Бумажная тест-полоска, набор для определения цикла хгч, способ их получения и их применения

Авторы патента:

Оу Вэйджан (CN)

Цзи Ян (CN)

Сан Епин (CN)

G01N33/76 - человеческого хорионического гонадотропина

Владельцы патента RU 2738061:

НАНТОНГ ЭГЕНС БИОТЕХНОЛОДЖИ КО., ЛТД. (CN)

Группа изобретений относится к медицине и касается набора для определения цикла ХГЧ, характеризующегося тем, что он содержит бумажный тест для определения цикла ХГЧ, футляр и корпус крышки, при этом бумажный тест для определения цикла ХГЧ содержит первую бумажную тест-полоску и вторую бумажную тест-полоску. Группа изобретений также касается способа получения набора для определения цикла ХГЧ; способа определения срока беременности у человека с помощью указанного набора для определения цикла ХГЧ. Группа изобретений обеспечивает локальный, мгновенный и быстрый анализ для определения количества дней беременности. 4 н. и 6 з.п. ф-лы, 11 пр., 1 табл., 7 ил.

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

Заявка на изобретение испрашивает приоритет по китайской заявке на патент № 201810204279.3, поданной 12 марта 2018 г., под названием “hCG cycle test paper strip, kit, preparation method therefor and use thereof”, содержание которой полностью включено в настоящий документ посредством ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящая заявка относится к области биологического выявления и, в частности, относится к бумажной тест-полоске, набору для определения цикла хорионического гонадотропина человека (ХГЧ), способу их получения и их применения.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Хорионический гонадотропин человека (ХГЧ) представляет собой гликопротеиновый гормон, секретируемый плацентарными клетками-трофобластами во время беременности. Он состоит из двух различных субъединиц α и β, соединенных нековалентной связью. В процессе выработки, секреции и метаболизма гормонов молекулы ХГЧ будут претерпевать различные изменения, такие как разъединение и диссоциация, поэтому в крови и в моче они существуют в различных молекулярных формах. ХГЧ является единственным плацентарным гормоном, концентрация которого не возрастает по мере увеличения массы плаценты. Референсные значения ХГЧ у женщин описаны в документе Chinese Clinical Test Operating Procedures. Для 0,2-1 недели беременности референсное значение ХГЧ составляет 5-50 МЕ/мл, для 1-2 недель беременности референсное значение ХГЧ составляет 50-500 МЕ/мл, для 2-3недель беременности референсное значение ХГЧ составляет 100-5000 МЕ/мл, для 3-4 недель беременности референсное значение ХГЧ составляет 500-10000 МЕ/мл, для 4-5 недель беременности референсное значение ХГЧ составляет 1000-50 000 МЕ/мл, для 5-6 недель беременности референсное значение ХГЧ составляет 10 000-100 000 МЕ/мл, для 6-8 недель беременности референсное значение ХГЧ составляет 15 000-200 000 МЕ/мл, для 8-12 недель беременности референсное значение ХГЧ составляет 10 000-100 000 МЕ/мл. После 1 недели беременности концентрация ХГЧ в крови составляет 5-50 ммМЕ/мл, а в моче более 25 мМЕ/мл, достигает максимума в районе 8-10 недель и быстро снижается в течение следующих 1-2 недель, а затем поддерживается до родов на 1/5-1/10 максимального уровня. Таким образом, беременность можно выявить на раннем сроке путем определения концентрации ХГЧ в крови и в моче.

В настоящее время для тест-полоски в обычном тесте (в форме карандаша) для выявления беременности на раннем сроке главным образом используют метод двойного сэндвича антител, в котором в качестве индикатора для определения концентрации ХГЧ в моче используется коллоидное золото, и его можно использовать лишь для определения наличия или отсутствия беременности, но не числа дней беременности. Число дней беременности рассчитывают традиционным способом. На раннем сроке беременности отсчет числа дней беременности начинается с первого дня после последнего менструального периода. Однако этот метод неточен. В настоящее время более точным методом определения числа дней беременности в основном является анализ крови, выявление путем ультразвукового исследования и комбинация двух методов: определения ХГЧ и выявление путем ультразвукового исследования, для получения результата выявления по которому, после длительного периода исследования необходимы профессиональные специалисты и выполнение сложных операций.

В Китайском патенте CN101294966A раскрыто средство выявления эктопической беременности и числа дней беременности на основе коллоидного золота и способ его производства. В нем раскрыто изделие из индикаторной бумажной тест-полоски и раствора для обработки образца мочи; в котором индикаторная бумажная тест-полоска состоит из основной пластины, прокладки для нанесения образца, слоя меченых золотом моноклональных антител к β-ХГЧ и соединенной с основной пластиной нитрат-целлюлозной пленки, наложенной на место абсорбции и приклеенной к нему; на нитрат-целлюлозную пленку нанесена линия моноклональных антител к α-ХГЧ и линия овечьих антикрысиных моноклональных антител, и линия моноклональных антител к α-ХГЧ расположена близко к меченым золотом моноклональным антителам к β-ХГЧ. При использовании этой детектирующей бумажной тест-полоски для определения числа дней беременности требуется три бумажных тест-полоски и обработка образца мочи, что в результате осложняет методику работы и методику выявления, поэтому данное средство выявления не подходит для определения числа дней беременности в семейной обстановке.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Таким образом, цель состоит в преодолении недостатков средства выявления предшествующего уровня техники на основе коллоидного золота, связанных с тем, что для определения числа дней беременности требуется три бумажных тест-полоски и обработка мочи, что приводит к сложности методики работы и методики выявления. В настоящей заявке предложены бумажная тест-полоска и набор реактивов для определения цикла ХГЧ, способ их получения и их применение, которые требуют нескольких тест-полосок и могут быть использованы для образца мочи, который не нужно обрабатывать, методика работы и выявления проста и поэтому пригодна для определения числа дней беременности в семейной обстановке.

Таким образом, в настоящей заявке предложена бумажная тест-полоска для определения цикла ХГЧ, содержащая первую бумажную тест-полоску и вторую бумажную тест-полоску, причем первая бумажная тест-полоска и вторая бумажная тест-полоска соответственно содержат: подложку, а также прокладку для нанесения образца, прокладку, адсорбирующую коллоидное золото, пленку, несущую антитела и абсорбирующую воду прокладку, которые последовательно приклеены к подложке; при этом прокладка для нанесения образца, адсорбирующая коллоидное золото прокладка, несущая антитело пленка и абсорбирующая воду прокладка только контактируют и лишь частично накладываются на соседние; несущая антитело пленка имеет линию контроля качества и детектирующую линию, расположенные с интервалом, при этом линия контроля качества расположена вблизи абсорбирующей воду прокладки, а детектирующая линия расположена вблизи прокладки, адсорбирующей коллоидное золото.

Предпочтительно конъюгат моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека (β-ХГЧ) с коллоидным золотом адсорбирован на адсорбирующей коллоидное золото прокладке первой бумажной тест-полоски, а конъюгат моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека (β-ХГЧ) с коллоидным золотом и свободное β-антитело адсорбированы на адсорбирующей коллоидное золото прокладке второй бумажной тест-полоски.

Предпочтительно на детектирующую линию нанесено моноклональное антитело к хорионическому гонадотропину человека α-ХГЧ; на линию контроля качества нанесено поликлональное антимышиное IgG-антитело.

Свободное β антитело представляет собой свободное антитело к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ.

Предпочтительно несущая антитело пленка представляет собой пленку из нитроцеллюлозы, имеющую размер пор 3-10 мкм.

Предпочтительно каждая из прокладок, для нанесения образца и абсорбирующая воду прокладка снабжены защитной пленкой.

В настоящей заявке также предложен способ получения бумажной тест-полоски для определения цикла ХГЧ, включающий в себя следующие этапы:

S10: нанесение на несущую антитело пленку детектирующей линии и линии контроля качества, расположенных параллельно с интервалом 0,3-0,7 см и высушивание при постоянной температуре 4-35°C;

S20: погружение несущей антитело пленки, полученной на этапе S10, в фосфатно-солевой буферный раствор (ФСБ) с последующим погружением в раствор для блокирующей обработки и высушиванием при температуре 18-28°C и относительной влажности не более 40 %;

S30: приготовление раствора комплекса коллоидного золота и регулирование pH до 6,5-7,0, добавление моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ с последующим добавлением стабилизатора при тщательном перемешивании, центрифугирование и сбор осадка, использование раствора комплекса коллоидного золота для восстановления осадка, заливка на адсорбирующую коллоидное золото прокладку на первой бумажной тест-полоске и последующее высушивание, запаивание и хранение;

S40: приготовление раствора комплекса коллоидного золота и регулирование pH до 6,5-7,0, добавление моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ с последующим добавлением стабилизатора при тщательном перемешивании, центрифугирование и сбор осадка, использование раствора комплекса коллоидного золота для восстановления осадка, а затем добавление свободного β-антитела при тщательном перемешивании, заливка на адсорбирующую коллоидное золото прокладку на второй бумажной тест-полоске и последующее высушивание, запаивание и хранение;

S50: последовательное приклеивание прокладки для нанесения образца, адсорбирующей коллоидное золото прокладки первой бумажной тест-полоски, несущей антитело пленки и адсорбирующей воду прокладки вдоль направления длины подложки с получением первой бумажной тест-полоски; и последовательное приклеивание адсорбирующей коллоидное золото прокладки второй бумажной тест-полоски, несущей антитело пленки и адсорбирующей воду прокладки вдоль направления длины подложки с получением второй бумажной тест-полоски.

Предпочтительно концентрация моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека α-ХГЧ, используемого для нанесения на детектирующую линию, составляет 1,1-1,5 мг/мл, предпочтительно 1,3 мг/мл; концентрация поликлонального антимышиного IgG антитела, используемого для нанесения на линию контроля качества, составляет 1,5-2,5 мг/мл, предпочтительно 2 мг/мл.

Предпочтительно раствор для блокирующей обработки содержит 0,08-0,12-молярный буферный раствор, 0,3-0,7 масс. % сахара и 0,8-1,2 масс. % блокирующего белка и 0,03-0,08 масс. % консерванта, предпочтительно 0,1-молярный буферный раствор, 0,5 масс. % сахара, 1 масс. % блокирующего белка и 0,05 масс. % консерванта.

Предпочтительно буферный раствор представляет собой фосфатный буферный раствор, сахар представляет собой сахарозу или трегалозу, консервант представляет собой NaN₃ или тимеросал, а блокирующий белок представляет собой казеин или бычий сывороточный альбумин.

Предпочтительно концентрация моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ на этапе S30 составляет 5 мкг/мл.

Предпочтительно концентрация моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ на этапе S40 составляет 5 мкг/мл, а массовое отношение свободного β-антитела к моноклональному антителу к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ составляет 10: 1.

Предпочтительно конъюгат моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ с коллоидным золотом заливают на адсорбирующую коллоидное золото прокладку первой бумажной тест-полоски в количестве заливки 50 мкл/см².

Предпочтительно конъюгат моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ с коллоидным золотом и свободное β-антитело заливают на адсорбирующую коллоидное золото прокладку второй бумажной тест-полоски, где заливаемое количество составляет 50 мкл/см².

В настоящей заявке также предложен набор для определения цикла ХГЧ, содержащий бумажную тест-полоску для определения цикла ХГЧ или бумажную тест-полоску для определения цикла ХГЧ, полученную этим способом.

Предпочтительно набор для определения цикла ХГЧ дополнительно содержит футляр, на котором параллельно расположены две прорези, используемые для размещения первой бумажной тест-полоски и второй бумажной тест-полоски соответственно.

Предпочтительно набор для определения цикла ХГЧ содержит корпус крышки, снабженный двумя параллельными окошками и свободно охватывающий футляр, и через эти окошки можно наблюдать детектирующую линию и линию контроля качества первой бумажной тест-полоски и второй бумажной тест-полоски.

