Способ одновременного определения степеней окисления и алкилирования азоксимера бромида - действующего вещества полиоксидония - методом 13c спектроскопии ямр

Использование: для одновременного определения степеней окисления и алкилирования азоксимера бромида. Сущность изобретения заключается в том, что, используя метод 13С спектроскопии ЯМР, соотносят сигналы спектра 13С полиоксидония конкретным метиленовым группам N-оксида 1,4-этиленпиперазина и (N-карбоксиметил)-1,4-этиленпиперазиния, выявляют их характеристические сигналы и измеряют значения нормированных интегральных интенсивностей характеристических сигналов одинакового числа метиленовых групп N-оксида 1,4-этиленпиперазина и (N-карбоксиметил)-1,4-этиленпиперазиния. Технический результат: обеспечение возможности идентифицировать фармацевтическую субстанцию «Полиоксидоний» и лекарственных форм на ее основе, подтвердив наличие основных структурных фрагментов и определив их молярные доли - степени окисления и алкилирования. 2 з.п. ф-лы, 6 ил.

 

Изобретение относится к области контроля качества лекарственных средств и может быть использовано для идентификации фармацевтической субстанции «Полиоксидоний» (подтверждения наличия основных структурных фрагментов и определения их молярных долей - степеней окисления и алкилирования) и лекарственных форм на ее основе.

Полиоксидоний применяется как иммуномодулятор и детоксикант, а также как иммуностимулирующий и пролонгирующий носитель фармакологически активных соединений [1-8]. Фармацевтическая субстанция «Полиоксидоний» представляет собой смесь действующего вещества (азоксимера бромида) и вспомогательных веществ (маннитола и повидона К17). Лекарственные формы полиоксидония могут содержать дополнительные вспомогательные вещества, например, таблетки полиоксидония - лактозы моногидрат, крахмал картофельный, стеариновую кислоту; суппозитории вагинальные и ректальные - масло какао.

Азоксимера бромид по своему строению представляет собой сополимер N-оксида 1,4-этиленпиперазина и (N-карбоксиметил)-1,4-этиленпиперазиний бромида (Фиг. 1). Доли (N-карбоксиметил)-1,4-этиленпиперазиния (степень алкилирования, q) и N-оксида 1,4-этиленпиперазина (степень окисления, z) в сополимерной цепи азоксимера бромида являются структурными параметрами, характеризующими его состав, и определяют свойства препарата в целом (эффективность воздействия, токсичность и безопасность применения) [6, 7]. Интервал величин q и z в полиоксидоний составляет 0,2-0,4 и 0,4-0,8 соответственно [8].

Известны способы определения степени окисления азоксимера бромида методом хромометрического титрования и степени алкилирования азоксимера бромида методом инфракрасной спектроскопии (полоса 1735 см-1) [1]. Недостатками указанных способов является то, что:

- они применимы к изолированному азоксимера бромиду, а не к смеси азоксимера бромида с маннитолом и повидоном К17;

- они применимы к оценке только одного из двух структурных параметров (степени окисления или степени алкилирования);

- отсутствует описание методик определения степеней окисления и алкилирования в рамках этих способов в литературе.

Наиболее близким аналогом к заявляемому изобретению является способ определения степеней окисления и алкилирования методом 1Н спектроскопии ядерного магнитного резонанса (ЯМР) по отношению интегральных интенсивностей сигналов спектра азоксимера бромида в области 2,5-4,5 м.д. [1].

Недостатком данного способа является его неприменимость к смеси азоксимера бромида с маннитолом и повидоном К17, так как в спектре 1Н фармацевтической субстанции «Полиоксидоний» перекрываются сигналы основного и вспомогательных веществ. Повидон К17 не отделяется от азоксимера бромида ни экстракцией с использованием различных растворителей, ни ультрафильтрацией. Кроме того, в литературе отсутствует описание методик определения степеней окисления и алкилирования методом 1Н спектроскопии ЯМР.

Техническим результатом изобретения является одновременное определение степеней окисления и алкилирования азоксимера бромида в присутствии маннитола и повидона К17 в фармацевтической субстанции «Полиоксидоний» и лекарственных формах на ее основе без использования стандартных образцов.

Достижение технического результата обеспечивается благодаря такому техническому решению, как использование ядра 13С, что приводит к сужению областей перекрывания сигналов действующего и вспомогательного веществ полиоксидония и упрощению процедуры расшифровки спектральных данных.

