Растительный сбор, обладающий антиоксидантным, противовоспалительным и капилляроукрепляющим действием
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к растительному сбору, обладающему антиоксидантной, противовоспалительной и капилляроукрепляющей активностью. Сбор, обладающий антиоксидантной, противовоспалительной и капилляроукрепляющей активностью, содержит семена конского каштана обыкновенного, траву володушки многожильчатой, цветки лабазника вязолистного, плоды аронии черноплодной, листья земляники лесной, цветки календулы лекарственной при определенном соотношении компонентов. Вышеописанный сбор проявляет выраженную антиоксидантную, противовоспалительную активность и капилляроукрепляющее действие. 8 табл.
Изобретение относится к медицине, в частности к средствам из сырья растительного происхождения, и может быть применено, например, в качестве антиоксидантного, противовоспалительного и капилляроукрепляющего средства при заболеваниях вен, при повышенной ломкости капилляров.
Применение растительных средств в медицинской практике определяется тем, что они практически не токсичны, содержат комплекс биологически активных веществ и проявляют полифункциональные свойства. Сборы из лекарственного растительного сырья, как правило, имеют выраженную фармакологическую активность в нескольких направлениях, что обусловлено содержанием в их составе растений, содержащих разные группы биологически активных веществ. Компонентный состав сборов, имеющий теоретическое обоснование и экспериментальное подтверждение, представляет собой эффективное лекарственное средство. Использование лекарственных средств из сырья растительного происхождения отмечается в разных областях медицины, в том числе при заболеваниях вен и капилляров.
Растения являются источниками биологически активных веществ, а применение растительных сборов позволяет создать композицию, состоящую из комплекса биологически активных веществ, которые оказывают влияние на многие стадии патологического процесса.
Варикозная болезнь в настоящее время занимает одно из ведущих мест среди сердечно-сосудистых заболеваний и диагностируется более чем у 20% мужчин и 40% женщин [6]. В развитии заболеваний сосудов, капилляров существую роль вносит окислительный стресс, поэтому применение антиоксидантых средств на стадии развития заболевания, его течении и для профилактики обосновано применение биологически активных веществ, обладающих антиоксидантным действием [1].
Для усиления кровотока, повышения тонуса сосудов и снижения вязкости крови применяют биологически активные вещества семян конского каштана, представляющие собой тритерпеновые соединения и кумарины [2]. При развитии патологии вен и капилляров включается воспалительный процесс, поэтому рационально введение в состав средства растений, обладающих выраженным противовоспалительным эффектом. При нарушении проницаемости капилляров назначаются препараты с Р-витаминной активность, восстанавливающие полупроницаемость клеточных мембран. Такими свойствами обладают биологически активные вещества как флавоноиды - кверцетин, рутин, гесперидин. При сочетание биологически активных веществ - флавоноидов и аскорбиновой кислоты наблюдается синергизм в проявлении фармакологического эффекта антиоксидантного и капилляроукрепляющего.
В медицинской практике находят применение препараты на основе биологически активных веществ семян конского каштана (тритерпеновые сапонины и кумарины) - экстракт жидкий, эскузан таблетки, эскузан капли. Препараты на основе флавоноидов: детралекс (содержит диосмин и гесперидин), венарус (диосмин и гесперидин), флебавен (диосмин и гесперидин), флебодия 600 (диосмин), флебофа (диосмин), рутин в таблетках, аскорутин в таблетках. В большинстве случаев субстанции флавоноидов не природного происхождения, а получены путем синтеза [2].
Известно «Антиоксидантное, капилляропротекторное, противовоспалительное и антигистаминное средство» для использования в качестве средства с Р-витаминной активностью, представляющее собой индивидуальное соединение - дигидрокверцетин. [патент РФ 2014841, А61К 31/352, АК 61К 36/15. Авторы: Соколов С.Я., Тюкавкина Н.А., Колхир В.К. и др.]. Дигидрокверцетин получают экстракцией измельченной древесины лиственницы водой при нагревании и последующей очисткой на полиамидном сорбенте.
Известно «Средство, растительного происхождения, обладающее антиоксидантной активностью» [патент РФ 2342942, А61К 36/185, А61Р 39/06. Авторы: Латыпова Г.М., Романова З.Р. и др.]. Средство представляет собой густой экстракт травы первоцвета весеннего для профилактики и лечения свободнорадикальных патологий.
Известен «Сбор лекарственных растений антиоксидантного действия» [патент РФ 2613171, А61К, авторы: Шилова И.В., Суслов Н.И., Самылина И.А.]. Средство представляет собой растительный сбор из побегов княжика сибирского, зеленых листьев бадана, травы лабазника вязолистного.
