Фармацевтическая композиция для лечения болевого синдрома в стопе, включающая ботулинический токсин и гиалуроновую кислоту, и способ лечения болевого синдрома в стопе с ее использованием

Изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей ботулинический токсин и гиалуроновую кислоту, для лечения болевого синдрома в ногах и к способу лечения болевого синдрома в ногах. Изобретение обеспечивает синергетическое действие композиции, увеличивая как противовоспалительную, так и противоболевую активность посредством эффекта ингибирования воспаления при болевом синдроме в стопе, таком как боль, возникающая в результате подошвенного фасциита, фасциита стопы, диабета и подагры. 3 н. и 16 з.п. ф-лы, 2 пр., 1 ил.

 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей ботулинический токсин и гиалуроновую кислоту, предназначенной для лечения болевого синдрома в стопе, и к способу лечения болевого синдрома в стопе с ее использованием.

Уровень техники

Ботулинический токсин представляет собой нейротоксин, продуцируемый грамположительной анаэробной бактерией Clostridium botulinum. Ботулинический токсин подразделяется на восемь нейротоксинов, и из них семь (A, B, C, D, E, F и G) могут вызывать нервный паралич. Среди них тип А, известный как природный биологический агент, представляет собой наиболее смертоносный ботулинический токсин, белок токсина имеет размер 150 кДа и связывается с нетоксиновым белком с образованием комплекса, размер комплекса достигает 900 кДа в зависимости от типа нейротоксина.

Ботулинический токсин обладает эффектом вызывать временный паралич мышц, он вызывает локальный мышечный паралич по механизму ингибирования секреции ацетилхолина в мионевральном соединении нервного окончания (связываясь с холинергическим окончанием для входа в нервные клетки). Ботулинический токсин обладает эффектом подавления боли, такой как хроническая миофасциальная боль, возникающая в результате локального мышечного паралича, боль в пояснице, мышечная ригидность и головные боли напряженного типа, и подавляет боль путем ингибирования блокирования ацетилхолином нервной сигнализации.

Ботулинический токсин был одобрен FDA США в 1989 году, и его применяли для облегчения косоглазия и глабеллярных морщин. Ботулинический токсин применяли для лечения косоглазия, спазмов лица, блефароспазма, миотонии и тому подобного, его применяли в косметических целях, таких как удаление морщин, и в хирургических операциях по поводу квадратной челюсти.

Продолжительность действия ботулинического токсина, введенного в мышцы и ткани кожи, составляет от 3 до 6 месяцев, эффект от инъекции начинается через 3 дня, а максимальный эффект проявляется через 1-2 недели. Когда передача сигналов блокируется ботулиническим токсином путем ингибирования секреции ацетилхолина в мионевральном соединении, создается новая нервная ветвь, чтобы уменьшить эффект паралича нерва ботулиническим токсином, и, таким образом, ботулинический токсин необходимо вводить периодически.

Ботулинический токсин может вызывать побочные эффекты, такие как головные боли, птоз, дисфагия и ксеростомия, но непосредственной смерти от ботулинического токсина не наблюдали, и известно, что при применении ботулинического токсина в соответствующей дозе не возникает проблем с безопасностью. Однако его применение ограничено для беременных или кормящих женщин.

Болевой синдром в стопе представляет собой заболевание, при котором возникает воспаление, и которое сопровождается болью в определенной части стопы, и ее примеры включают подошвенный фасциит, фасциит стопы, диабетическую боль в нерве стопы, болевой синдром в стопе при подагре и тому подобное.

Среди них подошвенный фасциит как типичное заболевание представляет собой заболевание, при котором боль вызывает воспаление, происходящее в расположенной на подошве стопы ткани, называемой подошвенная фасция. Подошвенная фасция представляет собой жесткую волокнистую ткань, которая широко распространяется на подошве стопы, начинается под пятью пальцами стопы и собирается в одно сухожилие, а затем прикрепляется к переднемедиальной области пяточной кости, она играет важную роль в поддержании свода стопы, когда вы стоите или ходите, и когда подошвенная фасция повреждена, могут возникнуть воспаление и боль. Соответственно, как причина этого, воспаление возникает вследствие стимуляции стрессом в области, в которой подошвенная фасция прикреплена к пяточной кости, и иногда боль возникает из-за стимуляции окружающих нервов. В большинстве случаев для диагностики подошвенного фасциита часто применяют ультразвуковую диагностику, и, наблюдая за областью, в которой подошвенная фасция прикреплена к пяточной кости, можно увидеть, насколько толстой стала подошвенная фасция. Кроме того, при воспалении толстая фасция может быть обнаружена наряду с низким рефлексом подошвенной фасции.

