Способ регулирования активации нейтрофилов в модели in vitro

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для регуляции активации нейтрофилов путем применения лития хлорида. Это позволяет снизить уровень активации нейтрофилов за счет снижения уровня экспрессии молекул CD11b и CD66b. 2 табл., 2 ил.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к средствам терапевтического воздействия, основным компонентом которого является хлорид лития (LiCl). Изобретение может быть использовано для дальнейшей разработки медикаментозных средств и способов лечения больных с патологическими состояниями, при которых наблюдается воспалительная гиперактивация нейтрофилов: синдром системного воспалительного ответа (ССВО) после операций на сердце и сосудах, тяжелая сочетанная травма, тяжелый сепсис и септический шок, синдром ишемии-реперфузии тканей при инсульте и инфаркте миокарда, отек легкого и острый респираторный дистресс-синдром (ОРДС), ожоговая болезнь.

Уровень техники

Неразрешаемое воспаление, сопровождаемое гибелью множества клеток и развитием полиорганной недостаточности, несовершенные иммунные реакции и повышенная восприимчивость к инфекционным возбудителям являются основными причинами, лежащими в основе высокого риска смерти, характерного для критических состояний.

В настоящее время известно несколько терапевтических средств и способов, направленных на решение указанной задачи путем устранения избыточной воспалительной активации нейтрофилов.

Известно терапевтическое средство и метод лечения ССВО и других заболеваний, сопровождаемых активацией нейтрофилов (US 2016146835). Из описания указанного патента известно, что богатый гистидином гликопротеин (HRG) может выступать в роли регулятора активации нейтрофилов и приводить к меньшей выраженности ССВО. Его уровень в крови пациентов может быть предиктором неблагоприятного исхода при сепсисе.

Кроме того, известно, что использование пептидов от 10 до 19 аминокислот от NH2 конца белка СТАР-III может выступать в роли регулятора активации нейтрофилов и приводить к меньшей выраженности ССВО (WO 9205796).

Известно также, что использование пептидов LALF31-52 может выступать в роли регулятора активации нейтрофилов и приводить к меньшей выраженности ССВО. Цитопротекторная фармацевтическая комбинация, содержащая указанные пептиды может быть использована в профилактике и лечении ССВО (СА 2635342).

Из описания патента TW 201534322 (FPR1 antagonist derivatives and use thereof) известно, что дипептидные деривативы (dipeptide derivatives) могут выступать в роли антагонистов рецепторов FPR1 на поверхности нейтрофилов и блокировать активацию нейтрофилов, что приводит к уменьшению выраженности ССВО. Однако, указанный способ предполагает блокаду только воспалительного ответа на формил-пептиды, в отличие от заявляемого способа, который предполагает блокаду воспалительного ответа не только на формил-пептиды цитозоля бактериальной клетки, но и блокаду воспалительного ответа на компоненты стенки грамм-отрицательной бактерии (LPS) липополисахарида.

Из анализа представленных аналогов очевидно, что поиск средств для уменьшения воспалительной активации нейтрофилов и меньшей выраженности ССВО чрезвычайно актуален для молекулярной биологии и медицины, но известные препараты представляют собой пептиды или белки, что предполагает достаточную дороговизну и сложность белкового синтеза, а также возможные аллергические и пирогенные реакции на белок в условиях целостного организма.

Наиболее близким к заявляемому способу по совокупности существенных признаков является способ предотвращения воспалительной активации нейтрофилов, раскрытый в патенте TW 201825113 (Neutrophil activation regulator). Принят в качестве прототипа.

Способ-прототип относится к применению тромбин-подобного фермента (батроксобин) в качестве регулятора активации нейтрофилов путем инактивации интегрина Мас-1 на поверхности нейтрофилов, который ответственен за связывание с молекулами клеточной адгезии ICAM-1 и приводит к угнетению трансэндотелиальной миграции нейтрофилов, что уменьшает инфильтрацию нейтрофилами тканей органов и может быть использовано в клинической практике для лечения сепсиса, ССВО при панкреатите и ОРДС.

Заявляемый способ основан на ином молекулярном механизме действия, который состоит в том, что хлорид лития фосфорилирует (инактивирует) ГСК-3 бета и вызывает не только инактивацию интегрина CD-11b, также ответственного за связывание с молекулами клеточной адгезии ICAM-1, но и инактивацию CD-66b, который регулирует выход из цитозоля на поверхность нейтрофилов гранул с протеолитическими ферментами, которые могут повреждать ткани при воспалении.

Из уровня техники неизвестно примеров использования ионов лития в качестве средства для лечения критических состояний, ассоциированных с воспалительной активацией нейтрофилов.

Раскрытие изобретения

Заявляемое изобретение направлено на решение задачи подавления воспалительной гиперактиваци нейтрофилов.

