Оральная противопаразитарная композиция

Группа изобретений относится к области фармации, в частности к противопаразитарным пероральным композициям для лечения животных. Композиция содержит комбинацию, состоящую из эфирного масла, содержащего гамма-терпинен, корвакрол и тимол, выбранного из рода Origanum и рода Thymus, и эфирного масла, выбранного из рода Cinnamomum и Eugenia, или эфирного масла рода Cinnamomum и эфирного масла рода Eugenia. Также раскрыта противопаразитарная пероральная композиция, содержащая источник сапонина и комбинацию, состоящую из эфирного масла, содержащего гамма-терпинен, корвакрол и тимол, выбранного из рода Origanum и рода Thymus, и эфирного масла, выбранного из рода Cinnamomum и Eugenia, или эфирного масла рода Cinnamomum и эфирного масла рода Eugenia. Также раскрыт способ получения вышеуказанной композиции, включающий смешивание вместе всех ингредиентов. Группа изобретения обеспечивает получение композиций, которые являются эффективными для снижения паразитарной инфекции у животных. 3 н. и 12 з.п. ф-лы, 5 ил., 2 табл., 3 пр.

 

Настоящее изобретение относится к композиции для применения в качестве перорального противопаразитарного средства, причем композиция включает одно или более эфирных масел, которое содержит гамма-терпинен, и/или карвакрол, и/или тимол, и/или терпиненол, и/или эвкалиптол и/или эвгенол, эфирное масло рода Cinnamomum, Eugenia, Eucalyptus или источник сапонина. Изобретение также относится к способу профилактики и лечения паразитарной инфекции у животного, причем способ включает введение пероральным путем указанному животному композиции, включающей одно или более эфирных масел, которое содержит гамма-терпинен, и/или карвакрол, и/или тимол, и/или терпиненол, и/или эвкалиптол и/или эвгенол, эфирное масло рода Cinnamomum, Eugenia, Eucalyptus или источник сапонина.

Паразитарная инфекция может поражать всех животные. В частности, собаки и кошки являются основными хозяевами для паразитов, по меньшей мере 80% собак и кошек заражаются видом эндопаразита. При размножении в окружающих средах от 20 до 30% собак и кошек особенно подвержены воздействию некоторых внутренних паразитов, таких как кокцидианы. Паразитарная инфекция может вызывать симптомы, такие как гельминтная инфекция, боль в области живота, кишечные непроходимости, диарея и рвота, приводящие в результате к обезвоживанию, проблемам со сном, анемии, болям в мышцах или суставах, аллергиям и/или утомлению. Особенно, кошки и собаки являются хозяевами для многих паразитов и таким образом плотный контакт может приводить к повышенным рискам паразитарной инфекции для людей (зооноз).

Растительные экстракты использованы в комбинации с химическими лекарственными средствами, в частности, для применения на коже животных в виде пятна противопаразитарных лекарственных средств, например, ЕР0116401. Проблема данных способов с применением пятна состоит в том, что кожа животного становится раздраженной и может повреждаться.

Таким образом, существует потребность в разработке дополнительных альтернативных лекарственных средств и/или кормовых продуктов для животных, чтобы снижать паразитарную инфекцию, в частности, эндопаразитов у собак и/или кошек для уменьшения дальнейших возрастающих опасностей от зооноза.

Настоящее изобретение относится к композиции, которая адресована данной потребности.

Настоящее изобретение относится к композиции, включающей одно или более эфирных масел, которое содержит гамма-терпинен, и/или карвакрол, и/или тимол, и/или терпиненол, и/или эвкалиптол и/или эвгенол, эфирное масло рода Cinnamomum, Eugenia, Eucalyptus или источник сапонина для использования животными пероральным путем в качестве противопаразитарного средства. Композиция настоящего изобретения показала, что является эффективной для снижения паразитарной инфекции у животных.

Кроме того, композиция изобретения показала благоприятный эффект при включении двух или более эфирных масел с содержанием гамма-терпинена, и/или карвакрола, и/или тимола, и/или терпиненола, и/или эвкалиптола и/или эвгенола, эфирного масло рода Cinnamomum, Eugenia, Eucalyptus или источника сапонина. Данный эффект может быть синергетическим.

Настоящее изобретение относится, по всем аспектам, к любому животному, включая человека. В частности, настоящее изобретение относится к домашнему животному, а именно, к собаке или кошке.

