Способы получения промышленных продуктов из растительных липидов

Авторы патента:

ЭЛЬ ТАХЧИ Анна (AU)

ЛЮ Цин (AU)

ПЕТРИ Джеймс Робертсон (AU)

РЕЙНОЛДС Кайл (AU)

ЛЕЙТА Бенджамин Альдо (AU)

СИНГХ Суриндер Пал (AU)

ВАНЕРКЕ Томас (AU)

C12N15/82 - для клеток растений

C12N15/52 - гены, кодирующие ферменты или проферменты

C11B1/10 - экстракцией

C10B53/02 - материалов, содержащих целлюлозу (производство древесного уксуса C10C 5/00)

A01H5/00 - Цветковые, например покрытосеменные растения

Владельцы патента RU 2743384:

КОММОНВЕЛТ САЙЕНТИФИК ЭНД ИНДАСТРИАЛ РИСЕРЧ ОРГАНИЗЕЙШН (AU)

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения нефтепродукта, включающий стадии:(i) обработки в реакторе композиции, содержащей (a) вегетативные части растения, сухая масса которых составляет по меньшей мере 2 г и в которых общее содержание неполярных липидов составляет по меньшей мере 5% масс., в пересчете на сухую массу,(b) растворитель, который содержит воду, спирт или и то, и другое, и (c) необязательно катализатор, причем обработка включает нагревание композиции при температуре от около 270°C до около 400°C и давлении от 70 до 350 бар на протяжении периода от 1 до 120 минут в окислительной, восстановительной или инертной среде,(ii) извлечение нефтепродукта из реактора с выходом по меньшей мере 35% масс., в пересчете на сухую массу вегетативных частей растения, с получением таким образом нефтепродукта, где нефтепродукт является углеводородным продуктом, включающим эфиры жирных кислот, один или несколько алканов, один или несколько алкенов или комбинацию любых двух или нескольких из них. Изобретение позволяет получать нефтепродукты с высокой степенью эффективности. 9 н. и 15 з.п. ф-лы, 18 ил., 19 табл., 18 пр.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение связано со способами получения промышленных продуктов из растительных липидов, особенно из вегетативных частей растений. В частности, в настоящем изобретении предлагаются нефтепродукты, такие как биодизельное топливо и синтетическое дизельное топливо, и способы их получения, а также растения, содержащие повышенный уровень одного или более неполярных липидов, таких как триацилглицериды, и повышенное общее содержание неполярных липидов. В одном конкретном варианте реализации изобретения настоящее изобретение связано с комбинациями модификаций двух или более ферментов, процессирующих липиды, белков масляных включений, снижения уровня ферментов, катализирующих липиды, и/или факторов транскрипции, регулирующих биосинтез липида, с повышением уровня одного или более неполярных липидов и/или общего содержания неполярных липидов и/или содержания мононенасыщенных жирных кислот в растениях или любой их части. В варианте реализации настоящее изобретение связано со способом экстракции липидов. В другом варианте реализации изобретения липид превращается в один или более углеводородных продуктов в собранных вегетативных частях растения, с целью получения алкиловых эфиров жирных кислот, пригодных для применения в качестве возобновляемого биодизельного топлива.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Большая часть энергии в мире, особенно для транспортных целей, поставляется видами топлива, полученными из нефти, запас которой ограничен. Необходимы альтернативные, возобновляемые источники энергии, например, из вырабатываемых биологическим путем масел.

Биосинтез триацилглицеридов

Триацилглицериды (ТАГ) представляют собой основную форму липидов в семенах и состоят из трех ацильных цепей, присоединенных сложноэфирной связью к глицериновому скелету. Жирные кислоты синтезируются в пластиде как промежуточные соединения ацил-ацил-переносящего белка (АПБ), и в их молекуле может образовываться первая кратная связь под действием катализатора. Данная реакция катализируется стеароил-АПБ-десатуразой и дает олеиновую кислоту (C18:1^Δ9). Впоследствии ацильные цепи транспортируются к цитозолю и эндоплазматическому ретикулуму (ЭР) как тиоэфиры ацил-Коэнзим (КоА). До вхождения в основной путь биосинтеза ТАГ, также известный как путь Кеннеди или путь глицерил-3-фосфата (G3P), ацильные цепи обычно интегрируются в фосфолипиды мембраны ЭР, где в их молекулах могут образовываться дополнительные кратные связи. Двумя ключевыми ферментами в получении полиненасыщенных жирных кислот являются связанные с мембраной десатуразы FAD2 и FAD3, которые дают линолевую (C18:2^Δ9,12) и α-линоленовую кислоту (C18:3^Δ9,12,15), соответственно.

Биосинтез ТАГ по пути Кеннеди состоит из серии последовательных реакций ацилирования, в каждой из которых эфиры ацил-КоА используются в качестве доноров ацила. Первая стадия ацилирования обычно происходит в положении sn1 скелета G3P и катализируется глицерин-3-фосфатацилтрансферазой (sn1-GPAT). Продукт, sn1-лизофосфатидиновая кислота (sn1-LPA) служит субстратом для ацилтрансферазы лизофосфатидиновой кислоты, (LPAAT), которая осуществляет присоединение второй цепи ацила в положении sn2, с образованием фосфатидиновой кислоты (ФК). Далее ФК дефосфорилируется до диацилглицерина (ДАГ) фосфатазой фосфатидиновой кислоты (PAP), таким образом, обеспечивая субстрат для заключительной стадии ацилирования. В заключение, третья цепь ацила присоединяется сложноэфирной связью в положении sn3 ДАГ в ходе реакции, катализируемой диацилглицерилацилтрансферазой (DGAT), с образованием ТАГ, который аккумулируется в масляных включениях. Вторая ферментная реакция, осуществляемая фосфатидилглицерилацилтрансферазой (PDAT), также приводит к превращению ДАГ в ТАГ. Данная реакция не связана с DGAT, и в ней используются фосфолипиды в качестве доноров ацила.

Для максимизации выхода с целью коммерческого получения липидов существует потребность в дополнительных средствах повышения уровней липидов, особенно неполярных липидов, например, ДАГ и ТАГ, в трансгенных организмах или их частях, например, растениях, семенах, листьях, водорослях и грибах. Попытки повышения выхода нейтрального липида из растений большей частью были сосредоточены на отдельных критических ферментных стадиях, принимающих участие в биосинтезе жирных кислот или сборке ТАГ. Эти стратегии, однако, привели к скромному повышению содержания масла в семени или листьях. Недавняя работа по конструированию в области метаболизма маслянистых дрожжей Yarrowia lipolytica продемонстрировала, что комбинированный подход к повышению выхода глицерин-3-фосфата и предупреждения разложения ТАГ посредством β-окисления приводил к кумулятивному повышению общего содержания липида (Dulermo c соавт., 2011).

Липиды растений, например, триацилглицериды масла из семян (ТАГ), находят широкое применение, например, в кулинарии (рассыпчатость, текстура, аромат), промышленности (мыло, свечи, духи, косметика, пригодны в качестве агентов для сушки, изолирующих веществ, любрикантов) и обеспечивают питательную ценность. Кроме того, растет интерес к использованию липидов растительного происхождения в качестве биологического топлива.

Для максимизации выхода при коммерческом получении липидов биологическим способом существует потребность в дополнительных средствах для повышения уровней липидов, особенно неполярных липидов, например, ДАГ и ТАГ, в трансгенных организмах или их частях, например, растениях, семенах, листьях, водорослях и грибах.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Авторами настоящего изобретения идентифицирован способ получения нефтепродукта из вегетативных частей растения.

В первом аспекте настоящего изобретения предлагается способ получения нефтепродукта, включающий стадии:

(i) обработки в реакторе композиции, содержащей:

(a) вегетативные части растения, сухая масса которых составляет по меньшей мере 2 г, и в которых общее содержание неполярных липидов составляет по меньшей мере 5% масс., в пересчете на сухую массу,

(b) растворитель, который содержит воду, спирт или и то, и другое, и

причем обработка включает нагревание композиции при температуре от около 50°C до около 450°C и давлении от 5 до 350 бар на протяжении периода от 1 до 120 минут, в окислительной, восстановительной или инертной среде,

(ii) извлечение нефтепродукта из реактора с выходом по меньшей мере 35% масс., в пересчете на сухую массу вегетативных частей растения,

с получением таким образом нефтепродукта.

В варианте реализации изобретения сухая масса вегетативных частей растения составляет по меньшей мере 1 кг.

В варианте реализации изобретения общее содержание неполярных липидов в вегетативных частях растения составляет по меньшей мере 10%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, около 25%, около 30%, около 35%, от 10% до 75%, от 20% до 75% или предпочтительно от 30% до 75%, в пересчете на сухую массу.

В варианте реализации изобретения концентрация твердых веществ в композиции составляет от 5% до 90%, предпочтительно от 15% до 50% (сухая масса/масса).

Можно применять любой подходящий катализатор. В варианте реализации изобретения катализатор представляет собой щелочь, кислоту или катализатор на основе драгоценного металла. Например, в варианте реализации изобретения катализатор содержит NaOH или KOH или оба, предпочтительно в концентрации 0,1-2 М.

В варианте реализации изобретения время обработки составляет от 1 до 60 минут, предпочтительно от 10 до 60 минут, более предпочтительно, от 15 до 30 минут. В варианте реализации изобретения, в котором давление составляет менее чем 50 бар, время реакции может составлять до 24 часов или даже до 7 дней. В предпочтительном варианте реализации изобретения температура составляет от 275°C до 360°C, давление составляет от 100 до 200 бар, и длительность реакции составляет 10-60 минут.

В варианте реализации изобретения, в котором растворитель является водой, выход нефтепродукта в результате способа составляет от по меньшей мере 36%, 37%, 38%, 39% или 40% до максимального значения 55% или предпочтительно 60% масс., в пересчете на сухую массу вегетативных частей растения. В данном варианте реализации изобретения нефтепродукт содержит по меньшей мере в 2 раза, предпочтительно по меньшей мере в 3 раза больше углеводородных соединений, чем эфиров жирного ацила. Предпочтительно, нефтепродукт содержит 35%, более предпочтительно, 40% C13-C22 углеводородных соединений.

В другом варианте реализации изобретения, в котором растворитель содержит спирт, предпочтительно метанол, выход нефтепродукта в результате способа составляет от по меньшей мере 36%, 37%, 38%, 39% или 40% до максимального значения 65% или предпочтительно 70% масс., в пересчете на сухую массу вегетативных частей растения. В данном варианте реализации изобретения нефтепродукт содержит по меньшей мере в 1,5 раза, предпочтительно по меньшей мере в 2 раза больше эфиров жирного ацила, чем углеводородных соединений. Предпочтительно, нефтепродукт содержит 40%, более предпочтительно, 50% метиловых эфиров жирных кислот.

В дальнейшем варианте реализации изобретения, в котором растворитель содержит около 80% воды, нефтепродукт содержит около 30% C13-C22 углеводородных соединений, предпочтительно около 35%, более предпочтительно, около 40% C13-C22 углеводородных соединений.

В другом варианте реализации изобретения, в котором растворитель содержит около 50% метанола, нефтепродукт содержит около 50% метиловых эфиров жирных кислот (МЭЖК).

В дальнейшем варианте реализации изобретения содержание воды в извлеченном нефтепродукте составляет менее чем около 15% масс., предпочтительно менее чем 5% масс.

В другом варианте реализации изобретения выход нефтепродукта по меньшей мере на 2% масс. больше, предпочтительно по меньшей мере на 4% масс. больше, чем выход соответствующего способа с применением соответствующих вегетативных частей растения, в которых содержание неполярного липида составляет менее чем 2%, в пересчете на сухую массу.

В варианте реализации изобретения вегетативные части растения на стадии (i)(a) физически обрабатывают одним или больше из сушки, рубки, нарезания, помола, вальцовки, прессования, дробления или перетирания. В альтернативном варианте реализации изобретения вегетативные части растения не подвергают сушке до содержания влаги менее чем 10% до приготовления композиции. Например, вегетативные части растения содержат по меньшей мере 20% или по меньшей мере 30% влаги, или вегетативные части растения сохраняют по меньшей мере 50% от содержания воды, присутствующей в них на момент их сбора.

В варианте реализации изобретения способ дополнительно включает одно или более из:

(i) гидродезоксигенации извлеченного нефтепродукта,

(ii) обработки извлеченного нефтепродукта водородом, с целью снижения уровней кетонов или сахара в нефтепродукте,

(iii) выработки синтетического газа из извлеченного нефтепродукта, и

(iv) фракционирования извлеченного нефтепродукта, с целью получения одного или более из мазута, дизельного топлива, керосина или бензина Например, стадия фракционирования может представлять собой фракционную перегонку.

В варианте реализации изобретения вегетативные части растения включают листья растения, стебли или оба.

В варианте реализации изобретения вегетативные части растения содержат комбинацию экзогенных полинуклеотидов и/или генетических модификаций, как определяется в настоящем документе.

Авторами настоящего изобретения дополнительно продемонстрировано значительное повышение содержания липидов в организмах, особенно в вегетативных частях и семени растений, путем манипулирования биосинтезом жирных кислот, сборкой липидов и путями упаковки липидов, а также снижения катаболизма липидов. Различные комбинации генов и снижение экспрессии генов применяли для достижения значительного повышения содержания масла, что имеет большое значение для выработки биотоплива и других промышленных продуктов, получаемых из масла.

Во втором аспекте настоящего изобретения предлагается рекомбинантная эукариотная клетка, содержащая:

b) второй экзогенный полинуклеотид, кодирующий полипептид, принимающий участие в биосинтезе одного или более неполярных липидов, и любое одно или два или все три из:

c) первой генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в катаболизме триацилглицеридов (ТАГ) в клетке, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей генетической модификации,

d) третьего экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептида, который повышает экспорт жирных кислот из пластид клетки, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей четвертого экзогенного полинуклеотида, и

e) четвертого экзогенного полинуклеотида, кодирующего второй полипептид фактора транскрипции, который повышает экспрессию одного или более гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в клетке,

причем каждый экзогенный полинуклеотид функционально связан с промотором, способным направлять экспрессию полинуклеотида в клетке.

В варианте реализации изобретения клетка содержит a), b) и c), и необязательно d) или e).

В варианте реализации изобретения клетка содержит a), b) и d), и необязательно c) или e).

В варианте реализации изобретения клетка содержит a), b) и e), и необязательно c) или d).

В варианте реализации изобретения клетка дополнительно содержит один или более или все из:

a) пятого экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид покрытия масляного включения (ПМВ), предпочтительно связанный с липидной капелькой белок (БСЛК),

b) второй генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в импорте жирных кислот в пластиды клетки, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей второй генетической модификации, и

c) третьей генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в выработке диацилглицеридов (ДАГ) в пластиде, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей третьей генетической модификации.

В варианте реализации изобретения рекомбинантная эукариотная клетка содержит:

b) второй экзогенный полинуклеотид, кодирующий полипептид, принимающий участие в биосинтезе одного или более неполярных липидов, и

причем каждый экзогенный полинуклеотид функционально связан с промотором, способным направлять экспрессию полинуклеотида в клетке, и необязательно клетка дополнительно содержит один или более или все из:

d) третьего экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид покрытия масляного включения (ПМВ), предпочтительно БСЛК,

e) четвертого экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид, который повышает экспорт жирных кислот из пластид клетки, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей четвертого экзогенного полинуклеотида,

f) второй генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в импорте жирных кислот в пластиды клетки, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей второй генетической модификации, и

g) третьей генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в выработке диацилглицеридов (ДАГ) в пластиде, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей третьей генетической модификации.

В варианте реализации изобретения клетка является растительной клеткой из или в вегетативной части растения, причем один или более или все промоторы экспрессируются в вегетативной части с более высокими уровнями, чем в семени растения.

В предпочтительном варианте реализации изобретения присутствие c), d) или e), вместе с первым и вторым экзогенными полинуклеотидами повышает общее содержание неполярных липидов в клетке, предпочтительно клетке в вегетативной части растения, такой как лист или стебель, относительно соответствующей клетки, которая содержит первый и второй экзогенные полинуклеотиды, но не содержит каждый из c), d) и e). Более предпочтительно, повышение является синергетическим. Наиболее предпочтительно, по меньшей мере промотор, направляющий экспрессию первого экзогенного полинуклеотида, является промотором, не принадлежащим к конститутивным промоторам.

В варианте реализации изобретения полипептид, принимающий участие в биосинтезе одного или более неполярных липидов, является DGAT или PDAT, и полипептид, принимающий участие в катаболизме ТАГ в клетке, является липазой SDP1.

В варианте реализации изобретения полипептид фактора транскрипции, который повышает экспрессию одного или более гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в клетке, является полипептидом WRI1, и полипептид, принимающий участие в биосинтезе одного или более неполярных липидов, является DGAT или PDAT.

В варианте реализации изобретения два фактора транскрипции, если они присутствуют, представляют собой WRI1 и LEC2 или WRI1 и LEC1.

В упомянутых выше вариантах реализации изобретения клетка предпочтительно находится в вегетативной части растения, которое растет на грунте или которое было выращено на грунте, с последующим сбором урожая части растения, причем клетка содержит по меньшей мере 8% масс. ТАГ (% от сухой массы), например, от 8% до 75% или от 8% до 30%. Более предпочтительно, содержание ТАГ составляет по меньшей мере 10%, например, от 10% до 75% или от 10% до 30%. Предпочтительно, указанные уровни ТАГ присутствуют в вегетативных частях до или в ходе стадии цветения или до стадии завязывания семян в ходе развития растения. В указанных вариантах реализации изобретения соотношение содержания ТАГ в листьях к содержанию ТАГ в стеблях растения предпочтительно составляет от 1:1 до 10:1, и/или соотношение повышено по сравнению с соответствующей клеткой, содержащей первый и второй экзогенные полинуклеотиды, но не содержащей первой генетической модификации.

В упомянутых выше вариантах реализации изобретения клетка предпочтительно содержит экзогенный полинуклеотид, кодирующий DGAT, и генетическую модификацию, подавляющую выработку эндогенной липазы SDP1. Более предпочтительно, клетка не содержит экзогенного полинуклеотида, кодирующего PDAT, и/или представляет собой клетка, не являющуюся клеткой Nicotiana benthamiana, и/или WRI1 представляет собой WRI1, не являющийся WRI1 Arabidopsis thaliana (SEQ ID NO: 21 или 22). Наиболее предпочтительно, по меньшей мере один из экзогенных полинуклеотидов в клетке экспрессируется промотором, который не является конститутивным промотором, таким как промотор, который экспрессируется предпочтительно в зеленых тканях или стеблях растения или который активизируется после начала цветения или в ходе старения.

В третьем аспекте настоящего изобретения предлагается рекомбинантная эукариотная клетка, содержащая:

c) третий экзогенный полинуклеотид, кодирующий полипептид покрытия масляного включения (ПМВ), предпочтительно связанный с липидными капельками полипептид (СЛКП),

причем каждый экзогенный полинуклеотид функционально связан с промотором, способным направлять экспрессию полинуклеотида в клетке, и, при этом, рекомбинантная эукариотная клетка содержит повышенный уровень одного или более неполярных липидов и/или повышенное количество полипептида ПМВ, относительно соответствующей клетки, которая содержит третий экзогенный полинуклеотид, нуклеотидная последовательность которого комплементарна последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 176.

В варианте реализации изобретения клетка согласно упомянутому выше аспекту дополнительно содержит одно или более или все из:

d) первой генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в катаболизме триацилглицеридов (ТАГ) в клетке, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей первой генетической модификации,

В варианте реализации изобретения полипептид, принимающий участие в биосинтезе одного или более неполярных липидов, является DGAT или PDAT и полипептид ПМВ является олеозином. В качестве альтернативы, полипептид ПМВ представляет собой БСЛК.

В варианте реализации изобретения полипептид фактора транскрипции, который повышает экспрессию одного или более гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в клетке, является полипептидом WRI1, и полипептид, принимающий участие в биосинтезе одного или более неполярных липидов, является DGAT или PDAT.

В варианте реализации изобретения клетка содержит два экзогенных полинуклеотида, кодирующие два различных полипептида фактора транскрипции, которые повышают экспрессию в клетке одного или более гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот, такие как WRI1 и LEC2 или WRI1 и LEC1.

В предпочтительном варианте реализации изобретения присутствие третьего экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид ПМВ, предпочтительно БСЛК, вместе с первым и вторым экзогенными полинуклеотидами, повышает общее содержание неполярных липидов в растительной клетке, предпочтительно клетке в вегетативной части растения, такой как лист или стебель, относительно клетки соответствующего растения, которая содержит первый и второй экзогенные полинуклеотиды, но не содержит третьего экзогенного полинуклеотида. Более предпочтительно, повышение является синергетическим. Наиболее предпочтительно, по меньшей мере промотор, направляющий экспрессию первого экзогенного полинуклеотида, является промотором, не принадлежащим к конститутивным промоторам.

В четвертом аспекте настоящего изобретения предлагается рекомбинантная эукариотная клетка, содержащая пластиды и первый экзогенный полинуклеотид, кодирующий полипептид фактора транскрипции, который повышает экспрессию одного или более гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в клетке, и один или более или все из:

a) второго экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид, который повышает экспорт жирных кислот из пластид клетки, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей второго экзогенного полинуклеотида,

b) первой генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в импорте жирных кислот в пластиды клетки, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей первой генетической модификации, и

c) второй генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в выработке диацилглицерида (ДАГ) в пластиде, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей второй генетической модификации,

В варианте реализации изобретения клетка, предпочтительно растительная клетка, содержит a) и необязательно b) или c).

d) третьего экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид, принимающий участие в биосинтезе одного или более неполярных липидов,

e) третьей генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в катаболизме триацилглицеридов (ТАГ) в клетке, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей третьей генетической модификации, и

f) четвертого экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид покрытия масляного включения (ПМВ), предпочтительно БСЛК.

В предпочтительном варианте реализации изобретения клетка, предпочтительно растительная клетка, содержит первый, второй и третий экзогенные полинуклеотиды и необязательно третью генетическую модификацию или четвертый экзогенный полинуклеотид.

В предпочтительном варианте реализации изобретения присутствие второго экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид, который повышает экспорт жирных кислот из пластид клетки, предпочтительно являющегося тиоэстеразой жирного ацила, такой как полипептид FATA, вместе с первым и, если они присутствуют, третьими экзогенными полинуклеотидами повышает общее содержание неполярных липидов в растительной клетке, предпочтительно клетке в вегетативной части растения, такой как лист или стебель, по сравнению с соответствующей растительной клеткой, которая содержит первый и, если они присутствуют, третьи экзогенные полинуклеотиды, но не содержит второго экзогенного полинуклеотида. Более предпочтительно, повышение, обеспечиваемое вторым экзогенным полинуклеотидом, является синергетическим. Наиболее предпочтительно, по меньшей мере промотор, направляющий экспрессию первого экзогенного полинуклеотида, является промотором, не принадлежащим к конститутивным промоторам.

В варианте реализации изобретения полипептид фактора транскрипции, который повышает экспрессию одного или более гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в клетке, является полипептидом WRI1, полипептидом LEC2, полипептидом LEC1 или LEC1-подобным полипептидом, предпочтительно фактором транскрипции, не являющимся WRI1 Arabidopsis thaliana (SEQ ID NO: 21 или 22), а полипептид, который повышает экспорт жирных кислот из пластид клетки, является тиоэстеразой жирных кислот, предпочтительно полипептидом FATA или FATB, более предпочтительно, полипептидом FATA или тиоэстеразой жирных кислот, не являющейся тиоэстеразой среднецепочечных жирных кислот. На присутствие тиоэстеразы, не являющейся среднецепочечной тиоэстеразой, указывает процент C12:0 и/или C14:0 жирных кислот в общем содержании жирных кислот в клетке, которое является примерно таким же, как и в соответствующей клетке, не содержащей экзогенного полинуклеотида, кодирующего тиоэстеразу. Предпочтительно, клетка дополнительно содержит экзогенный полинуклеотид, кодирующий DGAT, и генетическую модификацию, подавляющую выработку эндогенной липазы SDP1. В варианте реализации изобретения сниженная выработка липазы SDP1 действует синергетически с фактором транскрипции и тиоэстеразой жирных кислот для повышения общего содержания неполярных липидов в клетке. Более предпочтительно, клетка не содержит экзогенного полинуклеотида, кодирующего PDAT, и/или представляет собой клетку, не являющуюся клеткой Nicotiana benthamiana. Наиболее предпочтительно, по меньшей мере один из экзогенных полинуклеотидов в клетке экспрессируется промотором, который не является конститутивным промотором, таким как промотор, который предпочтительно экспрессируется в зеленых тканях или стеблях растения или активизируется в ходе старения.

В вариантах реализации второго, третьего и четвертого аспектов изобретения, в которых клетка содержит экзогенный полинуклеотид, кодирующий тиоэстеразу жирных кислот, такую как полипептид FATA или FATB, тиоэстераза предпочтительно является полипептидом FATA или тиоэстеразой жирных кислот, не являющейся среднецепочечной тиоэстеразой жирных кислот.

В пятом аспекте настоящего изобретения предлагается рекомбинантная эукариотная клетка, содержащая:

a) первый экзогенный полинуклеотид, кодирующий полипептид фактора транскрипции, который повышает экспрессию одного или более гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в клетке, предпочтительно фактор транскрипции WRI,

b) второй экзогенный полинуклеотид, кодирующий полипептид, принимающий участие в биосинтезе одного или более неполярных липидов, которые представляют собой LPAAT с преимущественной активностью в отношении жирных кислот со средней длиной цепи (C8-C14), и

c) третий экзогенный полинуклеотид, кодирующий полипептид, который повышает экспорт C8-C14 жирных кислот из пластид клетки, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей третьего экзогенного полинуклеотида,

В варианте реализации изобретения третий экзогенный полинуклеотид кодирует тиоэстеразу, предпочтительно тиоэстеразу FATB с преимущественной активностью в отношении жирных кислот со средней длиной цепи (C8-C14).

В предпочтительном варианте реализации изобретения присутствие третьего экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид, который повышает экспорт C8-C14 жирных кислот из пластид клетки, вместе с первыми и вторыми экзогенными полинуклеотидами повышает общее содержание СЦЖК в клетке, предпочтительно клетке вегетативной части растения, такой как лист, корень или стебель, по сравнению с соответствующей растительной клеткой, содержащей первый и второй экзогенные полинуклеотиды, но не содержащей третьего экзогенного полинуклеотида. Более предпочтительно, повышение, обеспечиваемое третьим экзогенным полинуклеотидом, является синергетическим. Наиболее предпочтительно, по меньшей мере промотор, направляющий экспрессию первого экзогенного полинуклеотида, является промотором, не принадлежащим к конститутивным промоторам.

В варианте реализации изобретения экзогенный полинуклеотид, кодирующий тиоэстеразу FATB с преимущественной активностью в отношении жирных кислот со средней длиной цепи (C8-C14), содержит аминокислоты, последовательность которых приведена в любой из SEQ ID NO: 193-199, или биологически активный фрагмент любой из них или полипептид, аминокислотная последовательность которого по меньшей мере на 30% идентична любой одной или более из SEQ ID NO: 193-199. Более предпочтительно, экзогенный полинуклеотид, кодирующий тиоэстеразу FATB с преимущественной активностью в отношении жирных кислот со средней длиной цепи (C8-C14), содержит аминокислоты, последовательность которых приведена в SEQ ID NO: 193-199, или биологически активный фрагмент любой из них или полипептид, аминокислотная последовательность которого по меньшей мере на 30% идентична любой одной или обеим из SEQ ID NO: 193-199.

В варианте пятого аспекта фактор транскрипции не является WRI1 Arabidopsis thaliana (SEQ ID NO: 21 или 22).

В варианте пятого аспекта экзогенный полинуклеотид, кодирующий LPAAT, содержит аминокислоты, последовательность которых приведена как SEQ ID NO: 200, или его биологически активный фрагмент или полипептид, аминокислотная последовательность которого по меньшей мере на 30% идентична им.

В варианте пятого аспекта клетка дополнительно содержит одно или более или все из:

d) четвертого экзогенного полинуклеотида, кодирующего дополнительный полипептид, принимающий участие в биосинтезе одного или более неполярных липидов,

e) первой генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в катаболизме триацилглицеридов (ТАГ) в клетке, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей первой генетической модификации,

f) пятого экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид покрытия масляного включения (ПМВ), предпочтительно БСЛК,

g) второй генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в импорте жирных кислот в пластиды клетки, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей второй генетической модификации, и

h) третьей генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в выработке диацилглицерида (ДАГ) в пластиде, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей третьей генетической модификации,

В варианте пятого аспекта клетка является растительной клеткой из или в вегетативной части растения, и один или более или все из промоторов экспрессируются в вегетативной части с более высокими уровнями, чем в семени растения.

В варианте пятого аспекта жирная кислота со средней длиной цепи является по меньшей мере миристиновой кислотой. В предпочтительном варианте реализации изобретения содержание миристиновой кислоты в клетке составляет по меньшей мере около 8%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 11%, по меньшей мере около 12%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, от 8% до 25%, от 8% до 20%, от 10% до 25%, от 11% до 25%, от около 15% до 25%, от около 20% до 25% (масс./масс, в пересчете на сухую массу).

В вариантах реализации третьего, четвертого и пятого аспектов клетка предпочтительно находится в вегетативной части растения, которое растет на грунте или которое было выращено на грунте, с последующим сбором урожая частей растения, причем клетка содержит по меньшей мере 8% масс. ТАГ (% от сухой массы), например, от 8% до 75% или от 8% до 30%. Более предпочтительно, содержание ТАГ составляет по меньшей мере 10%, например, от 10% до 75% или от 10% до 30%. Предпочтительно, указанные уровни ТАГ присутствуют в вегетативных частях до или в ходе стадии цветения или до стадии завязывания семян в ходе развития растения. В указанных вариантах реализации изобретения соотношение содержания ТАГ в листьях к содержанию ТАГ в стеблях растения предпочтительно составляет от 1:1 до 10:1, и/или соотношение повышено по сравнению с соответствующей клеткой, содержащей первый и второй экзогенные полинуклеотиды, но не содержащей первой генетической модификации.

В вариантах второго, третьего, четвертого и пятого аспектов клетка предпочтительно содержит экзогенный полинуклеотид, кодирующий DGAT, и генетическую модификацию, подавляющую выработку эндогенной липазы SDP1. В предпочтительном варианте реализации изобретения клетка не содержит экзогенного полинуклеотида, кодирующего PDAT, и/или клетка не является клеткой Nicotiana benthamiana и/или клетка не является клеткой Brassica napus. Наиболее предпочтительно, по меньшей мере один из экзогенных полинуклеотидов в клетке экспрессируется промотором, который не является конститутивным промотором, таким как промотор, который предпочтительно экспрессируется в зеленых тканях или стеблях растения или активизируется в ходе старения.

В варианте реализации изобретения клетка по изобретению (включая второй, третий, четвертый и пятый аспекты) обладает одним или более или всеми из следующих признаков (если это уместно):

i) в клетке повышен синтез общих жирных кислот относительно соответствующей клетки, не содержащей первого экзогенного полинуклеотида, или снижен катаболизм общих жирных кислот относительно соответствующей клетки, не содержащей первого экзогенного полинуклеотида, или присутствуют оба этих признака, таким образом, что клетка содержит повышенный уровень общих жирных кислот относительно соответствующей клетки, не содержащей первого экзогенного полинуклеотида,

ii) в клетке повышена экспрессия и/или активность ацилтрансферазы ацилов жирных кислот, катализирующей синтез ТАГ, ДАГ или МАГ, предпочтительно ТАГ, относительно соответствующей клетки, содержащей первый экзогенный полинуклеотид и не содержащей экзогенного полинуклеотида, который кодирует полипептид, принимающий участие в биосинтезе одного или более неполярных липидов,

iii) в клетке снижена выработка лизофосфатидиновой кислоты (LPA) из ацил-АПБ и G3P в пластидах клетки относительно соответствующей клетки, содержащей первый экзогенный полинуклеотид и не содержащей генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в выработке диацилглицерида (ДАГ) в пластиде клетки,

iv) в клетке изменено соотношение C16:3 и C18:3 жирных кислот в содержании общих жирных кислот и/или содержании галактолипидов относительно соответствующей клетки, не содержащей экзогенного(ых) полинуклеотида(ов) и/или генетической(их) модификации(й), предпочтительно соотношение снижено,

v) клетка находится в вегетативной части растения, причем общее содержание в ней неполярных липидов составляет по меньшей мере около 8%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 11%, по меньшей мере около 12%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, от 8% до 75%, от 10% до 75%, от 11% до 75%, от около 15% до 75%, от около 20% до 75%, от около 30% до 75%, от около 40% до 75%, от около 50% до 75%, от около 60% до 75% или от около 25% до 50% (масс./масс., в пересчете на сухую массу);

vi) клетка находится в вегетативной части растения, причем содержание ТАГ в ней составляет по меньшей мере около 8%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 11%, по меньшей мере около 12%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, от 8% до 75%, от 10% до 75%, от 11% до 75%, от около 15% до 75%, от около 20% до 75%, от около 30% до 75%, от около 40% до 75%, от около 50% до 75%, от около 60% до 75% или от около 25% до 50% (масс./масс., в пересчете на сухую массу),

vii) полипептид(ы) фактора транскрипции выбран(ы) из группы, состоящей из Wrinkled 1 (WRI1), Leafy Cotyledon 1 (LEC1), LEC1-подобного, Leafy Cotyledon 2 (LEC2), BABY BOOM (BBM), FUS3, ABI3, ABI4, ABI5, Dof4 и Dof11 или из группы, состоящей из MYB73, bZIP53, AGL15, MYB115, MYB118, TANMEI, WUS, GFR2a1, GFR2a2 и PHR1,

viii) олеиновая кислота составляет по меньшей мере 20% (моль %), по меньшей мере 22% (моль %), по меньшей мере 30% (моль %), по меньшей мере 40% (моль %), по меньшей мере 50% (моль %) или по меньшей мере 60% (моль %), предпочтительно около 65% (моль %) или от 20% до около 65% от содержания общих жирных кислот в клетке,

ix) неполярный липид в клетке содержит жирную кислоту, которая содержит гидроксильную группу, эпоксигруппу, циклопропановую группу, двойную углерод-углеродную связь, тройную углерод-углеродную связь, конъюгированные двойные связи, разветвленную цепь, такую как метилированная или гидроксилированная разветвленная цепь, или комбинацию двух или более из них или любую из двух, трех, четырех, пяти или шести вышеупомянутых групп, связей или разветвленных цепей,

x) неполярный липид в клетке содержит одну или более полиненасыщенных жирных кислот, выбранных из эйкозадиеновой кислоты (ЭДК), арахидоновой кислоты (АРК), стеаридоновой кислоты (СДК), эйкозатриеновой кислоты (ЭТрК), эйкозатетраеновой кислоты (ЭТК), эйкозапентаеновой кислоты (ЭПК), докозапентаеновой кислоты (ДПК), докозагексаеновой кислоты (ДГК) или комбинации двух или более из них,

xi) клетка находится в растении или его части, предпочтительно вегетативной части растения, или клетка является клеткой водорослей, например, диатомовых (бацилляриофитов), зеленых водорослей (хлорофитов), зелено-голубых водорослей (цианофитов), золотисто-коричневых водорослей (хризофитов), гаптофитов, коричневых водорослей или водорослей гетероконтов, или клетка получена из или представляет собой микроорганизм, подходящий для ферментации, такой как гриб,

xii) один или более или все из промоторов выбраны промотором, не являющегося конститутивным промотором, предпочтительно тканеспецифического промотора, такого как специфичный для листьев и/или стеблей промотор, регулируемого развитием промотора, такого как специфичный для старения промотор, например, промотор SAG12, индуцибельного промотора или регулируемого циркадным ритмом промотора, причем по меньшей мере один из промоторов, функционально связанных с экзогенным полинуклеотидом, кодирующим полипептид фактора транскрипции, предпочтительно является промотором, не принадлежащим к конститутивным промоторам,

xiii) клетка содержит, в числе общих жирных кислот, среднецепочечные жирные кислоты, предпочтительно C12:0, C14:0 или обе, на уровне по меньшей мере 5% от общего содержания жирных кислот, и необязательно экзогенный полинуклеотид, кодирующий LPAAT, которая проявляет преимущественную активность в отношении жирных кислот со средней длиной цепи (C8-C14), предпочтительно C12:0 или C14:0;

xiv) клетка содержит, в числе общих жирных кислот, уровень олеиновой кислоты и/или уровень пальмитиновой кислоты, по меньшей мере на 2% выше, чем в соответствующей клетке,не содержащей экзогенного(ых) полинуклеотида(ов) и/или генетической(их) модификации(й), и/или уровень α-линоленовой кислоты (АЛК) и/или уровень линолевой кислоты по меньшей мере на 2% ниже, чем в соответствующей клетке, не содержащей экзогенного(ых) полинуклеотида(ов) и/или генетической(их) модификации(й),

xv) неполярный липид в клетке содержит модифицированный уровень общих стеролов, предпочтительно свободных (неэтерифицированных) стеролов, стероильных эфиров, стероилгликозидов, относительно неполярного липида в соответствующей клетке, не содержащей экзогенного(ых) полинуклеотида(ов) и/или генетической(их) модификации(й),

xvi) неполярный липид в клетке содержит воски и/или эфиры восков,

xvii) клетка является одним из членов популяции или коллекции размером по меньшей мере около 1000 таких клеток, предпочтительно в вегетативной части растения или семени,

xviii) клетка содержит экзогенный полинуклеотид, кодирующий супрессор сайленсинга, причем экзогенный полинуклеотид функционально связан с промотором, способным направлять экспрессию полинуклеотида в клетке,

xix) уровень одного или более неполярных липидов и/или общее содержание неполярных липидов в клетке по меньшей мере на 2% масс. выше, чем в соответствующей клетке, которая содержит экзогенные полинуклеотиды, кодирующие WRI1 Arabidposis thaliana (SEQ ID NO: 21) и DGAT1 Arabidopsis thaliana (SEQ ID NO: 1), и

xx) общее содержание полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК), сниженное относительно общего содержания ПНЖК в соответствующей клетке, не содержащей экзогенного(ых) полинуклеотида(ов) и/или генетической(их) модификации(й).

Следующие варианты реализации изобретения применяются к клетке по изобретению (включая второй, третий, четвертый и пятый аспекты), а также к способам получения клеток и к способам применения клеток. В указанных вариантах реализации изобретения, в которых клетка находится в вегетативной части растения, предпочтительно растение растет на грунте или было выращено на грунте.

В варианте реализации изобретения полипептид, принимающий участие в биосинтезе одного или более неполярных липидов, является ацилтрансферазой ацилов жирных кислот, который принимает участие в биосинтезе ТАГ, ДАГ или моноацилглицерида (МАГ) в клетке, предпочтительно ТАГ в клетке, такой как, например, DGAT, PDAT, LPAAT, GPAT или MGAT, предпочтительно DGAT или PDAT.

В варианте реализации изобретения полипептид, принимающий участие в катаболизме триацилглицеридов (ТАГ) в клетке, является липазой SDP1, полипептидом Cgi58, ацил-КоА оксидазой, такой как ACX1 или ACX2 или полипептидом, принимающим участие в β-окислении жирных кислот в клетке, такой как пероксисомальный транспортер АТФ-связывающей кассеты PXA1, предпочтительно липазой SDP1.

В варианте реализации изобретения полипептид покрытия масляного включения (ПМВ) является олеозином, таким как полиолеозин или калеозин, или предпочтительно связанным с липидными капельками белком (БСЛК).

В варианте реализации изобретения полипептид, который повышает экспорт жирных кислот из пластид клетки, является тиоэстеразой C16 или C18 жирных кислот, такой как полипептид FATA или полипептид FATB, переносчиком жирных кислот, таким как полипептид ABCA9, или длинноцепочечной ацил-КоА синтетазой (ДЦАС).

В варианте реализации изобретения полипептид, принимающий участие в импорте жирных кислот в пластиды клетки, является переносчиком жирных кислот или его субъединицей, предпочтительно полипептидом ТГД, таким как, например, полипептид TGD1, полипептид TGD2, полипептид TGD3 или полипептид TGD4.

В варианте реализации изобретения полипептид, принимающий участие в выработке диацилглицерида (ДАГ) в пластиде, является пластидной GPAT, пластидной LPAAT или пластидной PAP.

В одном варианте реализации изобретения клетка получена из или находится в растении 16:3 или в его вегетативной части или семени, причем клетка содержит одно или более или все из следующего:

a) экзогенный полинуклеотид, кодирующий полипептид, который повышает экспорт жирных кислот из пластид клетки, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей экзогенного полинуклеотида,

причем экзогенный полинуклеотид функционально связан с промотором, способным направлять экспрессию полинуклеотида в клетке.

В альтернативном варианте реализации изобретения клетка получена из или находится в растении 18:3 или в его вегетативной части или семени.

В варианте реализации изобретения клетка получена из или находится в листе стебле или корне растения, перед цветением растения, причем общее содержание неполярных липидов в клетке составляет по меньшей мере около 8%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 11%, от 8% до 15%, или от 9% до 12% (масс., в пересчете на сухую массу). В варианте реализации изобретения общее содержание неполярных липидов в клетке составляет по меньшей мере на 3%, более предпочтительно по меньшей мере на 5% больше, чем общее содержание неполярных липидов в соответствующей клетке, трансформированной генами, кодирующими WRI1 и DGAT, но не содержащей других экзогенных полинуклеотидов и генетических модификаций, описанных в настоящем документе для второго, третьего, четвертого и пятого аспектов. Более предпочтительно, степень повышения находится в клетке, расположенной в стебле или корне растения.

В варианте реализации изобретения введение одного или более экзогенных полинуклеотидов или генетических модификаций, предпочтительно экзогенного полинуклеотида, кодирующего ПМВ или тиоэстеразу жирного ацила, или генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в катаболизме триацилглицеридов (ТАГ) в клетке, более предпочтительно, экзогенного полинуклеотида, кодирующего тиоэстеразу FATA или БСЛК или снижающего экспрессию эндогенной липазы ТАГ, такой как липаза ТАГ SDP1, в клетке, приводит к синергетическому повышению общего содержания неполярного липида в клетке, при добавлении к паре трансгенов WRI1 и DGAT, особенно перед цветением растения и, даже более конкретно, в стеблях и/или корнях растения. Например, см. Примеры 8, 11 и 15. В предпочтительном варианте реализации изобретения повышение содержания ТАГ в клетке, расположенной в стебле или корне растения, по меньшей мере в 2 раза, более предпочтительно, по меньшей мере в 3 раза больше, чем в соответствующей клетки, трансформированной генами, кодирующими WRI1 и DGAT1, но не содержащей тиоэстеразы FATA, БСЛК и генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в катаболизме триацилглицеридов (ТАГ) в клетке. Наиболее предпочтительно, по меньшей мере промотор, направляющий экспрессию первого экзогенного полинуклеотида, является промотором, не принадлежащим к конститутивным промоторам.

Генетическая модификация может быть любой модификацией природной клетки, которая обеспечивает желательный эффект. Способы генетической модификации клеток хорошо известны из уровня техники. В варианте реализации изобретения каждая из одной или более или всех генетических модификаций представляет собой мутацию эндогенного гена, которая частично или полностью инактивирует ген, предпочтительно введенную мутацию, такую как точечная мутация, инсерция или делеция (или комбинация одного или более из этого). Точечная мутация может представлять собой преждевременный стоп-кодон, мутацию сайта сращивания, мутацию сдвига рамки или мутацию замены аминокислоты, которая снижает активность гена или кодируемого полипептида. Делеция может состоять из одного или более нуклеотидов в пределах транскрибированного экзона или промотора гена, или простираться сквозь или в более чем один экзон, или расширяться до делеции всего гена. Предпочтительно делецию вводят с применением технологий ZF, ПАТЭН или ККППРП. В варианте реализации изобретения одна или более или все генетические модификации представляют собой экзогенный полинуклеотид, кодирующий молекулу РНК, которая подавляет экспрессию эндогенного гена, причем экзогенный полинуклеотид функционально связан с промотором, способным направлять экспрессию полинуклеотида в клетке. Примеры экзогенного полинуклеотида, снижающего экспрессию эндогенного гена, выбраны из группы, состоящей из антисмыслового полинуклеотида, смыслового полинуклеотида, микроРНК, полинуклеотида, кодирующего полипептид, который связывается с эндогенным ферментом, молекулой двухцепочечной РНК и полученной из нее процессированной молекулой РНК. В варианте реализации изобретения клетка содержит генетические модификации, которые представляют собой введенную мутацию в эндогенном гене и экзогенном полинуклеотиде, кодирующем молекулу РНК, снижающую экспрессию другого эндогенного гена.

В варианте реализации изобретения экзогенный полинуклеотид, кодирующий WRI1, содержит одно или более из следующего:

i) нуклеотиды, кодирующие полипептид, содержащий аминокислоты, последовательность которых приведена в любой из SEQ ID NO: 21-75 или 205-210, или его биологически активный фрагмент или полипептид, аминокислотная последовательность которого по меньшей мере на 30% идентична любой одной или более из SEQ ID NO: 21-75 или 205-210,

ii) нуклеотиды, последовательность которых по меньшей мере на 30% идентична i), и

iii) нуклеотиды, которые гибридизуются с i) и/или ii) в строгих условиях. Предпочтительно, полипептид WRI1 представляет собой полипептид WRI1, не являющийся WRI1 Arabidopsis thaliana (SEQ ID NO: 21 или 22). Более предпочтительно, полипептид WRI1 содержит аминокислоты, последовательность которых приведена в SEQ ID NO: 208, или их биологически активный фрагмент или полипептид, аминокислотная последовательность которого по меньшей мере на 30% идентична им.

В варианте реализации второго, третьего, четвертого или пятого аспектов изобретения рекомбинантная клетка представляет собой клетку клубня картофеля (Solanum tuberosum), клетку клубня или листа сахарной свеклы (Beta vulgaris), клетку сахарного тростника (вид Saccharum) или стебля или листа сорго (Sorghum bicolor), клетку эндосперма однодольного растения, причем клетка содержит повышенное количество общих жирных кислот относительно соответствующей клетки эндосперма дикого типа, такой как, например, клетка зерна пшеницы (Triticum aestivum), зерна риса (вид Oryza) или семени кукурузы (Zea mays), клетка семени вида Brassica, содержащая повышенное количество общих жирных кислот, например, семя рапса, или клетка зерна боба, содержащая повышенное количество общих жирных кислот, например, семени сои (Glycine max).

В шестом аспекте настоящего изобретения предлагается организм, не относящийся к человеческому роду, или его часть, содержащий или состоящий из одной или более клеток по изобретению.

В варианте реализации изобретения часть организма, не относящегося к человеческому роду, представляет собой семя, плод или вегетативную часть растения, такую как воздушная часть растения или зеленая часть, например, лист или стебель.

В другом варианте реализации изобретения организм, не относящийся к человеческому роду, представляет собой фототрофный организм, такой как растение или водоросль или организм, подходящий для ферментации, такой как гриб.

В седьмом аспекте настоящего изобретения предлагается трансгенное растение или его часть, предпочтительно вегетативная часть растения, содержащее:

c) генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в катаболизме триацилглицеридов (ТАГ) в растении, по сравнению с соответствующим растением, не содержащим генетической модификации,

d) третьего экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид, который повышает экспорт жирных кислот из пластид клеток растения, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей четвертого экзогенного полинуклеотида, и

причем каждый экзогенный полинуклеотид функционально связан с промотором, способным направлять экспрессию полинуклеотида в растении.

В варианте реализации изобретения растение или его часть содержит a), b) и c), и необязательно d) или e).

В варианте реализации изобретения растение или его часть содержит a), b) и d), и необязательно c) или e).

В варианте реализации изобретения растение или его часть содержит a), b) и e), и необязательно c) или d).

В предпочтительном варианте реализации изобретения присутствие c), d) или e), вместе с a) и b), повышает общее содержание неполярного липида в растении или его части, предпочтительно вегетативной части растения, такой как лист, корень или стебель, относительно соответствующего растения или его части, которое содержит a) и b), но не содержит каждого из c), d) и e). Более предпочтительно, повышение является синергетическим. Наиболее предпочтительно, по меньшей мере промотор, направляющий экспрессию первого экзогенного полинуклеотида, является промотором, не принадлежащим к конститутивным промоторам.

В варианте реализации изобретения растение или его часть дополнительно содержит одно или более или все из:

a) пятого экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид покрытия масляного включения (ПМВ), предпочтительно БСЛК,

b) второй генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в импорте жирных кислот в пластиды растения, по сравнению с соответствующим растением, не содержащим второй генетической модификации, и

c) третьей генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в выработке диацилглицерида (ДАГ) в пластиде, по сравнению с соответствующим растением, не содержащим третьей генетической модификации.

В варианте реализации изобретения трансгенное растение или его часть содержит:

a) первый экзогенный полинуклеотид, кодирующий полипептид фактора транскрипции, который повышает экспрессию одного или более гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в растении, предпочтительно экспрессирующийся промотором, не являющегося конститутивным промотором,

причем каждый экзогенный полинуклеотид функционально связан с промотором, способным направлять экспрессию полинуклеотида в растении, и необязательно растение или его часть дополнительно содержит одно или более или все из:

e) четвертого экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид, который повышает экспорт жирных кислот из пластид растения, по сравнению с соответствующим растением, не содержащим четвертого экзогенного полинуклеотида,

f) второй генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в импорте жирных кислот в пластиды растения, по сравнению с соответствующим растением, не содержащим второй генетической модификации, и

g) третьей генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в выработке диацилглицерида (ДАГ) в пластиде, по сравнению с соответствующим растением, не содержащим третьей генетической модификации.

В варианте реализации изобретения часть является вегетативной частью, причем один или более или все из промоторов экспрессируются в вегетативной части с более высокими уровнями, чем в семени растения.

В варианте реализации изобретения полипептид фактора транскрипции, который повышает экспрессию одного или более гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в растении, является полипептидом WRI1, и полипептид, принимающий участие в биосинтезе одного или более неполярных липидов, является DGAT или PDAT.

В упомянутых выше вариантах реализации изобретения растение предпочтительно растет на грунте или было выращено на грунте, с последующим сбором урожая части растения. Предпочтительно, вегетативная часть растения содержит по меньшей мере 8% масс. ТАГ (% от сухой массы), например, от 8% до 75% или от 8% до 30%. Более предпочтительно, содержание ТАГ составляет по меньшей мере 10%, например, от 10% до 75% или от 10% до 30%. Предпочтительно, указанные уровни ТАГ присутствуют в вегетативной части до или во время стадии цветения или до стадии завязывания семян в ходе развития растения. В указанных вариантах реализации изобретения соотношение содержания ТАГ в листьях к содержанию ТАГ в стеблях растения предпочтительно составляет от 1:1 до 10:1, и/или соотношение повышено по сравнению с соответствующей клеткой, содержащей первый и второй экзогенные полинуклеотиды, но не содержащей первой генетической модификации.

В упомянутых выше вариантах реализации изобретения общее содержание неполярного липида в растении или его части предпочтительно по меньшей мере на 3%, более предпочтительно, по меньшей мере на 5% выше, чем общее содержание неполярного липида в соответствующем растении или его части, трансформированной генами, кодирующими WRI1 и DGAT, но не содержащем других экзогенных полинуклеотидов и генетических модификаций, описанных в настоящем документе. Более предпочтительно, указанная степень повышения присутствует в тканях стебля или корня растения.

В упомянутых выше вариантах реализации изобретения введение одного или более экзогенных полинуклеотидов или генетических модификаций, предпочтительно экзогенного полинуклеотида, кодирующего ПМВ или тиоэстеразу жирных кислот, или генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в катаболизме триацилглицеридов (ТАГ) в клетке, более предпочтительно, экзогенного полинуклеотида, кодирующего тиоэстеразу БСЛК или FATA или снижающего экспрессию эндогенной липазы ТАГ, такой как липаза ТАГ SDP1 в клетке, предпочтительно приводит к синергетическому повышению общего содержания неполярного липида в растении или его части, при добавлении к паре трансгенов WRI1 и DGAT, особенно перед цветением растения, и даже более конкретно, в ткани стебля и/или корня растения. Например, см. Примеры 8, 11 и 15. В предпочтительном варианте реализации изобретения повышение содержания ТАГ в тканях листа, стебля или корня или всех трех частей растения составляет по меньшей мере в 2 раза, более предпочтительно, по меньшей мере в 3 раза, относительно соответствующей части, трансформированной генами, кодирующими WRI1 и DGAT1, но не содержащей экзогенного полинуклеотида, кодирующего ПМВ или тиоэстеразу жирных кислот и генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в катаболизме триацилглицеридов (ТАГ) в клетке.

В упомянутых выше вариантах реализации изобретения растение или его часть предпочтительно содержит второй экзогенный полинуклеотид, кодирующий DGAT, и первую генетическую модификацию, подавляющую выработку эндогенной липазы SDP1 Более предпочтительно, растение или его часть не содержит экзогенного полинуклеотида, кодирующего PDAT, и/или представляет собой растение или его часть, не принадлежащие к Nicotiana benthamiana и/или Brassica napus, и/или WRI1 не является WRI1 Arabidopsis thaliana (SEQ ID NO: 21 или 22). В варианте реализации изобретения растение не является сахарным тростником. Наиболее предпочтительно, по меньшей мере один из экзогенных полинуклеотидов в растении экспрессируется промотором, который не является конститутивным промотором, например, таким как промотор, который предпочтительно экспрессируется в зеленых тканях или стеблях растения или который регулируется после начала цветения или в ходе старения. Предпочтительно, по меньшей мере первый экзогенный полинуклеотид (кодирующий фактор транскрипции) экспрессируется таким промотором.

В восьмом аспекте настоящего изобретения предлагается трансгенное растение или его часть, предпочтительно вегетативная часть растения, содержащее:

c) третий экзогенный полинуклеотид, кодирующий полипептид покрытия масляного включения (ПМВ), предпочтительно БСЛК,

причем каждый экзогенный полинуклеотид функционально связан с промотором, способным направлять экспрессию полинуклеотида в растении, и, при этом, растение содержит повышенный уровень одного или более неполярных липидов и/или повышенное количество полипептида ПМВ относительно соответствующего растения, которое содержит третий экзогенный полинуклеотид, нуклеотидная последовательность которого комплементарна последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 176.

В предпочтительном варианте реализации изобретения присутствие третьего экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид ПМВ, вместе с первым и вторым экзогенными полинуклеотидами, повышает общее содержание неполярного липида в растении или его части, предпочтительно вегетативной части растения, такой как лист, корень или стебель, относительно соответствующей части растения, которая содержит первый и второй экзогенные полинуклеотиды, но не содержит третьего экзогенного полинуклеотида. Более предпочтительно, повышение является синергетическим. Наиболее предпочтительно, по меньшей мере промотор, направляющий экспрессию первого экзогенного полинуклеотида, является промотором, не принадлежащим к конститутивным промоторам.

В варианте реализации восьмого аспекта изобретения растение или его часть дополнительно содержит одно или более или все из:

d) первой генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в катаболизме триацилглицеридов (ТАГ) в растении, по сравнению с соответствующим растением, не содержащим первой генетической модификации,

В варианте реализации изобретения полипептид фактора транскрипции, который повышает экспрессию одного или более гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в растении, является полипептидом WRI1, и полипептид, принимающий участие в биосинтезе одного или более неполярных липидов, является DGAT или PDAT.

В варианте реализации изобретения клетка содержит два экзогенных полинуклеотида, кодирующие два различных полипептида фактора транскрипции, которые повышают экспрессию одного или более гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в растении, такие как WRI1 и LEC2 или WRI1 и LEC1.

В девятом аспекте настоящего изобретения предлагается трансгенное растение или его часть, предпочтительно вегетативная часть растения, содержащее первый экзогенный полинуклеотид, кодирующий полипептид фактора транскрипции, который повышает экспрессию одного или более гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в растении, и одно или более или все из:

a) второго экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид, который повышает экспорт жирных кислот из пластид растения, по сравнению с соответствующим растением, не содержащим второго экзогенного полинуклеотида,

b) первой генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в импорте жирных кислот в пластиды растения, по сравнению с соответствующим растением, не содержащим первой генетической модификации, и

c) второй генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в выработке диацилглицерида (ДАГ) в пластиде, по сравнению с соответствующим растением, не содержащим второй генетической модификации,

В варианте реализации изобретения растение или его часть, предпочтительно вегетативная часть растения, содержит a) и необязательно b) или c)

В варианте реализации девятого аспекта изобретения растение или его часть дополнительно содержит одно или более или все из:

e) третьей генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в катаболизме триацилглицеридов (ТАГ) в растении, по сравнению с соответствующим растением, не содержащим третьей генетической модификации, и

В предпочтительном варианте реализации изобретения растение или его часть, предпочтительно вегетативная часть растения, содержит первый, второй и третий экзогенные полинуклеотиды и необязательно третью генетическую модификацию или четвертый экзогенный полинуклеотид.

