Способ количественного определения в вакцинном препарате антигена, адсорбированного на частицах гидроксида алюминия

Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для количественного определения содержания антигена. Раскрыт способ количественного определения антигена в вакцине, представляющей собой смесь адсорбированных на частицах гидроксида алюминия рекомбинантных анатоксина аТох и белка наружной мембраны OprF, заключающийся в том, что проводят иммобилизацию свободного исследуемого антигена в лунках планшета для иммуноферментного анализа; к разведениям вакцинного препарата, содержащего частицы гидроксида алюминия с сорбированным на них исследуемым антигеном, добавляют моноклональные антитела, конъюгированные с пероксидазой, специфичные исследуемому антигену; отделяют центрифугированием несвязавшиеся антитела, конъюгированные с пероксидазой, от частиц гидроксида алюминия с образовавшимся иммунным комплексом; на третьем этапе надосадочную жидкость помещают в планшет с иммобилизованными исследуемыми антигенами, определяют количество несвязавшихся антител прямым твердофазным иммуноферментным методом, после чего определяют содержание антигена, адсорбированного на частицах гидроксида алюминия в составе вакцинного препарата, по остаточному количеству антител, не связавшихся с вакцинным препаратом. Изобретение обеспечивает определение антигенов в вакцинном препарате, исключая стадию десорбции антигенов на частицах гидроксида алюминия. 4 з.п. ф-лы., 3 ил., 2 табл., 1 пр.

 

Область техники

Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для количественного определения содержания антигена, адсорбированного на частицах гидроокиси алюминия, в рекомбинантной вакцине.

Уровень техники.

Вакцины, предназначенные для иммунизации людей, могут иметь в своем составе адъюванты, способствующие развитию протективного иммунного ответа. В качестве адъюванта часто используется гидроксид алюминия, и, таким образом, вакцинный препарат представляет собой антигены, адсорбированные на частицах гидроксида алюминия.

Контроль качества вакцинного препарата предполагает количественное определение содержания антигена в конечном продукте в сравнении с контрольным вакцинным препаратом с доказанной эффективностью действия.

Одним из подходов к количественному определению антигена в адсорбированной вакцине является проведение иммуноферментного анализа с предварительной десорбцией антигена с частиц гидроокиси алюминия. Для этой цели используют различные поверхностно-активные вещества, фосфат-анион. (Shanmugham R., Thirumeni N., Rao V.S. et al. Immunocapture Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Assessmentof In Vitro Potency of Recombinant Hepatitis В Vaccine. Clinical and vaccine immunology. 2010, 17 (8): 1252-1260).

Определение антигена в адсорбированной вакцине возможно также и без десорбции антигена с частиц гидроксида алюминия. Так, известен способ контроля содержания антигена, адсорбированного на частицах гидроксида алюминия с помощью конкурентного иммуноферментного анализа. Способ включает предварительную сенсибилизацию лунок планшета антигеном, после чего в опытных планшетах проводят инкубацию испытуемых и контрольных образцов, сорбированных на гидроксиде алюминия, со специфичными антителами в различных разведениях. На следующей стадии смесь вакцины с антителами переносят в сенсибилизированный планшет и инкубируют, а затем, после отмывки, инкубируют с антивидовыми антителами. Количество антитела, которое связывается с реакционным сосудом, обратно пропорционально количеству антигена, который присутствовал в реакционном растворе, что позволяет рассчитать количество антигена (патент ЕР 2343552 А1, 07.01.2000, Competitive enzyme immunoassay for assessing total antigen content of aluminum-adsobed antigens).

Наиболее близким аналогом заявленного изобретения является способ, описанный в патенте ЕР 2705365 B1 Immunoassay for direct determination of antigen content of products comprising adjuvant-coupled -antigen particles. Указанный метод предполагает определение аллергена в препарате, представляющем собой аллерген, адсорбированный на частицах гидроокиси алюминия по остаточному количеству антител, специфичных к аллергену, не связавшихся с вакцинным препаратом в процессе предварительной инкубации твердофазным иммуноферментным методом. После предварительной инкубации препарата со специфическими иммуноглобулинами не связавшиеся иммуноглобулины выявляются твердофазным иммуноферментным методом. В лунках 96-луночного планшета сорбируют антиген. Кроличьи антитела класса IgG, специфичные к аллергену, предварительно инкубируют с различными концентрациями аллергена, сорбированного на гидроокиси алюминия. После инкубации смесь вносят в лунки планшета, таким образом оставшиеся в растворе антитела связываются с антигеном на планшете. На следующей стадии после отмывки связанные антитела выявляют конъюгатом анти-кроличьих антител с пероксидазой хрена. Содержание связанных антител в опытных лунках сравнивают с лунками контроля, содержащего антитела к аллергену, без аллергена, сорбированного на алюминии.

