Антисмысловые олигонуклеотиды в качестве ингибиторов сигнального пути tgf-r

Изобретение относится к биотехнологии. Описаны антисмысловые олигонуклеотиды, состоящие из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид комплементарен участку гена, кодирующего TGF-RII, или участку мРНК, кодирующей TGF-RII. Описана фармацевтическая композиция, содержащая такие антисмысловые олигонуклеотиды. Указанные нуклеотиды применяют для профилактики и лечения неврологических, нейродегенеративных, фиброзных и гиперпролиферативных заболеваний. 3 н. и 11 з.п. ф-лы, 32 ил., 85 табл., 640 пр.

 

Настоящее изобретение относится к антисмысловым олигонуклеотидам, их применению в качестве ингибиторов сигнального пути TGF-R, фармацевтическим композициям, содержащим такие антисмысловые олигонуклеотиды, и применению для профилактики и лечения неврологических, нейродегенеративных и гиперпролиферативных заболеваний, в том числе онкологических заболеваний.

В организме человека TGF-β находится в трех известных подтипах, TGF-β1, TGF-β2 и TGF-β3. Они подвергаются повышающей регуляции при нейродегенеративных заболеваниях, таких как ALS, и также при некоторых злокачественных заболеваниях человека, и также было показано, что повышенная экспрессия этого фактора роста имеет место при таких патологических состояниях, как нейродегенеративные заболевания, острая травма и нейровоспаление, и при старении. Полагают, что изоформы трансформирующего фактора роста бета (TGF-β1) также участвуют в патогенезе преэклампсии.

Активированные TGF-β оказывают свои эффекты на клетки-мишени через три различных класса рецепторов: тип I (TGFRI), также называемый активин-подобными киназами (ALK; 53 кДа), тип II (TGFRII; 70-100 кДа) и тип III (TGFRIII; 200-400 кДа). Рецепторы TGF-β представляют собой однопроходные рецепторы с серин-треонин-киназной активностью. В то время, как рецептор типа II киназы является конститутивно активным, рецептор типа I должен активироваться. Данный процесс инициируется посредством связывания лиганда с TGFRII; это «запускает» образование временного комплекса, который включает лиганд и рецептор типа I и II. Принимая во внимание димерный состав лиганда, рецепторный комплекс, скорее всего, состоит из тетрамерной структуры, образованной двумя парами рецепторов каждого типа.

Трансдукция сигналов TGF-β происходит через его рецепторы и ниже через белки Smad. Smad-зависимая трансдукция клеточных сигналов, инициируемая связыванием изоформы TGF-β с парой специфичных рецепторов TGFRI/II, приводит к фосфорилированию внутриклеточных Smads и затем транслокации активированного комплекса Smad в ядро, чтобы оказать влияние на экспрессию конкретного гена-мишени. Дивергенция сигналов на другие пути и конвергенция с соседних сигнальных путей генерирует очень сложную сеть. В зависимости от окружающей и клеточной среды сигнальный путь TGF-β приводит к различным клеточным реакциям, таким как пролиферация, дифференцировка, подвижность клеток и апоптоз опухолевых клеток. При раке TGF-β может непосредственно влиять на рост опухоли (упоминаемый как внутренний эффект сигнального пути TGF-β) или опосредованно (упоминаемый как внешний эффект) посредством стимуляции роста опухоли, индукцией эпителиально-мезенхимального перехода (EMT), блокированием противоопухолевых иммунных ответов, повышением опухолеассоциированного фиброза, модулированием внеклеточного матрикса (ECN) и миграцией клеток, и, наконец, усилением ангиогенеза. Факторы (например, концентрация, время, локальное воздействие), определяющие, имеет сигнальный путь TGF-β промоторную или супрессорную функцию для опухоли, являются предметом интенсивных исследований и дискуссий. В настоящее время считается, что супрессорная функция сигнального пути TGF-β для опухолей отсутствует на ранних стадиях рака аналогично рецессивным мутациям с потерей функции у других опухолевых супрессоров. Следовательно, существует несколько фармакологических подходов к лечению различных видов рака блокированием сигнальных путей TGF-β, таких как исследование галуницертиба и TEW-7197, которые оба являются низкомолекулярными ингибиторами TGFRI и находятся на стадии клинических испытаний, и LY3022859, антитело против TGFRII.

Сигналы, обеспечиваемые белками семейства трансформирующего фактора роста (TGF-β), представляют собой систему посредством которой нейрональные стволовые клетки регулируются в физиологических условиях, но по аналогии с другими типами клеток освобождаются от этого контроля после трансформации в раковые стволовые клетки. TGF-β представляет собой многофункциональный цитокин, участвующий в различных физиологических и патофизиологических процессах в головном мозге. Он индуцируется в мозге взрослого человека после травмы или гипоксии и во время нейродегенерации, когда он модулирует и гасит воспалительные реакции. После травмы, несмотря на то, что TGF-β в общем, является нейропротективным, он ограничивает самовосстановление головного мозга ингибированием пролиферации нервных стволовых клеток и индукцией фиброза/глиоза для образования рубца. Подобно своему действию на нейрональные стволовые клетки, TGF-β оказывает антипролиферативный контроль в отношении большинства типов клеток; однако, как это ни парадоксально, многие опухоли избегают контроля TGF-β. Более того, в таких опухолях развиваются механизмы, которые изменяют антипролиферативное влияние TGF-β и превращают его в онкогенные сигналы, в основном, организуя многочисленные TGF-β-опосредованные эффекты на матрикс, миграцию и инвазию, ангиогенез, и, самое главное, механизмы избежания иммунного надзора. Таким образом, TGF-β участвует в прогрессировании опухолей (смотри фиг. 3).

Следовательно, рецептор II TGF (рецептор II трансформирующего фактора роста бета; аналогично используемые символы: рецептор типа II TGF-бета, TGFBR2; AAT3; FAA3; LDS1B; LDS2; LDS2B; MFS2; RIIC; TAAD2; TGFR-2; TGFbeta-RII, TGF-RII, TGF-RII), и, в частности, его ингибирование, был признан в качестве мишени для лечения нейродегенеративных заболеваний, таких как ALS, и гиперпролиферативных заболеваний, таких как рак и фиброзные болезни.

Таким образом, целью настоящей заявки является обеспечение фармацевтически активных соединений, способных ингибировать экспрессию рецептора II TGF (TGF-RII), и, следовательно, уменьшать количество рецептора II TGF (TGF-RII) и снижать активность сигнального пути ниже по отношению TGF-β.

Цель настоящего изобретения достигается с помощью принципов независимых пунктов формулы изобретения. Другие преимущественные признаки, аспекты и детали изобретения станут очевидными из зависимых пунктов формулы изобретения, описания изобретения, фигур и примеров настоящей заявки.

С удивлением было установлено, что тысячи соединений-кандидатов, таких как белоково-нуклеотидные комплексы, миРНК, микроРНК (миРНК), рибозимы, аптамеры, CpG-олигонуклеотиды, ДНК-зимы, рибопереключатели, липиды, пептиды, небольшие молекулы, модификаторы raft или кавеолина, модификаторы аппарата Гольджи, антитела и их производные, в частности, химеры, Fab-фрагменты и Fc-фрагменты, антисмысловые олигонуклеотиды, содержащие LNA (LNA®: «замкнутые» нуклеиновые кислоты), являются наиболее перспективными кандидатами для применений, раскрытых здесь.

Таким образом, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность TGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 4) или последовательность CCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 5), или ACTACCAAAT последовательность (SEQ. ID NO: 6), или последовательность GGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 7), или последовательность GTCTATGACG (SEQ. ID NO: 8), или последовательность TTATTAATGC (SEQ. ID NO: 9), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную к гибридизации с указанной последовательностью TGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 4) или последовательностью CCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 5), или последовательностью ACTACCAAAT (SEQ. ID NO:6), или последовательностью GGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 7), или последовательностью GTCTATGACG (SEQ. ID NO: 8), или последовательностью TTATTAATGC (SEQ. ID NO: 9) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность TGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 4) или последовательность CCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 5) или ACTACCAAAT последовательность (SEQ. ID NO: 6), или последовательность GGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 7), или последовательность GTCTATGACG (SEQ. ID NO: 8), или последовательность TTATTAATGC (SEQ. ID NO: 9), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную к гибридизации с указанной последовательностью TGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 4) или последовательностью CCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 5), или последовательностью ACTACCAAAT (SEQ. ID NO:6), или последовательностью GGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 7), или последовательностью GTCTATGACG (SEQ. ID NO: 8), или последовательностью TTATTAATGC (SEQ. ID NO: 9) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Альтернативно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность TGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 4) или последовательность CCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 5), или ACTACCAAAT последовательность (SEQ. ID NO: 6), или последовательность GGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 7), или последовательность GTCTATGACG (SEQ. ID NO: 8), или последовательность TTATTAATGC (SEQ. ID NO: 9), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности TGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 4) или последовательности CCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 5), или последовательности ACTACCAAAT (SEQ. ID NO:6), или последовательности GGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 7), или последовательности GTCTATGACG (SEQ. ID NO: 8), или последовательности TTATTAATGC (SEQ. ID NO: 9) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность TGGTCCATTC (SEQ. ID No. 4) или последовательность CCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 5) или последовательность ACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 6), или последовательность GGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 7), или последовательность GTCTATGACG (SEQ. ID NO: 8), или последовательность TTATTAATGC (SEQ. ID NO: 9), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности TGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 4) или последовательности CCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 5) или последовательности ACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 6) или последовательности GGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 7) или последовательности GTCTATGACG (SEQ. ID NO: 8) или последовательности TTATTAATGC (SEQ. ID NO: 9) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Предпочтительно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность TGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 4), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью TGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 4), и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность TGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 4), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью TGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 4), и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Альтернативно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность TGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 4), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности TGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 4), и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность TGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 4), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную указанной последовательности TGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 4), и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Предпочтительно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность CCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 5), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью CCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 5), и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность CCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 5), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью CCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 5), и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Альтернативно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность CCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 5), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности CCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 5), и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность CCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 5), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности CCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 5), и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Предпочтительно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность ACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 6), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью ACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 6), и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность ACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 6), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью ACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 6), и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Альтернативно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность ACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 6), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности ACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 6), и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность ACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 6), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности ACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 6), и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Предпочтительно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность GGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 7), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью GGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 7), и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность GGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 7), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью GGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 7), и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Альтернативно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность GGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 7), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности GGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 7), и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность GGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 7), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности GGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 7), и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Предпочтительно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность GTCTATGACG (SEQ. ID NO: 8), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью GTCTATGACG (SEQ. ID NO: 8), и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность GTCTATGACG (SEQ. ID NO: 8), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью GTCTATGACG (SEQ. ID NO: 8), и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Альтернативно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность GTCTATGACG (SEQ. ID NO: 8), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности GTCTATGACG (SEQ. ID NO: 8), и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность GTCTATGACG (SEQ. ID NO: 8), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности GTCTATGACG (SEQ. ID NO: 8), и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Предпочтительно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность TTATTAATGC (SEQ. ID NO: 9), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью TTATTAATGC (SEQ. ID NO: 9), и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность TTATTAATGC (SEQ. ID NO: 9), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью TTATTAATGC (SEQ. ID NO: 9), и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Альтернативно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность TTATTAATGC (SEQ. ID NO: 9), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности TTATTAATGC (SEQ. ID NO: 9), и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок открытой рамки считывания гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность TTATTAATGC (SEQ. ID NO: 9), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности TTATTAATGC (SEQ. ID NO: 9), и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению предпочтительно содержат 2-10 звеньев LNA, более предпочтительно 3-9 звеньев LNA и еще более предпочтительно 4-8 звеньев LNA и также предпочтительно, по меньшей мере, 6 звеньев, которые не являются LNA, более предпочтительно, по меньшей мере, 7 звеньев, которые не являются LNA, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA. Звенья, которые не являются LNA, предпочтительно представляют собой звенья ДНК. Звенья LNA предпочтительно расположены на терминальном 3'-конце (также называемом 3'-концом) и терминальном 5'-конце (также называемом 5'-концом). Предпочтительно, по меньшей мере, одно и, более предпочтительно, по меньшей мере, два звена LNA находятся на терминальном 3'-конце и/или на 5'терминальном конце.

Таким образом, предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению, которые содержат 3-10 звеньев LNA и которые, в частности, содержат 1-5 звеньев LNA на терминальном 5'-конце и 1-5 звеньев LNA на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида, и между звеньями LNA, по меньшей мере, 7 и более предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев ДНК.

Кроме того, антисмысловые олигонуклеотиды могут содержать обычные азотистые основания, такие как аденин, гуанин, цитозин, тимин и урацил, а также их обычные производные. Антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению также могут содержать модифицированные межнуклеотидные мостики, такие как фосфоротиоат или фосфородитиоат вместо фосфатных мостиков. Такие модификации могут присутствовать только в сегментах LNA или только в сегменте, который не является LNA, антисмыслового олигонуклеотида.

Таким образом, настоящее изобретение также относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 12-24 нуклеотидов, и, по меньшей мере, три из 12-24 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность CTGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 296), TGGTCCATTCA (SEQ. ID NO: 297), CTGGTCCATTCA (SEQ. ID NO: 298), TCCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 299), CCCTAAACACT (SEQ. ID NO: 300), TCCCTAAACACT (SEQ. ID NO: 301), CACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 302), ACTACCAAATA (SEQ. ID NO: 303), CACTACCAAATA (SEQ. ID NO: 304), TGGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 305), GGACGCGTATC (SEQ. ID NO: 306), TGGACGCGTATC (SEQ. ID NO: 307), GGTCTATGACG (SEQ. ID NO: 308), GTCTATGACGA (SEQ. ID NO: 309), GGTCTATGACGA (SEQ. ID NO: 310), TTTATTAATGC (SEQ. ID NO: 311), TTATTAATGCC (SEQ. ID NO: 312) или TTTATTAATGCC (SEQ. ID NO: 313), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью CTGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 296), TGGTCCATTCA (SEQ. ID NO: 297), CTGGTCCATTCA (SEQ. ID NO: 298), TCCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 299), CCCTAAACACT (SEQ. ID NO: 300), TCCCTAAACACT (SEQ. ID NO: 301), CACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 302), ACTACCAAATA (SEQ. ID NO:303), CACTACCAAATA (SEQ. ID NO: 304), TGGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 305), GGACGCGTATC (SEQ. ID NO: 306), TGGACGCGTATC (SEQ. ID NO: 307), GGTCTATGACG (SEQ. ID NO: 308), GTCTATGACGA (SEQ. ID NO: 309), GGTCTATGACGA (SEQ. ID NO: 310), TTTATTAATGC (SEQ. ID NO: 311), TTATTAATGCC (SEQ. ID NO: 312) или TTTATTAATGCC (SEQ. ID NO: 313 соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Альтернативно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 12-24 нуклеотидов, и, по меньшей мере, три из 12-24 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность CTGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 296), TGGTCCATTCA (SEQ. ID NO: 297), CTGGTCCATTCA (SEQ. ID NO: 298), TCCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 299), CCCTAAACACT (SEQ. ID NO: 300), TCCCTAAACACT (SEQ. ID NO: 301), CACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 302), ACTACCAAATA (SEQ. ID NO:303), CACTACCAAATA (SEQ. ID NO: 304), TGGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 305), GGACGCGTATC (SEQ. ID NO: 306), TGGACGCGTATC (SEQ. ID NO: 307), GGTCTATGACG (SEQ. ID NO: 308), GTCTATGACGA (SEQ. ID NO: 309), GGTCTATGACGA (SEQ. ID NO: 310), TTTATTAATGC (SEQ. ID NO: 311), TTATTAATGCC (SEQ. ID NO: 312) или TTTATTAATGCC (SEQ. ID NO: 313), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности CTGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 296), TGGTCCATTCA (SEQ. ID NO: 297), CTGGTCCATTCA (SEQ. ID NO: 298), TCCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 299), CCCTAAACACT (SEQ. ID NO: 300), TCCCTAAACACT (SEQ. ID NO: 301), CACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 302), ACTACCAAATA (SEQ. ID NO:303), CACTACCAAATA (SEQ. ID NO: 304), TGGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 305), GGACGCGTATC (SEQ. ID NO: 306), TGGACGCGTATC (SEQ. ID NO: 307), GGTCTATGACG (SEQ. ID NO: 308), GTCTATGACGA (SEQ. ID NO: 309), GGTCTATGACGA (SEQ. ID NO: 310), TTTATTAATGC (SEQ. ID NO: 311), TTATTAATGCC (SEQ. ID NO: 312) или TTTATTAATGCC (SEQ. ID NO: 313 соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Предпочтительно настоящее изобретение также относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 12-24 нуклеотидов, и, по меньшей мере, три из 12-24 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность CTGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 296), TGGTCCATTCA (SEQ. ID NO: 297) или CTGGTCCATTCA (SEQ. ID NO: 298), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью CTGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 296), TGGTCCATTCA (SEQ. ID NO: 297) или CTGGTCCATTCA (SEQ. ID NO: 298) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение также относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 12-24 нуклеотидов, и, по меньшей мере, три из 12-24 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность CTGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 296), TGGTCCATTCA (SEQ. ID NO: 297) или CTGGTCCATTCA (SEQ. ID NO: 298), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности CTGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 296), TGGTCCATTCA (SEQ. ID NO: 297) или CTGGTCCATTCA (SEQ. ID NO: 298) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Предпочтительно настоящее изобретение также относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 12-24 нуклеотидов, и, по меньшей мере, три из 12-24 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность TCCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 299), CCCTAAACACT (SEQ. ID NO: 300) и TCCCTAAACACT (SEQ. ID NO: 301), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью TCCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 299), CCCTAAACACT (SEQ. ID NO: 300) и TCCCTAAACACT (SEQ. ID NO: 301) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 12-24 нуклеотидов, и, по меньшей мере, три из 12-24 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность TCCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 299), CCCTAAACACT (SEQ. ID NO: 300) или TCCCTAAACACT (SEQ. ID NO: 301), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности TCCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 299), CCCTAAACACT (SEQ. ID NO: 300) или TCCCTAAACACT (SEQ. ID NO: 301) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Предпочтительно настоящее изобретение также относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 12-24 нуклеотидов, и, по меньшей мере, три из 12-24 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность CACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 302), ACTACCAAATA (SEQ. ID NO:303) или CACTACCAAATA (SEQ. ID NO: 304), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью CACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 302), ACTACCAAATA (SEQ. ID NO: 303) или CACTACCAAATA (SEQ. ID NO: 304) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 12-24 нуклеотидов, и, по меньшей мере, три из 12-24 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность CACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 302), ACTACCAAATA (SEQ. ID NO: 303) или CACTACCAAATA (SEQ. ID NO: 304), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности CACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 302), ACTACCAAATA (SEQ. ID NO: 303) или CACTACCAAATA (SEQ. ID NO: 304) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Предпочтительно настоящее изобретение также относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 12-24 нуклеотидов, и, по меньшей мере, три из 12-24 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность TGGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 305), GGACGCGTATC (SEQ. ID NO: 306) или TGGACGCGTATC (SEQ. ID NO: 307), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью TGGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 305), GGACGCGTATC (SEQ. ID NO: 306) или TGGACGCGTATC (SEQ. ID NO: 307) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение также относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 12-24 нуклеотидов, и, по меньшей мере, три из 12-24 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность TGGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 305), GGACGCGTATC (SEQ. ID NO: 306) или TGGACGCGTATC (SEQ. ID NO: 307), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности TGGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 305), GGACGCGTATC (SEQ. ID NO: 306) или TGGACGCGTATC (SEQ. ID NO: 307) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Предпочтительно настоящее изобретение также относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 12-24 нуклеотидов, и, по меньшей мере, три из 12-24 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность GGTCTATGACG (SEQ. ID NO: 308), GTCTATGACGA (SEQ. ID NO: 309) или GGTCTATGACGA (SEQ. ID NO: 310), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью GGTCTATGACG (SEQ. ID NO: 308), GTCTATGACGA (SEQ. ID NO: 309) или GGTCTATGACGA (SEQ. ID NO: 310) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 12-24 нуклеотидов, и, по меньшей мере, три из 12-24 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность GGTCTATGACG (SEQ. ID NO: 308), GTCTATGACGA (SEQ. ID NO: 309) или GGTCTATGACGA (SEQ. ID NO: 310), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности GGTCTATGACG (SEQ. ID NO: 308), GTCTATGACGA (SEQ. ID NO: 309) или GGTCTATGACGA (SEQ. ID NO: 310) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Предпочтительно настоящее изобретение также относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 12-24 нуклеотидов, и, по меньшей мере, три из 12-24 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность TTTATTAATGC (SEQ. ID NO: 311), TTATTAATGCC (SEQ. ID NO: 312) или TTTATTAATGCC (SEQ. ID NO: 313), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью TTTATTAATGC (SEQ. ID NO: 311), TTATTAATGCC (SEQ. ID NO: 312) или TTTATTAATGCC (SEQ. ID NO: 313) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 12-24 нуклеотидов, и, по меньшей мере, три из 12-24 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность TTTATTAATGC (SEQ. ID NO: 311), TTATTAATGCC (SEQ. ID NO: 312) или TTTATTAATGCC (SEQ. ID NO: 313), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности TTTATTAATGC (SEQ. ID NO: 311), TTATTAATGCC (SEQ. ID NO: 312) или TTTATTAATGCC (SEQ. ID NO: 313 соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению предпочтительно содержат 3-10 звеньев LNA, более предпочтительно 3-9 звеньев LNA и еще более предпочтительно 4-8 звеньев LNA и также предпочтительно, по меньшей мере, 6 звеньев, которые не являются LNA, более предпочтительно, по меньшей мере, 7 звеньев, которые не являются LNA, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA. Звенья, которые не являются LNA, предпочтительно представляют собой звенья ДНК. Звенья LNA предпочтительно расположены на терминальном 3'-конце (также называемом 3'-концом) и терминальном 5'-конце (также называемом 5'-концом). Предпочтительно, по меньшей мере, одно и, более предпочтительно, по меньшей мере, два звена LNA находятся на терминальном 3'-конце и/или на 5'терминальном конце.

Таким образом, предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению, которые содержат 3-10 звеньев LNA и которые, в частности, содержат 1-5 звеньев LNA на терминальном 5'-конце и 1-5 звеньев LNA на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида, и, между звеньями LNA, по меньшей мере, 7 и более предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев ДНК.

Кроме того, антисмысловые олигонуклеотиды могут содержать обычные азотистые основания, такие как аденин, гуанин, цитозин, тимин и урацил, а также их обычные производные. Антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению могут также содержать модифицированные межнуклеотидные мостики, такие как фосфоротиоат или фосфородитиоат вместо фосфатных мостиков. Такие модификации могут присутствовать только в сегментах LNA или только в сегменте, который не является LNA, антисмыслового олигонуклеотида.

Таким образом, настоящее изобретение также относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов, и, по меньшей мере, четыре из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность ACTGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 314), TGGTCCATTCAT (SEQ. ID NO: 315), CTGGTCCATTCAT (SEQ. ID NO: 316), ACTGGTCCATTCA (SEQ. ID NO: 317), ACTGGTCCATTCAT (SEQ. ID NO: 318), CTCCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 319), CCCTAAACACTA (SEQ. ID NO: 320), TCCCTAAACACTA (SEQ. ID NO: 321), CTCCCTAAACACT (SEQ. ID NO: 322), CTCCCTAAACACTA (SEQ. ID NO: 323), ACACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 324), ACTACCAAATAG (SEQ. ID NO: 325), CACTACCAAATAG (SEQ. ID NO: 326), ACACTACCAAATA (SEQ. ID NO: 327), ACACTACCAAATAG (SEQ. ID NO: 328), GTGGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 329), GGACGCGTATCG (SEQ. ID NO: 330), TGGACGCGTATCG (SEQ. ID NO: 331), GTGGACGCGTATC (SEQ. ID NO: 332), GTGGACGCGTATCG (SEQ. ID NO: 333), CGGTCTATGACG (SEQ. ID NO: 334), GTCTATGACGAG (SEQ. ID NO: 335), GGTCTATGACGAG (SEQ. ID NO: 336), CGGTCTATGACGA (SEQ. ID NO: 337), CGGTCTATGACGAG (SEQ. ID NO: 338), CTTTATTAATGC (SEQ. ID NO: 339), TTATTAATGCCT (SEQ. ID NO: 340), TTTATTAATGCCT (SEQ. ID NO: 341), CTTTATTAATGCC (SEQ. ID NO: 342) или CTTTATTAATGCCT (SEQ. ID NO: 343), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью ACTGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 314), TGGTCCATTCAT (SEQ. ID NO: 315), CTGGTCCATTCAT (SEQ. ID NO: 316), ACTGGTCCATTCA (SEQ. ID NO: 317), ACTGGTCCATTCAT (SEQ. ID NO: 318), CTCCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 319), CCCTAAACACTA (SEQ. ID NO: 320), TCCCTAAACACTA (SEQ. ID NO: 321), CTCCCTAAACACT (SEQ. ID NO: 322), CTCCCTAAACACTA (SEQ. ID NO: 323), ACACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 324), ACTACCAAATAG (SEQ. ID NO: 325), CACTACCAAATAG (SEQ. ID NO: 326), ACACTACCAAATA (SEQ. ID NO: 327), ACACTACCAAATAG (SEQ. ID NO: 328), GTGGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 329), GGACGCGTATCG (SEQ. ID NO: 330), TGGACGCGTATCG (SEQ. ID NO: 331), GTGGACGCGTATC (SEQ. ID NO: 332), GTGGACGCGTATCG (SEQ. ID NO: 333), CGGTCTATGACG (SEQ. ID NO: 334), GTCTATGACGAG (SEQ. ID NO: 335), GGTCTATGACGAG (SEQ. ID NO: 336), CGGTCTATGACGA (SEQ. ID NO: 337), CGGTCTATGACGAG (SEQ. ID NO: 338), CTTTATTAATGC (SEQ. ID NO: 339), TTATTAATGCCT (SEQ. ID NO: 340), TTTATTAATGCCT (SEQ. ID NO: 341), CTTTATTAATGCC (SEQ. ID NO: 342) или CTTTATTAATGCCT (SEQ. ID NO: 343) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Альтернативно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов, и, по меньшей мере, четыре из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность ACTGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 314), TGGTCCATTCAT (SEQ. ID NO: 315), CTGGTCCATTCAT (SEQ. ID NO: 316), ACTGGTCCATTCA (SEQ. ID NO: 317), ACTGGTCCATTCAT (SEQ. ID NO: 318), CTCCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 319), CCCTAAACACTA (SEQ. ID NO: 320), TCCCTAAACACTA (SEQ. ID NO: 321), CTCCCTAAACACT (SEQ. ID NO: 322), CTCCCTAAACACTA (SEQ. ID NO: 323), ACACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 324), ACTACCAAATAG (SEQ. ID NO: 325), CACTACCAAATAG (SEQ. ID NO: 326), ACACTACCAAATA (SEQ. ID NO: 327), ACACTACCAAATAG (SEQ. ID NO: 328), GTGGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 329), GGACGCGTATCG (SEQ. ID NO: 330), TGGACGCGTATCG (SEQ. ID NO: 331), GTGGACGCGTATC (SEQ. ID NO: 332), GTGGACGCGTATCG (SEQ. ID NO: 333), CGGTCTATGACG (SEQ. ID NO: 334), GTCTATGACGAG (SEQ. ID NO: 335), GGTCTATGACGAG (SEQ. ID NO: 336), CGGTCTATGACGA (SEQ. ID NO: 337), CGGTCTATGACGAG (SEQ. ID NO: 338), CTTTATTAATGC (SEQ. ID NO: 339), TTATTAATGCCT (SEQ. ID NO: 340), TTTATTAATGCCT (SEQ. ID NO: 341), CTTTATTAATGCC (SEQ. ID NO: 342) или CTTTATTAATGCCT (SEQ. ID NO: 343), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности ACTGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 314), TGGTCCATTCAT (SEQ. ID NO: 315), CTGGTCCATTCAT (SEQ. ID NO: 316), ACTGGTCCATTCA (SEQ. ID NO: 317), ACTGGTCCATTCAT (SEQ. ID NO: 318), CTCCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 319), CCCTAAACACTA (SEQ. ID NO: 320), TCCCTAAACACTA (SEQ. ID NO: 321), CTCCCTAAACACT (SEQ. ID NO: 322), CTCCCTAAACACTA (SEQ. ID NO: 323), ACACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 324), ACTACCAAATAG (SEQ. ID NO: 325), CACTACCAAATAG (SEQ. ID NO: 326), ACACTACCAAATA (SEQ. ID NO: 327), ACACTACCAAATAG (SEQ. ID NO: 328), GTGGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 329), GGACGCGTATCG (SEQ. ID NO: 330), TGGACGCGTATCG (SEQ. ID NO: 331), GTGGACGCGTATC (SEQ. ID NO: 332), GTGGACGCGTATCG (SEQ. ID NO: 333), CGGTCTATGACG (SEQ. ID NO: 334), GTCTATGACGAG (SEQ. ID NO: 335), GGTCTATGACGAG (SEQ. ID NO: 336), CGGTCTATGACGA (SEQ. ID NO: 337), CGGTCTATGACGAG (SEQ. ID NO: 338), CTTTATTAATGC (SEQ. ID NO: 339), TTATTAATGCCT (SEQ. ID NO: 340), TTTATTAATGCCT (SEQ. ID NO: 341), CTTTATTAATGCC (SEQ. ID NO: 342) или CTTTATTAATGCCT (SEQ. ID NO: 343) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Предпочтительно настоящее изобретение также относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов, и, по меньшей мере, четыре из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность ACTGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 314), TGGTCCATTCAT (SEQ. ID NO: 315), CTGGTCCATTCAT (SEQ. ID NO: 316), ACTGGTCCATTCA (SEQ. ID NO: 317), ACTGGTCCATTCAT (SEQ. ID NO: 318), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью ACTGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 314), TGGTCCATTCAT (SEQ. ID NO: 315), CTGGTCCATTCAT (SEQ. ID NO: 316), ACTGGTCCATTCA (SEQ. ID NO: 317), ACTGGTCCATTCAT (SEQ. ID NO: 318) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение также относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов, и, по меньшей мере, четыре из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность ACTGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 314), TGGTCCATTCAT (SEQ. ID NO: 315), CTGGTCCATTCAT (SEQ. ID NO: 316), ACTGGTCCATTCA (SEQ. ID NO: 317) или ACTGGTCCATTCAT (SEQ. ID NO: 318), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности ACTGGTCCATTC (SEQ. ID NO: 314), TGGTCCATTCAT (SEQ. ID NO: 315), CTGGTCCATTCAT (SEQ. ID NO: 316), ACTGGTCCATTCA (SEQ. ID NO: 317) или ACTGGTCCATTCAT (SEQ. ID NO: 318) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Предпочтительно настоящее изобретение также относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов, и, по меньшей мере, четыре из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность CTCCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 319), CCCTAAACACTA (SEQ. ID NO: 320), TCCCTAAACACTA (SEQ. ID NO: 321), CTCCCTAAACACT (SEQ. ID NO: 322) или CTCCCTAAACACTA (SEQ. ID NO: 323), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью CTCCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 319), CCCTAAACACTA (SEQ. ID NO: 320), TCCCTAAACACTA (SEQ. ID NO: 321), CTCCCTAAACACT (SEQ. ID NO: 322) или CTCCCTAAACACTA (SEQ. ID NO: 323) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов, и, по меньшей мере, четыре из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность CTCCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 319), CCCTAAACACTA (SEQ. ID NO: 320), TCCCTAAACACTA (SEQ. ID NO: 321), CTCCCTAAACACT (SEQ. ID NO: 322) или CTCCCTAAACACTA (SEQ. ID NO: 323), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности CTCCCTAAACAC (SEQ. ID NO: 319), CCCTAAACACTA (SEQ. ID NO: 320), TCCCTAAACACTA (SEQ. ID NO: 321), CTCCCTAAACACT (SEQ. ID NO: 322) или CTCCCTAAACACTA (SEQ. ID NO: 323) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Предпочтительно настоящее изобретение также относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов, и, по меньшей мере, четыре из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность ACACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 324), ACTACCAAATAG (SEQ. ID NO: 325), CACTACCAAATAG (SEQ. ID NO: 326), ACACTACCAAATA (SEQ. ID NO: 327) или ACACTACCAAATAG (SEQ. ID NO: 328), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью ACACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 324), ACTACCAAATAG (SEQ. ID NO: 325), CACTACCAAATAG (SEQ. ID NO: 326), ACACTACCAAATA (SEQ. ID NO: 327) или ACACTACCAAATAG (SEQ. ID NO: 328) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение также относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов, и, по меньшей мере, четыре из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность ACACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 324), ACTACCAAATAG (SEQ. ID NO: 325), CACTACCAAATAG (SEQ. ID NO: 326), ACACTACCAAATA (SEQ. ID NO: 327) или ACACTACCAAATAG (SEQ. ID NO: 328), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности ACACTACCAAAT (SEQ. ID NO: 324), ACTACCAAATAG (SEQ. ID NO: 325), CACTACCAAATAG (SEQ. ID NO: 326), ACACTACCAAATA (SEQ. ID NO: 327) или ACACTACCAAATAG (SEQ. ID NO: 328) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Предпочтительно настоящее изобретение также относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов, и, по меньшей мере, четыре из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность GTGGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 329), GGACGCGTATCG (SEQ. ID NO: 330), TGGACGCGTATCG (SEQ. ID NO: 331), GTGGACGCGTATC (SEQ. ID NO: 332) или GTGGACGCGTATCG (SEQ. ID NO: 333), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью GTGGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 329), GGACGCGTATCG (SEQ. ID NO: 330), TGGACGCGTATCG (SEQ. ID NO: 331), GTGGACGCGTATC (SEQ. ID NO: 332) или GTGGACGCGTATCG (SEQ. ID NO: 333) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение также относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов, и, по меньшей мере, четыре из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность GTGGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 329), GGACGCGTATCG (SEQ. ID NO: 330), TGGACGCGTATCG (SEQ. ID NO: 331), GTGGACGCGTATC (SEQ. ID NO: 332) или GTGGACGCGTATCG (SEQ. ID NO: 333), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности GTGGACGCGTAT (SEQ. ID NO: 329), GGACGCGTATCG (SEQ. ID NO: 330), TGGACGCGTATCG (SEQ. ID NO: 331), GTGGACGCGTATC (SEQ. ID NO: 332) или GTGGACGCGTATCG (SEQ. ID NO: 333) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Предпочтительно настоящее изобретение также относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов, и, по меньшей мере, четыре из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность CGGTCTATGACG (SEQ. ID NO: 334), GTCTATGACGAG (SEQ. ID NO: 335), GGTCTATGACGAG (SEQ. ID NO: 336), CGGTCTATGACGA (SEQ. ID NO: 337) или CGGTCTATGACGAG (SEQ. ID NO: 338), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью CGGTCTATGACG (SEQ. ID NO: 334), GTCTATGACGAG (SEQ. ID NO: 335), GGTCTATGACGAG (SEQ. ID NO: 336), CGGTCTATGACGA (SEQ. ID NO: 337) или CGGTCTATGACGAG (SEQ. ID NO: 338) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение также относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов, и, по меньшей мере, четыре из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность CGGTCTATGACG (SEQ. ID NO: 334), GTCTATGACGAG (SEQ. ID NO: 335), GGTCTATGACGAG (SEQ. ID NO: 336), CGGTCTATGACGA (SEQ. ID NO: 337) или CGGTCTATGACGAG (SEQ. ID NO: 338), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности CGGTCTATGACG (SEQ NO: 334), GTCTATGACGAG (SEQ. ID NO: 335), GGTCTATGACGAG (SEQ. ID NO: 336), CGGTCTATGACGA (SEQ. ID NO: 337) или CGGTCTATGACGAG (SEQ. ID NO: 338) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Предпочтительно настоящее изобретение также относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов, и, по меньшей мере, четыре из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность CTTTATTAATGC (SEQ. ID NO: 339), TTATTAATGCCT (SEQ. ID NO: 340), TTTATTAATGCCT (SEQ. ID NO: 341), CTTTATTAATGCC (SEQ. ID NO: 342) или CTTTATTAATGCCT (SEQ. ID NO: 343), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, способную гибридизоваться с указанной последовательностью CTTTATTAATGC (SEQ. ID NO: 339), TTATTAATGCCT (SEQ. ID NO: 340), TTTATTAATGCCT (SEQ. ID NO: 341), CTTTATTAATGCC (SEQ. ID NO: 342) или CTTTATTAATGCCT (SEQ. ID NO: 343) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Другими словами, настоящее изобретение также относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов, и, по меньшей мере, четыре из 14-20, более предпочтительно 14-18 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где участок гена, кодирующего TGF-RII, или участок мРНК, кодирующей TGF-RII, содержит последовательность CTTTATTAATGC (SEQ. ID NO: 339), TTATTAATGCCT (SEQ. ID NO: 340), TTTATTAATGCCT (SEQ. ID NO: 341), CTTTATTAATGCC (SEQ. ID NO: 342) или CTTTATTAATGCCT (SEQ. ID NO: 343), и антисмысловой олигонуклеотид содержит последовательность, комплементарную последовательности CTTTATTAATGC (SEQ. ID NO: 339), TTATTAATGCCT (SEQ. ID NO: 340), TTTATTAATGCCT (SEQ. ID NO: 341), CTTTATTAATGCC (SEQ. ID NO: 342) или CTTTATTAATGCCT (SEQ. ID NO: 343) соответственно, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению предпочтительно содержат 4-11 звеньев LNA, более предпочтительно 4-10 звеньев LNA и еще более предпочтительно 4-8 звеньев LNA и также предпочтительно, по меньшей мере, 6 звеньев, которые не являются LNA, более предпочтительно, по меньшей мере, 7 звеньев, которые не являются LNA, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA. Звенья, которые не являются LNA, предпочтительно представляют собой звенья ДНК. Звенья LNA предпочтительно расположены на терминальном 3'-конце (также называемом 3'-концом) и терминальном 5'-конце (также называемом 5'-концом). Предпочтительно, по меньшей мере, одно и, более предпочтительно, по меньшей мере, два звена LNA находятся на терминальном 3'-конце и/или на 5'терминальном конце.

Таким образом, предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению, которые содержат 3-10 звеньев LNA и которые, в частности, содержат 1-5 звеньев LNA на терминальном 5'-конце и 1-5 звеньев LNA на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида, и между звеньями LNA, по меньшей мере, 7 и более предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев ДНК.

Кроме того, антисмысловые олигонуклеотиды могут содержать обычные азотистые основания, такие как аденин, гуанин, цитозин, тимин и урацил, а также их обычные производные. Антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению могут также содержать модифицированные межнуклеотидные мостики, такие как фосфоротиоат или фосфородитиоат вместо фосфатных мостиков. Такие модификации могут присутствовать только в сегментах LNA или только в сегменте, который не является LNA, антисмыслового олигонуклеотида.

Таким образом, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью 5'-N1-GTCATAGA-N2-3' (SEQ. ID NO: 12) или 5'-N3-ACGCGTCC-N4-3' (SEQ. ID NO: 98), или 5'-N11-TGTTTAGG-N12-3'(SEQ. ID NO: 10), или 5'-N5-TTTGGTAG-N6-3' (SEQ. ID NO: 11), или 5'-N7-AATGGACC-N8-3' (SEQ. ID NO: 100), или 5'-N9-ATTAATAA-N10-3' (SEQ. ID NO: 101), где

N1 представляет: CATGGCAGACCCCGCTGCTC-, ATGGCAGACCCCGCTGCTC-, TGGCAGACCCCGCTGCTC-, GGCAGACCCCGCTGCTC-, GCAGACCCCGCTGCTC-, CAGACCCCGCTGCTC-, AGACCCCGCTGCTC-, GACCCCGCTGCTC-, ACCCCGCTGCTC-, CCCCGCTGCTC-, CCCGCTGCTC-, CCGCTGCTC-, CGCTGCTC-, GCTGCTC-, CTGCTC-, TGCTC-, GCTC-, CTC-, TC- или C-;

N2 представляет: -C, -CC, -CCG, -CCGA, -CCGAG, -CCGAGC, -CCGAGCC, -CCGAGCCC, -CCGAGCCCC, -CCGAGCCCCC, -CCGAGCCCCCA, -CCGAGCCCCCAG, -CCGAGCCCCCAGC, -CCGAGCCCCCAGCG, -CCGAGCCCCCAGCGC, -CCGAGCCCCCAGCGCA, -CCGAGCCCCCAGCGCAG, -CCGAGCCCCCAGCGCAGC, -CCGAGCCCCCAGCGCAGCG или -CCGAGCCCCCAGCGCAGCGG;

N3 представляет: GGTGGGATCGTGCTGGCGAT-, GTGGGATCGTGCTGGCGAT-, TGGGATCGTGCTGGCGAT-, GGGATCGTGCTGGCGAT-, GGATCGTGCTGGCGAT-, GATCGTGCTGGCGAT-, ATCGTGCTGGCGAT-, TCGTGCTGGCGAT-, CGTGCTGGCGAT-, GTGCTGGCGAT-, TGCTGGCGAT-, GCTGGCGAT-, CTGGCGAT,- TGGCGAT-, GGCGAT-, GCGAT-, CGAT-, GAT-, AT- или T-;

N4 представляет: -ACAGGACGATGTGCAGCGGC, -ACAGGACGATGTGCAGCGG, -ACAGGACGATGTGCAGCG, -ACAGGACGATGTGCAGC, -ACAGGACGATGTGCAG, -ACAGGACGATGTGCA, -ACAGGACGATGTGC, -ACAGGACGATGTG, -ACAGGACGATGT, -ACAGGACGATG, -ACAGGACGAT, -ACAGGACGA, -ACAGGACG, -ACAGGAC, -ACAGGA, -ACAGG, -ACAG, -ACA, -AC, или -A;

N5 представляет: GCCCAGCCTGCCCCAGAAGAGCTA-, CCCAGCCTGCCCCAGAAGAGCTA-, CCAGCCTGCCCCAGAAGAGCTA-, CAGCCTGCCCCAGAAGAGCTA-, AGCCTGCCCCAGAAGAGCTA-, GCCTGCCCCAGAAGAGCTA-, CCTGCCCCAGAAGAGCTA-, CTGCCCCAGAAGAGCTA-, TGCCCCAGAAGAGCTA-, GCCCCAGAAGAGCTA-, CCCCAGAAGAGCTA-, CCCAGAAGAGCTA-, CCAGAAGAGCTA-, CAGAAGAGCTA-, AGAAGAGCTA-, GAAGAGCTA-, AAGAGCTA-, AGAGCTA-, GAGCTA-, AGCTA-, GCTA-, CTA-, ТА- или A-;

N6 представляет: -TGTTTAGGGAGCCGTCTTCAGGAA, -TGTTTAGGGAGCCGTCTTCAGGA, -TGTTTAGGGAGCCGTCTTCAGG, -TGTTTAGGGAGCCGTCTTCAG, -TGTTTAGGGAGCCGTCTTCA, -TGTTTAGGGAGCCGTCTTC, -TGTTTAGGGAGCCGTCTT, -TGTTTAGGGAGCCGTCT, -TGTTTAGGGAGCCGTC, -TGTTTAGGGAGCCGT, -TGTTTAGGGAGCCG, -TGTTTAGGGAGCC, -TGTTTAGGGAGC, -TGTTTAGGGAG, -TGTTTAGGGA, -TGTTTAGGG, -TGTTTAGG, -TGTTTAG, -TGTTTA, -TGTTT, -TGTT, -TGT, -TG или -Т;

N7 представляет: TGAATCTTGAATATCTCATG-, GAATCTTGAATATCTCATG-, AATCTTGAATATCTCATG-, ATCTTGAATATCTCATG-, TCTTGAATATCTCATG-, CTTGAATATCTCATG-, TTGAATATCTCATG-, TGAATATCTCATG-, GAATATCTCATG-, AATATCTCATG-, ATATCTCATG-, TATCTCATG-, ATCTCATG-, TCTCATG-, CTCATG-, TCATG-, CATG-, ATG-, TG- или G-;

N8 представляет: -AGTATTCTAGAAACTCACCA, -AGTATTCTAGAAACTCACC, -AGTATTCTAGAAACTCAC, -AGTATTCTAGAAACTCA, -AGTATTCTAGAAACTC, -AGTATTCTAGAAACT, AGTATTCTAGAAAC, -AGTATTCTAGAAA, -AGTATTCTAGAA, -AGTATTCTAGA, -AGTATTCTAG, -AGTATTCTA, -AGTATTCT, -AGTATTC, -AGTATT, -AGTAT, -AGTA, -AGT, -AG или -A;

N9 представляет: ATTCATATTTATATACAGGC-, TTCATATTTATATACAGGC-, TCATATTTATATACAGGC-, CATATTTATATACAGGC-, ATATTTATATACAGGC-, TATTTATATACAGGC-, ATTTATATACAGGC-, TTTATATACAGGC-, TTATATACAGGC-, TATATACAGGC-, ATATACAGGC-, TATACAGGC-, ATACAGGC-, TACAGGC-, ACAGGC-, CAGGC-, AGGC-, GGC-, GC- или С-;

N10 представляет: -AGTGCAAATGTTATTGGCTA, -AGTGCAAATGTTATTGGCT, -AGTGCAAATGTTATTGGC, -AGTGCAAATGTTATTGG, -AGTGCAAATGTTATTG, -AGTGCAAATGTTATT, -AGTGCAAATGTTAT, -AGTGCAAATGTTA, -AGTGCAAATGTT, -AGTGCAAATGT, -AGTGCAAATG, -AGTGCAAAT, -AGTGCAAA, -AGTGCAA, -AGTGCA, -AGTGC, -AGTG, -AGT, -AG или -A;

N11 представляет: TGCCCCAGAAGAGCTATTTGGTAG-, GCCCCAGAAGAGCTATTTGGTAG-, CCCCAGAAGAGCTATTTGGTAG-, CCCAGAAGAGCTATTTGGTAG-, CCAGAAGAGCTATTTGGTAG-, CAGAAGAGCTATTTGGTAG-, AGAAGAGCTATTTGGTAG-, GAAGAGCTATTTGGTAG-, AAGAGCTATTTGGTAG-, AGAGCTATTTGGTAG-, GAGCTATTTGGTAG-, AGCTATTTGGTAG-, GCTATTTGGTAG-, CTATTTGGTAG-, TATTTGGTAG-, ATTTGGTAG-, TTTGGTAG-, TTGGTAG-, TGGTAG-, GGTAG-, GTAG-, TAG-, AG- или G-,

N12 представляет: -GAGCCGTCTTCAGGAATCTTCTCC, -GAGCCGTCTTCAGGAATCTTCTC, -GAGCCGTCTTCAGGAATCTTCT, -GAGCCGTCTTCAGGAATCTTC, -GAGCCGTCTTCAGGAATCTT, -GAGCCGTCTTCAGGAATCT, -GAGCCGTCTTCAGGAATC, -GAGCCGTCTTCAGGAAT, -GAGCCGTCTTCAGGAA, -GAGCCGTCTTCAGGA, -GAGCCGTCTTCAGG, -GAGCCGTCTTCAG, -GAGCCGTCTTCA, -GAGCCGTCTTC, -GAGCCGTCTT, -GAGCCGTCT, -GAGCCGTC, -GAGCCGT, -GAGCCG, -GAGCC, -GAGC, -GAG, -Ga или -G;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида.

Таким образом, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью 5'-N1-GTCATAGA-N2-3' (SEQ. ID NO: 12) или 5'-N3-ACGCGTCC-N4-3' (SEQ. ID NO: 98), или 5'-N11-TGTTTAGG-N12-3'(SEQ. ID NO: 10), или 5'-N5-TTTGGTAG-N6-3' (SEQ. ID NO: 11), или 5'-N7-AATGGACC-N8-3' (SEQ. ID NO: 100), или 5'-N9-ATTAATAA-N10-3' (SEQ. ID NO: 101), где остатки N1-N12 имеют значения, в частности, дополнительно ограниченные значениями, раскрытыми здесь, и солям и оптическим изомерам указанного антисмыслового олигонуклеотида.

Кроме того, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью 5'-N1-GTCATAGA-N2-3' (SEQ. ID NO: 12), где:

N1 представляет: CATGGCAGACCCCGCTGCTC-, ATGGCAGACCCCGCTGCTC-, TGGCAGACCCCGCTGCTC-, GGCAGACCCCGCTGCTC-, GCAGACCCCGCTGCTC-, CAGACCCCGCTGCTC-, AGACCCCGCTGCTC-, GACCCCGCTGCTC-, ACCCCGCTGCTC-, CCCCGCTGCTC-, CCCGCTGCTC-, CCGCTGCTC-, CGCTGCTC-, GCTGCTC-, CTGCTC-, TGCTC-, GCTC-, CTC-, TC- или C-;

N2 представляет: -C, -CC, -CCG, -CCGA, -CCGAG, -CCGAGC, -CCGAGCC, -CCGAGCCC, -CCGAGCCCC, -CCGAGCCCCC, -CCGAGCCCCCA, -CCGAGCCCCCAG, -CCGAGCCCCCAGC, -CCGAGCCCCCAGCG, -CCGAGCCCCCAGCGC, -CCGAGCCCCCAGCGCA, -CCGAGCCCCCAGCGCAG, -CCGAGCCCCCAGCGCAGC, -CCGAGCCCCCAGCGCAGCG или -CCGAGCCCCCAGCGCAGCGG;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида.

Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S1 (SEQ ID NO:12) предпочтительно содержат 2-10 звеньев LNA, более предпочтительно 3-9 звеньев LNA и еще более предпочтительно 4-8 звеньев LNA и также предпочтительно, по меньшей мере, 6 звеньев, которые не являются LNA, более предпочтительно, по меньшей мере, 7 звеньев, которые не являются LNA, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA. Звенья, которые не являются LNA, предпочтительно представляют звенья ДНК. Звенья LNA предпочтительно расположены на терминальном 3'-конце (также называемом 3'-концом) и терминальном 5'-конце (также называемом 5'-концом). Предпочтительно, по меньшей мере, одно и, более предпочтительно, по меньшей мере, два звена LNA находятся на терминальном 3'-конце и/или на терминальном 5'-конце.

Таким образом, предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды, обозначенные как гапмеры, которые содержат 2-10 звеньев LNA и которые, в частности, содержат 1-5 звеньев LNA на терминальном 5'-конце и 1-5 звеньев LNA на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида, и между звеньями LNA, по меньшей мере, 7 и более предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев ДНК. Более предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды содержат 2-4 звена LNA на терминальном 5'-конце и 2-4 звена LNA на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида, и еще более предпочтительно содержат 3-4 звена LNA на терминальном 5'-конце и 3-4 звена LNA на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида, и содержат предпочтительно, по меньшей мере, 7 звеньев, которые не являются LNA, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA, таких как звенья ДНК, между двумя сегментами LNA.

Кроме того, антисмысловые олигонуклеотиды могут содержать обычные азотистые основания, такие как аденин, гуанин, цитозин, тимин и урацил, а также их обычные производные, такие как 5-метилцитозин или 2-аминоаденин. Антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению могут также содержать модифицированные межнуклеотидные мостики, такие как фосфоротиоат или фосфородитиоат вместо фосфатных мостиков. Такие модификации могут присутствовать только в сегментах LNA или только в сегменте, который не является LNA, антисмыслового олигонуклеотида. В качестве звеньев LNA, в частности, остатки b1-b9, раскрытые здесь, являются особенно предпочтительными.

Таким образом, предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S1):

5'-N1-GTCATAGA-N2-3' (SEQ. ID NO: 12)

где:

N1 представляет: CATGGCAGACCCCGCTGCTC-, ATGGCAGACCCCGCTGCTC-, TGGCAGACCCCGCTGCTC-, GGCAGACCCCGCTGCTC-, GCAGACCCCGCTGCTC-, CAGACCCCGCTGCTC-, AGACCCCGCTGCTC-, GACCCCGCTGCTC-, ACCCCGCTGCTC-, CCCCGCTGCTC-, CCCGCTGCTC-, CCGCTGCTC-, CGCTGCTC-, GCTGCTC-, CTGCTC-, TGCTC-, GCTC-, CTC-, TC- или C-;

N2 выбран из: -C, -CC, -CCG, -CCGA, -CCGAG, -CCGAGC, -CCGAGCC, -CCGAGCCC, -CCGAGCCCC, -CCGAGCCCCC, -CCGAGCCCCCA, -CCGAGCCCCCAG, -CCGAGCCCCCAGC, -CCGAGCCCCCAGCG, -CCGAGCCCCCAGCGC, -CCGAGCCCCCAGCGCA, -CCGAGCCCCCAGCGCAG, -CCGAGCCCCCAGCGCAGC, -CCGAGCCCCCAGCGCAGCG или -CCGAGCCCCCAGCGCAGCGG.

Предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S1) содержит 10-28 нуклеотидов и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 5'-конце. В качестве нуклеотидов LNA (звеньев LNA) подходящими, в частности, являются таковые, раскрытые в разделе «Замкнутые нуклеиновые кислоты» (LNA®) и предпочтительно в разделе «Предпочтительные LNA», и в качестве межнуклеотидных мостиков подходящими являются, в частности, раскрытые в разделе «Межнуклеотидные связи (IL)».

Более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S1) содержит 11-24 нуклеотида и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 5'-конце. Еще более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S1) содержит 12-20 нуклеотидов, более предпочтительно 13-19 и еще более предпочтительно 14-18 нуклеотидов и, 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 5'-конце. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды представляют гапмеры формы LNA-сегмент A-сегмент ДНК-LNA-сегмент B. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды содержат, по меньшей мере, 6, более предпочтительно, по меньшей мере, 7, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA, таких как звенья ДНК, между двумя сегментами LNA. Подходящие азотистые основания для звеньев, которые не являются LNA, и звеньев LNA описаны в разделе «Азотистые основания».

Также предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S1):

5'-N1-GTCATAGA-N2-3'

где:

N1 представляет: TGGCAGACCCCGCTGCTC-, GGCAGACCCCGCTGCTC-, GCAGACCCCGCTGCTC-, CAGACCCCGCTGCTC-, AGACCCCGCTGCTC-, GACCCCGCTGCTC-, ACCCCGCTGCTC-, CCCCGCTGCTC-, CCCGCTGCTC-, CCGCTGCTC-, CGCTGCTC-, GCTGCTC-, CTGCTC-, TGCTC-, GCTC-, CTC-, TC- или C-; и

N2 выбран из: -C, -CC, -CCG, -CCGA, -CCGAG, -CCGAGC, -CCGAGCC, -CCGAGCCC, -CCGAGCCCC, -CCGAGCCCCC, -CCGAGCCCCCA, -CCGAGCCCCCAG, -CCGAGCCCCCAGC, -CCGAGCCCCCAGCG, -CCGAGCCCCCAGCGC, -CCGAGCCCCCAGCGCA, -CCGAGCCCCCAGCGCAG или -CCGAGCCCCCAGCGCAGC.

Также предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S1):

5'-N1-GTCATAGA-N2-3'

где:

N1 представляет: GACCCCGCTGCTC-, ACCCCGCTGCTC-, CCCCGCTGCTC-, CCCGCTGCTC-, CCGCTGCTC-, CGCTGCTC-, GCTGCTC-, CTGCTC-, TGCTC-, GCTC-, CTC-, TC- или C-; и

N2 выбран из: -C, -CC, -CCG, -CCGA, -CCGAG, -CCGAGC, -CCGAGCC, -CCGAGCCC, -CCGAGCCCC, -CCGAGCCCCC, -CCGAGCCCCCA, -CCGAGCCCCCAG или -CCGAGCCCCCAGC.

Также предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S1):

5'-N1-GTCATAGA-N2-3'

где:

N1 представляет: CGCTGCTC-, GCTGCTC-, CTGCTC-, TGCTC-, GCTC-, CTC-, TC- или C-; и

N2 выбран из: -C, -CC, -CCG, -CCGA, -CCGAG, -CCGAGC, -CCGAGCC или -CCGAGCCC.

Предпочтительно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 12-24 нуклеотидов, и, по меньшей мере, три из 12-24 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью:

5'-N1A-CGTCATAGAC-N2A-3' (SEQ. ID NO: 69)

где:

N1A представляет: CATGGCAGACCCCGCTGCT-, ATGGCAGACCCCGCTGCT-, TGGCAGACCCCGCTGCT-, GGCAGACCCCGCTGCT-, GCAGACCCCGCTGCT-, CAGACCCCGCTGCT-, AGACCCCGCTGCT-, GACCCCGCTGCT-, ACCCCGCTGCT-, CCCCGCTGCT-, CCCGCTGCT-, CCGCTGCT-, CGCTGCT-, GCTGCT-, CTGCT-, TGCT-, GCT-, CT- или T-;

N2A представляет: -C, -CG, -CGA, -CGAG, -CGAGC, -CGAGCC, -CGAGCCC, -CGAGCCCC, -CGAGCCCCC, -CGAGCCCCCA, -CGAGCCCCCAG, -CGAGCCCCCAGC, -CGAGCCCCCAGCG, -CGAGCCCCCAGCGC, -CGAGCCCCCAGCGCA, -CGAGCCCCCAGCGCAG, -CGAGCCCCCAGCGCAGC, -CGAGCCCCCAGCGCAGCG или -CGAGCCCCCAGCGCAGCGG;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида.

Предпочтительно N1A представляет: TGGCAGACCCCGCTGCT-, GGCAGACCCCGCTGCT-, GCAGACCCCGCTGCT-, CAGACCCCGCTGCT-, AGACCCCGCTGCT-, GACCCCGCTGCT-, ACCCCGCTGCT-, CCCCGCTGCT-, CCCGCTGCT-, CCGCTGCT-, CGCTGCT-, GCTGCT-, CTGCT-, TGCT-, GCT-, CT- или T-; и

N2A представляет: -C, -CG, -CGA, -CGAG, -CGAGC, -CGAGCC, -CGAGCCC, -CGAGCCCC, -CGAGCCCCC, -CGAGCCCCCA, -CGAGCCCCCAG, -CGAGCCCCCAGC, -CGAGCCCCCAGCG, -CGAGCCCCCAGCGC, -CGAGCCCCCAGCGCA, -CGAGCCCCCAGCGCAG или -CGAGCCCCCAGCGCAGC.

Более предпочтительно N1A представляет: GACCCCGCTGCT-, ACCCCGCTGCT-, CCCCGCTGCT-, CCCGCTGCT-, CCGCTGCT-, CGCTGCT-, GCTGCT-, CTGCT-, TGCT-, GCT-, CT- или T-; и

N2A представляет: -C, -CG, -CGA, -CGAG, -CGAGC, -CGAGCC, -CGAGCCC, -CGAGCCCC, -CGAGCCCCC, -CGAGCCCCCA, -CGAGCCCCCAG или -CGAGCCCCCAGC.

Еще более предпочтительно N1A представляет: CGCTGCT-, GCTGCT-, CTGCT-, TGCT-, GCT-, CT- или T-; и

N2A представляет: -C, -CG, -CGA, -CGAG, -CGAGC, -CGAGCC или -CGAGCCC.

Предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S1A/SEQ. ID NO: 69) содержит 12-24 нуклеотида и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 5'-конце. В качестве нуклеотидов LNA (звеньев LNA) подходящими, в частности, являются таковые, раскрытые в разделе «Замкнутые нуклеиновые кислоты» (LNA®) и предпочтительно в разделе «Предпочтительные LNA», и в качестве межнуклеотидных мостиков подходящими являются, в частности, раскрытые в разделе «Межнуклеотидные связи (IL)».

Более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S1A) содержит 12-22 нуклеотида и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 5'-конце. Еще более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S1A) содержит 12-20 нуклеотидов, более предпочтительно 13-19 и еще более предпочтительно 14-18 нуклеотидов и, 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на 3'-конце, и 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на 5'-конце. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды представляют гапмеры формы LNA-сегмент A-сегмент ДНК-LNA-сегмент B. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды содержат, по меньшей мере, 6, более предпочтительно, по меньшей мере, 7, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA, таких как звенья ДНК, между двумя сегментами LNA. Подходящие азотистые основания для звеньев, которые не являются LNA, и звеньев LNA описаны в разделе «Азотистые основания».

Кроме того, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью 5'-N3-ACGCGTCC-N4-3' (SEQ. ID NO: 98), где:

N3 представляет: GGTGGGATCGTGCTGGCGAT-, GTGGGATCGTGCTGGCGAT-, TGGGATCGTGCTGGCGAT-, GGGATCGTGCTGGCGAT-, GGATCGTGCTGGCGAT-, GATCGTGCTGGCGAT-, ATCGTGCTGGCGAT-, TCGTGCTGGCGAT-, CGTGCTGGCGAT-, GTGCTGGCGAT-, TGCTGGCGAT-, GCTGGCGAT-, CTGGCGAT-, TGGCGAT-, GGCGAT-, GCGAT-, CGAT-, GAT-, AT- или T-;

N4 представляет: -ACAGGACGATGTGCAGCGGC, -ACAGGACGATGTGCAGCGG, -ACAGGACGATGTGCAGCG, -ACAGGACGATGTGCAGC, -ACAGGACGATGTGCAG, -ACAGGACGATGTGCA, -ACAGGACGATGTGC, -ACAGGACGATGTG, -ACAGGACGATGT, -ACAGGACGATG, -ACAGGACGAT, -ACAGGACGA, -ACAGGACG, -ACAGGAC, -ACAGGA, -ACAGG, -ACAG, -ACA, -AC или -A;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида.

Антисмысловые олигонуклеотиды общей формулы S2 (SEQ. ID NO: 98) предпочтительно содержат 2-10 звеньев LNA, более предпочтительно 3-9 звньев LNA и еще более предпочтительно 4-8 звеньев LNA и также предпочтительно, по меньшей мере, 6 звеньев, которые не являются LNA, более предпочтительно, по меньшей мере, 7 звеньев, которые не являются LNA, и наиболее предпочтительно 8 звеньев, которые не являются LNA. Звенья, которые не являются LNA, предпочтительно расположены на терминальном 3'-конце (также называемом 3'-концом) и терминальном 5'-конце (также называемом 5'-концом). Предпочтительно, по меньшей мере, одно и более предпочтительно, по меньшей мере, два звена LNA находятся на терминальном 3'-конце (также называемом 3'-концом) и терминальном 5'-конце (также называемом 5'-концом). Таким образом, предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению, обозначенные как гапмеры, которые содержат 2-10 звеньев LNA и которые предпочтительно содержат 1-5 звеньев LNA на терминальном 5'-конце, и 1-5 звеньев LNA на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида и между звеньями LNA, по меньшей мере, 7 и более предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев ДНК. Более предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды содержат 2-4 звена LNA на терминальном 5'-конце, и 2-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и еще более предпочтительные содержат 3-4 звена LNA на терминальном 5'-конце, и 3-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и содержат предпочтительно, по меньшей мере, 7 звеньев, которые не являются LNA, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA, таких как звенья ДНК, между двумя сегментами LNA.

