Способ получения аутологичной богатой тромбоцитами плазмы крови

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и может быть использовано при хирургическом лечении идиопатических макулярных разрывов сетчатки. Способ получения аутологической богатой тромбоцитами плазмы крови включает забор венозной крови в подсоединенный к катетеру шприц с предварительно набранным антикоагулянтом. Шприц закрывают, содержимое перемешивают и вводят в пробирку YCELLBIO-KIT иглой 18 G через парацентральное отверстие в крышке пробирки. Проводят центрифугирование при комнатной температуре со скоростью вращения 4000 об/мин в течение 5 мин. Проводят извлечение слоя плазмы, богатой тромбоцитами тупоконечной тонкостенной канюлей 27 G через центральное отверстие в крышке пробирки. При этом для мужчин объем венозной крови составляет 12,5 мл, а для женщин - 13,5. Изобретение позволяет получить аутологичную богатую тромбоцитами плазму с высоким содержанием тромбоцитов из небольшого количества крови. 2 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и может быть использовано при хирургическом лечении идиопатических макулярных разрывов сетчатки.

До настоящего времени ведутся дискуссии о протоколах получения аутологичной богатой тромбоцитами плазмы крови. Дизайн и используемое лабораторное оборудование во многом разнятся, что объясняется отсутствием стандартизированной технологии.

В получении аутологичной богатой тромбоцитами плазмы крови можно выделить общие ключевые моменты: забор крови, использование антикоагулянта, двухэтапное центрифугирование с использованием различных систем.

Известны различные способы получения аутологичной богатой тромбоцитами плазмы крови.

Известен способ получения аутоплазмы с богатым содержанием тромбоцитов, получивший название Плазмолифтинг™. На внутренней стенке пробирки в верхней и средней ее части нанесен мелкодисперсионный гепарин натрия, в нижней части разделительный гель, после забора крови пробирку устанавливают в центрифугу, осуществляют центрифугирование. Относительная сила центрифугирования составляет 1000 об/мин в течение 10 минут (Патент РФ на изобретение №2606338). Следует отметить, что разделительный гель, присутствующий в пробирках, адсорбирует клетки, приводя к получению плазмы с низким содержанием тромбоцитов.

Известен способ получения аутологичного тромбоцитного лизата (pHPL), осуществляемый следующим образом: в 6-8 специализированных пробирок с коммерческим названием Plasmolifting, содержащих гепарин и уникальный гель, производят забор крови объемом 9 мл (всего 54-72 мл), пробирки помещают в центрифугу и центрифугируют в течение 6-7 минут при 3700-3800 об/мин. В ходе вращения в центрифуге, кровь разделяется на две основные фракции - эритроцитарно-лейкоцитарный сгусток и плазму крови, содержащую тромбоциты (тромбоцитарная аутоплазма). Затем шприцем (10,0-20,0 мл) из пробирок забирают супернатант, содержащий аутоплазму, обогащенную тромбоцитами, находящуюся в верхней части пробирки над разделительным гелем помещают в одну пробирку объемом (15,0-50,0 мл) и производят повторное центрифугирование в течение 12-15 минут при 3500-3600 об/мин. Концентрация тромбоцитов в аутоплазме составляет не менее 1000×10 кл/мл. Из обогащенной тромбоцитами аутоплазмы готовят лизат, путем лизиса мембраны тромбоцитов. Тромбоциты аутологичной плазмы лизируют путем двукратного замораживания в жидком азоте (минус 196°С) и быстрого оттаивания на водяной бане (+37°С). Полученный аутологичный тромбоцитный лизат (pHPL) фильтруют через фильтр (0,22 нм) и хранят до использования при температуре минус 20°С. (Патент РФ на изобретение №2652076): Следует отметить необходимость забора большого объема крови, многоэтапность и длительность получения тромбомассы.

