtatatg tagtgagcct ctctctctct ctctctctct ctctctctct ctctctctct 11340

ctctctgtgt atgtgcatgc atgtgcatgt atgcatgtgc gtgtatcatt aagtggtaat 11400

tttggcaagg acaaatatta gaaatatagt tcggaatttt accttaattt tctttcattt 11460

gatcaatagt caaatgtaaa tttttgcctt ccattttcat acacattact tttatcttcg 11520

gtctatctga atttaagaat tagaaatttg aaactcattc tctgatctct acatgcttac 11580

ctgtacaaaa caaaataaaa caacaaaaac aaaaccaaaa cccagactgt atgtgtgatt 11640

cacttttttt aaaacttgaa ctaggtccta ggattcttat aaagagtaaa gttaacaccg 11700

agctgatatt gaagattgaa aaaacctccc cttatatgga aactaccaga tcaataaacc 11760

agatgaatat cacatacaga cccaacttag ctgattcaaa ttttttaaag taaattacaa 11820

tatttataaa aataatcacc attttagaaa acgtagaagt ttcagacagg agaatcattg 11880

gttttaaaat cagcttgtgt aagttaacaa gatcttttct caaaatagac taaataaaag 11940

ctggcagtgg aatgggaaga acgaggctgt tgagtgatta gcacttgatg aacatatctg 12000

aagcccaggc tttcctcctc agtcccacat aaaccaaaac caaaaccgat tatcttctgg 12060

aaagaggagc tatgaaataa tcctcaactc tgggatgtgg gtggccttct gcactcgaag 12120

catgaacact aagaaaacca acgattgtag atagtatgaa cttgtcttaa gaatgtcctt 12180

tccagcacat gtcgagaaat gtaattagtt tcctgacctt attttattta ttaacatatc 12240

caaaatgctg tataatttct taatgtgtat ttgtcgtttt attccccttt taaaatgtga 12300

ttttttttta aaccaggttt gggtgcttca tgaaagagag cattacaggg actttgccaa 12360

gaatacaccg gacaggggcc atttctggtc attctttaaa acagtgtggc catcaattaa 12420

gtggtaagat gtggattttt tttccaacta aatttatgtt actagcactc aaactcagag 12480

tagtttttgc tgaaagtcta tactatgatg gacttttaga agagaacacc gagaaagata 12540

acagacggag cagcatcatg gacctaagga ggggtctttc ttcctgataa tgttcatgtc 12600

tttatcagtt gtaatgcacg gccttaaagg gcttccatta tctatagtac tcacacacaa 12660

tgtaagattt gtgggaaatg aatgtgtagt ccagataata ggtcttctgt tccatagcag 12720

acatttcaga taagattcag gacacatctc accccaaagt gaaccctgga gagtaagtca 12780

ttgtcaccac cagaactgat tgtgcccttt ccacatcaaa caacagttgg tattctctgg 12840

ggacaattta ggtggttaca actgggagag atggtactct atggtaatgg ccaaggttgg 12900

tgcagtcaga cacaacaaca acaaaaaaag ttctgaaaag ttctggcccc cactagggtc 12960

attgagaagg gtttaagata gtggctctca actgtcctta cgctgcagct ctttctcttg 13020

ttgtggtggc tcccaaccat aaactattta catcaccatt tcataactat aattttgcta 13080

ctcttatgaa tcataattat aaatatttgt gttttccagt ggtcttaggc aactcctgtg 13140

aaagggtctt tcaatccccc caaaaggggt catgacccac aggttcagaa atgctggctt 13200

aagagatctt gtttgtcact cagtccagac tgcaggactg agttctgtca atcttgctaa 13260

gcatactatt tcttgcaagg ggtgtaaatg caaggatgtt agagagcttt ctctcaggcc 13320

accattgtaa ctgatgtcct aggaaacaac atcctaattt ccacaccatc ttaaaggctt 13380

aatacaaaga gggcgtttta ataaaacgat gggggctgtt agaaagtgaa agtgctaaca 13440

aagaatgagt tgggttgtat cgtttagctt tgtttttaac gtcattcatt ccgtaggctc 13500

aaatttcaaa tgttctcatt ttgccccaat aacaacaacc ctctcaccac atatacagtc 13560

agagtctgaa acttaagctt tagggagtta atgaagggtg acaatggctt agttataaat 13620

actgcttcac tggtgtaata tcttctctat cttataagat caaacccata taccaatata 13680

acttgctgca tattatttga tgaaatgttg tgtctaatta ttgtgaccaa caacaaaata 13740

taaaaaaata gaaacattat gccttttcca aagctgctta gttgtcacat gccccctccc 13800

ccctagctta accttcttca ctgagtttgg ctctaaagtt tatttgcaac tttctcccaa 13860

atacctttga gaaagatctt caagttaaaa aatgtttgca ggaaccaatt ttagtaaaaa 13920

ctattgagag gcaggcttaa tatttacaga taatcattaa aaatatgttt tatttgtaac 13980

tacttcatcc caatcctcag ttcatttcct ttcttatctg aagcaaattt aaaagaaccc 14040

catttttatg atttacaatt ttctgccctg taaactgctg ggagcttagc acccctacac 14100

cctaacataa tgctttttca attagtttat atatacagtc tgtctcctgt gtttaaatta 14160

atttcacaat tcttagaaac ttatagttat gtacaataga atattgtttg tgctaacaca 14220

cacacacaca cacacacaca cacacactgc ttgcttaact aagaatctaa ttatgttgtc 14280

ttaaaaacaa aacctaagag cttaatttgg cttgatttct gttaaaagaa tcaactattt 14340

ttaacatgta agataaactt caatgaaggg atattttaaa taaactgaag aaacgtttta 14400

aaactggcgt gctagtgcat ggctataatc ccagcactag ggaagcaggg gcaaagaaca 14460

ttttaagttc aaagccagcc tgatctgaag tgggagatta ccacatccag catggcttgg 14520

gtcctggaaa actgagagga acatcaagag aataagaaag gacagacaca gagacccctg 14580

tccagagaag ctagaacagt gtgagctttg agcactgaac ctccaatccc cagagtgctt 14640

attagacaca gcacagtgga ggggttaact agtcacagag gggtgtctcc ctcttggtct 14700

ctcctcttgg tctgtaatca tcttggagta gaaggtgacg tcacggtaca cactggtcaa 14760

tagttcctaa acactgttgc tgagacccag ggaaggcttt gccgaagtcc catggggctg 14820

agccattggt ccttcacatg gctacggact tcaaactaca gatttcacct gctcctttca 14880

cagttactca gggcttccca tggttaccac aggagttcca agccagccag ttttgaaagg 14940

acaagaaagg gttcggtggc tgcggtggtg gtggtagtgg tgatggtggt taatagaatt 15000

taagaaagtt ttaaagcaag aaggaaaatg atttcattgt gcatataaat aaattgagat 15060

aatctgttaa agattcgaca cagatatcag tgttgtgact aacagtcaca aatcacaatc 15120

agacctgaat agatgaagga agagaaatag atgcagatcg tgattttgtt gatttgtctg 15180

tttttttgtt tcgttgttgt tgggttttgg tttggggttt ttgtttgttt gtttttgact 15240

cagaagtcaa aggctcgata tttgtcaatt actttgcgtc tctgtcacac actatcagga 15300

cggttgcttt cttggtttat caatacctct gatagccttc ttctgaaact gtattgttct 15360

gaattgttgc atatcccttg cagtttaaga agcagaataa cctgtgttta atgcaaaggt 15420

caggttaagc acacctgcgg tgagctaatg tctagcagca cttgataatt tagacacgtg 15480

ataaacattt taattcctgt acttaccagg gtggtcacaa aaatgggata ctagccttca 15540

aaatgactcc gagggctgag cagtttatct gtgtccaata tacatatatt ataatacata 15600

tatatacata tatgtatgta tatatatatg gtcgaatgtc tctctgtgtt tcatttcagc 15660

ttgccaccaa gacatatacg aaggactgga tatgagaggg tccaacttta atatatctaa 15720

gaccgacagt attgaagaat gccagaaact gtgcacaaat aatattcact gccaattttt 15780

cacatatgct acaaaagcat ttcacagacc agagtacagg tgagtgagtc atggttccct 15840

gagaggacat tccaggatgc atcagcatcc gcagtgaaaa agacaagtct gcttccctcc 15900

agtcaaagac aaggggtggg cagtcctgag ccccttcctt ccttaaattt cttagttaca 15960

tacttaattt cagtggaatt tcctcccaga gatagtgaac ttcgtttagt gactggtaag 16020

ctatgtatgg gcataatgtc agacaatgat gtccgccact ccatttgcag ccgcctgtcc 16080

cctttgcaga agggaaaagt gtctattgat cactaatggc ccaactgtgc ccctttgtgg 16140

taacaaatat tatctgcaca cctttgcaca cctcaaggaa ggaagcataa catcttttgt 16200

tgacactcag gaagagttgc ctgctgaagc gcagttcaag tggaacgccc accagtataa 16260

agccagtgga caacctggtg tctggattct cactgaagtc ctgtgctctc tcagagatcg 16320

gtaattagat gacgattatt cctctgtgtc tgtgatgtcc taaggaaggg ttcccagaaa 16380

catccacatg ctgttccccg ggacccagga atatgatgcc tttttataga tgtgattacg 16440

tggaaatagt ttgcaatcag agttatttgg gattaccaga atatgtgcct atccactctc 16500

aggggttctt agatgataaa gcgggtaaca gagaggtcag tgtcagaggt agatagactt 16560

gaaaggtgga acaagagtcc gaaagccaaa ggggtaccag tggtctgtag acattgaaaa 16620

ggacatagaa cagaggaaca gaagcaagcc aacctttgac tggcacccag gaagacttgc 16680

tttggccttc cagcctctag gaaaggtgat aaatttctgt tgctgtaacc tctagtttta 16740

ctataatatg cctacaacaa catcattaga agaggaagct ccaccataaa gaaaaccaca 16800

agatcattct gtggtatccg tatccagaga aatatgcaca ttgtcgtgaa tcaaccaagc 16860

cctgtaactt cacacacaga ggtagcgcta aatgaattac ccggacagtt gccttcaaat 16920

ttaggacacc aaggtgtcag tggtgagatt tactgagacc agtccactta tagtaaatag 16980

taccaatact gaatgctggc cctacaccag gccctgtgtt aggtttccga attctgtggt 17040

atgacctctg tctgaaagac tgagaagtca gaagcaacat agctctttcc ctatttgtgt 17100

tttcttttct ctatgtgtcc ccaccaggct gtgccattca gatggcttaa atatattaac 17160

tatttaattt taatattccc cttttctagt ttttggaaac ttgtctatag gagatagggc 17220

tctttattca acagtgttcc cttttgtata ctgcgcttat cttagactgc accctgcagc 17280

tatagccaga tgccagagga ctgggaaaca ggcaatttaa aactcaggat gctgactgct 17340

gcaaatacca attgtcataa tcaccttagt ttctatgttg aaaagcaagc aaactccaca 17400

tcgtgtcact gagaaatgtt caccactgag ttcacaggtt gccccatgga tattttccag 17460

cactttgcct ttgcagacct gaatgtaagc catgtcgtca cccccgatgc cttcgtgtgt 17520

cgcaccgttt gcaccttcca tcccaactgc ctcttcttca cattctacac gaatgagtgg 17580

gagacggaat cacagaggtg agtgtcagca gcatatgctc ccttcttagc cttttccggt 17640

cctagcagag gcttgcaagg gtcttgctgg tttccctaac agcgctggag cctgtggttt 17700

aacaggatgc ttttcagacg ggtgcaggtt acttcgcaga ttagcagatt catcctcaca 17760

ctttccttct tccataaaac aaacgcgcta ttcactcaga ccacagtggc aggggcaaag 17820

ggagcaggca gcgttctcac tggcattaag gttgaggatt ggcttgggta acagctgctc 17880

atgcaatcca tcctttaatc ttgtgagaaa tccgagccct gcttaccctg atctagggtc 17940

tagtctgacc tcttcatctt tacacaacac ttcctttatg tataccctgg ggccggcaaa 18000

aggatgcgtg tggacgtaat accgcaggca gcataaatcc aaaccaacag tcctttgatg 18060

ccttctcttt ttctttttct aattagaagg tggactttaa tcctctgtcc tcttctctgg 18120

ctgtctgtac ttactaggtt tttttttttt tttttttttt ttttgccgga gggagaggtg 18180

gctccattta catttaagcc ctgtgatatt ttggagtctt gttgtctgac tgactgaaga 18240

gaatttctca gaatacaatt tacagagttg ctttaaaaag aaaggaagaa agaaagaagg 18300

taagtaggta ggtaggaagg aaggaaggaa agaaggaagg aaggaaggaa agaaggaagg 18360

aagggtgggt cttagtcagg gtttctattc ctgcacaaaa catcatgacc aggaagcaag 18420

ttgaggagga aaggaattat tcagcttaca catccacatc gctgttcatc accaaaggaa 18480

gtcaggactg gaactcacac agggcaggag gcaggagctg atgcagaggc catggaggga 18540

tgttacttac tggcttgctt cccctggctt gttcagcttg ctctcttata gaacccaaga 18600

ccaccagccc agggacggca ccacccacaa tgggctgggt ccttccccct tgatcactgg 18660

ttgagaaaat gccttacagc tgggtctcat ggaggcattt cctcaaggga gtctcctttc 18720

tctgtgataa ctccagcttg tgtcaagctg acacacaaaa ccaatctgta caggaaggaa 18780

ggaaggaaag aaagaatatg tctagtgctt ctaatgctgt cttctttctc tttcttgttt 18840

atttttaata ggaatgtttg ttttcttaag acatctaaaa gtggaagacc aagtccccct 18900

attattcaag aaaatgctgt atctggatac agtctcttca cctgcagaaa agctcgccct 18960

ggtaatgtca ctcaacctcg atggcgtgtg acttgtgtcc tggtttggtt cttggttgct 19020

gtaataaata ccatgaccaa aagcaagttg gggaggagag aggtgttttg ttcacatgtc 19080

cctgttatag ccgattcctg agggaagtca ggctaggaac tcaagcagag gcaaagacag 19140

gaactgagca tagacctcag agaaatgctg cctttttgac ttgctcctgt gattgatcat 19200

atatgtgtat gtgtatgtat gtgtatgtgt gtgtttgtgt gtgtatgtgt atatgatgtg 19260

tagatgacgt atgtatatgt gtatgagttt gtgtgtgtgt ttgtgtatat gatgtgtaga 19320

tgacgtatgt atatgtgtat atgtgtacgt gtttgtgtgt gtatgtgtat atgatgtgta 19380

gatgtatgta tatgtgtatg tgtttgtatg tgtgtttgtg tgtgtatgtg tatatgtata 19440

ggttgtagat gtataagtat acgatgtata tgatgtatgc atcatgtgca tatgatgtgt 19500

gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtatcagtag cccatgacca cctgcccaga gtggatactg 19560

ccccccagtt ggctgaccct cttctttcca tcattaatcc aaagaacatc ccatagacat 19620

tcctttaagt tagcctgagg gaggcaattc ttcaagggat gttccatctt ttcaggtgac 19680

tcttttatgt caagttgaca aacactaggt gtaccacatc ttgggagcct ctaagagtta 19740

atgaaatggg tctcaagtcc ctagaaacgt tgccaatatg ccttatgtcc tgacttgtca 19800

tatctccttt ggtgtttgta tgtggtgcag aaccctgcca tttcaagatt tactctggag 19860

ttgccttcga aggggaagaa ctgaacgcga ccttcgtgca gggagcagat gcgtgccaag 19920

agacttgtac aaagaccatc cgctgtcagt tttttactta ctcattgctt ccccaagact 19980

gcaaggcaga ggggtaaggg aacctttctt taacgataat cagcaaggta atttttttct 20040

agttttctct ctctgtgggt ttaattttgt actgttcatt tttttccagg tgtaaatgtt 20100

ccttaaggtt atccacggat ggctctccaa ctaggatcac ctatgaggca caggggagct 20160

ctggttattc tctgagactg tgtaaagttg tggagagctc tggtgagtga agctcacttg 20220

ttatggaact gcatggctgg cttgactgct gtgatgaatg tcttggtctt atataatggg 20280

attgtttata tggtttctgt tatggtttgt atgtgcttgg cccagggtgt ggccctgttg 20340

gagtaacttg ttggagtggg tgtgtcactg tgggtatggg ctataagacc ctcatgctag 20400

ctgcctggaa gtcagtattc tgctagcagc cttcagatga aggcaccatg catgcctgga 20460

tgccgccatg ttcccatctt ggcgataatg gactgaacct ttaaacctct aaaccagctc 20520

caattaaatg ttgtctttat aagagttgcc ttggtcatgg tgtctgttcg cacagtaaaa 20580

accctaacta agacagtttc cttggataaa gggagggaat gctgatctgt gtctaattct 20640

gccacacatc tcaacacttt tcagactgta cgacaaaaat aaatgcacgt attgtgggag 20700

gaacaaactc ttctttagga gagtggccat ggcaggtcag cctgcaagta aagttggttt 20760

ctcagaatca tatgtgtgga gggtccatca ttggacgcca atggatactg acggctgccc 20820

attgctttga tgggtaagtt ttcgatccat cttattttac caatgtgtgt gtgtgtgtgt 20880

gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgagcat gcacgtgtat ggacccttac 20940