Первый аспект данного изобретения относится к композиции для применения в качестве орального противопаразитарного средства, причем композиция включает одно или более эфирных масел, которое содержит гамма-терпинен, и/или карвакрол, и/или тимол, и/или терпиненол, и/или эвкалиптол и/или эвгенол, эфирное масло рода Cinnamomum, Eugenia, Eucalyptus или источник сапонина.

Применение в качестве противопаразитарного средства заключается в лечении и/или профилактике симптомов паразитарной инфекции. Лечение заключается в уменьшении интенсивности симптомов паразитарной инфекции.

Композиция настоящего изобретения может быть применена против паразитов, в частности относящихся к типу Apicomplexa. Apicomplexa представляет собой большую группу протистов. Данная группа протистов включает организмы, классифицированные как кокцидиан, грегарины, пироплазмы, гемогрегарины и плазмодии. Предпочтительно, паразит является представителем класса Conoidasida.

Композиция изобретения может быть применена против паразитов из класса Conoidasida. Conoidasida включает два подкласса: кокцидии или грегаринии. Предпочтительно, паразит является представителем подкласса кокцидии.

Композиция настоящего изобретения может быть использована для лечения кокцидоза. Предпочтительно, композиция лечит паразитарную инфекцию от паразитов рода Isospora, Neospora или Toxoplasma. Наиболее предпочтительно, композиция настоящего изобретения может лечить кокцидоз от видов паразитов Neospora сaninum или Toxoplasma gondii.

Композиция настоящего изобретения включает одно или более эфирных масел, которое содержит гамма-терпинен.

Терпинены представляют собой группу изомерных углеводородов, классифицированных как терпены, которые находятся в естественных условиях в растениях и цветах. Терпинены имеют молекулярную формулу С₁₀Н₁₆ и отличаются один от другого положением углеродных двойных связей. Терпинены включают (α) альфа-терпинен, (β) бета-терпинен, (γ) гамма-терпинен или (δ) дельта-терпинен, в частности, гамма-терпинен.

Эфирные масла представляют собой летучую смесь сложных эфиров, альдегидов, кетонов, терпенов, монотерпенов, сесквитерпенов, фенолов и оксидов, которые могут быть получены из любых частей растения. Способы экстракции эфирных масел из растений, например, дистилляция или экстракция растворителем, хорошо известны в данной области.

Эфирные масла могут быть экстрагированы из любых частей растений, таких как листья, цветы, стебли, кора, семена или корни. Предпочтительно, эфирное масло экстрагируют из листьев.

Эфирные масла, содержащие гамма-терпинен, и/или карвакрол, и/или тимол, и/или терпиненол, и/или эвкалиптол и/или эвгенол, включают представителей из рода Satureja, Thymus, Trachyspermum, Origanum или Melaleuca. Соединения также могут быть синтетическими или выделенными из природных источников. Может быть также использована смесь соединений из природных и синтетических источников.

В частности, масло из зимнего чабера может быть получено из листьев Satureja montana, масло из тимьяна может быть получено из листьев Thymus vulgaris или Thymus zygis, масло душицы может быть получено из листьев Origanum vulgare.

Эфирное масло, содержащее гамма-терпинен, может быть получено из любого представителя рода Satureja, Thymus, Trachyspermum, Origanum или Melaleuca.

Композиция настоящего изобретения содержит одно или более эфирное масло рода Cinnamomum, Eugenia, Eucalyptus.

Эфирное масло рода Cinnamomum может быть коричным. Эфирное масло рода Eugenia может быть гвоздичным. Эфирное масло рода Eucalyptus может быть эвкалиптовым. Предпочтительно, эфирное масло является коричным.

Корица представляет собой специю, которую получают из внутренней коры деревьев Сinnamomum. Корица содержится в Сinnamomum verum, Сinnamomum burmanii, Сinnamomum loureuros или Сinnamomum cassia. Предпочтительно, коричное масло экстрагируют из Сinnamomum cassia (также называемой коричником). Наиболее предпочтительно, коричное масло экстрагируют из листьев Сinnamomum cassia.

Гвоздика представляет собой специю, которую получают из цветочных почек дерева семейства Myrtaceae. В частности, гвоздичное масло экстрагируют из цветочных почек Syzygium aromaticum. Предпочтительно, гвоздика представляет собой Eugenia caryophyllus.