Ближайшим аналогом является способ получения аутологичной богатой тромбоцитами плазмы крови, в которой говорится об эффективном применении аутологичных тромбоцитов в хирургии макулярных разрывов (Konstantinidis, Aristeidis, et al. Efficacy of autologous platelets in macular hole surgery // j. Clinical Ophthalmology / - 2013. - vol. 7, no. 7, p. 745-750). В конце операции на разрыв наносили аутологичный тромбоконцентрат. Получали концентрат следующим путем. Забор 50 мл венозной крови выполняется за 1 час до операции. Данный образец крови смешивают с 6 мл цитрата декстрозы и центрифугируют в режиме 280g (1500 об/мин) в течение 15 минут. Затем выделяется обогащенная тромбоцитами плазма и смешивается с 1/8 объема цитрата декстрозы, после чего снова выполняют центрифугирование в режиме 1000 g в течение 10 минут. Тромбоцитарную массу смешивают с 0,6 мл 0,9% NaCl. Две капли (каждая по 0,1 мл) вводят на поверхность разрыва. По мнению авторов, независимо от скорости вращения центрифуги и времени центрифугирования разделение эритроцитов и тромбоцитов за один этап невозможно.

Недостатком данного способа является то, что забор большого объема крови и двухэтапное центрифугирование усложняет методику, а «ручные» процессы получения аутологичной богатой тромбоцитами плазмы четко не регламентированы (перенос слоев из пробирки в пробирку осуществляется «на глаз» с помощью шприца, пипетки), в результате чего не исключено случайное получение плазмы с заниженным количеством тромбоцитов.

Задачей изобретения является разработка способа получения аутологичной плазмы с высоким содержанием тромбоцитов путем одноэтапного закрытого центрифугирования из небольшого количества крови.

Технический результат, получаемый в результате решения данной задачи, состоит в получении аутологичной богатой тромбоцитами плазмы с высоким содержанием тромбоцитов из небольшого количества крови, путем одноэтапного закрытого центрифугирования, что является доступной и легко воспроизводимой процедурой при наличии стандартного лабораторного оборудования, что расширяет возможности ее применения.

Технический результат достигается тем, что, в способе получения аутологичной богатой тромбоцитами плазмы крови, включающем забор венозной крови, смешивание с антикоагулянтом и центрифугирование, согласно изобретению, забор крови проводят в подсоединенный к катетеру шприц с предварительно набранным антикоагулянтом в количестве 1,5 мл, при этом для мужчин объем крови составляет 12,5 мл, а для женщин -13,5 мл; затем шприц закрывают, содержимое перемешивают и вводят в пробирку YCELLBIO-KIT иглой 18 G через парацентральное отверстие в крышке пробирки; центрифугирование проводят при комнатной температуре со скоростью вращения 4000 об/мин в течение 5 минут, извлечение слоя богатой тромбоцитами плазмы проводят тупоконечной тонкостенной канюлей 27 G через центральное отверстие в крышке пробирки.

Способ осуществлялся следующим образом.

Образец крови берут из кубитальной вены за 30 минут до операции, перед премедикацией. Подготавливают катетер-бабочку, место прокола обрабатывают 70% спиртом и дают высохнуть. После введения иглы в вену жгут тотчас же расслабляют. Забор крови проводят в подсоединенный к катетеру шприц объемом 20 мл с предварительно набранным антикоагулянтом (Цитрат натрия + Декстроза) - 1,5 мл, учитывая пол пациента и физиологическую норму количества тромбоцитов (12,5 мл для мужчин или 13,5 мл для женщин).

Затем шприц закрывают, перемешивают содержимое путем 6-8-кратного переворачивания или вращения (без встряхивания) и переносят кровь в пробирку YCELLBIO-KIT (РУ № РЗН 2014/2149 от 08.12.2014).

Кровь вводят в парацентральное отверстие крышки пробирки под углом 45° иглой 18 G, что облегчает введение.

Универсальный размер пробирки подходит для всех типов центрифуг: с угловым ротором (угол наклона ротора 45°) и ротор-крестовиной с подвесными стаканами.