Недостатком способа является наличие стадии внесения антивидовых антител при проведении иммуноферментного анализа, что увеличивает общее время определения антигена, а также возможность влияния частиц гидроксида алюминия на результаты этого определения, поскольку неполное удаление частиц геля гидроксида алюминия в процессе отмывки может приводить к изменению оптической плотности исследуемого раствора при проведении ИФА, и, как следствие, к получению ложноположительных результатов, а также затруднять диффузию моноклональных антител, принимающих участие в иммунохимической реакции.

Задачей изобретения является разработка метода определения содержания антигенных компонентов вакцины, адсорбированных на гидроокиси алюминия.

Техническим результатом изобретения является возможность определения антигенов в вакцинном препарате, адсорбированных на частицах гидроксида алюминия, исключая стадию десорбции антигенов с этих частиц.

С помощью предлагаемого изобретения возможно определение антигена в исследуемой вакцине по остаточному количеству антител, не связавшихся с вакцинным препаратом в процессе предварительной инкубации. Использование специфических моноклональных антител, конъюгированных с пероксидазой хрена, позволяет проводить выявление специфичных антигенов прямым твердофазным иммуноферментным методом только в одну стадию. Заявленный способ также включает стадию центрифугирования, благодаря чему отделение комплексов антитело-антиген-гидроксид алюминия не занимает много времени, а также сводит к минимуму влияние гидроксида алюминия на получаемые результаты.

Для решения поставленной задачи мы предлагаем способ количественного определения адсорбированного на частицах гидроксида алюминия антигена, заключающийся в том, что на первом этапе осуществляют предварительную иммобилизацию свободного исследуемого антигена в лунках 96-луночного планшета для иммуноферментного анализа, на втором этапе к разведениям вакцинного препарата, содержащего частицы гидроксида алюминия с сорбированным на них исследуемым антигеном добавляют моноклональные антитела к данному антигену, конъюгированные с пероксидазой, на третьем этапе производят отделение центрифугированием не связавшихся антител, конъюгированных с пероксидазой, от частиц гидроксида алюминия с образовавшимся иммунным комплексом, на четвертом этапе отделяют надосадочную жидкость и помещают ее в планшет с иммобилизованным исследуемым антигеном, определяют количество не связавшихся антител прямым твердофазным иммуноферментным методом, после чего определяют содержание антигена, адсорбированного на частицах гидроксида алюминия в составе вакцинного препарата.

В частном случае изобретения содержание антигена определяют по калибровочному графику, построенному для вакцинного препарата с известным содержанием антигена.

В частном случае антиген представляет собой рекомбинантные анатоксин и OprF P.aeruginosa.

Краткое описание чертежей и иных поясняющих материалов

Фиг. 1. Схематическое представление изобретения

I - стадия инкубации антигена, сорбированного на частицах гидроксида алюминия и специфических антител, меченых пероксидазой хрена,

1- частицы гидроксида алюминия

II - стадия отделения комплекса антиген-Аl(ОН)3-антитело-ПХ от несвязавшихся антител, меченых ПХ, центрифугированием.

III - стадия определения несвязавшихся антител, меченых ПХ, прямым твердофазным иммуноферментным методом.

Фиг.2. Калибровочный график с обратной зависимостью для количественного определения OprF в вакцинном препарате, где по оси абсцисс - оптическая плотность (ОП),

по оси ординат - концентрация OprF в РВС, мкг/мл.

Фиг. 3. Калибровочный график с обратной зависимостью для количественного определения анатоксина аТох в вакцинном препарате, где по оси абсцисс - ОП, по оси ординат - концентрация анатоксина аТох в РВС, мкг/мл

Таблица 1. Определение количественного содержания OprF в двух сериях вакцины.

Таблица 2. Определение количественного содержания анатоксина в двух сериях вакцины.