Кроме того, антисмысловые олигонуклеотиды могут содержать обычные азотистые основания, такие как аденин, гуанин, цитозин, тимин и урацил, а также их обычные производные, такие как 5-метилцитозин или 2-аминоаденин. Антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению могут также содержать модифицированные межнуклеотидные мостики, такие как фосфоротиоат или фосфородитиоат вместо фосфатных мостиков. Такие модификации могут присутствовать только в сегментах LNA или только в сегменте, который не является LNA, антисмыслового олигонуклеотида. В качестве звеньев LNA, в частности, остатки b1-b9, раскрытые здесь, являются особенно предпочтительными.

Таким образом, предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S2):

5'-N3-ACGCGTCC-N4-3' (SEQ. ID No: 98)

где:

N3 представляет: GGTGGGATCGTGCTGGCGAT-, GTGGGATCGTGCTGGCGAT-, TGGGATCGTGCTGGCGAT-, GGGATCGTGCTGGCGAT-, GGATCGTGCTGGCGAT-, GATCGTGCTGGCGAT-, ATCGTGCTGGCGAT-, TCGTGCTGGCGAT-, CGTGCTGGCGAT-, GTGCTGGCGAT-, TGCTGGCGAT-, GCTGGCGAT-, CTGGCGAT-, TGGCGAT-, GGCGAT-, GCGAT-, CGAT-, GAT-, AT- или T-;

N4 представляет: -ACAGGACGATGTGCAGCGGC, -ACAGGACGATGTGCAGCGG, -ACAGGACGATGTGCAGCG, -ACAGGACGATGTGCAGC, -ACAGGACGATGTGCAG, -ACAGGACGATGTGCA, -ACAGGACGATGTGC, -ACAGGACGATGTG, -ACAGGACGATGT, -ACAGGACGATG, -ACAGGACGAT, -ACAGGACGA, -ACAGGACG, -ACAGGAC, -ACAGGA, -ACAGG, -ACAG, -ACA, -AC или -A.

Предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S2) содержит 10-28 нуклеотидов и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 5'-конце. В качестве нуклеотидов LNA (звеньев LNA) подходящими, в частности, являются таковые, раскрытые в разделе «Замкнутые нуклеиновые кислоты» (LNA®) и предпочтительно в разделе «Предпочтительные LNA», и в качестве межнуклеотидных мостиков подходящими являются, в частности, раскрытые в разделе «Межнуклеотидные связи (IL)».

Более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S2) содержит 11-24 нуклеотида и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 5'-конце. Еще более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S2) содержит 12-20, более предпочтительно 13-19 и еще более предпочтительно 14-18 нуклеотидов и, 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 5'-конце. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды представляют гапмеры формы LNA-сегмент A-сегмент ДНК-LNA-сегмент B. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды содержат, по меньшей мере, 6, более предпочтительно, по меньшей мере, 7, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA, таких как звенья ДНК, между двумя сегментами LNA. Подходящие азотистые основания для звеньев, которые не являются LNA, и звеньев LNA описаны в разделе «Азотистые основания».

Также предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S2):

5'-N3-ACGCGTCC-N4-3'

где:

N3 представляет: TGGGATCGTGCTGGCGAT-, GGGATCGTGCTGGCGAT-, GGATCGTGCTGGCGAT-, GATCGTGCTGGCGAT-, ATCGTGCTGGCGAT-, TCGTGCTGGCGAT-, CGTGCTGGCGAT-, GTGCTGGCGAT-, TGCTGGCGAT-, GCTGGCGAT-, CTGGCGAT-, TGGCGAT-, GGCGAT-, GCGAT-, CGAT-, GAT-, AT- или T-; и

N4 представляет: -ACAGGACGATGTGCAGCG, -ACAGGACGATGTGCAGC, -ACAGGACGATGTGCAG, -ACAGGACGATGTGCA, -ACAGGACGATGTGC, -ACAGGACGATGTG, -ACAGGACGATGT, -ACAGGACGATG, -ACAGGACGAT, -ACAGGACGA, -ACAGGACG, -ACAGGAC, -ACAGGA, -ACAGG, -ACAG, -ACA, -AC или -A.

Также предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S2):

5'-N3-ACGCGTCC-N4-3'

где:

N3 представляет: TCGTGCTGGCGAT-, CGTGCTGGCGAT-, GTGCTGGCGAT-, TGCTGGCGAT-, GCTGGCGAT-, CTGGCGAT-, TGGCGAT-, GGCGAT-, GCGAT-, CGAT-, GAT-, AT- или T-;

N4 представляет: -ACAGGACGATGTG, -ACAGGACGATGT, -ACAGGACGATG, -ACAGGACGAT, -ACAGGACGA, -ACAGGACG, -ACAGGAC, -ACAGGA, -ACAGG, -ACAG, -ACA, -AC или -A.

Также предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S2):

5'-N3-ACGCGTCC-N4-3'

где:

N3 представляет: CTGGCGAT-, TGGCGAT-, GGCGAT-, GCGAT-, CGAT-, GAT-, AT- или T-;

N4 представляет: -ACAGGACG, -ACAGGAC, -ACAGGA, -ACAGG, -ACAG, -ACA, -AC или -A

Предпочтительно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 12-24 нуклеотидов, и, по меньшей мере, три из 12-24 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью:

5'-N3A-TACGCGTCCA-N4A-3' (SEQ. ID NO: 70)

где:

N3A представляет: GGTGGGATCGTGCTGGCGA-, GTGGGATCGTGCTGGCGA-, TGGGATCGTGCTGGCGA-, GGGATCGTGCTGGCGA-, GGATCGTGCTGGCGA-, GATCGTGCTGGCGA-, ATCGTGCTGGCGA-, TCGTGCTGGCGA-, CGTGCTGGCGA-, GTGCTGGCGA-, TGCTGGCGA-, GCTGGCGA-, CTGGCGA-, TGGCGA-, GGCGA-, GCGA-, CGA-, GA- или A-;

N4A представляет: -CAGGACGATGTGCAGCGGC, -CAGGACGATGTGCAGCGG, -CAGGACGATGTGCAGCG, -CAGGACGATGTGCAGC, -CAGGACGATGTGCAG, -CAGGACGATGTGCA, -CAGGACGATGTGC, -CAGGACGATGTG, -CAGGACGATGT, -CAGGACGATG, -CAGGACGAT, -CAGGACGA, -CAGGACG, -CAGGAC, -CAGGA, -CAGG, -CAG, -CA или -C;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида.

Предпочтительно N3A представляет: TGGGATCGTGCTGGCGA-, GGGATCGTGCTGGCGA-, GGATCGTGCTGGCGA-, GATCGTGCTGGCGA-, ATCGTGCTGGCGA-, TCGTGCTGGCGA-, CGTGCTGGCGA-, GTGCTGGCGA-, TGCTGGCGA-, GCTGGCGA-, CTGGCGA-, TGGCGA-, GGCGA-, GCGA-, CGA-, GA- или A-; и

N4A представляет: -CAGGACGATGTGCAGCG, -CAGGACGATGTGCAGC, -CAGGACGATGTGCAG, -CAGGACGATGTGCA, -CAGGACGATGTGC, -CAGGACGATGTG, -CAGGACGATGT, -CAGGACGATG, -CAGGACGAT, -CAGGACGA, -CAGGACG, -CAGGAC, -CAGGA, -CAGG, -CAG, -CA или -C.

Более предпочтительно N3A представляет: TCGTGCTGGCGA-, CGTGCTGGCGA-, GTGCTGGCGA-, TGCTGGCGA-, GCTGGCGA-, CTGGCGA-, TGGCGA-, GGCGA-, GCGA-, CGA-, GA- или A-; и

N4A представляет: -CAGGACGATGTG, -CAGGACGATGT, -CAGGACGATG, -CAGGACGAT, -CAGGACGA, -CAGGACG, -CAGGAC, -CAGGA, -CAGG, -CAG, -CA или -C.

Еще более предпочтительно N3A представляет: CTGGCGA-, TGGCGA-, GGCGA-, GCGA-, -CAG, -CA или -C; и

N4A представляет: -CAGGACG, -CAGGAC, -CAGGA, -CAGG, -CAG, -CA или -C.

Предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S2A/SEQ. ID NO: 70) содержит 12-24 нуклеотида и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 5'-конце. В качестве нуклеотидов LNA (звеньев LNA) подходящими, в частности, являются таковые, раскрытые в разделе «Замкнутые нуклеиновые кислоты» (LNA®) и предпочтительно в разделе «Предпочтительные LNA», и в качестве межнуклеотидных мостиков подходящими являются, в частности, раскрытые в разделе «Межнуклеотидные связи (IL)».

Более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S2A) содержит 12-22 нуклеотида и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 5'-конце. Еще более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S2A) содержит 12-20, более предпочтительно 13-19 и еще более предпочтительно 14-18 нуклеотидов и, 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 5'-конце. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды представляют гапмеры формы LNA-сегмент A-сегмент ДНК-LNA-сегмент B. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды содержат, по меньшей мере, 6, более предпочтительно, по меньшей мере, 7, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA, таких как звенья ДНК, между двумя сегментами LNA. Подходящие азотистые основания для звеньев, которые не являются LNA, и звеньев LNA описаны в разделе «Азотистые основания».

Кроме того, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью 5'-N11-TGTTTAGG-N12-3' (SEQ. ID NO: 10), где:

N11 представляет: TGCCCCAGAAGAGCTATTTGGTAG-, GCCCCAGAAGAGCTATTTGGTAG-, CCCCAGAAGAGCTATTTGGTAG-, CCCAGAAGAGCTATTTGGTAG-, CCAGAAGAGCTATTTGGTAG-, CAGAAGAGCTATTTGGTAG-, AGAAGAGCTATTTGGTAG-, GAAGAGCTATTTGGTAG-, AAGAGCTATTTGGTAG-, AGAGCTATTTGGTAG-, GAGCTATTTGGTAG-, AGCTATTTGGTAG-, GCTATTTGGTAG-, CTATTTGGTAG-, TATTTGGTAG-, ATTTGGTAG-, TTTGGTAG-, TTGGTAG-, TGGTAG-, GGTAG-, GTAG-, TAG-, AG- или G-;

N12 представляет: -GAGCCGTCTTCAGGAATCTTCTCC, -GAGCCGTCTTCAGGAATCTTCTC, -GAGCCGTCTTCAGGAATCTTCT, -GAGCCGTCTTCAGGAATCTTC, -GAGCCGTCTTCAGGAATCTT, -GAGCCGTCTTCAGGAATCT, -GAGCCGTCTTCAGGAATC, -GAGCCGTCTTCAGGAAT, -GAGCCGTCTTCAGGAA, -GAGCCGTCTTCAGGA, -GAGCCGTCTTCAGG, -GAGCCGTCTTCAG, -GAGCCGTCTTCA, -GAGCCGTCTTC, -GAGCCGTCTT, -GAGCCGTCT, -GAGCCGTC, -GAGCCGT, -GAGCCG, -GAGCC, -GAGC, -GAG, -GA или -G;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида.

Антисмысловые олигонуклеотиды общей формулы S3 (SEQ. ID NO: 10) предпочтительно содержат 2-10 звеньев LNA, более предпочтительно 3-9 звеньев LNA и еще более предпочтительно 4-8 звеньев LNA и также предпочтительно, по меньшей мере, 6 звеньев, которые не являются LNA, более предпочтительно, по меньшей мере, 7 звеньев, которые не являются LNA, и наиболее предпочтительно 8 звеньев, которые не являются LNA. Звенья, которые не являются LNA, предпочтительно расположены на терминальном 3'-конце (также называемом 3'-концом) и терминальном 5'-конце (также называемом 5'-концом). Предпочтительно, по меньшей мере, одно и более предпочтительно, по меньшей мере, два звена LNA находятся на терминальном 3'-конце и терминальном 5'-конце. Таким образом, предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению, обозначенные как гапмеры, которые содержат 2-10 звеньев LNA и которые предпочтительно содержат 1-5 звеньев LNA на терминальном 5'-конце, и 1-5 звеньев LNA на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида и между звеньями LNA, по меньшей мере, 7 и более предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев ДНК. Более предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды содержат 2-4 звена LNA на терминальном 5'-конце, и 2-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и еще более предпочтительно содержат 3-4 звена LNA на терминальном 5'-конце, и 3-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и содержат предпочтительно, по меньшей мере, 7 звеньев, которые не являются LNA, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA, таких как звенья ДНК, между двумя сегментами LNA.

Кроме того, антисмысловые олигонуклеотиды могут содержать обычные азотистые основания, такие как аденин, гуанин, цитозин, тимин и урацил, а также их обычные производные, такие как 5-метилцитозин или 2-аминоаденин. Антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению могут также содержать модифицированные межнуклеотидные мостики, такие как фосфоротиоат или фосфородитиоат вместо фосфатных мостиков. Такие модификации могут присутствовать только в сегментах LNA или только в сегменте, который не является LNA, антисмыслового олигонуклеотида. В качестве звеньев LNA, в частности, остатки b1-b9, раскрытые здесь, являются особенно предпочтительными.

Таким образом, предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S3):

5'-N11-TGTTTAGG-N12-3' (SEQ. ID No: 10)

где:

N11 представляет: TGCCCCAGAAGAGCTATTTGGTAG-, GCCCCAGAAGAGCTATTTGGTAG-, CCCCAGAAGAGCTATTTGGTAG-, CCCAGAAGAGCTATTTGGTAG-, CCAGAAGAGCTATTTGGTAG-, CAGAAGAGCTATTTGGTAG-, AGAAGAGCTATTTGGTAG-, GAAGAGCTATTTGGTAG-, AAGAGCTATTTGGTAG-, AGAGCTATTTGGTAG-, GAGCTATTTGGTAG-, AGCTATTTGGTAG-, GCTATTTGGTAG-, CTATTTGGTAG-, TATTTGGTAG-, ATTTGGTAG-, TTTGGTAG-, TTGGTAG-, TGGTAG-, GGTAG-, GTAG-, TAG-, AG- или G-; и

N12 представляет: -GAGCCGTCTTCAGGAATCTTCTCC, -GAGCCGTCTTCAGGAATCTTCTC, -GAGCCGTCTTCAGGAATCTTCT, -GAGCCGTCTTCAGGAATCTTC, -GAGCCGTCTTCAGGAATCTT, -GAGCCGTCTTCAGGAATCT, -GAGCCGTCTTCAGGAATC, -GAGCCGTCTTCAGGAAT, -GAGCCGTCTTCAGGAA, -GAGCCGTCTTCAGGA, -GAGCCGTCTTCAGG, -GAGCCGTCTTCAG, -GAGCCGTCTTCA, -GAGCCGTCTTC, -GAGCCGTCTT, -GAGCCGTCT, -GAGCCGTC, -GAGCCGT, -GAGCCG, -GAGCC, -GAGC, -GAG, -GA или -G.

Предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S3) содержит 10-28 нуклеотидов и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 5'-конце. В качестве нуклеотидов LNA (звеньев LNA) подходящими, в частности, являются таковые, раскрытые в разделе «Замкнутые нуклеиновые кислоты» (LNA®) и предпочтительно в разделе «Предпочтительные LNA», и в качестве межнуклеотидных мостиков подходящими являются, в частности, раскрытые в разделе «Межнуклеотидные связи (IL)».

Более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S3) содержит 11-24 нуклеотида и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 5'-конце. Еще более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S3) содержит 12-20, более предпочтительно 13-19 и еще более предпочтительно 14-18 нуклеотидов и, 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 5'-конце. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды представляют гапмеры формы LNA-сегмент A-сегмент ДНК-LNA-сегмент B. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды содержат, по меньшей мере, 6, более предпочтительно, по меньшей мере, 7, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA, таких как звенья ДНК, между двумя сегментами LNA. Подходящие азотистые основания для звеньев, которые не являются LNA, и звеньев LNA описаны в разделе «Азотистые основания».

Также предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S3):

5'-N11-TGTTTAGG-N12-3'

где:

N11 представляет: AGAAGAGCTATTTGGTAG-, GAAGAGCTATTTGGTAG-, AAGAGCTATTTGGTAG-, AGAGCTATTTGGTAG-, GAGCTATTTGGTAG-, AGCTATTTGGTAG-, GCTATTTGGTAG-, CTATTTGGTAG-, TATTTGGTAG-, ATTTGGTAG-, TTTGGTAG-, TTGGTAG-, TGGTAG-, GGTAG-, GTAG-, TAG-, AG- или G-; и

N12 представляет: -GAGCCGTCTTCAGGAATC, -GAGCCGTCTTCAGGAAT, -GAGCCGTCTTCAGGAA, -GAGCCGTCTTCAGGA, -GAGCCGTCTTCAGG, -GAGCCGTCTTCAG, -GAGCCGTCTTCA, -GAGCCGTCTTC, -GAGCCGTCTT, -GAGCCGTCT, -GAGCCGTC, -GAGCCGT, -GAGCCG, -GAGCC, -GAGC, -GAG, -GA или -G.

Также предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S3):

5'-N11-TGTTTAGG-N12-3'

где:

N11 представляет: AGCTATTTGGTAG-, GCTATTTGGTAG-, CTATTTGGTAG-, TATTTGGTAG-, ATTTGGTAG-, TTTGGTAG-, TTGGTAG-, TGGTAG-, GGTAG-, GTAG-, TAG-, AG- или G-; и

N12 представляет: -GAGCCGTCTTCAG, -GAGCCGTCTTCA, -GAGCCGTCTTC, -GAGCCGTCTT, -GAGCCGTCT, -GAGCCGTC, -GAGCCGT, -GAGCCG, -GAGCC, -GAGC, -GAG, -GA или -G.

Также предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S3):

5'-N11-TGTTTAGG-N12-3'

где:

N11 представляет: TTTGGTAG-, TTGGTAG-, TGGTAG-, GGTAG-, GTAG-, TAG-, AG- или G-; и

N12 представляет: -GAGCCGTC, -GAGCCGT, -GAGCCG, -GAGCC, -GAGC, -GAG, -GA или -G.

Предпочтительно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 12-24 нуклеотидов, и, по меньшей мере, три из 12-24 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью 5'-N11A-GTGTTTAGGG-N12A-3' (SEQ. ID NO: 71), где:

N11A представляет: TGCCCCAGAAGAGCTATTTGGTA-, GCCCCAGAAGAGCTATTTGGTA-, CCCCAGAAGAGCTATTTGGTA-, CCCAGAAGAGCTATTTGGTA-, CCAGAAGAGCTATTTGGTA-, CAGAAGAGCTATTTGGTA- AGAAGAGCTATTTGGTA-, GAAGAGCTATTTGGTA-, AAGAGCTATTTGGTA-, AGAGCTATTTGGTA-, GAGCTATTTGGTA-, AGCTATTTGGTA-, GCTATTTGGTA-, CTATTTGGTA-, TATTTGGTA-, ATTTGGTA-, TTTGGTA-, TTGGTA-, TGGTA-, GGTA-, GTA-, TA- или A-;

N12A представляет: -AGCCGTCTTCAGGAATCTTCTCC, -AGCCGTCTTCAGGAATCTTCTC, -AGCCGTCTTCAGGAATCTTCT, -AGCCGTCTTCAGGAATCTTC, -AGCCGTCTTCAGGAATCTT, -AGCCGTCTTCAGGAATCT, -AGCCGTCTTCAGGAATC, -AGCCGTCTTCAGGAAT, -AGCCGTCTTCAGGAA, -AGCCGTCTTCAGGA, -AGCCGTCTTCAGG, -AGCCGTCTTCAG, -AGCCGTCTTCA, -AGCCGTCTTC, -AGCCGTCTT, -AGCCGTCT, -AGCCGTC, -AGCCGT, -AGCCG, -AGCC, -AGC, -AG или -A;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида.

Предпочтительно N11A представляет: AGAAGAGCTATTTGGTA-, GAAGAGCTATTTGGTA-, AAGAGCTATTTGGTA-, AGAGCTATTTGGTA-, GAGCTATTTGGTA-, AGCTATTTGGTA-, GCTATTTGGTA-, CTATTTGGTA-, TATTTGGTA-, ATTTGGTA-, TTTGGTA-, TTGGTA-, TGGTA-, GGTA-, GTA-, TA- или A-; и

N12A представляет: -AGCCGTCTTCAGGAATC, -AGCCGTCTTCAGGAAT, -AGCCGTCTTCAGGAA, -AGCCGTCTTCAGGA, -AGCCGTCTTCAGG, -AGCCGTCTTCAG, -AGCCGTCTTCA, -AGCCGTCTTC, -AGCCGTCTT, -AGCCGTCT, -AGCCGTC, -AGCCGT, -AGCCG, -AGCC, -AGC, -AG или -A.

Более предпочтительно N11A представляет: AGCTATTTGGTA-, GCTATTTGGTA-, CTATTTGGTA-, TATTTGGTA-, ATTTGGTA-, TTTGGTA-, TTGGTA-, TGGTA-, GGTA-, GTA-, TA- или A-; и

N12A представляет: -AGCCGTCTTCAG, -AGCCGTCTTCA, -AGCCGTCTTC, -AGCCGTCTT, -AGCCGTCT, -AGCCGTC, -AGCCGT, -AGCCG, -AGCC, -AGC, -AG или -A.

Еще более предпочтительно N11A представляет: TTTGGTA-, TTGGTA-, TGGTA-, GGTA-, GTA-, TA- или A-; и

N12A представляет: -AGCCGTC, -AGCCGT, -AGCCG, -AGCC, -AGC, -AG или -A.

Предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S3A/SEQ. ID NO: 71) содержит 12-24 нуклеотидов и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 5'-конце. В качестве нуклеотидов LNA (звеньев LNA) подходящими, в частности, являются таковые, раскрытые в разделе «Замкнутые нуклеиновые кислоты» (LNA®) и предпочтительно в разделе «Предпочтительные LNA», и в качестве межнуклеотидных мостиков подходящими являются, в частности, раскрытые в разделе «Межнуклеотидные связи (IL)».

Более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S3A) содержит 12-22 нуклеотида и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 5'-конце. Еще более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S3A) содержит 12-20, более предпочтительно 13-19 и еще более предпочтительно 14-18 нуклеотидов и, 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 5'-конце. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды представляют гапмеры формы LNA-сегмент A-сегмент ДНК-LNA-сегмент B. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды содержат, по меньшей мере, 6, более предпочтительно, по меньшей мере, 7, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA, таких как звенья ДНК, между двумя сегментами LNA. Подходящие азотистые основания для звеньев, которые не являются LNA, и звеньев LNA описаны в разделе «Азотистые основания».

Кроме того, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью 5'-N5-TTTGGTAG-N6-3' (SEQ. ID NO: 11), где:

N5 представляет: GCCCAGCCTGCCCCAGAAGAGCTA-, CCCAGCCTGCCCCAGAAGAGCTA-, CCAGCCTGCCCCAGAAGAGCTA-, CAGCCTGCCCCAGAAGAGCTA-, AGCCTGCCCCAGAAGAGCTA-, GCCTGCCCCAGAAGAGCTA-, CCTGCCCCAGAAGAGCTA-, CTGCCCCAGAAGAGCTA-, TGCCCCAGAAGAGCTA-, GCCCCAGAAGAGCTA-, CCCCAGAAGAGCTA-, CCCAGAAGAGCTA-, CCAGAAGAGCTA-, CAGAAGAGCTA-, AGAAGAGCTA-, GAAGAGCTA-, AAGAGCTA-, AGAGCTA-, GAGCTA-, AGCTA-, GCTA-, CTA-, TA- или A-;

N6 представляет: -TGTTTAGGGAGCCGTCTTCAGGAA, -TGTTTAGGGAGCCGTCTTCAGGA, -TGTTTAGGGAGCCGTCTTCAGG, -TGTTTAGGGAGCCGTCTTCAG, -TGTTTAGGGAGCCGTCTTCA, -TGTTTAGGGAGCCGTCTTC, -TGTTTAGGGAGCCGTCTT, -TGTTTAGGGAGCCGTCT, -TGTTTAGGGAGCCGTC, -TGTTTAGGGAGCCGT, -TGTTTAGGGAGCCG, -TGTTTAGGGAGCC, -TGTTTAGGGAGC, -TGTTTAGGGAG, -TGTTTAGGGA, -TGTTTAGGG, -TGTTTAGG, -TGTTTAG, -TGTTTA, -TGTTT, -TGTT, -TGT, -TG или -T;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида.

Антисмысловые олигонуклеотиды общей формулы S4 (SEQ. ID NO: 11) предпочтительно содержат 2-10 звеньев LNA, более предпочтительно 3-9 звеньев LNA и еще более предпочтительно 4-8 звеньев LNA и также предпочтительно, по меньшей мере, 6 звеньев, которые не являются LNA, более предпочтительно, по меньшей мере, 7 звеньев, которые не являются LNA, и наиболее предпочтительно 8 звеньев, которые не являются LNA. Звенья, которые не являются LNA, предпочтительно расположены на терминальном 3'-конце (также называемом 3'-концом) и терминальном 5'-конце (также называемом 5'-концом). Предпочтительно, по меньшей мере, одно и более предпочтительно, по меньшей мере, два звена LNA находятся на терминальном 3'-конце и терминальном 5'-конце. Таким образом, предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению, обозначенные как гапмеры, которые содержат 2-10 звеньев LNA и которые предпочтительно содержат 1-5 звеньев LNA на терминальном 5'-конце, и 1-5 звеньев LNA на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида и между звеньями LNA, по меньшей мере, 7 и более предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев ДНК. Более предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды содержат 2-4 звена LNA на терминальном 5'-конце, и 2-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и еще более предпочтительные содержат 3-4 звена LNA на терминальном 5'-конце и 3-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и содержат предпочтительно, по меньшей мере, 7 звеньев, которые не являются LNA, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA, таких как звенья ДНК, между двумя сегментами LNA.

Кроме того, антисмысловые олигонуклеотиды могут содержать обычные азотистые основания, такие как аденин, гуанин, цитозин, тимин и урацил, а также их обычные производные, такие как 5-метилцитозин или 2-аминоаденин. Антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению могут также содержать модифицированные межнуклеотидные мостики, такие как фосфоротиоат или фосфородитиоат вместо фосфатных мостиков. Такие модификации могут присутствовать только в сегментах LNA или только в сегменте, который не является LNA, антисмыслового олигонуклеотида. В качестве звеньев LNA, в частности, остатки b1-b9, раскрытые здесь, являются особенно предпочтительными.

Таким образом, предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S4):

5'-N5-TTTGGTAG-N6-3' (SEQ. ID No: 11)

где:

N5 представляет: GCCCAGCCTGCCCCAGAAGAGCTA-, CCCAGCCTGCCCCAGAAGAGCTA-, CCAGCCTGCCCCAGAAGAGCTA-, CAGCCTGCCCCAGAAGAGCTA-, AGCCTGCCCCAGAAGAGCTA-, GCCTGCCCCAGAAGAGCTA-, CCTGCCCCAGAAGAGCTA-, CTGCCCCAGAAGAGCTA-, TGCCCCAGAAGAGCTA-, GCCCCAGAAGAGCTA-, CCCCAGAAGAGCTA-, CCCAGAAGAGCTA-, CCAGAAGAGCTA-, CAGAAGAGCTA-, AGAAGAGCTA-, GAAGAGCTA-, AAGAGCTA-, AGAGCTA-, GAGCTA-, AGCTA-, GCTA-, CTA-, TA- или A-; и

N6 выбран из: -TGTTTAGGGAGCCGTCTTCAGGAA, -TGTTTAGGGAGCCGTCTTCAGGA, -TGTTTAGGGAGCCGTCTTCAGG, -TGTTTAGGGAGCCGTCTTCAG, -TGTTTAGGGAGCCGTCTTCA, -TGTTTAGGGAGCCGTCTTC, -TGTTTAGGGAGCCGTCTT, -TGTTTAGGGAGCCGTCT, -TGTTTAGGGAGCCGTC, -TGTTTAGGGAGCCGT, -TGTTTAGGGAGCCG, -TGTTTAGGGAGCC, -TGTTTAGGGAGC, -TGTTTAGGGAG, -TGTTTAGGGA, -TGTTTAGGG, -TGTTTAGG, -TGTTTAG, -TGTTTA, -TGTTT, -TGTT, -TGT, -TG или -T.

Предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S4) содержит 10-28 нуклеотидов и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 5'-конце. В качестве нуклеотидов LNA (звеньев LNA) подходящими, в частности, являются таковые, раскрытые в разделе «Замкнутые нуклеиновые кислоты» (LNA®) и предпочтительно в разделе «Предпочтительные LNA», и в качестве межнуклеотидных мостиков подходящими являются, в частности, раскрытые в разделе «Межнуклеотидные связи (IL)».

Более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S4) содержит 11-24 нуклеотида и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 5'-конце. Еще более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S4) содержит 12-20, более предпочтительно 13-19 и еще более предпочтительно 14-18 нуклеотидов и, 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 5'-конце. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды представляют гапмеры формы LNA-сегмент A-сегмент ДНК-LNA-сегмент B. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды содержат, по меньшей мере, 6, более предпочтительно, по меньшей мере, 7, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA, таких как звенья ДНК, между двумя сегментами LNA. Подходящие азотистые основания для звеньев, которые не являются LNA, и звеньев LNA описаны в разделе «Азотистые основания».

Также предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S4):

5'-N5-TTTGGTAG-N6-3'

где:

N5 представляет: CCTGCCCCAGAAGAGCTA-, CTGCCCCAGAAGAGCTA-, TGCCCCAGAAGAGCTA-, GCCCCAGAAGAGCTA-, CCCCAGAAGAGCTA-, CCCAGAAGAGCTA-, CCAGAAGAGCTA-, CAGAAGAGCTA-, AGAAGAGCTA-, GAAGAGCTA-, AAGAGCTA-, AGAGCTA-, GAGCTA-, AGCTA-, GCTA-, CTA-, TA- или A-; и

N6 выбран из: -TGTTTAGGGAGCCGTCTT, -TGTTTAGGGAGCCGTCT, -TGTTTAGGGAGCCGTC, -TGTTTAGGGAGCCGT, -TGTTTAGGGAGCCG, -TGTTTAGGGAGCC, -TGTTTAGGGAGC, -TGTTTAGGGAG, -TGTTTAGGGA, -TGTTTAGGG, -TGTTTAGG, -TGTTTAG, -TGTTTA, -TGTTT, -TGTT, -TGT, -TG или -T.

Также предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S4):

5'-N5-TTTGGTAG-N6-3'

где:

N5 представляет: CCCAGAAGAGCTA-, CCAGAAGAGCTA-, CAGAAGAGCTA-, AGAAGAGCTA-, GAAGAGCTA-, AAGAGCTA-, AGAGCTA-, GAGCTA-, AGCTA-, GCTA-, CTA-, TA- или A-; и

N6 выбран из: -TGTTTAGGGAGCC, -TGTTTAGGGAGC, -TGTTTAGGGAG, -TGTTTAGGGA, -TGTTTAGGG, -TGTTTAGG, -TGTTTAG, -TGTTTA, -TGTTT, -TGTT, -TGT, -TG или -T.

Также предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S4):

5'-N5-TTTGGTAG-N6-3'

где:

N5 представляет: AAGAGCTA-, AGAGCTA-, GAGCTA-, AGCTA-, GCTA-, CTA-, TA- или A-; и

N6 выбран из: -TGTTTAGG, -TGTTTAG, -TGTTTA, -TGTTT, -TGTT, -TGT, -TG или -T.

Предпочтительно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 12-24 нуклеотидов, и, по меньшей мере, три из 12-24 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью 5'-N5A-ATTTGGTAGT-N6A-3' (SEQ. ID NO: 72), где:

N5A представляет: GCCCAGCCTGCCCCAGAAGAGCT-, CCCAGCCTGCCCCAGAAGAGCT-, CCAGCCTGCCCCAGAAGAGCT-, CAGCCTGCCCCAGAAGAGCT-, AGCCTGCCCCAGAAGAGCT-, GCCTGCCCCAGAAGAGCT-, CCTGCCCCAGAAGAGCT-, CTGCCCCAGAAGAGCT-, TGCCCCAGAAGAGCT-, GCCCCAGAAGAGCT-, CCCCAGAAGAGCT-, CCCAGAAGAGCT-, CCAGAAGAGCT-, CAGAAGAGCT-, AGAAGAGCT-, GAAGAGCT-, AAGAGCT-, AGAGCT-, GAGCT-, AGCT-, GCT-, CT- или T-; и

N6A представляет: -GTTTAGGGAGCCGTCTTCAGGAA, -GTTTAGGGAGCCGTCTTCAGGA, -GTTTAGGGAGCCGTCTTCAGG, -GTTTAGGGAGCCGTCTTCAG, -GTTTAGGGAGCCGTCTTCA, -GTTTAGGGAGCCGTCTTC, -GTTTAGGGAGCCGTCTT, -GTTTAGGGAGCCGTCT, -GTTTAGGGAGCCGTC, -GTTTAGGGAGCCGT, -GTTTAGGGAGCCG, -GTTTAGGGAGCC, -GTTTAGGGAGC, -GTTTAGGGAG, -GTTTAGGGA, -GTTTAGGG, -GTTTAGG, -GTTTAG, -GTTTA, -GTTT, -GTT, -GT или -G;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида.

Предпочтительно N5A представляет: CCTGCCCCAGAAGAGCT-, CTGCCCCAGAAGAGCT-, TGCCCCAGAAGAGCT-, GCCCCAGAAGAGCT-, CCCCAGAAGAGCT-, CCCAGAAGAGCT-, CCAGAAGAGCT-, CAGAAGAGCT-, AGAAGAGCT-, GAAGAGCT-, AAGAGCT-, AGAGCT-, GAGCT-, AGCT-, GCT-, CT- или T-; и

N6A представляет: -GTTTAGGGAGCCGTCTT, -GTTTAGGGAGCCGTCT, -GTTTAGGGAGCCGTC, -GTTTAGGGAGCCGT, -GTTTAGGGAGCCG, -GTTTAGGGAGCC, -GTTTAGGGAGC, -GTTTAGGGAG, -GTTTAGGGA, -GTTTAGGG, -GTTTAGG, -GTTTAG, -GTTTA, -GTTT, -GTT, -GT или -G.

Более предпочтительно N5A представляет: CCCAGAAGAGCT-, CCAGAAGAGCT-, CAGAAGAGCT-, AGAAGAGCT-, GAAGAGCT-, AAGAGCT-, AGAGCT-, GAGCT-, AGCT-, GCT-, CT- или T-; и

N6A представляет: -GTTTAGGGAGCC, -GTTTAGGGAGC, -GTTTAGGGAG, -GTTTAGGGA, -GTTTAGGG, -GTTTAGG, -GTTTAG, -GTTTA, -GTTT, -GTT, -GT или -G.

Еще более предпочтительно N5A представляет: AAGAGCT-, AGAGCT-, GAGCT-, AGCT-, GCT-, CT- или T-; и

N6A представляет: -GTTTAGG, -GTTTAG, -GTTTA, -GTTT, -GTT, -GT или -G.

Предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S4/SEQ. ID NO: 72) содержит 12-24 нуклеотидов и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 5'-конце. В качестве нуклеотидов LNA (звеньев LNA) подходящими, в частности, являются таковые, раскрытые в разделе «Замкнутые нуклеиновые кислоты» (LNA®) и предпочтительно в разделе «Предпочтительные LNA», и в качестве межнуклеотидных мостиков подходящими являются, в частности, раскрытые в разделе «Межнуклеотидные связи (IL)».

Более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S4A) содержит 12-22 нуклеотида и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 5'-конце. Еще более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S4) содержит 12-20, более предпочтительно 13-19 и еще более предпочтительно 14-18 нуклеотидов и, 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 5'-конце. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды представляют гапмеры формы LNA-сегмент A-сегмент ДНК-LNA-сегмент B. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды содержат, по меньшей мере, 6, более предпочтительно, по меньшей мере, 7, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA, таких как звенья ДНК, между двумя сегментами LNA. Подходящие азотистые основания для звеньев, которые не являются LNA, и звеньев LNA описаны в разделе «Азотистые основания».

Кроме того, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью 5'-N7-AATGGACC-N8-3' (SEQ. ID NO: 100), где:

N7 представляет: TGAATCTTGAATATCTCATG-, GAATCTTGAATATCTCATG-, AATCTTGAATATCTCATG-, ATCTTGAATATCTCATG-, TCTTGAATATCTCATG-, CTTGAATATCTCATG-, TTGAATATCTCATG-, TGAATATCTCATG-, GAATATCTCATG-, AATATCTCATG-, ATATCTCATG-, TATCTCATG-, ATCTCATG-, TCTCATG-, CTCATG-, TCATG-, CATG-, ATG-, TG- или G-;

N8 представляет: -AGTATTCTAGAAACTCACCA, -AGTATTCTAGAAACTCACC, -AGTATTCTAGAAACTCAC, -AGTATTCTAGAAACTCA, -AGTATTCTAGAAACTC, -AGTATTCTAGAAACT, -AGTATTCTAGAAAC, -AGTATTCTAGAAA, -AGTATTCTAGAA, -AGTATTCTAGA, -AGTATTCTAG, -AGTATTCTA, -AGTATTCT, -AGTATTC, -AGTATT, -AGTAT, -AGTA, -AGT, -AG или -A;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида.

Антисмысловые олигонуклеотиды общей формулы S6 (SEQ. ID NO: 100) предпочтительно содержат 2-10 звеньев LNA, более предпочтительно 3-9 звеньев LNA и еще более предпочтительно 4-8 звеньев LNA и также предпочтительно, по меньшей мере, 6 звеньев, которые не являются LNA, более предпочтительно, по меньшей мере, 7 звеньев, которые не являются LNA, и наиболее предпочтительно 8 звеньев, которые не являются LNA. Звенья, которые не являются LNA, предпочтительно представляют звенья ДНК. Звенья LNA предпочтительно расположены на терминальном 3'-конце (также называемом 3'-концом) и терминальном 5'-конце (также называемом 5'-концом). Предпочтительно, по меньшей мере, одно и более предпочтительно, по меньшей мере, две звена LNA находятся на терминальном 3'-конце и терминальном 5'-конце. Таким образом, предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению, обозначенные как гапмеры, которые содержат 2-10 звеньев LNA и которые предпочтительно содержат 1-5 звеньев LNA на терминальном 5'-конце, и 1-5 звеньев LNA на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида и между звеньями LNA, по меньшей мере, 7 и более предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев ДНК. Более предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды содержат 2-4 звена LNA на терминальном 5'-конце, и 2-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и еще более предпочтительно содержат 3-4 звена LNA на терминальном 5'-конце, и 3-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и содержат предпочтительно, по меньшей мере, 7 звеньев, которые не являются LNA, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA, таких как звенья ДНК, между двумя сегментами LNA.

Кроме того, антисмысловые олигонуклеотиды могут содержать обычные азотистые основания, такие как аденин, гуанин, цитозин, тимин и урацил, а также их обычные производные, такие как 5-метилцитозин или 2-аминоаденин. Антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению могут также содержать модифицированные межнуклеотидные мостики, такие как фосфоротиоат или фосфородитиоат вместо фосфатных мостиков. Такие модификации могут присутствовать только в сегментах LNA или только в сегменте, который не является LNA, антисмыслового олигонуклеотида. В качестве звеньев LNA, в частности, остатки b1-b9, раскрытые здесь, являются особенно предпочтительными.

Таким образом, предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S6):

5'-N7-AATGGACC-N8-3' (SEQ. ID No: 100)

где:

N7 представляет: TGAATCTTGAATATCTCATG-, GAATCTTGAATATCTCATG-, AATCTTGAATATCTCATG-, ATCTTGAATATCTCATG-, TCTTGAATATCTCATG-, CTTGAATATCTCATG-, TTGAATATCTCATG-, TGAATATCTCATG-, GAATATCTCATG-, AATATCTCATG-, ATATCTCATG-, TATCTCATG-, ATCTCATG-, TCTCATG-, CTCATG-, TCATG-, CATG-, ATG-, TG- или G-; и

N8 выбран из: -AGTATTCTAGAAACTCACCA, -AGTATTCTAGAAACTCACC, --AGTATTCTAGAAACTCAC, -AGTATTCTAGAAACTCA, -AGTATTCTAGAAACTC, -AGTATTCTAGAAACT, -AGTATTCTAGAAAC, -AGTATTCTAGAAA, -AGTATTCTAGAA, -AGTATTCTAGA, -AGTATTCTAG, -AGTATTCTA, -AGTATTCT, -AGTATTC, -AGTATT, -AGTAT, -AGTA, -AGT, -AG или -A.

Предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S6) содержит 10-28 нуклеотидов и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 5'-конце. В качестве нуклеотидов LNA (звеньев LNA) подходящими, в частности, являются таковые, раскрытые в разделе «Замкнутые нуклеиновые кислоты» (LNA®) и предпочтительно в разделе «Предпочтительные LNA», и в качестве межнуклеотидных мостиков подходящими являются, в частности, раскрытые в разделе «Межнуклеотидные связи (IL)».

Более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S6) содержит 11-24 нуклеотида и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 5'-конце. Еще более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S6) содержит 12-20, более предпочтительно 13-19 и еще более предпочтительно 14-18 нуклеотидов и, 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 5'-конце. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды представляют гапмеры формы LNA-сегмент A-сегмент ДНК-LNA-сегмент B. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды содержат, по меньшей мере, 6, более предпочтительно, по меньшей мере, 7, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA, таких как звенья ДНК, между двумя сегментами LNA. Подходящие азотистые основания для звеньев, которые не являются LNA, и звеньев LNA описаны в разделе «Азотистые основания».

Также предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S6):

5'-N7-AATGGACC-N8-3'

где:

N7 представляет: AATCTTGAATATCTCATG-, ATCTTGAATATCTCATG-, TCTTGAATATCTCATG-, CTTGAATATCTCATG-, TTGAATATCTCATG-, TGAATATCTCATG-, GAATATCTCATG-, AATATCTCATG-, ATATCTCATG-, TATCTCATG-, ATCTCATG-, TCTCATG-, CTCATG-, TCATG-, CATG-, ATG-, TG- или G-; и

N8 выбран из: -AGTATTCTAGAAACTCAC, -AGTATTCTAGAAACTCA, -AGTATTCTAGAAACTC, -AGTATTCTAGAAACT, -AGTATTCTAGAAAC, -AGTATTCTAGAAA, -AGTATTCTAGAA, -AGTATTCTAGA, -AGTATTCTAG, -AGTATTCTA, -AGTATTCT, -AGTATTC, -AGTATT, -AGTAT, -AGTA, -AGT, -AG или -A.

Также предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S6):

5'-N7-AATGGACC-N8-3'

где:

N7 представляет: TGAATATCTCATG-, GAATATCTCATG-, AATATCTCATG-, ATATCTCATG-, TATCTCATG-, ATCTCATG-, TCTCATG-, CTCATG-, TCATG-, CATG-, ATG-, TG- или G-; и

N8 выбран из: -AGTATTCTAGAAA, -AGTATTCTAGAA, -AGTATTCTAGA, -AGTATTCTAG, -AGTATTCTA, -AGTATTCT, -AGTATTC, -AGTATT, -AGTAT, -AGTA, -AGT, -AG или -A.

Также предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S6):

5'-N7-AATGGACC-N8-3'

где:

N7 представляет: ATCTCATG-, TCTCATG-, CTCATG-, TCATG-, CATG-, ATG-, TG- или G-; и

N8 выбран из: -AGTATTCT, -AGTATTC, -AGTATT, -AGTAT, -AGTA, -AGT, -AG или -A.

Предпочтительно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 12-24 нуклеотидов, и, по меньшей мере, три из 12-24 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью

5'-N7A-GAATGGACCA-N8A-3' (SEQ. ID NO: 73)

где:

N7A представляет: TGAATCTTGAATATCTCAT-, GAATCTTGAATATCTCAT-, AATCTTGAATATCTCAT-, ATCTTGAATATCTCAT-, TCTTGAATATCTCAT-, CTTGAATATCTCAT-, TTGAATATCTCAT-, TGAATATCTCAT-, GAATATCTCAT-, AATATCTCAT-, ATATCTCAT-, TATCTCAT-, ATCTCAT-, TCTCAT-, CTCAT-, TCAT-, CAT-, AT- или T-;

N8A представляет: -GTATTCTAGAAACTCACCA, -GTATTCTAGAAACTCACC, -GTATTCTAGAAACTCAC, -GTATTCTAGAAACTCA, -GTATTCTAGAAACTC, -GTATTCTAGAAACT, -GTATTCTAGAAAC, -GTATTCTAGAAA, -GTATTCTAGAA, -GTATTCTAGA, -GTATTCTAG, -GTATTCTA, -GTATTCT, -GTATTC, -GTATT, -GTAT, -GTA, -GT или -G;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида.

Предпочтительно N7A представляет: AATCTTGAATATCTCAT-, ATCTTGAATATCTCAT-, TCTTGAATATCTCAT-, CTTGAATATCTCAT-, TTGAATATCTCAT-, TGAATATCTCAT-, GAATATCTCAT-, AATATCTCAT-, ATATCTCAT-, TATCTCAT-, ATCTCAT-, TCTCAT-, CTCAT-, TCAT-, CAT-, AT- или T-; и

N8A представляет: -GTATTCTAGAAACTCAC, -GTATTCTAGAAACTCA, -GTATTCTAGAAACTC, -GTATTCTAGAAACT, -GTATTCTAGAAAC, -GTATTCTAGAAA, -GTATTCTAGAA, -GTATTCTAGA, -GTATTCTAG, -GTATTCTA, -GTATTCT, -GTATTC, -GTATT, -GTAT, -GTA, -GT или -G.

Более предпочтительно N7A представляет: TGAATATCTCAT-, GAATATCTCAT-, AATATCTCAT-, ATATCTCAT-, TATCTCAT-, ATCTCAT-, TCTCAT-, CTCAT-, TCAT-, CAT-, AT- или T-; и

N8A представляет: -GTATTCTAGAAA, -GTATTCTAGAA, -GTATTCTAGA, -GTATTCTAG, -GTATTCTA, -GTATTCT, -GTATTC, -GTATT, -GTAT, -GTA, -GT или -G.

Еще более предпочтительно N7A представляет: ATCTCAT-, TCTCAT-, CTCAT-, TCAT-, CAT-, AT- или T-; и

N8A представляет: -GTATTCT, -GTATTC, -GTATT, -GTAT, -GTA, -GT или -G.

Предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S6А/SEQ. ID NO: 73) содержит 12-24 нуклеотидов и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 5'-конце. В качестве нуклеотидов LNA (звеньев LNA) подходящими, в частности, являются таковые, раскрытые в разделе «Замкнутые нуклеиновые кислоты» (LNA®) и предпочтительно в разделе «Предпочтительные LNA», и в качестве межнуклеотидных мостиков подходящими являются, в частности, раскрытые в разделе «Межнуклеотидные связи (IL)».

Более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S6A) содержит 12-22 нуклеотида и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 5'-конце. Еще более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S6A) содержит 12-20, более предпочтительно 13-19 и еще более предпочтительно 14-18 нуклеотидов и, 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 5'-конце. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды представляют гапмеры формы LNA-сегмент A-сегмент ДНК-LNA-сегмент B. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды содержат, по меньшей мере, 6, более предпочтительно, по меньшей мере, 7, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA, таких как звенья ДНК, между двумя сегментами LNA. Подходящие азотистые основания для звеньев, которые не являются LNA, и звеньев LNA описаны в разделе «Азотистые основания».

Кроме того, настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 10-28 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью 5'-N9-ATTAATAA-N10-3' (SEQ. ID NO: 101), где:

N9 представляет: ATTCATATTTATATACAGGC-, TTCATATTTATATACAGGC-, TCATATTTATATACAGGC-, CATATTTATATACAGGC-, ATATTTATATACAGGC-, TATTTATATACAGGC-, ATTTATATACAGGC-, TTTATATACAGGC-, TTATATACAGGC-, TATATACAGGC-, ATATACAGGC-, TATACAGGC-, ATACAGGC-, TACAGGC-, ACAGGC-, CAGGC-, AGGC-, GGC-, GC- или C-;

N10 представляет: -AGTGCAAATGTTATTGGCTA, -AGTGCAAATGTTATTGGCT, -AGTGCAAATGTTATTGGC, -AGTGCAAATGTTATTGG, -AGTGCAAATGTTATTG, -AGTGCAAATGTTATT, -AGTGCAAATGTTAT, -AGTGCAAATGTTA, -AGTGCAAATGTT, -AGTGCAAATGT, -AGTGCAAATG, -AGTGCAAAT, -AGTGCAAA, -AGTGCAA, -AGTGCA, -AGTGC, -AGTG, -AGT, -AG или -A;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида.

Антисмысловые олигонуклеотиды общей формулы S7 (SEQ. ID NO: 101) предпочтительно содержат 2-10 звеньев LNA, более предпочтительно 3-9 звеньев LNA и еще более предпочтительно 4-8 звеньев LNA и также предпочтительно, по меньшей мере, 6 звеньев, которые не являются LNA, более предпочтительно, по меньшей мере, 7 звеньев, которые не являются LNA и наиболее предпочтительно 8 звеньев, которые не являются LNA. Звенья, которые не являются LNA, предпочтительно представляют звенья ДНК. Звенья LNA предпочтительно расположены на терминальном 3'-конце (также называемом 3'-концом) и терминальном 5'-конце (также называемом 5'-концом). Предпочтительно, по меньшей мере, одно и более предпочтительно, по меньшей мере, две звена LNA находятся на терминальном 3'-конце и терминальном 5'-конце. Таким образом, предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению, обозначенные как гапмеры, которые содержат 2-10 звеньев LNA и которые предпочтительно содержат 1-5 звеньев LNA на терминальном 5'-конце, и 1-5 звеньев LNA на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида и между звеньями LNA, по меньшей мере, 7 и более предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев ДНК. Более предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды содержат 2-4 звена LNA на терминальном 5'-конце, и 2-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и еще более предпочтительно содержат 3-4 звена LNA на терминальном 5'-конце, и 3-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и содержат предпочтительно, по меньшей мере, 7 звеньев, которые не являются LNA, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA, таких как звенья ДНК, между двумя сегментами LNA.

Кроме того, антисмысловые олигонуклеотиды могут содержать обычные азотистые основания, такие как аденин, гуанин, цитозин, тимин и урацил, а также их обычные производные, такие как 5-метилцитозин или 2-аминоаденин. Антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению могут также содержать модифицированные межнуклеотидные мостики, такие как фосфоротиоат или фосфородитиоат вместо фосфатных мостиков. Такие модификации могут присутствовать только в сегментах LNA или только в сегменте, который не является LNA, антисмыслового олигонуклеотида. В качестве звеньев LNA, в частности, остатки b1-b9, раскрытые здесь, являются особенно предпочтительными.

Таким образом, предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S7):

5'-N9-ATTAATAA-N10-3' (SEQ. ID No: 101)

где:

N9 представляет: ATTCATATTTATATACAGGC-, TTCATATTTATATACAGGC-, TCATATTTATATACAGGC-, CATATTTATATACAGGC-, ATATTTATATACAGGC-, TATTTATATACAGGC-, ATTTATATACAGGC-, TTTATATACAGGC-, TTATATACAGGC-, TATATACAGGC-, ATATACAGGC-, TATACAGGC-, ATACAGGC-, TACAGGC-, ACAGGC-, CAGGC-, AGGC-, GGC-, GC- или C-; и

N10 выбран из: -AGTGCAAATGTTATTGGCTA, -AGTGCAAATGTTATTGGCT, -AGTGCAAATGTTATTGGC, -AGTGCAAATGTTATTGG, -AGTGCAAATGTTATTG, -AGTGCAAATGTTATT, -AGTGCAAATGTTAT, -AGTGCAAATGTTA, -AGTGCAAATGTT, -AGTGCAAATGT, -AGTGCAAATG, -AGTGCAAAT, -AGTGCAAA, -AGTGCAA, -AGTGCA, -AGTGC, -AGTG, -AGT, -AG или -A.

Предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S7) содержит 10-28 нуклеотидов и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 5'-конце. В качестве нуклеотидов LNA (звеньев LNA) подходящими, в частности, являются таковые, раскрытые в разделе «Замкнутые нуклеиновые кислоты» (LNA®) и предпочтительно в разделе «Предпочтительные LNA», и в качестве межнуклеотидных мостиков подходящими являются, в частности, раскрытые в разделе «Межнуклеотидные связи (IL)».

Более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S7) содержит 11-24 нуклеотида и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 5'-конце. Еще более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S7) содержит 12-20, более предпочтительно 13-19 и еще более предпочтительно 14-18 нуклеотидов и, 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 5'-конце. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды представляют гапмеры формы LNA-сегмент A-сегмент ДНК-LNA-сегмент B. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды содержат, по меньшей мере, 6, более предпочтительно, по меньшей мере, 7, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA, таких как звенья ДНК, между двумя сегментами LNA. Подходящие азотистые основания для звеньев, которые не являются LNA, и звеньев LNA описаны в разделе «Азотистые основания».

Также предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S7):

5'-N9-ATTAATAA-N10-3'

где:

N 9 представляет: TCATATTTATATACAGGC-, CATATTTATATACAGGC-, ATATTTATATACAGGC-, TATTTATATACAGGC-, ATTTATATACAGGC-, TTTATATACAGGC-, TTATATACAGGC-, TATATACAGGC-, ATATACAGGC-, TATACAGGC-, ATACAGGC-, TACAGGC-, ACAGGC-, CAGGC-, AGGC-, GGC-, GC- или C-; и

N10 выбран из: -AGTGCAAATGTTATTGGC, -AGTGCAAATGTTATTGG, -AGTGCAAATGTTATTG, -AGTGCAAATGTTATT, -AGTGCAAATGTTAT, -AGTGCAAATGTTA, -AGTGCAAATGTT, -AGTGCAAATGT, -AGTGCAAATG, -AGTGCAAAT, -AGTGCAAA, -AGTGCAA, -AGTGCA, -AGTGC, -AGTG, -AGT, -AG или -A.

Также предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S7):

5'-N9-ATTAATAA-N10-3'

где:

N9 представляет: TTTATATACAGGC-, TTATATACAGGC-, TATATACAGGC-, ATATACAGGC-, TATACAGGC-, ATACAGGC-, TACAGGC-, ACAGGC-, CAGGC-, AGGC-, GGC-, GC- или C-; и

N10 выбран из: -AGTGCAAATGTTA, -AGTGCAAATGTT, -AGTGCAAATGT, -AGTGCAAATG, -AGTGCAAAT, -AGTGCAAA, -AGTGCAA, -AGTGCA, -AGTGC, -AGTG, -AGT, -AG или -A.

Также предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S7):

5'-N9-ATTAATAA-N10-3'

где:

N9 представляет:: ATACAGGC-, TACAGGC-, ACAGGC-, CAGGC-, AGGC-, GGC-, GC- или C-; и

N10 выбран из: -AGTGCAAA, -AGTGCAA, -AGTGCA, -AGTGC, -AGTG, -AGT, -AG или -A.

Предпочтительно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 12-24 нуклеотидов, и, по меньшей мере, три из 12-24 нуклеотидов представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью

5'-N9A-CATTAATAAA-N10A-3' (SEQ. ID NO: 74)

где:

N9A представляет: ATTCATATTTATATACAGG-, TTCATATTTATATACAGG-, TCATATTTATATACAGG-, CATATTTATATACAGG-, ATATTTATATACAGG-, TATTTATATACAGG-, ATTTATATACAGG-, TTTATATACAGG-, TTATATACAGG-, TATATACAGG-, ATATACAGG-, TATACAGG-, ATACAGG-, TACAGG-, ACAGG-, CAGG-, AGG-, GG- или G-;

N10A представляет: -GTGCAAATGTTATTGGCTA, -GTGCAAATGTTATTGGCT, -GTGCAAATGTTATTGGC, -GTGCAAATGTTATTGG, -GTGCAAATGTTATTG, -GTGCAAATGTTATT, -GTGCAAATGTTAT, -GTGCAAATGTTA, -GTGCAAATGTT, -GTGCAAATGT, -GTGCAAATG, -GTGCAAAT, -GTGCAAA, -GTGCAA, -GTGCA, -GTGC, -GTG, -GT или -G;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида.

Предпочтительно N9A представляет: TCATATTTATATACAGG-, CATATTTATATACAGG-, ATATTTATATACAGG-, TATTTATATACAGG-, ATTTATATACAGG-, TTTATATACAGG-, TTATATACAGG-, TATATACAGG-, ATATACAGG-, TATACAGG-, ATACAGG-, TACAGG-, ACAGG-, CAGG-, AGG-, GG- или G-; и

N10A представляет: -GTGCAAATGTTATTGGCTA, -GTGCAAATGTTATTGGCT, -GTGCAAATGTTATTGGC, -GTGCAAATGTTATTGG, -GTGCAAATGTTATTG, -GTGCAAATGTTATT, -GTGCAAATGTTAT, -GTGCAAATGTTA, -GTGCAAATGTT, -GTGCAAATGT, -GTGCAAATG, -GTGCAAAT, -GTGCAAA, -GTGCAA, -GTGCA, -GTGC, -GTG, -GT или -G;

Более предпочтительно N9A представляет: TTTATATACAGG-, TTATATACAGG-, TATATACAGG-, ATATACAGG-, TATACAGG-, ATACAGG-, TACAGG-, ACAGG-, CAGG-, AGG-, GG- или G-; и

N10A представляет: -GTGCAAATGTTA, -GTGCAAATGTT, -GTGCAAATGT, -GTGCAAATG, -GTGCAAAT, -GTGCAAA, -GTGCAA, -GTGCA, -GTGC, -GTG, -GT или -G.

Еще более предпочтительно N9A представляет: ATACAGG-, TACAGG-, ACAGG-, CAGG-, AGG-, GG- или G-; и

N10A представляет: -GTGCAAA, -GTGCAA, -GTGCA, -GTGC, -GTG, -GT или -G.

Предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S7A/SEQ. ID NO: 74) содержит 12-24 нуклеотида и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 5'-конце. В качестве нуклеотидов LNA (звеньев LNA) подходящими, в частности, являются таковые, раскрытые в разделе «Замкнутые нуклеиновые кислоты» (LNA®) и предпочтительно в разделе «Предпочтительные LNA», и в качестве межнуклеотидных мостиков подходящими являются, в частности, раскрытые в разделе «Межнуклеотидные связи (IL)».

Более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S7A) содержит 12-22 нуклеотида и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 5'-конце. Еще более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S7А) содержит 12-20, более предпочтительно 13-19 и еще более предпочтительно 14-18 нуклеотидов и, 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 5'-конце. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды представляют гапмеры формы LNA-сегмент A-сегмент ДНК-LNA-сегмент B. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды содержат, по меньшей мере, 6, более предпочтительно, по меньшей мере, 7, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA, таких как звенья ДНК, между двумя сегментами LNA. Подходящие азотистые основания для звеньев, которые не являются LNA, и звеньев LNA описаны в разделе «Азотистые основания».

Предпочтительно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), состоящему из 8-18, предпочтительно 10-28 нуклеотидов, и, по меньшей мере, два из 8-28, предпочтительно 10-28 нуклеотидов, представляют LNA, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью:

5'-(N13)m-GTAGTGTT-(N14)n-3' (SEQ. ID NO: 99)

где:

N13 представляет: CCCAGCCTGCCCCAGAAGAGCTATTTG-, CCAGCCTGCCCCAGAAGAGCTATTTG-, CAGCCTGCCCCAGAAGAGCTATTTG-, AGCCTGCCCCAGAAGAGCTATTTG-, GCCTGCCCCAGAAGAGCTATTTG-, CCTGCCCCAGAAGAGCTATTTG-, CTGCCCCAGAAGAGCTATTTG-, TGCCCCAGAAGAGCTATTTG-, GCCCCAGAAGAGCTATTTG-, CCCCAGAAGAGCTATTTG-, CCCAGAAGAGCTATTTG-, CCAGAAGAGCTATTTG-, CAGAAGAGCTATTTG-, AGAAGAGCTATTTG-, GAAGAGCTATTTG-, AAGAGCTATTTG-, AGAGCTATTTG-, GAGCTATTTG-, AGCTATTTG-, GCTATTTG-, CTATTTG-, TATTTG-, ATTTG-, TTTG-, TTG-, TG- или G-;

N14 выбран из: -TAGGGAGCCGTCTTCAGGAATCTTCTC, -TAGGGAGCCGTCTTCAGGAATCTTCT, -TAGGGAGCCGTCTTCAGGAATCTTC, -TAGGGAGCCGTCTTCAGGAATCTT, -TAGGGAGCCGTCTTCAGGAATCT, -TAGGGAGCCGTCTTCAGGAATC, -TAGGGAGCCGTCTTCAGGAAT, -TAGGGAGCCGTCTTCAGGAA, -TAGGGAGCCGTCTTCAGGA, -TAGGGAGCCGTCTTCAGG, -TAGGGAGCCGTCTTCAG, -TAGGGAGCCGTCTTCA, -TAGGGAGCCGTCTTC, -TAGGGAGCCGTCTT, -TAGGGAGCCGTCT, -TAGGGAGCCGTC, -TAGGGAGCCGT, -TAGGGAGCCG, -TAGGGAGCC, -TAGGGAGC, -TAGGGAG, -TAGGGA, -TAGGG, -TAGG, -TAG, -TA или -T;

m равно 0 или 1;

n равно 0 или 1;

и n+m=1 или 2;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида.

Антисмысловые олигонуклеотиды общей формулы S5 (SEQ. ID NO: 99) предпочтительно содержат 2-10 звеньев LNA, более предпочтительно 3-9 звеньев LNA и еще более предпочтительно 4-8 звеньев LNA и также предпочтительно, по меньшей мере, 6 звеньев, которые не являются LNA, более предпочтительно, по меньшей мере, 7 звеньев, которые не являются LNA, и наиболее предпочтительно 8 звеньев, которые не являются LNA. Звенья, которые не являются LNA, предпочтительно представляют звенья ДНК. Звенья LNA предпочтительно расположены на терминальном 3'-конце (также называемом 3'-концом) и терминальном 5'-конце (также называемом 5'-концом). Предпочтительно, по меньшей мере, одно и более предпочтительно, по меньшей мере, две звена LNA находятся на терминальном 3'-конце и терминальном 5'-конце. Таким образом, предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению, обозначенные как гапмеры, которые содержат 2-10 звеньев LNA и которые предпочтительно содержат 1-5 звеньев LNA на терминальном 5'-конце, и 1-5 звеньев LNA на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида и между звеньями LNA, по меньшей мере, 7 и более предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев ДНК. Более предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды содержат 2-4 звена LNA на терминальном 5'-конце, и 2-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и еще более предпочтительно содержат 3-4 звена LNA на терминальном 5'-конце, и 3-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и содержат предпочтительно, по меньшей мере, 7 звеньев, которые не являются LNA, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA, таких как звенья ДНК, между двумя сегментами LNA.