Эвкалипт относится к роду цветущих деревьев и кустарников семейства Myrtaceae с более чем 700 видами. В частности, эвкалиптовое масло экстрагируют из Eucalyptus globulus. Предпочтительно, эвкалиптовое масло экстрагируют из листьев Eucalyptus globulus.

Сапонины представляют собой соединения, найденные в природе в разных растениях, и также могут быть найдены в морских организмах. Сапонины могут находиться в ботанических семействах Quillajaceae, Caryophyllaceae, Sapindaceae, Aceraceae, Hippocastanceae, Cucurbitancеae, Araliaceae или Asparagaceae.

Предпочтительно, источник сапонина получают из видов семейства Asparagaceae. В частности, источник сапонина получают от видов рода Yucca. Наиболее предпочтительно, источник сапонина получают от видов Yucca schidigera.

Источник сапонина может находиться в разных частях растения, таких как: листья, стебли, корни, почки, биосомы и плоды. Способы экстракции источника сапонина из растений известны.

Сапонины представляют собой амфипатические гликозиды, содержащие одну или несколько групп гидрофильных гликозидов, соединенных с тритерпеновым производным. Число присоединенных сахаридных цепей может меняться по длине от 1 до 11, предпочтительно от 2 до 5. Сахаридные цепи могут быть линейными или разветвленными.

Источник сапонина может быть стероидным.

Предпочтительно, сапонин представляет собой стероидный сапогенин, подобный диосгенину, сарсапогенину, смилагенину, тигоненину, гекогенину, 9-дегидрогекогенину, гитогенину, хлорогенину, юккагенину, самогенину, маногенину, 9-дегидроманогенину или каммогенину.

Предпочтительная композиция содержит одно или более эфирных масел корицы, гвоздики или эвкалипта. Предпочтительно, композиция содержит душицу в качестве источника эфирного масла, содержащего гамма-терпинен. Наиболее предпочтительно, композиция содержит эфирные масла душицы и корицы или душицы и гвоздики.

Композиция данного изобретения представляет собой любую композицию, которую животное может потреблять или может потреблять в качестве части диеты.

Композиция может быть жидкостью, таблеткой или кормовым продуктом. Предпочтительно, композиция может быть кормовым продуктом. Она может быть любым кормовым продуктом, таким как сухой продукт, полувлажный продукт, влажный кормовой продукт или жидкость и включает дополнение к пище, легкую закуску или угощение. Таким образом, данное изобретение охватывает стандартные пищевые продукты, включающие жидкости, а также любимые пищевые лакомства (например, закусочные батончики, любимый жевательный продукт, хрустящее лакомство, зерновые батончики, закуски, печенье и сладкие продукты) и добавки.

Композиция может быть включена в желатинированную крахмальную матрицу, или в любые сухие или влажные кормовые продукты или добавки. Способы включения известны в данной области.

Кормовой продукт предпочтительно является коммерческим продуктом для домашних животных. Такой продукт продают предпочтительно как продукт для кормления/введения домашнему животному, в частности, для домашней кошки или домашней собаки.

Обычный сухой кормовой продукт для домашнего животного содержит приблизительно 10-40% сырого белка и приблизительно 5-40% жира, остаток, являющийся углеводом, содержащим клетчатку и золу. Обычный увлажненный или мокрый продукт содержит (в расчете на сухое вещество) приблизительно 40% жира, 50% белка и остаток, являющийся клетчаткой и золой. Кормовой продукт данного изобретения может быть сухим продуктом (приблизительно с 5 до приблизительно 15% влажности), полувлажным продуктом (приблизительно с 15 до приблизительно 70% влажности) или влажным продуктом (приблизительно с 70 до приблизительно 90% влажности) (приблизительно с 15 до приблизительно 70% влажности). Кормовой продукт изобретения изготавливают предпочтительно в виде как сухого продукта, содержащего от приблизительно 5% до приблизительно 15% влажности. Предпочтительный сухой продукт предпочтительно присутствует в виде мелкого печенья - подобного муке крупного помола.

Остальные компоненты кормового продукта являются несущественными для изобретения и могут включать обычные стандартные продукты. Комбинированные ингредиенты кормового продукта согласно изобретению могут обеспечить все рекомендуемые витамины и минералы для конкретного исследуемого животного (полный и сбалансированный корм).