Известна «Композиция «Ангионорм», обладающая антиагрегационным, капилляропротекторным, венотонизирующим действием» [патент РФ 2241483, А61К 9/20, А61Р 7/00, авторы: Колхир В.К., Воскобойникова И.В.]. Растительная композиция, обладающая антиагрегационным, капилляропротекторным, венотонизирующим действием, представляет собой сухой экстракт, полученный спиртовой экстракцией смеси плодов конского каштана обыкновенного, корней солодки, плодов шиповника, плодов боярышника, взятые в определенных соотношениях. Средство рекомендуется для лечения острых патологических состояний и/или обострений хронических заболеваний, связанных с сосудистыми нарушениями, такие как повышенная агрегация тромбоцитов, нарушение проницаемости капилляров, микроциркуляции и венозного кровообращения.
Рассмотренные средства имеют недостатки - неполный спектр фармакологической активности для проявления антиоксидантного, противовоспалительного, капилляроукрепляющего действия.
Наиболее близким является «Сбор «Касмин» для профилактики и лечения тромбозов» [патент РФ 2104024, А61К 36/738, А61К 36/185, авторы: Быков В.А., Климахин Г.И., Черных Д.С. и др.]. Средство представляет собой сбор из лекарственных растений, содержащий семена конского каштана обыкновенного (7-12), корни солодки голой (12-17), листья мяты перечной или траву мелиссы лекарственной (20), плоды боярышника (20) и плоды шиповника остальное. Сбор влияет не только на собственно систему гомеостаза, но и на сердечно-сосудистую систему в целом, липидный, углеводный обмен. Недостатком сбора является недостаточное количество флавоноидов в компонентах сбора, которые определяют антиоксидантное, противовоспалительное действие и Р-витаминную активность.
Цель изобретения - разработка растительного сбора, обладающего антиоксидантной, противовоспалительной и капилляроукрепляющей активностью.
Технический результат изобретения - расширение ассортимента лекарственных средств растительного происхождения, обладающих антиоксидантной, противовоспалительной и капилляроукрепляющей активностью, за счет использования широко распространенного растительного сырья, имеющего надежную и обеспеченную сырьевую базу, расширение спектра фармакологической активности за счет многокомпонентности лекарственного средства и экспериментально обоснованного соотношения компонентов сбора.
Технический результат достигается тем, что растительный сбор содержит в своем составе:
траву володушки многожильчатой - Bupleuri multinervis herba (ВФС 42-580-76) - 20% (2 ч);
семена каштана конского - Aesculi hippocastani semen (ТУ 64-4-75-87) - 20% (2 ч);
цветки лабазника вязолистного - Filipendulae ulmariae flores (ВФС 42-1777-87) - 30% (3 ч);
плоды аронии черноплодной - Aroniae melanocarpae fructus (ФС 2.5.0003.15) - 10% (1 ч);
листья земляники лесной - Fragariae vescae folia (ФС.2.5.0016.15) - 10% (1 ч);
цветки календулы лекарственной - Calendulae officinalis flores (ФС 2.5.0030.15) - 10% (1 ч).
Компонентный состав сбора и предложенное соотношение растительного сырья были обоснованы в результате теоретических и экспериментальных фотохимических и фармакологических исследований.
Биологически активные вещества володушки многожильчатой флавоноиды - рутин, кверцетин, изокверцетин, сапонины, которые нормализуют проницаемость капилляров и оказывают противовоспалительное действие.
Действующие вещества семян конского каштана тритерпеновый сапонин эсцин, кумарины эскулин, фраксин обладают венотонизирующим, антитромботическим действием, усиливают венозный кровоток, уменьшают проницаемость и ломкость капилляров.
Действующими веществами цветков лабазника вязолистного являются флавоноиды - кверцетин, рутин, кемпферол, нарциссин, простые фенольные соединения спиреин, изосалицин и монотропитин, кофейная и эллаговая кислоты. Они обладают антиоксидантным, противовоспалительным, иммуномодулирующим действием.
Плоды аронии черноплодной сухие являются источником комплекса флавоноидов и аскорбиновой кислоты. В состав флавоноидов входят цианидин-3-глюкозид, рутин, кверцетин, тритерпеновые сапонины. Фармакологическое действие антиоксидантное, биологически активные вещества придают эластичность и гибкость сосудам, восстанавливают их проницаемость, снижают кровяное давление.