Осуществление изобретения

В 96-луночные планшеты (Corning, США) вносили по 100 мкл изучаемые антигены в 0,1 М карбонатно-бикарбонатном буфере рН 9,6 в концентрации 5 мкг/мл. Планшеты выдерживали в течение ночи при температуре 4-8°С. После инкубации планшеты промывали один раз деионизованной водой, далее на 1 час при комнатной температуре вносили блокирующий раствор, представляющий собой 0,02 М фосфатный буферный раствор рН 7,2; содержащий 5% сахарозы, 0,09% казеината натрия, 0,05% Tween 20. После удаления блокирующего раствора планшеты высушивали в ламинарном потоке в течение 2 часов, запаивали в полиэтиленовые пакеты и хранили при 4-8°С до использования.

Выявление изучаемого антигена в вакцинных препаратах проводили следующим образом. Параллельно анализировали разведения стандартной и исследуемой серии вакцины. На первой стадии в пробирках смешивали конъюгат моноклональных антител с пероксидазой хрена (ПХ), специфичных к изучаемому антигену, с разными разведениями вакцинных препаратов (от 0,5 до 10 мкг/мл в пересчете изучаемый антиген), и выдерживали пробы при температуре 22±4°С в течение 40 мин, периодически перемешивая. Образовавшийся комплекс антител, меченных пероксидазой, с антигеном, сорбированным на частицах гидроксида алюминия, отделяли центрифугированием. Не связавшиеся с антигеном антитела, меченные ПХ, оставались в надосадочных жидкостях, которые исследовали методом иммуноферментного анализа.

Для постановки ИФА использовали полистироловые планшеты, сенсибилизированные изучаемым антигеном. В лунки планшета вносили по 100 мкл надосадочных жидкостей, выдерживали на шейкере при температуре 37°С, скорости вращения 500 об/мин в течение 30 мин. После отмывки вносили по 100 мкл 33 мМ цитратного буферного раствора рН 4,0, содержащего 0,01% перекиси водорода и 0,5 мМ 3,3',5,5'-тетраметилбензидина. Через 15 мин реакцию останавливали добавлением 50 мкл 2 N серной кислоты, измеряли оптическую плотность (ОП) в двухволновом режиме при основной длине волны 450 нм и длине волны сравнения 680 нм.

Строили калибровочный график зависимости оптической плотности от концентрации изучаемого антигена в стандартной серии. Регистрируемая оптическая плотность была обратно пропорциональна концентрации антигена в анализируемых образцах.

Пример.

В 96-луночные планшеты (Corning, США) вносили по 100 мкл рекомбинантных анатоксина или OprF в 0,1 М карбонатно-бикарбонатном буфере рН 9,6 в концентрации 5 мкг/мл. Планшеты выдерживали в течение ночи при температуре 4-8°С. После инкубации планшеты промывали один раз деионизованной водой, далее на 1 час при комнатной температуре вносили блокирующий раствор, представляющий собой 0,02 М фосфатный буферный раствор рН 7,2; содержащий 5% сахарозы, 0,09% казеината натрия, 0,05% Tween 20. После удаления блокирующего раствора планшеты высушивали в ламинарном потоке в течение 2 часов, запаивали в полиэтиленовые пакеты и хранили при 4-8°С до использования.

Количественное определение адсорбированного на гидроокиси алюминия антигена в составе вакцинного препарата проводили с использованием стандартной серии вакцины с содержанием аТох - 100 мкг/мл и OprF - 50 мкг/мл.

Выявление анатоксина и OprF в вакцинных препаратах проводили следующим образом. Параллельно анализировали разведения стандартной и исследуемой серии вакцины. На первой стадии в пробирках смешивали конъюгат моноклональных антител с пероксидазой хрена, специфичных к анатоксину или OprF, с разными разведениями вакцинных препаратов (от 0,5 до 10 мкг/мл в пересчете на анатоксин или на OprF), и выдерживали пробы при температуре 22±4°С в течение 40 мин, периодически перемешивая. Образовавшийся комплекс антител, меченных пероксидазой, с антигеном, сорбированным на частицах гидроксида алюминия, отделяли центрифугированием. Не связавшиеся с антигеном антитела, меченные ПХ, оставались в надосадочных жидкостях, которые исследовали методом иммуноферментного анализа.

