Клеточная линия меланомы мыши мех-73, предназначенная для разработки противоопухолевой вакцины

Авторы патента:

C12N5/09 - Недифференцированные клетки человека, животных или растений, например клеточные линии; ткани; культивирование или сохранение их; питательные среды для них (размножение растений из тканевых культур A01H 4/00)

Владельцы патента RU 2724503:

Общество с ограниченной ответственностью "Северный стиль" (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к клеточной линии меланомы мыши МЕХ-73. Линия возникла спонтанным мутированием из меланомы мыши В16 в процессе длительного пересева, предназначена для разработки противоопухолевой вакцины и хранится в Специализированной коллекции культур клеток ЦКП «Коллекция культур клеток позвоночных» Института Цитологии РАН под номером РККК (П) 777Д. Изобретение позволяет расширить арсенал технических средств. 1 пр.

Изобретение относится к области медицинской биотехнологии и касается клеточной линии меланомы мыши МЕХ-73, предназначенной для разработки вакцины. Вакцины, приготовленные на основе опухолевых клеток, являются одним из способов лечения онкологических заболеваний. Принцип данного способа основан на индукции противоопухолевого иммунитета после введения в организм опухолевого антигена.

Опухолевая линия МЕХ-73 может быть предложена как безопасный иммуногенный субстрат для разработки препарата применяемого для лечения и профилактики меланомы у человека и млекопитающих (кошки, собаки и др.).

Цель изобретения - получение новой клеточной линии меланомы мыши и использование ее в разработке противоопухолевой вакцины.

Опухолевая линия возникла спонтанным мутированием из меланомы мыши В16 в процессе длительного пересева. Полученная клеточная линия обладает стабильными культуральными и морфологическими характеристиками. Хранится в Специализированной коллекции культур клеток ЦКП «Коллекция культур клеток позвоночных» Института Цитологии РАН под номером РККК (П) 777Д.

Морфологические признаки клеточной линии МЕХ-73.

Культура представлена двумя пулами клеток: эпителиоидные - 23,3%, фибробластоподобные - 76,7%. Эпителиоидные клетки имеют полиморфное строение. Ядерно-цитоплазматическое соотношение смещено в сторону цитоплазмы. Хроматин в ядре слабо конденсирован, распределен равномерно. Фигур митоза не наблюдается. Цитоплазма негомогенная. Фибробластоподобные клетки имеют полиморфное строение. Значительная часть клетки занята ядром с мелко конденсированными зернами хроматина. Фигуры митоза наблюдаются крайне редко. 43,5% клеток содержат пигмент.

Генетический анализ клеточной линии МЕХ-73.

1. Выявлено присутствие мышиных генов раковых маркеров в хромосомной ДНК: mage А-1, GP100, тирозиназы, her2/neu, раково-эмбрионального антигена.

2. Выявлены белковые продукты экспрессии генов Her2/neu, тирозиназы, GP100.

Культуральные свойства клеточной линии МЕХ-73.

Опухолевые клетки культивируют в среде RPMI 1640, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки, 2 мМ L-глутамина, 1% HEPES, в культуральных флаконах (Costar). Клетки растут в виде прилипающего к пластику фибробластоподобного монослоя. Клетки снимаются с использованием 0,25% трипсина/ЭДТА. Концентрация клеток при посеве - 40000 кл/см², периодичность рассева - 1 раз в 5-7 дней.

Кариотипирование. Цитогенетический анализ МЕХ-73 выявил перестроенный кариотип, большей частью состоящий из акроцентрических хромосом, характерных для мыши, Mus museums. Клетки характеризуются околодиплоидным числом хромосом, разброс по числу хромосом варьирует от 39 до 43, в 67% клеток модальное число хромосом равно 41. Кариотип клеток стабилен, соответствует кариотипу исходного вида Mus museums.

ПЦР-анализ клеточной линии МЕХ-73. В линии клеток МЕХ-73 присутствуют девять микросателлитов, маркирующих восемь разных хромосом мыши. Праймеры для амплификации микросателлитов видоспецифичны для мыши.

Условия криоконсервации.