Кормовой продукт может быть снабжен пищевой добавкой. Пищевая добавка может представлять собой порошок, соус, ботву корнеплодов, печенье, муку крупного помола, пакетик или таблетку, которые могут быть введены с дополнительным кормовым продуктом или без него. В случае, где пищевую добавку вводят с дополнительным кормовым продуктом или без него, пищевая добавка может быть введена последовательно, одновременно или раздельно. Пищевая добавка может быть смешана с кормовым продуктом, разбрызгана на кормовом продукте или подана отдельно. В альтернативном случае, пищевая добавка может быть добавлена в жидкость, предназначенную для питья, а именно, в воду или молоко.

Кормовой продукт представляет собой предпочтительно продукт, прошедший тепловую обработку. Он может включать мясо или продукт, полученный от животного (а именно, говядину, курятину, индюшатину, баранину, рыбу, плазму крови, мозговую кость и т.д. или один или несколько из них). Продукт в альтернативном случае может быть свободен от мяса (предпочтительно включает заместитель мяса, такой как соя, клейковина кукурузы или соевый продукт) для обеспечения источника белка. Кормовой продукт может содержать дополнительные белковые источники, а именно, соевый белковый концентрат, белки молока, клейковину и т.д. Кормовой продукт также может содержать источник крахмала, а именно, одно или несколько зерен (напр., пшеницы, кукурузы, риса, видов овса, ячменя и т.д.) или может быть без крахмала.

Кормовой продукт изобретения может быть использован сам по себе или в комбинации с полным и сбалансированным кормом, который предоставляет все рекомендованные витамины и минералы для собаки в исследованиях, например, описанных в National Research Council, 1985, Nutritional Requirements for Dogs, National Academy Press, Washington DC (ISBN: 0-309-03498-5); или Association of American Feed Control Officials, Official Publication 1996.

Эти величины применяются к композиции для кормления животного, в частности, домашнего животного, такого как собака или кошка.

Общее количество эфирного масла/сапонина составляет от 0,01 до 1000 мг/кг (ч/млн) кормового продукта (твердое вещество или жидкость).

Количество эфирного масла/сапонина или любой их комбинации в кормовом продукте (продаваемой жидкости) может находиться в интервале от 0,01 до 500 мг/кг (ч/млн), от 0,01 до 100 мг/кг (ч/млн), от 0,01 до 50 мг/кг (ч/млн), от 0,01 до 1 мг/кг (ч/млн), от 100 до 1000 мг/кг (ч/млн), от 100 до 500 мг/кг (ч/млн), от 50 до 100 мг/кг (ч/млн), или до 50 мг/кг (ч/млн).

Второй аспект данного изобретения относится к способу профилактики или лечения паразитарной инфекции у животного.

Показано, что композиция изобретения обеспечивает, между прочим, снижение паразитарной инфекции и пролиферации in vitro. Композиция изобретения предотвращает и/или лечит паразитарную инфекцию у животных, включая профилактику зооноза и профилактику и/или лечение в окружающей среде конуры для щенной суки.

В частности, желательно для производителей кормового продукта для домашнего животного и для здоровья домашних питомцев предоставления кормового продукта, включающего добавки, подходящие для поддержания здоровья домашних питомцев. В особенности, она желательна для обеспечения диеты, подходящей для повышения или сохранения здоровья уже жизнеспособных животных-компаньонов в качестве профилактических диет.

В особенности, второй аспект изобретения относится к способу профилактики и/или лечения паразитарной инфекции у животного, причем способ включает снижение симптомов паразитарной инфекции. Способ представляет собой введение указанному животному композиции, которая включает одно или более эфирное масло, которое содержит гамма-терпинен, и/или карвакрол, и/или тимол, и/или терпиненол, и/или эвкалиптол и/или эвгенол, эфирное масло рода Cinnamomum, Eugenia, Eucalyptus или источник сапонина. Животное может испытывать потребность в них.

Настоящее изобретение относится, по всем аспектам, к любому животному с включением человека. В частности, настоящее изобретение относится к домашним питомцам, таким как собака, кошка или любое другое такое животное, которое страдает или склонно к заражению паразитарной инфекцией. Так как значительное число собак и/или кошек являются хозяевами для паразитов, поэтому они легко склонны к паразитарной инфекции.