В предпочтительном варианте реализации изобретения присутствие второго экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид, который повышает экспорт жирных кислот из пластид растения, предпочтительно являющийся тиоэстеразой жирного ацила, такой как полипептид FATA, вместе с первым и, если они присутствуют, третьими экзогенными полинуклеотидами повышает общее содержание неполярного липида в части растения, предпочтительно вегетативной части растения, такой как лист, корень или стебель, относительно соответствующей части растения, которая содержит первый и, если они присутствуют, третьи экзогенные полинуклеотиды, но не содержит второго экзогенного полинуклеотида. Более предпочтительно, повышение, обеспечиваемое вторым экзогенным полинуклеотидом, является синергетическим. Наиболее предпочтительно, по меньшей мере промотор, направляющий экспрессию первого экзогенного полинуклеотида, является промотором, не принадлежащим к конститутивным промоторам.

В варианте реализации изобретения растение содержит два экзогенных полинуклеотида, кодирующие два различных полипептида фактора транскрипции, которые повышают экспрессию одного или более гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в клетке, таких как WRI1 и LEC2 или WRI1 и LEC1.

В вариантах реализации седьмого, восьмого и девятого аспектов изобретения, в которых растение содержит экзогенный полинуклеотид, кодирующий тиоэстеразу жирных кислот, такую как, например, полипептид FATA или FATB, тиоэстераза предпочтительно является полипептидом FATA или тиоэстеразой жирных кислот, кроме тиоэстеразы среднецепочечных жирных кислот.

В десятом аспекте настоящего изобретения предлагается трансгенное растение или его часть, предпочтительно вегетативная часть, содержащее:

a) первый экзогенный полинуклеотид, кодирующий полипептид фактора транскрипции, который повышает экспрессию одного или более гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в растении, предпочтительно фактора транскрипции WRI,

c) третий экзогенный полинуклеотид, кодирующий полипептид, который повышает экспорт C8-C14 жирных кислот из пластид растения, по сравнению с соответствующим растением, не содержащим третьего экзогенного полинуклеотида,

В предпочтительном варианте реализации изобретения присутствие третьего экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид, который повышает экспорт C8-C14 жирных кислот из пластид растения, вместе с первым и вторым экзогенными полинуклеотидами, повышает общее содержание СЦЖК в части растения, предпочтительно вегетативной части растения, такой как лист, корень или стебель, относительно соответствующей части растения, которая содержит первый и второй экзогенные полинуклеотиды, но не содержит третьего экзогенного полинуклеотида. Более предпочтительно, повышение, обеспечиваемое третьим экзогенным полинуклеотидом, является синергетическим. Наиболее предпочтительно, по меньшей мере промотор, направляющий экспрессию первого экзогенного полинуклеотида, является промотором, не принадлежащим к конститутивным промоторам.

В варианте реализации десятого аспекта изобретения трансгенное растение или его часть дополнительно содержит одно или более или все из:

e) первой генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в катаболизме триацилглицеридов (ТАГ) в растении, по сравнению с соответствующим растением, не содержащим первой генетической модификации,

g) второй генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в импорте жирных кислот в пластиды растения, по сравнению с соответствующим растением, не содержащим второй генетической модификации, и

h) третьей генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в выработке диацилглицерида (ДАГ) в пластиде, по сравнению с соответствующим растением, не содержащим третьей генетической модификации,

В варианте реализации десятого аспекта изобретения фактор транскрипции не является WRI1 Arabidopsis thaliana (SEQ ID NO: 21 или 22), и/или растение не является N. benthamiana.

В варианте реализации десятого аспекта изобретения экзогенный полинуклеотид, кодирующий LPAAT, содержит аминокислоты, последовательность которых приведена в SEQ ID NO: 200, или их биологически активный фрагмент или полипептид LPAAT, аминокислотная последовательность которого по меньшей мере на 30% идентична им.

В варианте реализации десятого аспекта изобретения один или более или все из промоторов экспрессируются в вегетативной части с более высокими уровнями, чем в семени растения, предпочтительно включая по меньшей мере промотор, который экспрессирует первый экзогенный полинуклеотид.

В варианте реализации десятого аспекта изобретения жирная кислота со средней длиной цепи представляет собой по меньшей мере миристиновую кислоту (C14:0). В предпочтительном варианте реализации изобретения содержание миристиновой кислоты в части растения, предпочтительно вегетативной части растения, составляет по меньшей мере около 8%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 11%, по меньшей мере около 12%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, от 8% до 25%, от 8% до 20%, от 10% до 25%, от 11% до 25%, от около 15% до 25%, от около 20% до 25% (масс./масс., в пересчете на сухую массу).

В вариантах реализации шестого, седьмого, восьмого, девятого и десятого аспектов изобретения растение предпочтительно растет на грунте или было выращено на грунте, с последующим сбором урожая части растения, предпочтительно вегетативной части растения, причем часть растения содержит по меньшей мере 8% масс. ТАГ (% от сухой массы), например, от 8% до 75% или от 8% до 30%. Более предпочтительно, содержание ТАГ составляет по меньшей мере 10%, например, от 10% до 75% или от 10% до 30%. Предпочтительно, указанные уровни ТАГ присутствуют в вегетативной части до или во время стадии цветения или до стадии завязывания семян в ходе развития растения. В указанных вариантах реализации изобретения соотношение содержания ТАГ в листьях к содержанию ТАГ в стеблях растения предпочтительно составляет от 1:1 до 10:1, и/или соотношение повышено по сравнению с соответствующей клеткой, содержащей первый и второй экзогенные полинуклеотиды, но не содержащей первой генетической модификации.

В вариантах реализации шестого, седьмого, восьмого, девятого и десятого аспектов изобретения растение или его часть предпочтительно содержит экзогенный полинуклеотид, кодирующий DGAT, и генетическую модификацию, подавляющую выработку эндогенной липазы SDP1. В предпочтительном варианте реализации изобретения растение или его часть не содержит экзогенного полинуклеотида, кодирующего PDAT, и/или растение не является растением Nicotiana benthamiana. Наиболее предпочтительно, по меньшей мере один из экзогенных полинуклеотидов в растении или его части экспрессируется промотором, который не является конститутивным промотором, например, таким как промотор, который предпочтительно экспрессируется в зеленых тканях или стеблях растения или который регулируется в ходе старения.

В одиннадцатом аспекте настоящего изобретения предлагается растение, содержащее вегетативную часть, или его вегетативная часть, причем общее содержание неполярного липида в вегетативной части составляет по меньшей мере около 18%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, от 18% до 75%, от около 20% до 75%, от около 30% до 75%, от около 40% до 75%, от около 50% до 75%, от около 60% до 75% или от около 25% до 50% (масс., в пересчете на сухую массу), и, при этом, неполярный липид содержит по меньшей мере 90% триглицеридов (ТАГ).

В предпочтительных вариантах реализации изобретения вегетативная часть растения отличается признаками, описанными в седьмом, восьмом, девятом и десятом аспектах. Растение предпочтительно является растением 18:3.

В варианте реализации упомянутых выше аспектов изобретения растительную клетку или часть растения обрабатывают таким образом, что она становится неспособной размножаться или дать начало живому растению, т.е. ее убивают. Например, растительную клетку или часть растения высушивают и/или перемалывают.

В двенадцатом аспекте настоящего изобретения предлагается растение, содержащее вегетативную часть, или его вегетативная часть, причем содержание ТАГ в вегетативной части составляет по меньшей мере около 18%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, от 18% до 75%, от около 20% до 75%, от около 30% до 75%, от около 40% до 75%, от около 50% до 75%, от около 60% до 75% или от около 25% до 50% (масс., в пересчете на сухую массу), и, при этом, неполярный липид содержит по меньшей мере 90% триацилглицеридов (ТАГ). Растение предпочтительно является растением 18:3.

В тринадцатом аспекте настоящего изобретения предлагается растение, содержащее вегетативную часть, или его вегетативная часть, причем общее содержание неполярного липида в вегетативной части составляет по меньшей мере 8%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 11%, по меньшей мере около 12%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, от 8% до 75%, от 10% до 75%, от 11% до 75%, от около 15% до 75%, от около 20% до 75%, от около 30% до 75%, от около 40% до 75%, от около 50% до 75%, от около 60% до 75%, или от около 25% до 50% (масс., в пересчете на сухую массу), и, при этом, неполярный липид содержит по меньшей мере 90% триацилглицеридов (ТАГ), при том, что растение является растением 16:3 или его вегетативной частью.

В четырнадцатом аспекте настоящего изобретения предлагается растение, содержащее вегетативную часть, или его вегетативная часть, причем содержание ТАГ в вегетативной части составляет по меньшей мере 8%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 11%, по меньшей мере около 12%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, от 8% до 75%, от 10% до 75%, от 11% до 75%, от около 15% до 75%, от около 20% до 75%, от около 30% до 75%, от около 40% до 75%, от около 50% до 75%, от около 60% до 75%, или от около 25% до 50% (масс., в пересчете на сухую массу), и, при этом, неполярный липид содержит по меньшей мере 90% триацилглицеридов (ТАГ), при том, что растение является растением 16:3 или его вегетативной частью.

В варианте реализации изобретения клетка по изобретению (включая второй, третий, четвертый или пятый аспекты) представляет собой клетку следующих видов или родов, или растение или его часть по изобретению (включая шестой, седьмой, восьмой, девятый, десятый, одиннадцатый, двенадцатый, тринадцатый и четырнадцатый аспекты) представляет собой Acrocomia aculeata (макаубская пальма), Arabidopsis thaliana, Aracinis hypogaea (арахис), Astrocaryum murumuru (мурумуру), Astrocaryum vulgare (тукума), Attalea geraensis (атталия), Attalea humilis (американская масличная пальма), Attalea oleifera (андайя), Attalea phalerata (урикури), Attalea speciosa (бабассу), Avena sativa (овес), Beta vulgaris (сахарная свекла), виды Brassica, например, Brassica carinata, Brassica juncea, Brassica napobrassica, Brassica napus (рапс), Camelina sativa (ложный лен), Cannabis sativa (конопля), Carthamus tinctorius (сафлор красильный), Caryocar brasiliense (пекви), Cocos nucifera (кокосовый орех), Crambe abyssinica (абиссинская капуста), Cucumis melo (дыня), Elaeis guineensis (африканская пальма), Glycine max (соя), Gossypium hirsutum (хлопчатник), виды Helianthu, например, Helianthus annuus (подсолнечник), Hordeum vulgare (ячмень), Jatropha curcas (лечебный орех), Joannesia princeps (лещина арара), виды Lemna (ряска), такие как Lemna aequinoctialis, Lemna disperma, Lemna ecuadoriensis, Lemna gibba (ряска горбатая), Lemna japonica, Lemna minor, Lemna minuta, Lemna obscura, Lemna paucicostata, Lemna perpusilla, Lemna tenera, Lemna trisulca, Lemna turionifera, Lemna valdiviana, Lemna yungensis, Licania rigida (ойтика), Linum usitatissimum (лен), Lupinus angustifolius (люпин), Mauritia flexuosa (пальма бурити), Maximiliana maripa (пальма инайя), виды Miscanthus, такие как Miscanthus x giganteus и Miscanthus sinensis, виды Nicotiana (табак), такие как Nicotiana tabacum или Nicotiana benthamiana, Oenocarpus bacaba (бакаба-до-азейте), Oenocarpus bataua (патайя), Oenocarpus distichus (бакаба-де-лек), виды Oryza (рис), такие как Oryza sativa и Oryza glaberrima, Panicum virgatum (просо прутьевидное), Paraqueiba paraensis (марь), Persea amencana (авокадо), Pongamia pinnata (индийский бук), Populus trichocarpa, Ricinus communis (клещевина обыкновенная), виды Saccharum (сахарный тростник), Sesamum indicum (кунжут), Solanum tuberosum (картофель), виды Sorghum, например, Sorghum bicolor, Sorghum vulgare, Theobroma grandiforum (какао), виды Trifolium, Trithrinax brasiliensis (бразильская игольчатая пальма), виды Triticum (пшеница),Triticum aestivum и Zea mays (кукуруза).

В пятнадцатом аспекте настоящего изобретения предлагается растение картофеля или его часть, предпочтительно клубень, диаметр которого составляет по меньшей мере 2 см, и содержание ТАГ в котором составляет по меньшей мере 0,5%, в пересчете на сухую массу, и/или общее содержание жирных кислот составляет по меньшей мере 1%, предпочтительно по меньшей мере 1,5% или по меньшей мере 2,0%, в пересчете на сухую массу. Картофельный клубень предпочтительно содержит повышенный уровень мононенасыщенных жирных кислот (МНЖК) и/или сниженный уровень полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК), как в общем содержании жирных кислот, так и во фракции ТАГ общего содержания жирных кислот, например, повышенный уровень олеиновой кислоты и сниженный уровень АЛК, по сравнению с соответствующим картофельным клубнем, не содержащим генетических модификаций и/или экзогенного(ых) полинуклеотида(ов). Предпочтительно, уровень АЛК в общем содержании жирных кислот клубня снижен до менее чем 10%, и/или уровень олеиновой кислоты в общем содержании жирных кислот повышен по меньшей мере до 5%, предпочтительно по меньшей мере до 10% или, более предпочтительно, по меньшей мере до 15%, по сравнению с соответствующим картофельным клубнем, не содержащим генетических модификаций и/или экзогенного(ых) полинуклеотида(ов). Кроме того, в варианте реализации изобретения уровень пальмитиновой кислоты в общем содержании жирных кислот клубня повышен, и/или уровни стеариновой кислоты (18:0) снижены в общем содержании жирных кислот клубня, по сравнению с соответствующим картофельным клубнем, не содержащим генетических модификаций и/или экзогенного(ых) полинуклеотида(ов). В варианте реализации изобретения содержание крахмала в клубне составляет от около 90% до 100% масс., по сравнению с клубнем дикого типа, при выращивании в одинаковых условиях.

В варианте реализации изобретения растение картофеля или его часть по изобретению, предпочтительно клубень, содержит:

b) второй экзогенный полинуклеотид, кодирующий полипептид, принимающий участие в биосинтезе одного или более неполярных липидов,

причем каждый экзогенный полинуклеотид функционально связан с промотором, способным направлять экспрессию полинуклеотида в клубне в процессе роста растения картофеля.

В предпочтительном варианте реализации изобретения картофельный клубень дополнительно содержит одно или более или все из:

d) первой генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в катаболизме триацилглицеридов (ТАГ) в клубне, по сравнению с соответствующим клубнем, не содержащим первой генетической модификации, например, где полипептид является SDP1,

e) четвертого экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид, который повышает экспорт жирных кислот из пластид клубня, по сравнению с соответствующим клубнем, не содержащим четвертого экзогенного полинуклеотида,

f) второй генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в импорте жирных кислот в пластиды клубня, по сравнению с соответствующим клубнем, не содержащим второй генетической модификации, и

g) третьей генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в выработке диацилглицерида (ДАГ) в пластиды клубня, по сравнению с соответствующим клубнем, не содержащим третьей генетической модификации.

В дальнейших вариантах реализации изобретения дополнительные генетические модификации в клубне являются такими, как определено в контексте клетки или растения по изобретению.

В шестнадцатом аспекте настоящего изобретения предлагается растение сорго или сахарного тростника или его часть, предпочтительно стебель или лист, общее содержание жирных кислот в котором составляет по меньшей мере 6% или по меньшей мере 8%, в пересчете на сухую массу, и/или содержание ТАГ в стебле составляет по меньшей мере 2% или по меньшей мере 3%, в пересчете на сухую массу, и/или содержание ТАГ повышено по меньшей мере в 50 раз в стебле и/или по меньшей мере в 100 раз в листе, в пересчете на массу. В вариантах реализации изобретения растение сорго или сахарного тростника или его часть, предпочтительно стебель или лист, отличается признаками, определенными в контексте клетки или растения или его части по изобретению.

В семнадцатом аспекте настоящего изобретения предлагается растение сорго или сахарного тростника или его часть, предпочтительно стебель или лист, которое содержит:

b) второй экзогенный полинуклеотид, кодирующий полипептид, принимающий участие в биосинтезе одного или более неполярных липидов, причем каждый экзогенный полинуклеотид функционально связан с промотором, способным направлять экспрессию полинуклеотида в растении или его части в процессе роста растения.

Предпочтительно, промотор, который направляет экспрессию по меньшей мере первого экзогенного полинуклеотида, представляет собой промотор, не являющийся убихитиновым промотором риса (Rubi3). Более предпочтительно, промотор не является убихитиновым промотором или любым другим конститутивным промотором. Предпочтительно, первый и второй экзогенные полинуклеотиды и их соответствующие промоторы объединены в одной генетической конструкции, которая интегрирована в геном растения.

В варианте реализации изобретения содержание сахара в стебле сахарного тростника составляет от около 70% до 100% масс. относительно стебля сахарного тростника дикого типа, при выращивании в одинаковых условиях. В качестве альтернативы, содержание сахара составляет от 50% до 70%.

В варианте реализации изобретения растение сорго или сахарного тростника или его часть, предпочтительно стебель или лист, по изобретению содержит:

причем по меньшей мере один из экзогенных полинуклеотидов, предпочтительно по меньшей мере первый экзогенный полинуклеотид функционально связан с промотором, который предпочтительно экспрессируется в стебле(ях) относительно листьев в процессе роста растения.

В варианте реализации изобретения растение сорго или сахарного тростника или его часть по изобретению дополнительно содержит одно или более или все из:

d) первой генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в катаболизме триацилглицеридов (ТАГ) в растении или его части, по сравнению с соответствующим растением или его частью, не содержащими первой генетической модификации,

e) четвертого экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид, который повышает экспорт жирных кислот из пластид растения или его части, по сравнению с соответствующим растением или его частью, не содержащими четвертого экзогенного полинуклеотида,

f) второй генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в импорте жирных кислот в пластиды растения или его части, по сравнению с соответствующим растением или его частью, не содержащими второй генетической модификации, и

g) третьей генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в выработке диацилглицерида (ДАГ) в пластидах растения или его части, по сравнению с соответствующим растением или его частью, не содержащими третьей генетической модификации.

Растение сорго или сахарного тростника или его часть по изобретению предпочтительно содержит повышенный уровень мононенасыщенных жирных кислот (МНЖК) и/или сниженный уровень полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК), как в общем содержании жирных кислот, так и во фракции ТАГ общего содержания жирных кислот, например, повышенный уровень олеиновой кислоты и сниженный уровень АЛК, по сравнению с соответствующим растением или его частью, не содержащими генетических модификаций и/или экзогенного(ых) полинуклеотида(ов).

Предпочтительно, уровень АЛК в общем содержании жирных кислот составляет менее чем 10% и/или уровень олеиновой кислоты в общем содержании жирных кислот составляет по меньшей мере 5%, предпочтительно по меньшей мере 10% или более предпочтительно по меньшей мере 15%, по сравнению с соответствующим растением или его частью, не содержащими генетических модификаций и/или экзогенного(ых) полинуклеотида(ов).

В дальнейших вариантах реализации изобретения дополнительные генетические модификации в растении сорго или сахарного тростника или его части являются такими, как определено в контексте клетки или растения по изобретению.

В восемнадцатом аспекте настоящего изобретения предлагается трансгенное однодольное растение или его часть, предпочтительно лист, семя, стебель, корень или эндосперм, общее содержание жирных кислот или содержание ТАГ в котором повышено по меньшей мере в 5 раз, в пересчете на массу, по сравнению с соответствующим нетрансгенным однодольным растением или его частью. В качестве альтернативы, в изобретении предлагается трансгенное однодольное растение, содержание ТАГ в эндосперме которого составляет по меньшей мере 2,0%, предпочтительно по меньшей мере 3%, более предпочтительно, по меньшей мере 4% или по меньшей мере 5%, масс., или часть растения, предпочтительно лист, стебель, корень, зерно или эндосперм. В варианте реализации изобретения содержание ТАГ в эндосперме составляет по меньшей мере 2%, что по меньшей мере в 5 раз выше, чем в соответствующем нетрансгенном эндосперме. Предпочтительно, растение обладает полной мужской и женской фертильностью, его пыльца по существу является на 100% жизнеспособной, и скорость прорастания его семени составляет от 70% до 100% относительно соответствующего семени дикого типа. В варианте реализации изобретения трансгенное растение представляет собой растение-потомок, по меньшей мере через два поколения от начального трансгенного растения пшеницы, и предпочтительно является гомозиготным по трансгенам. В вариантах реализации изобретения однодольное растение или его часть, предпочтительно лист, стебель, семя или эндосперм, дополнительно отличается одним или более признаками, определенными в контексте клетки или растения по изобретению.

В девятнадцатом аспекте настоящего изобретения предлагается однодольное растение или его часть, предпочтительно лист, зерно, стебель или эндосперм, которое содержит:

причем каждый экзогенный полинуклеотид функционально связан с промотором, способным направлять экспрессию полинуклеотида в растении или его части в процессе роста растения.

Предпочтительно, промотор, который направляет экспрессию по меньшей мере первого экзогенного полинуклеотида, представляет собой промотор, не являющийся конститутивным промотором.

В варианте реализации изобретения содержание крахмала в семени однодольного растения по изобретению составляет от около 70% до 100% масс. относительно семени дикого типа, если растения, от которых они получены, выращены в одинаковых условиях. Предпочтительными однодольными растениями в упомянутых выше двух аспектах являются пшеница, рис, сорго и кукуруза (маис).

В варианте реализации изобретения однодольное растение или его часть, предпочтительно лист, зерно или эндосперм, по изобретению содержит:

причем по меньшей мере один из экзогенных полинуклеотидов, предпочтительно по меньшей мере первый экзогенный полинуклеотид, функционально связан с промотором, который в процессе роста растения экспрессируется в эндосперме с более высокими уровнями, чем в листьях.

В предпочтительном варианте реализации изобретения однодольное растение или его часть дополнительно содержит одно или более или все из:

d) первой генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в катаболизме триацилглицеридов (ТАГ) в растении или его части, по сравнению с соответствующим растением или его частью, не содержащими первой генетической модификации,

В варианте реализации изобретения однодольное растение обладает признаками a), b), одним или обоими из d) и e), и необязательно одним из c), f) и g).

Однодольное растение или его часть, предпочтительно лист, семя, стебель или эндосперм по изобретению предпочтительно содержит повышенный уровень мононенасыщенных жирных кислот (МНЖК) и/или сниженный уровень полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК), как в общем содержании жирных кислот, так и во фракции ТАГ общего содержания жирных кислот, например, повышенный уровень олеиновой кислоты и сниженный уровень ЛК (18:2), по сравнению с соответствующим растением или его частью, не содержащими генетических модификаций и/или экзогенного(ых) полинуклеотида(ов).

Предпочтительно, уровень линолевой кислоты (ЛК, 18:2) в общем содержании жирных кислот семени или эндосперма снижен по меньшей мере на 5%, и/или уровень олеиновой кислоты в общем содержании жирных кислот повышен по меньшей мере на 5% относительно соответствующего растения дикого типа или его части, предпочтительно по меньшей мере на 10% или, более предпочтительно, по меньшей мере на 15%, по сравнению с соответствующим растением или его частью, не содержащими генетических модификаций и/или экзогенного(ых) полинуклеотида(ов).

Следующие варианты реализации изобретения применяются к каждому из растений и их частей в соответствии с пятнадцатым, шестнадцатым, семнадцатым, восемнадцатым и девятнадцатым аспектами.

В варианте реализации изобретения полипептид фактора транскрипции, который повышает экспрессию одного или более гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в растении или его части, является полипептидом WRI1, и полипептид, принимающий участие в биосинтезе одного или более неполярных липидов, является DGAT или PDAT.

В варианте реализации изобретения растение или его часть содержит два экзогенных полинуклеотида, кодирующие два различных полипептида фактора транскрипции, которые повышают экспрессию одного или более гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в клетке, например, WRI1 и LEC2 или WRI1 и LEC1.

В каждом из вариантов реализации клеток, растений и их частей по изобретению (включая второй, третий, четвертый, пятый, шестой, седьмой, восьмой, девятый, десятый, одиннадцатый, двенадцатый, тринадцатый, четырнадцатый, пятнадцатый, шестнадцатый, семнадцатый, восемнадцатый и девятнадцатый аспекты), предпочтительно полипептид фактора транскрипции, который повышает экспрессию одного или более гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в клетке, является полипептидом WRI1, полипептидом LEC2, полипептидом LEC1 или LEC1-подобным полипептидом, полипептид, принимающий участие в биосинтезе одного или более неполярных липидов, является DGAT или PDAT, и полипептид, принимающий участие в катаболизме триацилглицеридов (ТАГ) в клетке, является липазой SDP1.

В каждом из вариантов реализации клеток, растений и их частей по изобретению (включая второй, третий, пятый, шестой, седьмой, восьмой, десятый, одиннадцатый, двенадцатый, тринадцатый, четырнадцатый, пятнадцатый, шестнадцатый, семнадцатый, восемнадцатый и девятнадцатый аспекты, но исключая пятый и десятый аспекты) предпочтительно полипептид фактора транскрипции, который повышает экспрессию одного или более гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в клетке, является полипептидом WRI1, полипептидом LEC2, полипептидом LEC1 или LEC1-подобным полипептидом, полипептид, принимающий участие в биосинтезе одного или более неполярных липидов, является DGAT или PDAT, и полипептид, который повышает экспорт жирных кислот из пластид клетки, является тиоэстеразой жирных кислот, предпочтительно полипептидом FATA или FATB, более предпочтительно, полипептидом FATA или тиоэстеразой жирных кислот, кроме тиоэстеразы среднецепочечных жирных кислот.

В каждом из упомянутых выше вариантов реализации клеток, растений и их частей по изобретению (включая второй, третий, четвертый, пятый, шестой, седьмой, восьмой, девятый, десятый, одиннадцатый, двенадцатый, тринадцатый, четырнадцатый, пятнадцатый, шестнадцатый, семнадцатый, восемнадцатый и девятнадцатый аспекты) предпочтительно полипептид фактора транскрипции, который повышает экспрессию одного или более гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в растении или его части, является комбинацией по меньшей мере двух полипептидов, предпочтительно полипептида WRI1 и полипептида LEC2. Более предпочтительно, указанные по меньшей мере два полипептида фактора транскрипции экспрессируются различными промоторами. Наиболее предпочтительно, экзогенные полинуклеотиды, кодирующие указанные по меньшей мере два полипептида, объединены на единой генетической конструкции, интегрированной в геном клетки или растения.

В каждом из упомянутых выше вариантов реализации изобретения, в которых растение является двудольным растением, указанный фактор транскрипции может быть фактором транскрипции однодольного растения. С другой стороны, если растение является однодольным растением, указанный фактор транскрипции может быть фактором транскрипции двудольного растения. Указанный фактор транскрипции предпочтительно представляет собой фактор транскрипции, не являющийся WRI1 A. thaliana (SEQ ID NO: 21 или 22).

В каждом из упомянутых выше вариантов реализации изобретения растение предпочтительно является трансгенным растением-потомком, по меньшей мере через два поколения от начального трансгенного растения, и предпочтительно является гомозиготным по трансгенам.

В дальнейших вариантах реализации изобретения дополнительные генетические модификации в растении или его части являются такими, как определено в контексте клетки по изобретению.

В варианте реализации изобретения растение или его часть по изобретению (включая шестой, седьмой, восьмой, девятый, десятый, одиннадцатый, двенадцатый, тринадцатый, четырнадцатый, пятнадцатый, шестнадцатый, семнадцатый, восемнадцатый и девятнадцатый аспекты) обладает одним или более или всеми из следующих признаков (если это уместно):

i) растение содержит часть, предпочтительно вегетативную часть, в которой повышен синтез общих жирных кислот относительно соответствующей части, не содержащей первого экзогенного полинуклеотида, или снижен катаболизм общих жирных кислот относительно соответствующей части, не содержащей первого экзогенного полинуклеотида, или присутствуют оба этих явления, таким образом, что она содержит повышенный уровень общих жирных кислот относительно соответствующей части, не содержащей первого экзогенного полинуклеотида,

ii) растение содержит часть, предпочтительно вегетативную часть, в которой повышена экспрессия и/или активность ацилтрансферазы ацилов жирных кислот, катализирующей синтез ТАГ, ДАГ или МАГ, предпочтительно ТАГ, относительно соответствующей части, содержащей первый экзогенный полинуклеотид и не содержащей экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид, принимающий участие в биосинтезе одного или более неполярных липидов,

iii) растение содержит часть, предпочтительно вегетативную часть, в которой снижена выработка лизофосфатидиновой кислоты (LPA) из ацил-АПБ и G3P в пластидах относительно соответствующей части, содержащей первый экзогенный полинуклеотид и не содержащей генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в выработке диацилглицерида (ДАГ) в пластидах части растения,

iv) растение содержит часть, предпочтительно вегетативную часть, которая содержит модифицированное соотношение C16:3 и C18:3 жирных кислот в общем содержании жирных кислот и/или содержании галактолипидов относительно соответствующей части, не содержащей экзогенного(ых) полинуклеотида(ов) и/или генетической(их) модификации(й), предпочтительно соотношение снижено,

v) общее содержание неполярного липида в вегетативной части растения составляет по меньшей мере около 8%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 11%, по меньшей мере около 12%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, от 8% до 75%, от 10% до 75%, от 11% до 75%, от около 15% до 75%, от около 20% до 75%, от около 30% до 75%, от около 40% до 75%, от около 50% до 75%, от около 60% до 75%, или от около 25% до 50% (масс./масс., в пересчете на сухую массу), предпочтительно до цветения,

vi) содержание ТАГ в вегетативной части растения составляет по меньшей мере около 8%, по меньшей мере около 10%, по меньшей мере около 11%, по меньшей мере около 12%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, от 8% до 75%, от 10% до 75%, от 11% до 75%, от около 15% до 75%, от около 20% до 75%, от около 30% до 75%, от около 40% до 75%, от около 50% до 75%, от около 60% до 75%, или от около 25% до 50% (масс./масс., в пересчете на сухую массу), предпочтительно до цветения,

vii) полипептид(ы) фактора транскрипции выбран(ы) из группы, состоящей из WRI1, LEC1, LEC1-подобного, LEC2, BBM, FUS3, ABI3, ABI4, ABI5, Dof4 и Dof11, предпочтительно WRI1, LEC1 или LEC2, или из группы, состоящей из MYB73, bZIP53, AGL15, MYB115, MYB118, TANMEI, WUS, GFR2a1, GFR2a2 и PHR1,

viii) олеиновая кислота составляет по меньшей мере 20% (моль %), по меньшей мере 22% (моль %), по меньшей мере 30% (моль %), по меньшей мере 40% (моль %), по меньшей мере 50% (моль %), или по меньшей мере 60% (моль %), предпочтительно около 65% (моль %) или от 20% до около 65% от общего содержания жирных кислот в растении или его части,

ix) неполярный липид в растении или его части, предпочтительно вегетативной части, содержит повышенный уровень одной или более жирных кислот, которые содержат гидроксильную группу, эпоксигруппу, циклопропановую группу, двойную углерод-углеродную связь, тройную углерод-углеродную связь, конъюгированные двойные связи, разветвленную цепь, например, метилированную или гидроксилированную разветвленную цепь, или комбинацию двух или более из этого, или любые две, три, четыре, пять или шесть из вышеупомянутых групп, связей или разветвленных цепей,

x) неполярный липид в растении или его части, предпочтительно вегетативной части, содержит одну или более полиненасыщенных жирных кислот, выбранных из эйкозадиеновой кислоты (ЭДК), арахидоновой кислоты (АРК), стеаридоновой кислоты (СДК), эйкозатриеновой кислоты (ЭТрК), эйкозатетраеновой кислоты (ЭТК), эйкозапентаеновой кислоты (ЭПК), докозапентаеновой кислоты (ДПК), докозагексаеновой кислоты (ДГК) или комбинации двух из более из них,

xi) часть является вегетативной частью растения, такой как лист или стебель или его часть,

xii) один или более или все промоторы выбраны промотором, не являющегося конститутивным промотором, предпочтительно тканеспецифического промотора, такого как специфичный для листьев и/или стеблей промотор, регулируемого развитием промотора, такого как специфичный для старения промотор, например, промотор SAG12, индуцибельного промотора или регулируемого циркадным ритмом промотора, причем по меньшей мере один из промоторов, функционально связанных с экзогенным полинуклеотидом, кодирующим полипептид фактора транскрипции, предпочтительно является промотором, не принадлежащим к конститутивным промоторам,

xiii) растение или его часть, предпочтительно вегетативная часть, содержит, в числе общих жирных кислот, среднецепочечные жирные кислоты, предпочтительно C12:0, C14:0 или обе, на уровне по меньшей мере 5% от общего содержания жирных кислот, и необязательно экзогенный полинуклеотид, кодирующий LPAAT, которая проявляет преимущественную активность в отношении жирных кислот со средней длиной цепи (C8-C14), предпочтительно C12:0 или C14:0,

xiv) растение или его часть, предпочтительно вегетативная часть, содержит, в числе общих жирных кислот, уровень олеиновой кислоты и/или уровень пальмитиновой кислоты, по меньшей мере на 2% выше, чем в соответствующем растении или его части, не содержащей экзогенного(ых) полинуклеотида(ов) и/или генетической(их) модификации(й), и/или уровень α-линоленовой кислоты (АЛК) и/или уровень линолевой кислоты, по меньшей мере на 2% ниже, чем в соответствующей клетке, не содержащей экзогенного(ых) полинуклеотида(ов) и/или генетической(их) модификации(й),

xv) неполярный липид в растении или его части, предпочтительно вегетативной части, содержит модифицированный уровень общих стеролов, предпочтительно свободных (неэтерифицированных) стеролов, стероильных эфиров, стероилгликозидов, относительно неполярного липида в соответствующей клетке, не содержащей экзогенного(ых) полинуклеотида(ов) и/или генетической(их) модификации(й),

xvi) неполярный липид в растении или его части содержит воски и/или эфиры восков,

xvii) растение или его часть, предпочтительно вегетативная часть, является членом популяции или коллекции размером по меньшей мере около 1000 таких растений или их частей,

xviii) растение содержит экзогенный полинуклеотид, кодирующий супрессор сайленсинга, причем экзогенный полинуклеотид функционально связан с промотором, способным направлять экспрессию полинуклеотида в растении,

xix) уровень одного или более неполярных липидов и/или общее содержание неполярного липида в растении или его части, предпочтительно вегетативной части растения, по меньшей мере на 2% масс. выше, чем в соответствующей клетке, которая содержит экзогенные полинуклеотиды, кодирующие WRI1 Arabidposis thaliana (SEQ ID NO: 21) и DGAT1 Arabidopsis thaliana (SEQ ID NO: 1), и

xxi) часть растения является клубнем картофеля (Solanum tuberosum), сахарной свеклы (Beta vulgaris), стеблем сахарного тростника (вид Saccharum) или сорго (Sorghum bicolor) семенем однодольного растения с повышенным общим содержанием жирных кислот в эндосперме, например, зерном пшеницы (Triticum aestivum) или зернышком кукурузы (Zea mays), листом вида Nicotiana или семенем боба с повышенным общим содержанием жирных кислот, например, семенем вида Brassica или семенем сои (Glycine max),

xxii) если часть растения является семенем, то семя прорастает в существенной мере с такой же скоростью, как и соответствующее семя дикого типа, или при высевании в грунт дает растение, семена которого прорастают в существенной мере с такой же скоростью относительно соответствующего семени дикого типа, и

xxiii) растение является водорослевым растением, например, из числа диатомовых (бацилляриофитов), зеленых водорослей (хлорофитов), зелено-голубых водорослей (цианофитов), золотисто-коричневых водорослей (хризофитов), гаптофитов, коричневых водорослей или водорослей гетероконтов.

В упомянутых выше вариантах реализации изобретения предпочтительной частью растения является фрагмент листа с площадью поверхности по меньшей мере 1 см² или фрагмент стебля длиной по меньшей мере 1 см.

В варианте реализации упомянутых выше аспектов изобретения растение или часть растения обрабатывают таким образом, что она становится неспособной размножаться или дать начало живому растению, т.е. ее убивают. Например, растение или часть растения высушивают и/или перемалывают.

В упомянутых выше вариантах реализации изобретения общее содержание неполярного липида в части растения предпочтительно по меньшей мере на 3% выше, более предпочтительно, по меньшей мере на 5% выше, чем общее содержание неполярного липида в соответствующей части растения, трансформированной генами, кодирующими WRI1 и DGAT, но не содержащей других экзогенных полинуклеотидов и генетических модификаций, описанных в настоящем документе для упомянутых выше аспектов. Более предпочтительно, указанная степень повышения относится к стеблю или корню растения.

В варианте реализации изобретения введение одного или более экзогенных полинуклеотидов или генетических модификаций, предпочтительно экзогенного полинуклеотида, кодирующего ПМВ или тиоэстеразу жирного ацила, или генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в катаболизме триацилглицеридов (ТАГ) в клетке, более предпочтительно, экзогенного полинуклеотида, кодирующего тиоэстеразу FATA или БСЛК или снижающего экспрессию эндогенной липазы ТАГ, такой как липаза ТАГ SDP1, в клетке, приводит к синергетическому повышению общего содержания неполярного липида в клетке, при добавлении к паре трансгенов WRI1 и DGAT, особенно перед цветением растения и, даже более конкретно, в стеблях и/или корнях растения. Например, см. Примеры 8, 11 и 15. В предпочтительном варианте реализации изобретения повышение содержания ТАГ в клетке, расположенной в стебле или корне растения, по меньшей мере в 2 раза, более предпочтительно, по меньшей мере в 3 раза выше, чем в соответствующей клетке, трансформированной генами, кодирующими WRI1 и DGAT1, но не содержащей тиоэстеразы FATA, БСЛК и генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в катаболизме триацилглицеридов (ТАГ) в растении. Наиболее предпочтительно, по меньшей мере промотор, направляющий экспрессию первого экзогенного полинуклеотида, является промотором, не принадлежащим к конститутивным промоторам.

В вариантах реализации шестого, седьмого, восьмого, девятого, десятого, одиннадцатого, двенадцатого, тринадцатого, четырнадцатого, шестнадцатого, восемнадцатого и девятнадцатого аспектов изобретения растение или его часть предпочтительно является фенотипически нормальным в том смысле, что его способность расти и воспроизводиться в существенной мере не снижена, по сравнению с немодифицированным растением или его частью. Предпочтительно биомасса, скорость роста, скорость прорастания, размер запасающего органа, размер семени и/или количество образованных жизнеспособных семян составляет не менее чем 90% от показателей соответствующего растения дикого типа, при выращивании в идентичных условиях. В варианте реализации изобретения растение обладает мужской и женской фертильностью в той же степени, что и соответствующее растение дикого типа, а его пыльца (если она образуется) так же жизнеспособна, как и пыльца соответствующего растения дикого типа, предпочтительно жизнеспособность составляет около 100%. В варианте реализации изобретения растение образует семя, которому свойственна скорость прорастания по меньшей мере 90% относительно скорости прорастания соответствующего семени растения дикого типа, если вид растений образует семена. В варианте реализации изобретения высота растения по изобретению составляет по меньшей мере 90% относительно высоты соответствующего растения дикого типа, выращенного в таких же условиях. Комбинация каждого из указанных признаков включена. В альтернативном варианте реализации изобретения высота растения по изобретению составляет от 60% до 90% относительно высоты соответствующего растения дикого типа, выращенного в таких же условиях. В варианте реализации изобретения растение или его часть по изобретению, предпочтительно лист растения, не проявляет усиленного некроза, т.е. степень некроза, если он присутствует, такая же, какую демонстрирует соответствующее растение дикого типа или его часть, выращенное в таких же условиях и находящееся на такой же стадии развития растения. Данный признак применяется, в частности, к растению или его части, содержащему экзогенный полинуклеотид, кодирующий тиоэстеразу жирных кислот, такой как тиоэстераза FATB.

Следующие варианты реализации изобретения применяются к растению или его части по изобретению (включая шестой, седьмой, восьмой, девятый, десятый, одиннадцатый, двенадцатый, тринадцатый, четырнадцатый, шестнадцатый, восемнадцатый и девятнадцатый аспекты), а также к способу получения растения или его части или способу их применения. В варианте реализации изобретения полипептид, принимающий участие в биосинтезе одного или более неполярных липидов, является ацилтрансферазой ацилов жирных кислот, принимающей участие в биосинтезе ТАГ, ДАГ или моноацилглицерида (МАГ) в растении или его части, предпочтительно ТАГ в растении или его части, такой как DGAT, PDAT, LPAAT, GPAT или MGAT, предпочтительно DGAT или PDAT.

В другом варианте реализации изобретения полипептид, принимающий участие в катаболизме триацилглицеридов (ТАГ) в растении или части растения, является липазой SDP1, полипептидом Cgi58, ацил-КоА оксидазой, такой как ACX1 или ACX2, или полипептидом, принимающим участие в β-окислении жирных кислот в растении, таким как пероксисомальный транспортер АТФ-связывающей кассеты PXA1, предпочтительно липазой SDP1.

В варианте реализации изобретения полипептид, который повышает экспорт жирных кислот из пластид растения, является тиоэстеразой C16 или C18 жирных кислот, такой как полипептид FATA или полипептид FATB, переносчиком жирных кислот, таким как полипептид ABCA9 или длинноцепочечная ацил-КоА синтетаза (ДЦАС).

В варианте реализации изобретения полипептид, принимающий участие в импорте жирных кислот в пластиды растения, является переносчиком жирных кислот или его субъединицей, предпочтительно полипептидом ТГД, таким как полипептид TGD1, полипептид TGD2, полипептид TGD3 или полипептид TGD4.

В варианте реализации изобретения растение или его часть по изобретению является растением 16:3 или его частью, которая содержит одно или более или все из следующего:

a) экзогенный полинуклеотид, кодирующий полипептид, который повышает экспорт жирных кислот из пластид растения, по сравнению с соответствующим растением, не содержащим экзогенного полинуклеотида,

c) второй генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в выработке диацилглицерида (ДАГ) в пластиде, по сравнению с соответствующим растением, не содержащим второй генетической модификации,

причем экзогенный полинуклеотид функционально связан с промотором, способным направлять экспрессию полинуклеотида в растении, или его части.

В альтернативном варианте реализации изобретения растение или его часть по изобретению является растением 18:3 или его частью.

В варианте реализации изобретения общее содержание неполярного липида в вегетативной части растения перед цветением растения составляет по меньшей мере около 8%, по меньшей мере около 10%, около 11%, от 8% до 15%, или от 9% до 12% (масс./масс., в пересчете на сухую массу)

В варианте реализации изобретения одна или более или все из генетических модификаций представляют собой мутацию эндогенного гена, которая частично или полностью инактивирует ген, такую как точечная мутация, инсерция или делеция (или комбинация одного или более из этого), предпочтительно введенную мутацию. Точечная мутация может представлять собой преждевременный стоп-кодон, мутацию сайта сращивания, мутацию сдвига рамки или мутацию замены аминокислоты, которая снижает активность гена или кодируемого полипептида. Делеция может состоять из одного или более нуклеотидов в пределах транскрибированного экзона или промотора гена, или простираться сквозь или в более чем один экзон, или расширяться до делеции всего гена. Предпочтительно делецию вводят с применением технологий ZF, ПАТЭН или ККППРП. В альтернативном варианте реализации изобретения одна или более или все генетические модификации представляют собой экзогенный полинуклеотид, кодирующий молекулу РНК, которая подавляет экспрессию эндогенного гена, причем экзогенный полинуклеотид функционально связан с промотором, способным направлять экспрессию полинуклеотида в растении или его части.

ii) нуклеотиды, последовательность которых по меньшей мере на 30% идентична i), и

В варианте реализации изобретения общее содержание неполярного липида или одного или более неполярных липидов и/или уровень олеиновой кислоты или ПНЖК в растении или его части определяют методом анализа метиловых эфиров жирных кислот, полученных из растения или его вегетативной части, с применением газовой хроматографии.

В дальнейшем варианте реализации изобретения, в котором часть растения является листом, общее содержание неполярного липида в листе определяют методом анализа с применением ядерного магнитного резонанса (ЯМР).

В варианте реализации изобретения растение или его часть является членом популяции или коллекции размером по меньшей мере около 1000 таких растений или их частей.

В дальнейшем аспекте настоящего изобретения предлагается популяция размером по меньшей мере около 1000 растений, каждое из которых представляет собой растение по изобретению, выращенное в поле.

В другом аспекте настоящего изобретения предлагается коллекция размером по меньшей мере около 1000 вегетативных частей растения, каждая из которых является вегетативной частью растения по изобретению, причем урожай вегетативных частей растения собран с растений, растущих в поле.

В варианте реализации клетки, организма, не относящегося к человеческому роду, растения или его части по изобретению, полипептид фактора транскрипции, который повышает экспрессию одного или более гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в клетке, является фактором транскрипции WRI1, полипептид, принимающий участие в биосинтезе одного или более неполярных липидов, является DGAT, например, DGAT1 или DGAT2, или PDAT, и полипептид, принимающий участие в катаболизме триацилглицеридов (ТАГ) в клетке, является липазой SDP1. В предпочтительном варианте реализации изобретения полипептид покрытия масляного включения (ПМВ) является олеозином, полипептид, который повышает экспорт жирных кислот из пластид клетки, является тиоэстеразой жирных кислот, например, тиоэстеразой FATA или FATB, полипептид, принимающий участие в импорте жирных кислот в пластиды клетки, является полипептидом ТГД, предпочтительно полипептидом TGD1, и полипептид, принимающий участие в выработке диацилглицерида (ДАГ) в пластиде, является пластидной GPAT. В более предпочтительном варианте реализации изобретения клетка находится в вегетативной части растения, причем содержание ТАГ в вегетативной части растения перед цветением растения составляет по меньшей мере 8% (% от сухой массы).

В варианте реализации изобретения растение, вегетативная часть растения, организм, не относящийся к человеческому роду, или его часть, семя или клубень картофеля содержат первый экзогенный полинуклеотид, кодирующий WRI1, второй экзогенный полинуклеотид, кодирующий DGAT или ПДАТ, предпочтительно DGAT1, третий экзогенный полинуклеотид, кодирующий РНК, которая уменьшает экспрессию гена, кодирующего полипептид SPD1, и четвертый экзогенный полинуклеотид, кодирующий олеозин. В предпочтительных вариантах реализации изобретения, в вегетативной части растения, организме, не относящемся к человеческому роду, или его части, семени или клубне картофеля присутствует один или более, или все из следующих признаков:

i) общее содержание липида по меньшей мере 8%, по меньшей мере 10%, по меньшей мере 12%, по меньшей мере 14% или по меньшей мере 15,5% (%, масс.);

ii) общее содержание липида в вегетативной части растения или организме, не относящемся к человеческому роду, по меньшей мере в 3 раза, по меньшей мере в 5 раз, по меньшей мере в 7 раз, по меньшей мере в 8 раз или по меньшей мере в 10 раз выше относительно соответствующей вегетативной части растения или организма, не относящегося к человеческому роду, в которых отсутствуют экзогенные полинуклеотиды;

iii) общее содержание ТАГ составляет по меньшей мере 5%, по меньшей мере 6%, по меньшей мере 6,5% или по меньшей мере 7% (%, масс. в пересчете на массу сухого вещества или массу семени);

iv) общее содержание ТАГ по меньшей мере в 40 раз, по меньшей мере в 50 раз, по меньшей мере в 60 раз или по меньшей мере в 70 раз, по меньшей мере в 100 раз или по меньшей мере в 120 раз выше, чем в соответствующей вегетативной части растения или организма, не относящегося к человеческому роду, в которых отсутствуют экзогенные полинуклеотиды;

v) олеиновая кислота составляет по меньшей мере 15%, по меньшей мере 19% или по меньшей мере 22% (%, масс., в пересчете на массу сухого семени) всех жирных кислот в ТАГ;

vi) уровень олеиновой кислоты в ТАГ по меньшей мере в 10 раз, по меньшей мере в 15 раз или по меньшей мере в 17 раз превышает уровень в соответствующей вегетативной части растения или организме, не относящемся к человеческому роду, в которых отсутствуют экзогенные полинуклеотиды;

vii) пальмитиновая кислота составляет по меньшей мере 20%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30% или по меньшей мере 33% (%, масс.) жирных кислот в ТАГ;

viii) уровень пальмитиновой кислоты в ТАГ по меньшей мере в 1,5 раза выше относительно соответствующей вегетативной части растения или организма, не относящегося к человеческому роду, в которых отсутствуют экзогенные полинуклеотиды;

ix) линолевая кислота составляет по меньшей мере 22%, по меньшей мере 25%, по меньшей мере 30% или по меньшей мере 34% (%, масс.) жирных кислот в ТАГ;

x) α-линоленовая кислота составляет менее 20%, менее 15%, менее 11% или менее 8% (%, масс.) жирных кислот в ТАГ,

xi) уровень α-линоленовой кислоты в ТАГ по меньшей мере в 5 раз или по меньшей мере в 8 раз ниже, чем в соответствующей вегетативной части растения или организме, не относящемся к человеческому роду, в которых отсутствуют экзогенные полинуклеотиды, и

xii) для картофельного клубня, содержание ТАГ составляет по меньшей мере 0,5%, в пересчете на сухую массу, и/или общее содержание жирных кислот составляет по меньшей мере 1%, предпочтительно по меньшей мере 1,5% или по меньшей мере 2,0%, в пересчете на сухую массу.

Дополнительно предлагается семя растения по изобретению или полученное от такого растения.

В другом аспекте изобретения предлагается трансгенный стебель растения или часть стебля размером по меньшей мере 1 г сухой массы, содержание ТАГ в которой составляет по меньшей мере 5% масс. (сухая масса), предпочтительно по меньшей мере 6%, более предпочтительно по меньшей мере 7%. В варианте реализации изобретения трансгенный стебель растения или часть стебля принадлежит, или предпочтительно ее урожай собран с двудольного растения. В качестве альтернативы, трансгенный стебель растения или часть стебля принадлежит, или предпочтительно ее урожай собран с однодольного растения. В варианте реализации изобретения стебель растения или часть стебля принадлежит или получена от растения, не являющегося сахарным тростником. В вариантах реализации изобретения стебель растения или часть стебля дополнительно отличается одним или более признаками, определенными в контексте клетки или растения по изобретению.

В другом аспекте изобретения предлагается растительная клетка, содержащая:

a) первый экзогенный полинуклеотид, кодирующий PDAT,

b) первую генетическую модификацию, подавляющую эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в импорте жирных кислот в пластиды клетки, предпочтительно полипептида ТГД, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей первой генетической модификации, и одно или более из:

c) второй генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в катаболизме триацилглицеридов (ТАГ) в клетке, предпочтительно полипептида SDP1, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей генетической модификации,

d) второго экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид, который повышает экспорт жирных кислот из пластид клетки, предпочтительно тиоэстеразу жирного ацила, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей второго экзогенного полинуклеотида, и

e) третьей генетической модификации, подавляющей эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в выработке диацилглицерида (ДАГ) в пластиде, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей третьей генетической модификации,

причем каждый экзогенный полинуклеотид функционально связан с промотором, способным направлять экспрессию полинуклеотида в клетке. В предпочтительном варианте реализации изобретения присутствие в клетке первой, второй или третьей генетической модификации или второго экзогенного полинуклеотида синергетически повышает общее содержание неполярного липида в клетке, по сравнению с соответствующей клеткой, содержащей PDAT, но не содержащей дополнительной генетической модификации или экзогенного полинуклеотида. Более предпочтительно, по меньшей мере один из экзогенных полинуклеотидов экспрессируется промотором, который не принадлежит к конститутивным промоторам.

В другом аспекте настоящего изобретения предлагается способ получения рекомбинантной эукариотной клетки по изобретению, включающий стадии:

i) введения в эукариотную клетку по меньшей мере одного экзогенного полинуклеотида и/или по меньшей мере одной генетической модификации, определенной в настоящем документе, с получением эукариотной клетки, содержащей набор экзогенных полинуклеотидов и/или генетических модификаций, определенных в настоящем документе,

ii) экспрессии экзогенного(ых) полинуклеотида(ов) в клетке или ее клетке-потомке,

iii) анализ содержания липидов в клетке или ее клетке-потомке, и

iv) отбор клетки по изобретению.

В варианте реализации изобретения один или более экзогенные полинуклеотиды стабильно интегрированы в геном клетки или ее клетки-потомка.

В варианте реализации изобретения способ дополнительно включает стадию регенерации трансгенного растения из клетки или клетки-потомка, содержащей один или более экзогенных полинуклеотидов.

В дальнейшем варианте реализации изобретения стадия регенерации трансгенного растения выполняется до стадии экспрессии одного или более экзогенных полинуклеотидов в клетке или ее клетке-потомке и/или до стадии анализа содержимого липида в клетке или ее клетке-потомке и/или до стадии отбора клетки или клетки-потомка, содержащей повышенный уровень одного или более неполярных липидов.

В другом варианте реализации изобретения способ дополнительно содержит стадию получения семени или растения-потомка из трансгенного растения, причем семя или растение-потомок содержит один или более экзогенных полинуклеотидов.

Еще в другом варианте реализации изобретения отобранная клетка или регенерированное из нее растение или вегетативная часть растения или семя регенерированного растения обладает одним или более признаками, определенными в настоящем документе.

В дальнейшем аспекте настоящего изобретения предлагается способ получения растения, в геном которого интегрирован набор экзогенных полинуклеотидов и/или генетических модификаций, определенных в настоящем документе, причем способ включает стадии:

i) скрещивания двух материнских растений, и, при этом, одно растение содержит по меньшей мере один из экзогенных полинуклеотидов и/или по меньшей мере одну из генетических модификаций, определенных в настоящем документе, и другоерастение содержит по меньшей мере один из экзогенных полинуклеотидов и/или по меньшей мере одну из генетических модификаций, определенных в настоящем документе, притом, что два материнских растения содержат набор экзогенных полинуклеотидов и/или генетических модификаций, определенных в настоящем документе,

ii) скрининг одного или более растений-потомков скрещивания на предмет присутствия или отсутствия набора экзогенных полинуклеотидов и/или генетических модификаций, определенных в настоящем документе, и

iii) отбор растения-потомка, содержащего набор экзогенных полинуклеотидов и/или генетических модификаций, определенных в настоящем документе,

с получением таким образом растения.

Дополнительно предложена трансгенная клетка или трансгенное растение, полученные с применением способа по изобретению, или его часть, полученная из него, которая содержит набор экзогенных полинуклеотидов и/или генетических модификаций, определенных в настоящем документе.

Дополнительно предлагается применение набора экзогенных полинуклеотидов и/или генетических модификаций, определенных в настоящем документе, для получения трансгенной клетки, трансгенного организма, не относящегося к человеческому роду, или его части или семени, обладающих повышенной способностью к выработке одного или более неполярных липидов относительно соответствующей клетки, организма, не относящегося к человеческому роду, или его части или семени, не содержащих набора экзогенных полинуклеотидов и/или генетических модификаций, причем каждый экзогенный полинуклеотид функционально связан с промотором, способным направлять экспрессию экзогенного полинуклеотида в трансгенной клетке, трансгенном организме, не относящемся к человеческому роду, или его части или семени.

Предпочтительно, по меньшей мере один из промоторов, функционально связанных с экзогенным полинуклеотидом, который кодирует полипептид фактора транскрипции, представляет собой промотор, не принадлежащий к конститутивным промоторам.

В варианте реализации изобретения трансгенная клетка, организм, не относящийся к человеческому роду, или его часть или семя обладает одним или более признаками, определенными в настоящем документе.

В дальнейшем аспекте настоящего изобретения предлагается способ получения промышленного продукта, включающий стадии:

i) получение рекомбинантной эукариотной клетки по изобретению, трансгенного организма, не относящегося к человеческому роду, или его части по изобретению, трансгенного растения или его части по изобретению, семени по изобретению, или трансгенной клетки или трансгенного растения или его части по изобретению, и

ii) превращение по меньшей мере части липида в клетке, организме, не относящемся к человеческому роду, или его части, растении или его части, или семени в промышленный продукт, с применением нагревания, химических или ферментных средств или любой их комбинации к липиду in situ в организме, не относящемся к человеческому роду, или его части, и

iii) извлечение промышленного продукта,

с получением таким образом промышленного продукта.

ii) физическая обработка клетки, организма, не относящегося к человеческому роду, или его части, растения или его части или семени со стадии i),

iii) одновременное или последующее превращение по меньшей мере части липида в обрабатываемой клетке, организме, не относящемся к человеческому роду, или его части, растении или его части или семени в промышленный продукт, с применением нагревания, химических или ферментных средств или любой их комбинации к липиду в обрабатываемой клетке, организме, не относящемся к человеческому роду, или его части, растении или его части или семени, и

iv) извлечение промышленного продукта,

с получением таким образом промышленного продукта.

В варианте реализации двух упомянутых выше аспектов изобретения часть растения является вегетативной частью растения.

i) получение вегетативной части растения с общим содержанием неполярного липида по меньшей мере около 18%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, от 18% до 75%, от около 20% до 75%, от около 30% до 75%, от около 40% до 75%, от около 50% до 75%, от около 60% до 75%, или от около 25% до 50% (масс./масс., в пересчете на сухую массу),

ii) превращение по меньшей мере части липида в вегетативной части растения в промышленный продукт, с применением нагревания, химических или ферментных средств или любой их комбинации к липиду in situ в вегетативной части растения, и

iii) извлечение промышленного продукта,

с получением таким образом промышленного продукта.

