Лизобактин для применения для лечения коровьего мастита

Изобретение может быть использовано в фармацевтике и относится к применению лизобактина для лечения бактериального коровьего мастита. Лизобактин вводят интрамаммарно в дозе от 25 до 1000 мг на четверть вымени. Также изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения бактериального коровьего мастита, составленной для интрамаммарного введения в коровьи молочные железы, содержащей лизобактин и фармацевтически приемлемый эксципиент. Заявленное интрамаммарное применение лизобактина в дозе от 25 до 1000 мг на четверть вымени эффективно и безопасно в молочной среде вымени, включая лактирующих коров, и приводит к быстрому и длительному эффекту. 2 н. и 6 з.п. ф-лы, 5 ил., 8 пр.

 

Настоящее изобретение относится к лизобактину для применения для лечения коровьего мастита.

Мастит является воспалением ткани вымени и продолжает оставаться наиболее частым и дорогостоящим заболеванием молочного скота. Финансовые потери от мастита происходят как на преклинической, так и на клинической стадиях заболевания. Потери, вызванные преклиническим маститом, хорошо документированы. Каждое увеличение вдвое количества соматических клеток (SCC) выше 50000 клеток/мл приводит к потере 0,4 кг и 0,6 кг молока в день у коров первой лактации и более старых коров соответственно (Hortet Р, Н. Seegers. 1998. Calculated milk production losses associated with elevated somatic cell counts in dairy cows: review and critical discussion. Vet Res. 29(6):497-510). Убытки, вызванные клиническим маститом, включают забракованное молоко, временные сокращения продуктивности молока и преждевременное отбраковывание. Лечение мастита должно быть нацелено на причинные бактерии, когда это возможно.

S в журнале Irish Veterinary Journal, Volume 62 Supplement 40-44 2009 раскрывает следующие рекомендации по противомикробному лечению клинического мастита, вызванного различными патогенами:

Применяемой в недавнее время фармацевтической композицией для лечения мастита у молочных коров является Ubrolexin®, антибиотик широкого спектра действия против как грамположительных, так и грамотрицательных бактерий, вызывающих мастит. Ubrolexin® представляет собой комбинацию цефалексина и канамицина и показана для лечения клинического мастита, вызванного Staphylococcus aureus, Streptococcus dysgalacticae, Streptococcus uberis и Escherichia coli. Способом действия цефалексина является необратимое связывание с D-аланинтранспептидазой, которое нарушает синтез клеточной стенки бактерий. Канамицин действует путем присоединения к 30S субъединице связанных с мембраной рибосом и ингибирует синтез бактериальных белков.

Постоянно возникающая проблема с антибиотиками в уровне техники заключается в том, что патогены могут развивать резистентность к лекарственным средствам, применяемым при лечении вызываемых ими заболеваний. Поэтому постоянно ищут новые активные фармацевтические ингредиенты.

Лизобактин был впервые выделен из ферментативного бульона Lysobacter sp. SC-14076 (АТСС 53042). Независимо, ученые обнаружили катанозин А и В из почвенной бактерии, относящейся к роду Cytophaga (штамм-продуцент PBJ-5356). Катанозин В оказался идентичным лизобактину. Биосинтез бактериальной клеточной стенки является основной целью этих антибиотиков; однако механизм действия отличается от механизма действия ванкомицина. Лизобактины представляют собой циклические депсипитиды, содержащие несколько непротеиногенных D- и L-аминокислот.

Природный продукт лизобактин и некоторые производные описаны как имеющие противобактериальную активность в патенте US 4,754,018. Выделение и противобактериальная активность лизобактина также описаны в ЕР 196 042 А1 и JP 01-132600.

Противобактериальная активность лизобактина и катанозина А, кроме того, описана в , J. et al., J. Antibiot. (1988) 41:1740-1744, Bonner, D.P. et al., J. Antibiot. (1988) 41:1745-1751, Shoji, J. et al., J. Antibiot. (1988) 41:713-718 и Tymiak, A.A. et al., J. Org. Chem. (1989) 54:1149-1157.

В отличие от способов действия цефалексина и канамицина, лизобактин, как предполагают, непосредственно взаимодействует с липидом II предшественником клеточной стенки бактерий (Breukink Е. and de Kruijff В., Nat. Rev. Drug Disc. (2006) 5:321-323).