В частных вариантах осуществления изобретения, данный способ включает введение указанному животному композиции, содержащей одно или более эфирных масел, которые содержат гамма-терпинен, и/или карвакрол, и/или тимол, и/или терпиненол, и/или эвкалиптол и/или эвгенол, эфирное масло рода Cinnamomum, Eugenia, Eucalyptus или источник сапонина. Композиция может включать одно или более эфирных масел, содержащих гамма-терпинен, и/или карвакрол, и/или тимол, и/или терпиненол, и/или эвкалиптол и/или эвгенол с включением рода Cinnamomum, Eugenia, Eucalyptus или источника сапонина. Композиция может включать одно или более эфирных масел, содержащих гамма-терпинен, и/или карвакрол, и/или тимол, и/или терпиненол, и/или эвкалиптол и/или эвгенол, включая род Satureja, Thymus, Trachyspermum, Origanum или Melaleuca и одно или более эфирное масло корицы, гвоздики или эвкалипта. Предпочтительно, композиция включает душицу в качестве эфирного масла, содержащего гамма-терпинен и карвакрол. Наиболее предпочтительно, данная композиция включает эфирные масла душицы и корицы или душицы и гвоздики.

Далее, способ предпочтительно направлен на животное, в особенности, на домашнее животное, а именно, на собаку и/или кошку, которая страдает от паразитарной инфекции и нуждается в снижении симптомов паразитарной инфекции или в необходимости предотвращения дополнительных симптомов паразитарной инфекции. Это может быть, например, юное домашнее животное, такое как щенок, или более взрослое домашнее животное. В случае, где композиция является кормовым продуктом, данный кормовой продукт может быть введен в режим диеты в соответствии с обычным диетическим режимом домашнего животного. Кормовой продукт может составлять 100% диеты домашнего животного или быть в меньшей пропорции в зависимости от уровня профилактики или требуемого лечения. Кормовой продукт легко вводится в композицию, таким образом, устраняется потребность в добавке к пище домашнего животного. Кроме того, кормовой продукт может быть введен владельцем животного, таким образом, устраняется постоянный ветеринарный контроль. Кормовой продукт может быть доступен на любом рынке, продающем пищевые продукты для домашних животных или может быть доступен от ветеринара или животновода.

Как использован в данной работе, термин “введение” также включает потребление с пищей или любой другой способ перорального введения. Другие способы введения могут включать таблетки, капсулы, инъекцию, суппозитории или любые другие подходящие способы.

Характерные черты первого аспекта изобретения применяются в отношении второго аспекта изобретения с учетом соответствующих различий.

Третий аспект изобретения относится к композиции, содержащей два или более из следующих эфирных масел из рода Cinnamomum, Eugenia, Satureja, Thymus, Trachyspermum, Origanum или Melaleuca.

Предпочтительно, композиция содержит эфирное масло, выделенное из зимнего чабера, тимьяна, душицы, или масло чайного куста и эфирное масло, выделенное из корицы, гвоздики или эвкалипта. Предпочтительно, композиция содержит душицу. Наиболее предпочтительно, композиция одержит эфирные масла душицы и корицы и душицы и гвоздики.

Характерные черты первого и второго аспекта изобретения применяются в отношении третьего аспекта изобретения с учетом соответствующих различий.

Четвертый аспект изобретения относится к композиции, включающей источник сапонина и одно или более эфирных масел, которые содержит гамма-терпинен, и/или карвакрол, и/или тимол, и/или терпиненол, и/или эвкалиптол и/или эвгенол, или эфирное масло из рода Cinnamomum, Eugenia, или Eucalyptus.

Предпочтительно, композиция может включать одно или более эфирных масел, содержащих гамма-терпинен, и одно или более эфирных масел корицы, гвоздики или эвкалипта. Предпочтительно, композиция содержит душицу в качестве источника эфирного масла, содержащего гамма-терпен. Наиболее предпочтительно, композиция содержит эфирные масла душицы и корицы или душицы и гвоздики.

Характерные черты первого, второго и третьего аспектов изобретения применяются в отношении четвертого аспекта изобретения с учетом соответствующих различий.

Настоящее описание включает способ получения композиции изобретения.