Для постановки ИФА использовали полистироловые планшеты, сенсибилизированные аТох или OprF. В лунки планшета вносили по 100 мкл надосадочных жидкостей, выдерживали на шейкере при температуре 37°С, скорости вращения 500 об/мин в течение 30 мин. После отмывки вносили по 100 мкл 33 мМ цитратного буферного раствора рН 4,0, содержащего 0,01% перекиси водорода и 0,5 мМ 3,3',5,5'-тетраметилбензидина. Через 15 мин реакцию останавливали добавлением 50 мкл 2 N серной кислоты, измеряли оптическую плотность (ОП) в двухволновом режиме при основной длине волны 450 нм и длине волны сравнения 680 нм.

Строили калибровочный график зависимости оптической плотности от концентрации рекомбинантных анатоксина или OprF в стандартной серии. Регистрируемая оптическая плотность была обратно пропорциональна концентрации антигена в анализируемых образцах.

На основании установленной стандартной серии произведено количественное содержание OprF в двух сериях вакцины.

В каждом эксперименте на основании серий разведений стандартной серии были построены калибровочные графики зависимости оптической плотности от количественного содержания OprF в анализируемой пробе с учетом обратной зависимости. Калибровочные образцы представляли собой последовательные разведения в диапазоне концентраций 0,075-10 мкг/мл. Для определения приемлемости интерполяции, на основании установленной стандартной серии проводили обратный пересчет концентраций калибровочных образцов. Коэффициент вариации (KB, %) рассчитывали по ОП в четырех повторах. Типичный калибровочный график представлен на рис 2., результаты определения - в таблице 1.

На основании установленной стандартной серии произведено определение количественного содержания анатоксина в двух сериях вакцины.

В каждом эксперименте на основании серий разведений стандартной серии были построены калибровочные графики зависимости оптической плотности от количественного содержания анатоксина в анализируемой пробе с учетом обратной зависимости. Калибровочные образцы представляли собой последовательные разведения в диапазоне концентраций 0,5-10 мкг/мл. Для определения приемлемости интерполяции, на основании установленной стандартной серии проводили обратный пересчет концентраций калибровочных образцов. Коэффициент вариации (KB, %) рассчитывали по ОП в четырех повторах. Типичный калибровочный график представлен на рис 3., результаты определения - в таблице 2.

Таким образом, преимуществами предлагаемого метода являются исключение стадии десорбции и использование специфических моноклональных антител, конъюгированных с пероксидазой корня хрена, что обеспечивает возможность быстрого количественного определения рекомбинантных анатоксина и OprF в вакцине, представляющей собой смесь адсорбированных на частицах гидроксида алюминия анатоксина и OprF.

1. Способ количественного определения антигена в вакцине, представляющей собой смесь адсорбированных на частицах гидроксида алюминия рекомбинантных анатоксина аТох и белка наружной мембраны OprF, заключающийся в том, что:

а) предварительно проводят иммобилизацию свободного исследуемого антигена в лунках планшета для иммуноферментного анализа внесением его в каждую лунку по 100 мкл в 0,1 М карбонатно-бикарбонатном буфере рН 9,6 в концентрации 5 мкг/мл;

б) на первом этапе к разведениям вакцинного препарата, содержащего частицы гидроксида алюминия с сорбированным на них исследуемым антигеном, добавляют моноклональные антитела, конъюгированные с пероксидазой, специфичные исследуемому антигену, и выдерживают при температуре 22±4°С в течение 40 мин, периодически перемешивая;

в) на втором этапе отделяют центрифугированием несвязавшиеся антитела, конъюгированные с пероксидазой, от частиц гидроксида алюминия с образовавшимся иммунным комплексом;

г) на третьем этапе надосадочную жидкость помещают в планшет с иммобилизованными исследуемыми антигенами, определяют количество несвязавшихся антител прямым твердофазным иммуноферментным методом, после чего определяют содержание антигена, адсорбированного на частицах гидроксида алюминия в составе вакцинного препарата, по остаточному количеству антител, не связавшихся с вакцинным препаратом.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что серии вакцинного препарата исследуются параллельно со стандартной серией с известным содержанием антигена.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что содержание антигена, адсорбированного на частицах гидроксида алюминия, в составе вакцинного препарата определяют по калибровочному графику, построенному для вакцинного препарата с известным содержанием антигена.