Производные лизобактина являются объектом заявок на патент WO 2004/099239 A1, WO 2006/042653 A1, WO 2006/042654 A1, WO 2006/042655 A1, WO 2006/048139 A1, WO 2006/048140 A1, WO 2006/048156 A1, WO 2007/085456 А1, WO 2007/118691 А1 и WO 2007/118693 А1.

Ни в одном из документов предшествующего уровня техники не рассматривается лечение коровьего мастита с использованием лизобактина.

Существует потребность в данной области техники в терапии коровьего мастита, которая не страдает от недостатка, связанного с резистентностью бактерий к активному ингредиенту. Настоящее изобретение направлено на предоставление агента для такого лечения.

Соответственно, настоящее изобретение относится к лизобактину для применения для лечения коровьего мастита.

В контексте настоящего изобретения термин "лизобактин" относится к веществу с номером CAS 118374-47-3 и его физиологически приемлемым солям. Лизобактин имеет следующую структуру:

К коровьему маститу относится в частности мастит у молочного скота.

Физиологически приемлемые соли лизобактина включают кислотно-аддитивные соли минеральных кислот, карбоновых кислот и сульфоновых кислот, например, соли соляной кислоты, бромистоводородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, метансульфоновой кислоты, этансульфоновой кислоты, толуолсульфоновой кислоты, бензолсульфоновой кислоты, нафталиндисульфоновой кислоты, уксусной кислоты, трифторуксусной кислоты, пропионовой кислоты, молочной кислоты, винной кислоты, яблочной кислоты, лимонной кислоты, фумаровой кислоты, малеиновой кислоты и бензойной кислоты.

Физиологически приемлемые соли лизобактина также включают соли обычных оснований, такие как, например и предпочтительно, соли щелочных металлов (например, соли натрия и калия), соли щелочноземельных металлов (например, соли кальция и магния) и соли аммония, полученные из аммиака или органических аминов, имеющих от 1 до 16 атомов углерода, таких как, в качестве примера и предпочтительно этиламина, диэтиламина, триэтиламина, этилдиизопропиламина, моноэтаноламина, диэтаноламина, триэтаноламина, дициклогексиламина, диметиламиноэтанола, прокаина, дибензиламина, N-метилморфолина, аргинина, лизина, этилендиамина и N-метилпиперидина.

Лизобактин может действовать системно и/или локально. С этой целью его можно вводить подходящим способом, таким как, например, пероральный, парентеральный, легочный, назальный, сублингвальный, лингвальный, буккальный, ректальный, интрааурикулярный, дермальный или трансдермальный путь или в виде имплантата или стента.

Лизобактин может вводиться в формах введения, подходящих для этих путей введения.

Подходящими для перорального введения являются формы введения, которые действуют в соответствии с предшествующим уровнем техники и доставляют лизобактин быстро и/или модифицирированным образом, и которые содержат лизобактин в кристаллической и/или аморфизированной и/или растворенной форме, такие как, например, таблетки (без покрытия или покрытые таблетки, например, имеющие энтеросолюбильные покрытия или покрытия, которые нерастворимы или растворяются с задержкой и контролируют высвобождение лизобактин), таблетки, которые быстро распадаются во рту, или пленки/пластины, пленки/лиофилизаты, капсулы (например, твердые или мягкие желатиновые капсулы), таблетки с сахарным покрытием, гранулы, пеллеты, порошки, эмульсии, суспензии, аэрозоли или растворы.

Парентеральное введение может происходить с предотвращением стадии абсорбции (например, интрамаммарной, внутривенной, внутриартериальной, внутрисердечной, интраспинальной или интралюмбарной) или с включением абсорбции (например, внутримышечной, подкожной, внутрикожной, чрескожной или внутрибрюшинной). Формы введения, подходящие для парентерального введения, включают, среди прочего, препараты для инъекций и инфузии в виде растворов, суспензий, эмульсий, лиофилизатов или стерильных порошков.

Подходящими для других путей введения являются, например, фармацевтические формы для водных суспензий (лосьоны, встряхиваемые смеси), липофильные суспензии, мази, кремы, трансдермальные терапевтические системы (такие как, например, пластыри), молоко, пасты, пены, опудривающие порошки, импланты или стенты.