Сущность заявляемого способа заключается в соотнесении сигналов спектра 13С полиоксидония конкретным метиленовым группам N-оксида 1,4-этиленпиперазина (А) и (N-карбоксиметил)-1,4-этиленпиперазиния (В), выявлении характеристических сигналов А и В и измерении значений их нормированных интегральных интенсивностей. Значения величин z (степень окисления) и q (степень алкилирования) равны величинам нормированных интегральных интенсивностей сигналов одинакового числа метиленовых групп А и В. В качестве эталона для калибровки шкалы химических сдвигов используется сигнал метиленовой группы маннитола (δ=63,18 м.д.).

В заявляемом изобретении способ одновременного определения степеней окисления и алкилирования азоксимера бромида - действующего вещества полиоксидония - методом 13С спектроскопии ЯМР реализуется следующим образом.

Пробоподготовка

Зависит от типа лекарственной формы исследуемого образца и заключается в получении раствора азоксимера бромида в дейтерированной воде. При этом вспомогательные вещества фармацевтической субстанции «Полиоксидоний» (маннитол, повидон К17) также переходят в раствор.

Параметры эксперимента

Регистрация спектров проводится на спектрометре ЯМР Agilent DD2 NMR System 600 с 5-мм мультиядерным датчиком, оснащенным градиентной катушкой или на аналогичном спектрометре ЯМР с рабочей частотой по протонам не менее 500 МГц.

Температура - 27°С, ширина спектра - 200 м.д., угол поворота намагниченности - 45°, время релаксации - 1 с, количество накоплений сигнала свободной индукции - 10000, число точек аналого-цифрового преобразования - 64к, экспоненциальное умножение - 3,0 Гц, автоматическая коррекция базовой линии спектра, ручная настройка фазы.

Учет результатов

1) Фиксируют сигналы структурных компонентов основного и вспомогательных веществ:

N-оксид 1,4-этиленпиперазин (Фиг. 2):

l3C(D2O), δ, м.д.: 67,3-64,6 (1С, N+-CH2), 64,6-63,3 (1С, N+-CH2), 59,1-58,3 (1С, N+-CH2), 52,2-51,6 (1С, N-CH2), 49,9-48,9 (1С, N-CH2), 47,2-46,0 (1С, N-CH2).

(N-карбоксиметил)-1,4-этиленпиперазиния бромид (Фиг. 2):

13C(D2O), δ, м.д.: 168,8-167,7 (1С, СО), 62,9-61,9 (1С, СН2-СО), 59,8-59,1 (2С, N+-CH2), 54,4-52,9 (1С, N+-CH2), 52,9-52,2 (1С, N-CH2), 51,6-50,5 (2С, N-CH2).

Маннитол (Фиг. 2):

13C(D2O), δ, м.д.: 70,77 (2С, 2СН), 69,19 (2С, 2СН), 63,18 (2С, 2СН2).

Повидон К17 (Фиг. 2):

13C(D2O), δ, м.д.: 178,2-176,9 (1С, СО), 46,0-44,0 (1С, N-CH2), 43,4-41,2 (1С, N-CH), 36,2-32,0 (1С, СН2 ацикл.), 31,9-30,5 (1С, O=С-СН2), 18,0-16,7 (1С, СН2 цикл.).

2) Выявляют характеристические сигналы азоксимера бромида: синглетные сигналы в областях 59,0-58,3 и 47,1-46,2 м.д. (две метиленовые группы мономерного звена А) и синглетный сигнал в области 59,8-59,0 м.д. (две метиленовые группы пиперазинового цикла мономерного звена В) и измеряют значения их нормированных интегральных интенсивностей.

3) Величину степени окисления (z) приравнивают к измеренной сумме значений нормированных интегральных интенсивностей синглетных сигналов в областях 59,0-58,3 и 47,1-46,2 м.д.

4) Величину степени алкилирования (q) приравнивают к измеренному значению нормированной интегральной интенсивности синглетного сигнала в области 59,8-59,0 м.д.

Существенными отличительными признаками заявляемого изобретения являются:

1) Одновременное определение степеней окисления и алкилирования в азоксимера бромиде без его предварительного выделения из смеси с маннитолом и повидоном К17.

2) Возможность идентификации полиоксидония без использования стандартных образцов.

3) Повышение точности количественных измерений z и q за счет ликвидации неопределенности измерения, связанной с перекрыванием сигналов сополимерных звеньев и вспомогательных веществ.

4) Возможность определения степеней окисления и алкилирования в азоксимера бромиде во всех существующих лекарственных формах полиоксидония.

Краткое описание чертежей и иных материалов (Приложения 1-6):

Фиг. 1. Структурная формула азоксимера бромида.