Подошвенный фасциит лечат с целью уменьшения боли, поддержания подвижности и минимизации расстройства. Примеры способа его лечения включают немедикаментозное лечение (регулирование количества упражнений и способа, упражнения на растяжку, упражнения для укрепления мышечной силы, ношение супинаторов и регулировка обуви), лечение лекарственными средствами (нестероидный противовоспалительный анальгетик, инъекция стероидов, экстракорпоральное ударно-волновое лечение и хирургическое лечение). Поскольку воспаление и боль из-за подошвенной фасции представляют собой заболевание, которое вызывает множество ограничений в повседневной жизни, при приеме препарата в течение длительного периода времени возникают побочные эффекты, такие как гепатотоксичность, почечная недостаточность, язвенная болезнь желудка и желудочно-кишечные кровотечения, и, следовательно, существует настоятельная необходимость в способе лечения без каких-либо побочных эффектов вместо эффектов улучшения, которые зависят от лекарственного средства.

Сообщалось, что для снятия воспаления и боли при подошвенном фасциите достаточно введения только ботулинического токсина, снимающего воспаление. Кроме того, существует клиническое исследование, показавшее усиление эффектов по сравнению со стероидными препаратами, в случае, когда подошвенный фасциит лечили ботулиническим токсином. К тому же, сообщалось о том, что противовоспалительный эффект проявляется при применении гиалуроновой кислоты для ингибирования IL-1 бета, который представляет собой основной цитокин воспаления.

На ранней стадии подошвенного фасциита симптомы можно снять с помощью немедикаментозного лечения, но хроническое заболевание, сопровождающееся воспалением и болью, следует лечить медикаментозными способами и с помощью подкожной инъекционной терапии. Поскольку на сегодняшний день нет препарата, который был бы одобрен и коммерчески доступен в качестве лекарственного средства для профилактики и лечения болевого синдрома в стопе, такого как боль, вызванная подошвенным фасциитом, фасциитом стопы, невралгией диабетической стопы и болевым синдромом в стопе при подагре, с применением смешанного состава ботулинического токсина и гиалуроновой кислоты, то существует потребность в подкожном инъекционном препарате подошвы, в котором были бы смешаны ботулинический токсин и гиалуроновая кислота.

Раскрытие изобретения

Технические проблемы

Настоящее изобретение было разработано для решения вышеупомянутых проблем, и авторы настоящего изобретения предприняли интенсивные усилия по поиску препарата для инъекций, способного снимать воспаление и боль, вызванные хроническим подошвенным фасциитом, и поддерживать функциональность стоп, и в результате подтвердили, что комплексный препарат ботулинического токсина и гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению обладает эффектом ослабления воспаления и боли, вызванных подошвенным фасциитом, тем самым завершая настоящее изобретение.

Таким образом, цель настоящего изобретения заключается в обеспечении фармацевтической композиции для лечения болевого синдрома в стопе, включающей гиалуроновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль и ботулинический токсин.

Другая цель настоящего изобретения заключается в обеспечении способа лечения болевого синдрома в стопе, включающего стадию введения субъекту фармацевтической композиции для лечения болевого синдрома в стопе, включающей композицию или ее фармацевтически приемлемую соль.

Еще одна цель настоящего изобретения состоит в обеспечении применения фармацевтической композиции для лечения болевого синдрома в стопе для производства терапевтического средства от болевого синдрома в стопе.

Однако техническая проблема, решаемая настоящим изобретением, не ограничивается вышеупомянутыми проблемами, и другие проблемы, которые не упомянуты, могут быть понятны специалистам в данной области техники из следующего описания.