Композиция может содержать подходящие носители, которые известны в данной области, например, диоксид кремния, мальтодекстрин, аравийскую камедь или алюмосиликатные минералы. Композиция может быть включена в желатинированную крахмальную матрицу.

Композицию можно наносить опрыскиванием на кормовой продукт, смешивать с кормовым продуктом или включать в состав кормового продукта в желатинированной крахмальной матрице. Способы включения композиции известны в данной области.

Настоящее изобретение относится к способу получения кормового продукта изобретения.

Кормовой продукт может быть изготовлен по любому способу, известному в данной области, такому как в издании Waltham Book of Dog and Cat Nutrition, Ed. ATB Edney, глава A. Rainbird, озаглавленная как “Сбалансированная диета” на страницах 57-74 Pergamon Press Oxford.

Например, способ изготовления кормового продукта, как определено в настоящем изобретении, состоит в смешивании ингредиентов вместе с композицией, которая содержит одно или более эфирных масел, которые содержат гамма-терпинен, эфирное масло корицы, гвоздики, эвкалипта или источник сапонина, и при этом образуется кормовой продукт, в частности, кормовой продукт для домашнего животного. Нагревание/варка могут быть применены к любому одному или нескольким ингредиентам до, в течение или последующего смешивания.

Важность настоящего изобретения состоит в полезных свойствах одного или нескольких эфирных масел и/или источника сапонина. В частности, может наблюдаться эффект, больший чем кумулятивный.

Комбинация эфирных масел и/или источника сапонина в композиции настоящего изобретения может давать синергетический эффект в виде одного или нескольких влияний на снижение паразитарной инфекции и/или пролиферации, профилактику паразитарной инфекции и/или пролиферации, снижение рисков зооноза и лечение паразитарной инфекции, в частности, кокцидоза.

Видна дополнительная польза, когда эфирное масло с содержанием гамма-терпинена и эфирное масло корицы, гвоздики или эвкалипта объединены в композиции. В частности, когда эфирное масло, содержащее гамма-терпинен, является маслом зимнего чабера, тимьяна, душицы или чайного куста и второе эфирное масло является коричным, гвоздичным или эвкалиптовым. Предпочтительно, композиция содержит душицу. Наиболее предпочтительно, композиция включает эфирные масла душицы и корицы или душицы и гвоздики.

Данное изобретение будет дополнительно описано ниже посредством следующих примеров и фигур, которые даны только с целью иллюстрации и не должны восприниматься как ограничивающие для изобретения.

Фигура 1 показывает 7 растворов эфирных масел и источник использованного сапонина. Каждый раствор помечен от А до Н.

Фигура 2А показывает схематическую диаграмму соответствующего протокола пролиферации. Фигура 2В показывает флуоресцентную микроскопию клеток HFF, зараженных различными паразитическими инокулятами Toxoplasma gondii.

Фигура 3 показывает результаты теста по ингибированию пролиферации паразита Neospora canicum в присутствии различных эфирных масел при разных концентрациях. Сводка результатов и ИК50(IC50) представлены в таблице 1.

Фигура 4 показывает сравнительные результаты по ИК50 для 7 эфирных масел (душица (Е), тестированная при 50 ч/млн и 100 ч/млн) и по жизнеспособности клеток.

Фигура 5 показывает результаты от теста по ингибированию пролиферации Toxoplasma gondii c коктейлем эфирных масел FB (душица и гвоздика).

Примеры

Исследование направлено на определение противопаразитарной активности семи эфирных масел на внутриклеточном микроорганизме Neospora canicum, но также комбинаций данных лекарственных средств на Toxoplasma gondii. Работа фокусировалась на способности пролиферации паразита в присутствии данных растворов, содержащих эфирные масла, и инвазии после предварительной обработки.

Тестировали семь растворов эфирных масел и один раствор с источником сапонина (см. фигуру 1: от А до Н).

Для того чтобы солюбилизировать эфирные масла, масла разбавляли в диметилсульфоксиде (ДМСО) и затем распределяли в клеточной культуральной среде (DMEM), которую дополняли 10% фетальной телячьей сывороткой (D10). ДМСО также применяли в конечной концентрации, не превышающей 0,1%.