Состав среды для криоконсервации: 90% инактивированная фетальная бычья сыворотка, 10% DMSO, концентрация клеток - 1,0 млн/мл. Заморозка производится в программном замораживателе при понижении температуры на 1°/мин. Хранение клеточной линии происходит в жидком азоте при -196°С. Размораживание производится в водяной бане при 37°С. Жизнеспособность клеток после размораживания, определенная методом исключения трипанового синего и составляет 80%.

Контаминация. При длительном наблюдении бактерии и грибы в культуре не обнаружены. Тест на микоплазму отрицателен.

Пример 1. Культивирование клеточной линии МЕХ-73.

МЕХ-73 перевивается на самках и самцах мышей линии C57Bl/6 подкожным введением. Доза перевивки - 2×10⁵-5×10⁵ живых клеток в физиологическом растворе. Перевиваемость 100%. Средняя продолжительность жизни животных равна 21-31 день. При подкожной имплантации опухоль растет в виде солидного образования, при внутрибрюшинной - в виде множественных мелких узелков, выстилающих брюшную полость.

Клеточная линия меланомы мыши МЕХ-73, предназначенная для разработки противоопухолевой вакцины, возникла спонтанным мутированием из меланомы мыши В16 в процессе длительного пересева, обладает стабильными культуральными и морфологическими характеристиками; хранится в Специализированной коллекции культур клеток ЦКП «Коллекция культур клеток позвоночных» Института Цитологии РАН под номером РККК (П) 777Д.

Изобретение относится к области медицинской биотехнологии и касается клеточной линии карциномы легких мыши СРХ-1, предназначенной для разработки вакцины. Опухолевая линия СРХ-1 возникла спонтанным мутированием из карциномы легких Льюиса (LLC) мышей в процессе длительного пересева.

Рекомбинантная клеточная линия cyto-car-yt-lact, проявляющая повышенную цитотоксическую активность по отношению к psca-позитивным раковым клеткам человека // 2724431

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к рекомбинантной клеточной CYTO-CAR-YT-Lact, проявляющей повышенную цитотоксическую активность по отношению к PSMA-позитивным раковым клеткам человека.

Многокамерный биореактор для выращивания тканеинженерных конструкций // 2723955

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен многокамерный биореактор для выращивания тканеинженерных конструкций.

Органоиды, содержащие изолированные почечные клетки, и их применение // 2722361

Изобретение относится к биохимии и медицине и представляет собой способ формирования кластера клеток, включающий: (i) объединение популяции гетерогенных клеток почки и популяции биоактивных клеток, где популяция гетерогенных клеток почек содержит клетки, полученные из биоптата почки или из целой почки млекопитающего или происходящие из культуры клеток in vitro, полученных из биоптата почки или целой почки млекопитающего, и где популяция биологически активных клеток (а) содержит популяцию эндотелиальных клеток, полученных не из почек, или популяцию эндотелиальных клеток-предшественников, полученных не из почек, и (b) выделена из источника, происходящего из взрослой особи, или из клеточной линии, происходящей из взрослой особи, и (ii) культивирование популяции гетерогенных почечных клеток и популяции биоактивных клеток в трехмерной культуральной системе, содержащей вращающиеся колбы до образования кластера клеток, где популяцию гетерогенных клеток почки и популяцию биоактивных клеток культивируют независимо в течение первого периода времени, а затем объединяют и культивируют в трехмерной культуральной системе в течение второго периода времени, где второй период времени составляет не менее 24 часов.

Не являющиеся человеком животные с дефицитом дпнрнк // 2721855

Изобретение относится к области биохимии, в частности к грызуну для оценки потери функции длинной межгенной некодирующей РНК (дпнРНК), содержащему в своем геноме модифицированный эндогенный локус дпнРНК, способу его получения, а также к его клетке, ткани и эмбриону и способу их получения.

Вакцинная композиция против злокачественной опухоли // 2721574

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к противоопухолевым пептидным вакцинам, и может быть использовано в медицине для лечения или профилактики рака.

Клеточная культура и биотрансплантат для регенерации костной ткани на ее основе // 2721532

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к клеточному сфероиду для создания костных тканей и тканеинженерных конструкций, используемых для восполнения костных дефектов, и биотрансплантату для регенерации костной ткани при хирургическом лечении деструктивных, дегенеративно-дистрофических, травматических или врожденных поражений костной ткани.