Лизобактин может быть преобразован в указанные формы введения. Это может происходить по существу известным способом путем смешивания с инертными, нетоксичными, фармацевтически приемлемыми эксципиентами. Эти эксципиенты включают, среди прочего, носители (например, микрокристаллическую целлюлозу, лактозу, маннит), растворители (например, жидкие полиэтиленгликоли), эмульгаторы и диспергирующие средства или смачивающие агенты (например, додецилсульфат натрия, полиоксисорбитан олеат), связующие вещества (например, поливинилпирролидон), синтетические и природные полимеры (например, альбумин), стабилизаторы (например, антиоксиданты, такие как, например, аскорбиновая кислота), красители (например, неорганические пигменты, такие как, например, оксиды железа) и маскирующие ароматизаторы и/или ароматные вещества.

Настоящее изобретение далее описано со ссылкой на следующие объекты настоящего изобретения и варианты выполнения настоящего изобретения. Их можно свободно комбинировать, если из контекста ясно не следует иное.

Один вариант выполнения настоящего изобретения касается лизобактина для применения для лечения коровьего мастита, в котором лизобактин вводят интрамаммарно.

Другой вариант выполнения настоящего изобретения касается лизобактина для применения для лечения коровьего мастита, где коровьим маститом является клинически выраженный коровий мастит.

Другой вариант выполнения настоящего изобретения касается лизобактина для применения для лечения коровьего мастита, где коровьим маститом является преклиничский коровий мастит.

Другой вариант выполнения настоящего изобретения касается лизобактина для применения для лечения коровьего мастита, в котором лизобактин обеспечивают при дозе от 25 до 1000 мг на четверть вымени, предпочтительно при дозе от 50 до 500 мг на четверть вымени и более предпочтительно при дозе от 100 до 300 мг на четверть вымени.

Тем не менее, при необходимости может потребоваться отклонение от указанных количеств; в частности, в зависимости от массы тела, пути введения, индивидуального ответа на активный ингредиент, природы препарата и времени или промежутка времени, в течение которого происходит введение. Таким образом, в некоторых случаях может быть достаточным количество меньшее чем вышеуказанное минимальное количество, тогда как в других случаях вышеуказанный верхний предел должен быть превышен. В случае введения более больших количеств целесообразно разделить их на несколько отдельных доз в течение дня.

Другой вариант выполнения настоящего изобретения касается лизобактина для применения для лечения коровьего мастита, где коровий мастит вызван бактериями стафилококки, бактериями стрептококки, бактериями Trueperella и/или бактериями Corynebacterium. В частности, коровий мастит может быть вызван Staphylococcus aureus, коагулазонегативными стафилококками, Streptococcus uberis, Streptococcus dysgalacticae и/или Streptococcus agalacticae. Кроме того, коровий мастит может быть вызван Trueperella pyogenes. Также коровий мастит может быть вызван Corynebacterium bovis. Эти микроорганизмы являются наиболее распространенными патогенами, обнаруженными в случаях коровьего мастита, и, как было установлено, являются особенно восприимчивыми к лечению с помощью лизобактина в соответствии с настоящим изобретением.

Другим объектом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, предназначенная для интрамаммарного введения в коровьи молочные железы, причем композиция содержит лизобактин. Предпочтительно композиция дополнительно содержит фармацевтически приемлемый эксципиент и, в частности, фармацевтически приемлемый носитель.

Эти эксципиенты включают, среди прочего, носители (например, микрокристаллическую целлюлозу, лактозу, маннит), растворители (например, жидкие полиэтиленгликоли), эмульгаторы и диспергирующие средства или смачивающие агенты (например, додецилсульфат натрия, полиоксисорбитан олеат), связующие вещества (например, поливинилпирролидон), синтетические и природные полимеры (например, альбумин), стабилизаторы (например, антиоксиданты, такие как, например, аскорбиновая кислота), красители (например, неорганические пигменты, такие как, например, оксиды железа) и маскирующие ароматизаторы и/или ароматные вещества.

Другим объектом настоящего изобретения является применение лизобактина для получения фармацевтических препаратов для лечения коровьего мастита.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения коровий мастит является клинически выраженным коровьим маститом.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения коровий мастит является преклинический коровий мастит.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения коровий мастит вызван бактериями стафилококки, бактериями стрептококки, бактериями Trueperella и/или бактериями Corynebacterium. В частности, коровий мастит может быть вызван Staphylococcus aureus, коагулазонегативными стафилококками, Streptococcus uberis, Streptococcus dysgalacticae и/или Streptococcus agalacticae. Кроме того, коровий мастит может быть вызван Trueperella pyogenes. Также коровий мастит может быть вызван Corynebacterium bovis.

