Способы идентификации и прогнозирования риска сердечно-сосудистого события или заболевания, или смертельного исхода, способы оценки тяжести и мониторинга сердечно-сосудистого события или заболевания, способ мониторинга эффективности терапии

Настоящее изобретение относится к способу прогнозирования риска инфаркта миокарда или смертельного исхода у субъекта после инфаркта миокарда, а также к мониторингу эффективности лечения инфаркта миокарда. Способ прогнозирования риска инфаркта миокарда или смертельного исхода у субъекта после инфаркта миокарда включает измерение уровня экспрессии растворимого триггерного рецептора (sTREM-1) в образце от субъекта, при этом более высокий уровень экспрессии sTREM-1 относительно контрольной величины является указателем риска инфаркта миокарда или смертельного исхода у субъекта после инфаркта миокарда, где значение контрольной величины составляет по крайней мере 100 пг/мл. 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 5 табл., 1 пр., 4 ил.

 

Область техники

Настоящее изобретение относится к способам и наборам для прогнозирования риска возникновения у субъекта сердечно-сосудистого заболевания путем определения уровня растворимого TREM-1 в образце.

Предшествующий уровень техники

Атеросклероз является причиной сердечно-сосудистых заболеваний и ишемической болезни сердца за счет медленно прогрессирующего формирования бляшек и сужения просвета артерий. В результате разрыва бляшек и тромбоза, наиболее распространенные формы сердечно-сосудистых заболеваний обычно манифестируют как острый коронарный синдром (ОКС), инфаркт миокарда или инсульт. Исследования на животных и людях подтвердили, что атеросклероз запускается хроническим воспалительным процессом в сосудистой стенке, который возникает главным образом в ответ на модификацию эндогенных структур, таких, как частично оксидированные липопротеины, которые стимулируют как врожденный, так и приобретенный иммунный ответ. Врожденный иммунный ответ инициируется активацией как сосудистых клеток, так и моноцитов/макрофагов, а приобретенный иммунный ответ развивается в ответ на целый ряд потенциальных антигенов, презентируемых Т-эффекторным лимфоцитам антиген-презентирующими клетками (Ait-Oufella, Н. et al. 2011. Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 31: 969-979). На генетически модифицированных мышиных моделях было показано, что циркулирующие моноциты рекрутируются в сосудистую стенку хемокинами и затем преобразуются в макрофаги и нагруженные липидами пенистые клетки. Макрофаги в интиме стимулируют развитие бляшек посредством выброса цитокинов, усиливают воспаление и дестабилизацию бляшек за счет продукции протеаз и аккумуляции апоптоза (Libby, P. et al. 2011. Nature 473: 317-325). Моноциты/макрофаги стимулируются несколькими медиаторами, называемыми ПАМПс (Патоген Ассоциированные Молекулярные Паттерны), которые взаимодействуют с ПРР (Патоген-Распознающими Рецепторами). Некоторые ППРс участвуют в патофизиологии атеросклероза. Например, Toll-подобные рецепторы экспрессируются у человека и животных в атеросклеротических бляшках. Миокардиальный или церебральный инфаркт являются примерами комплексных клинических синдромов, которые являются следствием опасной и повреждающей, постоянной или транзиторной ишемии, ишемия обычно вызывается окллюзией коронарных/церебральных артерий, что приводит к нарушению баланса между поступлением кислорода и потребностью в нем. Инфаркт миокарда ассоциирован с мультифазным воспалительным ответом. Первичная ишемия индуцирует некроз, образование свободных радикалов кислорода, активацию комплемента и цитокинового каскада, индуцируемого высвобождением TNF-альфа. Фаза реперфузии пораженного участка ассоциирована с повышенной и усиленной воспалительной реакцией, приводящей к рекрутингу лейкоцитов в зону ишемии. Рекрутированные лейкоциты также участвуют в in situ и системном высвобождении медиаторов воспаления, что приводит к состоянию гиперактивированного воспаления, следствием которого являются патофизиологические последствия инфаркта.

В целом существует большое количество доказательств того, что врожденный иммунитет, в частности моноциты/макрофаги и нейтрофилы, играют ключевую роль в патофизиологии атеросклероза и постишемическом ремоделировании сердечной ткани. Инфаркт миокарда (ИМ) сопровождается высоким уровнем циркулирующих в крови моноцитов в течение нескольких недель. Повышенное количество циркулирующих моноцитов - это огромный пул воспалительных клеток, способных проникать в растущие артериальные бляшки и, возможно, увеличивать вероятность их разрыва. Действительно, высокий уровень лейкоцитов в крови после ИМ свидетельствует о высоком риске повторного инфаркта и смерти (Swirski FK. And Nahrendorf М. 2013. Science. 339: 161-166.; Sabatine, M.S et al. 2002. J. Am. Coll. Cardiol. 40: 1761-1768). По факту, ИМ усиливает воспаление в атеросклеротических бляшках на расстоянии, что провоцирует развитие хронического атеросклероза, а иммунные клетки врожденного иммунитета потенциируют этот патологический процесс.

TREM-1 (Триггерный рецептор, экспрессируемый на миелоидных клетках 1) представляет собой иммунорецептор, экспрессируемый клетками врожденного иммунитета (моноцитами/макрофагами и нейтрофилами). Активация TREM-1 приводит к продукции цитокинов и хемокинов (TNF-α, IL-6, IL-8, МСР-1 and -3, MIP-1α), а также к быстрой дегрануляции и окислительному взрыву (Derive, М. et al. 2010. Self Nonself 1: 225-230; Derive, M. et al. 2012. J. Immunol. Baltim. Md 1950). Функция TREM-1 заключается в модуляции/усилении а также в активации/инициации воспаления за счет синергичного взаимодействия с ПРРс (включая Toll-подобные рецепторы), результатом которого является избыточный иммунный ответ.

С-реактивный белок (СРБ) широко используется в диагностических тестах на предмет сердечно-сосудистых заболеваний. Однако он не является признанным специфическим диагностическим маркером.

Существующие в настоящее время диагностические процедуры не являются в достаточной мере удовлетворительными, например, что касается определения индивидуальных рисков для определенных исходов. Существует необходимость в диагностических и прогностических способах и системах, при этом указанные способы должны быть неинвазивными, чувствительными и пригодными для оценки и прогнозирования серьезных исходов сердечно-сосудистых заболеваний, в особенности у лиц с риском заболевания коронарных артерий (ИБС) и их последствий.

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение предлагает новый способ идентификации субъектов, имеющих риск наличия или развития сердечно-сосудистых заболеваний или осложнений.

Одним объектом настоящего изобретения является способ идентификации субъекта, имеющего риск наличия или развития сердечно-сосудистых заболеваний или событий, или риск смерти от любых причин, при этом указанный способ заключается в измерении уровня sTREM-1 в образце, полученном от субъекта.

Другим объектом настоящего изобретения является способ стратификации субъектов по степени риска наличия или развития сердечно-сосудистых заболеваний или событий, или риска смерти от любых причин, при этом указанный способ заключается в измерении уровня sTREM-1 в образце, полученном от субъекта.

Еще одним объектом настоящего изобретения является способ оценки тяжести сердечно-сосудистого заболевания или события у субъекта, при этом указанный способ заключается в измерении уровня sTREM-1 в образце, полученном от субъекта.

Согласно одному варианту осуществления изобретения, уровень sTREM-1 сравнивают с контрольной величиной.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, уровень sTREM-1 выше, чем контрольная величина, свидетельствует о риске наличия или развития сердечно-сосудистого заболевания или события или о риске смерти от любых причин.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, указанным образцом является образец периферической крови.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, указанным сердечно-сосудистым событием является инфаркт миокарда. Согласно другому варианту осуществления изобретения, указанным сердечно-сосудистым событием является атеросклероз.

Другим объектом настоящего изобретения является способ мониторинга сердечно-сосудистого заболевания или события у субъекта, нуждающегося в этом, при этом указанный способ заключается в измерении уровня sTREM-1 в образце, полученном от субъекта.

Еще одним объектом настоящего изобретения является способ мониторинга эффективности лечения, проводимого субъекту, страдающему от сердечно-сосудистого заболевания или события, указанный способ заключается в измерении уровня sTREM-1 в образце, полученном от субъекта. Согласно одному варианту осуществления изобретения, уровень sTREM-1 сравнивается с индивидуальной контрольной величиной для данного субъекта. Предпочтительно, индивидуальная контрольная величина для конкретного субъекта - это уровень sTREM-1, измеренный в образце, полученном у субъекта до начала лечения или в самом его начале.

Определения

В описании настоящего изобретения представленные ниже термины имеют следующие значения:

Термин "сердечно-сосудистое событие" используется взаимозаменяемо с термином "сердечное событие", "острое артериоваскулярное событие" или "артериоваскулярное событие" и относится к внезапной сердечной смерти, острому коронарному синдрому, такому, как (без ограничений указанными), разрыв атеросклеротической бляшки, инфаркт миокарда, нестабильная стенокардия, а также к внесердечным артериоваскулярным событиям, таким, как тромбозы сосудов нижних конечностей, аневризмы или прогрессирование аневризм, инсульт или другие артериоваскулярные ишемические события, при которых нарушается ток крови по сосудам и временно или постоянно прекращается поступление кислорода в ткани.