ctgcacatgt gtatataaag aggttagcct caggtatctt cgtgtactgc ttgcttttct 21000

tatttgttga gacagggttg ttcactgagt ctagtgctaa cccttttgac tagactggct 21060

gcacagccag tcccagagat ctgtctgcct ctgtctcccg gcacattctt agccctagtt 21120

cagtgttggg gctctgaact tgaatgttca tgtttgagaa gcaagccctt tgcccactta 21180

gccatctcct tggccctgag gcatttgttt tgatgataat aaaagtttcc aagcctttgt 21240

ctagaaaata ttatgatttt aaatttagct tatatatctt ttacatggtc aatttaaaat 21300

tcaaaagata tgtaggtaca ttttaagcaa caaaataacc ttaattccta ctggggctta 21360

ttttaatcgt tacagctgct tgatggctct gatgtaatga aagcaattgc ttttaggtct 21420

ggtaaactga acttaattct cctaaagctt cttcaaaagg cacagaagca ttcccgtatt 21480

tttacttgta ataaatataa agcaattgtt aagtttgttt tgagtatttt caaccacagc 21540

ttttatactg tgctctgtaa tcctatatgg acacagttca gctgaatatg agcccctcaa 21600

agattttaga aacagtaaag ggatcctgaa ggaacactga ccaaaattca atcaaaataa 21660

aatgttatga caaacctgag gcattctgag aatcctctcc tgtgcatatt tcaggactcc 21720

actgggtttg taaacataca acatgcttac tgtgcactgt gcatgccacc atgctgtgta 21780

gtaccaacag atggtaccct aaagacaatc agactgaaga ttatgtaatg ttgtgaacca 21840

tggtgtctgt agtacgtgtg ccttaggttt tctgctctta caaaacataa gagtttaatt 21900

tcaaagaaca aaagcattaa aatgtgtctt gtcacagtcg cctttgggtt gtacagtgtt 21960

aaactttgat tttcaacatt gtttcataaa aactcattga atgaacttgg gtttgggtat 22020

tagagtttcc aaagctttct aaatggtcct taatctaaga ctatcatttg gtcctccata 22080

tgtatgtgaa gtggtgttct tagcattatc agttataaaa gtaaaatatt aagaaactct 22140

taaaagcatt gaggatgttc tttgtcttat agtatcaaat attcagacat attttaatta 22200

tgtatgtcga cataaataaa cacgttattc tattaagatg tgcatttgct gataagtggt 22260

aaaattatct gtgcaccaaa aattgtcttg tagtaagttt ctttataata tatcatcagt 22320

aaatgtttaa tatgtgtgcc tgcttcatgt aatcacacac aaaaacaaaa aattatcttt 22380

tcaggcaaaa gggagtctca catggacaaa gttttattat aaactaaatc ttcgaagtcc 22440

aatactgctg ctgtaaacaa caataggtgg ccttgccaga aaaagtaact aggtcatatg 22500

gaatgttttc gttcttctcc ctcctcccct tcaaagaaat gtgctaagaa aaaggagcaa 22560

ggaaggatgc caacgttact ttgttctcct gcttctctcc taggattccc tatccagacg 22620

tgtggcgtat atatggcggg attcttaatc tgtcagagat tacaaacaaa acgcctttct 22680

caagtataaa ggagcttatt attcatcaga aatacaaaat gtcagaaggc agttacgata 22740

ttgccttaat aaagcttcag acaccgttga attatactgg tatgcagcgt atttaagggg 22800

aaactgtaca attcacttgt attggcgtta gcttccagtt caatttgagc gagaagacag 22860

atctgcagca attgtctttg tgtcctggtt ggtggggctg agggagagat gaggctgcct 22920

gggaagtaaa aaccccacga cctaccatgc atttgctgct acttaagggg gcaaaagagc 22980

ttcattactt tctcagagtg caacggagtg tatggtattg aaacagttgg tatagggaag 23040

attttgacat ctggggacat tgggtatctt ttgacaagat tggcaggatg actcttgctt 23100

gggcttagga atatacaact atatgaacat gaatgggact agaggttagt gcctaagaag 23160

acactgggct gacagtggag gaacatgaag aatggaactg ccattggtgg cacatcactc 23220

cacagaaaca gaatgcctgc caataccatt agctgcaagt gtctgctaac agtcatgtgt 23280

ccttagacag ctcgcctttc ttccttccac ctctaatatc cactgtatgt gtgctgacta 23340

cttcattgct ttcttgcaat aattaagcaa gatattcaag taaaatacca ggacagcatg 23400

gctatgtttg ctctgcttct gaattctgtt acagtgtagg tttaccaaag cataaggatg 23460

tttaccaata cattttggtt gaagagtccc tcttccccat ggaaatttca ttctgaaatg 23520

ccattcaaac tgtgagaatt tccttgaatc atgggcttta gaaatggctg gagggccatt 23580

ctttatactc tttagtttca gcaatggttt cattatatct catacatggg catggtatgt 23640

tttgattgca tgcaccccct tcaccctctc ttgcccttcc cactcctgtt gttcgcccta 23700

ctcctcccgt gtagtcccac atggctcatt cttgctctgt tgctttgtag aaaaagaata 23760

aggcaaaaga tagatattaa tttttcagat ccctatctat ggttttaatt agcctaaatc 23820

tattcatgaa attttctttc agaattccaa aaaccaatat gcctgccttc caaagctgac 23880

acaaatacaa tttataccaa ctgctgggtg actggatggg gctacacaaa ggaacgaggt 23940

aagcctggca tgtggaatgt tcctctctta tgtgctaagg tacatggagt agagccactc 24000

aacaacccgt agtcatgatc cttctgtaga tccattcaac agcccttact catggccttt 24060

ctgttcattc caaaatgatc ccaagaatat gacttttttg cattaaaaac tgatgagcta 24120

atccattaaa catattactc ataatagaga tcattttcat gactctgcat caagaactgt 24180

aaccctatgg tgctcttaag tccactgaag ctcatctgat ccccagttct cacagcatcc 24240

ctgtttacta tgctctccct tgctatgaat agccaaagtg ccagcatctc tttaaggaca 24300

gtgccatata tatatatata ttatagtata gtagtgccaa atatatatat ttgtagtata 24360

ataaatctaa ctttccctct aattatgctg ttaacttctt gtgtaaaata catagattca 24420

taaagacaag tagattgcag cacaattgcc attattttta gcagaatttc acacagggat 24480

aaacatacat ctgtattaat gtaatcctta gcaagttgtt tgaatatcta ccataatgtt 24540

taaataacta tgcacaagaa caatatcttc ctttctgttg taactacaat tcaaagaatc 24600

cgtgactctt acacagcagt gctggtgaca atatcacact tccgtatttg ttatctgcat 24660

ttgaaacaga gggtggggtt cagccttact tggaagggag agactgtaga ggccagtttt 24720

tctccttccc ttcctcggag tttatggata gatcagttgt atgcgtggct ctcaaatcaa 24780

gggatctgtg tgttaagact tgagacattt ctctagaaat aagcatgttt tccttttaga 24840

ctgagtgcca gatagcatgt ttgagtgatt tttttaaaaa aagagatgat tggctgtgtc 24900

ttctttatat tttctgaacc agttagtact gtattcaatt aatcctcatt ttcactatgt 24960

tgacttggct acaaatacgt ggacacacac atatacatgt gtgcacatgc acacacatac 25020

acacacatac atatacacac atacatacat acaaccaaga aatatagaaa tgggtgtaga 25080

acaaaatact tctctgctgt taaatgtttg ggatttattt tcataaattg tatatttgtg 25140

ttataatttg aatttataaa acaatgaaag gcaagagcat ccacgtatta aaggtacaaa 25200

tgtttaaaac aacatatttt tctgaggaga gccttggttg atacaggagg atggctgaga 25260

tcatagaaac caagtctgtg gtagcttggg tgatagggga gcttcagtca acacagatca 25320

ttgcttcttc atctccatct ccctcccctg ctctccctcc acttcttgct tcctttctcc 25380

ctccctcttt ctcccctact tattgtattt cctctcttta atgctacttc ctgattgctt 25440

cataggtgag acccaaaata ttctacaaaa ggcaactatt cccttggtac caaatgaaga 25500

atgccagaaa aaatatagag attatgttat aaccaagcag atgatctgtg ctggctacaa 25560

agaaggtgga atagatgctt gtaaggtaac tctgggaaaa atacgtaata gttcactgga 25620

gactgctcat ccaaaagcaa atttcccaag ttacatttca ttagtttcag ttttgaagtt 25680

gcagagttaa gtgacatgga gacttttttt tttttaaaga tttattttta tttatgtgag 25740

tgtacactgt cactgttttc accagaagag ggcatcggat tccattacag atggttgtga 25800

gccaccatgt ggttgctggg aattgaactc agaacctctg gaagagcagt cagtgctctt 25860

agctgctgag ccatctctct agccccagac ctggagactt tttaaacagc ctttaacaaa 25920

ctaaacacac acaatgcaca tcatgtgttc cttataatag ttacgttaga atttgtattg 25980

actgtgacgg gtgtgtcaca gtcagtacag ggacatgcca tatttaagga caattttaca 26040

tacatggtca tgctaaaata caaggaaaca gatttatttg aactttgggt aaagatgcta 26100

aaattgttgg gtttatctga gaacgggaga gggaataaat tggccttgta accatccact 26160

tactttcttc atggctaatg gggtgcagag aaattgagaa gttgcatgtg tgatatgtaa 26220

aatatgatag caaaatgtta aagacatcta tctttgaaca aggggctcct aatttgaatc 26280

atcactgtta tagctctcta tcattttttt tctactcact gtgatccagg gagattccgg 26340

tggcccctta gtttgcaaac atagtggaag gtggcagttg gtgggtatca ccagctgggg 26400

cgaaggctgt gcccgcaagg agcaaccagg agtctacacc aaagttgctg agtacattga 26460

ctggatattg gagaagatac agagcagcaa ggaaagagct ctggagacat ctccagcatg 26520

aggaggctgg gtactgatgg ggaagagccc agctggcacc agctttacca cctgccctca 26580

agtcctacta gagctccaga gttctcttct gcaaaatgtc gatagtggtg tctacctcgc 26640

atccttacca taggattaaa agtccaaatg tagacacagt tgctaaagac agcgccatgc 26700

tcaagcgtgc ttcctgcctt gagcaacagg aacgccaatg agaactatcc aaagattacc 26760

aagcctgttt ggaaataaaa tggtcaaagg atttttatta ggtagtgaaa ttaggtagtt 26820

gtccttggaa ccattctcat gtaactgttg actctggacc tcagcagatc acagttacct 26880

tctgtccact tctgacattt gtgtactgga acctgatgct gttcttccac ttggagcaaa 26940

gaactgagaa acctggttct atccattggg aaaaagagat ctttgtaaca tttcctttac 27000

aataaaaaga tgttctactt ggacttgatg ggacagagca ccttttcata taaaccacct 27060

ttctggccat tgctgctgag tcctgcatgg tcatgagtaa ggagctcgtg acagggtttc 27120

ccacccctgg agcaaaacca gctagatgtt aggcttgttt gtataaattt caagttcctc 27180

ctttgggaag tattctctct gcctagatta ttgggggaat atcctctctg tcagggcagc 27240

ccttaagatt gtgggaaaca tgagaatata taatttctct acaatgcaaa atataaggat 27300

acagtctgaa ttatataagg agatccatgg acctaagaga acagaggcag ctacactatg 27360

agccagcttg tcagaaagat actactgaag gagttaaaga gataaagaga tttggggaat 27420

agctatcaca gggcaagatc ccacccagct aagtttatta tttgtgttta caaagacagc 27480

cagattcctg agttcaaggt catcctggga cagagctggt ttaggcccag ggtaatgggg 27540

gtcccactca gctagcttat tgtctatgct tttaaatgca ggcagatttc tgaattcatt 27600

tgccatgtta aaaaaaatgt acctgatgtc ttttcctaag atatacgggt ctagagtcat 27660

ggaatgctga ttcatgggtt aatcaaaagg gaacctagag taaacgcctg tactgataga 27720

tacataaaag tctgggcttt ggtctacaaa tgttgagcta tgtggatgag ctgtgtagag 27780

ctaaagattg aacagtggtc tctaattatt tttttagatt atttttttct agcagctacc 27840

cagagagaac ggcttagaga gtaaatattg ctattttaga tttttttttc tagaaaatcc 27900

aagaattttt atagcagctt ttctgacact ggtcagaaaa cccatgagct atccagaaag 27960

cttttagatt tttttttttc aagagagaac tgtctcaagt agagacagct ctctcaatca 28020

gagagagctg cctggagcag aaagctatct cgatcagact acagagccaa gagctattta 28080

caaagagctg tctagggagc cattttaagc aggctataag gctgtcagct tgcaccccat 28140

catttgactt tgagttgttt ctttcaccac tctcaaacac cccttctctc aggaactcct 28200

ctccaagcca agactggttc ttggcacatt gccacatggt cttggctacg tatgcatgta 28260

agacctgtag ggctatattt ttcttcttgt gtgcagctcc aacaataggc ttatcacaca 28320

gtactcatac agggcacgga atctgatgag aatctccccc agggaaccct ttggagttcg 28380

gttgatactg tattctgcaa tagtaattca tggaatgtca ttggatgtaa agtgttgtat 28440

aaaattcagg cttgtagttg agttgaaagt aaaaagcaat cttggaaggg atgacagtaa 28500

tcctcatgta agacaaattt ccagcttccc agtgattcat aaagtggacc atatgggctt 28560

aactccattt agttaagctg attaatattt agaattagcc atttacaaac tattgtgcaa 28620

gttaaataga caaacagaaa agtgaaattt cctaaagaag attaaacctt tcactgcaaa 28680

ggtttgttga gtagtgcaga ggattaaata tggaaaagcc agtgggttat ccacagaatt 28740

tgccacggga agtggaggag gtggttatta tctgaggagc aaataaatgg cttttgtaaa 28800

atctgtctgg attcccatga aatcactccc ctttaaagca caccacttca acttttaatt 28860

ttgtatacaa tttcatctta atctgttctg tgtggaagtt attttatatt taaaatgaaa 28920

gaagtggttc tcaatgaaaa tcacgtatct caggatttca tactgataac cctaacaggt 28980

gttcacacaa ggtgtcagag tgctggctgg gtagaccttg ggctttggtt tctcaaggaa 29040

tggcctcatt tgatctaaac agttttgaaa tgtttaattt ccctggggca taaagtaaca 29100

ttataacatt gccagtggga gtccagttag attggaaggc tctgtttatt ttttgttgtg 29160

tgttccagca caaagtagcc tgtcttccac ttggggcctt atggggctag tgagaaagtg 29220

agaggcttga ataacatcac tgtcacaagg cagagaggag gcaggaggcc ctagatcttt 29280

ggcaggtcca tccaaaaaag ggagtgttat ctctgggaaa gaacacggtt cttcctgggt 29340

cacacatgca gaacacactg catactgttc acatgtgtgg agttcaaccc aaagctcaga 29400

gggctgtctc tcatcgttga cttttcttct tgtaattctt gcttatgcct gccagcccta 29460

tagattgtca gtaactagga aggaggttct ccctgactct gtctctctct ttcatcaata 29520

ctacatgtga atgagcatgt ggcacatgtc tccctttaga tttaccttta ttatctttgt 29580

tgatgtgttg tttaattgta tgtcacgtgg ttgctagtgc ctgacaccaa ctgatcaaag 29640

cgtaacttct gagcaactgc cttctaccag agtaaaatag agtagtcctt catgtcaaga 29700

tctcttcaaa gtcatacaca ggcacacaca catggacaca catgcaggaa agcatggaca 29760

cacatacaca tacacatgca tacacacgtg ttgtagttac cattattttg agtgtttact 29820

ataccccctt tttgccttta actatttatt aggtatttct accctacttt agataattta 29880

gttcccaaat aaaagacaca ggaatctttg gatttagaat aaactttaga gcactgggca 29940

gatatcaacc ctctatgcta tcttgtctgt ttccctatca aattgctgga gatactactt 30000

<210> 16

<400> 16

000

<210> 17

<211> 2353

<212> ДНК

<213> Macaca mulatta

<400> 17

ggaagccgtt cactagtcag attgaccaga gattatgggt gggctgtctg ttggggtcta 60

tgcacaggat ttctgttgga gttctaagga caaaaagttg aaactgttgg cagaaaccca 120

aagtcaatat cgaagccaag gaaaacattg cctgcggtgc cacattagaa cagcttgaag 180

accgttcatt tttaagtgac aagagactca cctccaagaa gcaattgtgt ttgcagaatg 240

attttattca agcaagcaac ttatttcatt tccttgtttg ctacagtttc ctgtggatgt 300

ctgactcaac tatatgaaaa cgccttcttc agaggtgggg atgtagcttc catgtacacc 360

ccgaacgccc agcactgcca gatgatgtgc acattccacc caaggtgttt gctattcagt 420

tttcttccag caagttccat caatgacatg gagaaaaggt ttggctgctt cttgaaagat 480

agtgttacag gaaccttgcc aaaagtacgt cgagcaggtg caatttctgg acattcctta 540

aagcagtgtg gtcatcaaat aagtgcttgc caccgagaca tttataaagg aattgatatg 600

agaggagtca attttaatgt atctaaggtt agcagtgttg aagaatgcca aaaaaggtgc 660

accaataaca ttcgctgcca atttttttca tatgccacac aaacatttca caatgcagag 720

taccggaaca cttgcctctt aaagcacagt cccggaggaa cgcctaccac tataaaggtg 780

ctgaataacg tggaatctgg attctcactg aagccctgtg ccctttcaga aattggttgt 840

cacatgaaca tcttccagca tcttgccttc tcggatgtgg atgttgccag agttctcgcc 900

ccagatgctt ttgtgtgtcg aaccatctgc acctatcatc ccagctgcct cttctttacg 960

ttctatacga atgcatggaa gatcgagtca caaaggcgag tatgcatggc tagcacttgc 1020

tgctgtactt tcatcaattt tattttagaa actttacctg aaccctgcca ttctaaaatt 1080

tacccgggag ttgactttgg aggagaagaa ttgaatgtga ctttcgttaa aggagtgaat 1140

gtttgccaag agacttgtac aaagatgatt cgctgtcagt ttttcactta ctctttactc 1200

ccagaagact gtaaggagga gaagtgtaag tgtttcttaa gattatcttc ggatggttct 1260

ccaactagga ttacatatgg gacacaaggg agctctggtt actctttgag attgtgtaac 1320

actggggaca gctctgtctg cacaacaaaa acaagctcac gcattgttgg aggaacaaac 1380

tcttcttggg gagagtggcc ctggcaagtg agcctgcagg tgaagctgat ggctcagagg 1440

cacctgtgtg gagggtcact cataggacac cagtgggtcc tcactgctgc ccactgcttt 1500

gatgggcttc ccttaccgga tgtttggcgc atttatagtg gcattttaaa tctgtcagac 1560

attacaaaag aaacaccttt ctcacaaata aaagagatca ttattcacca aaactataga 1620

atctcagaag ggaatcatga tatcgcctta ataaaactcc aggctccttt gaattacact 1680

gaattccaaa aaccaatatg cctaccttcc aaaggtgaca caaacacaat ttataccaac 1740

tgttgggtaa ctggatgggg cttctcgaag gaaaaaggtg aaatccaaga tattctacaa 1800

aaggtaaata ttcctttggt aacaaatgaa gaatgccaga aaagatatca agattataaa 1860

ataacccaac ggatggtctg tgctggctat aaagaagggg gaaaagatgc ttgtaaggga 1920

gattcagggg gtcccttagc ttgcaaacac aatggaatgt ggcgtttggt gggcatcacc 1980

agctggggcg aaggctgtgc ccgcagggag caacctggtg tctacaccaa agtcgctgag 2040

tacatggact ggattttaga gaaaacacag agcagtgatg gaaacgctcg gatgcaggcg 2100

ccagcatgag gagcagccca gagtcttggc gagttttaca acctgggttc aagtcaaatt 2160

ctgagcctgg gggtcctcat ctgcaaagca tggagagtgg catctacttt gcatcctgtc 2220

ataaggacaa aagacagtgc actcagagct gctgaggaca atgttttgct gaagccagct 2280

ttcagcattc agtaactggg agctgataat gtgaagtcgc aaccgagatc tccatgattg 2340

tgtgtcgtaa aat 2353

<210> 18

<211> 33001

<212> ДНК

<213> Macaca mulatta

<220>

<221> misc_feature

<222> (17364)..(18312)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<220>

<221> misc_feature

<222> (23228)..(23609)