Активация нейтрофилов - обязательный этап и чувствительный маркер ССВО - состояния, с развитием которого связывается последующее возникновение полиорганной недостаточности - основного показания для пребывания пациентов в отделении реанимации. Поиск препаратов, способных предотвратить развитие ССВО и снизить летальность, остается актуальность задачей анестезиологии-реаниматологии.

ССВО - состояние, возникающее в ответ на различные повреждающие воздействия, как инфекционного (бактериальные возбудители), так и неинфекционного (травмы, ожоги, оперативные вмешательства большого объема) характера и проявляющееся в гиперпродукции так называемых провоспалительных цитокинов, их проникновении через гистогематические барьеры с последующей инфильтрацией лейкоцитами и цитокинами тканей органов-мишеней (Alexander JJ, Jacob A, Cunningham Р, Hensley L, Quigg RJ. TNF is a key mediator of septic encephalopathy acting through its receptor, TNF receptor-1. Neurochem Int. 2008; 52: 447-56. doi: 10.1016/j.neuint.2007.08.00). Последнее приводит к развитию полиорганной недостаточности, являющейся основной причиной гибели пациентов в палатах интенсивной терапии.

Важнейшую роль в развитии, регуляции и разрешении воспаления играют нейтрофилы - клетки врожденного иммунитета. Иммунный ответ на повреждение тканей или инфекцию начинается с секреции нейтрофилами провоспалительных и антивоспалительных цитокинов, что направлено на удаление повреждающего агента и восстановление гомеостаза.

Чувствительными маркерами системного воспалительного ответа являются молекулы CD11b и CD66b, которые находятся во внутриклеточных гранулах нейтрофилов. При действии воспалительных стимулов внутриклеточные гранулы сливаются с цитоплазматической мембраной и эти молекулы (CD11b и CD66b) экспонируются на поверхности клеток. Происходит процесс дегрануляции. CD11b взаимодействует с рецепторами ICAM-1 на эндотелиальных клетках, что обеспечивает адгезию нейтрофилов и последующую их миграцию через эндотелиальный барьер к очагу воспаления, в то время как CD66b связан с агрегацией нейтрофилов и выходом из цитозоля на поверхность нейтрофилов гранул с протеолитическими ферментами, которые могут повреждать ткани при воспалении.

Количественный анализ молекул CD11b и CD66b широко используется в клинической диагностике: известно, что их уровень значительно повышен у пациентов с различными видами бактериальных инфекций (Lilius Е.М. Nuutila J. Bacterial infections, DNA virus infections, and RNA virus infections manifest differently in neutrophil receptor expression. ScientificWorldJournal. 2012; 2012: 527347. doi: 10.1100/2012/5273478) и сепсисе, поскольку имеются многочисленные данные о том, что экспрессия CD11b и CD66b значительно увеличивается при сепсисе и ССВО (Muller Kobold A, Tulleken J Е, Zijlstra J G, Sluiter W, Hermans J. Leukocyte activation in sepsis; correlations with disease state and mortality. Intensive Care Med. 2000 Jul; 26 (7): 883-92).

Однако при определенных условиях возникает избыточный иммунный ответ, сопровождающийся гиперактивацией нейтрофилов и других клеток иммунной системы, нарушением их миграции, избыточным количеством провоспалительных цитокинов в крови, так называемой «цитокиновой бурей», последующим «иммунным параличом», что и приводит к увеличению числа осложнений и повышению летальности у пациентов. (Alexander JJ, Jacob A, Cunningham Р, Hensley L, Quigg RJ. TNF is a key mediator of septic encephalopathy acting through its receptor, TNF receptor-1. Neurochem Int. 2008; 52: 447-56. doi: 10.1016/j.neuint.2007.08.00).

Известные к настоящему времени средства, используемые для уменьшения воспалительной активации нейтрофилов и меньшей выраженности ССВО, представляют собой пептиды или белки, что предполагает достаточную дороговизну и сложность белкового синтеза, а также возможные аллергические и пирогенные реакции на белок в условиях целостного организма.

В частности, дипептидные деривативы (dipeptide derivatives) могут выступать в роли антагонистов рецепторов FPR1 на поверхности нейтрофилов и блокировать активацию нейтрофилов, что приводит к уменьшению выраженности ССВО. Однако, результатом воздействия указанных соединений является блокада воспалительного ответа только на формил-пептиды, в отличие от заявляемого способа, который предполагает блокаду воспалительного ответа не только на формил-пептиды цитозоля бактериальной клетки, но и блокаду воспалительного ответа на компоненты стенки грамм-отрицательной бактерии (LPS) липополисахарида.

В случае применения тромбин-подобного фермента (батроксобина) в качестве регулятора активации нейтрофилов путем инактивации интегрина Мас-1 на поверхности нейтрофилов, который ответственен за связывание с молекулами клеточной адгезии ICAM-1, происходит угнетение трансэндотелиальной миграции нейтрофилов, что уменьшает инфильтрацию нейтрофилами тканей органов и может быть использовано в клинической практике для лечения сепсиса, ССВО при панкреатите и ОРДС.