Термины "сердечно-сосудистое заболевание" или "артериоваскулярное заболевание" - это общие термины, используемые для обозначения целого ряда патологических состояний, затрагивающих сердце, клапаны сердца, кровоток и сосудистую сеть тела, и объединяющие все заболевания, поражающие сердце или кровеносные сосуды, включая, без ограничений указанными, метаболический синдром, синдром X, атеросклероз, атеротромбоз, ишемическую болезнь сердца, стабильную и нестабильную стенокардию, инсульт, заболевания аорты и ее ветвей (такие, как аортальный стеноз, тромбоз или аневризма), заболевания периферических артерий, заболевания периферических сосудов, цереброваскулярную болезнь, а также любое транзиторное или перманентное ишемическое артериоваскулярное событие. Термин артериоваскулярное заболевание, используемый в настоящем описании, чаще всего относится к ишемическому или пред-ишемическому заболеванию, но также может обозначать и неишемическое заболевание. Используемые в описании термины "атеросклероз" и "атеротромбоз" относятся к системному воспалительному заболеванию, ассоциированному с комплексными воспалительными ответами на возникшие впервые сосудистые патологии, в которых участвуют активированный воспалением эндотелий, воспалительные лейкоциты, служащие источником тромбогенных стимулов, гладкомышечные клетки как источник прокоагулянтов и стимуляторы воспалительного ответа во время тромбоза, и тромбоциты как медиаторы воспаления и тромбоза. Артерии утолщаются и сужаются в результате образования на внутренней стенке особого материала, называемого "бляшками". По мере развития бляшки и увеличения ее в размерах, внутренний просвет артерий сужается ("стеноз") и, следовательно, уменьшается поток крови. Стеноз или разрыв бляшки может вызывать частичную или полную окклюзию пораженных сосудов. Ткани, которые кровоснабжаются пораженными сосудами, таким образом, лишаются источника кислорода (ишемия) результатом чего может явиться смерть клеток (некроз). "ИБС" или "ишемическая болезнь сердца" представляет собой артериоваскулярное забоолевание, которое происходит когда сосуды, кровоснабжающие сердца, поражаются атеросклерозом, кальцифицируются и/или сужаются. В итоге снижается кровоток в сердечной мышце в результате чего мышца не получает необходимое ей количество кислорода и происходит некроз. ИБС объединяет такие состояния как острый коронарный синдром (ОКС), инфаркт миокарда (сердечная атака), стенокардия (стабильная и нестабильная), атеросклероз и атеротромбоз, который развивается в сосудах, снабжающих сердце большим количеством обогащенной кислородом крови. "ЦВБ" или "цереброваскулярная болезнь" представляет собой артериоваскулярное заболевание сосудов, по которым богатая кислородом кровь поступает к лицу и головному мозгу, и является следствием атеросклероза или атеротромбоза. Указанный термин также часто используется для описания "уплотнения" сонных артерий, кровоснабжающих головной мозг. Это заболевание часто сопровождает ИБС и/или ЗПА (заболевания периферических артерий). Оно также считается ишемическим заболеванием, то есть заболеванием, которое приводит к снижению кровотока. ЦВБ объединяет такие состояния как цереброваскулярная ишемия, острый церебральный инфаркт, инсульт, ишемический инсульт, геморрагический инсульт, аневризма, умеренные когнитивные нарушения (УКН) и транзиторные ишемические атаки (ТИА). Считается, что ишемическая ЦВБ тесно связана с ИБС и ЗПА; а неишемическая ЦВБ может иметь множественный патогенез.

По подсчетам около 5 миллионов американцев выжили после поздно диагностированного острого цереброваскулярного события, при этом, каждый год регистрируется 700 тысяч острых цереброваскулярных событий. Как раскрывается в настоящем документе, что даже если у субъекта имеется невысокий риск ЦВБ или полностью отсутствует риск ЦВБ, что определено на основании установления традиционных факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний, либо на основании отсутствия симптомов, таких, как транзиторные ишемические атаки, умеренные когнитивные нарушения или сильная головная боль, риск развития острого цереброваскулярного события все равно сохраняется. Термин "ЗПА" или "заболевание периферических артерий" объединяет такие патологические состояния, как атеросклероз и атеротромбоз, которые локализуются в сосудах, расположенных вне сердца и головного мозга. Это очень распространенное заболевание, часто сопутствующее сердечно-сосудистым заболеваниям (ИБС). Даже если у субъекта имеется невысокий риск ЗПА или полностью отсутствует риск ЗПА (или артериоваскулярного заболевания), и полностью отсутствуют клинические симптомы ЗПА или артероваскулярного заболевания, у него все равно сохраняется риск развития артериоваскулярного события, даже при отсутствии динамических нарушений кровобращения. Под динамическими нарушениями кровобращения понимается боль или дискомфорт в мышцах нижних конечностей, возникающие в результате снижения притока крови к мышцам по причине сужения периферических артерий; впоследствии часто развивается ишемия и полная артериальная окклюзия, что приводит к некрозу скелетных мышц и нижних конечностей. Боль или дискомфорт часто возникают при ходьбе и проходят в покое (перемежающаяся хромота). Боль, напряжение мышц, судороги, утомление и слабость часто являются результатом динамических нарушений кровообращения. ЗПА приводят не только к гемодинамическим нарушениям, характерным для ИБС, но и к метаболическим изменениям скелетных мышц. При прогрессировании ЗПА развивается хроническая тяжелая окллюзия периферических артерий, единственным способом лечения которой является оперативное лечение в объеме ампутации поврежденной конечности. ЗПА считается редко диагностируемым заболеванием, в большинстве случаев точный диагноз ставится уже после появления клинических симптомов, либо при подтверждении другого артериоваскулярного заболевания как сопутствующий, либо уже после возникновения необратимого сосудистого повреждения, такого, как ишемическое повреждение.

Термин "измерение" или альтернативно "определение", или "обнаружение" означает оценку наличия, отсутствия, величины или количества (которое может представлять собой эффективное количество) либо заданного вещества в клиническом полученном от субъекта образце, включая определение количественных или качественных уровней концентрации указанных веществ, либо определенной величины или значения неаналитических клинических параметров субъекта.

Термин "риск" в контексте настоящего изобретения относится к вероятности того, что какое-либо событие произойдет в течение специфического периода времени, например, сердечно-сосудистое событие; указанный термин может означать "абсолютный" или "относительный" риск для субъекта. Абсолютный риск может быть оценен на основании как актуальных наблюдений после измерений для соответствующей временной когорты, как и на основании заданных значений, полученных при оценке статистически значимых исторических когорт, за которыми наблюдали в течение определенного периода времени. Относительный риск относится к соотношению абсолютных рисков для субъекта, которые сравнивают либо с абсолютным риском для когорт низкого риска, либо со средним популяционным риском, которые могут отличаться в зависимости от того, какие клинические факторы риска оцениваются. Также широко используются понятия отношения шансов, соотношение положительных и отрицательных событий для заданного изучаемого результата (шансы определяются в соответствии с формулой р/(1-р), где р - вероятность события, а (1-р) - вероятность того, что событие не произойдет).

Термин "образец" в контексте настоящего изобретения относится к биологическому образцу, полученному от субъекта, и включает, без ограничений указанными, биологические жидкости и/или образцы тканей, такие, как гомогенаты или солюбилизированные ткани, полученные от субъекта. Образцы тканей традиционно получают путем тканевой биопсии или во время аутопсии. К биологическим жидкостям в контексте настоящего изобретения относятся: кровь, моча, слюна и любой другой секрет человеческого тела или его производное. Используемый в описании термин "кровь" объединяет цельную кровь, плазму, сыворотку, циркулирующие эпителиальные клетки, составляющие элементы и любые производные крови.

Термин "клинические параметры или признаки" объединяет все биомаркеры состояния здоровья человека или другие характеристики, определяемые не в анализах или образцах, такие, как (без ограничений указанными), возраст (Age), раса (Race), пол (Sex), диастолическое артериальное давление (DBP) и систолическое артериальное давление (SBP), семейный анамнез (FamHX), вес (НТ), рост (WT), объем талии (Waist) и окружность бедра (Hip), индекс массы тела (BMI или БМТ), а также другие параметры, такие, как сахарный диабет 1-го или 2-го типа или гестационный сахарный диабет (DM или GDM, все указанные термины в описании объединены термином "диабет"), а также частота сердечных сокращений в покое.

Термин "субъект" в контексте настоящего изобретения относится, предпочтительно, к млекопитающему. Млекопитающим может быть человек, не принадлежащий к человеческому роду примат, мышь, крыса, собака, кошка, лошадь или корова, и другие животные, без ограничений указанными примерами. Млекопитающие, не принадлежащие к человеческому роду, преимущественно могут использоваться как субъекты, представляющие собой животные модели артерио-васкулярных заболеваний или артериоваскулярных событий, которые, в некоторых случаях, уже прошли или проходят лечение по поводу артериоваскулярного заболевания или события. Альтернативно, субъектом может быть и тот, у кого ранее не было диагностировано артериоваскулярное заболевание. Например, субъектом может быть тот, кто имеет один или более фактор риска артериоваскулярного заболевания, или тот, кто не имеет факторов риска артериоваскулярного заболевания, или тот, у кого нет симптомов артериоваскулярного заболевания или артериоваскулярного события. Субъектом также может быть тот, что страдает от риска развития артериоваскулярного заболевания или артериоваскулярного события.

"Растворимый TREM-1" (sTREM-1) используемый в настоящем описании, относится к растворимой форме внеклеточного домена TREM-1 (код доступа Q9NP99, SEQ ID NO: 1). sTREM-1 освобождается при отщеплении внеклеточного домена TREM-1. sTREM-1 может представлять собой растворимую форму TREM-1, которая образуется в результате протеолитического расщепления мембранно-связанной формы TREM-1. В исследовании, проведенном Gingras (Gingras et al., Mol Immunol 2002, 38 (11): 817-24) была предпринята попытка идентифицировать экспрессию мРНК альтернативного сплайсинга TREM-1 (TREM-1sv), которая может транслироваться в растворимую форму рецептора. Однако указанная растворимая форма TREM-1 (которая представляет собой белковую последовательность, структура которой получена на основании гипотетической нуклеотидной последовательности) так и не была выделена у человека. Позднее, в 2007 и 2012 гг., (Gomez-Pina et al., J Immunol. 2007, 179(6): 4065-73; Gomez-Pina et al., J Leukoc Biol. 2012, (6): 933-45) было показано, что растворимый TREM-1 образуется в результате протеолитического расщепления мембранно-связанной формы TREM-1 металлопротеиназами. В действительности, TREM-1 представляет собой трансмембранный гликопротеин, который имеет Ig-подобный домен, легко отщепляемый металлопротеиназами (MMPs) с образованием sTREM-1. В лейкоцитах человека не были обнаружены альтернативные формы сплайсинга TREM-1.