Время между взятием образца крови из вены и центрифугированием составляет не более 10 минут. Центрифугирование проводят на лабораторной центрифуге «Armed»:80-2S с угловым ротором при комнатной температуре (от +18 до +24°С). Диапазон скорости вращения прибора - от 1000 до 4000 об/мин с шагом 500 об/мин. Для контроля работы пользуются таймером с установкой времени центрифугирования.

Пробирку с кровью помещают в центрифугу. В противоположную ячейку ставят такую же пробирку, заполненную водой, в качестве противовеса для уравновешивания образцов.

Частоту вращения и времени устанавливают на панели управления прибором: время центрифугирования 5 минут скорость вращения центрифуги 4000 об/мин.

Сужение в центральной части пробирки обеспечивает точное извлечение слоя богатой тромбоцитами плазмы, которое проводят тупоконечной тонкостенной канюлей 27 G через центральное отверстие в крышке пробирки, что облегчает извлечение.

Таким образом, разработан способ получения плазмы, который может найти широкое применение в травматологии, спортивной медицине, стоматологии, косметологии. Для получения плазмы сделаны необходимые практические шаги: налажено производство и осуществляется реализация специализированных пробирок (Номер регистрационного удостоверения: YCELLBIO-KIT (Южная Корея) - РУ № РЗН 2014/2149 от 08.12.2014). Особенности конструкции пробирки позволяют проводить закрытое центрифугирование, что исключает непосредственный контакт крови пациента с внешней средой, предотвращая вторичную контаминацию в ходе манипуляций с кровью и плазмой. Герметичная крышка обеспечивает стерильность и неизменность состава плазмы. Разработанный способ получения аутологичной богатой тромбоцитами плазмы крови с использованием специализированных пробирок позволит получить плазму с высоким количеством тромбоцитов. Лабораторные исследования подтвердили увеличение тромбоцитов после центрифугирования в указанном режиме, в среднем, в 7-9 раза. Выбранный опытным путем режим: 4000 об/мин в течение 5 минут - это оптимальный режим для того малого объема крови, с которым необходимо работать, чтобы получить плазму для закрытия макулярного разрыва в центральной зоне сетчатки.

При этом способ является малоинвазивным (требуется незначительное количество крови больного), не затратен (не требуется дорогостоящего оборудования и инструментария).

Пример 1.

Пациентка Д., 67 лет. Обратилась с жалобами на искривление и снижение зрения на левом глазу в течение 3 месяцев. При обследовании острота зрения на левом глазу 0,06, коррекция улучшения не давала. ВГД=20 мм рт.ст. На правом глазу патологии не выявлено. При офтальмоскопии левого глаза обнаружены помутнения в кортикальных слоях хрусталика и сквозной дефект в макуле. При дополнительном обследовании на оптическом когерентном томографе подтвержден макулярный разрыв D=576 мкм, без задней отслойки стекловидного тела. Диагноз: OS: Осложненная катаракта. Идиопатический макулярный разрыв. Проведена операция микроинвазивная субтотальная витрэктомия с применением богатой тромбоцитами плазмы, полученной из 13,5 мл крови указанным способом. При контрольной явке через 1 месяц коррегированная острота зрения левого глаза 0,4. ВГД 21 мм рт.ст. При офтальмоскопии: передний отрезок без особенностей, интраокулярная линза (ИОЛ) в капсульном мешке, авитрия, макулярный разрыв блокирован, сетчатка прилежит. При осмотре через 3 месяца после операции коррегированная острота зрения левого глаза 0,8. ВГД 19 мм рт.ст. При офтальмоскопии: передний отрезок без особенностей, ИОЛ в капсульном мешке, авитрия, макулярный разрыв блокирован, сетчатка прилежит.

Пример 2.