Кроме того, антисмысловые олигонуклеотиды могут содержать обычные азотистые основания, такие как аденин, гуанин, цитозин, тимин и урацил, а также их обычные производные, такие как 5-метилцитозин или 2-аминоаденин. Антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению могут также содержать модифицированные межнуклеотидные мостики, такие как фосфоротиоат или фосфородитиоат вместо фосфатных мостиков. Такие модификации могут присутствовать только в сегментах LNA или только в сегменте, который не является LNA, антисмыслового олигонуклеотида. В качестве звеньев LNA, в частности, остатки b1-b9, раскрытые здесь, являются особенно предпочтительными.

Таким образом, предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S5):

5'-(N13)m-GTAGTGTT-(N14)n-3'

где:

N13 представляет: GCCTGCCCCAGAAGAGCTATTTG-, CCTGCCCCAGAAGAGCTATTTG-, CTGCCCCAGAAGAGCTATTTG-, TGCCCCAGAAGAGCTATTTG-, GCCCCAGAAGAGCTATTTG-, CCCCAGAAGAGCTATTTG-, CCCAGAAGAGCTATTTG-, CCAGAAGAGCTATTTG-, CAGAAGAGCTATTTG-, AGAAGAGCTATTTG-, GAAGAGCTATTTG-, AAGAGCTATTTG-, AGAGCTATTTG-, GAGCTATTTG-, AGCTATTTG-, GCTATTTG-, CTATTTG-, TATTTG-, ATTTG-, TTTG-, TTG-, TG- или G-; и

N14 выбран из: -TAGGGAGCCGTCTTC, -TAGGGAGCCGTCTT, -TAGGGAGCCGTCT, -TAGGGAGCCGTC, -TAGGGAGCCGT, -TAGGGAGCCG, -TAGGGAGCC, -TAGGGAGC, -TAGGGAG, -TAGGGA, -TAGGG, -TAGG, -TAG, -TA или -T; и

m равно 0 или 1; n равно 0 или 1; и n+m=1 или 2.

Предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S5) содержит 10-28 нуклеотидов и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 5'-конце. В качестве нуклеотидов LNA (звеньев LNA) подходящими, в частности, являются таковые, раскрытые в разделе «Замкнутые нуклеиновые кислоты» (LNA®) и предпочтительно в разделе «Предпочтительные LNA», и в качестве межнуклеотидных мостиков подходящими являются, в частности, раскрытые в разделе «Межнуклеотидные связи (IL)».

Более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S5) содержит 11-24 нуклеотида и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 5'-конце. Еще более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S5) содержит 12-20, более предпочтительно 13-19 и еще более предпочтительно 14-18 нуклеотидов и, 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 5'-конце. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды представляют гапмеры формы LNA-сегмент A-сегмент ДНК-LNA-сегмент B. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды содержат, по меньшей мере, 6, более предпочтительно, по меньшей мере, 7, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA, таких как звенья ДНК, между двумя сегментами LNA. Подходящие азотистые основания для звеньев, которые не являются LNA, и звеньев LNA описаны в разделе «Азотистые основания».

Также предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S5):

5'-(N13)m-GTAGTGTT-(N14)n-3'

где:

N13 представляет: CCCCAGAAGAGCTATTTG-, CCCAGAAGAGCTATTTG-, CCAGAAGAGCTATTTG-, CAGAAGAGCTATTTG-, AGAAGAGCTATTTG-, GAAGAGCTATTTG-, AAGAGCTATTTG-, AGAGCTATTTG-, GAGCTATTTG-, AGCTATTTG-, GCTATTTG-, CTATTTG-, TATTTG-, ATTTG-, TTTG-, TTG-, TG- или G-; и

N14 выбран из: -TAGGGAGCCG, -TAGGGAGCC, -TAGGGAGC, -TAGGGAG, -TAGGGA, -TAGGG, -TAGG, -TAG, -TA или -T; и

m равно 0 или 1; n равно 0 или 1; и n+m=1 или 2.

Также предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S5):

5'-(N13)m-GTAGTGTT-(N14)n-3'

где:

N13 представляет: GAAGAGCTATTTG-, AAGAGCTATTTG-, AGAGCTATTTG-, GAGCTATTTG-, AGCTATTTG-, GCTATTTG-, CTATTTG-, TATTTG-, ATTTG-, TTTG-, TTG-, TG- или G-; и

N14 выбран из: -TAGGG, -TAGG, -TAG, -TA или -T; и

m равно 0 или 1; n равно 0 или 1; и n+m=1 или 2.

Также предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S5):

5'-(N13)m-GTAGTGTT-(N14)n-3'

где:

N13 представляет: CAGAAGAGCTATTTG-, AGAAGAGCTATTTG-, GAAGAGCTATTTG-, AAGAGCTATTTG-, AGAGCTATTTG-, GAGCTATTTG-, AGCTATTTG-, GCTATTTG-, CTATTTG-, TATTTG-, ATTTG-, TTTG-, TTG-, TG- или G-; и

N14 выбран из: -TAGGGAGCCGTCTTCAGGAATCT, -TAGGGAGCCGTCTTCAGGAATC, -TAGGGAGCCGTCTTCAGGAAT, -TAGGGAGCCGTCTTCAGGAA, -TAGGGAGCCGTCTTCAGGA, -TAGGGAGCCGTCTTCAGG, -TAGGGAGCCGTCTTCAG, -TAGGGAGCCGTCTTCA, -TAGGGAGCCGTCTTC, -TAGGGAGCCGTCTT, -TAGGGAGCCGTCT, -TAGGGAGCCGTC, -TAGGGAGCCGT, -TAGGGAGCCG, -TAGGGAGCC, -TAGGGAGC, -TAGGGAG, -TAGGGA, -TAGGG, -TAGG, -TAG, -TA или -T; и

m равно 0 или 1; n равно 0 или 1; и n+m=1 или 2.

Также предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S5):

5'-(N13)m-GTAGTGTT-(N14)n-3'

где:

N13 представляет: GAGCTATTTG-, AGCTATTTG-, GCTATTTG-, CTATTTG-, TATTTG-, ATTTG-, TTTG-, TTG-, TG- или G-; и

N14 выбран из: -TAGGGAGCCGTCTTCAGG, -TAGGGAGCCGTCTTCAG, -TAGGGAGCCGTCTTCA, -TAGGGAGCCGTCTTC, -TAGGGAGCCGTCTT, -TAGGGAGCCGTCT, -TAGGGAGCCGTC, -TAGGGAGCCGT, -TAGGGAGCCG, -TAGGGAGCC, -TAGGGAGC, -TAGGGAG, -TAGGGA, -TAGGG, -TAGG, -TAG, -TA или -T; и

m равно 0 или 1; n равно 0 или 1; и n+m=1 или 2.

Также предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды формулы (S5):

5'-(N13)m-GTAGTGTT-(N14)n-3'

где:

N13 представляет: ATTTG-, TTTG-, TTG-, TG- или G-; и

N14 выбран из: -TAGGGAGCCGTCT, -TAGGGAGCCGTC, -TAGGGAGCCGT, -TAGGGAGCCG, -TAGGGAGCC, -TAGGGAGC, -TAGGGAG, -TAGGGA, -TAGGG, -TAGG, -TAG, -TA или -T; и

m равно 0 или 1; n равно 0 или 1; и n+m=1 или 2.

Предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S5/SEQ. ID NO: 99) содержит 12-24 нуклеотида и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, один нуклеотид LNA на 5'-конце. В качестве нуклеотидов LNA (звеньев LNA) подходящими, в частности, являются таковые, раскрытые в разделе «Замкнутые нуклеиновые кислоты» (LNA®) и предпочтительно в разделе «Предпочтительные LNA», и в качестве межнуклеотидных мостиков подходящими являются, в частности, раскрытые в разделе «Межнуклеотидные связи (IL)».

Более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S5) содержит 12-22 нуклеотида и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, два нуклеотида LNA на 5'-конце.

Еще более предпочтительно антисмысловой олигонуклеотид общей формулы (S5) содержит 12-20, более предпочтительно 13-19 и еще более предпочтительно 14-18 нуклеотидов и, 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 5'-конце. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды представляют гапмеры формы LNA-сегмент A-сегмент ДНК-LNA-сегмент B. Предпочтительно антисмысловые олигонуклеотиды содержат, по меньшей мере, 6, более предпочтительно, по меньшей мере, 7, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA, таких как звенья ДНК, между двумя сегментами LNA. Подходящие азотистые основания для звеньев, которые не являются LNA, и звеньев LNA описаны в разделе «Азотистые основания».

Еще один аспект настоящего изобретения относится к антисмысловому олигонуклеотиду(ам), имеющему длину из 10-28 нуклеотидов, предпочтительно 10-24 нуклеотидов, более предпочтительно 11-22 нуклеотидов, или 12-20 нуклеотидов, еще более предпочтительно 13-19 нуклеотидов и наиболее предпочтительно 14-18 нуклеотидов, где, по меньшей мере, два из нуклеотидов, предпочтительно, по меньшей мере, три из нуклеотидов, и более предпочтительно, по меньшей мере, четыре из нуклеотидов представляют LNA, и последовательность антисмыслового олигонуклеотида из 10-28 нуклеотидов, предпочтительно 10-24 нуклеотидов, более предпочтительно 11-22 нуклеотидов, или 12-20 нуклеотидов, еще более предпочтительно 13-19 нуклеотидов и наиболее предпочтительно 14-18 нуклеотидов выбрана из группы последовательностей из 10-28 нуклеотидов, предпочтительно 10-24 нуклеотидов, более предпочтительно 11-22 нуклеотидов, или 12-20 нуклеотидов, еще более предпочтительно 13-19 нуклеотидов и наиболее предпочтительно 14-18 нуклеотидов, входящих в состав последовательности, выбранной из следующей группы:

GAATCTTGAATATCTCATGAATGGACCAGTATTCTAGAAAC

(SEQ. ID NO. 75: 383-423 в последовательности SEQ. ID NO: 1),

TTCATATTTATATACAGGCATTAATAAAGTGCAAATGTTAT

(SEQ. ID NO. 77: 2245-2285 в последовательности SEQ. ID NO: 1),

TGAGGAAGTGCTAACACAGCTTATCCTATGACAATGTCAAAG

(SEQ. ID NO. 78: 2315-2356 в последовательности SEQ. ID NO: 1),

GCCTGCCCCAGAAGAGCTATTTGGTAGTGTTTAGGGAGCCGTCTTCAGG

(SEQ. ID NO. 79: 2528-2576 в последовательности SEQ. ID NO: 1),

CGCAGGTCCTCCCAGCTGATGACATGCCGCGTCAGGTACTCCTGTAGGT

(SEQ. ID NO. 81: 3205-3253 в последовательности SEQ. ID NO: 1),

ATGTCGTTATTAACCGACTTCTGAACGTGCGGTGGGATCGTGCTGGCGATACGCGTCCACAGGA

CGATGTGCAGCGGC

(SEQ. ID NO. 83: 4141-4218 в последовательности SEQ. ID NO: 1),

GGCCACAGGCCCCTGAGCAGCCCCCGACCCATGGCAGACCCCGCTGCTCGTCATAGACCGAGC

CCCCAGCGCAG

(SEQ. ID NO. 84: 4216-4289 в последовательности SEQ. ID NO: 1),

ATGTCGTTATTAACCGACTTCTGAACGTGCGGTGGGATCGTGCTGGCGATACGCGTCCACAGGA

CGATGTGCAGCGGCCACAGGCCCCTGAGCAGCCCCCGACCCATGGCAGACCCCGCTGCTCGTC

ATAGACCGAGCCCCCAGCGCAG

(SEQ. ID NO. 86: 4141-4289 в последовательности SEQ. ID NO: 1),

TTGAATATCTCATGAATGGACCAGTATTCTA

(SEQ. ID NO. 87: 388-418 в последовательности SEQ. ID NO: 1),

CAAGTGGAATTTCTAGGCGCCTCTATGCTACTG

(SEQ. ID NO. 88: 483-515 в последовательности SEQ. ID NO: 1),

ATTTATATACAGGCATTAATAAAGTGCAAAT

(SEQ. ID NO. 89: 2250-2280 в последовательности SEQ. ID NO: 1),

AAGTGCTAACACAGCTTATCCTATGACAATGT

(SEQ. ID NO. 90: 2320-2351 в последовательности SEQ. ID NO: 1),

CCCCAGAAGAGCTATTTGGTAGTGTTTAGGGAGCCGTCT

(SEQ. ID NO. 91: 2533-2571 в последовательности SEQ. ID NO: 1),

CTGGTCGCCCTCGATCTCTCAACACGTTGTCCTTCATGCTTTCGACACAGGGGTGCTCCCGCAC

CTTGGAACCAAATG

(SEQ. ID NO. 92: 2753-2830 в последовательности SEQ. ID NO: 1),

GTCCTCCCAGCTGATGACATGCCGCGTCAGGTACTCCTG

(SEQ. ID NO. 93: 3210-3248 в последовательности SEQ. ID NO: 1),

CTCAGCTTCTGCTGCCGGTTAACGCGGTAGCAGTAGAAGA

(SEQ. ID NO. 94: 3655-3694 в последовательности SEQ. ID NO: 1),

GTTATTAACCGACTTCTGAACGTGCGGTGGGATCGTGCTGGCGATACGCGTCCACAGGACGATGTGCA

(SEQ. ID NO. 95: 4146-4213 в последовательности SEQ. ID NO: 1),

CAGGCCCCTGAGCAGCCCCCGACCCATGGCAGACCCCGCTGCTCGTCATAGACCGAGCCCCCAG

(SEQ. ID NO. 96: 4221-4284 в последовательности SEQ. ID NO: 1),

CACGCGCGGGGGTGTCGTCGCTCCGTGCGCGCGAGTGACTCACTCAACTTCA

(SEQ. ID NO. 97: 4495-4546 в последовательности SEQ. ID NO: 1),

где антисмысловой олигонуклеотид способен избирательно гибридизоваться, по отношению ко всему транскриптому человека, только с геном, кодирующим TGF-RII, или с мРНК, кодирующей TGF-RII, и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида.

Указанный антисмысловой олигонуклеотид, имеющий последовательность, входящую в состав последовательностей № 75, 77, 78, 79, 81, 83, 84, 86-97, содержит 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 3'-конце, и 2-5, предпочтительно 3-5 и более предпочтительно 3-4 звена LNA на терминальном 5'-конце, и предпочтительно имеют структуру гапмеров формы LNA-сегмент A-сегмент ДНК-LNA-сегмент B. В качестве нуклеотидов LNA (звеньев LNA) подходящими, в частности, являются таковые, раскрытые в разделе «Замкнутые нуклеиновые кислоты» (LNA®) и предпочтительно в разделе «Предпочтительные LNA», и в качестве межнуклеотидных мостиков подходящими являются, в частности, раскрытые в разделе «Межнуклеотидные связи (IL)». Предпочтительно указанные антисмысловые олигонуклеотиды содержат, по меньшей мере, 6, более предпочтительно, по меньшей мере, 7, и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 8 звеньев, которые не являются LNA, таких как звенья ДНК, между двумя сегментами LNA. Подходящие азотистые основания для звеньев, которые не являются LNA, и звеньев LNA описаны в разделе «Азотистые основания». Подходящие примеры указанных антисмысловых олигонуклеотидов представлены формулами (S1)-(S7), (S1A)-(S4A), (S6A) и (S7A).

SEQ. ID NO: 1 представляет антисмысловую цепь кДНК (кДНК) (5'-3' антисмысловую последовательность) рецептора II трансформирующего фактора роста бета человека (TGF-RII), вариант транскрипта 2.

SEQ. ID NO: 2 представляет смысловую цепь кДНК (кДНК) (5'-3' смысловую последовательность) рецептора II трансформирующего фактора роста бета человека (70/80 кДа) (TGF-RII), вариант транскрипта 2. Альтернативно также можно рассматривать последовательность SEQ. ID NO: 2, как представляющую последовательность мРНК рецептора II трансформирующего фактора роста бета человека (TGF-RII), вариант транскрипта 2 (SEQ. ID NO: 3), но представленной в коде ДНК, т.е. представленной в коде G, C, A, T, а не в коде РНК.

SEQ. ID NO: 3 представляет мРНК (5'-3' смысловую последовательность) рецептора II трансформирующего фактора роста бета человека (TGF-RII), вариант транскрипта 2. Очевидно, что мРНК, показанная в SEQ. ID NO: 3, представлена в коде РНК, т.е. представлена в коде G, C, A, U.

Очевидно, понятно, что «кодирующая цепь ДНК», как здесь используется, относится к цепи ДНК, которая идентична мРНК (за исключением того, что представлена в коде ДНК), и которая включает кодоны, используемые для трансляции белка. Она не используется в качестве матрицы для транскрипции в мРНК. Таким образом, термины «кодирующая цепь ДНК», «смысловая цепь ДНК» и «нематричная цепь ДНК» могут быть использованы взаимозаменяемо. Кроме того, как здесь используется, термин «некодирующая цепь ДНК» относится к цепи ДНК, комплементарной «кодирующей цепи ДНК», и служит в качестве матрицы для транскрипции мРНК. Таким образом, термины «некодирующая цепь ДНК», «антисмысловая цепь ДНК» и «матричная цепь ДНК» могут быть использованы взаимозаменяемо.

Термин «антисмысловой олигонуклеотид» относится к олигомеру или полимеру рибонуклеиновой кислоты (РНК) или дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) или их миметикам, или вариантам, таким как антисмысловые олигонуклеотиды, имеющие измененную межнуклеотидную связь, такую как фосфортиоатная связь, и/или одно или более модифицированных азотистых оснований, таких как 5-метилцитозин, и/или одну или более модифицированных нуклеотидных звеньев, таких как LNA, например, β-D-окси-LNA. Термин «антисмысловой олигонуклеотид» включает олигонуклеотиды, состоящие из встречающихся в природе азотистых оснований, сахаров и ковалентных межнуклеотидных (остовных) связей, а также олигонуклеотиды, имеющие не встречающиеся в природе фрагменты, которые функционируют аналогично. Такие модифицированные или замещенные олигонуклеотиды часто являются предпочтительными по сравнению с нативными формами за счет наличия желаемых свойств, например, таких как повышенное поглощения клетками, повышенная аффинность для нуклеиновой кислоты-мишени и повышенная стабильность в присутствии нуклеаз. Антисмысловые олигонуклеотиды представляют короткие каталитические РНК или каталитические олигонуклеотиды, которые гибридизуются с нуклеиновой кислотой-мишенью и ингибируют ее экспрессию.

Термин «нуклеозид» хорошо известен специалистам в данной области и относится к пентозной сахарной группе, такой как рибоза, дезоксирибоза или модифицированная или замкнутая рибоза или модифицированная или замкнутая дезоксирибоза, такая как LNA, которые подробно описаны ниже. Азотистое основание связано с гликозидным атомом углерода (положение 1' пентозы), и межнуклеотидная связь образуется между атомом кислорода или серы в положении 3', и предпочтительно атомом кислорода в положении 3' нуклеозида и атомом кислорода или серы в положении 5' и предпочтительно атомом кислорода в положении 5' соседнего нуклеозида, в то время как межнуклеотидная связь отсутствует в нуклеозиде (смотри фиг. 2).

Термин «нуклеотид» хорошо известен специалистам в данной области и относится к пентозной сахарной группе, такой как рибоза, дезоксирибоза или модифицированная или замкнутая рибоза или модифицированная или замкнутая дезоксирибоза, такая как LNA, которые подробно описаны ниже. Азотистое основание связано с гликозидным атомом углерода (положение 1' пентозы), и межнуклеотидная связь образуется между атомом кислорода или серы в положении 3', и предпочтительно атомом кислорода в положении 3' нуклеотида и атомом кислорода или серы в положении 5' и предпочтительно атомом кислорода в положении 5' соседнего нуклеотида, в то время как межнуклеотидная связь является частью нуклеотида (смотри фиг. 2).

Азотистые основания

Термин «азотистое основание», сокращенно здесь как «В», и относится к пяти обычным азотистым основаниям аденину (А), тимину (Т), гуанину (G), цитозину (С) и урацилу (U), а также к их модификациям или аналогам, или аналогам, способным образовывать пары оснований согласно модели Уотсона-Крика с основаниями в комплементарной цепи. Модифицированные азотистые основания включают другие синтетические и природные азотистые основания, такие как 5-метилцитозин (С*), 5-гидроксиметилцитозин, N4-метилцитозин, ксантин, гипоксантин, 7-деазаксантин, 2-аминоаденин, 6-метиладенин, 6-метилгуанин, 6-этиладенин, 6-этилгуанин, 2-пропиладенин, 2-пропилгуанин, 6-карбоксиурацил, 5-галогенурацил, 5,6-дигидроурацил, 5-галогенцитозин, 5-пропинилурацил, 5-пропинилцитозин, 6-азаурацил, 6-азацитозин, 6-азатимин, 5-урацил (псевдоурацил), 4-тиоурацил, 8-фтораденин, 8-хлораденин, 8-бромаденин, 8-иодаденин, 8-аминоаденин, 8-тиоладенин, 8-тиоалкиладенин, 8-гидроксиаденин, 8-фторгуанин, 8-хлоргуанин, 8-бромгуанин, 8-иодгуанин, 8-аминогуанин, 8-тиолгуанин, 8-тиолалкилгуанин, 8-гидроксигуанин, 5-фторурацил, 5-бромурацил, 5-хлорурацил, 5-иодурацил, 5-трифторметилурацил, 5-фторцитозин, 5-бромцитозин, 5-хлорцитозин, 5-иодцитозин, 5-трифторметилцитозин, 7-метилгуанин, 7-метиладенин, 8-азагуанин, 8-азааденин, 7-деазагуанин, 7-деазааденин, 7-деаза-8-азааденин, 3-деазагуанин, 3-деазааденин, 2-тиоурацил, 2-тиотимин и 2 тиоцитозин и т.д., где 5-метилцитозин и/или 2-аминоаденин являются предпочтительными, поскольку эти модификации, как было показано, повышают стабильность дуплекса нуклеиновой кислоты.

Предпочтительные антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению могут содержать аналоги азотистых оснований. Азотистое основание только одного нуклеотидного звена антисмыслового олигонуклеотида может быть замещено аналогом азотистого основания, или два, три, четыре, пять или даже все азотистые основания в антисмысловом олигонуклеотиде могут быть замещены аналогами азотистых оснований, такими как 5-метилцитозин или N6-метиладенин, или 2-аминоаденин. Предпочтительно звенья LNA могут быть связаны с аналогами азотистых оснований, такими как 5-метилцитозин.

Следует иметь ввиду, что при обращении к последовательности нуклеотидов или мономеров, то, что называют, представляет собой последовательность оснований, таких как А, Т, G, C или U. Однако за исключением конкретных примеров, приведенных в таблицах 3-8, при представлении антисмысловых олигонуклеотидов буквенным кодом A, T, G, C и U следует понимать, что указанный антисмысловой олигонуклеотид может содержать любые азотистые основания, раскрытые здесь, любую 3'-концевую группу, раскрытую здесь, любую 5'-концевую группу, раскрытую здесь, и любую межнуклеотидную связь (также называемую межнуклеотидным мостиком), описанную здесь. Нуклеотиды А, Т, G, С и U также следует понимать как нуклеотиды LNA или нуклеотиды, которые не являются LNA, предпочтительно такие как нуклеотиды ДНК. Только в отношении конкретных примеров, приведенных в таблицах 4-9, азотистые основания, звенья LNA, звенья, которые не являются LNA, межнуклеотидные связи и концевые группы дополнительно определены, как указано в разделе «Список условных обозначений» перед таблицей 2.

Было доказано, что антисмысловые олигонуклеотиды, а также соли антисмысловых олигонуклеотидов, описанные здесь, являются комплементарными к мишени, которая представляет ген, кодирующий TGF-RII, или мРНК, кодирующую TGF-RII, т.е. гибридизуются достаточно эффективно и с достаточной специфичностью, и особенно избирательностью с получением желаемого ингибирующего эффекта.

Термин «соль» относится к физиологически и/или фармацевтически приемлемым солям антисмысловых олигонуклеотидов по настоящему изобретению. Антисмысловые олигонуклеотиды содержат азотистые основания, такие как аденин, гуанин, тимин, цитозин или их производные, которые являются основными соединениями и которые образуют соли, такие как хлорид или мезилат. Межнуклеотидная связь предпочтительно содержит отрицательно заряженный атом кислорода или серы, которые образуют соли, такие как соли натрия, лития или калия. Таким образом, фармацевтически приемлемые основно-аддитивные соли образованы неорганическими основаниями или органическими основаниями. Примеры подходящих органических и неорганических оснований представляют основания, полученные из ионов металлов, например, алюминия, ионов щелочных металлов, таких как натрий или калий, ионов щелочноземельных металлов, таких как кальций или магний, или иона аминной соли, или гидроксидов щелочных или щелочноземельных металлов, карбонатов или бикарбонатов. Примеры включают водный LiOH, NaOH, KOH, NH4OH, карбонат калия, аммиак и бикарбонат натрия, соли аммония, первичные, вторичные и третичные амины, например, такие как гидроксид тетраалкиламмония, низшие алкиламины, такие как метиламин, трет-бутиламин, прокаин, этаноламин, арилалкиламины, такие как дибензиламин и N,N-дибензилэтилендиамин, низшие алкилпиперидины, такие как N-этилпиперидин, циклоалкиламины, такие как циклогексиламин или дициклогексиламин, морфолин, глюкамин, N-метил- и N,N-диметилглюкамин, 1-адамантиламин, бензатин или соли, полученные из аминокислот, таких как аргинин, лизин, орнитин, или амиды исходно нейтральных или кислых аминокислот, хлорпрокаин, холин, прокаин и тому подобное.

Поскольку антисмысловые олигонуклеотиды являются основными соединениями, то они образуют фармацевтически приемлемые соли с органическими и неорганическими кислотами. Примерами пригодных кислот для образования такой кислотно-аддитивной соли являются соляная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, фосфорная кислота, уксусная кислота, лимонная кислота, щавелевая кислота, малоновая кислота, салициловая кислота, п-аминосалициловая кислота, яблочная кислота, фумаровая кислота, янтарная кислота, аскорбиновая кислота, малеиновая кислота, сульфоновая кислота, фосфоновая кислота, перхлорная кислота, азотная кислота, муравьиная кислота, пропионовая кислота, глюконовая кислота, молочная кислота, винная кислота, оксималеиновая кислота, пировиноградная кислота, фенилуксусная кислота, бензойная кислота, п-аминобензойная кислота, п-оксибензойная кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, азотистая кислота, оксиэтансульфоновая кислота, этиленсульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота, нафтилсульфоновая кислота, сульфаниловая кислота, камфорсульфоновая кислота, хиновая кислота, миндальная кислота, о-метилминдальная кислота, гидроксибензолсульфоновая кислота, пикриновая кислота, адипиновая кислота, D-o-толилвинная кислота, тартроновая кислота, α-толуиловая кислота, (о,м,п)-толуиловая кислота, нафтиламинсульфоновая кислота, и другие минеральные или карбоновые кислоты, хорошо известные специалистам в данной области. Соли получают взаимодействием свободного основания с достаточным количеством требуемой кислоты с получением соли обычным способом.

В контексте настоящего изобретения термин «гибридизация» означает гибридизацию нуклеиновых кислот, где одноцепочечная нуклеиновая кислота (ДНК или РНК) взаимодействует с другой одноцепочечной нуклеиновой кислотой, имеющей очень сходную или даже комплементарную последовательность. Таким образом, взаимодействие происходит за счет образования водородных связей между определенными азотистыми основаниями (спаривания оснований).

Как здесь используется, термин «комплементарность» (комплементарность пары оснований ДНК и РНК) относится к способности к точному спариванию между двумя нуклеиновыми кислотами. Нуклеотиды в паре оснований комплементарны друг другу, когда их форма позволяет им связываться друг с другом водородными связями. В результате чего образуется пара аденина и тимидина (или урацила) посредством образования двух водородных связей, и образуется пара цитозин-гуанин посредством образования трех водородных связей. Как здесь используется, термин «комплементарные последовательности» означает последовательности ДНК или РНК, которые, когда они выравниваются антипараллельно друг к другу, то азотистые основания в каждом положении в последовательностях будут комплементарны, как если смотреть в зеркало и видеть оборотную сторону предметов.

Как здесь используется, термин «специфически гибридизуемый» указывает на достаточную степень комплементарности или точного спаривания оснований антисмыслового олигонуклеотида с последовательностью-мишенью таким образом, что происходит стабильное и специфическое связывание между антисмысловым олигонуклеотидом и ДНК- или РНК-мишенью. Последовательность антисмыслового олигонуклеотида по изобретению не должна быть на 100% комплементарной по отношению к его нуклеиновой кислоте-мишени, чтобы быть специфически гибридизуемой, хотя, 100% комплементарность является предпочтительной. При этом «100% комплементарность» означает, что антисмысловой олигонуклеотид гибридизуется с мишенью по ее всей или полной длине без ошибочного спаривания. Другими словами, в настоящем изобретении определено, что антисмысловое соединение является специфически гибридизуемым, когда связывание соединения с молекулой-мишенью ДНК или РНК происходит в физиологических или патологических условиях, а неспецифическое связывание антисмыслового олигонуклеотида с немишеневыми последовательностями весьма маловероятно или даже невозможно.

Таким образом, настоящее изобретение предпочтительно относится к антисмысловым олигонуклеотидам, где антисмысловые олигонуклеотиды связываются со 100% комплементарностью с мРНК, кодирующей TGF RII, и не связываются с каким-либо другим участком в полном транскриптоме человека. Кроме того, предпочтительно настоящее изобретение относится к антисмысловым олигонуклеотидам, где антисмысловые олигонуклеотиды обладают 100% комплементарностью по их полной длине с мРНК, кодирующей TGF RII, и не обладают эффектами вне мишени. Альтернативно настоящее изобретение предпочтительно относится к антисмысловым олигонуклеотидам, обладающим 100% комплементарностью по отношению к мРНК, кодирующей TGF RII, но не обладает комплементарностью к другой мРНК транскриптома человека. Таким образом, термин «транскриптом человека» относится к полному набору транскриптов в человеческом организме, что означает транскрипты всех типов клеток и условий окружающей среды (в любой данный момент времени).

Специфичность

Антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению имеют общее свойство, заключающееся в том, что они специфичны в отношении участка, где они связываются с геном или с мРНК, кодирующей TGF-RII. По настоящему изобретению предпочтительно, чтобы в человеческом транскриптоме антисмысловые олигонуклеотиды обладали 100% комплементарностью по их полной длине только с мРНК, кодирующей TGF-RII. Кроме того, целью настоящего изобретения было найти антисмысловые олигонуклеотиды без перекрестной реактивности в пределах транскриптома млекопитающего, иного, чем обезьяны; в частности, антисмысловые олигонуклеотиды обладают только перекрестной реактивностью с транскриптомом человекообразных обезьян. Это позволит избежать проявления побочных эффектов. Таким образом, антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению обладают высокой специфичностью в отношении гибридизации с геном или с мРНК, кодирующей TGF-RII. Антисмысловые олигонуклеотиды по изобретению предпочтительно связываются по их полной длине со 100% комплементарностью, специфичной для гена, кодирующего TGF-RII, или мРНК, кодирующей TGF-RII, и не связываются с каким-либо другим участком во всем транскриптоме человека. Это означает, что антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению гибридизуются с мишенью (мРНК TGF-RII) без ошибочного спаривания.

Как здесь используется, термин «мРНК может включать мРНК, содержащую интроны (также относится к пре-мРНК), и также мРНК, которая не содержит интронов.

Антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению способны связываться или гибридизоваться с пре-мРНК и/или с мРНК. Это означает, что антисмысловые олигонуклеотиды могут связываться или гибридизоваться в области интрона или внутри области интрона пре-мРНК или могут связываться или гибридизоваться в перекрывающейся области интрон-экзон пре-мРНК или могут связываться или гибридизоваться в области экзона или внутри области экзона пре-мРНК и области экзона мРНК (см. фиг. 1). Предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды, которые способны связываться или гибридизоваться с пре-мРНК и мРНК. Связывание или гибридизация антисмысловых олигонуклеотидов (ASO) с пре-мРНК ингибирует образование 5'-кэппа, ингибирует сплайсинг пре-мРНК для образования мРНК, и активирует РНКазу H, которая расщепляет пре-мРНК. Связывание или гибридизация антисмысловых олигонуклеотидов (ASO) с мРНК активирует РНКазу H, которая расщепляет РНК и ингибирует связывание рибосомных субъединиц.

Антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению содержат, по меньшей мере, 10 и не более 28, предпочтительно не более чем 24 и более предпочтительно не более чем 20 нуклеотидов и, следовательно, содержат 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 нуклеотидов, предпочтительно 11-20 или 11-19, или 12-19, или 13-19, или 13-18 нуклеотидов и более предпочтительно 14- 18 нуклеотидов, где, по меньшей мере, два, предпочтительно три из этих нуклеотидов представляют замкнутые нуклеиновые кислоты (LNA). Также возможны более короткие антисмысловые олигонуклеотиды, т.е. антисмысловые олигонуклеотиды, содержащие менее 10 нуклеотидов, но чем короче антисмысловые олигонуклеотиды, тем выше риск, что гибридизация будет не достаточно сильной, и селективность будет снижаться или будет вовсе отсутствовать. Неселективные антисмысловые олигонуклеотиды несут риск связываться с нежелательными участками в человеческом транскриптоме и с нежелательными мРНК, кодирующими другие белки, чем TGF-RII, тем самым вызывая нежелательные побочные эффекты. Также возможны более длинные антисмысловые олигонуклеотиды, содержащие более чем 20 нуклеотидов, но дальнейшее увеличение длины делает синтез таких антисмысловых олигонуклеотидов еще более сложным и дорогостоящим, без какой-либо дополнительной пользы в отношении повышения селективности или силы гибридизации, или лучшей стабильности к деградации.

Таким образом, настоящее изобретение относится к антисмысловым олигонуклеотидам, состоящим из 10-20 нуклеотидов, где, по меньшей мере, два нуклеотида, и предпочтительно 3'- и 5'-концевых нуклеотида представляют LNA. Таким образом, предпочтительно, чтобы, по меньшей мере, 3'-концевой нуклеотид представлял LNA, и также, по меньшей мере, 5'-концевой нуклеотид представлял LNA. В том случае, если присутствует более чем 2 LNA, то предпочтительно, чтобы дополнительные LNA были связаны с 3'-или 5'-концевой LNA, как это имеет место в случае гапмеров, описанных здесь.

Один нуклеотидный строительный блок, присутствующий в антисмысловом олигонуклеотиде по настоящему изобретению, может быть представлен следующей общей формулой (B1) и (B2):

где:

В представляет азотистое основание;

IL' представляет -X''-Р(=Х')(X-);

R представляет -Н, -F, -OH, -NH2, -ОСН3, -OCH2CH2OCH3, и R# представляет -Н;

или R и R#, взятые вместе, образуют мостик -R#-R-, который выбран из -CH2-O-, -CH2-S-, -CH2-NH-, -CH2-N(CH3)-, -CH2-N(C2H5)-, -CH2-CH2-O-, -CH2-CH2-S-, -CH2-CH2-NH-, -CH2-CH2-N(CH3)- или -CH2-CH2-N(C2H5)-;

X' представляет =O или =S;

Х представляет -O-, -OH, -ORH, -NHRH, -N(RH)2, -OCH2CH2ORH, -OCH2CH2SRH, -BH3-, -RH, -SH, -SRH или -S-;

Х'' представляет -O-, -NH-, -NRH-, -CH2-, или -S-;

Y представляет -О-, -NH-, -NRH-, -CH2- или -S-;

RH выбран из атома водорода и С1-4-алкила и предпочтительно -СН3 или -С2Н5 и наиболее предпочтительно -CH3.

Предпочтительно Х- представляет -O-, -OH, -OCH3, -NH(CH3), -N (CH3)2, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2SCH3, -BH3-, -СН3, -SH, -SCH3 или -S-; и более предпочтительно -O-, -OH, -OCH3, -N(CH3)2, -OCH2CH2OCH3, -BH3-, -SH, -SCH3 или -S-.

IL' предпочтительно представляет -O-P(O)(O-)-, -OP(O)(S-)-, -O-P(S)(S-)-, -S-P(O)(O-)-, -S-P(O)(S-)-, -S-Р(S)(S-)-, -O-P(O)O-)-, -O-P(O)(S-)-, -S-Р(O)(O-)-, -O-P(O)(RH)-, -O-P(O)(ORH)-, -O-P(O) (NHRH)-, -O-P(O)[N(RH)2]-, -O-P(O) (BH3-)-, -O-P(O)(OCH2CH2ORH)-, -O-P(O)(OCH2CH2SRH)-, -O-Р(O)(O-)-, -NRH-P(O)(O-)-, где RH выбран из атома водорода и С1-4-алкила.

Группа -O-P(O)(RH)-O- предпочтительно представляет -O-P(O)(CH3)-O- или -O-P(O)(C2H5)-O-, и наиболее предпочтительно -O-P(O)(CH3)-O-.

Группа -O-P(O)(ORH)-O- предпочтительно представляет -O-P(O)(OCH3)-O- или -O-P(O)(OC2H5)-O-, и наиболее предпочтительно -O-P(O)(OCH3)-O-.

Группа -O-Р(O)(NHRH)-O- предпочтительно представляет -O-P(O)(NHCH3)-O- или -O-P(O)(NHC2H5)-O- и наиболее предпочтительно -O-P(O)(NHCH3)-О-.

Группа -O-Р(O)[N(RH)2]-O- предпочтительно представляет -O-P(O)[N(CH3)2]-O- или -O-P(O)[N(C2H5)2]-О-, и наиболее предпочтительно -O-P(O)[N(CH3)2]-O-.

Группа -O-Р(O)(OCH2CH2ORH)-O- предпочтительно представляет -O-P(O)(OCH2CH2OCH3)-O- или -O-P(O)(OCH2CH2OC2H5)-O- и наиболее предпочтительно -O-P(O)(OCH2CH2OCH3)-О-.

Группа -O-Р(O)(OCH2CH2SRH)-O-, предпочтительно представляет -O-P(O)(OCH2CH2SCH3)-O- или -O-P(O)(OCH2CH2SC2H5)-O-, и наиболее предпочтительно -O-P(O)(OCH2CH2SCH3)-О-.

Группа -O-Р(O)(O-)-NRH- предпочтительно представляет -O-P(O)(O-)-NH- или -O-P(O)(O-)-N(CH3)- и наиболее предпочтительно -O-P(O)(O-)-NH-.

Группа -NRH-P(O)(O-)-O- предпочтительно представляет -NH-P(O)(O-)-O- или -N(CH3)-P(O)(O-)-O- и наиболее предпочтительно -NH-P(O)(O-)-O-.

Еще более предпочтительно IL' представляет -O-P(O)(O-)-, -O-P(O)(S-)-, -O-P(S)(S-)-, -O-Р(O)(NHRH)- или -O-P(O)[N(RH)2] -, и еще более предпочтительно IL' представляет -O-P(O)(O-)-, -O-P(O) (S-)- или -O-P(S)(S-)-, и наиболее предпочтительно IL' представляет -O-P(O)(S-)- или -O-P(S)(S-)-.

Предпочтительно Y представляет -О-.

Предпочтительно В представляет обычное азотистое основание, выбранное из A, T, G, C, U.

Предпочтительно IL представляет -O-P(=O)(S-) - или -O-P(=S) (S-)-.

Приведенные выше определения B, Y и IL' применимы также к формулам b1-b9.

Таким образом, следующие общие формулы (B3)-(B6) являются предпочтительными:

где:

В представляет азотистое основание и предпочтительно А, Т, G, C, U;

R представляет -H, -F, -OH, -NH2, -N(CH3)2, -OCH3, -OCH2CH2OCH3, -OCH2CH2CH2OH, -OCH2CH2CH2NH2 и предпочтительно -H;

R* представляет группу -R#-R-, как это определено ниже, и она, например, предпочтительно выбрана из -C(RaRb)-O-, -C(RaRb)-NRc-, -C(RaRb)-S- и -C(RaRb)-C(RaRb)-O-, где заместители Ra, Rb и Rc имеют значения, определенные здесь. Более предпочтительно R* выбран из -CH2-O-, -CH2-S-, -CH2-NH-, -CH2-N(CH3)-, -CH2-CH2-O- или -CH2-CH2-S-, более предпочтительно из -CH2-O-, -CH2-S-, -CH2-CH2-O- или -CH2-CH2-S-, и еще более предпочтительно из -CH2-O-, -CH2-S- или -CH2-CH2-O-, и еще более предпочтительно из -СН2-О- или -СН2-S-, и наиболее предпочтительно представляет -СН2-О-.

Примерами предпочтительных нуклеотидов, которые не представляют звенья LNA, являются следующие:

Межнуклеотидные связи (IL)

Мономеры антисмысловых олигонуклеотидов, описанных здесь, соединены друг с другом посредством межнуклеотидной связи. Соответственно, каждый мономер связан со смежным 3'-мономером через межнуклеотидную связь. Специалисту с обычной квалификацией в данной области техники понятно, что, в контексте настоящего изобретения 5'-мономер в конце олигомера не содержит 5'-межнуклеотидную связь, хотя, он может содержать концевую 5'-группу или нет. Термин «межнуклеотидная связь» означает группу, способную ковалентно связывать два нуклеотида, два нуклеотидных аналога, таких как две LNA, и нуклеотид и аналог нуклеотида, такой как LNA. Конкретные и предпочтительные примеры включают фосфатные группы и фосфортиоатные группы.

Нуклеотиды антисмысловых олигонуклеотидов по настоящему изобретению или соседние нуклеотидные последовательности соединены друг с другом посредством межнуклеотидных связей. Соответственно каждый нуклеотид связан через 5'-положение с соседним 3'-нуклеотидом через межнуклеотидную связь.

Антисмысловые олигонуклеотиды можно модифицировать различными способами. Возможны модификации в остове, и они относятся к антисмысловым олигонуклеотидам, где фосфатные группы (также называемые фосфодиэфирными группами) в их межнуклеотидном остове частично или полностью заменены другими группами. Предпочтительные модифицированные остовы антисмысловых олигонуклеотидов включают, например, фосфоротиоаты, хиральные фосфоротиоаты, фосфородитиоаты, фосфотриэфир, аминоалкилфосфотриэфиры, метил-, этил- и С310-алкилфосфонаты, включая 3'-алкиленфосфонаты и хиральные фосфонаты, фосфинаты, фосфороамидаты, включая 3'-аминофосфорамидат и аминоалкилфосфорамидаты, тионофосфорамидаты, тионоалкил фос фонаты, тионоалкилфосфотриэфиры и боранофосфаты, содержащие 3'-5' связи, их 2'-5' связанные аналоги, и таковые, которые имеют инвертированную полярность, где смежные пары нуклеотидных звеньев связаны 3'-5' с 5'-3' или 2'-5' с 5'-2'. Различные соли, смешанные соли и их свободные кислотные формы также включаются и раскрываются более подробно.

Подходящие межнуклеотидные связи включают таковые, которые описаны в международной заявке WO 2007/031091, например межнуклеотидные связи, приведенные в первом абзаце на странице 34 в WO 2007/031091 (включена в данное описание в качестве ссылки). В некоторых вариантах осуществления предпочтительно модифицировать межнуклеотидную связь по сравнению с обычной фосфодиэфирной связью, которая более устойчива к атаке нуклеаз, такую как фосфоротиоат или боранофосфат - эти две, принятые как опосредованное РНКазой Н расщепление, также представляют путь ингибирования антисмысловым олигонуклеотидом, приводящий к снижению экспрессии гена-мишени.

Межнуклеотидная связь состоит из группы IL', которая является группой, связанной с 3'-атомом углерода рибозного фрагмента и группой Y, которая является группой, связанной с 5'-углеродным атомом соседнего рибозного фрагмента, как показано в формуле (IL'Y) ниже:

Межнуклеотидная связь IL представлена -IL'-Y-. IL' представляет -X''-P(=X')(Х-)- так, что IL представляет -X''-P(=X')(X-)-Y-, где заместители Х-, Х', Х'' и Y имеют значения, определенные здесь.

Межнуклеотидная связь IL=-X''-P(=X')(X-)-Y- предпочтительно выбрана из группы, состоящей из:

-O-P(O)(O-)-О-, -OP(O)(S-)-О-, -O-P(S)(S-)-О-, -S-P(O)(O-)-О-, -S-P(O)(S-)-О-, -S-Р(S)(S-)-О-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O-)(S)-S-, -S-Р(O)(O-)-S-, -O-P(O)(RH)-О-, -O-P(O)(ORH)-О-, -O-P(O)(NHRH)-О-, -O-P(O)[N(RH)2]-О-, -O-P(O)(BH3-)-О-, -O-P(O)(OCH2CH2ORH)-О-, -O-P(O)(OCH2CH2SRH)-O-, -O-Р(O)(O-)-NRH-, -NRH-P(O)(O-)-O-, где RH выбран из атома водорода и С1-4-алкила.

Группа -O-P(O)(RH)-O- предпочтительно представляет -O-P(O)(CH3)-O- или -O-P(O)(C2H5)-O-, и наиболее предпочтительно -O-P(O)(CH3)-O-.

Группа -O-P(O)(ORH)-O- предпочтительно представляет -O-P(O)(OCH3)-O- или -O-P(O)(OC2H5)-O-, и наиболее предпочтительно -O-P(O)(OCH3)-O-.

Группа -O-Р(O)(NHRH)-O- предпочтительно представляет -O-P(O)(NHCH3)-O- или -O-P(O)(NHC2H5)-O- и наиболее предпочтительно -O-P(O)(NHCH3)-О-.

Группа -O-Р(O)[N(RH)2]-O- предпочтительно представляет -O-P(O)[N(CH3)2]-O- или -O-P(O)[N(C2H5)2]-О-, и наиболее предпочтительно -O-P(O)[N(CH3)2]-O-.

Группа -O-Р(O)(OCH2CH2ORH)-O- предпочтительно представляет -O-P(O)(OCH2CH2OCH3)-O- или -O-P(O)(OCH2CH2OC2H5)-O- и наиболее предпочтительно -O-P(O)(OCH2CH2OCH3)-О-.

Группа -O-Р(O)(OCH2CH2SRH)-O- предпочтительно представляет -O-P(O)(OCH2CH2SCH3)-O- или -O-P(O)(OCH2CH2SC2H5)-O-, и наиболее предпочтительно -O-P(O)(OCH2CH2SCH3)-О-.

Группа -O-Р(O)(O-)-NRH- предпочтительно представляет -O-P(O)(O-)-NH- или -O-P(O)(O-)-N(CH3)-, и наиболее предпочтительно -O-P(O)(O-)-NH-.

Группа -NRH-P(O)(O-)-O- предпочтительно представляет -NH-P(O)(O-)-O- или -N(CH3)-P(O)(O-)-O- и наиболее предпочтительно -NH-P(O)(O-)-O-.

Еще более предпочтительно IL представляет -O-P(O)(O-)-О-, -O-P(O)(S-)-О-, -O-P(S)(S-)-О-, -O-Р(O)(NHRH)-О- или -O-P(O)[N(RH)2]-О -, и еще более предпочтительно IL представляет -O-P(O)(O-)-О-, -O-P(O)(S-)-О- или -O-P(S)(S-)-О-, и наиболее предпочтительно IL представляет -O-P(O)(S-)-О- или -O-P(O)(O-)-O-.

Таким образом, IL предпочтительно представляет фосфатную группу (-O-P(O)(O-)-O-), фосфоротиоатную группу (-O-P(O)(S-)-О-) или фосфородитиоатную группу (-O-Р(S)(S-)-О-).

Нуклеотидные звенья или нуклеозиды антисмысловых олигонуклеотидов соединены друг с другом посредством межнуклеотидных связей, таким образом, что в одном антисмысловом олигонуклеотиде могут присутствовать различные межнуклеотидные связи. Звенья LNA предпочтительно связаны межнуклеотидными связями, которые не являются фосфатными группами. Звенья LNA соединены друг с другом группой IL, которая предпочтительно выбрана из -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -O-P(O)(NHRH)-O- и -O- (O)[N(RH)2]-О- и более предпочтительно -O-P(O)(S-)-O- и -O-Р(S) (S-)-О-.

Звенья, которые не являются LNA, связаны друг с другом группой IL, которая предпочтительно выбрана из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-О-, -О-P (S)(S-)-O-, -O-P(O)(NHRH)-O- и -O-P(O)[N(RH)2]-О- и более предпочтительно -О-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O- и -O-Р(S)(S-)-О-.

Звенья, которые не являются LNA, связаны со звеном LNA группой IL, которая предпочтительно выбрана из -O-P(O)(S-)-О-, -О-Р(S)(S-)-O-, -O-P(O)(NHRH)-O- и -O-P(O)[N(RH)2]-О- и более предпочтительно -O-P (O)(S-)-O- и -O -P(S)(S-)-О-.

Как здесь используется, термин «звено LNA» относится к нуклеотиду, который замкнут, т.е. нуклеотиду, который имеет бициклическую структуру, и особенно бициклическую рибозную структуру и особенно бициклическую рибозную структуру, показанную в общей формуле (II). Мост «замыкает» рибозу в 3'-эндо (север) конформации. Рибозный фрагмент нуклеотида LNA модифицируется дополнительным мостиком, соединяющим 2'-кислород и 4'-углерод. Альтернативно используемые термины для LNA представляют бициклические нуклеотиды или связанные мостиком нуклеотиды, таким образом, альтернативный термин для звена LNA представляет бициклическое нуклеотидное звено или связанное мостиком нуклеотидное звено.

Как здесь используется, термин «звено, которое не является LNA» относится к нуклеотиду, который не является замкнутым, т.е. нуклеотиду, который не содержит бициклическую сахарную группу, и особенно не содержит бициклическую рибозную структуру и особенно бициклическую рибозную структуру, показанную в общей формуле (II). Звенья, которые не являются LNA, наиболее предпочтительно представляют звенья ДНК.

Как здесь используется, термин «звено ДНК» относится к нуклеотиду, содержащему 2-дезоксирибозу в качестве сахара. Таким образом, нуклеотид состоит из азотистого основания и 2-дезоксирибозы.

Как здесь используется, термин «звено» относится к части или фрагменту, или группе антисмыслового олигонуклеотида по настоящему изобретению. Таким образом, «звено» не является полной молекулой, оно является частью или его фрагментом, или группой антисмыслового олигонуклеотида, которое имеет, по меньшей мере, одно положение для ковалентного связывания с другой частью или фрагментом, или группой антисмыслового олигонуклеотида. Например, общие структуры (B1)-(B6) представляют звенья, поскольку они могут быть ковалентно связаны через группу Y и IL' или -O- и -O-P(O)(S-)- соответственно. Предпочтительно звено представляет фрагмент, состоящий из пентозной структуры, азотистого основания, соединенного с пентозной структурой 5'-радикальной группой, и радикальной группой IL'.

Как здесь используется, термин «строительный блок» или «мономер» относится к молекуле, и, в частности, к нуклеозиду, который используется в синтезе антисмыслового олигонуклеотида по настоящему изобретению. Примерами являются молекулы LNA общей формулы (I), где Y представляет 5'-концевую группу, и IL' представляет 3'-концевую группу.

Кроме того, предпочтительными являются чистые диастереомерные антисмысловые олигонуклеотиды. Предпочтительными являются Sp- и Rp-диастереомеры, как показано справа:

Соответствующие серусодержащие (S) межнуклеотидные связи, как представлено здесь, являются предпочтительными.

Предпочтительными являются фосфоротиоатные группы в остове, где, по меньшей мере, 50% межнуклеотидных связей представляют фосфортиоатные группы. Также предпочтительным является то, чтобы звена LNA, если они присутствуют, были связаны между собой через фосфоротиоаты в качестве межнуклеотидных связей. Наиболее предпочтительным является полностью фосфоротиоатный остов, т.е. наиболее предпочтительным является, когда все нуклеотидные звенья, а также звенья LNA (если они присутствуют) были связаны друг с другом через фосфортиоатные группы, которые определяются следующим образом: -O-P(O)(S-)-O-, что является аналогичным -O-P(O, S)-O- или -O-P(O-)(S)-O-.

В случае, если антисмысловой олигонуклеотид является гапмером, то предпочтительно, чтобы участки LNA имели межнуклеотидные связи, выбранные из -O-P(O)(S-)-O- и -O-P(S)(S-)-O- и чтобы участки, которые не являются LNA, в средней части имели межнуклеотидные связи, выбранные из -O-P(O)(O-)-O- и -O-P(O)(S-)-O-, и чтобы участки LNA были связаны с участками, которые не являются LNA, через межнуклеотидные связи, выбранные из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O- и -O-Р(S)(S-)-О-.

Еще более предпочтительно, если все межнуклеотидные связи, которые представляют 9 в 10-мерных и 19 в 20-мерных олигонуклеотидах, были выбраны из -О-P(O)(S-)-O- и -O-P(S)(S-)-О-.Еще более предпочтительным является то, чтобы все межнуклеотидные связи представляли фосфортиоатные группы (-О-Р(О)(S-)-О-) или представляли фосфородитиоатные группы (-О-Р(S)(S-)-О-).

Замкнутые нуклеиновые кислоты (LNA ® )

Особенно предпочтительно, чтобы некоторые из нуклеотидов общей формулы (В1) или (В2) в антисмысловых олигонуклеотидах были замещены так называемыми LNA (замкнутыми нуклеиновыми кислотами). Сокращенное обозначение LNA является зарегистрированным торговым названием, но здесь термин «LNA» используется исключительно в описательной форме. Предпочтительно, чтобы концевые нуклеотиды замещены LNA и более предпочтительно последние 1-4 нуклеотида на 3'-конце и/или последние 1-4 нуклеотида 5'-конце были замещены LNA. Кроме того, предпочтительно, чтобы, по меньшей мере, концевой нуклеотид на 3'-конце и 5'-конце каждый был замещен LNA.

Как здесь используется, термин «LNA» относится к бициклическому нуклеотидному аналогу, известному как «замкнутая нуклеиновая кислота». Он может относиться к мономеру LNA, или, при использовании в контексте «антисмыслового олигонуклеотида с LNA» или «антисмысловому олигонуклеотиду, содержащему LNA», LNA относится к олигонуклеотиду, содержащему один или более таких бициклических нуклеотидных аналогов. Нуклеотиды LNA характеризуются наличием линкерной группы (такой как мостик) между C2' и C4' рибозного сахарного кольца - например, как показано в виде бирадикала R#-R, описанного ниже. LNA, используемая в антисмысловых олигонуклеотидах по настоящему изобретению, предпочтительно имеет структуру общей формулы (I):

где для всех хиральных центров асимметричные группы могут находиться в любой R- или S-ориентации;

где Х выбран из -О-, -S-, -N(RN)-, -C(R6R7)-, и предпочтительно Х представляет -O-;

В выбран из атома водорода, необязательно замещенного С1-4-алкокси, необязательно замещенного С1-4-алкила,, необязательно замещенного С1-4-ацилокси, азотистых оснований и аналогов азотистых оснований, и предпочтительно В представляет азотистое основание или аналог азотистого основания, и наиболее предпочтительно представляет обычное азотистое основание;

Y представляет часть межнуклеотидной связи с соседним нуклеотидом в случае, если фрагмент общей формулы (I) представляет звено LNA антисмыслового олигонуклеотида по настоящему изобретению, или 5'-концевую группу в случае, если фрагмент общей формулы (I) представляет мономер или строительный блок для синтеза антисмыслового олигонуклеотида по настоящему изобретению. 5'-атом углерода необязательно содержит заместитель R4 и R5;

IL' представляет часть межнуклеотидной связи с соседним нуклеотидом в случае, если фрагмент общей формулы (I) представляет звено LNA антисмыслового олигонуклеотида по настоящему изобретению, или 5'-концевую группу в случае, если фрагмент общей формулы (I) представляет мономер или строительный блок для синтеза антисмыслового олигонуклеотида по настоящему изобретению.

R# и R, взятые вместе, представляют двухвалентную линкерную группу, состоящую из 1-4 групп или атомов, выбранных из -C(RaRb)-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -O-, -Si(Ra)2-, -S-, -SO2-, -N(Rc)- и > C=Z, где Z выбран из -O-, -S- и -N(Ra)-, и Ra, Rb и Rc независимо друг от друга выбраны из атома водорода, необязательно замещенного C1-12-алкила, необязательно замещенного C2-6-алкенила, необязательно замещенного C2-6-алкинила, гидрокси, необязательно замещенного C1-12-алкокси, С1-6-алкокси-С1-6-алкила, С2-6-алкенилокси, карбокси, С1-12-алкоксикарбонила, С1-12-алкилкарбонила, формила, арила, арилоксикарбонила, арилокси, арилкарбонила, гетероарила, гетероарилоксикарбонила, гетероарилокси, гетероарилкарбонила, амино, моно- и ди(С1-6- алкил)амино, карбамоила, моно- и ди(C1-6-алкил)аминокарбонила, амино-C1-6-алкилениламинокарбонила, моно- и ди(С1-6-алкил)амино-С 1-6-алкилениламинокарбонила, C1-6-алкилкарбониламино, карбамидо, С1-6-алканоилокси, сульфоно, С1-6-алкилсульфонилокси, нитро, азидо, сульфанила, С1-6-алкилтио, атома галогена, где арил и гетероарил могут быть необязательно замещены, и где два геминальных заместителя Ra и Rb, взятые вместе, могут представлять необязательно замещенный метилен (=СН2), где для всех хиральных центров асимметричные группы могут находиться в любой R- или S-ориентации; и

каждый из заместителей R1, R2, R3, R4, R5, R6 и R7, которые присутствуют, независимо выбраны из атома водорода, необязательно замещенного C1-12-алкила, необязательно замещенного C2-6-алкенила, необязательно замещенного C2-6-алкинила, гидрокси, C1-12-алкокси, С1-6-алкокси-С1-6-алкила, С2-6-алкенилокси, карбокси, С1-12-алкоксикарбонила, С1-12-алкилкарбонила, формила, арила, арилоксикарбонила, арилокси, арилкарбонила, гетероарила, гетероарилоксикарбонила, гетероарилокси, гетероарилкарбонила, амино, моно- и ди(С1-6-алкил)амино, карбамоила, моно- и ди(C1-6-алкил)аминокарбонила, амино-C1-6-алкиламинокарбонила, моно- и ди(С1-6-алкил)амино-С1-6-алкиламинокарбонила, C1-6-алкилкарбониламино, карбамидо, С1-6-алканоилокси, сульфоно, С1-6-алкилсульфонилокси, нитро, азидо, сульфанила, С1-6-алкилтио, атома галогена, где арил и гетероарил могут быть необязательно замещены, и где два геминальных заместителя, взятые вместе, могут представлять оксо, тиооксо, имино или необязательно замещенный метилен;

где RN выбран из атома водорода и С1-4-алкила, и где два соседних (негеминальных) заместителя могут обозначать дополнительную связь, приводя к образованию двойной связи; и RN, если он присутствует и не входит в состав бирадикала, выбран из атома водорода и С1-4-алкила; и их основно- и кислотно-аддитивные соли. Для всех хиральных центров асимметричные группы могут находиться в любой R- или S-ориентации.

В предпочтительных вариантах осуществления R# и R, взятые вместе, представляют бирадикал, состоящий из групп, выбранных из группы, состоящей из -C(RaRb)-C(RaRb)-, -C(RaRb)-O-, -C(RaRb)-NRC-, -C(RaRb)-S- и -C(RaRb)-C(RaRb)-O-, где каждый из Ra, Rb и Rc может быть необязательно, независимо выбран.

В некоторых вариантах осуществления Ra и Rb могут быть необязательно, независимо выбраны из группы, состоящей из атома водорода и C1-6-алкила, такого как метил, и предпочтительно является атомом водорода.

В предпочтительных вариантах осуществления R1, R2, R3, R4 и R5 независимо выбраны из группы, состоящей из атома водорода, атома галогена, C1-6-алкила, замещенного С1-6-алкила, С2-6-алкенила, замещенного С2-6-алкенила, С2-6-алкинила или замещенного С2-6-алкинила, С1-6-алкоксила, замещенного С1-6-алкоксила, ацила, замещенного ацила, C1-6-аминоалкила или замещенного C1-6-аминоалкила. Для всех хиральных центров асимметричные группы могут находиться в любой R- или S-ориентации.

В предпочтительных вариантах осуществления R1, R2, R3, R4 и R5 представляют атом водорода.

В некоторых вариантах осуществления R1, R2 и R3 независимо выбраны из группы, состоящей из атома водорода, атома галогена, C1-6-алкила, замещенного С1-6-алкила, С2-6-алкенила, замещенного С2-6-алкенила, С2-6-алкинила или замещенного С2-6-алкинила, С1-6-алкоксила, замещенного С1-6-алкоксила, ацила, замещенного ацила, C1-6-аминоалкила или замещенного C1-6-аминоалкила. Для всех хиральных центров асимметричные группы могут находиться в любой R- или S-ориентации. В предпочтительных вариантах осуществления R1, R2 и R3 представляют атом водорода.

В предпочтительных вариантах осуществления R4 и R5 каждый независимо выбран из группы, состоящей из -H, -CH3, -CH2-CH3, -CH2-O-CH3 и -CH=CH2. Соответственно, в некоторых вариантах осуществления один из R4 или R5 представляет атом водорода, тогда как другой (R4 или R5 соответственно) выбран из группы, состоящей из C1-6-алкила, С2-6-алкенила, С2-6-алкинила, замещенного C1-6-алкила, замещенного С2-6-алкенила, замещенного С2-6-алкинила или замещенного ацила (-C(=O)-); где каждая замещенная группа моно- или полизамещена заместителями, независимо выбранными из атома галогена, C1-6-алкила, замещенного C1-6-алкила, С2-6-алкенила, замещенного С2-6-алкенила, С2-6-алкинила, замещенного С2-6-алкинила, -OJ1, -SJ1, -NJ1J2, -N3, -COOJ1, -CN, -О-С(=O)NJ1J2, -N(Н)С(=NH)NJ1J2 или -N(H)С(=Х)N(H)J2, где Х представляет О или S; и каждый J1 и J2 независимо представляет -Н, C1-6-алкил, замещенный C1-6-алкил, С2-6-алкенил, замещенный С2-6-алкенил, С2-6-алкинил, замещенный С2-6-алкинил, С1-6-аминоалкил, замещенный С1-6-аминоалкил или защитную группу. В некоторых вариантах осуществления один из R4 или R5 представляет замещенный C1-6-алкил. В некоторых вариантах осуществления один из R4 или R5 представляет замещенный метилен, где предпочтительные заместители включают одну или более групп, независимо выбранных из -F, -NJ1J2, -N3, -CN, -OJ1, -SJ1, -О-С(=O)NJ1J2, -N(Н)С(=NH)NJ1J2 или -N(H)С(=O)N(H)J2. В некоторых вариантах осуществления каждый J1 и J2 независимо представляет -H или C1-6-алкил. В некоторых вариантах осуществления один из R4 или R5 представляет метил, этил или метоксиметил. В некоторых вариантах осуществления один из R4 или R5 представляет метил. В дополнительном варианте осуществления один из R4 или R5 представляет этиленил. В некоторых вариантах осуществления один из R4 или R5 представляет замещенный ацил. В некоторых вариантах осуществления один из R4 или R5 представляет -О-С(=O)NJ1J2. Для всех хиральных центров асимметричные группы могут находиться в любой R- или S-ориентации. Такие 5'-модифицированные бициклические нуклеотиды раскрыты в публикации международной заявки WO 2007/134181 А, которая включена здесь в качестве ссылки во всей ее полноте.