Термин "приблизительно" означает отклонение плюс или минус 10% от заданной величины.

Детальное описание изобретения

TREM-1 (триггерный рецептор миелоидных клеток -1) является иммунным рецептором, экспрессируемым клетками, отвечающими за врожденный иммунитет. Без привязки к какой-либо теории, авторы изобретения установили, что вовлечение Nod-подобных рецепторов (NLRs) (включая Toll-подобные рецепторы, TLRs) индуцирует up-регуляцию экспрессии TREM-1 и его экспозицию на мембране клеток. Указанная активация NLRs и TLRs может происходить как в условиях стерильного иммунитета, путем связывания ассоциированных с повреждением молекулярных паттернов (DAMPs), или в условиях инфекции, путем связывания патоген-ассоциированных молекулярных паттернов (PAMPs). Такая активация NLRs и TLRs индуцирует up-регуляцию металлопротеиназ, которые, в свою очередь, среди большого количества мишеней, будут связываться с внеклеточным доменом TREM-1 и индуцировать высвобождение растворимой формы TREM-1 [Gomez-Pina et al., J Immunol. 2007, 179 (6): 4065-73].

Согласно одному варианту осуществления изобретения, sTREM-1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, соответствующую аминокислотам 21-205 последовательности SEQ ID NO: 1.

Согласно другому варианту осуществления изобретения, sTREM-1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3, соответствующую аминокислотам 31-205 последовательности SEQ ID NO: 1.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, sTREM-1 представляет собой вариант SEQ ID NO: 2 или вариант SEQ ID NO: 3.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3, представляет собой аминокислотную последовательность, включающую, по крайней мере, 25 последовательных аминокислот, предпочтительно, по крайней мере, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 165, 170, 175, 180 или 185 последовательных аминокислот из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3, соответственно.

Согласно другому варианту осуществления изобретения, вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3, представляет собой аминокислотную последовательность, включающую, аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3, соответственно, и дополнительные аминокислоты на С-конце или N-конце SEQ ID NO: 2 или 3, при этом число дополнительных аминокислот составляет от 1 до 50, предпочтительно, от 1 до 20, более предпочтительно, от 1 до 10 аминокислот, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислот на С-конце и/или 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислот на N-конце.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3 представляет собой аминокислотную последовательность, которая обычно отличается от последовательности SEQ ID NO: 2 или 3 заменой, делецией, добавлением и/или вставкой одной или более аминокислоты. Согласно одному варианту осуществления изобретения, указанные замены, добавления, делеции и/или вставки могут затрагивать 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислот.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3 представляет собой аминокислотную последовательность, по крайней мере, из 25 аминокислот, предпочтительно, по крайней мере, из 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 165, 170, 175, 180 или 185 аминокислот, которые, по крайней мере, на 75%, 80%, 90%, 95%, или, по крайней мере, на 96%, 97%, 98%, 99% или более идентичны аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3, соответственно.

Термин "идентичность" или "идентичны", когда используются по отношению к последовательностям одного или более полипептида, обозначают степень родства между полипептидами, что определяется количеством соответствий между нитями из двух или более аминокислотных остатков. "Идентичность" измеряет процент идентичных соответствий между двумя или более последовательностями, без подсчета пропусков (если такие есть) и описывается математической моделью или компьютерной программой ("алгоритмом"), при этом расчет ведется по самой короткой последовательности. Идентичность родственных пептидов может быть легко вычислена при помощи хорошо известных специалистам способов. К таким способам относятся, без ограничений указанными, способы, описанные в следующих источниках: Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part 1, Griffin, A.M., and Griffin, H.G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M. Stockton Press, New York, 1991; and Carillo et al., SIAM J. Applied Math. 48, 1073 (1988). Предпочтительными способами измерения идентичности являются способы, разработанные таким образом, чтобы показывать наибольшее количество соответствий между изучаемыми последовательностями. Предпочтительными компьютерными способами для определения идентичности между двумя последовательностями являются программное обеспечение GCO, включая GAP (Devereux et al., Nucl. Acid. Res. 2, 387, 1984); программное обеспечение Genetics Computer Group, University of Wisconsin, Madison, Wis., BLASTP, BLASTN, и FASTA (Altschul et al., J. MoI. Biol. 215, 403-410, 1990). Программа BLASTX является общедоступной в Национальном Центре Биотехнологической Информации (NCBI) и в других источниках (BLAST Manual, Altschul et al. NCB/NLM/NIH Bethesda, Md. 20894). Для определения идентичности также может быть использован широко известный алгоритм Смита-Ватермана.

Согласно одному варианту осуществления изобретения, вариант SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3 не является SEQ ID NO: 1.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, sTREM-1 представляет собой фрагмент SEQ ID NO: 2 или фрагмент SEQ ID NO: 3.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, фрагмент аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3 представляет собой аминокислотную последовательность, включающую, по крайней мере, 25 последовательных аминокислот, предпочтительно, по крайней мере, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 165, 170, 175, 180 или 185 последовательных аминокислот аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3, соответственно.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, sTREM-1 соответствует внеклеточному фрагменту, образующемуся в результате отщепления TREM-1 последовательности SEQ ID NO: 1 матричной металлопептидазой, предпочтительно, матричной металлопептидазой 9 (ММР9).

Одним объектом настоящего изобретения является способ идентификации субъекта, имеющего риск наличия или развития сердечно-сосудистого события или сердечно-сосудистого заболевания, или риск смерти от любых причин, при этом указанный способ заключается в измерении уровня sTREM-1 в образце, полученном от субъекта, что позволяет определить, находится ли субъект в группе риска по наличию или развитию сердечно-сосудистого события или заболевания.

Другим объектом настоящего изобретения является способ оценки риска наличия или развития сердечно-сосудистого события или заболевания, или риск смерти от любых причин у субъекта, при этом указанный способ заключается с измерении уровня sTREM-1 в образце, полученном от субъекта, что позволяет определить, находится ли субъект в группе риска по наличию или развитию сердечно-сосудистого события или заболевания.

Еще одним объектом настоящего изобретения является способ прогнозирования риска наличия или развития у субъекта сердечно-сосудистого события или заболевания, или риска смерти от любых причин, при этом указанный способ заключается с измерении уровня sTREM-1 в образце, полученном от субъекта, что позволяет определить, находится ли субъект в группе риска по наличию или развитию сердечно-сосудистого события или заболевания.

Еще одним объектом настоящего изобретения является способ стратификации субъектов по степени риска наличия или развития сердечнососудистых заболеваний или осложнений, или риска смерти от любых причин, при этом указанный способ заключается в измерении уровня sTREM-1 в образце, полученном от субъекта, что позволяет определить, находится ли субъект в группе риска по наличию или развитию сердечно-сосудистого события или заболевания.

Еще одним объектом настоящего изобретения является способ оценки тяжести сердечно-сосудистого события или заболевания у субъекта, при этом указанный способ заключается в измерении уровня sTREM-1 в образце, полученном от субъекта, что позволяет определить находится ли субъект в группе риска по наличию или развитию сердечно-сосудистого события или заболевания.

В соответствии с настоящим изобретением, смерть от любых причин означает смерть, происходящую после сердечно-сосудистого заболевания или события, такого, как например, первое сердечно-сосудистое заболевание или событие.

Согласно одному из вариантов осуществления изобретения, заявленный способ предназначен для идентификации субъекта, имеющего риск смерти от причин, связанных или вызванных сердечно-сосудистым событием или сердечнососудистым заболеванием.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, заявленный способ предназначен для оценки риска смерти субъекта от причин, связанных или вызванных сердечно-сосудистым событием или сердечно-сосудистым заболеванием.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, заявленный способ предназначен для прогнозирования риска смерти субъекта от причин, связанных или вызванных сердечно-сосудистым событием или сердечнососудистым заболеванием.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, заявленный способ предназначен для стратификации субъектов по степени риска смерти от причин, связанных или вызванных сердечно-сосудистым событием или сердечнососудистым заболеванием.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, субъектом может быть практически здоровый субъект, что означает, что у субъекта ранее не было диагностировано или выявлено сердечно-сосудистое заболевание, или не было установлено развитие сердечно-сосудистого заболевания.

Согласно другому варианту осуществления изобретения, субъектом может быть тот, у кого нет симптомов сердечно-сосудистого заболевания. Используемый в настоящем описании термин "бессимптомный" означает, что у субъекта нет характерных симптомов сердечно-сосудистого заболевания или события, включая, без ограничений указанными, боль в грудной клетке и одышку при ишемической болезни сердца (ИБС), перемежающуюся хромоту (ЗПА) а также транзиторные ишемические атаки, умеренные когнитивные нарушения и сильная головная боль при ЦВБ.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, субъектом может быть тот, у кого имеется риск наличия или развития сердечно-сосудистого заболевания или сердечно-сосудистого события, что установлено при оценке клинических параметров, таких, как, например: возраст, пол, концентрация ЛПНП, концентрация ЛПВП, концентрация триглицеридов, артериальное давление, индекс массы тела, концентрация С-реактивного белка, кальциевый индекс, окружность талии, курение табака, наличие в анамнезе сердечнососудистых заболеваний, семейная история сердечно-сосудистых заболеваний, частота сердечных сокращений, концентрация инсулина натощак, концентрация глюкозы натощак, диабетический статус и также применение противогипертонических препаратов.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, субъектом может быть тот, у кого ранее было диагностировано или выявлено сердечнососудистое заболевание или сердечно-сосудистое событие, такое, как, например, хроническое ишемическое заболевание без миокардиального некроза (например, стабильная стенокардия или стенокардия напряжения), острое ишемическое заболевание без миокардиального некроза (например, нестабильная стенокардия), ишемические заболевания с миокрадиальным некрозом (например, инфаркт миокарда с подъемом сегмента ST или инфаркт миокарда без подъема сегмента ST).