Заявляемый способ основан на ином молекулярном механизме действия, который состоит в том, что хлорид лития фосфорилирует (инактивирует) ГСК-3 бета и вызывает не только инактивацию интегрина CD-11b, также ответственного за связывание с молекулами клеточной адгезии ICAM-1, но и инактивацию CD-66b, который регулирует выход из цитозоля на поверхность нейтрофилов гранул с протеолитическими ферментами, которые могут повреждать ткани при воспалении.

Препарат, содержащий лития хлорид, принадлежит к веществам, обладающим выраженными цитопротективными свойствами вследствие способности фосфорилировать Сер9 молекулы киназы 3-бета гликогенсинтетазы (GSK3beta), приводящей к ингибиции активности фермента (Klein, P.S., and Melton, D.A. (1996) A molecular mechanism for the effect of lithium on development, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93, 8455-8459).

Авторами заявляемого способа показано, что лития хлорид оказывает противовоспалительное действие на нейтрофилы человека. Такое защитное действие ограничивает гиперпродукцию провоспалительных цитокинов, их проникновение через гистогематические барьеры с последующей инфильтрацией лейкоцитами и цитокинами тканей органов-мишеней, которое приводит к развитию полиорганной недостаточности при критических состояниях, включающих, но не ограничивающихся ССВО после операций на сердце и сосудах, ССВО при тяжелой сочетанной травме сепсисом, отеком легкого и ОРДС и тяжелыми ожогами.

В описанных ниже экспериментах показано, что лития хлорид снижает уровень активации нейтрофилов, оказывая противоспалительный эффект на предварительно активированные компонентами бактерий (ЛПС, fMLP) нейтрофилы и способствует снижению уровня экспрессии молекул CD11b и CD66b на поверхности интактных нейтрофилов, ингибируя процесс активации и дегрануляции.

Проведенное изучение влияния бактериальных компонентов и лития хлорида на фосфорилирование ГСК-3бета в нейтрофилах методом вестерн-блоттинга показало, что лития хлорид модулирует воспалительную активацию нейтрофилов бактериальными компонентами через фосфорилирование ГСК-3бета в нейтрофилах.

Использование заявляемого способа позволяет достичь нескольких технических и экономических результатов:

• устранение избыточной воспалительной активации нейтрофилов, уменьшение проницаемости эндотелия;

• уменьшение инфильтрации тканей органов-мишеней и как следствие модулирование воспалительного ответа организма как на инфекционные, так и неинфекционные повреждающие агенты;

• повышение терапевтического эффекта за счет применения препарата, который воздействует на два независимых механизма активации;

• снижение себестоимости фармацевтических препаратов, изготовленных на основе солей лития, по сравнению с препаратами, содержащими пептиды или белки, для которых общеизвестны их дороговизна и сложность белкового синтеза, а также возможные аллергические и пирогенные реакции на белок в условиях целостного организма.

Указанные технические и экономические результаты при осуществлении изобретения достигаются за счет того, что также как в известном способе регулирование активации нейтрофилов осуществляют путем ингибирования трансэндотелиальной миграции нейтрофилов.

Особенность заявляемого способа заключается в том, что в качестве регулятора активации нейтрофилов использован лития хлорид.

Краткое описание чертежей

На Фиг. 1 представлена диаграмма, отражающая понижение экспрессии маркеров дегрануляции CD11b и CD66b под воздействием хлорида лития 9 мМ в предактивированных fMLP 100 нМ нейтрофилах человека.

На Фиг. 2 представлена диаграмма, отражающая понижение экспрессии маркеров дегрануляции CD11b и CD66b под воздействием хлорида лития 9 мМ в предактивированных ЛПС 100 нг/мл нейтрофилах человека

Описание процедуры эксперимента

Исследование было проведено с использованием нейтрофилов, выделенных из крови пяти здоровых доноров, часть из которых активировали с помощью 100 mkM fMLP и 100 нг/мл ЛПС и затем оценивали их активность с помощью флуоресцентных антител к маркерам дегрануляции CD11b и CD66b. Интактные и активированные нейтрофилы обрабатывали раствором лития хлорида в концентрации 9 ммоль.

Выделение нейтрофилов

Гепаринизированную венозную кровь 5-ти здоровых доноров смешивали раствором декстрана Т-500 (Pharmacosmos, Дания) до конечной концентрации декстрана 1%) и оставляли при комнатной температуре на 30 минут для осаждения эритроцитов. Верхний слой плазмы (обогащенный лейкоцитами и лишенный эритроцитов) наслаивали на Фиколл (ПанЭко, Россия) с плотностью 1,077 г/мл и центрифугировали при комнатной температуре при 300 g, 30' в центрифуге с отключенным тормозом. Затем удаляли супернатант и все дальнейшие процедуры проводили на льду и с использованием охлажденных растворов. Удаление примесных эритроцитов проводили с помощью ресуспендирования осадка в 2 мл деионизованной стерильной воды в течение 45 сек, а затем добавляли 2 мл 2-х кратного PBS для восстановления онкотического давления. Центрифугировали при 200 g, +4°С, 10'. Осажденные нейтрофилы промывали PBS и ресуспендировали в культуральной среде (RPMI-1640 (ПанЭко, Россия) + 10% FBS с низким содержанием эндотоксинов).