В некоторых вариантах осуществления В представляет азотистое основание, в том числе аналоги азотистого основания и встречающиеся в природе азотистые основания, такие как пурин или пиримидин, или замещенный пурин или замещенный пиримидин, такие как азотистое основание в настоящем описании, например, азотистое основание, выбранное из группы, состоящей из аденина, цитозина, тимина, аденина, урацила и/или модифицированного или замещенного азотистого основания, такого как 5-тиазолоурацил, 2-тиоурацил, 5-пропинилурацил, 2'-тиотимин, 5-метилцитозин, 5-тиазолоцитозин, 5-пропинилцитозин и 2,6-диаминопурин.

В предпочтительных вариантах осуществления R# и R, взятые вместе, представляют бирадикал, выбранный из -С(RaRb)-O-, -C(RaRb) -C(RcRd)-O-, -C(RaRb)-C(RcRd)-C(ReRf)-O-, -C(RaRb)-O-С(RdRe)-, -C (RaRb)-O-С(RdRe)-O-, -C (RaRb)-C(RdRe)-, -C(RaRb)-C(RcRd)-C(ReRf)-, -C(Ra)=C(Rb)-C(RdRe)-, -C(RaRb)-N(Rc)-, -C(RaRb)-С(RdRe)-N(Rc)-, -C (RaRb)-N(Rc)-O-, -C(RaRb)-S- и -C(RaRb)-C(RdRe)-S-, где Ra, Rb, Rc, Rd, Re и Rf каждый независимо выбран из атома водорода, необязательно замещенного C1-12-алкила, необязательно замещенного C2-6-алкенила, необязательно замещенного C2-6-алкинила, гидрокси, необязательно замещенного C1-12-алкокси, С1-6-алкокси-С1-6-алкила, С2-6-алкенилокси, карбокси, С1-12-алкоксикарбонила, С1-12-алкилкарбонила, формила, арила, арилоксикарбонила, арилокси, арилкарбонила, гетероарила, гетероарилоксикарбонила, гетероарилокси, гетероарилкарбонила, амино, моно- и ди(С1-6- алкил)амино, карбамоила, моно- и ди(C1-6-алкил)аминокарбонила, амино-C1-6-алкиламинокарбонила, моно- и ди(С1-6-алкил)амино-С1-6-алкиламинокарбонила, C1-6-алкилкарбониламино, карбамидо, С1-6-алканоилокси, сульфоно, С1-6-алкилсульфонилокси, нитро, азидо, сульфанила, С1-6-алкилтио, атома галогена, где арил и гетероарил могут быть необязательно замещены, и где два геминальных заместителя Ra и Rb, взятые вместе, могут представлять необязательно замещенный метилен (=СН2). Для всех хиральных центров асимметричные группы могут находиться в любой R- или S-ориентации.

В дополнительном варианте осуществления R# и R, взятые вместе, представляют бирадикал (двухвалентную группу), выбранный из -СН2-O-, -СН2-S-, -СН2-NH-, -СН2-N(CH3)-, -СН2-СН2-О-, -СН2-СН(СН3)-, -СН2-СН2-S-, -СН2-СН2-NH-, -СН2-СН2-СН2-, -СН2-СН2-СН2-О-, -СН2-СН2-СН(СН3)-, -СН=СН-СН2-, -СН2-О-СН2-О-, -СН2-NH-О-, -СН2-N(CH3)-O-, -CH2-O-CH2-, -CH(CH3)-O-, -CH(CH2-O-CH3)-O-, -СН2-СН2-, и -СН=СН-. Для всех хиральных центров асимметричные группы могут находиться в любой R- или S-ориентации.

В некоторых вариантах осуществления R# и R, взятые вместе, представляют бирадикал -C(RaRb)-N(Rc)-O-, где Ra и Rb независимо выбраны из группы, состоящей из атома водорода, атома галогена, C1-6-алкила, замещенного C1-6-алкила, С2-6-алкенила, замещенного С2-6-алкенила, С2-6-алкинила, замещенного С2-6-алкинила, С1-6- алкоксила, замещенного С1-6-алкоксила, ацила, замещенного ацила, С1-6-аминоалкила или замещенного C1-6-аминоалкила, такой как атом водорода; где Rc выбран из группы, состоящей из атома водорода, атома галогена, C1-6-алкила, замещенного C1-6-алкила, С2-6-алкенила, замещенного С2-6-алкенила, С2-6-алкинила, замещенного С2-6-алкинила, С1-6-алкоксила, замещенного С1-6-алкоксила, ацила, замещенного ацила, С1-6-аминоалкила или замещенного C1-6-аминоалкила, и предпочтительно представляет атом водорода.

В предпочтительных вариантах осуществления R# и R, взятые вместе, представляют бирадикал -C(RaRb)-O-С(RdRe)-O-, где Ra, Rb, Rd и Re независимо выбраны из группы, состоящей из атома водорода, атома галогена, C1-6-алкила, замещенного C1-6-алкила, С2-6-алкенила, замещенного С2-6-алкенила, С2-6-алкинила, замещенного С2-6-алкинила, С1-6-алкоксила, замещенного С1-6-алкоксила, ацила, замещенного ацила, С1-6-аминоалкила или замещенного C1-6-аминоалкила, и предпочтительно представляют атом водорода.

В предпочтительных вариантах осуществления R# и R образуют бирадикал -CH(Z)-O-, где Z выбран из группы, состоящей из C1-6-алкила, С2-6-алкенила, С2-6-алкинила, замещенного C1-6-алкила, замещенного С2-6-алкенила, замещенного С2-6-алкинила, ацила, замещенного ацила, замещенного амида, тиола или замещенного тио; и где каждая из замещенных групп независимо моно- или полизамещена необязательно защищенными заместителями, независимо выбранными из атома галогена, оксо, гидроксила, -OJ1, -NJ1J2, -SJ1, -N3, -OC(=X)J1, -OC(=X)NJ1J2, -NJ3C(=Х)NJ1J2 и -CN, где каждый J1, J2 и J3, независимо представляет -Н или C1-6-алкил, и Х представляет О, S или NJ1. В предпочтительных вариантах осуществления Z представляет C1-6-алкил или замещенный С1-6-алкил. В других предпочтительных вариантах осуществления Z представляет метил. В предпочтительных вариантах осуществления Z представляет замещенный С1-6-алкил. В предпочтительных вариантах осуществления указанный заместитель представляет собой С1-6-алкокси. В некоторых вариантах осуществления Z представляет CH3OCH2-. Для всех хиральных центров асимметричные группы могут находиться в любой R- или S-ориентации. Такие бициклические нуклеотиды раскрыты в патенте США № 7399845, который включен здесь в качестве ссылки во всей его полноте. В предпочтительных вариантах осуществления R1, R2, R3, R4 и R5 представляют атом водород. В предпочтительных вариантах осуществления R1, R2 и R3 представляют водород, и один или оба из R4, R5 могут быть другими, чем атом водород, как указано выше, и в международной заявке WO 2007/134181.

В предпочтительных вариантах осуществления R# и R, взятые вместе, представляют бирадикал, который содержит замещенную аминогруппу в мостике, такой как бирадикал -СН2-N(Rc)-, где Rc представляет С1-12-алкилокси. В предпочтительных вариантах осуществления R# и R, взятые вместе, представляют бирадикал Cq3q4-NOR-, где q3 и q4 независимо выбраны из группы, состоящей из атома водорода, атома галогена, C1-6-алкила, замещенного C1-6-алкила, С2-6-алкенила, замещенного С2-6-алкенила, С2-6-алкинила, замещенного С2-6-алкинила, С1-6-алкоксила, замещенного С1-6-алкоксила, ацила, замещенного ацила, С1-6-аминоалкила или замещенного C1-6-аминоалкила; где каждая замещенная группа независимо моно- или полизамещена заместителями, независимо выбранными из атома галогена, -OJ1, -SJ1, -NJ1J2, -COOJ1, -CN, -OC(=O)NJ1J2, -NH-C(=NH)NJ1J2 или -NH-С(=Х)NHJ2, где Х представляет О или S; и каждый из J1 и J2 независимо представляет -Н, C1-6-алкил, С2-6-алкенил, С2-6-алкинил, С1-6-аминоалкил или защитную группу. Для всех хиральных центров, асимметричные группы могут находиться в любой R- или S- ориентации. Такие бициклические нуклеотиды раскрыты в международной заявке WO2008/150729, которая включена здесь в качестве ссылки во всей ее полноте. В предпочтительных вариантах осуществления R1, R2, R3, R4 и R5 независимо выбраны из группы, состоящей из атома водорода, атома галогена, C1-6-алкила, замещенного C1-6-алкила, С2-6-алкенила, замещенного С2-6-алкенила, С2-6-алкинила, замещенного С2-6-алкинила, С1-6-алкоксила, замещенного С1-6-алкоксила, ацила, замещенного ацила, С1-6-аминоалкила или замещенного C1-6-аминоалкила. В предпочтительных вариантах осуществления R1, R2, R3, R4 и R5 представляют атом водорода. В предпочтительных вариантах осуществления R1, R2 и R3 представляют атом водорода, и один или оба из R4, R5 могут быть иными, чем атом водорода, как указано выше, и в международной заявке WO 2007/134181.

В предпочтительных вариантах осуществления R# и R, взятые вместе, представляют бирадикал (двухвалентную группу) -C(RaRb)-O-, где Ra и Rb каждый независимо представляет атом галогена, C1-12-алкил, замещенный C1-12-алкил, С2-6-алкенил, замещенный С2-6-алкенил, С2-6-алкинил, замещенный С2-6-алкинил, С1-12-алкокси, замещенный С1-12-алкокси, -OJ1, -SJ1, -S(O)J1, -SO2-J1, -NJ1J2, -N3, -CN, -C(=O)OJ1, -C(=O)NJ1J2, -C(=O)J1, -OC(=O)NJ1J2, -NH-C(=NH) NJ1J2, -NH-С(=O)NJ1J2 или -NH-C(=S)NJ1J2; или Ra и Rb, взятые вместе, представляют =C(q3)(q4); q3 и q4 каждый независимо представляет -Н, атом галогена, С1-12-алкил или замещенный С1-12-алкил; каждая замещенная группа независимо моно- или полизамещена заместителями, независимо выбранными из атома галогена, С1-6-алкила, замещенного С1-6-алкила, С2-6-алкенила, замещенного С2-6-алкенила, С2-6-алкинила, замещенного С2-6-алкинила, -OJ1, -SJ1, -NJ1J2, -N3, -CN, -C(=O)OJ1, -C(=O)NJ1J2, -C(=O)J1, -OC(=O)NJ1J2, -NH-C(=O)NJ1J2 или -NH-C(=S)NJ1J2; и каждый из J1 и J2 независимо представляет -H, С1-6-алкил, замещенный С1-6-алкил, С2-6-алкенил, замещенный С2-6-алкенил, С2-6-алкинил, замещенный С2-6-алкинил, С1-6-аминоалкил, замещенный С1-6-аминоалкил или защитную группу. Такие соединения описаны в международной заявке WO2009006478A, которая включена здесь в качестве ссылки во всей ее полноте.

В предпочтительных вариантах осуществления R# и R образуют бирадикал -Q-, где Q представляет -C(q1)(g2)C(q3)(q4)-, -C(q1)=С(q3)-, -C[=C(q1)(q2)]-С(q3)(q4)- или -C(q1)(q2)-C[=С(q3) (q4)]-;

q1, q2, q3, q4 каждый независимо друг от друга представляет -Н, атом галогена, C1-12-алкил, замещенный C1-12-алкил, С2-6-алкенил, замещенный С2-6-алкенил, С2-6-алкинил, замещенный С2-6-алкинил, С1-12-алкокси, замещенный С1-12-алкокси, -OJ1, -SJ1, -S(O)J1, -SO2-J1, -NJ1J2, -N3, -CN, -C(=O)OJ1, -C(=O)NJ1J2, -C(=O)J1, -OC(=O)NJ1J2, -NH-C(=NH) NJ1J2, -NH-С(=O)NJ1J2 или -NH-C(=S)NJ1J2; каждый из J1 и J2 независимо друг от друга представляет -H, С1-6-алкил, С2-6-алкенил, С2-6-алкинил, С1-6-аминоалкил или защитную группу; и необязательно, когда Q представляет -C(q1)(q2)C(q3)(q4), и один из q3 или q4 представляет -СН3, то, по меньшей мере, один из q3 или q4 или один из q1 и q2 является иным, чем -Н. В предпочтительных вариантах осуществления R1, R2, R3, R4 и R5 представляют атом водород. Для всех хиральных центров асимметричные группы могут находиться в любой R- или S-ориентации. Такие бициклические нуклеотиды раскрыты в международной заявке WO2008/154401, которая включена здесь в качестве ссылки во всей ее полноте. В предпочтительных вариантах осуществления изобретения R1, R2, R3, R4 и R5 независимо выбраны из группы, состоящей из атома водорода, атома галогена, C1-6-алкила, замещенного C1-6-алкила, С2-6-алкенила, замещенного С2-6-алкенила, С2-6-алкинила, замещенного С2-6-алкинила, С1-6- алкоксила, замещенного С1-6-алкоксила, ацила, замещенного ацила, С1-6-аминоалкила или замещенного C1-6-аминоалкила. В предпочтительных вариантах R1, R2, R3, R4 и R5 представляют атом водорода. В предпочтительных вариантах осуществления R1, R2 и R3 представляют атом водорода, и один или оба из R4, R5 могут быть иными, чем атом водорода, как указано выше и в международных заявках WO 2007/134181 или WO 2009/067647 (альфа-L-бициклические аналоги нуклеиновых кислот).

Как здесь используется, термин «С1-6-алкил» относится к -CH3, -C2H5, -C3H7, -CH(CH3)2, -C4H9, -CH2-CH(CH3)2, -CH(СН3)-C2H5, - C(CH3)3, -C5H11, -CH(СН3)-C3H7, -СН2-СН(СН3)-С2Н5, -СН(СН3)-СН(СН3)2, -C(CH3)22Н5, -СН2-C(CH3)3, -СН(С2Н5)2, -C2H4-CH(CH3)2, -C6H13, -C3H6-CH(CH3)2, -C2H4-CH(CH3)-C2H5, -СН(СН3)-C4H9, -СН2-СН(СН3)-C3H7, -СН (СН3)-СН2-СН(СН3)2, -СН(СН3)-СН(СН3)-С2Н5, -СН2-СН(СН3)-СН(СН3)2, -СН2-С(СН3)22Н5, -С(СН3)23Н7, -С(СН3)2-СН(СН3)2, -C2H4-C(CH3)3, -CH2-CH(С2Н5)2 и -CH(CH3)-C(CH3)3. Термин «С1-С6-алкил» также включает «С1-С6-циклоалкил» такой, как цикло-C3H5, цикло-C4H7, цикло-C5H9 и цикло-С6Н11.

Предпочтительными являются -CH3, -C2H5, -C3H7, -CH(CH3)2, -C4H9, -CH2-CH(CH3)2, -CH(СН3)-C2H5, -C(CH3)3 и -C5H11. Особенно предпочтительными являются -CH3, -C2H5, -C3H7 и -CH(CH3)2.

Термин «C1-C6-алкил» также включает «C1-C6-циклоалкил» такой, как цикло-C3H5, цикло-C4H7, цикло-C5H9, и цикло-С6Н11.

Как здесь используется, термин «C1-C12-алкил» относится к C1-C6-алкилу, -C7H15, -C8H17, -C9H19, -C10H21, -C11H23, -C12H25.

Как здесь используется, термин «С2-С6-алкиленил» относится к -CH2-, -C2H4-, -CH(CH3)-, -C3H6-, -CH2-CH(CH3)-, -CH(CH3)-CH2-, -C(CH3)2-, -C4H8-, -CH2-C(CH3)2-, -C(CH3)2-CH2-, -C2H4-CH(CH3)-, -CH(CH3)-C2H4-, -CH2-CH(CH3)-CH2-, -CH(CH3)-CH(CH3)-, -C5H10-, -CH(CH3)-C3H6-, -CH2-CH(CH3)-C2H4-, -C2H4-CH(CH3)-CH2-, -C3H6-CH(CH3)-, -C2H4-C(CH3)2-, -C(CH3)2-C2H4-, -CH2-C(CH3)2-CH2-, -CH2-CH(CH3)-CH(CH3)-, -CH(CH3)-CH2-CH(CH3)-, -CH(CH3)-CH(CH3)-CH2-, -CH(CH3)-CH(CH3)-CH(CH3)-, -C(CH3)2-C3H6-, -CH2-C(CH3)2-C2H4-, -C2H4-C(CH3)2-CH2-, -C3H6-C(CH3)2-, -CH(CH3)-C4H8-, -C6H12-, -CH2-CH(CH3)-C3H6-, -C2H4-CH(CH3)-C2H4-, -C3H6-CH(CH3)-CH2-, -C4H8-CH(CH3)-, -C2H4-CH(CH3)-CH(CH3)-, -CH2-CH(CH3)-CH(CH3)-CH2-, -CH2-CH(CH3)-CH2-CH(CH3)-, -CH(CH3)-C2H4-CH(CH3)-, -CH(CH3)-CH2-CH(CH3)-CH2- и -CH(CH3)-CH(CH3)-C2H4-.

Как здесь используется, термин «С2-С6-алкенил» относится к -CH=CH2, -CH2-CH=CH2, -C(CH3)=CH2, -CH=CH-CH3, -C2H4-CH=CH2, -CH2-CH=CH-CH3, -CH=CH-C2H5, -CH2-C(CH3)=CH2, -CH(CH3)-CH=CH, -CH=C(CH3)2, -C(CH3)=CH-CH3, -CH=CH-CH=CH2, -C3H6-CH=CH2, -C2H4-CH=CH-CH3, -CH2-CH=CH-C2H5, -CH=CH-C3H7, -CH2-CH=CH-CH=CH2, -CH=CH-CH=CH-CH3, -CH=CH-CH2-CH=CH2, -C(CH3)=CH-CH=CH2, -CH=C(CH3)-CH=CH2, -CH=CH-C(CH3)=CH2, -C2H4-C(CH3)=CH2, -CH2-CH(CH3)-CH=CH2, -CH(CH3)-CH2-CH=CH2, -CH2-CH=C(CH3)2, -CH2-C(CH3)=CH-CH3, -CH(CH3)-CH=CH-CH3, -CH=CH-CH(CH3)2, -CH=C(CH3)-C2H5, -C(CH3)=CH-C2H5, -C(CH3)=C(CH3)2, -C(CH3)2-CH=CH2, -CH(CH3)-C(CH3)=CH2, -C(CH3)=CH-CH=CH2, -CH=C(CH3)-CH=CH2, -CH=CH-C(CH3)=CH2, -C4H8-CH=CH2, -C3H6-CH=CH-CH3, -C2H4-CH=CH-C2H5, -CH2-CH=CH-C3H7, -CH=CH-C4H9, -C3H6-C(CH3)=CH2, -C2H4-CH(CH3)-CH=CH2, -CH2-CH(CH3)-CH2-CH=CH2, -CH(CH3)-C2H4-CH=CH2, -C2H4-CH=C(CH3)2, -C2H4-C(CH3)=CH-CH3, -CH2-CH(CH3)-CH=CH-CH3, -CH(CH3)-CH2-CH=CH-CH3, -CH2-CH=CH-CH(CH3)2, -CH2-CH=C(CH3)-C2H5, -CH2-C(CH3)=CH-C2H5, -CH(CH3)-CH=CH-C2H5, -CH=CH-CH2-CH(CH3)2, -CH=CH-CH(CH3)-C2H5, -CH=C(CH3)-C3H7, -C(CH3)=CH-C3H7, -CH2-CH(CH3)-C(CH3)=CH2, -CH(CH3)-CH2-C(CH3)=CH2, -CH(CH3)-CH(CH3)-CH=CH2, -CH2-C(CH3)2-CH=CH2, -C(CH3)2-CH2-CH=CH2, -CH2-C(CH3)=C(CH3)2, -CH(CH3)-CH=C(CH3)2, -C(CH3)2-CH=CH-CH3, -CH(CH3)-C(CH3)=CH-CH3, -CH=C(CH3)-CH(CH3)2, -C(CH3)=CH-CH(CH3)2, -C(CH3)=C(CH3)-C2H5, -CH=CH-C(CH3)3, -C(CH3)2-C(CH3)=CH2, -CH(C2H5)-C(CH3)=CH2, -C(CH3)(C2H5)-CH=CH2, -CH(CH3)-C(C2H5)=CH2, -CH2-C(C3H7)=CH2, -CH2-C(C2H5)=CH-CH3, -CH(C2H5)-CH=CH-CH3, -C(C4H9)=CH2, -C(C3H7)=CH-CH3, -C(C2H5)=CH-C2H5, -C(C2H5)=C(CH3)2, -C[C(CH3)3]=CH2, -C[CH(CH3)(C2H5)]=CH2, -C[CH2-CH(CH3)2]=CH2, -C2H4-CH=CH-CH=CH2, -CH2-CH=CH-CH2-CH=CH2, -CH=CH-C2H4-CH=CH2, -CH2-CH=CH-CH=CH-CH3, -CH=CH-CH2-CH=CH-CH3, -CH=CH-CH=CH-C2H5, -CH2-CH=CH-C(CH3)=CH2, -CH2-CH=C(CH3)-CH=CH2, -CH2-C(CH3)=CH-CH=CH2, -CH(CH3)-CH=CH-CH=CH2, -CH=CH-CH2-C(CH3)=CH2, -CH=CH-CH(CH3)-CH=CH2, -CH=C(CH3)-CH2-CH=CH2, -C(CH3)=CH-CH2-CH=CH2, -CH=CH-CH=C(CH3)2, -CH=CH-C(CH3)=CH-CH3, -CH=C(CH3)-CH=CH-CH3, -C(CH3)=CH-CH=CH-CH3, -CH=C(CH3)-C(CH3)=CH2, -C(CH3)=CH-C(CH3)=CH2, -C(CH3)=C(CH3)-CH=CH2 и -CH=CH-CH=CH-CH=CH2.

Предпочтительными являются -CH=CH2, -CH2-CH=CH2, -C(CH3)=CH2, -CH=CH-CH3, -C2H4-CH=CH2, -CH2-CH=CH-CH3. Особенно предпочтительными являются -CH=CH2, -CH2-CH=CH2 и -CH=CH-CH3.

Как здесь используется, термин «С2-С6-алкинил» относится к -C≡CH, -C≡C-CH3, -CH2 C≡CH, -C2H4-C≡CH, -CH2-C≡C-CH3, -C≡C-C2H5, -C3H6-C≡CH, -C2H4-C≡C-CH3, -CH2-C≡C-C2H5, -C≡C-C3H7, -CH(CH3)-C≡CH, -CH2-CH(CH3)-C≡CH, -CH(CH3)-CH2-C≡CH, -CH(CH3)-C≡C-CH3, -C4H8-C≡CH, -C3H6-C≡C-CH3, -C2H4-C≡C-C2H5, -CH2-C≡C-C3H7, -C≡C-C4H9, -C2H4-CH(CH3)-C≡CH, -CH2-CH(CH3)-CH2-C≡CH, -CH(CH3)-C2H4-C≡CH, -CH2-CH(CH3)-C≡C-CH3, -CH(CH3)-CH2-C≡C-CH3, -CH(CH3)-C≡C-C2H5, -CH2-C≡C-CH(CH3)2, -C≡C-CH(CH3)-C2H5, -C≡C-CH2-CH(CH3)2, -C≡C-C(CH3)3, -CH(C2H5)-C≡C-CH3, -C(CH3)2-C≡C-CH3, -CH(C2H5)-CH2-C≡CH, -CH2-CH(C2H5)-C≡CH, -C(CH3)2-CH2-C≡CH, -CH2-C(CH3)2-C≡CH, -CH(CH3)-CH(CH3)-C≡CH, -CH(C3H7)-C≡CH, -C(CH3)(C2H5)-C≡CH, -C≡C-C≡CH, -CH2-C≡C-C≡CH, -C≡C-C≡C-CH3, -CH(C≡CH)2, -C2H4-C≡C-C≡CH, -CH2-C≡C-CH2-C≡CH, -C≡C-C2H4-C≡CH, -CH2-C≡C-C≡C-CH3, -C≡C-CH2-C≡C-CH3, -C≡C-C≡C-C2H5, -C≡C-CH(CH3)-C≡CH, -CH(CH3)-C≡C-C≡CH, -CH(C≡CH)-CH2-C≡CH, -C(C≡CH)2-CH3, -CH2-CH(C≡CH)2, -CH(C≡CH)-C≡C-CH. Предпочтительными являются -С≡СН и -С≡С-СН3.

Термин «С1-6-алкоксил» относится к группе «C1-C6-алкил-O-».

Термин «С1-12-алкоксил» относится к группе «C1-C12-алкил-O-».

Термин «С1-6-аминоалкил» относится к группе «H2N-C1-C6-алкил-».

Термин «С26-алкенилокси» относится к группе «С26-алкенил-О-».

Термин «С1-6-алкилкарбонил» относится к группе «C1-C6-алкил-СО-». Также упоминается как «ацил».

Термин «С1-12-алкилкарбонил» относится к «С112-алкил-СО-». Также упоминается как «ацил».

Термин «С1-6-алкоксикарбонил» относится к группе «С16-алкил-О-СО-».

Термин «С1-12-алкоксикарбонил» относится к группе «С112-алкил-СО-О-».

Термин «С16-алаканоилокси» относится к группе «С16-алкил-СО-О-».

Термин «С1-6-алкилтио» относится к группе «С16-алкил-S-».

Термин «С1-6-алкилсульфонилокси» относится к группе «С16-алкил-SO2-O-».

Термин «С1-6-алкилкарбониламино» относится к группе «С16-алкил-СО-NH-».

Термин «С1-6-алкиламино» относится к группе «С16-алкил-NH-».

Термин «(C1-6)2алкиламино» относится к диалкиламиногруппе, такой как «[С16-алкил][С16-алкил]N-».

Термин «С1-6-алкиламинокарбонил» относится к группе «С16-алкил-NH-CO-».

Термин «(C1-6)-алкиламинокарбонил» относится к группе диалкиламинокарбонил, такой как «[C1-C6-алкил][C1-C6-алкил]-N-CO-».

Термин «амино-C1-6-алкиламинокарбонил» относится к группе «H2N-[С16-алкиленил]-HN-СО-».

Термин «C1-6-алкиламино-С1-6-алкиламинокарбонил» относится к группе «C16-алкил-HN-[C1-C6-алкиленил]-NH-СО-».

Термин «(C1-6)2-алкиламино-С1-6-алкиламинокарбонил» относится к группе «[C1-C6-алкил][C1-C6-алкил]-N-[C1-C6-алкиленил]-NH-СО-».

Термин «арил» относится к фенилу, толуилу, замещенному фенилу и замещенному толуилу.

Термин «арилокси» относится к группе «арил-О-».

Термин «арилкарбонил» относится к группе «арил-СО-».

Термин «арилоксикарбонил» относится к группе «арил-O-СО-».

Термин «гетероарил» относится к замещенным или незамещенным гетероароматическиам группам, которые содержат 4-9 атомов в кольце, 1-4 из которых выбраны из О, N и/или S. Предпочтительные «гетероарильные» группы содержат 1 или 2 гетероатома в 5- или 6-членном ароматическом кольце. Включаются моно- и бициклические кольцевые системы. Типичными «гетероарильными» группами являются пиридил, фурил, тиенил, пирролил, оксазолил, тиазолил, имидазолил, изоксазолил, оксадиазолил, пиридазинил, пиримидил, пиразинил, 1,3,5-триазинил, 1,2,3-триазолил, 1,3,4-тиадиазолил, индолизинил, индолил, изоиндолил, бензо[b]фурил, бензо[b]тиенил, индазолил, бензимидазолил, бензтиазолил, пуринил, хинолизинил, хинолил, изохинолил, хиназолинил, хиноксалинил, 1,8-нафтиридинил, тетрагидрохинолил, бензооксазолил, хром-2-онил, индазолил и тому подобное.

Термин «гетероарилокси» относится к группе «гетероарил-О-».

Термин «гетероарилкарбонил» относится к группе «гетероарил-СО-».

Термин «гетероарилоксикарбонил» относится к группе «гетероарил-O-СО- ».

Термин «замещенный» относится к группам, в которых один или более атомов водорода замещены одним или более из следующих заместителей: -OH, -OCH3, -OC2H5, -OC3H7, -O-цикло-C3H5, -OCH(CH3)2, -OCH2Ph, -F, -Cl, -COCH3, -COC2H5, -COC3H7, -CO-цикло-C3H5, -COCH(CH3)2, -COOH, -CONH2, -NH2, -NHCH3, -NHC2H5, -NHC3H7, -NH-цикло-C3H5, -NHCH(CH3)2, -N(CH3)2, -N(C2H5)2, -N(C3H7)2, -N(цикло-C3H5)2, -N[CH(CH3)2]2, -SO3H, -OCF3, -OC2F5, цикло-C3H5, -CH3, -C2H5, -C3H7, -CH(CH3)2, -CH=CH2, -CH2-CH=CH2, -C≡CH и/или -C≡C-CH3.

В случае, когда общая формула (I) представляет мономеры или строительные блоки для синтеза антисмысловых олигонуклеотидов по настоящему изобретению, то концевые группы Y и IL' выбраны независимо друг от друга из атома водорода, азидо, атома галогена, циано, нитро, гидрокси, PG-O-, AG-O-, меркапто, PG-S-, AG-S, С1-6-алкилтио, амино, PG-N(RH)-, AG-N(RH)-, моно- или ди(С1 -6-алкил)амино, необязательно замещенного С1-6-алкокси, необязательно замещенного С1-6-алкила, необязательно замещенного С2-6-алкенила, необязательно замещенного С2-6-алкенилокси, необязательно замещенного С1-6-алкенила, необязательно замещенного С2-6-алкенилокси, необязательно замещенного С2-6-алкинила, монофосфата, монотиофосфата, дифосфата, дитиофосфата, трифосфата, тритиофосфата, карбокси, сульфоно, гидроксиметила, PG-O-CH2, AG-O-CH2-, аминометила, PG-N(RH)-CH2, AG-N(RH)-CH2, карбоксиметила, сульфонометила, где PG представляет собой защитную группу для -ОН, -SH и NH(RH) соответственно, AG является активирующей группой для -ОН, -SH и NH(RH) соответственно, и RH выбран из атома водорода и С1-6-алкила.

Защитные группы PG в гидрокси-заместителях включают замещенный тритил, такой как 4,4'-диметокситритил (DMT), 4-монометокситритил (MMT), необязательно замещенный 9-(9-фенил)ксантенил (пиксил), необязательно замещенный метокситетрагидропиранил (mthp), силил, такой как триметилсилил (™S), триизопропилсилил (TIPS), трет-бутилдиметилсилил (TBDMS), триэтилсилил и фенилдиметилсилил, трет-бутиловые эфиры, ацетали (включающие две гидроксильные группы), ацил, такой как ацетил или, замещенный галогеном ацетил, например, хлорацетил или фторацетил, изобутирил, пивалоил, бензоил и замещенные бензоилы, метоксиметил (MOM), бензиловые эфиры или замещенные бензиловые эфиры, такие как 2,6-дихлорбензил (2,6-Cl2Bzl). Альтернативно, когда Y или IL' представляют гидроксил, то они могут быть защищены присоединением к твердому носителю, необязательно через линкер.

Когда Y или IL' представляет аминогруппу, то иллюстративными примерами защитных групп для аминогруппы являются флуоренилметоксикарбонил (Fmoc), трет-бутилоксикарбонил (ВОС), трифторацетил, аллилоксикарбонил (alloc или АОС), бензилоксикарбонил (Z или Cbz), замещенные бензилоксикарбонилы, такие как 2-хлорбензилоксикарбонил (2-ClZ), монометокситритил (ММТ), диметокситритил (DMT), фталоил и 9-(9-фенил)ксантенил (пиксил).

Act представляет активирующую группу для -ОН, -SH, -NH(RH) соответственно. Такие активирующие группы, например, выбраны из необязательно замещенного O-фосфорамидита, необязательно замещенного O-фосфотриэфира, необязательно замещенного O-фосфодиэфира, необязательно замещенного H-фосфоната и необязательно замещенного O-фосфоната.

В данном контексте термин «фосфорамидит» означает группу формулы -P(ORx)N(Ry)2, где Rx представляет необязательно замещенную алкильную группу, например, метил, 2-цианоэтил или бензил, и каждый из Ry представляет необязательно замещенные алкильные группы, например, этил или изопропил, или группа N(Ry)2 образует морфолиногруппу (N(CH2CH2)2O). Rx предпочтительно обозначает 2-цианоэтил, и два Ry предпочтительно являются одинаковыми и обозначают изопропил. Таким образом, особенно подходящий фосфорамидит представляет N,N-диизопропил-O-(2-цианоэтил)фосфорамидит.

Мономеры LNA или строительные блоки LNA

Мономеры LNA или строительные блоки LNA, используемые в качестве исходных веществ в синтезе антисмысловых олигонуклеотидов по настоящему изобретению, предпочтительно представляют собой нуклеозиды LNA следующих общих формул:

Строительные блоки LNA, как правило, обеспечиваются в виде фосфорамидитов LNA с четырьмя различными азотистыми основаниями: аденином (А), гуанином (G), 5-метилцитозином (С*) и тимином (Т). Антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению, содержащие звенья LNA, синтезируют с использованием стандартной фосфорамидатной химии. В строительных блоках LNA азотистые основания защищены. Предпочтительной защитной группой для аминогруппы пуринового основания является бензоильная группа (BZ), обозначенная как ABZ. Предпочтительной защитной группой для аминогруппы 5-метилпиримидинового основания является бензоильная группа (BZ), обозначенная как C*Bz. Предпочтительной защитной группой для аминогруппы пуринового основания является диметилформамидин (DMF), диэтилформамидин (DEF), дипропилформамидин (DPF), дибутилформамидин (DBF) или изо-бутирил(-СОСН(СН3)2), обозначенные соответственно как GDMF, GDEF, GDPF, GDBF или GiBu. Таким образом, группа -NDMF относится к -N=CH-N(CH3)2. DMT относится к 4,4'-диметокситритилу.

Таким образом, LNA-Т относится к LNA 5'-O-(4,4'-диметокситритил)-3'-O(2-цианоэтил-N,N-диизопропил)фосфорамитид- тимидину. LNA С*Bz относится к LNA 5'-O-(4,4'-диметокситритил)-3'-O-(2-цианоэтил-N,N-диизопропил)фосфорамидит-4-N-бензоил-5-метил-2'-цитидину. LNA-ABZ относится к LNA 5'-O-(4,4'-диметокситритил)-3'-O-(2-цианоэтил-N,N-диизопропил)фосфорамидит-6-N-бензоил-2'-аденозину. LNA-GDMF относится к LNA 5'-O-(4,4'-диметокситритил)-3'-O-(2-цианоэтил-N,N-диизопропил)фосфорамидит-2-N-диметилформамидин-2'-гуанозину. LNA-GiBu относится к LNA 5'-O-(4,4'-диметокситритил)-3'-O-(2-цианоэтил-N,N-диизопропил)фосфор амидит-2-N-бутирил-2'-гуанозину.

Концевые группы

В случае, если Y представляет 5'-концевую группу антисмыслового олигонуклеотида по настоящему изобретению, то остаток Y, также обозначенный как Y5', представляет:

-OH, -O-C1-6-алкил, -S-C1-6-алкил, -O-C6-9-фенил, -O-C7-10-бензил, -NH-C1-6-алкил, -N(C1-6-алкил)2, -O-C2-6-алкенил, -S-C2-6-алкенил, -NH-C2-6-алкенил, -N(C2-6-алкенил)2, -O-C2-6-алкинил, -S-C2-6-алкинил, -NH-C2-6-алкинил, -N(C2-6-алкинил)2, -O-C1-6-алкилeнил-O-C1-6-алкил, -O-[C1-6-алкилeнил-O]m-C1-6-алкил, -O-CO-C1-6-алкил, -O-CO-C2-6-алкенил, -O-CO-C2-6-алкинил, -O-S(O)-C1-6-алкил, -O-SO2-C1-6-алкил, -O-SO2-O-C1-6-алкил, -O-P(O)(O-)2, -O-P(O)(O-)(O-C1-6-алкил), -O-P(O)(O-C1-6-алкил)2, -O-P(O)(S-)2, -O-P(O)(S-C1-6-алкил)2, -O-P(O)(S-)(O-C1-6-алкил), -O-P(O)(O-)(NH-C1-6-алкил), -O-P(O)(O-C1-6-алкил)(NH-C1-6-алкил), -O-P(O)(O-)[N(C1-6-алкил)2], -O-P(O)(O-C1-6-алкил)[N(C1-6-алкил)2], -O-P(O)(O-)(BH3-), -O-P(O)(O-C1-6-алкил)(BH3-), -O-P(O)(O-)(O-C1-6-алкилeнил-O-C1-6-алкил), -O-P(O)(O-C1-6-алкилeнил-O-C1-6-алкил)2, -O-P(O)(O-)(O-C1-6-алкилeнил-S-C1-6-алкил), -O-P(O)(O-C1-6-алкилeнил-S-C1-6-алкил)2, -O-P(O)(O-)(OCH2CH2O-C1-6-алкил), -O-P(O)(OCH2CH2O-C1-6-алкил)2, -O-P(O)(O-)(OCH2CH2S-C1-6-алкил), -O-P(O)(OCH2CH2S-C1-6-алкил)2, -O-P(O)(O-)OC3H6OH, -O-P(O)(S-)OC3H6OH, -O-P(S)(S-)OC3H6OH, где С1-6-алкил, С2-6-алкенил, С2-6-алкинил, -O-С6-9-фенил или -O-С7-10-бензил могут быть дополнительно замещены -F, -ОН, C1-4-алкилом, С2-4-алкенилом и/или С2-4-алкинилом, где m выбран из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10.

Более предпочтительными являются: -OCH3, -OC2H5, -OC3H7, -O-цикло-C3H5, -OCH(CH3)2, -OC(CH3)3, -OC4H9, -OPh, -OCH2-Ph, -O-COCH3, -O-COC2H5, -O-COC3H7, -O-CO-цикло-C3H5, -O-COCH(CH3)2, -OCF3, -O-S(O)CH3, -O-S(O)C2H5, -O-S(O)C3H7, -O-S(O)-цикло-C3H5, -O-SO2CH3, -O-SO2C2H5, -O-SO2C3H7, -O-SO2-цикло-C3H5, -O-SO2-OCH3, -O-SO2-OC2H5, -O-SO2-OC3H7, -O-SO2-O-цикло-C3H5, -O(CH2)nN[(CH2)nOH], -O(CH2)nN[(CH2)n-H], -O-P(O)(O-)OC3H6OH, -O-P(O)(S-)OC3H6OH,

еще более предпочтительными являются:

-OCH3, -OC2H5, -OCH2CH2OCH3 (также известный как MOE), -OCH2CH2-N(CH3)2 (также известный как DMAOE), -O[(CH2)nO]mCH3, -O(CH2)nOCH3, -O(CH2)nNH2, -O(CH2)nN(CH3)2, -O-P(O)(O-)OC3H6OH, -O-P(O)(S-)OC3H6OH,

где n выбран из 1, 2, 3, 4, 5 или 6; и

где m выбран из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10.

В случае, когда IL' представляет 3'-концевую группу антисмыслового олигонуклеотида по настоящему изобретению, то остаток IL', также обозначенный как IL3', представляет:

-OH, -O-C1-6-алкил, -S-C1-6-алкил, -O-C6-9-фенил, -O-C7-10-бензил, -NH-C1-6-алкил, -N(C1-6-алкил)2, -O-C2-6-алкенил, -S-C2-6-алкенил, -NH-C2-6-алкенил, -N(C2-6-алкенил)2, -O-C2-6-алкинил, -S-C2-6-алкинил, -NH-C2-6-алкинил, -N(C2-6-алкинил)2, -O-C1-6-алкилeнил-O-C1-6-алкил, -O-[C1-6-алкилeнил-O]m-C1-6-алкил, -O-CO-C1-6-алкил, -O-CO-C2-6-алкенил, -O-CO-C2-6-алкинил, -O-S(O)-C1-6-алкил, -O-SO2-C1-6-алкил, -O-SO2-O-C1-6-алкил, -O-P(O)(O-)2, -O-P(O)(O-)(O-C1-6-алкил), -O-P(O)(O-C1-6-алкил)2, -O-P(O)(S-)2, -O-P(O)(S-C1-6-алкил)2, -O-P(O)(S-)(O-C1-6-алкил), -O-P(O)(O-)(NH-C1-6-алкил), -O-P(O)(O-C1-6-алкил)(NH-C1-6-алкил), -O-P(O)(O-)[N(C1-6-алкил)2], -O-P(O)(O-C1-6-алкил)[N(C1-6-алкил)2], -O-P(O)(O-)(BH3-), -O-P(O)(O-C1-6-алкил)(BH3-), -O-P(O)(O-)(O-C1-6-алкилeнил-O-C1-6-алкил), -O-P(O)(O-C1-6-алкилeнил-O-C1-6-алкил)2, -O-P(O)(O-)(O-C1-6-алкилeнил-S-C1-6-алкил), -O-P(O)(O-C1-6-алкилeнил-S-C1-6-алкил)2, -O-P(O)(O-)(OCH2CH2O-C1-6-алкил), -O-P(O)(OCH2CH2O-C1-6-алкил)2, -O-P(O)(O-)(OCH2CH2S-C1-6-алкил), -O-P(O)(OCH2CH2S-C1-6-алкил)2, -O-P(O)(O-)OC3H6OH, -O-P(O)(S-)OC3H6OH, -O-P(S)(S-)OC3H6OH,

где С1-6-алкил, С2-6-алкенил, С2-6-алкинил, -O-С6-9-фенил или -O-С7-10-бензил могут быть дополнительно замещены -F, -ОН, C1-4-алкилом, С2-4-алкенилом и/или С2-4-алкинилом, где m выбран из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10.

Более предпочтительными являются: -OCH3, -OC2H5, -OC3H7, -O-цикло-C3H5, -OCH(CH3)2, -OC(CH3)3, -OC4H9, -OPh, -OCH2-Ph, -O-COCH3, -O-COC2H5, -O-COC3H7, -O-CO-цикло-C3H5, -O-COCH(CH3)2, -OCF3, -O-S(O)CH3, -O-S(O)C2H5, -O-S(O)C3H7, -O-S(O)-цикло-C3H5, -O-SO2CH3, -O-SO2C2H5, -O-SO2C3H7, -O-SO2-цикло-C3H5, -O-SO2-OCH3, -O-SO2-OC2H5, -O-SO2-OC3H7, -O-SO2-O-цикло-C3H5, -O(CH2)nN[(CH2)nOH], -O(CH2)nN[(CH2)n-H], -O-P(O)(O-)OC3H6OH, -O-P(O)(S-)OC3H6OH,

еще более предпочтительными являются:

-OCH3, -OC2H5, -OCH2CH2OCH3 (также известный как MOE), -OCH2CH2-N(CH3)2 (также известный как DMAOE), -O[(CH2)nO]mCH3, -O(CH2)nOCH3, -O(CH2)nNH2, -O(CH2)nN(CH3)2, -O-P(O)(O-)OC3H6OH, -O-P(O)(S-)OC3H6OH,

где n выбран из 1, 2, 3, 4, 5 или 6; и

где m выбран из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10.

Предпочтительные LNA

В предпочтительных вариантах осуществления звенья LNA, используемые в антисмысловых олигонуклеотидах по настоящему изобретению, предпочтительно, имеют структуру общей формулы (II):

Группа -C(RaRb)-X- предпочтительно представляет -C(RaRb)-O-, -C(RaRb)-NRc-, -C(RaRb)-S- и -C(RaRb)-C(RaRb)-O-, где заместители Ra, Rb и Rc имеют значения, определенные здесь, и предпочтительно представляют C1-6-алкил и более предпочтительно С1-4-алкил. Более предпочтительно -C(RaRb)-X- выбран из -CH2-O-, -CH2-S-, -CH2-NH-, -CH2-N(CH3)-, -CH2-CH2-O- или -CH2-CH2-S-, и более предпочтительно из -CH2-O-, -CH2-S-, -CH2-CH2-O- или -CH2-CH2-S-, и еще более предпочтительно из -CH2-O-, -CH2-S- или -CH2-CH2-O-, и еще более предпочтительно из -CH2-O- или -CH2-S-, и наиболее предпочтительно представляет -CH2-O-.

Все хиральные центры и асимметричные заместители (если таковые имеются) могут находиться в R- или в S-ориентации. Например, два иллюстративных стереохимических изомера представляют бета-D- и альфа-L-изоформы, как показано ниже:

Предпочтительные звенья LNA выбраны из общих формул (b1)-(b9):

Термин «тио-LNA» включает замкнутый нуклеотид, где Х в общей формуле (II) выбран из -S- или -СН2-S-. Тио-LNA может находиться в бета-D- и альфа-L-конфигурации.

Термин «амино-LNA» включает замкнутый нуклеотид, где Х в общей формуле (II) выбран из -NH-, -N(R)-, -СН2-NH- и -СН2-N(R)-, где R выбран из атома водорода и С1-4-алкила. Амино-LNA может находиться в бета-D- и альфа-L-конфигурации.

Термин «окси-LNA» включает замкнутый нуклеотид, где Х в общей формуле (II) представляет -О-. «Окси-LNA» может находиться в бета-D- и альфа-L-конфигурации.

Термин «ЕNA» включает замкнутый нуклеотид, где Х в общей формуле (II) представляет -CH2-O- (где атом кислорода -СН2-O- присоединен к 2'-положению по отношению к основанию B). Ra и Rb независимо представляют атом водорода или метил.

В предпочтительных примерных вариантах осуществления LNA выбран из бета-D-окси-LNA, альфа-L-окси-LNA, бета-D-амино-LNA и бета-D-тио-LNA, в частности, бета-D-окси-LNA.

Еще более предпочтительными являются следующие антисмысловые олигонуклеотиды (таблица 1):

SP L SEQ ID NO. Последовательность, 5'-3'
89 17 102a GCGAGTGACTCACTCAA
90 15 103a CGAGTGACTCACTCA
90 16 104a GCGAGTGACTCACTCA
90 17 105a CGCGAGTGACTCACTCA
91 14 106a CGAGTGACTCACTC
91 16 107a CGCGAGTGACTCACTC
91 17 108a GCGCGAGTGACTCACTC
92 14 109a GCGAGTGACTCACT
92 16 110a GCGCGAGTGACTCACT
92 17 111a CGCGCGAGTGACTCACT
93 12 112a CGAGTGACTCAC
93 13 113a GCGAGTGACTCAC
93 14 114a CGCGAGTGACTCAC
93 16 115a CGCGCGAGTGACTCAC
93 17 116a GCGCGCGAGTGACTCAC
94 13 117a CGCGAGTGACTCA
94 14 118a GCGCGAGTGACTCA
94 15 119a CGCGCGAGTGACTCA
94 16 120a GCGCGCGAGTGACTCA
94 17 121a TGCGCGCGAGTGACTCA
95 14 122a CGCGCGAGTGACTC
95 16 123a TGCGCGCGAGTGACTC
95 17 124a GTGCGCGCGAGTGACTC
96 13 125a CGCGCGAGTGACT
97 14 126a TGCGCGCGAGTGAC
97 16 127a CGTGCGCGCGAGTGAC
98 13 128a TGCGCGCGAGTGA
107 16 129a GTCGTCGCTCCGTGCG
108 15 130a GTCGTCGCTCCGTGC
108 17 131a GTGTCGTCGCTCCGTGC
109 13 132a TCGTCGCTCCGTG
109 15 133a TGTCGTCGCTCCGTG
110 12 134a TCGTCGCTCCGT
110 13 135a GTCGTCGCTCCGT
110 14 136a TGTCGTCGCTCCGT
110 15 137a GTGTCGTCGCTCCGT
110 16 138a GGTGTCGTCGCTCCGT
351 16 139a CGTCATAGACCGAGCC
351 12 140a ATAGACCGAGCC
354 16 141a GCTCGTCATAGACCGA
354 13 142a CGTCATAGACCGA
355 14 143a CTCGTCATAGACCG
355 15 144a GCTCGTCATAGACCG
356 14 145a GCTCGTCATAGACC
381 17 146a CAGCCCCCGACCCATGG
382 16 147a CAGCCCCCGACCCATG
383 14 148a AGCCCCCGACCCAT
384 14 149a CAGCCCCCGACCCA
422 17 150a CGCGTCCACAGGACGAT
425 14 151a CGCGTCCACAGGAC
429 15 152a CGATACGCGTCCACA
431 13 153a CGATACGCGTCCA
431 16 154a TGGCGATACGCGTCCA
432 12 155a CGATACGCGTCC
432 13 156a GCGATACGCGTCC
432 17 157a GCTGGCGATACGCGTCC
433 15 158a CTGGCGATACGCGTC
433 12 159a GCGATACGCGTC
433 16 160a GCTGGCGATACGCGTC
433 14 161a TGGCGATACGCGTC
434 13 162a TGGCGATACGCGT
434 14 163a CTGGCGATACGCGT
434 12 164a GGCGATACGCGT
435 13 165a CTGGCGATACGCG
435 12 166a TGGCGATACGCG
437 17 167a ATCGTGCTGGCGATACG
449 16 168a CGTGCGGTGGGATCGT
449 17 169a ACGTGCGGTGGGATCGT
450 17 170a AACGTGCGGTGGGATCG
452 15 171a AACGTGCGGTGGGAT
452 17 172a TGAACGTGCGGTGGGAT
459 17 173a CGACTTCTGAACGTGCG
941 17 174a TTAACGCGGTAGCAGTA
941 16 175a TAACGCGGTAGCAGTA
942 17 176a GTTAACGCGGTAGCAGT
943 15 177a TTAACGCGGTAGCAG
944 13 178a TAACGCGGTAGCA
945 12 179a TAACGCGGTAGC
945 13 180a TTAACGCGGTAGC
946 12 181a TTAACGCGGTAG
946 13 182a GTTAACGCGGTAG
946 15 183a CGGTTAACGCGGTAG
946 16 184a CCGGTTAACGCGGTAG
947 14 185a CGGTTAACGCGGTA
947 13 186a GGTTAACGCGGTA
947 15 187a CCGGTTAACGCGGTA
947 16 188a GCCGGTTAACGCGGTA
947 17 189a TGCCGGTTAACGCGGTA
948 13 190a CGGTTAACGCGGT
949 13 191a CCGGTTAACGCGG
949 14 192a GCCGGTTAACGCGG
949 15 193a TGCCGGTTAACGCGG
950 13 194a GCCGGTTAACGCG
950 15 195a CTGCCGGTTAACGCG
950 16 196a GCTGCCGGTTAACGCG
1387 16 197a ATGCCGCGTCAGGTAC
1392 13 198a ACATGCCGCGTCA
1393 16 199a GATGACATGCCGCGTC
1394 12 200a GACATGCCGCGT
1394 15 201a GATGACATGCCGCGT
1395 13 202a ATGACATGCCGCG
1805 17 203a TCCCGCACCTTGGAACC
1851 16 204a CGATCTCTCAACACGT
1851 17 205a TCGATCTCTCAACACGT
1852 15 206a CGATCTCTCAACACG
1852 16 207a TCGATCTCTCAACACG
1852 17 208a CTCGATCTCTCAACACG
2064 16 209a GTAGTGTTTAGGGAGC
2072 16 210a GCTATTTGGTAGTGTT
2284 15 211a AGCTTATCCTATGAC
2285 14 212a AGCTTATCCTATGA
2355 17 213a CAGGCATTAATAAAGTG
4120 16 214a CTAGGCGCCTCTATGC
4121 14 215a TAGGCGCCTCTATG
4121 15 216a CTAGGCGCCTCTATG
4122 13 217a TAGGCGCCTCTAT
4217 16 218a CATGAATGGACCAGTA

SP - стартовое положение или стартовый нуклеотид в SEQ ID NO:2

L - длина последовательности.

Антисмысловые олигонуклеотиды, раскрытые здесь, такие как антисмысловые олигонуклеотиды, представленные в таблицах 1-3, и в частности, антисмысловые олигонуклеотиды, представленные в таблицах 4-9, состоят из нуклеотидов, предпочтительно нуклеотидов ДНК, представляющих звенья, которые не являются LNA (также называемые здесь как нуклеотиды, которые не являются LNA), а также звеньев LNA (также называемых здесь как нуклеотиды LNA). Несмотря на то, что точно не указано, антисмысловые олигонуклеотиды с последовательностями SEQ ID NO: 102а-218а из таблицы 1 содержат 2-4 нуклеотида LNA (звена LNA) на 3'-конце и 2-4 нуклеотида LNA (звена LNA) на 5'-конце. Несмотря на то, что точно не указано, «С» в таблице 2, которые относятся к звеньям LNA, предпочтительно содержат 5-метилцитозин (С*) в качестве азотистого основания.

Это означает, несмотря на то, что точно не указано, антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению или, как здесь раскрыто буквенным кодом А, С, G, Т и U, могут содержать любую межнуклеотидную связь, любую концевую группу и любое азотистое основание, описанные здесь. Кроме того, антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению или раскрытые здесь, представляют гапмеры любой гапмерной структуры, как здесь описано, по меньшей мере, с одним звеном LNA на 3'-конце и, по меньшей мере, с одним звеном LNA на 5'-конце. Кроме того, любое звено LNA, как здесь раскрыто, может быть использовано в антисмысловых олигонуклеотидах по настоящему изобретению или раскрытых здесь. Так, например, антисмысловой олигонуклеотид GCTCGTCATAGACCGA (SEQ ID NO: 13) или CGATACGCGTCCACAG (SEQ ID NO: 14) или GTAGTGTTTAGGGAGC (SEQ ID NO: 15) или GCTATTTGGTAGTGTT (SEQ ID NO: 16) или CATGAATGGACCAGTA (SEQ ID NO: 17) или AGGCATTAATAAAGTG (SEQ ID NO: 18) содержит, по меньшей мере, одно звено LNA на 5'-конце и, по меньшей мере, одно звено LNA на 3'-конце, любое азотистое основание, любую 3'-концевую группу, любую 5'-концевую группу, любую гапмерную структуру и любую межнуклеотидную связь, как здесь описано, и также включает соли и оптические изомеры этого антисмыслового олигонуклеотида.

Использование звеньев LNA является предпочтительным, особенно на терминальном 3'-конце и терминальном 5'-конце. Таким образом, предпочтительно, если последние 1-5 нуклеотидов на терминальном 3'-конце и также последние 1-5 нуклеотидов на терминальном 5'-конце, в частности, последовательностей, раскрытых здесь, и в частности, последовательностей SEQ ID NO: 102а-218а в таблице 1, представляют звенья LNA (также называемые нуклеотидами LNA), в то время как между 1-5 звеньями LNA на 3'- и 5'-конце, находится 2-14, предпочтительно 3-12, более предпочтительно 4-10, более предпочтительно 5-9, еще более предпочтительно 6-8 звеньев, которые не являются LNA (также называющиеся нуклеотидами, которые не являются LNA). Такой вид антисмысловых олигонуклеотидов называют гапмерами, и они более подробно описаны ниже. Более предпочтительными являются 2-5 нуклеотидов LNA на 3'-конце и 2-5 нуклеотидов LNA на 5'-конце или 1-4 нуклеотида LNA на 3'-конце и 1-4 нуклеотида LNA на 5'-конце и еще более предпочтительно 2-4 нуклеотида LNA на 3'-конце и 2-4 нуклеотида LNA на 5'-конце антисмысловых олигонуклеотидов с числом предпочтительно 4-10, более предпочтительно от 5-9, еще более предпочтительно 6-8 звеньев, которые не являются LNA, между звеньями LNA на 3'- и 5'-конце.

Кроме того, в качестве межнуклеотидных связей между звеньями LNA и между звеньями LNA и звеньями, которые не являются LNA, предпочтительным является использование фосфоротиоатов или фосфородитиоатов и предпочтительно фосфоротиоатов.

Таким образом, предпочтительными являются антисмысловые олигонуклеотиды, где более чем 50%, предпочтительно более чем 60%, более предпочтительно более чем 70%, еще более предпочтительно более чем 80%, и наиболее предпочтительно более чем 90% межнуклеотидных связей представляют фосфоротиоатные или фосфатные, и более предпочтительно фосфоротиоатные связи, и где последние 1-4 или 2-5 нуклеотидов на 3'-конце представляют звенья LNA, и последние 1-4 или 2-5 нуклеотидов на 5'-конце представляют звенья LNA, и между звеньями LNA на концах последовательности находится 6-14 нуклеотидов, предпочтительно 7-12, предпочтительно 8-11, более предпочтительно 8-10 звеньев, которые не являются LNA, предпочтительно звенья ДНК. Кроме того, предпочтительно, чтобы эти антисмысловые олигонуклеотиды в форме гапмеров состояли в общей сложности из 12-20, предпочтительно 12-18 нуклеотидов.

Гапмеры

Антисмысловые олигонуклеотиды по изобретению могут состоять из нуклеотидных последовательностей, которые содержат нуклеотиды ДНК, представляющие звенья, которые не являются LNA, а также нуклеотиды LNA, и они могут располагаться в виде гапмера.

Таким образом, антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению, предпочтительно представляют собой гапмеры. Гапмер состоит из средней части нуклеотидных звеньев ДНК, которые не являются замкнутыми, и которые, таким образом, не являются звеньями LNA. Нуклеотиды ДНК данной средней части могут быть связаны друг с другом межнуклеотидными связями (IL), описанными здесь, которые предпочтительно представляют фосфатные группы, фосфортиоатные группы или фосфородитиоатные группы, и которые могут содержать аналоги азотистых оснований, такие как 5-пропинилцитозин, 7-метилгуанин, 7-метиладенин, 2-аминоаденин, 2-тиотимин, 2-тиоцитозин или 5-метилцитозин. Такие звенья ДНК или нуклеотиды ДНК не являются бициклическими пентозными структурами. Средняя часть звеньев, которые не являются LNA, фланкирована на 3'-конце и 5'-конце последовательностями, состоящими из звеньев LNA. Таким образом, гапмеры имеют общую формулу:

LNA-последовательность 1 - последовательность, которая не является LNA - LNA-последовательность 2

или

участок A - участок B - участок C

Средняя часть антисмыслового олигонуклеотида, которая состоит из нуклеотидных звеньев ДНК, которые не являются звеньями LNA, когда образует дуплекс с комплементарной РНК-мишенью, способна к рекрутингу РНКазы. 3'- и 5'-концевые нуклеотидные звенья представляют звенья LNA, которые предпочтительно находятся в альфа-L-конфигурации, в частности, предпочтительными являются бета-D-окси-LNA и альфа-L-окси-LNA.

Таким образом, гапмер представляет собой антисмысловой олигонуклеотид, который содержит непрерывный участок нуклеотидов ДНК, который способен к рекрутингу РНКазы, такой как РНКаза H, такой как участок, по меньшей мере, из 6 или 7 нуклеотидов ДНК, которые не являются LNA, называемые здесь средней частью или участком B, где участок В фланкирован на 3'- и 5'-концах областями нуклеотидных аналогов с повышенной аффинностью, которые представляют звенья LNA, например, 1-6 звеньями LNA 5' и 3', к непрерывному участку нуклеотидов ДНК, способному к рекрутингу РНКазы - эти фланкирующие области относятся к участкам А и С соответственно.

Предпочтительно гапмер содержит (поли)нуклеотидную последовательность формулы (5'к 3') A-B-C или необязательно A-B-C-D или D-A-B-C, где; участок А (5'-область) состоит, по меньшей мере, из одного нуклеотидного аналога, например, по меньшей мере, одного звена LNA, например, 1-6 звеньев LNA, и участок В состоит, по меньшей мере, из пяти последовательных нуклеотидов ДНК, представляющих звенья, которые не являются LNA, и которые способны к рекрутингу РНКазы (при образовании дуплекса с комплементарной молекулой РНК, такой как мРНК-мишень), и участок С (3'-область) состоит, по меньшей мере, из одного нуклеотидного аналога, например, по меньшей мере, одного звена LNA, например, 1-6 звеньев LNA, и область D, если она присутствует, состоит из 1, 2 или 3 нуклеотидных звеньев ДНК, представляющих звенья, которые не являются LNA.

В некоторых вариантах осуществления участок А состоит из 1, 2, 3, 4, 5 или 6 звеньев LNA, например, 2-5 звеньев LNA, например, 3 или 4 звеньев LNA; и/или участок С состоит из 1, 2, 3, 4, 5 или 6 звеньев LNA, например, 2-5 звеньев LNA, например, 3 или 4 звеньев LNA.

В некоторых вариантах осуществления участок В состоит из 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 или 12 последовательных нуклеотидов ДНК, которые способны к рекрутингу РНКазы, или 6-10, или 7-9, например, 8 последовательных нуклеотидов, которые способны к рекрутингу РНКазы. В некоторых вариантах осуществления участок В состоит, по меньшей мере, из одного нуклеотидного звена ДНК, например, 1-12 нуклеотидных звеньев ДНК, предпочтительно 4-12 нуклеотидных звеньев ДНК, более предпочтительно 6-10 нуклеотидных звеньев ДНК, еще более предпочтительно, например, 7-10 нуклеотидных звеньев ДНК и наиболее предпочтительно, 8, 9 или 10 нуклеотидных звеньев ДНК, представляющих звенья, которые не являются LNA.