Пациент П., 47 лет. Обратился с жалобами на появление пятна в поле зрения правого глаза в течение 7 месяцев. 3 года назад была проведена факоэмульсификация катаракты обоих глаз. При обследовании острота зрения на правом глазу 0,02, коррекция улучшения не давала. ВГД=20 мм рт.ст. На левом глазу патологии не выявлено. ИОЛ в капсульном мешке. При офтальмоскопии правого глаза - ИОЛ в капсульном мешке, в и сквозной дефект в макуле. При дополнительном обследовании на оптическом когерентном томографе подтвержден макулярный разрыв D=720 мкм, без задней отслойки стекловидного тела. Диагноз: OD: Артифакия. Идиопатический макулярный разрыв. Проведена операция микроинвазивная субтотальная витрэктомия с применением богатой тромбоцитами плазмы, полученной из 12,5 мл крови указанным способом. При контрольной явке через 1 месяц коррегированная острота зрения правого глаза 0,3, ВГД 21 мм рт.ст. При офтальмоскопии: передний отрезок без особенностей, ИОЛ в капсульном мешке, авитрия, макулярный разрыв блокирован, сетчатка прилежит. При осмотре через 3 месяца после операции коррегированная острота зрения правого глаза 0,8. ВГД 19 мм рт.ст. При офтальмоскопии: передний отрезок без особенностей, ИОЛ в капсульном мешке, авитрия, макулярный разрыв блокирован, сетчатка прилежит.

С применением богатой тромбоцитами плазмы, полученной указанным способом в ФГАУ «НМИЦ «МНТК «Микрохирургия глаза» им. акад. С.Н. Федорова» прооперировано 512 пациентов. Во всех случаях были получены хорошие результаты, с высоким количеством тромбоцитов, полученных из небольшого объема крови путем одноэтапного закрытого центрифугирования, что сделало технологию получения плазмы проще.

Способ получения аутологичной богатой тромбоцитами плазмы крови, включающий забор венозной крови, смешивание с антикоагулянтом и центрифугирование, отличающийся тем, что забор крови проводят в подсоединенный к катетеру шприц с предварительно набранным антикоагулянтом в количестве 1,5 мл, при этом для мужчин объем крови составляет 12,5 мл, а для женщин - 13,5 мл; затем шприц закрывают, содержимое перемешивают и вводят в пробирку YCELLBIO-KIT иглой 18 G через парацентральное отверстие в крышке пробирки; центрифугирование проводят при комнатной температуре со скоростью вращения 4000 об/мин в течение 5 минут, извлечение слоя богатой тромбоцитами плазмы проводят тупоконечной тонкостенной канюлей 27 G через центральное отверстие в крышке пробирки.



 

Похожие патенты:

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложена фармацевтическая композиция для предотвращения и лечения вызванного неоваскуляризацией заболевания глаз, содержащая белок слияния, в котором проникающий в ткань пептид слит с анти-VEGF.

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и предназначена для поддержания стабильности дибутилгидрокситолуола в жидком препарате.

Настоящая группа изобретений относится к лечению пигментной дистрофии сетчатки у человека. Способ лечения пигментной дистрофии сетчатки у млекопитающего, который включает введение млекопитающему терапевтически эффективного количества дозы N-ацетилцистеинамида (NACA), составляющей 100, 150, 300, 333, 400, 500, 600, 700, 750, 800, 900, 1000, 2500, 5000, 7500 или 10000 мг на дозу.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной медицине и офтальмологии, и может быть использовано для лечения экспериментальных химических ожогов и катаракты, смоделированных на кроликах породы Шиншилла.

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и предназначено для защиты роговицы, уменьшения нарушения эпителия роговицы или восстановления после нарушения роговицы.

Изобретение относится к применимому в медицине и фармацевтической промышленности диэтиламинному сольвату соединения формулы (I): ,имеющему одну молекулу диэтиламина на одну молекулу соединения формулы (I), композиции на его основе, способу его получения и ингибированию натрий-зависимых глюкозных котранспортеров (SGLT) с его использованием для лечения заболеваний.

Группа изобретений относится к области медицины и фармацевтики. Первый объект представляет собой офтальмологическое средство для профилактики и/или лечения дисфункции мейбомиевых желез в форме глазных капель, содержащее от 0,01 до 0,5% масс./об.