В другом аспекте настоящего изобретения предлагается способ получения промышленного продукта, включающий стадии:

ii) физическая обработка вегетативной части растения со стадии i),

iii) одновременное или последующее превращение по меньшей мере части липида в обрабатываемой вегетативной части растения в промышленный продукт, с применением нагревания, химических или ферментных средств или любой их комбинации к липиду в обрабатываемой вегетативной части растения, и

iv) извлечение промышленного продукта,

с получением таким образом промышленного продукта.

Еще в другом аспекте настоящего изобретения предлагается способ получения промышленного продукта, включающий стадии:

i) получение вегетативной части растения с общим содержанием неполярного липида по меньшей мере около 11%, по меньшей мере около 12%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, от 8% до 75%, от 10% до 75%, от 11% до 75%, от около 15% до 75%, от около 20% до 75%, от около 30% до 75%, от около 40% до 75%, от около 50% до 75%, от около 60% до 75%, или от около 25% до 50% (масс./масс., в пересчете на сухую массу), причем растение является растением 16:3 или его вегетативной частью,

iii) извлечение промышленного продукта,

с получением таким образом промышленного продукта.

ii) физическая обработка вегетативной части растения со стадии i),

iv) извлечение промышленного продукта,

с получением таким образом промышленного продукта.

В варианте реализации изобретения стадия физической обработки клетки, организма, не относящегося к человеческому роду, или его части, растения или его части, или семени включает одно или более из вальцовки, прессования, дробления или помола клетки, организма, не относящегося к человеческому роду, или его части, растения или его части, или семени.

В варианте реализации изобретения способ включает стадии:

(a) экстракция по меньшей мере части неполярного липида, содержащегося в клетке, организме, не относящемся к человеческому роду, или его части, растении или его части, или семени в форме неполярного липида, и

(b) извлечение экстрагированного неполярного липида,

причем стадии (a) и (b) выполняются до стадии превращения по меньшей мере части липида в клетке, организме, не относящемся к человеческому роду, или его части, растении или его части, или семени в промышленный продукт.

В варианте реализации изобретения экстрагированный неполярный липид содержит триацилглицериды, причем триацилглицериды составляют по меньшей мере 90%, предпочтительно по меньшей мере 95% экстрагированного липида.

В варианте реализации изобретения промышленный продукт является углеводородным продуктом, таким как эфиры жирных кислот, предпочтительно метиловые эфиры жирных кислот и/или этиловые эфиры жирных кислот, алкан, например, метан, этан или длинноцепочечный алкан, смесь алканов с более длинной цепью, алкен, биотопливо, газообразный монооксид углерода и/или водород, биоспирт, например, этанол, пропанол или бутанол, биоуголь или комбинация монооксида углерода, водорода и биоугля. В предпочтительном варианте реализации изобретения общие жирные кислоты в вегетативной части растения содержат по меньшей мере 5% C12:0, C14:0, или сумма C12:0 и C14:0 составляет по меньшей мере 5% от общего содержания жирных кислот, и промышленный продукт, полученный из липида вегетативной части растения, является компонентом авиационного топлива.

В дальнейшем аспекте настоящего изобретения предлагается способ получения экстрагированного липида, включающий стадии:

ii) экстракция липида из клетки, организма, не относящегося к человеческому роду, или его части, растения или его части, или семени, и

iii) извлечение экстрагированного липида,

с получением таким образом экстрагированного липида.

ii) экстракцию липида из вегетативной части растения, и

iii) извлечение экстрагированного липида,

с получением таким образом экстрагированного липида.

ii) экстракцию липида из вегетативной части растения, и

iii) извлечение экстрагированного липида,

с получением таким образом экстрагированного липида.

В варианте реализации изобретения способ экстракции включает одно или более из сушки, вальцевания, прессования, дробления или помола клетки, организма, не относящегося к человеческому роду, или его части, растения или его части, или семени, и/или очистки экстрагированного липида или масла из семян.

В варианте реализации изобретения органический растворитель применяется в способе в процессе экстракции, для экстрагирования масла.

В дальнейшем варианте реализации изобретения способ включает извлечение экстрагированного липида или масла путем сбора его в емкость и/или одного или более из дегуммации, дезодорирования, обесцвечивания, сушки, фракционирования экстрагированного липида или масла, удаления по меньшей мере некоторых восков и/или эфиров восков из экстрагированного липида или масла или анализа состава жирных кислот экстрагированного липида или масла.

В варианте реализации изобретения объем экстрагированного липида или масла составляет по меньшей мере 1 литр.

В дальнейшем варианте реализации изобретения применяются один или более или все из следующих признаков:

(i) экстрагированный липид или масло содержит триацилглицериды, причем триацилглицериды составляют по меньшей мере 90%, предпочтительно по меньшей мере 95% или по меньшей мере 96% экстрагированного липида или масла,

(ii) экстрагированный липид или масло содержит свободные стеролы, стероильные эфиры, стероилгликозиды, воски или эфиры восков или любую их комбинацию, и

(iii) общее содержание и/или состав стеролов в экстрагированном липиде или масле значительно отличается от содержания и/или состава стеролов в экстрагированном липиде или масле, полученном из соответствующей клетки, организма, не относящегося к человеческому роду, или его части, растения или его части, или семени.

В варианте реализации изобретения способ дополнительно включает превращение экстрагированного липида или масла в промышленный продукт.

В дальнейшем варианте реализации изобретения часть растения является воздушной частью растения или зеленой частью растения, предпочтительно вегетативной частью растения, такой как лист или стебель растения. В альтернативном варианте реализации изобретения часть растения является клубнем или свеклой, таким как клубень картофеля (Solanum tuberosum) или сахарная свекла.

Еще в другом варианте реализации изобретения способ дополнительно включает стадию сбора урожая клетки, организма, не относящегося к человеческому роду, или его части, растения или его части, такого как клубень или свекла, или семени, предпочтительно с помощью механического уборщика, или посредством процесса, включающего фильтрацию, центрифугирование, осаждение, флотацию или флоккуляцию водорослевых или грибковых организмов.

В другом варианте реализации изобретения уровень липида в клетке, организме, не относящемся к человеческому роду, или его части, растении или его части, или семени и/или в экстрагированном липиде или масле может быть определен методом анализа с применением газовой хроматографии метиловых эфиров жирных кислот, полученных из экстрагированного липида или масла.

Еще в другом варианте реализации изобретения способ дополнительно включает сбор урожая части с растения.

В варианте реализации изобретения часть растения является вегетативной частью растения с общим содержанием неполярного липида по меньшей мере около 18%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, от 18% до 75%, от около 20% до 75%, от около 30% до 75%, от около 40% до 75%, от около 50% до 75%, от около 60% до 75%, или от около 25% до 50% (масс./масс., в пересчете на сухую массу).

В дальнейшем варианте реализации изобретения часть растения является вегетативной частью растения с общим содержанием ТАГ по меньшей мере около 18%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, от 18% до 75%, от около 20% до 75%, от около 30% до 75%, от около 40% до 75%, от около 50% до 75%, от около 60% до 75%, или от около 25% до 50% (масс./масс., в пересчете на сухую массу).

В другом варианте реализации изобретения часть растения является вегетативной частью растения с общим содержанием неполярного липида по меньшей мере около 11%, по меньшей мере около 12%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, от 8% до 75%, от 10% до 75%, от 11% до 75%, от около 15% до 75%, от около 20% до 75%, от около 30% до 75%, от около 40% до 75%, от около 50% до 75%, от около 60% до 75%, или от около 25% до 50% (масс./масс., в пересчете на сухую массу), причем вегетативная часть растения получена от растений 16:3.

Еще в другом варианте реализации изобретения часть растения является вегетативной частью растения с общим содержанием ТАГ по меньшей мере около 11%, по меньшей мере около 12%, по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, от 8% до 75%, от 10% до 75%, от 11% до 75%, от около 15% до 75%, от около 20% до 75%, от около 30% до 75%, от около 40% до 75%, от около 50% до 75%, от около 60% до 75%, или от около 25% до 50% (масс./масс., в пересчете на сухую массу), причем вегетативная часть растения получена от растений 16:3.

Дополнительно предлагается способ получения семени, включающий:

i) выращивание растения по изобретению, и

ii) сбор урожая семени с растения.

В варианте реализации изобретения упомянутый выше способ включает выращивание популяции размером по меньшей мере около 1000 растений, каждое из которых является растением по изобретению, и сбор урожая семени с популяции растений.

Еще в другом аспекте настоящего изобретения предлагается способ ферментации, включающий:

i) обеспечение емкости, содержащей жидкую композицию, которая содержит рекомбинантную эукариотную клетку по изобретению или трансгенный организм, не относящийся к человеческому роду, по изобретению, причем клетка или организм, не относящийся к человеческому роду, пригодны для ферментации, и составляющие, необходимые для ферментации и биосинтеза жирных кислот, и

ii) обеспечение условий, способствующих ферментации жидкой композиции, содержащейся в указанной емкости.

Кроме того, предлагается извлеченный или экстрагированный липид, получаемый из рекомбинантной эукариотной клетки по изобретению, трансгенного организма, не относящегося к человеческому роду, или его части по изобретению, трансгенного растения или его части по изобретению, семени по изобретению или трансгенной клетки или трансгенного растения или его части по изобретению или получаемый с применением способа по изобретению.

В дальнейшем аспекте настоящего изобретения предлагается промышленный продукт, полученный с применением способа по изобретению, который является углеводородным продуктом, таким как эфиры жирных кислот, предпочтительно метиловые эфиры жирных кислот и/или этиловые эфиры жирных кислот, алкан, например, метан, этан или длинноцепочечный алкан, смесь алканов с более длинной цепью, алкен, биотопливо, газообразный монооксид углерода и/или водород, биоспирт, например, этанол, пропанол или бутанол, биоуголь или комбинация монооксида углерода, водорода и биоугля.

Дополнительно предлагается применение рекомбинантной эукариотной клетки по изобретению, трансгенного организма, не относящегося к человеческому роду, или его части по изобретению, трансгенного растения или его части по изобретению, семени по изобретению или трансгенной клетки или трансгенного растения или его части по изобретению или извлеченного или экстрагированного липида по изобретению для производства промышленного продукта.

Примеры промышленных продуктов по изобретению включают, но не ограничиваясь ими, углеводородный продукт, такой как эфиры жирных кислот, предпочтительно метиловые эфиры жирных кислот и/или этиловые эфиры жирных кислот, алкан, например, метан, этан или длинноцепочечный алкан, смесь алканов с более длинной цепью, алкен, биотопливо, газообразный монооксид углерода и/или водород, биоспирт, например, этанол, пропанол или бутанол, биоуголь или комбинация монооксида углерода, водорода и биоугля.

В дальнейшем аспекте настоящего изобретения предлагается способ получения топлива, включающий:

i) приведение в реакцию липида по изобретению со спиртом, необязательно в присутствии катализатора, с получением алкиловых эфиров, и

ii) необязательное смешивание алкиловых эфиров с топливом на основе нефти.

В варианте реализации упомянутого выше способа алкиловые эфиры являются метиловыми эфирами.

Еще в другом аспекте настоящего изобретения предлагается способ получения синтетического дизельного топлива, включающий:

i) превращение липида в рекомбинантной эукариотной клетке по изобретению, трансгенном организме, не относящемся к человеческому роду, или его части по изобретению, трансгенном растении или его части по изобретению, семени по изобретению, или трансгенной клетке или трансгенном растении или его части по изобретению, в бионефть с применением способа, включающего пиролиз или гидротермическую обработку, или в синтетический газ с применением газификации, и

ii) превращение бионефти в синтетическое дизельное топливо с применением способа, включающего фракционирование, предпочтительно с отбором углеводородных соединений, которые конденсируются при температуре от приблизительно 150°C до приблизительно 200°C или от приблизительно 200°C до приблизительно 300°C, или превращение синтетического газа в биотопливо с применением металлического катализатора или микробного катализатора.

В другом аспекте настоящего изобретения предлагается способ получения биотоплива, включающий превращение липида в рекомбинантной эукариотной клетке по изобретению, трансгенном организме, не относящемся к человеческому роду, или его части по изобретению, трансгенном растении или его части по изобретению, семени по изобретению или трансгенной клетке или трансгенном растении или его части по изобретению в бионефть с применением пиролиза, в биоспирт с применением ферментации или в биогаз с применением газификации или анаэробного расщепления.

В варианте реализации упомянутого выше способа часть является вегетативной частью растения.

Кроме того, предлагается способ получения кормов (продуктов питания), включающий смешивание рекомбинантной эукариотной клетки по изобретению, трансгенного организма, не относящегося к человеческому роду, или его части по изобретению, трансгенного растения или его части по изобретению, семени по изобретению или трансгенной клетки или трансгенного растения или его части по изобретению, или получаемых с применением способа по изобретению, или экстракта или его части, по меньшей мере с еще одним питательным ингредиентом.

В дальнейшем аспекте настоящего изобретения предлагаются корма (продукты питания), косметические продукты или химические реактивы, содержащие рекомбинантную эукариотную клетку по изобретению, трансгенный организм, не относящийся к человеческому роду, или его часть по изобретению, трансгенное растение или его часть по изобретению, семя по изобретению или трансгенную клетку или трансгенное растение или его часть по изобретению, или получаемые с применением способа по изобретению, или экстракт или его часть.

В другом аспекте настоящего изобретения предлагается способ кормления животного, включающий предложение животному трансгенного растения или его части по изобретению, семени по изобретению или трансгенного растения или его части по изобретению, или извлеченного или экстрагированного липида по изобретению.

Любой вариант реализации изобретения будет взят для применения соответствующих поправок к любому другому варианту реализации изобретения, если конкретно не указано иное.

Контекст настоящего изобретения не ограничивается конкретными вариантами реализации изобретения, описанными в настоящем документе, которые предназначены только для целей иллюстрации. Функционально равноценные продукты, составы и способы явно находятся в пределах контекста изобретения, как раскрыто в настоящем документе.

В настоящем документе, если конкретно не указано иное или контекст не требует иного, ссылка на одну стадию, состав вещества, группу стадий или группу составов вещества должна интерпретироваться, как включающая единственное и множественное число (т. е., один или более) таких стадий, составов вещества, групп стадий или групп составов вещества.

Изобретение дополнительно раскрыто посредством следующих неограничивающих Примеров и со ссылкой на прилагаемые фигуры.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

Фиг. 1. Схема синтеза липида в эукариотных клетках, демонстрирующая экспорт некоторых из жирных кислот, синтезированных в пластидах, в эндоплазматический ретикулум (ЭР) через связанную с пластидой мембрану (СПЛМ), и импорт некоторых из жирных кислот из ЭР в пластиду для эукариотного синтеза галактолипидов. Сокращения:

ацетил-КоА и малонил-КоА: ацетил-кофермент A и малонил-кофермент A;

ACCase: ацетил-КоА карбоксилаза;

FAS: комплекс синтетазы жирных кислот;

16:0-АПБ, 18:0-АПБ и 18:1-АПБ: C16:0-ацилпереносящий белок (АПБ), C18:0-ацилпереносящий белок, C18:1-ацилпереносящий белок;

KAS II: кетоацил-АПБ синтетаза II (EC 2.3.1.41);

PLPAAT: пластидная LPAAT;

PGPAT: пластидная GPAT;

PAP: фосфорилаза ФК (EC 3.1.3.4);

G3P: глицерин-3-фосфат;

LPA: лизофосфатидиновая кислота;

PA: фосфатидиновая кислота;

ДАГ: диацилглицерид;

ТАГ: триацилглицерид;

ацил-КоА и ацил-ФХ: ацил-коэнзим A и ацил-фосфатидилхолин;

ФХ: фосфатидилхолин;

GPAT: глицерил-3-фосфат ацилтрансфераза;

LPAAT: ацилтрансфераза лизофосфатидиновой кислоты (EC 2.3.1.51);

LPCAT: ацил-КоА:лизофосфатидилхолин ацилтрансфераза; или синонимы 1-ацилглицерофосфохолин O-ацилтрансфераза; ацил-КоА:1-ацил-sn-глицеро-3-фосфохолин O-ацилтрансфераза (EC 2.3.1.23),

CPT: холинфосфотрансфераза ХДГ-холин:диацилглицерил холинфосфотрансфераза; или синонимы 1-алкил-2-ацетилглицерил холинфосфотрансфераза; алкилацилглицерил холинфосфотрансфераза; холинфосфотрансфераза; фосфорилхолин-глицерид трансфераза (EC 2.7.8.2),

PDCT: фосфатидилхолин:диацилглицерил холинфосфотрансфераза,

PLC: фосфолипаза C (EC 3.1.4.3),

PLD: фосфолипаза D; холин фосфатаза; лецитиназа D; липофосфодиэстераза II (EC 3.1.4.4),

PDAT: фосфолипид: диацилглисерил ацилтрансфераза; или синоним фосфолипид: 1,2-диацил-sn-глицерил O-ацилтрансфераза (EC 2.3.1.158);

FAD2: Δ 12-десатураза жирных кислот; FAD3, Δ15-десатураза жирных кислот;

UDP-Gal: уридиндифосфатгалактоза;

MGDS: моногалактозилдиацилглицерид синтетаза;

MGDG: моногалактозилдиацилглицерид; ДГДГ: дигалактозилдиацилглицерид

FAD6, 7, 8: пластидная Δ12-десатураза жирных кислот, пластидная ω3-десатураза, пластидная ω3-десатураза, индуцируемые при низкой температуре, соответственно.

Фиг. 2. Схематическая генетическая карта конструкции для повышения содержания масла из семян в двудольных растениях. Сокращения: PRO Pissa-Vicillin, промотор вицилина и 5' НТР Pisum sativum; TMV leader, 5'НТР вируса мозаики табака; Arath-DGAT1, кодирующий белок участок, который кодирует DGAT1 A. thaliana; TER Glyma-Lectin, 3' участок терминатора/полиаденилирования гена лектина G. max; PRO Phavu-Phaseolin, промотор из гена белка фазеолина Phaseolus vulgaris; Arath-WRI1, кодирующий белок участок, который кодирует WRI1 A. thaliana; TER AGRTU-NOS, 3' участок терминатора/полиаденилирования гена НОС Agrobacterium tumefaciens; РRО Phavu-PHA, промотор гена фазеолина Phaseolus vulgaris; Sesin-Oleosin, кодирующий белок участок, который кодирует ген олеозина Sesame indicum; TER Phavu-PHA, 3' участок терминатора/полиаденилирования гена фазеолина Phaseolus vulgaris.

Фиг. 3. Схематическая диаграмма вектора pOIL122. Сокращения: TER Agrtu-NOS, терминатор нопалинсинтетазы Agrobacterium tumefaciens; NPTII, участок кодирования белка неомицинфосфотрансферазы; PRO CaMV35S-Ex2, промотор 35S вируса мозаики цветной капусты с двойным участком энхансера; Arath-DGAT1, участок кодирования белка ацилтрансферазы DGAT1 Arabidopsis thaliana; PRO Arath-Rubisco SSU, промотор маленькой субъединицы Rubisco A. thaliana; Arath-FATA2, участок кодирования белка тиоэстеразы FATA2 A. thaliana; Arath-WRI, участок кодирования белка фактора транскрипции WRI1 A. thaliana; TER Glyma-Lectin, терминатор лектина Glycine max; промотор enTCUP2, криптический конститутивный промотор Nicotiana tabacum; attB1 и attB2, сайты рекомбинации Gateway; фрагмент NB SDP1, участок SDP1 Nicotiana benthamiana, служащий мишенью для сайленсинга шпРНКи; терминатор ОКС, терминатор октопинсинтетазы A. tumefaciens. Признаки скелета за пределами участка T-ДНК получены из pORE04 (Coutu с соавт., 2007).

Фиг. 4. Профили метиловых эфиров общих жирных кислот (% масс.) (МЭЖК), иллюстрирующие влияние опосредованного WRI1+DGAT1 генетического фона с высоким содержанием масла на выработку среднецепочечных жирных кислот (СЦЖК) в листе Nicotiana benthamiana (n=4). Наиболее высокая выработка СЦЖК наблюдалась после добавления Arath-WRI1.

Фиг. 5. Профили общих МЭЖК в листьях (% масс.), проясняющие влияние WRI1 на аккумуляцию СЦЖК (n=4). Добавление Arath-WRI1 значительно повысило выработку соответствующей жирной кислоты (C12:0, C14:0 или C16:0) относительно предыдущего добавления только Cocnu-LPAAT.

Фиг. 6. Уровни общих жирных кислот (ОЖК) (% масс.), уровни ТАГ, уровни СЦЖК (C16:0 и C14:0, % от общих жирных кислот) в ОЖК и СЦЖК в ТАГ (% от общего содержания жирных кислот в ТАГ) в клетках растения после экспрессии комбинаций трех DGAT масличной пальмы с FATB, LPAAT и WRI1. Номера 1-10 такие же, как приведено в тексте (Пример 9).

Фиг. 7. Уровни ТАГ (% сухой массы листа) в ткани листа N. benthamiana, инфильтрованной генами, кодирующими различные полипептиды WRI1, с (прямоугольники справа) или без (прямоугольники слева) кo-экспрессией DGAT1 (n=3). Все образцы дополнительно были инфильтрованы конструкцией P19.

Фиг. 8. Схематическое представление конструкции шпильки SDP1 N. benthamiana. Проиллюстрированные генетические сегменты являются такими, как описано в Примере 11. Сокращения являются такими, как приведено на Фиг. 3. Сайты attB представляют собой сайты рекомбинации из вектора pHELLSGATE12.

Фиг. 9. Содержание ТАГ в образцах зеленых листьев растений табака, трансформированных T-ДНК из pOIL51, линии №61 и №69, собранных перед цветением. Контрольные (родительские) образцы были получены от растений, трансформированных T-ДНК из pJP3502.

Фиг. 10. Уровни ТАГ (% сухой массы) в корне и ткани ствола дикого типа (дт) и трансгенных растений N. tabacum, содержащих только T-ДНК из pJP3502 или дополнительно содержащих T-ДНК из pOIL051.

Фиг. 11. Уровни ТАГ (% сухой массы) в корне и ткани ствола дикого типа (дт) и трансгенных растений N. tabacum, содержащих только T-ДНК из pJP3502 или дополнительно содержащих T-ДНК из pOIL049.

Фиг. 12. Содержание ТАГ в образцах листьев растений табака в стадии завязывания семян, трансформированных T-ДНК из pOIL049, линии №23c и №32b. Контрольные (родительские) образцы были получены от растений, трансформированных T-ДНК из pJP3502. Верхняя линия иллюстрирует процент 18:2 в ТАГ, а нижняя линия иллюстрирует процент 18:3 (АЛК) в содержании жирных кислот.

Фиг. 13. A. Содержание крахмала в листовой ткани растений дикого типа (ДТ) и трансгенных растений, содержащих T-ДНК из pJP3502 (контроль HO) или Т-ДНК как из pJP3502, так и из pOIL051 (pOIL51.61 и pOIL51.69), или как из pJP3502, так и из pOIL049 (pOIL49.32b). Данные представляют объединенные результаты по меньшей мере для трех индивидуальных растений. B. Корреляция между содержанием крахмала и ТАГ в листовой ткани растений дикого типа (ДТ) и трансгенных растений, содержащих T-ДНК из pJP3502 (контроль HO) или Т-ДНК как из pJP3502, так и из pOIL051 (pOIL51.61 и pOIL51.69), или как из pJP3502, так и из pOIL049 (pOIL49.32b). Данные представляют объединенные результаты по меньшей мере для трех индивидуальных растений.

Фиг. 14. Схематическое представление бинарного вектора pTV55. Сокращения: PRO, промотор; TER, 3' участок терминации/полиаденилирования; Arath, A. thaliana; Linus, Linum usitatissimum; Nicta, Nicotiana tabacum; Glyma, G. max; Cnl1, конлинин 1 из льна; Cnl2, конлинин 2 из льна; MAR Nicat-RB7, участок прикрепления к матриксу из RB7 табака, или как на Фиг. 3. Сокращения генов MGAT2, DGAT1, GPAT4, WRI1 такие же, как в тексте.

Фиг. 15. Содержание масла (%) в семенах T2 C. sativa, по данным ЯМР трансформированных pTV55, pTV56 и pTV57. Каждая точка данных представляет среднее содержание масла для трех независимых партий семени по 50 мг от каждой трансгенной линии. Семена отрицательного контроля представляли собой семена C. sativa дикого типа (нетрансформированные), выращенные в таких же условиях в теплице. N указывает на количество независимых трансгенных событий для каждой конструкции.

Фиг. 16. Филогенетическое дерево полипептидов LDAP (Пример 15).

Фиг. 17. Схематическое представление генетической конструкции pJP3506, включая участок T-ДНК между левой и правой границами. Сокращения такие же, как на Фиг. 3, и: Sesin-Oleosin, участок кодирования белка олеозина Sesame indicum.

Фиг. 18. Выход и изменение калорийности для выработки бионефти методом гидротермической обработки (ГТО) из вегетативного растительного материала табака с высоким содержанием масла, дикого типа и трансгенного, в качестве исходного сырья.

КЛЮЧ К ПЕРЕЧНЮ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

SEQ ID NO: 1 полипептид DGAT1 Arabidopsis thaliana (CAB44774.1)

SEQ ID NO: 2 полипептид DGAT2 Arabidopsis thaliana (NP_566952.1)

SEQ ID NO: 3 полипептид DGAT2 Ricinus communis (AAY16324.1)

SEQ ID NO: 4 полипептид DGAT2 Vernicia fordii (ABC94474.1)

SEQ ID NO: 5 полипептид DGAT2 Mortierella ramanniana (AAK84179.1)

SEQ ID NO: 6 полипептид DGAT2 Homo sapiens (Q96PD7.2)

SEQ ID NO: 7 полипептид DGAT2 Homo sapiens (Q58HT5.1)

SEQ ID NO: 8 полипептид DGAT2 Bos taurus (Q70VZ8.1)

SEQ ID NO: 9 полипептид DGAT2 Mus musculus (AAK84175.1)

SEQ ID NO: 10 YFP трипептид-консервативная DGAT2 и/или мотив последовательности MGAT1/2

SEQ ID NO: 11 HPHG тетрапептид-консервативная DGAT2 и/или мотив последовательности MGAT1/2

SEQ ID NO: 12 мотив последовательности EPHS тетрапептид-консервативной растительной DGAT2

SEQ ID NO: 13 RXGFX(K/R)XAXXXGXXX(L/V)VPXXXFG(E/Q) -длинный консервативный мотив последовательности DGAT2, который представляет собой часть предполагаемого глицерил фосфолипидного домена

SEQ ID NO: 14 FLXLXXXN - консервативный мотив последовательности DGAT2 и MGAT1/2 мыши, который представляет собой предполагаемый домен связывания с нейтральным липидом

SEQ ID NO: 15 домен plsC ацилтрансферазы (PF01553) GPAT

SEQ ID NO: 16 домен суперсемейства галогенокислоты дегалогеназы (ГКД)-подобной гидролазы (PF12710) GPAT

SEQ ID NO: 17 домен фосфосерин фосфатазы (PF00702). GPAT4-8 содержит N-концевой участок, гомологичный указанному домену.

SEQ ID NO: 18 Консервативная последовательность аминокислоты GPAT GDLVICPEGTTCREP

SEQ ID NO: 19 Консервативная последовательность аминокислоты GPAT/фосфатазы (Мотив I)

SEQ ID NO: 20 Консервативная последовательность аминокислоты GPAT/фосфатазы (Мотив III)

SEQ ID NO: 21 полипептид WRI1 Arabidopsis thaliana (A8MS57).

SEQ ID NO: 22 полипептид WRI1 Arabidopsis thaliana (Q6X5Y6)

SEQ ID NO: 23 полипептид WRI1 Arabidopsis lyrata подвид lyrata (XP_002876251.1)

SEQ ID NO: 24 полипептид WRI1 Brassica napus (ABD16282.1)

SEQ ID NO: 25полипептид WRI1Brassica napus (ADO16346.1)

SEQ ID NO: 26 полипептид WRI1 Glycine max (XP_003530370.1)

]SEQ ID NO: 27 полипептид WRI1 Jatropha curcas (AEO22131.1)

[SEQ ID NO: 28 полипептид WRI1 Ricinus communis (XP_002525305.1)

SEQ ID NO: 29 полипептид WRI1 Populus trichocarpa (XP_002316459.1)

SEQ ID NO:30 полипептид WRI1 Vitis vinifera (CBI29147.3)

SEQ ID NO: 31 полипептид WRI1 Brachypodium distachyon (XP_003578997.1)

SEQ ID NO: 32 полипептид WRI1 Hordeum vulgare подвид. vulgare (BAJ86627.1)

SEQ ID NO: 33 полипептид WRI1 Oryza sativa (EAY79792.1)

SEQ ID NO: 34 полипептид WRI1 Sorghum bicolor (XP_002450194.1)

SEQ ID NO: 35 полипептид WRI1 Zea mays (ACG32367.1)

SEQ ID NO: 36 полипептид WRI1 Brachypodium distachyon (XP_003561189.1)

SEQ ID NO: 37 полипептид WRI1 Brachypodium sylvaticum (ABL85061.1)

SEQ ID NO: 38 полипептид WRI1 Oryza sativa (BAD68417.1)

SEQ ID NO: 39 полипептид WRI1 Sorghum bicolor (XP_002437819.1)

SEQ ID NO: 40 полипептид WRI1 Sorghum bicolor (XP_002441444.1)

SEQ ID NO: 41 полипептид WRI1 Glycine max (XP_003530686.1)

SEQ ID NO: 42 полипептид WRI1 Glycine max (XP_003553203,1)

SEQ ID NO: 43 полипептид WRI1 Populus trichocarpa (XP_002315794.1)

SEQ ID NO: 44 полипептид WRI1 Vitis vinifera (XP_002270149.1)

SEQ ID NO: 45 полипептид WRI1 Glycine max (XP_003533548.1)

SEQ ID NO: 46 полипептид WRI1 Glycine max (XP_003551723.1)

SEQ ID NO: 47 полипептид WRI1 Medicago truncatula (XP_003621117.1)

SEQ ID NO: 48 полипептид WRI1 Populus trichocarpa (XP_002323836.1)

SEQ ID NO: 49 полипептид WRI1 Ricinus communis (XP_002517474.1)

SEQ ID NO: 50 полипептид WRI1 Vitis vinifera (CAN79925.1)

SEQ ID NO: 51 полипептид WRI1 Brachypodium distachyon (XP_003572236.1)

SEQ ID NO: 52 полипептид WRI1 Oryza sativa (BAD10030.1)

SEQ ID NO: 53 полипептид WRI1 Sorghum bicolor (XP_002444429.1)

SEQ ID NO: 54 полипептид WRI1 Zea mays (NP_001170359.1)

SEQ ID NO: 55 полипептид WRI1 Arabidopsis lyrata подвид lyrata (XP_002889265.1)

SEQ ID NO: 56 полипептид WRI1 Arabidopsis thaliana (AAF68121.1)

SEQ ID NO: 57 полипептид WRI1 Arabidopsis thaliana (NP_178088.2)

SEQ ID NO: 55 полипептид WRI1 Arabidopsis lyrata подвид lyrata (XP_002889265.1)

SEQ ID NO: 59 полипептид WRI1 Thellungiella halophila (BAJ33872.1)

SEQ ID NO: 60 полипептид WRI1 Arabidopsis thaliana (NP_563990.1)

SEQ ID NO: 61 полипептид WRI1Glycine max (XP_003530350.1)

SEQ ID NO: 62 полипептид WRI1 Brachypodium distachyon (XP_003578142.1)

SEQ ID NO: 63 полипептид WRI1 Oryza sativa (EAZ09147.1)

SEQ ID NO: 64 полипептид WRI1 Sorghum bicolor (XP_002460236.1)

SEQ ID NO: 65 полипептид WRI1 Zea mays (NP_001146338.1)

SEQ ID NO: 66 полипептид WRI1 Glycine max (XP_003519167.1)

SEQ ID NO: 67 полипептид WRI1 Glycine max (XP_003550676.1)

SEQ ID NO: 68 полипептид WRI1 Medicago truncatula (XP_003610261.1)

SEQ ID NO: 69 полипептид WRI1 Glycine max (XP_003524030.1)

SEQ ID NO: 70 полипептид WRI1 Glycine max (XP_003525949.1)

SEQ ID NO: 71 полипептид WRI1 Populus trichocarpa (XP_002325111.1)

SEQ ID NO: 72 полипептид WRI1 Vitis vinifera (CBI36586.3)

SEQ ID NO: 73 полипептид WRI1 Vitis vinifera (XP_002273046.2)

SEQ ID NO: 74 полипептид WRI1 Populus trichocarpa (XP_002303866.1)

SEQ ID NO: 75 полипептид WRI1 Vitis vinifera (CBI25261.3)

SEQ ID NO: 76 Sorbi-WRL1

SEQ ID NO: 77 Lupan-WRL1

SEQ ID NO: 78 Ricco-WRL1

SEQ ID NO: 79 полипептид WRI1 Lupin angustifolius

SEQ ID NO: 80 полипептид DGAT1 Aspergillus fumigatus (XP_755172.1)

SEQ ID NO: 81 полипептид DGAT1 Ricinus communis (AAR11479.1)

SEQ ID NO: 82 полипептид DGAT1 Vernicia fordii (ABC94472.1)

SEQ ID NO: 83 полипептид DGAT1 Vernonia galamensis (ABV21945.1)

SEQ ID NO: 84 полипептид DGAT1 Vernonia galamensis (ABV21946.1)

SEQ ID NO: 85 полипептид DGAT1 Euonymus alatus (AAV31083.1)

SEQ ID NO: 86 полипептид DGAT1 Caenorhabditis elegans (AAF82410.1)

SEQ ID NO: 87 полипептид DGAT1 Rattus norvegicus (NP_445889.1)

SEQ ID NO: 88 полипептид DGAT1 Homo sapiens (NP_036211.2)

SEQ ID NO: 89 мотив WRI1 (R G V T/S R H R W T G R)

SEQ ID NO: 90 мотив WRI1 (F/Y E A H L W D K)

SEQ ID NO: 91 мотив WRI1 (D L A A L K Y W G)

SEQ ID NO: 92 мотив WRI1 (S X G F S/A R G X)

SEQ ID NO: 93 мотив WRI1 (H H H/Q N G R/K W E A R I G R/K V)

SEQ ID NO: 94 мотив WRI1 (Q E E A A A X Y D)

SEQ ID NO: 95 полипептид олеозин Brassica napus (CAA57545.1)

SEQ ID NO: 96 полипептид олеозин S1-1Brassica napus (ACG69504.1)

SEQ ID NO: 97 полипептид олеозин S2-1 Brassica napus (ACG69503.1)

SEQ ID NO: 98 полипептид олеозин S3-1 Brassica napus (ACG69513.1)

SEQ ID NO: 99 полипептид олеозин S4-1 Brassica napus (ACG69507.1)

SEQ ID NO: 100 полипептид олеозин S5-1 Brassica napus (ACG69511.1)

SEQ ID NO: 101 полипептид олеозин 1 Arachis hypogaea (AAZ20276.1)

SEQ ID NO: 102 полипептид олеозин 2 Arachis hypogaea (AAU21500.1)

SEQ ID NO: 103 полипептид олеозин 3 Arachis hypogaea (AAU21501.1)

SEQ ID NO: 104 полипептид олеозин 5 Arachis hypogaea (ABC96763.1)

SEQ ID NO: 105 полипептид олеозин 1 Ricinus communis (EEF40948.1)

SEQ ID NO: 106 полипептид олеозин 2 Ricinus communis (EEF51616.1)

SEQ ID NO: 107 полипептид олеозин Glycine max изоформа a (P29530.2)

SEQ ID NO: 108 полипептид олеозин Glycine max изоформа b (P29531.1)

SEQ ID NO: 109 полипептид олеозин Linum usitatissimum низкомолекулярная изоформа (ABB01622.1)

SEQ ID NO: 110 последовательность аминокислоты полипептида олеозин Linum usitatissimum высокомолекулярная изоформа (ABB01624.1)

SEQ ID NO: 111 полипептид олеозин Helianthus annuus (CAA44224.1)

SEQ ID NO: 112 полипептид олеозин Zea mays (NP_001105338.1)

SEQ ID NO: 113 полипептид стеролеозин Brassica napus (ABM30178.1)

SEQ ID NO: 114 полипептид стеролеозин SLO1-1 Brassica napus (ACG69522.1)

SEQ ID NO: 115 полипептид стеролеозин SLO2-1 Brassica napus (ACG69525.1)

SEQ ID NO: 116 полипептид стеролеозин Sesamum indicum (AAL13315.1)

SEQ ID NO: 117 полипептид стеролеозин Zea mays (NP_001152614.1)

SEQ ID NO: 118 полипептид калеозин CLO-1 Brassica napus (ACG69529.1)

SEQ ID NO: 119 полипептид калеозин CLO-3 Brassica napus (ACG69527.1)

SEQ ID NO: 120 полипептид калеозин Sesamum indicum (AAF13743.1)

SEQ ID NO: 121 полипептид калеозин Zea mays (NP_001151906.1)

SEQ ID NO: 122 последовательность Т-ДНК pJP3502 (вставленная в геном)

SEQ ID NO: 123 последовательность вектора pJP3507

SEQ ID NO: 124 последовательность линкера

SEQ ID NO: 125 частичная последовательность CGI-58 Nicotiana benthamiana, выбранная для сайленсинга шпРНКи (pTV46)

SEQ ID NO: 126 частичная последовательность АГФазы N. tabacum, выбранная для сайленсинга шпРНКи (pTV35)

SEQ ID NO: 127 мотив липазы GXSXG

SEQ ID NO: 128 мотив ацилтрансферазы HX(4)D

SEQ ID NO: 129 вероятный мотив связывания с липидом VX(3)HGF

SEQ ID NO: 130 полинуклеотид CGi58 Arabidopsis thaliana (NM_118548.1)

SEQ ID NO: 131 полинуклеотид CGi58 Brachypodium distachyon (XM_003578402.1)

SEQ ID NO: 132 полинуклеотид CGi58 Glycine max (XM_003523590.1)

SEQ ID NO: 133 полинуклеотид CGi58 Zea mays (NM_001155541.1)

SEQ ID NO: 134 полинуклеотид CGi58 Sorghum bicolor (XM_002460493.1)

SEQ ID NO: 135 полинуклеотид CGi58 Ricinus communis (XM_002510439.1)

SEQ ID NO: 136 полинуклеотид CGi58 Medicago truncatula (XM_003603685.1)

SEQ ID NO: 137 полинуклеотид LEC2 Arabidopsis thaliana (NM_102595.2)

SEQ ID NO: 138 полинуклеотид LEC2 Medicago truncatula (X60387.1)

SEQ ID NO: 139 полинуклеотид LEC2 Brassica napus (HM370539.1)

SEQ ID NO: 140 полинуклеотид BBM Arabidopsis thaliana (NM_121749.2)

SEQ ID NO: 141 полинуклеотид BBM Medicago truncatula (AY899909.1)

SEQ ID NO: 142 полипептид LEC2 Arabidopsis thaliana (NP_564304.1)

SEQ ID NO: 143 полипептид LEC2 Medicago truncatula (CAA42938.1)

SEQ ID NO: 144 полипептид LEC2 Brassica napus (ADO16343.1)

SEQ ID NO: 145 полипептид BBM Arabidopsis thaliana (NP_197245.2)

SEQ ID NO: 146 полипептид BBM Medicago truncatula (AAW82334.1)

SEQ ID NO: 147 индуцибельный промотор alcA Aspergilus niger

SEQ ID NO: 148 индуктор AlcR, который активирует промотор AlcA в присутствии этанола

SEQ ID NO: 149 LEC1 Arabidopsis thaliana (AAC39488)

SEQ ID NO: 150 LEC1 Arabidopsis lyrata (XP_002862657)

SEQ ID NO: 151 LEC1 Brassica napus (ADF81045)

SEQ ID NO: 152 LEC1 Ricinus communis (XP_002522740)

SEQ ID NO: 153 LEC1 Glycine max (XP_006582823)

SEQ ID NO: 154 LEC1 Medicago truncatula (AFK49653)

SEQ ID NO: 155 LEC1 Zea mays (AAK95562)

SEQ ID NO: 156 LEC1 Arachis hypogaea (ADC33213)

SEQ ID NO: 157 LEC1-подобный Arabidopsis thaliana (AAN15924)

SEQ ID NO: 158 LEC1-подобный Brassica napus (AHI94922)

SEQ ID NO: 159 LEC1-подобный Phaseolus coccineus (AAN01148)

SEQ ID NO: 160 FUS3 Arabidopsis thaliana (AAC35247)

SEQ ID NO: 161 FUS3 Brassica napus

SEQ ID NO: 162 FUS3Medicago truncatula

SEQ ID NO: 163 последовательность кДНК SDP1 Arabidopsis thaliana, номер доступа NM_120486, 3275 нуклеотидов (нт)

SEQ ID NO: 164 кДНК SDP1 Brassica napus номер доступа GN078290

SEQ ID NO: 165 кДНК SDP1 Brachypodium distachyon, 2670 нуклеотидов (нт)

SEQ ID NO: 166 кДНК SDP1 Populus trichocarpa, 3884 нт

SEQ ID NO: 167 кДНК SDP1 Medicago truncatula; XM_003591377; 2490 нт

SEQ ID NO: 168 кДНК SDP1Glycine max XM_003521103; 2783 нт

SEQ ID NO: 169 кДНК SDP1Sorghum bicolor XM_002458486; 2724 нт

SEQ ID NO: 170 кДНК SDP1Zea mays, NM_001175206; 2985 нт

SEQ ID NO: 171 кДНК SDP1Physcomitrella patens, XM_001758117; 1998 нт

SEQ ID NO: 172 кДНК SDP1 Hordeum vulgare, AK372092; 3439 нт

SEQ ID NO: 173 кДНК SDP1Nicotiana benthamiana, Nbv5tr6404201

SEQ ID NO: 174 участок кДНК SDP1 Nicotiana benthamiana, являющийся мишенью для сайленсинга шпРНКи

SEQ ID NO: 175 промотор гена SDP1 Arabidopsis thaliana, 1,5 тысяч пар оснований

SEQ ID NO: 176 нуклеотидная последовательность, комплементарная гену pSSU-Олеозина в Т-ДНК pJP3502. В порядке (комплементарный последовательности): терминатор лектина Glycine max 348 нт, 3' экзон 255 нт, интрон UBQ10 304 нт, 5' экзон 213 нт, промотор SSU 1751 нт

SEQ ID NO: 177 кДНК пластидной GPAT Arabidopsis thaliana, NM_179407

SEQ ID NO: 178 полипептид пластидной GPAT Arabidopsis thaliana, NM_179407

SEQ ID NO: 179 кДНК пластидной GPAT Populus trichocarpa, XP_006368351

SEQ ID NO: 180 кДНК пластидной GPAT Jatropha curcas, ACR61638

SEQ ID NO: 181 кДНК пластидной GPAT Ricinus communis, XP_002518993

SEQ ID NO: 182 кДНК пластидной GPAT Helianthus annuus, ADV16382

SEQ ID NO: 183 кДНК пластидной GPAT Medicago truncatula, XP_003612801

SEQ ID NO: 184 кДНК пластидной GPAT Glycine max, XP_003516958

SEQ ID NO: 185 кДНК пластидной GPAT Carthamus tinctorius, CAHG3PACTR

SEQ ID NO: 186 кДНК пластидной GPAT Solanum tuberosum, XP_006352898

SEQ ID NO: 187 кДНК пластидной GPAT Oryza sativa, японской, NM_001072027

SEQ ID NO: 188 кДНК пластидной GPAT Sorghum bicolor, XM_002467381

SEQ ID NO: 189 кДНК пластидной GPAT Zea mays, NM_001158637

SEQ ID NO: 190 кДНК пластидной GPAT Hordeum vulgare, AK371419

SEQ ID NO: 191 кДНК пластидной GPAT Physcomitrella patens, XM_001771247

SEQ ID NO: 192 кДНК пластидной GPAT Chlamydomonas reinhardtii, XM_001694925

SEQ ID NO: 193 14:0-АПБ тиоэстераза Cinnamomum camphora (Cinca-TE), хлоропластная, 382 аминокислоты (ак), (номер доступа Q39473.1)

SEQ ID NO: 194 ацил-АПБ тиоэстераза FatB1 Cocos nucifera (Cocnu-TE1; 417 ак, номер доступа AEM72519.1

SEQ ID NO: 195 ацил-АПБ тиоэстераза FatB2 Cocos nucifera (Cocnu-TE2; 423 ак, номер доступа AEM72520.1)

SEQ ID NO: 196 ацил-АПБ тиоэстераза FatB3 Cocos nucifera (Cocnu-TE3; 414 ак, номер доступа AEM72521.1)

SEQ ID NO: 197 ацил-(АПБ) тиоэстераза типа B Cuphea lanceolata (Cupla-TE, 419 ак, номер доступа CAB60830.1)

SEQ ID NO: 198 FatB1 Cuphea viscosissima (Cupvi-TE; 419 ак, номер доступа AEM72522.1)

SEQ ID NO: 199 12:0-АПБ тиоэстераза Umbellularia californica (лауроил-ацилпереносящего белка тиоэстераза) (Umbca-TE, 382 ак; номер доступа Q41635.1)

SEQ ID NO: 200 LPAAT Cocos nucifera (Cocnu-LPAAT, 308 ак, номер доступа Q42670.1)

SEQ ID NO: 201 пластидная LPAAT1 Arabidopsis thaliana (Arath-PLPAAT; 356 ак, номер доступа AEE85783.1)

SEQ ID NO: 202 FATA1Arabidopsis thaliana

SEQ ID NO: 203 FATA2 Arabidopsis thaliana

SEQ ID NO: 204 FATB Arabidopsis thaliana

SEQ ID NO: 205 WRI3 Arabidopsis thaliana

SEQ ID NO: 206 WRI4 Arabidopsis thaliana

SEQ ID NO: 207 WRI1Avena sativa

SEQ ID NO: 208 WRI1 Sorghum bicolor

SEQ ID NO: 209 WRI1 Zea mays

SEQ ID NO: 210 WRI1Triadica sebifera

SEQ ID NO: 211 последовательность промотора пататина B33 S. tuberosum

SEQ ID NO 212-215 и 245-254 олигонуклеотидные праймеры

SEQ ID NO: 216 участок промотора SEE1 Z. mays (1970 нт из номера доступа AJ494982)

SEQ ID NO: 217 последовательность промотора AlSAP A. littoralis, номер доступа DQ885219

SEQ ID NO: 218 последовательность промотора ArRolC A. rhizogenes, номер доступа DQ160187

SEQ ID NO: 219 конструкция шпРНКи, содержащая фрагмент 732 пар оснований (по) пластидной GPAT N. benthamiana

SEQ ID NO: 220 DGAT1 Elaeis guineensis (масличная пальма)

SEQ ID NO: 221 MYB73 G. max, номер доступа ABH02868

SEQ ID NO: 222 bZIP53 A. thaliana, номер доступа AAM14360

SEQ ID NO: 223 AGL15 A. thaliana, номер доступа NP_196883

SEQ ID NO: 224 MYB118 A. thaliana, номер доступа AAS58517

SEQ ID NO: 225 MYB115 A. thaliana, номер доступа AAS10103

SEQ ID NO: 226 TANMEI A. thaliana, номер доступа BAE44475

SEQ ID NO: 227 WUS A. thaliana, номер доступа NP_565429

SEQ ID NO: 228 GFR2a1 B. napus, номер доступа AFB74090

SEQ ID NO: 229 GFR2a2 B. napus, номер доступа AFB74089

SEQ ID NO: 230 PHR1 A. thaliana, номер доступа AAN72198

SEQ ID NO: 231 фрагмент TGD1 N. benthamiana

SEQ ID NO: 232 аминокислоты SDP1 картофеля

SEQ ID NO: 233 нуклеотидная последовательность SDP1 картофеля

SEQ ID NO: 234 малая субъединица АГФ-азы картофеля

SEQ ID NO: 235 нуклеотидная последовательность малой субъединицы АГФ-азы картофеля

SEQ ID NO: 236 нуклеотидная последовательность LDAP-1 Sapium sebiferum

SEQ ID NO: 237 аминокислотная последовательность LDAP-1Sapium sebiferum

SEQ ID NO: 238 нуклеотидная последовательность LDAP-2 Sapium sebiferum

SEQ ID NO: 239 аминокислотная последовательность LDAP-2 Sapium sebiferum

SEQ ID NO: 240 нуклеотидная последовательность LDAP-3 Sapium sebiferum

SEQ ID NO: 241 аминокислотная последовательность LDAP-3 Sapium sebiferum

SEQ ID NO: 242 SDP1 S. bicolor (номер доступа XM_002463620)

SEQ ID NO: 243 нуклеотидная последовательность SDP1 T. aestivum (номер доступа AK334547)

SEQ ID NO: 244 фрагмент SDP1 шпРНКи S. bicolor

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Общие методы

Если конкретно не определено иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, следует интерпретировать как имеющие такое же значение, которое им обычно придает средний специалист в данной области (например, культуры клеток, молекулярной генетики, биологии растений, клеточной биологии, химии белка, химии липида и жирной кислоты, получения биотоплива и биохимии).

Если не указано иное, методы химии рекомбинантного белка, культуры клетки и иммунологические методы, применяемые в настоящем изобретении, представляют собой стандартные методики, хорошо известные специалистам из уровня техники. Такие методы описаны и объяснены в литературных источниках, например, J. Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning, John Wiley and Sons (1984), J. Sambrook с соавт., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbour Laboratory Press (1989), T.A. Brown (редактор), Essential Molecular Biology: A Practical Approach, Volumes 1 and 2, IRL Press (1991), D.M. Glover and B.D. Glover and B.D. Hames (редакторы), DNA Cloning: A Practical Approach, Volumes 1-4, IRL Press (1995 и 1996), F.M. Ausubel с соавт. (редакторы), Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates and Wiley-Interscience (1988, включая все обновления, изданные до настоящего времени), Ed Harlow and David Lane (редакторы) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbour Laboratory, (1988), и J.E. Coligan с соавт. (редакторы), Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (включая все обновления, изданные до настоящего времени).

Некоторые определения

Термин «трансгенный организм, не относящийся к человеческому роду» обозначает, например, цельное растение, водоросль, не относящиеся к человеческому роду животное или организм, пригодный для ферментации, такой как дрожжи или гриб, содержащий один или более экзогенных полинуклеотидов (трансген) или полипептидов. В варианте реализации трансгенный организм, не относящийся к человеческому роду, не является животным или его частью. В одном варианте реализации трансгенный организм, не относящийся к человеческому роду, представляет собой фототрофный организм (например, растение или водоросль), способный к получению из солнечного света энергии для синтеза питательных органических соединений.

Термин «экзогенный» в контексте полинуклеотида или полипептида обозначает полинуклеотид или полипептид, присутствующий в клетке, которая от природы не содержит полинуклеотида или полипептида. Такая клетка в настоящем документе называется «рекомбинантной клеткой» или «трансгенной клеткой». В варианте реализации экзогенный полинуклеотид или полипептид происходит из другого рода относительно клетки, содержащей экзогенный полинуклеотид или полипептид. В другом варианте реализации экзогенный полинуклеотид или полипептид происходит от другого вида. В одном варианте реализации экзогенный полинуклеотид или полипептид экспрессируется в растении-хозяине или растительной клетке, и экзогенный полинуклеотид или полипептид происходит от другого вида или рода. Экзогенный полинуклеотид или полипептид может быть неприродным, например, таким как синтетическая молекула ДНК, которая получена способами рекомбинации ДНК. Молекула ДНК может, часто предпочтительно, содержать кодирующий белок участок, который является кодон-оптимизированным для экспрессии в клетке, с получением таким образом полипептида, который содержит такую же последовательность аминокислот, что и природный полипептид, даже если нуклеотидная последовательность кодирующего белок участка имеет неприродное происхождение. Экзогенный полинуклеотид может кодировать или экзогенный полипептид может представлять собой: диацилглицерил ацилтрансферазу (DGAT), например, DGAT1 или DGAT2, фактор транскрипции Wrinkled 1 (WRI1), на ПМТ, таком как олеозин или, предпочтительно, БСКЛ, тиоэстераза жирной кислоты, такая как полипептид FATA или FATB или полипептид супрессора сайленсинга.

В настоящем документе термин «экстрагированный липид» обозначает состав, экстрагированный из трансгенного организма или его части, который содержит по меньшей мере 60% (масс./масс.) липида.

В настоящем документе термин «неполярный липид» обозначает жирные кислоты и их производные, растворимые в органических растворителях, но не растворимые в воде. Жирные кислоты могут быть жирными кислотами в свободной и/или этерифицированной форме. Примеры этерифицированных форм включают, без ограничений, триацилглицерид (ТАГ), диацилглицерид (ДАГ), моноацилглицерид (МАГ). Неполярные липиды также включают стероиды, эфиры стероидов и эфиры восков. Неполярные липиды также известны, как «нейтральные липиды». При комнатной температуре неполярный липид обычно представляет собой жидкость. Предпочтительно, неполярный липид в основном (> 50%) содержит жирные кислоты, длина которых составляет по меньшей мере 16 атомов углерода. Более предпочтительно, по меньшей мере 50% общих жирных кислот в неполярном липиде представляют собой C18 жирные кислоты, например, олеиновую кислоту. Предпочтительно, по меньшей мере 5% от общих жирных кислот в неполярных липидах представляют собой жирные кислоты C12 или C14 или те и другие. В варианте реализации по меньшей мере 50%, более предпочтительно по меньшей мере 70%, более предпочтительно по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90%, более предпочтительно по меньшей мере 91%, более предпочтительно по меньшей мере 92%, более предпочтительно по меньшей мере 93%, более предпочтительно по меньшей мере 94%, более предпочтительно по меньшей мере 95%, более предпочтительно по меньшей мере 96%, более предпочтительно по меньшей мере 97%, более предпочтительно по меньшей мере 98%, более предпочтительно по меньшей мере 99% жирных кислот в неполярном липиде по изобретению могут представлять собой ТАГ. Неполярный липид может быть дополнительно очищен или обработан, например гидролизом с сильным основанием, чтобы высвободить свободную жирную кислоту, или фракционированием, дистилляцией, или подобным методом. Неполярный липид может присутствовать в или быть получен из частей растения, например, семени, листьев, клубней, свеклы или плода, из рекомбинантных клеток или из организмов, не относящихся к человеческому роду, например, дрожжей. Неполярный липид по изобретению может образовывать часть «масла из семян», если он получен из семени.

Концентрация свободного и этерифицированного стероида (например, ситостерола, кампэстрола, стигмастерола, брассикастерола, Δ5-авенастерола, ситостанола, кампестанола и холестерина) в экстрагированном липиде может быть такой, как описано в Phillips с соавт. (2002). Стероиды в растительных маслах присутствуют, как свободные спирты, эфиры с жирными кислотами (этерифицированные стероиды), гликозиды стероидов и ацилированные гликозиды стероидов. Концентрации стероидов в природных растительных маслах (масло из семян) варьируют до максимального содержания приблизительно 1100 мг/100 г. Гидрогенизированное пальмовое масло содержит одну из самых низких концентраций для природных масел, приблизительно 60 мг/100 г. Извлеченные или экстрагированные масла из семян по изобретению предпочтительно содержат от приблизительно 100 до приблизительно 1000 мг общего стероида/100 г масла. В случае применения в качестве продукта питания или корма, предпочтительно, стероиды присутствуют, главным образом, в свободных или этерифицированных формах вместо гликозилированных форм. В маслах из семян по настоящему изобретению, предпочтительно по меньшей мере 50% стероидов в маслах присутствуют, как этерифицированные стероиды, за исключением соевого масла, которое содержит около 25% этерифицированных стероидов. Масло из семени рапса и рапса по изобретению предпочтительно содержат от приблизительно 500 до приблизительно 800 мг общего стероида/100 г, причем основным стероидом является ситостерол, и вторым по распространенности - кампэстрол. Кукурузное масло из семени по изобретению предпочтительно содержит от приблизительно 600 до приблизительно 800 мг общего стероида/100 г, причем основным стероидом является ситостерол. Соевое масло из семени по изобретению предпочтительно содержит от приблизительно 150 до приблизительно 350 мг общего стероида/100 г, причем основным стероидом является ситостерол, и вторым по распространенности - стигмастерол, и, при этом, содержание свободного стероида выше, чем этерицифированного стероида. Хлопковое масло по изобретению предпочтительно содержит от приблизительно 200 до приблизительно 350 мг общего стероида/100 г, причем основным стероидом является ситостерол. Кокосовое масло и пальмовое масло по изобретению предпочтительно содержат от приблизительно 50 до приблизительно 100 мг общего стероида/100 г, причем основным стероидом является ситостерол. Сафлоровое масло из семени по изобретению предпочтительно содержит от приблизительно 150 до приблизительно 250 мг общего стероида/100 г, причем основным стероидом является ситостерол. Арахисовое масло по изобретению предпочтительно содержит от приблизительно 100 до приблизительно 200 мг общего стероида/100 г, причем основным стероидом является ситостерол. Кунжутное масло из семени по изобретению предпочтительно содержит от приблизительно 400 до приблизительно 600 мг общего стероида/100 г, причем основным стероидом является ситостерол. Масло подсолнечника из семени по изобретению предпочтительно содержит от приблизительно 200 до 400 мг общего стероида/100 г, причем основным стероидом является ситостерол. Масла, полученные из вегетативных частей растения по изобретению, предпочтительно содержат менее 200 мг общего стероида/100 г, более предпочтительно менее 100 мг общего стероида/100 г, и наиболее предпочтительно менее 50 мг общего стероида/100 г, причем большая часть стероидов присутствует в форме свободных стероидов.