<223> n представляет собой a, c, g или t

<400> 18

actgttggaa agacatcatt ggttttgaaa tctgaaaagg acgtgagatt tgggaaaggc 60

caggggaaga atgatatagt ttggctccat gtccccaccc aaacctcatc ttgaattgta 120

atccctgcat gttgaaggag gggcctggtg ggaggtgata ggatcattgg ggtggtttcc 180

cctgtgctgt gttctcatga tagtgaggga tttaaaagta gctgtttccc ctgcacatgc 240

acactctgtc tctcctatca ccttgtgaag aaggtgtctg cttcccctct gccttccatc 300

atgattataa gtttcctgag gcctccccag ccatgggtaa ccgtgggtca gttcaacctc 360

ttttgtttat aaattgccca gtctcaggta gtatctttac agcaatgtga aactgaacta 420

atacatctgg gaaattcttt ttctctcctt cctttctgaa ggacagcttt gcctgatatt 480

atattcctgg ttgccaggtt ttgtactttc agtactttga atatatcatc ccattctctc 540

agcctacatg atttctgctg agaaatccac tgataatctt atgaagcttc ccttgtatgt 600

gaagaattgc ttttctcttg cttctttgaa aattctctct ttgtcatggt gaggatctct 660

ttatatttaa tctattggag ttcttttggg cttcataaat ctggatgttt atttcattta 720

tgtctccaaa ttttgagagt tttctgttct tatttttaaa aataagtttc tgcaactttc 780

tctttctctg cttcttctgg aactcttgtc atgcatatta gttttcttaa cagtgtcctg 840

taatttttgt cagctttctg caatctttat cattcctttt attactctga ctgggtaatt 900

tcaaatgacc tgtatctgag tgtgctgatc ctttctcctg cttgatcaag tctgctgctg 960

aagatgtttg tgaatttttt caattcagtc attgtgttct tcagttcgag aatttctgtt 1020

tggttctttt tatggttcct atctatcttt ttgttgaact tctaattttg ctcatgtatt 1080

attttcctga ttttgtttac tgtctatcta tattgttttg tagctcactg agctttctta 1140

agataattat ttttaactct ttgtcatgca gtatagatct ccatttcttt agagtcgcct 1200

cctgctgctt tattttcttc ctttggtggt ttcttgtttc cctgattatt tgtgatcagt 1260

gtggccttgc attgaagtag gtacctattt cagtctttac atactagctt cagtagagga 1320

agccgttcac tagtcagatt gaccagagat tatgggtggg ctgtctgttg gggtctatgc 1380

acaggatttc tgttggagtt ctaaggtagg cagggctgga ttctgggttc attcattgtg 1440

gttgtctgta ttctgtgcac aaggactggc ttgaagcatg gatccttgag ggctgacttg 1500

gcactgaaat gagccttaag cctgagtctg caggggccag cctaacatgg ggatcaccta 1560

gcacctgagt tcatggggac agacctgttc ctgagtttat tcaggctgtc ctgggaccag 1620

ggtccactgg ggtgagccca gcatctgggt ccacatggcc aagatctctg gaggctgacc 1680

tggtgctgga tctgcagggg atggcctgaa ttctaggccc atgggtacca acttggagcc 1740

ttgggctgct ggggctaatg tggaggctag agtcttgggg gccaggctag agctggggca 1800

ggtctgaagt ctaggtcttc tgtggccacc ttggagtcta gacccccagg ggctgacctg 1860

gtctggggtg agcatggggc tgaggccaca gaggccagtc tggcctgtgg caggcctgaa 1920

tcctggtgcc ggggtttact ggagtgggct tggtgcttgg ggtctgtggt gaaggtgggt 1980

gctatcttaa ctgtctctct tccacgcaag agggtatctc tctccatgct gtgctgccca 2040

ggcttgaagg tggggtgaca ctggtaatgt gaaattgtcc ttcctatgca cttcaatgtg 2100

tcttttctta cttctgtgct gcaactgggt ggtacaacct ctcacctgat tcctgagctc 2160

tagtgaagtt attttcgtgc atggatactt attcaaattg atgtttctgc aagggatgag 2220

cactagaaac tcctgttctg acaaactcct attccggttc ttgctgacat cactccctga 2280

aatagttaat atacttaaca gctgaacacg gataggatgt tcacggaata tgttgacagg 2340

acaaaaagtt gaaactgttg gcagaaaccc aaagtcaata tcgaagccaa ggaaaacatt 2400

gcctgcggtg ccacattaga acagcttgaa gaccgttcat ttttaagtga caagagactc 2460

acctccaaga agcaattgtg tttgcaggta gcaaatttct attattctga ttgtttccaa 2520

agaaactata atttttaaag tatagttttt tactttatga gaaaattagt catttatatt 2580

ctaatttcct gagtatatag atagtagaga aggaactaat attcctttat gtagaaatat 2640

ttaaatgtaa gatgacttta aatcaaaaag aatacttgat tgatttaaaa tttttaattg 2700

ggctttaata ttttcagagg ttttctttac ttagggattt ttggactgac attattgcca 2760

ttatttatta attttctttt tgctcaaatc aagaggtttc ataactgttt aatctctctc 2820

tctaccaatt ccctttccaa cattactagc cacagagttt gccaatcaac aataaacaca 2880

acagtagtct ggaggtctca atttgtatct tgggaagcat tataaacttt ccaactccct 2940

agacacaaat gtagagaaaa aaccccttgt tttctatacc agaaactgtg tgctttgtct 3000

tgtaattcag acatttacaa gaaaatctgt atcaccttaa attaagattt atgttaaatg 3060

cagtctaaaa ccaacagagt tatgtattgt tttctttttt agaatgattt tattcaagca 3120

agcaacttat ttcatttcct tgtttgctac agtttcctgt ggtaagtgaa ttatctataa 3180

agcatgaaat tcaggctaag acaggagtag ccaagcaagt cgcaccacct ctggagaaag 3240

ctattgaaca tacagcttcg gggatggaga tagtccctga tgattcagga cacgtgtcta 3300

tttaatgttc cagaacaagt acgacttgtg agatatattg ctgtatacat acattgcaga 3360

ccagaggaag gagctcagaa gcgggaatgt cttgggactt gtgttaataa aaacttctgt 3420

tcacagatga cactctgcaa aacaaaactc aaaacaaaaa aattactcct ctatttttat 3480

caacattaaa aaattaaaca ttatctgaaa tttcaaaaga gtgctgggca ttatatagtg 3540

tctgggtcca atccaagtat ctgttaggta catgatacat agttttactc tggacagcca 3600

gggaaccatt tcaaaaatga aagtacctgg tttaaattta acttagcaaa ccaggcattt 3660

ggatagttct aggtgaataa ctttcaacac tagatttcga tctcatttct ctattaatat 3720

cattaatttt tggagaataa aaatgattct ggacatttca ttaatcgcta tagagggagt 3780

tttctctgtg tccccacaag gcatgattct gagtctatgg tgacttaaga gggccacata 3840

acaatgagta tttaactttc ctctcgtatg gctacaataa acgtctacag ggaaggttta 3900

cattcataaa gagactactt ttccaggaaa aaaggctttg attcccccta aatcacaact 3960

cccctgtgtc tgtccctcaa ccctgattgc ttttctaaac cgtaatttac caacccatgt 4020

gcaaacccac tgaaaactga aaaggagcat gagccaggga tactgtgaac cacggccacc 4080

tccaggtggt ttctcatttt ctgttttttt cttctggcaa aataaatcat gattatggct 4140

aggaaaatta aggatgtaaa taagcaaaaa actataaact acatattgca tgtagtcccc 4200

aaattcagaa gcagtcgttg ttaaacatct tttgtttagt ctttcagata tttttctaca 4260

tatgcctatt tgcacatttt acaaaaaaga gttattaact atggatactc tttgacttgc 4320

attttccact tacagctacc ttttggtgca aataaatgac attttttgga gcttgctatt 4380

ctctttttat ggtatgtttg tgtgcacatt cttatgcact tagttatttc tgtagaatac 4440

attttttgaa ataaaaatac tagattcaaa ggtatgaata ttttagaagg ttttatggtg 4500

tggcatcatg aaattatctt tcagaaaagt tactccctag ttgacttctt ctaccagcta 4560

ataagagtcc ttatttaccc cacttaggcc aacactaaca ggcttctgtt gctttgcatc 4620

ccgacatgtt tatctttctg gaaacagtat cctaatttat ttctgcagag ctactgcctc 4680

tcagttttgg tccatgtggt tctggtgacc ctgactcttc tgctgaacca ggaagtgcac 4740

acatcctgct gactgcagtg acccaatcag agccaacatc ttgcaatgaa gcgtttgttt 4800

agacgtctag aaataggact cttacttttt tttttccaat ttaacttgaa acataagaga 4860

atacagaggc ctgagctgct ggtcctattt tgctactatg tggagcttga gagtaatggt 4920

aacaccatga ctggagcaag cggaaggaga ctattgtcca ctgatgctat ccgttgagca 4980

caatgtgggg ttactcctta agccagagtc accatgggct ttttggctcc tgaaccaata 5040

gatttcattt gtattcaagc cactttgtac taggttttcc atcatttgca atcaaaacca 5100

gtatacaaat actggttatt taatttttca tttttactaa tctcatggaa aactggcttc 5160

tagttgtttt aacttgcctg tatttgtgat tcttcccatt ttcgtgtact tactaatcac 5220

ttctatttct tttgtaaatt atcttttcat atttgtccac taattcttta aaattagagt 5280

acttttcttc tccttattgt ttatgtaatt gttaaacaag actgaataac ctgcccaaaa 5340

tccgtggaca tgggagccca tgtgaaagct ttgaaagcca ccatcattat gagataaact 5400

atataacagt actttacata tgctccaaaa tacagtacag acacggctat cattgtcatg 5460

atcatgatca tcattatcag catgatcacc aacttaggag gataagcaag aacacctact 5520

agaagtttct ttccattcag caacaaagtt ggcgtttttc tagtcactcc cttccctgac 5580

tgagtcacat ggcaggtcac agaggctcaa tggcagaatg ggaagctctg ggccagcacc 5640

agccattgtg tgcatccttg cgtgtgaacc taggtgctgg aagaggagtg actgcttgat 5700

aattatgagt cagtcaaaac caccaactgt ctgacaaaac agacctcttt gtaacctgta 5760

ttgtcactaa accaatgcct ccatgctttg tgcatacatg aaatctaggc aatacacttg 5820

tattccccaa agcttccatt tgaagagatc tgtgctcttc ccaaatgtaa accttacccg 5880

agaggtggtc atctggccgc acctctgaga gggatagaag tcttgctgtg ttgggtggtc 5940

agactggggc tcagggccag aattcccagg gggtaggatt gtgcagagaa gatggcactc 6000

tccagtgctt aataaaatgc acgtggtcta agttgcccat tccctcaaag gcaataaaaa 6060

aataggtact atttaaattg aagagtaact actgccccag cgaatggaca ggttgtcatc 6120

ggaatagcca tggttaatgc cccagcgaat ggacaggttg tcatcggaat agccatggtt 6180

aatgccccag cgaatggaca ggttatcatc ggagtagcca tggttaatgg tcagttgact 6240

gactgaaatg aatatgctgg ctgaccagga aagctcatta agcagacttg gaagagagtc 6300

tttccaggta aatccacatt tacaaattaa agcagtaatg acacctaatt ctctaataat 6360

aggtggggtg cagtgtattt tagagctggg aataattcca aacagcaaat agttcaaaat 6420

ttattttcca tttagcatat gcatgcattt gcttaaacta tcttaaaaat gagtaaaaaa 6480

tattgtcagt ttgcttgaat catactgaga tgcggaacaa tatttagcac tgcatgctag 6540

aaaaggacac aggattggga gtcagggctg ggtgactgtc gcaggatttt cattaagtgt 6600

gtggatcttg ggcaagtctg tatgccctga gattcagtta tttaactttc tttcaaaaaa 6660

cctaatccag atgcagataa caaaacctgc ttctaacttc ccttacagaa ttgtgagaag 6720

ctggtggaga tgtttgtaac caaagtgttt tgaaaataga gcaaatatta ttctttttaa 6780

ggcatgatat tttcatagca tgtcaggcaa cagggaaaaa ctaagttagg attttatttt 6840

attgtgggta atttatgtgc aaattttggt gcaatttaat gaaaataagc caaagtttta 6900

atgcagaagt gcccagaaaa ttaaataaca atctacattg ttcaaatggt tgccttaata 6960

tattttattt tctcagcata attagaatta tattatacag gtcttggagt agtcagtcag 7020

tgggagaagt taagacaaca gatatctttt tgttaaaatt attatttgaa ttatctcaaa 7080

ttaactttta tggttctatc acaggatgtc tgactcaact atatgaaaac gccttcttca 7140

gaggtgggga tgtagcttcc atgtacaccc cgaacgccca gcactgccag atgatgtgca 7200

cattccaccc aaggtgtttg ctattcagtt ttcttccagc aagttccatc aatgacatgg 7260

agaaaaggta aaagttgata tttcattatt ggagaagcca tttttctaaa ctgaatcggt 7320

tttgtgcaaa gaggtgtagt ataactgaga gttctgtctc agacggggct caaggaccag 7380

cttcagcaaa atcccttcaa gtggttctta ccaatgcaga ttcctcggca acaacccaga 7440

tttgctgaac caaagtttct tgggactaga aattgcattt taaacaatca ctgtgtttat 7500

ttaaagtagt agaagttagt cattttctat tcaaagcctc aaaatgcttg aacatcgttg 7560

ggctaagaga ttgtctccag aaagcatcta acaggcgaac atttcatctg aataaagaaa 7620

cagacttaac tgtgtgaccc gtgatcacat tagtggctag cacagtccga aggaaataac 7680

gtaagacaag cattttgcgg agaatataat tgagaaacat ctagaacttg tgattttggg 7740

acagggcaga tctgaatgac gcctaaagtg agccagtttg ggcacctatg gcatgatgct 7800

atgtatggta tgtgtgtgtt catgtgtgct tgtgcttgtg tgaatatgta ttattaactg 7860

gagatttgta aaagtattgg aaaaatacta cttatgattt tttttttttt tgagatggag 7920

tcttgctttg taacccaggc tggagtgcag tggcacgatc ttggctcact gcaacttccg 7980

cctcccaggt tcaagcgatt ctcctgcctt agcctcccaa gtagctggga ttacaggcac 8040

gcaccactac atctggctaa tttttgtatt tttagtagag acggggtttc accatattgg 8100

ccaggctggc cttgaactcc tgaccttgtg atccacctgc ctctgcctcc taaagtgctg 8160

ggattacagg cgtgagccac cgcacccggc tgtaattaca atttttatta catcagagag 8220

atgcttatta atcacaagct acagtttcat cttaatgatt ttcattttga ataagaataa 8280

gcttttcttt gttcttccca tttccatatt cataactctt ttctcatctt ctccacgtga 8340

gtttgtgaac tagaaattgg atagtcattc tctgatccta catgttaaac ttgtagagaa 8400

aacccagatt gtatgtgagg atcatcatct taaaagtgga ggtaggttct agaattctta 8460

taaataatga aattaacatg gaggctgaca tttgagacag agggaagtct ttcattaagt 8520

gcagactaca aggagttaat aagcaagatg aacacacaat atacagatcc agctcttatc 8580

actaagttaa ttttttaagt aaatgaaagt atttgcaaaa ataattacca attaaggaca 8640

tagttgcctg aaggtttaag aatacaggaa aagtcattaa ctcttcaatg tggttgactt 8700

cctgtactta aaaaatgtga gtgtaaagaa aacgcaatgc tgaagttaaa tattatgggg 8760