Техническое решение

Для достижения целей настоящего изобретения, как описаны выше, настоящее изобретение предлагает фармацевтическую композицию для лечения болевого синдрома в стопе, включающую гиалуроновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль и ботулинический токсин.

В качестве воплощения настоящего изобретения ботулинический токсин может быть типа A, B, C, D, E, F или G, предпочтительно типа A.

В качестве другого воплощения настоящего изобретения ботулинический токсин может быть включен в количестве от 0,01 до 250 единиц (ед.), предпочтительно от 0,01 до 20 единиц (ед.).

В качестве еще одного воплощения настоящего изобретения ботулинический токсин может представлять собой белок токсина или комплексный белок.

В качестве еще одного воплощения настоящего изобретения гиалуроновая кислота может иметь молекулярную массу 1000 кДа или менее.

В качестве еще одного воплощения настоящего изобретения гиалуроновая кислота может быть включена в количестве от 0,5 до 5% (по масс.), предпочтительно, от 0,5 до 1% (по масс.).

В качестве еще одного воплощения настоящего изобретения болевой синдром в стопе может быть вызван одним или несколькими заболеваниями, выбранными из группы, состоящей из подошвенного фасциита, фасциита стопы, диабета и подагры. Кроме того, настоящее изобретение относится к способу лечения болевого синдрома в стопе, включающему стадию введения фармацевтической композиции субъекту.

В качестве воплощения настоящего изобретения введение может представлять собой подкожное введение в область стопы.

В качестве еще одного воплощения настоящего изобретения, ботулинический токсин может представлять собой токсин типа A, B, C, D, E, F или G, предпочтительно, типа A.

Кроме того, настоящее изобретение относится к применению композиции для производства терапевтического средства от болевого синдрома в стопе.

В качестве воплощения настоящего изобретения терапевтическое средство может представлять собой жидкость.

Благоприятные эффекты

Настоящее изобретение относится к композиции для лечения болевого синдрома в стопе, включающей ботулинический токсин и гиалуроновую кислоту. Более конкретно, композиция по настоящему изобретению может проявлять синергетическое действие, увеличивая как противовоспалительную, так и противоболевую активность посредством эффекта ингибирования воспаления при болевом синдроме в стопе, таком как боль, возникающая в результате подошвенного фасциита, фасциита стопы, повреждения ахиллова сухожилия, плоскостопия, диабета и подагры. Таким образом, ожидается, что композицию в соответствии с настоящим изобретением можно будет эффективно применять подкожно в подошве стопы в качестве жидкого инъекционного средства, которое проявляет эффект лечения или облегчения болевого синдрома в стопе.

Описание чертежей

Фиг. 1 представляет собой диаграмму, иллюстрирующую степень уменьшения боли под действием композиции по настоящему изобретению, определенную с помощью теста фон Фрея.

Способы изобретения

Авторы настоящего изобретения специально подтвердили, что препарат комплекса ботулинического токсина и гиалуроновой кислоты по настоящему изобретению может ослаблять воспаление и боль при болевом синдроме в стопе и поддерживать ее функциональность, тем самым завершая основанное на этом настоящее изобретение.

Далее настоящее изобретение будет описано подробно.

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения болевого синдрома в стопе, включающей ботулинический токсин или его фармацевтически приемлемую соль и гиалуроновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может представлять собой жидкость и, предпочтительно, может быть составлена в виде лекарственной формы для инъекций. Кроме того, композицию можно вводить подкожно в область стопы, чтобы лечить болевой синдром в стопе, и, предпочтительно, вводить подкожно в подошву стопы, чтобы лечить подошвенный фасциит, но не ограничивается этим.

Применяемый в настоящем документе термин «ботулинический токсин» относится к типу ботулинического токсина, который могут продуцировать бактерии или который может быть продуцирован рекомбинантным способом, но включает любой известный тип ботулинического токсина и его модифицированный вариант или слитый белок, и любой тип ботулинического токсина, который может быть обнаружен впоследствии. Ботулинический токсин подразделяется на восемь нейротоксинов, и семь серотипов ботулинического токсина A, B, C, D, E, F и G могут вызывать нервный паралич. Этот белок подразделяют на белок, который включает в себя комплекс, и белок, который не включает в себя комплекс, и чистый белок токсина имеет молекулярную массу 150 кДа, и в соответствии с тем, как формируется комплекс, получают различные белки с молекулярной массой 300 кДа, 500 кДа и 900 кДа.