В настоящей заявке также предложено применение бумажной тест-полоски для определения цикла ХГЧ или бумажной тест-полоски для определения цикла ХГЧ, полученной этим способом, или набора для определения цикла ХГЧ при определении срока беременности у человека.

В настоящей заявке также предложен способ определения срока беременности у человека с помощью бумажной тест-полоски для определения цикла ХГЧ, включающий следующие этапы:

a) взятие мочи у исследуемого лица, затем полное смачивание в моче прокладок для нанесения образца первой бумажной тест-полоски и второй бумажной тест-полоски в течение 3-10 секунд, а затем изъятие прокладок для нанесения образца и расположение их на плоскости, наблюдение результата в пределах 3-5 минут, причем после 5 минут результат недействителен;

b) наблюдение интенсивности цвета детектирующих линий T1 и T2 первой бумажной тест-полоски и второй бумажной тест-полоски и определение того, окрашена ли линия контроля качества C1 первой бумажной тест-полоски и линия контроля качества C2 второй бумажной тест-полоски:

если на линиях C1 и C2 проявляется окрашивание, а на детектирующих линиях T1 и T2 окрашивание не проявляется, это указывает на то, что исследуемое лицо не является беременным;

если на линиях C1 и C2 проявляется окрашивание, и на детектирующей линии T1 проявляется окрашивание, а на детектирующей линии T2 окрашивание не проявляется, это указывает на то, что исследуемое лицо является беременным и срок беременности - 1-2 недели;

если на линиях C1 и C2 проявляется окрашивание, на детектирующей линии T1 проявляется окрашивание, и на детектирующей линии T2 проявляется более светлое окрашивание, чем на детектирующей линии T1, это указывает на то, что исследуемое лицо является беременным со сроком беременности 2-3 недели;

если на линиях C1 и C2 проявляется окрашивание, на детектирующей линии T1 проявляется окрашивание, на детектирующей линии T2 проявляется более светлое или близкое по цвету к линии T1 окрашивание, это указывает на то, что исследуемое лицо является беременным и срок беременности превышает 3 недели; и

если ни на линиях контроля качества C1 и C2, ни на детектирующих линиях T1 и T2 не видно фиолетового окрашивания или ни на одной из линий контроля качества C1 и C2 не видно фиолетового окрашивания, это указывает на то, что бумажная тест-полоска для определения цикла ХГЧ непригодна.

Предложенные в настоящей заявке технические решения имеют следующие преимущества по сравнению с предшествующим уровнем техники.

(1) Предложенная в настоящей заявке бумажная тест-полоска для определения цикла ХГЧ содержит первую бумажную тест-полоску и вторую бумажную тест-полоску, причем первая бумажная тест-полоска и вторая бумажная тест-полоска соответственно содержат: подложку и последовательно приклеенные на подложку прокладку для нанесения образца, адсорбирующую коллоидное золото прокладку, несущую антитело пленку и абсорбирующую воду прокладку; при этом прокладка для нанесения образца, адсорбирующая коллоидное золото прокладка, несущая антитело пленка и абсорбирующая воду прокладка только контактируют с соседней прокладкой и лишь частично наложены на нее; несущая антитело пленка имеет линию контроля качества и детектирующую линию, расположенные через интервал, линия контроля качества расположена близко к абсорбирующей воду прокладке, а детектирующая линия расположена близко к адсорбирующей коллоидное золото прокладке; конъюгат моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ с коллоидным золотом адсорбирован в адсорбирующей коллоидное золото прокладке первой бумажной тест-полоски, конъюгат моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ с коллоидным золотом и свободное β-антитело адсорбированы в адсорбирующей коллоидное золото прокладке второй бумажной тест-полоски; на детектирующую линию нанесено моноклональное антитело к хорионическому гонадотропину человека α-ХГЧ; на линию контроля качества нанесено поликлональное антимышиное IgG антитело. Описанная выше тест-полоска для определения цикла ХГЧ содержит только две бумажные тест-полоски и может быть использована для образца мочи, который не нуждается в обработке, методика работы и выявления проста, поэтому она обладает высокой специфичностью, воспроизводимостью, стабильностью и чувствительностью. Поскольку минимальное определяемое количество для первой тест-полоски не превышает 25 мМЕ/мл, а минимальное определяемое количество для второй тест-полоски не превышает 100 мМЕ/мл, описанная выше бумажная тест-полоска для определения цикла ХГЧ может точно определять число дней беременности, и процесс этого определения занимает всего 5 мин, и поэтому она подходит для прямого и быстрого определения на месте, а также подходит для определения числа дней беременности в семейной обстановке.

(2) предложенный в настоящей заявке набор для определения цикла ХГЧ можно использовать для качественного определения числа дней беременности с помощью простой методики, подходящей для прямого и быстрого определения на месте. По сравнению с существующей тест-полоской она обладает очевидными преимуществами в отношении скорости определения, портативности и возможности применения в полевых условиях и может точно определять число дней беременности.

(3) Способ определения числа дней беременности с помощью предложенных в настоящей заявке бумажной тест-полоски для определения цикла ХГЧ или набора для определения цикла ХГЧ представляет собой простую и быструю операцию и может быть использован для качественного определения числа дней беременности, и поэтому он подходит для прямого и быстрого определения на месте. По сравнению с существующей тест-полоской он обладает очевидными преимуществами в отношении скорости определения, портативности и возможности применения в полевых условиях.

ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

На Фиг. 1 представлено схематическое изображение, показывающее первую бумажную тест-полоску бумажной тест-полоски для определения цикла ХГЧ в соответствии с настоящей заявкой;

На Фиг. 2 представлено схематическое изображение, показывающее вторую бумажную тест-полоску бумажной тест-полоски для определения цикла ХГЧ в соответствии с настоящей заявкой;

На Фиг. 3 (a) представлено схематическое изображение, показывающее набор для определения цикла ХГЧ в соответствии с примером 5 настоящей заявки;

На Фиг. 3 (b) представлено схематическое изображение, показывающее набор для определения цикла ХГЧ в соответствии с примером 5 настоящей заявки;

На Фиг. 4 представлено схематическое изображение, показывающее набор для определения цикла ХГЧ в соответствии с примером 9 настоящей заявки;

На Фиг. 5 представлено схематическое изображение, показывающее набор для определения цикла ХГЧ в соответствии с примером 7 настоящей заявки;

На Фиг. 6 представлено схематическое изображение, показывающее набор для определения цикла ХГЧ в соответствии с примером 9 настоящей заявки;

На Фиг. 7 представлено схематическое изображение, показывающее набор для определения цикла ХГЧ в соответствии с примером 8 настоящей заявки.

Номера позиций на фигурах представляют собой: 1 - первая бумажная тест-полоска, 2 - вторая бумажная тест-полоска, 3 - корпус крышки, 4 - футляр, 11 - первая полимерная подложка, 12 - первая прокладка для нанесения образца, 13 - первая абсорбирующая воду прокладка, 14 - первая защитная пленка, 15 - первая пленка из нитроцеллюлозы, 16 - первая адсорбирующая коллоидное золото прокладка, T1 - первая детектирующая линия, C1 - первая линия контроля качества, 21 - вторая полимерная подложка, 22 - вторая прокладка для нанесения образца, 23 - вторая абсорбирующая воду прокладка, 24 - вторая защитная пленка, 25 - вторая пленка из нитроцеллюлозы, 26 - вторая адсорбирующая коллоидное золото прокладка, T2 - вторая детектирующая линия, C2 - вторая линия контроля качества.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Чтобы задачи, технические решения и преимущества настоящей заявки стали понятнее, воплощения настоящей заявки поясняют на приведенных ниже конкретных примерах. Если не указано иное, в экспериментальных методиках, раскрытых в настоящей заявке, применены традиционные методики данной области техники.

Пример 1

В примере 1 предложена бумажная тест-полоска для определения цикла ХГЧ, содержащая первую бумажную тест-полоску 1 и вторую бумажную тест-полоску 2. Первая бумажная тест-полоска 1 и вторая бумажная тест-полоска 2 содержат: подложку и прокладку для нанесения образца, адсорбирующую коллоидное золото прокладку, несущую антитело пленку и адсорбирующую воду прокладку, последовательно приклеенные к подложке. Прокладка для нанесения образца, адсорбирующая коллоидное золото прокладка, несущая антитело пленка и абсорбирующая воду прокладка только контактируют с соседней прокладкой и лишь частично наложены на нее. Несущая антитело пленка приклеена к средней части подложки и на нее с интервалом нанесены линия контроля качества и детектирующая линия. Линия контроля качества расположена близко к абсорбирующей воду прокладке, а детектирующая линия расположена близко к адсорбирующей коллоидное золото прокладке. Конъюгат моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека (β-ХГЧ) с коллоидным золотом адсорбирован в адсорбирующей коллоидное золото прокладке первой бумажной тест-полоски, а конъюгат моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека (β-ХГЧ) с коллоидным золотом и свободное β-антитело адсорбированы в адсорбирующей коллоидное золото прокладке второй бумажной тест-полоски. На детектирующую линию нанесено моноклональное антитело к хорионическому гонадотропину человека α-ХГЧ; на линию контроля качества нанесено поликлональное антимышиное IgG антитело.

В примере 1, как показано на Фиг. 1, первая бумажная тест-полоска 1 содержит первую полимерную подложку 11 и первую прокладку 12 для нанесения образца, первую адсорбирующую коллоидное золото прокладку 16, первую несущую антитело пленку и первую адсорбирующую воду прокладку 13, последовательно приклеенные к первой полимерной подложке 11. Первая несущая антитело пленка представляет собой первую пленку 15 из нитроцеллюлозы, расположенную между первой прокладкой 12 для нанесения образца и ниже ее и первой адсорбирующей воду прокладкой 13. На первую пленку 15 из нитроцеллюлозы наложена первая абсорбирующая воду прокладка 13, на один конец первой прокладки 12 для нанесения образца наложена первая адсорбирующая коллоидное золото прокладка 16, а на первую адсорбирующую коллоидное золото прокладку 16 наложена первая пленка 15 из нитроцеллюлозы. На первую пленку 15 из нитроцеллюлозы нанесена первая детектирующая линия T1 и первая линия C1 контроля качества, расположенные с интервалом, причем первая детектирующая линия T1 расположена близко к первой прокладке 12 для нанесения образца, первая линия C1 контроля качества расположена близко к первой адсорбирующей воду прокладке 13. Конъюгат моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ с коллоидным золотом адсорбирован на первой адсорбирующей коллоидное золото прокладке 16. На первую детектирующей линии T1 нанесено моноклональное антитело к хорионическому гонадотропину человека α-ХГЧ; на первую линию C1 контроля качества нанесено поликлональное антимышиное IgG антитело.

Как показано на Фиг. 2, вторая бумажная тест-полоска 2 содержит вторую полимерную подложку 21 и вторую прокладку 22 для нанесения образца, вторую адсорбирующую коллоидное золото прокладку 26, вторую несущую антитело пленку и вторую адсорбирующую воду прокладку 23, последовательно приклеенные ко второй полимерной подложке 21. Вторая несущая антитело пленка представляет собой вторую пленку 25 из нитроцеллюлозы, расположенную между второй прокладкой 22 для нанесения образца и ниже ее и второй адсорбирующей воду прокладкой 23. На вторую пленку 25 из нитроцеллюлозы наложена вторая абсорбирующая воду прокладка 23, на один конец второй прокладки 22 для нанесения образца наложена вторая адсорбирующая коллоидное золото прокладка 26, а на вторую адсорбирующую коллоидное золото прокладку 26 наложена вторая пленка 25 из нитроцеллюлозы. На вторую пленку 25 из нитроцеллюлозы нанесена вторая детектирующая линия T2 и вторая линия C2 контроля качества, расположенные с интервалом, причем вторая детектирующая линия T2 расположена близко ко второй прокладке 22 для нанесения образца, вторая линия C2 контроля качества расположена близко ко второй адсорбирующей воду прокладке 23. Конъюгат моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ с коллоидным золотом и свободное β-антитело адсорбированы на второй адсорбирующей коллоидное золото прокладке 26. На вторую детектирующую линию T2 нанесено моноклональное антитело к хорионическому гонадотропину человека α-ХГЧ; на вторую линию C2 контроля качества нанесено поликлональное антимышиное IgG антитело.