Активация нейтрофилов

Активацию (дегрануляцию) нейтрофилов измеряли с помощью антител, конъюгированных с флуоресцентными красителями (CD11b-FITC и CD66b-AlexaFluor647 (BD Biosciences, USA) согласно протоколу производителя.

Для определения активации нейтрофилов были использованы антитела к молекулам CD11b (β2-интегрин) и CD66b. В качестве индукторов воспаления были применены липополисахарид (ЛПС), основной компонент клеточной стенки грамотрицательных бактерий, а также fMLP, который бактерии используют при биосинтезе белка.

К нейтрофилам в концентрации 4 млн/мл добавляли 100 mkM fMLP и лития хлорид в концентрациях 9 ммоль и инкубировали 30 мин при 37°С. Затем добавляли антитела и инкубировали 30 мин во льду, после чего измеряли уровень флуоресценции (единицы флуоресценции) на проточном цитофлуориметре Beckman-Coulter FC 500.

К нейтрофилам в концентрации 4 млн/мл добавляли 100 нг/мл ЛПС и хлорид лития в концентрациях 9 ммоль и инкубировали 30 мин при 37°С. Затем добавляли антитела и инкубировали 30 мин во льду, после чего измеряли уровень флуоресценции (условные единицы флуоресценции) на проточном цитофлуориметре Beckman-Coulter FC 500.

Исследование фермента ГСК-3-бета методом иммуноблотинга.

Определение концентрации белка.

Определение концентрации белка в нейтрофилах во всех опытах выполнялось по методу, описанному Р.K. Smith [Measurement of protein using bicinchoninic acid / P.K. Smith, R.I. Krohn, G.T. Hermanson [et al.] // Anal. Biochem. - 1985. - Vol. 150, №1. - P. 76-85] и основанному на колориметрической реакции бицинхониновой кислоты с белками. Для определения использовали раствор следующего состава: натриевая соль бицинхониновой кислоты (Sigma Chemical Co., США), Na виннокислый (Sigma Chemical Co., США), NaHCO3 0,95% (реагент А) и CuSO4 × 5H2O 4% (реагент В). Раствор для определения готовили непосредственно перед измерением концентрации белка, смешивая исходные реагенты А и B в соотношении 50:1. К аликвоте 50 мкл анализируемого образца добавляли 1 мл раствора для определения, перемешивали и инкубировали 30 мин при 37°С, после чего определяли оптическую плотность раствора при 562 нм в акриловой кювете на спектрофотометре Hitachi-557 (Hitachi Ltd., Япония).

Концентрацию белка в анализируемом образце определяли по калибровочной кривой с помощью программного обеспечения SigmaPlot 2000. В качестве стандарта для построения калибровочной кривой использовали коммерческий препарат бычьего сывороточного альбумина («Fermentas») с концентрацией 2 мг/мл.