Ботулинический токсин, применяемый в композиции по настоящему изобретению, может альтернативно представлять собой производное ботулинического токсина, то есть соединение, которое обладает активностью ботулинического токсина, но включает одну или несколько химических модификаций или функциональных модификаций по сравнению с природным или рекомбинантным прототипом ботулинического токсина. Например, ботулинический токсин может представлять собой модифицированный нейротоксин (например, нейротоксин, имеющий одну или несколько аминокислотных делеций, модификаций или замен по сравнению с прототипом нейротоксина, или нейротоксин, продуцированный с помощью рекомбинации, их производные или их фрагменты). Например, ботулинический токсин может представлять собой ботулинический токсин, у которого усилены его характеристики или снижены нежелательные побочные эффекты, но он модифицирован таким образом, что предпочтительная активность ботулинического токсина все еще сохраняется. Альтернативно, ботулинический токсин может представлять собой токсин, продуцируемый с применением рекомбинантного или синтетического химического способа (например, рекомбинантный пептид, гибридный белок или гибридный нейротоксин, полученный из различных субъединиц или доменов серотипа ботулинического токсина (смотри, например, патент США № 6444209). Ботулинический токсин также может быть частью всей молекулы, которая, как было доказано, обладает требуемой активностью ботулинического токсина, и, в таком случае, его применяют как таковой или как часть комбинации или молекулы конъюгата, например, слитого белка. Кроме того, ботулинический токсин может находиться в форме предшественника ботулинического токсина, который сам может быть нетоксичным, например, нетоксичная цинковая протеаза, которая может стать токсичной при распаде в результате гидролиза белка.

В настоящем документе термин «гиалуроновая кислота» представляет собой один из сложных полисахаридов, включающих аминокислоту и уроновую кислоту, и имеет низкую молекулярную массу (от 500 кДа до 1000 кДа), которая равна размеру гиалуроновой кислоты, присутствующей в организме человека, и, таким образом, представляет собой не только биологически безопасное, но и более эффективное, чем высокомолекулярная гиалуроновая кислота, соединение в отношении снижения уровня воспаления синовиальной жидкости и реологического восстановления во время подкожной инъекции. С другой стороны, высокомолекулярная гиалуроновая кислота (2300 кДа или более) имеет преимущество в том, что частота введения может быть уменьшена из-за высокой вязкоупругости.

В настоящем документе термины «фармацевтически приемлемая соль гиалуроновой кислоты» и «фармацевтически приемлемая соль ботулинического токсина» относятся к солям, которые общеприняты для животного, в особенности, для человека, и примеры соли, применяемой для получения соли присоединения основания, включают такую неорганическую соль, как соль лития, натрия, калия, кальция, магния или алюминия, или такую органическую соль, как соль этиламина, диэтиламина, этилендиамина, этаноламина, диэтаноламина, аргинина, лизина, гистидина или пиперазина; или примеры соли присоединения кислоты включают такие органические соли, как ацетаты, цитраты, лактаты, малонаты, малеаты, тартраты, фумараты, бензоаты, аспартаты, глутаматы, сукцинаты, олеаты, трифторацетаты, оксалаты, памоаты или глюконаты, такие неорганические соли, как хлориды, сульфаты, бораты или карбонаты и тому подобное, но примеры не ограничиваются ими. При условии, что соль представляет собой фармацевтически приемлемую соль, характеристики соли не представляют собой важные факторы. Фармацевтически приемлемая соль композиции по настоящему изобретению может быть получена типичным способом, хорошо известным в данной области техники.