atgttataaa attacctcta agagtgttct ttccagcaag ttttggggaa gctatattat 8820

ttcccttatt cctggtttta tgttagtgta tagaaaatgc tagacatttc ctcaatgtat 8880

gtttgttgtt ctacttccta aataaagcta cttttaaaac aggtttggct gcttcttgaa 8940

agatagtgtt acaggaacct tgccaaaagt acgtcgagca ggtgcaattt ctggacattc 9000

cttaaagcag tgtggtcatc aaataagtgg taagctgcga atttcttagc tacatttgag 9060

ttaatattga atctacctta gaacagcttt tgctaaaagt ctgtactgct acagcctttg 9120

ggaaggaatc actcataaag atagaagatg gggcagtatt ctggacacaa aagagggacc 9180

catattcatc tggacacttc tgttgtcttt atcaatcgac acgtatttaa tgagcctcta 9240

ttatttatga ggttagcact caagtgtaag atttgcagaa aatgaatcca aataatcgtg 9300

tctccttgtt tccagataag aatttttaag aaaacacgag ggaacatctc tctcaggttc 9360

acgtgagggt aatttttata tcagtgattc tcaactggca gtgatttttg tctcttccat 9420

taggggacat ttgacaatgt ctggagacac ttttggttgc tatgactagg gagggcgtta 9480

ttagcattta ctaagtagag gccagaatgc ctctctcatt tactaagaag aggccagaac 9540

gttcgaatgc tgctgcccaa ccttctacaa ggcacagagc agtcctccac agcaaataat 9600

cttctggccc aaaatgtcaa cagtgctgac atcaagaaac tctgatatac cattaggccc 9660

aaactgaaga actgggttct gcaaatcttg ctaagaataa tacttcttaa aggaaacttg 9720

aggactagga tgctagagaa ctttgatttt acatctgaag ctactgatgt cttgggaaat 9780

aatttccaac actatcctaa taaatttaag acaaatgaac tatttctcaa acatgactgg 9840

gactgatcag aaagtgagaa gtgctgaaaa gattcaactg atgggttgtc ggaatcttaa 9900

aatagctgtg ctgtgattct atgtgtgact atacatcata actattttat ttgtattatg 9960

cacaattaat tttgtaggtt caaatttcag atgtttttaa atttgtcatc ctttcctccc 10020

tcattgatat caccccttcg atacatacac actttgagcc tgctgtttgc atgttaacca 10080

gttatcaaag gatggcaaag cgttcgttat gaatatgggc ctgacttagc cagtgtaata 10140

agtgtagtct acctgaggtg gggtacattt cctgttttat aagaccaatg tgtatgttca 10200

tctaatttgg tataaagtat tcaaggaagt gctgtttcca attgttgtat cttatagcaa 10260

aatttaaaga aaaagtaaca ttgtgccttc cccaatattc ctgttattgt taatgtattc 10320

taaaactcag tgttactcac ttagcttgct tttaatgttt ttttctaact tcatcatctt 10380

aaagtgaaaa attgttccca agtacataaa atctctactt tcaggaacaa ttctagtcga 10440

aagcatttag agctttcaca tgaacactta caaagttgtt atttgtgaga gtcccatccc 10500

aactcttagc ctactctttt ctcacacgca gaaaaattgg aaagagattt catttcgacc 10560

gtctgcaaat tcctgtgttt aagaaccact gtgaataatc cacctcccta cccaattccc 10620

aattcgacat gcagttttcc tgacagtttg tatgttttct gtctttccca cccttaaatt 10680

tagttttatg acttcaacca cacttcttag gagtggaaag ttacctgtaa tagattatgg 10740

tttattccac ataatcttgg ggaataaaac tttaaaaaag tttatggttt agacttctgg 10800

tttacattac ttccttaacc aaaagtctaa ctaagaaatt tgaatattta aaaaaaaaaa 10860

gagcctaatt ttgcttcctt gtctgtgaaa agaattatct atatcttttg catgtaagac 10920

aaatctcagt gaaaagggtg cttaaataga agttaacact attttaaagc aagaatggaa 10980

gtggcttcat catgcataaa caacaactct ccacattttg taacgattga tccagatgca 11040

atttgtagtc agacaggaga agttgaaagc agagaaagaa cactgggaga tagagaagct 11100

ccttcattca atgcaaaagg tcaaaggcac atcagtttct ttaataatgc aaacctcagc 11160

acacatgatc agtgtcctca ttattattgc cttgtttatt tcccactgct cactgttaat 11220

ttcaacgtga aatttacctg tattgctgca tgcatcttgc agtttaagaa gcgaagtaac 11280

ccaatttcca agctagtgct ttcaggaaaa tactggattg tatttacttc gagcagagtt 11340

tgataattta tggacatcat aaaaatttta aatcccttaa ttaatatagc aattgccaaa 11400

actgggctgt tatccttcta aactaccggc ccaaatggta gtgggatcct tctaaactac 11460

cagcccaaat ggtagtgggt atctaatcta cctctagaaa gaaaatggac tgtgtttgct 11520

ctatttcctt tttcttgtac agcttgccac cgagacattt ataaaggaat tgatatgaga 11580

ggagtcaatt ttaatgtatc taaggttagc agtgttgaag aatgccaaaa aaggtgcacc 11640

aataacattc gctgccaatt tttttcatat gccacacaaa catttcacaa tgcagagtac 11700

cggtgagtac aattcatggt gtttgttctt tatattagtg cccccaggat ttcactgtat 11760

tcttcacaac ctcttttgtt cccaaactaa aaaccaaaca gggcttttac tcctaaccac 11820

tttccttatt tacttactct attttatatt tttatcttct tttttttttt ttttttgaga 11880

tggagtctcg cgtgttgccc aggctggagt gcagtggctc aatctcggct cactgcaacc 11940

tgtgcttcct ggcttcaagc aatcctcctt cctcagcctc ccatgtagct aggactacag 12000

gcgcccacca ccacacctag ctaattttta tgtttttact agagacgggg ttttaccatg 12060

ttgctcaggc tggtctggaa ctcctgatct cgtgatccac ccacctgggc ctcccaaagc 12120

gctgggatta caggcatgag ccactgctcc cggcccttca ttttaaagtt aaataattca 12180

tttaatttca tttgtttctc tactcttttc ctctggcagg taattgtacc ccatcttcaa 12240

agcctggcat cctcttccac cacttctcca aaggctgatt ctttcaggtc tttcctcaga 12300

taccgtcccc tccaaagggc catttctgag cattctcttt taagccacat tcagctctgt 12360

ttatttcatt cgtagagcta atcacaattt gattttaact tgtgaatttc tttccttatt 12420

tttaaatctc gtttttgttt gcatagatgt atggggtaca agtgtaattt tgttaccttg 12480

gtgtattgta cagtggtaaa gtctgggctt ttggtatatc catcactgga gtcacgtaca 12540

ttgtacccac taagcaattt gtcatcacct gcccctttcc cacctctcta tcgccttccc 12600

agtctctact gtcgatcact ccatgctctt ctcaattgtg gtgtcatttt tcctgaagcg 12660

aaatttcggt gtcattgttt ctgaagtcat tttctgacgt ctgtgtcatt ttttgctttc 12720

ctgaagtgaa ttttggtgtc atttttcctg aagttccatt tgccccacgc ataggcctta 12780

cttgtagaat gagggtttag tgtcatggtg tctcctgcct cattctcacc ccaactttcc 12840

cttgacccct ttgcgaggag aaggatgtcc atttgattaa taatgcaaac ccctaaccca 12900

ctcattatca gcatcattgt tttttccact gtccgtttga atactaaatg ttacctggac 12960

tgctacctcc gcctcaaagt gcaggaagca aagtcacctc ttttcttccc attcaggaac 13020

acttgcctct taaagcacag tcccggagga acgcctacca ctataaaggt gctgaataac 13080

gtggaatctg gattctcact gaagccctgt gccctttcag aaattggtaa ttgtaggacc 13140

acttcacctt gtgattgtag taggcggaat aggacccccc agagatgtcc ctgtgcggag 13200

ccccggtacc tgtgcgtgtg ttcccatagc tggcaaaagc gtttctatca atgggattca 13260

gttaaggact ttgagatggg gagtttactc tggatttcct cgatgggccc aatgtactca 13320

caggattggg tgctcacaag gctaataaga aaaagggaga ggcagaaggg tcagaggcag 13380

agagaggttt gaaggtgtta cactgctggc tttgaagatg aaggtccatg agccaaggaa 13440

tgcaagtggc ctctagaagt tgaaaagggc gaggaaacag tttccctgtg gagcatcctg 13500

gaggaacaag ccctgctgat gtcttgattt tagcccagta agacccaatc tctagaatgg 13560

taagataata aatttttgtt gtttttaacc actgagtttg tggttatgcc cctatagcag 13620

cagttatagg aaactagtac agtgatattg ttataggtac aatgatattg tagcaaaact 13680

gtaaggacct tccttggttg tgtccctatc tagggaaatg actctaccgg ggggagggaa 13740

ataacattct gtcgtgtcac acataaaggt aatttcaatg gaattgtcca gaaaattgcc 13800

atgacattcc acctcattta gcgtatcagg atgttaacga caagatgtta ctgaaaccaa 13860

atcccttact gccagttctc cgcagtagtg ggtgctggct ctgtgcctgg ccctgtattg 13920

ggtgctgggc taggatttcc ctgtggaaga ttgggaaggt tggttacaag gtgtctattt 13980

tcctgtctcc tctttgtgac agcacacctt ctccacggtg cgtgccaggt tcacgtgtac 14040

tgatgatgtg attttaacgt tcatattatt tttttccggg agagtttttg aaggctgcca 14100

ggaggcagga ctcgatgcaa gcatgctcca ttctgtaccc agcactgttg ctggaaggat 14160

ttgctgcact tacccaggga acaggcaagc tcatgccgtg gttctgggct gtcacagctg 14220

ctgtccacac ctgggagagc accctggatg gctcatctct gtacttgctt tcttgttaaa 14280

ttgcagtgag ttcacatgtg atttaatctg atcaaatggc ctttacagac tggtaaaaat 14340

ctggctgttt caggcagtgt tttgagctgc taaaggcatg gcttttcact gagtacgtgt 14400

tccccgttcc tcagggaaca cccagtagct acgtgcctcc tcaacctgga gtagggctgt 14460

ctcctggcct cactgcccag atgagattca taagttaggg atcatctgta gtcatcacta 14520

caggtttgtc cttagtttca ccatggattt ttctaatttt acaaacaaaa cccctaaggc 14580

tcctagaagg agggcagaag tgaaggtgct tgggggtcat atagctgatg agctgaacga 14640

gaacttgacc cttgggtcac acagatttca cattgctcac tccccatttt gattttttaa 14700

tggatttaat ggtgttttaa agtctcctgc ctctcaactc atataaattc atcatattta 14760

cagatttcct tctcttgcgg tccatcttcc tgcatagatc ttgacagatg tcagggtaat 14820

cacatcttcc cagttaattt aacaaaaccg tttgcaattc tgatatggga aatctaccat 14880

atgacttatt aatttatcaa ttgaggtgat aaacatattt ttcaagccaa aagtaggaga 14940

acataaactg gaaaaaaaag tttttttatt ttttattttt ttatttttat cacctctggg 15000

gaagaaaatc tgataaatga acctggttga tgaaattgca attagtggga gcaacatcat 15060

ggtttctgtt ctgagaataa ccagatggta tacttgaaat agagaatgtc ctagaaatca 15120

actggttgct tggccaaaat atctataaat agtgcccgac atattagata ggaaaagcaa 15180

agtaaaagca attttaatag gttaggacat tgggctgaag tattgcatat atttaatgtc 15240

acgtgcatct gtgtgaagag accaccaaac aggctttgtg tgagcaataa agctttttaa 15300

tcacctgggt gcaggaaggc tgagtccaaa aagagagtca gggaagcgag ataggggtgg 15360

ggccatttta caggatttgg gtaggtaacg gaaaattaca gtcaaagggg ttgttctctg 15420

gtgggcaggg gtgggggtca caaggtgctc agtgggagag cttctgagcc aggagaagga 15480

atttcacaag gtaatgtcat cagttaaggc aggaaccgac tattttcact tcttttgtca 15540

ttcttcagtt acttcaggcc atctggatgt atgtgttcag gcttaggccc agaggcctga 15600

cattcctgtc ttctcatatt aataagaaaa ataaaatgaa ataggagtaa agtgttgggg 15660

tggcaaaaat tttggaggtg gtatggagag ataacgggca atgtttctca gggctgcttc 15720

gagcaggatt aggggtggcg tgggaaccta gagtgggaga gattaagctg aagaaagatt 15780

ttgtggtaaa ggttgatatt gtggggttgt tagtgggagc atttgtcgta tagaatgatt 15840

ggtgatagcc tggatatggt tttgtatgaa ttgagaaact aaacagaaga cataaggtct 15900

gaataagaga aggagaaaaa caggtattaa aggactaaga attgggagga cccaggacat 15960

ctaattagag agtgcctgag ggggttcaac ataattagtt gcttggttgc tgagtttttg 16020

ggctctatcc ttgacagagt cctccttctt aagttggagg ctgagcttgg tgaggtgtgt 16080

ttttaaaaga ccattagtcc tttctacctt tcctgaagat tgaggagagt aaggagtatg 16140

aaggttttac tgactactaa gagcctgaga aactgcttgg gtgatttgac taataaaggc 16200

cagtccatta tcagattgta tagaggtggg aagtccaaac caaggaatta tgtcttacag 16260

aagggaagaa atgaccacgg tggccttctc agaccctgtg ggaaaggcct ctacccatcc 16320

agtgaaagtg tctgcccaga ccaagaggta ttttagtttc ctgactcggg gcatgtgagt 16380

aaagtcaatt taccagtcct ctgcagggac aaatccccaa gcttgatgtg tagggaaggg 16440

agggggcctg aacaatcctt gaggagtagt agaatagcag atggaatact gagaagtgat 16500

ttccttgggg atagatttcc acaatggaaa ggaaaagagg ggttttaaga ggcaggctag 16560

tggcttgtaa cttacatgga agaggttacg aaatgatgac agaatagaat gggcctgtga 16620

ggctggaagg agatattttc cttggtccaa gaactatttg ccttgtgtgg gaagagattg 16680

ataggtggaa gtttcaatgt gggagtagat gggagtgacc gattagaggg aggaaaaact 16740

ggccgtgagg gacagaagtt ggaatgctag ctgcttttat aactacctta tcagcatggg 16800

tgttgccttg agcaatggga tctgatgcct tttgatggcc cttgcagtga atgactccag 16860

cttcctttgg acgtaaagtg gccttgagaa gagtttttat taaagaggca ttaatgatgg 16920

aggacccttg cagagtgagg aaacctcttt cagcccatat aacagcatag tggtgcagga 16980

tatggaaggc atatttagag tcagtgtaaa tattgatgca tagtaccttt gcaagagtga 17040

ggacctgagt taaggcaatg agtttggctt gctgagaggt aagttaaggc aatgagtttg 17100

gcttgctgag aggtagtgga ggggtgcaga gtggtagcct caatgataga tgtagaagat 17160

attatagcat accctgcctt tgctggtggg tggagattag gcctggtgga actgccatca 17220

ataaaccaag tgtgattagg gtaaggaata ggaaagacag aagtatgggg aaatggagtg 17280

gatgtcaggt ggatcagaga gatacagtca tggggatggg ggccagccta aaacagtaag 17340

gtcaagttgt ttctacagaa agcnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 17400