Биологически активные вещества земляники лесной - аскорбиновая кислота, флавоноиды (преимущественно рутин), следы эфирного масла. Водные извлечения листьев земляники обладают мочегонным действием и являются источником аскорбиновой кислоты.
Цветки календулы лекарственной являются источником каротина, флавоноидов нарциссина, изорамнетина, изорамнетин-3-глюкозида, стероидов - β-ситостерин, стигмастерин, холестанол, кампестанол; тритерпеноидов - арнидиол и фарадиол, кумаринов - скополетин, умбеллиферон и эскулетин. Действие настоя цветков календулы противовоспалительное, спазмолитическое, улучшаещее процессы регенерации.
Технология приготовления сбора заключается в том, что каждый вид лекарственного сырья измельчают отдельно: траву и листья до размера частиц не более 7 мм, цветки не более 5 мм, плоды - не более 3 мм, семена - не более 2 мм. Затем необходимое количество ингредиентов взвешивают, тщательно смешивают до получения равномерной смеси и отсеивают от пыли через сито с диаметром отверстий 0,18 мм.
Для приготовления настоя 10 г сбора заливают 210 мл (с учетом рассчитанного коэффициента водопоглощения равном 2,1) водой очищенной комнатной температуры, настаивают в инфундирном аппарате на кипящей водяной бане при частом перемешивании в течение 15 мин, затем охлаждают при комнатной температуре в течение 45 мин; процеживают (отжимая растительное сырье) и прибавляют воду до требуемого объема извлечения. В результате получают настой в соотношении сырье - экстрагент 1:10 [3].
Качественными аналитическими реакциями и хроматографическими исследованиями в составе предлагаемого сбора обнаружены тритерпеновые сапонины эсцин, сайкосапонин А, флавониды - рутин, гиперозид, кверцетин, изорамнетин, изорамнетин-3-О-рутинозид, цианидин-3-глюкозид; фенолкарбоновые кислоты - 5-О-кофеилхинная кислота, 1,3-ди-О-кофеилхинная кислота; кумарины - эскулин, эскулетин; дубильные вещества.
Количественное содержание суммы флавоноидов определяли спектрофотометрическим методом, основанном на реакции комплексообразования флавоноидов с алюминия хлоридом в пересчете на рутин. Содержание суммы фенолкарбоновых кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту определяли спектрофотометрическим методом, содержание аскорбиновой кислоты титриметрическим методом (рекомендованным для плодов шиповника по ГФ XIV издания). Содержание суммы полифенольных соединений определяли перманганатометрическим методом, экстрактивных веществ по ГФ XIV [3].
Для определения оптимального соотношения ингредиентов в сборе были приготовлены варианты сборов №1-№5 с разным соотношением компонентов (табл. 1).
Далее методом мацерации были приготовлены из сборов извлечения в соотношении сырье-экстрагент (2:50) 50% спиртом этиловым, в которых определяли содержание фенольных соединений, сухого остатка и антиоксидантную активность (табл. 2 и 3).
Антиоксидантную активность изучали на сыворотке донорской крови в опытах in vitro. Методика: к 2 мл сыворотки донорской крови прибавляли 1 мл деалкоголезированного тестируемого извлечения, 0,1 мл 0,5 М раствора сульфата меди (II), в качестве индуктора перекисного окисления липидов. Для сравнения использовали контроль без исследуемого извлечения. Реакционную смесь инкубирования 24 часа при 37°С, и исследовали на содержание диеновых конъюгатов (ДК) и малонового диальдегида (МДА) [9].
Все варианты сборов снижают образование ДК в сравнении с контролем (вода очищенная) от 10,50 до 37,00%. Извлечение варианта сбора №3 максимально снижает содержание ДК на 37% и МДА в на 67,33% (табл. 2).
В извлечениях сбора №3 содержится наибольшее количество биологически активных веществ и он обладает высокой антиоксидантной активность. Данное соотношение компонентов нами выбрано, как базовое для составления рецептуры сбора.
Анализ растительного сырья сбора №3 показал содержание суммы полифенольных соединений - 11,96±0,42%, суммы флавоноидов в пересчете на рутин 4,24±0,13%, суммы фенолкарбоновых кислот в пересчете на хлорогеновую кислоту 3,50±0,06%, аскорбиновой кислоты - 0,25±0,03%, экстрактивных веществ, извлекаемых водой очищенной - 33,01±0,4%, экстрактивных веществ, извлекаемых спиртом этиловым 50% - 43,60±0,8%.