Фиг. 2. 13C спектр субстанции-раствора «Полиоксидоний».

Фиг. 3. Фрагмент 13C спектра субстанции-раствора «Полиоксидоний» с нормированными интергальными интенсивностями характеристических сигналов N-оксида 1,4-этиленпиперазина и (N-карбоксиметил)-1,4-этиленпиперазиния бромида.

Фиг. 4. Фрагмент 13C спектра лиофилизата «Полиоксидоний» с нормированными интергальными интенсивностями характеристических сигналов N-оксида 1,4-этиленпиперазина и (N-карбоксиметил)-1,4-этиленпиперазиния бромида.

Фиг. 5. Фрагмент 13C спектра таблеток «Полиоксидоний» с нормированными интергальными интенсивностями характеристических сигналов N-оксида 1,4-этиленпиперазина и (N-карбоксиметил)-1,4-этиленпиперазиния бромида.

Фиг. 6. Фрагмент 13C спектра суппозиториев «Полиоксидоний» с нормированными интергальными интенсивностями характеристических сигналов N-оксида 1,4-этиленпиперазина и (N-карбоксиметил)-1,4-этиленпиперазиния бромида.

Возможность осуществления заявляемого изобретения показана следующими примерами.

Пример 1. Определение степеней окисления и алкилирования азоксимера бромида в субстанции-растворе «Полиоксидоний».

Пробоподготовка

К 500 мкл субстанции добавляют 150 мкл дейтерированной воды (D2O). Раствор используют для получения спектра 13C.

Параметры эксперимента соответствуют описанию изобретения

Учет результатов

Измеряют значения нормированных интегральных интенсивностей синглетных сигналов в областях 59,0-58,3 и 47,1-46,2 м.д. и суммируют их. Значение суммы соответствует величине z (Фиг. 3).

z=0,39+0,39=0,78

Измеренное значение нормированной интегральной интенсивности синглетного сигнала в области 59,8-59,0 м.д. соответствует величине q (Фиг. 3).

q=0,22

Значения величин z и q соответствуют представленным в литературе [1, 8].

Пример 2. Определение степеней окисления и алкилирования азоксимера бромида в лиофилизате для приготовления лекарственных форм и вакцин «Полиоксидоний».

Пробоподготовка

25 мг испытуемого образца (точная навеска не обязательна) растворяют в 0,5 мл D2O. Раствор используют для получения спектра 13C.

Параметры эксперимента соответствуют описанию изобретения

Учет результатов

Измеряют значения нормированных интегральных интенсивностей синглетных сигналов в областях 59,0-58,3 и 47,1-46,2 м.д. и суммируют их. Значение суммы соответствует величине z (Фиг. 4).

z=0,40+0,40=0,80

Измеренное значение нормированной интегральной интенсивности синглетного сигнала в области 59,8-59,0 м.д. соответствует величине q (Фиг. 4).

q=0,20

Значения величин z и q соответствуют представленным в литературе [1, 8].

Пример 3. Определение степеней окисления и алкилирования азоксимера бромида в таблетках «Полиоксидоний».

Пробоподготовка

48 мг испытуемого образца (4 таблетки по 12 мг) растирают до порошкообразного состояния, добавляют 1,2 мл D2O и интенсивно встряхивают в течение 10 мин. Полученную суспензию фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм. Фильтрат используют для получения спектра 13C.

Параметры эксперимента соответствуют описанию изобретения

Учет результатов

Измеряют значения нормированных интегральных интенсивностей синглетных сигналов в областях 59,0-58,3 и 47,1-46,2 м.д. и суммируют их. Значение суммы соответствует величине z (Фиг. 5).

z=0,40+0,40=0,80

Измеренное значение нормированной интегральной интенсивности синглетного сигнала в области 59,8-59,0 м.д. соответствует величине q (Фиг. 5).

q=0,20

Значения величин z и q соответствуют представленным в литературе [1, 8].

Пример 4. Определение степеней окисления и алкилирования азоксимера бромида в суппозиториях вагинальных и ректальных «Полиоксидоний».

Пробоподготовка

Один суппозиторий помещают в коническую колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 5 мл воды, расплавляют на кипящей водяной бане в течение 5 мин при умеренном встряхивании. Смесь охлаждают до комнатной температуры, затем центрифугируют при 3000 об/мин и температуре 7°С в течение 20 мин. Водный экстракт фильтруют через фильтр с диаметром пор 0,22 мкм, затем лиофилизируют. Лиофилизаты от четырех суппозиториев объединяют и растворяют в 0,5 мл D2O. Раствор используют для получения спектра 13C.