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 17460

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 17520

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 17580

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 17640

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 17700

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 17760

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 17820

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 17880

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 17940

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 18000

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 18060

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 18120

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 18180

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 18240

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 18300

nnnnnnnnnn nnctggcgag gagcagcctg gggaggaggg gagaggtcag atgggtccat 18360

agaaaaggaa gattggaaag actcagcaac gcttggggtt gggattgagg ggacaggcgg 18420

gagggaaaga aggaagattt gggatgagtt gcattgggaa caaagactag ggagggactg 18480

atgtgtaaaa gactgcctgg acatcaggca gctcagacca tttgcccatt ttacaacaag 18540

aattatctag atcttgtagg atggaaaaat caaaagtgcc gttttctggc tatttggaac 18600

cattgtcaag tttgtattgg ggttaagcgg cattgcagaa gaaaataagg cgttttggtt 18660

ttaggtcagg tgtgagttga agaggtttta agttcttgag aacataggct gagggagaag 18720

aaggaggagt ggagggtgga aagttgccta tagtgaatga ggcaagccca gagaaaagag 18780

agggtagaga cacggagaga aggggtcagg gtgcttgccc cccaggaaag tggtgcttgc 18840

cactaagggt gaaggatcaa ggcaggcatc cctaaggtga tcagacacct ctgaaacatg 18900

ggcgcataat caagcaggtg tccctgtagt gattaaatgc caagggaaga ctgtcttccc 18960

gagtccatga ctggtgccag agttttgggt tcacagataa aacgcgtctc ctctgtctct 19020

accagaaaat gaaatgaatt gaaattaaga gaagggagag attgaaggat ggcgccaaga 19080

ttaaaaggag aaagaggttg agggatagtg agagagattg gataagagag taaaaagagg 19140

ccgtttaccc aatttaaaat tggtgagatg ttccttgggc tggttggtct gaggaccaga 19200

ggtcataggt ggatctttct cacagagcaa agagcaggag gacaggggat tgatctccca 19260

agggaggtcc cccaatccgt gtcacggcac caaatgtcat gtgcacccgt gtgaagagac 19320

cactaaacag gctttgtgtg agcaataaag ctttttaatc acctgggtgc aggtgggctg 19380

agtcagaaaa gagagtcagt gaagggagat aggggtgggc cgttttatag gatttgggtg 19440

ggtaatagaa aattatagtc aaaggggttg ttctctgatg ggcagggttg gagctcacaa 19500

ggtgctcagt gggtgagctt ctgagccagg agaaggaatt tcataaggtg atgtcatcag 19560

ttaaggcagg aaccggccat tttcacttct tttgtcattc ttcacttact tcaggccatc 19620

tggatgtatg cgtgcaggct tgggcccaga gacctgacat ttaacatgaa taaatgtgaa 19680

gttcttagaa tcatacatac acattggaaa agatggggtt taatagcact ttataaggag 19740

acttgaagaa tgtttgagaa tccaccatga agctgctgaa aatatcaaga aaatttaatt 19800

cttatgtata taaataatgt gtctgtttta catgaattcc ctctatcaag tttggtattt 19860

taatatagca tatattattt tttcatagta gatttaaaat ttttgatgta taatttagat 19920

aacataaaat taaccctttg aaagtgtaca actcagtggt ttttagtata tccacctgat 19980

ttcacaagaa tcaccactat ctagttccag aacattttta ttaccactga agaaagactg 20040

tatccattgg cagtctttct ccattgccta ctcctccaat cccctgacaa ccactaatct 20100

actttctatg tctgtggact tgactcttcg ggacatttta cataaatgca atcatgcaat 20160

gcagcacatt ttgcatctag cttttttcat ctggagtgtt ttcaaggctc attcatattc 20220

tagcatatat cggtactttg ttcctattta ggactaaata gtattctatt atatgaataa 20280

accatatttt gtttatatac ttagtttgat gaacatttga gttgtttctg gatttttttt 20340

tttttttttt ttttgcctct tatgaataat gctgcaatgg acagcagttt ttgtgtaggc 20400

atacatttta aattatctta tgtatatact taggattaaa attgttggat catacagtaa 20460

ctccatgttt aactttttga ggaagtgtca aactgttttt gagagcagct acacaatttt 20520

acattcttac cagcaacaac tgagtgcttc aatctctcta caaccttaac aacacttgtt 20580

attgtctttt ttattattgc ctttctaggc agtgtgaagt ggtgtctcac tgtggttttg 20640

atatgtattt ccctaatgac taataatgtt gtgtatcttt tcatatgctt attatcaatt 20700

tgaataaatt ctttggggaa atctctgttt aaatccttta gccattaaaa ataattgggt 20760

tattttgttt tcattgttga gttgtatgaa ctctttatat actctggata ctacactctt 20820

gtaacatata ttattggcaa attttctgtg catctgcagg tcatcttttc actttagtga 20880

tggtgttctc tgaagcgcaa aagtttttaa acttgatgaa atacagtctg gctttattct 20940

tgcatgtgct ttacctaaaa tgccaaaacc taattcatgg ttatgaagat ttttgtgtat 21000

gatttgttct tagaggttta tagttttagc tcttacattt aggcatttga tgcattttaa 21060

attaaatttt gtatatggtg taaagtagga atccaactta attcttgtat gtggatattc 21120

agttattcca ttgtcttgaa actcttttca aaatcaattt tctataaatg taagagttta 21180

tttttagacc atcagttcta tcccattgac ctgtatgtct gtcctaatgc cagttacaca 21240

cagtcttgat taccataact tcgtagtaag ttttgaactc agacagtctg agtgctttta 21300

ttttgttctt tttcaagatt aatttggtta ttccggatct tttgcatttc catatgaatt 21360

gtaggttggt tgtcaatttc tgcaaccaga aggcagcagg attttgacag agagggcatt 21420

gaatctgtag accaatgagt atcaatagaa ttatgtgtta tcaaatttag taaactacgt 21480

aaacgatagg aacacagcta aaataaaact aagatataag atcgtattaa tgtaatgtta 21540

ataaaagtag attgtctccc attctaattt taatgggcac aaggcatttt tgttaatcac 21600

ttcttattaa ataatttttt ataatattca ggaaaataca acaacaaaaa acccttacat 21660

tccaaaggcc tcagagtcag agtaatagaa ggaaaacgta aacacatgct gagtaatgca 21720

aacatttggc aacggtggtg actggagctg ggagcacagc ttttatttct ctgacatagg 21780

agtttgcccc ttagagttgg accagttttg ccttcctcta aatgacaaac agtttggagg 21840

tattttaaag gacgttttgt cacttaggat gtttagtacc atgaataata taaatagtca 21900

taattcctta attacgatga caaaatacaa gcgaatttag catcgtgtgg tttcctaagg 21960

aacatctctc tctgagttca caggttgtca catgaacatc ttccagcatc ttgccttctc 22020

ggatgtggat gttgccagag ttctcgcccc agatgctttt gtgtgtcgaa ccatctgcac 22080

ctatcatccc agctgcctct tctttacgtt ctatacgaat gcatggaaga tcgagtcaca 22140

aaggcgagta tgcatggcta gcacttgctg ctgtactttc atcaatttta ttttagagtc 22200

tgagttttta aaagtttcct tcatttccct caaaacactt ggacctgcag tttaagtagg 22260

tacttttctg ccaggtgcag attagttaag agattagcag acttctctgc ctgtcttctc 22320

ttactttaaa acacatgtta ccagctgggt gcggtggctc ccacctgtaa tcccagcaca 22380

ttgggaggcc gaggcgggtg gatcacgagg tcaggagatg gagaccatcc tggctaacac 22440

ggtgaaaccc cgtctctact aaaaatacac aaaattagcc gggcgaggtg gcggcgcctg 22500

tagtcccagc tcctcgggag gctgaggcag gagaatggcg ggaacccggg gggcggagct 22560

tgcagggagc caagatggcg ccgctcactc cagcctgggt gactgagcga gactccgtct 22620

caaacaaaaa aacaaaaaca aacaaacaaa aaaaaacacg ttaccattga atccaggaag 22680

caatagccat gagaacaaag aaggatctga cgcctttgaa tgaagattca aaacacgatc 22740

ttcacgtttt gtattagctt ggagtaaaag ccactccctg gcagaatatc ccttaagctt 22800

gttgcctctt ccctttgttt cagaaactag agctctgttt attctgatca aggctctgtc 22860

ccactctctt tatctcagat aacccaccct cttctacaca cagcatggag ctaagagaag 22920

ggtgcctagt tatggaatat catcagcagc ataaactccc agaatttctt ctttgatttt 22980

tttgtttgtt tgtttttcca gttagaaggt ggaacttcgt cactgtcctc tcttcaggtt 23040

gtctgtgcct attagttttc tccagaggga gatgtggttt gatttacatt taatctctgc 23100

aatttattag agtcctgtag tcggatttac ttggaagaga gtttcccaaa agaataaaat 23160

ttgccaactt cctttttggg tgtgagctgc ttttgtattt gcctaatgcc tttaatgcaa 23220

acttcttnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 23280

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 23340

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 23400

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 23460

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 23520

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 23580

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnna gaactttacc tggtaatgtg attcaataat 23640