В настоящем документе термин «масло из семян» обозначает состав, полученный из семени/зерна растения, содержащего по меньшей мере 60% (масс./масс.) липидов, или такой, который можно получить из семени/зерна, если масло из семян все еще присутствует в семени/зерне. Таким образом, масло из семян по изобретению включает масло из семян, которое присутствует в семени/зерне или его части, а также масло из семян, которое экстрагировано из семени/зерна. Масло из семян предпочтительно является экстрагированным маслом из семян. Масло из семян при комнатной температуре обычно представляет собой жидкость. Предпочтительно, общее содержание жирных кислот (ОЖК) в масле из семян в основном (> 50%) включает жирные кислоты, длина которых составляет по меньшей мере 16 атомов углерода. Более предпочтительно, по меньшей мере 50% общих жирных кислот в масле из семян представляют собой C18 жирные кислоты например, олеиновую кислоту. Жирные кислоты обычно присутствуют в этерифицированной форме, например, такой как ТАГ, ДАГ, ацил-КоА или фосфолипид. Жирные кислоты могут быть жирными кислотами в свободной и/или этерифицированной форме. В варианте реализации изобретения по меньшей мере 50%, более предпочтительно по меньшей мере 70%, более предпочтительно по меньшей мере 80%, более предпочтительно по меньшей мере 90%, более предпочтительно по меньшей мере 91%, более предпочтительно по меньшей мере 92%, более предпочтительно по меньшей мере 93%, более предпочтительно по меньшей мере 94%, более предпочтительно по меньшей мере 95%, более предпочтительно по меньшей мере 96%, более предпочтительно по меньшей мере 97%, более предпочтительно по меньшей мере 98%, более предпочтительно по меньшей мере 99% жирных кислот в масле из семян по изобретению могут быть найдены в виде ТАГ. В варианте реализации масло из семян по изобретению представляет собой «в существенной мере очищенное» или «очищенное» масло, которое отделено от одного или более других липидов, нуклеиновых кислот, полипептидов или других загрязняющих молекул, с которыми оно связано в семени или в неочищенном экстракте. Предпочтительно, в существенной мере очищенное масло из семян по меньшей мере на 60% свободно, более предпочтительно по меньшей мере на 75% свободно, и более предпочтительно, по меньшей мере на 90% свободно от других компонентов, с которыми оно связано в семени или экстракте. Масло из семян по изобретению может дополнительно содержать молекулы, не относящиеся к классу жирных кислот, например, без ограничений, стероиды. В варианте реализации масло из семян представляет собой масло рапса (вид Brassica, такой как Brassica carinata, Brassica juncea, Brassica napobrassica, Brassica napus), горчичное масло (Brassica juncea), масло других видов Brassica (например, Brassica napobrassica, Brassica camelina), масло подсолнечника (вид Helianthus, такой как Helianthus annuus), льняное масло (Linum usitatissimum), соевое масло (Glycine max), сафлоровое масло (Carthamus tinctorius), кукурузное масло (Zea mays), масло табака (вид Nicotiana, такой как Nicotiana tabacum или Nicotiana benthamiana), арахисовое масло (Arachis hypogaea), пальмовое масло (Elaeis guineensis), хлопковое масло (Gossypium hirsutum), кокосовое масло (Cocos nucifera), масло авокадо (Persea americana), оливковое масло (Olea europaea), масло кешью (Anacardium occidentale), масло макадамии (Macadamia intergrifolia), миндальное масло (Prunus amygdalus), масло из семян овса (Avena sativa), рисовое масло (вид Oryza, такой как Oryza sativa и Oryza glaberrima), масло из семян Arabidopsis (Arabidopsis thaliana) или масло из семян Acrocomia aculeata (макаубская пальма), Aracinis hypogaea (арахис), Astrocaryum murumuru (мурумуру), Astrocaryum vulgare (тукума), Attalea geraensis (атталия), Attalea humilis (американская масличная пальма), Attalea oleifera (андайя), Attalea phalerata (урикури), Attalea speciosa (бабассу), Beta vulgaris (сахарная свекла), Camelina sativa (ложный лен), Caryocar brasiliense (пекви), Crambe abyssinica (абиссинская капуста), Cucumis melo (дыня), Hordeum vulgare (ячмень), Jatropha curcas (лечебный орех), Joannesia princeps (лещина арара), Licania rigida (ойтика), Lupinus angustifolius (люпин), Mauritia flexuosa (пальма бурити), Maximiliana maripa (пальма инайя), вид Miscanthus, такой как Miscanthus x giganteus и Miscanthus sinensis, Oenocarpus bacaba (бакаба-до-азейте), Oenocarpus bataua (патайя), Oenocarpus distichus (бакаба-де-лек), Panicum virgatum (просо прутьевидное), Paraqueiba paraensis (марь), Persea amencana (авокадо), Pongamia pinnata (индийский бук), Populus trichocarpa, Ricinus communis (клещевина), вид Saccharum (сахарный тростник), Sesamum indicum (кунжут), Solanum tuberosum (картофель), вид Sorghum такой как Sorghum bicolor, Sorghum vulgare, Theobroma grandiforum (какао) вид Trifolium, Trithrinax brasiliensis (бразильская игольчатая пальма) и вид Triticum. (пшеница) такой как Triticum aestivum. Масло из семян может быть экстрагировано из семени/зерна любым способом, известным из уровня техники. Такие способы обычно включают экстракцию неполярными растворителями, такими как диэтиловый эфир, петролейный эфир, смеси хлороформ/метанол или бутанол, в общем, ассоциирующимися с первым дроблением семян. Липиды, связанные с крахмалом в зерне, могут быть экстрагированы с помощью насыщенного водой бутанола. Масло из семян может быть «дегуммировано» способами, известными из уровня техники, чтобы удалить полисахариды, или обработано другими способами, чтобы удалить загрязняющие вещества или повысить чистоту, стабильность, или улучшить цвет. ТАГ и другие эфиры в масле из семян могут быть гидролизованы с целью высвобождения свободных жирных кислот, или масло из семян может быть гидрогенизировано, обработано химическим или ферментным способом, как известно из уровня техники.

В настоящем документе термин «жирная кислота» обозначает карбоновую кислоту с алифатическим хвостом размером по меньшей мере 8 атомов углерода, насыщенным или ненасыщенным. Предпочтительные жирные кислоты содержат углеродно-углеродную цепь длиной по меньшей мере 12 атомов углерода. Большинство природных жирных кислот содержат четное количество атомов углерода, поскольку в их биосинтезе участвует ацетат, содержащий два атома углерода. Жирные кислоты могут находиться в свободном состоянии (неэтерифицированные) или в этерифицированной форме, например, как часть ТАГ, ДАГ, МАГ, связи ацил-КоА (тиоэфир), связи ацил-ацилпереносящий белок (АПБ) или другой ковалентно связанной форме. Будучи ковалентно связанной в этерифицированной форме, жирная кислота в настоящем документе обозначается как группа «ацил». Жирная кислота может быть этерифицирована как фосфолипид, например, фосфатидилхолин (ФХ), фосфатидилэтаноламин, фосфатидилсерин, фосфатидилглицерил, фосфатидилинозитол или дифосфатидилглицерил. Насыщенные жирные кислоты не содержат кратных связей или других функциональных групп вдоль цепи. Термин «насыщенный» обозначает водород, в котором все атомы углерода (кроме карбоксильной группы [-COOH]) связаны с максимальным количеством атомов водорода. Иными словами, омега (ω) конец содержит 3 атома водорода (CH3-), и каждый атом углерода в цепи связан с 2 атомами водорода (-CH2-). Ненасыщенные жирные кислоты по форме сходны с насыщенными жирными кислотами, за исключением того, что одна или более алкеновых функциональных групп расположены вдоль цепи, причем каждый алкен заменяет часть одинарной связи «-CH2-CH2-» в цепи частью двойной связи «-CH=CH-» (т. е., двойная связь между двумя атомами углерода). Два последующих атома углерода в цепи, присоединенные к каждому из концов двойной связи, могут находиться в цис- или транс-конфигурации.

В настоящем документе термин "мононенасыщенная жирная кислота" или "МНЖК" обозначает жирную кислоту, содержащую по меньшей мере 12 атомов углерода в углеродной цепи и только одну алкеновую группу (двойная углерод-углеродная связь), которая может находиться в этерифицированной или неэтерифицированной (свободной) форме. В настоящем документе термин "полиненасыщенная жирная кислота" или "ПНЖК" обозначает жирную кислоту, содержащую по меньшей мере 12 атомов углерода в углеродной цепи и по меньшей мере две алкеновые группы (двойные углерод-углеродные связи), которая может находиться в этерифицированной или неэтерифицированной форме.

В настоящем документе жирная кислота со ʺсредней длиной цепиʺ, дополнительно обозначенная как ʺСЦЖКʺ, включает ацильную цепь длиной 8-14 атомов углерода. Ацильная цепь может быть модифицированной (например, она может содержать одну или более двойных связей, гидроксильных групп, эпоксигрупп и т.д) или немодифицированной (насыщенной). Данный термины включают по меньшей мере одну или более или все из каприловой кислоты (C8:0), каприновой кислоты (C10:0), лауриновой кислоты (C12:0) и миристиновой кислоты (C14:0).

«Моноацилглицерид» или «МАГ» представляет собой глицерид, в котором глицерин этерифицирован одной жирной кислотой. В настоящем документе МАГ содержит гидроксильную группу в положении sn-1/3 (также обозначена в настоящем документе как sn-1 МАГ или 1-МАГ или 1/3-МАГ) или sn-2(также обозначена в настоящем документе как 2-МАГ), и, таким образом, МАГ не содержит фосфорилированных молекул, таких как фосфатидиновая кислота (ФК) или фосфатидилхолин (ФХ). МАГ, таким образом, является компонентом нейтральных липидов в клетке.

«Диацилглицерид» или «ДАГ» представляет собой глицерид, в котором глицерин этерифицирован двумя жирными кислотами, которые могут быть одинаковыми или, предпочтительно, разными. В настоящем документе ДАГ содержит гидроксильную группу в положении sn-1,3 или sn-2, и, таким образом, ДАГ не содержит фосфорилированных молекул, таких как ФК или ФХ. ДАГ, таким образом, является компонентом нейтральных липидов в клетке. В пути Кеннеди синтеза ДАГ (Фиг. 1), прекурсор sn-глицерил-3-фосфат (G-3-P) этерифицируется двумя ацильными группами, каждая из которых поступает от сложного эфира жирной кислоты коэнзима A, при этом, первая реакция катализируется глицерин-3-фосфат ацилтрансферазой (GPAT) в положении sn-1 с образованием ЛизоФК, с последующей реакцией присоединения второго ацила в положении sn-2, катализированного ацилтрансферазой лизофосфатидиновой кислоты (LPAAT), с образованием фосфатидиновой кислоты (ФК). Данное промежуточное соединение затем дефосфорилируется PAP с образованием ДАГ. Кроме того, ДАГ может быть образован из ТАГ удалением ацильной группы под действием липазы или из ФХ по существу удалением головной группы холина любым из ферментов карнитинпальмитоилтрансфераза (КПТ), PLC или PLD (Фиг. 1).

«Триацилглицерид» или «ТАГ» представляет собой глицерид, в котором глицерин этерифицирован тремя жирными кислотами, которые могут быть одинаковыми (например, как в триолеине) или, чаще, разными. В пути Кеннеди синтеза ТАГ, ДАГ образуется, как изложено выше, а затем третья ацильная группа присоединяется к основе глицерина под действием DGAT. Альтернативные пути образования ТАГ включают катализированный ферментом PDAT (Фиг. 1) и путь MGAT, описанные в настоящем документе.

В настоящем документе термин "дикий тип" или его вариации обозначает вегетативную часть растения, клетку, семя или не относящийся к человеческому роду организм или его часть, например, клубень или свеклу, которые не были генетически модифицированы, например, введением экзогенного(ых) полинуклеотида(ов) по настоящему изобретению.

Термин "соответствующий" обозначает вегетативную часть растения, клетку, семя или не относящийся к человеческому роду организм или его часть (например, клубень или свекла), которые имеют такой же или подобный генетический фон, как и вегетативная часть растения, клетка, семя или не относящийся к человеческому роду организм или его часть по изобретению, но при этом они не были модифицированы, как описано в настоящем документе (например, вегетативная часть растения, клетка, семя или не относящийся к человеческому роду организм или его часть, в которых отсутствует экзогенный(ые) полинуклеотид(ы) и/или отсутствует генетическая(ие) модификация(и)). В предпочтительном варианте реализации изобретения соответствующая вегетативная часть растения, эукариотная клетка, семя или не относящийся к человеческому роду организм или его часть находятся в той же стадии развития, что и вегетативная часть растения, эукариотная клетка, семя или не относящийся к человеческому роду организм или его часть по изобретению. Например, если не относящийся к человеческому роду организм представляет собой цветущее растение, то соответствующее растение также предпочтительно находится в стадии цветения. Соответствующая вегетативная часть растения, эукариотная клетка, семя или не относящийся к человеческому роду организм или его часть может применяться в качестве контроля для сравнения уровней нуклеиновой кислоты или экспрессии белка или степени и природы модификации признака, например, выработки и/или содержания неполярных липидов, с вегетативной частью растения, эукариотной клеткой, семенем или не относящимся к человеческому роду организмом или его частью по изобретению, которые модифицированы, как описано в настоящем документе. Квалифицированный специалист в данной области с легкостью может определить подходящую "соответствующую" вегетативную часть растения, эукариотную клетку, семя или не относящийся к человеческому роду организм или его часть, ткань, орган или организм для такого сравнения.

В настоящем документе "по сравнению с" или ʺотносительноʺ обозначает сравнение уровней неполярного липида, общего содержания неполярных липидом, содержания жирных кислот или другого параметра вегетативной части растения, эукариотной клетки, семени, не относящегося к человеческому роду организма или его части (такой как клубень или свекла), экспрессирующих один или более экзогенных полинуклеотидов или экзогенных полипептидов, с вегетативной частью растения, эукариотной клеткой, семенем, не относящимся к человеческому роду организма или его частью, в которых отсутствуют один или больше экзогенных полинуклеотидов или полипептидов.

В настоящем документе "повышенная способность к выработке неполярных липидов" является относительным термином, который обозначает повышенное общее количество неполярного липида, выработанного вегетативной частью растения, эукариотной клеткой, семенем или не относящимся к человеческому роду организмом или его частью (например, клубень или свекла) по изобретению, относительно соответствующей вегетативной части растения, эукариотной клетки, семени или не относящегося к человеческому роду организма или его части. В одном варианте реализации изобретения повышено содержание ТАГ и/или полиненасыщенных жирных кислот или содержание олеиновой кислоты в общем содержании жирных кислот неполярного липида, или снижено содержание линоленовой кислоты в общем содержании жирных кислот неполярного липида, например, по меньшей мере на 2% в абсолютных величинах.

В настоящем документе каждый из ʺсинергииʺ, ʺсинергетическогоʺ, ʺдействуя синергетическиʺ и родственных терминов представляет собой сравнительный термин, который означает, что влияние комбинации элементов, присутствующих в клетке, растении или его части по изобретению, например, комбинации элементов A и B, превышает сумму влияния элементов по отдельности в соответствующих клетках, растениях или их частях, например, суммарное влияние A и влияние B. Если более двух элементов присутствуют в клетке, растении или его части, например, элементы A, B и C, это означает, что влияние комбинации всех элементов превышает сумму влияний индивидуальных элементов. В предпочтительном варианте реализации изобретения это означает, что влияние комбинации элементов A, B и C превышает сумму сочетанного влияния элементов A и B и влияния элемента C. В таком случае, может быть указано, что элемент C действует синергетически с элементами A и B. Необходимо понимать, что влияние измеряют в соответствующих клетках, растениях или их частях, например, выращенных в таких же условиях и находящихся в такой же стадии биологического развития.

В настоящем документе "прорастать со скоростью, в существенной мере такой же, как и соответствующее растение дикого типа" обозначает, что семя растения по изобретению относительно способно к прорастанию при сравнении с семенем растения дикого типа, не содержащего определенного(ых) экзогенного(ых) полинуклеотида(ов). Прорастание может быть измерено in vitro на питательной среде для культуры ткани или в грунте, как это происходит в поле. В одном варианте реализации изобретения количество семян, которые прорастают, например, при выращивании в оптимальных условиях теплицы для данного вида растений, составляет по меньшей мере 75%, более предпочтительно, по меньшей мере 90%, по сравнению с соответствующими семенами дикого типа. В другом варианте реализации изобретения семена, которые прорастают, например, при выращивании в оптимальных условиях теплицы для данного вида растений, дают саженцы, растущие со скоростью, которая, в среднем, составляет по меньшей мере 75%, более предпочтительно, по меньшей мере 90%, по сравнению с соответствующими растениями дикого типа. Это обозначается как ʺсила роста саженцевʺ. В варианте реализации изобретения скорость начального роста корней и роста побегов у саженцев по изобретению является по существу такой же, как у соответствующего саженца дикого типа, выращенного в таких же условиях. В варианте реализации изобретения биомасса листьев (сухая масса) растений по изобретению составляет по меньшей мере 80%, предпочтительно по меньшей мере 90% относительно биомассы листьев соответствующих растений дикого типа, выращенных в таких же условиях, предпочтительно в поле. В варианте реализации изобретения высота растений по изобретению составляет по меньшей мере 70%, предпочтительно по меньшей мере 80%, более предпочтительно, по меньшей мере 90% высоты растения относительно соответствующего растения дикого типа, выращенного в таких же условиях, предпочтительно в поле и предпочтительно в состоянии зрелости.

В настоящем документе термин "экзогенный полинуклеотид, который подавляет выработку и/или активность эндогенного полипептида" или его вариации обозначают полинуклеотид, кодирующий молекулу РНК (например, кодирующий искусственную микроРНК (имиРНК) или шпилечную РНК-интерференцию (шпРНКи)), которая подавляет выработку и/или активность или непосредственно подавляет выработку и/или активность (например, представляет собой имиРНК или шпРНК, которая может быть доставлена, например, непосредственно в клетку) эндогенного полипептида, например, SDP1 ТАГ липазы, пластидной GPAT, пластидной LPAAT, полипептида TGD, АГФазы или дельта-12 десатуразы жирных кислот (FAD2), или проявляет комбинацию двух или более из указанных эффектов. Обычно, молекула РНК уменьшает экспрессию эндогенного гена, кодирующего полипептид.

В настоящем документе термин "в пересчете на массу" обозначает массу вещества (например, ТАГ, ДАГ, жирной кислоты) как процент от массы композиции, содержащей вещество (например, семя, лист). Например, если трансгенное семя содержит 25 мкг общих жирных кислот на 120 мкг массы семени, процент от общих жирных кислот в пересчете на массу составляет 20,8%.

В настоящем документе термин "в относительном выражении" обозначает параметр, например, количество вещества в композиции, содержащей вещество, в сравнении с параметром для соответствующей композиции, в процентном выражении. Например, уменьшение с 3 единиц до 2 единиц является уменьшением на 33% в относительном выражении.

В настоящем документе ʺпластидыʺ представляют собой органеллы в растениях, включая морские водоросли, которые являются местом выработки углеродных соединений на основе фотосинтеза, включая сахара, крахмал и жирные кислоты. Пластиды включают хлоропласты, содержащие хлорофилл и осуществляющие фотосинтез, этиопласты, которые являются прекурсорами хлоропластов, а также специализированные пластиды, такие как хромопласты, которые представляют собой окрашенные пластиды для синтеза и хранения пигментов, геронтопласты, которые руководят демонтажем фотосинтетических структур в ходе старения, амилопласты для синтеза и хранения крахмала, элайопласты для хранения липидов и протеинопласты для хранения и модификации белков.

В настоящем документе термин «биологическое топливо» обозначает любой вид топлива, обычно применяемый для выработки энергии машинным оборудованием, например, автомобилями, самолетами, катерами, большими грузовыми машинами или работающими на нефти двигателями, энергия которого происходит от биологической фиксации углерода. Биотопливо включает виды топлива, получаемые в результате превращения биомассы, а также твердой биомассы, жидких видов топлива и биогазов. Примеры биологического топлива включают биоспирты, биодизельное топливо, синтетическое дизельное топливо, вегетативное масло, биоэфиры, биогаз, синтетический газ, твердое биологическое топливо, полученное из водорослей топливо, биоводород, биометанол, 2,5-диметилфуран (ДМФ), биодиметиловый эфир (биоДМЭ), дизельное топливо Фишера-Тропша, биоводородное дизельное топливо, смешанные спирты и древесное дизельное топливо.

В настоящем документе термин «биоспирт» обозначает полученные биологическим способом спирты, например, этанол, пропанол и бутанол. Биоспирты образуются под действием микроорганизмов и/или ферментов посредством ферментации сахаров, гемицеллюлозы или целлюлозы.

В настоящем документе термин «биодизельное топливо» обозначает состав, содержащий метиловые или этиловые эфиры жирной кислоты, полученные из липидов переэтерификацией, причем липиды получены из живых клеток, а не из окаменелых остатков.

В настоящем документе термин «синтетическое дизельное топливо» обозначает форму дизельного топлива, которое получено из возобновляемого сырья вместо окаменелого сырья, используемого в большинстве видов дизельного топлива.

В настоящем документе термин «растительное масло» включает чистое растительное масло (или непосредственно масло) или масло из отходов (побочный продукт других отраслей промышленности), в том числе масло, которое вырабатывается в вегетативной части или семени растения.

В настоящем документе термин «биогаз» обозначает метан или легковоспламеняющуюся смесь метана и других газов, полученные анаэробным расщеплением органического материала анаэробами.

В настоящем документе термин «синтетический газ» обозначает горючую смесь, которая содержит варьирующиеся количества монооксида углерода и водорода, и может содержать другие углеводороды, полученные частичным окислением биомассы. Синтетический газ может быть превращен в метанол в присутствии катализатора (обычно на основе меди), с последующей дегидратацией метанола в присутствии другого катализатора (например, кремния диоксида-алюминия).

В настоящем документе термин «Фишер-Тропш» обозначает набор химических реакций, в ходе которых смесь монооксида углерода и водорода превращается в жидкие углеводороды. Синтетический газ вначале может быть кондиционирован с использованием, например, конверсии водяного газа, чтобы достичь требуемого соотношения H₂/CO. Конверсия происходит в присутствии катализатора, обычно железа или кобальта. Температура, давление и катализатор определяют, будет ли образовываться легкая или тяжелая синтетическая нефть. Например, при 330°C образуются в основном бензин и олефины, тогда как при 180-250°C образуются в основном дизельное топливо и воски. Жидкости, полученные из синтетического газа, которые содержат различные углеводородные фракции, представляют собой углеводороды с неразветвленной цепью и высокой степенью чистоты (не содержащие серы).

В настоящем документе термин «биоуголь» обозначает древесный уголь, полученный из биомассы, например, пиролизом биомассы.

В настоящем документе термин «сырье» обозначает материал, например, биомассу или продукт ее превращения (например, синтетический газ), который используют для производства продукта, например, биологического топлива, например, биодизельного топлива или синтетического дизельного топлива.

В настоящем документе термин «промышленный продукт» обозначает углеводородный продукт, который в основном состоит из атомов углерода и водорода, например, метиловые и/или этиловые эфиры жирной кислоты или алканы, такие как метан, смеси алканов с более длинной цепью, которые обычно являются жидкостями при температуре окружающей среды, биологическое топливо, монооксид углерода и/или водорода или биоспирт, например, этанол, пропанол или бутанол или биоуголь. Термин «промышленный продукт» предназначен включать промежуточные продукты, которые могут быть превращены в другие промышленные продукты, например, синтетический газ, который сам по себе рассматривается, как промышленный продукт, может использоваться для синтеза углеводородного продукта, который также рассматривается, как промышленный продукт. Термин «промышленный продукт» в настоящем документе включает обе чистые формы упомянутых выше соединений или, чаще, смесь различных соединений и компонентов, например, углеводородный продукт может содержать соединения с длиной углеродной цепи в определенном интервале, как хорошо известно из уровня техники.

В настоящем документе ʺпотомокʺ подразумевает ближайшее и все последующие поколения потомства, полученные от родительского организма, например, второе, третье или более поздние поколения потомства.

В настоящем документе слово «включают (содержат)» или его вариации, например, «включает (содержит)» или «включающий (содержащий)» следует понимать, как обозначающее включение заявленного элемента, целого числа или стадии, или группы элементов, целых чисел или стадий, но исключение любого другого элемента, целого числа или стадии или группы элементов, целых чисел или стадий.

Термин «и/или», например, «X и/или Y» следует понимать, как обозначающий любое из «X и Y» или «X или Y» и интерпретировать как обеспечивающий явное присутствие обоих значений, или любого из значений.

В настоящем документе термин около (приблизительно), если не указано иное, обозначает +/- 10%, более предпочтительно +/- 5%, более предпочтительно +/- 2%, более предпочтительно +/- 1%, даже более предпочтительно +/- 0,5% от указанного значения.

Выработка неполярных липидов и триацилглицеридов

Настоящее изобретение основано на открытии того факта, что содержание неполярных липидов в рекомбинантных эукариотных клетках может быть повышено с помощью комбинации модификаций, выбранных из обозначенных в настоящем документе как: (A). Push, (B). Pull, (C). Protect, (D). Package, (E). Plastidial export, (F). Plastidial import и (G). Prokariotyc Pathway. Как описано в настоящем документе, клетки без пластид могут содержать различные комбинации A-D, тогда как клетки с пластидами, такие как растительные и водорослевые клетки, могут содержать различные комбинации A-G.

Таким образом, рекомбинантные клетки, трансгенные животные, не относящиеся к человеческому роду, или их часть, а также трансгенные растения или их часть по изобретению содержат целый ряд комбинаций экзогенных полинуклеотидов и/или генетических модификаций, каждая из которых обеспечивает одну из модификаций. Указанные экзогенные полинуклеотиды и/или генетические модификации включают:

(A) экзогенный полинуклеотид, кодирующий полипептид фактора транскрипции, который увеличивает экспрессию одного или боле гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в клетке, трансгенном животном, не относящемся к человеческому роду, или его части, или трансгенном растении или его части, обеспечивая модификацию ʺPushʺ

(B) экзогенный полинуклеотид, кодирующий полипептид, который принимает участие в биосинтезе одного или более неполярных липидов в клетке, трансгенном животном, не относящемся к человеческому роду, или его части, или трансгенном растении или его части, обеспечивая модификацию ʺPullʺ

(C) генетическая модификация, которая подавляет эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в катаболизме триацилглицеридов (ТАГ) в клетке,трансгенном животном, не относящемся к человеческому роду, или его части, или трансгенном растении или его части, по сравнению с соответствующей клеткой, трансгенным животным, не относящимся к человеческому роду, или его частью, или трансгенным растением или его частью, в которых отсутствует генетическая модификация, обеспечивающая модификацию ʺProtectʺ

(D) экзогенный полинуклеотид, кодирующий полипептид покрытия масляного включения (ПМВ), обеспечивая модификацию ʺPackageʺ,

(E) экзогенный полинуклеотид, кодирующий полипептид, который увеличивает экспорт жирных кислот из пластид клетки, трансгенного животного, не относящегося к человеческому роду, или его части, или трансгенного растения или его части, по сравнению с соответствующей клеткой, трансгенным животным, не относящимся к человеческому роду, или его частью, или трансгенным растением или его частью, в которых отсутствует экзогенный полинуклеотид, обеспечивающий ʺPlastidial exportʺ,

(F) генетическая модификация, подавляющая эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в импорте жирных кислот в пластиды клетки,трансгенное животное, не относящееся к человеческому роду, или его часть, или трансгенное растение или его часть, по сравнению с соответствующей клеткой,трансгенным животным, не относящимся к человеческому роду, или его частью, или трансгенным растением или его частью, в которых отсутствует генетическая модификация, обеспечивающая ʺPlastidial importʺ, и

(G) генетическая модификация, подавляющая эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в выработке диацилглицеридов (ДАГ) в пластиде клетки, трансгенном животном, не относящемся к человеческому роду, или его части, или трансгенном растении или его части, по сравнению с соответствующей клеткой,трансгенным животным, не относящимся к человеческому роду, или его частью, или трансгенным растением или его частью, в которых отсутствует генетическая модификация, обеспечивающая модификацию ʺProkaryotic Pathwayʺ.

Предпочтительные комбинации (дополнительно обозначенные в настоящем документе как наборы) экзогенных полинуклеотидов и/или генетические модификации по изобретению представляют собой;

1) A, B и необязательно один из C, D, E, F или G;

2) A, C и необязательно один из D, E, F или G;

3) A, D и необязательно один из E, F или G;

4) A, E и необязательно F или G;

5) A, F и необязательно G;

6) A и G;

7) A, B, C и необязательно один из D, E, F или G;

8) A, B, D и необязательно один из E, F или G;

9) A, B, E и необязательно F или G;

10) A, B, F и необязательно G;

11) A, B, C, D и необязательно один из E, F или G;

12) A, B, C, E и необязательно F или G;

13) A, B, C, F и необязательно G;

14) A, B, D, E и необязательно F или G;

15) A, B, D, F и необязательно G;

16) A, B, E, F и необязательно G;

17) A, C, D и необязательно один из E, F или G;

18) A, C, E и необязательно F или G;

19) A, C, F и необязательно G;

20) A, C, D, E и необязательно F или G;

21) A, C, D, F и необязательно G;

22) A, C, E, F и необязательно пятая модификация G;

23) A, D, E и необязательно F или G;

24) A, D, F и необязательно G;

25) A, D, E, F и необязательно G;

26) A, E, F и необязательно G;

27) шесть из А, B, C, D, E, F и G, за исключением одной из A, B, C, D, E, F или G, и

28) любая из 1-26 выше, где присутствуют два или более экзогенных полинуклеотида, кодирующие два или более различных полипептида фактора транскрипции, которые увеличивают экспрессию одного или более гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в клетке, например, один экзогенный полинуклеотид, кодирующий WRI1, и другой экзогенный полинуклеотид, кодирующий LEC2.

В каждой из приведенных выше предпочтительных комбинаций может присутствовать по меньшей мере два различных экзогенных полинуклеотида, которые кодируют по меньшей мере два различных полипептида фактора транскрипции, увеличивающих экспрессию одного или более гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в клетке,трансгенном животном, не относящемся к человеческому роду, или его части, или трансгенном растении или его части.

Эти модификации описаны, как указано ниже:

A. Модификация ʺPush (Толчок)ʺ отличается повышенным синтезом общих жирных кислот в пластидах эукариотной клетки. В варианте реализации изобретения это происходит благодаря повышенной экспрессии и/или активности фактора транскрипции, который регулирует синтез жирных кислот в пластидах. В одном варианте реализации изобретения это может быть достигнуто путем экспрессии в трансгенной клетке экзогенного полинуклеотида, который кодирует полипептид фактора транскрипции, повышающего экспрессию одного или более гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в клетке. В варианте реализации изобретения повышенный синтез жирных кислот не является вызванным доставкой в клетку модифицированной АККазы, активность которой в меньшей степени ингибируется жирными кислотами, по сравнению с эндогенной АККазой в клетке. В варианте реализации изобретения клетка содержит экзогенный полинуклеотид, кодирующий фактор транскрипции, предпочтительно под контролем промотора, кроме конститутивного промотора. Фактор транскрипции может быть выбран из группы, состоящей из WRI1, LEC1, LEC1-подобного, LEC2, BBM, FUS3, ABI3, ABI4, ABI5, Dof4, Dof11, или из группы, состоящей из MYB73, bZIP53, AGL15, MYB115, MYB118, TANMEI, WUS, GFR2a1, GFR2a2 и PHR1, и предпочтительно представляет собой WRI1, LEC1 или LEC2. В дальнейшем варианте реализации изобретения увеличенный синтез общих жирных кислот является относительным по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа. В варианте реализации изобретения присутствует два или более экзогенных полинуклеотида, кодирующие два или более различных полипептида фактора транскрипции.

B. Модификация ʺPull (Притягивание)ʺ отличается повышенной экспрессией и/или активностью в клетке ацилтрансферазы ацилов жирных кислот, которая катализирует синтез ТАГ, ДАГ или МАГ в клетке, такой как DGAT, PDAT, LPAAT, GPAT или MGAT, предпочтительно DGAT или PDAT. В одном варианте реализации изобретения это может быть достигнуто путем экспрессии в трансгенной клетке экзогенного полинуклеотида, который кодирует полипептид, принимающий участие в биосинтезе одного или более неполярных липидов. В варианте реализации изобретения ацилтрансфераза является мембрано-связанной ацилтрансферазой, которая использует субстрат ацил-КоА в качестве донора ацила в случае DGAT, LPAAT, GPAT или MGAT или ацильную группу ФК в качестве донора ацила в случае PDAT. Модификация Pull может быть относительной по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа или, предпочтительно, относительной по сравнению с соответствующей клеткой, содержащей модификацию Push. В варианте реализации изобретения клетка содержит экзогенный полинуклеотид, кодирующий ацилтрансферазу ацилов жирных кислот.

C. Модификация ʺProtect (Защита)ʺ отличается снижением катаболизма триацилглицеридов (ТАГ) в клетке. В варианте реализации изобретения это может быть достигнуто путем генетической модификации в клетке, которая подавляет эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в катаболизме триацилглицеридов (ТАГ) в клетке, по сравнению с соответствующей клеткой без генетической модификации. В варианте реализации изобретения клетка проявляет сниженную экспрессию и/или активность эндогенной ТАГ липазы в клетке, предпочтительно липазы SDP1, полипептида Cgi58, ацил-КоА оксидазы, такой как ACX1 или ACX2, или полипептида, принимающего участие в β-окислении жирных кислот в клетке, такого как пероксисомальный переносчик ATP-связывающей кассеты PXA1. Это может происходить благодаря экспрессии в клетке экзогенного полинуклеотида, кодирующего молекулу РНК, которая снижает экспрессию, например, эндогенного гена, кодирующего ТАГ липазу, такую как липаза SDP1, ацил-КоА оксидаза или полипептид, принимающий участие в β-окислении жирных кислот в клетке, или путем мутации в эндогенном гене, кодирующем, например, ТАГ липазу, ацил-КоА оксидазу или полипептид, принимающий участие в β-окислении жирных кислот. Это может происходить благодаря экспрессии в клетке экзогенного полинуклеотида, кодирующего молекулу РНК, которая снижает экспрессию, например, эндогенного гена, кодирующего ТАГ липазу, такую как липаза SDP1, ацил-КоА оксидаза или полипептид, принимающий участие в β-окислении жирных кислот в клетке, или путем мутации в эндогенном гене, кодирующем, например, ТАГ липазу, ацил-КоА оксидазу или полипептид, принимающий участие в β-окислении жирных кислот. В варианте реализации изобретения сниженная экспрессия и/или активность является относительной по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа или относительной по сравнению с соответствующей клеткой, содержащей модификацию Push.

D. Модификация ʺPackage (Упаковка)ʺ отличается повышенной экспрессией и/или аккумуляцией полипептида покрытия масляного включения (ПМВ). В варианте реализации изобретения это может быть достигнуто путем экспрессии в трансгенной клетке экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид покрытия масляного включения (ПМВ). Полипептид ПМВ может представлять собой олеозин, такой как полиолеозин, каолеозин или стеролеозин или предпочтительно LDAP. В варианте реализации изобретения уровень олеозина, который аккумулируется в эукариотной клетке, по меньшей мере в 2 раза выше относительно соответствующей клетки, содержащей ген олеозина из T-ДНК pJP3502. В варианте реализации изобретения повышенная экспрессия или аккумуляция полипептида ПМВ не является вызванной исключительно модификацией Push. В варианте реализации изобретения экспрессия и/или аккумуляция является относительной по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа или предпочтительно относительно соответствующей клетки, которая содержит модификацию Push.

E. Модификация ʺPlastidial export (Пластидный экспорт)ʺ отличается повышенной скоростью экспорта общих жирных кислот из пластид эукариотной клетки. В одном варианте реализации изобретения это может быть достигнуто путем экспрессии в трансгенной клетке экзогенного полинуклеотида, кодирующего полипептид, который увеличивает экспорт жирных кислот из пластид клетки, по сравнению с соответствующей клеткой, в которой отсутствует экзогенный полинуклеотид. В варианте реализации изобретения это достигается путем повышения экспрессии и/или активности тиоэстеразы (ТЭ) жирных кислот, полипептида-переносчика жирных кислот, такого как полипептид ABCA9, или длинноцепочечной ацил-КоА синтетазы (ДЦАС). В варианте реализации изобретения клетка содержит экзогенный полинуклеотид, кодирующий ТЭ, полипептид-переносчик жирных кислот или ДЦАС. ТЭ может представлять собой полипептид FATB или, предпочтительно, полипептид FATA. В варианте реализации изобретения ТЭ предпочтительно представляет собой ТЭ со специфичностью в отношении СЦЖК. В варианте реализации изобретения модификация Plastidial export является относительной по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа или предпочтительно относительной по сравнению с соответствующей клеткой, которая содержит модификацию Push.

F. Модификация ʺPlastidial import (Пластидный импорт)ʺ отличается сниженной скоростью импорта жирных кислот в пластиды клетки из пространства за пределами пластид. В варианте реализации изобретения это может быть достигнуто с помощью генетической модификации в клетке, которая подавляет эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в импорте жирных кислот в пластиды клетки, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей генетической модификации. Например, это может происходить благодаря экспрессии в клетке экзогенного полинуклеотида, кодирующего молекулу РНК, которая снижает экспрессию эндогенного гена, кодирующего полипептид-переносчик, такой как полипептид TGD, например полипептид TGD1, TGD2, TGD3 или TGD4, или мутации в эндогенном гене, кодирующем полипептид TGD. В варианте реализации изобретения сниженная скорость импорта является относительной по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа или относительной по сравнению с соответствующей клеткой, которая содержит модификацию Push.

G. Модификация ʺProkaryotic Pathway (Прокариотный путь)ʺ отличается сниженным количеством ДАГ или сниженной скоростью выработки ДАГ в пластидах клетки. В варианте реализации изобретения это может быть достигнуто путем генетической модификации в клетке, которая подавляет эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в выработке диацилглицеридов (ДАГ) в пластиде, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей генетической модификации. В варианте реализации изобретения сниженное количество или скорость выработки ДАГ является результатом сниженной выработки LPA из ацил-АПБ и G3P в пластидах. Сниженное количество или скорость выработки ДАГ может быть результатом экспрессии в клетке экзогенного полинуклеотида, кодирующего молекулу РНК, которая снижает экспрессию эндогенного гена, кодирующего пластидную GPAT, пластидную LPAAT или пластидную PAP, предпочтительно пластидную GPAT, или мутации в эндогенном гене, кодирующем пластидный полипептид. В варианте реализации изобретения сниженное количество или скорость выработки ДАГ является относительным по сравнению с соответствующей клеткой дикого типа или предпочтительно относительной по сравнению с соответствующей клеткой, которая содержит модификацию Push.

Модификация Push имеет большое значение для изобретения, а модификация Pull является предпочтительной. Модификации Protect и Package могут быть комплементарными, т.е. одной из двух может быть достаточно. Клетка может содержать одну, две или все три из модификаций Plastidial export, Plastidial import и Prokaryotic Pathway. В варианте реализации изобретения по меньшей мере один из экзогенных полинуклеотидов в клетке, предпочтительно по меньшей мере экзогенный полинуклеотид, кодирующий фактор транскрипции, который регулирует синтез жирных кислот в пластидах, экспрессируется под контролем (H) промотора, кроме конститутивного промотора, например, такого как связанный с развитием промотор, промотор, который предпочтительно активен в фотосинтезирующих клетках, тканеспецифичный промотор, промотор, модифицированный путем снижения уровня его экспрессии относительно соответствующего природного промотора, или предпочтительно промотора, представляющего собой специфичный для старения промотор. Более предпочтительно, по меньшей мере экзогенный полинуклеотид, кодирующий фактор транскрипции, который регулирует синтез жирных кислот в пластидах, экспрессируется под контролем промотора, кроме конститутивного промотора, причем экзогенный полинуклеотид, кодирующий молекулу РНК, которая подавляет эндогенную выработку и/или активность полипептида, принимающего участие в катаболизме триацилглицеридов, также экспрессируется под контролем промотора, кроме конститутивного промотора, и, при этом, промоторы могут быть одинаковыми или разными.

Растения вырабатывают некоторые, но не все из их мембранных липидов, такие как MGDG, в пластидах по так называемому прокариотному пути (Фиг. 1). Кроме того, в растениях присутствует эукариотный путь для синтеза галактолипидов и глицеролипидов, по которому ЖК вначале синтезируются в пластиде, а затем в ЭР происходит сборка ЖК в глицеролипиды. MGDG, синтезированный по эукариотному пути, содержит C18:3 жирную кислоту (АЛК), этерифицированную в положении sn-2 MGDG. Сборка скелета ДАГ, содержащего АЛК для синтеза MGDG данным путем, происходит в ЭР, после чего происходит его импорт в пластиду. В противоположность этому, MGDG, синтезированный прокариотным путем, содержит C16:3 жирную кислоту, этерифицированную в положении sn-2 MGDG. Соотношение вклада прокариотного пути относительно эукариотного пути в выработку MGDG (16:3) против MGDG (18:3) представляет собой характерный и отличительный признак различных видов растений (Mongrand с соавт., 1998). Указанный отличительный жирнокислотный состав MGDG позволяет классифицировать все высшие растения (покрытосеменные) на так называемые 16:3 или 18:3 растения. Виды 16:3, примером которых являются Arabidopsis и Brassica napus, в общем содержат активный прокариотный и активный эукариотный пути синтеза MGDG, тогда как виды 18:3, примером которых являются Nicotiana tabacum Pisum sativum и Glycine max, в общем, содержат только (или почти полностью) эукариотный путь синтеза MGDG, с небольшой или отсутствующей аккумуляцией C16:3 жирной кислоты в вегетативных тканях. В настоящем документе ʺрастение 16:3ʺ или ʺвид 16:3ʺ представляет собой такое, которое содержит более чем 2% C16:3 жирной кислоты в общем содержании жирных кислот в его фотосинтезирующих тканях. В настоящем документе ʺрастение 18:3ʺ или ʺвид 18:3ʺ представляет собой такое, которое содержит менее чем 2% C16:3 жирных кислот в общем содержании жирных кислот в его фотосинтетических тканях. Как описано в настоящем документе, растение может быть превращено из растения 16:3 в растение 18:3 путем подходящих генетических модификаций. Соотношение потока между прокариотным и эукариотным путями не является консервативным для разных видов растений или тканей. В видах 16:3 до 40% потока в листьях проходит по прокариотному пути (Browse с соавт., 1986), тогда как в видах 18:3, таких как горох и соя, около 90% ЖК, которые синтезированы в пластиде, экспортируется из пластиды в ЭР, чтобы обеспечить источник ЖК для эукариотного пути (Ohlrogge и Browse, 1995; Somerville с соавт., 2000).

Таким образом, различные количества 18:3 и 16:3 жирных кислот найдены в гликолипидах различных видов растений. Это используется для того, чтобы отличать растения 18:3, в которых жирные кислоты с 3 двойными связями практически полностью являются C18 жирными кислотами, и растения 16:3, которые содержат как C₁₆-, так и C₁₈-жирные кислоты с 3 двойными связями. В хлоропластах растений 18:3 ферментная активность, катализирующая превращение фосфатидата в диацилглицерид и диацилглицерида в моногалактозилдиацилглицерид (МГД), существенно менее выражена, чем в хлоропластах 16:3. В листьях растений 18:3 хлоропласты синтезируют стеароил-ACP2 в строме, вводят первую двойную связь в насыщенную углеводородную цепь, а затем гидролизуют тиоэфир тиоэстеразами (Фиг. 1). Высвобождающийся олеат экспортируется сквозь конверты хлоропластов в мембраны эукариотной части клетки, вероятно, эндоплазматический ретикулум, где он инкорпорируется в ФХ. В этих мембранах в ФХ-связанные олеоильные группы вводятся кратные связи, и далее они перемещаются обратно в хлоропласт. МГД-связанные ацильные группы представляет собой субстраты для введения третьей двойной связи с образованием МГД с двумя линоленоильными остатками. Данный галактолипид является характерным для растений 18:3, например, таких как Asteraceae и Fabaceae. В фотосинтетически активных клетках растений 16:3, которые представлены, например, членами Apiaceae и Brassicaceae, два пути действуют параллельно, чтобы обеспечить тилакоиды МГД.

В одном варианте реализации изобретения вегетативная часть растения, эукариотная клетка, семя или трансгенный организм, не принадлежащий к человеческому роду, или их часть (например, клубень или свекла) по изобретению вырабатывает более высокие уровни неполярных липидов, таких как ТАГ, или имеет более высокое содержание общих жирных кислот (ОЖК), предпочтительно оба, по сравнению с соответствующей вегетативной частью растения, эукариотной клеткой, семенем или организмом, не принадлежащим к человеческому роду, или их частью, в которой отсутствуют генетические модификации или экзогенные полинуклеотиды. В одном примере растения по изобретению дают семена, листья или имеют части листьев с площадью поверхности по меньшей мере 1 см², стволы и/или клубни с повышенным содержанием неполярных липидов, например, содержанием ТАГ или ОЖК, предпочтительно обоими, по сравнению с соответствующими семенами, листьями, частями листьев с площадью поверхности по меньшей мере 1 см², стволами или клубнями.

В другом варианте реализации изобретения вегетативная часть растения, трансгенный организм, не относящийся к человеческому роду, или их часть (такая как клубень или свекла), предпочтительно растение, клубень, свекла или семя, вырабатывают ТАГ, обогащенный одной или более конкретных жирных кислот. Широкий спектр жирных кислот может быть инкорпорирован в ТАГ, в том числе насыщенные и ненасыщенные жирные кислоты и короткоцепочечные и длинноцепочечные жирные кислоты. Некоторые неограничивающие примеры жирных кислот, которые могут быть инкорпорированы в ТАГ, и уровень которых может быть повышен, включают: каприновую (10:0), лауриновую (12:0), миристиновую (14:0), пальмитиновую (16:0), пальмитолеиновую (16:1), стеариновую (18:0), олеиновую (18:1), вакценовую (18:1), линолевую (18:2), элеостеариновую (18:3), γ-линоленовую (18:3), α-линоленовую (18:3ω3), стеаридоновую (18:4ω3), арахидоновую (20:0), эйкозадиеновую (20:2), дигомо-γ-линолевую (20:3), эйкозатриеновую (20:3), арахидоновую (20:4), эйкозатетраеновую (20:4), эйкозапентаеновую (20:5ω3), бегеновую (22:0), докозапентаеновую (22:5ω), докозагексаеновую (22:6ω3), лигноцериновую (24:0), ацетэруковую (24:1), церотиновую (26:0) и монтановую (28:0) жирные кислоты. В одном варианте настоящего изобретения вегетативная часть растения, эукариотная клетка, семя или трансгенный организм или их часть (как например, клубень или свекла) обогащены ТАГ, содержащими олеиновую кислоту и/или сниженное содержание линоленовой кислоты (АЛК), предпочтительно по меньшей мере на 2% или по меньшей мере на 5%, в пересчете на абсолютное вещество.

Предпочтительно, вегетативная часть растения, эукариотная клетка, семя или трансгенный организм, не принадлежащий к человеческому роду, или их часть по изобретению трансформированы одной или более химерными ДНК (экзогенные полинуклеотиды). В случае нескольких химерных ДНК, предпочтительно они ковалентно соединены в одну молекулу ДНК, например, такую как единая молекула T-ДНК, и предпочтительно интегрированы в один локус генома клетки-хозяина. В качестве альтернативы, химерные ДНК находятся на двух или более молекулах ДНК, которые могут быть несвязанными с геномом хозяина, или молекула(ы) ДНК не являются интегрированными в геном хозяина, например, как это происходит в экспериментах с временной экспрессией. Растение, вегетативная часть растения, эукариотная клетка, семя или трансгенный организм, не принадлежащий к человеческому роду, или их часть предпочтительно являются гомозиготными по одной молекуле ДНК, инкорпорированной в их геном.

Факторы транскрипции

В эукариотных клетках различные факторы транскрипции принимают участие в синтезе жирных кислот и липидов, содержащих жирные кислоты, такие как ТАГ, и, таким образом, существует возможность манипулировать ими с целью модификации Push. Предпочтительным фактором транскрипции является WRI1. В настоящем документе термин «Wrinkled 1» или «WRI1» или «WRL1» обозначает фактор транскрипции класса AP2/ERWEBP, который регулирует экспрессию нескольких ферментов, принимающих участие в гликолизе и биосинтезе жирных кислот de novo. WRI1 содержит два специфичных для растения (AP2/EREB) домена связывания с ДНК. Дополнительно, WRI1, по меньшей мере в Arabidopsis, также регулирует разложение сахарозы посредством гликолиза, таким образом регулируя поступление прекурсоров для биосинтеза жирных кислот. Иными словами, он управляет потоком углерода от продукта фотосинтеза к запасным липидам. Мутанты wri1, по меньшей мере в Arabidopsis, демонстрируют фенотип сморщенного семени, за счет дефекта во встраивании сахарозы и глюкозы в ТАГ.

Примеры генов, которые транскрибируются WRI1, включают, без ограничений, одну или более, предпочтительно все из генов, кодирующих пируваткиназу (At5g52920, At3g22960), субъединицу E1 альфа (At1g01090) пируватдегидрогеназы (ПДГ), ацетил-КоА карбоксилазу (АЦКазу), субъединицу BCCP2 (At5g15530), еноил-АПБ редуктазу (At2g05990; EAR), фосфоглицерат мутазу (At1g22170), цитозольную фруктокиназу и цитозольную фосфоглицерат мутазу, синтетазу сахарозы (SuSy) (см., например, Liu с соавт., 2010b; Baud с соавт., 2007; Ruuska с соавт., 2002).

WRI1 содержит консервативный домен AP2 (cd00018). AP2 представляет собой домен связывания с ДНК, найденный в регуляторах транскрипции в растениях, например, APETALA2 и EREBP (белок, связывающийся с элементом, который реагирует на этилен). В EREBP домен специфично связывается с боксом 11bp GCC элемента, который реагирует на этилен (ЭРЭ), промоторного элемента, незаменимого для реагирования на этилен. EREBP и фактор связывания с C-повтором CBF1, который принимает участие в ответе на стресс, содержат одну копию домена AP2. APETALA2-подобные белки, которые играют роль в развитии растения, содержат две копии.

Другие мотивы последовательности, которые могут быть найдены в WRI1 и его функциональных гомологах, включают:

1. R G V T/S R H R W T G R (SEQ ID NO:89).

2. F/Y E A H L W D K (SEQ ID NO:90).

3. D L A A L K Y W G (SEQ ID NO:91).

4. S X G F S/A R G X (SEQ ID NO:92).

5. H H H/Q N G R/K W E A R I G R/K V (SEQ ID NO:93).

6. Q E E A A A X Y D (SEQ ID NO:94).

В настоящем документе термин «Wrinkled 1» или «WRI1» также включает «подобные Wrinkled 1» или «WRI1-подобные» белки. Примеры белков WRI1 включают номера доступа: Q6X5Y6, (Arabidopsis thaliana; SEQ ID NO:22), XP_002876251.1 (подвид Arabidopsis lyrata ; Lyrata; SEQ ID NO:23), ABD16282.1 (Brassica napus; SEQ ID NO:24), ADO16346.1 (Brassica napus; SEQ ID NO:25), XP_003530370.1 (Glycine max; SEQ ID NO:26), AEO22131.1 (Jatropha curcas; SEQ ID NO:27), XP_002525305.1 (Ricinus communis; SEQ ID NO:28), XP_002316459.1 (Populus trichocarpa; SEQ ID NO:29), CBI29147.3 (Vitis vinifera; SEQ ID NO:30), XP_003578997.1 (Brachypodium distachyon; SEQ ID NO:31), BAJ86627.1 (Hordeum vulgare подвид. vulgare; SEQ ID NO:32), EAY79792.1 (Oryza sativa; SEQ ID NO:33), XP_002450194.1 (Sorghum bicolor; SEQ ID NO:34), ACG32367.1 (Zea mays; SEQ ID NO:35), XP_003561189.1 (Brachypodium distachyon; SEQ ID NO:36), ABL85061.1 (Brachypodium sylvaticum; SEQ ID NO:37), BAD68417.1 (Oryza sativa; SEQ ID NO:38), XP_002437819.1 (Sorghum bicolor; SEQ ID NO:39), XP_002441444.1 (Sorghum bicolor; SEQ ID NO:40), XP_003530686.1 (Glycine max; SEQ ID NO:41), XP_003553203.1 (Glycine max; SEQ ID NO:42), XP_002315794.1 (Populus trichocarpa; SEQ ID NO:43), XP_002270149.1 (Vitis vinifera; SEQ ID NO:44), XP_003533548.1 (Glycine max; SEQ ID NO:45), XP_003551723.1 (Glycine max; SEQ ID NO:46), XP_003621117.1 (Medicago truncatula; SEQ ID NO:47), XP_002323836.1 (Populus trichocarpa; SEQ ID NO:48), XP_002517474.1 (Ricinus communis; SEQ ID NO:49), CAN79925.1 (Vitis vinifera; SEQ ID NO:50), XP_003572236.1 (Brachypodium distachyon; SEQ ID NO:51), BAD10030.1 (Oryza sativa; SEQ ID NO:52), XP_002444429.1 (Sorghum bicolor; SEQ ID NO:53), NP_001170359.1 (Zea mays; SEQ ID NO:54), XP_002889265.1 (Arabidopsis lyrata подвид lyrata; SEQ ID NO:55), AAF68121.1 (Arabidopsis thaliana; SEQ ID NO:56), NP_178088.2 (Arabidopsis thaliana; SEQ ID NO:57), XP_002890145.1 (Arabidopsis lyrata подвид lyrata; SEQ ID NO:58), BAJ33872.1 (Thellungiella halophila; SEQ ID NO:59), NP_563990.1 (Arabidopsis thaliana; SEQ ID NO:60), XP_003530350.1 (Glycine max; SEQ ID NO:61), XP_003578142.1 (Brachypodium distachyon; SEQ ID NO:62), EAZ09147.1 (Oryza sativa; SEQ ID NO:63), XP_002460236.1 (Sorghum bicolor; SEQ ID NO:64), NP_001146338.1 (Zea mays; SEQ ID NO:65), XP_003519167.1 (Glycine max; SEQ ID NO:66), XP_003550676.1 (Glycine max; SEQ ID NO:67), XP_003610261.1 (Medicago truncatula; SEQ ID NO:68), XP_003524030.1 (Glycine max; SEQ ID NO:69), XP_003525949.1 (Glycine max; SEQ ID NO:70), XP_002325111.1 (Populus trichocarpa; SEQ ID NO:71), CBI36586.3 (Vitis vinifera; SEQ ID NO:72), XP_002273046.2 (Vitis vinifera; SEQ ID NO:73), XP_002303866.1 (Populus trichocarpa; SEQ ID NO:74), и CBI25261.3 (Vitis vinifera; SEQ ID NO:75). Дальнейшие примеры включают Sorbi-WRL1 (SEQ ID NO: 76), Lupan-WRL1 (SEQ ID NO: 77), Ricco-WRL1 (SEQ ID NO: 78), и Lupin angustifolius WRI1 (SEQ ID NO: 79). Предпочтительным WRI1 является WRI1 маиса или WRI1 сорго.

Позже, подмножество WRI1-подобных факторов транскрипции было повторно классифицировано как факторы транскрипции WRI2, WRI3 или WRI4, которые скорее отличаются преимущественной экспрессией в стволах и/или корнях растений, чем в развивающихся семенах (To с соавт., 2012). Несмотря на повторную классификацию, они входят в определение ʺWRI1ʺ в настоящем документе. Предпочтительными WRI1-подобными факторами транскрипции являются те, которые могут дополнить функцию мутации wri1 в растении, особенно функцию в развивающемся семени растения, например, в мутанте wri1 A. thaliana. Кроме того, функция WRI1-подобного полипептида может быть количественно оценена в N. benthamiana при помощи анализов с временной экспрессией, как описано в настоящем документе.