В некоторых вариантах осуществления участок А состоит из 3 или 4 LNA, участок В состоит из 7, 8, 9 или 10 нуклеотидных звеньев ДНК, и участок С состоит из 3 или 4 звеньев LNA. Такие конструкции включают (A-B-C): 1-7-2, 2-7-1, 2-7-2, 3-7-1, 3-7-2, 1-7-3, 2-7-3, 3-7-3, 2-7-4, 3-7-4, 4-7-2, 4-7-3, 4-7-4, 1-8-1, 1-8-2, 2-8-1, 2-8-2, 1-8-3, 3-8-1, 3-8-3, 2-8-3, 3-8-2, 4-8-1, 4-8-2, 1-8-4, 2-8-4, 3-8-4, 4-8-3, 4-8-4, 1-9-1, 1-9-2, 2-9-1, 2-9-2, 2-9-3, 3-9-2, 3-9-3, 1-9-3, 3-9-1, 4-9-1, 1-9-4, 4-9-2, 2-9-4, 4-9-3, 3-9-4, 4-9-4, 1-10-1, 1-10-2, 2-10-1, 2-10-2, 1-10-3, 3-10-1, 2-10-2, 2-10-3, 3-10-2, 3-10-3, 2-10-4, 4-10-2, 3-10-4, 4-10-3, 4-10-4, 1-11-1, 1-11-2, 2-11-1, 2-11-2, 1-11-3, 3-11-1, 2-11-2, 2-11-3, 3-11-2, 3-11-3, 2-11-4, 4-11-2, 3-11-4, 4-11-3, 4-11-4, и могут дополнительно включать участок D, который может содержать 1 или 2 нуклеотидных звена ДНК, которые не являются звеньями LNA.

Другие гапмерные конструкции раскрыты в международной заявке WO2004/046160A, которая включена здесь в качестве ссылки. Предварительная заявка на патент США 60/977409, включенная здесь в качестве ссылки, относится к короткомерным гапмерным антисмысловым олигонуклеотидам, которые также подходят для настоящего изобретения.

В некоторых вариантах осуществления антисмысловой олигонуклеотид состоит из непрерывной нуклеотидной последовательности в общей сложности из 10, 11, 12, 13 или 14 нуклеотидных звеньев (звеньев LNA и звеньев, которые не являются LNA вместе), где эта непрерывная нуклеотидная последовательность имеет формулу (5'-3'), А-В-С, или необязательно A-B-C-D или D-A-B-C, где участок А состоит из 1, 2 или 3 звеньев LNA, и участок В состоит из 7, 8 или 9 непрерывных нуклеотидных звеньев ДНК, которые не являются звеньями LNA, и которые способны к рекрутингу РНКазы при образовании дуплекса с комплементарной молекулой РНК (например, мРНК-мишенью), и участок С состоит из 1, 2 или 3 звеньев LNA. Когда он присутствует, то участок D состоит из одного нуклеотидного звена ДНК, которое не является LNA.

В некоторых вариантах осуществления участок А состоит из 1 звена LNA. В некоторых вариантах осуществления состоит участок А из 2 звеньев LNA. В некоторых вариантах осуществления участок С состоит из 3 звеньев LNA. В некоторых вариантах осуществления участок С состоит из 2 звеньев LNA. В некоторых вариантах осуществления участок С состоит из 3 звеньев LNA. В некоторых вариантах осуществления участок В состоит из 7 нуклеотидных звеньев ДНК, которые не являются LNA. В некоторых вариантах осуществления участок В состоит из 8 нуклеотидных звеньев ДНК. В некоторых вариантах осуществления участок В состоит из 9 нуклеотидных звеньев ДНК. В некоторых вариантах осуществления участок В состоит из 1-9 нуклеотидных звеньев ДНК, например, 2, 3, 4, 5, 6, 7 или 8 нуклеотидных звеньев ДНК. Нуклеотидные звенья ДНК всегда представляют звенья, которые не являются LNA. В некоторых вариантах осуществления участок В содержит 1, 2 или 3 звена LNA, которые предпочтительно находятся в альфа-L-конфигурации и которые более предпочтительно представляют звенья альфа-окси-L-LNA. В некоторых вариантах осуществления число нуклеотидов, присутствующих в A-B-C, выбрано из группы, состоящей из (звенья LNA-участок В-звенья LNA и более предпочтительно звенья альфа-L-окси-LNA (участок А)-участок В-(участок С) звенья альфа-L-окси-LNA): 1-8-1, 1-8-2, 2-8-1, 2-8-2, 1-8-3, 3-8-1, 3-8-3, 2-8-3, 3-8-2, 4-8-1, 4-8-2, 1-8-4, 2-8-4, 3-8-4, 4-8-3, 4-8-4, 1-9-1, 1-9-2, 2-9-1, 2-9-2, 2-9-3, 3-9-2, 3-9-3, 1-9-3, 3-9-1, 4-9-1, 1-9-4, 4-9-2, 2-9-4, 4-9-3, 3-9-4, 4-9-4, 1-10-1, 1-10-2, 2-10-1, 2-10-2, 1-10-3, 3-10-1, 2-10-2, 2-10-3, 3-10-2, 3-10-3, 2-10-4, 4-10-2, 3-10-4, 4-10-3, 4-10-4, 1-11-1, 1-11-2, 2-11-1, 2-11-2, 1-11-3, 3-11-1, 2-11-2, 2-11-3, 3-11-2, 3-11-3, 2-11-4, 4-11-2, 3-11-4, 4-11-3, 4-11-4. В других предпочтительных вариантах осуществления число нуклеотидов в A-B-C выбрано из группы, состоящей из: 3-8-3, 4-8-2, 2-8-4, 3-8-4, 4-8-3, 4-8-4, 3-9-3, 4-9-2, 2-9-4, 4-9-3, 3-9-4, 4-9-4, 3-10-3, 2-10-4, 4-10-2, 3-10-4, 4-10-3, 4-10-4, 2-11-4, 4-11-2, 3-11-4, 4-11-3, и еще более предпочтительно представляет: 3-8-3, 3-8-4, 4-8-3, 4-8-4, 3-9-3, 4-9-3, 3-9-4, 4-9-4, 3-10-3, 3-10-4, 4-10-3, 4-10-4, 3-11-4 и 4-11-3.

Фосфоротиоатные, фосфатные или фосфородитиоатные и особенно фосфортиоатные межнуклеотидные связи также являются предпочтительными, в частности, для участка B гапмера. Фосфоротиоатные, фосфатные или фосфородитиоатные связи и особенно фосфоротиоатные межнуклеотидные связи также могут быть использованы для фланкирующих участков (А и С, и для связывания А или С с D, и в участке D, если он присутствует).

Однако участки A, В и С могут содержать межнуклеотидные связи, иные, чем фосфоротиоатные или фосфородитиоатные, такие как фосфодиэфирные связи, в частности, например, когда применение нуклеотидных аналогов защищает межнуклеотидные связи в участках А и С от разрушения под воздействием эндонуклеазы, когда участки А и С состоят из звеньев LNA.

Межнуклеотидные связи в антисмысловом олигонуклеотиде могут быть фосфодиэфирными, фосфоротиоатными, фосфордитиоатными или боранофосфатными таким образом, чтобы обеспечить расщепление РНК-мишени РНКазой Н. Фосфоротиоат или фосфородитиоат являются предпочтительными для повышения устойчивости к воздействию нуклеаз и по другим причинам, таким простота производства. В одном аспекте олигомера по изобретению, звенья LNA и/или звенья, которые не являются LNA, связаны друг с другом фосфоротиоатными группами.

Следует понимать, что включение фосфодиэфирных связей, например, одной или двух связей, иначе в антисмысловой олигонуклеотид с фосфортиоатными связями, в частности, между или рядом с звеньями LNA (как правило, в участке А и/или С) может изменить биодоступность и/или биологическое распределение антисмыслового олигонуклеотида (см. WO2008/053314A, которая включена здесь в качестве ссылки).

В некоторых вариантах осуществления, например, в последовательностях антисмысловых олигонуклеотидов, раскрытых здесь, и где это подходит и не указано конкретно, все остальные группы межнуклеотидных связей представляют фосфодиэфирные группы или фосфортиоатные группы, или их комбинации.

В некоторых вариантах осуществления все группы межнуклеотидных связей представляют фосфоротиоатные группы. При обращении к специфическим гапмерным последовательностям антисмысловых олигонуклеотидов, описанных здесь, следует понимать, что в различных вариантах осуществления, когда связи представляют фосфоротиоатные связи, то можно использовать альтернативные связи, такие как здесь описаны, например, фосфатные связи (также называемые фосфодиэфирными связями), в частности, для связей между нуклеотидными аналогами, такими как звенья LNA. Аналогично, при обращении к специфическим гапмерным последовательностям антисмысловых олигонуклеотидов, описанных здесь, когда остатки C представляют 5'-метил-модифицированный цитозин, в различных вариантах осуществления, то один или более C, присутствующих в олигомере, могут представлять немодифицированные остатки C.

Список условных обозначений

Как здесь используется, аббревиатуры b, d, s, ss имеют следующее значение:

b звено LNA или нуклеотид LNA (любой выбранный из b1-b7)
b1 β-D-окси-LNA
b2 β-D-тио-LNA
b3 β-D-амино-LNA
b4 α-L-окси-LNA
b5 β-D-ENA
b6 β-D-(NH)-LNA
b7 β-D-(NCH3)-LNA
d 2-дезокси означает 2-дезоксирибозные звенья (например, формула B3 или B5 с R=-H)
C* метил-С (5-метилцитозин); [следовательно, dС* представляет 5-метил-2'-дезоксицитидин]
A* 2-аминоаденин [следовательно, dА* представляет 2-амино-2'-дезоксиаденозин]
s межнуклеотидная связь представляет фосфоротиоатную группу (-O-P(O)(S-)O)
ss межнуклеотидная связь представляет фосфородитиоатную группу (-O-P(S)(S-)O)
/5SpC3/ -O-P(O)(O-)OC3H6OH в 5'-концевой группе антисмыслового олигонуклеотида
/3SpC3/ -O-P(O)(O-)OC3H6OH в 3'-концевой группе антисмыслового олигонуклеотида
/5SpC3s/ -O-P(O)(S-)OC3H6OH в 5'-концевой группе антисмыслового олигонуклеотида
/3SpC3s/ -O-P(O)(S-)OC3H6OH в 3'-концевой группе антисмыслового олигонуклеотида

нуклеотиды, выделенные жирным шрифтом, представляют нуклеотиды LNA

нуклеотиды, не выделенные жирным шрифтом, представляют нуклеотиды, которые не являются LNA.

Гапмерные последовательности

Следующие антисмысловые олигонуклеотиды в форме гапмеров, приведенные в таблицах 2-9 и более предпочтительно в таблицах 4-9, являются особенно предпочтительными.

Таблица 2
SP L SEQ ID NO. Последовательность, 5'-3'
89 17 102b GbsCbsGbsAbsdGsdTsdGsdAsdCsdTsdCsdAsdCsTbsCbsAbsAb
90 15 103b CbsGbsAbsdGsdTsdGsdAsdCsdTsdCsdAsdCsTbsCbsAb
90 16 104b GbsCbsGbsdAsdGsdTsdGsdAsdCsdTsdCsdAsdCsTbsCbsAb
90 17 105b CbsGbsCbsGbsdAsdGsdTsdGsdAsdCsdTsdCsdAsCbsTbsCbsAb
91 14 106b CbsGbsAbsdGsdTsdGsdAsdCsdTsdCsdAsCbsTbsCb
91 16 107b CbsGbsCbsdGsdAsdGsdTsdGsdAsdCsdTsdCsdAsCbsTbsCb
91 17 108b GbsCbsGbsCbsdGsdAsdGsdTsdGsdAsdCsdTsdCsAbsCbsTbsCb
92 14 109b GbsCbsGbsdAsdGsdTsdGsdAsdCsdTsdCsAbsCbsTb
92 16 110b GbsCbsGbsdCsdGsdAsdGsdTsdGsdAsdCsdTsdCsAbsCbsTb
92 17 111b CbsGbsCbsGbsdCsdGsdAsdGsdTsdGsdAsdCsdTsCbsAbsCbsTb
93 12 112b CbsGbsdAsdGsdTsdGsdAsdCsdTsdCsAbsCb
93 13 113b GbsCbsGbsdAsdGsdTsdGsdAsdCsdTsdCsAbsCb
93 14 114b CbsGbsCbsdGsdAsdGsdTsdGsdAsdCsdTsCbsAbsCb
93 16 115b CbsGbsCbsdGsdCsdGsdAsdGsdTsdGsdAsdCsdTsCbsAbsCb
93 17 116b GbsCbsGbsCbsdGsdCsdGsdAsdGsdTsdGsdAsdCsTbsCbsAbsCb
94 13 117b CbsGbsCbsdGsdAsdGsdTsdGsdAsdCsdTsCbsAb
94 14 118b GbsCbsGbsdCsdGsdAsdGsdTsdGsdAsdCsTbsCbsAb
94 15 119b CbsGbsCbsdGsdCsdGsdAsdGsdTsdGsdAsdCsTbsCbsAb
94 16 120b GbsCbsGbsdCsdGsdCsdGsdAsdGsdTsdGsdAsdCsTbsCbsAb
94 17 121b TbsGbsCbsGbsdCsdGsdCsdGsdAsdGsdTsdGsdAsCbsTbsCbsAb
95 14 122b CbsGbsCbsdGsdCsdGsdAsdGsdTsdGsdAsCbsTbsCb
95 16 123b TbsGbsCbsdGsdCsdGsdCsdGsdAsdGsdTsdGsdAsCbsTbsCb
95 17 124b GbsTbsGbsCbsdGsdCsdGsdCsdGsdAsdGsdTsdGsAbsCbsTbsCb
96 13 125b CbsGbsCbsdGsdCsdGsdAsdGsdTsdGsdAsCbsTb
97 14 126b TbsGbsCbsdGsdCsdGsdCsdGsdAsdGsdTsGbsAbsCb
97 16 127b CbsGbsTbsdGsdCsdGsdCsdGsdCsdGsdAsdGsdTsGbsAbsCb
98 13 128b TbsGbsCbsdGsdCsdGsdCsdGsdAsdGsdTsGbsAb
107 16 129b GbsTbsCbsdGsdTsdCsdGsdCsdTsdCsdCsdGsdTsGbsCbsGb
108 15 130b GbsTbsCbsdGsdTsdCsdGsdCsdTsdCsdCsdGsTbsGbsCb
108 17 131b GbsTbsGbsTbsdCsdGsdTsdCsdGsdCsdTsdCsdCsGbsTbsGbsCb
109 13 132b TbsCbsGbsdTsdCsdGsdCsdTsdCsdCsdGsTbsGb
109 15 133b TbsGbsTbsdCsdGsdTsdCsdGsdCsdTsdCsdCsGbsTbsGb
110 12 134b TbsCbsdGsdTsdCsdGsdCsdTsdCsdCsGbsTb
110 13 135b GbsTbsCbsdGsdTsdCsdGsdCsdTsdCsdCsGbsTb
110 14 136b TbsGbsTbsdCsdGsdTsdCsdGsdCsdTsdCsCbsGbsTb
110 15 137b GbsTbsGbsdTsdCsdGsdTsdCsdGsdCsdTsdCsCbsGbsTb
110 16 138b GbsGbsTbsdGsdTsdCsdGsdTsdCsdGsdCsdTsdCsCbsGbsTb
351 16 139b CbsGbsTbsdCsdAsdTsdAsdGsdAsdCsdCsdGsdAsGbsCbsCb
351 12 140b AbsTbsdAsdGsdAsdCsdCsdGsdAsdGsCbsCb
354 16 141b GbsCbsTbsdCsdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsdCsCbsGbsAb
354 13 142b CbsGbsTbsdCsdAsdTsdAsdGsdAsdCsdCsGbsAb
355 14 143b CbsTbsdCsdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsCbsCbsGb
355 14 143c CbsTbsCbsdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsdCsCbsGb
355 14 143d CbsTbsCbsdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsCbsCbsGb
355 15 144b GbsCbsTbsdCsdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsCbsCbsGb
356 14 145b GbsCbsTbsdCsdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsAbsCbsCb
381 17 146b CbsAbsGbsCbsdCsdCsdCsdCsdGsdAsdCsdCsdCsAbsTbsGbsGb
382 16 147b CbsAbsGbsdCsdCsdCsdCsdCsdGsdAsdCsdCsdCsAbsTbsGb
382 16 147c CbsAbsGbsdCsdCsdCsdCsdCsdGsdAsdCsdCsdCsAsTsG
382 16 147d CbsAbsGbsdCsdCsdCsdCsdCsdGsdAsdCsdCsCbsAbsTbsGb
382 16 147e CbsAbsGbsCbsdCsdCsdCsdCsdGsdAsdCsdCsdCsAbsTbsGb
382 16 147f CbsAbsGbsCbsdCsdCsdCsdCsdGsdAsdCsdCsCbsAbsTbsGb
383 14 148b AbsGbsdCsdCsdCsdCsdCsdGsdAsdCsdCsCbsAbsTb
383 14 148c AbsGbsCbsdCsdCsdCsdCsdGsdAsdCsdCsdCsAbsTb
383 14 148d AbsGbsCbsdCsdCsdCsdCsdGsdAsdCsdCsCbsAbsTb
384 14 149 CbsAbsGbsdCsdCsdCsdCsdCsdGsdAsdCsCbsCbsAb
422 17 150b CbsGbsCbsGbsdTsdCsdCsdAsdCsdAsdGsdGsdAsCbsGbsAbsTb
425 14 151b CbsGbsCbsdGsdTsdCsdCsdAsdCsdAsdGsGbsAbsCb
429 15 152b CbsGbsAbsdTsdAsdCsdGsdCsdGsdTsdCsdCsAbsCbsAb
429 15 152c CbsGbsAbsdTsdAsdCsdGsdCsdGsdTsdCsCbsAbsCbsAb
429 15 152d CbsGbsAbsTbsdAsdCsdGsdCsdGsdTsdCsdCsAbsCbsAb
432 12 155b CbsGbsdAsdTsdAsdCsdGsdCsdGsdTsCbsCb
431 13 153b CbsGbsAbsdTsdAsdCsdGsdCsdGsdTsdCsCbsAb
431 13 153c CbsGbsdAsdTsdAsdCsdGsdCsdGsdTsCbsCbsAb
431 16 154b TbsGbsGbsdCsdGsdAsdTsdAsdCsdGsdCsdGsdTsCbsCbsAb
432 12 155c CbsGbsdAsdTsdAsdCsdGsdCsdGsdTsdCsCb
432 12 155d CbsdGsdAsdTsdAsdCsdGsdCsdGsdTsCbsCb
432 13 156b GbsCbsGbsdAsdTsdAsdCsdGsdCsdGsdTsCbsCb
432 17 157b GbsCbsTbsGbsdGsdCsdGsdAsdTsdAsdCsdGsdCsGbsTbsCbsCb
433 15 158b CbsTbsGbsdGsdCsdGsdAsdTsdAsdCsdGsdCsGbsTbsCb
433 12 159b GbsCbsdGsdAsdTsdAsdCsdGsdCsdGsTbsCb
433 16 160b GbsCbsTbsdGsdGsdCsdGsdAsdTsdAsdCsdGsdCsGbsTbsCb
433 14 161b TbsGbsGbsdCsdGsdAsdTsdAsdCsdGsdCsGbsTbsCb
434 12 164b GbsGbsdCsdGsdAsdTsdAsdCsdGsdCsGbsTb
434 13 162b TbsGbsGbsdCsdGsdAsdTsdAsdCsdGsdCsGbsTb
434 13 162c TbsGbsdGsdCsdGsdAsdTsdAsdCsdGsCbsGbsTb
434 14 163b CbsTbsGbsdGsdCsdGsdAsdTsdAsdCsdGsCbsGbsTb
435 13 165b CbsTbsGbsdGsdCsdGsdAsdTsdAsdCsdGsCbsGb
435 12 166b TbsGbsdGsdCsdGsdAsdTsdAsdCsdGsCbsGb
437 17 167b AbsTbsCbsGbsdTsdGsdCsdTsdGsdGsdCsdGsdAsTbsAbsCbsGb
449 16 168b CbsGbsTbsdGsdCsdGsdGsdTsdGsdGsdGsdAsdTsCbsGbsTb
449 17 169b AbsCbsGbsTbsdGsdCsdGsdGsdTsdGsdGsdGsdAsTbsCbsGbsTb
450 17 170b AbsAbsCbsGbsdTsdGsdCsdGsdGsdTsdGsdGsdGsAbsTbsCbsGb
452 15 171b AbsAbsCbsdGsdTsdGsdCsdGsdGsdTsdGsdGsGbsAbsTb
452 17 172b TbsGbsAbsAbsdCsdGsdTsdGsdCsdGsdGsdTsdGsGbsGbsAbsTb
459 17 173b CbsGbsAbsCbsdTsdTsdCsdTsdGsdAsdAsdCsdGsTbsGbsCbsGb
941 17 174b TbsTbsAbsAbsdCsdGsdCsdGsdGsdTsdAsdGsdCsAbsGbsTbsAb
941 16 175b TbsAbsAbsdCsdGsdCsdGsdGsdTsdAsdGsdCsdAsGbsTbsAb
942 17 176b GbsTbsTbsAbsdAsdCsdGsdCsdGsdGsdTsdAsdGsCbsAbsGbsTb
943 15 177b TbsTbsAbsdAsdCsdGsdCsdGsdGsdTsdAsdGsCbsAbsGb
944 13 178b TbsAbsAbsdCsdGsdCsdGsdGsdTsdAsdGsCbsAb
945 12 179b TbsAbsdAsdCsdGsdCsdGsdGsdTsdAsGbsCb
945 13 180b TbsTbsAbsdAsdCsdGsdCsdGsdGsdTsdAsGbsCb
946 12 181b TbsTbsdAsdAsdCsdGsdCsdGsdGsdTsAbsGb
946 13 182b GbsTbsTbsdAsdAsdCsdGsdCsdGsdGsdTsAbsGb
946 15 183b CbsGbsGbsdTsdTsdAsdAsdCsdGsdCsdGsdGsTbsAbsGb
946 16 184b CbsCbsGbsdGsdTsdTsdAsdAsdCsdGsdCsdGsdGsTbsAbsGb
947 14 185b CbsGbsGbsdTsdTsdAsdAsdCsdGsdCsdGsGbsTbsAb
947 13 186b GbsGbsTbsdTsdAsdAsdCsdGsdCsdGsdGsTbsAb
947 15 187b CbsCbsGbsdGsdTsdTsdAsdAsdCsdGsdCsdGsGbsTbsAb
947 16 188b GbsCbsCbsdGsdGsdTsdTsdAsdAsdCsdGsdCsdGsGbsTbsAb
947 17 189b TbsGbsCbsCbsdGsdGsdTsdTsdAsdAsdCsdGsdCsGbsGbsTbsAb
948 13 190b CbsGbsGbsdTsdTsdAsdAsdCsdGsdCsdGsGbsTb
949 13 191b CbsCbsGbsdGsdTsdTsdAsdAsdCsdGsdCsGbsGb
949 14 192b GbsCbsCbsdGsdGsdTsdTsdAsdAsdCsdGsCbsGbsGb
949 15 193b TbsGbsCbsdCsdGsdGsdTsdTsdAsdAsdCsdGsCbsGbsGb
950 13 194b GbsCbsCbsdGsdGsdTsdTsdAsdAsdCsdGsCbsGb
950 15 195b CbsTbsGbsdCsdCsdGsdGsdTsdTsdAsdAsdCsGbsCbsGb
950 16 196b GbsCbsTbsdGsdCsdCsdGsdGsdTsdTsdAsdAsdCsGbsCbsGb
1387 16 197b AbsTbsGbsdCsdCsdGsdCsdGsdTsdCsdAsdGsdGsTbsAbsCb
1392 13 198b AbsCbsAbsdTsdGsdCsdCsdGsdCsdGsdTsCbsAb
1393 16 199b GbsAbsTbsdGsdAsdCsdAsdTsdGsdCsdCsdGsdCsGbsTbsCb
1393 16 199c GbsAbsTbsdGsdAsdCsdAsdTsdGsdCsdCsdGsCbsGbsTbsCb
1393 16 199d GbsAbsTbsGbsdAsdCsdAsdTsdGsdCsdCsdGsdCsGbsTbsCb
1393 16 199e GbsAbsTbsGbsdAsdCsdAsdTsdGsdCsdCsdGsCbsGbsTbsCb
1394 12 200b GbsAbsdCsdAsdTsdGsdCsdCsdGsdCsGbsTb
1394 15 201b GbsAbsTbsdGsdAsdCsdAsdTsdGsdCsdCsdGsCbsGbsTb
1395 13 202b AbsTbsGbsdAsdCsdAsdTsdGsdCsdCsdGsCbsGb
1805 17 203b TbsCbsCbsCbsdGsdCsdAsdCsdCsdTsdTsdGsdGsAbsAbsCbsCb
1851 16 204b CbsGbsAbsdTsdCsdTsdCsdTsdCsdAsdAsdCsdAsCbsGbsTb
1851 17 205b TbsCbsGbsAbsdTsdCsdTsdCsdTsdCsdAsdAsdCsAbsCbsGbsTb
1852 15 206b CbsGbsAbsdTsdCsdTsdCsdTsdCsdAsdAsdCsAbsCbsGb
1852 16 207b TbsCbsGbsdAsdTsdCsdTsdCsdTsdCsdAsdAsdCsAbsCbsGb
1852 17 208b CbsTbsCbsGbsdAsdTsdCsdTsdCsdTsdCsdAsdAsCbsAbsCbsGb
2064 16 209b GbsTbsdAsdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsAbsGbsCb
2064 16 209c GbsTbsAbsGbsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsAbsGbsCb
2064 16 209d GbsTbsAbsdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsAbsGbsCb
2064 16 209e GbsTbsAbsdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsdAsGbsCb
2064 16 209f GbsTbsAbsdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsGbsAbsGbsCb
2064 16 209g GbsTbsAbsGbsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsGbsAbsGbsCb
2064 16 209h GbsTbsdAsdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsAbsGbsCb
2064 16 209i GbsTbsAbsGbsTbsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsGbsAbsGbsCb
2064 16 209j GbsTbsAbsGbsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsGbsGbsAbsGbsCb
2064 16 209k GbsTbsAbsGbsTbsdGsdTsdTsdTsdAsdGsGbsGbsAbsGbsCb
2072 16 210b GbsCbsdTsdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsGbsTbsTb
2072 16 210c GbsCbsTbsdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsdGsTbsTb
2072 16 210d GbsCbsTbsdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsGbsTbsTb
2072 16 210e GbsCbsTbsAbsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsGbsTbsTb
2072 16 210f GbsCbsTbsdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsTbsGbsTbsTb
2072 16 210g GbsCbsTbsAbsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsTbsGbsTbsTb
2284 15 211b AbsGbsCbsdTsdTsdAsdTsdCsdCsdTsdAsdTsGbsAbsCb
2284 15 211c AbsGbsCbsdTsdTsdAsdTsdCsdCsdTsdAsTbsGbsAbsCb
2284 15 211d AbsGbsCbsTbsdTsdAsdTsdCsdCsdTsdAsdTsGbsAbsCb
2285 14 212b AbsGbsdCsdTsdTsdAsdTsdCsdCsdTsdAsTbsGbsAb
2285 14 212c AbsGbsCbsdTsdTsdAsdTsdCsdCsdTsdAsdTsGbsAb
2285 14 212d AbsGbsCbsdTsdTsdAsdTsdCsdCsdTsdAsTbsGbsAb
2355 17 213b CbsAbsGbsdGsdCsdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsGbsTbsGb
2355 17 213c CbsAbsGbsGbsdCsdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsGbsTbsGb
2355 17 213d CbsAbsGbsdGsdCsdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsAbsGbsTbsGb
2355 17 213e CbsAbsGbsGbsdCsdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsAbsGbsTbsGb
4217 16 218d CbsAbsTbsdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsdAsGbsTbsAb
4217 16 218e CbsAbsTbsdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsAbsGbsTbsAb
4217 16 218f CbsAbsTbsGbsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsdAsGbsTbsAb
4217 16 218g CbsAbsTbsGbsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsAbsGbsTbsAb
4120 16 214 CbsTbsAbsdGsdGsdCsdGsdCsdCsdTsdCsdTsdAsTbsGbsCb
4121 14 215b TbsAbsGbsdGsdCsdGsdCsdCsdTsdCsdTsAbsTbsGb
4121 15 216b CbsTbsAbsdGsdGsdCsdGsdCsdCsdTsdCsdTsAbsTbsGb
4122 13 217b TbsAbsGbsdGsdCsdGsdCsdCsdTsdCsdTsAbsTb
Таблица 3
SP L SEQ ID NO. Последовательность, 5'-3'
2064 16 209m GbsTbsAbsGbsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsAbsGbsC*b
2064 16 209n GbsTbsAbsdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsAbsGbsC*b
2064 16 209o GbsTbsAbsdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsdAsGbsC*b
2064 16 209p GbsTbsAbsdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsGbsAbsGbsC*b
2064 16 209q GbsTbsAbsGbsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsGbsAbsGbsC*b
2064 16 209r GbsTbsdAsdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsAbsGbsC*b
429 15 152e C*bsGbsAbsTbsdAsdC*sdGsdC*sdGsdTsdC*sdC*sAbsC*bsAb
4217 16 218j C*bsAbsTbsdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdC*sdC*sAbsGbsTbsAb
2355 17 213f C*bsAbsGbsdGsdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsAbsGbsTbsGb
2355 17 213g C*bsAbsGbsdGsdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsGbsTbsGb
432 12 155e C*bsGbsdAsdTsdAsdC*sdGsdC*sdGsdTsC*bsC*b
4217 16 218h C*bsAbsTbsGbsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdC*sdC*sAbsGbsTbsAb
2072 16 210h GbsC*bsTbsAbsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsGbsTbsTb
2072 16 210i GbsC*bsdTsdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsGbsTbsTb
432 12 155f C*bsGbsdAsdTsdAsdC*sdGsdC*sdGsdTsdC*sC*b
2072 16 210j GbsC*bsTbsdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsdGsTbsTb
432 12 155g C*bsdGsdAsdTsdAsdC*sdGsdC*sdGsdTsC*bsC*b
431 13 153d C*bsGbsAbsdTsdAsdC*sdGsdC*sdGsdTsdC*sC*bsAb
429 15 152f C*bsGbsAbsdTsdAsdC*sdGsdC*sdGsdTsdC*sdC*sAbsC*bsAb
4217 16 218i C*bsAbsTbsGbsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdC*sdC*sdAsGbsTbsAb
1393 16 199f GbsAbsTbsdGsdAsdC*sdAsdTsdGsdC*sdC*sdGsdC*sGbsTbsC*b
2285 14 212e AbsGbsC*bsdTsdTsdAsdTsdC*sdC*sdTsdAsdTsGbsAb
355 14 143e C*bsTbsdC*sdGsdTsdC*sdAsdTsdAsdGsdAsC*bsC*bsGb
2072 16 210k GbsC*bsTbsdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsGbsTbsTb
1393 16 199g GbsAbsTbsdGsdAsdC*sdAsdTsdGsdC*sdC*sdGsC*bsGbsTbsC*b
2355 17 213h C*bsAbsGbsGbsdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsAbsGbsTbsGb
429 15 152g C*bsGbsAbsdTsdAsdC*sdGsdC*sdGsdTsdC*sC*bsAbsC*bsAb
2285 14 212f AbsGbsC*bsdTsdTsdAsdTsdC*sdC*sdTsdAsTbsGbsAb
355 14 143f C*bsTbsC*bsdGsdTsdC*sdAsdTsdAsdGsdAsC*bsC*bsGb
1393 16 199h GbsAbsTbsGbsdAsdC*sdAsdTsdGsdC*sdC*sdGsC*bsGbsTbsC*b
1393 16 199i GbsAbsTbsGbsdAsdC*sdAsdTsdGsdC*sdC*sdGsdC*sGbsTbsC*b
4217 16 218k C*bsAbsTbsdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdC*sdC*sdAsGbsTbsAb
2285 14 212g AbsGbsdC*sdTsdTsdAsdTsdC*sdC*sdTsdAsTbsGbsAb
434 13 162d TbsGbsGbsdC*sdGsdAsdTsdAsdC*sdGsdC*sGbsTb
383 14 148e AbsGbsC*bsdC*sdC*sdC*sdC*sdGsdAsdC*sdC*sdC*sAbsTb
431 13 153e C*bsGbsdAsdTsdAsdC*sdGsdC*sdGsdTsC*bsC*bsAb
2284 15 211e AbsGbsC*bsdTsdTsdAsdTsdC*sdC*sdTsdAsdTsGbsAbsC*b
355 14 143g C*bsTbsC*bsdGsdTsdC*sdAsdTsdAsdGsdAsdC*sC*bsGb
2284 15 211f AbsGbsC*bsdTsdTsdAsdTsdC*sdC*sdTsdAsTbsGbsAbsC*b
383 14 148f AbsGbsC*bsdC*sdC*sdC*sdC*sdGsdAsdC*sdC*sC*bsAbsTb
383 14 148g AbsGbsdC*sdC*sdC*sdC*sdC*sdGsdAsdC*sdC*sC*bsAbsTb
382 16 147g C*bsAbsGbsdC*sdC*sdC*sdC*sdC*sdGsdAsdC*sdC*sdC*sAbsTbsGb
2072 16 210m GbsC*bsTbsdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsTbsGbsTbsTb
2072 16 210n GbsC*bsTbsAbsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsTbsGbsTbsTb
434 13 162e TbsGbsdGsdC*sdGsdAsdTsdAsdC*sdGsC*bsGbsTb
2284 15 211g AbsGbsC*bsTbsdTsdAsdTsdC*sdC*sdTsdAsdTsGbsAbsC*b
382 16 147h C*bsAbsGbsdC*sdC*sdC*sdC*sdC*sdGsdAsdC*sdC*sC*bsAbsTbsGb
382 16 147i C*bsAbsGbsC*bsdC*sdC*sdC*sdC*sdGsdAsdC*sdC*sdC*sAbsTbsGb
382 16 147j C*bsAbsGbsdC*sdC*sdC*sdC*sdC*sdGsdAsdC*sdC*sdC*sAbsTbsGb
2355 17 213i C*bsAbsGbsGbsdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsGbsTbsGb
382 16 147k C*bsAbsGbsC*bsdC*sdC*sdC*sdC*sdGsdAsdC*sdC*sC*bsAbsTbsGb

Предпочтительные антисмысловые олигонуклеотиды

Далее раскрываются предпочтительные антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению.

Таким образом, настоящее изобретение предпочтительно относится к антисмысловому олигонуклеотиду в форме гапмера, состоящему из 10-28 нуклеотидов, предпочтительно 11-24 нуклеотидов, более предпочтительно 12-20, и еще более предпочтительно 13-19 или 14-18 нуклеотидов, и 1-5 из этих нуклеотидов на терминальном 5'-конце и 1-5 нуклеотидов на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида представляют нуклеотиды LNA, и между нуклеотидами LNA на терминальном 5'-конце и на терминальном 3'-конце последовательности находится, по меньшей мере, 6, предпочтительно, 7 и более предпочтительно 8 нуклеотидов ДНК, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью 5'-N1-GTCATAGA-N2-3' (SEQ. ID NO: 12) или 5'-N3-ACGCGTCC-N4-3' (SEQ. ID NO: 98) или 5'-N11-TGTTTAGG-N12-3' (SEQ. ID NO: 10) или 5'-N5-TTTGGTAG-N6-3' (SEQ. ID NO: 11) или 5'-N7-AATGGACC-N8-3' (SEQ. ID NO: 100) или 5'-N9-ATTAATAA-N10-3' (SEQ. ID NO: 101), где:

N1 представляет: CATGGCAGACCCCGCTGCTC-, ATGGCAGACCCCGCTGCTC-, TGGCAGACCCCGCTGCTC-, GGCAGACCCCGCTGCTC-, GCAGACCCCGCTGCTC-, CAGACCCCGCTGCTC-, AGACCCCGCTGCTC-, GACCCCGCTGCTC-, ACCCCGCTGCTC-, CCCCGCTGCTC-, CCCGCTGCTC-, CCGCTGCTC-, CGCTGCTC-, GCTGCTC-, CTGCTC-, TGCTC-, GCTC-, CTC-, TC- или C-;

N2 представляет: -C, -CC, -CCG, -CCGA, -CCGAG, -CCGAGC, -CCGAGCC, -CCGAGCCC, -CCGAGCCCC, -CCGAGCCCCC, -CCGAGCCCCCA, -CCGAGCCCCCAG, -CCGAGCCCCCAGC, -CCGAGCCCCCAGCG, -CCGAGCCCCCAGCGC, -CCGAGCCCCCAGCGCA, -CCGAGCCCCCAGCGCAG, -CCGAGCCCCCAGCGCAGC, -CCGAGCCCCCAGCGCAGCG или -CCGAGCCCCCAGCGCAGCGG;

N3 представляет: GGTGGGATCGTGCTGGCGAT-, GTGGGATCGTGCTGGCGAT-, TGGGATCGTGCTGGCGAT-, GGGATCGTGCTGGCGAT-, GGATCGTGCTGGCGAT-, GATCGTGCTGGCGAT-, ATCGTGCTGGCGAT-, TCGTGCTGGCGAT-, CGTGCTGGCGAT-, GTGCTGGCGAT-, TGCTGGCGAT-, GCTGGCGAT-, CTGGCGAT-, TGGCGAT-, GGCGAT-, GCGAT-, CGAT-, GAT-, AT- или T-;

N4 представляет: -ACAGGACGATGTGCAGCGGC, -ACAGGACGATGTGCAGCGG, -ACAGGACGATGTGCAGCG, -ACAGGACGATGTGCAGC, -ACAGGACGATGTGCAG, -ACAGGACGATGTGCA, -ACAGGACGATGTGC, -ACAGGACGATGTG, -ACAGGACGATGT, -ACAGGACGATG, -ACAGGACGAT, -ACAGGACGA, -ACAGGACG, -ACAGGAC, -ACAGGA, -ACAGG, -ACAG, -ACA, -AC или -A;

N5 представляет: GCCCAGCCTGCCCCAGAAGAGCTA-, CCCAGCCTGCCCCAGAAGAGCTA-, CCAGCCTGCCCCAGAAGAGCTA-, CAGCCTGCCCCAGAAGAGCTA-, AGCCTGCCCCAGAAGAGCTA-, GCCTGCCCCAGAAGAGCTA-, CCTGCCCCAGAAGAGCTA-, CTGCCCCAGAAGAGCTA-, TGCCCCAGAAGAGCTA-, GCCCCAGAAGAGCTA-, CCCCAGAAGAGCTA-, CCCAGAAGAGCTA-, CCAGAAGAGCTA-, CAGAAGAGCTA-, AGAAGAGCTA-, GAAGAGCTA-, AAGAGCTA-, AGAGCTA-, GAGCTA-, AGCTA-, GCTA-, CTA-, TA- или A-;

N6 представляет: -TGTTTAGGGAGCCGTCTTCAGGAA, -TGTTTAGGGAGCCGTCTTCAGGA, -TGTTTAGGGAGCCGTCTTCAGG, -TGTTTAGGGAGCCGTCTTCAG, -TGTTTAGGGAGCCGTCTTCA, -TGTTTAGGGAGCCGTCTTC, -TGTTTAGGGAGCCGTCTT, -TGTTTAGGGAGCCGTCT, -TGTTTAGGGAGCCGTC, -TGTTTAGGGAGCCGT, -TGTTTAGGGAGCCG, -TGTTTAGGGAGCC, -TGTTTAGGGAGC, -TGTTTAGGGAG, -TGTTTAGGGA, -TGTTTAGGG, -TGTTTAGG, -TGTTTAG, -TGTTTA, -TGTTT, -TGTT, -TGT, -TG или -T;

N7 представляет: TGAATCTTGAATATCTCATG-, GAATCTTGAATATCTCATG-, AATCTTGAATATCTCATG-, ATCTTGAATATCTCATG-, TCTTGAATATCTCATG-, CTTGAATATCTCATG-, TTGAATATCTCATG-, TGAATATCTCATG-, GAATATCTCATG-, AATATCTCATG-, ATATCTCATG-, TATCTCATG-, ATCTCATG-, TCTCATG-, CTCATG-, TCATG-, CATG-, ATG-, TG- или G-;

N8 представляет: -AGTATTCTAGAAACTCACCA, -AGTATTCTAGAAACTCACC, -AGTATTCTAGAAACTCAC, -AGTATTCTAGAAACTCA, -AGTATTCTAGAAACTC, -AGTATTCTAGAAACT, -AGTATTCTAGAAAC, -AGTATTCTAGAAA, -AGTATTCTAGAA, -AGTATTCTAGA, -AGTATTCTAG, -AGTATTCTA, -AGTATTCT, -AGTATTC, -AGTATT, -AGTAT, -AGTA, -AGT, -AG или -A;

N9 представляет: ATTCATATTTATATACAGGC-, TTCATATTTATATACAGGC-, TCATATTTATATACAGGC-, CATATTTATATACAGGC-, ATATTTATATACAGGC-, TATTTATATACAGGC-, ATTTATATACAGGC-, TTTATATACAGGC-, TTATATACAGGC-, TATATACAGGC-, ATATACAGGC-, TATACAGGC-, ATACAGGC-, TACAGGC-, ACAGGC-, CAGGC-, AGGC-, GGC-, GC- или C-;

N10 представляет: -AGTGCAAATGTTATTGGCTA, -AGTGCAAATGTTATTGGCT, -AGTGCAAATGTTATTGGC, -AGTGCAAATGTTATTGG, -AGTGCAAATGTTATTG, -AGTGCAAATGTTATT, -AGTGCAAATGTTAT, -AGTGCAAATGTTA, -AGTGCAAATGTT, -AGTGCAAATGT, -AGTGCAAATG, -AGTGCAAAT, -AGTGCAAA, -AGTGCAA, -AGTGCA, -AGTGC, -AGTG, -AGT, -AG или -A;

N11 представляет: TGCCCCAGAAGAGCTATTTGGTAG-, GCCCCAGAAGAGCTATTTGGTAG-, CCCCAGAAGAGCTATTTGGTAG-, CCCAGAAGAGCTATTTGGTAG-, CCAGAAGAGCTATTTGGTAG-, CAGAAGAGCTATTTGGTAG-, AGAAGAGCTATTTGGTAG-, GAAGAGCTATTTGGTAG-, AAGAGCTATTTGGTAG-, AGAGCTATTTGGTAG-, GAGCTATTTGGTAG-, AGCTATTTGGTAG-, GCTATTTGGTAG-, CTATTTGGTAG-, TATTTGGTAG-, ATTTGGTAG-, TTTGGTAG-, TTGGTAG-, TGGTAG-, GGTAG-, GTAG-, TAG-, AG- или G-;

N12 представляет: -GAGCCGTCTTCAGGAATCTTCTCC,

-GAGCCGTCTTCAGGAATCTTCTC, -GAGCCGTCTTCAGGAATCTTCT, -GAGCCGTCTTCAGGAATCTTC, -GAGCCGTCTTCAGGAATCTT, -GAGCCGTCTTCAGGAATCT, -GAGCCGTCTTCAGGAATC, -GAGCCGTCTTCAGGAAT, -GAGCCGTCTTCAGGAA, -GAGCCGTCTTCAGGA, -GAGCCGTCTTCAGG, -GAGCCGTCTTCAG, -GAGCCGTCTTCA, -GAGCCGTCTTC, -GAGCCGTCTT, -GAGCCGTCT, -GAGCCGTC, -GAGCCGT, -GAGCCG, -GAGCC, -GAGC, -GAG, -GA или -G;

или где N1-N12 представляют любой из ограниченных списков остатков, раскрытых здесь,

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида.

Кроме того, настоящее изобретение предпочтительно относится к антисмысловому олигонуклеотиду в форме гапмера, состоящему из 10-28 нуклеотидов, предпочтительно 11-24 нуклеотидов, более предпочтительно 12-20, и еще более предпочтительно 13-19 или 14-18 нуклеотидов, и 1-5 из этих нуклеотидов на терминальном 5'-конце и 1-5 нуклеотидов на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида представляют нуклеотиды LNA, и между нуклеотидами LNA на терминальном 5'-конце и на терминальном 3'-конце последовательности находится, по меньшей мере, 6, предпочтительно 7 и более предпочтительно 8 нуклеотидов ДНК, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью 5'-N1-GTCATAGA-N2-3' (SEQ. ID NO: 12), где:

N1 представляет: GGCAGACCCCGCTGCTC-, GCAGACCCCGCTGCTC-, CAGACCCCGCTGCTC-, AGACCCCGCTGCTC-, GACCCCGCTGCTC-, ACCCCGCTGCTC-, CCCCGCTGCTC-, CCCGCTGCTC-, CCGCTGCTC-, CGCTGCTC-, GCTGCTC-, CTGCTC-, TGCTC-, GCTC-, CTC-, TC- или C-;

N2 представляет: -C, -CC, -CCG, -CCGA, -CCGAG, -CCGAGC, -CCGAGCC, -CCGAGCCC, -CCGAGCCCC, -CCGAGCCCCC, -CCGAGCCCCCA, -CCGAGCCCCCAG, -CCGAGCCCCCAGC, -CCGAGCCCCCAGCG, -CCGAGCCCCCAGCGC, -CCGAGCCCCCAGCGCA или -CCGAGCCCCCAGCGCAG;

и солям и опти ческим изомерам антисмыслового олигонуклеотида.

N1 и/или N2 также могут представлять любой из дополнительных ограниченных списков 3'- и 5'-остатков, раскрытых здесь.

Особенно предпочтительными гапмерными антисмысловыми олигонуклеотидами, подпадающими под общую формулу S1:

5'-N1-GTCATAGA-N2-3' (SEQ. ID NO: 12) S1

являются следующие:

CCGCTGCTCGTCATAGAC (SEQ. ID NO: 19)
CGCTGCTCGTCATAGACC (SEQ. ID NO: 20)
CTGCTCGTCATAGACCGA (SEQ. ID NO: 22)
TGCTCGTCATAGACCGAG (SEQ. ID NO: 23)
GCTCGTCATAGACCGAGC (SEQ. ID NO: 24)
CTCGTCATAGACCGAGCC (SEQ. ID NO: 25)
TCGTCATAGACCGAGCCC (SEQ. ID NO: 26)
CGTCATAGACCGAGCCCC (SEQ. ID NO: 27)
CGCTGCTCGTCATAGAC (SEQ. ID NO: 28)
GCTGCTCGTCATAGACC (SEQ. ID NO: 29)
CTGCTCGTCATAGACCG (SEQ. ID NO: 30)
TGCTCGTCATAGACCGA (SEQ. ID NO: 31)
GCTCGTCATAGACCGAG (SEQ. ID NO: 32)
CTCGTCATAGACCGAGC (SEQ. ID NO: 33)
TCGTCATAGACCGAGCC (SEQ. ID NO: 34)
CGTCATAGACCGAGCCC (SEQ. ID NO: 35)
GCTGCTCGTCATAGAC (SEQ. ID NO: 36)
CTGCTCGTCATAGACC (SEQ. ID NO: 37)
TGCTCGTCATAGACCG (SEQ. ID NO: 38)
GCTCGTCATAGACCGA (SEQ. ID NO: 39)
CTCGTCATAGACCGAG (SEQ. ID NO: 40)
TCGTCATAGACCGAGC (SEQ. ID NO: 41)
CGTCATAGACCGAGCC (SEQ. ID NO: 42)
CTGCTCGTCATAGAC (SEQ. ID NO: 43)
TGCTCGTCATAGACC (SEQ. ID NO: 44)
GCTCGTCATAGACCG (SEQ. ID NO: 45)
CTCGTCATAGACCGA (SEQ. ID NO: 46)
TCGTCATAGACCGAG (SEQ. ID NO: 47)
CGTCATAGACCGAGC (SEQ. ID NO: 48)
TGCTCGTCATAGAC (SEQ. ID NO: 49)
GCTCGTCATAGACC (SEQ. ID NO: 50)
CTCGTCATAGACCG (SEQ. ID NO: 51)
TCGTCATAGACCGA (SEQ. ID NO: 52)
CGTCATAGACCGAG (SEQ. ID NO: 53)

Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S1 в форме гапмеров (LNA-сегмент 1-сегмент ДНК -LNA-сегмент 2) содержат сегмент LNA на терминальном 5'-конце, состоящий из 2-5, предпочтительно 2-4 звеньев LNA, и содержат сегмент LNA на терминальном 3'-конце, состоящий из 2-5, предпочтительно 2-4 звеньев LNA, и между двумя сегментами LNA один сегмент ДНК, состоящий из 6-14, предпочтительно 7-12 и более предпочтительно 8-11 звеньев ДНК.

Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S1 содержат нуклеотиды LNA (звенья LNA), описанные здесь, в частности, раскрытые в разделе «Замкнутые нуклеиновые кислоты» (LNA®) и предпочтительно раскрытые в разделе «Предпочтительные LNA». Звенья LNA и звенья ДНК могут содержать стандартные азотистые основания, такие как аденин (А), цитозин (С), гуанин (G), тимин (Т) и урацил (U), но могут также содержать модифицированные азотистые основания, описанные в разделе «Азотистые основания». Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S1 или сегменты LNA и сегмент ДНК антисмыслового олигонуклеотида могут содержать любую межнуклеотидную связь, описанную здесь, и в частности, таковые, раскрытые в разделе «Межнуклеотидные связи (IL)». Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S1 необязательно могут также содержать концевые группы в терминальном 3'-конце и/или терминальном 5'-конце и в частности, таковые, раскрытые в разделе «Концевые группы».

Результаты экспериментов показали, что модифицированные азотистые основания незначительно увеличивают или изменяют активность антисмысловых олигонуклеотидов по изобретению в отношении тестированных неврологических и онкологических заболеваний. Было показано, что модифицированные азотистые основания 5-метилцитозин или 2-аминоаденин дополнительно повышают активность антисмысловых олигонуклеотидов формулы S1, особенно если 5-метилцитозин используется только в нуклеотидах LNA или в нуклеотидах LNA и в нуклеотидах ДНК, и/или, если 2-аминоаденин используется в нуклеотидах ДНК и не в нуклеотидах LNA.

Предпочтительная гапмерная структура антисмысловых олигонуклеотидов формулы S1 является следующей: 3-8-3, 4-8-2, 2-8-4, 3-8-4, 4-8-3, 4-8-4, 3-9-3, 4-9-2, 2-9-4, 4-9-3, 3-9-4, 4-9-4, 3-10-3, 2-10-4, 4-10-2, 3-10-4, 4-10-3, 4-10-4, 2-11-4, 4-11-2, 3-11-4, 4-11-3 и еще более предпочтительной: 3-8-3, 3-8-4, 4-8-3, 4-8-4, 3-9-3, 4-9-3, 3-9-4, 4-9-4, 3-10-3, 3-10-4, 4-10-3, 4-10-4, 3-11-4 и 4-11-3.

В качестве звеньев LNA для антисмысловых олигонуклеотидов формулы S1, в частности, β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-ENA (b5), β-D-(NH)-LNA (b6), β-D-(NCH3)-LNA (b7), β-D-(ONH)-LNA (b8) и β-D-(ONCH3)-LNA (b9) являются предпочтительными. Результаты экспериментов показали, что все эти звенья LNA b1, b2, b4, b5, b6, b7, b8 и b9 можно синтезировать с требуемым усилием и обеспечить антисмысловые олигонуклеотиды с сопоставимой стабильностью и активностью. Однако, основываясь на результатах экспериментов, звенья LNA b1, b2, b4, b5, b6 и b7 являются более предпочтительными. Еще более предпочтительными являются звенья LNA b1, b2, b4, b6 и b7, и еще более предпочтительными являются звенья LNA b1 и b4, и наиболее предпочтительным также с учетом сложности химического синтеза является β-D-окси-LNA (b1).

К настоящему времени не было найдено никакой конкретной 3'-концевой группы или 5'-концевой группы, которая заметно изменяла или повышала стабильность или активность в отношении онкологических или неврологических заболеваний, таким образом, 3'- и 5'-концевые группы возможны, но явно не являются предпочтительными.

Возможны различные межнуклеотидные мостики или межнуклеотидные связи. В приведенных здесь формулах межнуклеотидная связь IL представлена -IL'-Y-. Таким образом, IL=-IL'-Y-=-X''-P(=X')(X-)-Y-, где IL предпочтительно выбрана из группы, состоящей из: -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(CH3)-O-, -O-P(O)(OCH3)-O-, -O-P(O)(NH(CH3))-O-, -O-P(O)[N(CH3)2]-O-, -O-P(O)(BH3-)-O-, -O-P(O)(OCH2CH2OCH3)-O-, -O-P(O)(OCH2CH2SCH3)-O-, -O-P(O)(O-)-N(CH3)-, -N(CH3)-P(O)(O-)-O-. Предпочтительными являются межнуклеотидные связи IL, выбранные из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(OCH3)-O-, -O-P(O)(NH(CH3))-O-, -O-P(O)[N(CH3)2]-O-, -O-P(O)(OCH2CH2OCH3)-O-, и более предпочтительные, выбранные из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-, и еще более предпочтительные, выбранные из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, и наиболее предпочтительные, выбранные из -O-P(O)(O-)-O- и -O-P(O)(S-)-O-.

Таким образом, настоящее изобретение предпочтительно относится к антисмысловому олигонуклеотиду в форме гапмера, состоящему из 10-28 нуклеотидов, предпочтительно 11-24 нуклеотидов, более предпочтительно 12-20 и еще более предпочтительно 13-19 или 14-18 нуклеотидов, и 1-5 из этих нуклеотидов на 5'-конце и 1-5 нуклеотидов на 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида представляют нуклеотиды LNA, и между нуклеотидами LNA на терминальном 5'-конце и терминальном 3'-конце находится последовательность, по меньшей мере, из 6, предпочтительно 7 и более предпочтительно 8 нуклеотидов ДНК, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью

5'-N1-GTCATAGA-N2-3' (SEQ ID NO: 12)

где:

N1 представляет: GGCAGACCCCGCTGCTC-, GCAGACCCCGCTGCTC-, CAGACCCCGCTGCTC-, AGACCCCGCTGCTC-, GACCCCGCTGCTC-, ACCCCGCTGCTC-,CCCCGCTGCTC-, CCCGCTGCTC-, CCGCTGCTC-, CGCTGCTC-, GCTGCTC-, CTGCTC-, TGCTC-, GCTC-, CTC-, TC- или C-;

N2 представляет: -C, -CC, -CCG, -CCGA, -CCGAG, -CCGAGC, -CCGAGCC, -CCGAGCCC, -CCGAGCCCC, -CCGAGCCCCC, -CCGAGCCCCCA, -CCGAGCCCCCAG, -CCGAGCCCCCAGC, -CCGAGCCCCCAGCG, -CCGAGCCCCCAGCGC, -CCGAGCCCCCAGCGCA или -CCGAGCCCCCAGCGCAG; и

нуклеотиды LNA выбраны из β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-ENA (b5), β-D-(NH)-LNA (b6), β-D-(NCH3)-LNA (b7), β-D-(ONH)-LNA (b8) и β-D-(ONCH3)-LNA (b9); и предпочтительно из β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-(NH)-LNA (b6) и β-D-(NCH3)-LNA (b7); и

межнуклеотидные связи выбраны из: -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(CH3)-O-, -O-P(O)(OCH3)-O-, -O-P(O)(NH(CH3))-O-, -O-P(O)[N(CH3)2]-O-, -O-P(O)(BH3-)-O-, -O-P(O)(OCH2CH2OCH3)-O-, -O-P(O)(OCH2CH2SCH3)-O-, -O-P(O)(O-)-N(CH3)-, -N(CH3)-P(O)(O-)-O-;

и предпочтительно из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида. Такие предпочтительные антисмысловые олигонуклеотиды могут не содержать какого-либо модифицированного терминального 3'- и 5'-конца или могут не содержать какой-либо 3'- и 5'-концевой группы, и могут в качестве модифицированного азотистого основания содержать 5-метилцитозин и/или 2-аминоаденин.

Более предпочтительно N1 представляет: CAGACCCCGCTGCTC-, AGACCCCGCTGCTC-, GACCCCGCTGCTC-, ACCCCGCTGCTC-, CCCCGCTGCTC-, CCCGCTGCTC-, CCGCTGCTC-, CGCTGCTC-, GCTGCTC-, CTGCTC-, TGCTC-, GCTC-, CTC-, TC- или C-; и

N2 представляет: -C, -CC, -CCG, -CCGA, -CCGAG, -CCGAGC, -CCGAGCC, -CCGAGCCC, -CCGAGCCCC, -CCGAGCCCCC, -CCGAGCCCCCA, -CCGAGCCCCCAG, -CCGAGCCCCCAGC, -CCGAGCCCCCAGCG или -CCGAGCCCCCAGCGC.

Еще более предпочтительно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду в форме гапмера, состоящему из 11-24 нуклеотидов, более предпочтительно 12-20 нуклеотидов и более предпочтительно 13-19 или 14-18 нуклеотидов, и 2-5 из этих нуклеотидов на терминальном 5'-конце и 2-5 нуклеотидов на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида представляют нуклеотиды LNA, и между нуклеотидами LNA на терминальном 5'-конце и терминальном 3'-конце находится последовательность, по меньшей мере, из 7, предпочтительно 8 нуклеотидов ДНК, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью:

5'-N1-GTCATAGA-N2-3' (SEQ ID NO: 12)

где:

N1 представляет: ACCCCGCTGCTC-, CCCCGCTGCTC-, CCCGCTGCTC-, CCGCTGCTC-, CGCTGCTC-, GCTGCTC-, CTGCTC-, TGCTC-, GCTC-, CTC-, TC- или C-; предпочтительно N1 представляет: CCCGCTGCTC-, CCGCTGCTC-, CGCTGCTC-, GCTGCTC-, CTGCTC-, TGCTC-, GCTC-, CTC-, TC- или C-; и

N2 представляет: -C, -CC, -CCG, -CCGA, -CCGAG, -CCGAGC, -CCGAGCC, -CCGAGCCC, -CCGAGCCCC или -CCGAGCCCCC, -CCGAGCCCCCA или -CCGAGCCCCCAG; предпочтительно N2 представляет: -C, -CC, -CCG, -CCGA, -CCGAG, -CCGAGC, -CCGAGCC, -CCGAGCCC, -CCGAGCCCC или -CCGAGCCCCC;

и нуклеотиды LNA выбраны из β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-(NH)-LNA (b6) и β-D-(NCH3)-LNA (b7); и межнуклеотидные связи выбраны из: -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-; и предпочтительно выбраны из фосфата, фосфоротиоата и фосфородитиоата;

и солям и опти ческим изомерам антисмыслового олигонуклеотида. Такие предпочтительные антисмысловые олигонуклеотиды могут не содержать какого-либо модифицированного терминального 3'- и 5'-конца или могут не содержать какой-либо 3'- и 5'-концевой группы, и могут в качестве модифицированного азотистого основания содержать 5-метилцитозин и/или 2-аминоаденин.

Особенно предпочтительными являются гапмерные антисмысловые олигонуклеотиды последовательностей SEQ ID NO: 19-SEQ ID NO: 53, содержащие сегмент из 2-5, предпочтительно 2-4 и более предпочтительно 3-4 звеньев LNA на 3'-конце, и сегмент из 2-5, предпочтительно 2-4 и более предпочтительно 3-4 звеньев LNA на 5'-конце, и сегмент, по меньшей мере, из 6, предпочтительно 7 и более предпочтительно 8 звеньев ДНК между двумя сегментами звеньев LNA, где звенья LNA выбраны из: β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-(NH)-LNA (b6) и β-D-(NCH3)-LNA (b7); и межнуклеотидные связи выбраны из фосфата, фосфоротиоата и фосфородитиоата. Такие предпочтительные антисмысловые олигонуклеотиды могут не содержать какого-либо модифицированного терминального 3'- и 5'-конца или могут не содержать какой-либо 3'- и 5'-концевой группы, и могут в качестве модифицированного азотистого основания содержать 5-метилцитозин в звеньях LNA, предпочтительно всех звеньях LNA и/или 2-аминоаденин в некоторых или всех звеньях ДНК, и/или 5-метилцитозин в некоторых или всех звеньях ДНК.

Также особенно предпочтительными являются гапмерные антисмысловые олигонуклеотиды из таблицы 4 (SEQ ID NO: 232a-244b).

Кроме того, настоящее изобретение предпочтительно относится к антисмысловому олигонуклеотиду в форме гапмера, состоящему из 10-28 нуклеотидов, предпочтительно 11-24 нуклеотидов, более предпочтительно 12-20 нуклеотидов и еще более предпочтительно 13-19 или 14-18 нуклеотидов, и 1-5 из этих нуклеотидов на терминальном 5'-конце и 1-5 нуклеотидов на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида представляют нуклеотиды LNA, и между нуклеотидами LNA на терминальном 5'-конце и терминальном 3'-конце находится последовательность, по меньшей мере, из 6, предпочтительно 7 и более предпочтительно 8 нуклеотидов ДНК, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью

5'-N3-ACGCGTCC-N4-3' (SEQ ID NO: 98)

где:

N3 представляет: GGGATCGTGCTGGCGAT-, GGATCGTGCTGGCGAT-, GATCGTGCTGGCGAT-, ATCGTGCTGGCGAT-, TCGTGCTGGCGAT-, CGTGCTGGCGAT-, GTGCTGGCGAT-, TGCTGGCGAT-, GCTGGCGAT-, CTGGCGAT-, TGGCGAT-, GGCGAT-, GCGAT-, CGAT-, GAT-, AT- или T-;

N4 представляет: -ACAGGACGATGTGCAGC, -ACAGGACGATGTGCAG, -ACAGGACGATGTGCA, -ACAGGACGATGTGC, -ACAGGACGATGTG, -ACAGGACGATGT, -ACAGGACGATG, -ACAGGACGAT, -ACAGGACGA, -ACAGGACG, -ACAGGAC, -ACAGGA, -ACAGG, -ACAG, -ACA, -AC или -A;

и солям и оптически изомерам антисмыслового олигонуклеотида.

N3 и/или N4 могут также представлять любой из дополнительных ограниченных списков 3'- и 5'-остатков, раскрытых здесь.