Изобретение относится к способу получения водосодержащей суспензии частиц, состоящих из антиоксидантного фермента супероксиддисмутазы, поликатиона и полианиона, путем смешения буферных растворов супероксиддисмутазы и поликатиона, выбранного из группы, включающей протамин, полилизин и полиаргинин, перемешивания и выдерживания полученной смеси с последующими добавлением в нее водного буферного раствора полианиона блок-сополимера полиглутаминовой кислоты и полиэтиленгликоля или блок-сополимера полиаспарагиновой кислоты и полиэтиленгликоля, перемешиванием и выдерживанием полученной смеси, добавлением в нее водного раствора глутарового альдегида, выдерживанием смеси, добавлением в смесь водного раствора боргидрида натрия и очисткой смеси с использованием мембранной фильтрующей системы, причем в качестве буфера используют буферный раствор с рН 5-8, содержащий, по крайней мере, гидрофосфат натрия и дигидрофосфат натрия, глутаровый альдегид добавляют в количестве, обеспечивающем его мольное соотношение с аминогруппами поликатиона 0,3-1,5, и используют фильтрующую систему с пределом пропускания 90-130 килодальтон.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к N-[(3-фтор-4-метоксипиридин-2-ил)метил]-3-(метоксиметил)-1-({4-[(2-оксопиридин-1-ил)метил]фенил}метил)пиразол-4-карбоксамиду указанной ниже структуры или к его фармацевтически приемлемой соли или сольвату.

Заявлены соединения Формулы I или их фармацевтически приемлемые соли, их содержащая фармацевтическая композиция, способы лечения и применение этих соединений для получения лекарственного средства для лечения заболеваний, опосредованных фактором D комплемента.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ активации ядерного фактора короткоцепочечного энхенсера каппа активированных клеток В (NF-κВ) в пищеварительном тракте организма, нуждающегося в этом.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу стимулирования иммунной системы. Способ стимулирования иммунной системы включает введение терапевтических доз соединений минерала осмистый иридий с мумие 1:10000, осмистый иридий с прополисом 1:10000, медь гидрофосфат, железо фосфорнокислое (II) двухзамещенное двуводное, калий-натрий виннокислый, 2-хлорэтансульфоновой кислоты натриевая соль одноводная, L-цистин, пчелиный яд, аскорбиновая кислота, калий фосфорнокислый однозамещенный, глюкоза, где состав вводится 2-4 раза в день через желудочно-кишечный тракт, также организм человека в течение курса 30 дней подвергают воздействиям мягкого инфракрасного облучения, импульсного сверхвысокого тока 10-100 ГГц, ежедневно во время курса лечения.
Изобретение относится к медицине и предназначено для лечения артроза суставов. В синовиальную сумку вводят 1/15-1/14 объема полости следующий состав, мас.%: змеиный и пчелиный яды, женьшень от 1 до 2% каждого; мумие от 6 до 7% в плазме крови - остальное.
Изобретение относится к ветеринарии и касается способа комплексного лечения травм связок и сухожилий у лошадей, включающего подкожное введение тромбоцитарной аутоплазмы (ТАП), при этом в первый день травмы на пораженное место накладывают компресс димексида с водой и оставляют его на ночь, на следующий день ТАП вводят в очаг поражения связки или сухожилия под контролем УЗИ в объеме, необходимом до заполнения дефекта, затем дополнительно вводят ТАП подкожно, при этом кратность введения составляет от 2 до 5 раз с последующим ультразвуковым контролем.
Изобретение относится к медицине и предназначено для лечения пациентов с эмоциогенным патологическим пищевым поведением. Предложен способ лечения тревожных расстройств у пациентов с нарушениями пищевого поведения, включающий фармакотерапию, при этом перорально вводят препарат Бак-Сет Форте курсом 2 недели.

Группа изобретений относится к штамму Streptococcus thermophilus, используемому для получения ферментированного молочного продукта, и ферментированному молочному продукту, содержащему указанный штамм.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу лечения гипотонии мочевого пузыря с использованием мезенхимальных стволовых клеток жировой ткани.