Настоящее изобретение, кроме того, относится к способу лечения коровьего мастита, причем способ включает стадию введения корове, нуждающейся в этом, терапевтически эффективного количества лизобактина.

Примеры:

Настоящее изобретение будет дополнительно разъяснено со ссылкой на следующие примеры и чертежи, без ограничения ими.

Фиг. 1 показывает кинетика уничтожения лизобактином в отношении Staphylococcus aureus и Streptococcus uberis (пример 2)

Фиг. 2 показывает изменения MIC лизобактина в отношении Staphylococcus aureus и Streptococcus uberis в ходе серийного пассирования (пример 4)

Фиг. 3 показывает эффективность лизобактина на мышиной мадели острого мастита, вызванной Staphylococcus aureus (пример 5)

Фиг. 4 показывает эффективность лизобактина на мышиной мадели острого мастита, вызванной Streptococcus uberis (пример 6)

Фиг. 5 показывает профиль зависимости концентрации от времени лизобактина в молоке после интрамаммарного (IMAM) применения на кормящих голштинских коровах (пример 7)

Пример 1: In vitro противобактериальная активность против патогенов, вызывающих мастит

in vitro противобактериальная активность лизобактина против распространенных патогенов, вызывающих мастит, таких как Staphylococcus aureus, коагулазонегативные стафилококки, Streptococcus uberis, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus agalactiae, Trueperella pyogenes, Escherichia coli, или Klebsiella pneumoniae оценивали методом микроразведений в бульоне MIC, как описано Институтом клинических и лабораторных стандартов (CLSI), чтобы получить минимальную подавляющую концентрацию (MIC), которая определяется как самая низкая концентрация вещества, которая предотвращает видимый рост бактерии. Результаты, выраженные как MIC₉₀, суммированы в следующей таблице, где MIC₉₀ определяется как концентрация, при которой ингибируется рост по меньшей мере 90% штаммов данного вида.

Пример 2: In vitro кинетика уничтожения патогенов, вызывающих мастит

Чтобы оценить способность лизобактина уничтожать бактерии в молоке, колбы, содержащие разные концентрации лизобактина, в покупном полножирном молоке инокулировали 1-2×10⁶ колониеобразующих единиц/мл типичного штамма либо Staphyloccus aureus, либо Streptococcus uberis. Колбы инкубировали в течение 24-48 часов на встряхивающей водяной бане при температуре 35 +/- 2°С, и количества жизнеспособных бактерий в каждой колбе определяли в нескольких временных точках путем разбавления и нанесения покрытия на агаровые пластины. Сокращение числа жизнеспособных бактерий в исходном инокуляте по меньшей мере на 99,9% определяется как бактерицидная активность.

Кинетика уничтожения лизобактина против Staphylococcus aureus АТСС 29740 и Streptococcus uberis АТСС 27958 в молоке определялась для концентраций лизобактина 4, 8, 16, 32 и 64 мкг/мл. Результаты показаны на Фиг. 1 (КОЕ: колониеобразующие единицы). Летальный эффект через 24 ч и 48 ч, соответственно, может быть постулирован для S. aureus и S. uberis.

Пример 3: In vitro оценка развития спонтанной резистентности:

Частоту развития спонтанной резистентности оценивали путем нанесения по меньшей мере 1×10⁹ колониеобразующих единиц соответствующего бактериального штамма на агаровые пластины, содержащие лизобактин, при либо 4х, либо 8х MIC, и инкубации пластин при 35 +/- 2°С. Через 48 ч количество колоний, которые выросли на пластинах при концентрации лизобактина выше MIC, было поделено на количество бактерий, которые изначально были нанесены. Полученное число определяется как частота спонтанной резистентности и является показателем вероятности появления резистентных изолятов во время инфекции.