Вестерн-блоттинг

Электрофорез белков проводили в 12,5% полиакриламидном геле в денатурирующих условиях по U.K. Laemmli [Laemmli, U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 / U.K. Laemmli // Nature. - 1970. - Vol. 227, №5259. - P. 680-685.]. Образцы растворяли в буфере, содержащем 0,125 М Трис-HCl (рН 6,8), 4% додецилсульфата натрия (Sigma Chemical Co., США), 20% глицерина, 0,005% бромфенола синего (Sigma Chemical Co., США) и 10% 2β-меркаптоэтанола (Merck, Германия). Образцы кипятили 2 мин на водяной бане и вносили в лунки геля. Для приготовления разделяющего геля использовали 30% смесь акриламида (Sigma Chemical Co., США) и бис-акриламида (Sigma Chemical Co., США) (37,5:1) которую разводили до 12,5%) 1,5 М Трис-HCl буфером (рН=8,8) и водой до конечной концентрации Трис-HCl 375 мМ. В смесь также добавляли додецилсульфат натрия до 0,1%, персульфат аммония (Sigma Chemical Co., США) до 0,1% и ТЕМЕД (N,N,N',N'-тетраметилэтилендиамин, Acros, Бельгия) до 0,1%. Для приготовления концентрирующего геля 30% смесь акриламида и бис-акриламида разводили до 5% 1 М Трис-HCl буфером (рН=6,8) и водой до конечной концентрации Трис-HCl 125 мМ. В смесь также добавляли 0,1% додецилсульфата натрия, 0,1% персульфат аммония и 0,1% ТЕМЕД. В работе использовали стекла 8×10 см со спейсерами толщиной 1 мм. Для проведения электрофореза использовали Трис-глициновый электродный буфер, содержащий 25 мМ Трис-HCl, 192 мМ глицин, 0,1% додецилсульфата натрия, рН=8,3. Электрофорез проводили при постоянном токе 10 мА в режиме концентрирования и 15 мА в режиме разделения. По окончании электрофореза переносили белки на PVDF мембрану (Amersham Pharmacia Biotech, Объединенное Королевство). Перенос проводили полусухим методом в течение 2 ч при 200 мА, 20 V. Качество переноса оценивали окрашиванием части геля и окрашиванием мембраны 2% раствором Ponceau (Sigma Chemical Co., США). Мембраны блокировали 12 ч при +4°С в трис-буферной среде (Sigma Chemical Co., США), содержащем 5% обезжиренного сухого молока. Затем мембраны промывали трис-буферной средой 3 раза по 10 мин и инкубировали 2 час. при комнатной температуре с первичными антителами (против гликоген-синтетазы-киназы типа 3 бета или фосфорилированной формы гликоген-синтетазы-киназы типа 3 бета) в разведении 1:1000 в трис-буферной среде, содержащем 0,5% бычьего сывороточного альбумина («Calbiochem») и 0,01% Tween-20 («Sigma Chemical Со.»). Мембраны три раза по 15 мин промывали в TBS, содержащем 0,01% Tween-20 и инкубировали 1 час. с вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена, в разведении 1:10000 в трис-буферной среде, содержащем 0,01% Tween-20. После финальной отмывки от несвязанных антител, полосы детектировали с помощью хемилюминесцентного субстрата пероксидазы хрена ECL (Enhanced chemiluminescence system, Amersham Pharmacia Biotech, Бельгия). Хемилюминесценция детектировалась на фотопленку Kodak Professional Т-МАХ Р3200 TMZ 135-36 (Kodak, США). Изображение оцифровывали на сканере Epson Perfection V750 Pro (Seiko Epson Corp., Япония) и анализировали с помощью программы Image J.

Содержание фосфорилированной формы гликоген-синтетазы-киназы типа 3 бета выражали в условных единицах хемилюминесценции (у.е.л.).

Статистический анализ

Для расчетов использовались программы Statistica 10.0 (StatSoft, Inc.) и MedCalc 12.5.0.0 (MedCalc Software bvba). Средние значения представлены медианой с межквартильным интервалом. Межгрупповые различия показателей оценивались при помощи U-критерия Уитни-Манна и принимались статистически значимыми при уровне р<0,05.

Результаты.

Как видно из табл. 1, 2 уровень экспрессии CD11b на поверхности интактных нейтрофилов составляет 3681,50 [3507,0-3880,0] условных единиц флуоресценции (у.е.ф.). Установлено, что присутствие лития хлорида в концентрации 9 мМ способствует снижению уровня экспрессии молекул CD11b на поверхности интактных нейтрофилов на 16% (р=0.07), a fMLP в дозе 100 нМ, увеличивает экспрессию тех же молекул на в 2,6 раза (р=0,0007). Добавление раствора лития хлорида в концентрации 9 мМ к нейтрофилам, активированным fMLP, уменьшает экспрессию молекул CD11b (р=0,0317), практически возвращая уровень их экспрессии к контрольному уровню. ЛПС добавленный в дозе 100 нг/мл к интактным нейтрофилам в 2,1 раза (р=0,0007) увеличивает экспрессию молекул CD11b на поверхности нейтрофилов по отношению к контролю, добавление лития хлорида в концентрации 9 мМ к активированным ЛПС нейтрофилам (р=0,0317).

Проведенное изучение влияния бактериальных компонентов и хлорида лития на фосфорилирование ГСК-3бета в нейтрофилах методом вестерн-блоттинга показало, что fMLP - пептид хемотактичесий fMet-Leu-Phe приводит к дефосфорилированию ГСК-3бета на 47% (р<0.05), а хлорид лития в концентрации 9 мМ увеличивает фосфорилирилирование ГСК-3 бета на 387% (р<0.05). Добавление хлорида лития к активированным fMLP нейтрофилам восстанавливает уровень фосфорилирилирования ГСК-3 бета на 277% относительно контрольного уровня в интактных нейтрофилах (р<0.05).

Таким образом, установлено, что реализация противовоспалительных свойств солей лития, как на инфекционные, так и неинфекционные повреждающие агенты осуществляется через фосфорилирование ГСК-3бета в нейтрофилах, что приводит к снижению экспрессии на их поверхности маркеров дегрануляции CD11b и CD66b.

Эти данные показывают перспективы применения лития хлорида для профилактики и лечения ССВО при тяжелой сочетанной травме, операциях на сердце с использованием аппарата искусственного кровообращения, а также при инфаркте миокарда и ишемическом инсульте.