Фармацевтическая композиция настоящего изобретения может включать фармацевтически приемлемый носитель в дополнение к активному ингредиенту. В этом случае фармацевтически приемлемый носитель обычно применяют во время приготовления, и он включает лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, крахмал, аравийскую камедь, фосфат кальция, альгинат, желатин, силикат кальция, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидинон, целлюлозу, воду, сироп, метилцеллюлозу, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния, минеральное масло и тому подобное, но не ограничивается ими. Кроме того, фармацевтически приемлемый носитель может дополнительно включать смазывающее средство, смачивающее средство, подсластитель, ароматизатор, эмульгатор, суспендирующее средство, консервант и тому подобное, в дополнение к вышеупомянутым ингредиентам.

Фармацевтическую композицию настоящего изобретения вводят в терапевтически эффективном количестве. В настоящем изобретении «фармацевтически эффективное количество» относится к количеству, достаточному для лечения заболевания с разумным соотношением польза/риск, применимым к медикаментозному лечению, и уровень эффективной дозировки может быть определен в соответствии с типом и тяжестью заболевания пациента, активностью лекарственного средства, чувствительностью к лекарственному средству пациента, временем введения, путем введения и скоростью высвобождения лекарственного средства, продолжительностью лечения, факторами, включающими лекарственные средства, которые одновременно применяют с композицией по настоящему изобретению, или другими факторами, хорошо известными в области медицины. Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить в виде единственного терапевтического средства или в комбинации с другими терапевтическими средствами, можно вводить последовательно или одновременно с терапевтическими средствами, связанными с данной областью техники, и можно вводить в однократной или многократных дозах. Важно вводить композицию в минимальном количестве, которое может обеспечить максимальный эффект без каких-либо побочных эффектов, принимая во внимание все вышеупомянутые факторы, и это количество может легко определить специалист в данной области техники.

«Подошвенный фасциит», который представляет собой заболевание, подлежащее лечению в настоящем изобретении, в совокупности относится к заболеванию, при котором боль возникает из-за повторяющейся нагрузки на фасцию, которая протянута от пятки до пальца ноги, и сильная боль возникает, когда стопы нажимают на землю, и может включать в себя болевой синдром в стопе, такой как боль, вызванная фасциитом стопы, боль, вызванная повреждением ахиллова сухожилия, боль, вызванная плоскостопием, боль при диабетической стопе и боль, вызванная подагрой, но не ограничивается этим.

Между тем, другой аспект настоящего изобретения обеспечивает способ лечения подошвенного фасциита, способ, включающий этап введения композиции субъекту.

В настоящем изобретении термин «субъект» относится к субъекту, нуждающемуся в лечении заболевания, и, более конкретно, относится к млекопитающему, такому как человек или примат, не являющийся человеком, мышь, крыса, собака, кошка, лошадь и корова.

Термин «местное введение», применяемое к настоящему изобретению, относится к прямому введению лекарственного средства в или вблизи области или на теле животного, нуждающегося в биологическом воздействии лекарственного средства. Местное введение исключает введение по системному пути, такому как внутривенное введение или пероральное введение. Местное введение включено в форме местного введения, при котором фармацевтическую композицию вводят подкожно в подошву стопы человека. Для введения предпочтительно, чтобы композицию в форме, в которой смешаны активный ингредиент ботулинический токсин и ингредиент гиалуроновая кислота, можно было вводить путем подкожной инъекции в подошву, и лечение было достаточным при повторных введениях один или два раза в три месяца.

Дозировка активного ингредиента композиции согласно настоящему изобретению варьирует в зависимости от различных факторов, таких как возраст пациента, степень боли и время наступления болезни. Активный ингредиент на основе ботулинического токсина типа A можно вводить в количестве от около 0,01 до около 250 единиц (ед.), предпочтительно, от около 0,01 до 100 единиц (ед.), более предпочтительно, от 0,01 до 50 единиц (ед.) и, еще более предпочтительно, от 0,01 до 20 единиц (ед.) ботулинического токсина. Дозировка может быть соответствующим образом выбрана специалистами в данной области техники в зависимости от состояния и массы тела пациента, тяжести заболевания, лекарственной формы, пути и времени введения.