Кроме того, первая прокладка 12 для нанесения образца и первая абсорбирующая воду прокладка 13 (каждая из них) снабжены первой защитной пленкой 14, а вторая прокладка 22 для нанесения образца и вторая абсорбирующая воду прокладка 23 (каждая из них) снабжены второй защитной пленкой 24.

Кроме того, первая линия C1 контроля качества и первая детектирующая линия T1 расположены параллельно друг другу и с интервалом 0,3-0,7 см. В данном примере первая линия C1 контроля качества и первая детектирующая линия T1 расположены с интервалом 0,5 см. Вторая линия C2 контроля качества и вторая детектирующая линия T2 расположены параллельно друг другу и с интервалом 0,3-0,7 см. В данном примере вторая линия C2 контроля качества расположена на 0,5 см от второй детектирующей линии T2.

Кроме того, первая пленка 15 из нитроцеллюлозы и вторая пленка 25 из нитроцеллюлозы представляют собой пленку из нитроцеллюлозы, имеющей размер пор 3-10 мкм.

Пример 2

В примере 2 предложен способ получения бумажной тест-полоски для определения цикла ХГЧ примера 1, включающий следующие этапы:

1. Подготовка пленки из нитроцеллюлозы:

(1) Отрезают пленку из нитроцеллюлозы с размером пор 3-10 мкм с получением пленки, имеющей параметры по ширине, равной 2,0 см или более, и по длине 30,5 см, по необходимости.

(2) Готовят раствор 1,3 мг/мл моноклонального антитела к α-ХГЧ в 0,1 M фосфатном буферном растворе для нанесения на детектирующую линию и 2,0 мг/мл поликлонального антимышиного IgG антитела на буферном растворе, содержащем 0,85 масс. % хлорида натрия, для нанесения на линию контроля качества.

(3) На нитроцеллюлозной пленке отмечают поверхность нанесения антитела. Раствор антитела для нанесения на детектирующую линию и раствор антитела для нанесения на линию контроля качества следует равномерно параллельно наносить на пленку, и детектирующая линия и линия контроля качества должны быть покрыты. Детектирующая линия и линия контроля качества расположены с интервалом 0,5 см. Пленку из нитроцеллюлозы сушат при постоянной температуре 4 -35° C.

(4) Готовят пропитывающий раствор для блокирующей обработки. В смесительный резервуар добавляют фактический технологический объем очищенной воды; затем на электронных аналитических весах взвешивают 0,1 моль фосфатного буферного раствора, 0,5 масс. % сахара, 1 масс. % блокирующего белка и 0,05 масс. % консерванта, а затем непосредственно добавляют в смесительный резервуар при перемешивании до полного растворения, добавляют очищенную воду до достижения требуемого объема, после чего тщательно перемешивают не менее 10 минут.

(5) Покрывающую пленку помещают в резервуар для обработки и добавляют в него подготовленный буферный раствор 0,01 M ФСБ при температуре около 36°C. Следует убедиться, что каждая пленка полностью погружена в буферный раствор 0,01 M ФСБ на 5 минут (пленка не должна смещаться или складываться). Пленку извлекают из резервуара для обработки и буферный раствор 0,01 M ФСБ сливают. Затем пленку, однократно погруженную в буферный раствор 0,01 M ФСБ на 5 минут, помещают в резервуар для обработки, затем добавляют в него подготовленный буферный раствор 0,01 M ФСБ так, чтобы гарантировать, что каждая пленка полностью погружена в буферный раствор 0,01 M ФСБ на 30 минут (пленка не должна смещаться или складываться). После этого пленку извлекают из резервуара для обработки и буферный раствор 0,01 M ФСБ сливают. Затем пленку, дважды погруженную в буферный раствор 0,01 M ФСБ, помещают в резервуар для обработки и погружают в подготовленный раствор для блокирующей обработки так, чтобы гарантировать, что каждая пленка полностью погружена в раствор для обработки на 15 минут (пленка не должна смещаться или складываться). После этого пленку извлекают из резервуара для обработки и с помощью пинцета пленку из каждой рамки отводят в сторону, чтобы убедиться, что она не сместилась из рамки и не сложилась, после чего рамку с пленкой снова погружают в раствор для обработки на 20 минут. После этого пленку извлекают из резервуара для обработки и с помощью пинцета пленку выводят из рамки и помещают на марлю, чтобы немного подсушить (действия по сушке пленки выполняют внимательно, чтобы не порвать и не деформировать пленку, обращая внимание на степень высыхания пленки).

(6) Наклеивают на пластинку и высушивают

Снимают белую бумагу посередине линии отреза на двухсторонней липкой ленте пластинки липкой ленты. На левой руке оператора должна быть надета одноразовая перчатка и, удерживая пинцет в правой руке, он помещает пленку на свободное пространство в центре пластинки липкой ленты и убеждается, что угол отреза расположен в правой верхней стороны пластинки, а правая сторона пластинки липкой ленты выровнена с правой стороной пленки. Во избежание ошибок в технологическом процессе необходимо убедиться, что положение проявления окрашивания является довольно точным. Пленку наклеивают на пластинку, выравнивая по верхнему концу линии контроля качества. После наклеивания пленки на пластинку липкой ленты поверхность пленки разглаживают поперек двусторонней липкой ленты во избежание возникновения пузырьков воздуха. Температуру в помещении контролируют в диапазоне 18-28 °C, а относительная влажность составляет не более 40 %. Необходимо также убедиться, что воздух в помещении для сушки может циркулировать, а воздушный поток из осушителя не дует непосредственно на поверхность пленки. Время сушки составляет не менее 4 часов.

2. Получение первой адсорбирующей коллоидное золото прокладки

(1) Приготовление раствора комплекса коллоидного золота

В смесительный резервуар добавляют фактический технологический объем очищенной воды; а затем на электронных аналитических весах взвешивают 5 масс. % трегалозы, 2 масс. % бычьего сывороточного альбумина, 0,5 масс. % натрия цитрата трехзамещенного, 0,05 масс. % полиэтиленгликоля и 0,05 масс. % NaN₃, а затем непосредственно добавляют в смесительный резервуар, перемешивая до полного растворения, добавляют очищенную воду до достижения требуемого объема, после чего тщательно перемешивают не менее 30 минут с получением, таким образом, раствора комплекса коллоидного золота.

(2) С помощью мерного цилиндра отмеряют требуемое количество коллоидного золота, регулируют pH до 6,5-7,0 добавлением раствора 0,2 моль/л карбоната калия с 0,53 % по объему коллоидного золота при перемешивании на магнитной мешалке в течение 15 минут с получением, таким образом, оптимизированного раствора коллоидного золота. Моноклональное антитело к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ метят оптимизированным коллоидным золотом в концентрации 5 мкг/мл, т. е. моноклональное антитело к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ разводят дважды дистиллированной водой до концентрации 5 % по объему, тщательно перемешивая с получением раствора моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ с концентрацией 5 мкг/мл, который добавляют к оптимизированному коллоидному золоту с последующим перемешиванием на магнитной мешалке в течение 30 минут, а затем добавляют 0,5 % по объему стабилизатора при перемешивании в течение 30 минут, после чего центрифугируют, собирают осадок, меченный коллоидным золотом, который снова растворяют раствором комплекса коллоидного золота до концентрации 3 % по объему и перемешивают на магнитной мешалке, пока смесь не станет однородной, и, таким образом, получают раствор повторно растворенного коллоидного золота.

(3) отбирают 3 % по объему раствор повторно растворенного коллоидного золота описанной выше стадии (2) и повторно растворяют раствором комплекса коллоидного золота до 40 % по объему с последующим перемешиванием на магнитной мешалке. Однородно перемешанный раствор коллоидного золота заливают на подготовленную адсорбирующую коллоидное золото прокладку в количестве 50 мкл/см², после чего помещают ее в помещение для сушки для высушивания в течение не менее 4 часов и поддерживают температуру в помещении для сушки в диапазоне 18-28°C, а относительную влажность — на уровне не более 40 %. Следует убедиться, что воздух проходит свободно, и что поток воздуха не может дуть непосредственно на адсорбирующую коллоидное золото прокладку. Высушенную адсорбирующую коллоидное золото прокладку помещают в пакет из алюминиевой фольги, содержащий осушитель, запечатывают для хранения и маркируют как первую адсорбирующую коллоидное золото прокладку. Примечание: Раствор коллоидного золота заливают, поскольку залитое коллоидное золото можно свободно нарезать, таким образом, легко регулировать интенсивность цвета продукта.

3. Получение второй адсорбирующей коллоидное золото прокладки

(1) С помощью мерного цилиндра отмеряют требуемое количество коллоидного золота, регулируют pH до 6,5-7,0 добавлением раствора 0,2 моль/л карбоната калия с 0,53% по объему коллоидного золота, перемешивая на магнитной мешалке в течение 15 минут с получением, таким образом, оптимизированного раствора коллоидного золота. Моноклональное антитело к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ метят оптимизированным коллоидным золотом в концентрации 5 мкг/мл, а затем разводят дважды дистиллированной водой до концентрации 5 % по объему, тщательно перемешивая, с получением раствора моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ с концентрацией 5 мкг/мл, который добавляют к оптимизированному коллоидному золоту с последующим перемешиванием на магнитной мешалке в течение 30 минут, а затем добавляют 0,5% по объему стабилизатора, перемешивая в течение 30 минут, после чего центрифугируют, собирают осадок, который снова растворяют раствором комплекса коллоидного золота концентрацией 3% по объему и перемешивают на магнитной мешалке, пока смесь не станет однородной.

(2) Отбирают 3% по объему повторно растворенного коллоидного золота описанной выше стадии (1) и повторно растворяют раствором комплекса коллоидного золота до 40% по объему, а затем добавляют свободное β-антитело в соответствии с массовым соотношением моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ и свободного β-антитела 1:10 с последующим перемешиванием на магнитной мешалке. Однородно перемешанный раствор коллоидного золота заливают на подготовленную адсорбирующую коллоидное золото прокладку в количестве 50 мкл/см², после чего помещают ее в помещение для сушки для высушивания в течение не менее 4 часов, поддерживая температуру в помещении для сушки в диапазоне 18-28°C, а относительную влажность — на уровне не более 40%. Следует убедиться, что воздух проходит свободно, и что поток воздуха не может дуть непосредственно на адсорбирующую коллоидное золото прокладку. Высушенное маркированное золото помещают в пакет из алюминиевой фольги, содержащий осушитель, запечатывают для хранения и маркируют как вторую адсорбирующую коллоидное золото прокладку. Примечание: Раствор коллоидного золота заливают, поскольку залитое коллоидное золото можно свободно нарезать, таким образом, легко регулировать интенсивность цвета продукта.

4. Сборка и нарезка:

(1) Берут наполовину готовое изделие, представляющее собой прозрачную подложку, на которую наклеена пленка из нитроцеллюлозы, и первую адсорбирующую коллоидное золото прокладку, на которую нанесено антитело, нарезают на полоски 0,5 см × 30 см, шириной 0,5 см, наклеивают на прозрачную подложку, оставляя около 1 мм для наложения пленки из нитроцеллюлозы. Первую адсорбирующую воду прокладку присоединяют в верхнем конце прозрачной пленочной подложки с пленкой из нитроцеллюлозы и оставляют около 1 мм для наложения пленки. Первую прокладку для нанесения образца присоединяют в нижнем конце первой адсорбирующей коллоидное золото прокладки, на которую нанесено антитело, накладывая сверху около 1 мм, и маркируют для применения.