aatattacat aaaacgtaac atatttcatg acttaacagc aacagtgttg aaacaatcca 23700

caaggtaaca gaaacttttg taaatgtcgt tcattgcttt tctcatttgg tatcttttca 23760

tgtttataat tgacacagaa ccctgccatt ctaaaattta cccgggagtt gactttggag 23820

gagaagaatt gaatgtgact ttcgttaaag gagtgaatgt ttgccaagag acttgtacaa 23880

agatgattcg ctgtcagttt ttcacttact ctttactccc agaagactgt aaggaggaga 23940

agtaagggac attttatttt tcatgatcat ttcatatcct ttttccccta gtgaaggctt 24000

actctttcta ctgttcattt catctaggtg taagtgtttc ttaagattat cttcggatgg 24060

ttctccaact aggattacat atgggacaca agggagctct ggttactctt tgagattgtg 24120

taacactggg gacagctctg gtgagtaacc tcactttttc atggaactgt aagggatgtc 24180

tgtcatgttg atagtgtgct tagtcttaag gaattatatg tcttgttctc cttggttaga 24240

agggactttg attcacttct aatttcaacc attagcatca acactcttgt ttcagtctgc 24300

acaacaaaaa caagctcacg cattgttgga ggaacaaact cttcttgggg agagtggccc 24360

tggcaagtga gcctgcaggt gaagctgatg gctcagaggc acctgtgtgg agggtcactc 24420

ataggacacc agtgggtcct cactgctgcc cactgctttg atgggtaagt gttggatgca 24480

tctcatccag agtcttacct tgacttttca ttttgaaggg tctgtgatca gctgcttcac 24540

cgtcatgtga ctttatgaat agagacgtgt taaagcaggg atggtattca caacatttaa 24600

ctagcagagt ccaagcactg accagtctga ccatcataac agagtgtggt ctctgtacag 24660

gactgatggc cctgggtggg tattctccca cagaaagaga aacaaacaca atacaccact 24720

cctccaaccc accacccgcc accaatccca ccacccatcc caccacacaa cccaccaccc 24780

atcctgacac caatcccaac accaattcca ccaccaatcc caccaccacc caccaccaat 24840

ccctccacca atcccaccac cacccaccac caatcccatc accaatccca ccaccaatcc 24900

caccaccacc caccaccaat cccaccacca atcccagcac ccgtcccacc accaatccct 24960

ccaccaatcc caccaccaat cccaccacca cccaccacca cccaccacca agcccgccac 25020

caatcccagc acccatccca ccaccaatcc caccatcacc caccaccacc catcaccaat 25080

cccaccacca ataacaccac cagtcccaac gctacccacc accaatccca ccaccaatcc 25140

cagcacccat cccaccacca atcccaccac caatcccacc acccatccca ccaccaatcc 25200

caccaccaat cccaccacca ccaatcctac caccacccac caccaatccc accaccaatc 25260

ccaccaccaa tcccaccacc acccaccacc aatcccacca ccagtcccac caccacccac 25320

caccaatccc accaccaatc ccaccaccac ccactaccaa tcccaccagc agtcctacca 25380

ccaatccctc caccaatccc accaccaccc accaccaatc ccaccaccac ccaccactaa 25440

tcccaccacc aatcccacca gcaatcccac cagcaataaa tcaaagactt atttctcagg 25500

cccatagaaa tgttacttct tgctttttga ttaataaata tactaataat aatttttaaa 25560

agtgagagtt ttgtactccg tatatttcaa catatgtaat ttgatctatt tcagttttat 25620

tggtcaaata gtagacatgt taggtaagtc ttaaaacact gaggttttgg agttagacaa 25680

aacatggctt gagtgataac tttgctgctt attagaggtg tggccctagg agatttgtaa 25740

atctctctga gctttatttt atctaaaaga taaataataa tagtacctaa tttgtaaggt 25800

tattgggagg attaagtgac acatttaaaa tgcttagtac tatatgtcga acatgaacac 25860

tgctcaacaa atgtaaacta tgatttctat attcaataag aagtgtagaa atggacaaag 25920

catatgaaaa agcaaaagaa atactagaag acacttgatt tttctaaaaa ataaacacaa 25980

agtatttttg ttttagtgaa attcatgctt agatgctgtg tactaggatt gaacatacag 26040

ccgccaaaat atagcagttg gtggtacatg tgggtggagc aagacccctc caccttgtca 26100

ccgtgaaggg gctccgccat acatgccctt gcatgtggtt taaaggtggt tggcctggaa 26160

gaaaaggccc aagatgggaa acagtaggtg tcttttttac taaatgtact ccaatttgag 26220

accaggaatt ttcattcttg aaggctcagt attgtaagtt tataagagat aatagacata 26280

aaagtacgat gatttcatta aaaaaaggct cctttgcacg tgatatctcc gttatttttt 26340

ctagaatatt gtgcacacat gccttgcacc acttggtgat gataaagatt tctagatctt 26400

tgcacagaat aaggctttgc tttagatcat aattttggat gtacttagta tgtattcatc 26460

ttttaaagaa tcaatttaaa ttttcatact ttcatatata tatacacaca cacatacaca 26520

aacacacgca cacactttat tttaatattt tatttattta tttattgaga tggaatctca 26580

ctctgtcacc caggctggag tgcagtggca ggatctcggc tcactgcagc ctccgcctcc 26640

caggttcaag cgagtctcct gcctcatcct cccaaatttt tgtattttca gtagagacgg 26700

ggtttcacca tgttggtcag gctggcctta aactcctggc ctcaagtgat ccacccgcct 26760

cggcctcccg aagtgctggg attacaggtg tgagccactg tgcccggccg tatagagata 26820

ttttaaacaa cactgaagtc ctcctactct gcctaattag aagagcattg aaagatcagt 26880

ctgacttctt gatagttctg aatttaatgg agcaatgagg tgcagctttg gtgaatgagc 26940

ttaatttttc catgataaat tgctagtctc ttcccactac agtgtctctc aaaaatggga 27000

cagcaacatt ctttgtgttt tcacttgcag taagtaagca tgatacaatt acataaatgt 27060

acacttctca gtttgttaaa tagaatcttc agagattcac gtctgccgct attggtgatg 27120

aaaaatgacc cgtaggagga attaggtagg agaaaatatg tcctatgtag tatttccttc 27180

ccagttctct ttgaaagaga gtgataggaa aaaggaacaa tattgaagga aggccttccc 27240

agtttcaaat aggttttatt tttctctcct aggcttccct taccggatgt ttggcgcatt 27300

tatagtggca ttttaaatct gtcagacatt acaaaagaaa cacctttctc acaaataaaa 27360

gagatcatta ttcaccaaaa ctatagaatc tcagaaggga atcatgatat cgccttaata 27420

aaactccagg ctcctttgaa ttacactggt atgtagcgta tgtaagaagg cggatagcag 27480

aattgtgctg gatgatattt tcatatcagt ttggacaaga gggcagatct agagagactg 27540

ttgttatttt ctgaccggtg gagttgaggg aaaggtgagg gttgcatggg aagtgaagat 27600

cccacgactt gccatgaaat ctcttctacg taaagagcaa gaaacgtgaa ttagttcttt 27660

cagggaggag cacagccgcg cgcaggtgat ggaaataatg gacggaggag atgtctgtgc 27720

cgtctgagag gcaccgggct tcttttgaca agagtagcag aactgtcatt gctttgggct 27780

tagggatatt agaatgtgtg aggaccagtg ggactagata catatttcca ggtataattt 27840

gggtaggaaa gagactgatg ccgaaagaag ccctggaaag gccagaacat cgtgatcaga 27900

ggtgttgcct ttggaggttc attgctgcca ggagctgaat acccactgta tccaataaca 27960

ttaatggcca ggcatggtgg ctcacccctg taatccccac actttgggat gcccaggtgg 28020

gaggattgct tgaggtcagg agtttgagat cagcctgggc aacacagtga gaccctgtct 28080

ctacataaaa ttacaaaaaa aacaattaac tgggtgtggt ggtgtgcacc tgtagtccaa 28140

gctagtcagg aggctgagac aagaggatca tgtcagccca ggaggtcaag gctgtagtga 28200

gccaagatag tgccactgca cacaattatg tgaccttggg caagttgctt tacctctttg 28260

cacctcttaa tttcctcatc tgtaaaatga ggatgataat ttcttcctgg gtttgttgta 28320

ataatcaata cattaaagca cttcatgtct ggaacagtga agacacctgc tatgactatt 28380

aaggatagca tacacggaat aagacgcagg aacttctaaa tgcttttgac cgtagattta 28440

ggttctgagt tttaagaatg taactcagga aattgtaaca ccaaaaaggt catgtgaaaa 28500

atggtggtga caaattttct tgaatcaata gccttagaag ttgggcagaa agcaaaaaag 28560

ttattcttgg tgctactcta tagaaagaga agacagaaaa agaaaaagat gtatttttaa 28620

agtctatatc cataacttta tttgaccaaa ctctaattta aaaattatgt ttcagaattc 28680

caaaaaccaa tatgcctacc ttccaaaggt gacacaaaca caatttatac caactgttgg 28740

gtaactggat ggggcttctc gaaggaaaaa ggtacagcat gatgctttaa atattgcttc 28800

tagagtaagt cttacatgtt gagatgcatg gagtgggtcg ttttaatcgg cttctctctg 28860

aaattatatc gaaccccttt atctttccta cctatttatt ccccaatatt tattcagtta 28920

ttcttaaaaa acgtattttt gctttggctt gaaaaaaaaa ttttagggag aattttaagc 28980

atcttacttc attctaaaga tcgtttgctt gacttcgcat gaaagattgt ccccatctaa 29040

ggctgacgag cccgtgcaag accatctggt cctcagtgtt agcagcattc ccatctccca 29100

ataccatgtt ctcccttgat gctaatggcc gggagcacag gcaggcgtgt cgcctctctc 29160

tgtggccagt tcttcatctt cttcttccag gcacccttcc tgcaatctga ggaagcctag 29220

gaaccacttc tctaacaatg cttttaaatg cttaaataaa atacacagga ttacaaaaga 29280

aaccaagtga agtgcaagac agttctcaaa atactttcaa aaagtactac aataatatat 29340

atgcctcttt attaatcctc tacatagcga gttattctaa taccaaacct acttttgaaa 29400

tagtggtgag cataaatggc attttcactt atctgccaca acagaaaagg gatatgaaaa 29460

tatctgtaat ctctgttgat ggcaaagtca taggtgccac tgatactgct gtgtttgttg 29520

tctgcattcg taatcgaagg gagtggtagg cttcatctgg aggtttgtga aaacaaagac 29580

tttttttcta cacaaattta taagccatgt gaattctttc tgaggacctt aggtttgcaa 29640

ttcctacttg tgggtatctg gagtgttcca atcgtccttg aactttttaa aaaacagacc 29700

agtctccctt tccaaaatta tgttcctgat agacactatg gagaataata tctgtgtcat 29760

tctttacaga agaaggtagc ttgccaaact ctctccatct ttcccgattc agtccttagt 29820

tcaagtgatt cacattttta gattttttac tggtaatctg agacaagaag aaattaaaag 29880

taatcttcac taagcaacga aagctcccaa cactgtcctc cccatgagag atgctcgctt 29940

gcatttactc agaaacaaaa gaccccaaga cccctctgtc gcgaaagctc ggagggcttt 30000

tcagaaacga tagggctttc aattataatt tggaatatat gaaacaaaaa aatgaaaagt 30060

gagaacttcc aggctttgga tttttgtaga tgataaatat aaaatgggat ttctggggga 30120

ctgttaccga gatgagggga tggaagaaga cacggaagca aggtctctgg tcagcccagg 30180

gtgctgggct tgtcccaaca ccacacaggt aataagagga cagtgcaggg ctccgtgtct 30240

ctctctctct ctctctctct gtgtgtgtgt gtgtgtgtaa cactaccttc ctaattttta 30300

ctatttgtat tcaaagatac ggcccttata aaaaagtaca ctgctctgat tcacttgaaa 30360

acttatttcc atatttacta tttattgtgt ttcctccctc tgaagttata tattggttac 30420

ttcacaggtg aaatccaaga tattctacaa aaggtaaata ttcctttggt aacaaatgaa 30480

gaatgccaga aaagatatca agattataaa ataacccaac ggatggtctg tgctggctat 30540

aaagaagggg gaaaagatgc ttgtaaggta atgcatgaga ttatgaaaaa cacaataggc 30600

tgcttgagaa aattcacttc aaaatatatt ttccaatagc ataatttatt atagttttta 30660

aaaaaaattc agagacaaat gatctgataa atttataagc aacttttaac aaattgaata 30720

tatacaatac atatttatat tattcatgat gtatgtcaca atctatgcat gtgctaattt 30780

aagagggaca aaaatacata caataattgc actaaaatat aaaaacatta gatttctttg 30840

tcattgggat gatgatatca agatttcttt gttagattta tttaagaatt gaagagggga 30900

tacaaaaaat gcaggcacat gagatacttg gagaacttta agaaagtttg tgtgtgtgtg 30960

tgtgtgtatg tgtatgtgtg tgttgctgtg tagtggacta cagaatttta gaggtggtca 31020

cttatttgag tcccattgtc ataactttct accattttat ttttcccctg tgactcaggg 31080

agattcaggg ggtcccttag cttgcaaaca caatggaatg tggcgtttgg tgggcatcac 31140

cagctggggc gaaggctgtg cccgcaggga gcaacctggt gtctacacca aagtcgctga 31200

gtacatggac tggattttag agaaaacaca gagcagtgat ggaaacgctc ggatgcaggc 31260

gccagcatga ggagcagccc agagtcttgg cgagttttac aacctgggtt caagtcaaat 31320

tctgagcctg ggggtcctca tctgcaaagc atggagagtg gcatctactt tgcatcctgt 31380

cataaggaca aaagacagtg cactcagagc tgctgaggac aatgttttgc tgaagccagc 31440

tttcagcatt cagtaactgg gagctgataa tgtgaagtcg caaccgagat ctccatgatt 31500

gtgtgtcgta aaataaaatg gtaaaagatc acaattagca agtgttttct tctggttgtg 31560

aaacagaact gaaagtaagt ggttgaggtt ctagcacagt gcctggactc cctctaattg 31620

cactacttct tctggaactc agtctatctc aaagatgtaa tttcctctcc ttgctgcacc 31680

tggttagcca ctgaaaccca cgattgtctg cttcacttgt ggcaaagagc tagcaggctt 31740

gggttctgtt ctgccgagtg gaagggagaa cacctgcgtc acacccactc ttataagaaa 31800

gagatgggtt acctgaaccc atagggtata tttgcctctt ggcctcctaa ctttgctact 31860

ggggcatgga taggagggtc caggctgcgt gtgtggagga actcgagggg ctgcagcatt 31920

gcacagcctt catggtaggc aaggaatctg ctttgcaagg ggcattagcc ctggaggctc 31980

agtggatatg ggctattgca atactaattc aaggagcatt tttaggatgg cacattggct 32040

catgcctgta attccaacaa tttgggagat cacggcaggt ggatctcttg agcctaggag 32100

ttcaagacca gcctgggcaa tgtgacaaaa ccccatctct acaaaaatta gctgggcgtg 32160

gtggtgcata cctgtaatcc cagctccccc agaagctgag gcaggaggat cacttgagtg 32220

tggctgcagt gagcagagat cgcactactg cattccagcc tggacgacag agtgagactc 32280

tgtctcaaaa aaaaaaggaa gcattgttag gtataaatta ctattattta tttatttatt 32340

tttgaaagga gtctcgctct gtcacccagg ctgcagtgca gtggcgccat ctcggctcac 32400

tgcaagctcc gcctcccagg ttcacagcat tctcctgcct cagcctcccg agtagctggg 32460

attataggtg cccgccacca cgcctggcta attttttgta tttttagtag aaacggggtt 32520

tcactgtgtt ggccaggatg gtctcgatct cctgactttg tgatccacct gccttggcct 32580

cccaaagtgc tgggattaca gacttgaacc accatgcccg gccctgttag gtataaacta 32640

tttcataaaa ttcagacttg taaatttatc atagccttta gaatggatga tagaaatcct 32700

tatgccacac aaattcctca tatgccaggg ctcaccataa ctgataccag ctcacttgat 32760

tcagctcagt ttaacattta cacagaattg gccatttaca aaatcttaca taagttaagt 32820

agaaaaatag aaaagtgagg ttttctgaaa gagtttgggt ttttccttca atgctcaaca 32880

acagaggtcc ccaatctttc tggcaccaga gaccagtttt gtgcaagaca ctttttccat 32940

gaaccagcgt ggtggggggg ggatgattct ggaatgattc aagtgcatga catttattgt 33000

g 33001

<210> 19

<400> 19

000

<210> 20

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 20

ccaaaaaagg tgcaccagta aca 23

<210> 21

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 21

cctccgggac tgtactttaa tagg 24

<210> 22

<211> 29

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Зонд

<400> 22

cacgcaaaca tttcacaagg cagagtacc 29

<210> 23

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 23

cctgtgtgga gggtcactca 20

<210> 24

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Праймер

<400> 24

ccactataga tgcgccaaac atc 23

<210> 25

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Зонд

<400> 25

cccactgctt tgatgggctt ccc 23

<210> 26

<400> 26

000

<210> 27

<400> 27

000

<210> 28

<400> 28

000

<210> 29

<400> 29

000

<210> 30

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 30

aacggtcttc aagctgttct 20

<210> 31

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 31

aaatgaacgg tcttcaagct 20

<210> 32

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 32

cttaaaaatg aacggtcttc 20

<210> 33

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 33

tgtcacttaa aaatgaacgg 20

<210> 34

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 34

tggaggtgag tctcttgtca 20

<210> 35

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 35

cttcttggag gtgagtctct 20

<210> 36

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 36

gcttgaataa aatcattctg 20

<210> 37

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 37

tgcttgcttg aataaaatca 20

<210> 38

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 38

taagttgctt gcttgaataa 20

<210> 39

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 39

ggaaatgaaa taagttgctt 20

<210> 40

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 40

aacaaggaaa tgaaataagt 20

<210> 41

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 41

tagcaaacaa ggaaatgaaa 20

<210> 42

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 42

aactgtagca aacaaggaaa 20

<210> 43

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 43

caggaaactg tagcaaacaa 20

<210> 44

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 44

atccacagga aactgtagca 20

<210> 45

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 45

cagacatcca caggaaactg 20

<210> 46

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 46

atccccacct ctgaagaagg 20

<210> 47

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 47

tacatcccca cctctgaaga 20

<210> 48

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 48

gaagctacat ccccacctct 20

<210> 49

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 49

acatggaagc tacatcccca 20

<210> 50

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 50

ggtgtacatg gaagctacat 20

<210> 51

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 51

accttgggtg gaatgtgcac 20

<210> 52

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 52

caaacacctt gggtggaatg 20

<210> 53

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 53

ctgaatagca aacaccttgg 20

<210> 54

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 54

gaaaactgaa tagcaaacac 20

<210> 55

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 55

tggaagaaaa ctgaatagca 20

<210> 56

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 56

caaacctttt ctccatgtca 20

<210> 57

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 57

acactatctt tcaagaagca 20

<210> 58

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 58

ggcaagcact tatttgatga 20

<210> 59

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 59

ttaaaattga ctcctctcat 20

<210> 60

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 60

tcaacactgc taaccttaga 20

<210> 61

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 61

attcttcaac actgctaacc 20

<210> 62

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 62

ttggcattct tcaacactgc 20

<210> 63

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 63

ccttttttgg cattcttcaa 20

<210> 64

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 64

tggtgcacct tttttggcat 20

<210> 65

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 65

cttcagtgag aatccagatt 20

<210> 66

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 66

ggcacagggc ttcagtgaga 20

<210> 67

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 67

aatttctgaa agggcacagg 20

<210> 68

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 68

caaccaattt ctgaaagggc 20

<210> 69

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 69

caagatgctg gaagatgttc 20

<210> 70

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 70

gtgccacttt cagatgtttt 20

<210> 71

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 71

ttggtgtgcc actttcagat 20

<210> 72

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 72

ggaacttggt gtgccacttt 20

<210> 73

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 73

gtagaggaac ttggtgtgcc 20

<210> 74

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 74

gaggagtaga ggaacttggt 20

<210> 75

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 75

ttcttgagga gtagaggaac 20

<210> 76

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 76

gtgttttctt gaggagtaga 20

<210> 77

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 77

atatggtgtt ttcttgagga 20

<210> 78

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 78

tccagatatg gtgttttctt 20

<210> 79

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 79

ctatatccag atatggtgtt 20

<210> 80

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 80

ggttaaaagg ctatatccag 20

<210> 81

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 81

ttgcaggtta aaaggctata 20

<210> 82

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 82

ttcttttgca ggttaaaagg 20

<210> 83

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 83

taaagttctt ttgcaggtta 20

<210> 84

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 84

atggcagggt tcaggtaaag 20

<210> 85

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 85

ttagaatggc agggttcagg 20

<210> 86

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 86

aaattttaga atggcagggt 20

<210> 87

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 87

cgggtaaatt ttagaatggc 20

<210> 88

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 88

actcccgggt aaattttaga 20

<210> 89

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 89

tccaaagtca actcccgggt 20

<210> 90

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 90

tctcctccaa agtcaactcc 20

<210> 91

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 91

attcttctcc tccaaagtca 20

<210> 92

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 92

attcaattct tctcctccaa 20

<210> 93

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 93

gtcacattca attcttctcc 20

<210> 94

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 94

caaacattca ctcctttaac 20

<210> 95

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 95

cttggcaaac attcactcct 20

<210> 96

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 96

agtctcttgg caaacattca 20

<210> 97

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 97

tgacagcgaa tcatctttgt 20

<210> 98

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 98

aaaactgaca gcgaatcatc 20

<210> 99

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 99

agtgaaaaac tgacagcgaa 20

<210> 100

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 100

cagtcttctg ggagtaaaga 20

<210> 101

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 101

aagaaacact tacacttctc 20

<210> 102

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 102

agataatctt aagaaacact 20

<210> 103

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 103

gagctccctt gtgtcccata 20

<210> 104

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 104

aaccagagct cccttgtgtc 20

<210> 105

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 105

agagtaacca gagctccctt 20

<210> 106

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 106

ctcaaagagt aaccagagct 20

<210> 107

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 107

gcttgttttt gttgtgcaga 20

<210> 108

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 108

acccaacagt tggtataaat 20

<210> 109

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 109

aggcatattg gtttttggaa 20

<210> 110

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 110

aacacaattg cttcttggag 20

<210> 111

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 111

tgctggaaga tgttcatgtg 20

<210> 112

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 112

tttgttcctc caacaatgcg 20

<210> 113

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 113

aagagtttgt tcctccaaca 20

<210> 114

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 114

ccaagaagag tttgttcctc 20

<210> 115

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 115

tctccccaag aagagtttgt 20

<210> 116

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 116

ccagggccac tctccccaag 20

<210> 117

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 117

agcttcacct gcaggctcac 20

<210> 118

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 118

tatgagtgac cctccacaca 20

<210> 119

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 119

tgtcctatga gtgaccctcc 20

<210> 120

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 120

actggtgtcc tatgagtgac 20

<210> 121

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 121

gacccactgg tgtcctatga 20

<210> 122

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 122

gtgaggaccc actggtgtcc 20

<210> 123

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 123

aagcccatca aagcagtggg 20

<210> 124

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 124

gtctgacaga tttaaaatgc 20

<210> 125

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 125

gtaatgtctg acagatttaa 20

<210> 126

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 126

cttttgtaat gtctgacaga 20

<210> 127

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 127

tttatttgtg agaaaggtgt 20

<210> 128

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 128

tctcttttat ttgtgagaaa 20

<210> 129

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 129

atcatgattc ccttctgaga 20

<210> 130

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 130

aaaggagcct ggagttttat 20

<210> 131

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 131

aattcaaagg agcctggagt 20

<210> 132

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 132

agtgtaattc aaaggagcct 20

<210> 133

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 133

aattcagtgt aattcaaagg 20

<210> 134

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 134

tttggaattc agtgtaattc 20

<210> 135

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 135

tggtttttgg aattcagtgt 20

<210> 136

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 136

attggttttt ggaattcagt 20

<210> 137

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 137

catattggtt tttggaattc 20

<210> 138

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 138

gtaggcatat tggtttttgg 20

<210> 139

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 139

gtgtcacctt tggaaggtag 20

<210> 140

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 140

aacagttggt ataaattgtg 20

<210> 141

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 141

caacagttgg tataaattgt 20

<210> 142

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 142

tacccaacag ttggtataaa 20

<210> 143

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 143

tccttcgaga agccccatcc 20

<210> 144

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 144

aaaggaatat ttaccttttg 20

<210> 145

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 145

ttaccaaagg aatatttacc 20