Гиалуроновый ингредиент по настоящему изобретению можно вводить в количестве от около 0,5% (по масс.) до около 5% (по масс.), предпочтительно, от около 0,5% (по масс.) до около 3% (по масс.) и, более предпочтительно от около 0,5% (по масс.) до около 1% (по масс.).

Для введения фармацевтическую композицию, полученную путем смешивания активного ингредиента ботулинического токсина с ингредиентом гиалуроновой кислотой, вводят с помощью инъекции подкожно в подошву стопы, и лечение было достаточным при повторных введениях от одного до двух раз в три месяца.

В этом способе гиалуроновая кислота может служить для облегчения боли и лечения воспаления, действуя в качестве смазывающего и буферного средства в подкожной области стопы, а ботулинический токсин будет способствовать функциональность путем ингибирования ацетилхолина для блокирования нейронной сигнализации боли и ослабления боли. Поскольку применение перорального препарата может быть уменьшено с помощью композиции по настоящему изобретению, следовательно, побочные эффекты перорального препарата для человека могут быть уменьшены.

В настоящем изобретении ботулинический токсин и гиалуроновую кислоту можно вводить подкожно в подошву стопы в форме смеси фармацевтической композиции.

Композиция согласно настоящему изобретению может быть применена в производстве терапевтического средства от болевого синдрома в стопе, и в этом случае терапевтическое средство может предпочтительно представлять собой жидкость и, более предпочтительно, жидкую инъекцию.

Далее будут предложены предпочтительные примеры, помогающие понять настоящее изобретение. Однако следующие примеры предоставлены только для более легкого понимания настоящего изобретения, и содержание настоящего изобретения не ограничивается следующими примерами.

Пример 1. Экспериментальный препарат и экспериментальные способы

1-1. Получение экспериментального материала

Гиалуроновую кислоту (HA) растворяли в 50 мМ натрий-фосфатном буфере (рН 6,8) до концентрации 10 мг/мл. После того как в день введения измеряли массу тела животного, в приготовленную гиалуроновую кислоту соответственно вводили ботулинический токсин типа A (BoNT/A) на основе средней массы тела в тестируемой группе, так что конечное количество введенного ботулинического токсина типа A (BoNT/A) составляло 1,5 ед./кг и 3,0 ед./кг, и полученную смесь смешивали и перемешивали в течение 30-ти минут.

1-2. Экспериментальная модель на животном

Для модели на животном по настоящему эксперименту, модель индуцировали путем введения подкожным путем 100 мкл (1 мг/мл) полного адъюванта Фрейнда (FCA) в подошву правой задней лапы белой крысы Sprague-Dawley (SD). Для построения группы в общей сложности сформировали 5 групп: группа плацебо, в которой модель не индуцировали, группа отрицательного контроля, в которой индуцировали модель, и затем вводили 50 мкл 50 мМ натрий-фосфатного буфера (рН 6,8), тестируемая группа (1% HA + 1,5 ед./кг BoNT/A), в которой была индуцирована модель, и которой затем вводили один раз 50 мкл HA+BoNT/A (0,5 мг 1% HA, 0,454 единицы BoNT/A (на основе 300 г массы тела животного)), и тестируемая группа (1% HA+3,0 ед./кг BoNT/A), которой вводили один раз 50 мкл HA+BoNT/A (0,5 мг 1% HA, 0,909 единицы BoNT/A (в расчете на 300 г массы тела животного)), и тестируемая группа (1% HA+1,5 ед./кг BoNT/A), которой вводили 50 мкл HA+BoNT/A (0,5 мг 1% HA, 0,454 единицы BoNT/A (в расчете на 300 г массы тела животного)) дважды с еженедельным интервалом, и тестируемый материал вводили подкожно в подошвы правой задней лапы 5 животных, принадлежащих к группе плацебо и 10 животных, принадлежащих к группе отрицательного контроля и тестируемым группам.

До того как тестируемый материал вводили подкожно в подошву стопы, на следующий день после введения полного адъюванта Фрейнда (FCA) три раза проводили измерения с применением теста на порог отдёргивания лапы (PWT), чтобы оценить подтверждение модели и степени индукции, и разделение на группы проводили с применением измеренных значений. После разделения на группы, около 50 мкл тестируемого материала вводили в подошву правой задней лапы, где было вызвано воспаление, животных наблюдали в течение 21-го дня, и после того, как полный адъювант Фрейнда (FCA) вводили только тестируемой группе, на 7-й день проводили PWT-тест, а затем проводили повторное введение.