В настоящем документе полипептид ʺЛИСТОВАЯ СЕМЯДОЛЯʺ или ʺLECʺ обозначает фактор транскрипции, который является фактором транскрипции LEC1, LEC1-подобным, LEC2, ABI3 или FUS3 и демонстрирует широкий контроль над созреванием семени и синтезом жирных кислот. LEC2, FUS3 и ABI3 представляют собой родственные полипептиды, каждый из которых содержит ДНК-связывающий домен B3 размером 120 аминокислот (Yamasaki с соавт., 2004), найденный только в растительных белках. Их можно отличить при помощи филогенетического анализа, чтобы определить связь аминокислотной последовательности с членами множества полипептидов A. thaliana, имеющими указанные ниже номера доступа: LEC2, номер доступа AAL12004.1; FUS3 (также известный как FUSCA3), номер доступа AAC35247. LEC1 принадлежит к другому классу полипептидов и гомологичен полипептиду HAP3 класса фактора связывания CBF (Lee с соавт., 2003). Гены LEC1, LEC2 и FUS3 требуются в ходе раннего эмбриогенеза, чтобы предопределить гибель эмбриональных клеток и определить идентичность семядоли, и позже в ходе инициации и поддержания созревания эмбриона (Santos-Mendoza с соавт., 2008). Кроме того, они индуцируют экспрессию генов, кодирующих запасные белки семени, путем связывания с мотивами RY, присутствующими в промоторах, и генов олеозина. Дополнительно, они могут отличаться характером экспрессии в ходе развития семени или своей способностью дополнить соответствующую мутацию в A. thaliana.

В настоящем документе термин ʺЛистовая Семядоля 1ʺ или ʺLEC1ʺ обозначает фактор транскрипции NF-YB-типа, который принимает участие в развитии зиготы и соматическом эмбриогенезе. Эндогенный ген специфично экспрессируется в семени, как в эмбрионе, так и эндосперме. LEC1 активизирует ген, кодирующий WRI1, а также большой класс генов синтеза жирных кислот. Кроме того, эктопическая экспрессия LEC2 вызывает быструю активацию реагирующих на ауксин генов и может вызывать образование соматических эмбрионов. Примеры полипептидов LEC1 включают белки Arabidopsis thaliana (AAC39488, SEQ ID NO:149), Medicago truncatula (AFK49653, SEQ ID NO:154) and Brassica napus (ADF81045, SEQ ID NO:151), A. lyrata (XP_002862657, SEQ ID NO:150), R. communis (XP_002522740, SEQ ID NO:152), G. max (XP_006582823, SEQ ID NO:153), A. hypogaea (ADC33213, SEQ ID NO:156), Z. mays (AAK95562, SEQ ID NO:155).

LEC1-подобный (L1L) является близкородственным LEC1, но отличается другим характером экспрессии гена, который экспрессируется раньше в ходе эмбриогенеза (Kwong с соавт., 2003). Примеры LEC1-подобных полипептидов включают белки Arabidopsis thaliana (AAN15924, SEQ ID NO:157), Brassica napus (AHI94922, SEQ ID NO:158), and Phaseolus coccineus LEC1-like (AAN01148, SEQ ID NO: 159).

В настоящем документе термин ʺЛистовая семядоля 2ʺ или ʺLEC2ʺ обозначает домен B3 фактора транскрипции, который принимает участие в развитии зиготы и соматическом эмбриогенезе и который активизирует экспрессию гена, кодирующего WRI1. Его эктопическая экспрессия облегчает эмбриогенез из вегетативных тканей растения (Alemanno с соавт., 2008). Примеры полипептидов LEC2 включают белки Arabidopsis thaliana (номер доступа NP_564304.1, SEQ ID NO:142), Medicago truncatula (номер доступа CAA42938.1, SEQ ID NO:143) and Brassica napus (номер доступа ADO16343.1, SEQ ID NO:144).

В варианте реализации изобретения экзогенный полинуклеотид по изобретению, который кодирует LEC2, содержит одно или более из следующего:

i) нуклеотиды, кодирующие полипептид, содержащий аминокислоты, последовательность которых приведена в любой из SEQ ID NO: 142-144, или его биологически активный фрагмент или полипептид, аминокислотная последовательность которого по меньшей мере на 30% идентична любой одной или больше из SEQ ID NO: 142-144,

ii) нуклеотиды, последовательность которых по меньшей мере на 30% идентична i), и

iii) полинуклеотид, который гибридизуется с одним или обоими из i) или ii) в строгих условиях.

В настоящем документе термин ʺFUS3ʺ обозначает домен B3 фактора транскрипции, который принимает участие в развитии зиготы и соматическом эмбриогенезе и обнаружен по большей части в протодермальной ткани эмбриона (Gazzarrini с соавт., 2004). Примеры полипептидов FUS3 включают белки Arabidopsis thaliana (AAC35247, SEQ ID NO:160), Brassica napus (XP_006293066.1, SEQ ID NO:161) and Medicago truncatula (XP_003624470, SEQ ID NO:162). Чрезмерной экспрессией любого из LEC1, L1L, LEC2, FUS3 и ABI3 из экзогенного полинуклеотида предпочтительно управляют с помощью регулируемого развитием промотора, такого как специфичный для старения промотор, индуцибельный промотор, или промотор, который сконструирован с целью обеспечения сниженного уровня экспрессии относительно природного промотора, особенно в растениях, кроме Arabidopsis thaliana и B. napus сорт Westar, во избежание аномалий развития, возникающих в ходе развития растения, которые обычно ассоциируются с повышенной экспрессией этих факторов транскрипции (Mu с соавт., 2008).

В настоящем документе термин «BABY BOOM» или «BBM» обозначает фактор транскрипции AP2/ERF, который индуцирует регенерацию в условиях культуры, в норме не поддерживающий регенерацию в растениях дикого типа. Эктопическая экспрессия генов Brassica napus BBM (BnBBM) в B. napus и Arabidopsis индуцирует спонтанный соматический эмбриогенез и органогенез из саженцев, выращиваемых на свободной от гормона основной среде (Boutilier с соавт., 2002). В табаке эктопическая экспрессия BBM является достаточной для индукции дополнительной регенерации побегов и корней на основной среде, но необходим экзогенный цитокинин для образования соматического зародыша (СЭ) (Srinivasan с соавт., 2007). Примеры полипептидов BBM включают белки Arabidopsis thaliana (номер доступа NP_197245.2, SEQ ID NO: 145), маиса (US 7579529), Sorghum bicolor (номер доступа XP_002458927) и Medicago truncatula (номер доступа AAW82334.1, SEQ ID NO:146).

В варианте реализации изобретения экзогенный полинуклеотид по изобретению, который кодирует BBM, содержит, если не указано иное, одно или более из следующего:

i) нуклеотиды, кодирующие полипептид, содержащий аминокислоты, последовательность которых приведена в одной из SEQ ID NO: 145 или 146, или его биологически активный фрагмент или полипептид, аминокислотная последовательность которого по меньшей мере на 30% идентична одной или обеим из SEQ ID NO: 145 или 146,

ii) нуклеотиды, последовательность которых по меньшей мере на 30% идентична i), и

iii) полинуклеотид, который гибридизуется с одним или обоими из i) или ii) в строгих условиях.

Полипептид ABI3 (A. thaliana, номер доступа NP_189108), родственный белку VP1 маиса, экспрессируется с низкими уровнями в вегетативных тканях и влияет на развитие пластид. Полипептид ABI4 A. thaliana, номер доступа NP_181551) принадлежит к семейству факторов транскрипции, которые содержат специфический для растений домен AP2 (Finkelstein с соавт., 1998) и действуют ниже ABI3 в биохимическом пути. ABI5 (A. thaliana номер доступа NP_565840) представляет собой фактор транскрипции семейства bZIP, который влияет на чувствительность ABA и управляет экспрессией некоторых генов LEA в семенах. Он связывает с реагирующим на ABA элементом.

Каждый из следующих факторов транскрипции был выбран на основе того, что они функционируют в ходе эмбриогенеза в растениях. Номера доступа приведены в Таблице 10. Гомологи каждого из них могут быть с легкостью идентифицированы во многих другие видах растений и проанализированы, как описано в Примере 10.

MYB73 представляет собой фактор транскрипции, идентифицированный в сое, который принимает участие в стрессовых реакциях.

bZIP53 представляет собой фактор транскрипции в семействе белка bZIP, идентифицированный в Arabidopsis.

AGL15 (бесполо-подобный 15) представляет собой фактор транскрипции бокса MADS, который нативно экспрессируется в ходе эмбриогенеза. Кроме того, AGL15 нативно экспрессируется в листовом примордии, верхушечном меристеме побегов и молодых цветочных почках, наводя на мысль о том, что AGL15 может дополнительно функционировать в ходе развития после прорастания. AGL15 играет роль в эмбриогенезе и катаболизме гиббереловой кислоты. Он нацелен на домен B3 факторов транскрипции, которые являются ключевыми регуляторами эмбриогенеза.

MYB115 и MYB118 представляют собой факторы транскрипции в семействе MYB из Arabidopsis, принимающем участие в эмбриогенезе.

TANMEI, также известный как EMB2757, кодирует белок повтора WD, необходимый Arabidopsis для эмбрионального развития.

WUS, также известный как Wuschel, представляет собой ген гомеобокса, который управляет пулом стволовых клеток в эмбрионах. Он экспрессируется в стволовой клетке, организующей центр меристема, и необходим для удерживания стволовых клеток в недифференцированном состоянии. Фактор транскрипции связывается с мотивом TAAT компонента ядра.

GFR2a1 и GFR2a2 представляет собой факторы транскрипции по меньшей мере из сои.

Ацилтрансферазы ацилов жирных кислот

В настоящем документе термин "ацилтрансфераза ацилов жирных кислот" обозначает белок, способный к переносу ацильной группы с ацил-КоА, ФХ или ацил-АПБ, предпочтительно ацил-КоА или ФХ, на субстрат, с целью образования ТАГ, ДАГ или МАГ. Указанные ацилтрансферазы включают DGAT, PDAT, MGAT, GPAT и LPAAT.

В настоящем документе термин «диацилглицерил ацилтрансфераза» (DGAT) обозначает белок, который переносит жирную ацильную группу из ацил-КоА к субстрату ДАГ, с образованием ТАГ. Таким образом, термин «активность диацилглицерил ацилтрансферазы» обозначает перенос группы ацила от ацил-КоА к ДАГ, с образованием ТАГ. DGAT может дополнительно выполнять функцию MGAT, но, в основном, функционирует, как DGAT, т. е., обладает более выраженной каталитической активностью в роли DGAT, чем в роли MGAT, если активность фермента выражена в единицах нмоль продукта/мин/мг белка (см. например, Yen с соавт., 2005). Активность DGAT может быть лимитирующей скорость в процессе синтеза ТАГ в семенах (Ichihara с соавт., 1988). DGAT использует субстрат ацил-КоА в качестве донора ацила и переносит его в положение sn-3 ДАГ, с образованием ТАГ. Фермент в своем нативном состоянии функционирует в эндоплазматическом ретикулуме (ЭР) клетки.

Существует три известных типа DGAT, обозначаемых, как DGAT1, DGAT2 и DGAT3, соответственно. Полипептиды DGAT1 являются мембранными белками, которые обычно содержат 10 трансмембранных доменов, полипептиды DGAT2 также являются мембранными белками, но обычно содержат 2 трансмембранных домена, тогда как полипептиды DGAT3 обычно не содержат ни одного и считаются растворимыми в цитоплазме, а не интегрированными в мембраны. Растительные полипептиды DGAT1 обычно содержат около 510-550 остатков аминокислот, в то время как полипептиды DGAT2 обычно содержат около 310-330 остатков. DGAT1 является основным ферментом, ответственным за выработку ТАГ из ДАГ в большинстве развивающихся семян растений, тогда как DGAT2 из таких видов растений, как тунговое дерево (Vernicia fordii) и клещевина (Ricinus communis), которые продуцируют высокие количества необычных жирных кислот, по-видимому, играют важную роль в аккумуляции необычных жирных кислот в ТАГ. Повышенная экспрессия AtDGAT1 в листьях табака приводила к повышению содержания ТАГ в 6-7 раз (Bouvier-Nave с соавт., 2000).

Примеры полипептидов DGAT1 включают белки DGAT1Aspergillus fumigatus (XP_755172.1; SEQ ID NO:80), Arabidopsis thaliana (CAB44774.1; SEQ ID NO:1), Ricinus communis (AAR11479.1; SEQ ID NO:81), Vernicia fordii (ABC94472.1; SEQ ID NO:82), Vernonia galamensis (ABV21945.1 and ABV21946.1; SEQ ID NO:83 and SEQ ID NO:84, соответственно), Euonymus alatus (AAV31083.1; SEQ ID NO:85), Caenorhabditis elegans (AAF82410.1; SEQ ID NO:86), Rattus norvegicus (NP_445889.1; SEQ ID NO:87), Homo sapiens (NP_036211.2; SEQ ID NO:88), а также их варианты и/или мутанты. Примеры полипептидов DGAT2 включают белки, кодируемые генами DGAT2 Arabidopsis thaliana (NP_566952.1; SEQ ID NO: 2), Ricinus communis (AAY16324.1; SEQ ID NO: 3), Vernicia fordii (ABC94474.1; SEQ ID NO: 4), Mortierella ramanniana (AAK84179.1; SEQ ID NO: 5), Homo sapiens (Q96PD7.2; SEQ ID NO: 6) (Q58HT5.1; SEQ ID NO: 7), Bos taurus (Q70VZ8.1; SEQ ID NO: 8), Mus musculus (AAK84175.1; SEQ ID NO: 9), а также их варианты и/или мутанты. Аминокислотные последовательности DGAT1 и DGAT2 демонстрируют незначительную гомологию. Экспрессия в листьях экзогенного DGAT2 была в два раза более эффективной, чем DGAT1 с точки зрения повышения содержания масла (ТАГ). Кроме того, DGAT2 A. thaliana проявляет большее предпочтение в отношении линолеоил-КоА и линоленоил-КоА в качестве доноров ацила, по сравнению с олеоил-КоА, сравнению с DGAT1. Указанное предпочтение в отношении субстрата может применяться, чтобы отличить два класса DGAT, в добавление к их аминокислотным последовательностям.

Примеры полипептидов DGAT3 включают белки, кодируемые генами DGAT3 арахиса (Arachis hypogaea, Saha с соавт., 2006), а также их вариантами и/или мутантами. DGAT обладает незначительной или не обладает обнаружимой активностью MGAT, например, менее 300 пмоль/мин/мг белка, предпочтительно менее 200 пмоль/мин/мг белка, более предпочтительно менее 100 пмоль/мин/мг белка.

В варианте реализации изобретения экзогенный полинуклеотид по изобретению, кодирующий DGAT1, содержит одно или больше из следующего:

i) нуклеотиды, кодирующие полипептид, который содержит аминокислоты, последовательность которых приведена в любой из SEQ ID NO: 1 или 80-88, или его биологически активный фрагмент или полипептид, последовательность аминокислот которого по меньшей мере на 30% идентична любой одной или более из SEQ ID NO: 1 или 80-88,

ii) нуклеотиды, последовательность которых по меньшей мере на 30% идентична i), и

iii) полинуклеотид, который гибридизуется с одним или обоими из i) или ii) в строгих условиях.

В варианте реализации изобретения экзогенный полинуклеотид по изобретению, кодирующий DGAT2, содержит одно или более из следующего

i) нуклеотиды, кодирующие полипептид, который содержит аминокислоты, последовательность которых приведена в любой из SEQ ID NO: 2-9, или его биологически активный фрагмент или полипептид, последовательность аминокислот которого по меньшей мере на 30% идентична любой одной или больше из SEQ ID NO: 2-9,

ii) нуклеотиды, последовательность которых по меньшей мере на 30% идентична i), и

iii) полинуклеотид, который гибридизуется с одним или обоими из i) или ii) в строгих условиях.

В настоящем документе термин ʺфосфолипид:диацилглицерид ацилтрансферазаʺ (PDAT; EC 2.3.1.158) или его синоним ʺфосфолипид:1,2-диацил-sn-глицерид O-ацилтрансферазаʺ обозначает ацилтрансферазу, переносящую ацильную группу с фосфолипида, обычно ФХ, в положение sn-3 ДАГ, с образованием ТАГ. Данная реакция не связана с DGAT, и в ней используются фосфолипиды в качестве доноров ацила. Существует несколько форм PDAT в растительных клетках, включая PDAT1, PDAT2 или PDAT3 (Ghosal с соавт., 2007).

В настоящем документе термин «моноацилглицерил ацилтрансфераза» или «MGAT» обозначает белок, который переносит жирную ацильную группу из ацил-КоА к субстрату МАГ, например, sn-2 МАГ, для образования ДАГ. Таким образом, термин «активность моноацилглицерил ацилтрансферазы» по меньшей мере обозначает перенос ацильной группы от ацил-КоА к МАГ, для образования ДАГ. Термин «MGAT» в настоящем документе включает ферменты, которые действуют на субстраты sn-1/3 МАГ и/или sn-2 МАГ с образованием sn-1,3 ДАГ и/или sn-1,2/2,3-ДАГ, соответственно. В предпочтительном варианте реализации MGAT отдает предпочтение субстрату sn-2 МАГ относительно sn-1 МАГ, или в существенной мере использует в качестве субстрата только sn-2 МАГ. В настоящем документе MGAT не включает ферментов, которые предпочтительно переносят ацильную группу к ЛизоФК относительно МАГ, такие ферменты известны как LPAAT. Таким образом, MGAT предпочтительно использует нефосфорилированные моноацильные субстраты, даже если они также могут обладать низкой каталитической активностью по отношению к ЛизоФК. Предпочтительный MGAT не обладает обнаружимой активностью ацилирования ЛизоФК. Кроме того, MGAT может выполнять функцию DGAT, но, в основном, функционирует как MGAT, т. е., он обладает более выраженной каталитической активностью в роли MGAT, чем в роли DGAT, если активность фермента выражается в единицах нмоль продукта/мин/мг белка (также см. Yen с соавт., 2002). Существует три известных класса MGAT, обозначаемых, как MGAT1, MGAT2 и MGAT3, соответственно. Примеры полипептидов MGAT1, MGAT2 и MGAT3 описаны в WO2013/096993.

В настоящем документе «путь MGAT» обозначает анаболический путь образования ТАГ, отличный от пути Кеннеди, в котором ДАГ образуется ацилированием sn-1 МАГ или, предпочтительно, sn-2 МАГ, катализированным MGAT. В дальнейшем ДАГ может быть использован для образования ТАГ или других липидов. В WO2012/000026 продемонстрировано, во-первых, что листовая ткань растения может синтезировать МАГ из G-3-P таким образом, что МАГ доступен экзогенной MGAT, экспрессирующейся в листовой ткани, во-вторых, что MGAT из различных источников может функционировать в тканях растения, что требует успешного взаимодействия с другими факторами растения, принимающими участие в синтезе липидов, и в-третьих, что ДАГ, образованный под действием экзогенной MGAT, доступен растительной DGAT или экзогенной DGAT для выработки ТАГ. Активность MGAT и DGAT может быть проанализирована путем введения конструкций, кодирующих ферменты (или ферменты-кандидаты) в Saccharomyces cerevisiae, штамм H1246 и демонстрирует аккумуляцию ТАГ.

Некоторые из мотивов, важность которых для каталитической активности DGAT2 продемонстрирована в некоторых DGAT2, также являются консервативными в MGAT ацилтрансферазах. Особый интерес представляет предполагаемый домен связывания с нейтральными липидами с консенсусной последовательностью FLXLXXXN (SEQ ID NO: 14), где каждый X независимо представляет собой любую аминокислоту, кроме пролина, и N представляет собой любую неполярную аминокислоту, расположенную в пределах N-концевого трансмембранного участка, после которого следует предполагаемый домен глицерил/фосфолипид ацилтрансферазы. Мотив FLXLXXXN (SEQ ID NO: 14) найден в DGAT2 мыши (аминокислоты 81-88) и MGAT1/2, но не в DGAT2 дрожжей или растения. Он является важным для активности DGAT2 мыши. Другие мотивы последовательности DGAT2 и/или MGAT1/2 включают:

1. В высокой степени консервативный трипептид YFP (SEQ ID NO: 10) в большинстве полипептидов DGAT2, а также в MGAT1 и MGAT2, например, присутствующий как аминокислоты 139-141 в DGAT2 мыши. Мутация данного мотива в DGAT2 дрожжей посредством неконсервативных замен делает фермент нефункциональным.

2. Тетрапептид HPHG (SEQ ID NO: 11), в высокой степени консервативный в MGAT, а также в последовательностях DGAT2 животных и грибов, например, присутствующий как аминокислоты 161-164 в DGAT2 мыши, и важный для каталитической активности по меньшей мере в DGAT2 дрожжей и мыши. Растительные ацилтрансферазы DGAT2 содержат вместо него консервативную последовательность EPHS (SEQ ID NO: 12), поэтому консервативные модификации в первом и четвертом положениях аминокислот могут быть переносимыми.

3. Более длинный консервативный мотив, который является частью предполагаемого домена фосфолипида глицерина. Примером данного мотива является

RXGFX(K/R)XAXXXGXXX(L/V)VPXXXFG(E/Q) (SEQ ID NO:13), который присутствует как аминокислоты 304-327 в DGAT2 мыши. Последовательность аминокислот в данном мотиве менее консервативна, чем в остальных, как можно было бы ожидать на основании его длины, и гомологи могут быть распознаны путем поиска мотива. Расположение может варьировать для более консервативных аминокислот, т. е., могут присутствовать дополнительные X аминокислоты в пределах мотива или меньшее количество X аминокислот, по сравнению с приведенной выше последовательностью.

Одним важным компонентом в синтезе глицеролипида из жирных кислот, этерифицированных АЦБ или КоА, является фермент, sn-глицерил-3-фосфат ацилтрансфераза (GPAT), которая представляет собой другой полипептид, принимающий участие в биосинтезе неполярных липидов. Указанный фермент принимает участие в различных метаболических путях и осуществлении физиологических функций. Он катализирует следующую реакцию: G3P+жирный ацил-АПБ или -КоА →LPA+свободный-АПБ или -КоА. Катализируемая GPAT реакция происходит в трех отдельных субклеточных структурах растения: пластиде, эндоплазматическом ретикулуме (ЭР) и митохондрии. Указанные реакции катализируются тремя различными видами ферментов GPAT, растворимой формой, которая локализована в строме пластиды, которая использует ацил-АПБ в качестве своего природного ацильного субстрата (ПGPAT на Фиг. 1), и двумя мембраносвязанными формами, локализованными в ЭР и митохондрии, которые используют ацил-КоА и ацил-АПБ в качестве природных доноров ацила, соответственно (Chen с соавт., 2011).

В настоящем документе термин «глицерил-3-фосфат ацилтрансфераза» («GPAT»; EC 2.3.1.15) и его синоним «глицерил-3-фосфат O-ацилтрансфераза» обозначают белок, который ацилирует глицерил-3-фосфат (G-3-P), с образованием ЛизоФК и/или МАГ, причем последний продукт образуется, если GPAT дополнительно обладает активностью фосфатазы по отношению к ЛизоФК. Ацильная группа, которая переносится, происходит от ацил-КоА, если GPAT относится к ЭР-типу GPAT («ацил-КоА:sn-глицерил-3-фосфат 1-O-ацилтрансфераза», дополнительно обозначается как «микросомальная GPAT»), или от ацил-АЦФ, если GPAT является GPAT пластидного типа (GPATПТ). Таким образом, термин «активность глицерил-3-фосфат ацилтрансферазы» обозначает ацилирование G-3-P с образованием ЛизоФК и/или МАГ. Термин «GPAT» включает ферменты, которые ацилируют G-3-P с образованием sn-1 LPA и/или sn-2 LPA, предпочтительно sn-2 LPA. Предпочтительно, GPAT, которая может повышенно экспрессироваться при модификации Pull, представляет собой мембраносвязанную GPAT, которая функционирует в ЭР клетки, более предпочтительно, GPAT9, а пластидная GPAT, которая подавляется при модификации Prokaryotic pathway, представляет собой растворимую GPAT («пластидную GPAT»).В предпочтительном варианте реализации GPAT обладает активностью фосфатазы. В наиболее предпочтительном варианте реализации GPAT представляет собой sn-2 GPAT, обладающий активностью фосфатазы, которая продуцирует sn-2 МАГ.

В настоящем документе термин « sn-1 глицерил-3-фосфат ацилтрансфераза» (sn-1 GPAT) обозначает белок, который ацилирует sn-глицерил-3-фосфат (G-3-P), с предпочтительным образованием 1-ацил -sn-глицерил-3-фосфата (sn-1 LPA). Таким образом, термин «активность sn-1 глицерил-3-фосфат ацилтрансферазы» обозначает ацилирование sn-глицерил-3-фосфата с образованием 1-ацил-sn-глицерил-3-фосфата (sn-1 LPA).

В настоящем документе термин « sn-2 глицерил-3-фосфат ацилтрансфераза» (sn-2 GPAT) обозначает белок, который ацилирует sn-глицерил-3-фосфат (G-3-P) с предпочтительным образованием 2-ацил-sn-глицерил-3-фосфата (sn-2 LPA). Таким образом, термин «активность sn-2 глицерил-3-фосфат ацилтрансферазы» обозначает ацилирование sn-глицерил-3-фосфата с образованием 2-ацил-sn-глицерил-3-фосфата (sn-2 LPA).

Семейство GPAT большое, и все известные члены содержат два консервативных домена, ацилтрансферазный домен plsC (PF01553; SEQ ID NO: 15) и домен суперсемейства галогенкислоты дегалогеназа-подобной гидролазы (PF12710; SEQ ID NO: 16), а также их варианты. В дополнение к этому, по меньшей мере в Arabidopsis thaliana, все GPAT в подклассах GPAT4-GPAT8 содержат N-концевой участок, гомологичный домену фосфосерин фосфатазы (PF00702; SEQ ID NO: 17), и GPAT, которые продуцируют МАГ в качестве продукта, могут быть идентифицированы по наличию такого гомологичного участка. Некоторые GPAT, эндогенно экспрессируемые в ткани листа, содержат консервативную последовательность аминокислот GDLVICPEGTTCREP (SEQ ID NO:18). GPAT4 и GPAT6 содержат консервативные остатки, которые известны как критические для активности фосфатазы, конкретно консервативные аминокислоты в мотиве I (DXDX[T/V][L/V]; SEQ ID NO: 19) и мотиве III (K-[G/S][D/S]XXX[D/N]; SEQ ID NO: 20), расположены на N-конце (Yang с соавт., 2010).

Гомологи Arabidopsis GPAT4 (номер доступа NP_171667.1) и GPAT6 (NP_181346.1) включают AAF02784.1 (Arabidopsis thaliana), AAL32544.1 (Arabidopsis thaliana), AAP03413.1 (Oryza sativa), ABK25381.1 (Picea sitchensis), ACN34546.1 (Zea Mays), BAF00762.1 (Arabidopsis thaliana), BAH00933.1 (Oryza sativa), EAY84189.1 (Oryza sativa), EAY98245.1 (Oryza sativa), EAZ21484.1 (Oryza sativa), EEC71826.1 (Oryza sativa), EEC76137.1 (Oryza sativa), EEE59882.1 (Oryza sativa), EFJ08963.1 (Selaginella moellendorffii), EFJ11200.1 (Selaginella moellendorffii), NP_001044839.1 (Oryza sativa), NP_001045668.1 (Oryza sativa), NP_001147442.1 (Zea mays), NP_001149307.1 (Zea mays), NP_001168351.1 (Zea mays), AFH02724.1 (Brassica napus) NP_191950.2 (Arabidopsis thaliana), XP_001765001.1 (Physcomitrella patens), XP_001769671.1 (Physcomitrella patens), (Vitis vinifera), XP_002275348.1 (Vitis vinifera), XP_002276032.1 (Vitis vinifera), XP_002279091.1 (Vitis vinifera), XP_002309124.1 (Populus trichocarpa), XP_002309276.1 (Populus trichocarpa), XP_002322752.1 (Populus trichocarpa), XP_002323563.1 (Populus trichocarpa), XP_002439887.1 (Sorghum bicolor), XP_002458786.1 (Sorghum bicolor), XP_002463916.1 (Sorghum bicolor), XP_002464630.1 (Sorghum bicolor), XP_002511873.1 (Ricinus communis), XP_002517438.1 (Ricinus communis), XP_002520171.1 (Ricinus communis), ACT32032.1 (Vernicia fordii), NP_001051189.1 (Oryza sativa), AFH02725.1 (Brassica napus), XP_002320138.1 (Populus trichocarpa), XP_002451377.1 (Sorghum bicolor), XP_002531350.1 (Ricinus communis), and XP_002889361.1 (Arabidopsis lyrata).

Были выделены растворимые пластидные GPAT (ПGPAT, также известные как ATS1 в Arabidopsis thaliana), причем кодирующие их гены клонированы из нескольких видов растений, таких как горох (Pisum sativum, номер доступа: P30706.1), шпинат (Spinacia oleraceа, номер доступа: Q43869.1), тыква (Cucurbita moschate, номер доступа: P10349.1), огурец (Cucumis sativus, номер доступа: Q39639.1) и Arabidopsis thaliana (номер доступа: Q43307.2). Растворимая пластидная GPAT представляет собой первую фиксированную стадию того, что известно как прокариотный путь синтеза глицеролипидов и действует только в пластиде (Фиг. 1). Так называемый прокариотный путь расположен исключительно в пластидах растений и обеспечивает сборку ДАГ для синтеза галактолипидов (MGDG и ДГМГ), которые содержат C16:3 жирные кислоты, этерифицированные в положении sn-2 глицеринового скелета.

Консервативные мотивы и/или остатки могут использоваться в качестве основанного на последовательности диагностического признака для идентификации ферментов GPAT. Альтернативно, может применяться более строгий анализ, основанный на функции. Такой анализ включает, например, подкормку меченым глицерил-3-фосфатом клеток или микросом и количественное определение уровней меченых продуктов тонкослойной хроматографией или подобным методом. Активность GPAT приводит к образованию меченой LPA, тогда как активность GPAT/фосфатазы приводит к образованию меченого МАГ.

В настоящем документе термин "ацилтрансфераза лизофосфатидиновой кислоты" (LPAAT; EC 2.3.1.51) и его синонимы ʺ1-ацил-глицерил-3-фосфат ацилтрансферазаʺ, ʺацил-КоА:1-ацил-sn-глицерол-3-фосфат 2-O-ацилтрансферазаʺ и ʺ1-ацилглицерил-3-фосфат O-ацилтрансферазаʺ обозначают белок, который ацилирует лизофосфатидиновую кислоту (LPA) с образованием фосфатидиновой кислоты (ФК, PA). Ацильную группу для переноса получают из ацил-КоА, если LPAAT представляет собой LPAAT ЭР-типа, или из ацил-АПБ, если LPAAT представляет собой LPAAT пластидного типа (ПLPAAT). Таким образом, термин "активность ацилтрансферазы лизофосфатидиновой кислоты" обозначает ацилирование LPA с образованием ФК.

Полипептиды покрытия масляного включения

Семена растения и пыльца аккумулируют ТАГ в субклеточных структурах, называемых масляными включениями, диаметр которых в общем находится в диапазоне 0,5-2,5 мкм. В настоящем документе ʺлипидные капелькиʺ, также называемые ʺмасляными включениямиʺ, представляет собой богатые липидами клеточные органеллы для хранения или обмена нейтральных липидов, в основном содержащие ТАГ. Размер липидных капелек может значительно варьировать, от около 20 нм до 100 мкм. Указанные органеллы содержат ядро ТАГ, окруженное фосфолипидным монослоем, содержащим несколько инкорпорированных белков, принимающих участие в метаболизме и хранении липидов, а также в переносе липидов к другим мембранам, в том числе олеозинов, если масляные включения происходят из растительных семян или тканей цветка (Jolivet с соавт., 2004). В общем, они содержат 0,5-3,5% белка, в то время как остальная часть представлена липидом. Они являются наименее плотными органеллами в большинстве клеток и могут, таким образом, с легкостью быть выделены путем центрифугирования с флотацией. Олеозины представляют самый распространенный (по меньшей мере 80%) белок в мембране масляных включений из семян.

В настоящем документе термин «олеозин» обозначает амфифильный белок, присутствующий в мембране масляных включений в запасных тканях семян (см., например, Huang, 1996; Lin с соавт., 2005; Capuano с соавт., 2007; Lui с соавт., 2009; Shimada и Hara-Nishimura, 2010), и искусственно созданные варианты (см., например WO2011/053169 и WO2011/127118).

Олеозин обладает низкой М.м. (15-26000), что соответствует приблизительно 140-230 аминокислотных остатков, и это позволяет им плотно упаковываться на поверхности масляных включений. В семенах каждого вида обычно представлены два или более олеозинов с различной М.м.. Каждая молекула олеозина содержит относительно гидрофильный, вариабельный N-концевой домен (например, длиной около 48 остатков аминокислоты), центральный полностью гидрофобный домен (например, длиной приблизительно 70-80 остатков аминокислоты), который особенно богат алифатическими аминокислотами, такими как аланин, глицин, лейцин, изолейцин и валин, и амфифильный α-спиральный домен размером около 30-40 остатков аминокислот на C-конце или вблизи него. Обычно центральный гидрофобный домен содержит в центре мотив пролинового узла размером около 12 остатков. В общем, центральный участок гидрофобных остатков вставлен в липидное ядро, и амфифильный N-концевой участок и/или амфифильный C-концевой участок размещен на поверхности масляных включений, причем положительно заряженные остатки инкорпорированы в фосфолипидный монослой, и отрицательно заряженные участки контактируют с внешней средой.

В настоящем документе термин «олеозин» включает полиолеозины, содержащие несколько полипептидов олеозина, соединенных вместе способом «голова к хвосту» в качестве единого полипептида (WO2007/045019), например, 2x, 4x или 6x пептидов олеозина, и калеозины, которые связывают кальций и составляют минорный белковый компонент белков, покрывающих масляные включения в семенах (Froissard с соавт., 2009), а также стеролеозины, которые связываются со стероидами (WO2011/053169). Однако, в общем, значительная часть (по меньшей мере 80%) олеозинов в масляных включениях не будет относиться к калеозинам и/или стеролеозинам. Термин ʺолеозинʺ дополнительно включает полипептиды олеозина, модифицированные искусственным путем, т.е. олеозины, в которых один или более остатков аминокислот природного олеозина искусственно заменены остатками цистеина, как описано в WO2011/053169. Обычно, 4-8 остатков заменены искусственным путем, предпочтительно 6 остатков, но может быть заменено от 2 до 14 остатков. Предпочтительно, амфифильные N-концевой и C-концевой домены содержат замены цистеина. Модификация повышает способность олеозинов к образованию поперечных связей и повышает термостабильность и/или устойчивость белков к разложению протеазами.

Известно значительное количество последовательностей белка олеозина и нуклеотидных последовательностей, кодирующих его, из множества различных видов растений. Примеры включают, без ограничений, олеозины Arabidposis, рапса, кукурузы, риса, арахиса, клещевины, сои, льна, винограда, капусты, хлопчатника, подсолнечника, сорго и ячменя. Примеры олеозинов (с номерами доступа) включают олеозин Brassica napus (CAA57545.1; SEQ ID NO:95), Brassica napus олеозин S1-1 (ACG69504.1; SEQ ID NO:96), Brassica napus олеозин S2-1 (ACG69503.1; SEQ ID NO:97), Brassica napus олеозин S3-1 (ACG69513.1; SEQ ID NO:98), Brassica napus олеозин S4-1 (ACG69507.1; SEQ ID NO:99), Brassica napus олеозин S5-1 (ACG69511.1; SEQ ID NO:100), Arachis hypogaea олеозин 1 (AAZ20276.1; SEQ ID NO:101), Arachis hypogaea олеозин 2 (AAU21500.1; SEQ ID NO:102), Arachis hypogaea олеозин 3 (AAU21501.1; SEQ ID NO:103), Arachis hypogaea олеозин 5 (ABC96763.1; SEQ ID NO:104), Ricinus communis олеозин 1 (EEF40948.1; SEQ ID NO:105), Ricinus communis олеозин 2 (EEF51616.1; SEQ ID NO:106), олеозин Glycine max изоформа a (P29530.2; SEQ ID NO:107), олеозин Glycine max изоформа b (P29531.1; SEQ ID NO:108), олеозин Linum usitatissimum низкомолекулярная изоформа (ABB01622.1; SEQ ID NO:109), олеозин Linum usitatissimum высокомолекулярная изоформа (ABB01624.1; SEQ ID NO:110), олеозин Helianthus annuus (CAA44224.1; SEQ ID NO:111), олеозин Zea mays (NP_001105338.1; SEQ ID NO:112), Brassica napus стеролеозин (ABM30178.1; SEQ ID NO:113), Brassica napus стеролеозин SLO1-1 (ACG69522.1; SEQ ID NO:114), Brassica napus стеролеозин SLO2-1 (ACG69525.1; SEQ ID NO:115), стеролеозин Sesamum indicum (AAL13315.1; SEQ ID NO:116), стеролеозин Zea mays (NP_001152614.1; SEQ ID NO:117), калеозин CLO-1 Brassica napus (ACG69529.1; SEQ ID NO:118), Brassica napus калеозин CLO-3 (ACG69527.1; SEQ ID NO:119), калеозин Sesamum indicum (AAF13743.1; SEQ ID NO:120), калеозин Zea mays (NP_001151906.1; SEQ ID NO:121), калеозин Glycine max (AAB71227). Другими функционально эквивалентными полипептидами липидной инкапсуляции являются пластоглобулины и полипептиды белка жировых капель миокарда (БЖКМ) (WO2011/127118).

В варианте реализации изобретения экзогенный полинуклеотид по изобретению, кодирующий олеозин, содержит, если не указано иное, одно или более из следующего:

i) нуклеотиды, кодирующие полипептид, который содержит аминокислоты, последовательность которых приведена в любой из SEQ ID NO: 95-112, или его биологически активный фрагмент или полипептид, последовательность аминокислот которого по меньшей мере на 30% идентична любой одной или более из SEQ ID NO: 95-112,

ii) нуклеотиды, последовательность которых по меньшей мере на 30% идентична i), и

iii) полинуклеотид, который гибридизуется с одним или обоими из i) или ii) в строгих условиях.

В варианте реализации изобретения экзогенный полинуклеотид по изобретению, кодирующий стеролеозин, содержит, если не указано иное, одно или более из следующего:

i) нуклеотиды, кодирующие полипептид, который содержит аминокислоты, последовательность которых приведена в любой из SEQ ID NO: 113-117, или его биологически активный фрагмент или полипептид, последовательность аминокислот которого по меньшей мере на 30% идентична одной или более из SEQ ID NO: 113-117,

ii) нуклеотиды, последовательность которых по меньшей мере на 30% идентична i), и

iii) полинуклеотид, который гибридизуется с одним или обоими из i) или ii) в строгих условиях.

В настоящем документе ʺбелок, связанный с липидной капелькойʺ или ʺБСЛКʺ обозначает полипептид, который в растениях связан с липидными капельками в тканях или органах, кроме семян, пыльников и пыльцы, например, тканях фруктов, включая перикарпий и мезокарпий. БСЛК могут быть связаны с масляными включениями в семенах, пыльниках или пыльце, а также в тканях или органах, кроме семян, пыльников и пыльцы. Они отличаются от олеозинов, которые являются полипептидами, связанными с поверхностью липидных капелек в тканях семени, пыльниках и пыльце. БСЛК в настоящем документе включают полипептиды БСЛК, образованные природным путем в тканях растения, а также варианты аминокислотной последовательности, полученные искусственным путем. Функция таких вариантов может быть проанализирована, как проиллюстрировано в Примере 15.

Horn с соавт. (2013) идентифицировали два гена БСЛК, которые экспрессируются в перикарпии авокадо. Аминокислотная последовательность кодируемых полипептидов авокадо БСЛК1 и БСЛК2 была на 62% идентичной, а также обладала гомологией к полипептиду, кодируемому At3g05500 Arabidopsis и SRPP-подобному белку резинового дерева. Gidda с соавт. (2013) идентифицировали три гена БСЛК, которые экспрессировались в мезокарпии, но не в ядрах масличной пальмы (Elaeis guineensis) и сделали вывод о том, что гены БСЛК были специфичными для растения и консервативными для всех видов растений. Полипептиды БСЛК могут содержать дополнительные домены (Gidda с соавт., (2013). Гены, кодирующие БСЛК, в общем, активизируются в тканях, не относящихся к семенам, с обильным содержанием липидов, и могут быть идентифицированы таким образом, однако считается, что они экспрессируются во всех клетках, не относящихся к семенам, которые вырабатывают масло, в том числе для временного хранения. Horn с соавт. (2013) иллюстрируют филогенетическое дерево SRPP-подобных белков в растениях. Характерные полипептиды БСЛК описаны в Примере 15 настоящего документа. Гомологи БСЛК в других видах растений могут быть с легкостью идентифицированы специалистами в данной области.

В варианте реализации изобретения экзогенный полинуклеотид по изобретению, кодирующий БСЛК, содержит, если не указано иное, одно или более из следующего:

i) нуклеотиды, кодирующие полипептид, который содержит аминокислоты, последовательность которых приведена в любой из SEQ ID NO: 237, 239 или 241, или его биологически активный фрагмент или полипептид, последовательность аминокислот которого по меньшей мере на 30% идентична любой одной или более из SEQ ID NO: 237, 239 или 241,

ii) нуклеотиды, последовательность которых по меньшей мере на 30% идентична i), и

iii) полинуклеотид, который гибридизуется с одним или обоими из i) или ii) в строгих условиях.

В настоящем документе термин «Полипептид, принимающий участие в биосинтезе крахмала» обозначает любой полипептид, регуляция которого в клетке вниз до уровней ниже нормальных (дикий тип), приводит к снижению уровня синтеза крахмала и снижению уровней крахмала. Примером такого полипептида является АГФаза.

В настоящем документе термин «фосфорилаза АДФ-глюкозы» или «АГФаза» обозначает фермент, который регулирует биосинтез крахмала, катализируя превращение глюкозы-1-фосфата и АТФ в АДФ-глюкозу, которая служит строительным блоком для полимеров крахмала. Активная форма фермента АГФазы состоит из 2 больших и 2 маленьких субъединиц.

Фермент АДФаза в растениях существует, главным образом, в форме тетрамера, который состоит из 2 больших и 2 маленьких субъединиц. Хотя каталитическая и регуляторная роли этих субъединиц отличаются в зависимости от вида (Kuhn с соавт., 2009), в растениях маленькая субъединица проявляет, главным образом, каталитическую активность. Молекулярная масса маленькой субъединицы составляет приблизительно 50-55 кДа. Молекулярная масса большой субъединицы составляет приблизительно 55-60 кДа. Фермент растения интенсивно активизируется 3-фосфоглицератом (ФГА), продуктом фиксации диоксида углерода; в отсутствие ФГА фермент проявляет только около 3% активности. Растительная АГФаза также интенсивно ингибируется неорганическим фосфатом (Фн). Наоборот, бактериальная и водорослевая АГФазы существуют в виде гомотетрамеров размером 50 кДа. Водорослевый фермент, подобно его растительному двойнику, активируется ФГА и ингибируется Фн, тогда как бактериальный фермент активируется фруктозо-1,6-бифосфатом (ФБФ) и ингибируется АМФ и Фн.

ТАГ липазы и бета-окисление

В настоящем документе термин «полипептид, принимающий участие в разложении липида и/или который снижает содержание липида» обозначает любой полипептид, катаболизирующий липид, причем регуляция полипептида в клетке вниз до уровней ниже нормальных (дикий тип) приводит к повышению уровня масла, например, жирных кислот и/или ТАГ, в клетке, предпочтительно клетке вегетативной части, клубне, свекле или семени растения. Примеры таких полипептидов включают, без ограничений, липазы или липазу, такую как полипептид CGi58 (подобный сравнительному идентификатору гена-58), САХАРОЗАВИСИМУЮ триацилглицерил липазу 1 (SDP1) (см., например, Kelly с соавт., 2011) и липазу, описанную в WO 2009/027335.

В настоящем документе термин «ТАГ липаза» (EC.3.1.1.3) обозначает белок, который гидролизует ТАГ до одной или более жирных кислот и любого из ДАГ, МАГ или глицерина. Таким образом, термин «активность ТАГ липазы» обозначает гидролиз ТАГ до глицерина и жирных кислот.

В настоящем документе термин «CGi58» обозначает растворимую ацил-КоА-зависимую ацилтрансферазу лизофосфатидиновой кислоты, кодируемую геном At4g24160 в Arabidopsis thaliana и его гомологами в других растениях, и «Ict1p» в дрожжах и его гомологами. Растительный ген, например, локус гена Arabidopsis At4g24160, экспрессируется как две альтернативные копии: более длинная полноразмерная изоформа (At4g24160.1) и более короткая изоформа (At4g24160.2), в которой отсутствует часть 3' конца (см. James с соавт., 2010; Ghosh с соавт., 2009; US 201000221400). Обе иРНК кодируют белок, гомологичный человеческому белку CGI-58 и другим ортологичным членам данного семейства α/гидролазы (АБГД). В варианте реализации белок CGI58 (At4g24160) содержит три мотива, которые являются консервативными в видах растений: мотив липазы GXSXG (SEQ ID NO: 127), мотив ацилтрансферазы HX(4)D (SEQ ID NO: 128), и VX(3)HGF, вероятный мотив связывания с липидом (SEQ ID NO: 129). Белок CGI-58 человека обладает активностью ацилтрансферазы лизофосфатидиновой кислоты (LPAAT), но не активностью липазы. И наоборот, белки растения и дрожжей содержат канонический мотив последовательности липазы GXSXG (SEQ ID NO: 127), отсутствующий в белках позвоночных (человек, мыши и рыбки данио) и обладающий липазной и фосфолипазной активностью (Ghosh с соавт., 2009). Хотя белки CGI58 растения и дрожжей, похоже, обладают обнаружимыми уровнями активности липазы ТАГ и фосфолипазы А, в дополнение к активности LPAAT, белок человека не проявляет такой активности.

Разрушение гомологичного гена CGI-58 в Arabidopsis thaliana приводит к аккумуляции капелек нейтрального липида в зрелых листьях. Масс-спектроскопический анализ капелек липида, выделенных от мутантов с утратой функции cgi-58,показал, что они содержат триацилглицериды со специфичными жирными кислотами, обычными для листьев. Листья зрелых растений cgi-58 демонстрируют заметное повышение абсолютных уровней триацилглицеридов, более чем в 10 раза превышающих уровни в растениях дикого типа. Уровни липида в запасающих масло семенах cgi-58 оставались неизменными, и, в отличие от мутаций с β-окислением, семена cgi-58 прорастали и росли нормально, не требуя спасения с помощью сахарозы (James с соавт., 2010).

Примеры нуклеотидов, кодирующих полипептиды CGi58, включают нуклеотиды из Arabidopsis thaliana (NM_118548.1 кодирующий NP_194147.2; SEQ ID NO:130), Brachypodium distachyon (XP_003578450.1; SEQ ID NO:131), Glycine max (XM_003523590.1 кодирующий XP_003523638.1; SEQ ID NO:132), Zea mays (NM_001155541.1 кодирующий NP_001149013.1; SEQ ID NO:133), Sorghum bicolor (XM_002460493.1 кодирующий XP_002460538.1; SEQ ID NO:134), Ricinus communis (XM_002510439.1 кодирующий XP_002510485.1; SEQ ID NO:135), Medicago truncatula (XM_003603685.1 кодирующий XP_003603733.1; SEQ ID NO:136), и Oryza sativa (кодирующий EAZ09782.1).

В варианте реализации изобретения генетическая модификация по изобретению подавляет эндогенную выработку CGi58, причем CGi58 кодируется одним или более из следующего:

i) нуклеотиды, содержащие последовательность, приведенную в любой из SEQ ID NO: 130-136,

ii) нуклеотиды, содержащие последовательность, которая по меньшей мере на 30% идентична любой одной или более из SEQ ID NO: 130-136, и

iii) полинуклеотид, который гибридизуется с одним или обоими из i) или ii) в строгих условиях.

Другие липазы, обладающие активностью липазы в отношении ТАГ, включают САХАРО-ЗАВИСИМУЮ триацилглицерид липазу 1 (SDP1, см., например, Eastmond с соавт., 2006; Kelly с соавт., 2011) и SDP1-подобные полипептиды, найденные в растительных видах, а также дрожжах (полипептид TGL4) и животных клетках, которые принимают участие в расщеплении запасных ТАГ. По-видимому, SDP1 и SDP1-подобные полипептиды ответственны за начало расщепления ТАГ в семенах после прорастания (Eastmond с соавт., 2006). Растения с мутантным SDP1, в отсутствие экзогенных WRI1 и DGAT1, демонстрируют повышенные уровни ПНЖК в ТАГ. В настоящем документе ʺполипептиды SDP1ʺ включают SDP1 полипептиды, SDP1-подобные полипептиды и их гомологи в растительных видах. Размер SDP1 и SDP1-подобных полипептидов в растениях составляет 800-910 остатков аминокислот, причем они содержат пататин-подобный домен ацилгидролазы, который может связываться с поверхностями масляных включений и предпочтительно гидролизовать ТАГ относительно ДАГ или МАГ. Считается, что SDP1 проявляет предпочтение к гидролизу ацильной группы в положении sn-2 ТАГ. Arabidopsis содержит по меньшей мере три гена, кодирующих SDP1 липазы, а именно SDP1 (номер доступа NP_196024, нуклеотидная последовательность SEQ ID NO: 163 и гомологи в других видах), SDP1 (номер доступа NM_202720 и гомологи в других видах, Kelly с соавт., 2011) и ATGLL (At1g33270) (Eastmond с соавт., 2006). Особый интерес с точки зрения снижения активности гена представляют гены SDP1, которые экспрессируются в вегетативных тканях растений, например, в листьях, стеблях и корнях. Таким образом, уровни неполярных липидов в вегетативных частях растения могут быть повышены путем снижения активности полипептидов SDP1 в частях растения, например, с помощью мутации эндогенного гена, кодирующего полипептид SDP1, или введением экзогенного гена, который кодирует сайленсинговую РНК молекулу, которая снижает экспрессию эндогенного гена SDP1. Такое снижение приносит конкретную пользу на урожаях клубней, таких как сахарная свекла и картофель, и в ʺвысокосахарозныхʺ растениях, таких как сахарный тростник и сахарная свекла.

Гены, кодирующие гомологи SDP1 (в том числе SDP1-подобные гомологи) в растительных видах выбора, могут быть с легкостью идентифицированы по гомологии к известным последовательностям гена SDP1. Известные нуклеотидные или аминокислотные последовательности SDP1 включают номера доступа: в Brassica napus, GN078290 (SEQ ID NO:164), GN078281, GN078283; Capsella rubella, XP_006287072; Theobroma cacao, XP_007028574.1; Populus trichocarpa, XP_002308909 (SEQ ID NO:166); Prunus persica, XP_007203312; Prunus mume, XP_008240737; Malus domestica, XP_008373034; Ricinus communis, XP_002530081; Medicago truncatula, XP_003591425 (SEQ ID NO:167); Solanum lycopersicum, XP_004249208; Phaseolus vulgaris, XP_007162133; Glycine max, XP_003554141 (SEQ ID NO:168); Solanum tuberosum, XP_006351284; Glycine max, XP_003521151; Cicer arietinum, XP_004493431; Cucumis sativus, XP_004142709; Cucumis melo, XP_008457586; Jatropha curcas, KDP26217; Vitis vinifera, CBI30074; Oryza sativa, Japonica Group BAB61223; Oryza sativa, Indica Group EAY75912; Oryza sativa, Japonica Group NP_001044325; Sorghum bicolor, XP_002458531 (SEQ ID NO:169); Brachypodium distachyon, XP_003567139 (SEQ ID NO:165); Zea mays, AFW85009; Hordeum vulgare, BAK03290 (SEQ ID NO:172); Aegilops tauschii, EMT32802; Sorghum bicolor, XP_002463665; Zea mays, NP_001168677 (SEQ ID NO:170); Hordeum vulgare, BAK01155; Aegilops tauschii, EMT02623; Triticum urartu, EMS67257; Physcomitrella patens, XP_001758169 (SEQ ID NO:171). Предпочтительные последовательности SDP1 для применения в генетических конструкциях с целью подавления экспрессии эндогенных генов, происходят из кДНК, соответствующих генам, которые экспрессируются в наибольшей степени в клетках, вегетативных частях растения или семенах, в зависимости от того, что подлежит модификации. Нуклеотидные последовательности, которые являются в высокой степени консервативными между кДНК, соответствующими всем генам SDP1 в виде растений, являются предпочтительными, если желательно сократить активность всех членов генного семейства в данном виде.

В варианте реализации изобретения генетическая модификация по изобретению подавляет эндогенную выработку SDP1, причем SDP1 кодируется одним или более из следующего:

i) нуклеотиды, последовательность которых приведена в любой из SEQ ID NO: 163-174,

ii) нуклеотиды, последовательность которых по меньшей мере на 30% идентична любой одной или более последовательностям, приведенным как SEQ ID NO: 163-174, и

iii) последовательность нуклеотидов, которая гибридизуется с одним или обоими из i) или ii) в строгих условиях.

Как проиллюстрировано в Примерах, снижение экспрессии и/или активности ТАГ липазы SDP1 в листьях растения значительно повышало содержание ТАГ, как с точки зрения количества ТАГ, которые аккумулируются, так и более раннего наступления периода аккумуляции в ходе развития растения, в контексте co-экспрессии фактора транскрипции WRI1 и ацилтрансферазы ацилов жирных кислот. В частности, повышение наблюдалось в растениях до цветения, и составляло до около 70% масс. (% сухой массы) на момент начала старения. Повышение было относительным по сравнению с уровнями ТАГ, наблюдаемыми в соответствующих листьях растений, трансформированных экзогенными полинуклеотидами, кодирующими WRI1 и ацилтрансферазу ацилов жирных кислот, но без модификации, которая снижает экспрессию и/или активность SDP1.

Кроме того, снижение экспрессии других генов катаболизма ТАГ в частях растения может повысить содержание ТАГ, например, генов ACX, кодирующих ацил-КоА оксидазы, таких как гены Acx1 (At4g16760 и гомологи в других видах растений) или Acx2 (At5g65110 и гомологи в других видах растений). Другим полипептидом, принимающим участие в катаболизме липидов, является PXA1, который представляет собой пероксисомальный переносчик АТФ-связывающей кассеты, необходимый для импорта жирных кислот для β-окисления (Zolman с соавт., 2001).

Экспорт жирных кислот из пластид

В настоящем документе термин "полипептид, который повышает экспорт жирных кислот из пластид клетки" обозначает любой полипептид, который способствует переносу жирных кислот из внутреннего пространства пластид (в клетках, которые содержат пластиды, таких как клетка вегетативной части, клубня, свеклы или семени растения) за пределы пластиды, т.е. в любую другую часть клетки, такую как эндоплазматический ретикулум (ЭР). Примеры таких полипептидов включают, но не ограничиваясь ими, тиоэстеразу C16 или C18 жирных кислот, такую как полипептид FATA или полипептид FATB, тиоэстеразу C8-C14 жирных кислот (которая дополнительно является полипептидом FATB), переносчик жирных кислот, такой как полипептид ABCA9 или длинноцепочечная ацил-КоА синтетаза (ДЦАС).

В настоящем документе термина ʺтиоэстераза жирных кислотʺ или ʺТЖК (FAT)ʺ обозначает фермент, катализирующий гидролиз тиоэфирной связи между ацильным фрагментом и ацилпереносящим белком (АПБ) в ацил-АПБ и высвобождение свободной жирной кислоты. Такие ферменты обычно функционируют в пластидах организма, синтезирующего жирные кислоты de novo. В настоящем документе термин ʺтиоэстераза C16 или C18 жирной кислотыʺ обозначает фермент, катализирующий гидролиз тиоэфирной связи между C16 и/или C18 ацильным фрагментом и АПБ в ацил-АПБ и высвобождение свободной C16 или C18 жирной кислоты в пластиде. Далее свободная жирная кислота переэтерифицируется до КоА в пластидном конверте, и в таком виде она транспортируется из пластиды. Специфичность субстрата фермента тиоэстеразы жирных кислот (ТЖК) в пластиде принимает участие в определении спектра длины цепи и степени насыщенности жирных кислот, экспортируемых из пластиды. Ферменты ТЖК могут быть классифицированы в два класса, на основании их специфичности в отношении субстрата и нуклеотидных последовательностей, FATA и FATB (EC 3.1.2.14) (Jones с соавт., 1995). Полипептиды FATA отдают предпочтение олеоил-АПБ в качестве субстрата, в то время как полипептиды FATB демонстрируют более высокую активность в отношении насыщенных ацил-АПБ с различной длиной цепи, например, воздействуя на пальмитоил-АПБ с образованием свободной пальмитиновой кислоты. Примеры полипептидов FATA, пригодных в соответствии с изобретением, включают, но не ограничиваясь ими, полипептиды из Arabidopsis thaliana (NP_189147), Arachis hypogaea (GU324446), Helianthus annuus (AAL79361), Carthamus tinctorius (AAA33020), Morus notabilis (XP_010104178,1), Brassica napus (CDX77369,1), Ricinus communis (XP_002532744,1) и Camelina sativa (AFQ60946,1). Примеры полипептидов FATB, пригодных в соответствии с изобретением, включают, но не ограничиваясь ими, полипептиды из Zea mays (AIL28766), Brassica napus (ABH11710), Helianthus annuus (AAX19387), Arabidopsis thaliana (AEE28300), Umbellularia californica (AAC49001), Arachis hypogaea (AFR54500), Ricinus communis (EEF47013) и Brachypodium sylvaticum (ABL85052.1).