Применение лития хлорида в качестве регулятора активации нейтрофилов путем ингибирования трансэндотелиальной миграции нейтрофилов.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, а именно к способу получения лекарственного средства, обладающего адаптогенной активностью. Лекарственное средство представляет собой сухой экстракт, полученный из следующего растительного сырья в соотношении: корней и корневищ солодки уральской 178.57 г; древесины караганы гривастой 321.42 г; корней купены душистой 53.57 г; корней купены приземистой 53.57 г; клубней ятрышника мужского 178.57 г; корней ревеня обыкновенного 107.14 г; корней и корневищ марены красильной 107.14 г, которые измельчают до размера частиц диаметром 1 мм и экстрагируют 50% этиловым спиртом в соотношении сырье: экстрагент, равном 1:16, при температуре 60°С и постоянном перемешивании.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к гетероциклическому соединению формулы (1) или к его фармацевтически приемлемой соли, где R1: (1-1) водород, (1-2) пиразолил, (1-3) пиримидинил, (1-4) пиридил, имеющий 1-2 заместителя, выбранных из галогена, циано, C1-C6 алкила, C1-C6 алкилсульфонила и галогензамещенного метила, (1-5) оксазолил, имеющий одну C1-C6 алкильную группу, (1-6) пиразинил, необязательно замещенный 1 группой, выбранной из галогена и C1-C6 алкила, (1-7) фенил, имеющий 1-2 заместителя, выбранных из галогена и галогензамещенного метила, (1-8) (пиридин 1-оксид)ил, имеющий 1-2 заместителя, выбранных из галогена и галогензамещенного метила, (1-9) галогензамещенный тиазолил, (1-10) C1-C6 алкилзамещенный изоксазолил, (1-11) циклопропилзамещенный 1,2,4-оксадиазолил, или (1-12) фенил; R2: водород или C1-C6 алкокси; R3: (3-1) водород, (3-2) C1-C6 алкокси, (3-3) C1-C6 алкокси C1-C6 алкокси, (3-4) C1-C6 алкил, (3-5) галоген, (3-6) бензилокси, или (3-7) гидрокси; R4: (4-1) пиридил, необязательно имеющий заместитель, выбранный из галогена, циано, гидрокси, пирролидинила, C1-C6 алкила, C1-C6 алкилтио, C1-C6 алкилсульфонила, C1-C6 алкокси и галогензамещенного C1-C6 алкила, R5: (5-1) водород, (5-2) C1-C6 алкил, или (5-3) C1-C6 алкокси; R6: (6-1) водород, (6-2) C1-C6 алкокси C1-C6 алкил, или (6-3) C1-C6 алкил, необязательно замещенный одной циклопропильной группой, при этом R6 прикреплен к только одному из N в 1-позиции и N в 3-позиции имидазольного скелета, R6 прикреплен к N в 1-позиции, когда связь между N в 3-позиции и C в 2-позиции имидазольного скелета представляет собой двойную связь, и R6 прикреплен к N в 3-позиции, когда связь между N в 3-позиции и C в 2-позиции имидазольного скелета представляет собой одинарную связь; R7: (7-1) водород, (7-2) галоген, (7-3) C1-C6 алкил, (7-4) гидроксиметил, (7-5) галогензамещенный C1-C6 алкил, или (7-6) циано; A представляет собой одинарную связь, когда R1 представляет собой водород, и A представляет собой C1-C2 алкилен, когда R1 представляет собой группу, не являющуюся водородом; в имидазольном скелете связь между C в 2-позиции и N в 1-позиции представляет собой одинарную связь, когда связь между N в 3-позиции и C в 2-позиции представляет собой двойную связь, и связь между C в 2-позиции и N в 1-позиции представляет собой двойную связь, когда связь между N в 3-позиции и C в 2-позиции представляет собой одинарную связь; при условии, что соединения, представленные формулой (1), в которых все R1-R3 и R5-R7 представляют собой водород, исключены.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и челюстно-лицевой хирургии, и может быть использовано для лечения начальных стадий рака полости рта и губы при глубине инвазии не более 7 мм.

Изобретение относится к новому соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. Соединения обладают свойствами ингибитора Akt киназы, Rsk киназы или S6K киназы и могут быть использованы в качестве противоопухолевого средства.

Группа изобретений относится к медицине и может быть использована для ингибирования роста опухоли у млекопитающего. Для этого используют средство, в состав которого входит 20% жировая эмульсия липофундина, насыщенная инертным газом ксеноном, бета-блокатор пропранолол, симпатолитик резерпин, антиангинальный препарат ивабрадин, антигистаминовый препарат дифенгидрамин, нейролептический препарат с гипотермным действием перициазин, серотонинергическое средство серотонин гидрохлорид, антитиреоидное средство пропицил, сульфат магния и фармацевтически приемлемый растворитель, и второй препарат, который содержит 20% жировой эмульсии липофундина, насыщенной инертным газом ксеноном, где 1 мл 20% жировой эмульсии липофундина содержит от 0,54 мл до 2,2 мл ксенона при насыщении под давлением 2 атм.

