Метод изготовления микропрепаратов


G01N1/28 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2714044:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины ФГБОУ ВО СПбГАВМ (RU)

Изобретение относится к области ветеринарно-санитарной экспертизы и контроля качества и термического состояния мяса животных и птицы. Метод изготовления микропрепаратов для идентификации охлажденного и дефростированного мяса убойных животных и птицы путем микроскопии структурного строения мышечных волокон характеризуется тем, что из исследуемого образца охлажденного или замороженного мяса вырезают 5 продольных срезов размером 1 см длиной и 2 мм толщиной, раскладывают их на нижнем стекле компрессориума с промежутками не менее 1 см, накрывают срезы верхним стеклом, отводя его относительно нижнего стекла максимально на себя, прижимают стекла с усилием друг к другу, после чего сдвигают их в обратном направлении, сохраняя сжатие до исходного положения, стекла фиксируют винтами, придавая мышечным срезам тонкую конфигурацию, после чего раскручивают винты, снимают раздавленные срезы и помещают их на дно фарфоровой чашки, подвергают их окрашиванию, окрашенные срезы помещают на предметное стекло, на срезы добавляют по 1-2 капли 50% водного раствора глицерина и фиксируют мышечную ткань покровным стеклом, слегка придавливая его, после чего оценивают термическое состояние мяса по наличию механических повреждений мышечных волокон. Метод позволяет в кратчайшие сроки изготовить нативные препараты мышечной ткани для оценки термического состояния мяса по наличию механических повреждений мышечных волокон. 2 з.п. ф-лы.

 

Изобретение относится к области ветеринарно-санитарной экспертизы, контроля качества и термического состояния мяса животных и птицы.

В настоящее время для идентификации охлажденного и дефростированного мяса применяется гистологический метод исследования образцов, включающий процедуры обезвоживания материала, изготовление срезов тканей с использованием санных или замораживающих микротомов, окраской препаратов и последующей микроскопии с целью обнаружения механических повреждений структуры мышечных волокон, характерных для сырья ранее замороженного в соответствии с ГОСТ 19496-2013 «Мясо и мясные продукты. Метод гистологического исследования», ГОСТ 31931-2012 «Мясо птицы. Методы гистологического и микроскопического анализа». (ГОСТ 19496-2013 «Мясо и мясные продукты. Метод гистологического исследования» - М.: Стандартинформ, 2014-12 с; ГОСТ 31931-2012 «Мясо птицы. Методы гистологического и микроскопического анализа» - М.: Стандартинформ, 2013-9 с).

Недостатками данного метода являются большие затраты времени (полный анализ осуществляется в течецие 30 дней), необходимость специализированного дорогостоящего оборудования и расходных материалов к нему, высокой квалификации персонала, поэтому гистологический метод анализа мяса доступен только в крупных аккредитованных лабораториях.

Данный метод выбран в качестве прототипа стандартизированной методики подготовки микропрепаратов мяса, включающий в себя фиксацию и длительное обезвоживание мышечной ткани, изготовление тончайших срезов с помощью микротома, и может быть использован в лабораториях ветеринарно-санитарной экспертизы напродовольственных рынках, производственных лабораториях.

Техническим результатом является создание экспресс-метода, позволяющего при предложенном способе изготовить микропрепараты мышечной ткани, по структуре которых установить термическое состояние мяса животных и птицы.

Технический результат достигается за счет того, что экспресс-метод изготовления микропрепаратов для идентификации, охлажденного и дефростированного мяса убойных животных и птицы путем микроскопии структурного строения мышечных волокон из исследуемого образца мяса вырезают продольные срезы, раздавливают их между стеклами компрессориума, после чего их окрашивают и оценивают термическое состояние мяса по наличию механических повреждений мышечных волокон.

Экспресс-метод изготовления микропрепаратов мышечной ткани включает в себя следующие операции:

1. Для изготовления мышечного среза потребуется образец исследуемого мяса 15-20 грамм. Кусочек мяса необходимо удерживать пинцетом. Под контролем зрения в образце находят направление мышечных волокон и по этому направлению изогнутыми ножницами выпуклой стороной кнаружи делают срез толщиной 2-3 мм и длиной 8-10 мм.