Тканевая ишемия часто является относительным понятием и происходит тогда, когда потребности в кислороде больше, чем может удовлетворить количество поступающего к тканям кислорода. Существует дисбаланс между потребностями кислорода в тканях (например, ткани миокарда) и снабжением тканей кислородом. Такое состояние дефицита кислорода может сопровождаться недостаточным удалением метаболитов вследствие недостаточной перфузии. Ишемия миокарда может диагностироваться клинически (боль в груди, например), биологически (увеличение активности миелопероксидазы, например), метаболически, с использованием сцинтиграфии, путем регистрации нарушений движений стенки миокарда при помощи электрокардиографии (типичные изменения сегмента ST, отклонение сегмента ST вверх или вниз, типичные изменения Т-зубца, такие, как инверсия Т-зубца или симметричный "коронарный" зубец Т или высокоамплитудный положительный зубец Т). "Тихая" ишемия обычно диагностируется при помощи сцинтиграфии или в течение 24-часовой регистрации электрокардиографии.

Стабильная стенокардия и стенокардия напряжения обычно манифестирует болью в груди во время физических нагрузок, которая медленно исчезает в покое. Она обычно свидетельствует о тканевой ишемии во время физических нагрузок.

Нестабильная стенокардия проявляется увеличением частоты и/или тяжести приступов стабильной стенокардии, впервые возникшей стенокардией или стенокардией в покое.

Миокардиальный некроз обычно диагностируется по увеличению уровня миокардиальных ферментов (например, тропонина I, тропонина Т, СРК) в циркулирующей крови.

Согласно одному из вариантов осуществления изобретения, субъектом может быть тот, у кого наблюдается снижение сердечно-сосудистых факторов риска после лечения сердечно-сосудистых заболеваний. Об уменьшении свидетельствуют клинические улучшения, например, снижение индекса массы тела, снижение концентрации общего холестерина, снижение концентрации ЛПНП, увеличение концентрации ЛПВП, снижение систолического и/или диастолического артериального давления, или улучшения со стороны других факторов риска или их комбинаций, упомянутых выше.

Согласно другому варианту осуществления изобретения, у субъекта не было выявлено симптомов дебюта ишемического состояния. Ишемия миокарда может диагностироваться клинически (боль в груди, например), биологически (увеличение активности миелопероксидазы, например), метаболически, с использованием сцинтиграфии, путем регистрации нарушений движений стенки миокарда при помощи электрокардиографии (типичные изменения сегмента ST, отклонение сегмента ST вверх или вниз, типичные изменения Т-зубца, такие, как инверсия Т-зубца или симметричный "коронарный" зубец Т или высокоамплитудный положительный зубец Т).

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, у субъекта были выявлены симптомы дебюта ишемического состояния.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, образец, который используется для анализа уровня sTREM-1, является образец крови пациента, образец цельной крови, образец плазмы, образец сыворотки или образец мочи.

Используемый в настоящем описании термин "уровень" относится к уровню экспрессии sTREM-1. Он также может альтернативно относиться к уровню транскрипции sTREM-1 или уровню трансляции sTREM-1. Уровень экспрессии может определяться внутриклеточно или внеклеточно. Способы измерения уровня sTREM-1 хорошо известны специалистам в данной области и включают, без ограничений указанными, ПЦР в реальном времени (RT-PCR), количественную ПЦР в реальном времени (RT-qPCR), Нозерн-блоттинг, гибридизационные методики, такие, как например, использование микроматриц, а также комбинации указанных способов, включая, без ограничений указанными, гибридизацию ампликонов полученных при помощи RT-PCR, секвенирование, такое, как например, секвенирование ДНК нового поколения (NGS) или RNA-seq (также известное, как "Секвенирование целого транскриптома методом выстрела из дробового ружья") и подобные способы, иммуногистохимия, способы Multiplex (Luminex), вестерн-блот, иммуносорбентный ферментный анализ (ELISA), сэндвич - ELISA, иммуносорбентный ферментный анализ с флуоресцентным усилением (FLISA), ферментный иммуноанализ (EIA), радиоиммунологический анализ (RIA), проточная цитометрия (FACS) и подобные способы.

Согласно одному варианту осуществления изобретения, уровень sTREM-1 сравнивается с контрольной величиной.

Согласно другому варианту осуществления изобретения, контрольная величина может представлять собой заданную величину или может быть получена на основании одного или более алгоритма прогнозирования рисков или компьютерного показателя для сердечно-сосудистых заболеваний и/или событий. Контрольная величина может относиться к набору величин, полученных в результате популяционных исследований, включая, без ограничений указанными, величины, установленные для субъектов, имеющих такой же индекс массы тела, концентрацию холестерина, концентрации ЛПНП/ЛПВП, систолическое или диастолическое артериальное давление, для субъектов такого же возраста, из такой же или сходной этнической группы, для субъектов с аналогичной семейной историей атеросклероза, атеротромбоза, ИБС, ЗПА или ЦВБ; либо же контрольной величиной является величина, определенная в первоначальном образце субъекта, проходящего лечение артериоваскулярного заболевания, такого, как атерсклероз, атеротромбоз, КБС, ЗПА или ЦВБ.

Указанные контрольные величины могут быть получены в ходе статистического анализа и/или при помощи способов прогнозирования риска в популяциях, основанных на математических алгоритмах и компьютерных показателях для сердечно-сосудистых заболеваний, таких, как, например, алгоритм, описанный в исследовании Framingham, NCEP/ATP III, среди прочих. Контрольные величины Факторов Относительного Риска могут быть также сконструированы и использованы при помощи алгоритмов и других способов статистической и структурной классификации.

Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения, контрольная величина является персонализированной контрольной величиной, то есть контрольная величина определяется в образце, полученном от конкретного субъекта.

Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения, контрольная величина получена при определении уровня sTREM-1 в контрольном образце, полученном от одного или более практически здорового субъекта, как определено выше. Такие практически здоровые субъекты не имеют традиционных факторов риска для сердечно-сосудистых заболеваний: например, концентрация холестерина у таких субъектов ниже 200 мг/дл, систолическое артериальное давление равно или ниже 120 мм рт.ст., диастолическое артериальное давление равно или ниже 80 мм рт.ст., они не являются постоянными курильщиками, не страдают диабетом, никогда ранее не имели подтвержденного диагноза острого коронарного синдрома или гипертензии, среди факторов риска помимо упомянутых выше могут оцениваться и другие, при помощи инвазивных и неинвазивных способов диагностики сердечно-сосудистых заболеваний, хорошо известных специалистам в данной области, таких, как (без ограничений указанными) электрокардиограмма (ЭКГ), ультразвуковое исследование сонных артерий в В-режиме (измерение толщины интима-медального сегмента), электронно-лучевая компьютерная томография (ЕВСТ), подсчет кальциевого индекса, мультиспиральная компьютерная томография с высоким разрешением, ядерный магнитный резонанс, стрессовая нагрузочная проба, ангиография, внутрисосудистое ультразвуковое исследование (IVUS), другие контрастные и/или радиоизотопные визуализирующие технологии или другие провокационные технологии тестирования.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, указанные субъекты подвергаются мониторингу и/или периодическому повторному тестированию в течение диагностически значимого периода времени ("лонгитюдное исследование") для того чтобы убедиться в отсутствии сердечнососудистых заболеваний или острых сердечно-сосудистых событий (выживаемость вне заболевания или события). Указанный период времени может составлять один год, два года, от двух до пяти лет, пять лет, от пяти до десяти лет, десять лет, или более десяти лет от момента первичного тестирования на предмет определения контрольной величины. Кроме того, ретроспективное измерение уровня sTREM-1 в правильно собранных ранее образцах может использоваться для получения контрольных величин, что укорачивает время исследования, вышеуказанное действительно при условии, что объекты должным образом оставались под контролем на протяжении промежуточного периода времени вплоть до предполагаемого срока возможной подачи претензии к изобретению.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, контрольные величины могут быть также получены на основании определения уровня sTREM-1 в образце, полученном от одного или более субъекта, у которого ранее было диагностировано или выявлено сердечно-сосудистое заболевание или сердечнососудистое событие при помощи одного из указанных выше инвазивных или неинвазивных способов, или от субъекта, имеющего риск развития сердечнососудистого события, или от субъекта, у которого имеется высокий риск развития атеросклеротического или атеротромботического разрыва бляшки, или от субъекта, который уже страдает от сердечно-сосудистого события или разрыва атеросклеретической бляшки.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, контрольная величина также может быть получена на основании определения уровня sTREM-1 в образце, полученном от одного или более субъекта, у которого отмечается снижение факторов риска развития сердечно-сосудистого заболевания после лечения сердечно-сосудистых заболеваний. О снижении факторов риска свидетельствуют клинические улучшения, например, снижение индекса массы тела, снижение концентрации общего холестерина, снижение концентрации ЛПНП, увеличение концентрации ЛПВП, снижение систолического и/или диастолического артериального давления, или улучшения со стороны других факторов риска или их комбинаций, упомянутых выше.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, контрольная величина представляет собой заданную величину или исходную величину. Заданную величину или исходную величину получают на основании обследования одного или более субъекта, не имеющего сердечно-сосудистого заболевания, такого, как атеросклероз, атеротромбоз, ИБС, ЗПА или ЦВБ, или субъектов, не имеющих симптомов сердечно-сосудистого заболевания. Исходная величина также может быть получена на основании обследования субъекта, у которого отмечается снижение факторов риска развития сердечно-сосудистого заболевания (в результате лечения сердечно-сосудистого заболевания). О снижении факторов риска свидетельствуют клинические улучшения, например, снижение индекса массы тела, снижение концентрации общего холестерина, снижение концентрации ЛПНП, увеличение концентрации ЛПВП, снижение систолического и/или диастолического артериального давления, а также улучшения со стороны других факторов риска или их комбинаций, упомянутых выше.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, указанное сердечно-сосудистое событие или заболевание представляет собой синдром, синдром X, атеросклероз, атеротромбоз, ишемическую болезнь сердца (ИБС), стабильную или нестабильную стенокардию, инсульт, заболевания аорты и ее ветвей (такие, как тромбоз аорты или аневризма аорты), заболевания периферических артерий, заболевания периферических сосудов, цереброваскулярная болезнь, а также любое транзиторное или перманентное сердечно-сосудистое событие.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, указанное сердечно-сосудистое событие или заболевание представляет собой инфаркт миокарда.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, указанное сердечно-сосудистое событие или заболевание представляет собой атеросклероз.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, уровень sTREM-1, измеренный в образце крови, больше или равен 265 пг/мл, 270, 275, 280, 285, 290, 295, 300, 305, 310, 315, 320, 325, 330, 335, 340, 345, 350, 360, 370, 380, 390, or 400 пг/мл, свидетельствует о том, что субъект имеет риск смерти от сердечнососудистого события или сердечно-сосудистого заболевания.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, если было выявлено, что у субъекта имеется высокий риск развития сердечно-сосудистого заболевания или сердечно-сосудистого события, его отбирают для назначения лечения для замедления прогрессирования сердечно-сосудистого заболевания, или снижения или профилактики риска развития сердечно-сосудистого заболевания или сердечно-сосудистого события.