Параметры эксперимента соответствуют описанию изобретения

Учет результатов

Измеряют значения нормированных интегральных интенсивностей синглетных сигналов в областях 59,0-58,3 и 47,1-46,2 м.д. и суммируют их. Значение суммы соответствует величине z (Фиг. 6).

z=0,40+0,40=0,80

Измеренное значение нормированной интегральной интенсивности синглетного сигнала в области 59,8-59,0 м.д. соответствует величине q (Фиг. 6).

q=0,20

Значения величин z и q соответствуют представленным в литературе [1, 8].

Представленные примеры не ограничивают объем притязаний настоящего изобретения и служат только для цели иллюстрации.

Список литературы

1. Патент РФ 2073031 (1997).

2. Некрасов А.В., Пучкова Н.Г., Иванова А.С.Иммунология, 2000, 5; 19-23.

3. Dambaeva S.V., Mazurov D.V., Golubeva N.M. et al. Centr Eur J Immunol, 2003, 28(2), 127-33.

4. Dyakonova V.A., Dambaeva S.V., Pinegin B.V. et al. Intern Immunopharmacol, 2004, 4, 1623-1631.

5. Караулов A.B., Самойлова H.M., Кокушков Д.Б. Иммунология, 2007, №2, 93-95.

6. Булгакова В.А. Терапевтический архив, 2014, 12, 92-97.

7. Полиоксидоний в клинической практике. Под ред. А.В. Караулова. М: ГЭОТАР-Медиа, 2008; 135 с.

8. Патент РФ 2112542 (1998).

1. Способ одновременного определения степеней окисления и алкилирования азоксимера бромида - действующего вещества полиоксидония - методом 13С спектроскопии ядерного магнитного резонанса в различных лекарственных формах полиоксидония, характеризующийся тем, что соотносят сигналы спектра 13С полиоксидония конкретным метиленовым группам N-оксида 1,4-этиленпиперазина и (N-карбоксиметил)-1,4-этиленпиперазиния, выявляют их характеристические сигналы и измеряют значения нормированных интегральных интенсивностей характеристических сигналов одинакового числа метиленовых групп N-оксида 1,4-этиленпиперазина и (N-карбоксиметил)-1,4-этиленпиперазиния.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что отсутствует предварительное выделение азоксимера бромида из смеси с маннитолом и повидоном К17.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что его применяют без использования стандартных образцов.



 

Похожие патенты:

Настоящее изобретение относится к системе анализа, выполненной с возможностью осуществления операций в отношении анализируемого вещества, которое может вступать в соединение с несколькими реактивами до введения в проточную кювету.

Настоящее изобретение относится к способу, который, под контролем схемы управления, реализующей протокол смешивания, предусматривает всасывание реактивов из нескольких различных резервуаров для реактивов в накопительный канал.

Изобретение относится к фармакологии и может быть использовано для идентификации и количественного определения содержания пяти близких по строению олигопептидов (ADEL, DER, DEG, DEP, KDE) в фармацевтической субстанции «Пептофорс».

Использование: для обнаружения сигналов ядерного квадрупольного резонанса. Сущность изобретения заключается в том, что в устройство обнаружения сигналов ядерного квадрупольного резонанса, содержащее генератор качающей частоты, усилитель мощности и согласующее устройство, дополнительно введены формирователь импульсов частотных, формирователь импульсов временных, многочастотная синфазная приемная антенная система, многочастотная синфазная передающая антенная система, формирователь информации приемной системы, блок фильтров, блок анализа спектра ядерного квадрупольного резонанса излучения, блок исследования спектра ядерного квадрупольного резонанса излучения, при этом выход генератора качающей частоты соединен с входом усилителя мощности параллельно через формирователь импульсов частотных, через первый включатель Вк.1, а также через формирователь временных импульсов, через второй включатель Вк.2; выход усилителя мощности соединен параллельно с входом согласующего устройства передающей системы и через «n1» вход с формирователем информации приемной системы; «n» выходов согласующего устройства передающей системы соединены с каждым из «n» в системе излучателей 7 через клемму «ж», начиная с 71 до 7N; «n» входов формирователя информации приемной системы соединены с N синфазными линейками 6, например «n» входов формирователя информации соединены с первой синфазной приемной линейкой от первой антенны 611 до «n» 61N; выход формирователя информации приемной системы соединен с блоком исследования спектра излучения сигналов ядерного квадрупольного резонанса через блок фильтров и через блок анализа спектра излучения сигналов ядерного квадрупольного резонанса; излучающая часть устройства обнаружения излучателей ядерного квадрупольного резонанса излучения размещена между двух экранирующих плоскостей, выполненных в виде усеченных цилиндрических плоскостей.