Изобретение относится к соединению, выбранному из группы, состоящей из 4-фтор-3-(2-оксо-2-{2-[4-(трифторметил)фенил]-6,7-дигидро-5H-имидазо[1,2-a][1,4]диазепин-8(9H)-ил}этил)-1,3-бензоксазол-2(3H)-она, 4-фтор-3-{2-[2-(2-фторфенил)-6,7-дигидро-5H-имидазо[1,2-a][1,4]диазепин-8(9H)-ил]-2-оксоэтил}-1,3-бензоксазол-2(3H)-она, 3-[2-(4,5-дигидро-1H-[1,4]диазепино[1,2-a]бензимидазол-2(3H)-ил)-2-оксоэтил]-4,5-дифтор-1,3-бензоксазол-2(3H)-она, 4-фтор-3-[2-(8-фтор-4,5-дигидро-1H-[1,4]диазепино[1,2-a]бензимидазол-2(3H)-ил)-2-оксоэтил]-1,3-бензоксазол-2(3H)-она, 4,5-дифтор-3-[2-оксо-2-(2-фенил-6,7-дигидро-5H-имидазо[1,2-a][1,4]диазепин-8(9H)-ил)этил]-1,3-бензоксазол-2(3H)-она, 4-фтор-3-{2-[2-(3-фторфенил)-6,7-дигидро-5H-имидазо[1,2-a][1,4]диазепин-8(9H)-ил]-2-оксоэтил}-1,3-бензоксазол-2(3H)-она и 3-{2-[2-(4-хлорфенил)-6,7-дигидро-5H-имидазо[1,2-a][1,4]диазепин-8(9H)-ил]-2-оксоэтил}-4-фтор-1,3-бензоксазол-2(3H)-она, или его фармацевтически приемлемой соли.

Изобретение относится к медицине, в частности к способу повышения устойчивости организма к развитию многосторонних вредных эффектов комбинированного действия на него свинца и кадмия в ионной форме.

Изобретение относится к области биологии и медицины. Предложено применение кристаллического аскорбата лития общей формулы LiС6Н7О6 в качестве средства, индуцирующего продукцию интерлейкина-8.
Изобретение относится к медицине и предназначено для лечения пациентов с эмоциогенным патологическим пищевым поведением. Предложен способ лечения тревожных расстройств у пациентов с нарушениями пищевого поведения, включающий фармакотерапию, при этом перорально вводят препарат Бак-Сет Форте курсом 2 недели.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к гетероциклическому соединению формулы (I), к его изомерам, стереоизомерам и его фармацевтически приемлемым солям, где B - конденсированное 6,5- или 6,6-гетероароматическое бициклическое кольцо, содержащее N и необязательно 1-2 атома азота, которое необязательно замещено 1-2 заместителями, выбранными из алкила, алкокси, галогена и NR8R9; где, когда B представляет собой конденсированное 6,5-гетероароматическое бициклическое кольцо, оно связано с -CONH-CH2- через его 6-членный кольцевой компонент; W, X, Y и Z независимо выбирают из C, N и S, в результате чего кольцо представляет собой пиразол, пиррол или тиазол; где R5, R6 и R7 отсутствуют или их выбирают из H, алкила, галогена, арила, гетероарила, -NR8R9, CN, COOR8, CONR8R9, -NR8COR9, CF3 и R16; где, по меньшей мере, один из R5, R6 и R7 присутствует и его выбирают из алкила, галогена, арила, гетероарила, -NR8R9, CN, COOR8, CONR8R9, -NR8COR9, CF3 и R16; A выбирают из арила и гетероарила; R8 и R9 выбирают из H и алкила; R16 - углеродсодержащее 3-6-членное моноциклическое кольцо, которое может быть ароматическим, насыщенным или ненасыщенным неароматическим, необязательно содержащее 2 гетероатома, выбранных из N и O, где кольцо R16, в свою очередь, необязательно замещено 2 заместителями, выбранными из алкила и оксо; алкил - линейный насыщенный (C1-C6) углеводород или разветвленный насыщенный (C3-C6)углеводород; алкил необязательно замещен 1-2 заместителями, выбранными из (C1-C6)алкокси, OH, CF3 и фтора; алкокси - линейный O-связанный (C1-C6) углеводород или разветвленный O-связанный (C3-C6) углеводород; алкокси необязательно замещен одним CF3; арил представляет собой фенил; арил необязательно замещен 1 заместителем, независимо выбранным из этилендиокси, -(CH2)0-3-O-гетероарила, -(CH2)1-3-гетероарила и -(CH2)1-3-NR14R15; гетероарил представляет собой 5- или 6-членное моноциклическое ароматическое кольцо, содержащее, когда это возможно, 1-3 кольцевых элемента, независимо выбранных из N, NR8, S и O; гетероарил необязательно замещен 1-2 заместителями, выбранными из алкила, алкокси, галогена, CN, арила, -CONR10R11 и -NR10R11; R10 и R11 выбирают из H и алкила или R10 и R11 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют углеродсодержащее 5-членное гетероциклическое кольцо, которое может быть насыщенным или ненасыщенным с 2 двойными связями и которое необязательно замещено 1-2 заместителями, выбранными из алкила и F; R14 и R15 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют углеродсодержащее 5- или 6-членное гетероциклическое кольцо, которое является ненасыщенным с 2 двойными связями и необязательно может быть оксозамещенным; или соединение формулы (I) представляет собой (1-аминоизохинолин-6-илметил)-амид 3-циклопропил-1-(6-феноксипиридин-3-илметил)-1Н-пиразол-4-карбоновой кислоты, его изомеры, стереоизомеры и его фармацевтически приемлемые соли за исключением 1-бензил-5-хлоро-3-метил-N-[(4-метилхиназолин-2-ил)]-1Н-празол-4-карбоксамида.
Изобретение относится к медицине, а именно к неонатологии и детской хирургии, и может быть использовано для консервативного лечения послеоперационного пареза кишечника у новорожденных детей.