В соответствии с настоящим изобретением, описанный способ предназначен для мониторинга сердечно-сосудистого заболевания или сердечно-сосудистого события у субъекта, нуждающегося в этом.

В соответствии с настоящим изобретением, описанный способ предназначен для оценки прогрессирования сердечно-сосудистого заболевания или сердечнососудистого события у субъекта, нуждающегося в этом.

Согласно одному варианту осуществления изобретения, описанный выше способ предназначен для мониторинга эффективности лечения сердечнососудистого заболевания. Эффективность лечения отражают изменения уровня sTREM-1. Если лечение оказало желаемый эффект, уровень sTREM-1 будет ниже, чем уровень, измеренный до начала лечения. С другой стороны, если лечение не оказало нужного эффекта, уровень sTREM-1 будет оставаться высоким. Согласно другому варианту осуществления изобретения, уровень sTREM-1, полученный до начала лечения или на момент начала лечения является контрольной величиной.

Таким образом, врач может адаптировать лечение (дозы, режим) для достижения снижения уровня sTREM-1 до исходного или до уровня, который наблюдается у здоровых субъектов.

Примерами лекарственных препаратов для лечения сердечно-сосудистых заболеваний являются, без ограничений указанными, аспирин, клопидогрел, прасугрел, ингибиторы гликопротеина IIb/IIIa, низкомолекулярный гепарин, нефракционированный гепарин, фондапаринукс, бивалирудин, статин, бета-блокаторы, ACE-I или ARB и подобные.

Согласно одному из вариантов осуществления изобретения, лечение сердечно-сосудистого заболевания основано на модуляции функции TREM-1, его активности или экспрессии. Примерами модуляторов функции TREM-1, его активности или экспрессии, являются, без ограничений указанными, антитела, связывающиеся с TREM-1 и/или sTREM-1, или TREM-1 и/или sTREM-1 лиганды, малые молекулы, ингибирующие функцию, активность или экспрессию TREM-1, миРНК, направленные против TREM-1, рибозимы, направленные против TREM-1 или аптамеры TREM-1.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, лечение сердечно-сосудистого заболевания является лечением с использованием пептида, связывающего sTREM-1 лиганд, такого, как, например, LR12 (SEQ ID NO: 4).

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, описанный выше способ предназначен для выбора режима лечения субъекта, у которого было диагностировано сердечно-сосудистое заболевание или субъекта, который имеет риск развития сердечно-сосудистого заболевания или события.

Соответственно, уровень sTREM-1 измеряют в образце, полученном до начала лечения (указанный уровень и представляет собой контрольную величину) и, по крайней мере, еще в одном образце, полученном во время лечения. Снижение уровня sTREM-1 свидетельствует о положительном эффекте лечения у субъекта. Наоборот, неизменный или повышенный уровень sTREM-1 свидетельствует о неэффективности лечения у субъекта. Согласно одному варианту осуществления изобретения, у субъекта получают образец до начала лечения, и затем каждый месяц во время лечения, в течение, по крайней мере, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 месяцев или более, или в течение, по крайней мере, 1 года, 2 лет, 3 лет или более.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, уровень sTREM-1 может быть измерен в образце, полученном на момент начала лечения (указанный уровень и представляет собой контрольную величину) и, по крайней мере, еще в одном образце, полученном во время лечения. Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, образец получают у пациента на момент начала лечения, и затем каждый месяц во время лечения, в течение, по крайней мере, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 месяцев или более, или в течение, по крайней мере, 1 года, 2 лет, 3 лет или более. Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, момент начала лечения соответствует первому дню начала введения лекарственных препаратов.

Другим объектом настоящего изобретения является набор, позволяющий определить, имеет ли субъект риск наличия или развития сердечно-сосудистого заболевания и/или сердечно-сосудистого события, и включающий средства для измерения уровня sTREM-1.

Согласно одному варианту осуществления изобретения, указанные средства для измерения уровня sTREM-1 включают антитела, такие, как поликлональные или моноклональные антитела.

Примерами антител, позволяющих определить sTREM-1, являются, без ограничений указанными, поликлональные антитела к аминокислотам Мет1-Арг200 TREM-1 человека, Ref AF1278 из лаборатории R&D Systems; моноклональное антитело к Ала21-Асн205 TREM-1 человека, Ref МАВ1278 из лаборатории R&D Systems. Другими примерами антител, позволяющих определить sTREM-1, являются, без ограничений указанными, sTREM-1 и/или TREM-1 антитела, описанные в следующих патентных документах: US 2013/150559, US 2013/211050, US 2013/309239, WO 2013/120553 и US 8,106,165. Согласно другому варианту осуществления изобретения, указанным средством для измерения уровня sTREM-1, является иммуносорбентный ферментный анализ (ELISA).

Примерами ELISA являются без ограничений указанными, набор для ELISA TREM-1 Quantikine лаборатории R&D Systems; набор DuoSet для TREM-1 человека, Ref DY1278 В и DY1278BE лаборатории R&D Systems, набор sTREM-1 ELISA, Ref sTREM-1 ELISA компании iQProducts.

Соответственно, настоящее изобретение относится к in vitro способу идентификации субъекта, имеющего риск наличия или развития сердечнососудистых заболеваний или осложнений, или риск смерти от любых причин, или к способу оценки субъекта на предмет наличия у него риска развития сердечнососудистого заболевания или события или риска смерти от любых причин, указанный способ включает:

а) измерение уровня sTREM-1 в образце, полученном от указанного субъекта;

б) сравнение уровня, полученного на этапе а) с контрольной величиной, при этом разница в показателях свидетельствует о наличии риска развития сердечнососудистого заболевания или события или риска смерти от любых причин.

Соответственно, настоящее изобретение относится к in vitro способу прогнозирования риска сердечно-сосудистого заболевания или события у субъекта, при этом указанный способ включает:

а) измерение уровня sTREM-1 в образце, полученном от указанного субъекта;

б) сравнение уровня, полученного на этапе а) с контрольной величиной, при этом разница в показателях свидетельствует о наличии риска развития сердечнососудистого заболевания или события.

Соответственно, настоящее изобретение относится к in vitro способу стратификации субъектов по степени риска наличия или развития сердечнососудистых заболеваний или событий, или риска смерти от любых причин, или к способу оценки тяжести сердечно-сосудистого события или сердечно-сосудистого заболевания у субъекта, при этом указанный способ включает:

а) измерение уровня sTREM-1 в образце, полученном от указанного субъекта;

б) сравнение уровня, полученного на этапе а) с контрольной величиной, при этом разница в показателях свидетельствует о наличии риска, возможно, высокого риска развития сердечно-сосудистого заболевания или события.

Согласно одному варианту осуществления изобретения, повышенный уровень sTREM-1 в изучаемом образце, при сравнении с контрольной величиной, свидетельствует о риске наличия или развития сердечно-сосудистого события или заболевания. Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, уровень sTREM-1 в изучаемом образце равный или выше 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или более, при сравнении с контрольной величиной, свидетельствует о риске наличия или развития сердечно-сосудистого события или заболевания.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, повышенный уровень sTREM-1 в изучаемом образце при сравнении с контрольной величиной, свидетельствует о высоком риске наличия или развития сердечно-сосудистого заболевания или события. Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, уровень sTREM-1 в изучаемом образце равный или выше 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или более, при сравнении с контрольной величиной, свидетельствует о высоком риске наличия или развития сердечно-сосудистого события или заболевания.