Подкласс полипептидов FATB составляют тиоэстеразы жирных кислот, которые проявляют гидролитическую активность в отношении насыщенного ацильного фрагмента C8-C14, соединенного тиоэфирной связью с АПБ. Такие ферменты дополнительно обозначают как тиоэстеразы среднецепочечных жирных кислот (СЦЖК) или ферменты СЦ-FAT. Такие ферменты могут дополнительно проявлять активность тиоэстеразы в отношении C16-АПБ, в действительности, они могут проявлять более высокую активность тиоэстеразы в отношении субстрата C16 ацил-АПБ, чем субстрата СЦЖК-АПБ, тем не менее, они рассматриваются в настоящем документе как СЦЖК тиоэстеразы, если при экзогенной экспрессии в растительной клетке они продуцируют по меньшей мере 0,5% СЦЖК в общем содержании жирных кислот. Примеры СЦЖК тиоэстераз предоставлены в Примере 9 настоящего документа.

В настоящем документе термин ʺпереносчик жирной кислотыʺ связан с наличием в мембране пластиды полипептида, который принимает активное участие в переносе жирных кислот из пластиды за ее пределы. Примеры полипептидов ABCA9 (ABC переносчик A член семейства 9), пригодных в соответствии с изобретением, включают, но не ограничиваясь ими, полипептиды из Arabidopsis thaliana (Q9FLT5), Capsella rubella (XP_006279962.1), Arabis alpine (KFK27923.1), Camelina sativa (XP_010457652.1), Brassica napus (CDY23040.1) и Brassica rapa (XP_009136512.1).

В настоящем документе термин ʺацил-КоА синтетазаʺ или ʺАКС (ACS)ʺ (EC 6.2.1.3) обозначает полипептид, который входит в состав семейства лигазы, катализирующего образование жирного ацил-КоА в ходе двухстадийного процесса, проходящего через промежуточное аденилированное соединение, с использованием неэтерифицированной жирной кислоты, КоА и АТФ в качестве субстратов, с образованием эфира ацил-КоА, АМФ и пирофосфата в качестве продуктов. В настоящем документе термин ʺдлинноцепочечная ацил-КоА синтетазаʺ (ДАКС) обозначает АКС, которая проявляет активность по меньшей мере в отношении субстрата C18 свободной жирной кислоты, хотя она может обладать более широкой активностью в отношении любой из свободных C14-C20 жирных кислот. Эндогенные пластидные ферменты ДЦАС локализуются во внешней мембране пластиды и функционируют вместе с тиоэстеразой жирной кислоты с целью экспорта жирных кислот из пластиды (Schnurr с соавт., 2002). В Arabidopsis присутствует по меньшей мере девять идентифицированных генов ДЦАС (Shockey с соавт., 2002). Предпочтительными полипептидами ДЦАС являются принадлежащие к подклассу LACS9, которые в Arabidopsis являются основными пластидными ДЦАС. Примеры полипептидов ДЦАС, пригодных в соответствии с изобретением, включают, но не ограничиваясь ими, полипептиды из Arabidopsis thaliana (Q9CAP8), Camelina sativa (XP_010416710.1), Capsella rubella (XP_006301059.1), Brassica napus (CDX79212.1), Brassica rapa (XP_009104618.1), Gossypium raimondii (XP_012450538.1) и Vitis Vinifera (XP_002285853.1). Гомологи вышеупомянутых полипептидов в других видах могут быть с легкостью идентифицированы специалистами в данной области.

Полипептиды, принимающие участие в выработке диацилглицерида (ДАГ) в пластидах

Уровни неполярных липидов, например, в вегетативных частях растения могут быть дополнительно повышены путем снижения активности полипептидов, принимающих участие в выработке диацилглицерида (ДАГ) в пластиде в частях растения, например, мутацией эндогенного гена, кодирующего такой полипептид, или введением экзогенного гена, который кодирует сайленсинговую молекулу РНК, снижающую экспрессию гена-мишени, принимающего участие в выработке диацилглицерида (ДАГ) в пластиде.

В настоящем документе термин "полипептид, принимающий участие в выработке диацилглицерида (ДАГ) в пластиде" обозначает любой полипептид в пластиде (в клетках, которые содержат пластиды, таких как клетка вегетативной части, клубня, свеклы или семени растения), который непосредственно принимает участие в синтезе диацилглицерида. Примеры таких полипептидов включают, но не ограничиваясь ими, пластидную GPAT, пластидную LPAAT или пластидную PAP.

GPAT описаны в другом месте настоящего документа. Примеры пластидных полипептидов GPAT, которые могут служить мишенью для подавления согласно изобретению, включают, но не ограничиваясь ими, полипептиды из Arabidopsis thaliana (BAA00575), Capsella rubella (XP_006306544.1), Camelina sativa (010499766.1), Brassica napus (CDY43010.1), Brassica rapa (XP_009145198.1), Helianthus annuus (ADV16382.1) и Citrus unshiu (BAB79529.1). Гомологи в других видах могут с легкостью быть идентифицированы специалистами в данной области.

LPAAT описаны в другом месте настоящего документа. Как будет понятно квалифицированному специалисту, пластидные LPAAT, которые служат мишенью для подавления с целью снижения синтеза ДАГ в пластиде, не являются эндогенными LPAAT, которые функционируют за пределами пластиды, например, в ЭР, например, описанных в настоящем документе как пригодные для выработки ТАГ, содержащих среднецепочечные жирные кислоты. Примеры пластидных полипептидов LPAAT, которые могут служить мишенью для подавления согласно изобретению, включают, но не ограничиваясь ими, полипептиды Brassica napus (ABQ42862), Brassica rapa (XP_009137939.1), Arabidopsis thaliana (NP_194787.2), Camelina sativa (XP_010432969.1), Glycine max (XP_006592638.1) и Solanum tuberosum (XP_006343651.1). Гомологи вышеупомянутых полипептидов в других видах могут быть с легкостью идентифицированы специалистами в данной области.

В настоящем документе термин "фосфатаза фосфатидиновой кислоты (PAP) (EC 3.1.3.4)ʺ обозначает белок, осуществляющий гидролиз фосфатной группы на 3-sn-фосфатидате с образованием 1,2-диацил-sn-глицерида (ДАГ) и фосфата. Примеры пластидных полипептидов PAP, которые могут служить мишенью для подавления согласно изобретению, включают, но не ограничиваясь ими, полипептиды из Arabidopsis thaliana (Q6NLA5), Capsella rubella (XP_006288605.1), Camelina sativa (XP_010452170.1), Brassica napus (CDY10405.1), Brassica rapa (XP_009122733.1), Glycine max (XP_003542504.1) и Solanum tuberosum (XP_006361792.1). Гомологи вышеупомянутых полипептидов в других видах могут быть с легкостью идентифицированы специалистами в данной области.

Импорт жирных кислот в пластиды

Уровни неполярных липидов в вегетативных частях растения могут быть дополнительно повышены путем снижения активности полипептидов ТГД в частях растения, например, с помощью мутации эндогенного гена, кодирующего полипептид ТГД, или введения экзогенного гена, кодирующего сайленсинговую молекулу РНК, которая снижает экспрессию эндогенного гена ТГД. В настоящем документе ʺтригалактозилдиацилглицерид полипептидʺ (ТГД, TGD) представляет собой принимающий участие в переносе липидов хлоропластами в ЭР (Xu с соавт., 2010) и принимающий участие в формировании белкового комплекса, осуществляющего функцию пермеазы для липидов. Четыре таких полипептида известны, как формирующие или связанные с ТГД пермеазой, а именно TGD-1 (номер доступа At1g19800 и гомологи в других видах), TGD-2 (номер доступа At2g20320 и гомологи в других видах), TGD-3 (номер доступа NM-105215 и гомологи в других видах) и TGD-4 (At3g06960 и гомологи в других видах) (US 20120237949). Считается, что полипептиды TGD-1, -2 и -3 являются компонентами переносчика АТФ-связывающей кассеты (АСК), связанного с внутренней мембраной конверта хлоропласта. Полипептиды TGD-2 и TGD-4 связываются с фосфатидиновой кислотой, тогда как полипептид TGD-3 действует, как АТФаза в строме хлоропласта. В настоящем документе ʺэндогенный ген ТГДʺ представляет собой ген, кодирующий полипептид ТГД в растении. Мутации в гене TGD-1 A. thaliana вызывали аккумуляцию триацилглицеридов, олигогалактолипидов и фосфатидиновой кислоты (ФК) (Xu с соавт., 2005). Мутации в генах ТГД или генах SDP1, или, в действительности, в любом целевом гене в растении, могут быть введены в сайт-специфической форме с помощью искусственной цинк-пальцевой нуклеазы (ЦПН), эффектора TAL (ПАТЭН) или технологии ККППРП (с применением нуклеазы Cas9 типа), как известно из уровня техники. Предпочтительными экзогенными генами, кодирующими сайленсинговые РНК, являются кодирующие молекулу двухцепочечной РНК, такой как шпилечная РНК или искусственный прекурсор микроРНК.

Ферменты, модифицирующие жирные кислоты

В настоящем документе термин «FAD2» обозначает связанную с мембраной дельта-12 десатуразу жирной кислоты, которая образует кратные связи в олеиновой кислоте (C18:1^Δ9)с образованием линолевой кислоты (C18:2^Δ9,12).

В настоящем документе термин «эпоксигеназа» или «эпоксигеназа жирной кислоты» обозначает фермент, который вводит эпоксидную группу в жирную кислоту, с получением в результате эпоксижирной кислоты. В предпочтительном варианте реализации эпоксигруппа вводится при 12-м атоме углерода на цепи жирной кислоты, если эпоксигеназа представляет собой Δ12-эпоксигеназу, особенно цепи жирной кислоты C16 или C18. Эпоксигеназа может быть Δ9-эпоксигеназой, Δ15-эпоксигеназой или оказывать свое действие при другом положении в цепи ацила, как известно из уровня техники. Эпоксигеназа может принадлежать к классу P450. Предпочтительные эпоксигеназы принадлежат к классу монооксигеназ, как описано в WO98/46762. Многочисленные эпоксигеназы или предполагаемые эпоксигеназы клонированы и известны в данной области. Другие примеры эпоксигеназ включают белки, содержащие последовательность аминокислоты, представленную в SEQ ID NO: 21 WO 2009/129582, полипептиды, кодируемые генами Crepis paleastina (CAA76156, Lee с соавт., 1998), Stokesia laevis (AAR23815) (монооксигеназный тип), Euphorbia lagascae (AAL62063) (тип P450), CYP2J2 человека (эпоксигеназа арахидоновой кислоты, U37143); CYPIA1 человека (эпоксигеназа арахидоновой кислоты, K03191), а также их варианты и/или мутанты.

В настоящем документе термин «гидроксилаза» или «гидроксилаза жирной кислоты» обозначает фермент, который вводит гидроксильную группу в жирную кислоту, с образованием гидроксилированной жирной кислоты. В предпочтительном варианте реализации гидроксильная группа вводится при 2-м, 12-м и/или 17-м атоме углерода на цепи жирной кислоты C18. Предпочтительно, гидроксильная группа вводится при 12 ^-м атоме углерода, если гидроксилаза представляет собой Δ12-гидроксилазу. В другом предпочтительном варианте реализации гидроксильная группа вводится при 15-м атоме углерода на цепи жирной кислоты C16. Дополнительно, гидроксилазы могут обладать активностью фермента, такого как десатураза жирной кислоты. Примеры генов, кодирующих Δ12-гидроксилазы включают полученные из Ricinus communis (AAC9010, van de Loo 1995); Physaria lindheimeri, (ABQ01458, Dauk с соавт., 2007); Lesquerella fendleri, (AAC32755, Broun с соавт., 1998); Daucus carota, (AAK30206); гидроксилазы жирных кислот, которые гидроксилируют конец жирных кислот, например: A, thaliana CYP86A1 (P48422, ω-гидроксилаза жирной кислоты); Vicia sativa CYP94A1 (P98188, ω-гидроксилаза жирной кислоты); CYP2E1 мыши (X62595, ω-1 гидроксилаза лауриновой кислоты); CYP4A1 крысы (M57718, ω-гидроксилаза жирной кислоты), а также их варианты и/или мутанты.

В настоящем документе термин «конъюгаза» или «конъюгаза жирной кислоты» обозначает фермент, способный к образованию конъюгационной связи в ацильной цепи жирной кислоты. Примеры конъюгаз включают конъюгазы, кодируемые генами Calendula officinalis (AF343064, Qiu с соавт., 2001); Vernicia fordii (AAN87574, Dyer с соавт., 2002); Punica granatum (AY178446, Iwabuchi с соавт., 2003) и Trichosanthes kirilowii (AY178444, Iwabuchi с соавт., 2003); а также их варианты и/или мутанты.

В настоящем документе термин «ацетиленаза» или «ацетиленаза жирной кислоты» обозначает фермент, который вводит тройную связь в жирную кислоту, что приводит в результате к образованию ацетиленсодержащей жирной кислоты. В предпочтительном варианте реализации тройная связь вводится при 2-м, 6-м, 12-м и/или 17-м атоме углерода на цепи жирной кислоты C18. Примеры ацетиленаз включают полученные из Helianthus annuus (AA038032, ABC59684), а также их варианты и/или мутанты.

Примеры таких модифицирующих жирные кислоты генов включают белки в соответствии со следующими номерами доступа, которые сгруппированы по предполагаемой функции, и гомологи из других видов: Δ12-ацетиленазы ABC00769, CAA76158, AAO38036, AAO38032; Δ12 конъюгазы AAG42259, AAG42260, AAN87574; Δ12-десатуразы P46313, ABS18716, AAS57577, AAL61825, AAF04093, AAF04094; Δ12 эпоксигеназы XP_001840127, CAA76156, AAR23815; Δ12-гидроксилазы ACF37070, AAC32755, ABQ01458, AAC49010; и ферменты Δ12 P450, например, AF406732.

Супрессоры сайленсинга

В варианте реализации изобретения рекомбинантная/трансгенная клетка по изобретению может содержать супрессор сайленсинга.

В настоящем документе ʺсупрессор сайленсингаʺ повышает экспрессию трансгена в клетке по изобретению. Например, присутствие супрессора сайленсинга приводит к более высоким уровням полипептида(ов), продуцируемого экзогенным(и) полинуклеотидом(ами) в клетке по изобретению, по сравнению с соответствующей клеткой, не содержащей супрессора сайленсинга. В варианте реализации изобретения супрессор сайленсинга предпочтительно связывается с молекулой дцРНК, размер которой составляет 21 пару оснований, относительно молекулы дцРНК другой длины. Это является признаком по меньшей мере супрессора сайленсинга типа p19, а именно p19 и его функциональных ортологов. В другом варианте реализации изобретения супрессор сайленсинга предпочтительно связывается с двухцепочечной молекулой РНК с нависающими 5' концами, по сравнению с соответствующей двухцепочечной молекулой РНК с тупыми концами. Это признак супрессора сайленсинга типа V2, а именно V2 и его функциональных ортологов. В варианте реализации изобретения молекула дцРНК или ее процессированный РНК продукт содержит по меньшей мере 19 нуклеотидов подряд, длина которого предпочтительно составляет 19-24 нуклеотида, с 19-24 парами оснований подряд в случае двухцепочечной молекулы шпилечной РНК или процессированного РНК продукта, более предпочтительно, состоит из 20, 21, 22, 23 или 24 нуклеотидов и предпочтительно содержит метилированный нуклеотид, по меньшей мере на 95% идентичный последовательности, комплементарной участку РНК-мишени, причем, участок РНК-мишени находится i) в пределах 5' нетранслируемого участка РНК-мишени, ii) в пределах 5' половины РНК-мишени, iii) в пределах кодирующей белок открытой рамки считывания РНК-мишени, iv) в пределах 3' половины РНК-мишени или v) в пределах 3' нетранслируемого участка РНК-мишени.

Дальнейшие подробности относительно супрессоров сайленсинга хорошо известны из уровня техники и описаны в WO 2013/096992 и WO 2013/096993.

Полинуклеотиды

Термины «полинуклеотид», и «нуклеиновая кислота» используются равнозначно. Они обозначают полимерную форму нуклеотидов любой длины, дезоксирибонуклеотидов или рибонуклеотидов или их аналогов. Полинуклеотид по изобретению может быть геномного, кДНК, полусинтетического или синтетического происхождения, одноцепочечным или двухцепочечным, и вследствие его происхождения или манипуляций с ним: (1) не связан с полноразмерным или частью полинуклеотида, с которым он связан в природе, (2) связан с другим полинуклеотидом, чем тот, с которым он связан в природе, или (3) не встречается в природе. Ниже приведены неограничивающие примеры полинуклеотидов: кодирующие или не кодирующие участки гена или фрагмента гена, экзоны, интроны, информационная РНК (иРНК), транспортная РНК (тРНК), рибосомальная РНК (рРНК), рибозимы, кДНК, рекомбинантные полинуклеотиды, плазмиды, векторы, выделенная ДНК с любой последовательностью, выделенная РНК с любой последовательностью, химерная ДНК с любой последовательностью, зонды нуклеиновой кислоты и праймеры. Для применения in vitro полинуклеотид может включать нуклеотиды, модифицированные, например, посредством конъюгации с меткой.

В настоящем документе «выделенный полинуклеотид» обозначает полинуклеотид, который отделен от полинуклеотидных последовательностей, с которыми он связан или соединен в природном состоянии, или от неприродного полинуклеотида.

В настоящем документе термин «ген» понимается в самом широком контексте и включает дезоксирибонуклеотидные последовательности, содержащие транскрибированный участок и, при условии трансляции, участок кодирования белка структурного гена и, в том числе, последовательности, смежные с кодирующим участком, на 5' и 3' концах, на расстоянии по меньшей мере около 2 тысяч пар оснований на любом конце, которые принимают участие в экспрессии гена. В этом отношении, ген содержит контрольные сигналы, например, промоторы, энхансеры, сигналы терминации и/или полиаденилирования, которые в природе связаны с указанным геном, или гетерологичные контрольные сигналы, и в этом случае ген обозначается, как «химерный ген». Последовательности, которые размещены в направлении 5' по отношению к кодирующему белок участку, и которые присутствуют в иРНК, обозначаются как 5' нетранслируемые последовательности. Последовательности, которые размещены в направлении 3' или по ходу транскрипции относительно кодирующего белок участка, и которые присутствуют в иРНК, обозначаются, как 3' нетранслируемые последовательности. Термин «ген» включает кДНК и геномные формы гена. Геномная форма или клон гена содержит кодирующий участок, который может перемежаться не кодирующими последовательностями под названием «интроны», «вставочные последовательности» или «встроенные последовательности». Интроны представляют собой сегменты гена, которые транскрибированы в ядерную РНК (яРНК). Интроны могут содержать регуляторные элементы, например, энхансеры. Интроны удаляются, или «происходит укорачивание» ядерной или первичной копии; таким образом, интроны отсутствуют в копии иРНК. Ген, содержащий по меньшей мере один интрон, может подвергаться вариабельному сплайсингу с образованием альтернативных иРНК из одного транскрибированного гена и, таким образом, полипептидных вариантов. В природном или химерном гене интроны могут отсутствовать. Функции иРНК в ходе трансляции состоят в определении последовательности или порядка аминокислот в возникающем полипептиде. Термин «ген» включает синтетическую или слитую молекулу, кодирующую полноразмерные белки по изобретению или их части, как раскрыто в настоящем документе, и нуклеотидную последовательность, комплементарную к любому из упомянутого выше.

В настоящем документе «химерная ДНК» обозначает любую молекулу ДНК, которая не найдена в природе; также обозначается в настоящем документе как «конструкция ДНК» или «генетическая конструкция». Обычно, химерная ДНК содержит регуляторную и транскрибированную или кодирующую белок последовательности, которые не найдены вместе в природе. Соответственно, химерная ДНК может содержать регуляторные последовательности и кодирующие последовательности, которые происходят из различных источников или регуляторных последовательностей, и кодирующие последовательности, происходящие из того же источника, но организованные до некоторой степени отличным образом, чем найденные в природе. Открытая рамка считывания может быть или может не быть связанной с ее природными регуляторными элементами, расположенными против хода транскрипции и по ходу транскрипции. Открытая рамка считывания может быть инкорпорирована, например, в геном растения, в неприродном расположении или в репликоне или векторе, где она не найдена в природе, например, бактериальной плазмиде или вирусном векторе. Термин «химерная ДНК» не ограничивается молекулами ДНК, которые являются реплицируемыми в организме-хозяине, но включает ДНК, способную к лигированию в репликон, например, специфическими адаптерными последовательностями.

«Трансген» представляет собой ген, который введен в геном процедурой трансформации. Термин включает ген в клетке-потомке, растении, семени, организме, не относящемся к человеческому роду, или его части, который был введен в геном их родительской клетки. Такие клетки-потомки, и т. п. могут представлять по меньшей мере 3^-еили 4^-епоколение потомков относительно родительской клетки, которая была первоначально трансформирована, или родительского трансгенного растения (которое в настоящем документе обозначается как растение T0). Потомок может быть получен путем полового воспроизводства или вегетативно, например, из клубней картофеля или отводков сахарного тростника. Термин «генетически модифицированный», «генетическая модификация» и их вариации представляют более широкий термин, который включает введение гена в клетку посредством трансформации или трансдукции, видоизменение гена в клетке и генную модификацию или модуляцию регулирования гена в клетке или потомке любой модифицированной клетки, как изложено выше.

«Геномный участок» в настоящем документе обозначает положение в пределах генома, в котором трансген или группа трансгенов (также обозначается в настоящем документе как кластер) вставлены в клетку или ее предка. Такие участки содержат только нуклеотидны, введенные в результате вмешательства человека, например, способами, раскрытыми в настоящем документе.

«Рекомбинантный полинуклеотид» по изобретению обозначает молекулу нуклеиновой кислоты, которая сконструирована или модифицирована способами искусственной рекомбинации. Рекомбинантный полинуклеотид может присутствовать в клетке в измененном количестве или экспрессироваться с измененной скоростью (например, в случае иРНК), по сравнению с его природным состоянием. В одном варианте реализации полинуклеотид введен в клетку, которая от природы не содержит полинуклеотида. Обычно экзогенная ДНК используется в качестве шаблона для транскрипции иРНК, которая в дальнейшем транслируется в непрерывную последовательность остатков аминокислоты, кодируя полипептид по изобретению в пределах трансформированной клетки. В другом варианте реализации полинуклеотид является для клетки эндогенным, и его экспрессия модифицирована рекомбинантными средствами, например, экзогенная контрольная последовательность введена в направлении относительного целевого эндогенного гена, чтобы предоставить возможность трансформированной клетке экспрессировать полипептид, кодируемый геном, или делеция введена в целевой ген методами ZFN, ПАТЭН или ККППРП.

Рекомбинантный полинуклеотид по изобретению содержит полинуклеотиды, которые не были отделены от других компонентов клеточной или неклеточной системы экспрессии, в которой он присутствует, и полинуклеотиды, образованные в указанных клеточных или неклеточных системах, которые впоследствии очищают по меньшей мере от некоторых других компонентов. Полинуклеотид может быть беспрерывным участком нуклеотидов или может содержать два или более смежных участков нуклеотидов из различных источников (природных и/или синтетических), соединенных таким образом, чтобы сформировать единый полинуклеотид. Обычно, такие химерные полинуклеотиды содержат по меньшей мере открытую рамку считывания, кодирующую полипептид по изобретению, функционально связанную с промотором, пригодным для управления транскрипцией открытой рамки считывания в целевой клетке.

С учетом определенных полинуклеотидов, необходимо понимать, что % идентичности, превышающий приведенные выше, будет охватывать предпочтительные варианты реализации изобретения. Таким образом, если это уместно, в свете минимальных значений % идентичности, предпочтительно, полинуклеотид содержит последовательность полинуклеотида, которая по меньшей мере на 60%, более предпочтительно по меньшей мере на 65%, более предпочтительно по меньшей мере на 70%, более предпочтительно по меньшей мере на 75%, более предпочтительно по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, более предпочтительно по меньшей мере на 91%, более предпочтительно по меньшей мере на 92%, более предпочтительно по меньшей мере на 93%, более предпочтительно по меньшей мере на 94%, более предпочтительно по меньшей мере на 95%, более предпочтительно по меньшей мере на 96%, более предпочтительно по меньшей мере на 97%, более предпочтительно по меньшей мере на 98%, более предпочтительно по меньшей мере на 99%, более предпочтительно по меньшей мере на 99,1%, более предпочтительно по меньшей мере на 99,2%, более предпочтительно по меньшей мере на 99,3%, более предпочтительно по меньшей мере на 99,4%, более предпочтительно по меньшей мере на 99,5%, более предпочтительно по меньшей мере на 99,6%, более предпочтительно по меньшей мере на 99,7%, более предпочтительно по меньшей мере на 99,8%, и даже более предпочтительно по меньшей мере на 99,9% идентична представленной в соответствующей SEQ ID NO.

Полинуклеотид по настоящему изобретению или пригодный для применения в соответствии с настоящим изобретением может селективно гибридизоваться, в строгих условиях, с полинуклеотидом, определенным в настоящем документе. В настоящем документе строгие условия представляют собой: (1) применение в ходе гибридизации денатурирующего агента, такого как формамид, например, 50%, об/об формамида, содержащего 0,1%, масс/об телячьего сывороточного альбумина, 0,1% Фиколла, 0,1% поливинилпирролидона, 50 мМ натрий фосфатного буфера, pH 6,5, содержащего 750 мМ NaCl, 75 мМ натрия цитрата, при 42°C; или (2) применение 50%, формамида, 5 x натрия хлорида+натрия цитрата (0,75 M NaCl, 0,075 M натрия цитрата), 50 мМ натрия фосфата (pH 6,8), 0,1% натрия пирофосфата, 5 x раствор Денхардта, обработанная ультразвуком ДНК спермы лосося (50 г/мл), 0,1% натрия лаурилсульфата и 10% декстрана сульфата при 42°C в 0,2 x натрия хлорида+натрия цитрата и 0,1% натрия лаурилсульфата, и/или (3) применение низкой ионной силы и высокой температуры для промывания, например, 0,015 M NaCl/0,0015 M натрия цитрата/0,1% натрия лаурилсульфата при 50°C.

Полинуклеотиды по изобретению могут содержать, по сравнению с природными молекулами, одну или более мутаций, которые представляют собой делеции, вставки или замены нуклеотидных остатков. Полинуклеотиды, которые содержат мутации относительно референтной последовательности, могут быть природными (т. е., выделенными из природного источника) или синтетическими (например, полученными путем сайт-направленного мутагенеза или тасования ДНК в нуклеиновой кислоте, как изложено выше).

Полинуклеотиды для снижения уровней экспрессии генов

РНК-интерференция

РНК-интерференция (РНКи) особенно пригодна для специфичного снижения экспрессии гена, что ведет к уменьшению выработки конкретного белка, если ген кодирует белок. Не желая ограничиваться теорией, Waterhouse с соавт. (1998) предложили модель механизма, по которому двухцепочечная РНК (дцРНК) может использоваться для снижения выработки белка. Данная технология зависит от присутствия молекул дцРНК, которые содержат последовательность, по существу идентичную иРНК целевого гена или его части. Пригодным образом, дцРНК может быть получена с помощью единственного промотора в рекомбинантном векторе или клетке-хозяине, в которых смысловые и антисмысловые последовательности фланкированы посторонней последовательностью, которая позволяет смысловой и антисмысловой последовательностям гибридизоваться с образованием молекулы дцРНК с посторонней последовательностью, образующей структуру петли. Конструирование и получение подходящих молекул дцРНК находится в пределах компетенции специалиста в данной области, особенно с учетом Waterhouse с соавт. (1998), Smith с соавт. (2000), WO 99/32619, WO 99/53050, WO 99/49029 и WO 01/34815.

В одном из примеров вводят ДНК, которая направляет синтез по меньшей мере частично двухцепочечного продукта(-ов) РНК, гомологичного гену мишени, который подлежит инактивации, например, такого как SDP1, TGD, пластидная GPAT, пластидная LPAAT, пластидная PAP, ген АДФ-глюкозопирофосфорилазы (АГФазы). Таким образом, ДНК содержит смысловые и антисмысловые последовательности, которые при транскрибировании в РНК могут гибридизоваться с образованием двухцепочечного участка РНК. В одном варианте реализации, смысловая и антисмысловая последовательности отделены спейсерным участком, который содержит интрон, отщепляющийся при транскрибировании в РНК. Показано, что такое размещение приводит к более высокой эффективности сайленсинга гена (Smith с соавт., 2000). Двухцепочечный участок может содержать одну или две молекулы РНК, транскрибированные с одного или двух участков ДНК. Считается, что присутствие двухцепочечной молекулы запускает реакцию эндогенной системы, которая разрушает двухцепочечную РНК, а также гомологичную копию РНК, образованную геном-мишенью, эффективно снижая или устраняя активность гена-мишени.

Длина смысловой и антисмысловой последовательностей, которые гибридизуются, должна составлять для каждой по меньшей мере 19 нуклеотидов подряд, предпочтительно по меньшей мере 50 нуклеотидов подряд, более предпочтительно, по меньшей мере 100 или по меньшей мере 200 нуклеотидов подряд. В общем, применяется последовательность размером 100-1000 нуклеотидов, соответствующая участку иРНК гена-мишени. Может использоваться полноразмерная последовательность, соответствующая полному транскрипту гена. Степень идентичности смысловой последовательности целевому транскрипту (и, таким образом, также идентичности антисмысловой последовательности и последовательности, комплементарной транскрипту-мишени) должна составлять по меньшей мере 85%, по меньшей мере 90% или 95-100%. Молекула РНК может, конечно, содержать посторонние последовательности, функция которых может состоять в стабилизации молекулы. Молекула РНК может экспрессироваться под контролем промотора РНК полимеразы II или РНК полимеразы III. Примеры последнего включают промоторы тРНК или мяРНК.

Предпочтительные молекулы малой интерферирующей РНК («миРНК») содержат нуклеотидную последовательность, которая идентична приблизительно 19-25 смежным нуклеотидам иРНК-мишени. Предпочтительно, последовательность миРНК начинается с динуклеотида AA, содержит GC в количестве приблизительно 30-70% (предпочтительно, 30-60%, более предпочтительно 40-60% и более предпочтительно приблизительно 45-55%), и не обладает высокой степенью идентичности ни к одной нуклеотидной последовательности в геноме организма, кроме мишени, в которую она должна быть введена, например, как определяется стандартным поиском BLAST.

МикроРНК

МикроРНК (сокращенно миРНК) в общем представляют собой некодирующие молекулы РНК длиной 19-25 нуклеотидов (в растениях обычно приблизительно 20-24 нуклеотида), происходящие от крупных прекурсоров, которые образуют несовершенные структуры «петля-на-стебле».

миРНК связывают с дополнительными последовательностями на целевых транскриптах информационной РНК (иРНК), что обычно приводит к угнетению трансляции или разложению мишени и сайленсингу гена. Как хорошо известно из уровня техники, на основе природных миРНК могут быть сконструированы искусственные миРНК (имиРНК) для целей уменьшения экспрессии любого целевого гена.

Считается, что в клетках растений процессинг молекул-прекурсоров миРНК в значительной степени происходит в ядре. Процессинг пре-миРНК (содержащих один или более локальных двухцепочечных или «шпилечных» участков, а также обыкновенный 5' «кэп» и полиаденилированный хвост иРНК) происходит до более короткой молекулы-прекурсора миРНК, которая также содержит структуру «петля-на-стебле» или конъюгацию плеч хромосомы и называется «пре-миРНК». В растениях, пре-миРНК расщепляются различными ДАЙСЕР-подобными ферментами (ДСП), образуя дуплексы миРНК:миРНК*. Перед транспортом за пределы ядра, такие дуплексы метилируются.

В цитоплазме, цепь миРНК от спаренной миРНК:миРНК селективно инкорпорируется в активный РНК-индуцированный комплекс сайленсинга (РИКС) для распознавания мишени. Комплексы РИКС содержат конкретное подмножество белков Argonaute, которые осуществляют специфичное в отношении последовательности подавление гена (см., например, Millar и Waterhouse, 2005; Pasquinelli с соавт., 2005; Almeida и Allshire, 2005).

Косупрессия

Гены могут подавлять экспрессию родственных эндогенных генов и/или трансгенов, уже присутствующих в геноме, причем данный признак, назван зависимым от гомологии сайленсингом гена. В большинстве случаев зависимый от гомологии сайленсинг гена относится к одному из двух классов - функционирующий на уровне транскрипции трансгена или действующий посттранскрипционально.

Посттранскрипциональный зависимый от гомологии сайленсинг (т. е., косупрессия) гена описывает прекращение экспрессии трансгена и родственных эндогенных или вирусных генов в трансгенных растениях. Косупрессия часто, но не всегда, возникает, если копий трансгена много, и, в общем, считается запускаемой на уровне процессинга, локализации и/или разложения иРНК. Существуют различные модели для объяснения того, как осуществляется косупрессия (см. Taylor, 1997).

Косупрессия включает введение добавочной копии гена или его фрагмента в растение, в смысловой ориентации относительно промотора, для его экспрессии. Размер смыслового фрагмента, его соответствие участкам гена-мишени, и степень идентичности его последовательности гену-мишени могут быть определены специалистами в данной области. В некоторых случаях дополнительная копия последовательности гена препятствует экспрессии растительного гена-мишени. В WO 97/20936 и EP 0465572 раскрыты способы осуществления подходов косупрессии.

Антисмысловые полинуклеотиды

Термин «антисмысловой полинуклеотид» следует интерпретировать как обозначающий молекулу ДНК или РНК, которая комплементарна по меньшей мере части конкретной молекулы иРНК, кодирующей эндогенный полипептид, и способна препятствовать посттранскрипциональному событию, например, трансляции иРНК. Применение антисмысловых методов хорошо известно из уровня техники (см., например, G. Hartmann and S. Endres, Manual of Antisense Methodology, Kluwer (1999)). Применение антисмысловых методов в растениях рассмотрено Bourque (1995) и Senior (1998). Bourque (1995) перечисляет большое количество примеров того, как антисмысловые последовательности применяются в растительных системах в качестве способа инактивации гена. Bourque также заявляет, что достижение 100% ингибирования любой ферментной активности может не быть необходимым, поскольку частичное ингибирование будет более чем вероятно приводить к измеримому изменению в системе. Senior (1998) указывает, что антисмысловые методы в настоящее время представляют собой хорошо изученную технику для манипуляции экспрессией гена.

В одном варианте реализации антисмысловой полинуклеотид гибридизуется в физиологических условиях, т. е., антисмысловой полинуклеотид (который полностью или частично является одноцепочечным) по меньшей мере способен к образованию двухцепочечного полинуклеотида с иРНК, кодирующей в клетке эндогенный полипептид, например, иРНК SDP1, TGD, пластидной GPAT, пластидной LPAAT, пластидной PAP или АГФазы, в нормальных условиях.

Антисмысловые молекулы могут включать последовательности, которые соответствуют структурным генам или для последовательностей, которые осуществляют контроль над экспрессией гена или событием укорачивания. Например, антисмысловая последовательность может соответствовать целевому кодирующему участку эндогенного гена или 5'-нетранслируемому участку (НТУ) или 3'-НТУ или их комбинации. Она может быть частично комплементарной интронным последовательностям, которые могут быть укорочены в ходе или после транскрипции, предпочтительно только до экзонных последовательностей гена-мишени. Принимая во внимание существенную в общем дивергенцию НТУ, нацеливание данных участков обеспечивает высокую степень специфичности ингибирования гена.

Длина антисмысловой последовательности должна составить по меньшей мере 19 нуклеотидов подряд, предпочтительно по меньшей мере 50 нуклеотидов и более предпочтительно по меньшей мере 100, 200, 500 или 1000 нуклеотидов. Может использоваться полноразмерная последовательность, комплементарная к полноразмерному транскрипту гена. Наиболее предпочтительно, длина составляет 100-2000 нуклеотидов. Степень идентичности антисмысловой последовательности целевому транскрипту должна составлять по меньшей мере 90% и более предпочтительно 95-100%. Антисмысловая молекула РНК, конечно, может содержать посторонние последовательности, функция которых может состоять в стабилизации молекулы.

Рекомбинантные векторы

Один вариант реализации настоящего изобретения включает рекомбинантный вектор, который содержит по меньшей мере один полинуклеотид, раскрытый в настоящем документе, и способен доставлять полинуклеотид в клетку-хозяина. Рекомбинантные векторы включают векторы экспрессии. Рекомбинантные векторы содержат гетерологичные полинуклеотидные последовательности, т. е., полинуклеотидные последовательности, которые в природе не найдены смежно с полинуклеотидом, раскрытым в настоящем документе, и, предпочтительно, получены от другого вида. Вектор может представлять собой РНК или ДНК, и обычно представляет собой вирусный вектор, полученный из вируса, или плазмиду. Плазмидные векторы обычно содержат дополнительные последовательности нуклеиновой кислоты, которые включены для простоты селекции, амплификации и трансформации кассеты экспрессии в прокариотных клетках, например, pUC-полученных векторах, pGEM-полученных векторах или бинарных векторах, содержащих один или более участков T-ДНК. Дополнительные последовательности нуклеиновой кислоты включают источники репликации для автономной репликации вектора, гены селекционного маркера, предпочтительно кодирующие резистентность к антибиотику или гербициду, уникальные множественные сайты клонирования, предусматривающие множественные сайты для вставки последовательностей нуклеиновой кислоты или кодируемых генов в конструкцию нуклеиновой кислоты, и последовательностей, которые увеличивают степень трансформации прокариотных и эукариотных (особенно растительных) клеток.

«Функционально связанный» в настоящем документе обозначает функциональное взаимоотношение двух или более сегментов нуклеиновой кислоты (например, ДНК). Обычно, это выражение обозначает функциональное взаимоотношение элемента регуляции транскрипции (промотор) с транскрибированной последовательностью. Например, промотор функционально связан с кодирующей последовательностью полинуклеотида, раскрытого в настоящем документе, если он стимулирует или модулирует транскрипцию кодирующей последовательности в пригодной клетке. В общем, промоторные элементы регуляции транскрипции, которые функционально связаны с транскрибированной последовательностью, являются физически смежными с транскрибированной последовательностью, т. е., они цис-действующие. Однако, некоторые элементы регуляции транскрипции, например, энхансеры, не должны быть физически смежными или расположенными поблизости кодирующих последовательностей, транскрипцию которых они усиливают.

Если присутствует несколько промоторов, каждый промотор независимо может быть таким же или другим.

Кроме того, рекомбинантные векторы могут содержать одну или более последовательностей сигнального пептида, чтобы позволить удержание экспрессированного полипептида, раскрытого в настоящем документе, в эндоплазматическом ретикулуме (ЭР) клетки или перенос в пластиду, и/или химерные последовательности, которые приводят к экспрессии молекул нуклеиновой кислоты в виде слитых белков. Примеры пригодных сигнальных сегментов включают любой сигнальный сегмент, способный направлять секрецию или локализацию полипептида, раскрытого в настоящем документе.

Чтобы упростить идентификацию трансформантов, рекомбинантный вектор желательно должен включать ген селекционного или пригодного для скрининга маркера. «Ген маркера» обозначает ген, который передает отличный фенотип клеткам, экспрессирующим ген маркера, и, таким образом, позволяет отличать такие трансформированные клетки от клеток, которые не содержат маркера. Ген селекционного маркера обеспечивает признак, по которому может быть осуществлена «селекция» на основе резистентности к агенту селекции (например, гербициду, антибиотику). Ген пригодного для скрининга маркера (или репортерный ген) обеспечивает признак, который можно идентифицировать посредством наблюдения или тестирования, т. е., «скрининга» (например., β-глюкуронидаза, люцифераза, ЗФБ или другая ферментная активность, отсутствующая в нетрансформированных клетках). Примеры селекционных маркеров для селекции трансформантов растения включают, без ограничений, ген hyg, который кодирует резистентность к гигромицину B; ген неомицинфосфотрансферазы (nptII), обеспечивающий резистентность к канамицину, паромомицину; ген глутатион-S-трансферазы из печени крыс, обеспечивающий резистентность к полученным из глутатиона гербицидам, например, описанный в EP 256223; гена глутаминсинтетазы, при повышенной экспрессии обеспечивающий резистентность к ингибиторам глутаминсинтетазы, таким как фосфинотрицин, например, как раскрыто в WO 87/05327; ген ацетилтрансферазы Streptomyces viridochromogenes, обеспечивающий резистентность к агенту селекции фосфинотрицину, например, как раскрыто в EP 275957; ген, кодирующий 5-енолшикимат-3-фосфат синтетазу (ЕШФС), обеспечивающую переносимость N-фосфонометилглицина, например, как раскрыто Hinchee с соавт. (1988); ген bar, обеспечивающий резистентность к биалафосу, например, раскрытый в WO 91/02071; ген нитрилазы, например, bxn Klebsiella ozaenae, который обеспечивает резистентность к бромоксинилу (Stalker с соавт., 1 988); ген дигидрофолатредуктазы (ДГФР), обеспечивающий резистентность к метотрексату (Thillet с соавт., 1988); мутантный ген ацетолактсинтетазы (АЛС), который обеспечивает резистентность к имидазолинону, сульфонилмочевине или другим ингибирующим АЛС химическим веществам (EP 154204); модифицированный ген антранилатсинтетазы, который обеспечивает резистентность к 5-метилтриптофану; или ген далапон дегалогеназы, который обеспечивает резистентность к гербициду.

Предпочтительно, рекомбинантный вектор стабильно инкорпорирован в геном клетки, например, растительные клетки. Соответственно, рекомбинантный вектор может содержать пригодные элементы, которые позволяют вектору инкорпорироваться в геном или хромосому клетки.

Вектор экспрессии

В настоящем документе «вектор экспрессии» представляет собой ДНК вектор, который способен к трансформации клетки-хозяина и эффективной экспрессии одного или более указанных полинуклеотидов. Векторы экспрессии по настоящему изобретению содержат регуляторные последовательности, например, последовательности контроля транскрипции, последовательности контроля трансляции, источники репликации и другие регуляторные последовательности, которые совместимы с клеткой-хозяином и которые управляют экспрессией полинуклеотидов по настоящему изобретению. В частности, векторы экспрессии по настоящему изобретению содержат последовательности контроля транскрипции. Последовательности контроля транскрипции представляют собой последовательности, которые управляют инициацией транскрипции, удлинением транскрипта и окончанием транскрипции. Особенно значимыми последовательностями контроля транскрипции являются такие, которые управляют инициацией транскрипции, например, промоторные, энхансерные, операторные и репрессорные последовательности. Выбор используемых регуляторных последовательностей зависит от организма-мишени, например, растения, и/или органа-мишени или целевой ткани. Такие регуляторные последовательности могут быть получены от любого эукариотного организма, такого как растения или вирусы растения, или могут быть химически синтезированы. Целый ряд векторов, пригодных для стабильной трансфекции растительных клеток или для получения трансгенных растений, раскрыт, например, в Pouwels с соавт., Cloning Vectors: A Laboratory Manual, 1985, supp. 1987, Weissbach and Weissbach, Methods for Plant Molecular Biology, Academic Press, 1989, и Gelvine с соавт., Plant Molecular Biology Manual, Kluwer Academic Publishers, 1990. Обычно, векторы экспрессии растений содержат, например, один или более клонированных генов растения под транскрипциональным контролем 5' и 3' регуляторных последовательностей и доминирующего селекционного маркера. Кроме того, такие векторы экспрессии растений могут содержать регуляторный участок промотора (например, регуляторный участок, управляющий индуцибельной или конститутивной, регулируемой окружающей средой или стадией развития, клеточно- или тканеспецифичной экспрессией), старт-сайт инициации транскрипции, сайт связывания с рибосомой, сайт терминации транскрипции и/или сигнал полиаденилирования.

Раскрыт целый ряд конститутивных промоторов, которые активны в клетках растений. Пригодные промоторы для конститутивной экспрессии в растениях включают, без ограничений, промотор 35S вируса мозаики цветной капусты (CaMV), 35S вируса мозаики норичника (ВМН), индуцируемый светом промотор маленькой субъединицы (МСЕ) рибулозо-1,5-бисфосфат карбоксилазы, рисовый промотор цитозольной триозофосфат изомеразы, промотор аденин фосфорибозилтрансферазы Arabidopsis, промотор гена рисового актина 1, промоторы маннопин синтетазы и октопин синтетазы, промотор Adh, промотор синтетазы сахарозы, промотор комплекса R гена и промотор гена белка, связывающегося с α/βхлорофиллом. Эти промоторы использовались для создания векторов ДНК, которые экспрессируются в растениях, см., например, WO 84/02913. Все указанные промоторы использовались для создания различных видов экспрессируемых в растениях рекомбинантных ДНК векторов.

С целью экспрессии в исходных тканях растения, таких как лист, семя, корень или стебель, промоторы, используемые в настоящем изобретении, предпочтительно демонстрируют относительно высокую экспрессию в указанных конкретных тканях. Для достижения данной цели можно выбирать из целого ряда промоторов для генов с ткане- или клеточноспецифичной или -усиленной экспрессией. Примеры таких промоторов, о которых сообщалось в литературе, включают, промотор глутаминсинтетазы хлоропластов GS2 гороха, промотор фруктозо-1,6-бифосфатазы хлоропласта пшеницы, промотор ядерного фотосинтетического ST-LS1 картофеля, промотор серин/треонинкиназы и промотор глюкоамилазы (CHS) Arabidopsis thaliana. Также сообщалось, что активным в фотосинтетически активных тканях является промотор рибулозо-1,5-бисфосфат карбоксилазы восточной лиственницы (Larix laricinа), промотор гена Cab сосны, Cab6, промотор гена Cab-1 пшеницы, промотора гена Cab-1 шпината, промотор гена Cab-1R риса, промотор пируват, ортофосфат дикиназы (ПФДК) Zea mays, промотор гена Lhcb1*2 табака, промотор симпортера Suc2 Arabidopsis thaliana сахарозы-H³⁰, и промотор для генов тилакоидного белка мембраны шпината (PsaD, PsaF, PsaE, PC, FNR, AtpC, AtpD, Cab, RbcS). Другие промоторы белков, связывающихся с α/βхлорофиллом также могут использоваться в настоящем изобретении, например, промоторы гена LhcB и гена PsbP белой горчицы (Sinapis albа).

Различные промоторы растительных генов, которые регулируются в ответ на экологические, гормональные, химические и/или связанные с развитием сигналы, также могут использоваться для экспрессии генов РНК-связывающего белка в клетках растения, в том числе, промоторы, регулируемые (1) нагреванием, (2) светом (например, промотор RbcS-3A гороха, промотор RbcS маиса), (3) гормонами, например, абсцизиновая кислота, (4) образованием ран (например, WunI) или (5) химическими веществами, такими как метилжасмонат, салициловая кислота, стероидные гормоны, спирт, сафенеры (WO 97/06269), или дополнительно может быть предпочтительным использование (6) специфичных в отношении органа промоторов.

В настоящем документе термин «промотор, специфичный в отношении запасающего органа растения» обозначает промотор, который предпочтительно, по сравнению с другими тканями растения, направляет транскрипцию гена в запасающем органе растения. С целью экспрессии в акцептирующих тканях растения, например, клубня картофельного растения, плода помидора или семени сои, рапса, хлопка, Zea mays, пшеницы, риса и ячменя, промоторам, используемым в настоящем изобретении, предпочтительно свойственна относительно высокая экспрессия в данных конкретных тканях. Может применяться промотор β-конглицинина или другие специфичные для семени промоторы, например, промоторы напина, зеина, линина и фазеолина. Кроме того, могут применяться специфичные в отношении корней промоторы. Примером такого промотора является промотор гена кислой хитиназы. Дополнительно, экспрессия в корневой ткани могла бы быть достигнута с использованием специфичных в отношении корней субдоменов промотора CaMV 35S, которые идентифицированы.

В особенно предпочтительном варианте реализации промотор направляет экспрессию в тканях и органах, в которых имеет место биосинтез липида. Такие промоторы могут действовать на стадии развития семени, в подходящее время для модификации состава липида в семенах. Предпочтительные промоторы для специфичной экспрессии в семени включают: 1) промоторы генов, кодирующих ферменты, принимающие участие в биосинтезе липида и аккумуляции в семенах, например, десатуразы и элонгазы, 2) промоторы генов, кодирующих запасаемые белки семени, и 3) промоторы генов, кодирующих ферменты, принимающие участие в биосинтезе углеводов и аккумуляции в семенах. Пригодные промоторы, специфичные в отношении семени, представляют собой: промотор гена напина масличного рапса (US 5608152), промотор Фарм. USP Vicia faba (Baumlein с соавт., 1991), промотор олеозина Arabidopsis (WO 98/45461), промотор фазеолина Phaseolus vulgaris (US 5504200), промотор Bce4 Brassica (WO 91/13980) или промотор легумина B4 (Baumlein с соавт., 1992), а также промоторы, которые приводят к специфичной экспрессии в семени однодольных, таких как маис, ячмень, пшеница, рожь, рис и т. п. Следует отметить пригодные промоторы гена lpt2 или lpt1 ячменя (WO 95/15389 и WO 95/23230) или промоторы, описанные в WO 99/16890 (промоторы гена гордеина ячменя, гена глютелина риса, гена оризина риса, гена проламина риса, гена глиадина пшеницы, гена глютелина пшеницы, гена зеина маиса, гена глютелина овса, гена казирина сорго, гена секалина ржи). Другие промоторы включают раскрытые Broun с соавт. (1998), Potenza с соавт. (2004), US 20070192902 и US 20030159173. В варианте реализации специфичный для семени промотор предпочтительно экспрессируется в определенных частях семени, например, семядоле(-ях) или эндосперме. Примеры специфичных для семядоли промоторов включают, без ограничений, промотор FP1 (Ellerstrometal.,1996), промотор легумина гороха (Perrin с соавт., 2000) и промотор фитогемагглютинина боба (Perrin с соавт., 2000). Примеры специфичных для эндоспермы промоторов включают, без ограничений, промотор зеина-1 маиса (Chikwamba с соавт., 2003), промотор глютелина-1 риса (Yang с соавт., 2003), промотор D-гордеина ячменя (Horvath с соавт., 2000) и промоторы высокомолекулярного глютенина пшеницы (Alvarez с соавт., 2000). В дальнейшем варианте реализации специфичный для семени промотор не экспрессируется или экспрессируется только на низком уровне в зародыше и/или после того, как семя прорастает.

В другом варианте реализации промотор, специфичный для запасного органа растения, представляет собой специфичный для фрукта промотор. Примеры включают, без ограничений, промотор полигалактуроназы помидора, E8 и Pds, а также промотор аминоциклопропанкарбоксилат оксидазы (АЦК) яблока (обзор см. в Potenza с соавт., 2004). В предпочтительном варианте реализации промотор предпочтительно направляет экспрессию в съедобных частях плода, например, сердцевине плода, относительно кожуры плода или семян в пределах плода.

В варианте реализации индуцибельный промотор представляет собой систему alc Aspergillus nidulans. Примеры индуцибельных систем экспрессии, которые могут использоваться вместо системы Aspergillus nidulans alc, описаны в обзоре Padidam (2003) и Corrado и Karali (2009). В другом варианте реализации индуцибельный промотор представляет собой индуцируемый сафенером промотор, например, такой как промотор ln2-1 или ln2-2 маиса (Hershey и Stoner, 1991), индуцибельный промотор сафенера представляет собой промотор GST-27 маиса (Jepson с соавт., 1994) или соевый промотор GH2/4 (Ulmasov с соавт., 1995).

В другом варианте реализации индуцибельный промотор представляет собой промотор, индуцируемый старением, например, такой как индуцируемый старением промотор SAG (связанный со старением ген) 12 и SAG 13 Arabidopsis (Gan, 1995; Gan и Amasino, 1995) и LSC54 Brassica napus (Buchanan-Wollaston, 1994). Такие промоторы демонстрируют повышенную экспрессию в период около начала старения растительных тканей, особенно листьев.

Для экспрессии в вегетативных тканях могут использоваться специфичные для листьев промоторы, такие как промоторы рибулозобифосфат карбоксилазы (РБФК). Например, гены RBCS1, RBCS2 и RBCS3A помидора экспрессируются в листьях и растущих под действием света саженцах (Meier с соавт., 1997). Могут использоваться промоторы рибулозобифосфат карбоксилазы, экспрессирующиеся почти исключительно в клетках мезофилла листовых пластинок и влагалищ листьев с высокими уровнями, как раскрыто Matsuoka с соавт. (1994). Другой специфичный для листьев промотор представляет собой легко собирающий урожай промотор гена улавливающего свет белка a/b, связывающегося с хлорофиллом (см. Shiina с соавт., 1997). Родственный myb промотор (Atmyb5) гена Arabidopsis thaliana, описанный Li с соавт. (1996), является специфичным для листьев. Промотор Atmyb5 экспрессируется в процессе развития листовых трихом, прилистников и эпидермальных клеток на краях молодой розетки и стеблевых листьях, а также в незрелых семенах. Кроме того, может использоваться листовой промотор, идентифицированный в маисе Busk с соавт. (1997).

В некоторых случаях, например, если LEC2 или BBM рекомбинантно экспрессируется, может быть желательным, чтобы трансген не экспрессировался с высокими уровнями. Примером промотора, который может использоваться в таких случаях, является укороченный промотор напина A, который сохраняет специфичный для семени характер экспрессии, но со сниженным уровнем экспрессии (Tan с соавт., 2011).

5' Нетранслируемые лидерные последовательности могут быть получены промотором, выбранного для экспрессии последовательности гетерологичного гена полинуклеотида по настоящему изобретению, или могут быть гетерологичными относительно участка кодирования фермента, который должен вырабатываться, и могут быть специфично модифицированы, при желании, с целью увеличения трансляции иРНК. Обзор оптимизации экспрессии трансгенов см. в Koziel с соавт. (1996). 5' Нетранслируемые участки также могут быть получены из РНК вирусов растений (среди прочего, вирус мозаики табака, вирус гравировки табака, вирус карликовой мозаики маиса, вирус мозаики люцерны), из пригодных эукариотных генов, растительных генов (лидер гена белка a/b, связывающегося с хлорофиллом, пшеницы и маиса) или из синтетической последовательности гена. Настоящее изобретение не ограничивается конструкциями, в которых нетранслируемый участок получен из 5' нетранслируемой последовательности, которая сопровождает последовательность промотора. Дополнительно, лидерная последовательность может происходить от постороннего промотора или кодирующей последовательности. Лидерные последовательности, пригодные по форме и содержанию для настоящего изобретения, включают лидер Hsp70 маиса (US 5362865 и US 5859347) и элемент омега вируса мозаики табака (ВМТ).

Терминация транскрипции достигается с помощью 3' нетранслируемой последовательности ДНК, функционально связанной в векторе экспрессии с целевым полинуклеотидом. 3' Нетранслируемый участок рекомбинантной молекулы ДНК содержит сигнал полиаденилирования, функция которого в растениях состоит в присоединении аденилатных нуклеотидов к 3' концу РНК. 3' Нетранслируемый участок может быть получен из различных генов, которые экспрессируются в клетках растения. В данном случае обычно используются 3' нетранслируемые участки синтетазы нопалина, 3' нетранслируемый участок маленькой субъединицы гена РУБИСКО гороха, 3' нетранслируемый участок соевого гена запасаемого белка 7S семени. Кроме того, пригодными являются 3' транскрибированные, нетранслируемые участки, содержащие полиаденилатный сигнал индуцирующих опухоль (ИО) генов плазмиды Agrobacterium.

Рекомбинантные технологии ДНК могут использоваться для улучшения экспрессии трансформированного полинуклеотида посредством манипуляции, например, эффективностью, с которой транслируются образующиеся в результате транскрипты, путем оптимизации кодонов согласно виду клетки-хозяина или делеции последовательностей, которые дестабилизируют транскрипты, и эффективностью посттрансляционных модификаций.

Транспортные нуклеиновые кислоты

Транспортные нуклеиновые кислоты могут использоваться для доставки экзогенного полинуклеотида в клетку и содержат одну, предпочтительно, две граничные последовательности и один или более целевые полинуклеотиды. Транспортная нуклеиновая кислота может кодировать или не кодировать селекционный маркер. Предпочтительно, транспортная нуклеиновая кислота формирует часть бинарного вектора в клетке бактерии, причем бинарный вектор дополнительно содержит элементы, которые позволяют репликацию вектора у бактерии, селекцию или поддержание бактериальных клеток, содержащих бинарный вектор. При переносе в эукариотную клетку, компонент транспортной нуклеиновой кислоты бинарного вектора способен к интеграции в геном эукариотной клетки или пригоден для экспериментов с временной экспрессией, только с экспрессией в клетке.

В настоящем документе термин «внехромосомная транспортная нуклеиновая кислота» обозначает молекулу нуклеиновой кислоты, которая способна к перемещению из бактерии, например, вида Agrobacterium, в эукариотную клетку, например, клетку листа растения. Внехромосомная транспортная нуклеиновая кислота представляет собой генетический элемент, который известен, как элемент, способный к перемещению, с последующей интеграцией с нуклеотидной последовательностью, содержащейся в пределах его границ, в геном клетки-реципиента. В данном отношении, транспортная нуклеиновая кислота фланкирована обычно двумя «граничными» последовательностями, хотя в некоторых случаях может использоваться одна граница на одном конце, и второй конец транспортной нуклеиновой кислоты генерируется случайным образом в процессе переноса. Целевой полинуклеотид обычно размещается между левой, подобной границе, последовательностью и правой, подобной границе, последовательностью транспортной нуклеиновой кислоты. Полинуклеотид, содержащийся в пределах транспортной нуклеиновой кислоты, может быть функционально связан со множеством других промоторных и терминаторных регуляторных элементов, которые облегчают его экспрессию, т. е., транскрипцию и/или трансляцию полинуклеотида. Транспортные ДНК (Т-ДНК) видов Agrobacterium, например, Agrobacterium tumefaciens или Agrobacterium rhizogenes, и созданные человеком их варианты/мутанты, вероятно, представляют собой лучше всего описанные примеры транспортных нуклеиновых кислот. Другой пример представляет собой Р-ДНК («растительная ДНК»), которая содержит подобные границе последовательности T-ДНК из растений.