1-3. Тест на порог отдёргивания лапы (PWT)

Чтобы подтвердить эффективность лечения подошвенного фасциита в примере с применением индукционной модели FCA, был проведен тест PWT в качестве параметра для измерения боли.

Для теста PWT измеряли эффект ингибирования острой боли, применяя физическую стимуляцию с помощью нити фон Фрея с помощью динамического подошвенного эстетезометра (UGO BASILE 37450, Италия). Каждое животное было помещено в одно отделение акриловой клетки и оставлено на 15 минут, чтобы крыса могла акклиматизироваться в новой среде. После акклиматизации к окружающей среде эстезиометр устанавливали в диапазоне от 0 до 50 г и от 0 до 20 с, а в качестве способа измерения аллодинии, стимулируемой стимулятором, измеряли три раза с 5-минутными интервалами порог отдергивания задней лапы (сила в момент, когда экспериментальное тело уклоняется от стимулятора: граммы) реакции на отдергивание путем стимуляции пораженной боковой подошвенной области силой от 0 до 50 г. Тест PWT измеряли на 1, 2, 7, 14 и 21 день после введения FCA.

Пример 2. Подтверждение влияния препарата комплекса ботулинического токсина и гиалуроновой кислоты на подавление боли в области стопы на модели FCA-индуцированной гипералгезии в области стоп

FCA представляет собой материал, который индуцирует боль, вызывая воспалительный ответ при введении в подошву задней лапы подкожным путем, который широко применяют для изучения боли и оценки эффективности с помощью FCA-индуцированной модели на животных, и он особенно подходит для оценки степени болевого синдрома в стопах, такого как подошвенный фасциит, поскольку вызывает воспаление в подошвенной фасции. Таким образом, чтобы подтвердить эффекты HA+BoNT/A на лечение болевого синдрома в стопе с применением FCA-индуцированной модели, тест фон Фрея в качестве параметра для измерения боли был протестирован способом по примеру 1.

2-1. Тест фон Фрея

Чтобы оценить подтверждение и степень индукции модели после введения FCA, тест фон Фрея был выполнен способом по примеру 1-3, и в этом случае, чем выше числовые значения на графике, тем лучше проявляется эффект снижения боли.

Данные, представленные на фиг. 1, приведены как среднее ± стандартное отклонение (sd), а для статистического анализа наименьшую значимую разницу (LSD) применяли в качестве одностороннего анализа ANOVA SPSS и ретроспективного анализа. В результате, как показано на фиг. 1, в день 0 после введения можно было подтвердить, что как в тестируемой группе (группа HA+BoNT/A), так и в группе отрицательного контроля (группа, индуцированная FCA), наблюдали значительную разницу с группой положительного контроля (группа плацебо), и, таким образом, можно видеть, что модель была индуцирована, и группы были разделены путем выравнивания средних числовых значений для оценки боли. Кроме того, в результате теста фон Фрея, выполненного на 7, 14 и 21 день после введения, когда тестируемую группу (1% HA+3,0 ед./кг BoNT/A), в которой индуцировали модель, а затем вводили один раз 50 мкл HA+BoN/TA (0,5 мг 1% HA, 0,909 единицы BoNT/A (в расчете на 300 г массы тела животного), сравнивали с отрицательным контролем, в котором индуцировали модель, и затем вводили 50 мкл 50 мМ натрий-фосфатного буфера (рН 6,8), была показана тенденция к статистически значимому уменьшению численных значений измерения боли, и была выявлена тенденция, которая не была статистически значимой, к увеличению среднего значения измерения боли в соответствии в зависимости от концентрации HA+BoNT/A.

На основании результатов было подтверждено, что во время подкожного введения в подошву задней лапы группа HA+BoNT/A оказывала эффект подавления боли.