В заключении, лизобактин при 4 - и 8-кратной MIC проявляет очень хороший профиль резистетности: резистентные изоляты не были обнаружены. Результаты приведены в следующих таблицах:

Staphylococcus aureus АТСС 29740:

Streptococcus uberis АТСС 27958:

Пример 4: In vitro оценка развития резистентности в ходе серийного пассирования

Появление изменений MIC в ходе постоянного воздействия бактерий на суб-MIC концентрации лизобактина оценивали с помощью экспериментов серийного пассирования. В первый день концентрации MIC S. aureus и S. uberis оценивали методом микроразведений в бульоне MIC, как описано Институтом клинических и лабораторных стандартов (CLSI). Каждый день в течение следующих 33 последовательных дней бактерии из лунки, содержащей самые высокие концентрации, обеспечивающие полное развитие, собирали и использовали для инокуляции новых 96-луночных планшетов и для оценки MIC при постоянном воздействии лизобактина. MIC, полученную в каждый день, нанесли на график зависимости от времени. Результаты показаны на Фиг. 2. Рифампицин, который, как известно, приводит к быстрым изменениям MIC, использовался в качестве положительного контроля.

Результаты показывают очень хороший профиль лизобактина в отношении развития резистентности при постоянном воздействии, поскольку концентрации MIC для S. aureus и S. uberis остаются постоянными в течение 33 дней.

Пример 5: Эффективность на мышиной модели острого мастита, вызванного S. aureus

Эффективность лизобактина (полученного в форме гидрогеля при рН 4,7) была протестирована на мышиной модели острого мастита, вызванного Staphylococcus aureus, созданной в Университете Шербрука, Канада (Broui-llette et al, Vet. Microbiol. (2004) 4:253-262), который включен в настоящую заявку посредством ссылки. Обе абдоминальные молочные железы (L4 и R4) кормящих CD-1 мышей были интрамаммарно инфицированы 100 КОЕ (колониеобразующими единицами) S. aureus. Мышей обрабатывали интрамаммарно лизобактином через четыре часа после заражения. Каждая группа лечения содержала по меньшей мере 3 мыши (6 четвертей), через 14 часов (через 18 часов после инокуляции) мышей умерщвляли, молочные железы собирали, и оценивали содержание КОЕ путем нанесения 10-кратных серийных разведений гомогенатов молочной железы. Количество КОЕ было выражено как log₁₀. Предел обнаружения составлял 200 КОЕ/г железа. Железы с менее чем 200 КОЕ/г считались очищенными. Результаты показаны на Фиг. 3.

Интрамаммарное введение 50 мкг лизобактина уменьшает среднее содержание КОЕ на около 4 log₁₀, 400 мкг лизобактина устраняет инфекцию от всех инфицированных железах.

Пример 6: Эффективность на мышиной модели острого мастита, вызванного S. uberis

Эффективность лизобактина (получен в форме гидрогеля при рН 4.7) протестировали на мышиной модели мастита, вызванного Streptococcus uberis. Результаты показаны на Фиг. 4.

Двадцать кормящих мышей были экспериментально инфицированы в четверть пары молочных желез посредством S. uberis примерно через 12-15 дней после рождения потомства. Через четыре часа после инокуляции группы из четырех мышей обрабатывали на тех же железах лизобактином при 100, 200, 400 или 800 мкг/железа, полученном в виде гидрогеля. Пятая группа была обработана исключительно с помощью гидрогелевого носителя в качестве отрицательного контроля. Через 18 часов после заражения животных подвергали эвтаназии, железы удаляли, гомогенизировали, и колониеобразующие единицы (КОЕ) определяли установленными микробиологическими методами. Затем рассчитывали КОЕ /мл гомогената, а также КОЕ/г железы. Предел обнаружения составлял около 100 КОЕ/г железы. Противомикробную активность лизобактина против Strep uberis определяли путем сравнения средних КОЕ/железа групп различного дозирования и группы отрицательного контроля.

Железы всех животных контрольной группы показали оптимальную зараженность (≥10⁷ КОЕ/г железы) через 18 часов после заражения. За одним исключением в группе самой высокой дозы все железы в группах, получавших лизобактин, имели количество бактерий ниже предела обнаружения (10² КОЕ/г). Можно сделать вывод, что лизобактин, полученный в форме гидрогеля, обладает выдающейся противобактериальной эффективностью против S. uberis при интрамаммарно вводимых дозах от 100 до 800 мкг/железа.