2. Полученные срезы в количестве 5-7 штук раскладывают на нижнем стекле компрессориума так, чтобы расстояние между ними составляло не менее 1 см., накрывают верхним стеклом, которое насколько это возможно не прижимая, притягивают на себя, далее сильно сжимают стекла, друг к другу и с усилием продвигают верхнее стекло от себя, после чего скрепляют стекла винтами. В результате движения с одновременным нажатием мышечная ткань раздавливается, а при сжатии винтами - фиксируется в таком положении.

3. Далее необходимо ослабить и раскрутить винты компрессориума и с помощью препаровальных игл снять раздавленные мышечные срезы в фарфоровую чашку, где произвести их окраску известными методами гематоксилин-эозином и смесью красителей раствора метиленового синего и эозина.

4. После окраски при помощи препаровальных игл мышечные срезы по одному помещают на предметные стекла, разравнивают, наносят 1-2 капли 50% водного раствора глицерина, накрывают покровным стеклом, слегка придавливая его препаровальными иглами. Подготовленный микропрепарат мышечной ткани рассматривают под увеличением окуляра 7 и 10, объектива - 8 и 40 светового микроскопа и оценивают наличие микроповреждений мышечных волокон, характерных для дефростированного мяса. Структура мышечных волокон охлажденного мяса, не подвергшегося замораживанию, не нарушена и целостная. (Рогов И.А., Забашта А.Г., Казюлин Г.П. «Технология мяса и мясных продуктов. Книга 1. Общая технология мяса» - М.: КолосС, 2009- стр. 565 (стр. 216-223)).

Пример 1. Из образца охлажденной говядины отбирают пробу массой 20 грамм, зафиксировав ее пинцетом. Изогнутыми ножницами, направляя их лезвия выпуклой стороной наружу, девают 5 тонких срезов по ходу мышечных волокон размером 1 см длиной и 2 мм толщиной. Далее раскладывают их при помощи препаровальных игл на нижнем стекле компрессориума с промежутками между ними не менее 1 см. Аккуратно накрывают срезы верхним стеклом, отводя его относительно нижнего стекла максимально на себя, прижимают стекла с усилием друг к другу и сдвигают их в обратном направлении, сохраняя сжатие до исходного положения. Стекла фиксируют винтами, тем самым придавая мышечным срезам тонкую необходимую конфигурацию, доступную для просмотра структуры мышц в световом луче микроскопа.

Далее раскручивают винты, осторожно препаровальными иглами снимают раздавленные срезы и помещают их на дно фарфоровой чашки, после чего подвергают их окраске их гематоксилин-эозином. Сначала в фарфоровую чашку со срезами добавляют 3-4 капли квасцового гематоксилина Эрлиха и выдерживают окраску им в течение 3-4 минут. Далее промывают срезы в воде в течение 2 минут до обесцвечивания смываемой воды и для наиболее полного удаления гематоксилина срезы опускают в 1% раствор соляной кислоты до появления слабо-розовой окраски, затем помещают их в 1% раствор аммиака до синего окрашивания жидкости и промывают водой в течение 2 мин. Затем мышечные срезы обрабатывают 1% водно-спиртовым раствором эозина в течение 1 мин и вновь промывают водой.

После этого окрашенные срезы при помощи препаровальных игл, разравнивая, по одному помещают на предметное стекло, на срезы добавляют по 1 капле 50% водного раствора глицерина и фиксируют мышечную ткань, покровным стеклом слегка придавливая его. Подготовленный таким образом микропрепарат доступен для микроскопии и оценки структуры элементов мышечных волокон.

Пример 2. Образец замороженного мяса птицы дефростируют при комнатной температуре. После размораживания отбирают пробу массой 20 грамм, зафиксировав ее пинцетом. Изогнутыми ножницами, направляя их лезвия выпуклой стороной наружу, делают 5 тонких срезов по ходу мышечных волокон размером 1 см длиной и 2 мм толщиной. Далее раскладывают их при помощи препаровальных игл на нижнем стекле компрессориума с промежутками между ними не менее 1 см. Аккуратно накрывают срезы верхним стеклом, отводя его относительно нижнего стекла, максимально на себя, прижимают стекла с усилием друг к другу и сдвигают их в обратном направлении, сохраняя сжатие до исходного положения. Стекла фиксируют винтами, тем самым придавая мышечным срезам тонкую необходимую конфигурацию, доступную для просмотра структуры мышц в световом луче микроскопа.