Особенно предпочтительными гапмерными антисмысловыми олигонуклеотидами, подпадающими под общую формулу S2:

5'-N3-ACGCGTCC-N4-3' (SEQ ID NO: 98) S2

являются следующие:

GCTGGCGATACGCGTCCA (SEQ ID NO: 54)
CTGGCGATACGCGTCCAC (SEQ ID NO: 55)
TGGCGATACGCGTCCACA (SEQ ID NO: 56)
GGCGATACGCGTCCACAG (SEQ ID NO: 57)
GCGATACGCGTCCACAGG (SEQ ID NO: 58)
CGATACGCGTCCACAGGA (SEQ ID NO: 59)
GATACGCGTCCACAGGAC (SEQ ID NO: 60)
ATACGCGTCCACAGGACG (SEQ ID NO: 61)
TACGCGTCCACAGGACGA (SEQ ID NO: 62)
CTGGCGATACGCGTCCA (SEQ ID NO: 63)
TGGCGATACGCGTCCAC (SEQ ID NO: 64)
GGCGATACGCGTCCACA (SEQ ID NO: 65)
GCGATACGCGTCCACAG (SEQ ID NO: 66)
CGATACGCGTCCACAGG (SEQ ID NO: 67)
GATACGCGTCCACAGGA (SEQ ID NO: 68)
ATACGCGTCCACAGGAC (SEQ ID NO: 349)
TACGCGTCCACAGGACG (SEQ ID NO: 350)
TGGCGATACGCGTCCA (SEQ ID NO: 351)
GGCGATACGCGTCCAC (SEQ ID NO: 352)
GCGATACGCGTCCACA (SEQ ID NO: 353)
CGATACGCGTCCACAG (SEQ ID NO: 354)
GATACGCGTCCACAGG (SEQ ID NO: 355)
ATACGCGTCCACAGGA (SEQ ID NO: 356)
TACGCGTCCACAGGAC (SEQ ID NO: 357)
GGCGATACGCGTCCA (SEQ ID NO: 358)
GCGATACGCGTCCAC (SEQ ID NO: 359)
CGATACGCGTCCACA (SEQ ID NO: 360)
GATACGCGTCCACAG (SEQ ID NO: 361)
ATACGCGTCCACAGG (SEQ ID NO: 362)
TACGCGTCCACAGGA (SEQ ID NO: 363)
GCGATACGCGTCCA (SEQ ID NO: 364)
CGATACGCGTCCAC (SEQ ID NO: 365)
GATACGCGTCCACA (SEQ ID NO: 366)
ATACGCGTCCACAG (SEQ ID NO: 367)
TACGCGTCCACAGG (SEQ ID NO: 368)

Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S2 в форме гапмеров (LNA-сегмент 1-сегмент ДНК-LNA-сегмент 2) содержат сегмент LNA на терминальном 5'-конце, состоящий из 2-5, предпочтительно 2-4 звеньев LNA, и содержат сегмент LNA на терминальном 3'-конце, состоящий из 2-5, предпочтительно 2-4 звеньев LNA, и между двумя сегментами LNA один сегмент ДНК, состоящий из 6-14, предпочтительно 7-12 и более предпочтительно 8-11 звеньев ДНК.

Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S2 содержат нуклеотиды LNA (звенья LNA), описанные здесь, в частности, таковые, раскрытые в разделе «Замкнутые нуклеиновые кислоты» (LNA®) и, предпочтительно таковые, раскрытые в разделе «Предпочтительные LNA». Звенья LNA и звенья ДНК могут содержать обычные азотистые основания, такие как аденин (А), цитозин (С), гуанин (G), тимин (Т) и урацил (U), но могут также содержать модифицированные азотистые основания, как описано в разделе «Азотистые основания». Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S2 или сегменты LNA и сегмент ДНК антисмыслового олигонуклеотида могут содержать любую межнуклеотидную связь, описанную здесь, и в частности, таковые, раскрытые в разделе «Межнуклеотидные связи (IL)». Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S2 необязательно могут также содержать концевые группы в терминальном 3'-конце и/или терминальном 5'-конце и в частности, таковые, раскрытые в разделе «Концевые группы».

Результаты экспериментов показали, что модифицированные азотистые основания незначительно увеличивают или изменяют активность антисмысловых олигонуклеотидов по изобретению в отношении тестированных неврологических и онкологических заболеваний. Было показано, что модифицированные азотистые основания 5-метилцитозин или 2-аминоаденин дополнительно повышают активность антисмысловых олигонуклеотидов формулы S1, особенно если 5-метилцитозин используется только в нуклеотидах LNA или в нуклеотидах LNA и в нуклеотидах ДНК и/или, если 2-аминоаденин используется в нуклеотидах ДНК и не в нуклеотидах LNA.

Предпочтительная гапмерная структура антисмысловых олигонуклеотидов формулы S2 является следующей: 3-8-3, 4-8-2, 2-8-4, 3-8-4, 4-8-3, 4-8-4, 3-9-3, 4-9-2, 2-9-4, 4-9-3, 3-9-4, 4-9-4, 3-10-3, 2-10-4, 4-10-2, 3-10-4, 4-10-3, 4-10-4, 2-11-4, 4-11-2, 3-11-4, 4-11-3 и еще более предпочтительной: 3-8-3, 3-8-4, 4-8-3, 4-8-4, 3-9-3, 4-9-3, 3-9-4, 4-9-4, 3-10-3, 3-10-4, 4-10-3, 4-10-4, 3-11-4 и 4-11-3.

В качестве звеньев LNA для антисмысловых олигонуклеотидов формулы S2, в частности, β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-ENA (b5), β-D-(NH)-LNA (b6), β-D-(NCH3)-LNA (b7), β-D-(ONH)-LNA (b8) и β-D-(ONCH3)-LNA (b9) являются предпочтительными. Результаты экспериментов показали, что все эти звенья LNA b1, b2, b4, b5, b6, b7, b8 и b9 можно синтезировать с требуемым усилием и обеспечить антисмысловые олигонуклеотиды с сопоставимой стабильностью и активностью. Однако, основываясь на экспериментах, звенья LNA b1, b2, b4, b5, b6 и b7 являются более предпочтительными. Еще более предпочтительными являются звенья LNA b1, b2, b4, b6 и b7, и еще более предпочтительными являются звенья LNA b1 и b4, и наиболее предпочтительным также в отношении сложности химического синтеза является β-D-окси-LNA (b1).

К настоящему времени не было найдено никакой конкретной 3'-концевой группы или 5'-концевой группы, которая заметно изменяла или повышала стабильность или активность в отношении онкологических или неврологических заболеваний, но явно не являются предпочтительными.

Возможны различные межнуклеотидные мостики или межнуклеотидные связи. В приведенных здесь формулах межнуклеотидная связь IL представлена -IL'-Y-. Таким образом, IL=-IL'-Y-=-X''-P(=X')(X-)-Y-, где IL предпочтительно выбрана из группы, состоящей из: -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(CH3)-O-, -O-P(O)(OCH3)-O-, -O-P(O)(NH(CH3))-O-, -O-P(O)[N(CH3)2]-O-, -O-P(O)(BH3-)-O-, -O-P(O)(OCH2CH2OCH3)-O-, -O-P(O)(OCH2CH2SCH3)-O-, -O-P(O)(O-)-N(CH3)-, -N(CH3)-P(O)(O-)-O-. Предпочтительными являются межнуклеотидные связи IL, выбранные из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(OCH3)-O-, -O-P(O)(NH(CH3))-O-, -O-P(O)[N(CH3)2]-O-, -O-P(O)(OCH2CH2OCH3)-O-, и более предпочтительные, выбранные из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-, и еще более предпочтительные, выбранные из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, и наиболее предпочтительные, выбранные из -O-P(O)(O-)-O- и -O-P(O)(S-)-O-.

Таким образом, настоящее изобретение предпочтительно относится к антисмысловому олигонуклеотиду в форме гапмера, состоящему из 10-28 нуклеотидов, предпочтительно 11-24 нуклеотидов, более предпочтительно 12-20 и еще более предпочтительно 13-19 или 14-18 нуклеотидов, и 1-5 из этих нуклеотидов на терминальном 5'-конце и 1-5 нуклеотидов на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида представляют нуклеотиды LNA, и между нуклеотидами LNA на терминальном 5'-конце и терминальном 3'-конце находится последовательность, по меньшей мере, из 6, предпочтительно 7 и более предпочтительно 8 нуклеотидов ДНК, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью:

5'-N3-ACGCGTCC-N4-3 (SEQ ID NO: 98)

где:

N3 представляет: GGGATCGTGCTGGCGAT-, GGATCGTGCTGGCGAT-, GATCGTGCTGGCGAT-, ATCGTGCTGGCGAT-, TCGTGCTGGCGAT-, CGTGCTGGCGAT-, GTGCTGGCGAT-, TGCTGGCGAT-, GCTGGCGAT-, CTGGCGAT-, TGGCGAT-, GGCGAT-, GCGAT-, CGAT-, GAT-, AT- или T-; и

N4 представляет: -ACAGGACGATGTGCAGC, -ACAGGACGATGTGCAG, -ACAGGACGATGTGCA, -ACAGGACGATGTGC, -ACAGGACGATGTG, -ACAGGACGATGT, -ACAGGACGATG, -ACAGGACGAT, -ACAGGACGA, -ACAGGACG, -ACAGGAC, -ACAGGA, -ACAGG, -ACAG, -ACA, -AC или -A, и

и нуклеотиды LNA выбраны из β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-ENA (b5), β-D-(NH)-LNA (b6), β-D-(NCH3)-LNA (b7), β-D-(ONH)-LNA (b8) и β-D-(ONCH3)-LNA (b9); и предпочтительно из β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-(NH)-LNA (b6) и β-D-(NCH3)-LNA (b7); и

межнуклеотидные связи выбраны из: -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(CH3)-O-, -O-P(O)(OCH3)-O-, -O-P(O)(NH(CH3))-O-, -O-P(O)[N(CH3)2]-O-, -O-P(O)(BH3-)-O-, -O-P(O)(OCH2CH2OCH3)-O-, -O-P(O)(OCH2CH2SCH3)-O-, -O-P(O)(O-)-N(CH3)-, -N(CH3)-P(O)(O-)-O-;

и предпочтительно из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида. Такие предпочтительные антисмысловые олигонуклеотиды могут не содержать какого-либо модифицированного терминального 3'- и 5'-конца или могут не содержать какой-либо 3'- и 5'-концевой группы, и могут в качестве модифицированного азотистого основания содержать 5-метилцитозин и/или 2-аминоаденин.

Более предпочтительно N3 представляет: GATCGTGCTGGCGAT-, ATCGTGCTGGCGAT-, TCGTGCTGGCGAT-, CGTGCTGGCGAT-, GTGCTGGCGAT-, TGCTGGCGAT-, GCTGGCGAT-, CTGGCGAT-, TGGCGAT-, GGCGAT-, GCGAT-, CGAT-, GAT-, AT- или T-; и

N4 представляет: -ACAGGACGATGTGCA, -ACAGGACGATGTGC, -ACAGGACGATGTG, -ACAGGACGATGT, -ACAGGACGATG, -ACAGGACGAT, -ACAGGACGA, -ACAGGACG, -ACAGGAC, -ACAGGA, -ACAGG, -ACAG, -ACA, -AC или -A.

Еще более предпочтительно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду в форме гапмера, состоящему из 11-24 нуклеотидов, более предпочтительно 12-20 нуклеотидов и более предпочтительно 13-19 или 14-18 нуклеотидов, и 2-5 из этих нуклеотидов на терминальном 5'-конце и 2-5 нуклеотидов на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида представляют нуклеотиды LNA, и между нуклеотидами LNA на терминальном 5'-конце и терминальном 3'-конце находится последовательность, по меньшей мере, из 7, предпочтительно, по меньшей мере, 8 нуклеотидов ДНК, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью 5'-N3-ACGCGTCC-N4-3' (SEQ ID NO: 98), где

N3 представляет: CGTGCTGGCGAT-, GTGCTGGCGAT-, TGCTGGCGAT-, GCTGGCGAT-, CTGGCGAT-, TGGCGAT-, GGCGAT-, GCGAT-, CGAT-, GAT-, AT- или T-; предпочтительно N3 представляет: TGCTGGCGAT-, GCTGGCGAT-, CTGGCGAT-, TGGCGAT-, GGCGAT-, GCGAT-, CGAT-, GAT-, AT- или T-; и

N4 представляет: -ACAGGACGATGT, -ACAGGACGATG, -ACAGGACGAT, -ACAGGACGA, -ACAGGACG, -ACAGGAC, -ACAGGA, -ACAGG, -ACAG, -ACA, -AC или -A; предпочтительно N4 представляет: -ACAGGACGAT, -ACAGGACGA, -ACAGGACG, -ACAGGAC, -ACAGGA, -ACAGG, -ACAG, -ACA, -AC или -A;

и нуклеотиды LNA выбраны из β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-(NH)-LNA (b6) и β-D-(NCH3)-LNA (b7); и межнуклеотидные связи выбраны из: -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-; и предпочтительно выбраны из фосфата, фосфоротиоата и фосфородитиоата;

и солям и опти ческим изомерам антисмыслового олигонуклеотида. Такие предпочтительные антисмысловые олигонуклеотиды могут не содержать какого-либо модифицированного терминального 3'- и 5'-конца или могут не содержать какой-либо 3'- и 5'-концевой группы, и могут в качестве модифицированного азотистого основания содержать 5-метилцитозин и/или 2-аминоаденин.

Особенно предпочтительными являются гапмерные антисмысловые олигонуклеотиды последовательностей SEQ ID NO: 54-SEQ ID NO: 68 и SEQ ID NO: 349-SEQ ID NO: 368, содержащие сегмент из 2-5, предпочтительно 2-4 и более предпочтительно 3-4 звеньев LNA на 3'-конце, и сегмент из 2-5, предпочтительно 2-4 и более предпочтительно 3-4 звеньев LNA на 5'-конце, и сегмент, по меньшей мере, из 6, предпочтительно 7 и более предпочтительно 8 звеньев ДНК между двумя сегментами из звеньев LNA, где звенья LNA выбраны из: β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-(NH)-LNA (b6) и β-D-(NCH3)-LNA (b7); и межнуклеотидные связи выбраны из фосфата, фосфоротиоата и фосфородитиоата. Такие предпочтительные антисмысловые олигонуклеотиды могут не содержать какого-либо модифицированного терминального 3'- и 5'-конца или могут не содержать какой-либо 3'- и 5'-концевой группы, и могут в качестве модифицированного азотистого основания содержать 5-метилцитозин в звеньях LNA, предпочтительно всех звеньях LNA и/или 2-аминоаденин в некоторых или всех звеньях ДНК, и/или 5-метилцитозин в некоторых или всех звеньях ДНК.

Также особенно предпочтительными являются гапмерные антисмысловые олигонуклеотиды из таблицы 5 (SEQ ID NO: 245a-257b).

Кроме того, настоящее изобретение предпочтительно относится к антисмысловому олигонуклеотиду в форме гапмера, состоящему из 10-28 нуклеотидов, предпочтительно 11-24 нуклеотидов, более предпочтительно 12-20 и еще более предпочтительно 13-19 или 14-18 нуклеотидов, и 1-5 из этих нуклеотидов на терминальном 5'-конце и 1-5 нуклеотидов на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида представляют нуклеотиды LNA, и между нуклеотидами LNA на терминальном 5'-конце и терминальном 3'-конце находится последовательность, по меньшей мере, из 6, предпочтительно 7 и более предпочтительно 8 нуклеотидов ДНК, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью 5'-N11-TGTTTAGG-N12-3' (SEQ ID NO: 10), где:

N11 представляет: GAAGAGCTATTTGGTAG-, AAGAGCTATTTGGTAG-, AGAGCTATTTGGTAG-, GAGCTATTTGGTAG-, AGCTATTTGGTAG-, GCTATTTGGTAG-, CTATTTGGTAG-, TATTTGGTAG-, ATTTGGTAG-, TTTGGTAG-, TTGGTAG-, TGGTAG-, GGTAG-, GTAG-, TAG-, AG- или G-;

N12 представляет: -GAGCCGTCTTCAGGAAT, -GAGCCGTCTTCAGGAA, -GAGCCGTCTTCAGGA, -GAGCCGTCTTCAGG, -GAGCCGTCTTCAG, -GAGCCGTCTTCA, -GAGCCGTCTTC, -GAGCCGTCTT, -GAGCCGTCT, -GAGCCGTC, -GAGCCGT, -GAGCCG, -GAGCC, -GAGC, -GAG, -GA или -G;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида.

N11 и/или N12 могут также представлять любой из дополнительных ограниченных списков 3'- и 5'-остатков, как здесь раскрыто.

Особенно предпочтительными гапмерными антисмысловыми олигонуклеотидами, подпадающими под общую формулу S3:

5'-N11-TGTTTAGG-N12-3' (SEQ ID NO: 10) S3

являются следующие:

ATTTGGTAGTGTTTAGGG (SEQ ID NO: 369)
TTTGGTAGTGTTTAGGGA (SEQ ID NO: 370)
TTGGTAGTGTTTAGGGAG (SEQ ID NO: 371)
TGGTAGTGTTTAGGGAGC (SEQ ID NO: 372)
GGTAGTGTTTAGGGAGCC (SEQ ID NO: 373)
GTAGTGTTTAGGGAGCCG (SEQ ID NO: 374)
TAGTGTTTAGGGAGCCGT (Seq. ID No. 375)
AGTGTTTAGGGAGCCGTC (SEQ ID NO: 376)
GTGTTTAGGGAGCCGTCT (SEQ ID NO: 377)
TTTGGTAGTGTTTAGGG (SEQ ID NO: 378)
TTGGTAGTGTTTAGGGA (SEQ ID NO: 379)
TGGTAGTGTTTAGGGAG (SEQ ID NO: 380)
GGTAGTGTTTAGGGAGC (SEQ ID NO: 381)
GTAGTGTTTAGGGAGCC (SEQ ID NO: 382)
TAGTGTTTAGGGAGCCG (SEQ ID NO: 383)
AGTGTTTAGGGAGCCGT (SEQ ID NO: 384)
GTGTTTAGGGAGCCGTC (SEQ ID NO: 385)
TTGGTAGTGTTTAGGG (SEQ ID NO: 386)
TGGTAGTGTTTAGGGA (SEQ ID NO: 387)
GGTAGTGTTTAGGGAG (SEQ ID NO: 388)
GTAGTGTTTAGGGAGC (SEQ ID NO: 389)
TAGTGTTTAGGGAGCC (SEQ ID NO: 390)
AGTGTTTAGGGAGCCG (SEQ ID NO: 391)
GTGTTTAGGGAGCCGT (SEQ ID NO: 392)
TGGTAGTGTTTAGGG (SEQ ID NO: 393
GGTAGTGTTTAGGGA (SEQ ID NO: 394)
GTAGTGTTTAGGGAG (SEQ ID NO: 395)
TAGTGTTTAGGGAGC (SEQ ID NO: 396)
AGTGTTTAGGGAGCC (SEQ ID NO: 397)
GTGTTTAGGGAGCCG (SEQ ID NO: 398)
GGTAGTGTTTAGGG (SEQ ID NO: 399)
GTAGTGTTTAGGGA (SEQ ID NO: 400)
TAGTGTTTAGGGAG (SEQ ID NO: 401)
AGTGTTTAGGGAGC (SEQ ID NO: 402)
GTGTTTAGGGAGCC (SEQ ID NO: 403)

Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S3 в форме гапмеров (LNA-сегмент 1-сегмент ДНК-LNA-сегмент 2) содержат сегмент LNA на терминальном 5'-конце, состоящий из 2-5, предпочтительно 2-4 звеньев LNA, и содержат сегмент LNA на терминальном 3'-конце, состоящий из 2-5, предпочтительно 2-4 звеньев LNA, и между двумя сегментами LNA один сегмент ДНК, состоящий из 6-14, предпочтительно 7-12 и более предпочтительно 8-11 звеньев ДНК.

Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S3 содержат нуклеотиды LNA (звенья LNA), описанные здесь, в частности, таковые, раскрытые в разделе «Замкнутые нуклеиновые кислоты» (LNA®) и, предпочтительно таковые, раскрытые в разделе «Предпочтительные LNA». Звенья LNA и звенья ДНК могут содержать обычные азотистые основания, такие как аденин (А), цитозин (С), гуанин (G), тимин (Т) и урацил (U), но могут также содержать модифицированные азотистые основания, как описано в разделе «Азотистые основания». Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S3 или сегменты LNA и сегмент ДНК антисмыслового олигонуклеотида могут содержать любую межнуклеотидную связь, описанную здесь, и в частности, таковые, раскрытые в разделе «Межнуклеотидные связи (IL)». Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S3 необязательно могут также содержать концевые группы на терминальном 3'-конце и/или терминальном 5'-конце и в частности, таковые, раскрытые в разделе «Концевые группы».

Результаты экспериментов показали, что модифицированные азотистые основания незначительно увеличивают или изменяют активность антисмысловых олигонуклеотидов по изобретению в отношении тестированных неврологических и онкологических заболеваний. Было показано, что модифицированные азотистые основания 5-метилцитозин или 2-аминоаденин дополнительно повышают активность антисмысловых олигонуклеотидов формулы S3, особенно если 5-метилцитозин используется только в нуклеотидах LNA или в нуклеотидах LNA и в нуклеотидах ДНК и/или, если 2-аминоаденин используется в нуклеотидах ДНК и не в нуклеотидах LNA.

Предпочтительная гапмерная структура антисмысловых олигонуклеотидов формулы S2 является следующей: 3-8-3, 4-8-2, 2-8-4, 3-8-4, 4-8-3, 4-8-4, 3-9-3, 4-9-2, 2-9-4, 4-9-3, 3-9-4, 4-9-4, 3-10-3, 2-10-4, 4-10-2, 3-10-4, 4-10-3, 4-10-4, 2-11-4, 4-11-2, 3-11-4, 4-11-3, и еще более предпочтительная: 3-8-3, 3-8-4, 4-8-3, 4-8-4, 3-9-3, 4-9-3, 3-9-4, 4-9-4, 3-10-3, 3-10-4, 4-10-3, 4-10-4, 3-11-4 и 4-11-3.

В качестве звеньев LNA для антисмысловых олигонуклеотидов формулы S3, в частности, β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-ENA (b5), β-D-(NH)-LNA (b6), β-D-(NCH3)-LNA (b7), β-D-(ONH)-LNA (b8) и β-D-(ONCH3)-LNA (b9) являются предпочтительными. Результаты экспериментов показали, что все эти звенья LNA b1, b2, b4, b5, b6, b7, b8 и b9 можно синтезировать с требуемым усилием и обеспечить антисмысловые олигонуклеотиды с сопоставимой стабильностью и активностью. Однако, основываясь на экспериментах, звенья LNA b1, b2, b4, b5, b6 и b7 являются более предпочтительными. Еще более предпочтительными являются звенья LNA b1, b2, b4, b6 и b7, и еще более предпочтительными являются звенья LNA b1 и b4, и наиболее предпочтительным также с учетом сложности химического синтеза является β-D-окси-LNA (b1).

К настоящему времени не было найдено никакой конкретной 3'-концевой группы или 5'-концевой группы, которая заметно изменяла или повышала стабильность или активность в отношении онкологических или неврологических заболеваний, таким образом, 3'- и 5'-концевые группы возможны, но явно не являются предпочтительными.

Возможны различные межнуклеотидные мостики или межнуклеотидные связи. В формулах, раскрытых здесь, межнуклеотидная связь IL представлена -IL'-Y-. Таким образом, IL=-IL'-Y-=-X''-P(=X')(X-)-Y-, где IL предпочтительно выбрана из группы, состоящей из: -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(CH3)-O-, -O-P(O)(OCH3)-O-, -O-P(O)(NH(CH3))-O-, -O-P(O)[N(CH3)2]-O-, -O-P(O)(BH3-)-O-, -O-P(O)(OCH2CH2OCH3)-O-, -O-P(O)(OCH2CH2SCH3)-O-, -O-P(O)(O-)-N(CH3)-, -N(CH3)-P(O)(O-)-O-. Предпочтительными являются межнуклеотидные связи IL, выбранные из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(OCH3)-O-, -O-P(O)(NH(CH3))-O-, -O-P(O)[N(CH3)2]-O-, -O-P(O)(OCH2CH2OCH3)-O-, и более предпочтительные, выбранные из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-, и еще более предпочтительные, выбранные из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, и наиболее предпочтительные, выбранные из -O-P(O)(O-)-O- и -O-P(O)(S-)-O-.

Таким образом, настоящее изобретение предпочтительно относится к антисмысловому олигонуклеотиду в форме гапмера, состоящему из 10-28 нуклеотидов, предпочтительно 11-24 нуклеотидов, более предпочтительно 12-20 и еще более предпочтительно 13-19 или 14-18 нуклеотидов, и 1-5 из этих нуклеотидов на терминальном 5'-конце и 1-5 нуклеотидов на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида представляют нуклеотиды LNA, и между нуклеотидами LNA на терминальном 5'-конце и терминальном 3'-конце находится последовательность, по меньшей мере, из 6, предпочтительно 7 и более предпочтительно 8 нуклеотидов ДНК, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью:

5'-N11-TGTTTAGG-N12-3' (SEQ ID NO: 10)

где:

N11 представляет: GAAGAGCTATTTGGTAG-, AAGAGCTATTTGGTAG-, AGAGCTATTTGGTAG-, GAGCTATTTGGTAG-, AGCTATTTGGTAG-, GCTATTTGGTAG-, CTATTTGGTAG-, TATTTGGTAG-, ATTTGGTAG-, TTTGGTAG-, TTGGTAG-, TGGTAG-, GGTAG-, GTAG-, TAG-, AG- или G-; и

N12 представляет: -GAGCCGTCTTCAGGAAT, -GAGCCGTCTTCAGGAA, -GAGCCGTCTTCAGGA, -GAGCCGTCTTCAGG, -GAGCCGTCTTCAG, -GAGCCGTCTTCA, -GAGCCGTCTTC, -GAGCCGTCTT, -GAGCCGTCT, -GAGCCGTC, -GAGCCGT, -GAGCCG, -GAGCC, -GAGC, -GAG, -GA или -G; и

нуклеотиды LNA выбраны из β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-ENA (b5), β-D-(NH)-LNA (b6), β-D-(NCH3)-LNA (b7), β-D-(ONH)-LNA (b8) и β-D-(ONCH3)-LNA (b9); и предпочтительно из β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-(NH)-LNA (b6) и β-D-(NCH3)-LNA (b7); и

межнуклеотидные связи выбраны из: -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(CH3)-O-, -O-P(O)(OCH3)-O-, -O-P(O)(NH(CH3))-O-, -O-P(O)[N(CH3)2]-O-, -O-P(O)(BH3-)-O-, -O-P(O)(OCH2CH2OCH3)-O-, -O-P(O)(OCH2CH2SCH3)-O-, -O-P(O)(O-)-N(CH3)-, -N(CH3)-P(O)(O-)-O-;

и предпочтительно из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида. Такие предпочтительные антисмысловые олигонуклеотиды могут не содержать какого-либо модифицированного терминального 3'- и 5'-конца или могут не содержать какой-либо 3'- и 5'-концевой группы, и могут в качестве модифицированного азотистого основания содержать 5-метилцитозин и/или 2-аминоаденин.

Более предпочтительно N11 представляет: AGAGCTATTTGGTAG-, GAGCTATTTGGTAG-, AGCTATTTGGTAG-, GCTATTTGGTAG-, CTATTTGGTAG-, TATTTGGTAG-, ATTTGGTAG-, TTTGGTAG-, TTGGTAG-, TGGTAG-, GGTAG-, GTAG-, TAG-, AG- или G-; и

N12 представляет: -GAGCCGTCTTCAGGA, -GAGCCGTCTTCAGG, -GAGCCGTCTTCAG, -GAGCCGTCTTCA, -GAGCCGTCTTC, -GAGCCGTCTT, -GAGCCGTCT, -GAGCCGTC, -GAGCCGT, -GAGCCG, -GAGCC, -GAGC, -GAG, -GA или -G.

Еще более предпочтительно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду в форме гапмера, состоящему из 11-24 нуклеотидов, более предпочтительно 12-20 нуклеотидов и более предпочтительно 13-19 или 14-18 нуклеотидов, и 2-5 из этих нуклеотидов на терминальном 5'-конце и 2-5 нуклеотидов на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида представляют нуклеотиды LNA, и между нуклеотидами LNA на терминальном 5'-конце и терминальном 3'-конце находится последовательность, по меньшей мере, из 7, предпочтительно, по меньшей мере, 8 нуклеотидов ДНК, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью:

5'-N11-TGTTTAGG-N12-3' (SEQ ID NO: 10)

где:

N11 представляет: GCTATTTGGTAG-, CTATTTGGTAG-, TATTTGGTAG-, ATTTGGTAG-, TTTGGTAG-, TTGGTAG-, TGGTAG-, GGTAG-, GTAG-, TAG-, AG- или G-; предпочтительно N11 представляет: TATTTGGTAG-, ATTTGGTAG-, TTTGGTAG-, TTGGTAG-, TGGTAG-, GGTAG-, GTAG-, TAG-, AG- или G-; и

N12 представляет: -GAGCCGTCTTCA, -GAGCCGTCTTC, -GAGCCGTCTT, -GAGCCGTCT, -GAGCCGTC, -GAGCCGT, -GAGCCG, -GAGCC, -GAGC, -GAG, -GA или -G; предпочтительно N12 представляет: -GAGCCGTCTT, -GAGCCGTCT, -GAGCCGTC, -GAGCCGT, -GAGCCG, -GAGCC, -GAGC, -GAG, -GA или -G; и

нуклеотиды LNA выбраны из β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-(NH)-LNA (b6) и β-D-(NCH3)-LNA (b7); и межнуклеотидные связи выбраны из: -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-; и предпочтительно выбраны из фосфата, фосфоротиоата и фосфородитиоата;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида. Такие предпочтительные антисмысловые олигонуклеотиды могут не содержать какого-либо модифицированного терминального 3'- и 5'-конца или могут не содержать какой-либо 3'- и 5'-концевой группы, и могут в качестве модифицированного азотистого основания содержать 5-метилцитозин и/или 2-аминоаденин.

Особенно предпочтительными являются гапмерные антисмысловые олигонуклеотиды последовательностей SEQ ID NO: 369-SEQ ID NO: 403, содержащие сегмент из 2-5, предпочтительно 2-4 и более предпочтительно 3-4 звеньев LNA на 3'-конце, и сегмент из 2-5, предпочтительно 2-4 и более предпочтительно 3-4 звеньев LNA на 5'-конце, и сегмент, по меньшей мере, из 6, предпочтительно 7 и более предпочтительно 8 звеньев ДНК между двумя сегментами звеньев LNA, где звенья LNA выбраны из: β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-(NH)-LNA (b6) и β-D-(NCH3)-LNA (b7); и межнуклеотидные связи выбраны из фосфата, фосфоротиоата и фосфородитиоата. Такие предпочтительные антисмысловые олигонуклеотиды могут не содержать какого-либо модифицированного терминального 3'- и 5'-конца или могут не содержать какой-либо 3'- и 5'-концевой группы, и могут в качестве модифицированного азотистого основания содержать 5-метилцитозин в звеньях LNA, предпочтительно всех звеньях LNA и/или 2-аминоаденин в некоторых или всех звеньях ДНК, и/или 5-метилцитозин в некоторых или всех звеньях ДНК.

Также особенно предпочтительными являются гапмерные антисмысловые олигонуклеотиды из таблицы 6 (SEQ ID NO: 258a-270b).

Кроме того, настоящее изобретение предпочтительно относится к антисмысловому олигонуклеотиду в форме гапмера, состоящему из 10-28 нуклеотидов, предпочтительно 11-24 нуклеотидов, более предпочтительно 12-20 и еще более предпочтительно 13-19 или 14-18 нуклеотидов, и 1-5 из этих нуклеотидов на терминальном 5'-конце и 1-5 нуклеотидов на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида представляют нуклеотиды LNA, и между нуклеотидами LNA на терминальном 5'-конце и терминальном 3'-конце находится последовательность, по меньшей мере, из 6, предпочтительно 7 и более предпочтительно 8 нуклеотидов ДНК, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью:

5'-N5-TTTGGTAG-N6-3' (SEQ ID NO: 11)

где:

N5 представляет: CTGCCCCAGAAGAGCTA-, TGCCCCAGAAGAGCTA-, GCCCCAGAAGAGCTA-, CCCCAGAAGAGCTA-, CCCAGAAGAGCTA-, CCAGAAGAGCTA-,CAGAAGAGCTA-, AGAAGAGCTA-, GAAGAGCTA-, AAGAGCTA-, AGAGCTA-, GAGCTA-, AGCTA-, GCTA-, CTA-, TA- или A-;

N6 представляет: -TGTTTAGGGAGCCGTCT, -TGTTTAGGGAGCCGTC, -TGTTTAGGGAGCCGT, -TGTTTAGGGAGCCG, -TGTTTAGGGAGCC, -TGTTTAGGGAGC, -TGTTTAGGGAG, -TGTTTAGGGA, -TGTTTAGGG, -TGTTTAGG, -TGTTTAG, -TGTTTA, -TGTTT, -TGTT, -TGT, -TG или -T;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида.

N5 и/или N6 могут также представлять любой из дополнительных ограниченных списков 3'- и 5'-остатков, как здесь раскрыто.

Особенно предпочтительными гапмерными антисмысловыми олигонуклеотидами, подпадающими под общую формулу S4:

5'-N5-TTTGGTAG-N6-3' (SEQ ID NO: 11) S4

являются следующие:

GAAGAGCTATTTGGTAGT (SEQ ID NO: 404)
AAGAGCTATTTGGTAGTG (SEQ ID NO: 405)
AGAGCTATTTGGTAGTGT (SEQ ID NO: 406)
GAGCTATTTGGTAGTGTT (SEQ ID NO: 407)
AGCTATTTGGTAGTGTTT (SEQ ID NO: 408)
GCTATTTGGTAGTGTTTA (SEQ ID NO: 409)
CTATTTGGTAGTGTTTAG (SEQ ID NO: 410)
TATTTGGTAGTGTTTAGG (SEQ ID NO: 411)
ATTTGGTAGTGTTTAGGG (SEQ ID NO: 412)
AAGAGCTATTTGGTAGT (SEQ ID NO: 413)
AGAGCTATTTGGTAGTG (SEQ ID NO: 414)
GAGCTATTTGGTAGTGT (SEQ ID NO: 415)
AGCTATTTGGTAGTGTT (SEQ ID NO: 416)
GCTATTTGGTAGTGTTT (SEQ ID NO: 417)
CTATTTGGTAGTGTTTA (SEQ ID NO: 418)
TATTTGGTAGTGTTTAG (SEQ ID NO: 419)
ATTTGGTAGTGTTTAGG (SEQ ID NO: 420)
AGAGCTATTTGGTAGT (SEQ ID NO: 421)
GAGCTATTTGGTAGTG (SEQ ID NO: 422)
AGCTATTTGGTAGTGT (SEQ ID NO: 423)
GCTATTTGGTAGTGTT (SEQ ID NO: 424)
CTATTTGGTAGTGTTT (SEQ ID NO: 425)
TATTTGGTAGTGTTTA (SEQ ID NO: 426)
ATTTGGTAGTGTTTAG (SEQ ID NO: 427)
GAGCTATTTGGTAGT (SEQ ID NO: 428)
AGCTATTTGGTAGTG (SEQ ID NO: 429)
GCTATTTGGTAGTGT (SEQ ID NO: 430)
CTATTTGGTAGTGTT (SEQ ID NO: 431)
TATTTGGTAGTGTTT (SEQ ID NO: 432)
ATTTGGTAGTGTTTA (SEQ ID NO: 433)
AGCTATTTGGTAGT (SEQ ID NO: 434)
GCTATTTGGTAGTG (SEQ ID NO: 435)
CTATTTGGTAGTGT (SEQ ID NO: 436)
TATTTGGTAGTGTT (SEQ ID NO: 437)
ATTTGGTAGTGTTT (SEQ ID NO: 438)

Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S4 в форме гапмеров (LNA-сегмент 1-сегмент ДНК-LNA-сегмент 2) содержат сегмент LNA на терминальном 5'-конце, состоящий из 2-5, предпочтительно 2-4 звеньев LNA, и содержат сегмент LNA на терминальном 3'-конце, состоящий из 2-5, предпочтительно 2-4 звеньев LNA, и между двумя сегментами LNA один сегмент ДНК, состоящий из 6-14, предпочтительно 7-12 и более предпочтительно 8-11 звеньев ДНК.

Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S4 содержат нуклеотиды LNA (звенья LNA), как здесь описано, в частности, таковые, раскрытые в разделе «Замкнутые нуклеиновые кислоты» (LNA®) и, предпочтительно таковые, раскрытые в разделе «Предпочтительные LNA». Звенья LNA и звенья ДНК могут содержать обычные азотистые основания, такие как аденин (А), цитозин (С), гуанин (G), тимин (Т) и урацил (U), но могут также содержать модифицированные азотистые основания, как описано в разделе «Азотистые основания». Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S4 или сегменты LNA и сегмент ДНК антисмыслового олигонуклеотида могут содержать любую межнуклеотидную связь, как здесь описано, и в частности, таковые, раскрытые в разделе «Межнуклеотидные связи (IL)». Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S4 необязательно могут также содержать концевые группы на терминальном 3'-конце и/или терминальном 5'-конце и в частности, таковые, раскрытые в разделе «Концевые группы».

Результаты экспериментов показали, что модифицированные азотистые основания незначительно увеличивают или изменяют активность антисмысловых олигонуклеотидов по изобретению в отношении тестированных неврологических и онкологических заболеваний. Было показано, что модифицированные азотистые основания 5-метилцитозин или 2-аминоаденин дополнительно повышают активность антисмысловых олигонуклеотидов формулы S4, особенно если 5-метилцитозин используется только в нуклеотидах LNA или в нуклеотидах LNA и в нуклеотидах ДНК и/или, если 2-аминоаденин используется в нуклеотидах ДНК и не в нуклеотидах LNA.

Предпочтительная гапмерная структура антисмысловых олигонуклеотидов формулы S4 является следующей: 3-8-3, 4-8-2, 2-8-4, 3-8-4, 4-8-3, 4-8-4, 3-9-3, 4-9-2, 2-9-4, 4-9-3, 3-9-4, 4-9-4, 3-10-3, 2-10-4, 4-10-2, 3-10-4, 4-10-3, 4-10-4, 2-11-4, 4-11-2, 3-11-4, 4-11-3 и еще более предпочтительной: 3-8-3, 3-8-4, 4-8-3, 4-8-4, 3-9-3, 4-9-3, 3-9-4, 4-9-4, 3-10-3, 3-10-4, 4-10-3, 4-10-4, 3-11-4 и 4-11-3.

В качестве звеньев LNA для антисмысловых олигонуклеотидов формулы S4, в частности, β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-ENA (b5), β-D-(NH)-LNA (b6), β-D-(NCH3)-LNA (b7), β-D-(ONH)-LNA (b8) и β-D-(ONCH3)-LNA (b9) являются предпочтительными. Результаты экспериментов показали, что все эти звенья LNA b1, b2, b4, b5, b6, b7, b8 и b9 можно синтезировать с требуемым усилием и обеспечить антисмысловые олигонуклеотиды с сопоставимой стабильностью и активностью. Однако, основываясь на экспериментах, звенья LNA b1, b2, b4, b5, b6 и b7 являются более предпочтительными. Еще более предпочтительными являются звенья LNA b1, b2, b4, b6 и b7, и еще более предпочтительными являются звенья LNA b1 и b4, и наиболее предпочтительным также с учетом сложности химического синтеза является β-D-окси-LNA (b1).

К настоящему времени не было найдено никакой конкретной 3'-концевой группы или 5'-концевой группы, которая заметно изменяла или повышала стабильность или активность в отношении онкологических или неврологических заболеваний, таким образом, 3'- и 5'-концевые группы возможны, но явно не являются предпочтительными.

Возможны различные межнуклеотидные мостики или межнуклеотидные связи. В приведенных здесь формулах межнуклеотидная связь IL представлена -IL'-Y-. Таким образом, IL=-IL'-Y-=-X''-P(=X')(X-)-Y-, где IL предпочтительно выбрана из группы, состоящей из: -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(CH3)-O-, -O-P(O)(OCH3)-O-, -O-P(O)(NH(CH3))-O-, -O-P(O)[N(CH3)2]-O-, -O-P(O)(BH3-)-O-, -O-P(O)(OCH2CH2OCH3)-O-, -O-P(O)(OCH2CH2SCH3)-O-, -O-P(O)(O-)-N(CH3)-, -N(CH3)-P(O)(O-)-O-. Предпочтительными являются межнуклеотидные связи IL, выбранные из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(OCH3)-O-, -O-P(O)(NH(CH3))-O-, -O-P(O)[N(CH3)2]-O-, -O-P(O)(OCH2CH2OCH3)-O-, и более предпочтительные, выбранные из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-, и еще более предпочтительные, выбранные из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, и наиболее предпочтительные, выбранные из -O-P(O)(O-)-O- и -O-P(O)(S-)-O-.

Таким образом, настоящее изобретение предпочтительно относится к антисмысловому олигонуклеотиду в форме гапмера, состоящему из 10-28 нуклеотидов, предпочтительно 11-24 нуклеотидов, более предпочтительно 12-20 и еще более предпочтительно 13-19 или 14-18 нуклеотидов, и 1-5 из этих нуклеотидов на терминальном 5'-конце и 1-5 нуклеотидов на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида представляют нуклеотиды LNA, и между нуклеотидами LNA на терминальном 5'-конце и терминальном 3'-конце находится последовательность, по меньшей мере, из 6, предпочтительно 7 и более предпочтительно 8 нуклеотидов ДНК, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью:

5'-N5-TTTGGTAG-N6-3' (SEQ ID NO: 11)

где:

N5 представляет: CTGCCCCAGAAGAGCTA-, TGCCCCAGAAGAGCTA-, GCCCCAGAAGAGCTA-, CCCCAGAAGAGCTA-, CCCAGAAGAGCTA-, CCAGAAGAGCTA-, CAGAAGAGCTA-, AGAAGAGCTA-, GAAGAGCTA-, AAGAGCTA-, AGAGCTA-, GAGCTA-, AGCTA-, GCTA-, CTA-, TA- или A-; и

N6 представляет: -TGTTTAGGGAGCCGTCT, -TGTTTAGGGAGCCGTC, -TGTTTAGGGAGCCGT, -TGTTTAGGGAGCCG, -TGTTTAGGGAGCC, -TGTTTAGGGAGC, -TGTTTAGGGAG, -TGTTTAGGGA, -TGTTTAGGG, -TGTTTAGG, -TGTTTAG, -TGTTTA, -TGTTT, -TGTT, -TGT, -TG или -T; и

нуклеотиды LNA выбраны из β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-ENA (b5), β-D-(NH)-LNA (b6), β-D-(NCH3)-LNA (b7), β-D-(ONH)-LNA (b8) и β-D-(ONCH3)-LNA (b9); и предпочтительно из β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-(NH)-LNA (b6) и β-D-(NCH3)-LNA (b7); и

межнуклеотидные связи выбраны из: -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(CH3)-O-, -O-P(O)(OCH3)-O-, -O-P(O)(NH(CH3))-O-, -O-P(O)[N(CH3)2]-O-, -O-P(O)(BH3-)-O-, -O-P(O)(OCH2CH2OCH3)-O-, -O-P(O)(OCH2CH2SCH3)-O-, -O-P(O)(O-)-N(CH3)-, -N(CH3)-P(O)(O-)-O-;

и предпочтительно из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида. Такие предпочтительные антисмысловые олигонуклеотиды могут не содержать какого-либо модифицированного терминального 3'- и 5'-конца или могут не содержать какой-либо 3'- и 5'-концевой группы, и могут в качестве модифицированного азотистого основания содержать 5-метилцитозин и/или 2-аминоаденин.

Более предпочтительно N5 представляет: GCCCCAGAAGAGCTA-, CCCCAGAAGAGCTA-, CCCAGAAGAGCTA-, CCAGAAGAGCTA-, CAGAAGAGCTA-, AGAAGAGCTA-, GAAGAGCTA-, AAGAGCTA-, AGAGCTA-, GAGCTA-, AGCTA-, GCTA-, CTA-, TA- или A-; и

N6 представляет: -TGTTTAGGGAGCCGT, -TGTTTAGGGAGCCG, -TGTTTAGGGAGCC, -TGTTTAGGGAGC, -TGTTTAGGGAG, -TGTTTAGGGA, -TGTTTAGGG, -TGTTTAGG, -TGTTTAG, -TGTTTA, -TGTTT, -TGTT, -TGT, -TG или -T.

Еще более предпочтительно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду в форме гапмера, состоящему из 11-24 нуклеотидов, более предпочтительно 12-20 нуклеотидов и более предпочтительно 13-19 или 14-18 нуклеотидов, и 2-5 из этих нуклеотидов на терминальном 5'-конце и 2-5 нуклеотидов на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида представляют нуклеотиды LNA, и между нуклеотидами LNA на терминальном 5'-конце и терминальном 3'-конце находится последовательность, по меньшей мере, из 7, предпочтительно, по меньшей мере, 8 нуклеотидов ДНК, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью:

5'-N5-TTTGGTAG-N6-3' (SEQ ID NO: 11)

где:

N5 представляет: CCAGAAGAGCTA-, CAGAAGAGCTA-, AGAAGAGCTA-, GAAGAGCTA-, AAGAGCTA-, AGAGCTA-, GAGCTA-, AGCTA-, GCTA-, CTA-, TA- или A-; предпочтительно N5 представляет: AGAAGAGCTA-, GAAGAGCTA-, AAGAGCTA-, AGAGCTA-, GAGCTA-, AGCTA-, GCTA-, CTA-, TA- или A-; и

N6 представляет: -TGTTTAGGGAGC, -TGTTTAGGGAG, -TGTTTAGGGA, -TGTTTAGGG, -TGTTTAGG, -TGTTTAG, -TGTTTA, -TGTTT, -TGTT, -TGT, -TG, or -T; предпочтительно N6 представляет: -TGTTTAGGGA, -TGTTTAGGG, -TGTTTAGG, -TGTTTAG, -TGTTTA, -TGTTT, -TGTT, -TGT, -TG или -T; и

нуклеотиды LNA выбраны из β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-(NH)-LNA (b6) и β-D-(NCH3)-LNA (b7); и межнуклеотидные связи выбраны из: -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-; и предпочтительно выбраны из фосфата, фосфоротиоата и фосфородитиоата;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида. Такие предпочтительные антисмысловые олигонуклеотиды могут не содержать какого-либо модифицированного терминального 3'- и 5'-конца или могут не содержать какой-либо 3'- и 5'-концевой группы, и могут в качестве модифицированного азотистого основания содержать 5-метилцитозин и/или 2-аминоаденин.

Особенно предпочтительными являются гапмерные антисмысловые олигонуклеотиды последовательностей SEQ ID NO: 404-SEQ ID NO: 438, содержащие сегмент из 2-5, предпочтительно 2-4 и более предпочтительно 3-4 звеньев LNA на 3'-конце, и сегмент из 2-5, предпочтительно 2-4 и более предпочтительно 3-4 звеньев LNA на 5'-конце, и сегмент, по меньшей мере, из 6, предпочтительно 7 и более предпочтительно 8 звеньев ДНК между двумя сегментами звеньев LNA, где звенья LNA выбраны из: β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-(NH)-LNA (b6) и β-D-(NCH3)-LNA (b7); и межнуклеотидные связи выбраны из фосфата, фосфоротиоата и фосфородитиоата. Такие предпочтительные антисмысловые олигонуклеотиды могут не содержать какого-либо модифицированного терминального 3'- и 5'-конца или могут не содержать какой-либо 3'- и 5'-концевой группы, и могут в качестве модифицированного азотистого основания содержать 5-метилцитозин в звеньях LNA, предпочтительно всех звеньях LNA и/или 2-аминоаденин в некоторых или всех звеньях ДНК, и/или 5-метилцитозин в некоторых или всех звеньях ДНК.

Также особенно предпочтительными являются гапмерные антисмысловые олигонуклеотиды из таблицы 7 (SEQ ID NO: 271a-283b).

Кроме того, настоящее изобретение предпочтительно относится к антисмысловому олигонуклеотиду в форме гапмера, состоящему из 10-28 нуклеотидов, предпочтительно 11-24 нуклеотидов, более предпочтительно 12-20 и еще более предпочтительно 13-19 или 14-18 нуклеотидов, и 1-5 из этих нуклеотидов на терминальном 5'-конце и 1-5 нуклеотидов на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида представляют нуклеотиды LNA, и между нуклеотидами LNA на терминальном 5'-конце и терминальном 3'-конце находится последовательность, по меньшей мере, из 6, предпочтительно 7 и более предпочтительно 8 нуклеотидов ДНК, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью:

5'-N7-AATGGACC-N8-3' (SEQ ID NO: 100)

где:

N7 представляет: ATCTTGAATATCTCATG-, TCTTGAATATCTCATG-, CTTGAATATCTCATG-, TTGAATATCTCATG-, TGAATATCTCATG-, GAATATCTCATG-,AATATCTCATG-, ATATCTCATG-, TATCTCATG-, ATCTCATG-, TCTCATG-, CTCATG-, TCATG-, CATG-, ATG-, TG- или G-;

N8 представляет: -AGTATTCTAGAAACTCA, -AGTATTCTAGAAACTC, -AGTATTCTAGAAACT, -AGTATTCTAGAAAC, -AGTATTCTAGAAA, -AGTATTCTAGAA, -AGTATTCTAGA, -AGTATTCTAG, -AGTATTCTA, -AGTATTCT, -AGTATTC, -AGTATT, -AGTAT, -AGTA, -AGT, -AG или -A;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида.

N7 и/или N8 могут также представлять любой из дополнительных ограниченных списков 3'- и 5'-остатков, как здесь раскрыто.

Особенно предпочтительными гапмерными антисмысловыми олигонуклеотидами, подпадающими под общую формулу S6:

5'-N7-AATGGACC-N8-3' (SEQ ID NO: 100) S6

являются следующие:

TATCTCATGAATGGACCA (SEQ ID NO: 439)
ATCTCATGAATGGACCAG (SEQ ID NO: 440)
TCTCATGAATGGACCAGT (SEQ ID NO: 441)
CTCATGAATGGACCAGTA (SEQ ID NO: 442)
TCATGAATGGACCAGTAT (SEQ ID NO: 443)
CATGAATGGACCAGTATT (SEQ ID NO: 444)
ATGAATGGACCAGTATTC (SEQ ID NO: 445)
TGAATGGACCAGTATTCT (SEQ ID NO: 446)
GAATGGACCAGTATTCTA (SEQ ID NO: 447)
ATCTCATGAATGGACCA (SEQ ID NO: 448)
TCTCATGAATGGACCAG (SEQ ID NO: 449)
CTCATGAATGGACCAGT (SEQ ID NO: 450)
TCATGAATGGACCAGTA (SEQ ID NO: 451)
CATGAATGGACCAGTAT (SEQ ID NO: 452)
ATGAATGGACCAGTATT (SEQ ID NO: 453)
TGAATGGACCAGTATTC (SEQ ID NO: 454)
GAATGGACCAGTATTCT (SEQ ID NO: 455)
TCTCATGAATGGACCA (SEQ ID NO: 456)
CTCATGAATGGACCAG (SEQ ID NO: 457)
TCATGAATGGACCAGT (SEQ ID NO: 458)
CATGAATGGACCAGTA (SEQ ID NO: 459)
ATGAATGGACCAGTAT (SEQ ID NO: 460)
TGAATGGACCAGTATT (SEQ ID NO: 461)
GAATGGACCAGTATTC (SEQ ID NO: 462)
CTCATGAATGGACCA (SEQ ID NO: 463)
TCATGAATGGACCAG (SEQ ID NO: 464)
CATGAATGGACCAGT (SEQ ID NO: 465)
ATGAATGGACCAGTA (SEQ ID NO: 466)
TGAATGGACCAGTAT (SEQ ID NO: 467)
GAATGGACCAGTATT (SEQ ID NO: 468)
TCATGAATGGACCA (SEQ ID NO: 469)
CATGAATGGACCAG (SEQ ID NO: 470)
ATGAATGGACCAGT (SEQ ID NO: 471)
TGAATGGACCAGTA (SEQ ID NO: 472)
GAATGGACCAGTAT (SEQ ID NO: 473)

Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S6 в форме гапмеров (LNA-сегмент 1-сегмент ДНК-LNA-сегмент 2) содержат сегмент LNA на терминальном 5'-конце, состоящий из 2-5, предпочтительно 2-4 звеньев LNA, и содержат сегмент LNA на терминальном 3'-конце, состоящий из 2-5, предпочтительно 2-4 звеньев LNA, и между двумя сегментами LNA один сегмент ДНК, состоящий из 6-14, предпочтительно 7-12 и более предпочтительно 8-11 звеньев ДНК.

Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S6 содержат нуклеотиды LNA (звенья LNA), как здесь описано, в частности, таковые, раскрытые в разделе «Замкнутые нуклеиновые кислоты» (LNA®) и, предпочтительно таковые, раскрытые в разделе «Предпочтительные LNA». Звенья LNA и звенья ДНК могут содержать обычные азотистые основания, такие как аденин (А), цитозин (С), гуанин (G), тимин (Т) и урацил (U), но могут также содержать модифицированные азотистые основания, как описано в разделе «Азотистые основания». Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S6 или сегменты LNA и сегмент ДНК антисмыслового олигонуклеотида могут содержать любую межнуклеотидную связь, как здесь описано, и в частности, таковые, раскрытые в разделе «Межнуклеотидные связи (IL)». Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S6 необязательно могут также содержать концевые группы на терминальном 3'-конце и/или терминальном 5'-конце и в частности, таковые, раскрытые в разделе «Концевые группы».

Результаты экспериментов показали, что модифицированные азотистые основания незначительно увеличивают или изменяют активность антисмысловых олигонуклеотидов по изобретению в отношении тестированных неврологических и онкологических заболеваний. Было показано, что модифицированные азотистые основания 5-метилцитозин или 2-аминоаденин дополнительно повышают активность антисмысловых олигонуклеотидов формулы S6, особенно если 5-метилцитозин используется только в нуклеотидах LNA или в нуклеотидах LNA и в нуклеотидах ДНК и/или, если 2-аминоаденин используется в нуклеотидах ДНК и не в нуклеотидах LNA.

Предпочтительная гапмерная структура антисмысловых олигонуклеотидов формулы S6 является следующей: 3-8-3, 4-8-2, 2-8-4, 3-8-4, 4-8-3, 4-8-4, 3-9-3, 4-9-2, 2-9-4, 4-9-3, 3-9-4, 4-9-4, 3-10-3, 2-10-4, 4-10-2, 3-10-4, 4-10-3, 4-10-4, 2-11-4, 4-11-2, 3-11-4, 4-11-3 и еще более предпочтительной: 3-8-3, 3-8-4, 4-8-3, 4-8-4, 3-9-3, 4-9-3, 3-9-4, 4-9-4, 3-10-3, 3-10-4, 4-10-3, 4-10-4, 3-11-4 и 4-11-3.

В качестве звеньев LNA для антисмысловых олигонуклеотидов формулы S6, в частности, β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-ENA (b5), β-D-(NH)-LNA (b6), β-D-(NCH3)-LNA (b7), β-D-(ONH)-LNA (b8) и β-D-(ONCH3)-LNA (b9) являются предпочтительными. Результаты экспериментов показали, что все эти звенья LNA b1, b2, b4, b5, b6, b7, b8 и b9 можно синтезировать с требуемым усилием и обеспечить антисмысловые олигонуклеотиды с сопоставимой стабильностью и активностью. Однако, основываясь на экспериментах, звенья LNA b1, b2, b4, b5, b6 и b7 являются более предпочтительными. Еще более предпочтительными являются звенья LNA b1, b2, b4, b6 и b7, и еще более предпочтительными являются звенья LNA b1 и b4, и наиболее предпочтительным также в отношении сложности химического синтеза является β-D-окси-LNA (b1).

К настоящему времени не было найдено никакой конкретной 3'-концевой группы или 5'-концевой группы, которая заметно изменяла или повышала стабильность или активность в отношении онкологических или неврологических заболеваний, таким образом, 3'- и 5'-концевые группы возможны, но явно не являются предпочтительными.

Возможны различные межнуклеотидные мостики или межнуклеотидные связи. В приведенных здесь формулах межнуклеотидная связь IL представлена -IL'-Y-. Таким образом, IL=-IL'-Y-=-X''-P(=X')(X-)-Y-, где IL предпочтительно выбрана из группы, состоящей из: -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(CH3)-O-, -O-P(O)(OCH3)-O-, -O-P(O)(NH(CH3))-O-, -O-P(O)[N(CH3)2]-O-, -O-P(O)(BH3-)-O-, -O-P(O)(OCH2CH2OCH3)-O-, -O-P(O)(OCH2CH2SCH3)-O-, -O-P(O)(O-)-N(CH3)-, -N(CH3)-P(O)(O-)-O-. Предпочтительными являются межнуклеотидные связи IL, выбранные из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(OCH3)-O-, -O-P(O)(NH(CH3))-O-, -O-P(O)[N(CH3)2]-O-, -O-P(O)(OCH2CH2OCH3)-O-, и более предпочтительные, выбранные из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-, и еще более предпочтительные, выбранные из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, и наиболее предпочтительные, выбранные из -O-P(O)(O-)-O- и -O-P(O)(S-)-O-.

Таким образом, настоящее изобретение предпочтительно относится к антисмысловому олигонуклеотиду в форме гапмера, состоящему из 10-28 нуклеотидов, предпочтительно 11-24 нуклеотидов, более предпочтительно 12-20 и еще более предпочтительно 13-19 или 14-18 нуклеотидов, и 1-5 из этих нуклеотидов на терминальном 5'-конце и 1-5 нуклеотидов на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида представляют нуклеотиды LNA, и между нуклеотидами LNA на терминальном 5'-конце и терминальном 3'-конце находится последовательность, по меньшей мере, из 6, предпочтительно 7 и более предпочтительно 8 нуклеотидов ДНК, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью:

5'-N7-AATGGACC-N8-3' (SEQ ID NO: 100)

где:

N7 представляет: ATCTTGAATATCTCATG-, TCTTGAATATCTCATG-, CTTGAATATCTCATG-, TTGAATATCTCATG-, TGAATATCTCATG-, GAATATCTCATG-,AATATCTCATG-, ATATCTCATG-, TATCTCATG-, ATCTCATG-, TCTCATG-, CTCATG-, TCATG-, CATG-, ATG-, TG- или G-; и

N8 представляет: -AGTATTCTAGAAACTCA, -AGTATTCTAGAAACTC, -AGTATTCTAGAAACT, -AGTATTCTAGAAAC, -AGTATTCTAGAAA, -AGTATTCTAGAA, -AGTATTCTAGA, -AGTATTCTAG, -AGTATTCTA, -AGTATTCT, -AGTATTC, -AGTATT, -AGTAT, -AGTA, -AGT, -AG или -A; и

и нуклеотиды LNA выбраны из β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-ENA (b5), β-D-(NH)-LNA (b6), β-D-(NCH3)-LNA (b7), β-D-(ONH)-LNA (b8) и β-D-(ONCH3)-LNA (b9); и предпочтительно из β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-(NH)-LNA (b6) и β-D-(NCH3)-LNA (b7); и

межнуклеотидные связи выбраны из: -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(CH3)-O-, -O-P(O)(OCH3)-O-, -O-P(O)(NH(CH3))-O-, -O-P(O)[N(CH3)2]-O-, -O-P(O)(BH3-)-O-, -O-P(O)(OCH2CH2OCH3)-O-, -O-P(O)(OCH2CH2SCH3)-O-, -O-P(O)(O-)-N(CH3)-, -N(CH3)-P(O)(O-)-O-;

и предпочтительно из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида. Такие предпочтительные антисмысловые олигонуклеотиды могут не содержать какого-либо модифицированного терминального 3'- и 5'-конца или могут не содержать какой-либо 3'- и 5'-концевой группы, и могут в качестве модифицированного азотистого основания содержать 5-метилцитозин и/или 2-аминоаденин.

Более предпочтительно N7 представляет: CTTGAATATCTCATG-, TTGAATATCTCATG-, TGAATATCTCATG-, GAATATCTCATG-, AATATCTCATG-, ATATCTCATG-, TATCTCATG-, ATCTCATG-, TCTCATG-, CTCATG-, TCATG-, CATG-, ATG-, TG- или G-; и

N8 представляет: -AGTATTCTAGAAACT, -AGTATTCTAGAAAC, -AGTATTCTAGAAA, -AGTATTCTAGAA, -AGTATTCTAGA, -AGTATTCTAG, -AGTATTCTA, -AGTATTCT, -AGTATTC, -AGTATT, -AGTAT, -AGTA, -AGT, -AG или -A.

Еще более предпочтительно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду в форме гапмера, состоящему из 11-24 нуклеотидов, более предпочтительно 12-20 нуклеотидов и более предпочтительно 13-19 или 14-18 нуклеотидов, и 2-5 из этих нуклеотидов на терминальном 5'-конце и 2-5 нуклеотидов на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида представляют нуклеотиды LNA, и между нуклеотидами LNA на терминальном 5'-конце и терминальном 3'-конце находится последовательность, по меньшей мере, из 7, предпочтительно, по меньшей мере, 8 нуклеотидов ДНК, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью:

5'-N7-AATGGACC-N8-3' (SEQ ID NO: 100)

где:

N7 представляет: GAATATCTCATG-, AATATCTCATG-, ATATCTCATG-, TATCTCATG-, ATCTCATG-, TCTCATG-, CTCATG-, TCATG-, CATG-, ATG-, TG- или G-; предпочтительно N7 представляет: ATATCTCATG-, TATCTCATG-, ATCTCATG-, TCTCATG-, CTCATG-, TCATG-, CATG-, ATG-, TG- или G-; и

N8 представляет: -AGTATTCTAGAA, -AGTATTCTAGA, -AGTATTCTAG, -AGTATTCTA, -AGTATTCT, -AGTATTC, -AGTATT, -AGTAT, -AGTA, -AGT, -AG или -A; предпочтительно N8 представляет: -AGTATTCTAG, -AGTATTCTA, -AGTATTCT, -AGTATTC, -AGTATT, -AGTAT, -AGTA, -AGT, -AG или -A; и

нуклеотиды LNA выбраны из β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-(NH)-LNA (b6) и β-D-(NCH3)-LNA (b7); и межнуклеотидные связи выбраны из: -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-; и предпочтительно выбраны из фосфата, фосфоротиоата и фосфородитиоата;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида. Такие предпочтительные антисмысловые олигонуклеотиды могут не содержать какого-либо модифицированного терминального 3'- и 5'-конца или могут не содержать какой-либо 3'- и 5'-концевой группы, и могут в качестве модифицированного азотистого основания содержать 5-метилцитозин и/или 2-аминоаденин.

Особенно предпочтительными являются гапмерные антисмысловые олигонуклеотиды последовательностей SEQ ID NO: 439-SEQ ID NO: 473, содержащие сегмент из 2-5, предпочтительно 2-4 и более предпочтительно 3-4 звеньев LNA на 3'-конце, и сегмент из 2-5, предпочтительно 2-4 и более предпочтительно 3-4 звеньев LNA на 5'-конце, и сегмент, по меньшей мере, из 6, предпочтительно 7 и более предпочтительно 8 звеньев ДНК между двумя сегментами звеньев LNA, где звенья LNA выбраны из: β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-(NH)-LNA (b6) и β-D-(NCH3)-LNA (b7); и межнуклеотидные связи выбраны из фосфата, фосфоротиоата и фосфородитиоата. Такие предпочтительные антисмысловые олигонуклеотиды могут не содержать какого-либо модифицированного терминального 3'- и 5'-конца или могут не содержать какой-либо 3'- и 5'-концевой группы, и могут в качестве модифицированного азотистого основания содержать 5-метилцитозин в звеньях LNA, предпочтительно всех звеньях LNA и/или 2-аминоаденин в некоторых или всех звеньях ДНК, и/или 5-метилцитозин в некоторых или всех звеньях ДНК.

Также особенно предпочтительными являются гапмерные антисмысловые олигонуклеотиды из таблицы 8 (SEQ ID NO: 219a-231b).