Пример 7: Лизобактин in vivo данные для крупного рогатого скота - исследование фармакокинетики в молоке на кормящих голштинских коровах

Исследование было разработано как неосновное исследование, подходящее для исследования фармакокинетики в молоке активного вещества лизобактин после однократного интрацистернального введения кормящим молочным коровам.

Активное вещество было получено в виде рабочей композиции на основе парафина, подходящей для интрацистернального применения, содержащей 150 мг лизобактина В в 10 г масляной суспензии.

Испытуемый образец вводили как однократное интрацистернальное лечение при дозе 150 мг лизобактина в одну заднюю четверть каждой из четырех кормящих молочных коров.

Молочные коровы в исследовании (голштинские коровы) представляли целевую популяцию по возрасту, количеству лактации, стадии лактации, производительности молока и породе. Животных помещали в коровник и кормили стандартным кормом для молочных коров, состоящим из силоса из кукурузы и корма для производительности молока. Доение было два раза в день с интервалом в 12 часов, используя ковшеобразное доильное устройство.

Частый отбор молока проводили из обработанной и соответственно контрольных четвертей до (0 ч) и после периода 168 ч после обработки (0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 24, 36, 48, 60, 72, 84, 96, 120, 144 и 168 часов) путем ручного выдаивания соответствующих четвертей вымени. Образцы молока в обычное время доения были собраны до начала доения.

Концентрации активного вещества лизобактина в молоке анализировали посредством ВЭЖХ при обнаружении посредством тандемной масс-спектрометрии. Предел количественного обнаружения составлял 0.05 мг/л.

Фармакокинетическая оценка данных концентрации молока была основана на модельно-независимых методах и содержала РК-параметры для адекватного описания профиля абсорбции, распределения и элиминации активного вещества в молоке.

Обобщенные результаты, полученные из обработанных четвертей вымени приведены в следующей таблице. Лизобактин не был обнаружен в контрольных образцах (необработанные четверти вымени).

Кривая зависимости концентрации от времени лизобактина показана на Фиг. 5.

Пример 8: Лизобактин in vivo данные для крупного рогатого скота - модель заражения вымени кормящих коров с S. aureus

Пятнадцать здоровых кормящих молочных коров экспериментально инфицировали патогенном, вызывающим мастит Staphylococcus aureus во всех четырех четвертях вымени. Как только в четверти вымени были выявлены клинические симптомы мастита, такие как отек, боль, аномальная консистенция молока, ее обрабатывали либо мазью лизобактина на основе парафина при двух различных концентрациях, либо Ubrolexin® (цефалексин + канамицин, Boehringer Ingelheim), либо физиологическим раствором в качестве отрицательного контроля. Обработки были рандомизированно назначены для 42 четвертей вымени в общей сложности, либо 50 мг лизобактина на четверть (для 11 четвертей), либо 150 мг лизобактина (для 11 четвертей), либо Ubrolexin® (для 9 четвертей), либо физиологический раствор (для 11 четвертей). Только четверти вымени, которые были бактериологически положительными в отношении заражающего организма непосредственно перед лечением (n=42) подлежали оценке микробиологического и клинического лечения. Больные четверти обрабатывались этими интрамаммарными составами два раза с интервалом в 24 часа между ними. Вымя клинически исследовали, и образцы молока брали до обработки и несколько раз после нее, вплоть до трех недель после второго введения. Молоко оценивали визуально на отклонения в его консистенции, и образцы оценивали на присутствии заражающего организма и на количество соматических клеток для подтверждения диагноза мастит. Больные четверти вымени рассматривали как микробиологически излеченные, когда Staphylococcus aureus, обнаруженные в образцах молока незадолго до обработки, не могли быть выделены из образца молока, взятого в течение периода времени между третьим и двадцать первым днем после второго введения. Клиническое излечение достигалось, когда локальные симптомы мастита полностью исчезали, и истощение количества соматических клеток (SCC) в качестве параметра воспаления вымени достигалось, когда все количества оставались ниже 500.000 клеток на мл молока в указанный выше период.