Отдельные культуры обоих паразитов, Toxoplasma gondii и Neospora canicum, готовили in vitro в клетах человека типа HFF (кожные фибробласты человека), выращивали при 37°С под 5% СО₂ в среде D10. Обе культуры были подобными, инокуляты, используемые для разных тестов, были теми же самыми, 105 паразитов на лунку. Обнаружено, что рост Neospora canicum является более медленным чем рост Toxoplasma gondii.

Пример 1: Оценка пролиферации паразита Neospora canicum в присутствии эфирных масел

Пролиферацию паразитов в клетках измеряли подсчетом специфической радиоактивности введенного тритированного урацила и сравнивали с контролем без эфирного масла (100% пролиферация). Тест проводят в 24-луночных планшетах и полный тест длится приблизительно 24 часа. Положительный контроль достигают с помощью применения пириметамина (ИК50: 0,1 мкг/мл). Фигура 3 показывает ИК50 раствора каждого эфирного масла, испытанного в разных концентрациях в присутствии Neospora canicum.

Таблица 1 (ниже) суммирует результаты примера 1 на фигуре 3. Величины представляют собой ингибирование пролиферации. Заштрихованные результаты показывают ИК50 для каждого испытанного эфирного масла.

Эфирное масло	12,5 ч/млн	25 ч/млн	50 ч/млн	100 ч/млн	200 ч/млн	400 ч/млн	800 ч/млн
А (корица)	43,7%	84,3%	95,3%	94,5%
В (гвоздика)			21,0%	58,7%	78,0%
С (зимний чабер)		4,6%	-3,1%	42,2%	85,2%
D (тимьян)		6,0%	43,8%	41,1%
Е (душица)		26,7%	53,9%	75,9%
F (эвкалипт)			-1,6%	23,9%	15,0%	20,7%	69,5%
G (чайный куст)			7,9%	18,7%	11,6%	24,5%

Пример 2

Ингибирование пролиферации измеряли введением тритированного урацила как в Toxoplasma gondii , так и в Neospora canicum и жизнеспособность клеток HFF оценивали, используя способ МТТ . Результаты показаны на фигуре 4.

Фигура 4 показывает для каждого эфирного масла, имеющего концентрацию по ингибированию пролиферации, свойства по каждому из паразитов с одновременным сохранением жизнеспособности клеток HFF около 80%.

Можно наблюдать, что масла, имеющие пестицидную активность, концентрации ИК50, полученные от Toxoplasma gondii, являются теми же самыми как для Neospora canicum. Однако F и G масла обладают слабым действием или не действуют на ингибирование пролиферации Neospora canicum.

Пример 3: Оценка пролиферации Toxoplasma gondii в присутствии набора из комбинаций эфирных масел.

Набор из комбинаций эфирных масел представляет собой: АВ, АЕ, АD и BE.

Для каждой комбинации проводили 3-разовую 3-факториальную оценку. Теоретическую ИК50 устанавливают по степени измеренного ингибирования пролиферации и затем используют как основу для проведения разбавлений и проведения последующих 9 различных соотношений двух эфирных масел, объединенных в коктейль.

Эфирное масло 1		Эфирное масло 2
ЕО1 ИК50/4		ЕО2 ИК50/4		ЕО1 ИК50/4 + ЕО2 ИК50/4 ЕО1 ИК50/4 + ЕО2 ИК50/2 ЕО1 ИК50/4 + ЕО2 ИК50
ЕО1 ИК50/2		ЕО2 ИК50/2	⇒	ЕО1 ИК50/2 + ЕО2 ИК50/4 ЕО1 ИК50/2 + ЕО2 ИК50/2 ЕО1 ИК50/2 + ЕО2 ИК50
ЕО1 ИК50		ЕО2 ИК50		ЕО1 ИК50 + ЕО2 ИК50/4 ЕО1 ИК50 + ЕО2 ИК50/2 ЕО1 ИК50 + ЕО2 ИК50

Для каждой группы проведены 9 тестов по ингибированию пролиферации Toxoplasma gondii (все данные не показаны). Снова, ингибирование пролиферации измеряли введением тритированного урацила.

Коктейль ВЕ (см. фигуру 5): Данные по синергетическому действию коктейля ВЕ на пролиферацию Toxoplasma gondii .