Соответственно, настоящее изобретение относится к in vitro способу мониторинга эффективности лечения сердечно-сосудистого заболевания у субъекта, при этом указанный способ включает:

а) измерение уровня sTREM-1 в образце, полученном от указанного субъекта;

б) сравнение уровня, полученного на этапе а) с контрольной величиной, при этом разница в показателях свидетельствует о достижении желаемого эффекта от лечения.

Согласно одному варианту осуществления изобретения, заявленный способ мониторинга включает:

а) измерение уровня sTREM-1 в образце, полученном от указанного субъекта, до начала лечения;

б) измерение уровня sTREM-1 в образце, полученном от указанного субъекта на протяжении лечения, предпочтительно, каждый месяц на протяжении лечения, в течение, по крайней мере, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 месяцев или более, на протяжении, по крайней мере, 1 года, 2-х лет, 3-х лет или более;

в) сравнение уровня, полученного на этапе б) с уровнем sTREM-1, полученном на этапе а), при этом снижение уровня sTREM-1 свидетельствует о положительном эффекте от лечения.

Согласно другому варианту осуществления изобретения, заявленный способ мониторинга включает:

а) измерение уровня sTREM-1 в образце, полученном от указанного субъекта на момент начала лечения, предпочтительно, в первый день лечения;

б) измерение уровня sTREM-1 в образце, полученном от указанного субъекта на протяжении лечения, предпочтительно, каждый месяц на протяжении лечения, в течение, по крайней мере, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 месяцев или более, на протяжении, по крайней мере, 1 года, 2-х лет, 3-х лет или более;

в) сравнение уровня, полученного на этапе б) с уровнем sTREM-1, полученном на этапе а), при этом снижение уровня sTREM-1 свидетельствует о положительном эффекте от лечения.

Согласно одному из вариантов осуществления изобретения, снижение уровня sTREM-1, в изучаемом образце на 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100% или более по сравнению с уровнем sTREM-1 в образце, полученном на момент начала лечения, свидетельствует от положительном эффекте от лечения у субъекта.

Согласно другому варианту осуществления изобретения, контрольная величина, составляет, приблизительно, по крайней мере, 80 пг/мл, 100 пг/мл или, приблизительно, по крайней мере, 150, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 390, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 520, 540, 560, 580, 600, 620, 640, 660, 680, 700 пг/мл или более.

Согласно одному из вариантов осуществления изобретения, уровни sTREM-1, измеренные в контрольной популяции, используемые для получения контрольных величин, представлены в процентилях, при этом уровни sTREM-1 всех субъектов из контрольной популяции распределяются в зависимости от их значения по возрастанию. Согласно одному из вариантов осуществления изобретения, процентили являются процентилями субъектов, то есть каждый процентиль включает одинаковое количество субъектов. Таким образом, первый процентиль соответствует субъектам, имеющим самый низкий уровень sTREM-1, в то время как последний процентиль соответствует субъектам, имеющим самый высокий уровень sTREM-1.

Согласно одному варианту осуществления изобретения, контрольные величины соответствуют самому высокому уровню sTREM-1 первого процентиля контрольной популяции.

Согласно другому варианту осуществления изобретения, контрольные величины соответствуют самому высокому уровню sTREM-1 второго, третьего, или предпоследнего процентиля контрольной популяции.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, когда три процентиля выстроены, каждый процентиль называется терциль. В соответствии с данным вариантом осуществления изобретения, контрольные величины соответствуют самому высокому уровню sTREM-1 первого или второго терциля.

Согласно еще одному варианту осуществления изобретения, когда четыре процентиля выстроены, каждый процентиль называется квартиль. В соответствии с данным вариантом осуществления изобретения, контрольные величины соответствуют самому высокому уровню sTREM-1 первого, второго или третьего квартиля.

В соответствии с настоящим изобретением, уровень sTREM-1 может измеряться при помощи любого способа, известного специалистам в данной области.

Обычно способы включают взаимодействие образца со связывающим агентом, способным селективно взаимодействовать с sTREM-1, если он присутствует в образце. В некоторых случаях указанными связывающими агентами являются антитела, такие, как например, моноклональные антитела или аптамеры.

Указанные выше исследования в целом включают связывание партнера (например, антитела или аптамера) с твердой подложкой. К указанным твердым подложкам, которые могут использоваться в соответствии с практическими целями настоящего изобретения относятся, без ограничений указанными, субстраты, такие как нитроцеллюлоза (например, на мембране или на лунках микротитровального планшета); поливинилхлорид (например, листы или лунки микротитровального планшета); полистироловый латекс (например, бусины или планшеты для микротитрования); поливинилфторид; диазотизированная бумага; нейлоновые мембраны; активированные бусины, магнитные бусины и подобные субстраты.

Уровень sTREM-1 может быть измерен путем использования стандартных методов иммунодиагностики, включая иммунологические исследования, такие, как конкуренция, прямая реакция, или сэндвичевый анализ. К таким исследованиям относятся, без ограничений указанными, агглютинационные тесты; иммунологические исследования с мечеными ферментами и опосредуемые иммунологические исследования, такие, как ELISAs; исследования типа биотин/авидин; радиоиммунологические исследования; иммуноэлектрофорез; иммунопреципитация.

Примерами биохимических тестов для идентификации специфических белков являются страндартизированные тесты, такие, как ELISA, в то время как информация, предлагаемая в настоящем изобретении, может способствовать развитию других биохимических и диагностических тестов и не ограничивается только ELISA (например, Molecular Immunology: A Textbook, edited by Atassi et al. Marcel Dekker Inc., New York and Basel 1984). Очевидно, что наборы для энзим-связанного иммуноферментного анализа (ELISA) различных составляющих плазмы являются коммерчески доступными. Таким образом, может применяться ELISA, при этом лунки планшета для микротитрования покрывают набором антител, способных распознавать sTREM-1. Затем на лунки планшета добавляют образец, содержащий (или возможно содержащий) sTREM-1. После периода инкубации, достаточного для формирования комплексов антиген-антитело, планшет(ы) отмывают для удаления несвязавшихся молекул и добавляют меченые вторичные связывающие молекулы. Вторичные связывающие молекулы взаимодействуют с любым связанным маркерным белком в образце, после чего планшет отмывают, а наличие вторичных связывающих молекул определяют при помощи способов, хорошо известных специалистам в данной области.

Измерение уровня sTREM-1 (при помощи иммунологических методов или без них) может также включать разделение соединений: центрифугирование по молекулярному весу соединений; электрофорез по массе или заряду; жидкостную хроматографию на основании гидрофобности; эксклюзионную хроматографию на основании размера соединений; и твердофазную аффинность на основании аффинности соединения к определенной используемой твердой фазе. После разделения указанные соединения могут быть идентифицированы на основании известного "сепарационного профиля", например, времени удерживания для указанного соединения, а их концентрация измерена при помощи стандартных методик.

Альтернативно, разделенные соединения могут определяться и измеряться при помощи, например, масс-спектрометрии.

Обычно уровни sTREM-1 в образце измеряют при помощи иммунометрического исследования с использованием двойных антител и сэндвич-анализа с моноклональными антителами, специфичными к sTREM-1.

Другим объектом настоящего изобретения является использование sTREM-1 в качестве биомаркера для диагностики сердечно-сосудистого события или заболевания.

Еще одним объектом настоящего изобретения является использование sTREM-1 в качестве биомаркера для мониторинга сердечно-сосудистого заболевания.

Краткое описание фигур

Фиг. 1 представляет собой график, отражающий взаимосвязь концентрации растворимого TREM-1 в плазме и исход сердечно-сосудистого события, такого как инфаркт миокарда, в когорте FAST-MI-2005.

Фиг. 2 представляет собой график, отражающий площадь под кривой ROC (AUC) уровней sTREM-1, у адаптированной модели в когорте FAST-MI-2005.

Фиг. 3 представляет собой график, отражающий взаимосвязь концентрации растворимого TREM-1 и смерти после инфаркта миокарда в когорте FAST-MI-2010.

Фиг. 4 представляет собой комбинацию гистограмм, отражающих уровни sTREM-1 в плазме после сердечного ишемического события у мышей с атеросклерозом.

(A) Взрослые Balb/c мыши мужского пола (20-23 г) подвергались ишемии миокарда, после чего их случайным образом разделяли на группы (n=10 на группу) для последующего интраперитонеального введения повторных доз LR12 (100 мкг в 0.2 мл NaCl 0.9% один раз в день в течение 5 дней) или рандомизированного LR12 (100 мкг в 0.2 мл NaCl 0.9% один раз в день в течение 5 дней). Образцы крови забирали через 24,72 и 168 часов после ишемического события для измерения уровня sTREM-1 в плазме. Физиологический исходный уровень рассчитывали на основании дозы для здоровых животных. N=10 для каждой группы, и для каждой временной точки.

(B) Атеросклеротических мышей случайным образом разделяли на группы, затем животным интраперитонеально вводили LR12 (100 мкг в 0.2 мл NaCl 0.9% один раз в день в течение 4 недель) или рандомизированный LR12 (100 мкг в 0.2 мл NaCl 0.9% один раз в день в течение 4 недель). Образцы крови забирали в конце лечения (4 неделя) для определения концентрации sTREM-1 в плазме. Физиологический исходный уровень рассчитывали на основании дозы для здоровых животных. N=10 для каждой группы.

Настоящее изобретение дополнительно иллюстрируют следующие примеры.

Примеры

Способы

Популяционное исследование 1.