Фармакологические исследования проводили в соответствии с установленными документами «Об утверждении правил лабораторной практики» (МЗ РФ, приказ от 19 июня 2003 г. №267), Good Laboratory Practice for Nonclinical Laboratory Studies (FDA, 21 CFR Part 58, 22.12.1978), OECD Principles on Good Laboratory Practice (OECD, ENV/ МС/ CHEM (98) 17, 1977).
Изучение противовоспалительной активности сбора №3. Опыты проведены на 30 белых крысах линии Wistar обоего пола массой 180-200 г. Исследования проводили в трех сериях опытов: оценка влияния на экссудативную фазу воспаления [7], фазу пролиферации [8] и на процессы альтерации [5]. Во всех экспериментах энтерально вводились животным настой сбора №3 в дозе 100 мг/кг (первой группе крыс) и в виде препарата сравнения - настой цветков ромашки аптечной в дозе 100 мг/кг (второй группе крыс). Животным контрольной группы в равном объеме вводили воду по аналогичной схеме. В первой серии опытов антиэкссудативное действие сбора №3 изучали на модели острого воспалительного отека, вызванного субплантарным введением в заднюю лапку крыс 0,1 мл 2% водного раствора формалина. Настои сбора №3 и ромашки аптечной вводили соответствующим группам животных за 2 часа до введения и через 5 и 18 часов после введения формалина. Измерение объема лапок проводили с помощью онкометра до начала опыта и в момент максимального развития отека (через 4 часа). Активность сбора №3 выражали в процентах угнетения отека.
Во второй серии опытов изучали влияние сбора №3 на процессы альтерации и регенерации в очаге воспаления путем подкожного введения 0,5 мл 9% раствора уксусной кислоты в область спины крыс с предварительно выстриженной шерстью. Одновременно с этим крысам вводили раствор декстрана внутрибрюшинно в дозе 300 мг/кг. Первое введение препарата сбора №3 и ромашки аптечной указанным группам крыс осуществляли за 1 час до введения уксусной кислоты, а затем ежедневно 1 раз в сутки в течение 25 дней. На 9 и 29 сутки эксперимента оценивали площадь некротизированной ткани путем нанесения контура некроза на прозрачную пленку.
В третьей серии опытов изучали влияние сбора №3 на процессы пролиферации путем имплантирования стерильных ватных шариков массой 15 мг под кожу крыс в области спины в асептических условиях. Настой сбора №3 первой группе крыс и ромашки аптечной другой группе крыс вводили внутрижелудочно 1 раз в сутки в течение 7 дней. Через 7 суток у наркотизированных под легким эфирным наркозом животных извлекали гранулемы и сразу проводили их взвешивание на аналитических весах и после высушивания при температуре 70°С в течение 24 часов (до постоянного веса).
Статистическая обработка данных проведена с использованием t-критерия Стьюдента.
В результате проведенных исследований установлено, что сбор №3 снижает формалиновый отек лапок крыс на 38,60%, тогда как ромашка аптечная - на 29,80% по сравнению с контролем (табл. 4).
Кроме того, сбор №3 уменьшал степень повреждения ткани. В частности, на 9 сутки у крыс, получавших настой сбора №3, площадь некротизированной ткани была на 35,00% меньше, чем у крыс контрольной группы, а у животных, получавших настой ромашки аптечной - на 39,20%. Сбор №3 эффективно стимулировал регенераторные процессы, следствием чего явилось уменьшение площади альтерации на 29 сутки опыта на 58,90%, тогда как у крыс, получавших настой ромашки аптечной, площадь повреждения уменьшалась на 27,10% (табл. 5).
В результате проведенной третьей серии опытов установлено, что у животных, получавших сбор №3, масса извлеченных гранулем превышала контроль на 21%. (табл. 6). Использованный в качестве сравнения настой ромашки аптечной, наоборот, снижал массу гранулем на 45% по сравнению с контролем.
Сбор №3 снижает формалиновый отек, альтрацию и способствует процессу пролиферации. Это доказывает выраженную противовоспалительную активность сбора №3.