Показатель эффективности микробиологического лечения на день 3 и день 21 после второй обработки составлял 73% и 27% для 50 мг лизобактина, 73% и 45% для 150 мг лизобактина, 78% и 44% для Ubrolexin^®, и 0% и 0% для физиологического раствора, соответственно. Локальная частота клинического лечения на день 3 и день 21 после второй обработки составляла 45% и 73% для 50 мг лизобактина, 37% и 82% для 150 мг лизобактина, 33% и 67% для Ubrolexin^®, и 55% и 73% для физиологического раствора, соответственно. Степень истощения SCC на день 3 и день 21 после второй обработки составлял 36% и 45% для 50 мг лизобактина, 36% и 91% для 150 мг лизобактина, 56% и 67% для Ubrolexin^®, и 36% и 27% для физиологического раствора, соответственно.

Можно сделать заключение, что 150 мг лизобактина показывают подобную или даже более высокую эффективность по сравнению с положительным контролем продуктом Ubrolexin^® и более высокую, чем у 50 мг лизобактина и физиологического раствора с точки зрения параметров микробиологического и клинического излечения и истощения SCC.

Пример 9: Лизобактин in vivo данные для крупного рогатого скота - модель заражения вымени кормящих коров с S. uberis

Семьдесят две здоровых кормящих молочных коров экспериментально инфицировали патогенном, вызывающим мастит Streptococcus uberis в две четверти вымени на корову. Как только в четверти вымени были выявлены клинические симптомы мастита (например, повышенная температура, опухание, покраснение, боль, аномальная консистенция молока), ее обрабатывали либо мазью лизобактина на основе парафина при двух различных концентрациях, либо Ubrolexin® (цефалексин + канамицин, Boehringer Ingelheim).

Обработки были рандомизированно назначены для 41 (клинические) или 37 (микробиологические) четвертей вымени, либо 50 мг лизобактина на четверть (для 15/13 четвертей), либо 150 мг лизобактина (для 15/14 четвертей), либо Ubrolexin® (для 11/10 четвертей) в качестве положительного контроля. Больные четверти обрабатывались этими интрамаммарными составами два раза с интервалом в 24 часа между ними. Вымя клинически исследовали, и образцы молока брали до обработки и несколько раз после нее, вплоть до трех недель после второго введения. Молоко оценивали визуально на отклонения в его консистенции, и образцы оценивали на присутствии заражающего организма и на количество соматических клеток для подтверждения диагноза мастит. Больные четверти вымени рассматривали как микробиологически излеченные, когда Streptococcus uberis, обнаруженные в образцах молока незадолго до обработки, не могли быть выделены из образца молока, взятого в течение периода времени между седьмым и двадцать первым днем после второй обработки. Клиническое излечение достигалось, когда локальные симптомы мастита полностью исчезали или имели намного более легкую природу.

Показатель эффективности микробиологического лечения на день 7 аи день 21 после второй обработки составлял 84.6% и 92.31% для 50 мг лизобактина, 71.4% и 85.71% для 150 мг лизобактина, и 30% и 30% для Ubrolexin^®, соответственно. Локальная частота клинического лечения на день 7 после второй обработки составлял 86.7% как для 50 мг лизобактина, так и для 150 мг лизобактина, и 36.4% для Ubrolexin^®, соответственно.

Можно сделать заключение, что лизобактин при концентрации 50 и 150 мг очевидно намного более эффективен по сравнению с положительным контролем Ubrolexin^® с точки зрения основных параметров микробиологического и клинического излечения.

1. Применение лизобактина для лечения бактериального коровьего мастита, где лизобактин вводят интрамаммарно и предоставляют при дозе от 25 до 1000 мг на четверть вымени.

2. Применение по п. 1, где коровий мастит представляет собой клинически выраженный коровий мастит.

3. Применение по п. 1, где коровий мастит представляет собой преклинический коровий мастит.

4. Применение по любому из пп. 1-3, где коровий мастит вызван бактериями Staphylococcus, бактериями Streptococcus, бактериями Trueperella и/или бактериями Corynebacterium.

5. Применение по п. 4, где коровий мастит вызван Staphylococcus aureus, коагулазонегативными стафилококками, Streptococcus uberis, Streptococcus dysgalacticae и/или Streptococcus agalacticae.

6. Применение по п. 4, где коровий мастит вызван Trueperella pyogenes.

7. Применение по п. 4, где коровий мастит вызван Corynebacterium bovis.

8. Фармацевтическая композиция для лечения бактериального коровьего мастита, составленная для интрамаммарного введения в коровьи молочные железы, отличающаяся тем, что композиция содержит лизобактин и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый эксципиент.