<210> 146

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 146

atttgttacc aaaggaatat 20

<210> 147

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 147

ggcattcttc atttgttacc 20

<210> 148

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 148

tttctggcat tcttcatttg 20

<210> 149

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 149

gatatctttt ctggcattct 20

<210> 150

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 150

atcttgatat cttttctggc 20

<210> 151

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 151

ttataatctt gatatctttt 20

<210> 152

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 152

ttattttata atcttgatat 20

<210> 153

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 153

ttgggttatt ttataatctt 20

<210> 154

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 154

atccgttggg ttattttata 20

<210> 155

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 155

agaccatccg ttgggttatt 20

<210> 156

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 156

agcacagacc atccgttggg 20

<210> 157

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 157

ctttatagcc agcacagacc 20

<210> 158

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 158

cccttcttta tagccagcac 20

<210> 159

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 159

tttccccctt ctttatagcc 20

<210> 160

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 160

catcttttcc cccttcttta 20

<210> 161

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 161

cccttacaag catcttttcc 20

<210> 162

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 162

acattccatt gtgtttgcaa 20

<210> 163

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 163

tggtgatgcc caccaaacgc 20

<210> 164

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 164

tgctccctgc gggcacagcc 20

<210> 165

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 165

caggttgctc cctgcgggca 20

<210> 166

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 166

gacaccaggt tgctccctgc 20

<210> 167

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 167

gtgtagacac caggttgctc 20

<210> 168

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 168

ctttggtgta gacaccaggt 20

<210> 169

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 169

agcgactttg gtgtagacac 20

<210> 170

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 170

tactcagcga ctttggtgta 20

<210> 171

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 171

ccatgtactc agcgactttg 20

<210> 172

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 172

ccagtccatg tactcagcga 20

<210> 173

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 173

ctgtgttttc tctaaaatcc 20

<210> 174

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 174

ctgctctgtg ttttctctaa 20

<210> 175

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 175

gctcagaatt tgacttgaac 20

<210> 176

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 176

cccaggctca gaatttgact 20

<210> 177

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 177

ctttgcagat gaggaccccc 20

<210> 178

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 178

ccatgctttg cagatgagga 20

<210> 179

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 179

actctccatg ctttgcagat 20

<210> 180

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 180

atgccactct ccatgctttg 20

<210> 181

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 181

agcagctctg agtgcactgt 20

<210> 182

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 182

tcctcagcag ctctgagtgc 20

<210> 183

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 183

cattgtcctc agcagctctg 20

<210> 184

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 184

tggtttttgg aattctgaaa 20

<210> 185

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 185

atattggttt ttggaattct 20

<210> 186

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 186

tgtactagtt tcctataact 20

<210> 187

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 187

atagggacac aaccaaggaa 20

<210> 188

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 188

aggcacagag ccagcaccca 20

<210> 189

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 189

cctgcctcct ggcagccttc 20

<210> 190

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 190

ccaggtgtgg acagcagctg 20

<210> 191

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 191

ggttttgttt gtaaaattag 20

<210> 192

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 192

aaaacaccat taaatccatt 20

<210> 193

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 193

acagaaacca tgatgttgct 20

<210> 194

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 194

tcagcccaat gtcctaacct 20

<210> 195

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 195

ccttcactga ctctcttttc 20

<210> 196

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 196

ttctcctggc tcagaagctc 20

<210> 197

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 197

gaatgtcagg cctctgggcc 20

<210> 198

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 198

ctaacaaccc cacaatatca 20

<210> 199

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 199

cccaattctt agtcctttaa 20

<210> 200

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 200

accaagctca gcctccaact 20

<210> 201

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 201

ttattagtca aatcacccaa 20

<210> 202

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 202

tggatgggta gaggcctttc 20

<210> 203

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 203

ccccctccct tccctacaca 20

<210> 204

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 204

atgtaagtta caagccacta 20

<210> 205

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 205

tgcctcttta ataaaaactc 20

<210> 206

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 206

actcattgcc ttaactcagg 20

<210> 207

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 207

acttgacctt actgttttag 20

<210> 208

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 208

ctcctcccca ggctgctcct 20

<210> 209

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 209

aagatctaga taattcttgt 20

<210> 210

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 210

tcaactcaca cctgacctaa 20

<210> 211

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 211

tgaacccaaa actctggcac 20

<210> 212

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 212

agcccaagga acatctcacc 20

<210> 213

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 213

gcctgtttgg tggtctcttc 20

<210> 214

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 214

cttctcctgg ctcagaagct 20

<210> 215

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 215

atgtatgatt ctaagaactt 20

<210> 216

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 216

aacagacaca ttatttatat 20

<210> 217

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 217

agagtcaagt ccacagacat 20

<210> 218

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 218

tcctaaatag gaacaaagta 20

<210> 219

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 219

ttgttaaggt tgtagagaga 20

<210> 220

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 220

acccaattat ttttaatggc 20

<210> 221

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 221

gcctaaatgt aagagctaaa 20

<210> 222

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 222

taaactctta catttataga 20

<210> 223

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 223

aaataaaagc actcagactg 20

<210> 224

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 224

ttggtctaca gattcaatgc 20

<210> 225

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 225

taacaaaaat gccttgtgcc 20

<210> 226

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 226

tcccagctcc agtcaccacc 20

<210> 227

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 227

gtactaaaca tcctaagtga 20

<210> 228

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 228

actcgccttt gtgactcgat 20

<210> 229

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 229

ttttgaatct tcattcaaag 20

<210> 230

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 230

cagagccttg atcagaataa 20

<210> 231

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 231

aagttccacc ttctaactgg 20

<210> 232

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 232

agcagctcac acccaaaaag 20

<210> 233

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 233

ttctgtgtca attataaaca 20

<210> 234

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 234

tagaaagagt aagccttcac 20

<210> 235

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 235

agtgaggtta ctcaccagag 20

<210> 236

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 236

ttttgttgtg cagactgaaa 20

<210> 237

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 237

ttacccatca aagcagtggg 20

<210> 238

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 238

aatgttgtga ataccatccc 20

<210> 239

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 239

taacatttct atgggcctga 20

<210> 240

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 240

tgtctactat ttgaccaata 20

<210> 241

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 241

tttaaatgtg tcacttaatc 20

<210> 242

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 242

tcactaaaac aaaaatactt 20

<210> 243

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 243

tcttccaggc caaccacctt 20

<210> 244

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 244

tgcaaggcat gtgtgcacaa 20

<210> 245

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 245

tgtttaaaat atctctatac 20

<210> 246

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 246

catggaaaaa ttaagctcat 20

<210> 247

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 247

tgaagattct atttaacaaa 20

<210> 248

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 248

gcctaggaga gaaaaataaa 20

<210> 249

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 249

ccagtgtaat tcaaaggagc 20

<210> 250

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 250

ccattatttc catcacctgc 20

<210> 251

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 251

tacccaaatt atacctggaa 20

<210> 252

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 252

agaggtaaag caacttgccc 20

<210> 253

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 253

tccttaatag tcatagcagg 20

<210> 254

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 254

tcaccaccat ttttcacatg 20

<210> 255

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 255

gttatggata tagactttaa 20

<210> 256

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 256

ctagaagcaa tatttaaagc 20

<210> 257

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 257

atgaagtaag atgcttaaaa 20

<210> 258

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 258

cttcttgtct cagattacca 20

<210> 259

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 259

tctgaaaagc cctccgagct 20

<210> 260

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 260

aagtgaatca gagcagtgta 20

<210> 261

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 261

accttacaag catcttttcc 20

<210> 262

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 262

atttgttaaa agttgcttat 20

<210> 263

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 263

tgatatcatc atcccaatga 20

<210> 264

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 264

cagacacctt cttcacaagg 20

<210> 265

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 265

aatttcccag atgtattagt 20

<210> 266

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 266

tcagcagaaa tcatgtaggc 20

<210> 267

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 267

ttaaatataa agagatcctc 20

<210> 268

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 268

gtaataaaag gaatgataaa 20

<210> 269

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 269

agacagtaaa caaaatcagg 20

<210> 270

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 270

caagaaacca ccaaaggaag 20

<210> 271

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 271

accccaacag acagcccacc 20

<210> 272

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 272

tgggctcacc ccagtggacc 20

<210> 273

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 273

gcctggcccc caagactcta 20

<210> 274

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 274

aggcctgcca caggccagac 20

<210> 275

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 275

ttcaagcctg ggcagcacag 20

<210> 276

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 276

aaaataactt cactagagct 20

<210> 277

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 277

tgttaagtat attaactatt 20

<210> 278

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 278

tactcaggaa attagaatat 20

<210> 279

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 279

ttatgaaacc tcttgatttg 20

<210> 280

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 280

ttcttgtaaa tgtctgaatt 20

<210> 281

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 281

accacaggaa actgtagcaa 20

<210> 282

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 282

gattggaccc agacactata 20

<210> 283

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 283

cctcttaagt caccatagac 20

<210> 284

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 284

ggttgaggga cagacacagg 20

<210> 285

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 285

ataatcatga tttattttgc 20

<210> 286

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 286

cataagaatg tgcacacaaa 20

<210> 287

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 287

actcttatta gctggtagaa 20

<210> 288

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 288

ggaccaaaac tgagaggcag 20

<210> 289

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 289

ccattactct caagctccac 20

<210> 290

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 290

atctattggt tcaggagcca 20

<210> 291

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 291

gttaaaacaa ctagaagcca 20

<210> 292

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 292

aggtgttctt gcttatcctc 20

<210> 293

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 293

gcagtcactc ctcttccagc 20

<210> 294

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 294

aagtgtattg cctagatttc 20

<210> 295

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 295

gagtgccatc ttctctgcac 20

<210> 296

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 296

ttattcccag ctctaaaata 20

<210> 297

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 297

ctcacaattc tgtaagggaa 20

<210> 298

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 298

ataaaatata ttaaggcaac 20

<210> 299

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 299

ttgagtcaga catcctgtga 20

<210> 300

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 300

taccttttct ccatgtcatt 20

<210> 301

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 301

gggattttgc tgaagctggt 20

<210> 302

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 302

ctttgaatag aaaatgacta 20

<210> 303

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 303

caaaatcaca agttctagat 20

<210> 304

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 304

tttccaatac ttttacaaat 20

<210> 305

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 305

attaataagc atctctctga 20

<210> 306

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 306

tgactatcca atttctagtt 20

<210> 307

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 307

cttgtagtct gcacttaatg 20

<210> 308

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 308

acatttttta agtacaggaa 20

<210> 309

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 309

gaaatgtcta gcattttcta 20

<210> 310

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 310

ccacttattt gatgaccaca 20

<210> 311

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 311

tccagaatac tgccccatct 20

<210> 312

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 312

tggattcatt ttctgcaaat 20

<210> 313

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 313

agacattgtc aaatgtcccc 20

<210> 314

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 314

ttgatgtcag cactgttgac 20

<210> 315

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 315

acatcagtag cttcagatgt 20

<210> 316

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 316

caaaattaat tgtgcataat 20

<210> 317

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 317

tttttcttta aattttgcta 20

<210> 318

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 318

tagagatttt atgtacttgg 20

<210> 319

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 319

aaacacagga atttgcagac 20

<210> 320

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 320

gtggaataaa ccataatcta 20

<210> 321

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 321

gataattctt ttcacagaca 20

<210> 322

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 322

cttctctatc tcccagtgtt 20

<210> 323

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 323

caatacaggt aaatttcacg 20

<210> 324

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 324

aagggattta aaatttttat 20

<210> 325

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 325

ggcaagctgt acaagaaaaa 20

<210> 326

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 326

tgtactcacc ggtactctgc 20

<210> 327

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 327

aagagaatgc tcagaaatgg 20

<210> 328

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 328

acacttgtac cccatacatc 20

<210> 329

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 329

gacagtagag actgggaagg 20

<210> 330

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 330

taccaatttc tgaaagggca 20

<210> 331

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 331

cagagtaaac tccccatctc 20

<210> 332

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 332

cttcaaagcc agcagtgtaa 20

<210> 333

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 333

cttactgggc taaaatcaag 20

<210> 334

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 334

tatcactgta ctagtttcct 20

<210> 335

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 335

ctgtactagt ttcctataac 20

<210> 336

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 336

actgtactag tttcctataa 20

<210> 337

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 337

cactgtacta gtttcctata 20

<210> 338

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 338

tcactgtact agtttcctat 20

<210> 339

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 339

atcactgtac tagtttccta 20

<210> 340

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 340

gtggaatgtc atggcaattt 20

<210> 341

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 341

atgaacggtc ttcaagctgt 20

<210> 342

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 342

aatgaacggt cttcaagctg 20

<210> 343

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 343

aaaatgaacg gtcttcaagc 20

<210> 344

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 344

ttaaaaatga acggtcttca 20

<210> 345

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 345

cacttaaaaa tgaacggtct 20

<210> 346

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 346

tgagtctctt gtcacttaaa 20

<210> 347

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 347

gaggtgagtc tcttgtcact 20

<210> 348

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 348

ggaggtgagt ctcttgtcac 20

<210> 349

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 349

ttggaggtga gtctcttgtc 20

<210> 350

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 350

attgcttctt ggaggtgagt 20

<210> 351

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 351

caattgcttc ttggaggtga 20

<210> 352

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 352

cacaattgct tcttggaggt 20

<210> 353

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 353

acacaattgc ttcttggagg 20

<210> 354

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 354

aaacacaatt gcttcttgga 20

<210> 355

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 355

aaaacacaat tgcttcttgg 20

<210> 356

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 356

gaaaacacaa ttgcttcttg 20

<210> 357

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 357

ttgcttgaat aaaatcattc 20

<210> 358

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 358

gcttgcttga ataaaatcat 20

<210> 359

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 359

ttgcttgctt gaataaaatc 20

<210> 360

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 360

agttgcttgc ttgaataaaa 20

<210> 361

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 361

gaaataagtt gcttgcttga 20

<210> 362

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 362

aaatgaaata agttgcttgc 20

<210> 363

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 363

actgtagcaa acaaggaaat 20

<210> 364

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 364

ggaaactgta gcaaacaagg 20

<210> 365

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 365

cacaggaaac tgtagcaaac 20

<210> 366

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 366

agacatccac aggaaactgt 20

<210> 367

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 367

gtcagacatc cacaggaaac 20

<210> 368

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 368

tgagtcagac atccacagga 20

<210> 369

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 369

catagagttg agtcagacat 20

<210> 370

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 370

tcatagagtt gagtcagaca 20

<210> 371

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 371

ttcatagagt tgagtcagac 20

<210> 372

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 372

cgttttcata gagttgagtc 20

<210> 373

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 373

ccccacctct gaagaaggcg 20

<210> 374

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 374

catccccacc tctgaagaag 20

<210> 375

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 375

agctacatcc ccacctctga 20

<210> 376

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 376

ggaagctaca tccccacctc 20

<210> 377

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 377

atggaagcta catccccacc 20

<210> 378

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 378

tacatggaag ctacatcccc 20

<210> 379

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 379

gtacatggaa gctacatccc 20

<210> 380

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 380

gggtgtacat ggaagctaca 20

<210> 381

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 381

tggcagtatt gggcatttgg 20

<210> 382

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 382

catctggcag tattgggcat 20

<210> 383

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 383

ctcatctggc agtattgggc 20

<210> 384

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 384

cctcatctgg cagtattggg 20

<210> 385

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 385

acctcatctg gcagtattgg 20

<210> 386

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 386

tgcacctcat ctggcagtat 20

<210> 387