Далее раскручивают винты, осторожно препаровальными иглами снимают раздавленные срезы и помещают их на дно фарфоровой чашки, после чего подвергают их окраске смесью красителей, состоящей из 1% спиртового раствора метиленового синего, 1% спиртового раствора эозина и водного раствора метиленового синего с бурой в течение 30 минут, после чего промывают водой до обесцвечивания смываемой жидкости.

После этого окрашенные срезы при помощи препаровальных игл, разравнивая, по одному помещают на предметное стекло, на срезы добавляют по 1 капле 50% водного раствора глицерина и фиксируют мышечную ткань, покровным стеклом слегка придавливая его. Подготовленный таким образом микропрепарат доступен для микроскопии и оценки структуры элементов мышечных волокон.

Предложенный экспресс-метод изготовления микропрепаратов для идентификации, охлажденного и дефростированного мяса убойных животных и птицы позволяет в кратчайшие сроки изготовить нативные препараты мышечной ткани с целью оценки термического состояния мяса по наличию механических повреждений мышечных волокон.

1. Метод изготовления микропрепаратов для идентификации охлажденного и дефростированного мяса убойных животных и птицы путем микроскопии структурного строения мышечных волокон, характеризующийся тем, что из исследуемого образца охлажденного или замороженного мяса вырезают 5 продольных срезов размером 1 см длиной и 2 мм толщиной, раскладывают их на нижнем стекле компрессориума с промежутками не менее 1 см, накрывают срезы верхним стеклом, отводя его относительно нижнего стекла максимально на себя, прижимают стекла с усилием друг к другу, после чего сдвигают их в обратном направлении, сохраняя сжатие до исходного положения, стекла фиксируют винтами, придавая мышечным срезам тонкую конфигурацию, после чего раскручивают винты, снимают раздавленные срезы и помещают их на дно фарфоровой чашки, подвергают их окрашиванию, окрашенные срезы помещают на предметное стекло, на срезы добавляют по 1-2 капли 50% водного раствора глицерина и фиксируют мышечную ткань покровным стеклом, слегка придавливая его, после чего оценивают термическое состояние мяса по наличию механических повреждений мышечных волокон.

2. Метод по п. 1, отличающийся тем, что окрашивание срезов мышечной ткани убойных животных осуществляют добавлением 3-4 капель квасцового гематоксилина Эрлиха в фарфоровую чашку со срезами и выдерживанием, затем срезы промывают в воде до обесцвечивания смываемой воды, а для полного удаления гематоксилина срезы опускают в 1% раствор соляной кислоты до появления слабо-розовой окраски, затем помещают их в 1% раствор аммиака до синего окрашивания жидкости, промывают водой и обрабатывают 1% водно-спиртовым раствором эозина и вновь промывают водой.

3. Метод по п. 1, отличающийся тем, что окрашивание срезов мышечной ткани птицы осуществляют смесью красителей, состоящей из 1% спиртового раствора метиленового синего, 1% спиртового раствора эозина и водного раствора метиленового синего с бурой, после чего промывают водой до обесцвечивания смываемой жидкости.



 

Похожие патенты:
Способ относится к области ветеринарно-санитарной экспертизы продуктов животноводства и представляет собой способ определения содержания каррагинана в мясных продуктах, включающий отбор пробы, отличающийся тем, что отбирают пробу исследуемого продукта, равную 0,2 г, помещают в пробирку с 2 мл 10% раствора гидроксида калия, нагревают на кипящей водяной бане при 100°С в течение 30 мин при периодическом перемешивании, охлаждают до комнатной температуры, вносят 8 мл охлажденного 95° этилового спирта, интенсивно перемешивают и помещают в морозильную камеру при -10°С - -20°С на 1 час, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин, осадок высушивают в сушильном шкафу при 50-60°С, растворяют при 100°С в 1 мл дистиллированной воды, раствор охлаждается до комнатной температуры, приливают 1 мл 50% раствора свежеполученной цельной слюны человека, жидкости перемешивают и доводят рН до 7,3, раствор инкубируется при 37°С в течение 15 мин, повторно добавляется 8 мл 95° этилового спирта, помещают в морозильную камеру при -10°С - -20°С на 60 мин, осадок центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин, надосадочную жидкость декантируют, пробирку высушивают в сушильном шкафу при 50-60°С, осадок каррагинана отделяют от дна пробирки и взвешивают, количество каррагинана пересчитывают на 100 г мясного продукта.