Эфирное масло В при 100 ч/млн само по себе соответствует ИК58 (58% ингибирование пролиферации). Эфирное масло Е при 75 ч/млн само по себе соответствует ИК88 (88% ингибирование пролиферации). При предположении о независимом взаимоотношении между двумя маслами при ингибировании пролиферации, коктейль эфирного масла В с ИК58/2 = ИК29 с эфирным маслом Е с ИК88/4 = ИК22 приводит к ожидаемому дополнительному эффекту ИК22 + ИК29 = ИК51 (51% ингибирование пролиферации). Измеренное ингибирование пролиферации такого коктейля (В с ИК22, объединенное с Е с ИК29) показало неожиданное измеримое ингибирование пролиферации, равное 87% (ИК87). Такое высоко значимое отличие выдвигает на первый план синергетическое действие коктейля ВЕ на пролиферацию Toxoplasma gondii.

Смесевой коктейль

Таблица 2 (ниже) включает все результаты по ингибированию пролиферации Toxoplasma gondii в присутствии 36 вариантов эфирных масел.

Величины показывают ингибирование пролиферации. Заштрихованная площадь показывает комбинации для ингибирования пролиферации паразита на 50-90%. Полосатая площадь показывает комбинации для ингибирования пролиферации паразита более чем на 90%.

Заключение

Различные тесты на двух паразитах показали прекрасные результаты. Комбинация эфирных масел имеет в некоторых случаях повышенную способность по ингибированию пролиферации соединений (паразитов?). Это позволяет предположить, что эфирные масла могут действовать с синергизмом. Это особенно справедливо для комбинаций АЕ (данные не показаны) и ВЕ, где измеренный эффект коктейля значительно выше, чем ожидаемый дополнительный эффект от того и другого эфирного масла, взятого по отдельности. Также важно отметить, что все испытанные количества не проявили цитотоксических эффектов на клетках HFF (монослойная сохранность).

1. Противопаразитарная пероральная композиция для лечения животных, содержащая:

- комбинацию, состоящую из:

i) эфирного масла, содержащего гамма-терпинен, корвакрол и тимол, выбранного из рода Origanum и рода Thymus; и

ii) эфирного масла, выбранного из рода Cinnamomum и Eugenia; или

-эфирного масла рода Cinnamomum и эфирного масла рода Eugenia.

2. Композиция по п.1, которая содержит источник сапонина.

3. Композиция по п.1 или 2, которая содержит эфирное масло рода Cinnamomum и эффирное масло рода Eugenia.

4. Композиция по п.1 или 2, которая содержит комбинацию эфирных масел, состоящую из эфирного масла рода Cinnamomum и эфирного масла рода Origanum.

5. Композиция по п.1 или 2, которая содержит комбинацию эфирных масел, состоящую из эфирного масла рода Cinnamomum и эфирного масла рода Thymus.

6. Композиция по п.1 или 2, которая содержит эфирное масло рода Eugenia и эфирное масло рода Origanum.

7. Композиция по любому одному из пп.2-6, где источник сапонина содержит стероидный сапонигенин.

8. Композиция по любому одному из пп.1-7 для обработки кошки или собаки.

9. Композиция по любому одному из пп.1-8 в форме жидкости, таблетки или кормового продукта.

10. Композиция по любому одному из пп.1-9, которая включена в желатинированную крахмальную матрицу или влажный продукт.

11. Композиция по любому одному из пп.1-10, где композиция является противопаразитарной композиций в отношении паразитов из вида Apicomplexa, где необязательно паразиты являются паразитами из класса Сonoidasida.

12. Композиция по п.11, где композиция является противопаразитарной композицией в отношении паразитов Neospora canicum или Toxoplasma gondii.

13. Противопаразитарная пероральная композиция для лечения животных, содержащая источник сапонина и

комбинацию, состоящую из:

i) эфирного масла, содержащего гамма-терпинен, корвакрол и тимол, выбранного из рода Origanum и рода Thymus; и

ii) эфирного масла, выбранного из рода Cinnamomum и Eugenia;

или

-эфирного масла рода Cinnamomum и эфирного масла рода Eugenia.

14. Способ получения композиции по п.13, включающий смешивание вместе всех ингредиентов и необязательно представление смеси в форме, подходящей для введения.

15. Способ по п.14, где композицию добавляют к желатинированной крахмальной матрице путем распыления смеси с образованием покрытия или путем включения в желатинированную крахмальную матрицу.