Кроме того, настоящее изобретение предпочтительно относится к антисмысловому олигонуклеотиду в форме гапмера, состоящему из 10-28 нуклеотидов, предпочтительно 11-24 нуклеотидов, более предпочтительно 12-20 и еще более предпочтительно 13-19 или 14-18 нуклеотидов, и 1-5 из этих нуклеотидов на терминальном 5'-конце и 1-5 нуклеотидов на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида представляют нуклеотиды LNA, и между нуклеотидами LNA на терминальном 5'-конце и терминальном 3'-конце находится последовательность, по меньшей мере, из 6, предпочтительно 7 и более предпочтительно 8 нуклеотидов ДНК, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью:

5'-N9-ATTAATAA-N10-3' (SEQ ID NO: 101)

где:

N9 представляет: CATATTTATATACAGGC-, ATATTTATATACAGGC-, TATTTATATACAGGC-, ATTTATATACAGGC-, TTTATATACAGGC-, TTATATACAGGC-,TATATACAGGC-, ATATACAGGC-, TATACAGGC-, ATACAGGC-, TACAGGC-, ACAGGC-, CAGGC-, AGGC-, GGC-, GC- или C-;

N10 представляет: -AGTGCAAATGTTATTGG, -AGTGCAAATGTTATTG, -AGTGCAAATGTTATT, -AGTGCAAATGTTAT, -AGTGCAAATGTTA, -AGTGCAAATGTT, -AGTGCAAATGT, -AGTGCAAATG, -AGTGCAAAT, -AGTGCAAA, -AGTGCAA, -AGTGCA, -AGTGC, -AGTG, -AGT, -AG или -A;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида.

N9 и/или N10 могут также представлять любой из дополнительных ограниченных списков 3'- и 5'-остатков, как здесь раскрыто.

Особенно предпочтительными гапмерными антисмысловыми олигонуклеотидами, подпадающими под общую формулу S7:

5'-N9-ATTAATAA-N10-3' (SEQ ID NO: 101) S7

являются следующие:

TATACAGGCATTAATAAA (SEQ ID NO: 474)
ATACAGGCATTAATAAAG (SEQ ID NO: 475)
TACAGGCATTAATAAAGT (SEQ ID NO: 476)
ACAGGCATTAATAAAGTG (SEQ ID NO: 477)
CAGGCATTAATAAAGTGC (SEQ ID NO: 478)
AGGCATTAATAAAGTGCA (SEQ ID NO: 479)
GGCATTAATAAAGTGCAA (SEQ ID NO: 480)
GCATTAATAAAGTGCAAA (SEQ ID NO: 481)
CATTAATAAAGTGCAAAT (SEQ ID NO: 482)
ATACAGGCATTAATAAA (SEQ ID NO: 483)
TACAGGCATTAATAAAG (SEQ ID NO: 484)
ACAGGCATTAATAAAGT (SEQ ID NO: 485)
CAGGCATTAATAAAGTG (SEQ ID NO: 486)
AGGCATTAATAAAGTGC (SEQ ID NO: 487)
GGCATTAATAAAGTGCA (SEQ ID NO: 488)
GCATTAATAAAGTGCAA (SEQ ID NO: 489)
CATTAATAAAGTGCAAA (SEQ ID NO: 490)
TACAGGCATTAATAAA (SEQ ID NO: 491)
ACAGGCATTAATAAAG (SEQ ID NO: 492)
CAGGCATTAATAAAGT (SEQ ID NO: 493)
AGGCATTAATAAAGTG (SEQ ID NO: 494)
GGCATTAATAAAGTGC (SEQ ID NO: 495)
GCATTAATAAAGTGCA (SEQ ID NO: 496)
CATTAATAAAGTGCAA (SEQ ID NO: 497)
ACAGGCATTAATAAA (SEQ ID NO: 498)
CAGGCATTAATAAAG (SEQ ID NO: 499)
AGGCATTAATAAAGT (SEQ ID NO: 500)
GGCATTAATAAAGTG (SEQ ID NO: 501)
GCATTAATAAAGTGC (SEQ ID NO: 502)
CATTAATAAAGTGCA (SEQ ID NO: 503)
CAGGCATTAATAAA (SEQ ID NO: 504)
AGGCATTAATAAAG (SEQ ID NO: 505)
GGCATTAATAAAGT (SEQ ID NO: 506)
GCATTAATAAAGTG (SEQ ID NO: 507)
CATTAATAAAGTGC (SEQ ID NO: 508)

Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S7 в форме гапмеров (LNA-сегмент 1-сегмент ДНК-LNA-сегмент 2) содержат сегмент LNA на терминальном 5'-конце, состоящий из 2-5, предпочтительно 2-4 звеньев LNA, и содержат сегмент LNA на терминальном 3'-конце, состоящий из 2-5, предпочтительно 2-4 звеньев LNA, и между двумя сегментами LNA один сегмент ДНК, состоящий из 6-14, предпочтительно 7-12 и более предпочтительно 8-11 звеньев ДНК.

Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S7 содержат нуклеотиды LNA (звенья LNA), как здесь описано, в частности, таковые, раскрытые в разделе «Замкнутые нуклеиновые кислоты» (LNA®) и, предпочтительно таковые, раскрытые в разделе «Предпочтительные LNA». Звенья LNA и звенья ДНК могут содержать обычные азотистые основания, такие как аденин (А), цитозин (С), гуанин (G), тимин (Т) и урацил (U), но могут также содержать модифицированные азотистые основания, как описано в разделе «Азотистые основания». Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S7 или сегменты LNA и сегмент ДНК антисмыслового олигонуклеотида могут содержать любую межнуклеотидную связь, как описано здесь, и в частности, таковые, раскрытые в разделе «Межнуклеотидные связи (IL)». Антисмысловые олигонуклеотиды формулы S7 необязательно могут также содержать концевые группы на терминальном 3'-конце и/или терминальном 5'-конце и в частности, таковые, раскрытые в разделе «Концевые группы».

Результаты экспериментов показали, что модифицированные азотистые основания незначительно увеличивают или изменяют активность антисмысловых олигонуклеотидов по изобретению в отношении тестированных неврологических и онкологических заболеваний. Было показано, что модифицированные азотистые основания 5-метилцитозин или 2-аминоаденин дополнительно повышают активность антисмысловых олигонуклеотидов формулы S7, особенно если 5-метилцитозин используется только в нуклеотидах LNA или в нуклеотидах LNA и в нуклеотидах ДНК и/или, если 2-аминоаденин используется в нуклеотидах ДНК и не в нуклеотидах LNA.

Предпочтительная гапмерная структура антисмысловых олигонуклеотидов формулы S7 является следующей: 3-8-3, 4-8-2, 2-8-4, 3-8-4, 4-8-3, 4-8-4, 3-9-3, 4-9-2, 2-9-4, 4-9-3, 3-9-4, 4-9-4, 3-10-3, 2-10-4, 4-10-2, 3-10-4, 4-10-3, 4-10-4, 2-11-4, 4-11-2, 3-11-4, 4-11-3 и еще более предпочтительной: 3-8-3, 3-8-4, 4-8-3, 4-8-4, 3-9-3, 4-9-3, 3-9-4, 4-9-4, 3-10-3, 3-10-4, 4-10-3, 4-10-4, 3-11-4 и 4-11-3.

В качестве звеньев LNA для антисмысловых олигонуклеотидов формулы S7, в частности, β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-ENA (b5), β-D-(NH)-LNA (b6), β-D-(NCH3)-LNA (b7), β-D-(ONH)-LNA (b8) и β-D-(ONCH3)-LNA (b9) являются предпочтительными. Результаты экспериментов показали, что все эти звенья LNA b1, b2, b4, b5, b6, b7, b8 и b9 можно синтезировать с требуемым усилием и обеспечить антисмысловые олигонуклеотиды с сопоставимой стабильностью и активностью. Однако, основываясь на экспериментах, звенья LNA b1, b2, b4, b5, b6 и b7 являются более предпочтительными. Еще более предпочтительными являются звенья LNA b1, b2, b4, b6 и b7, и еще более предпочтительными являются звенья LNA b1 и b4, и наиболее предпочтительным также в отношении сложности химического синтеза является β-D-окси-LNA (b1).

К настоящему времени не было найдено никакой конкретной 3'-концевой группы или 5'-концевой группы, которая заметно изменяла или повышала стабильность или активность в отношении онкологических или неврологических заболеваний, таким образом, 3'- и 5'-концевые группы возможны, но явно не являются предпочтительными.

Возможны различные межнуклеотидные мостики или межнуклеотидные связи. В приведенных здесь формулах межнуклеотидная связь IL представлена -IL'-Y-. Таким образом, IL=-IL'-Y-=-X''-P(=X')(X-)-Y-, где IL предпочтительно выбрана из группы, состоящей из: -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(CH3)-O-, -O-P(O)(OCH3)-O-, -O-P(O)(NH(CH3))-O-, -O-P(O)[N(CH3)2]-O-, -O-P(O)(BH3-)-O-, -O-P(O)(OCH2CH2OCH3)-O-, -O-P(O)(OCH2CH2SCH3)-O-, -O-P(O)(O-)-N(CH3)-, -N(CH3)-P(O)(O-)-O-. Предпочтительными являются межнуклеотидные связи IL, выбранные из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(OCH3)-O-, -O-P(O)(NH(CH3))-O-, -O-P(O)[N(CH3)2]-O-, -O-P(O)(OCH2CH2OCH3)-O-, и более предпочтительные, выбранные из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-, и еще более предпочтительные, выбранные из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, и наиболее предпочтительные, выбранные из -O-P(O)(O-)-O- и -O-P(O)(S-)-O-.

Таким образом, настоящее изобретение предпочтительно относится к антисмысловому олигонуклеотиду в форме гапмера, состоящему из 10-28 нуклеотидов, предпочтительно 11-24 нуклеотидов, более предпочтительно 12-20 и еще более предпочтительно 13-19 или 14-18 нуклеотидов, и 1-5 из этих нуклеотидов на терминальном 5'-конце и 1-5 нуклеотидов на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида представляют нуклеотиды LNA, и между нуклеотидами LNA на терминальном 5'-конце и терминальном 3'-конце находится последовательность, по меньшей мере, из 6, предпочтительно 7 и более предпочтительно 8 нуклеотидов ДНК, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью:

5'-N9-ATTAATAA-N10-3' (SEQ ID NO: 101)

где:

N9 представляет: CATATTTATATACAGGC-, ATATTTATATACAGGC-, TATTTATATACAGGC-, ATTTATATACAGGC-, TTTATATACAGGC-, TTATATACAGGC-,TATATACAGGC-, ATATACAGGC-, TATACAGGC-, ATACAGGC-, TACAGGC-, ACAGGC-, CAGGC-, AGGC-, GGC-, GC- или C-; и

N10 представляет: -AGTGCAAATGTTATTGG, -AGTGCAAATGTTATTG, -AGTGCAAATGTTATT, -AGTGCAAATGTTAT, -AGTGCAAATGTTA, -AGTGCAAATGTT, -AGTGCAAATGT, -AGTGCAAATG, -AGTGCAAAT, -AGTGCAAA, -AGTGCAA, -AGTGCA, -AGTGC, -AGTG, -AGT, -AG или -A, и

нуклеотиды LNA выбраны из β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-ENA (b5), β-D-(NH)-LNA (b6), β-D-(NCH3)-LNA (b7), β-D-(ONH)-LNA (b8) и β-D-(ONCH3)-LNA (b9); и предпочтительно из β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-(NH)-LNA (b6) и β-D-(NCH3)-LNA (b7); и

межнуклеотидные связи выбраны из: -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(CH3)-O-, -O-P(O)(OCH3)-O-, -O-P(O)(NH(CH3))-O-, -O-P(O)[N(CH3)2]-O-, -O-P(O)(BH3-)-O-, -O-P(O)(OCH2CH2OCH3)-O-, -O-P(O)(OCH2CH2SCH3)-O-, -O-P(O)(O-)-N(CH3)-, -N(CH3)-P(O)(O-)-O-;

и предпочтительно из -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида. Такие предпочтительные антисмысловые олигонуклеотиды могут не содержать какого-либо модифицированного терминального 3'- и 5'-конца или могут не содержать какой-либо 3'- и 5'-концевой группы, и могут в качестве модифицированного азотистого основания содержать 5-метилцитозин и/или 2-аминоаденин.

Более предпочтительно N9 представляет: TATTTATATACAGGC-, ATTTATATACAGGC-, TTTATATACAGGC-, TTATATACAGGC-, TATATACAGGC-, ATATACAGGC-, TATACAGGC-, ATACAGGC-, TACAGGC-, ACAGGC-, CAGGC-, AGGC-, GGC-, GC- или C-; и

N10 представляет: -AGTGCAAATGTTATT, -AGTGCAAATGTTAT, -AGTGCAAATGTTA, -AGTGCAAATGTT, -AGTGCAAATGT, -AGTGCAAATG, -AGTGCAAAT, -AGTGCAAA, -AGTGCAA, -AGTGCA, -AGTGC, -AGTG, -AGT, -AG или -A.

Еще более предпочтительно настоящее изобретение относится к антисмысловому олигонуклеотиду в форме гапмера, состоящему из 11-24 нуклеотидов, более предпочтительно 12-20 нуклеотидов и более предпочтительно 13-19 или 14-18 нуклеотидов, и 2-5 из этих нуклеотидов на терминальном 5'-конце и 2-5 нуклеотидов на терминальном 3'-конце антисмыслового олигонуклеотида представляют нуклеотиды LNA, и между нуклеотидами LNA на терминальном 5'-конце и терминальном 3'-конце находится последовательность, по меньшей мере, из 7, предпочтительно, по меньшей мере, 8 нуклеотидов ДНК, и антисмысловой олигонуклеотид способен гибридизоваться с участком гена, кодирующего TGF-RII, или с участком мРНК, кодирующей TGF-RII, где антисмысловой олигонуклеотид представлен следующей последовательностью:

5'-N9-ATTAATAA-N10-3' (SEQ ID NO: 101)

где:

N9 представляет: TTATATACAGGC-, TATATACAGGC-, ATATACAGGC-, TATACAGGC-, ATACAGGC-, TACAGGC-, ACAGGC-, CAGGC-, AGGC-, GGC-, GC- или C-; предпочтительно N9 представляет: ATATACAGGC-, TATACAGGC-, ATACAGGC-, TACAGGC-, ACAGGC-, CAGGC-, AGGC-, GGC-, GC- или C-; и

N10 представляет: -AGTGCAAATGTT, -AGTGCAAATGT, -AGTGCAAATG, -AGTGCAAAT, -AGTGCAAA, -AGTGCAA, -AGTGCA, -AGTGC, -AGTG, -AGT, -AG или -A; предпочтительно N10 представляет: -AGTGCAAATG, -AGTGCAAAT, -AGTGCAAA, -AGTGCAA, -AGTGCA, -AGTGC, -AGTG, -AGT, -AG или -A; и

нуклеотиды LNA выбраны из β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-(NH)-LNA (b6) и β-D-(NCH3)-LNA (b7); и межнуклеотидные связи выбраны из: -O-P(O)(O-)-O-, -O-P(O)(S-)-O-, -O-P(S)(S-)-O-, -S-P(O)(O-)-O-, -S-P(O)(S-)-O-, -O-P(O)(O-)-S-, -O-P(O)(S-)-S-, -S-P(O)(O-)-S-; и предпочтительно выбраны из фосфата, фосфоротиоата и фосфородитиоата;

и солям и оптическим изомерам антисмыслового олигонуклеотида. Такие предпочтительные антисмысловые олигонуклеотиды могут не содержать какого-либо модифицированного терминального 3'- и 5'-конца или могут не содержать какой-либо 3'- и 5'-концевой группы, и могут в качестве модифицированного азотистого основания содержать 5-метилцитозин и/или 2-аминоаденин.

Особенно предпочтительными являются гапмерные антисмысловые олигонуклеотиды последовательностей SEQ ID NO: 474-SEQ ID NO: 508, содержащие сегмент из 2-5, предпочтительно 2-4 и более предпочтительно 3-4 звеньев LNA на 3'-конце, и сегмент из 2-5, предпочтительно 2-4 и более предпочтительно 3-4 звеньев LNA на 5'-конце, и сегмент, по меньшей мере, из 6, предпочтительно 7 и более предпочтительно 8 звеньев ДНК между двумя сегментами звеньев LNA, где звенья LNA выбраны из: β-D-окси-LNA (b1), β-D-тио-LNA (b2), α-L-окси-LNA (b4), β-D-(NH)-LNA (b6) и β-D-(NCH3)-LNA (b7); и межнуклеотидные связи выбраны из фосфата, фосфоротиоата и фосфородитиоата. Такие предпочтительные антисмысловые олигонуклеотиды могут не содержать какого-либо модифицированного терминального 3'- и 5'-конца или могут не содержать какой-либо 3'- и 5'-концевой группы, и могут в качестве модифицированного азотистого основания содержать 5-метилцитозин в звеньях LNA, предпочтительно всех звеньях LNA и/или 2-аминоаденин в некоторых или всех звеньях ДНК, и/или 5-метилцитозин в некоторых или всех звеньях ДНК.

Также особенно предпочтительными являются гапмерные антисмысловые олигонуклеотиды из таблицы 9 (SEQ ID NO: 284a-236b).

Таблица 4
SP L SEQ ID NO. Последовательность, 5'-3'
357 10 232a C*b1sGb1sdTsdC*sdAsdTsdAsdGsAb1sC*b1
357 10 232b C*b1Gb1dTdC*dAdTdAdGAb1C*b1
356 12 233a Tb1sC*b1sGb1sdTsdC*sdAsdTsdAsdGsAb1sC*b1sC*b1
356 12 233b Tb1C*b1Gb1dTdC*dAdTdAdGAb1C*b1C*b1
356 12 233c Tb1sC*b1sGb1sdTsdC*sdAsdTsdAsdGsdAsC*b1sC*b1
356 12 233d Tb1sdC*sdGsdTsdC*sdAsdTsdAsdGsdAsC*b1sC*b1
356 12 233e Tb1sC*b1sdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsdC*sC*b1
355 13 234a Tb1sC*b1sGb1sTb1sdCsdAsdTsdAsdGsdAsC*b1sC*b1sGb1
355 13 234b Tb1C*b1Gb1Tb1dCdAdUdAdGdAC*b1C*b1Gb1
355 13 234c Tb1sC*b1sGb1sTb1sdC*sdAsdTsdAsdGsdAsC*b1sC*b1sGb1
355 13 234d Tb1sC*b1sGb1sdTsdC*sdA*sdTsdA*sdGsdA*sdC*sC*b1sGb1
355 13 234e Tb1sC*b1sdGsdTsdC*sdAsdTsdA*sdGsdA*sdC*sdCsGb1
355 13 234f Tb1sdCsdGsdTsdC*sdA*sdTsdAsdGsAb1sC*b1sC*b1sGb1
354 13 142c C*b1sGb1sTb1sdCsdAsdTsdAsdGsdAsdCsdCsGb1sAb1
355 14 143i C*b1sTb1sC*b1sGb1sdTsdCsdAsdTsdAsdGsAb1sC*b1sC*b1sGb1
355 14 143j C*b4ssTb4ssC*b4ssdGssdTssdCssdAssdTssdAssdGssdA*ssC*b4ssC*b4ssGb4
355 14 143h C*b1sTb1sdCsdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsC*b1sC*b1sGb1
355 14 143k C*b2ssTb2ssC*b2ssdGssdTssdCssdAssdTssdAssdGssdAssC*b2ssC*b2ssGb2
355 14 143m C*b1Tb1C*b1Gb1dUsdCsdAsdTsdAsdGsAb1C*b1C*b1Gb1
355 14 143n C*b1sTb1sC*b1sGb1sTb1sdCsdA*sdTsdA*sdGsdA*sC*b1sC*b1sGb1
355 14 143o C*b1sTb1sdCsdGsdUsdCsdAsdUsdAsGb1sAb1sC*b1sC*b1sGb1
355 14 143p C*b6sTb6sC*b6sGb6sdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsC*b6sC*b6sGb6
355 14 143q C*b7sTb7sC*b7sdGsdUsdCsdA*sdUsdA*sdGsdA*sC*b7sC*b7sGb7
355 14 143r C*b4sTb4sC*b4sGb4sdTsdC*sdA*sdTsdAsdGsdAsdC*sC*b4sGb4
355 14 143s C*b4Tb4C*b4Gb4dTdCdAdTdAdGdAdCC*b4Gb4
355 14 143t C*b1ssTb1ssC*b1ssdGssdTssdC*ssdAssdTssdAssdGssdAssC*b1ssC*b1ssGb1
355 14 143u C*b1Tb1sdCsdGsdUsdC*sdAsdUsdAsdGsdAsC*b1C*b1Gb1
355 14 143v C*b1Tb1sdC*sdGsdTsdC*sdA*sdTsdAsdGsdAsC*b1C*b1Gb1
355 14 143w C*b6sTb6sdC*dGdTdC*dAdTdAdGdAsC*b6sC*b6sGb6
355 14 143x C*b7sTb7sC*b7sGb7sdTsdC*sdAsdTsdAsdGsdAsC*b7sC*b7sGb7
355 14 143y C*b7sTb7sdC*sdGsdTsdCsdAsdUsdAsdGsAb7sC*b7sC*b7sGb7
355 14 143z C*b1sTb1sdC*sdGsdTsdC*sdAsdTsdAsdGsdAsC*b1sC*b1sGb1
355 14 143aa C*b1Tb1sdC*sdGsdTsdC*sdAsdTsdAsdGsdAsC*b1C*b1Gb1
355 14 143ab C*b1sTb1sdC*sdGsdTsdC*sdA*sdTsdAsdGsdA*sC*b1sC*b1sGb1
355 14 143ac C*b1sTb1sdC*sdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsC*b1sC*b1sGb1
355 14 143ad C*b1Tb1dC*dGdTdCdAdTdAdGdAC*b1C*b1Gb1
355 14 143ae C*b1sTb1sdC*dGdTdC*dAdTdAdGdAsC*b1sC*b1sGb1
355 14 143af /5SpC3s/C*b1sTb1sdC*dGdTdC*dA*dTdAdGdA*sC*b1sC*b1sGb1
355 14 143ag C*b1sTb1sdC*dGdTdC*dA*dTdAdGdA*sC*b1sC*b1sGb1/3SpC3s/
355 14 143ah /5SpC3s/C*b1sTb1sdC*dGdTdC*dA*dTdAdGdA*sC*b1sC*b1sGb1/3SpC3s/
355 14 143ai C*b1sTb1sdC*sdGsdUsdC*sdA*sdUsdA*sdGsdA*sC*b1sC*b1sGb1
355 14 143aj C*b1sTb1sC*b1sdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsC*b1sC*b1sGb1
356 14 145c Gb1sC*b1sTb1sdCsdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsAb1sC*b1sC*b1
354 15 235i C*b1sTb1sC*b1sGb1sdTdC*dAdTdAdGdAsC*b1sC*b1sGb1sAb1
354 15 235a C*b1ssTb1ssdCssdGssdTssdCssdAssdTssdAssdGssdAssdCssdCssdGssAb1
354 15 235b C*b1Tb1dCdGdTdCdAdTdAdGdAdCdCdGAb1
354 15 235c C*b1sTb1sdCsdGsdTsdCsdA*sdUsdAsdGsdAsdCsC*b1sGb1sAb1
354 15 235d C*b1Tb1sdCsdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsC*b1C*b1Gb1Ab1
354 15 235e C*b4sTb4sC*b4sdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsdCsdCsGb4sAb4
354 15 235f C*b6sTb6sC*b6sdGdTdCdA*dTdAdGdAdC*sC*b6sGb6sAb6
354 15 235g C*b1sTb1sC*b1sGb1sdTsdC*sdAsdTsdAsdGsdAsdC*sdC*sdGsAb1
354 15 235h C*b1ssTb1ssdCssdGssdUssdCssdAssdUssdAssdGssdAssdCssdCssGb1ssAb1
355 15 144c Gb1sC*b1sTb1sdCsdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsC*b1sC*b1sGb1
354 16 141c Gb1sC*b1sTb1sC*b1sdGsdTsdC*sdAsdTsdAsdGsdAsC*b1sC*b1sGb1sAb1
354 16 141d Gb1C*b1Tb1C*b1sdGsdTsdC*sdAsdTsdAsdGsdAsdCsC*b1Gb1Ab1
354 16 141e Gb4sC*b4sTb4sC*b4sdGsdTsdC*sdAsdTsdAsdGsdA*sdC*sdC*sGb4sAb4
354 16 141f Gb1sdC*sdTsdCsdGsdTsdC*sdA*sdTsdAsdGsdA*sdC*sdC*sdGsAb1
354 16 141g Gb2sC*b2sTb2sdCsdGsdUsdCsdAsdTsdA*sdGsdAsdCsC*b2sGb2sAb2
354 16 141h Gb4ssC*b4ssTb4ssdCssdGssdTssdCssdAssdTssdAssdGssdAssC*b4ssC*b4ssGb4ssAb4
354 16 141i Gb1C*b1dTdCdGdTdCdA*dTdA*dGdA*dCC*b1Gb1Ab1
354 16 141j Gb1sC*b1sTb1sdCsdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsdCsC*b1sGb1sAb1
351 16 139c C*b1sGb1sTb1sdCsdAsdTsdAsdGsdAsdCsdCsdGsdAsGb1sC*b1sC*b1
354 17 237a Tb1sGb1sC*b1sTb1sC*b1sdGsdTsdC*sdAsdTsdAsdGsAb1sC*b1sC*b1sGb1sAb1
354 17 237b Tb2sGb2sC*b2sdTsdGsdTsdC*sdAsdTsdAsdGsAb2sC*b2sC*b2sGb2sAb2
354 17 237c Tb1sGb1sC*b1sTb1sdC*sdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsdC*sC*b1sGb1sAb1
354 17 237d Tb1sdGsdCsdUsdC*sdGsdTsdC*sdAsdUsdAsdGsAb1sC*b1sC*b1sGb1sAb1
354 17 237e Tb1sGb1sC*b1sdTsdGsdTsdC*sdA*sdTsdA*sdGsAb1sC*b1sC*b1sGb1sAb1
354 17 237f Tb1Gb1dC*dTdGdTdC*dAdTdAdGdAC*b1C*b1Gb1Ab1
354 17 237g Tb1sdGsdC*sdTsdGsdTsdC*sdAsdTsdAsdGsdAsdC*sC*b1sGb1sAb1
354 17 237h Tb1Gb1C*b1Tb1C*b1dGdTdC*dA*dTdA*dGdA*dC*dC*Gb1Ab1
354 17 237i Tb1ssGb1ssC*b1ssTb1ssC*b1ssdGssdTssdCssdAssdTssdAssdGssdAssdCssC*b1ssGb1ssAb1
354 17 237j Tb4sGb4sC*b4sdTdGdTdCdA*dTdA*dGdA*sC*b4sC*b4sGb4sAb4
354 17 237k Tb6sGb6sC*b6sdUsdGsdUsdC*sdA*sdUsdA*sdGsdA*sdC*sC*b6sGb6sAb6
354 17 237m Tb7sGb7sC*b7sTb7sdC*dGdTdC*dAdTdAdGdAsC*b7sC*b7sGb7sAb7
353 18 238a Tb1sGb1sC*b1sTb1sC*b1sdGsdTsdC*sdAsdTsdAsdGsdAsC*b1sC*b1sGb1sAb1sGb1
353 18 238b Tb7sGb7sC*b7sTb7sC*b7sdGsdTsdC*sdAsdTsdAsdGsdAsdC*sdC*sdGsdAsGb7
353 18 238c Tb1sGb1sC*b1sTb1sdC*sdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsdC*sC*b1sGb1sAb1sGb1
353 18 238d Tb1sGb1sdC*sdTsdC*sdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsdC*sdC*sGb1sAb1sGb1
353 18 238e Tb1sGb1sC*b1sTb1sdC*sdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsdC*sdC*sGb1sAb1sGb1
353 18 238f Tb1Gb1dC*dUdC*dGdTdC*dAdTdAdGdA*C*b1C*b1Gb1Ab1Gb1
353 18 238g Tb4Gb4C*b4Tb4sdCsdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsC*b4C*b4Gb4Ab4Gb4
353 18 238h Tb1ssGb1ssC*b1ssdTssdC*ssdGssdTssdC*ssdAssdTssdA*ssdGssdAssdC*ssdC*ssGb1ssAb1ssGb1
353 18 238i Tb2Gb2C*b2dTdCdGdTdC*dAdTdAdGdAC*b2C*b2Gb2Ab2Gb2
352 19 239a Tb1sGb1sC*b1sTb1sC*b1sdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsdC*sC*b1sGb1sAb1sGb1sC*b1
352 19 239b Tb6Gb6C*b6Tb6C*b6dGdTdC*dAdTdAdGdAdC*C*b6Gb6Ab6Gb6C*b6
352 19 239c Tb1sGb1sC*b1sTb1sdC*sdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsdCsdCsdGsAb1sGb1sC*b1
352 19 239d Tb1sdGsdCsdTsdCsdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdA*sdC*sC*b1sGb1sAb1sGb1sC*b1
352 19 239e Tb4sGb4sdCsdUsdCsdGsdUsdCsdAsdTsdAsdGsdA*sdC*sdC*sGb4sAb4sGb4sC*b4
352 19 239f Tb2ssGb2ssC*b2ssTb2ssC*b2ssdGssdTssdCssdAssdTssdAssdGssdAssdCssdCssdGssdAssGb2ssC*b2
352 20 240a C*b1sTb1sGb1sC*b1sTb1sdC*sdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsdC*sC*b1sGb1sAb1sGb1sC*b1
352 20 240b C*b2sTb2sGb2sdC*sdTsdC*sdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsdC*sC*b2sGb2sAb2sGb2sC*b2
352 20 240c C*b1Tb1Gb1dC*dTdC*dGdTdCdAdTdAdGdAdC*dC*Gb1Ab1Gb1C*b1
352 20 240d C*b1sdUsdGsdCsdUsdC*sdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsdC*sC*b1sGb1sAb1sGb1sC*b1
352 20 240e C*b4sTb4sGb4sC*b4sdTsdCsdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsdCsdCsGb4sAb4sGb4sC*b4
351 22 241a Gb1sC*b1sTb1sGb1sC*b1sdTsdC*sdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsdCsdC*sGb1sAb1sGb1sC*b1sC*b1
351 22 241b Gb1C*b1Tb1Gb1C*b1dTdC*dGdTdC*dAdTdAdGdAdC*dC*Gb1Ab1Gb1C*b1C*b1
351 22 241c Gb1sC*b1sTb1sGb1sC*b1sdTsdCsdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsdCsdCsGb1sAb1sGb1sC*b1sC*b1
350 24 242a C*b1sGb1sC*b1sTb1sGb1sdCsdTsdCsdGsdTsdCsdAsdTsdAsdGsdAsdCsdC*sdGsAb1sGb1sC*b1sC*b1sC*b1
350 24 242b C*b1Gb1C*b1Tb1Gb1dC*dTdCdGdTdCdAdTdAdGdAdCdC*dGAb1Gb1C*b1 C*b1C*b1
349 26 243a C*b1sC*b1sGb1sC*b1sTb1sdGsdC*sdTsdCsdGsdTsdC*sdAsdTsdAsdGsdAsdCsdC*sdGsdAsGb1sC*b1sC*b1sC*b1sC*b1
349 26 243b C*b1C*b1Gb1C*b1Tb1dGdC*dTdCdGdTdC*dAdTdAdGdAdCdC*dGdAGb1C*b1C*b1C*b1C*b1
348 28 244a C*b1sC*b1sC*b1sGb1sC*b1sdTsdGsdCsdTsdCsdGsdTsdC*sdAsdTsdAsdGsdAsdC*sdCsdGsdAsdGsC*b1sC*b1sC*b1sC*b1sC*b1
348 28 244b C*b1C*b1C*b1Gb1C*b1dTdGdC*dTdCdGdTdC*dAdTdAdGdAdC*dCdGdAdGC*b1C*b1C*b1C*b1C*b1
Таблица 5
SP L SEQ ID NO. Последовательность, 5'-3'
431 10 245a Tb1sAb1sdC*sdGsdCsdGsdTsdC*sC*b1sAb1
431 10 245b Tb1Ab1dCdGdC*dGdTdCC*b1Ab1
430 12 246a Ab1sTb1sAb1sdC*sdGsdCsdGsdTsdCsC*b1sAb1sC*b1
430 12 246b Ab1Tb1Ab1dCdGdCdGdTdC*C*b1Ab1C*b1
430 12 246c Ab1sTb1sAb1sdCsdGsdCsdGsdTsdC*sdC*sAb1sC*b1
430 12 246d Ab1sTb1sdA*sdC*sdGsdCsdGsdTsdC*sdC*sdA*sC*b1
430 12 246e Ab1sdTsdA*sdC*sdGsdC*sdGsdTsdC*sdC*sAb1sC*b1
430 13 247a Gb1sAb1sTb1sAb1sdCsdGsdCsdGsdTsdCsC*b1sAb1sC*b1
430 13 247b Gb1Ab1Tb1Ab1dCdGdCdGdUdCC*b1Ab1C*b1
430 13 247c Gb1sAb1sTb1sAb1sdC*sdGsdCsdGsdTsdC*sC*b1sAb1sC*b1
430 13 247d Gb1sAb1sTb1sdA*sdCsdGsdCsdGsdTsdCsdC*sAb1sC*b1
430 13 247e Gb1sAb1sdTsdA*sdCsdGsdC*sdGsdTsdCsdC*sdA*sC*b1
430 13 247f Gb1sdA*sdTsdA*sdC*sdGsdCsdGsdTsC*b1sC*b1sAb1sC*b1
431 13 153f C*b1sGb1sAb1sdTsdAsdCsdGsdCsdGsdTsdCsC*b1sAb1
429 14 248a Gb1sAb1sTb1sAb1sdC*sdGsdC*sdGsdTsdC*sC*b1sAb1sC*b1sAb1
429 14 248b Gb1Ab1Tb1Ab1sdC*sdGsdCsdGsdTsdC*sdC*sAb1C*b1Ab1
429 14 248c Gb4sAb4sTb4sAb4sdC*sdGsdCsdGsdTsdC*sdC*sdA*sC*b4sAb4
429 14 248d Gb1sdA*sdTsdAsdCsdGsdCsdGsdTsdCsdC*sdA*sdCsAb1
429 14 248e Gb2sAb2sTb2sdA*sdCsdGsdCsdGsdUsdCsdCsAb2sC*b2sAb2
429 14 248f Gb4ssAb4ssdTssdAssdCssdGssdCssdGssdTssdCssdCssAb4ssC*b4ssAb4
429 14 248g Gb1Ab1dTdA*dCdGdCdGdTdCC*b1Ab1C*b1Ab1
429 15 152h C*b1sGb1sAb1sTb1sdAsdCsdGsdCsdGsdTsdCsdCsAb1sC*b1sAb1
429 15 152i C*b1Gb1Ab1Tb1sdAsdCsdGsdCsdGsdUsdCsdC*sAb1C*b1Ab1
429 15 152j C*b1Gb1Ab1Tb1sdA*sdCsdGsdCsdGsdUsdCsdCsAb1C*b1Ab1
429 15 152k C*b6sGb6sAb6sTb6sdAdC*dGdCdGdTdCdC*sAb6sC*b6sAb6
429 15 152m C*b1sGb1sAb1sTb1sdAsdCsdGsdCsdGsdTsdC*sdC*sAb1sC*b1sAb1
429 15 152n C*b1Gb1Ab1Tb1sdAsdC*sdGsdC*sdGsdTsdC*sdC*sAb1C*b1Ab1
429 15 152o C*b1sGb1sAb1sTb1sdA*sdCsdGsdCsdGsdTsdCsdC*sAb1sC*b1sAb1
429 15 152p C*b1sGb1sAb1sTb1sdAsdCsdGsdCsdGsdTsdCsdC*sAb1sC*b1sAb1
429 15 152q C*b1Gb1Ab1Tb1dAdCdGdC*dGdTdCdC*Ab1C*b1Ab1
429 15 152r C*b1sGb1sAb1sTb1sdAdC*dGdC*dGdTdC*dC*sAb1sC*b1sAb1
429 15 152s /5SpC3s/C*b1sGb1sAb1sTb1sdAsdC*sdGsdC*sdGsdTsdCsdCsAb1sC*b1sAb1
429 15 152t C*b1sGb1sAb1sTb1sdAsdC*sdGsdCsdGsdTsdCsdC*sAb1sC*b1sAb1/3SpC3s/
429 15 152u /5SpC3s/C*b1sGb1sAb1sTb1sdAsdC*sdGsdC*sdGsdTsdCsdCsAb1sC*b1sAb1/3SpC3s/
429 15 152v C*b1sGb1sAb1sTb1sdA*sdC*sdGsdC*sdGsdUsdC*sdC*sAb1sC*b1sAb1
429 15 152w C*b7sGb7sAb7sdTsdAsdCsdGsdC*sdGsdTsdCsC*b7sAb7sC*b7sAb7
429 15 152z C*b7sGb7sdAsdUsdAsdCsdGsdC*sdGsdUsdCsC*b7sAb7sC*b7sAb7
429 15 152aa C*b1ssGb1ssAb1ssdTssdAssdC*ssdGssdCssdGssdTssdCssdC*ssAb1ssC*b1ssAb1
429 15 152ab C*b4ssGb4ssAb4ssdTssdA*ssdCssdGssdCssdGssdTssdCssdCssdA*ssC*b4ssAb4
429 15 152ac C*b2ssGb2ssAb2ssTb2ssdAssdCssdGssdCssdGssdTssdCssdCssdAssdCssAb2
429 15 152ad C*b1Gb1Ab1Tb1dAdCdGdCdGdUdCC*b1Ab1C*b1Ab1
429 15 152ae C*b1sGb1sAb1sTb1sAb1sdCsdGsdCsdGsdUsdCsdCsAb1sC*b1sAb1
429 15 152af C*b1sGb1sdA*sdTsdA*sdCsdGsdCsdGsdTsC*b1sC*b1sAb1sC*b1sAb1
429 15 152ag C*b6sGb6sAb6sdTsdAsdCsdGsdCsdGsdTsdCsC*b6sAb6sC*b6sAb6
429 15 152ah C*b7sGb7sAb7sdUsdA*sdCsdGsdCsdGsdUsdCsdCsAb7sC*b7sAb7
429 15 152ai C*b4sGb4sAb4sTb4sdA*sdCsdGsdCsdGsdTsdC*sdC*sdA*sC*b4sAb4
429 15 152aj C*b4Gb4Ab4Tb4dAdCdGdCdGdTdCdCdAC*b4Ab4
429 15 152ak C*b1sGb1sAb1sdTsdAsdCsdGsdCsdGsdTsdCsdCsAb1sC*b1sAb1
428 16 249a C*b1sGb1sAb1sTb1sdAdCdGdCdGdTdCdC*sAb1sC*b1sAb1sGb1
428 16 249b C*b1ssGb1ssdAssdTssdAssdCssdGssdCssdGssdTssdCssdCssdAssdCssdAssGb1
428 16 249c C*b1Gb1dAdTdAdCdGdCdGdTdCdCdAdCdAGb1
428 16 249d C*b1sGb1sdAsdUsdAsdC*sdGsdCsdGsdUsdCsdC*sdAsC*b1sAb1sGb1
428 16 249e C*b1Gb1sdAsdTsdAsdC*sdGsdC*sdGsdTsdCsdC*sAb1C*b1Ab1Gb1
428 16 249f C*b4sGb4sAb4sdTsdAsdCsdGsdCsdGsdTsdCsdCsdAsdCsAb4sGb4
428 16 249g C*b6Gb6Ab6dTdA*dCdGdCdGdTdC*dCdA*C*b6Ab6Gb6
428 16 249h C*b1sGb1sAb1sTb1sdAsdC*sdGsdCsdGsdTsdCsdC*sdAsdC*sdAsGb1
428 16 249i C*b1ssGb1ssdAssdUssdAssdCssdGssdCssdGssdUssdCssdCssdAssdCssAb1ssGb1
428 17 250a Gb1sC*b1sGb1sAb1sTb1sdAsdCsdGsdC*sdGsdTsdCsC*b1sAb1sC*b1sAb1sGb1
428 17 250b Gb1sC*b1sGb1sAb1sdTsdAsdC*sdGsdC*sdGsdTsdC*sdC*sdAsC*b1sAb1sGb1
428 17 250c Gb1sdC*sdGsdAsdUsdAsdCsdGsdC*sdGsdUsdCsC*b1sAb1sC*b1sAb1sGb1
428 17 250d Gb1sC*b1sGb1sdA*sdTsdA*sdC*sdGsdC*sdGsdTsdC*sC*b1sAb1sC*b1sAb1sGb1
428 17 250e Gb1C*b1dGdAdTdAdCdGdC*dGdTdCdC*Ab1C*b1Ab1Gb1
428 17 250f Gb1sdC*sdGsdAsdTsdAsdCsdGsdC*sdGsdTsdCsdCsdAsC*b1sAb1sGb1
428 17 250g Gb2sC*b2sGb2sdAsdTsdAsdCsdGsdC*sdGsdTsdC*sC*b2sAb2sC*b2sAb2sGb2
428 17 250h Gb1C*b1Gb1Ab1Tb1dA*dCdGdC*dGdTdC*dCdA*dC*Ab1Gb1
428 17 250i Gb1ssC*b1ssGb1ssAb1ssTb1ssdAssdCssdGssdCssdGssdTssdCssdCssdAssC*b1ssAb1ssGb1
428 17 250j Gb4sC*b4sGb4sdA*sdTsdA*sdCsdGsdCsdGsdTsdCsdCsAb4sC*b4sAb4sGb4
428 17 250k Gb6sC*b6sGb6sdA*sdUsdAsdCsdGsdCsdGsdUsdC*sdCsdA*sC*b6sAb6sGb6
428 17 250m Gb7sC*b7sGb7sAb7sdTdAdCdGdCdGdTdC*dCsAb7sC*b7sAb7sGb7
427 18 251a Gb1sC*b1sGb1sAb1sTb1sdAsdCsdGsdCsdGsdTsdCsdC*sAb1sC*b1sAb1sGb1sGb1
427 18 251b Gb7sC*b7sGb7sAb7sTb7sdAsdC*sdGsdCsdGsdTsdCsdCsdAsdCsdAsdGsGb7
427 18 251c Gb1sC*b1sGb1sAb1sdTsdAsdC*sdGsdCsdGsdTsdCsdC*sdAsC*b1sAb1sGb1sGb1
427 18 251d Gb1sC*b1sGb1sdAsdTsdAsdC*sdGsdC*sdGsdTsdCsdC*sdAsC*b1sAb1sGb1sGb1
427 18 251e Gb1sC*b1sGb1sAb1sdTsdAsdC*sdGsdCsdGsdTsdCsdC*sdAsdC*sAb1sGb1sGb1
427 18 251f Gb1C*b1dGdAdUdA*dCdGdCdGdTdC*dC*Ab1C*b1Ab1Gb1Gb1
427 18 251g Gb4C*b4Gb4Ab4sdTsdAsdCsdGsdCsdGsdTsdCsdCsAb4C*b4Ab4Gb4Gb4
427 18 251h Gb1ssC*b1ssGb1ssdA*ssdTssdA*ssdCssdGssdCssdGssdTssdCssdCssdA*ssdC*ssAb1ssGb1ssGb1
427 18 251i Gb2C*b2Gb2dAdTdAdCdGdC*dGdTdCdC*Ab2C*b2Ab2Gb2Gb2
426 19 252a Gb1sC*b1sGb1sAb1sTb1sdAsdC*sdGsdCsdGsdTsdCsdCsdAsC*b1sAb1sGb1sGb1sAb1
426 19 252b Gb6C*b6Gb6Ab6Tb6dAdC*dGdCdGdTdCdC*dAC*b6Ab6Gb6Gb6Ab6
426 19 252c Gb1sC*b1sGb1sdAsdTsdAsdCsdGsdCsdGsdTsdCsdCsdAsdC*sAb1sGb1sGb1sAb1
426 19 252d Gb1sdC*sdGsdA*sdTsdA*sdC*sdGsdCsdGsdTsdCsdCsdA*sC*b1sAb1sGb1 sGb1sAb1
426 19 252e Gb4sC*b4sdGsdAsdUsdAsdCsdGsdCsdGsdUsdCsdCsdAsdC*sAb4sGb4sGb4sAb4
426 19 252f Gb2ssC*b2ssGb2ssAb2ssTb2ssdAssdCssdGssdCssdGssdTssdCssdCssdAssdCssdAssdGssGb2ssAb2
426 20 253a Gb1sGb1sC*b1sGb1sAb1sdTsdAsdCsdGsdCsdGsdTsdC*sdC*sdAsC*b1sAb1sGb1sGb1sAb1
426 20 253b Gb2sGb2sC*b2sdGsdAsdTsdAsdC*sdGsdCsdGsdTsdC*sdC*sdAsC*b2sAb2sGb2sGb2sAb2
426 20 253c Gb1Gb1C*b1dGdAdTdAdCdGdCdGdTdCdCdAdC*Ab1Gb1Gb1Ab1
426 20 253d Gb1sdGsdCsdGsdAsdTsdAsdCsdGsdC*sdGsdUsdCsdCsdAsC*b1sAb1sGb1sGb1sAb1
426 20 253e Gb4sGb4sC*b4sGb4sdAsdTsdAsdCsdGsdCsdGsdTsdCsdCsdAsdCsAb4sGb4sGb4sAb4
425 22 254a Tb1sGb1sGb1sC*Gb1sdAsdTsdAsdCsdGsdCsdGsdTsdCsdCsdAsdC*sAb1sGb1sGb1sAb1sC*b1
425 22 254b Tb1Gb1Gb1C*b1Gb1dAdTdAdC*dGdCdGdTdCdC*dAdCAb1Gb1Gb1Ab1C*b1
425 22 254c Tb6sGb6sGb6sC*b6sdGsdAsdTsdAsdCsdGsdCsdGsdTsdCsdCsdAsdCsdAsdGsGb6sAb6sC*b6
424 24 255a C*b1sTb1sGb1sGb1sC*b1sdGsdAsdTsdAsdCsdGsdC*sdGsdTsdCsdC*sdAsdCsdAsGb1sGb1sAb1sC*b1sGb1
424 24 255b C*b1Tb1Gb1Gb1C*b1dGdAdTdAdCdGdC*dGdTdCdC*dAdC*dAGb1Gb1Ab1C*b1Gb1
423 26 256a Gb1sC*b1sTb1sGb1sGb1sdC*sdGsdAsdTsdAsdCsdGsdCsdGsdTsdCsdCsdAsdCsdAsdGsGb1sAb1sC*b1sGb1sAb1
423 26 256b Gb1C*b1Tb1Gb1Gb1dC*dGdAdTdAdCdGdCdGdTdCdCdAdC*dAdGGb1Ab1C*b1Gb1Ab1
422 28 257a Tb1sGb1sC*b1sTb1sGb1sdGsdCsdGsdAsdTsdAsdC*sdGsdC*sdGsdTsdCsdCsdAsdCsdAsdGsGb1sAb1sC*b1sGb1sAb1
422 28 257b Tb1Gb1C*b1Tb1Gb1dGdCdGdAdTdAdCdGdCdGdTdCdC*dAdC*dAdGGb1Ab1C*b1Gb1Ab1
Таблица 6
SP L SEQ ID NO. Последовательность, 5'-3'
2067 10 258a Gb1sTb1sdGsdTsdTsdTsdA*sdGsGb1sGb1
2067 10 258b Gb1sTb1sdGsdUsdTsdTsdA*sdGsGb1sGb1
2066 12 259a Ab1sGb1sTb1sdGsdTsdTsdTsdA*sdGsGb1sGb1sAb1
2066 12 259b Ab1Gb1Tb1dGdUdUdUdA*dGGb1Gb1Ab1
2066 12 259c Ab1sGb1sTb1sdGsdTsdTsdTsdA*sdGsdGsGb1sAb1
2066 12 259d Ab1sGb1sdTsdGsdTsdTsdTsdA*sdGsdGsdGsAb1
2066 12 259e Ab1sdGsdTsdGsdTsdTsdTsdA*sdGsdGsGb1sAb1
2066 13 260a Tb1sAb1sGb1sTb1sdGsdTsdTsdTsdAsdGsGb1sGb1sAb1
2066 13 260b Tb1Ab1Gb1Tb1dGdUdUdUdAdGGb1Gb1Ab1
2066 13 260c Tb1sAb1sGb1sTb1sdGsdTsdTsdTsdA*sdGsGb1sGb1sAb1
2066 13 260d Tb1sAb1sGb1sdUsdGsdTsdTsdTsdA*sdGsdGsGb1sAb1
2066 13 260e Tb1sAb1sdGsdUsdGsdUsdUsdUsdA*sdGsdGsdGsAb1
2066 13 260f Tb1sdA*sdGsdTsdGsdTsdTsdUsdA*sGb1sGb1sGb1sAb1
2065 14 261a Tb1sAb1sGb1sTb1sdGsdTsdTsdTsdA*sdGsGb1sGb1sAb1sGb1
2065 14 261b Tb1Ab1Gb1Tb1sdGsdTsdTsdTsdA*sdGsdGGb1Ab1Gb1
2065 14 261c Tb4sAb4sGb4sTb4sdGsdUsdTsdUsdA*sdGsdGsdGsAb4sGb4
2065 14 261d Tb1sdA*sdGsdUsdGsdTsdTsdUsdA*sdGsdGsdGsdA*sGb1
2065 14 261e Tb2sAb2sGb2sdUsdGsdUsdUsdTsdAsdGsdGsGb2sAb2sGb2
2065 14 261f Tb4sAb4sdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsGb4sAb4sGb4
2065 14 261g Tb1Ab1dGdTdGdTdTdTdA*dGGb1Gb1Ab1Gb1
2064 15 262a Tb1sAb1sGb1sTb1sdGdTdTdTdA*dGdGsGb1sAb1sGb1sC*b1
2064 15 262b Tb1ssAb1ssdGssdTssdGssdTssdTssdTssdAssdGssdGssdGssdAssdGssC*b1
2064 15 262c Tb1sAb1sdGsdUsdGsdUsdUsdUsdA*sdGsdGsdGsAb1sGb1sC*b1
2064 15 262d Tb1dAdGdTdGdTdTdTdAdGdGdGdAdGC*b1
2064 15 262e Tb1Ab1sdGsdUsdGsdUsdTsdUsdAsdGsdGsGb1Ab1Gb1C*b1
2064 15 262f Tb4sAb4sGb4sdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdsdGsdAsGb4sC*b4
2064 15 262g Tb6Ab6Gb6dUdGdTdTdUdAdGdGdGAb6Gb6C*b6
2064 15 262h Tb1sAb1sGb1sTb1sdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsdAsdGsC*b1
2064 15 262i Tb1ssAb1ssdGssdTssdGssdUssdUssdUssdAssdGssdGssdGssdAssGb1ssC*b1
2064 16 209s Gb1Tb1dAsdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsAb1Gb1C*b1
2064 16 209t Gb1sTb1sdA*sdGsdTsdGsdTsdTsdTsdA*sdGsdGsdGsAb1sGb1sC*b1
2064 16 209u Gb1Tb1dAdGdTdGdTdTdTdAdGdGdGAb1Gb1C*b1
2064 16 209v /5SpC3s/Gb1sTb1sdAsdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsAb1sGb1sC*b1
2064 16 209w Gb1sTb1sdAsdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsAb1sGb1sC*b1/s3SpC3/
2064 16 209x /5SpC3s/Gb1sTb1sdAsdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsAb1sGb1sC*b1/3SpC3s/
2064 16 209y Gb1sTb1sdAsdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsAb1sGb1sC*b1
2064 16 209aa Gb1Tb1dA*sdGsdUsdGsdUsdUsdUsdAsdGsdGsdGsAb1Gb1C*b1
2064 16 209ab Gb1Tb1dA*sdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsAb1Gb1C*b1
2064 16 209ac Gb6sTb6sdA*dGdTdGdTdTdTdA*dGdGdGAb6sGb6sC*b6
2064 16 209ad Gb1sTb1sdA*sdGsdUsdGsdUsdUsdUsdA*sdGsdGsdGsAb1sGb1sC*b1
2064 16 209ae Gb1sTb1sdA*sdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsAb1sGb1sC*b1
2064 16 209af Gb1sTb1sdAsdGsdTsdGsdTsdTsdTsdA*sdGsdGsdGsAb1sGb1sC*b1
2064 16 209ag Gb1Tb1dA*dGdTdGdTdTdTdA*dGdGdGAb1Gb1C*b1
2064 16 209ah Gb1Tb1dAdGdTdGdTdTdTdA*dGdGdGAb1Gb1C*b1
2064 16 209ai Gb6sTb6sdA*dGdTdGdTdTdTdAdGdGdGAb6sGb6sC*b6
2064 16 209aj Gb1sTb1sdA*sdGsdUsdGsdTsdTsdUsdA*sdGsdGsdGsAb1sGb1sC*b1
2064 16 209ak Gb7sTb7sAb7sGb7sdTsdGsdTsdTsdTsdA*sdGsdGsdGsAb7sGb7sC*b7
2064 16 209am Gb7sTb7sdAsdGsdTsdGsdTsdTsdUsdA*sdGsdGsGb7sAb7sGb7sC*b7
2064 16 209an Gb1ssTb1ssAb1ssdGssdTssdGssdTssdTssdTssdA*ssdGssdGssdGssAb1ssGb1ssC*b1
2064 16 209ao Gb4ssTb4ssAb4ssdGssdTssdGssdTssdTssdTssdAssdGssdGssdGssdA*ssGb4ssC*b4
2064 16 209ap Gb2ssTb2ssAb2ssGb2ssdTssdGssdTssdTssdTssdAssdGssdGssdGssdAssdGssC*b2
2064 16 209aq Gb1Tb1Ab1Gb1dUdGdUdUdUdAdGdGGb1Ab1Gb1C*b1
2064 16 209ar Gb1sTb1sAb1sGb1sTb1sdGsdTsdTsdTsdA*sdGsdGsdGsAb1sGb1sC*b1
2064 16 209as Gb1sTb1sdAsdGsdTsdGsdTsdTsdUsdAsdGsGb1sGb1sAb1sGb1sC*b1
2064 16 209at Gb6sTb6sAb6sGb6sdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsAb6sGb6sC*b6
2064 16 209au Gb7sTb7sAb7sdGsdUsdGsdTsdTsdTsdA*sdGsdGsdGsAb7sGb7sC*b7
2064 16 209av Gb4sTb4sAb4sGb4sdUsdGsdTsdUsdTsdA*sdGsdGsdGsdA*sGb4sC*b4
2064 16 209aw Gb4Tb4Ab4Gb4dTdGdTdTdTdAdGdGdGdAGb4C*b4
2064 16 209ax Gb1sTb1sAb1sdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsAb1sGb1sC*b1
2064 16 209az Gb1sTb1sAb1sdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsGb1sAb1sGb1sC*b1
2064 16 209ba Gb1sTb1sAb1sGb1sdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsGb1sAb1sGb1sC*b1
2064 16 209bb Gb1sTb1sAb1sdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsdAsGb1sC*b1
2063 17 263a Gb1sTb1sAb1sGb1sTb1sdGsdTsdTsdTsdA*sdGsdGsGb1sAb1sGb1sC*b1sC*b1
2063 17 263b Gb2sTb2sAb2sdGsdTsdGsdTsdTsdTsdA*sdGsdGsGb2sAb2sGb2sC*b2sC*b2
2063 17 263c Gb1sTb1sAb1sGb1sdTsdGsdTsdTsdTsdA*sdGsdGsdGsAb1sGb1sC*b1sC*b1
2063 17 263d Gb1sdUsdA*sdGsdUsdGsdUsdTsdTsdA*sdGsdGsGb1sAb1sGb1sC*b1sC*b1
2063 17 263e Gb1sTb1sAb1sdGsdTsdGsdUsdTsdTsdA*sdGsdGsGb1sAb1sGb1sC*b1sC*b1
2063 17 263f Gb1Tb1dA*dGdTdGdTdTdTdA*dGdGdGAb1Gb1C*b1C*b1
2063 17 263g Gb1sdTsdA*sdGsdTsdGsdTsdTsdTsdA*sdGsdGsdGsdA*sGb1sC*b1sC*b1
2063 17 263h Gb1Tb1Ab1Gb1Tb1dGdTdUdTdAdGdGdGdA*dGC*b1C*b1
2063 17 263i Gb1ssTb1ssAb1ssGb1ssTb1ssdGssdTssdTssdTssdAssdGssdGssdGssdAssGb1ssC*b1ssC*b1
2063 17 263j Gb4Tb4dA*dGdTdGdTdTdTdAdGdGdGdA*Gb4C*b4C*b4
2063 17 263k Gb6sTb6sAb6sdGsdTsdGsdUsdUsdTsdAsdGsdGsdGsdA*sGb6sC*b6sC*b6
2063 17 263m Gb7sTb7sAb7sGb7sdTdGdTdTdTdA*dGdGdGsAb7sGb7sC*b7sC*b7
2063 18 264a Gb1sGb1sTb1sAb1sGb1sdTsdGsdTsdTsdTsdA*sdGsdGsGb1sAb1sGb1sC*b1sC*b1
2063 18 264b Gb7sGb7sTb7sAb7sGb7sdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsdAsdGsdC*sC*b7
2063 18 264c Gb1sGb1sTb1sAb1sGb1sdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsdA*sdGsdC*sC*b1
2063 18 264d Gb1sGb1sTb1sAb1sGb1sdUsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsdA*sdGsdC*sC*b1
2063 18 264e Gb1sGb1sTb1sAb1sdGsdTsdGsdTsdTsdTsdA*sdGsdGsdGsAb1sGb1sC*b1sC*b1
2063 18 264f Gb1sGb1sTb1sdA*sdGsdTsdGsdTsdTsdTsdA*sdGsdGsdGsAb1sGb1sC*b1sC*b1
2063 18 264g Gb1sGb1sTb1sAb1sdGsdTsdGsdTsdTsdTsdA*sdGsdGsdGsdA*sGb1sC*b1sC*b1
2063 18 264h Gb1Gb1dUdA*dGdTdGdTdTdTdAdGdGGb1Ab1Gb1C*b1C*b1
2063 18 264i Gb4Gb4Tb4Ab4dGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsGb4Ab4Gb4C*b4C*b4
2063 18 264j Gb1ssGb1ssTb1ssdA*ssdGssdTssdGssdUssdTssdTssdA*ssdGssdGssdGssdA*ssGb1ssC*b1ssC*b1
2063 18 264k Gb2Gb2Tb2dA*dGdTdGdTdTdTdAdGdGGb2Ab2Gb2C*b2C*b2
2062 19 265a Gb1sGb1sTb1sAb1sGb1sdTsdGsdTsdTsdTsdA*sdGsdGsdGsAb1sGb1sC*b1sC*b1sGb1
2062 19 265b Gb6Gb6Tb6Ab6Gb6dTdGdTdTdTdA*dGdGdGAb6Gb6C*b6C*b6Gb6
2062 19 265c Gb1sGb1sTb1sAb1sdGsdTsdGsdTsdTsdTsdA*sdGsdGsdGsdA*sdGsC*b1sC*b1sGb1
2062 19 265d Gb1sdGsdTsdA*sdGsdUsdGsdTsdUsdTsdA*sdGsdGsdGsAb1sGb1sC*b1sC*b1sGb1
2062 19 265e Gb4sGb4sdUsdAsdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsdA*sGb4sC*b4sC*b4sGb4
2062 19 265f Gb2ssGb2ssTb2ssAb2ssGb2ssdTssdGssdTssdTssdTssdAssdGssdGssdGssdAssdGssdCssC*b2ssGb2
2062 20 266a Tb1sGb1sGb1sTb1sAb1sdGsdTsdGsdTsdTsdTsdA*sdGsdGsdGsAb1sGb1sC*b1sC*b1sGb1
2062 20 266b Tb2sGb2sGb2sdTsdA*sdGsdTsdGsdTsdTsdTsdA*sdGsdGsdGsAb2sGb2sC*b2sC*b2sGb2
2062 20 266c Gb1Gb1Tb1dA*dGdTdGdTdTdTdA*dGdGdGdA*Gb1C*b1C*b1Gb1
2062 20 266d Tb1sdGsdGsdUsdA*sdGsdTsdGsdTsdUsdTsdA*sdGsdGsdGsAb1sGb1sC*b1sC*b1sGb1
2062 20 266e Tb4sGb4sGb4sTb4sdAsdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsdAsGb4sC*b4 sC*b4sGb4
2061 22 267a Tb1sTb1sGb1sGb1sTb1sdAsdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsdA*sGb1 sC*b1sC*b1sGb1sTb1
2061 22 267b Tb1Tb1Gb1Gb1Tb1dA*dGdTdGdTdTdTdAdGdGdGdA*Gb1C*b1C*b1Gb1Tb1
2061 22 267c Tb6sTb6sGb6sdGsdTsdAsdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsdAsGb6sC*b6sC*b6sGb6sTb6
2060 24 268a Tb1sTb1sTb1sGb1sGb1sdTsdA*sdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsdAsdGC*b1sC*b1sGb1sTb1sC*b1
2060 24 268b Tb1Tb1Tb1Gb1Gb1dTdA*dGdTdGdTdTdTdAdGdGdGdA*dGC*b1C*b1Gb1Tb1C*b1
2059 26 269a Ab1sTb1sTb1sTb1sGb1sdGsdTsdAsdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsdAsdGsdC*sC*b1sGb1sTb1sC*b1sTb1
2059 26 269b Ab1Tb1Tb1Tb1Gb1dGdTdAdGdTdGdTdTdTdAdGdGdGdAdGdC*C*b1Gb1Tb1C*b1Tb1
2058 28 270a Tb1sAb1sTb1sTb1sTb1sdGsdGsdTsdAsdGsdTsdGsdTsdTsdTsdAsdGsdGsdGsdAsdGsdC*sdCsGb1sTb1sC*b1sTb1sTb1
2058 28 270b Tb1Ab1Tb1Tb1Tb1dGdGdTdAdGdTdGdTdTdTdAdGdGdGdAdGdC*dC*Gb1Tb1C*b1Tb1Tb1
Таблица 7
SP L SEQ ID NO. Последовательность, 5'-3'
2075 10 271a Ab1sTb1sdTsdTsdGsdGsdTsdA*sGb1sTb1
2075 10 271b Ab1Tb1dTdTdGdGdTdA*Gb1Tb1
2074 12 272a Tb1sAb1sTb1sdTsdTsdGsdGsdTsdA*sGb1sTb1sGb1
2074 12 272b Tb1Ab1Tb1dTdTdGdGdTdA*Gb1Tb1Gb1
2074 12 272c Tb1sAb1sTb1sdTsdTsdGsdGsdTsdA*sdGsTb1sGb1
2074 12 272d Tb1sAb1sdTsdTsdTsdGsdGsdTsdA*sdGsdUsGb1
2074 12 272e Tb1sdAsdTsdUsdTsdGsdGsdUsdA*sdGsTb1sGb1
2073 13 273a Tb1sAb1sTb1sdTsdTsdGsdGsdTsdAsGb1sTb1sGb1sTb1
2073 13 273b Tb1Ab1Tb1dUdUdGdGdUdAGb1Tb1Gb1Tb1
2073 13 273c Tb1sAb1sTb1sdTsdTsdGsdGsdTsdA*sGb1sTb1sGb1sTb1
2073 13 273d Tb1sAb1sTb1sdTsdTsdGsdGsdTsdA*sdGsdUsGb1sTb1
2073 13 273e Tb1sAb1sdUsdUsdUsdGsdGsdUsdA*sdGsdUsdGsTb1
2073 13 273f Tb1sdA*sdTsdTsdUsdGsdGsdTsdA*sGb1sTb1sGb1sTb1
2073 14 274a C*b1Tb1Ab1sdUsdTsdTsdGsdGsdTsdA*sGb1Tb1Gb1Tb1
2073 14 274b C*b4sTb4sAb4sTb4sdTsdTsdGsdGsdTsdA*sdGsdUsGb4sTb4
2073 14 274c C*b1sdUsdA*sdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsdGsTb1
2073 14 274d C*b2sTb2sAb2sdTsdTsdUsdGsdGsdTsdA*sdGsTb2sGb2sTb2
2073 14 274e C*b4ssTb4ssdAssdTssdTssdTssdGssdGssdTssdAssdGssTb4ssGb4ssTb4
2073 14 274f C*b1Tb1Ab1dTdTdTdGdGdTdA*Gb1Tb1Gb1Tb1
2073 14 274g C*b1sTb1sAb1sTb1sdTsdTsdGsdGsdTsdA*sGb1sTb1sGb1sTb1
2072 15 275a C*b1sTb1sAb1sTb1sdTsdTsdGsdGsdTsdA*sdGsdTsdGsdTsTb1
2072 15 275b C*b1sTb1sdA*sdUsdTsdUsdGsdGsdTsdAsdGsdUsGb1sTb1sTb1
2072 15 275c C*b4sTb4sAb4sdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsdGsTb4sTb4
2072 15 275d C*b1ssTb1ssdAssdTssdTssdTssdGssdGssdTssdAssdGssdTssdGssdTssTb1
2072 15 275e C*b1ssTb1ssdAssdUssdTssdTssdGssdGssdTssdAssdGssdUssdGssTb1 ssTb1
2072 15 275f C*b1sTb1sAb1sTb1sdTdTdGdGdTdA*dGsTb1sGb1sTb1sTb1
2072 15 275g C*b1Tb1sdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdA*sdGsTb1Gb1Tb1Tb1
2072 15 275h C*b6Tb6Ab6dUdTdTdGdGdTdA*dGdUGb6Tb6Tb6
2072 15 275i C*b1dTdAdTdTdTdGdGdTdAdGdTdGdTTb1
2072 16 210o Gb1C*b1Tb1Ab1dTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsGb1Tb1Tb1
2072 16 210p Gb1sC*b1sTb1sAb1sdTsdTsdTsdGsdGsdTsdA*sdGsdTsGb1sTb1sTb1
2072 16 210q Gb1sC*b1sTb1sAb1sdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsGb1sTb1sTb1
2072 16 210r Gb1C*b1Tb1Ab1dTdTdTdGdGdTdA*dGdTGb1Tb1Tb1
2072 16 210s Gb1sC*b1sTb1sAb1sdUsdUsdTdGsdGsdTsdA*sdGsdTsGb1sTb1sTb1
2072 16 210t Gb1sC*b1sTb1sAb1sdUsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdUsGb1sTb1sTb1
2072 16 210u Gb1sC*b1sTb1sAb1sdUsdUsdUsdGsdGsdUsdA*sdGsdUsGb1sTb1sTb1
2072 16 210v /5SpC3s/Gb1sC*b1sTb1sAb1sdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsGb1sTb1sTb1
2072 16 210w Gb1sC*b1sTb1sAb1sdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsGb1sTb1sTb1/3SpC3s/
2072 16 210x /5SpC3s/Gb1sC*b1sTb1sAb1sdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsGb1sTb1sTb1/3SpC3s/
2072 16 210y Gb1C*b1Tb1Ab1sdTsdTsdTsdGsdGsdTsdA*sdGsdTsGb1Tb1Tb1
2072 16 210z Gb1C*b1Tb1Ab1sdUsdTsdTsdGsdGsdUsdA*sdGsdTsGb1Tb1Tb1
2072 16 210aa Gb1sC*b1sTb1sAb1sdTdTdTdGdGdTdA*dGdTsGb1sTb1sTb1
2072 16 210ab Gb6sC*b6sTb6sAb6sdTdTdTdGdGdTdA*dGdTsGb6sTb6sTb6
2072 16 210ac Gb6sC*b6sTb6sdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsTb6sGb6sTb6sTb6
2072 16 210ad Gb7sC*b7sTb7sdA*sdTsdTsdTsdGsdGsdTsdA*sdGsTb7sGb7sTb7sTb7
2072 16 210ae Gb7sC*b7sdUsdAsdTsdTsdUsdGsdGsdUsdA*sdGsTb7sGb7sTb7sTb7
2072 16 210af Gb1ssC*b1ssTb1ssdAssdTssdTssdTssdGssdGssdTssdA*ssdGssdTssGb1ssTb1ssTb1
2072 16 210ag Gb4ssC*b4ssTb4ssdA*ssdTssdTssdTssdGssdGssdTssdAssdGssdTssdGssTb4ssTb4
2072 16 210ah Gb2ssC*b2ssTb2ssAb2ssdTssdTssdTssdGssdGssdTssdAssdGssdTssdGssdTssTb2
2072 16 210ai Gb1C*b1Tb1Ab1dUsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsTb1Gb1Tb1Tb1
2072 16 210aj Gb4C*b4Tb4Ab4dTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTdGTb4Tb4
2072 16 210ak Gb1sC*b1sTb1sAb1sTb1sdTsdTsdGsdGsdTsdA*sdGsdTsGb1sTb1sTb1
2072 16 210am Gb4sC*b4sTb4sAb4sdTsdTsdUsdGsdGsdTsdA*sdGsdTsdGsTb4sTb4
2072 16 210an Gb7sC*b7sTb7sdA*sdTsdTsdUsdGsdGsdTsdA*sdGsdTsGb7sTb7sTb7
2072 16 210ao Gb1sC*b1sdUsdAsdUsdUsdTsdGsdGsdUsdAsGb1sTb1sGb1sTb1sTb1
2072 16 210ap Gb1sC*b1sTb1sdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsGb1sTb1sTb1
2072 16 210aq Gb1sC*b1sTb1sdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsdGsTb1sTb1
2071 17 276a Gb1sC*b1sTb1sAb1sTb1sdTsdTsdGsdGsdTsdA*sdGsTb1sGb1sTb1sTb1sTb1
2071 17 276b Gb2sC*b2sTb2sdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdA*sdGsTb2sGb2sTb2sTb2sTb2
2071 17 276c Gb1sC*b1sTb1sdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdA*sdGsdTsGb1sTb1sTb1sTb1
2071 17 276d Gb2sdC*sdTsdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsTb2sGb2sTb2sTb2sTb2
2071 17 276e Gb6sC*b6sTb6sdA*sdUsdUsdUsdGsdGsdUsdA*sdGsdUsdGsTb6sTb6sTb6
2071 17 276f Gb1sdC*sdTsdA*sdUsdUsdUsdGsdGsdUsdAsdGsdUsdGsTb1sTb1sTb1
2071 17 276g Gb1C*b1dTdA*dTdTdTdGdGdTdA*dGdTGb1Tb1Tb1Tb1
2071 17 276h Gb4C*b4Tb4Ab4dTdTdTdGdGdTdA*dGdTdGTb4Tb4Tb4
2071 17 276i Gb1C*b1Tb1Ab1Tb1dUdTdGdGdTdA*dGdTdGdUTb1Tb1
2071 17 276j Gb1ssC*b1ssTb1ssAb1ssTb1ssdTssdTssdGssdGssdTssdAssdGssdTssdGssTb1ssTb1ssTb1
2071 17 276k Gb7sC*b7sTb7sAb7sdTdTdTdGdGdTdA*dGdTsGb7sTb7sTb7sTb7
2071 18 277a Ab1sGb1sC*b1sTb1sAb1sdTsdTsdTsdGsdGsdTsdA*sdGsTb1sGb1sTb1sTb1sTb1
2071 18 277b Ab7sGb7sC*b7sTb7sAb7sdTsdTsdTsdGsdGsdTsdA*sdGsdTsdGsdTsdTsTb7
2071 18 277c Ab1sGb1sdC*sdTsdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsTb1sGb1sTb1sTb1sTb1
2071 18 277d Ab1sGb1sdC*sdTsdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdA*sdGsTb1sGb1sTb1sTb1sTb1
2071 18 277e Ab1Gb1dC*dTdAdUdTdTdGdGdTdA*dGTb1Gb1Tb1Tb1Tb1
2071 18 277f Ab2Gb2C*b2dTdAdTdTdTdGdGdTdA*dGTb2Gb2Tb2Tb2Tb2
2071 18 277g Ab1sGb1sC*b1sTb1sdA*sdTsdTsdTsdGsdGsdTsdA*sdGsdTsGb1sTb1sTb1sTb1
2071 18 277h Ab1sGb1sC*b1sTb1sdA*sdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsdGsTb1sTb1sTb1
2071 18 277i Ab1sGb1sC*b1sdTsdA*sdTsdTsdTsdGsdGsdTsdA*sdGsdTsGb1sTb1sTb1sTb1
2071 18 277j Ab4Gb4C*b4Tb4sdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsTb4Gb4Tb4Tb4Tb4
2071 18 277k Ab1ssGb1ssC*b1ssdTssdA*ssdTssdTssdTssdGssdGssdTssdA*ssdGssdUssdGssTb1ssTb1ssTb1
2070 19 278a Ab1sGb1sC*b1sTb1sAb1sdTsdTsdTsdGsdGsdTsdA*sdGsdTsGb1sTb1sTb1sTb1sAb1
2070 19 278b Ab2ssGb2ssC*b2ssTb2ssAb2ssdTssdTssdTssdGssdGssdTssdAssdGssdTssdGssdTssdTssTb2ssAb2
2070 19 278c Ab1sdGsdC*sdTsdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdA*sdGsdTsGb1sTb1sTb1sTb1sAb1
2070 19 278d Ab1sdGsdC*sdTsdAsdTsdTsdTsdGsdGsdUsdA*sdGsdUsGb1sTb1sTb1sTb1sAb1
2070 19 278e Ab1sGb1sC*b1sdTsdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdA*sdGsdTsdGsTb1sTb1sTb1sAb1
2070 19 278f Ab4sGb4sdC*sdTsdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsdGsTb4sTb4sTb4sAb4
2070 19 278g Ab6Gb6C*b6Tb6Ab6dTdTdTdGdGdTdA*dGdTGb6Tb6Tb6Tb6Ab6
2070 20 279a Gb1sAb1sGb1sC*b1sTb1sdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdA*sdGsdTsGb1sTb1sTb1sTb1sAb1
2070 20 279b Gb2sAb2sGb2sdC*sdTsdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsGb2sTb2sTb2sTb2sAb2
2070 20 279c Gb1sdAsdGsdC*sdUsdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdA*sdGsdTsGb1sTb1sTb1sTb1sAb1
2070 20 279d Gb4sAb4sGb4sC*b4sdTsdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsdGsTb4sTb4sTb4sAb4
2070 20 279e Gb1Ab1Gb1dC*dTdAdTdTdTdGdGdTdAdGdTdGTb1Tb1Tb1Ab1
2069 22 280a Ab1sGb1sAb1sGb1sC*b1sdTsdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsdGsTb1sTb1sTb1sAb1sGb1
2069 22 280b Ab1Gb1Ab1Gb1C*b1dTdAdTdTdTdGdGdTdAdGdTdGTb1Tb1Tb1Ab1Gb1
2069 22 280c Ab1sGb1sAb1sGb1sdC*sdTsdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsdGsTb1sTb1sTb1sAb1sGb1
2069 22 280d Ab6sGb6sAb6sGb6sdC*sdTsdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdA*sdGsdTsdGsdTsdTsTb6sAb6sGb6
2068 24 281a Ab1sAb1sGb1sAb1sGb1sdC*sdTsdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsdGsdTsTb1sTb1sAb1sGb1sGb1
2068 24 281b Ab1Ab1Gb1Ab1Gb1dC*dTdAdTdTdTdGdGdTdAdGdTdGdTTb1Tb1Ab1Gb1Gb1
2067 26 282a Gb1sAb1sAb1sGb1sAb1sdGsdC*sdTsdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsdGsdTsdTsTb1sAb1sGb1sGb1sGb1
2067 26 282b Gb1Ab1Ab1Gb1Ab1dGdC*dTdAdTdTdTdGdGdTdAdGdTdGdTdTTb1Ab1Gb1Gb1Gb1
2066 28 283a Ab1sGb1sAb1sAb1sGb1sdAsdGsdC*sdTsdAsdTsdTsdTsdGsdGsdTsdAsdGsdTsdGsdTsdTsdTsAb1sGb1sGb1sGb1sAb1
2066 28 283b Ab1Gb1Ab1Ab1Gb1dAdGdC*dTdAdTdTdTdGdGdTdAdGdTdGdTdTdTAb1Gb1Gb1Gb1Ab1
Таблица 8
SP L SEQ ID NO. Последовательность, 5'-3'
4220 10 219a Gb1sAb1sdAsdTsdGsdGsdAsdCsC*b1sAb1
4220 10 219b Gb1Ab1dAdTdGdGdAdCC*b1Ab1
4219 12 220a Tb1sGb1sAb1sdAsdTsdGsdGsdAsdCsC*b1sAb1sGb1
4219 12 220b Tb1Gb1Ab1dAdTdGdGdAdCC*b1Ab1Gb1
4219 12 220c Tb1sGb1sAb1sdAsdTsdGsdGsdAsdCsdC*sAb1sGb1
4219 12 220d Tb1sdGsdA*sdAsdTsdGsdGsdAsdC*sdCsAb1sGb1
4219 12 220e Tb1sGb1sdA*sdA*sdTsdGsdGsdA*sdC*sdC*sdAsGb1
4218 13 221a Tb1sGb1sAb1sAb1sdTsdGsdGsdAsdCsdCsAb1sGb1sTb1
4218 13 221b Tb1Gb1Ab1Ab1dUdGdGdAdCdCAb1Gb1Tb1
4218 13 221c Tb1sGb1sAb1sAb1sdTsdGsdGsdAsdCsdC*sAb1sGb1sTb1
4218 13 221d Tb1sGb1sAb1sdAsdTsdGsdGsdA*sdCsdC*sdAsGb1sTb1
4218 13 221e Tb1sGb1sdA*sdAsdTsdGsdGsdAsdC*sdCsdAsdGsTb1
4218 13 221f Tb1sdGsdAsdA*sdTsdGsdGsdAsdCsC*b1sAb1sGb1sTb1
4218 14 222a Ab1sTb1sGb1sAb1sdAsdTsdGsdGsdAsdCsC*b1sAb1sGb1sTb1
4218 14 222b Ab1Tb1Gb1Ab1dAsdTsdGsdGsdAsdCsdC*sAb1Gb1Tb1
4218 14 222c Ab1Tb1dGdA*dAdTdGdGdA*dCC*b1Ab1Gb1Tb1
4218 14 222d Ab4sTb4sGb4sdA*sdAsdTsdGsdGsdAsdCsdC*sAbsGb4sTb4
4218 14 222e Ab1sdTsdGsdA*sdA*sdTsdGsdGsdA*sdC*sdC*sdA*sdGsTb1
4218 14 222f Ab2sTb2sGb2sdA*sdAsdUsdGsdGsdAsdCsdCsAb2sGb2sTb2
4218 14 222g Ab4ssTb4ssdGssdAssdAssdTssdGssdGssdAssdCssdCssAb4ssGb4ssTb4
4217 15 223a Ab1sTb1sGb1sAb1sdAdTdGdGdAdCdC*sAb1sGb1sTb1sAb1
4217 15 223b Ab1ssTb1ssdGssdAssdAssdTssdGssdGssdAssdCssdCssdAssdGssdTssAb1
4217 15 223c Ab1dTdGdAdAdTdGdGdAdCdCdAdGdTAb1
4217 15 223d Ab1sTb1sdGsdAsdAsdUsdGsdGsdA*sdCsdCsdAsGb1sTb1sAb1
4217 15 223e Ab6Tb6Gb6dA*dAdTdGdGdAdCdC*dAGb6Tb6Ab6
4217 15 223f Ab1Tb1dGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdC*sdC*sAb1Gb1Tb1Ab1
4217 15 223g Ab4sTb4sGb4sdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsdAsdGsTb4sAb4
4217 15 223h Ab1sTb1sGb1sAb1sdAsdTsdGsdGsdAsdC*sdC*sdAsdGsdTsAb1
4217 15 223i Ab1ssTb1ssdGssdAssdAssdUssdGssdGssdA*ssdCssdCssdAssdGssTb1ssAb1
4217 16 218y C*b2sAb2sTb2sdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsAb2sGb2sTb2sAb2
4217 16 218z C*b1sAb1sTb1sdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdC*sdC*sAb1sGb1sTb1sAb1
4217 16 218aa C*b1ssAb1ssTb1ssdGssdAssdAssdTssdGssdGssdAssdCssdCssAb1ssGb1ssTb1ssAb1
4217 16 218ab C*b1Ab1Tb1dGsdAsdAsdUsdGsdGsdAsdC*sdC*sAb1Gb1Tb1Ab1
4217 16 218ac C*b1Ab1Tb1dGsdA*sdA*sdTsdGsdGsdA*sdCsdCsAb1Gb1Tb1Ab1
4217 16 218ad C*b6sAb6sTb6sdGdAdAdTdGdGdAdCdCAb6sGb6sTb6sAb6
4217 16 218ae C*b7sAb7sTb7sGb7sdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsdAsGb7sTb7sAb7
4217 16 218af C*bs1Ab1sdUsdGsdAsdAsdUsdGsdGsdUsdCsdCsAb1sGb1sTb1sAb1
4217 16 218b C*b1sAb1sTb1sdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsAb1sGb1sTb1sAb1
4217 16 218m C*b1sAb1sTb1sdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdC*sdC*sAb1sGb1sTb1sAb1
4217 16 218n C*b1Ab1Tb1dGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdC*sdC*sAb1Gb1Tb1Ab1
4217 16 218o C*b1sAb1sTb1sdGsdA*sdA*sdTsdGsdGsdA*sdCsdCsAb1sGb1sTb1sAb1
4217 16 218p C*b1sAb1sTb1sdGsdA*sdA*sdTsdGsdGsdA*sdC*sdC*sAb1sGb1sTb1sAb1
4217 16 218q C*b1sAb1sTb1sdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdC*sdCsAb1sGb1sTb1sAb1
4217 16 218c C*b1sAb1sTb1sdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdC*sAb1sGb1sTb1sAb1
4217 16 218r C*b1Ab1Tb1dGdAdAdTdGdGdAdCdCAb1Gb1Tb1Ab1
4217 16 218s C*b1sAb1sTb1sdGdAdAdTdGdGdAdC*sdC*sAb1sGb1sTb1sAb1
4217 16 218t /5SpC3s/C*b1sAb1sTb1sdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsAb1sGb1sTb1sAb1
4217 16 218u C*b1sAb1sTb1sdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsAb1sGb1sTb1sAb1/3SpC3s/
4217 16 218v /5SpC3s/C*b1sAb1sTb1sdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsAb1sGb1sTb1sAb1/3SpC3s/
4217 16 218ag C*b1sAb1sTb1sdGsdA*sdA*sdUsdGsdGsdA*sdCsdCsAb1sGb1sTb1sAb1
4217 16 218ah C*b4ssAb4ssTb4ssdGssdA*ssdA*ssdTssdGssdGssdA*ssdCssdCssdAssdGssTb4ssAb4
4217 16 218ai C*b2ssAb2ssTb2ssGb2ssdAssdAssdTssdGssdGssdAssdCssdCssdAssdGssdTssAb2
4217 16 218aj C*b1Ab1Tb1Gb1dAdAdUdGdGdAdCdCAb1Gb1Tb1Ab1
4217 16 218ak C*b1sAb1sTb1sGb1sAb1sdA*sdUsdGsdGsdAsdCsdCsdA*sGb1sTb1sAb1
4217 16 218am C*b1sAb1sdUsdGsdAsdAsdUsdGsdGsdAsdCsC*b1sAb1sGb1sTb1sAb1
4217 16 218an C*b6sAb6sTb6sGb6sdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsdAsGb6sTb6sAb6
4217 16 218ao C*b7sAb7sTb7sdGsdA*sdA*sdUsdGsdGsdAsdCsdCsdA*sGb7sTb7sAb7
4217 16 218ap C*b4sAb4sTb4sGb4sdA*sdAsdTsdGsdGsdAsdCsdC*sdAsdGsTb4sAb4
4217 16 218aq C*b4Ab4Tb4Gb4dAdAdTdGdGdAdCdCdAdGTb4Ab4
4217 16 218ar C*b1sAb1sTb1sdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsdAsGb1sTb1sAb1
4216 17 224a C*b1sAb1sTb1sGb1sAb1sdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsAb1sGb1sTb1sAb1sTb1
4216 17 224b C*b2sAb2sTb2sdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsAb2sGb2sTb2sAb2sTb2
4216 17 224c C*b1sAb1sTb1sGb1sdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsdAsdGsTb1sAb1sTb1
4216 17 224d C*b1sdAsdUsdGsdAsdAsdUsdGsdGsdAsdC*sdC*sAb1sGb1sTb1sAb1sTb1
4216 17 224e C*b1sAb1sTb1sdGsdA*sdA*sdTsdGsdGsdA*sdC*sdC*sAb1sGb1sTb1sAb1sTb1
4216 17 224f C*b1Ab1dTdGdAdAdTdGdGdAdCdCdAGb1Tb1Ab1Tb1
4216 17 224g C*b1sdAsdTsdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsdAsdGsTb1sAb1sTb1
4216 17 224h C*b1Ab1Tb1Gb1Ab1dA*dTdGdGdA*dC*dC*dAdGdTAb1Tb1
4216 17 224i C*b1ssAb1ssTb1ssGb1ssAb1ssdAssdTssdGssdGssdAssdCssdCssdAssdGssTb1ssAb1ssTb1
4216 17 224j C*b4Ab4Tb4dGdA*dA*dTdGdGdA*dCdCdAGb4Tb4Ab4Tb4
4216 17 224k C*b6sAb6sTb6sdGsdA*sdA*sdUsdGsdGsdA*sdC*sdC*sdAsdGsTb6sAb6sTb6
4216 17 224m C*b7sAb7sTb7sGb7sdAdAdTdGdGdAdC*dC*dAsGb7sTb7sAb7sTb7
4216 18 225a Tb1sC*b1sAb1sTb1sGb1sdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsAb1sGb1sTb1sAb1sTb1
4216 18 225b Tb7sC*b7sAb7sTb7sGb7sdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsdAsdGsdTsdAsTb7
4216 18 225c Tb1sC*b1sAb1sTb1sdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdC*sdC*sdAsGb1sTb1sAb1sTb1
4216 18 225d Tb1sC*b1sAb1sdTsdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsdAsGb1sTb1sAb1sTb1
4216 18 225e Tb1sC*b1sAb1sTb1sdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsdAsdGsTb1sAb1sTb1
4216 18 225f Tb1C*b1dA*dTdGdAdAdUdGdGdAdCdC*Ab1Gb1Tb1Ab1Tb1
4216 18 225g Tb4C*b4Ab4Tb4sdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsAb4Gb4Tb4Ab4Tb4
4216 18 225h Tb1ssC*b1ssAb1ssdTssdGssdA*ssdA*ssdTssdGssdGssdAssdCssdC*ssdA*ssdGssTb1ssAb1ssTb1
4216 18 225i Tb2C*b2Ab2dTdGdAdAdTdGdGdAdC*dC*Ab2Gb2Tb2Ab2Tb2
4215 19 226a Tb1sC*b1sAb1sTb1sGb1sdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsdAsGb1sTb1sAb1sTb1sTb1
4215 19 226b Tb6C*b6Ab6Tb6Gb6dAdAdTdGdGdAdCdCdAGb6Tb6Ab6Tb6Tb6
4215 19 226c Tb1sC*b1sAb1sTb1sdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsdAsdGsdTsAb1sTb1sTb1
4215 19 226d Tb1sdCsdAsdTsdGsdAsdA*sdUsdGsdGsdAsdCsdCsdAsGb1sTb1sAb1sTb1sTb1
4215 19 226e Tb4sC*b4sdAsdUsdGsdAsdAsdUsdGsdGsdAsdCsdC*sdAsdGsTb4sAb4sTb4sTb4
4215 19 226f Tb2ssC*b2ssAb2ssTb2ssGb2ssdAssdAssdTssdGssdGssdAssdCssdCssdAssdGssdTssdAssTb2ssTb2
4215 20 227a C*b1sTb1sC*b1sAb1sTb1sdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsdAsGb1sTb1sAb1sTb1sTb1
4215 20 227b C*b2sTb2sC*b2sdAsdTsdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsdAsGb2sTb2sAb2sTb2sTb2
4215 20 227c C*b1Tb1C*b1dAdTdGdAdAdTdGdGdAdCdC*dAdGTb1Ab1Tb1Tb1
4215 20 227d C*b1sdUsdCsdAsdTsdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsdAsGb1sTb1sAb1sTb1sTb1
4215 20 227e C*b4sTb4sC*b4sAb4sdTsdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsdAsdGsTb4sAb4sTb4sTb4
4214 22 228a Tb1sC*b1sTb1sC*b1sAb1sdTsdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsdAsdGsTb1sAb1sTb1sTb1sC*b1
4214 22 228b Tb1C*b1Tb1C*b1Ab1dTdGdAdAdTdGdGdAdC*dC*dAdGTb1Ab1Tb1Tb1C*b1
4214 22 228c Tb6sC*b6sTb6sdCsdAsdTsdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsdAsdGsdTsAb6sTb6sTb6sC*b6
4213 24 229a Ab1sTb1sC*b1sTb1sC*b1sdAsdTsdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdC*sdCsdAsdGsdTsAb1sTb1sTb1sC*b1sTb1
4213 24 229b Ab1Tb1C*b1Tb1C*b1AdTdGdAdAdTdGdGdAdCdCdAdGdTAb1Tb1Tb1C*b1Tb1
4212 26 230a Tb1sAb1sTb1sC*b1sTb1sdCsdAsdTsdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsdAsdGsdTsdAsTb1sTb1sC*b1sTb1sAb1
4212 26 230a Tb1sAb1sTb1sC*b1sTb1sdCsdAsdTsdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsdAsdGsdTsdAsTb1sTb1sC*b1sTb1sAb1
4212 26 230b Tb1Ab1Tb1C*b1Tb1dCdAdTdGdAdAdTdGdGdAdCdCdAdGdTdATb1Tb1C*b1Tb1Ab1
4211 28 231a Ab1sTb1sAb1sTb1sC*b1sdTsdCsdAsdTsdGsdAsdAsdTsdGsdGsdAsdCsdCsdAsdGsdTsdAsdTsTb1sC*b1sTb1sAb1sGb1
4211 28 231b Ab1Tb1Ab1Tb1C*b1dTdCdAdTdGdAdAdTdGdGdAdCdCdAdGdTdAdTTb1C*b1Tb1Ab1Gb1
Таблица 9
SP L SEQ ID NO. Последовательность, 5'-3'
2358 10 284a C*b1sAb1sdTsdTsdAsdAsdTsdA*sAb1sAb1
2358 10 284b C*b1Ab1dTdTdA*dAdTdA*Ab1Ab1
2357 12 285a Gb1sC*b1sAb1sdTsdTsdA*sdA*sdTsdAsAb1sAb1sGb1
2357 12 285b Gb1sC*b1sAb1sdTsdTsdA*sdA*sdTsdAsdA*sAb1sGb1
2357 12 285c Gb1sC*b1sdAsdTsdTsdA*sdA*sdUsdAsdA*sdA*sGb1
2357 12 285d Gb1sdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsAb1sGb1
2357 12 285e Gb1sdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdA*sAb1sGb1
2357 12 285f Gb1C*b1Ab1dTdTdA*dA*dTdAAb1Ab1Gb1
2356 13 286a Gb1sC*b1sAb1sTb1sdTsdAsdAsdTsdAsdAsAb1sGb1sTb1
2356 13 286b Gb1sC*b1sAb1sTb1sdTsdA*sdA*sdTsdAsdAsAb1sGb1sTb1
2356 13 286c Gb1sC*b1sAb1sdUsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdA*sGb1sTb1
2356 13 286d Gb1sC*b1sdAsdTsdTsdAsdA*sdUsdAsdAsdAsdGsTb1
2356 13 286e Gb1sdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsAb1sAb1sGb1sTb1
2356 13 286f Gb1sdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdA*sAb1sAb1sGb1sTb1
2356 13 286g Gb1C*b1Ab1Tb1dUdAdAdUdAdAAb1Gb1Tb1
2356 14 287a Gb1sGb1sC*b1sAb1sdTsdTsdA*sdAsdTsdAsAb1sAb1sGb1sTb1
2356 14 287b Gb4sGb4sC*b4sAb4sdTsdTsdA*sdAsdUsdAsdAsdA*sGb4sTb4
2356 14 287c Gb1sdGsdCsdAsdUsdUsdAsdAsdTsdA*sdA*sdA*sdGsTb1
2356 14 287d Gb2sGb2sC*b2sdA*sdUsdTsdA*sdAsdTsdAsdA*sAb2sGb2sTb2
2356 14 287e Gb1Gb1C*b1Ab1sdTsdTsdAsdAsdTsdA*sdA*sAb1Gb1Tb1
2356 14 287f Gb1sGb1sdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsAb1sAb1sGb1sTb1
2356 14 287g Gb1sGb1sdC*sdA*sdTsdTsdA*sdA*sdTsdA*sAb1sAb1sGb1sTb1
2356 14 287h Gb1Gb1dC*dAdTdTdAdAdTdAAb1Ab1Gb1Tb1
2356 14 287i Gb4ssGb4ssdCssdAssdTssdTssdAssdAssdTssdAssAb4ssAb4ssGb4ssTb4
2356 14 287j Gb4ssGb4ssdC*ssdAssdTssdTssdAssdAssdTssdAssAb4ssAb4ssGb4ssTb4
2355 15 288a Gb1sGb1sdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsGb1sTb1sGb1
2355 15 288b Gb1sGb1sC*b1sAb1sdTsdTsdA*sdA*sdTsdAsdAsdAsdGsdTsGb1
2355 15 288c Gb4sGb4sC*b4sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsdGsTb4sGb4
2355 15 288d Gb1sGb1sC*b1sAb1sdTdTdAdAdTdAdAsAb1sGb1sTb1sGb1
2355 15 288e Gb1Gb1sdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsAb1Gb1Tb1Gb1
2355 15 288f Gb1ssGb1ssdCssdAssdUssdUssdAssdAssdUssdAssdAssdAssdGssTb1ssGb1
2355 15 288g Gb1ssGb1ssdCssdAssdTssdTssdAssdAssdTssdAssdAssdAssdGssdTssGb1
2355 15 288h Gb6Gb6C*b6dA*dTdTdAdAdUdA*dA*dAGb6Tb6Gb6
2355 15 288i Gb1Gb1C*b1dAdTdTdAdAdUdAdAdAGb1Tb1Gb1
2355 16 289a Ab1sGb1sGb1sC*b1sAb1sdTsdTsdA*sdA*sdTsdA*sAb1sAb1sGb1sTb1sGb1
2355 16 289b Ab1sGb1sGb1sdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsAb1sAb1sGb1sTb1sGb1
2355 16 289c Ab1sGb1sGb1sdC*sdA*sdTsdTsdA*sdA*sdTsdA*sAb1sAb1sGb1sTb1sGb1
2355 16 289d Ab2sGb2sGb2sdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsAb2sAb2sGb2sTb2sGb2
2355 16 289e Ab1sdGsdGsdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsAb1sAb1sGb1sTb1sGb1
2355 16 289f Ab1sdGsdGsdC*sdAsdTsdUsdAsdAsdUsdAsAb1sAb1sGb1sTb1sGb1
2355 16 289g Ab1sGb1sGb1sdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsAb1sGb1sTb1sGb1
2355 16 289h Ab1sGb1sGb1sC*b1sdA*sdTsdTsdA*sdA*sdTsdA*sdAsdAsGb1sTb1sGb1
2355 16 289i Ab6sGb6sGb6sdC*sdA*sdUsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsGb6sTb6sGb6
2355 16 289j Ab1sGb1sGb1sdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsGb1sTb1sGb1
2355 16 289k Ab1sdGsdGsdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsGb1sTb1sGb1
2355 16 289m Ab1Gb1Gb1C*b1Ab1dUdTdA*dA*dTdAdAdAdGTb1Gb1
2355 16 289n Ab1Gb1dGdC*dAdTdTdAdAdTdAdAAb1Gb1Tb1Gb1
2355 16 289o Ab4Gb4Gb4dCdA*dTdTdAdAdTdAdA*Ab4Gb4Tb4Gb4
2355 16 289p Ab1ssGb1ssGb1ssC*b1ssAb1ssdTssdTssdAssdAssdTssdAssdAssdAssGb1ssTb1ssGb1
2355 16 289q Ab7sGb7sGb7sC*b7sdA*dTdTdAdAdTdAdA*sAb7sGb7sTb7sGb7
2355 17 213j C*b1sAb1sGb1sdGsdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsGb1sTb1sGb1
2355 17 213k C*b1sAb1sGb1sdGsdCsdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsGb1sTb1sGb1
2355 17 213m C*b1sAb1sGb1sdGsdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdA*sdA*sGb1sTb1sGb1
2355 17 213n C*b1Ab1Gb1dGdC*dAdTdTdAdAdTdAdAdAGb1Tb1Gb1
2355 17 213o /5SpC3s/C*b1sAb1sGb1sdGsdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsGb1sTb1sGb1
2355 17 213p C*b1sAb1sGb1sdGsdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsGb1sTb1sGb1/3SpC3s/
2355 17 213q /5SpC3s/C*b1sAb1sGb1sdGsdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsGb1sTb1sGb1/3SpC3s/
2355 17 213r C*b1sAb1sGb1sdGsdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdUsdAsdAsdA*sGb1sTb1sGb1
2355 17 213s C*b6sAb6sGb6sdGdC*dAdTdTdAdAdTdAdAdAsGb6sTb6sGb6
2355 17 213t C*b1sAb1sGb1sdGdC*dAdTdTdAdAdTdAdAdAsGb1sTb1sGb1
2355 17 213u C*b1Ab1Gb1sdGsdC*sdAsdUsdUsdAsdAsdUsdAsdAsdAsGb1Tb1Gb1
2355 17 213v C*b1Ab1Gb1sdGsdC*sdAsdTsdTsdAsdA*sdTsdAsdAsdA*sGb1Tb1Gb1
2355 17 213w C*b1Ab1Gb1sdGsdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsGb1Tb1Gb1
2355 17 213x C*b7sAb7sGb7sGb7sdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsGb7sTb7sGb7
2355 17 213y C*b6sAb6sGb6sGb6sdCsdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsGb6sTb6sGb6
2355 17 213z C*b7sAb7sGb7sdGsdCsdA*sdUsdTsdAsdAsdTsdAsdAsAb7sGb7sTb7sGb7
2355 17 213aa C*b4sAb4sGb4sGb4sdC*sdA*sdTsdTsdAsdAsdTsdAsdA*sdAsdGsTb4sGb4
2355 17 213ab C*b1sAb1sGb1sGb1sC*b1sdA*sdTsdTsdA*sdA*sdTsdAsdA*sdA*sGb1sTb1sGb1
2355 17 213ac C*b1sAb1sGb1sdGsdCsdAsdTsdTsdA*sdA*sdTsdAsAb1sAb1sGb1sTb1sGb1
2355 17 213ad C*b1sAb1sdGsdGsdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdUsdAsdAsAb1sGb1sTb1sGb1
2355 17 213ae C*b1ssAb1ssGb1ssdGssdC*ssdAssdTssdTssdAssdAssdTssdAssdAssAb1ssGb1ssTb1ssGb1
2355 17 213af C*b4ssAb4ssGb4ssdGssdCssdAssdTssdTssdA*ssdAssdTssdAssdAssdAssdGssTb4ssGb4
2355 17 213ag C*b2ssAb2ssGb2ssGb2ssdCssdAssdTssdTssdAssdAssdTssdAssdAssdAssdGssdTssGb2
2355 17 213ah C*b1Ab1Gb1Gb1dCdAdTdTdAdAdUdAdAAb1Gb1Tb1Gb1
2355 17 213ai C*b4Ab4Gb4Gb4dCdAdTdTdAdAdTdAdAdAdGTb4Gb4
2355 17 213aj C*b1Ab1Gb1dGdCdAdTdTdAdAdUdAdAdAGb1Tb1Gb1
2355 17 213ak C*b1sAb1sGb1sGb1sdCsdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsAb1sGb1sTb1sGb1
2354 18 290a C*b1sAb1sGb1sGb1sC*b1sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdA*sdAsAb1sGb1sTb1sGb1sC*b1
2354 18 290b C*b1sAb1sGb1sGb1sdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsGb1sTb1sGb1sC*b1
2354 18 290c C*b1sAb1sGb1sGb1sdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsdGsTb1sGb1sC*b1
2354 18 290d C*b1sAb1sGb1sdGsdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsGb1sTb1sGb1sC*b1
2354 18 290e C*b7sAb7sGb7sGb7sC*b7sdA*sdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsdGsdTsdGsC*b7
2354 18 290f C*b4Ab4Gb4Gb4sdCsdAsdTsdTsdAsdAsdTsdA*sdAsAb4Gb4Tb4Gb4C*b4
2354 18 290g C*b1ssAb1ssGb1ssdGssdC*ssdAssdTssdTssdA*ssdAssdTssdA*ssdAssdA*ssdGssTb1ssGb1ssC*b1
2354 18 290h C*b2Ab2Gb2dGdC*dAdTdTdAdAdTdAdAAb2Gb2Tb2Gb2C*b2
2354 18 290i C*b1Ab1dGdGdC*dA*dUdUdAdAdUdA*dA*Ab1Gb1Tb1Gb1C*b1
2354 19 291a Ab1sC*b1sAb1sGb1sGb1sdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsAb1sGb1sTb1sGb1sC*b1
2354 19 291b Ab1sC*b1sAb1sGb1sdGsdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsdGsTb1sGb1sC*b1
2354 19 291c Ab4sC*b4sdAsdGsdGsdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdUsdAsdAsdAsGb4sTb4sGb4sC*b4
2354 19 291d Ab1sdC*sdAsdGsdGsdC*sdA*sdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsAb1sGb1sTb1sGb1sC*b1
2354 19 291e Ab2ssC*b2ssAb2ssGb2ssGb2ssdCssdAssdTssdTssdAssdAssdTssdAssdAssdAssdGssdTssGb2ssC*b2
2354 19 291f Ab6C*b6Ab6Gb6Gb6dC*dAdTdTdAdAdTdAdAAb6Gb6Tb6Gb6C*b6
2353 20 292a Ab1sC*b1sAb1sGb1sGb1sdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsGb1sTb1sGb1sC*b1sAb1
2353 20 292b Ab2sC*b2sAb2sdGsdGsdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsGb2sTb2sGb2sC*b2sAb2
2353 20 292c Ab1sdC*sdAsdGsdGsdC*sdAsdUsdUsdAsdAsdUsdAsdAsdAsGb1sTb1sGb1sC*b1sAb1
2353 20 292d Ab4sC*b4sAb4sGb4sdGsdCsdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsdGsTb4sGb4sC*b4sAb4
2353 20 292e Ab1C*b1Ab1dGdGdC*dAdTdTdAdAdTdAdAdAdGTb1Gb1C*b1Ab1
2352 22 293a Tb1sAb1sC*b1sAb1sGb1sdGsdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsdGsTb1sGb1sC*b1sAb1sAb1
2352 22 293b Tb1Ab1C*b1Ab1Gb1dGdC*dAdTdTdAdAdTdAdAdAdGTb1Gb1C*b1Ab1Ab1
2352 22 293c Tb6sAb6sC*b6sdAsdGsdGsdCsdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsdGsTb6sGb6sC*b6sAb6sAb6
2351 24 294a Ab1sTb1sAb1sC*b1sAb1sdGsdGsdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsdGsdTsGb1sC*b1sAb1sAb1sAb1
2351 24 294b Ab1Tb1Ab1C*b1Ab1dGdGdC*dAdTdTdAdAdTdAdAdAdGdTGb1C*b1Ab1Ab1Ab1
2350 26 295a Tb1sAb1sTb1sAb1sC*b1sdAsdGsdGsdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsdGsdTsdGsC*b1sAb1sAb1sAb1sTb1
2350 26 295b Tb1Ab1Tb1Ab1C*b1dAdGdGdC*dAdTdTdAdAdTdAdAdAdGdTdGC*b1Ab1Ab1Ab1Tb1
2349 28 236a Ab1sTb1sAb1sTb1sAb1sdC*sdAsdGsdGsdC*sdAsdTsdTsdAsdAsdTsdAsdAsdAsdGsdTsdGsdC*sAb1sAb1sAb1sTb1sGb1
2349 28 236b Ab1Tb1Ab1Tb1Ab1dC*dAdGdGdCdAdTdTdAdAdTdAdAdAdGdTdGdC*Ab1Ab1Ab1Tb1Gb1