Следовательно, когда ботулинический токсин и гиалуроновую кислоту применяют одновременно, то одновременное применение оказывает влияние на противоболевое действие, и, следовательно, ожидается, что его можно будет эффективно применять для облегчения боли в области стопы.

Вышеизложенное описание настоящего изобретения предоставлено в иллюстративных целях, и специалист в данной области техники, к которой относится настоящее изобретение, поймет, что настоящее изобретение может быть легко модифицировано в другие конкретные формы без изменения технической сущности или существенных признаков настоящего изобретения. Следовательно, следует понимать, что вышеописанные примеры представляют собой во всех аспектах только типичные, а не ограничительные примеры.

Промышленная применимость

Настоящее изобретение относится к композиции для лечения болевого синдрома в стопе, включающей ботулинический токсин и гиалуроновую кислоту, и ожидается, что композицию настоящего изобретения можно будет эффективно применять подкожно в подошве стопы в качестве жидкого инъекционного средства, которое проявляет эффект лечения или облегчения болевого синдрома в стопах, такого как боль, возникающая при подошвенном фасциите, фасциите стопы, повреждении ахиллова сухожилия, плоскостопии, диабете и подагре.

1. Применение фармацевтической композиции, включающей гиалуроновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль и ботулинический токсин, для лечения болевого синдрома в ногах, где боль в ногах возникает из-за любого заболевания, выбранного из группы, состоящей из подошвенного фасциита, фасциита стопы, диабета и подагры, и где композиция снимает воспаление и боль при болях в ногах.

2. Применение по п. 1, в котором ботулинический токсин представляет собой любой, выбранный из группы, состоящей из ботулинического токсина типов A, B, C, D, E, F и G.

3. Применение по п. 1, в котором ботулинический токсин составляет от около 0,01 до около 250 единиц (ед.).

4. Применение по п. 1, в котором ботулинический токсин составляет от около 0,01 до около 20 единиц (ед.).

5. Применение по п. 1, в котором ботулинический токсин представляет собой белок токсина или сложный белок.

6. Применение по п. 1, в котором гиалуроновая кислота имеет молекулярную массу 1000 кДа или менее.

7. Применение по п. 1, в котором гиалуроновая кислота содержится в количестве от 0,5% (по масс.) до 5% (по масс.).

8. Применение по п. 1, в котором гиалуроновая кислота содержится в количестве от 0,5% (по масс.) до 1% (по масс.).

9. Способ лечения болевого синдрома в ногах, включающий стадию введения субъекту фармацевтической композиции, включающей гиалуроновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль и ботулинический токсин, где боль в ногах возникает из-за любого заболевания, выбранного из группы, состоящей из подошвенного фасциита, фасциита стопы, диабета и подагры, и где композиция снимает воспаление и боль при болях в ногах.

10. Способ по п. 9, в котором введение представляет собой подкожное введение в область стопы.

11. Способ по п. 9, в котором ботулинический токсин составляет от 0,01 до 250 единиц (ед.).

12. Способ по п. 9, в котором тип ботулинического токсина представляет собой любой, выбранный из группы, состоящей из A, B, C, D, E, F и G.

13. Способ по п.9, в котором ботулинический токсин составляет от 0,01 до 20 единиц (ед.).

14. Способ по п. 9, в котором ботулинический токсин представляет собой белок токсина или сложный белок.

15. Способ по п. 9, в котором гиалуроновая кислота имеет молекулярную массу 1000 кДа или менее.

16. Способ по п. 9, в котором гиалуроновая кислота содержится в количестве от 0,5% (по масс.) до 5% (по масс.).

17. Способ по п. 9, в котором гиалуроновая кислота содержится в количестве от 0,5% (по масс.) до 1% (по масс.).

18. Применение фармацевтической композиции, содержащей гиалуроновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль и ботулинический токсин, для производства терапевтического средства от болевого синдрома в ногах, где боль в ногах возникает из-за любого заболевания, выбранного из группы, состоящей из подошвенного фасциита, фасциита стопы, диабета и подагры, и где композиция снимает воспаление и боль при болях в ногах.

19. Применение по п. 18, в котором терапевтическое средство представляет собой жидкость.