(2) В зависимости от соответствующего реакционного устройства собранную подложку нарезают на бумажные тест-полоски, маркированные как первая бумажная тест-полоска.

(3) Берут наполовину готовое изделие, представляющее собой прозрачную подложку, на которую наклеена пленка из нитроцеллюлозы, и вторую адсорбирующую коллоидное золото прокладку, на которую нанесено антитело, нарезают на полоски 0,5 см × 30 см, шириной 0,5 см наклеивают на прозрачную подложку, оставляя около 1 мм для наложения пленки из нитроцеллюлозы. Вторую адсорбирующую воду прокладку присоединяют в верхнем конце прозрачной пленочной подложки с пленкой из нитроцеллюлозы и накладывают пленку шириной около 1 мм. Вторую прокладку для нанесения образца присоединяют в нижнем конце второй адсорбирующей коллоидное золото прокладки, на которую нанесено антитело, накладывая сверху около 1 мм, и маркируют для применения.

(4) В зависимости от соответствующего реакционного устройства собранную подложку нарезают на бумажные тест-полоски, маркированные как вторая бумажная тест-полоска.

Пример 3

В примере 3 предложен способ получения бумажной тест-полоски для определения цикла ХГЧ примера 1, включающий следующие стадии:

1. Подготовка пленки из нитроцеллюлозы:

(1) Отрезают пленку из нитроцеллюлозы с размером пор 3,0 мкм с получением пленки, имеющей параметры в ширину 2,0 см или более, и в длину - 30,5 см, по необходимости.

(2) Готовят раствор 1,1 мг/мл моноклонального антитела к α-ХГЧ в 0,1 M фосфатном буферном растворе для нанесения на детектирующую линию и 2,5 мг/мл поликлонального антимышиного IgG антитела на буферном растворе, содержащем 0,85 масс. % хлорида натрия, для нанесения на линию контроля качества.

(4) Готовят пропитывающий раствор для блокирующей обработки. В смесительный резервуар добавляют фактический технологический объем очищенной воды; затем на электронных аналитических весах взвешивают фосфатный буферный раствор, сахар, бычий сывороточный альбумин и тимеросал, а затем непосредственно добавляют в смесительный резервуар, перемешивая до полного растворения, добавляют очищенную воду до достижения требуемого объема, после чего тщательно перемешивают не менее 10 минут. В приготовленном пропитывающем растворе для блокирующей обработки концентрация фосфатного буферного раствора составляет 0,08 моль, массовый процент сахара составляет 0,7 %, массовый процент бычьего сывороточного альбумина составляет 0,8 %, и массовый процент тимеросала составляет 0,08 %.

(5) Покрывающую пленку помещают в резервуар для обработки и добавляют в него подготовленный буферный раствор 0,01 M ФСБ при температуре около 36 °C. Следует убедиться, что каждая пленка полностью погружена в буферный раствор 0,01 M ФСБ на 5 минут (пленка не должна смещаться или складываться). Пленку извлекают из резервуара для обработки и буферный раствор 0,01 M ФСБ сливают. Затем пленку, однократно погруженную в буферный раствор 0,01 M ФСБ на 5 минут, помещают в резервуар для обработки, затем добавляют в него подготовленный буферный раствор 0,01 M ФСБ так, чтобы гарантировать, что каждая пленка полностью погружена в буферный раствор 0,01 M ФСБ на 30 минут (пленка не должна смещаться или складываться). После этого пленку извлекают из резервуара для обработки и буферный раствор 0,01 M ФСБ сливают. Затем пленку, дважды погруженную в буферный раствор 0,01 M ФСБ, помещают в резервуар для обработки и погружают в подготовленный раствор для блокирующей обработки так, чтобы гарантировать, что каждая пленка полностью погружена в раствор для обработки на 15 минут (пленка не должна смещаться или складываться). После этого пленку извлекают из резервуара для обработки и с помощью пинцета пленку из каждой рамки отводят в сторону, чтобы убедиться, что она не сместилась из рамки и не сложилась, после чего рамку с пленкой снова погружают в раствор для обработки на 20 минут. После этого пленку извлекают из резервуара для обработки, и с помощью пинцета пленку выводят из рамки и помещают на марлю, чтобы немного подсушить (действия по сушке пленки выполняют осторожно, чтобы не порвать и не деформировать пленку, обращая внимания на степень ее высыхания).

(6) Наклеивают на пластинку и высушивают

2. Получение первой адсорбирующей коллоидное золото прокладки

(1) Приготовление раствора комплекса коллоидного золота: В смесительный резервуар добавляют фактический технологический объем очищенной воды; а затем на электронных аналитических весах взвешивают трегалозу, бычий сывороточный альбумин, натрия цитрат трехзамещенный, полиэтиленгликоль и NaN₃, а затем непосредственно добавляют в смесительный резервуар, перемешивая до полного растворения, добавляют очищенную воду до достижения требуемого объема, после чего тщательно перемешивают не менее 30 минут с получением, таким образом, раствора комплекса коллоидного золота. Приготовленный раствор комплекса коллоидного золота содержит 5 масс. % трегалозы, 2 масс. % бычьего сывороточного альбумина, 0,5 масс. % натрия цитрата трехзамещенного, 0,05 масс. % полиэтиленгликоля и 0,05 масс. % NaN₃.

(2) С помощью мерного цилиндра отмеряют требуемое количество коллоидного золота, регулируют pH до 6,5-7,0 добавлением раствора 0,2 моль/л карбоната калия с 0,53 % по объему коллоидного золота при перемешивании на магнитной мешалке в течение 15 минут с получением, таким образом, оптимизированного раствора коллоидного золота. Моноклональное антитело к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ метят оптимизированным коллоидным золотом в концентрации 5 мкг/мл, т. е. соответствующее количество моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ разводят дважды дистиллированной водой до концентрации 5 % по объему при тщательном перемешивании, с получением раствора моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ с концентрацией 5 мкг/мл, который добавляют к оптимизированному коллоидному золоту с последующим перемешиванием на магнитной мешалке в течение 30 минут, а затем добавляют 0,5 % по объему стабилизатора, перемешивая в течение 30 минут, после чего центрифугируют, собирают осадок, меченный коллоидным золотом, который снова растворяют раствором комплекса коллоидного золота, после чего перемешивают на магнитной мешалке, пока смесь не станет однородной, и таким образом получают раствор повторно растворенного коллоидного золота. Объемный процент меченного коллоидным золотом осадка в растворе комплекса коллоидного золота составляет 3 %.

(3) Отбирают раствор повторно растворенного коллоидного золота описанной выше стадии (2) и повторно растворяют раствором комплекса коллоидного золота до 40 % по объему с последующим перемешиванием на магнитной мешалке. Однородно перемешанный раствор коллоидного золота заливают на подготовленную адсорбирующую коллоидное золото прокладку в количестве 50 мкл/см², после чего помещают ее в помещение для сушки для высушивания в течение не менее 4 часов, и поддерживают температуру в помещении для сушки в диапазоне 18-28 °C, а относительную влажность - на уровне не более 40 %. Следует убедиться, что воздух проходит свободно, и что поток воздуха не может дуть непосредственно на адсорбирующую коллоидное золото прокладку. Высушенную адсорбирующую коллоидное золото прокладку помещают в пакет из алюминиевой фольги, содержащий осушитель, запечатывают для хранения и маркируют как первую адсорбирующую коллоидное золото прокладку. Примечание: Раствор коллоидного золота заливают, поскольку залитое коллоидное золото можно свободно нарезать, таким образом, легко регулировать интенсивность цвета продукта.

3. Получение второй адсорбирующей коллоидное золото прокладки

(1) С помощью мерного цилиндра отмеряют требуемое количество коллоидного золота, регулируют pH до 6,5-7,0 добавлением раствора 0,2 моль/л карбоната калия с 0,53 % по объему коллоидного золота, перемешивая на магнитной мешалке в течение 15 минут с получением, таким образом, оптимизированного раствора коллоидного золота. Моноклональное антитело к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ метят оптимизированным коллоидным золотом в концентрации 5 мкг/мл, т. е. соответствующее количество моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ разводят дважды дистиллированной водой до концентрации 5 % по объему при тщательном перемешивании, с получением раствора моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ с концентрацией 5 мкг/мл, который добавляют к оптимизированному коллоидному золоту с последующим перемешиванием на магнитной мешалке в течение 30 минут, а затем добавляют 0,5 % по объему стабилизатора, перемешивая в течение 30 минут, после чего центрифугируют, собирают осадок, меченный коллоидным золотом, который снова растворяют раствором комплекса коллоидного золота, после чего перемешивают на магнитной мешалке, пока смесь не станет однородной, и таким образом получают раствор повторно растворенного коллоидного золота. Объемный процент меченного коллоидным золотом осадка в растворе комплекса коллоидного золота составляет 3 %.

(2) Берут раствор повторно растворенного коллоидного золота описанной выше стадии (1) и повторно растворяют раствором комплекса коллоидного золота до 40 % по объему, а затем добавляют свободное β-антитело в соответствии с массовым соотношением моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ и свободному β-антителу 1:10 с последующим перемешиванием на магнитной мешалке. Однородно перемешанный раствор коллоидного золота заливают на подготовленную адсорбирующую коллоидное золото прокладку в количестве 50 мкл/см², после чего помещают ее в помещение для сушки для высушивания в течение не менее 4 часов и поддерживают температуру в помещении для сушки в диапазоне 18-28 °C, а относительную влажность на уровне не более 40 %. Следует убедиться, что воздух проходит свободно, и что поток воздуха не может дуть непосредственно на адсорбирующую коллоидное золото прокладку. Высушенную адсорбирующую коллоидное золото прокладку помещают в пакет из алюминиевой фольги, содержащий осушитель, запечатывают для хранения и маркируют как вторую адсорбирующую коллоидное золото прокладку. Примечание: Раствор коллоидного золота заливают, поскольку залитое коллоидное золото можно свободно нарезать, таким образом, легко регулировать интенсивность цвета продукта.

4. Сборка и нарезка:

Пример 4

В примере 4 предложен способ получения бумажной тест-полоски для определения цикла ХГЧ примера 1, включающий следующие стадии:

1. Подготовка пленки из нитроцеллюлозы:

(2) Готовят раствор 1,5 мг/мл моноклонального антитела к α-ХГЧ в 0,1 M фосфатном буферном растворе для нанесения на детектирующую линию и 1,5 мг/мл поликлонального антимышиного IgG антитела на буферном растворе, содержащем 0,85 масс. % хлорида натрия, для нанесения на линию контроля качества.

(4) Готовят пропитывающий раствор для блокирующей обработки. В смесительный резервуар добавляют фактический технологический объем очищенной воды; затем на электронных аналитических весах взвешивают фосфатный буферный раствор, сахар, бычий сывороточный альбумин и тимеросал, а затем непосредственно добавляют в смесительный резервуар, перемешивая до полного растворения, добавляют очищенную воду до достижения требуемого объема, после чего тщательно перемешивают не менее 10 минут. В приготовленном пропитывающем растворе для блокирующей обработки концентрация фосфатного буферного раствора составляет 0,12 моль, массовый процент сахара составляет 0,3 %, массовый процент бычьего сывороточного альбумина составляет 1,2 %, и массовый процент тимеросала составляет 0,03 %.