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к области ветеринарной паразитологии. Предлагается способ лечения и профилактики ассоциированных трематодозов крупного рогатого скота, где животным задают групповым методом однократно микронизированный порошок бентонита размером частиц 25-60 микрон, метилурацил порошок, йодированную поваренную соль и хлористый кобальт, в определенном соотношении компонентов.

Заявленная группа изобретений относится к области медицины и представляет собой состав для получения кислотно-минеральной композиции, предназначенной для приготовления энтерального раствора для лаважа желудочно-кишечного тракта и/или коррекции нарушений гомеостаза, включающей натрия хлорид, калия хлорид, кальция хлорид, сульфат магния, а также соль, выбранную из натрия фосфата одно-, или дву-, или трехзамещенного, калия фосфата одно- или двузамещенного, натрия ацетата, взятых в количестве, обеспечивающем минерализацию энтерального раствора от 10,7 г до 14,0 г на 1 л, Na2ЭДТА или Nа3ДТПА в количестве, препятствующем образованию в растворе нерастворимых солей кальция и магния, а также карбоновые кислоты, выбранные из молочной, масляной, пропионовой и лимонной кислот, взятые в общем количестве, достаточном для поддержания рН раствора в диапазоне значений 4,61-5,8, и энтеральный раствор для лаважа желудочно-кишечного тракта и/или коррекции нарушений гомеостаза, включающий кислотно-минеральную композицию, полученную из компонентов заявленного состава, и питьевую очищенную воду, при этом очищенная вода содержится в количестве, обеспечивающем осмолярность раствора в интервале значений 280-310 мОсм/л.
Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, травматологии и ортопедии, и может быть использовано для лечения больных перипротезной инфекцией после эндопротезирования сустава.

Изобретение относится к области медицины и фармацевтики и представляет собой способ предупреждения реперфузионного синдрома в остром периоде инфаркта миокарда, включающий внутривенное введение хлорида лития на модели реперфузионного повреждения при ишемии миокарда, отличающийся тем, что раствор хлорида лития вводят в дозе 30 мг/кг в момент начала реперфузии сердца.

Изобретение относится к медицине, а именно к оториноларингологии, и может быть использовано для лечения больных аллергическим ринитом с нарушенным микробным пейзажем слизистой оболочки полости носа.

Изобретение относится к ветеринарной медицине и касается лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта молодняка крупного рогатого скота. Препарат содержит глюкозу, натрия хлорид, калия хлорид, кальция лактат, левомицетин и фталазол, отличающийся тем, что дополнительно содержит фтазин и пребиотик инулин растительный, при следующем соотношении составляющих компонентов, г/л водного раствора: инулин-пребиотик - 4,5, фтазин - 0,35, левомицетин - 0,5, фталазол - 0,5, глюкоза - 15,0, натрий хлорид - 4,5, калий хлорид - 0,1, кальций уксуснокислый или молочнокислый - 0,5.

Изобретение относится к медицине, а именно к реаниматологии и интенсивной терапии, и может быть использовано для лечения интестинальной недостаточности. По зонду в желудочно-кишечный тракт вводят оксигенированный солевой энтеральный раствор (СЭР).

Группа изобретений относится к области медицины и фармацевтической промышленности. Более конкретно, предложен инфузионный раствор для внутривенного введения и его применение в качестве плазмозамещающего раствора.

Заявленное изобретение относится к области медицины и представляет собой способ предотвращения ишемических и реперфузионных повреждений нейронов гиппокампа в постреанимационном периоде, включающий использование солей лития, отличающийся тем, что в качестве средства для предотвращения ишемических и реперфузионных повреждений нейронов гиппокампа в постреанимационном периоде используют 4,2% раствор лития хлоридя в дозе 40 мг/кг путем однократного внутривенного введения сразу после восстановления спонтанной сердечной деятельности и последующего введения на 1-е, 2-е и 3-й сутки после реанимации.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для регуляции активации нейтрофилов путем применения лития хлорида. Это позволяет снизить уровень активации нейтрофилов за счет снижения уровня экспрессии молекул CD11b и CD66b. 2 табл., 2 ил.

Наверх