4. Способ по п. 2, отличающийся тем, что калибровочные образцы представляют собой последовательные разведения препарата стандартной серии вакцины, содержащей рекомбинантный OprF P. aeruginosa в диапазоне концентраций 0,075-10 мкг/мл.

5. Способ по п. 2, отличающийся тем, что калибровочные образцы представляют собой последовательные разведения препарата вакцины, содержащей рекомбинантный анатоксин P. aeruginosa в диапазоне концентраций 0,5-10 мкг/мл.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии. Описана группа изобретений, включающая моноклональное антитело или его антиген-связывающий фрагмент, которое связывается с внеклеточным доменом протеинтирозинфосфатазы σ рецепторного типа человека (PTPRS человека) на плазмоцитоидной дендритной клетке (варианты), гибридому для получения вышеуказанного антитела, способ получения клетки, которая продуцирует антитело, способ получения антитела, распознающего PTPRS человека, применение клетки животного, которая сохраняет способность экспрессировать эндогенный полинуклеотид, который кодирует аминокислотную последовательность, включающую внеклеточный домен PTPRS человека, или фракцию мембран этой клетки для получения моноклонального антитела, способ детекции плазмацитоидной дендритной клетки, применение антитела или его фрагмента для детекции плазмоцитоидной дендритной клетки, способ подавления активности плазмацитоидной дендритной клетки ex vivo, применение антитела или его фрагмента для лечения заболевания, связанного с рDC и для лечения аутоиммунного заболевания, связанного с IFNальфа.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования эффективности неоадъювантной химиотерапии при тройном негативном раке молочной железы.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для прогнозирования эффективности неоадъювантной химиотерапии при тройном негативном раке молочной железы.
Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, биохимии, имплантологии, и может быть использовано для оценки интеграции остеозамещающего материала в эксперименте.
Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, биохимии, имплантологии, и может быть использовано для оценки интеграции остеозамещающего материала в эксперименте.

Группа изобретений относится к биологии и может быть использована для отслеживания миграции клеток при изучении поведения животных. Для этого в среду для культивирования эукариотических клеток добавляют люциферин.

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии и гематологии, и может быть использовано для прогнозирования гнойного пиелонефрита путем исследования венозной крови.

Изобретение относится к области медицины, в частности к дерматологии, и предназначено для прогнозирования риска возникновения кожной патологии в виде меланоза или дисхромии, ассоциированной с избыточной контаминацией мышьяком.

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития окклюзий ретинальных вен у женщин после перенесенной преэклампсии.

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития окклюзий ретинальных вен у женщин после перенесенной преэклампсии.

Группа изобретений относится к биологии и может быть использована для отслеживания миграции клеток при изучении поведения животных. Для этого в среду для культивирования эукариотических клеток добавляют люциферин.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложены система и способ секвенирования синтезом (SBS).

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ определения фактора Виллебранда, включающий использование иммуногистохимии, отличающийся тем, что мазки периферической крови от животных, фиксированные 96% спиртом, после 5-минутной промывки в дистиллированной воде переносят в 3%-ный водный раствор перекиси водорода на 10 мин при комнатной температуре, затем смывают дистиллированной водой и помещают в 0,01 М фосфатно-солевой буфер с рН 7,4 на 5-10 мин, наносят 5%-ный бычий сывороточный альбумина 10 мин, на одну из областей мазка наносят первичные поликлональные кроличьи антитела к фВ, а на вторую область мазка наносят фосфатно-солевой буфер, помещают предметные стекла с мазками во влажную камеру и ставят в термостат с температурой 27°С на 24 ч, затем смывают антитела, помещают стекла в сосуд со свежей порцией буфера на 5-10 мин, наносят вторичные кроличьи антитела, ставят в термостат с температурой 27°С на 35 мин, смывают антитела и наносят рабочий раствор 3,3-диаминобензидина, в течение 1-3 мин процесс контролируют, чтобы остановить реакцию до появления неспецифического фона, затем промывают препараты в 2-3 порциях дистиллированной воды по 3-5 мин в каждой, мазки докрашивают азур-эозином по Май-Грюнвальду или по Романовскому, после обезвоживания в спиртах восходящей крепости препараты просветляют в ксилоле и заключают в полистерол, фактор Виллебранда определяют по его преципитатам черно-коричневого цвета в виде мелкой зернистости и многочисленных агглютинированных тромбоцитов.