(5) Покрывающую пленку помещают в резервуар для обработки и добавляют в него подготовленный буферный раствор 0,01 M ФСБ при температуре около 36 °C. Следует убедиться, что каждая пленка полностью погружена в буферный раствор 0,01 M ФСБ на 5 минут (пленка не должна смещаться или складываться). Пленку извлекают из резервуара для обработки и буферный раствор 0,01 M ФСБ сливают. Затем пленку, однократно погруженную в буферный раствор 0,01 M ФСБ на 5 минут, помещают в резервуар для обработки, затем добавляют в него подготовленный буферный раствор 0,01 M ФСБ так, чтобы гарантировать, что каждая пленка полностью погружена в буферный раствор 0,01 M ФСБ на 30 минут (пленка не должна смещаться или складываться). После этого пленку извлекают из резервуара для обработки и буферный раствор 0,01 M ФСБ сливают. Затем пленку, дважды погруженную в буферный раствор 0,01 M ФСБ, помещают в резервуар для обработки и погружают в подготовленный раствор для блокирующей обработки так, чтобы гарантировать, что каждая пленка полностью погружена в раствор для обработки на 15 минут (пленка не должна смещаться или складываться). После этого пленку извлекают из резервуара для обработки и с помощью пинцета пленку из каждой рамки отводят в сторону, чтобы убедиться, что она не сместилась из рамки и не сложилась, после чего рамку с пленкой снова погружают в раствор для обработки на 20 минут. После этого пленку извлекают из резервуара для обработки и с помощью пинцета пленку выводят из рамки и помещают на марлю, чтобы немного подсушить (действия по сушке пленки выполняют внимательно, чтобы не порвать и не деформировать пленку, обращая внимание на степень высыхания пленки).

(6) Наклеивают на пластинку и высушивают

2. Получение первой адсорбирующей коллоидное золото прокладки

(2) С помощью мерного цилиндра отмеряют требуемое количество коллоидного золота, регулируют pH до 6,5-7,0 добавлением раствора 0,2 моль/л карбоната калия с 0,53 % по объему коллоидного золота при перемешивании на магнитной мешалке в течение 15 минут с получением, таким образом, оптимизированного раствора коллоидного золота. Моноклональное антитело к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ метят оптимизированным коллоидным золотом в концентрации 5 мкг/мл, т. е. соответствующее количество моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ разводят дважды дистиллированной водой до концентрации 5 % по объему при тщательном перемешивании, с получением раствора моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ с концентрацией 5 мкг/мл, который добавляют к оптимизированному коллоидному золоту с последующим перемешиванием на магнитной мешалке в течение 30 минут, а затем добавляют 0,5 % по объему стабилизатора, перемешивая в течение 30 минут, после чего центрифугируют, собирают осадок, меченный коллоидным золотом, который снова растворяют раствором комплекса коллоидного золота, после чего перемешивают на магнитной мешалке, пока смесь не станет однородной, и таким образом получают раствор повторно растворенного коллоидного золота. Объемный процент меченного коллоидным золотом осадка в растворе комплекса коллоидного золота составляет 3 %.

(3) Отбирают раствор повторно растворенного коллоидного золота описанной выше стадии (2) и повторно растворяют раствором комплекса коллоидного золота до 40 % по объему с последующим перемешиванием на магнитной мешалке. Однородно перемешанный раствор коллоидного золота заливают на подготовленную адсорбирующую коллоидное золото прокладку в количестве 50 мкл/см², после чего помещают ее в помещение для сушки для высушивания в течение не менее 4 часов, и поддерживают температуру в помещении для сушки в диапазоне 18-28 °C, а относительную влажность — на уровне не более 40 %. Следует убедиться, что воздух проходит свободно, и что поток воздуха не может дуть непосредственно на адсорбирующую коллоидное золото прокладку. Высушенную адсорбирующую коллоидное золото прокладку помещают в пакет из алюминиевой фольги, содержащий осушитель, запечатывают для хранения и маркируют как первую адсорбирующую коллоидное золото прокладку. Примечание: Раствор коллоидного золота заливают, поскольку залитое коллоидное золото можно свободно нарезать, таким образом, легко регулировать интенсивность цвета продукта.

3. Получение второй адсорбирующей коллоидное золото прокладки

(1) С помощью мерного цилиндра отмеряют требуемое количество коллоидного золота, регулируют pH до 6,5-7,0 добавлением раствора 0,2 моль/л карбоната калия с 0,53 % по объему коллоидного золота, перемешивая на магнитной мешалке в течение 15 минут с получением, таким образом, оптимизированного раствора коллоидного золота. Моноклональное антитело к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ метят оптимизированным коллоидным золотом в концентрации 5 мкг/мл, т. е. соответствующее количество моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ разводят дважды дистиллированной водой до концентрации 5 % по объему при тщательном перемешивании, с получением раствора моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ с концентрацией 5 мкг/мл, который добавляют к оптимизированному коллоидному золоту с последующим перемешиванием на магнитной мешалке в течение 30 минут, а затем добавляют 0,5 % по объему стабилизатора, перемешивая в течение 30 минут, после чего центрифугируют, собирают осадок, меченный коллоидным золотом, который снова растворяют раствором комплекса коллоидного золота, после чего перемешивают на магнитной мешалке, пока смесь не станет однородной, и таким образом получают раствор повторно растворенного коллоидного золота. Объемный процент меченного коллоидным золотом осадка в растворе комплекса коллоидного золота составляет 3 %.

4. Сборка и нарезка:

Пример 5

В примере 5 предложен набор для определения цикла ХГЧ, как показано на Фиг. 3 (a), включающий в себя первую бумажную тест-полоску 1 и вторую бумажную тест-полоску 2. Как показано на Фиг. 1, первая бумажная тест-полоска 1 содержит первую полимерную подложку 11 и первую прокладку 12 для нанесения образца, первую адсорбирующую коллоидное золото прокладку 16, первую пленку 15 из нитроцеллюлозы и первую адсорбирующую воду прокладку 13, последовательно наложенные друг на друга и приклеенные друг к другу, а затем иммобилизованные на первой полимерной подложке 11. На первую пленку 15 из нитроцеллюлозы последовательно нанесена первая детектирующая линия T1 и первая линия C1 контроля качества, расположенные параллельно, и первая детектирующая линия T1 нанесена с одной стороны близко к первой адсорбирующей коллоидное золото прокладке 16. Первая детектирующая линия T1 и первая линия C1 контроля качества расположены с интервалом 0,5 см. На первую адсорбирующую коллоидное золото прокладку 16 нанесено антитело к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ в концентрации наносимого раствора 5 мкг/мл, на первую детектирующую линию T1 нанесено моноклональное антитело к α-ХГЧ, а на первую линию C1 контроля качества нанесено поликлональное антимышиное IgG антитело.

Как показано на Фиг. 3 (a) и 3 (b), набор для определения цикла ХГЧ также содержит корпус 3 крышки и футляр 4. На футляре 4 параллельно расположены две прорези, в одну из них устанавливают первую тест-полоску 1, при этом первая прокладка 12 для нанесения образца выступает наружу из футляра 4, а в другую устанавливают вторую тест-полоску 2, и вторая прокладка 22 выступает наружу из футляра 4. Корпус 3 крышки снабжен двумя параллельными окошками и закрывает футляр 4. Первую детектирующую линию T1 и первую линию C1 контроля качества можно наблюдать через левое окошко на корпусе 3 крышки, а вторую детектирующую линию T2 и вторую линию C2 контроля качества можно наблюдать через правое окошко на корпусе 3 крышки.

Пример 6

В примере 6 предложен способ получения набора для определения цикла ХГЧ, включающий следующие стадии:

1. Подготовка пленки из нитроцеллюлозы:

(4) Готовят пропитывающий раствор для блокирующей обработки. В смесительный резервуар добавляют фактический технологический объем очищенной воды; затем на электронных аналитических весах взвешивают фосфатный буферный раствор, сахар, бычий сывороточный альбумин и тимеросал, а затем непосредственно добавляют в смесительный резервуар, перемешивая до полного растворения, добавляют очищенную воду до достижения требуемого объема, после чего тщательно перемешивают не менее 10 минут. В приготовленном пропитывающем растворе для блокирующей обработки концентрация фосфатного буферного раствора составляет 0,1 моль, массовый процент сахара составляет 0,5 %, массовый процент бычьего сывороточного альбумина составляет 1 %, и массовый процент NaN₃составляет 0,05 %.

(5) Покрывающую пленку помещают в резервуар для обработки и добавляют в него подготовленный буферный раствор 0,01 M ФСБ при температуре около 36 °C. Следует убедиться, что каждая пленка полностью погружена в буферный раствор 0,01 M ФСБ на 5 минут (пленка не должна смещаться или складываться). Пленку извлекают из резервуара для обработки и буферный раствор 0,01 M ФСБ сливают. Затем пленку, однократно погруженную в буферный раствор 0,01 M ФСБ на 5 минут, помещают в резервуар для обработки, затем добавляют в него подготовленный буферный раствор 0,01 M ФСБ так, чтобы гарантировать, что каждая пленка полностью погружена в буферный раствор 0,01 M ФСБ на 30 минут (пленка не должна смещаться или складываться). После этого пленку извлекают из резервуара для обработки и буферный раствор 0,01 M ФСБ сливают. Затем пленку, дважды погруженную в буферный раствор 0,01 M ФСБ, помещают в резервуар для обработки и погружают в подготовленный раствор для блокирующей обработки так, чтобы гарантировать, что каждая пленка полностью погружена в раствор для обработки на 15 минут (пленка не должна смещаться или складываться). После этого пленку извлекают из резервуара для обработки и с помощью пинцета пленку из каждой рамки отводят в сторону, чтобы убедиться, что она не сместилась из рамки и не сложилась, после чего рамку с пленкой снова погружают в раствор для обработки на 20 минут. После этого пленку извлекают из резервуара для обработки и с помощью пинцета пленку выводят из рамки и помещают на марлю, чтобы немного подсушить (действия по сушке пленки выполняют внимательно, чтобы не порвать и не деформировать пленку, обращая внимание на степень высыхания пленки).

(6) Наклеивают на пластинку и высушивают

2. Получение первой адсорбирующей коллоидное золото прокладки

(2) С помощью мерного цилиндра отмеряют требуемое количество коллоидного золота, регулируют pH до 6,5-7,0 добавлением раствора 0,2 моль/л карбоната калия с 0,53 % по объему коллоидного золота, перемешивая на магнитной мешалке в течение 15 минут с получением, таким образом, оптимизированного раствора коллоидного золота. Моноклональное антитело к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ метят оптимизированным коллоидным золотом в концентрации 5 мкг/мл, т. е. соответствующее количество моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ разводят дважды дистиллированной водой до концентрации 5 % по объему при тщательном перемешивании, с получением раствора моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ с концентрацией 5 мкг/мл, который добавляют к оптимизированному коллоидному золоту с последующим перемешиванием на магнитной мешалке в течение 30 минут, а затем добавляют 0,5 % по объему стабилизатора, перемешивая в течение 30 минут, после чего центрифугируют, собирают осадок, меченный коллоидным золотом, который снова растворяют раствором комплекса коллоидного золота, после чего перемешивают на магнитной мешалке, пока смесь не станет однородной, и таким образом получают раствор повторно растворенного коллоидного золота. Объемный процент меченного коллоидным золотом осадка в растворе комплекса коллоидного золота составляет 3 %.

(3) Отбирают раствор повторно растворенного коллоидного золота описанной выше стадии (2) и повторно растворяют раствором комплекса коллоидного золота до 40 % по объему с последующим перемешиванием на магнитной мешалке. Однородно перемешанный раствор коллоидного золота заливают на подготовленную адсорбирующую коллоидное золото прокладку в количестве 50 мкл/см², после чего помещают ее в помещение для сушки для высушивания в течение не менее 4 часов, и поддерживают температуру в помещении для сушки в диапазоне 18-28 °C, а относительную влажность — на уровне не более 40 %. Следует убедиться, что воздух проходит свободно, и что поток воздуха не может дуть непосредственно на адсорбирующую коллоидное золото прокладку. Высушенную адсорбирующую коллоидное золото прокладку помещают в пакет из алюминиевой фольги, содержащий осушитель, запечатывают для хранения и маркируют как первую адсорбирующую коллоидное золото прокладку. Примечание: Раствор коллоидного золота заливают, поскольку залитое коллоидное золото можно свободно нарезать, таким образом, легко регулировать интенсивность цвета продукта.