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано для определения сроков годности натуральных рыбных консервов. Для этого натуральные рыбные консервы хранят при температуре 30-55°С, периодически определяя по балльной системе органолептические показатели, кислотное число жира и содержание амино-аммиачного азота.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к оценке качества мяса свиней. Способ заключается в измерении в течение 1 мин электрического сопротивления мышечной ткани путем введения в область длиннейшей мышцы спины в течение 1 ч после убоя животного на глубину 10 мм датчика типового моста переменного тока Е7-4, представляющего собой устройство из двух электродов диаметром 1,5 мм, закрепленных на расстоянии 10 мм друг от друга в плате из диэлектрика, и разделении мяса на группы качества NOR при R=86-385 Ом, с пороком мяса PSE при R≤85 Ом и DFD при R≥386 Ом.
Изобретение относится к ветеринарно-санитарной экспертизе, а именно к определению качества рыбы при диплостомозе. Для этого в качестве биологического объекта используют хрусталик глаза рыбы, который раздавливают между стеклами и берут пробу для посева.
Изобретение относится к методам определения состояния мяса перед замораживанием. Способ предусматривает выделение из замороженного мяса образца мышечной ткани, его экстрагирование хлорной кислотой и определение оптической плотности экстракта при длинах волн 260±3 нм и 250±3 нм, по соотношению которых судят о состоянии мяса перед замораживанием.

Изобретение относится к аналитическому приборостроению, в частности к устройствам ввода проб в хроматограф, а именно к технике микродозированных проб. Пробоотборник включает линию подвода газа-носителя, линию подвода исследуемого газа, линию подачи газа-носителя в хроматографическую колонку, линию сброса исследуемого газа, внешнюю петлю отбора пробы.

Группа изобретений относится к пищевой промышленности. Устройство (10) для повторного разогрева приготовленного продукта питания, например мяса, содержит контейнер (12) для размещения продукта питания, подлежащего повторному разогреву, опознающий модуль (16), нагревающий модуль (18) и блок (20) обработки.

Группа изобретений относится к птицеперерабатывающей промышленности, а именно к обработке забиваемой птицы, транспортируемой на линию забоя. Способ и устройство для обработки забиваемой птицы (1, 2, 3, 4), транспортируемой на линию (5) забоя бойни, позволяют определять в начале указанной линии забоя живой или мертвой была птица (1, 2, 3, 4) при поступлении на бойню, что включает определение параметров тела забиваемой птицы, когда после ее оглушения птица подвешена за лапы на линии (5) забоя, причем определяют спектр поглощения крови забиваемой птицы (1, 2, 3, 4).

Изобретение относится к медицинским токсикологическим исследованиям. Способ количественного определения N-нитрозоаминов включает проведение пробоподготовки, твердофазную экстракцию (ТФЭ) и выполнение определения конкретных нитрозоаминов по градуировочному графику, при пробоподготовке к 20 г пробы измельченных копченых мясопродуктов добавляют 200 мл предварительно нагретой до +55°С дистиллированной воды, производят настаивание в течение 30 минут и последующее фильтрование, к фильтрату добавляют 1,5 г калия гидрооксида, полученную смесь фильтрата и калия гидрооксида подвергают отгонке перегретым до tпарообразователя=100±5°С водяным паром с получением 70 см3 дистиллята, указанный дистиллят подвергают ТФЭ, полученные элюаты анализируют методом хромато-масс-спектрометрии с селективным выделением девяти N-нитрозоаминов.

Изобретение относится к мясной промышленности, а именно к оценке качества шпика, позволяющей определить его технологическую пригодность для производства мясных изделий.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии и биотехнологии. Предложены новые варианты антител или их антигенсвязывающих фрагментов, которые специфично связываются с ММР9 и содержат вариабельные области тяжелой и легкой цепей, каждая из которых характеризуется наличием по меньшей мере соответствующих CDRs1-3.

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способу количественного определения хлорорганических пестицидов и полихлорированных бифенилов во внутренних органах и тканях человека.