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано для контроля качества пчелиного меда путем определения термического воздействия на мед. Способ включает приготовление водных растворов меда, последующую съемку 1Н – спектров на ЯМР-спектрометре с использованием стандартной импульсной последовательности zgpr с подавлением сигнала растворителя, фазирование спектров в автоматическом режиме, проведение коррекции базовой линии, интегрирование в составе меда дублетного сигнала аномерных протонов β-глюкозы при 4,45 м.д.

Использование: для исследования и неинвазивной идентификации визуально неразличимых образцов методом ядерного магнитного резонанса. Сущность изобретения заключается в том, что устройство для выявления методом ЯМР образцов, отличающихся по своим характеристикам от эталонного, включает две последовательно соединенные одинаковые катушки индуктивности, подключенные к приемнику сигнала и выполненные с возможностью размещения в одной из них эталонного образца, во второй исследуемого образца, при этом одна из катушек одним концом подключена к одному из входных концов приемника сигнала, другим - к одному из концов второй катушки, оставшийся конец второй катушки подключен к другому входному концу приемника сигнала, катушки выполнены с возможностью переключения режимов работы, при которых эдс индукции, наведенные на концах катушек, суммируются или вычитаются, а устройство выполнено с возможностью размещения в однородном магнитном поле с перпендикулярным расположением осей катушек относительно направления данного поля.

Использование: для одновременного количественного определения глицерина и ацетата калия в водном растворе методом 1Н ЯМР. Сущность изобретения заключается в том, что осуществляют 12-кратное разбавление исследуемого раствора, получают спектр при следующих параметрах: время отклика - 5 сек; длина радиочастотного импульса - 3,3 μсек (10 град); релаксационная задержка - 10 сек; количество накоплений - 16, затем в спектре 1Н ЯМР определяют интегральную интенсивность сигналов, после чего по полученным значениям интегралов в диапазонах химических сдвигов 1,8-2,0; 3,4-3,8 и 4,6-4,9 м.д.

Использование: для определения размера магнитных наночастиц. Сущность изобретения заключается в том, что приготовливают коллоидные растворы наночастиц с разной концентрацией С стабилизирующего вещества, помещают их в магнитное поле, измеряют намагниченности методом ядерного магнитного резонанса в разные моменты времени после приготовления или взбалтывания раствора и определяют две концентрации (С1 и С2), при которых скорость уменьшения намагниченности имеет минимумы.

Использование: для определения кислотного числа подсолнечного лецитина. Сущность изобретения заключается в том, что осуществляют отбор пробы подсолнечного лецитина, последовательное смешивание пробы с растворителем и водным раствором щелочи с получением смеси и вычисление значения кислотного числа по формуле, при этом в качестве растворителя используют четыреххлористый углерод при соотношении по массе подсолнечный лецитин:четыреххлористый углерод, равном (1:5)÷(1:5,5), в качестве водного раствора щелочи берут водный раствор гидроксида натрия концентрацией 0,9-1,1 моль/дм3 при соотношении по массе подсолнечный лецитин:водный раствор гидроксида натрия, равном (1:0,7)÷(1:0,8), а полученную смесь помещают в датчик импульсного ЯМР-анализатора и измеряют амплитуду сигналов ядерно-магнитной релаксации протонов образовавшегося мыла (Ам), при этом для вычисления значения кислотного числа используют формулу в виде уравнения: К.ч.=3,0554+0,9608⋅Ам.

Изобретение относится к области измерительной техники, а именно к средствам градуировки импульсных ЯМР-спектрометров, и может быть использовано для определения содержания линоленовой кислоты в масле семян льна.

Использование: для одновременного определения степеней окисления и алкилирования азоксимера бромида. Сущность изобретения заключается в том, что, используя метод 13С спектроскопии ЯМР, соотносят сигналы спектра 13С полиоксидония конкретным метиленовым группам N-оксида 1,4-этиленпиперазина и -1,4-этиленпиперазиния, выявляют их характеристические сигналы и измеряют значения нормированных интегральных интенсивностей характеристических сигналов одинакового числа метиленовых групп N-оксида 1,4-этиленпиперазина и -1,4-этиленпиперазиния. Технический результат: обеспечение возможности идентифицировать фармацевтическую субстанцию «Полиоксидоний» и лекарственных форм на ее основе, подтвердив наличие основных структурных фрагментов и определив их молярные доли - степени окисления и алкилирования. 2 з.п. ф-лы, 6 ил.

Наверх