Способ получения высококачественных индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ипск) // 2721266

Изобретение относится к области биохимии, в частности к применению вещества, содержащего ген Н1foo, матричную РНК Н1foo или протеин Н1foo, для улучшения качества индуцированной плюрипотентной стволовой клетки.

Последовательности 3'-utr для стабилизации рнк // 2720934

Изобретение относится к биотехнологии. Описана молекула нуклеиновой кислоты, содержащая, в направлении транскрипции 5' → 3': (a) промотор, (b) транскрибируемую последовательность нуклеиновой кислоты или последовательность нуклеиновой кислоты для введения транскрибируемой последовательности нуклеиновой кислоты и (c) последовательность нуклеиновой кислоты, которая, будучи транскрибированной под контролем промотора (a), кодирует 3'-нетранслируемую область транскрипта, которая в естественных условиях не связана с нуклеиновой кислотой (b), причем указанная 3'-нетранслируемая область содержит последовательность нуклеиновой кислоты, которая выбрана из группы, состоящей из: (c-1) последовательности нуклеиновой кислоты 3'-нетранслируемой области FCGRT, ее фрагмента или варианта указанных последовательности нуклеиновой кислоты или фрагмента, (c-2) последовательности нуклеиновой кислоты 3'-нетранслируемой области LSP1, ее фрагмента или варианта указанных последовательности нуклеиновой кислоты или фрагмента, (c-3) последовательности нуклеиновой кислоты 3'-нетранслируемой области CCL22, ее фрагмента или варианта указанных последовательности нуклеиновой кислоты или фрагмента, (c-4) последовательности нуклеиновой кислоты 3'-нетранслируемой области AES, ее фрагмента или варианта указанных последовательности нуклеиновой кислоты или фрагмента, (c-5) последовательности нуклеиновой кислоты 3'-нетранслируемой области PLD3, ее фрагмента или варианта указанных последовательности нуклеиновой кислоты или фрагмента, (c-6) последовательности нуклеиновой кислоты некодирующей РНК MTRNR1, ее фрагмента или варианта указанных последовательности нуклеиновой кислоты или фрагмента, (c-7) последовательности нуклеиновой кислоты 3'-нетранслируемой области HLA-DRB4, ее фрагмента или варианта указанных последовательности нуклеиновой кислоты или фрагмента и (c-8) любой комбинации двух или более последовательностей нуклеиновой кислоты, фрагментов и/или вариантов, обозначенных под номерами (c-1), (c-2), (c-3), (c-4), (c-5), (c-6) и (c-7), где последовательности нуклеиновой кислоты (b) и (c) под контролем промотора (a) могут быть транскрибированы с образованием общего транскрипта, в котором последовательность нуклеиновой кислоты, транскрибированная с последовательности нуклеиновой кислоты (c), является активной в отношении повышения эффективности трансляции и/или стабильности последовательности нуклеиновой кислоты, транскрибированной с транскрибируемой последовательности нуклеиновой кислоты (b).

Способ получения модельной иммортализованной линии клеток, содержащей реконструированный в-клеточный рецептор неходжкинских лимфом человека // 2720912

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу получения модельной иммортализованной линии клеток, содержащей поверхностно-экспонированную трансмембранно-заякоренную форму В-клеточного рецептора (BCR) патологических лимфоцитов неходжкинских лимфом (НХЛ) человека в формате одноцепочечного антитела (scFv), слитного с константным доменом иммуноглобулина человека класса IgG1 (Fc) и трансмемранным якорем, для разработки персонифицированных подходов к терапии лимфопролиферативных заболеваний человека.

Способ получения высокофункциональных тромбоцитов // 2724533

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к получению тромбоцитов и средству, способствующему получению PAC-1-позитивных тромбоцитов. Способ включает введение в контакт с мегакариоцитами или с их клетками-предшественниками средства, содержащего один или множество антагонистов арил-гидрокарбонового рецептора (AhR) и один или множество ингибиторов Rho-ассоциированных суперспираль-формирующих киназ (ROCK). Изобретение позволяет расширить арсенал технических средств. 2 н. и 10 з.п. ф-лы, 21 ил., 1 табл., 1 пр.