Изобретение относится к области оптического контроля трубопроводов. Устройство для определения присутствия жидкости в газовых трубопроводах высокого давления содержит смотровое стекло, обеспечивающее входное окно во внутреннюю часть трубопровода, один или большее количество источников света, светочувствительный датчик для приема и измерения света, отраженного из внутренней части трубопровода и прошедшего через смотровое стекло, и процессор для автоматического определения присутствия жидкости на основе измеренного отраженного света.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложено активируемое антитело, которое в активированном состоянии связывает рецептор эпидермального фактора роста (EGFR), включающее антитело, маскирующий фрагмент, который в нерасщепленном состоянии ингибирует связывание антитела с EGFR, и расщепляемый фрагмент, который функционирует в качестве субстрата для протеазы.

Изобретение относится к области биотехнологии. Описана группа изобретений, включающая применение тест-системы для изготовления набора для обнаружения и определения характеристики вируса гриппа типа «А» или типа «В», диагностическую тест-систему для обнаружения и определения характеристики вируса гриппа типа «А» или типа «В», набор для обнаружения и определения характеристики вируса гриппа типа «А» или типа «В».

Настоящее изобретение относится к способу, который, под контролем схемы управления, реализующей протокол смешивания, предусматривает всасывание реактивов из нескольких различных резервуаров для реактивов в накопительный канал.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для оценки систематической и случайной составляющих искажения сигнала датчика изображения. Раскрыт способ коррекции сигнала датчика изображения слабоконтрастных объектов в системах компьютерной микроскопии при онкологической диагностике, включающий получение цветного изображения медицинского препарата, расположенного на предметном столике микроскопа, посредством тринокуляра с цифровой камерой, после чего проводится получение серии данного изображения, с последующим усреднением в одно изображение, при этом число изображений в серии выбирается так, чтобы измеренная оценка стандартного отклонения яркости среднего значения пикселя составляло менее одной градации яркости, далее проводится получение N серий изображений без препарата для разных положений регулятора яркости микроскопа так, чтобы разность яркости изображения в соседних положениях регулятора яркости отличилась на значение, соответствующее примерно 1/N от максимально возможной яркости, а крайние позиции регулятора яркости соответствовали яркостям изображения, отличающимся от максимальной и соответственно минимальной яркости примерно на 1/(2N) от максимально возможной яркости изображения, с расчетом средней яркости по изображению для каждого из положений регуляторов яркости, после чего проводят корректировку искажений сигнала изображения.

Изобретение относится к области использования систем технического зрения для исследования деформаций и напряжений методом хрупких тензочувствительных покрытий с помощью системы технического зрения.

Группа изобретений относится к пробоотборникам для отбора проб из ванны расплавленного металла, в частности ванны расплавленной стали, для применений с высоким и низким содержанием кислорода.

Изобретение относится к области исследования загрязнений поверхности линейных сооружений и предназначено, в частности, для исследования загрязненной территории на поверхности участка железнодорожного пути.

Изобретение относится к области ветеринарно-санитарной экспертизы и контроля качества и термического состояния мяса животных и птицы. Метод изготовления микропрепаратов для идентификации охлажденного и дефростированного мяса убойных животных и птицы путем микроскопии структурного строения мышечных волокон характеризуется тем, что из исследуемого образца охлажденного или замороженного мяса вырезают 5 продольных срезов размером 1 см длиной и 2 мм толщиной, раскладывают их на нижнем стекле компрессориума с промежутками не менее 1 см, накрывают срезы верхним стеклом, отводя его относительно нижнего стекла максимально на себя, прижимают стекла с усилием друг к другу, после чего сдвигают их в обратном направлении, сохраняя сжатие до исходного положения, стекла фиксируют винтами, придавая мышечным срезам тонкую конфигурацию, после чего раскручивают винты, снимают раздавленные срезы и помещают их на дно фарфоровой чашки, подвергают их окрашиванию, окрашенные срезы помещают на предметное стекло, на срезы добавляют по 1-2 капли 50 водного раствора глицерина и фиксируют мышечную ткань покровным стеклом, слегка придавливая его, после чего оценивают термическое состояние мяса по наличию механических повреждений мышечных волокон. Метод позволяет в кратчайшие сроки изготовить нативные препараты мышечной ткани для оценки термического состояния мяса по наличию механических повреждений мышечных волокон. 2 з.п. ф-лы.

Наверх