3. Получение второй адсорбирующей коллоидное золото прокладки

(1) С помощью мерного цилиндра отмеряют требуемое количество коллоидного золота, регулируют pH до 6,5-7,0 добавлением раствора 0,2 моль/л карбоната калия с 0,53 % по объему коллоидного золота, перемешивая на магнитной мешалке в течение 15 минут с получением, таким образом, оптимизированного раствора коллоидного золота. Моноклональное антитело к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ метят оптимизированным коллоидным золотом в концентрации 5 мкг/мл, т. е. соответствующее количество моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ разводят дважды дистиллированной водой до концентрации 5 % по объему при тщательном перемешивании, с получением раствора моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ с концентрацией 5 мкг/мл, который добавляют к оптимизированному коллоидному золоту с последующим перемешиванием на магнитной мешалке в течение 30 минут, а затем добавляют 0,5 % по объему стабилизатора, перемешивая в течение 30 минут, после чего центрифугируют, собирают осадок, меченный коллоидным золотом, который снова растворяют раствором комплекса коллоидного золота, после чего перемешивают на магнитной мешалке, пока смесь не станет однородной, и таким образом получают раствор повторно растворенного коллоидного золота. Объемный процент меченного коллоидным золотом осадка в растворе комплекса коллоидного золота составляет 3 %.

(2) Берут раствор повторно растворенного коллоидного золота описанного выше этапа (1) и повторно растворяют раствором комплекса коллоидного золота до 40 % по объему, а затем добавляют свободное β-антитело в соответствии с массовым соотношением моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ и свободному β-антителу 1:10 с последующим перемешиванием на магнитной мешалке. Однородно перемешанный раствор коллоидного золота заливают на подготовленную адсорбирующую коллоидное золото прокладку в количестве 50 мкл/см², после чего помещают на сушку не менее чем на 4 часа, поддерживая температуру в помещении для сушки в диапазоне 18-28 °C, а относительную влажность на уровне не более 40 %. Следует убедиться, что воздух проходит свободно, и что поток воздуха не может дуть непосредственно на адсорбирующую коллоидное золото прокладку. Высушенную адсорбирующую коллоидное золото прокладку помещают в пакет из алюминиевой фольги, содержащий осушитель, запечатывают для хранения и маркируют как вторую адсорбирующую коллоидное золото прокладку. Примечание: Раствор коллоидного золота заливают, поскольку залитое коллоидное золото можно свободно нарезать, таким образом, легко регулировать интенсивность цвета продукта.

4. Сборка и нарезка:

(5) Аттестованную бумажную тест-полоску 1 помещают в левую прорезь аттестованного футляра 4. Сверху располагают оберточную бумагу. А затем аттестованную вторую бумажную тест-полоску 2 помещают в правую прорезь футляра 4. Плотно закрывают корпусом 3 крышки. Надпись на корпусе 3 крышки должна соответствовать тест-полоске.

Пример 7

В примере 7 предложен набор для определения цикла ХГЧ, отличающийся от набора примера 5 тем, что, как показано на Фиг. 5, первая прокладка 12 для нанесения образца и вторая прокладка 22 для нанесения образца не выступают наружу из футляра 4. В корпусе 3 крышки выполнено четыре окошка, два из которых соответствуют прорезям, расположенным на футляре 4 так, что первая детектирующая линия T1, первая линия C1 контроля качества, вторая детектирующая линия T2 и вторая линия C2 контроля качества открыты на корпусе 3 крышки. Два окошка соответствуют первой прокладке 12 для нанесения образца и второй прокладке 22 для нанесения образца так, что первая прокладка 12 для нанесения образца и вторая прокладка 22 для нанесения образца открыты на корпусе 3 крышки. Образец наносят каплями на первую прокладку 12 для нанесения образца и на вторую прокладку 22, используя капельницу.

Пример 8

В примере 8 предложен набор для определения цикла ХГЧ, отличающийся от предложенного в примере 5 или 3 тем, что, как показано на Фиг. 7, футляр 4 имеет форму продолговатой ручки. Первая бумажная тест-полоска 1 и вторая бумажная тест-полоска 2 установлены в футляре 4, первая прокладка 12 для нанесения образца и вторая прокладка 22 для нанесения образца выступают наружу из футляра 4, а в корпусе 3 крышки выполнены два окошка для наблюдения детектирующей линии и линии контроля качества.

Пример 9

В примере 9 предложен набор для определения цикла ХГЧ, отличающийся от предложенного в примере 5, 3 или 8 тем, что, как показано на Фиг. 6, футляр 4 имеет форму продолговатой ручки. Первая бумажная тест-полоска 1 и вторая бумажная тест-полоска 2 установлены в футляре 4. В футляре 4 выполнена выступающая часть, проходящая в осевом направлении до его середины, для отделения первой бумажной тест-полоски 1 от второй бумажной тест-полоски 2, и в футляре 4 на его верхнем конце также выполнена выступающая конструкция для помещения первой прокладки 12 для нанесения образца и второй прокладки 22 для нанесения образца. В корпусе 3 крышки выполнены два окошка для обзора детектирующей линии и линии контроля качества. В корпусе 3 крышки выполнены два ряда параллельных окошек, соответствующих первой прокладке 12 для нанесения образца и второй прокладке 22 для нанесения образца. В каждом ряду находится три окошка. Образец наносят каплями на первую прокладку 12 для нанесения образца и вторую прокладку 22 для нанесения образца, используя капельницу, или первую прокладку 12 для нанесения образца и вторую прокладку 22 для нанесения образца погружают в образец для исследования. С помощью этого набора в форме можно осуществлять нанесение образцов по отдельности; таким образом, первая бумажная тест-полоска 1 и вторая бумажная тест-полоска 2 не взаимодействуют друг с другом.

Пример 10

В примере 10 предложен способ определения срока беременности у человека с использованием тест-полосок набора для определения цикла ХГЧ примера 5. Тест начинают в тот день, когда должна была начаться менструация, но не началась. Если тест начинают заранее, его следует выполнить снова в ожидаемый день менструации. В случае задержки менструации тест следует выполнить снова через 3 дня. В случае нерегулярного менструального цикла перед проведением теста следует рассчитать самый длительный цикл в самом последнем месяце. Если пользователь не знает, когда у нее должен начаться менструальный цикл, тест следует выполнить по меньшей мере через 19 дней после последнего незащищенного полового контакта.

Тест проводят, выполняя следующие конкретные этапы: (1) исследуемый образец, набор и другое оборудование уравновешивают при комнатной температуре; (2) снимают внешнюю упаковку набора, и на наборе помечают исследуемый образец или образец сравнения; (3) прокладку для нанесения образца первой бумажной тест-полоски и прокладку для нанесения образца второй бумажной тест-полоски набора вставляют в образец мочи, как показано на Фиг. 4, при этом первую прокладку 12 для нанесения образца и вторую прокладку 22 для нанесения образца необходимо погрузить в мочу полностью; (4) первую прокладку 12 для нанесения образца и вторую прокладку 22 для нанесения образца вынимают через 3-10 секунд и кладут на ровную поверхность. Результаты интенсивности окрашивания первой детектирующей линии T1 и второй детектирующей линии T2 наблюдают в течение 3-5 минут, поскольку через 5 минут, они будут недействительными.

На основании интенсивности окрашивания первой детектирующей линии T1 и второй детектирующей линии T2 можно рассчитать число недель беременности, а также рассчитать время зачатия. Результаты теста являются следующими: (1) отрицательный (-): проявляется окрашивание только линий C1 и C2 контроля качества, а окрашивание первой детектирующей линии T1 и второй детектирующей линии T2 не проявляется, что указывает на отсутствие беременности; (2) положительный (+): всегда проявляется окрашивание линий C1 и C2 контроля качества; цвета первой детектирующей линии T1 и второй детектирующей линии T2 показаны в следующей таблице 1:

Таблица 1: Интерпретация результатов теста

Результаты	Срок беременности	Срок беременности, определенный врачом (28-дневный менструальный цикл)
Проявляется окрашивание первой детектирующей линии T1, окрашивание второй детектирующей линии T2 не проявляется	Результат теста «беременна» (+), и срок беременности составляет около 1-2 недель	3-4 недели
На второй детектирующей линии T2 проявляется окрашивание светлее, чем на первой детектирующей линии T1	Результат теста «беременна» (+), и срок беременности составляет около 2-3 недель	4-5 недель
На второй детектирующей линии T2 проявляется окрашивание светлее или близкое к интенсивности окрашивания на первой детектирующей линии T1	Результат теста «беременна» (+), и срок беременности составляет более 3 недель	более 5 недель

(3) Тест недействителен: если ни на одной из областей T идентификации (первой детектирующей линии T1 и второй детектирующей линии T2) и контрольной области C (ни на первой линии C1 контроля качества, ни на второй линии C2 контроля качества) не видна фиолетовая линия, либо на контрольной области C (линия контроля качества) бумажной тест-полоски не видна фиолетовая линия, что указывает на непригодность бумажной тест-полоски.

(4) На основании предполагаемого срока беременности можно рассчитать, когда произошло зачатие. Тем не менее врач рассчитывает срок беременности от первого дня последнего менструального цикла.

В настоящей заявке для качественного определения хорионического гонадотропина человека в моче, указывающего на срок беременности, использованы принципы методов двойного сэндвича антител и иммунохроматографии; при этом этап выявления достаточно прост, а результаты можно наблюдать в течение 3-5 минут, и обычные пользователи могут проводить тест самостоятельно, а результате теста более точны. В соответствии с настоящим изобретением интенсивность окрашивания первой детектирующей линии и второй детектирующей линии можно использовать для расчета числа недель беременности и для расчета срока беременности.

Экспериментальный пример 1

Из одной и той же серии образцов заранее проводят случайный отбор проб, при этом минимальный объем образца соответствует не менее чем 3-кратному объему, требующемуся для тестирования.

После отбора проб исследуемый образец помещают в «желтую зону» для проведения теста. Если тестирование может быть выполнено именно в этот день, он будет протестирован именно в этот день. Если тест невозможно провести именно в этот день, тест должен быть завершен на следующий день. Бумажные полоски, прошедшие испытание, можно временно поместить в зону квалифицированной продукции в качестве резервного образца, а затем некоторое количество изделий отбирают из каждой производственной линии в качестве резервного образца продукции в зависимости от выхода производства и потребности в резервных образцах.

1. Требуются следующие реактивы:

Раствор образца 0 мМЕ/мл: содержащий белок фосфатный буферный раствор (ФСБ) представляет собой раствор образца, содержащий 0 мМЕ/мл ХГЧ, где белок в содержащем белок фосфатном буферном растворе представляет собой бычий сывороточный альбумин, концентрация которого составляет 0,5 % -1 % по массе фосфатного буферного раствора.

Раствор образца хорионического гонадотропина человека (ХГЧ) 50 мМЕ/мл, 25 мМЕ/мл, 12,5 мМЕ/мл, приготовленный из стандартного образца хорионического гонадотропина человека (ХГЧ) и содержащего белок фосфатного буферного раствора (0,01 М ФСБ) до достижения надлежащей концентрации, соответственно.

Раствор образца хорионического гонадотропина человека (ХГЧ) 400 мМЕ/мл, 200 мМЕ/мл, 100 мМЕ/мл, приготовленный из стандартного образца хорионического гонадотропина человека (ХГЧ) и содержащего белок фосфатного буферного раствора (ФСБ) до достижения надлежащей концентрации, соответственно.

Лютеинизирующий гормон человека (ЛГЧ) 500 мМЕ/мл: После перевода стандартного образца ЛГЧ в раствор в содержащем белок фосфатном буферном растворе (ФСБ) для приготовления раствора ЛГЧ A с концентрацией 500 мМЕ/мл используют раствор образца ХГЧ с концентрацией 0 мМЕ/мл; для приготовления раствора ЛГЧ B с концентрацией 500 мМЕ/мл используют раствор образца хорионического гонадотропина человека с концентрацией 25 мМЕ/мл; для приготовления раствора ЛГЧ C с концентрацией 500 мМЕ/мл используют раствор образца хорионического гонадотропина человека с концентрацией 200 мМЕ/мл.