В настоящем документе «T-ДНК» обозначает T-ДНК ОИ плазмиды Agrobacterium tumefaciens или из плазмиды Ri Agrobacterium rhizogenes, или их варианты, функция которых состоит в переносе ДНК в растительные клетки. T-ДНК может содержать полноразмерную T-ДНК, включая как правую, так и левую граничные последовательности, но необходимыми являются только минимальные последовательности, необходимые в цис для переноса, т. е., правая T-ДНК граничная последовательность. Т-ДНК по изобретению имеют вставленный в них где-либо между правой и левой граничными последовательностями (если они присутствуют) целевой полинуклеотид. Последовательности, кодирующие факторы, необходимые в транс для переноса T-ДНК в растительную клетку, например, гены vir, могут быть вставлены в T-ДНК или могут присутствовать на том же репликоне, что и T-ДНК, или предпочтительно находятся в транс на совместимом репликоне в хозяине Agrobacterium. Такие «системы бинарного вектора» хорошо известны из уровня техники. В настоящем документе «П-ДНК» обозначает транспортную нуклеиновую кислоту, выделенную из генома растения или ее варианты/мутанты, созданные человеком, и содержит на каждом конце или только на одном конце подобную граничной последовательность T-ДНК.

В настоящем документе «граничная» последовательность транспортной нуклеиновой кислоты может быть выделена из выбранного организма, например, растения или бактерии, или представлять собой ее вариант/мутант, созданный человеком. Граничная последовательность способствует и облегчает перенос полинуклеотида, с которым она связана, и может облегчить его интеграцию в геном клетки-реципиента. В варианте реализации длина граничной последовательности составляет 10-80 пар оснований. Граничные последовательности T-ДНК видов Agrobacterium хорошо известны из уровня техники и включают раскрытые Lacroix с соавт. (2008).

Хотя традиционно использовались только виды Agrobacterium для переноса генов в клетки растений, в настоящее время идентифицировано/разработано большое число систем, которые функционируют подобным видам Agrobacterium способом. В последнее время несколько видов, не относящихся к Agrobacterium, были генетически модифицированы таким образом, чтобы сделать их компетентными для переноса гена (Chung с соавт., 2006; Broothaerts с соавт., 2005). Они включают вид Rhizobium NGR234, Sinorhizobium meliloti и Mezorhizobium loti.

Прямой перенос эукариотных экспрессионных плазмид от бактерий эукариотным хозяевам впервые был осуществлен несколько десятилетий тому назад слиянием клеток млекопитающего и протопластов несущей плазмиду Escherichia coli (Schaffner, 1980). С того времени, количество бактерий, способных доставлять гены в клетки млекопитающего, устойчиво возрастало (Weiss, 2003), будучи обнаружено четырьмя независимыми группами (Sizemore с соавт. 1995; Courvalin с соавт., 1995; Powell с соавт., 1996; Darji с соавт., 1997).

В настоящем документе термины «трансфекция», «трансформация» и их вариации, в общем, используются равнозначно. «Трансфицированными» или «трансформированными» клетками можно манипулировать с целью введения целевого полинуклеотида(ов) или получения из них клеток-потомков.

Рекомбинантные клетки

В изобретении также раскрывается рекомбинантная клетка, например, рекомбинантная растительная клетка или грибковая клетка, которая является клеткой-хозяином, трансформированной одним или более полинуклеотидов или векторов, раскрытых в настоящем документе, или их комбинацией. Пригодные клетки согласно изобретению включают любую клетку, которая может быть трансформирована полинуклеотидом или рекомбинантным вектором по изобретению, кодирующим РНК, полипептид или фермент, раскрытые в настоящем документе. Клетка представляет собой клетку, которая, таким образом, пригодна к использованию для получения липида. Рекомбинантная клетка может быть клеткой в культуре, клеткой in vitro или в организме, например, таком как растение, или в органе, например, таком как семя или лист. Предпочтительно, клетка находится в растении, более предпочтительно в семени растения. В одном варианте реализации рекомбинантная клетка представляет собой клетку, не являющуюся клеткой человека.

Клетки-хозяева, в которые введен(ы) полинуклеотид(ы), могут быть нетрансформированными клетками или клетками, которые уже трансформированы по меньшей мере одной нуклеиновой кислотой. Такие нуклеиновые кислоты могут быть связаны или не связаны с синтезом липида. Клетки-хозяева по настоящему изобретению могут быть эндогенно (т. е., от природы) способны к выработке полипептида(ов), раскрытого в настоящем документе, когда рекомбинантная клетка, полученная из них, обладает повышенной способностью к выработке полипептида(ов) или может быть способна к выработке указанного(ых) полипептида(ов) только после трансформации по меньшей мере одним полинуклеотидом по изобретению. В варианте реализации рекомбинантная клетка по изобретению обладает повышенной способностью к выработке неполярного липида, такого как ТАГ.

Клетки-хозяева по настоящему изобретению могут представлять собой любую клетку, способную к выработке по меньшей мере одного белка, раскрытого в настоящем документе, и включают клетки грибов (в том числе, дрожжей), животных, таких как членистоногие, и растительные клетки, такие как клетки водорослей и растений. В предпочтительном варианте реализации растительная клетка представляет собой клетку семени, в частности, клетку в семядоле или эндосперме семени. Клетки-хозяева могут быть организмом, пригодным для процесса ферментации, например, таким как Yarrowia lipolytica или другие дрожжи. В одном варианте реализации изобретения клетка представляет собой клетку животного. Клетка животного может принадлежать к любому виду животного, например, клетка животного, не относящегося к человеческому роду, клетка позвоночного, не относящегося к человеческому роду, клетка млекопитающего, не относящегося к человеческому роду, или клетки водных животных, например, рыб или ракообразных, беспозвоночных, насекомых и т. п. Примеры клеток водорослей, пригодных в качестве клеток-хозяев по настоящему изобретению, включают, например, виды Chlamydomonas (например, Chlamydomonas reinhardtii), виды Dunaliella, виды Haematococcus, виды Chlorella, виды Thraustochytrium, виды Schizochytrium и виды Volvox.

Трансгенные растения

В изобретении также раскрывается растение, содержащее один или более экзогенных полинуклеотидов или полипептидов и одну или более генетических модификаций по изобретению, клетки по изобретению, вектор по изобретению или их комбинации. Термин «растение» в роли имени существительного обозначает цельные растения, тогда как термин «его часть» обозначает органы растения (например, листья, стебли, корни, цветки, плод), одинарные клетки (например, пыльца), семя, части семени, например, зародыш, эндосперм, щиток зародыша или оболочку семени, ткань растения, например, сосудистую ткань, растительные клетки и их потомки. В настоящем документе части растения включают растительные клетки.

В настоящем документе термин ʺв растенииʺ, в контексте модификации растения означают, что модификация произошла по меньшей мере в одной части растения, включая ситуации, в которых модификация произошла во всем растению, и не исключая ситуаций, в которых модификация происходит только в одной или нескольких, но не во всех частях растения. Например, говорят, что тканеспецифичный промотор экспрессируется ʺв растенииʺ, даже если он может экспрессироваться только в некоторых частях растения. Аналогично, ʺполипептид фактора транскрипции, который повышает экспрессию одного или более гликолитических генов и/или генов биосинтеза жирных кислот в растенииʺ означает, что повышенная экспрессия присутствует по меньшей мере в части растения.

В настоящем документе термин «растение» применяется в самом широком смысле, включая любой организм из царства растений. Кроме того, он включает красные и коричневые водоросли, а также зеленые водоросли. Он включает, без ограничений, любые виды цветковых растений, травы, сельскохозяйственной культуры или злака (например, масличная культура, маис, соя), кормового или силосного, фруктового или овощного растения, травянистого растения, деревянистого растения или дерева. Не подразумевается ограничения растения какой-либо конкретной структурой. Кроме того, он обозначает одноклеточное растение (например, микроводоросль). Термин «его часть» со ссылкой на растение обозначает растительную клетку и ее потомка, множество клеток растения, структуру, которая присутствует на любой стадии развития растения или ткани растения. Такие структуры включают, без ограничений, листья, стебли, цветки, плоды, орехи, корни, семя, оболочку семени, зародыши. Термин «ткань растения» включает дифференцированные и недифференцированные ткани растений, в том числе, присутствующие в листьях, стеблях, цветках, плодах, орехах, корнях, семени, например, зародышевая ткань, эндосперм, ткань кожуры (например, эпидермис, перидерма), сосудистая ткань (например, ксилема, флоэма) или донная ткань (содержащая клетки паренхимы, колленхимы и/или склеренхимы), а также клетки в культуре (например, одинарные клетки, протопласты, каллюс, зародыши, и т. п.). Ткань растения может находиться in planta, в культуре органа, культуре ткани или культуре клеток.

В настоящем документе термин «вегетативная ткань» или «вегетативная часть растения» обозначает любую ткань растения, орган или часть, кроме органов для полового воспроизводства растений. В частности, органы для полового воспроизводства растений представляют собой несущие семена органы, цветки, пыльцу, плоды и семена. Вегетативные ткани и части включают по меньшей мере листья, стебли (в том числе, стрелки и побеги, за исключением головок), клубни и корни растения, за исключением цветков, пыльцы, семени, включая оболочку семени, зародыша и эндосперма, плода, включая ткани мезокарпа, несущие семя стручки и несущие семя головки. В одном варианте реализации изобретения вегетативная часть растения представляет собой воздушную часть растения. В другом или дальнейшем варианте реализации изобретения вегетативная часть растения представляет собой зеленую часть, например, лист или стебель.

«Трансгенное растение» или его вариации обозначают растение, которое содержит трансген, не найденный в растении дикого типа такого же вида, подвида или сорта. Трансгенные растения, раскрытые в контексте настоящего изобретения, включают растения и их потомков, генетически модифицированных с применением рекомбинантных методов, чтобы вызывать выработку по меньшей мере одного полипептида, раскрытого в настоящем документе, в желательном растении или его части. Трансгенные части растения имеют соответствующее значение.

Термины «семя» и «зерно» используются равнозначно в настоящем документе. «Зерно» обозначает зрелое зерно, например, собранное в процессе сбора урожая зерно, или зерно, которое находится на растении, но готово для сбора урожая, а также может обозначать зерно после набухания или прорастания, согласно контексту. Зрелое зерно обычно содержит менее чем приблизительно 18% влаги. В предпочтительном варианте реализации, содержание влаги в зерне находится на уровне, который в общем расценивается как безопасный для хранения, предпочтительно, от 5% до 15%, от 6% до 8%, от 8% до 10% или от 10% до 15%. В настоящем документе «развивающееся семя» обозначает семя до состояния зрелости, обычно найденное в репродуктивных структурах растения после оплодотворения или цветения, но может также обозначать семена до состояния зрелости, которые сняты с растения. Зрелое семя обычно содержит менее чем приблизительно 12% влаги

В настоящем документе термин «запасающий орган растения» обозначает часть растения, специализирующуюся на хранении энергии, например, в форме белков, углеводов, липида. Примерами запасающих органов растения являются семя, плод, клубневидные корни и клубни. Предпочтительным запасающим органом растения по изобретению является семя.

В настоящем документе термин «фенотипически нормальный» обозначает генетически модифицированное растение или его часть, например, трансгенное растение, или запасающий орган, такой как семя, клубень или плод по изобретению, без существенного снижения способности к росту и воспроизводству, по сравнению с немодифицированным растением или его частью. Предпочтительно, биомасса, темпы роста, скорость прорастания, размер запасающего органа, размер семени и/или количество образовавшихся жизнеспособных семян составляет не менее 90% от показателей растения, не содержащего указанных генетических модификаций или экзогенных полинуклеотидов, при выращивании в идентичных условиях. Данный термин не включает признаков растения, которые могут отличаться от растения дикого типа, но которые не влияют на полноценность растения с точки зрения коммерческих целей, например, такие как фенотип балерины листьев саженца. В варианте реализации генетически модифицированное растение или его часть, которые являются фенотипически нормальными, содержат рекомбинантный полинуклеотид, кодирующий подавляющий сайленсинг, функционально связанный с промотором, специфичным для запасающего органа растения, и обладают способностью к росту или воспроизводству, по существу такой же как соответствующее растение или его часть, не содержащие указанного полинуклеотида.

В настоящем документе "начало цветения" или ʺнаступление цветенияʺ со ссылкой на растение обозначает время раскрытия первого цветка на растении или время начала пыления.

В настоящем документе термин "завязывание семян" со ссылкой на несущее семена растение обозначает время, когда первое семя растения достигает зрелости. Обычно это можно определить по цвету семени или содержанию в нем влаги, как хорошо известно из уровня техники.

В настоящем документе термин "старениеʺ со ссылкой на цельное растение обозначает конечную стадию развития растения, которая следует за завершением роста, обычно после того, как воздушная биомасса или высота растения достигает максимума. Старение начинается, когда воздушная биомасса растения достигает максимума, и ее количество начинает уменьшаться, и в общем заканчивается с гибелью большинства тканей растения. В ходе данной стадии растение мобилизует и рециклизует клеточные компоненты из листьев и других частей, которые накапливались в процессе роста, в другие части, чтобы завершить репродуктивное развитие. Старение представляет собой сложный, регулируемый процесс, в который вовлечена экспрессия новых генов или повышенная экспрессия некоторых генов. Часто, некоторые части растения стареют, в то время как другие части того же растения продолжают расти. Таким образом, относительно листа растения или другого зеленого органа, термин ʺстарениеʺ в настоящем документе обозначает время, когда количество хлорофилла в листе или органе начинает снижаться. Старение обычно сопровождается обезвоживанием листа или органа, по большей части в последней стадии старения. Старение обычно можно определить по изменению цвета листа с зеленого по направлению к желтому и, в конечном счете, к коричневому окрашиванию после полного обезвоживания. Считается, что клеточное старение лежит в основе старения растения и органов.

Растения, раскрытые или предусмотренные для применения в практике настоящего изобретения, включают однодольные или двудольные. В предпочтительных вариантах реализации, растения по настоящему изобретению представляют собой сельскохозяйственные растения (например, злаковые и зернобобовые, маис, пшеницу, различные виды картофеля, рис, сорго, пшено, маниок, ячмень), или другие растения из семейства бобовых, такие как соя, бобы или горох. Растения могут выращиваться для производства съедобных корней, клубней, листьев, стеблей, цветков или плодов. Растения могут быть овощными растениями, вегетативные части которых используются в пищу. Растения по изобретению могут представлять собой: Acrocomia aculeata (макаубская пальма), Arabidopsis thaliana, Aracinis hypogaea (арахис), Astrocaryum murumuru (мурумуру), Astrocaryum vulgare (тукума), Attalea geraensis (атталия), Attalea humilis (американская масличная пальма), Attalea oleifera (андайя), Attalea phalerata (урикури), Attalea speciosa (бабассу), Avena sativa (овес), Beta vulgaris (сахарная свекла), виды Brassica, такие как Brassica carinata, Brassica juncea, Brassica napobrassica, Brassica napus (рапс), Camelina sativa (ложный лен), Cannabis sativa (конопля), Carthamus tinctorius (сафлор красильный), Caryocar brasiliense (пекви), Cocos nucifera (кокос), Crambe abyssinica (абиссинская капуста), Cucumis melo (дыня), Elaeis guineensis (африканская пальма), Glycine max (соя), Gossypium hirsutum (хлопчатник), виды Helianthus, такие как Helianthus annuus (подсолнечник), Hordeum vulgare (ячмень), Jatropha curcas (лечебный орех), Joannesia princeps (лещина арара), виды Lemna (ряска), такие как Lemna aequinoctialis, Lemna disperma, Lemna ecuadoriensis, Lemna gibba (ряска горбатая), Lemna japonica, Lemna minor, Lemna minuta, Lemna obscura, Lemna paucicostata, Lemna perpusilla, Lemna tenera, Lemna trisulca, Lemna turionifera, Lemna valdiviana, Lemna yungensis, Licania rigida (ойтика), Linum usitatissimum (лен), Lupinus angustifolius (люпин), Mauritia flexuosa (пальма бурити), Maximiliana maripa (пальма инайя), виды Miscanthus, такие как Miscanthus x giganteus и Miscanthus sinensis, виды Nicotiana (табак), такие как Nicotiana tabacum или Nicotiana benthamiana, Oenocarpus bacaba (бакаба-до-азейте), Oenocarpus bataua (патайя), Oenocarpus distichus (бакаба-де-лек), виды Oryza (рис), такие как Oryza sativa и Oryza glaberrima, Panicum virgatum (просо прутьевидное), Paraqueiba paraensis (марь), Persea amencana (авокадо), Pongamia pinnata (индийский бук), Populus trichocarpa, Ricinus communis (клещевина), виды Saccharum (сахарный тростник), Sesamum indicum (кунжут), Solanum tuberosum (картофель), виды Sorghum, такие как Sorghum bicolor, Sorghum vulgare, Theobroma grandiforum (какао), виды Trifolium, Trithrinax brasiliensis ((бразильская игольчатая пальма), виды Triticum (пшеница), такие как Triticum aestivum, Zea mays (кукуруза), люцерна (Medicago sativa), рожь (Secale cerale), сладкий картофель (Lopmoea batatus), маниок (Manihot esculenta), кофе (виды Cofea), ананас (Anana comosus), цитрусовое дерево (виды Citrus), какао (Theobroma cacao), чай (Camellia senensis), банан (виды Musa), авокадо (Persea americana), инжир (Ficus casica), гуава (Psidium guajava), манго (Mangifer indica), олива (Olea europaea), папайя (Carica papaya), кешью (Anacardium occidentale), макадамия (Macadamia intergrifolia) и миндаль (Prunus amygdalus).

Другие предпочтительные растения включают травы C4, например, в дополнение к упомянутым выше, Andropogon gerardi, Bouteloua curtipendula, B. gracilis, Buchloe dactyloides, Schizachyrium scoparium, Sorghastrum nutans, Sporobolus cryptandrus; травы C3, например, Elymus canadensis, бобы Lespedeza capitata и Petalostemum villosum, полукустарник Aster azureus; и древесные растения, например, Quercus ellipsoidalis и Q. macrocarpa. Другие предпочтительные растения включают травы C3.

В предпочтительном варианте реализации изобретения растение представляет собой покрытосеменное растение.

В варианте реализации изобретения растение представляет собой растение масличной культуры, предпочтительно сельскохозяйственной масличной культуры. В настоящем документе «растение масличной культуры» представляет собой вид растения, используемый для коммерческого получения липида из семян растения. Растение масличной культуры может представлять собой, например, масличный рапс (например, рапс), маис, подсолнечник, сафлор красильный, сою, сорго, лен (семя льна) или сахарную свеклу. К тому же, растение масличной культуры может быть другим представителем Brassica, хлопчатником, арахисом, маком, брюквой, горчицей, клещевиной, кунжутом, сафлором, Jatropha curcas или орехоносным растением. Растение может вырабатывать высокие уровни липида в плоде, например, олива, масличная пальма или кокосовая пальма. Садовые растения, к которым может быть применено настоящее изобретение, представляют собой салат, эндивий или растения вида Brassica, включая капусту, брокколи или цветную капусту. Настоящее изобретение может быть применено к табаку, тыквам, моркови, землянике, помидору или перцу.

В предпочтительном варианте реализации трансгенное растение является гомозиготным по всем и каждому гену, который введен (трансген), таким образом, что его потомок, не отходит от желательного фенотипа. Кроме того, трансгенное растение может быть гетерозиготным по введенному(ым) трансгену(ам), предпочтительно однородно гетерозиготным по трансгену, например, в потомстве F1, выращенном из гибридного семени. Такие растения могут предлагать преимущества, например, силу гибрида, хорошо известную из уровня техники.

Трансформация растений

Трансгенные растения могут быть получены с применением методов, известных из уровня техники, например, раскрытых в общих чертах в Slater et al., Plant Biotechnology - The Genetic Manipulation of Plants, Oxford University Press (2003), и Christou and Klee, Handbook of Plant Biotechnology, John Wiley and Sons (2004).

В настоящем документе термин «стабильно трансформирующий», «стабильно трансформированный» и его вариации обозначают интеграцию полинуклеотида в геном клетки таким образом, что он передается клеткам-потомкам в процессе деления клетки, без необходимости в положительной селекции на предмет их присутствия. Стабильные трансформанты или их потомки могут быть идентифицированы любыми средствами, известными из уровня техники, например, Саузерн-блоттингом на хромосомной ДНК или гибридизацией геномной ДНК in situ, которые позволяют осуществить их отбор.

Опосредованный Agrobacterium перенос представляет собой широко применимую систему для введения генов в растительные клетки, поскольку ДНК может быть введена в клетки цельных тканей растения, органов растения или эксплантов в культуре ткани, для временной экспрессии или стабильной интеграции ДНК в геном растительной клетки. Например, можно применять способы с погружением цветков (в полевых условиях). Применение опосредованных Agrobacterium векторов интеграции в растения с целью введения ДНК в растительные клетки хорошо известно из уровня техники. Участок ДНК для переноса определяется последовательностями границы, и перенесенная ДНК (T-ДНК) обычно вставляется в геном растения. Данный способ является способом выбора вследствие простой и надежной природы переноса гена.

Способы ускорения, которые могут применяться, включают, например, баллистическую трансфекцию и т. п. Одним из примеров способа доставки трансформирующих молекул нуклеиновых кислот в растительные клетки является баллистическая трансфекция. Данный способ рассмотрен Yang et al., Particle Bombardment Technology for Gene Transfer, Oxford Press, Oxford, England (1994). Небиологические частицы (микрочастицы), которые могут быть покрыты нуклеиновыми кислотами и доставлены в клетки, например, незрелых эмбрионов, толкающей силой. Примеры частиц включают состоящие из вольфрама, золота, платины и т.п.

В другом способе пластиды могут быть стабильно трансформированы. Способы, раскрытые для трансформации пластиды в высших растениях, включают доставку с помощью пистолета частицы ДНК, содержащей селекционный маркер, и нацеливание ДНК на геном пластиды посредством гомологичной рекомбинации (US 5451513, US 5545818, US 5877402, US 5932479 и WO 99/05265). Дополнительно, могут применяться другие способы трансформации клетки, которые включают, без ограничений, введение ДНК в растения прямым переносом ДНК в пыльцу, прямой инъекцией ДНК в репродуктивные органы растения или прямой инъекцией ДНК в клетки незрелых зародышей, с последующей регидратацией высушенных зародышей.

Регенерация, развитие и культивирование растений из единичных трансформантов протопласта растения или из различных трансформированных эксплантов хорошо известны из уровня техники (Weissbach с соавт., In: Methods for Plant Molecular Biology, Academic Press, San Diego, Calif., (1988)). Такая регенерация и процесс роста обычно включают стадии селекции трансформированных клеток, культивирования таких индивидуализированных клеток через обыкновенные стадии зародышевого развития, включая стадию укоренившегося сеянца. Трансгенные зародыши и семена регенерируют подобным образом. Полученные трансгенные укоренившиеся побеги в дальнейшем пересаживают в пригодную среду для роста растения, например, грунт.

Развитие или регенерация растений, содержащих чужеродный, экзогенный ген, хорошо известны из уровня техники. Предпочтительно, регенерирующиеся растения самоопыляются, чтобы обеспечить гомозиготные трансгенные растения. В другом случае, пыльцу, полученную от регенерирующих растений, скрещивают с выращенными из семени растениями важных с агрономической точки зрения линий. С другой стороны, пыльца растений таких важных линий используется для опыления регенерированных растений. Трансгенное растение по настоящему изобретению, содержащее желательный полинуклеотид, культивируют с использованием способов, хорошо известных специалисту в данной области.

Чтобы подтвердить присутствие трансгенов в трансгенных клетках и растениях, может быть осуществлена амплификация полимеразной цепной реакцией (ПЦР) или анализ методом Саузерн-блоттинга, с применением методов, известных специалистам из уровня техники. Продукты экспрессии трансгенов могут быть обнаружены любым из множества путей, в зависимости от природы продукта, которые включают Нозерн-блоттинг гибридизацию, Вестерн-блоттинг и ферментный анализ. Как только трансгенные растения получены, они могут выращиваться для получения тканей или частей растения, содержащих желательный фенотип. Урожай ткани растения или частей растения может быть собран, и/или семена могут быть собраны. Семя может служить источником для выращивания дополнительных растений с тканями или частями, обладающими желательными характеристиками. Предпочтительно, урожай вегетативных частей растения собирают в то время, когда выход неполярных липидов находится на самом высоком уровне. В одном варианте реализации урожай вегетативных частей растения собирают во время, близкое к цветению или после начала цветения. Предпочтительно, части растения собирают в период около начала старения, на который обычно указывает пожелтение и высыхание листьев.

Трансгенные растения, полученные с использованием Agrobacterium или других способов трансформации, обычно содержат единственный генетический локус на одной хромосоме. Такие трансгенные растения могут обозначаться как гемизиготные по дополнительному(ым) гену(ам). Более предпочтительным является трансгенное растение, гомозиготное по дополнительному(ым) гену(ам), т. е. трансгенное растение, которое содержит два дополнительных гена, по одному гену в одинаковых локусах на каждой хромосоме из пары хромосом. Гомозиготное трансгенное растение может быть получено путем самооплодотворения гемизиготного трансгенного растения, проращиванием части полученных семян и анализом полученных растений на предмет присутствия целевого гена.

Кроме того, необходимо понимать, что два различных трансгенных растения, которые содержат два независимо разделенных экзогенных гена или локуса, могут быть скрещены (получен гибрид), с целью получения потомства, содержащего оба набора генов или локусов. Самоопыление подходящего потомка F1 может давать растения, гомозиготные по обоим экзогенным генам или локусам. Обратное скрещивание с материнским растением и скрещивание с нетрансгенным растением также предусмотрены, как и вегетативное размножение. Подобным образом, трансгенное растение может быть скрещено со вторым растением, содержащим генетическую модификацию, такую как мутантный ген, с идентификацией потомства, содержащего как трансген, так и генетическую модификацию. Описание других способов разведения, которые обычно применяются для различных признаков и сельскохозяйственных культур, можно найти в Fehr, In: Breeding Methods for Cultivar Development, Wilcox J. ed., American Society of Agronomy, Madison Wis. (1987).

ИНЛПГ

В одном варианте реализации TILLING (Индуцированные Нацеливанием Локальные Повреждения В Геномах, ИНЛПГ) может применяться для получения растений, в которых эндогенные гены содержат мутацию, например, гены, кодирующие полипептид SDP1 или ТГД, пластидную GPAT, пластидную LPAAT, фосфатазу фосфатидиновой кислоты (PAP) или комбинацию двух или более из указанных компонентов. На первой стадии введение мутаций, например новых модификаций одинарных пар оснований, осуществляют в популяции растений посредством обработки семян (или пыльцы) химическим мутагеном, с последующим разведением растений до поколения, в котором мутации будут устойчиво наследоваться. ДНК извлекают и хранят семена всех членов популяции, чтобы создать ресурс, который может быть доступен повторно через некоторое время. Для анализа ИНЛПГ можно применить гетеродуплексные способы с использованием специфичных эндонуклеаз, с целью выявления однонуклеотидного полиморфизма (ОНП). В качестве альтернативы, секвенирование ДНК следующего поколения из пулов мутантных растений можно применять для идентификации мутаций в выбранном гене. Обычно, достигается частота мутаций один мутант на 1000 растений в популяции мутантных растений. С применением данного подхода может быть осуществлен скрининг многих тысяч растений для идентификации любого индивидуума с модификацией единственного основания, а также небольшими инсерциями или делециями (1-30 пар оснований) в любом гене или конкретном участке генома. ИНЛПГ дополнительно описана Slade и Knauf (2005) и Henikoff с соавт. (2004).

В дополнение к возможности эффективного обнаружения мутаций, высокопроизводительная технология ИНЛПГ идеальна для обнаружения природного полиморфизма. Таким образом, детальное исследование неизвестной гомологичной ДНК, образующей гетеродуплекс с известной последовательностью, выявляет количество и расположение полиморфных сайтов. Идентифицированы нуклеотидные модификации, а также инсерции и делеции небольшого размера, в том числе, по меньшей мере некоторые полиморфизмы количества повторов. Указанный признак получил название Ecotilling (Comai с соавт., 2004).

Редактирование генома с применением сайт-специфичных нуклеаз

Редактирование генома с применением сконструированных нуклеаз, таких как направляемые РНК эндонуклеазы или нуклеазы ДНК, состоящие из доменов связывания ДНК, специфичных для последовательности, слитых с неспецифичным модулем расщепления ДНК. Такие сконструированные нуклеазы дают возможность осуществлять эффективные и точные генетические модификации путем индукции направленных разрывов двухцепочечной ДНК, которые побуждают эндогенные клеточные механизмы восстановления ДНК клетки к восстановлению индуцированного разрыва. Такие механизмы включают, например, подверженное ошибкам негомологичное соединение концов (НГСК) и направляемое гомологией восстановление (НГВ).

В присутствии донорской плазмиды с удлиненными гомологичными плечами, НГВ может приводить к введению одного или нескольких трансгенов для коррекции или замены существующих генов. В отсутствии донорской плазмиды, НГСК-опосредованное восстановление дает незначительные инсерционные или делеционные мутации мишени, которые вызывают разрушение гена.

Сконструированные нуклеазы, пригодные для способов по настоящему изобретению, включают цинк-пальцевые нуклеазы (ЦПН), подобные активатору транскрипции (ПАТ) эффекторные нуклеазы (ПАТЭН) и нуклеазы типа CRISPR/Cas9.

Обычно кодирующие нуклеазу гены доставляются в клетки плазмидной ДНК, вирусными векторами или транскрибированной in vitro мРНК.

Цинк-пальцевая нуклеаза (ЦПН) содержит домен связывания с ДНК и домен расщепления ДНК, причем домен связывания с ДНК состоит по меньшей мере из одного «цинкового пальца» и функционально связан с доменом расщепления ДНК. Домен связывания с ДНК цинкового пальца расположен на N-конце белка, а домен расщепления ДНК расположен на C-конце указанного белка.

ЦПН должна содержать по меньшей мере один «цинковый палец». В предпочтительном варианте реализации изобретения ЦПН должна содержать по меньшей мере три «цинковых пальца», чтобы обладать достаточной специфичностью и быть пригодной для направленной генетической рекомбинации в клетке- или организме-хозяине. Обычно, специфичность ЦПН, содержащей более чем три «цинковых пальца», будет постепенно увеличиваться с наличием каждого дополнительного «цинкового пальца».

Домен «цинкового пальца» может происходить из любого класса или вида «цинковых пальцев». В конкретном варианте реализации изобретения домен «цинкового пальца» включает Cis₂His₂ тип «цинкового пальца», который в самом общем виде представлен, например, факторами транскрипции «цинкового пальца» TFIIIA или Sp1. В предпочтительном варианте реализации изобретения домен «цинкового пальца» включает три «цинковых пальца» типа Cis₂His₂. Распознавание ДНК и/или специфичность связывания ЦПН могут быть модифицированы с целью достижения целевой генетической рекомбинации на каком-либо выбранном сайте клеточной ДНК. Такая модификация может быть достигнута с применением известных методов молекулярной биологии и/или химического синтеза (см., например, Bibikova с соавт., 2002).

Домен расщепления ДНК ЦПН получают из класса неспецифичных доменов расщепления ДНК, например домен расщепления ДНК рестрикционного фермента типа II, например, FokI (Kim с соавт., 1996). Другие пригодные эндонуклеазы могут содержать, например, HhaI, HindIII, Nod, BbvCI, EcoRI, BglI и AlwI.

Подобная активатору транскрипции (ПАТ) эффекторная нуклеаза (ПАТЭН) содержит домен связывания с ДНК эффектора ПАТ и домен эндонуклеазы.

Эффекторы ПАТ представляют собой белки патогенных бактерий растения, которые впрыскиваются патогеном в растительную клетку, где они перемещаются к ядру и функционируют, как факторы транскрипции для активизации специфических генов растения. Первичная аминокислотная последовательность эффектора ПАТ диктует нуклеотидную последовательность, с которой он связывается. Таким образом, для эффекторов ПАТ могут быть предсказаны сайты-мишени, и эффекторы ПАТ могут быть сконструированы и сгенерированы для целей связывания с конкретными нуклеотидными последовательностями.

Слитые с эффектором ПАТ кодирующие последовательности нуклеиновых кислот представляют собой последовательности, кодирующие нуклеазу или часть нуклеазы, обычно неспецифический домен расщепления рестрикционной эндонуклеазы типа II, например, FokI (Kim с соавт., 1996). Другие пригодные эндонуклеазы могут содержать, например, HhaI, HindIII, Nod, BbvCI, EcoRI, BglI и AlwI. Тот факт, что некоторые эндонуклеазы (например, FokI) функционируют только в виде димеров, может быть с выгодой использован для повышения специфичности эффектора ПАТ в отношении мишени. Например, в некоторых случаях каждый мономер FokI может быть слит с последовательностью эффектора ПАТ, которая распознает другую последовательность мишени ДНК, и только в случае, когда два сайта распознавания находятся в непосредственной близости, неактивные мономеры сближаются настолько, чтобы совместно образовать функционирующий фермент. С включением необходимости в связывании с ДНК для активизации нуклеазы, может быть создан высокоспецифичный в отношении сайта рестрикционный фермент.

Специфичная для последовательности ПАТЭН может распознавать конкретную последовательность в пределах предварительно выбранной нуклеотидной последовательности-мишени, присутствующей в клетке. Таким образом, в некоторых вариантах реализации изобретения нуклеотидная последовательность-мишень может быть просканирована на предмет наличия сайтов для распознавания нуклеазой, и конкретная нуклеаза может быть выбрана на основании последовательности мишени. В других случаях, может быть сконструирована ПАТЭН, нацеленная на конкретную клеточную последовательность.

Редактирование генома с применением программируемых РНК-направляемых ДНК эндонуклеаз

В отличие от сайт-специфичных нуклеаз, описанных выше, система кластеризованных, коротких палиндромных повторов с регулярными промежутками (ККППРП, CRISP)/Cas предлагает альтернативу ЦПН и ПАТЭН для индукции направленных генетических модификаций посредством направляемого РНК расщепления ДНК.

Системы ККППРП зависят от ККППРП РНК (ккРНК) и трансактивирующей химерной РНК (траккРНК) для осуществления специфичного для последовательности расщепления ДНК. Существует три вида систем ККППРП/Cas: в системах II типа Cas9 служит направляемой РНК ДНК эндонуклеазой, которая расщепляет ДНК при распознавании мишени ккРНК-траккРНК. Основание ККППРП РНК спаривается с траккРНК с образованием структуры из двух РНК, которая направляет Cas9 эндонуклеазы к комплементарным сайтам ДНК для расщепления.

Система ККППРП может быть доставлена в растительные клетки путем совместной доставки плазмид, экспрессирующих эндонуклеазу Cas и необходимые компоненты ккРНК. Эндонуклеаза Cas может быть превращена в никазу, чтобы обеспечить дополнительный контроль над механизмом восстановления ДНК (Cong с соавт., 2013).

ККППРП обычно представляют собой короткие, частично палиндромные последовательности размером 24-40 пар оснований, содержащие внутренние и концевые перевернутые повторы размером до 11 пар оснований. Хотя обнаружены изолированные элементы, в общем они организованы в кластеры (в количестве до около 20 или более на геном) повторяющихся фрагментов, разделенных уникальными последовательностями размером 20-58 пар оснований. В общем, ККППРП являются гомогенными в пределах конкретного генома, и большинство из них идентичны. Однако, существуют примеры гетерогенности, например, в Archaea (Mojica с соавт., 2000).

Биомасса растения

Повышение общего содержания липида в биомассе растения эквивалентно более высокому содержанию энергии, что делает ее применение в качестве корма (продукта питания) или фуража или для выработки биологического топлива более экономичным.

Основным компонентом природной биомассы растения являются углеводы (приблизительно 75%, в пересчете на массу сухого вещества) и лигнин (приблизительно 25%), который может варьировать в зависимости от вида растения. Углеводы в основном представляют собой целлюлозные или гемицеллюлозные волокна, которые придают прочность структуре растения, и лигнин, который удерживает волокна вместе. Биомассе растений обычно свойственна низкая плотность энергии в результате двух факторов: физической формы и содержания влаги. Это придает дополнительное неудобство и неэффективность ее хранению и транспортировке без какой-либо предварительной обработки.

Существует целый ряд доступных способов превращения ее в более пригодные формы, в том числе: 1) физическая предварительная обработка (например, размалывание), или 2) трансформация термическими (например, окисление, газификация, пиролиз) или химическими (например, анаэробное расщепление, ферментация, компостирование, переэтерификация) способами. Таким образом, биомассу превращают в то, что может быть описано, как топливная биомасса.

Сжигание

Сжигание представляет собой процесс, в ходе которого легковоспламеняющимся материалам позволяют гореть в присутствии воздуха или кислорода с высвобождением тепла. Основой процесса является окисление. Сжигание представляет собой самый простой способ использования биомассы для получения энергии и применяется для обеспечения теплом. Указанное тепло может непосредственно использоваться множеством способов: 1) нагревание пространства, 2) нагревание воды (или другой жидкости) для центрального или местного нагревания или переработки тепла, 3) получение пара для генерации электричества или движущей силы. Если легковоспламеняющийся горючий материал находится в форме биомассы, окисление касается, в основном, атомов углерода (C) и водорода (H) в целлюлозе, гемицеллюлозе, лигнине и других присутствующих молекулах, с образованием диоксида углерода (CO₂) и воды (H₂O). Растения по изобретению дают усовершенствованное топливо для сжигания благодаря повышенному содержанию липидов.

Газификация

Газификация представляет собой процесс частичного окисления, посредством которого источник углерода, например, биомасса растения, разлагается на монооксид углерода (CO) и водород (H₂), плюс диоксид углерода (CO₂) и, возможно, молекулы углеводорода, например, метана (CH₄). Если газификация имеет место при относительно низкой температуре, например, от 700°C до 1000°C, газообразный продукт будет содержать относительно высокие уровни углеводородов, по сравнению с высокотемпературной газификацией. В результате, он может использоваться непосредственно для сжигания с целью получения тепла или генерации электричества с помощью паровой турбины или, при условии соответствующего удаления газа, в двигателе внутреннего сгорания для генерации электричества. Камера сжигания для простого парового котла может быть соединена с газификатором, или устройство для получения газа может очищаться от углеводородов с более длинной цепью (смолы), которые хранятся и сжигаются в другом месте. Система газификации может быть тесно связана с газовой турбиной комбинированного цикла для генерации электричества (КЦИГ - комбинированный цикл интегрированной газификации). Высокотемпературная газификация (от 1200°C до 1600°C) приводит к образованию нескольких углеводородов в газообразном продукте и более высокой доле CO и H₂. Это известно как синтетический газ (сингаз или биосинтетический газ), который может использоваться для синтеза углеводородов с более длинной цепью, с применением таких методов, как синтез Фишера-Тропша (ФТ). При надлежащем соотношении H₂ к CO (2:1), синтез ФТ может применяться для превращения синтетического газа в высококачественное синтетическое биологическое дизельное топливо, совместимое с обычными видами дизельного топлива из окаменелого сырья и дизельными двигателями.

Пиролиз

В настоящем документе термин «пиролиз» подразумевает процесс, в ходе которого используется медленное нагревание в отсутствие кислорода, с целью получения газообразных, нефтяных и угольных продуктов из биомассы. Пиролиз представляет собой термическое или термохимическое превращение материалов на основе липида, особенно на основе триглицерида. Продукты пиролиза включают газ, жидкость и твердый уголь, причем доля каждого зависит от параметров процесса. Более низкие температуры (около 400°C) показывают тенденцию к образованию более твердого угля (медленный пиролиз), тогда как несколько более высокие температуры (около 500°C) дают намного более высокую долю жидкости (бионефть), при условии, что продолжительность обработки паров удерживается на уровне до приблизительно 1 секунды или менее.

Температура от около 275°C до около 375°C может применяться для получения жидкой бионефти с более высоким относительным содержанием углеводородов с большей длиной цепи. Пиролиз включает прямой термической крекинг липидов или комбинацию термического и каталитического крекинга. При температурах приблизительно 400-500°C происходит крекинг, дающий углеводороды с короткой цепью, например, алканы, алкены, алкадиены, ароматические вещества, олефины и карбоновую кислоту, а также монооксид углерода и диоксид углерода.

Могут использоваться четыре основных типа катализатора, в том числе, катализаторы на основе переходного металла, катализаторы типа молекулярного сита, активизированный алюминия оксид и натрия карбонат (Maher с соавт., 2007). Примеры представлены в US 4102938. Алюминия оксид (Al₂O₃), активированный кислотой, представляет собой эффективный катализатор (US 5233109). Катализаторы типа молекулярного сита представляют собой пористые, высоко кристаллические структуры, которые демонстрируют избирательность в отношении размера, таким образом, что сквозь них могут проникать только молекулы определенных размеров. Они включают катализаторы на основе цеолита, например, ZSM-5 или HZSM-5, которые являются кристаллическими материалами, содержащими AlO₄ и SiO₄, и другие катализаторы на основе кремния диоксида-алюминия оксида. Активность и селективность указанных катализаторов зависит от кислотности, размера пор и формы пор, и обычно они активны при 300-500°C. Катализаторы на основе переходного металла раскрыты, например, в US 4992605. Катализатор на основе натрия карбоната использовали в пиролизе масел (Dandik и Aksoy, 1998).

В настоящем документе ʺгидротермическая обработкаʺ, ʺГТОʺ, дополнительно называемая ʺтермической деполимеризациейʺ представляет собой вид пиролиза, в ходе которого полученное из растения вещество, конкретно углеродсодержащий материал в полученном растение веществе, вводят в реакцию с водородом для получения продукта в форме бионефти, в основном состоящего из парафиновых углеводородов, наряду с другими газообразными и твердыми веществами. Значительное преимущество ГТО состоит в том, что нет необходимости сушить вегетативный растительный материал перед образованием композиции для введения в реакцию превращения, хотя вегетативный материал растения может быть предварительно высушен, чтобы упростить транспортировку или хранение биомассы. Биомасса может использоваться непосредственно после сбора урожая на поле. Реактор представляет собой любую емкость, способную выдерживать применяемую высокую температуру и давление и устойчивую к коррозии. Растворитель, применяемый для ГТО, содержит воду или полностью является водой или может содержать некоторые углеводородные соединения в форме масла. В общем, растворитель для ГТО не требует добавления спиртов. Реакция превращения может происходить в окислительном, восстановительном или инертном окружении. ʺОкислительныйʺ в настоящем документе означает присутствие воздуха, ʺвосстановительныйʺ означает присутствие восстановительного агента, обычно газообразного водорода или метана, например, 10-15% H₂ и остальная часть газообразного N₂, и ʺинертныйʺ означает присутствие инертного газа, такого как азот или аргон. Реакцию превращения предпочтительно осуществляют в восстановительных условиях. Углеродсодержащие материалы для превращения включают целлюлозу, гемицеллюлозу, лигнин и белки, а также липиды. Для процесса применяют температуру превращения от 270°C до 400°C и давление от 70 до 350 бар, обычно от 300°C до 350°C и 100-170 бар. В результате процесса образуются пары органических веществ, пиролизные газы и древесный уголь. Пары органических веществ конденсируют для получения бионефти. Извлечение бионефти может быть осуществлено путем охлаждения реактора и снижения давления до атмосферного, что позволяет образование бионефти (органическая) и водной фазы и извлечение бионефти из реактора.

Выход извлеченной бионефти вычисляют как процент от сухой массы исходной биомассы, в пересчете на сухую массу. Его вычисляют по формуле: масса бионефти x 100/сухая масса вегетативных частей растения. Масса бионефти не включает массу воды или твердых веществ, которые могут присутствовать в бионефтяной смеси и с легкостью удаляются фильтрацией или другими известными способами.

Далее бионефть можно разделить на фракции фракционной дистилляцией, с дополнительными процессами очистки или без них. Обычно, фракции, которые конденсируются при этих температурах, носят название: около 370°C, мазут; около 300°C, дизельное масло; около 200°C, керосин; около 150°C, газолин (бензин). Более тяжелые фракции можно расщеплять на более легкие, более желательные фракции, хорошо известные из уровня техники. Дизельное топливо обычно состоит из C13-C22 углеводородных соединений.

В настоящем документе ʺнефтяное дизельное топливоʺ (нефтедиз) обозначает дизельное топливо, полученное из окаменелого топлива, которое регламентируется спецификациями, установленными ASTM D975 в США и EN 590 в Европе. Термин ʺвозобновляемое дизельное топливоʺ в настоящем документе обозначает дизельное топливо, полученное из недавно живой биомассы (не окаменелого топлива), которое удовлетворяет требованиям ASTM D975 и не является моноалкиловыми эфирами. Типичными признаками возобновляемого дизельного топлива являются: цетановое число 75-90, плотность энергии приблизительно 44 МДж/кг, плотность приблизительно 0,78 г/мл, содержание энергии приблизительно 123 кБТЕ/галлон, уровни хлора менее чем 10 пропромилле, точка мутности ниже 0°C.

Переэтерификация

«Переэтерификация» в настоящем документе представляет собой превращение липидов, главным образом, триацилглицеридов, в метиловые эфиры или этиловые эфиры жирных кислот путем приведения в реакцию с короткоцепочечными спиртами, например, метанолом или этанолом, в присутствии катализатора, например, щелочи или кислоты. Метанол применяется чаще за счет низкой стоимости и доступности, однако могут применяться также этанол, пропанол или бутанол или их смеси. Катализаторы могут быть гомогенными катализаторами, гетерогенными катализаторами или ферментными катализаторами. Гомогенные катализаторы включают сульфат железа, и затем KOH. Гетерогенные катализаторы включают CaO, K₃PO₄ и WO₃/ZrO₂. Ферментные катализаторы включают Novozyme 435, получаемый из Candida antarctica.

Переэтерификация может осуществляться на экстрагированном масле или предпочтительно непосредственно in situ в вегетативном материале растения. Вегетативные части растения можно высушить и смолоть до использования, чтобы получить композицию для реакции превращения, но это не является необходимым. Преимущество прямого превращения в эфиры жирных кислот, предпочтительно МЭЖК, состоит в том, что для превращения можно применять более низкую температуру и давление, и несмотря на это получать высокий выход продукта, например, содержащего по меньшей мере 50% масс. МЭЖК. Выход извлекаемой посредством переэтерификации бионефти вычисляют так же, как и для процесса ГТО.

Получение неполярных липидов

Методы, которые рутинно применяются в уровне техники, могут применяться для извлечения, обработки, очистки и анализа липидов, таких как ТАГ, выработанных клетками, организмами или их частями по настоящему изобретению. Такие методы раскрыты и к ним дается пояснение в источниках литературы, например, Fereidoon Shahidi, Current Protocols in Food Analytical Chemistry, John Wiley & Sons, Inc. (2001) D1.1.1-D1.1.11, и Perez-Vich с соавт. (1998).

Получение масла из вегетативных частей растения или семян

Обычно семена растения варят, прессуют и/или экстрагируют для получения неочищенного масла из семян, которое в дальнейшем дегуммируют, рафинируют, отбеливают и дезодорируют. В общем, методы измельчения семени известны из уровня техники. Например, семена масличных культур могут быть смягчены обрызгиванием их водой, чтобы увеличить содержание влаги, например, до 8,5%, и вальцуют, используя гладкий валик со щелью 0,23-0,27 мм. В зависимости от вида семени, вода может не добавляться до измельчения. Применение тепла инактивирует ферменты, облегчает дальнейшее разрушение клеток, слияние капелек липида и агломерацию частиц белка, что облегчает процесс экстракции.

В варианте реализации изобретения большая часть масла из семян высвобождается при прохождении через винтовой пресс. Жмых, выходящий из винтового пресса, в дальнейшем экстрагируют растворителем, например гексаном, с применением колонки с подводом тепла. Альтернативно, неочищенное масло из семян, полученное операцией прессования, может быть пропущено сквозь резервуар для отстаивания, оборудованный проволочным дренажным верхом, для удаления твердых веществ, которые сопровождают масло из семян в ходе операции прессования. Осветленное масло из семян может быть пропущено сквозь планшет и рамочный фильтр для удаления любых оставшихся тонких частиц твердого вещества. При желании, масло из семян, полученное в результате процесса экстракции, может быть объединено с осветленным маслом из семян для получения смеси неочищенного масла из семян.

Как только растворитель удаляют из неочищенного масла из семян, прессованные и экстрагированные части объединяют и обрабатывают обычными процедурами обработки липида (т.е., дегуммирование, рафинация каустической содой, обесцвечивание и дезодорирование).

Для экстракции липида из вегетативных частей растений по изобретению применяются способы, аналогичные известным из уровня техники для экстракции масла из семян. Один из путей представляет собой физическую экстракцию, которая часто исключает экстракцию растворителем. Экстракция с помощью шнекового пресса, как и способы экстракции с помощью винтового пресса и гидравлического пресса, представляет собой распространенный вид экстракции. Механическая экстракция обычно менее эффективна, чем экстракция растворителем, при которой органический растворитель (например, гексан) смешивают по меньшей мере с биомассой растения, предпочтительно после высушивания и перемалывания биомассы. Растворитель растворяет липид в биомассе и подобном материале, после чего раствор отделяют от биомассы механической операцией (например, с помощью описанных выше процессов прессования). Данная стадия отделения также может выполняться посредством фильтрации (например, с помощью пресс-фильтра или подобного устройства) или центрифугирования и т. п. В дальнейшем, органический растворитель может быть отделен от неполярного липида (например, дистилляцией). Вторая стадия разделения дает неполярный липид из растения и может давать повторно используемый растворитель, если он пригоден для традиционного сбора в виде паров. В варианте реализации изобретения содержание масла и/или белка в части растения или семени анализируют отражательной спектроскопией в ближней инфракрасной области, как раскрыто в Hom с соавт. (2007), до экстракции.

Если вегетативные части растения не будут использоваться для экстракции липида немедленно, их предпочтительно перерабатывают, чтобы максимально снизить содержание липида (см., например, Christie, 1993), например, сушкой вегетативных частей растения.

Дегуммирование

Дегуммирование является ранней стадией рафинирования масел, и его основная цель состоит в удалении из масла большинства фосфолипидов, которые могут присутствовать в количестве приблизительно 1-2% от общего экстрагированного липида. Добавление к неочищенному маслу ~2% воды, обычно содержащей фосфорную кислоту, при 70-80° C приводит к отделению большинства фосфолипидов, в сопровождении следовых количеств металлов и пигментов. Удаляемый нерастворимый материал, главным образом представляет собой смесь фосфолипидов и триацилглицеридов, и также известен как лецитин. Дегуммирование может осуществляться добавлением концентрированной фосфорной кислоты к неочищенному маслу из семян, чтобы перевести неспособные к гидратации фосфатиды в способную к гидратации форму, и к незначительному количеству присутствующих хелатов металлов. Смолу отделяют от масла из семян центрифугированием. Масло из семян может быть рафинировано добавлением достаточного количества раствора натрия гидроксида для титрования всех жирных кислот, с удалением образованного таким образом мыла.

Щелочная рафинация

Щелочная рафинация представляет собой один из процессов очистки для обработки неочищенного масла, иногда также называемый нейтрализацией. Она обычно следует за дегуммированием и предшествует обесцвечиванию. После дегуммирования масло из семян может быть обработано добавлением достаточного количества раствора щелочи, чтобы оттитровать все жирные кислоты и фосфорные кислоты, с последующим удалением образованного таким способом мыла. Пригодные щелочные материалы включают натрия гидроксид, калия гидроксид, натрия карбонат, лития гидроксид, кальция гидроксид, кальция карбонат и аммония гидроксид. Данный процесс обычно осуществляется при комнатной температуре и позволяет удалить фракцию свободных жирных кислот. Мыло удаляют центрифугированием или экстракцией растворителем мыла, и нейтрализованное масло промывают водой. При необходимости, любая дополнительная щелочь в масле может быть нейтрализована подходящей кислотой, например, хлористоводородной кислотой или серной кислотой.

Отбеливание

Отбеливание представляет собой процесс очистки, в ходе которого масла нагревают до 90-120°C, выдерживая при этой температуре в течение 10-30 минут в присутствии отбеливающей земли (0,2-2,0%) и в отсутствие кислорода, путем проведения операции в атмосфере азота, под струей пара или в вакууме. Данная стадия обработки масла введена с целью удаления нежелательных пигментов (каротиноиды, хлорофилл, госсипол и т.д.), и в ходе данного процесса также удаляются продукты окисления, следовые металлы, соединения серы и следы мыла.

Дезодорирование

Дезодорирование представляет собой обработку масел и жиров при высокой температуре (200-260°C) и низком давлении (0,1-1 мм рт. ст). Это обычно достигается посредством введения пара в масло из семян со скоростью приблизительно 0,1 мл/минуту/100 мл масла из семян. Дезодорирование может выполняться путем нагревания масла из семян до 260°C под вакуумом, с медленным введением пара в масло из семян со скоростью приблизительно 0,1 мл/минуту/100 мл масла из семян. Приблизительно через 30 минут обрызгивания, маслу из семян дают остыть под вакуумом. Масло из семян обычно переносят в стеклянную емкость и продувают аргоном перед хранением при сниженной температуре. Если количество масла из семян ограничено, масло из семян может быть размещено под вакуумом, например, в реакторе Парра, и нагрето до 260°C с выдерживанием в течение такого периода времени, чтобы запах был уничтожен. Такая обработка улучшает цвет масла из семян и удаляет большинство летучих веществ или пахучих соединений, включая любые оставшиеся свободные жирные кислоты, моноацилглицериды и продукты окисления.

Вымораживание

Вымораживание представляет собой процесс, иногда применяемый в коммерческом производстве масел для разделения масел и жиров на твердые (стеарин) и жидкие (олеин) фракции путем кристаллизации при температурах ниже температуры окружающей среды. Впервые он был применен к хлопковому маслу с целью получения свободного от твердых веществ продукта. Его обычно применяют для уменьшения содержания насыщенных жирных кислот в маслах.

Водоросли для получения липидов

За год водоросли могут образовывать массу, в 10-100 раз превышающую массу наземных растений, причем их можно выращивать в открытых водоемах (таких как водоемы по типу водоводов и озер) или в фотобиореакторах. Наиболее распространенные водоросли, вырабатывающие масло, в общем, могут включать диатомовые (бацилляриофиты), зеленые водоросли (хлорофиты), зелено-голубые водоросли (цианофиты) и коричнево-золотистые водоросли (хризофиты). Дополнительно, пятая группа, известная как гаптофитовые водоросли, может быть использована. Группы включают коричневые водоросли и гетероконты. Конкретные неограничивающие примеры водорослей включают Классы: Chlorophyceae, Eustigmatophyceae, Prymnesiophyceae, Bacillariophyceae. Bacillariophytes, способные к выработке масла, включают рода Amphipleura, Amphora, Chaetoceros, Cyclotella, Cymbella, Fragilaria, Hantzschia, Navicula, Nitzschia, Phaeodactylum и Thalassiosira. Конкретные неограничивающие примеры хлорофитов, способных к выработке масла, включают Ankistrodesmus, Botryococcus, Chlorella, Chlorococcum, Dunaliella, Monoraphidium, Oocystis, Scenedesmus и Tetraselmis. В одном из аспектов, хлорофиты могут представлять собой Chlorella или Dunaliella. Конкретные неограничивающие примеры цианофитов, способных к выработке масла, включают Oscillatoria и Synechococcus. Конкретный пример хризофитов, способных к выработке масла, включает Boekelovia. Конкретные неограничивающие примеры гаптофитовых водорослей включают Isochysis и Pleurochysis

Конкретные водоросли, пригодные в соответствии с настоящим изобретением, включают, например, виды Chlamydomonas, например, Chlamydomonas reinhardtii, виды Dunaliella, например, Dunaliella salina, Dunaliella tertiolecta, D. acidophila, D. Lateralis, D. martima, D. parva, D. polmorpha, D. primolecta, D. pseudosalina, D. Quartolecta, D. viridis, виды Haematococcus, виды Chlorella, такие как Chlorella vulgaris, Chlorella sorokiniana или Chlorella protothecoides, виды Thraustochytrium, виды Schizochytrium, виды Volvox, виды Nannochloropsis, Botryococcus braunii, который может содержать более 60%, масс липида, Phaeodactylum tricornutum, Thalassiosira pseudonana, виды Isochrysis, виды Pavlova, виды Chlorococcum, виды Ellipsoidion, виды Neochloris, виды Scenedesmus.