Фармацевтические композиции

Антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению предпочтительно вводят в форме их фармацевтически активных солей, необязательно используя по существу нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, эксципиенты, адъюванты, растворители или разбавители. Лекарственные средства по настоящему изобретению формулируют в обычном твердом или жидком носителе или разбавителе и обычном фармацевтически приготовленном адъюванте на подходящем уровне дозирования известным способом. Предпочтительные препараты и композиции находятся в пригодной для введения форме, которая пригодна для инфузии или инъекции (интратекальной, интрацеребровентрикулярной, внутричерепной, внутривенной, интрапаренхимальной, внутриопухолевой, внутриглазной или экстраглазной, внутрибрюшинной, внутримышечной, подкожной), местного введения в мозг, ингаляции, местного введения в солидную опухоль или перорального применения. Однако возможны также другие формы применения, такие как абсорбция через выстилающие эпителиальные или слизисто-кожные оболочки (слизистую оболочку ротовой полости, ректальную и вагинальную эпителиальные оболочки, слизистую оболочку носоглотки, слизистую оболочку кишечника), ректально, трансдермально, местно, внутрикожно, внутрижелудочно, внутримышечно, внутрикожно, подкожно, подъязычно или любыми другими способами, доступными в области фармации.

Вводимые препараты включают, например, инъекционные жидкие композиции, задерживающие композиции, порошки, в частности, для ингаляции, пилюли, таблетки, таблетки с пленочным покрытием, покрытые оболочкой таблетки, диспергируемые гранулы, драже, гели, сиропы, взвеси, суспензии, эмульсии, капсулы и депо-препараты. Возможны и другие способы введения галеновых препаратов, например непрерывная инъекция через имплантированный насос или катетер в головной мозг.

Как здесь используется, термин «фармацевтически приемлемый» относится к любому носителю, который не оказывает отрицательного влияния на эффективность биологической активности антисмысловых олигонуклеотидов, используемых в качестве активного ингредиента в композиции, и не токсичен для хозяина, которому он вводится. Примеры подходящих фармацевтических носителей хорошо известны в данной области и включают забуференные фосфатом физиологические растворы, воду, эмульсии, такие как эмульсии масло/вода, различные типы смачивающих агентов, стерильные растворы и т.д. Такие носители можно формулировать обычными методами, и активное соединение может вводиться субъекту в эффективной дозе. «Эффективная доза» относится к количеству антисмыслового олигонуклеотида, используемого в качестве активного ингредиента, которое достаточно для воздействия на течение и тяжесть заболевания, приводя к снижению или ремиссии такой патологии. «Эффективная доза», пригодная для лечения и/или профилактики этих заболеваний или расстройств, может быть определена с использованием методов, известных специалистам в данной области. Кроме того, антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению можно смешать и вводить вместе с липосомами, комплексообразующими агентами, молекулами, нацеленными на рецепторы, растворителями, консервантами и/или разбавителями.

Предпочтительными являются фармацевтические препараты в форме инфузионных растворов или твердых матриц для непрерывного высвобождения активного ингредиента, особенно для непрерывной инфузии для интратекального введения, интрацеребровентрикулярного введения или внутричерепного введения, по меньшей мере, одного антисмыслового олигонуклеотида по настоящему изобретению. Также предпочтительными являются фармацевтические препараты в виде растворов или твердых матриц, пригодных для местного введения в головной мозг. Для фиброзных болезней легких особенно предпочтительны композиции для ингаляционного введения.

Готовый к употреблению стерильный раствор содержит, например, по меньшей мере, один антисмысловой олигонуклеотид в концентрации от 1 до 10 мг/мл, предпочтительно от 5 до 10 мг/мл, и изотонический агент, выбранный, например, из сахаров, таких как сахароза, лактоза, маннит или сорбит. Также может быть включен подходящий буферный агент для контроля рН раствора до 6-8 (предпочтительно 7-8). Другим необязательным ингредиентом композиции может быть неионогенное поверхностно-активное вещество, такое как твин 20 или твин 80.

Стерильный лиофилизированный порошок, который восстанавливают для применения, содержит, по меньшей мере, один антисмысловой олигонуклеотид и необязательно объемообразующий агент (например, маннит, трегалозу, сорбит, глицин) и/или криопротектор (например, трегалозу, маннит). Растворителем для восстановления может быть вода для инъекционных препаратов, с буферной солью или без нее для регуляции рН до 6-8.

Аэрозольные препараты, подходящие для ингаляции, могут содержать растворы и твердые вещества в виде порошка, которые могут находиться в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем, таким как инертный сжатый газ, например, азот.

Особенно предпочтительной фармацевтической композицией является лиофилизированный (высушенный сублимационной сушкой) препарат (лиофилизат), подходящий для введения ингаляцией или для внутривенного введения. Для получения предпочтительного лиофилизированного препарата, по меньшей мере, один антисмысловой олигонуклеотид по изобретению растворяют в 4-5% (мас./об.) растворе маннита и затем раствор лиофилизуют. Раствор маннита можно также приготовить в подходящем буферном растворе, как описано выше.

Дополнительные примеры подходящих крио/лиопротекторов (иначе относится к объемообразующему агенту или стабилизаторам) включают не содержащий тиоловых групп альбумин, иммуноглобулины, полиалкиленоксиды (например, ПЭГ, полипропиленгликоли), трегалозу, глюкозу, сахарозу, сорбит, декстран, мальтозу, рафинозу, стахиозу и другие сахариды (смотри, например, международную заявку WO 97/29782), в то время как маннит используется предпочтительно. Они могут быть использованы в обычных количествах в обычных способах лиофилизации. Способы лиофилизации хорошо известны в области приготовления фармацевтических композиций.

Для введения ингаляцией диаметр частиц лиофилизированного препарата предпочтительно составляет от 2 до 5 мкм, более предпочтительно от 3 до 4 мкм. Лиофилизованный препарат особенно подходит для введения с использованием ингалятора, например ингалятора OPTINEB® или VENTA NEB® (NEBU TEC, Elsenfeld, Германия). Лиофилизованный продукт можно регидратировать в стерильной дистиллированной воде или любой другой жидкости, подходящей для ингаляционного введения. Альтернативно, для внутривенного введения лиофилизированный продукт может быть регидратирован в стерильной дистиллированной воде или любой другой жидкости, подходящей для внутривенного введения.

После регидратации для введения в стерильной дистиллированной воде или другой подходящей жидкости лиофилизированный препарат должен иметь примерно физиологическую осмоляльность ткани-мишени для регидратированного пептидного препарата, то есть крови при внутривеннои введении или легочной ткани при ингаляционном введении. Таким образом, предпочтительно, чтобы регидратированный препарат был, по существу, изотоническим.

Предпочтительная концентрация для внутривенного, перорального или ингаляционного введения составляет от 10 до 2000 мкмоль/мл и более предпочтительно составляет от 200 до 800 мкмоль/мл.

Для перорального введения в форме таблеток или капсул, по меньшей мере, один антисмысловой олигонуклеотид может быть объединен с любым нетоксичным фармацевтически приемлемым инертным носителем, подходящим для перорального введения, таким как лактоза, крахмал, сахароза, целлюлоза, стеарат магния, дикальций фосфат, сульфат кальция, тальк, маннит, этиловый спирт (жидкие формы) и тому подобное. Кроме того, когда это желательно или необходимо, то также в смесь могут быть включены подходящие связующие, смазывающие вещества, разрыхлители и красители. Порошки и таблетки могут содержать примерно от 5 до 95% композиции по изобретению.

Подходящие связующие вещества включают крахмал, желатин, природные сахара, кукурузные подсластители, природные и синтетические камеди, такие как гуммиарабик, альгинат натрия, карбоксиметилцеллюлоза, полиэтиленгликоль и воски. Среди смазывающих веществ, которые могут быть упомянуты для применения в данных лекарственных формах, находятся борная кислота, бензоат натрия, ацетат натрия, хлорид натрия и тому подобное. Разрыхлители включают крахмал, метилцеллюлозу, гуаровую камедь и тому подобное.

Кроме того, композиции по настоящему изобретению могут быть составлены в форме с замедленным высвобождением для обеспечения контролируемой скорости высвобождения, по меньшей мере, одного антисмыслового олигонуклеотида для оптимизации терапевтических эффектов. Подходящие лекарственные формы для замедленного высвобождения включают имплантируемые биодеградируемые матрицы для замедленного высвобождения, содержащие, по меньшей мере, один антисмысловой олигонуклеотид, многослойные таблетки, содержащие слои с различной скоростью распадаемости, или полимерные матрицы с контролируемым высвобождением, пропитанные, по меньшей мере, одним антисмысловым олигонуклеотидом.

Препараты в жидкой форме включают растворы, суспензии и эмульсии. В качестве примера можно упомянуть водные или водные-пропиленгликолевые растворы для парентеральных инъекций или добавки подсластителей и замутнителей для пероральных растворов, суспензий и эмульсий.

Подходящими разбавителями являются вещества, которые обычно составляют основную часть композиции или лекарственной формы. Подходящие разбавители включают сахара, такие как лактоза, сахароза, маннит и сорбит, крахмалы, полученные из пшеницы, кукурузы, риса и картофеля, и целлюлозы, такие как микрокристаллическая целлюлоза. Количество разбавителей в композиции может составлять примерно от 5% до примерно 95% по отношению к общей массе композиции, предпочтительно примерно от 25% до примерно 75% по отношению к общей массе композиции.

Термин разрыхлители относится к веществам, добавленным к композиции для обеспечения ее разрушения (распадаемости) и высвобождения активных веществ. Подходящие разрыхлители включают крахмалы, «растворимые в холодной воде» модифицированные крахмалы, такие как натрия карбоксиметилкрахмал, натуральные и синтетические камеди, такие как камедь рожкового дерева, карая, гуаровая камедь, трагакант и агар, производные целлюлозы, такие как метилцеллюлоза и натрий карбоксиметилцеллюлоза, микрокристаллические целлюлозы и сшитые микрокристаллические целлюлозы, такие как кроскармеллоза натрия, альгинаты, такие как альгиновая кислота и альгинат натрия, глины, такие как бентониты, и шипучие смеси. Количество разрыхлителя в композиции может составлять примерно от 1 до примерно 40% по отношению к массе композиции, предпочтительно примерно от 2 до 30% по отношению к массе композиции, более предпочтительно примерно от 3 до 20% по отношению к массе композиции, и наиболее предпочтительно примерно от 5 до примерно 10% по отношению к массе композиции.

Связующие вещества представляют вещества, которые связывают или «склеивают» порошки вместе и делают их когезионными, образуя гранулы, таким образом, функционируя в качестве «адгезива» в композиции. Связующие вещества дополнительно повышают прочность сцепления, уже обеспеченную разбавителем или объемообразующим агентом. Подходящие связующие вещества включают сахара, такие как сахароза, крахмалы, полученные из пшеницы, кукурузы, риса и картофеля; природные камеди, такие как гуммиарабик, желатин и трагакант; производные бурых морских водорослей, такие как альгиновая кислота, альгинат натрия и альгинат аммония, альгинат кальция; целлюлозные материалы, такие как метилцеллюлоза и натрий карбоксиметилцеллюлоза и гидроксипропилметилцеллюлоза; поливинилпирролидон; и неорганические вещества, такие как алюмосиликат магния. Количество связующего вещества в композиции может составлять примерно от 1 до примерно 30% по отношению к массе композиции, предпочтительно примерно от 2 до 20% по отношению к массе композиции, более предпочтительно примерно от 3 до 10% по отношению к массе композиции, и еще более предпочтительно примерно от 3 до примерно 6% по отношению к массе композиции.

Смазочное вещество относится к веществу, добавленному в лекарственную форму для того, чтобы обеспечить таблетке, гранулам и т.д. после их прессования, извлечение из прессовальной формы или матрицы, или истирание в результате трения или износа. Подходящие смазывающие вещества включают стеараты металлов, такие как стеарат магния, стеарат кальция или стеарат калия, стеариновую кислоту; высокоплавкие воски; и водорастворимые смазывающие вещества, такие как хлорид натрия, бензоат натрия, ацетат натрия, олеат натрия, полиэтиленгликоли и D,L-лейцин.

Смазывающие вещества обычно добавляют на самой последней стадии перед прессованием, так как они должны присутствовать на поверхностях гранул и между ними и частями таблеточного пресса. Количество смазывающего вещества в композиции может составлять примерно от 0,05 до примерно 15% по отношению к массе композиции, предпочтительно примерно от 0,2 до примерно 5% по отношению к массе композиции, более предпочтительно примерно от 0,3 до примерно 3% по отношению к массе композиции, и наиболее предпочтительно примерно от 0,3 до примерно 1,5% по отношению к массе композиции.

Скользящие вещества представляют вещества, которые предотвращают комкование и улучшают текучесть гранулятов, для того, чтобы поток был гладким и однородным. Подходящие скользящие вещества включают диоксид кремния и тальк. Количество скользящего вещества в композиции может варьировать примерно от 0,01 до примерно 10% по отношению к массе композиции, предпочтительно примерно от 0,1 до примерно 7% по отношению к массе композиции, более предпочтительно примерно от 0,2 до примерно 5% по отношению к массе композиции, и наиболее предпочтительно примерно от 0,5 до примерно 2% по отношению к массе композиции.

В фармацевтические композиции, раскрытые здесь, антисмысловые олигонуклеотиды включают предпочтительно в форме их солей и, необязательно вместе с другими компонентами, которые повышают стабильность антисмысловых олигонуклеотидов, увеличивают рекрутинг РНКазы Н, повышают способность нахождения мишени, усиливают поглощение клетками и тому подобное. Для достижения этих целей антисмысловые олигонуклеотиды можно модифицировать химически вместо или в дополнении к использованию дополнительных компонентов, пригодных для достижения этих целей. Таким образом, антисмысловые олигонуклеотиды по изобретению можно химически связать с группами или компонентами, которые усиливают активность, клеточное распределение или поглощение клетками антисмысловых олигонуклеотидов и т.д.. Такие фрагменты включают липидные группы, такие как холестериловая группа, холевую кислоту, тиоэфир, гексил-S-тритилтиол, тиохолестерин, алифатическую цепь, например, остатки додекандиола или ундецила, фосфолипид, такой как дигексадецил-rac-глицерин или 1,2-ди-O-гексадецил-rac-глицеро-3-H-фосфонат триэтиламмония, цепь полиамина или полиэтиленгликоля, или адамантан-уксусную кислоту, пальмитиловую группу или группу октадециламина или гексиламинокарбонилоксихолестерина. Настоящее изобретение также включает антисмысловые олигонуклеотиды, которые являются химерными соединениями. «Химерные» антисмысловые олигонуклеотиды в контексте настоящего изобретения представляют собой антисмысловые олигонуклеотиды, которые содержат две или более химически различных областей, одна из которых представляет последовательность олигонуклеотида, как здесь раскрыто, которая связана с группой или компонентом, предназначенных для повышения поглощения клетками, повышения устойчивости к деградации под воздействием нуклеаз, повышения аффинности связывания с нуклеиновой кислотой-мишенью, увеличения рекрутинга РНКазы Н и так далее. Например, дополнительная область или группа или компонент антисмыслового олигонуклеотида может служить в качестве субстрата для ферментов, способных расщеплять гибриды РНК:ДНК или молекулы РНК:РНК. В качестве примера: РНКаза Н является клеточной эндорибонуклеазой, которая отщепляет цепь РНК из дуплекса РНК:ДНК. Таким образом, активация РНКазы Н приводит к отщеплению РНК-мишени, которая в данном случае представляет собой мРНК, кодирующую TGF-RII, тем самым существенно повышая эффективность ингибирования экспрессии гена антисмысловым олигонуклеотидом. Следовательно, сопоставимые результаты часто можно получить с более короткими олигонуклеотидами при использовании химерных олигонуклеотидов.

Показания

Настоящее изобретение относится к применению антисмысловых олигонуклеотидов, раскрытых здесь, для профилактики и лечения нейродегенеративных заболеваний, нейротравмы, нейрососудистых и нейровоспалительных заболеваний, включая постинфекционные и воспалительные заболевания центральной нервной системы (ЦНС).

Антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению особенно пригодны для стимуляции регенерации и функционального восстановления поврежденных нервных путей и/или для лечения и компенсации вызванного возрастом снижения обновления нейрональных стволовых клеток.

Таким образом, еще один аспект настоящего изобретения относится к применению антисмыслового олигонуклеотида, раскрытого здесь, для стимуляции регенерации нейрональной ткани посредством реактивации нейрогенеза, обеспечения дифференцировки и миграции нейронов и индукции интеграции новых нейронов в анатомические и функциональные нейрональные цепи.

Дополнительный аспект настоящего изобретения относится к применению антисмыслового олигонуклеотида, раскрытого здесь, для стимуляции регенерации и клинического (структурного) восстановления у пациентов с повреждением нервной системы или повреждением других систем органов, вызванных фиброзом, или потерей оборота стволовых клеток.

Кроме того, антисмысловые олигонуклеотиды пригодны для компенсации и лечения снижения обновления нейрональных стволовых клеток, вызванного возрастом, воспалением или дефектом гена.

Антисмысловые олигонуклеотиды по настоящему изобретению ингибируют экспрессию TGF-RII и, следовательно, используются для лечения заболеваний, ассоциированных с повышающей регуляцией или повышенным уровнем TGF-RII и/или TGF-RII.

Таким образом, еще один аспект настоящего изобретения относится к применению антисмысловых олигонуклеотидов в профилактике и лечении нейродегенеративных заболеваний, нейровоспалительных расстройств, травматических или посттравматических расстройств, сосудистых или точнее нейроваскулярных расстройств, гипоксических расстройств, постинфекционных расстройств центральной нервной системы, фиброзных болезней, гиперпролиферативных заболеваний, рака, опухолей, пресвиакуза и пресбиопии.

Термин «нейродегенеративное заболевание» или «неврологическое заболевание», или «нейровоспалительное расстройство» относится к любому заболеванию, расстройству или состоянию, поражающему центральную или периферическую нервную систему, включая СПИД, неврологические осложнения СПИДа, отсутствие septum pellucidum, приобретенную эпилептиформную афазию, острый диссеминированный энцефаломиелит, адренолейкодистрофию, агнезию мозолистого тела, агнозию, синдром Айкарди, болезнь Александера, болезнь Альперса, альтернирующую гемиплегию, болезнь Альцгеймера, боковой амиотрофический склероз (БАС), анэнцефалию, аневризму, синдром Ангельмана, ангиоматоз, аноксию, афазию, апраксию, арахноидальные кисты, арахноидит, мальформацию Арнольда-Киари, артериовенозную мальформацию, аспартам, синдром Аспергера, атаксию телеангиэктазию, атаксию, синдром дефицита внимания с гиперактивностью, аутизм, вегетативную дисфункцию, боли в спине, синдром Барта, болезнь Баттена, болезнь Бехчета, паралич Белла, доброкачественный эссенциальный блефароспазм, доброкачественную фокальную амиотрофию, доброкачественную внутричерепную гипертензию, синдром Бернарда-Рота, болезнь Бинсвангера, блефароспазм, синдром Блоха-Сульцбергера, родовые травматические повреждения плечевого сплетения, травмы плечевого сплетения, синдром Брэдбери-Эгглстона, аневризму головного мозга, черепно-мозговую травму, опухоли головного и спинного мозга, синдром Броуна-Секара, бульбоспинальную мышечную атрофию, болезнь Канавана, синдром запястного туннеля, каузалгию, каверномы, кавернозную ангиому, кавернозную мальформацию, пирамидный паралич, синдром центрального паралича, центральный болевой синдром, головные расстройства, мозжечковую дегенерацию, гипоплазию мозжечка, церебральную аневризму, церебральный атеросклероз, церебральную атрофию, церебральную форму бери-бери, церебральный гигантизм, церебральную гипоксию, церебральный паралич, церебро-оукло-фасцио-скелетный синдрома, болезнь Шарко-Мари-Тута, ишемический синдром, хорею, хореоакантоцитоз, хроническую воспалительную демиелинизирующую полинейропатию (CIDP), хроническую ортостатическую непереносимость, хроническую боль, синдром Коккейна типа II, синдром Коффина-Лоури, кому, включая стойкое вегетативное состояние, сложный региональный болевой синдром, врожденную лицевую диплегию, врожденную миастению, врожденную миопатию, врожденные пороки развития кавернозных сосудов, кортикобазальную дегенерацию, краниальный артериит, краниосиностоз, болезнь Крейтцфельдта-Якоба, кумулятивные травматические расстройства, синдром Кушинга, цитомегалическую болезнь телец включения (CIBD), цитомегаловирусную инфекцию, синдром танцующих глаз-танцующих ног, синдром Дэнди-Уокера, болезнь Доусона, синдром Де Морсье, паралич Дежерин-Клюмпке, мультиинфарктную деменцию, подкорковую деменцию, деменция с телами Леви, дерматомиозит, диспраксию развития, синдром Девика, диабетическую невропатию, рассеянный склероз, синдром Драве, вегетативную дистонию, дисграфию, дислексию, дисфагию, диспраксию, дистонию, раннюю младенческую эпилептическую энцефалопатию, синдром пустого турецкого седла, летаргический энцефалит, энцефалит и менингит, энцефалоцеле, энцефалопатию, энцефалотригеминальный ангиоматоз, эпилепсию, болезнь Эрба, параличи Эрба-Дюшенна и Дежерина-Клюмпке, болезнь Фабри, синдром Фара, обмороки, семейную дисаутономию, семейную гемангиому, семейную идиопатическую кальцификацию базальных ганглиев, семейный спастический паралич, фебрильные судороги (например, ГЭФС и ГЭФС плюс), синдром Фишера, синдром «вялого ребенка», атаксию Фридрейха, болезнь Гоше, синд