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 387

gaatgtgcac ctcatctggc 20

<210> 388

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 388

tggaatgtgc acctcatctg 20

<210> 389

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 389

gggtggaatg tgcacctcat 20

<210> 390

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 390

ttgggtggaa tgtgcacctc 20

<210> 391

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 391

cttgggtgga atgtgcacct 20

<210> 392

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 392

tagcaaacac cttgggtgga 20

<210> 393

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 393

actgaatagc aaacaccttg 20

<210> 394

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 394

aaactgaata gcaaacacct 20

<210> 395

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 395

acttgctgga agaaaactga 20

<210> 396

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 396

gaacttgctg gaagaaaact 20

<210> 397

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 397

tgattgaact tgctggaaga 20

<210> 398

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 398

cattgattga acttgctgga 20

<210> 399

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 399

tcattgattg aacttgctgg 20

<210> 400

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 400

tgtcattgat tgaacttgct 20

<210> 401

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 401

ccatgtcatt gattgaactt 20

<210> 402

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 402

ctccatgtca ttgattgaac 20

<210> 403

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 403

ttctccatgt cattgattga 20

<210> 404

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 404

cttttctcca tgtcattgat 20

<210> 405

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 405

accaaacctt ttctccatgt 20

<210> 406

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 406

gcaaccaaac cttttctcca 20

<210> 407

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 407

agcaaccaaa ccttttctcc 20

<210> 408

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 408

gaagcaacca aaccttttct 20

<210> 409

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 409

tcaagaagca accaaacctt 20

<210> 410

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 410

ctttcaagaa gcaaccaaac 20

<210> 411

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 411

atctttcaag aagcaaccaa 20

<210> 412

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 412

ctatctttca agaagcaacc 20

<210> 413

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 413

cactatcttt caagaagcaa 20

<210> 414

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 414

aacactatct ttcaagaagc 20

<210> 415

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 415

atgtactttt ggcagggttc 20

<210> 416

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 416

cgatgtactt ttggcagggt 20

<210> 417

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 417

gttcgatgta cttttggcag 20

<210> 418

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 418

cctgttcgat gtacttttgg 20

<210> 419

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 419

gcacctgttc gatgtacttt 20

<210> 420

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 420

ctgcacctgt tcgatgtact 20

<210> 421

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 421

aactgcacct gttcgatgta 20

<210> 422

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 422

gaaactgcac ctgttcgatg 20

<210> 423

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 423

cagaaactgc acctgttcga 20

<210> 424

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 424

ccagaaactg cacctgttcg 20

<210> 425

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 425

tgtccagaaa ctgcacctgt 20

<210> 426

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 426

gaatgtccag aaactgcacc 20

<210> 427

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 427

aggaatgtcc agaaactgca 20

<210> 428

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 428

tcaaggaatg tccagaaact 20

<210> 429

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 429

cttcaaggaa tgtccagaaa 20

<210> 430

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 430

ttgcttcaag gaatgtccag 20

<210> 431

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 431

cattgcttca aggaatgtcc 20

<210> 432

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 432

gaccacattg cttcaaggaa 20

<210> 433

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 433

tgaccacatt gcttcaagga 20

<210> 434

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 434

atgaccacat tgcttcaagg 20

<210> 435

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 435

ttgatgacca cattgcttca 20

<210> 436

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 436

atttgatgac cacattgctt 20

<210> 437

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 437

ttatttgatg accacattgc 20

<210> 438

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 438

cttatttgat gaccacattg 20

<210> 439

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 439

cacttatttg atgaccacat 20

<210> 440

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 440

agcacttatt tgatgaccac 20

<210> 441

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 441

caagcactta tttgatgacc 20

<210> 442

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 442

cgatggcaag cacttatttg 20

<210> 443

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 443

tgtctcgatg gcaagcactt 20

<210> 444

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 444

atgtctcgat ggcaagcact 20

<210> 445

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 445

aatgtctcga tggcaagcac 20

<210> 446

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 446

ttataaatgt ctcgatggca 20

<210> 447

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 447

tttataaatg tctcgatggc 20

<210> 448

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 448

ctcctttata aatgtctcga 20

<210> 449

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 449

aactccttta taaatgtctc 20

<210> 450

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 450

tcaactcctt tataaatgtc 20

<210> 451

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 451

tatcaactcc tttataaatg 20

<210> 452

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 452

ctctcatatc aactccttta 20

<210> 453

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 453

ctcctctcat atcaactcct 20

<210> 454

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 454

gactcctctc atatcaactc 20

<210> 455

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 455

aattgactcc tctcatatca 20

<210> 456

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 456

attaaaattg actcctctca 20

<210> 457

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 457

cattaaaatt gactcctctc 20

<210> 458

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 458

cacattaaaa ttgactcctc 20

<210> 459

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 459

gacacattaa aattgactcc 20

<210> 460

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 460

agacacatta aaattgactc 20

<210> 461

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 461

accttagaca cattaaaatt 20

<210> 462

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 462

gctaacctta gacacattaa 20

<210> 463

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 463

actgctaacc ttagacacat 20

<210> 464

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 464

cactgctaac cttagacaca 20

<210> 465

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 465

acactgctaa ccttagacac 20

<210> 466

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 466

cttcaacact gctaacctta 20

<210> 467

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 467

tcttcaacac tgctaacctt 20

<210> 468

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 468

ggcattcttc aacactgcta 20

<210> 469

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 469

tggcattctt caacactgct 20

<210> 470

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 470

tttggcattc ttcaacactg 20

<210> 471

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 471

aaaactggca gcgaatgtta 20

<210> 472

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 472

ccggtactct gccttgtgaa 20

<210> 473

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 473

attgttccgg tactctgcct 20

<210> 474

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 474

aattgttccg gtactctgcc 20

<210> 475

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 475

caattgttcc ggtactctgc 20

<210> 476

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 476

aataggcaat tgttccggta 20

<210> 477

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 477

taataggcaa ttgttccggt 20

<210> 478

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 478

ctttaatagg caattgttcc 20

<210> 479

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 479

gtactttaat aggcaattgt 20

<210> 480

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 480

cgggactgta ctttaatagg 20

<210> 481

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 481

cgttactcag cacctttata 20

<210> 482

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 482

gcttcagtga gaatccagat 20

<210> 483

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 483

ccaatttctg aaagggcaca 20

<210> 484

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 484

aaccaatttc tgaaagggca 20

<210> 485

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 485

gcaaccaatt tctgaaaggg 20

<210> 486

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 486

ggcaaccaat ttctgaaagg 20

<210> 487

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 487

agatgctgga agatgttcat 20

<210> 488

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 488

caacatccac atctgagaac 20

<210> 489

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 489

ggcaacatcc acatctgaga 20

<210> 490

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 490

ccctggcaac atccacatct 20

<210> 491

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 491

gaaccctggc aacatccaca 20

<210> 492

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 492

gagaaccctg gcaacatcca 20

<210> 493

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 493

tgagaaccct ggcaacatcc 20

<210> 494

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 494

ggagtgagaa ccctggcaac 20

<210> 495

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 495

ctggagtgag aaccctggca 20

<210> 496

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 496

atctggagtg agaaccctgg 20

<210> 497

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 497

gcatctggag tgagaaccct 20

<210> 498

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 498

aagcatctgg agtgagaacc 20

<210> 499

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 499

caaaagcatc tggagtgaga 20

<210> 500

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 500

cacaaaagca tctggagtga 20

<210> 501

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 501

tggtccgaca cacaaaagca 20

<210> 502

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 502

atggtccgac acacaaaagc 20

<210> 503

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 503

gatggtccga cacacaaaag 20

<210> 504

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 504

gcagatggtc cgacacacaa 20

<210> 505

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 505

taggtgcaga tggtccgaca 20

<210> 506

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 506

gataggtgca gatggtccga 20

<210> 507

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 507

gtgataggtg cagatggtcc 20

<210> 508

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 508

gggtgatagg tgcagatggt 20

<210> 509

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 509

gaatgtaaag aagaggcagt 20

<210> 510

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 510

tagaatgtaa agaagaggca 20

<210> 511

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 511

catttgtata gaatgtaaag 20

<210> 512

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 512

tacatttgta tagaatgtaa 20

<210> 513

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 513

ccatacattt gtatagaatg 20

<210> 514

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 514

ctcgattttc catacatttg 20

<210> 515

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 515

tgactcgatt ttccatacat 20

<210> 516

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 516

gtgactcgat tttccataca 20

<210> 517

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 517

tgtgactcga ttttccatac 20

<210> 518

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 518

ctttgtgact cgattttcca 20

<210> 519

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 519

ttctttgtga ctcgattttc 20

<210> 520

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 520

acatttcttt gtgactcgat 20

<210> 521

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 521

aaacatttct ttgtgactcg 20

<210> 522

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 522

tgtgccactt tcagatgttt 20

<210> 523

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 523

gtgtgccact ttcagatgtt 20

<210> 524

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 524

cttggtgtgc cactttcaga 20

<210> 525

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 525

acttggtgtg ccactttcag 20

<210> 526

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 526

aggaacttgg tgtgccactt 20

<210> 527

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 527

tggtgttttc ttgaggagta 20

<210> 528

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 528

atggtgtttt cttgaggagt 20

<210> 529

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 529

tatggtgttt tcttgaggag 20

<210> 530

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 530

cagatatggt gttttcttga 20

<210> 531

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 531

ccagatatgg tgttttcttg 20

<210> 532

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 532

atccagatat ggtgttttct 20

<210> 533

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 533

atatccagat atggtgtttt 20

<210> 534

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 534

ggctatatcc agatatggtg 20

<210> 535

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 535

aaggctatat ccagatatgg 20

<210> 536

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 536

gttaaaaggc tatatccaga 20

<210> 537

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 537

caggttaaaa ggctatatcc 20

<210> 538

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 538

tgcaggttaa aaggctatat 20

<210> 539

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 539

tttgcaggtt aaaaggctat 20

<210> 540

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 540

cttttgcagg ttaaaaggct 20

<210> 541

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 541

gttcttttgc aggttaaaag 20

<210> 542

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 542

aagttctttt gcaggttaaa 20

<210> 543

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 543

gtaaagttct tttgcaggtt 20

<210> 544

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 544

caggtaaagt tcttttgcag 20

<210> 545

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 545

tcaggtaaag ttcttttgca 20

<210> 546

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 546

gttcaggtaa agttcttttg 20

<210> 547

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 547

gggttcaggt aaagttcttt 20

<210> 548

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 548

cagggttcag gtaaagttct 20

<210> 549

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 549

gcagggttca ggtaaagttc 20

<210> 550

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 550

tggcagggtt caggtaaagt 20

<210> 551

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 551

gaatggcagg gttcaggtaa 20

<210> 552

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 552

agaatggcag ggttcaggta 20

<210> 553

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 553

tttagaatgg cagggttcag 20

<210> 554

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 554

attttagaat ggcagggttc 20

<210> 555

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 555

taaattttag aatggcaggg 20

<210> 556

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 556

agtcaactcc cgggtaaatt 20

<210> 557

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 557

caaagtcaac tcccgggtaa 20

<210> 558

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 558

ccaaagtcaa ctcccgggta 20

<210> 559

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 559

cctccaaagt caactcccgg 20

<210> 560

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 560

ctcctccaaa gtcaactccc 20

<210> 561

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 561

cttctcctcc aaagtcaact 20

<210> 562

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 562

ttcaattctt ctcctccaaa 20

<210> 563

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 563

cattcaattc ttctcctcca 20

<210> 564

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 564

tcacattcaa ttcttctcct 20

<210> 565

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 565

agtcacattc aattcttctc 20

<210> 566

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 566

ggcaaacatt cactccttta 20

<210> 567

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 567

tcttggcaaa cattcactcc 20

<210> 568

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 568

gtctcttggc aaacattcac 20

<210> 569

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 569

caagtctctt ggcaaacatt 20

<210> 570

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 570

tgcaagtctc ttggcaaaca 20

<210> 571

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 571

ctttgtgcaa gtctcttggc 20

<210> 572

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 572

catctttgtg caagtctctt 20

<210> 573

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 573

tcatctttgt gcaagtctct 20

<210> 574

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 574

atcatctttg tgcaagtctc 20

<210> 575

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 575

acagcgaatc atctttgtgc 20

<210> 576

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 576

actgacagcg aatcatcttt 20

<210> 577

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 577

gaaaaactga cagcgaatca 20

<210> 578

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 578

gtgaaaaact gacagcgaat 20

<210> 579

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 579

ggagtaaaga ataagtgaaa 20

<210> 580

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 580

tgggagtaaa gaataagtga 20

<210> 581

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 581

tctgggagta aagaataagt 20

<210> 582

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 582

gtcttctggg agtaaagaat 20

<210> 583

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 583

acagtcttct gggagtaaag 20

<210> 584

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 584

cttacagtct tctgggagta 20

<210> 585

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 585

ccttacagtc ttctgggagt 20

<210> 586

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 586

tccttacagt cttctgggag 20

<210> 587

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 587

cttccttaca gtcttctggg 20

<210> 588

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 588

cacttacact tctcttcctt 20

<210> 589

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 589

acacttacac ttctcttcct 20

<210> 590

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 590

agaaacactt acacttctct 20

<210> 591

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 591

cttaagaaac acttacactt 20

<210> 592

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 592

ccatagataa tcttaagaaa 20

<210> 593

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 593

catccataga taatcttaag 20

<210> 594

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 594

accatccata gataatctta 20

<210> 595

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 595

gaaccatcca tagataatct 20

<210> 596

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 596

tggagaacca tccatagata 20

<210> 597

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 597

tgtgtcccat acgcaatcct 20

<210> 598

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 598

cccttgtgtc ccatacgcaa 20

<210> 599

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 599

gctcccttgt gtcccatacg 20

<210> 600

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 600

agagctccct tgtgtcccat 20

<210> 601

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 601

ccagagctcc cttgtgtccc 20

<210> 602

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 602

taaccagagc tcccttgtgt 20

<210> 603

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 603

gtaaccagag ctcccttgtg 20

<210> 604

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 604

gagtaaccag agctcccttg 20

<210> 605

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 605

aagagtaacc agagctccct 20

<210> 606

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 606

tcaaagagta accagagctc 20

<210> 607

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 607

tctcaaagag taaccagagc 20

<210> 608

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 608

aatctcaaag agtaaccaga 20

<210> 609

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 609

caatctcaaa gagtaaccag 20

<210> 610

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 610

cacaatctca aagagtaacc 20

<210> 611

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 611

gttacacaat ctcaaagagt 20

<210> 612

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 612

cagtgttaca caatctcaaa 20

<210> 613

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 613

cccagtgtta cacaatctca 20

<210> 614

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 614

gtccccagtg ttacacaatc 20

<210> 615

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 615

gttgtcccca gtgttacaca 20

<210> 616

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 616

gtttgttcct ccaacaatgc 20

<210> 617

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 617

agagtttgtt cctccaacaa 20

<210> 618

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 618

caagaagagt ttgttcctcc 20

<210> 619

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 619

ccccaagaag agtttgttcc 20

<210> 620

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 620

ctccccaaga agagtttgtt 20

<210> 621

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 621

ctctccccaa gaagagtttg 20

<210> 622

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 622

gggccactct ccccaagaag 20

<210> 623

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 623

cagggccact ctccccaaga 20

<210> 624

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 624

tctgagctgt cagcttcacc 20

<210> 625

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 625

gcctctgagc tgtcagcttc 20

<210> 626

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 626

tcctatgagt gaccctccac 20

<210> 627

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Синтетический олигонуклеотид

<400> 627

gtcctatgag tgaccctcca 20

<210> 628

<2