Изобретение относится к микробиологической промышленности. Сухой пробиотик для откорма животных представляет собой лиофилизированную биомассу штамма Enterococcus mundtii ВКПМ В-11828.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к фармацевтической композиции для лечения аллергии, вызванной клещами домашней пыли. Предлагается фармацевтическая композиция для лечения аллергии, вызванной домашними пылевыми клещами, включающая экстракт аллергенов Dermatophagoides pteronyssinus (Der p) и Dermatophagoides farinae (Der f) в качестве активного ингредиента, которая содержит экстракт аллергена: аллергены клещей группы 1 - Der f 1 и Der p 1 и аллергены клещей группы 2 - Der f 2 и Der p 2 и где аллергены Der p 1, Der f 1, Der p 2 и Der f 2 присутствуют в заранее определенных контролируемых количествах, так что количество по массе аллергенов группы 1 - Der f 1 и Der p 1, к аллергенам группы 2 - Der f 2 и Der p 2, находится в соотношении от 1:0,7 до 1:1,5; и где фармацевтическая композиция представляет собой быстро растворяющуюся сублингвальную таблетку; применение фармацевтической композиции для получения медицинского продукта для лечения аллергии, вызванной домашними пылевыми клещами; медицинский продукт для лечения аллергии, вызванной домашними пылевыми клещами; применение фармацевтической композиции для лечения аллергии, вызванной домашними пылевыми клещами; способ лечения аллергии, вызванной домашними пылевыми клещами, причем указанный способ включает введение пациенту эффективного количества фармацевтической композиции.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ стимулирования иммунной системы и активации обменных процессов, включающий введение терапевтических доз соединений минерала осмистый иридий, отличающийся тем, что состав содержит порошкообразно следующие компоненты в мас.%: порошкообразные: осмистый иридий с семикарбазидом в соотношении 1:10000 - 15; осмистый иридий с канифолью в соотношении 1:10000 - 15; пчелиный яд с чистотелом в соотношении 1:10 - 2; пчелиный яд с аконитом в соотношении 1:10 - 2; этилендиамин динатриевой соли дигидрат с корой бархатного дерева в соотношении 1:10 - 17; цинка оксид с прополисом в соотношении 1:10 - 17; натрия метафосфат с сельдереем в соотношении 1:10 - остальное; и дополнительно обеспечивается массаж грудной клетки и ног составом из спиртовых вытяжек в соотношении 1:1 при выдержке настоя не менее 1 месяца спиртовых выдержек следующих компонентов в мас.%: чистотел 25; зверобой 25; кактус 25; перец чили 7; тысячелистник 7; прополис - остальное; причем порошкообразные компоненты принимают через желудочно-кишечный тракт перорально разовым приемом по 0,1 г, за 20-30 минут до приема пищи 3-4 раза в день за период 30 дней, а массаж грудной клетки и ног производят на ночь спиртовым составом в течение 15-20 минут за период 30 дней.

Изобретение относится к медицине, а именно к анестезиологии и офтальмологиии, и может быть использовано для обезболивания при витреоретинальной и эписклеральной хирургии.

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и может быть использовано при хирургическом лечении идиопатических макулярных разрывов сетчатки. Способ получения аутологической богатой тромбоцитами плазмы крови включает забор венозной крови в подсоединенный к катетеру шприц с предварительно набранным антикоагулянтом. Шприц закрывают, содержимое перемешивают и вводят в пробирку YCELLBIO-KIT иглой 18 G через парацентральное отверстие в крышке пробирки. Проводят центрифугирование при комнатной температуре со скоростью вращения 4000 обмин в течение 5 мин. Проводят извлечение слоя плазмы, богатой тромбоцитами тупоконечной тонкостенной канюлей 27 G через центральное отверстие в крышке пробирки. При этом для мужчин объем венозной крови составляет 12,5 мл, а для женщин - 13,5. Изобретение позволяет получить аутологичную богатую тромбоцитами плазму с высоким содержанием тромбоцитов из небольшого количества крови. 2 пр.

Наверх