Популяция и способы регистрации острого инфаркта миокарда с подъемом сегмента ST и без подъема сегмента ST согласно французскому регистру (FAST-MI) детально описаны в предыдущих публикациях (Cambou, J.-P et al. 2007. Arch. Mai. Coeur Vaiss. 100: 524-534, Simon, Т., et al. 2009. N. Engl. J. Med. 360: 363-375.). Вкратце, все субъекты старше 18 лет включались в регистр, если у них отмечалось повышение сывороточных маркеров некроза миокарда более чем в два раза от высшего предела для креатинкиназы, креатинкиназы-МВ, или повышение уровня тропонинов, а также другие симптомы острого инфаркта миокарда и/или изменения электрокардиограммы, по крайней мере, в двух отведениях, включая патологические Q зубцы (>0.04 сек) и/или постоянную депрессию или подъем сегмента ST>0.1 мВ. Время от момента появления симптомов до начала интенсивной терапии составляло <48 ч. Субъектам проводилась стандартная терапия, включение в регистр не влияло на лечение. Среди 374 центров Франции, в которых осуществлялось лечение больных с острым ИМ, 223 (60%) участвовали в регистре и отобрали 3670 пациентов. Среди них, 100 центров набрали 1061 пациентов для сывороточных банков. Исходные характеристики были сопоставимы с характеристиками целой популяции из регистра. Более чем 99% субъектов были с Кавказа. Последующее наблюдение осуществлялось посредством взаимодействия с лечащими врачами, а также самими субъектами или членами их семей, а также в регистрационных офисах по месту жительства. Последующее наблюдение в течение одного года осуществлено более чем на 99%. Исследование было рассмотрено Комитетом по защите прав человека в ходе биомедицинских исследований госпиталя при университете Св. Антония, а полученные данные предоставлялись Национальной Комиссии по информатике и свободам.

Популяционное исследование 2

Второе подтверждающее клиническое исследование называлось FAST-MI-2010. Указанная когорта подробно описана в предыдущих публикациях (Hanssen М et al. Heart. 2012 Мау; 98 (9): 699-705). Вкратце, все субъекты старше 18-ти лет включались в регистр, если у них отмечалось повышение сывороточных маркеров некроза миокарда (тропонина или MB фракции креатинкиназы), а также, по крайней мере, один из указанных признаков ишемии миокарда: раннее появление патологических Q зубцов, изменения сегмента ST, характерные для ишемии миокарда (подъем или депрессия сегмента ST, инверсия зубца Т). Время от момента появления симптомов до начала интенсивной терапии составляло <48 ч. Субъектам проводилась стандартная терапия, включение в регистр не влияло на лечение. 213 центров (76% центров, занимавшихся лечением острого инфаркта миокарда на момент исследования) участвовали в регистре и отобрали 4169 пациентов; включение пациентов в исследование началось 01 октября 2010 года. FAST-MI 2010 было проведено как новое исследование с теми же целями, что и регистр 2005 года. Последующее наблюдение пациентов в течение одного года осуществлено более чем на 99%.

Получение образцов крови и измерения

Образцы крови для исследования получали на момент начала интенсивной терапии (<48 ч от появления первых симптомов). Образцы крови хранили при -80°С. Все образцы идентифицировали только по номеру и анализировали случайным образом. Концентрацию sTREM-1 в сыворотке определяли при помощи ELISA (TREM-1 Duo-Set, RnDsystems) с порогом обнаружения 46.9 пг/мл. В первой когорте (FAST-MI-2005), среди 1061 пациентов, чьи образцы попали в сывороточный банк, результаты исследования уровня sTREM-1 были получены для 1015 субъектов (пропущенные измерения). Во второй когорте FAST-MI-2010, результаты исследования уровня sTREM-1 были получены для 1293 субъектов.

Уровни sTREM-1 в мышиной сыворотке определяли при помощи ELISA (Mouse TREM-1 Quantikine ELISA Kit, RnDsystems) с порогом обнаружения 31.3 пг/мл.

Статистический анализ

Завершенным случаем (исходом) считалась смерть от любых причин или инфаркт миокарда, не повлекший за собой смерть пациента, в течение 2-х летнего периода наблюдения. Первичная конечная точка, компиляция всех случаев смерти или инфаркта миокарда как описано выше, определяемая как индексный эпизод при включении, подтверждалась комитетом, члены которого не были осведомлены о способах лечения пациентов и не имели данных анализов крови. Непрерывные переменные описываются как среднее ±SD (стандартное отклонение), а категориальные переменные как частоты и проценты. Перед использованием в качестве непрерывных переменных, уровни sTREM-1 и С-реактивного белка в плазме были log-трансформированы для исключения положительной асимметрии. Основные демографические и клинические характеристики, особенности терапии и врачебные решения во время госпитализации сравнивали как переменные, заранее предусмотренные в плане исследования, среди тертилей уровней sTREM-1 с использованием χ2 или точного критерия Фишера для дискретных переменных, или ранговых критериев Уилкоксона или критерия Крускала-Уоллиса для непрерывных переменных. Тертили уровня sTREM-1 создавали на основании данных для всей выборки. Кривые выживаемости в соответствии с тертилями sTREM-1 оценивали при помощи метода Каплана-Мейра.

Для оценки независимого прогностического значения переменных, полученных в первичной конечной точке после 2-летнего периода наблюдения, мы использовали мультивариабельную модель пропорциональных рисков Кокса. Мультивариабельная модель учитывала пол, возраст, курение в анамнезе или в настоящее время, индекс массы тела, семейный анамнез заболеваний коронарных артерий, гипертензию в анамнезе, предшествующий острый ИМ, сердечную недостаточность, почечную недостаточность, хронические обструктивные болезни легких, диабет, частоту сердечных сокращений при поступлении, классификацию Киллипа, фракцию выброса левого желудочка, проводившееся в стационаре лечение (включая реперфузионную терапию, применение статинов, бета-блокаторов, клопидогреля, диуретиков, дигиталиса, гепарина) и log-уровни С-реактивного белка. Результаты были представлены как отношения рисков для Кокс модели с 95% доверительным интервалом (CIs). Зависимость чувствительности от частоты ложноположительных заключений (1-специфичность) для исходов сердечно-сосудистых заболеваний, ассоциированных с уровнем sTREM-1 в течение периода наблюдения, анализировали при помощи ROC- кривой (ROC). Индекс Юдена рассчитывали для уровней sTREM-1 при помощи следующей формулы: чувствительность + специфичность -1; при этом максимальная величина индекса Юдена соответствовала оптимальной точке среза (Youden WJ. Cancer. 1950; 3: 32-35).

Все статистические тесты были двусторонними и осуществлялись при помощи программного обеспечения SAS версия 9.3

Пептиды

LR12 представляет собой пептид из 12-ти аминокислот (LQEEDTGEYGCV, SEQ ID NO: 4), который специфически связывается с TREM-1 лигандом. Он был искусственно синтезирован (Pepscan Presto BV, Lelystad, Нидерланды) как амидированный по С-концу пептид для исследований in vivo. Выход корректных пептидов составлял >95%, все пептиды оставались гомогенными после предварительной очистки, что подтвердила масс-спектрометрия и аналитическая высокоэффективная обратно-фазная жидкостная хроматография. Все пептиды не содержали эндотоксина. Соответствующий рандомизированный пептид был синтезирован аналогично и служил контрольным пептидом (рандомизированный LR12, состоящий из тех же аминокислот, что и LR12, но в рандомизированной последовательности и поэтому не обладающий ингибирующей активностью в отношении TREM-1).

Животные

Все процедуры были одобрены местным комитетом по защите лабораторных животных и осуществлялись в соответствии с международными руководствами по экспериментам с использованием животных. Мышей и крыс получали в лаборатории Charles River (Strasbourg, France). Мышиная модель инфаркта миокарда

Все процедуры проводили на мышах мужского пола линии C57BL/C в возрасте 6-8 недель. Мышей наркотизировали путем интраперитонеального введения ксилазина (60 мг/кг) и фиксировали в положении на спине. Интубировали трахею и осуществляли искусственную вентиляцию легких (дыхательный объем 200 мкл/25 г, а скорость потока воздуха при дыхании 120 дыхательных движений в минуту). После проведения левосторонней торакотомии, выделяли левую коронарную артерию и перевязывали ее проленовой хирургической нитью 8-0 на 1,0 мм дистальнее от верхушки левого предсердия. Окклюзия передней нисходящей ветви левой коронарной артерии (LAD) подтверждалась изменением цвета миокарда с красного до белого в зоне ишемии (левый желудочек). Грудную клетку закрывали, а кожу зашивали шелковой хирургической нитью 6-0. Животных возвращали в клетки, где наблюдали до полного выздоровления.

Мышей случайным образом разделяли на группы, которые либо получали, либо не получали пептиды (ежедневно интраперитонеальная инъекция в течение 5 дней, 5 мг/кг), после чего животных умерщвляли через 24 ч, 72 ч, 168 ч (n=6 на группу) путем введения избыточной дозы фенобарбитала натрия и забирали образцы крови.

Атеросклероз у мышей

12-ти и 24-недельных мышей линии АроЕ-/- помещали на диету с высоким содержанием жиров (липиды 15%, холестерин 1,25%, отсутствие холата) или высококалорийную диету и лечили посредством ежедневного интраперитонеального введения пептидов (100 мкг/день). Через 4 недели лечения мышей умерщвляли и забирали образцы крови.