Изобретение относится к устройствам для иммунохроматографического анализа и может быть использовано в биотехнологии и медицинской диагностике для полуколичественного визуального определения биологически активных веществ.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа детектирования в исследуемом образце присутствия и/или свойств связывания анализируемых антител, способных реагировать с одной или более антигенными молекулами, включающего (a) обеспечение первой антигенной молекулы, выбранной из CRF; (b) обеспечение второй антигенной молекулы, выбранной из CRF; (c) приведение первых антигенных молекул и вторых антигенных молекул в контакт с образцом с образованием комплексов, содержащих [первую антигенную молекулу]-[анализируемое антитело]-[вторую антигенную молекулу]; (d1) обеспечение средства иммобилизации и/или (d2) обеспечение второго средства мечения; и (e) обеспечение первого средства мечения; и (g) детектирование присутствия комплексов, образованных во время или после этапа (c).

Группа изобретений относится к устройству и способу анализа, предоставляющим пользователю индикацию того, что используется достаточное количество анализируемого образца для точного результата.

Группа изобретений относится к области ветеринарии, а именно к диагностике, и может быть использована для выявления антигенов Toxoplasma gondii или антител к ним в сыворотке или плазме крови животных, а также в материале, полученном от животных методом биопсии, и в тканях и органах животных после убоя.

Изобретение относится к области иммунологии, биотехнологии и клинической лабораторной диагностики и может найти применение для определения индивидуальных рисков возникновения заболеваний, связанных с воздействием химических канцерогенов окружающей среды.

Изобретение относится к области иммунологии, биотехнологии и клинической лабораторной диагностики и может найти применение для определения индивидуальных рисков возникновения заболеваний, связанных с воздействием химических канцерогенов окружающей среды.

Группа изобретений относится к обнаружению присутствия сердечных биологических маркеров в крови. Раскрыт тестовый аппарат, содержащий тестовую полоску, метку радиочастотной идентификации (RFID) и корпус для тестовой полоски.

Изобретение относится к области биотехнологии. Описана группа изобретений, включающая моноклональное антитело или его антиген-связывающий фрагмент, которое связывается с внеклеточным доменом протеинтирозинфосфатазы σ рецепторного типа человека (PTPRS человека) на плазмоцитоидной дендритной клетке (варианты), гибридому для получения вышеуказанного антитела, способ получения клетки, которая продуцирует антитело, способ получения антитела, распознающего PTPRS человека, применение клетки животного, которая сохраняет способность экспрессировать эндогенный полинуклеотид, который кодирует аминокислотную последовательность, включающую внеклеточный домен PTPRS человека, или фракцию мембран этой клетки для получения моноклонального антитела, способ детекции плазмацитоидной дендритной клетки, применение антитела или его фрагмента для детекции плазмоцитоидной дендритной клетки, способ подавления активности плазмацитоидной дендритной клетки ex vivo, применение антитела или его фрагмента для лечения заболевания, связанного с рDC и для лечения аутоиммунного заболевания, связанного с IFNальфа.

Изобретение относится к иммунологии и может быть использовано для количественного определения содержания антигена. Раскрыт способ количественного определения антигена в вакцине, представляющей собой смесь адсорбированных на частицах гидроксида алюминия рекомбинантных анатоксина аТох и белка наружной мембраны OprF, заключающийся в том, что проводят иммобилизацию свободного исследуемого антигена в лунках планшета для иммуноферментного анализа; к разведениям вакцинного препарата, содержащего частицы гидроксида алюминия с сорбированным на них исследуемым антигеном, добавляют моноклональные антитела, конъюгированные с пероксидазой, специфичные исследуемому антигену; отделяют центрифугированием несвязавшиеся антитела, конъюгированные с пероксидазой, от частиц гидроксида алюминия с образовавшимся иммунным комплексом; на третьем этапе надосадочную жидкость помещают в планшет с иммобилизованными исследуемыми антигенами, определяют количество несвязавшихся антител прямым твердофазным иммуноферментным методом, после чего определяют содержание антигена, адсорбированного на частицах гидроксида алюминия в составе вакцинного препарата, по остаточному количеству антител, не связавшихся с вакцинным препаратом. Изобретение обеспечивает определение антигенов в вакцинном препарате, исключая стадию десорбции антигенов на частицах гидроксида алюминия. 4 з.п. ф-лы., 3 ил., 2 табл., 1 пр.

Наверх