Изучение влияния сбора №3 на проницаемость капилляров. Для исследования капилляроукрепляющего действия использовали модель локальной воспалительной реакции с помощью ксилола на крысах-самках массой 180-200 г по методу К.Н. Монаковой [4]. Животные были разбиты на 3 группы по 6 особей в каждой. Первая группа - интактные животные. Вторая группа получала раствор рутина в качестве препарата сравнения. Третьей группе за 30 мин до эксперимента вводили настой сбора №3. У крыс выстригали шерсть на коже живота (участок 0,5 см). Препараты вводились per os в объеме 3 мл (100 мг/кг сухого вещества) за 1 час до введения индикатора проницаемости, роль которого выполнял раствор трипановой сини. Трипановую синь вводили в хвостовую вену крыс в виде 0,5%-ного раствора на 0,9%-ном растворе натрия хлорида из расчета 1 мл на 100 г массы животного. Через 30 с на кожу передней брюшной стенки наносили каплю ксилола. Регистрировали время появления петехий и отчетливого их прокрашивания. Показателем проницаемости капилляров служило время появления на коже сине-окрашенных пятен и их диаметр.
Результаты эксперимента статистически обрабатывались методами для малой выборки с определением средней величины (М) и ошибки (m). Степень достоверности результатов исследований (Р) оценивали с помощью параметрического критерия t-Стьюдента для малой выборки. Различия между данными контроля и опыта считали значимыми при вероятности 95% (Р≤0,05).
По разнице во времени появления пятен и их диаметру до и после введения препаратов судили об их действии на проницаемость капилляров.
Как видно из таблицы 7, в контроле время появления петехий составляло в среднем 76 сек; время отчетливого прокрашивания 110 сек. Эти показатели мы приняли за 100%. В группе животных, получавших раствор рутина, время появления петехий составило 111 сек и время отчетливого прокрашивания - 126 сек. При введении настоя сбора №3, эти показатели составляли соответственно 126 сек и 138 сек., относительно контроля. В процентном выражении это выглядит следующим образом. Раствор рутина повышал время появления петехий на 46,1% и время отчетливого прокрашивания на 12,7%, тогда как в группе, получавшей настой сбора №3, эти показатели были соответственно 65,7% и 25,5%.
Сбор №3 превосходит по капилляроукрепляющему действию рутин и сбор «Касмин» (табл. 7). По содержанию основных биологически активных веществ, отвечающих за антиоксидантное, противовоспалительное и капилляроукрепляющее действие сбор №3 превосходит сбор «Касмин» (табл. 8).
Литература
1. Глазков А.А. Роль окислительного стресса в повреждении сосудов при артериальной гипертензии // Научное сообщество студентов XXI столетия. Естественные науки. Электронный сборник статей по материалам L студенческой международной научно-практической конференции. - Новосибирск: Изд. АНС «СибАК». - 2017. - №3 (49) - С. 36-34. / [Электронный ресурс] - Режим доступа. - URL: http://www.sibac.info/archive/nature/3(49).pdf
2. Государственный реестр лекарственных средств по состоянию на 02.09.2019 [Электронный ресурс] URL: http://grls.rosminzdrav.ru
3. Государственная Фармакопея России / [Электронный ресурс] - Режим доступа. - URL: / http://femb.ru/femb/pharmacopea.php
4. Жилина, И.В. Степанова Э.Ф., Огурцов Ю.А., Голова Г.А. Изучение капилляроукрепляющего действия геля с экстрактом лабазника вязолистного // Научные ведомости. Серия медицина. Фармация. - 2010. №22 (93). Выпуск 12 (2). - с. 29-31.
5. Ойвин И.А., Шетель С.Л. Методика изучения местных нарушений капиллярной проницаемости // Матер, по патогенезу воспаления и патологии белков крови. - Душанбе, 1961. - 49. - №5. - 167-173.
6. Покровский А.В., Сапелкин С.В. Хроническая венозная недостаточность нижних конечностей - современные проблемы диагностики, классификации, лечения // Ангиология и сосудистая хирургия. - 2003. - Т. 9, №1. - С. 53-60.
7. Стрельников Ю.Е. Сравнительная характеристика противовоспалительного действия некоторых пиримидиновых производных // Фармакология и токсикология - 1969. - №6. - С. 526-531.
8. Тринус Ф.П., Мохорт Н.А., Клебанов Б.М. Нестероидные противовоспалительные средства. - Киев, 1975. - 240 с.
9. Шаварда А.Л. и др. Антиоксидантная активность видов флоры Алтая // Растит, ресурсы. - 1998. - т. 34. - вып. 2. - С. 1-8.
Растительный сбор, обладающий антиоксидантным, противовоспалительным и капилляроукрепляющим действием, содержащий семена конского каштана обыкновенного, отличающийся тем, что дополнительно содержит траву володушки многожильчатой, цветки лабазника вязолистного, плоды аронии черноплодной, листья земляники лесной, цветки календулы лекарственной при соотношении компонентов сбора в частях соответственно 2:2:3:1:1:1.