Результаты 1

Оценивалась взаимосвязь между уровнем растворимого TREM-1 и исходом сердечно-сосудистого заболевания у пациентов, включенных во французский регистр острых инфарктов миокарда с подъемом сегмента ST или без подъема сегмента ST (FAST-MI, NCT00673036) в течение 48 часов после острого инфаркта миокарда. Уровни sTREM-1 в сыворотке ассоциировались с риском смерти от любых причин и риском повторного ИМ в течение одного или двух лет, при этом высокий уровень sTREM-1 свидетельствует о большой вероятности неблагоприятного исхода. Из 1015 пациентов, включенных в исследование, 183 пациента (18%) умерли или имели повторный острый инфаркт миокарда в течение 2-х летнего периода наблюдения. Все умершие пациенты или пациенты, у которых случился повторный ИМ в течение периода наблюдения, были старше (75±12 vs. 64±13 лет) и среди них преобладали женщины (42 vs. 27%), чем пациенты, среди которых не было зарегистрировано завершенного случая. Среди указанных пациентов также чаще встречалась артериальная гипертензия, диабет, сердечная недостаточность, предшествующий инфаркт миокарда, предшествующий инсульт или транзиторная ишемическая атака, хроническая почечная недостаточность и хронические обструктивные болезни легких. Они с меньшей процентной вероятностью получали лечение статинами (68 vs. 81%), бета-блокаторами (50 vs. 76%), клопидогрелем, гепарином, но чаще получали диуретики или дигоксин, по сравнению с пациентами, среди которых не было зарегистрировано завершенного случая. Пациенты, у которых произошло острое сердечно-сосудистое событие имели более высокий риск смерти в больнице согласно баллам по шкале оценке рисков GRACE (Global Registry of Acute Coronary Events, Общий регистр острых коронарных событий), при этом нескольким пациентам во время госпитализации была выполнена чрескожная коронарная ангиопластика (43 vs. 73%) или тромболизис (9 vs. 17%).

Характеристики пациентов в соответствии с исходами их заболеваний приведены в Таблице 1.

p задается ранговыми критериями Уилкоксона или критериями Крускала-Уоллиса (для непрерывных переменных) и точным критерием Пирсона x² или Фишера (для дискретных переменных), среднее ± стандартное отклонение.

Ингибиторы АПФ: ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента или блокаторы АТ-II: блокаторы рецепторов ангиотензина, ЧКА: чрескожная коронарная ангиопластика, АКШ: аортокоронарное шунтирование.

Характеристики пациентов согласно sTREM-1 тертилям представлены в Таблице 2

p задается ранговыми критериями Уилкоксона или критериями Крускала-Уоллиса (для непрерывных переменных) и точным критерием Пирсона х² или Фишера (для дискретных переменных), среднее ± стандартное отклонение.

Ингибиторы АПФ: ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента или блокаторы АТ-II: блокаторы рецепторов ангиотензина, ЧКА: чрескожная коронарная ангиопластика, АКШ: аортокоронарное шунтирование.

Измеряли уровень sTREM-1 (пг/мл) (Таблица 3)

Средний уровень sTREM-1 в популяции в целом составлял 273 пг/мл (разброс от 50 до 7069; первый тертиль <212.4 пг/мл, n=339; третий тертиль >354 пг/мл, n=339).

Вероятность возникновения завершенного случая как функция исходного уровня sTREM-1 представлена на Фиг. 1.

В 1 год, частота события для смерти или ИМ составляла 6% для первого тертиля, 9% для второго тертиля, и 24% для третьего тертиля.

Во 2 год, частота события для смерти или ИМ составляла 9% для первого тертиля, 14% для второго тертиля, и 31% для третьего тертиля.

Скорректированные отношения рисков (HR) для смерти или повторного МИ в течение 2-х летнего периода наблюдения, ассоциированные с повышением на 1 единицу пг/мл log (sTREM-1) составил 1.70 (95% CI 1.33-2.17; р<0.0001).

Также были изучены тенденции в sTREM-1 тертилях для того, чтобы проследить взаимосвязь между широким разбросом уровней sTREM-1. По сравнению с тертилем 1, выбранным как контроль, скорректированное HR составляло 1,38 (95% CI 0.83-2.28) и 2.08 (95% CI 1.28-3.39) для тертиля 2 и тертиля 3, соответственно (общее р=0.006). Тест на тренд Кохрана-Армитажа был достоверным (р<0.0001).

Площадь под кривой ROC (AUC) для уровней sTREM-1 для скорректированной модели, позволяющей точно предсказать исход сердечнососудистого заболевания через 2 года, составляла 0,847 (Фиг. 2).

Учитывая высокие показатели чувствительности в сочетании с более низкими показателями (1-специфичности), наилучший порог отечески для уровня sTREM-1, определенный при помощи индекса Юдена, составлял 343 пг/мл (чувствительность=0,61) и специфичность=0,70).

Результаты 2

Результаты для первой когорты FAST-MI-2005 подтверждались результатами для второй когорты FAST-MI-2010. FAST-MI 2010 был осуществлен как новое исследование с аналогичными критериями и целями, что и регистр 2005. В этой когорте, уровни sTREM-1 ассоциировались с риском смерти от любых причин в течение одного года после острого инфаркта миокарда.

Характеристики пациентов, согласно sTREM-1 тертилям представлены в Таблице 4 и Таблице 5. Разброс уровня sTREM-1 составлял от 112 до 7038, первый тертиль <264.552 пг/мл n=430, третий тертиль >444.287 пг/мл n=432.

Вероятность возникновения смерти от любых причин, как функция исходного уровня sTREM-1 представлена на Фиг. 3. Скорректированное HR для смерти в течение одного года наблюдения, ассоциированное с увеличением на 1 единицу пг/мл log уровня (sTREM-1) составляло 3,784 (95% CI 2.440-5.869; р<0.0001).

По сравнению с тертилем 1, выбранным как контроль, скорректированное HR составляло 2,996 (95% CI 0.631-14.220) и 9.375 (95% CI 2.147-40.936) для тертиля 2 и тертиля 3, соответственно (общее р=0.0005). Тест на тренд Кохрана-Армитажа был достоверным (р<0.0001).

p задается ранговыми критериями Уилкоксона или критериями Крускала-Уоллиса (для непрерывных переменных) и точным критерием Пирсона х² или Фишера (для дискретных переменных), среднее ± стандартное отклонение.

Ингибиторы АПФ: ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента или блокаторы АТ-II: блокаторы рецепторов ангиотензина, ЧКА: чрескожная коронарная ангиопластика, АКШ: аортокоронарное шунтирование.

Результаты 3

Вторая цель исследования заключалась в изучении того, насколько лечение может повлиять на уровни sTREM-1 в плазме. Мышам с атеросклерозом (24-недельный возраст АроЕ-/- мыши на диете с повышенным содержанием жиров) получали лечение LR12 пептидом, который взаимодействует с TREM-1 лигандом, или контрольным рандомизированным LR12 пептидом. Было показаноэ, что уровни sTREM-1 повышались через 4 недели лечения (311.8 пг/мл), а лечение LR12 позволяет снизить концентрацию sTREM-1 в плазме (189,8 пг/мл) (Фиг. 4 В).

Таже было показано, что у мышей с инфарктом уровни sTREM-1 снижались при лечении LR12 через 24 и 72 часа после ишемического события (Фиг. 4А).

Поскольку введение LR12 ассоциируется с лучшим исходом после сердечного ишемического события, а также при наличии атеросклероза (данные не представлены), полученные результаты позволяют сделать предположение о том, что определение уровней sTREM-1 должно осуществляться во время лечения для оценки прогрессирования заболевания.

1. Способ прогнозирования риска инфаркта миокарда или смертельного исхода у субъекта после инфаркта миокарда, отличающийся тем, что измеряют уровень экспрессии растворимого триггерного рецептора, экспрессируемого на миелоидных клетках (sTREM-1) в образце, полученном от субъекта, где указанный sTREM 1 представляет растворимую форму внеклеточного домена триггерного рецептора, экспрессируемого на миелоидных клетках-1 (TREM-1), и TREM-1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1; сравнивают уровень экспрессии sTREM-1, измеренный в образце, с контрольной величиной; где более высокий уровень экспрессии sTREM-1, измеренный в образце от субъекта, относительно контрольной величины, является указателем риска инфаркта миокарда, или смертельного исхода у субъекта после инфаркта миокарда, и значение контрольной величины составляет, по крайней мере, 100 пг/мл.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что sTREM-1 имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, их фрагмента или варианта, где вариант SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3 имеет аминокислотную последовательность, по крайней мере, из 25 аминокислот, по крайней мере, на 75% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3, соответственно.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что контрольная величина происходит от уровня экспрессии в контрольном образце, взятом от одного или более по существу здоровых субъектов.

4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что образцом является образец крови.

5. Способ мониторинга эффективности лечения инфаркта миокарда, отличающийся тем, что измеряют уровень экспрессии растворимого триггерного рецептора, экспрессируемого на миелоидных клетках (sTREM-1) в образце, полученном от субъекта, где указанный sTREM 1 представляет растворимую форму внеклеточного домена триггерного рецептора, экспрессируемого на миелоидных клетках-1 (TREM-1), и TREM-1 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1; и сравнивают уровень экспрессии sTREM-1, измеренный в образце, с персонализированной (индивидуальной) контрольной величиной для субъекта; где персонализированная контрольная величина для субъекта представляет собой уровень экспрессии sTREM-1, измеренный в образце, полученном от субъекта, до или в начале терапии, и уровень экспрессии sTREM-1, измеренный в образце от субъекта, ниже или равный около 10% по сравнению с персонализированной контрольной величиной, является указателем позитивного эффекта лечения.

6. Способ по п. 5, отличающийся тем, что sTREM-1 имеет аминокислотную последовательность, выбранную из группы SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, их фрагмента или варианта, где вариант SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3 имеет аминокислотную последовательность, по крайней мере, из 25 аминокислот, по крайней мере, на 75% идентичную аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 3, соответственно.

7. Способ по п. 5, отличающийся тем, что лечение субъекта основано на модуляции функции, активности или экспрессии TREM-1.

8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что модулятором TREM-1 функции, активности или экспрессии является пептид, мишенью которого является TREM-1 лиганд.

9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что пептид, мишенью которого является TREM-1 лиганд, имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4.