Фолликулостимулирующий гормон человека (ФСГЧ) 1000 мМЕ/мл: После перевода стандартного образца ФСГЧ в раствор в содержащем белок фосфатном буферном растворе (ФСБ) для приготовления раствора ФСГЧ с концентрацией 1000 мМЕ/мл используют раствор образца ХГЧ с концентрацией 0 мМЕ/мл; для приготовления раствора ФСГЧ B с концентрацией 1000 мМЕ/мл используют раствор образца хорионического гонадотропина человека с концентрацией 25 мМЕ/мл; для приготовления раствора ФСГЧ C с концентрацией 1000 мМЕ/мл используют раствор образца хорионического гонадотропина человека.

Тиреотропный гормон человека (ТТГЧ) 1000 мкМЕ/мл: После перевода стандартного образца ТТГЧ в раствор в содержащем белок фосфатном буферном растворе (ФСБ) для приготовления раствора ТТГЧ A с концентрацией 1000 мкМЕ/мл используют раствор образца ХГЧ с концентрацией 0 мМЕ/мл; для приготовления раствора ТТГЧ B с концентрацией 1000 мкМЕ/мл используют раствор образца хорионического гонадотропина человека с концентрацией 25 мМЕ/мл; для приготовления раствора ТТГЧ C с концентрацией 1000 мкМЕ/мл используют раствор образца хорионического гонадотропина человека.

2. Физические свойства:

Испытание свойств внешнего вида: Бумажную тест-полоску вынимают и проводят ее визуальный осмотр. Бумажная полоска должна быть чистой и целой, не иметь неровностей, повреждений и загрязнений и должна быть прочно прикреплена к материалу. Если устройство представляет собой тест в форме ручки, карточки или карандаша, также необходимо проверить, правильно ли оно собрано.

Ширина пленки полоски: три человека вынимали бумажные тест-полоски и измеряли ширину пленки на полосках с помощью линейки.

Хроматографический статус: нормальный, на коллоидном золоте отсутствует слой воды и фон сохраняет исходную чистоту в течение 3-5 минут.

3. Минимальное количество, определяемое тестом: готовят стандартные растворы государственного стандартного образца хорионического гонадотропина человека с концентрациями 12,5 мМЕ/мл, 25 мМЕ/мл и 50 мМЕ/мл. Проводят экстракцию и испытание образцов для трех человек. Результаты, наблюдаемые в течение 3-5 минут, показывают, что минимальное определяемое количество для первой детектирующей линии составляет 25 мМЕ/мл. Кроме того, готовят стандартные растворы государственного стандартного образца хорионического гонадотропина человека с концентрациями 100 мМЕ/мл, 200 мМЕ/мл и 400 мМЕ/мл. Экстракцию и испытание образцов проводят для трех человек. Результаты, наблюдаемые в течение 3-5 минут, показывают, что минимальное определяемое количество для второй детектирующей линии составляет 100 мМЕ/мл.

4. Специфичность:

Специфичность отрицательного результата: Испытание раствора 500 мМЕ/мл ЛГЧ A, раствора 1000 мМЕ/мл ФСГЧ A, раствора 1000 мкМЕ/мл ТТГЧ A проводят по 3 раза, соответственно. Если для каждого раствора все три раза дали отрицательные результаты на обеих, первой и второй, детектирующих линиях, можно считать, что результат для данного раствора является отрицательным.

Специфичность положительного результата: Испытание раствора 500 мМЕ/мл ЛГЧ B, раствора 1000 мМЕ/мл ФСГЧ B, раствора 1000 мкМЕ/мл ТТГЧ B проводят по 3 раза, соответственно. Результаты для каждого раствора три раза дают положительный результат для первой детектирующей линии, а на второй детектирующей линии окрашивание не проявляется, то есть результат является отрицательным. Испытание раствора ЛГЧ C 500 мМЕ/мл, ФСГЧ C 1000 мМЕ/мл, ТТГЧ C 1000 мкМЕ/мл проводят по 3 раза, соответственно. Результаты для каждого раствора три раза показывают положительный результат для первой и второй детектирующей линии, и окрашивание на второй детектирующей линии значительно светлее, чем на первой детектирующей линии.

5. Воспроизводимость:

Случайным образом отбирают 10 тест-полосок из одной серии и измеряют с их помощью стандартный раствор 25 мМЕ/мл хорионического гонадотропина человека. Все 10 раз показан положительный результат всех первых детектирующих линий и однородная интенсивность их окрашивания, а окрашивание вторых детектирующих линий не проявлялось, и потому результат отрицательный. Случайным образом отбирают 10 тест-полосок из одной серии и измеряют с их помощью стандартный раствор 200 мМЕ/мл хорионического гонадотропина человека. Результаты 10 раз показывают положительный результат для первой и второй детектирующей линии, и окрашивание на второй детектирующей линии значительно светлее, чем на первой детектирующей линии.

6. Стабильность:

Бумажные тест-полоски помещают на хранение при температуре 37 °C на 21 день или проводят испытания изделия через месяц после даты истечения срока годности, в соответствии с требованиями пунктов 2, 3, 4 и 5. Результаты должны соответствовать требованиям.

7. Различие между сериями:

Испытание 3 серий бумажных тест-полосок со стандартным раствором 25 мМЕ/мл хорионического гонадотропина человека проводят 10 раз. Показан положительный результат всех первых детектирующих линий и проявление однородной интенсивности их окрашивания, а окрашивание вторых детектирующих линий не проявляется, и потому результат отрицательный. Испытание 3 серий бумажных тест-полосок со стандартным раствором 200 мМЕ/мл хорионического гонадотропина человека проводят 10 раз. Результаты показывают положительный результат для первой и второй детектирующей линии, и окрашивание на второй детектирующей линии значительно светлее, чем на первой детектирующей линии.

8. Сверхдозовый эффект: при превышении концентрации ХГЧ 50 000 мМЕ/мл может возникать сверхдозовый эффект.

Тест-полоску для определения цикла хорионического гонадотропина человека используют для качественного определения хорионического гонадотропина человека (ХГЧ) в моче беременных женщин, позволяющего сделать предположение о сроке беременности.

Хорионический гонадотропин человека (ХГЧ) представляет собой гликопротеиновый гормон, секретируемый плацентарными клетками-трофобластами во время беременности. Он состоит из двух различных субъединиц α и β, соединенных нековалентной связью. В процессе выработки, секреции и метаболизма гормонов молекулы ХГЧ будут претерпевать различные изменения, такие как разъединение и диссоциация, поэтому в крови и в моче они существуют в различных молекулярных формах. ХГЧ является единственным плацентарным гормоном, концентрация которого не возрастает по мере увеличения массы плаценты. После 1 недели беременности концентрация ХГЧ в крови составляет 5-50 ммМЕ/мл, а в моче более 25 мМЕ/мл, достигает максимума в районе 8-10 недель и быстро снижается в течение следующих 1-2 недель, а затем поддерживается до родов на 1/5-1/10 максимального уровня. В настоящей заявке для качественного определения хорионического гонадотропина человека в моче, указывающего на срок беременности, использованы принципы методов двойного сэндвича антител и иммунохроматографии, при этом этап выявления достаточно прост, а результаты можно наблюдать в течение 3-5 минут, и обычные пользователи могут проводить тест самостоятельно, а результаты теста более точны. В соответствии с настоящим изобретением интенсивность окрашивания первой детектирующей линии и второй детектирующей линии можно использовать для расчета числа недель беременности и для расчета срока беременности.

Очевидно, что описанные выше воплощения изобретения являются исключительно примерами для ясности иллюстрации и не предназначены для ограничения вариантов воплощений изобретения. В свете приведенного выше описания специалистами в данной области техники могут быть выполнены другие изменения и модификации в различных формах. В настоящем документе представлены, конечно, не все воплощения изобретения, но в этом и нет необходимости. Вытекающие из них очевидные изменения или модификации все же находятся в объеме защиты настоящей заявки.

1. Набор для определения цикла ХГЧ, характеризующийся тем, что он содержит бумажный тест для определения цикла ХГЧ, футляр и корпус крышки, при этом

бумажный тест для определения цикла ХГЧ содержит первую бумажную тест-полоску и вторую бумажную тест-полоску,

где первая бумажная тест-полоска и вторая бумажная тест-полоска соответственно содержат:

подложку и

прокладку для нанесения образца, адсорбирующую коллоидное золото прокладку, несущую антитело пленку и адсорбирующую воду прокладку, последовательно приклеенные к подложке;

причем прокладка для нанесения образца, адсорбирующая коллоидное золото прокладка, несущая антитело пленка и абсорбирующая воду прокладка только контактируют с соседней прокладкой и лишь частично наложены на нее; несущая антитело пленка имеет линию контроля качества и детектирующую линию, расположенные с интервалом, при этом линия контроля качества расположена близко к абсорбирующей воду прокладке, а детектирующая линия расположена близко к адсорбирующей коллоидное золото прокладке;

конъюгат моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека (β-ХГЧ) с коллоидным золотом адсорбирован в адсорбирующей коллоидное золото прокладке первой бумажной тест-полоски, а конъюгат моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека (β-ХГЧ) с коллоидным золотом и свободное β-антитело адсорбированы в адсорбирующей коллоидное золото прокладке второй бумажной тест-полоски;

на детектирующую линию нанесено моноклональное антитело к хорионическому гонадотропину человека α-ХГЧ; на линию контроля качества нанесено поликлональное антимышиное IgG антитело;

детектирующая линия и линия контроля качества расположены параллельно с интервалом не менее 0,3 см, но менее 0,5 см, или более 0,5 см, но не более 0,7 см;

концентрация моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека α-ХГЧ, используемого для нанесения на детектирующую линию, составляет не менее 1,1 мг/мл, но менее 1,3 мг/мл, или более 1,3 мг/мл, но не более 1,5 мг/мл; концентрация поликлонального антимышиного IgG антитела, используемого для нанесения на линию контроля качества, составляет не менее 1,5 мг/мл, но менее 2 мг/мл, или более 2 мг/мл, но не более 2,5 мг/мл;

на футляре параллельно расположены две прорези, используемые для размещения первой бумажной тест-полоски и второй бумажной тест-полоски соответственно;

корпус крышки снабжен двумя параллельными окошками и свободно охватывает футляр, эти окошки позволяют наблюдать детектирующую линию и линию контроля качества первой бумажной тест-полоски и второй бумажной тест-полоски.

2. Набор для определения цикла ХГЧ по п. 1, характеризующийся тем, что несущая антитело пленка представляет собой пленку из нитроцеллюлозы, имеющей размер пор 3-10 мкм.

3. Набор для определения цикла ХГЧ по п. 1 или 2, характеризующийся тем, что каждая из прокладки для нанесения образца и адсорбирующей воду прокладки обеспечена защитной пленкой.

4. Способ получения набора для определения цикла ХГЧ по любому одному из пп. 1-3, характеризующийся тем, что набор для определения цикла ХГЧ содержит бумажный тест, футляр и корпус крышки, а изготовление бумажного теста включает этапы:

(1): нанесение на несущую антитело пленку детектирующей линии и линии контроля качества, расположенных параллельно с интервалом не менее 0,3 см, но менее 0,5 см, или более 0,5 см, но не более 0,7 см, и высушивание при постоянной температуре 4-35°C, при этом детектирующая линия покрыта моноклональным антителом к хорионическому гонадотропину человека α-ХГЧ; линия контроля качества покрыта поликлональным антимышиным IgG антителом; концентрация моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека α-ХГЧ, используемого для нанесения на детектирующую линию, составляет не менее 1,1 мг/мл, но менее 1,3 мг/мл, или более 1,3 мг/мл, но не более 1,5 мг/мл; концентрация поликлонального антимышиного IgG антитела, используемого для нанесения на линию контроля качества, составляет не менее 1,5 мг/мл, но менее 2 мг/мл, или более 2 мг/мл, но не более 2,5 мг/мл;

(2): погружение несущей антитело пленки, полученной на этапе (1) , в фосфатно-солевой буферный раствор с последующим погружением в раствор для блокирующей обработки и высушивание при температуре 18-28°C и относительной влажности не более 40%; раствор для блокирующей обработки содержит не менее 0.08 моль, но менее 0,1 моль или более 0,1 моль, но не более 0,12 моль буферного раствора, не менее 0,3 масс. %, но менее 0,5 масс. % или более 0,5 масс. %, но не более 0,7 масс. % сахара, не менее 0,8 масс. %, но менее 1 масс. % или более 1 масс. %, но не более 1,2 масс. % блокирующего белка и не менее 0,03 масс. %, но менее 0,05 масс. % или более 0,05 масс. %, но не более 0,08 масс. % консерванта;

(3): приготовление раствора комплекса коллоидного золота и регулирование pH до 6,5-7,0, добавление моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ с последующим добавлением стабилизатора при тщательном перемешивании, центрифугирование и сбор осадка, использование раствора комплекса коллоидного золота для растворения осадка, заливка на адсорбирующую коллоидное золото прокладку на первой бумажной тест-полоске и последующее высушивание, запаивание и хранение;

(4): приготовление раствора комплекса коллоидного золота и регулирование pH до 6,5-7,0, добавление моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ с последующим добавлением стабилизатора при тщательном перемешивании, центрифугирование и сбор осадка, использование раствора комплекса коллоидного золота для восстановления осадка, а затем добавление свободного β-антитела при тщательном перемешивании, заливка на адсорбирующую коллоидное золото прокладку на второй бумажной тест-полоске и последующее высушивание, запаивание и хранение;

(5): последовательное приклеивание прокладки для нанесения образца, адсорбирующей коллоидное золото прокладки первой бумажной тест-полоски, несущей антитело пленки и адсорбирующей воду прокладки вдоль направления длины с получением первой бумажной тест-полоски; и последовательное приклеивание адсорбирующей коллоидное золото прокладки второй бумажной тест-полоски, несущей антитело пленки и адсорбирующей воду прокладки вдоль направления длины с получением второй бумажной тест-полоски;

на футляре параллельно располагают две прорези, используемые для размещения первой бумажной тест-полоски и второй бумажной тест-полоски соответственно;

корпус крышки снабжают двумя параллельными окошками и он свободно охватывает футляр, эти окошки позволяют наблюдать детектирующую линию и линию контроля качества первой бумажной тест-полоски и второй бумажной тест-полоски.

5. Способ по п. 4, характеризующийся тем, что буферный раствор представляет собой фосфатный буферный раствор, сахар представляет собой сахарозу или трегалозу, консервант представляет собой NaN₃ или тимеросал, а блокирующий белок представляет собой казеин или бычий сывороточный альбумин.

6. Способ по п. 4 или 5, характеризующийся тем, что концентрация моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ на этапе (3) составляет 5 мкг/мл.

7. Способ по любому одному из пп. 4-6, характеризующийся тем, что концентрация моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ на стадии (4) составляет 5 мкг/мл, а массовое отношение свободного β-антитела к моноклональному антителу к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ составляет 10:1.

8. Способ по любому одному из пп. 4-7, характеризующийся тем, что конъюгат моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ с коллоидным золотом заливают на адсорбирующую коллоидное золото прокладку первой бумажной тест-полоски, где заливаемое количество составляет 50 мкл/см²;

конъюгат моноклонального антитела к хорионическому гонадотропину человека β-ХГЧ с коллоидным золотом и свободное β антитело заливают на адсорбирующую коллоидное золото прокладку второй бумажной тест-полоски, где заливаемое количество составляет 50 мкл/см².

9. Применение набора для определения цикла ХГЧ по любому одному из пп. 1-3 или набора для определения цикла ХГЧ, полученного способом по любому одному из пп. 4-8, в определении срока беременности у человека.

10. Способ определения срока беременности у человека с помощью набора для определения цикла ХГЧ по любому одному из пп. 1-3, характеризующийся тем, что он включает стадии:

a) взятие мочи у исследуемого лица, затем полное смачивание в моче прокладок для нанесения образца первой бумажной тест-полоски и второй бумажной тест-полоски в течение 3-10 секунд, а затем изъятие прокладок для нанесения образца и расположение их на плоской поверхности, наблюдение результата в течение 3-5 минут, причем после 5 минут результат недействителен;

b) наблюдение интенсивности цвета детектирующей линии первой бумажной тест-полоски (T1) и детектирующей линии второй бумажной тест-полоски (Т2) и определение того, окрашены ли линия контроля качества первой бумажной тест-полоски (С1) и линия контроля качества второй бумажной тест-полоски (С2):

если на линии контроля качества первой бумажной тест-полоски (С1) и линии контроля качества второй бумажной тест-полоски (C2) проявляется окрашивание, а на детектирующей линии первой бумажной тест-полоски (Т1) и детектирующей линии второй бумажной тест-полоски (T2) окрашивание не проявляется, это указывает на то, что исследуемое лицо не является беременным;

если на линии контроля качества первой бумажной тест-полоски (С1) и линии контроля качества второй бумажной тест-полоски (C2) проявляется окрашивание, и на детектирующей линии первой бумажной тест-полоски (T1) проявляется окрашивание, а на детектирующей линии второй бумажной тест-полоски (T2) окрашивание не проявляется, это указывает на то, что исследуемое лицо является беременным и срок беременности - 1-2 недели;

если на линии контроля качества первой бумажной тест-полоски (C1) и линии контроля качества второй бумажной тест-полоски (C2) проявляется окрашивание, на детектирующей линии первой бумажной тест-полоски (T1) проявляется окрашивание и на детектирующей линии второй бумажной тест-полоски (T2) проявляется более светлое окрашивание, чем на детектирующей линии первой бумажной тест-полоски (T1), это указывает на то, что исследуемое лицо является беременным со сроком беременности 2-3 недели;

если на линии контроля качества первой бумажной тест-полоски (C1) и линии контроля качества второй бумажной тест-полоски (C2) проявляется окрашивание, на детектирующей линии первой бумажной тест-полоски (T1) проявляется окрашивание, на детектирующей линии второй бумажной тест-полоски (T2) проявляется более светлое или близкое по цвету к линии первой бумажной тест-полоски (T1) окрашивание, это указывает на то, что исследуемое лицо является беременным и срок беременности превышает 3 недели; и

если ни на линии контроля качества первой бумажной тест-полоски (C1) и линии контроля качества второй бумажной тест-полоски (C2), ни на детектирующей линии первой бумажной тест-полоски (Т1) и детектирующей линии второй бумажной тест-полоски (T2) не видно фиолетового окрашивания или ни на одной из линии контроля качества первой бумажной тест-полоски (C1) и линии контроля качества второй бумажной тест-полоски (C2) не видно фиолетового окрашивания, это указывает на то, что бумажная тест-полоска для определения цикла ХГЧ непригодна.

Группа изобретений относится к медицине и касается электронного детектирующего устройства в форме ручки, содержащего корпус, бумажную тест-полоску и управляющую схему, характеризующегося тем, что бумажная тест-полоска используется для измерения концентрации хорионического гонадотропина человека в моче, и бумажная тест-полоска содержит первую бумажную тест-полоску и вторую бумажную тест-полоску, где минимальное количество хорионического гонадотропина человека, определяемое первой бумажной тест-полоской, меньше минимального количества хорионического гонадотропина человека, определяемого второй бумажной тест-полоской; при этом минимальное количество хорионического гонадотропина человека, определяемое первой бумажной тест-полоской, не превышает 25 мМЕ/мл, а минимальное количество хорионического гонадотропина человека, определяемое второй бумажной тест-полоской, не превышает 100 мМЕ/мл, и управляющая схема используется для получения результата определения количества недель на раннем сроке беременности в зависимости от хромогенной реакции первой бумажной тест-полоски и хромогенной реакции второй бумажной тест-полоски и вывода результата определения на жидкокристаллический дисплей (ЖКД), подключенный к управляющей схеме.

Способ прогнозирования риска развития псориаза 2 типа у женщин в постменопаузе // 2684287

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования риска развития псориаза 2 типа у женщин в постменопаузе, характеризующийся тем, что в сыворотке крови определяют уровень фолликулостимулирующего гормона методом иммунофлуоресценции и рассчитывают коэффициент прогноза риска развития псориаза 2 типа по формуле К=у×100%, где К - коэффициент прогноза риска развития псориаза 2 типа,у=ехр(-7,5+(0,17)*ФСГ)/(1+ехр(-7,5+(0,17)*ФСГ)), где у - коэффициент множественной регрессии, ФСГ - концентрация фолликулостимулирующего гормона в сыворотке крови в мМе/мл, при этом если K≥60%, то прогноз риска развития псориаза 2 типа у женщин в постменопаузе высокий, а если K<60%, то прогноз риска развития псориаза 2 типа низкий.

Усовершенствованное устройство и способ тестирования на беременность // 2674266

Группа изобретений относится к устройству для тестирования на беременность и способу выполнения тестирования на беременность. Цифровое тестирующее устройство для обнаружения беременности содержит аналитические средства для измерения количества hCG, FSH и метаболита прогестерона в образце, взятом у субъекта; устройство отображения результата анализа пользователю; компьютеризованное средство управления, запрограммированное с верхним и нижним пороговыми значениями для hCG, с по меньшей мере одним пороговым значением для FSH и/или с по меньшей мере одним пороговым значением метаболита прогестерона и с алгоритмом для интерпретации результатов анализа.

Способ дифференцированного органосохраняющего лечения прогрессирующей трубной беременности в интерстициальном отделе маточной трубы в зависимости от данных комплексного ультразвукового исследования и уровня хорионического гонадотропина человека в плазме пациентки (варианты) // 2643108

Группа изобретений относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использована для дифференцированного органосохраняющего лечения беременности в интерстициальном отделе трубы.

Способ прогнозирования угрозы невынашивания при гриппе a(h3n2) у женщин в первом триместре беременности // 2620567

Изобретение относится к медицине и касается способа прогнозирования угрозы невынашивания при гриппе A(H3N2) у женщин в первом триместре беременности. Сущность способа заключается в том, что у женщин в первом триместре гестации при гриппе A(H3N2) в период разгара заболевания в первой сыворотке крови определяют величину титра противовирусных антител (А), оценивают уровень TNF-α (пг/мл) (В).

Способ прогнозирования прерывания беременности в первом триместре // 2522244

Изобретение относится к области медицины, а именно, к лабораторной диагностике, и касается прогнозирования прерывания беременности в первом триместре. Сущность способа: в сыворотке крови в ранние сроки гестации (до 13 недель) определяют содержание β-субъединицы хорионического гонадотропина (β-ХГЧ) и растворимого рецептора васкуло-эндотелиального фактора роста (sVEGFR-1), сочетание которых обладает высокой прогностической значимостью для оценки риска ранних репродуктивных потерь.

Способ прогнозирования многоплодной беременности при экстракорпоральном оплодотворении // 2363956

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования многоплодной беременности при экстракорпоральном оплодотворении (ЭКО).

Устройство для определения анализируемого компонента в жидкой пробе // 2205693

Изобретение относится к определению присутствующего в жидкой пробе анализируемого компонента в виде химического, биохимического или биологического комплекса. .

Способ диагностики гиперсекреции фоллитропина и лютропина // 2177620

Изобретение относится к медицине, биологии, физиологии, генетике, лабораторной диагностике. .

Иммунометрический способ определения хорионического гонадотропина человека // 2062473