Урожай водорослей по изобретению можно собирать с помощью микросит, центрифугирования, флоккуляции (с применением, например, хитозана, алюминиевых квасцов и хлорида железа) и пенной флотации. Прерывание потока диоксида углерода может вынудить водоросли выпасть хлопьями самим по себе, что называется «аутофлоккуляцией». При пенной флотации, фермер аэрирует воду в пену, а затем снимает водоросли с поверхности. Ультразвуковой и другие методы сбора урожая в настоящий момент разрабатываются.

Липид может быть экстрагирован из водорослей механическим измельчением. При высушивании водорослевая масса сохраняет содержание липида, который в дальнейшем может быть «выжат» с помощью масляного пресса. Кроме того, осмотический шок может быть применен для высвобождения клеточных компонентов, например, липида из водорослей, а извлечение с помощью ультразвука может ускорить процессы экстракции. Химические растворители (например, гексан, бензол, петролейный эфир) часто применяются для экстракции липидов из водорослей. Дополнительно, ферментная экстракция с применением ферментов для разложения клеточных стенок может применяться для извлечения липидов из водорослей. Кроме того, суперкритический CO₂ может использоваться в качестве растворителя. В данном способе CO₂ превращают в жидкость под давлением и нагревают до точки, в которой он становится суперкритическим (обладает свойствами как жидкости, так и газа), что дает ему возможность выполнять роль растворителя.

В настоящем документе «маслянистый организм» обозначает такой, который аккумулирует по меньшей мере 20% сухой массы в виде триацилглицеридов. В настоящем документе «дрожжи» включают виды Saccharomyces, Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces carlbergensis, виды Candida, виды Kluveromyces, виды Pichia, виды Hansenula, виды Trichoderma, Lipomyces starkey и Yarrowia lipolytica. Предпочтительные дрожжи включают Yarrowia lipolytica или другие маслянистые дрожжи и штаммы видов Saccharomyces.

Применение растительных липидов

Липиды, полученные раскрытыми способами, находят множество применений. В некоторых вариантах реализации липиды используются в качестве пищевых масел. В других вариантах реализации липиды рафинируют и используют в качестве смазки или для других промышленных целей, например, синтеза пластмасс. В некоторых предпочтительных вариантах реализации липиды рафинируют для производства биодизельного топлива. Биодизельное топливо может быть получено из масел, получаемых из растений, водорослей и грибов по изобретению. Применение растительных триацилглицеридов для получения биологического топлива рассмотрено в Durrett с соавт. (2008). Полученное топливо обычно обозначается как биодизельное топливо и обладает динамическим интервалом вязкости 1,9-6,0 мм²с^-1 (ASTM D6751). Биоспирт можно получить из сахаров биомассы, не принадлежащих к липидам, которые остаются после экстракции липида. Общие способы получения биологического топлива могут быть найдены, например, в Maher и Bressler, 2007; Greenwell с соавт., 2010; Karmakar с соавт., 2010; Alonso с соавт., 2010; Liu с соавт., 2010a. Gong и Jiang, 2011; Endalew с соавт., 2011; и Semwal с соавт., 2011.

В настоящем изобретении предлагаются способы повышения содержания масла в вегетативных тканях. Растения по настоящему изобретению содержат повышенное количество энергии в листьях и/или стеблях, таким образом, что цельные надземные части растения можно собирать и использовать для получения биотоплива. Кроме того, уровень олеиновой кислоты значительно повышен, притом, что уровень полиненасыщенной жирной альфа-линоленовой кислоты (АЛК) снижен. Таким образом, растения, морские водоросли и грибы по настоящему изобретению снижают затраты на производство биотоплива.

Биодизельное топливо

Производство биодизельного топлива или алкиловых эфиров хорошо известно. Существует три основных способа получения сложного эфира из липидов: 1) катализированная основанием переэтерификация липида с использованием спирта; 2) прямая, катализируемая кислотой этерификация липида с использованием метанола; и 3) превращение липида в жирные кислоты, а затем в алкиловые эфиры с помощью кислотного катализа Может применяться любой способ получения алкиловых эфиров и глицериловых эфиров жирных кислот (в ходе которого этерифицируются одна, две или три гидроксигруппы на глицерине). Жирные кислоты могут быть получены, например, гидролизом или омылением ТАГ с использованием кислотных или основных катализаторов, соответственно, или фермента, например, липазы или эстеразы. Алкиловые эфиры жирных кислот могут быть получены путем введения жирной кислоты в реакцию со спиртом в присутствии кислотного катализатора. Кроме того, алкиловые эфиры жирных кислот могут быть получены путем введения ТАГ в реакцию со спиртом в присутствии кислотного или основного катализатора.

Эфиры глицерина могут быть получены, например, введением глицерина в реакцию с алкилгалогенидом в присутствии основания или с олефином или спиртом в присутствии кислотного катализатора. Алкиловые эфиры могут быть непосредственно смешаны с дизельным топливом или промыты водой или другими водными растворами с целью удаления различных примесей, в том числе катализаторов, перед смешиванием.

Авиационное топливо

Для улучшения характеристик биотоплива разработаны технологии термического и каталитического расщепления (разрыва) химических связей, что позволяет превращать бионефть в биологические альтернативы полученному из нефть дизельному топливу и другим видам топлива, такие как реактивное топливо.

Применение источника среднецепочечных жирных кислот, такого как вырабатывается рекомбинантной эукариотной клеткой по изобретению, трансгенным организмом, не относящимся к человеческому роду, или его частью по изобретению, трансгенным растением или его частью по изобретению, семенем по изобретению или трансгенной клеткой или трансгенным растением или его частью по изобретению, предотвращает потребность в высоких энергиях для расщепления цепи жирной кислоты и получения более коротких молекул, необходимых для реактивного топлива и других видов топлива с требованиями низкой температуры потока. Данный способ включает отщепление одной или более групп среднецепочечных жирных кислотных от глицеридов с получением глицерина и одной или больше свободных жирных кислот. Кроме того, способ включает отщепление одной или более среднецепочечных жирных кислот от глицерина и декарбоксилирование одной или более среднецепочечных жирных кислот с получением одного или более углеводородов для выработки реактивного горючего.

Пищевые (кормовые) продукты

Настоящее изобретение включает составы, которые могут применяться в качестве пищевых (кормовых) продуктов. Для целей настоящего изобретения, «пищевые (кормовые) продукты» включают любой пищевой продукт или препарат для потребления человеком или животным, который служит целям питания или образования тканей или снабжения энергией, и/или сохраняет, восстанавливает или поддерживает соответствующий пищевой статус или метаболическую функцию. Пищевые (кормовые) продукты во изобретению включают питательные составы для младенцев и/или маленьких детей.

Пищевые (кормовые) составы по изобретению включают, например, клетку по изобретению, растение по изобретению, часть растения по изобретению, семя по изобретению, экстракт по изобретению, продукт способа по изобретению или состав вместе с пригодным(и) носителем(ями). Термин «носитель» используется в самом широком смысле и включает любой компонент, который может иметь или не иметь пищевой ценности. Как будет понятно специалисту в данной области, носитель должен быть пригодным для использования (или используемым в достаточно низкой концентрации) в пищевом (кормовом) продукте, таким образом, что он не оказывает вредного влияния на организм, который потребляет пищевой (кормовой) продукт.

Пищевой (кормовой) продукт по настоящему изобретению содержит липид, полученный, прямо или косвенно, с применением способов, клеток или организмов, раскрытых в настоящем документе. Кроме того, состав может находиться в твердой или жидкой форме. Дополнительно, состав может содержать съедобные макронутриенты, витамины и/или минералы в количествах, желательных для конкретного применения. Количества таких ингредиентов будут варьировать, в зависимости от того, предназначен ли состав для применения у нормальных индивидуумов или индивидуумов с особыми потребностями например, индивидуумов, страдающих от метаболических расстройств и т. п.

Примеры пригодных носителей, обладающих пищевой ценностью, включают, без ограничений, макронутриенты, например, съедобные жиры, углеводы и белки. Примеры таких съедобных жиров включают, без ограничений, кокосовое масло, масло бораго, грибное масло, масло черной смородины, соевое масло и моно- и диглицериды. Примеры таких углеводов включают, без ограничений, глюкозу, съедобную лактозу и гидролизованный крахмал. Дополнительно, примеры белков, которые могут применяться в питательном составе по изобретению включают, без ограничений, белки сои, обработанную электродиализом сыворотку, обработанное электродиализом снятое молоко, молочную сыворотку или гидролизаты указанных белков.

Относительно витаминов и минералов, следующее может быть добавлено к составам пищевых (кормовых) продуктов по настоящему изобретению: кальций, фосфор, калий, натрий, хлорид, магний, марганец, железо, медь, цинк, селен, йод и витамины A, E, D, C и группы B. Другие такие витамины и минералы также могут быть добавлены.

Дополнительно, состав пищевого (кормового) продукта по настоящему изобретению может быть добавлен к пище даже в тех случаях, когда нет необходимости в дополнении рациона. Например, состав может быть добавлен к пище любого типа, включая, без ограничений, маргарин, масло, сыры, молоко, йогурт, шоколад, конфеты, легкие закуски, салатные масла, кондитерские масла, кондитерские жиры, мясо, рыбу и напитки.

Дополнительно, липид, полученный в соответствии с настоящим изобретением или клетками-хозяевами, трансформированными таким образом, чтобы содержать и экспрессировать указанные гены, может применяться в качестве пищевых добавок к корму для животного, с целью изменения состава жирных кислот в ткани животного или молоке до более желательного для потребления человеком или животным. Примеры таких животных включают овцу, теленка, лошадей и т. п. Дополнительно, пищевые (кормовые) продукты по изобретению могут использоваться в аквакультуре, с целью повышения уровней жирных кислот в организме рыбы, предназначенной для потребления человеком или животным.

Предпочтительные пищевые (кормовые) продукты по изобретению представляет собой растения, семя и другие части растения, такие как листья, плоды и стебли, которые могут быть использованы непосредственно в качестве пищи или корма человеком или другими животными. Например, животные могут пастись непосредственно на таких растениях, выращенных в поле, или получать более точно отмеренные количества в процессе управляемого кормления. Изобретение включает применение таких растений и частей растения в качестве корма, с целью повышения уровней полиненасыщенных жирных кислот в организме человека и других животных.

Для потребления животными, не принадлежащими к человеческому роду, ком может находиться в любой подходящей форме, например, но не ограничиваясь ими, силос, сено или подножный корм в поле. В варианте реализации изобретения корм для потребления животными представляет собой бобовое растение или его часть, принадлежащее к семейству Fabaceae (или Leguminosae) например люцерна, клевер, горох, люцерна посевная, бобы, чечевица, люпин, мескито, кэроб, соя и арахис.

Составы

Настоящее изобретение также включает составы, особенно фармацевтические составы, содержащие один или более липидов, полученных с применением способов по изобретению.

Фармацевтический состав может содержать один или более липидов, в комбинации со стандартным, известным, нетоксичным фармацевтически приемлемым носителем, адъювантом или растворителем, таким как буферизованный фосфатом раствор соли, вода, этанол, полиолы, растительные масла, увлажнитель или эмульсия, например, эмульсия вода/масло. Состав может находиться в жидкой или твердой форме. Например, состав может находиться в форме таблетки, капсулы, жидкости для приема внутрь, порошка, мази или крема для местного применения. Надлежащая сыпучесть может поддерживаться, например, поддержанием необходимого размера частиц в случае дисперсий и применением поверхностно-активных веществ. Кроме того, может быть желательным введение поддерживающих изотоничность агентов, например, сахаров, натрия хлорида и т. п. Помимо таких инертных разбавителей, состав может включать вспомогательные вещества, например, увлажнители, эмульгаторы и суспендирующие агенты, подсластители, вкусовые добавки и ароматизаторы.

Типичные дозы конкретной жирной кислоты составляют от 0,1 мг до 20 г, для приема от 1 до 5 раз в сутки (до 100 г в сутки) и, предпочтительно, находятся в интервале от приблизительно 10 мг до приблизительно 1, 2, 5 или 10 г в сутки (в виде одной или нескольких доз). Как известно из уровня техники, желательной является доза по меньшей мере около 300 мг/сутки жирной кислоты, особенно полиненасыщенной жирной кислоты. Однако следует понимать, что любое количество жирной кислоты будет полезным для субъекта.

Возможные способы введения фармацевтических составов по настоящему изобретению включают, например, энтеральный и парентеральный. Например, жидкий препарат можно вводить перорально. Дополнительно, гомогенная смесь может быть полностью диспергирована в воде, смешана в стерильных условиях с физиологически приемлемыми разбавителями, консервантами, буферами или пропеллентами, чтобы получить спрей или средство для ингаляций.

Дозы состава при введении субъекту могут быть определены специалистом, обладающим среднем уровнем квалификации в данной области, и зависят от различных факторов, таких как масса тела, возраст, общее состояние здоровья, анамнез, иммунный статус субъекта и т. п.

Дополнительно, составы по настоящему изобретению могут применяться для косметических целей. Составы могут быть добавлены к уже существующим косметическим составам, таким образом, что смесь, или жирная кислота, полученная согласно изобретению, может применяться в качестве единственного «активного» ингредиента в косметическом составе.

Полипептиды

В настоящем документе термины «полипептид» и «белок» в общем используются равнозначно.

Полипептид или класс полипептидов может быть определен по степени идентичности (% идентичности) его последовательности аминокислот референтной последовательности аминокислот или большему % идентичности одной референтной последовательности аминокислот, чем другой. % идентичности полипептида референтной последовательности аминокислот обычно определяется путем анализа GAP (Needleman и Wunsch, 1970; программное обеспечение GCG) с параметрами штрафа на открытие промежутка=5, и штрафа на продление промежутка=0,3. Длина последовательности запроса составляет по меньшей мере 100 аминокислот, и анализ GAP выравнивает две последовательности на протяжении участка длиной по меньшей мере 100 аминокислот. Даже более предпочтительно, длина последовательности запроса составляет по меньшей мере 250 аминокислот, и анализ GAP выравнивает две последовательности на протяжении участка длиной по меньшей мере 250 аминокислот. Даже более предпочтительно, анализ GAP выравнивает две последовательности на протяжении их полной длины. Полипептид или класс полипептидов может обладать такой же ферментной активностью как или отличной активностью от или не обладать активностью референтного полипептида. Предпочтительно, полипептид обладает ферментной активностью, составляющей по меньшей мере 10% от активности референтного полипептида.

В настоящем документе «биологически активный фрагмент» представляет собой часть полипептида по изобретению, которая обладает определенным видом активности полноразмерного референтного полипептида, например, активностью MGAT. Биологически активные фрагменты в настоящем документе исключают полноразмерный полипептид. Биологически активные фрагменты могут быть частью любого размера, до тех пор, пока они сохраняют определенную активность. Предпочтительно, биологически активный фрагмент сохраняет по меньшей мере 10% активности полноразмерного полипептида.

Относительно определенного полипептида или фермента, предусматривается, что более высокий % идентичности, чем раскрытый в настоящем документе, будет включать предпочтительные варианты. Таким образом, если это уместно, в свете минимального % идентичности, предпочтительно, полипептид/фермент содержит последовательность аминокислот, которая по меньшей мере на 60%, более предпочтительно по меньшей мере на 65%, более предпочтительно по меньшей мере на 70%, более предпочтительно по меньшей мере на 75%, более предпочтительно по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 85%, более предпочтительно по меньшей мере на 90%, более предпочтительно по меньшей мере на 91%, более предпочтительно по меньшей мере на 92%, более предпочтительно по меньшей мере на 93%, более предпочтительно по меньшей мере на 94%, более предпочтительно по меньшей мере на 95%, более предпочтительно по меньшей мере на 96%, более предпочтительно по меньшей мере на 97%, более предпочтительно по меньшей мере на 98%, более предпочтительно по меньшей мере на 99%, более предпочтительно по меньшей мере на 99,1%, более предпочтительно по меньшей мере на 99,2%, более предпочтительно по меньшей мере на 99,3%, более предпочтительно по меньшей мере на 99,4%, более предпочтительно по меньшей мере на 99,5%, более предпочтительно по меньшей мере на 99,6%, более предпочтительно по меньшей мере на 99,7%, более предпочтительно по меньшей мере на 99,8%, и даже более предпочтительно, по меньшей мере на 99,9% идентична соответствующей указанной SEQ ID NO.

Мутантные последовательности аминокислот полипептидов, раскрытых в настоящем документе, могут быть получены посредством введения подходящих нуклеотидных модификаций в нуклеиновую кислоту, определенную в настоящем документе, или синтезом желательного полипептида in vitro. Такие мутанты включают, например, делеции, вставки или замены остатков в пределах последовательности аминокислот. Комбинация делеций, вставок и замен может быть получена для введения в конечную конструкцию, при условии, что конечный полипептидный продукт обладает желательными характеристиками.

Мутантные (модифицированные) полипептиды могут быть получены с применением любой техники, известной в данной области, например, с применением стратегий направленной эволюции или рационального дизайна (см. ниже). Для продуктов, получаемых из мутантной/модифицированной ДНК, может быть легко проведен скрининг с применением способов, раскрытых в настоящем документе, чтобы определить, обладают ли они активностью фактора транскрипции, ацилтрансферазы жирных кислот или ПМВ.

При конструировании мутантов последовательности аминокислот, расположение сайта мутации и природа мутации будут зависеть от модифицированной характеристики (характеристик). Сайты мутации могут быть модифицированы индивидуально или сериями, например, (1) вначале заменой консервативными альтернативами аминокислот, а затем более радикальными вариантами, в зависимости от полученных результатов, (2) удалением целевого остатка, или (3) вставкой других остатков, смежных с размещенным сайтом.

Длина делеций в последовательности аминокислот, в общем, варьирует от приблизительно 1 до 15 остатков, более предпочтительно, приблизительно 1-10 остатков и обычно приблизительно 1-5 смежных остатков.

В мутантах с заменой по меньшей мере один остаток аминокислоты в полипептиде удален, и другой остаток вставлен на его место. Сайты, представляющие наибольший интерес для мутагенеза с замещением с целью инактивации ферментов, включают сайты, идентифицированные как активный(е) сайт(ы). Другими сайтами, представляющими интерес, являются такие, конкретные остатки которых, полученные от различных штаммов или видов, идентичны. Указанные положения могут быть важны с точки зрения биологической активности. Такие сайты, особенно находящиеся в пределах последовательности по меньшей мере трех других одинаково консервативных сайтов, предпочтительно заменяются относительно консервативным образом. Такие консервативные замены приведены в Таблице 1 под заголовком «примеры замен».

Таблица 1. Примеры замен.

Исходный Остаток	Примеры Замен
Ala (A)	val; leu; ile; gly
Arg (R)	lys
Asn (N)	gln; his
Asp (D)	glu
Cys (C)	ser
Gln (Q)	asn; his
Glu (E)	asp
Gly (G)	pro, ala
His (H)	asn; gln
Ile (I)	leu; val; ala
Leu (L)	ile; val; met; ala; phe
Lys (K)	arg
Met (M)	leu; phe
Phe (F)	leu; val; ala
Pro (P)	gly
Ser (S)	thr
Thr (T)	ser
Trp (W)	tyr
Tyr (Y)	trp; phe
Val (V)	ile; leu; met; phe, ala

В предпочтительном варианте мутантный/вариантный полипептид содержит только или не более чем один, два, три или четыре консервативных модификации аминокислот, по сравнению с природным полипептидом. Подробности относительно консервативных модификаций аминокислот приведены в Таблице 1. Как будет понятно специалисту, такие незначительные модификации могут быть спрогнозированы на рациональной основе как не влияющие на активность полипептида при экспрессии в рекомбинантной клетке. Мутанты с желательной активностью могут быть сконструированы с применением стандартных методик из уровня техники, например, случайным мутагенезом, направленным мутагенезом или мутагенезом насыщения в известных целевых генах, или путем обработки различных генов «тасованием» ДНК.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. Общие материалы и методы

Экспрессия генов в растительных клетках в системе временной экспрессии

Гены экспрессируют в клетках растения с использованием системы временной экспрессии, по существу как раскрыто Voinnet с соавт. (2003) и Wood с соавт. (2009). Бинарные векторы, содержащие кодирующий участок, которые экспрессируются высокоактивным конститутивным промотором e35S, содержащим дуплицированный энхансерный участок, вводят в Agrobacterium tumefaciens штамм AGL1. Химерный бинарный вектор, 35S:p19, для экспрессии вирусного супрессора сайленсинга p19 вводят в AGL1 отдельно, как раскрыто в WO2010/057246. Химерный бинарный вектор, 35S:V2, для экспрессии вирусного супрессора сайленсинга V2 вводят в AGL1 отдельно. Рекомбинантные клетки выращивают до стационарной фазы при температуре 28 °C в среде Лурия-Бертани с добавлением 50 мг/л канамицина и 50 мг/л рифампицина. Затем бактерии гранулируют центрифугированием при 5000 g в течение 5 минут при комнатной температуре, перед ресуспендированием до OD600=1,0 в инфильтрационном буфере, содержащем 10 мМ минимальной эссенциальной среды, pH 5,7, 10 мМ MgCl₂ и 100 мкМ ацетосирингона. Далее клетки инкубируют при 28°C со встряхиванием в течение 3 часов, после чего измеряют OD600, и объем каждой культуры, содержащей конструкцию вирусного супрессора 35S:p19 или 35S:V2, необходимый для достижения конечной концентрации OD600=0,125, помещают в свежую пробирку. Доводят до конечного объема упомянутым выше буфером. После этого осуществляют инфильтрацию листьев смесью культуры, и растения обычно выращивают еще в течение 3-5 дней после инфильтрации, перед выделением листовых пластинок для получения очищенного лизата клеток или выделения общего липида.

Трансформация Brassica napus

Семена Brassica napus стерилизуют с применением газообразного хлора, как описано Kereszt с соавт. (2007), и проращивают на питательной среде для культуры тканей. Котиледонные черешки с ножкой 2-4 мм выделяют, как описано Belide с соавт. (2013) и используют в качестве эксплантов. Готовят культуры A. tumefaciens AGL1 (Lazo с соавт., 1991), содержащие бинарный вектор, и котиледонные черешки инокулируют культурами, как описано Belide с соавт. (2013). Инфицированные котиледонные черешки культивируют на среде МС с добавлением 1 мг/л тидиазурона (ТДЗ)+0.1 мг/л 1-нафталинуксусной кислоты (НУК)+3 мг/л AgNO₃+250 мг/л цефотаксима, 50 мг/л тиментина и 25 мг/л канамицина и культивируют в течение 4 недель при 24 °C с фотопериодом света-темноты 16 часов/8 часов, с двухнедельными пассажами на такую же среду. Экспланты с зеленым каллюсом переносят в среду для инициации побегов (МС+1 мг/л кинетина+3 мг/л AgNO₃+250 мг/л цефотаксима+50 мг/л тиментина+25 мг/л канамицина) и культивируют еще в течение 2-3 недель. Маленькие побеги (~1 см) выделяют из устойчивого каллюса и переносят в среду для удлинения побегов (среда МС с добавлением 0,1 мг/л гибберелловой кислоты+3 мг/л AgNO₃+250 мг/л цефотаксима+25 мг/л канамицина) и культивируют еще в течение двух недель. Здоровые побеги с одним или двумя листьями отбирают и переносят в среду для корнеобразования (1/2 МС с добавлением 1 мг/л НУК+20 мг/л аденина сульфата (АДС)+3 мг/л AgNO₃+250 мг/л цефотаксима) и культивируют в течение 2-3 недель. ДНК выделяют из маленьких листьев устойчивых побегов с применением набора для выделения ДНК растения (Bioline, Александрия, Новый Южный Уэльс, Австралия), в соответствии с протоколом производителя. Присутствие последовательностей T-ДНК определяют методом ПЦР амплификации на геномной ДНК. Положительные, трансгенные побеги с корнями переносят в горшки, содержащие смесь для выращивания саженцев и выращивают в теплице с дневной температурой 24°C/ночной температурой 16°C (стандартные условия).

Анализ ферментов очищенного лизата листа

Ткани листа Nicotiana benthamiana, предварительно обработанные инфильтрацией, как изложено выше, измельчают в растворе, содержащем 0,1 М калий фосфатного буфера (pH 7,2) и 0,33 М сахарозы, с использованием стеклянного гомогенизатора. Гомогенат листьев центрифугируют при 20 000 g в течение 45 минут при температуре 4° C, после чего собирают каждый супернатант. Содержание белка в каждом супернатанте измеряют согласно Bradford (1976), с помощью мультиметочного счетчика Wallac1420 и реактива красителя для анализа белка Bio-Rad (Bio-Rad Laboratories, Геркулес, США, Калифорния). В анализах ацилтрансферазы используют 100 мкг белка согласно Cao с соавт. (2007), с некоторыми модификациями. Реакционная среда содержит 100 мМ Трис-HCl (pH 7,0), 5 мМ MgCl₂, 1 мг/мл альбумина телячьей сыворотки (не содержащего жирных кислот), 200 мМ сахарозы, 40 мМ холодного олеоил-КоА, 16,4 мкМ sn-2 моноолеоилглицерил[¹⁴C] (55 мКи/ммоль, American Radiochemicals, Сент-Луис, США, Миссури) или 6,0 мкМ динатриевой соли [¹⁴C]глицерил-3-фосфата (G-3-P) (150 мКи/ммоль, American Radiochemicals). Анализ проводят через 7,5, 15 или 30 минут.

Анализ липидов

Анализ содержания масла в семенах Arabidposis

Если содержание масла в семени или состав общих жирных кислот следует определить для семян небольшого размера, например, семян Arabidopsis, то жирные кислоты в семенах метилируют напрямую, без раздавливания семян. Семена сушат в эксикаторе в течение 24 часов, и приблизительно 4 мг семян переносят в стеклянный флакон емкостью 2 мл с навинчивающейся крышкой, покрытой слоем Тефлона. Раствор 0,05 мг тригептадеканоина (ТАГ с тремя C17:0 жирными кислотами) в 0,1 мл толуола помещают во флакон в качестве внутреннего стандарта. Жирные кислоты семени метилируют добавлением 0,7 мл 1 н метанольного HCl (Supelco) во флакон, содержащий материал семян. В дроблении семян для полного метилирования нет необходимости в случае семян небольшого размера, например, семян Arabidopsis. Смесь кратковременно обрабатывают вихревым перемешиванием и инкубируют при 80° C в течение 2 часов. После охлаждения смесей до комнатной температуры, 0,3 мл 0,9% NaCl (масс/об) и 0,1 мл гексана добавляют во флакон и тщательно перемешивают в течение 10 минут в Heidolph Vibramax 110. МЭЖК собирают в стеклянную вставку емкостью 0,3 мл и анализируют методом ГХ с плазменно-ионизационным детектором (ПИД), как описано ниже.

Площадь пика индивидуальных МЭЖК вначале корректируют на основе площади пиков известного количества таких же МЭЖК, присутствующих в коммерческом стандартном GLC-411 (NU-CHEK PREP, INC., США). GLC-411 содержит равные количества 31 жирной кислоты (% масс.), в интервале от C8:0 до C22:6. В случае жирных кислот, которые не присутствовали в стандарте, находят площадь пиков наиболее подобного МЭЖК. Например, площадь пика МЭЖК 16:1d9 используют для 16:1d7, и площадь пика МЭЖК C22:6 используют для C22:5. Скорректированные площади пиков используют для вычисления массы каждого МЭЖК в образце, по сравнению с массой внутреннего стандарта. Масло хранится, в основном, в форме ТАГ, и его массу вычисляют на основании массы МЭЖК. Общее количество моль глицерина определяют путем вычисления количества моль каждого МЭЖК и деления общего количества моль МЭЖК на 3. Содержание ТАГ вычисляют как сумму фрагментов глицерина и жирного ацила, с использованием формулы: %, масс. масла=100 x ((41 x общее количество моль МЭЖК/3)+(общее количество г МЭЖК - (15 x общее количество моль МЭЖК)))/грамм семени, где 41 и 15 представляют собой значения молекулярной массы фрагмента глицерина и метильной группы, соответственно.

Анализ содержания жирной кислоты в семенах Camelina и семенах рапса

Для определения состава жирных кислот в одиночных семенах большего размера, таких как семена рапса и Camelina, выполняют прямое метилирование жирных кислот в семени, как и для семян Arabidopsis, за исключением разрушения оболочек семян. Данный способ позволяет экстрагировать достаточное количество масла из семян, чтобы провести анализ состава жирных кислот. Для определения состава жирных кислот общего липида, экстрагированного из семян, семена раздавливают и липиды экстрагируют с помощью CHCl₃/MeOH. Аликвоты экстрагированного липида метилируют и анализируют методом ГХ. Содержание общего липида для объединенного в пул семени рапса (содержание масла в семенах) определяют при помощи двукратной экстракции липида с применением CHCl₃/MeOH из известной массы высушенных семян после раздавливания, с последующим метилированием аликвот липида вместе с 17:0 жирными кислотами в качестве внутреннего стандарта. В случае Camelina, липид из известного количества семян метилируют вместе с известным количеством 17:0 жирных кислот, как и в случае анализа масла Arabidopsis, и МЭЖК анализируют методом ГХ. Для количественного определения ТАГ, фракционируют ТАГ из экстрагированного липида с применением ТСХ и непосредственно метилируют на кремния диоксиде с применением 17:0 ТАГ в качестве внутреннего стандарта. Эти способы описаны более подробно ниже.

После сбора урожая в стадии зрелости растения, семена Camelina или рапса обезвоживают путем хранения семян в течение 24 часов при комнатной температуре в эксикаторе, содержащем силикагель в качестве поглотителя влаги. Содержание влаги в семенах обычно составляет 6-8%. Общие липиды экстрагируют из известной массы обезвоженных семян путем измельчения семян с помощью смеси хлороформа и метанола (2/1, об/об) в пробирке Эппендорфа, с использованием гомогенизатора для тканей Reicht (частота 22/секунду в течение 3 минут) и металлического шара. Добавляют один объем 0,1 М раствора KCl, и смесь встряхивают в течение 10 минут. Нижнюю неполярную фракцию собирают после центрифугирования смеси в течение 5 минут при скорости 3000 об/мин. Оставшуюся верхнюю (водную) фракцию промывают 2-мя объемами хлороформа при перемешивании в течение 10 минут. Вторую неполярную фракцию также собирают и объединяют в пул с ранее собранной. Растворитель испаряют из липидов в экстракте в потоке азота и высушенный общий липид растворяют в известном объеме хлороформа.

Для измерения количества липида в экстрагированном материале известное количество 17:0-ТАГ добавляют в качестве внутреннего стандарта и липиды из известного количества семян инкубируют в 1 н метанольной HCl (Supelco) в течение 2 часов при 80°C. Полученный таким образом МЭЖК экстрагируют гексаном и анализируют методом ГХ. Количество отдельного МЭЖК определяют на основании количества МЭЖК 17:0 ТАГ. Массу отдельных МЭЖК, после вычитания массы метильных групп, которыми этерифицированы МЭЖК, переводят в моль путем деления на молекулярную массу отдельных МЭЖК. Общее количество моль всех МЭЖК делят на три, чтобы вычислить количество моль ТАГ, и, таким образом, глицерина. Далее, количество моль ТАГ превращают в массу ТАГ. В конце, процент содержания масла на основе массы семени вычисляют с использованием массы семени, предполагая, что весь экстрагированный липид представляет собой ТАГ или эквивалент ТАГ для целей вычисления содержания масла. Данный способ базируется на Li с соавт., (2006). Другие семена подобного размера, кроме семян Camelina или рапса, также могут быть проанализированы данным способом.

Кроме того, содержание масла в семени рапса и других семенах было измерено методами ядерного магнитного резонанса (Rossell и Pritchard, 1991) пульсирующей волной NMS 100 Minispec (Bruker Pty Ltd Scientific Instruments, Германия), как описано в Примере 14. Метод ЯМР позволяет одновременно измерить содержание влаги. Кроме того, содержание масла в семенах можно измерить отражательной спектроскопией в ближнем ИК-диапазоне, например, с применением монохроматора NIRSystems модель 5000. Кроме того, содержание влаги может быть измерено в образце партии семян, посредством сушки семян в образце в течение 18 часов при температуре приблизительно 100°C, согласно Li с соавт. (2006).

Анализ липидов из образцов лизата листа

Липиды из образцов лизата экстрагируют с использованием смеси хлороформ/метанол/0,1 М раствор KCl (2:1:1) и извлекают. Различные классы липидов в образцах разделяют на пластинках Силикагель 60 для тонкослойной хроматографии (ТСХ) (MERCK, Дармштадт, Германия) (ТСХ), пропитанных 10% раствором борной кислоты. Система растворителей, используемых для фракционирования ТАГ из экстракта липидов, представляет собой хлороформ/ацетон (90:10, об/об). Отдельные классы липидов визуализируют посредством контакта пластинок с парами йода и идентифицируют посредством параллельного анализа аутентичных стандартов на такой же пластинке ТСХ. Пластинки приводят в контакт с фосфорными визуализационными экранами на протяжении ночи и анализируют с помощью визуализатора фосфора Fujifilm FLA-5000 перед жидкостно-сцинтиляционным подсчетом для количественного определения импульсов в минуту.

Выделение общего липида и фракционирование липидов из вегетативных тканей

Состав жирных кислот общего липида в образцах листьев и других вегетативных тканей определяли прямым метилированием жирных кислот в лиофилизированных образцах. Для количественной оценки общего липида, жирные кислоты в известной массе лиофилизированных образцов непосредственно метилируют с 17:0 СЖК. Для определения уровней общих ТАГ в образцах листьев, ТАГ из экстрагированного общего липида фракционируют с помощью ТСХ и метилируют в присутствии внутреннего стандарта 17:0 ТАГ, вследствие присутствия в листьях значительных количеств полярных липидов. Это осуществляют, как указано ниже. Ткани, включая образцы листа, лиофилизируют, взвешивают (сухая масса) и общие липиды, экстрагированные как описано Bligh и Dyer (1959) или с использованием смеси хлороформ/метанол/0,1 М раствор KCl (ХМК; 2:1:1) в качестве растворителя. Общие липиды извлекают из образцов листа N. benthamiana после лиофилизации, добавляя 900 мкл смеси хлороформ/метанол (2:1, об/об) на образец листа диаметром 1 см. Добавляют 0,8 мкг ДАГЭ на 0,5 мг массы сухого листа в качестве внутреннего стандарта, если должен быть проведен анализ ТСХ-ПИД. Образцы гомогенизируют с помощью гомогенизатора для тканей ULTRA-TURRAX производства IKA, после чего добавляют 500 мкл 0,1 М раствора KCl. Образцы обрабатывают вихревым перемешиванием, центрифугируют в течение 5 минут, и нижнюю фракцию собирают. Оставшуюся верхнюю фракцию экстрагируют повторно, добавляя 600 мкл хлороформа, обрабатывают вихревым перемешиванием и центрифугируют в течение 5 минут. Нижнюю фракцию извлекают и объединяют в пул с ранее собранной. Липиды сушат в потоке азота и ресуспендируют в 2 мкл хлороформа на мг сухой массы листа. Общие липиды листьев N. tabacum или образцов листа извлекают, как раскрыто выше, с некоторыми модификациями. Если 4 или 6 листовых дисков (каждый с площадью поверхности приблизительно 1 см²) объединяют, то используют 1,6 мл растворителя ХМК, а если объединяют 3 или менее листовых дисков, то используют 1,2 мл ХМК. Лиофилизированные ткани листа гомогенизируют в пробирке Эппендорфа, содержащей металлический шар, с помощью гомогенизатора для тканей Reicht (Qiagen) в течение 3 минут при частоте 20/секунду.

Отделение нейтральных липидов методами ТСХ и переметилирования

Известные объемы полных экстрактов листа, например, 30 мкл, помещают на пластинку ТСХ силикагель 60 (1×20 см) (Merck KGaA, Германия). Нейтральные липиды фракционируют на различные типы и отделяют от полярных липидов методом ТСХ в уравновешенной емкости для проявления, содержащей систему растворителей гексан/диэтиловый эфир (ДЭЭ)/уксусная кислота (70:30:1, об/об/об). Полосы ТАГ визуализируют посредством обрызгивания примулином, маркируют в УФ-свете, соскабливают с пластины ТСХ, переносят во флаконы для ГХ емкостью 2 мл и сушат с помощью N₂. Добавляют 750 мкл 1 н метанольного HCl (Supelco analytical, США) в каждый флакон, вместе с известным количеством C17:0 ТАГ в качестве внутреннего стандарта, в зависимости от количества ТАГ в каждом образце. Обычно, добавляют 30 мкг внутреннего стандарта для образцов с низким содержанием ТАГ, тогда как в случае образцов с высоким содержанием ТАГ применяют до 200 мк г внутреннего стандарта.

Образцы липида для анализа состава жирных кислот методом ГХ переметилируют путем инкубирования смесей при 80°C в течение 2 часов в присутствии метанольного HCl. После охлаждения образцов до комнатной температуры, реакцию останавливают, добавляя 350 мкл H₂O. Метиловые эфиры жирных кислот (МЭЖК) извлекают из смеси, добавляя 350 мкл гексана, обрабатывая вихревым перемешиванием и центрифугируя со скоростью 1700 об/мин в течение 5 минут. Верхнюю гексановую фракцию собирают и переносят во флаконы для ГХ с коническими вставками емкостью 300 мкл. После выпаривания, образцы ресуспендируют в 30 мкл гексана. По 1 мкл вводят в прибор для ГХ.

Количество индивидуальных и общих жирных кислот (ОЖК) в липидных фракциях определяют с помощью ГХ, определяя площадь каждого пика, и вычисляя посредством сравнения с площадью пика для известного количества внутреннего стандарта. Содержание ТАГ в листе вычисляют как сумму глицерильных и жирных ацильных фрагментов во фракции ТАГ, с использованием соотношения: %, масс. ТАГ=100 x ((41 x общее количество моль МЭЖК/3)+(общее количество МЭЖК в г - (15 x общее количество моль МЭЖК)))/грамм сухой массы листа, где 41 и 15 представляют собой молекулярную массу глицерильного фрагмента и метильной группы, соответственно.

Капиллярная газожидкостная хроматография (ГХ)

МЭЖК анализируют методом ГХ с использованием ГХ Agilent Technologies 7890A (Пало-Альто, Калифорния, США), оборудованного колонкой SGE BPX70 (70% цианопропил полисилфенилен-силоксан) (30 м x 0,25 мм внутренний диаметр, толщина пленки 0,25 мкм), ПИД, инжектором с расщеплением/без расщепления и аутосемплером с инжектором Agilent Technologies 7693 Series. Гелий используют в качестве газа-носителя. Образцы вводят в режиме расщепления (соотношение 50:1) при температуре печи 150°C. После инжекции температуру печи удерживают на уровне 150°C в течение 1 минуты, затем повышают до 210°C со скоростью 3°C/минуту^-1, и в конце до 240°C со скоростью 50°C/минуту^-1. Пики количественно измеряют с помощью программного обеспечения Agilent Technologies ChemStation (Rev B.04.03 (16), Пало-Альто, Калифорния, США), на основании ответа известного количества внешнего стандарта GLC-411 (Nucheck) и внутреннего стандарта C17:0-Me.

Количественное определение ТАГ с помощью Iatroscan

1 мкл экстракта липида помещают на один Chromarod-SII для ТСХ-ПИД Iatroscan™ (Mitsubishi Chemical Medience Corporation, Япония). Далее стойку Chromarod переносят в уравновешенную емкость для проявления, содержащую 70 мл системы растворителей гексан/CHCl₃/2-пропанол/муравьиная кислота (85: 10,716:0,567:0,0567, об/об/об/об). После инкубации в течение 30 минут, стойку Chromarod сушат в течение 3 минут при 100° C и немедленно сканируют на анализаторе ТСХ-ПИД Iatroscan MK-6s (Mitsubishi Chemical Medience Corporation. Япония). Площадь пиков внутреннего стандарта ДАГЭ и ТАГ интегрируют с помощью программного обеспечения для интеграции SIC-480II (версия: 7.0-E, SIC System instruments Co., LTD - Япония).

Количественное определение ТАГ осуществляют в две стадии. Вначале во всех образцах сканируют ДАГЭ для коррекции выходов экстракции, после чего концентрированные образцы ТАГ выбирают и разбавляют. Затем, количество ТАГ определяют в разбавленных образцах вторым сканированием в соответствии с внешней калибровкой, используя глицерилтрилинолеат в качестве внешнего стандарта (Sigma-Aldrich).

Количественное определение ТАГ в образцах листа методом ГХ

Площадь пика индивидуального МЭЖК вначале корректируют на основании площади пика известных количеств таких же МЭЖК, присутствующих в коммерческом стандарте GLC-411 (NU-CHEK PREP, Inc., США). Скорректированные значения площади пика используют для вычисления массы каждого МЭЖК в образце, по сравнению с внутренним стандартом. Поскольку масло хранится в основном в форме ТАГ, количество масла вычисляют на основании количества МЭЖК в каждом образце. Общее количество моль глицерина определяют, вычисляя количество моль МЭЖК, с последующим делением общего количества моль МЭЖК на 3 Количество ТАГ вычисляют как сумму глицерильных и жирных ацильных фрагментов, с использованием формулы: %, масс. масла=100 x ((41 x общее количество моль МЭЖК/3)+(общее количество г МЭЖК - (15 x общее количество моль МЭЖК)))/грамм сухой массы листа, где 41 и 15 представляют собой молекулярную массу глицерильного фрагмента и метильной группы, соответственно.

Пример 2. Увеличение содержания липида в вегетативных частях Nicotiana benthamiana

Генетическую конструкцию pJP3502 применяют для получения стабильно трансформированных растений Nicotiana benthamiana с помощью протокола опосредованной Agrobacterium трансформации, как описано в WO2013/096993 для Nicotiana tabacum. Отбирают трансгенные растения с резистентностью к канамицину и выращивают в теплице до состояния зрелости. Образцы листьев собирают на стадии завязывания семян и лиофилизируют. Определяют общее содержание жирных кислот (ОЖК) (% от сухой массы) и состав общего липида в образцах после экстракции в соответствии с Bligh и Dyer (1959), а также содержание и состав фракции триацилглицеридов (ТАГ). Данные приведены в Таблице 2 и Таблице 3. Образец листа с наиболее высоким содержанием масла получен от трансгенного растения №16, содержание ОЖК в котором составило 33% масс. Данный образец содержал 22,5% масс. ТАГ (в пересчете на сухую массу).

Наблюдается выраженная корреляция между изменением состава жирных кислот и содержанием ОЖК или ТАГ. Уровень олеиновой кислоты (C18:1n-9), повышает с увеличением содержания ОЖК и ТАГ, таким образом, что она является преобладающей жирной кислотой в листьях с высоким содержанием ТАГ, например, содержащих 66,8% ОЖК и 66,9% жирных кислот ТАГ в листьях с наиболее высоким содержанием ТАГ. Подобные корреляции наблюдаются для других жирных кислот, например, уровни АЛК снижаются до 4,9% ОЖК и 3,9% ТАГ в листьях с наиболее высоким содержанием ТАГ. Кроме того, наблюдается выраженная корреляция между уровнями C16:3 и содержанием как ОЖК, так и ТАГ, причем содержание C16:3 существенно снижается в образцах с высоким содержанием ОЖК и ТАГ.

Два растения из числа растений с высоким содержанием масла, №14 и №16, были дополнительно проанализированы в ходе фазы старения листьев, когда листья начали желтеть (Таблица 4 и Таблица 5). Несмотря на то, что изменение общего содержания жирных кислот было незначительным в образце с наиболее высокими показателями (32,9% против 33%), количество ТАГ повысилось до 32,6%. В указанных образцах липиды листьев практически полностью состояли из ТАГ.

Таблица 2. Состав и количество общих жирных кислот (ОЖК) (% от сухой массы) в листьях растений Nicotiana benthamiana, стабильно трансформированных T-ДНК из конструкции pJP3502. Образцы дополнительно содержат 0,1-0,3% C14:0 и 0,0-0,7% C20:1

	Образец	C16:0	C16:1	C16:3	C18:0	C18:1	C18:1d11	C18:2	C18:3n3	C20:0	C22:0	C24:0	% ОЖК
Контроль	1	24,9	0,9	6,9	4,2	11,7	0,0	2,6	46,4	0,8	0,6	0,8	0,6
	2	23,9	0,9	12,0	4,8	13,4	0,0	2,8	39,1	0,9	0,6	1,3	0,6
	3	24,1	0,9	10,4	4,7	10,5	0,0	2,8	43,7	0,9	0,6	1,2	0,5
	4	24,0	0,9	10,0	4,7	13,7	0,0	2,9	40,8	0,9	0,6	1,2	0,7
Трансгенные	7	18,6	0,2	2,3	4,2	35,8	0,3	4,7	28,0	2,3	1,5	1,3	2,4
	8	16,3	0,6	0,7	4,9	62,9	0,7	4,1	6,6	1,4	0,7	0,6	21,8
	11	25,9	1,2	2,8	3,2	47,3	0,8	3,1	13,3	1,3	0,7	0,1	14,7
	12	24,7	1,1	1,6	3,2	46,0	1,1	3,1	16,8	1,1	0,6	0,2	3,8
	13	20,3	0,6	21,1	4,7	15,0	0,0	2,9	33,4	1,2	0,0	0,6	1,2
	14	15,6	0,5	0,6	5,1	64,4	0,6	2,7	6,5	1,8	0,9	0,7	21,3
	15	17,7	0,4	0,2	5,6	60,7	0,4	2,7	7,5	2,2	1,2	0,9	21,0
	16	15,3	0,6	0,6	5,8	66,8	0,6	1,7	4,9	1,7	0,8	0,7	33,0
	17	25,5	0,0	7,4	4,2	8,6	0,0	3,7	48,8	0,7	0,0	0,9	1,4
	18	27,0	0,6	5,7	2,5	6,7	2,0	5,1	48,7	0,5	0,4	0,6	2,6
	19	21,1	0,8	2,1	5,2	35,9	1,0	10,0	20,8	1,5	0,9	0,2	4,3
	20	15,4	1,8	4,6	3,4	10,5	0,0	5,6	56,4	0,8	0,5	0,8	2,3
	21	16,3	0,7	6,6	3,6	10,2	0,0	10,1	49,7	1,4	0,8	0,7	1,6

Таблица 3. Состав жирных кислот и количество ТАГ (% от сухой массы) в листьях растений Nicotiana benthamiana, стабильно трансформированных T-ДНК из конструкции pJP3502. Образцы дополнительно содержат 0,1-0,3% C14:0 и 0,0-0,7% C20:1

	Образец	C16:0	C16:1	C16:3	C18:0	C18:1	C18:1d11	C18:2	C18:3n3	C20:0	C22:0	C24:0	% ТАГ
Контроль	1	57,7	0,0	0,0	6,6	7,4	0,0	0,0	28,3	0,0	0,0	0,0	0,1
	2	61,7	0,0	1,8	8,1	7,5	0,0	1,9	19,0	0,0	0,0	0,0	0,1
	3	69,9	0,0	0,0	8,7	6,0	0,0	0,0	15,5	0,0	0,0	0,0	0,1
	4	59,2	0,0	1,1	7,6	8,8	0,0	2,1	18,2	1,3	0,0	1,7	0,2
Трансгенные	7	26,7	0,2	1,0	6,1	38,1	0,4	3,8	16,8	3,6	2,1	0,2	2,5
	8	17,3	0,7	0,2	5,3	64,4	0,8	2,9	5,1	1,5	0,7	0,6	15,4
	11	28,9	1,5	0,2	3,4	49,9	1,0	2,6	9,3	1,3	0,7	0,8	9,7
	12	27,0	1,4	0,3	3,4	51,4	1,4	2,6	9,6	1,2	0,6	0,7	5,2
	13	39,7	1,3	4,0	5,5	17,2	0,0	2,4	27,9	1,0	0,0	0,6	0,6
	14	16,2	0,6	0,2	5,3	65,1	0,6	2,8	5,2	1,8	0,9	0,7	19,6
	15	18,4	0,4	0,1	5,9	61,0	0,4	2,9	5,8	2,3	1,3	1,0	14,9
	16	15,9	0,7	0,2	5,9	66,9	0,7	2,1	3,9	1,7	0,8	0,7	22,5
	17	29,8	0,0	0,0	4,2	13,5	0,0	5,1	47,4	0,0	0,0	0,0	0,4
	18	40,2	5,9	0,0	3,2	10,8	2,0	5,6	32,4	0,0	0,0	0,0	0,6
	19	24,6	1,0	0,7	6,8	43,6	1,1	9,4	8,7	1,9	1,0	0,8	3,7
	20	23,1	0,0	1,1	6,0	18,6	0,0	7,6	41,5	2,1	0,0	0,0	0,6
	21	28,1	0,0	2,5	6,2	19,9	0,0	11,5	27,7	2,7	1,3	0,0	0,7

Таблица 4. Состав и количество (% от сухой массы) общих жирных кислот (ОЖК) в листьях растений Nicotiana benthamiana, стабильно трансформированных T-ДНК из конструкции pJP3502, на стадии желтого листа. Образцы дополнительно содержат 0,1-0,3% C14:0 и 0,0-0,7% C20:1

	Образец	C16:0	C16:1	C16:3	C18:0	C18:1	C18:1d11	C18:2	C18:3n3	C20:0	22:0	C24:0	% ОЖК
Контроль	1	24,9	0,9	6,9	4,2	11,7	0,0	2,6	46,4	0,8	0,6	0,8	0,6
Трансгенные	14	17,2	0,5	0,7	6,0	64,7	0,6	0,1	6,8	2,1	0,0	0,6	29,0
	16	17,4	0,6	0,8	7,0	64,7	0,7	0,1	5,5	1,9	0,0	0,6	32,9

Таблица 5. Состав жирных кислот и количество (% от сухой массы) ТАГ в листьях растений Nicotiana benthamiana, стабильно трансформированных T-ДНК из конструкции pJP3502. Образцы дополнительно содержат 0,1-0,3% C14:0 и 0,0-0,7% C20:1

	Образец	C16:0	C16:1	C16:3	C18:0	C18:1	C18:1d11	C18:2	C18:3n3	C20:0	22:0	C24:0	% ТАГ
Контроль	1	38,1	0,0	0,0	7,0	10,6	0,0	2,9	40,3	1,1	0,0	0,0	0,1
Трансгенные	14	16,9	0,5	0,2	5,5	62,8	0,6	3,0	6,5	1,9	0,9	0,6	27,7
	16	17,3	0,7	0,2	6,4	63,3	0,6	2,2	5,5	1,8	0,8	0,6	32,6

Пример 3. Повышение содержания липидов в вегетативных частях растения Nicotiana tabacum

Конструкцию pJP3502 ранее применяли для трансформации Nicotiana tabacum (WO2013/096993). Семя, полученное от гомозиготного растения T1, трансформированного T-ДНК из pJP3502 и содержащее высокий уровень ОЖК и ТАГ, собирают и высевают с целью получения нового поколения растений-потомков T2, однородно гомозиготных по трансгенам. Горшки размещают в теплице таким образом, что зрелые листья растений частично перекрываются в форме типичного купола («купол парашюта»), как это происходило бы при выращивании в поле, или максимально контактируют с прямым солнечным светом (форма без купола). Образцы листьев получают от каждого полностью выросшего растения на стадии завязывания семян и лиофилизируют. Содержание жирных кислот определяют для фракции ТАГ (Таблица 6) после экстракции общих липидов из образцов в соответствии с Bligh и Dyer (1959). Уровни ТАГ в ткани зрелых листьев растений без купола обычно выше, чем в растениях с куполом, с максимально зарегистрированным содержанием ТАГ в листьях 20,6% от сухой массы листа.

Таблица 6. Содержание ТАГ (% от сухой массы) в ткани зрелых листьев трансгенных растений-потомков T2 (Линия 49), трансформированных T-ДНК pJP3502, по сравнению с диким типом (дт).

Растение	Условия выращивания	Содержание ТАГ	Растение	Условия выращивания	Содержание ТАГ
дт 1	Купол	0,0	дт 4	Без купола	0,0
дт 2	Купол	0,1	дт 5	Без купола	0,0
дт 3	Купол	0,1	49,6	Без купола	5,1
49,1	Купол	6,4	49,7	Без купола	5,6
49,2	Купол	3,6	49,8	Без купола	14,7
49,3	Купол	3,7	49,9	Без купола	6,3
49,4	Купол	1,9	49,10	Без купола	6,7
49,5	Купол	2,2	49,11	Без купола	19,5
			49,12	Без купола	16,4
			49,13	Без купола	20,6
			49,14	Без купола	15,7
			49,15	Без купола	15,1
			49,16	Без купола	6,3
			49,17	Без купола	18,6

Пример 4. Повышение содержания масла в вегетативных частях однодольных растений

Химерные конструкции ДНК разработаны таким образом, чтобы повысить содержание масла в однодольных растениях, например, растении C4 S. bicolor (сорго), путем экспрессии комбинации генов, кодирующих WRI1, LEC1 Z. mays (номер доступа AAK95562; SEQ ID NO: 155), DGAT и олеозина в трансгенных растениях. Несколько пар конструкций для биолистической сотрансформации разработаны и получены путем лигирования-клонирования рестрикционного фермента, как указано ниже.

Генетическая конструкция pOIL136 представляет собой бинарный вектор, содержащий три кассеты экспрессии однодольных, а именно ген селекционного маркера, кодирующий фосфинотрицин ацетилтрансферазу (ФАТ) для селекции растения, вторую кассету для экспрессии DGAT и третью для экспрессии олеозина. Вначале получают pJP136 амплификацией промотора гена актина из Oryza sativa (McElroy с соавт., 1990) и инсерции его в качестве фрагмента тупого-ClaI в pORE04 (Coutu с соавт., 2007) с получением pOIL094. Далее получают pOIL095 путем инсерции версии гена олеозина Sesamum indicum, кодон-оптимизированного для экспрессии в однодольных, в pOIL094 на сайте KpnI. pOIL093 получают клонированием версии кодон-оптимизированного для экспрессии в однодольных гена DGAT2a Umbelopsis ramanniana (Lardizabal с соавт., 2008) в качестве фрагмента SmaI-KpnI в вектор, уже содержащий промотор гена убихитина Zea mays. Далее получают pOIL134 клонированием кассеты экспрессии NotI DGAT2a из pOIL093 в pOIL095 на сайтах NotI. pOIL141 получают инсерцией гена селекционного маркера, кодирующего ФАТ в качестве фрагмента BamHI-SacI в вектор, содержащий промотор убихитина Z. mays. В конце получают pOIL136 клонированием кассеты экспрессии убихитина Z. mays::ФАТ в качестве фрагмента тупого-AscI в ZraI-AscI pOIL096. Генетическая конструкция pOIL136, таким образом, содержит следующие кассеты экспрессии: промотор актина O. sativa::олеозин S. indicum, промотор убихитина Z. mays::DGAT2a U. ramanniana и промотор убихитина Z. mays::ФАТ.

Подобный вектор pOIL197, содержащий NPTII вместо ФАТ, конструируют субклонированием кассеты убихитина Z. mays::NPTII из pUKN в качестве фрагмента HindIII-SmaI в сайты AscI (тупые) и HindIII pJP3343. Далее полученный вектор, pOIL196, расщепляют с помощью HindIII (тупые) и AgeI. Полученный фрагмент размером 3358 пар оснований клонируют в сайты ZraI-AgeI pOIL134 с получением pOIL197.

Разработан и получен набор конструкций, содержащих гены, которые кодируют WRI1 Z. mays (ZmWRI) или факторы транскрипции LEC1 (ZmLEC1) под контролем различных промоторов, для биолистической сотрансформации в комбинации с pOIL136, с целью оценки влияния активности промотора и специфичности в отношении клетки на функционирование WRI1 или LEC1, или обоих в случае комбинации, при экспрессии в вегетативных тканях растения C4, такого как сорго. Указанный отдельный набор конструкций не содержит гена селекционного маркера, за исключением pOIL333, который содержит NPTII в качестве селекционного маркера. Различные исследуемые промоторы были такими, как указано ниже. Промотор гена убихитина Z. Mays (pZmUbi) представляет собой активный конститутивный промотор однодольных, в то время как о расширенном промотор CaMV 35S (e35S), содержащем двойной участок энхансера, сообщалось, что он приводит к более низким уровням экспрессии трансгена (обзор в Girijashankar и Swathisree, 2009). Тогда как промотор гена фосфоенолпируваткарбоксилазы (pZmPEPC) Z. mays активен в мезофильных клетках листа (Matsuoka и Minami, 1989), месте фотосинтеза в видах растений C4, промотор гена маленькой субъединицы Z. mays Rubisco (pZmSSU) является специфичным для слоя клеток обкладки сосудистых пучков (Nomura с соавт., 2000; Lebrun с соавт., 1987), т.е. клеток, в которых имеет место фиксация углерода в растениях C4.

Экспрессия гена Z. mays, кодирующего SEE1 цистеинпротеазу (номер доступа AJ494982) идентифицирована, как сходная с экспрессией специфичного для старения промотора SAG12 A. thaliana в ходе развития растения. Таким образом, промотор размером 1970 пар оснований из гена SEE1 (SEQ ID NO: 216) был дополнительно выбран для контроля экспрессии генов, кодирующих факторы транскрипции WRI1 и LEC1 Z. mays. Далее, промоторы из гена, кодирующего белок «цинкового пальца» AlSAP Aeluropus littoralis (Ben Saad с соавт., 2011; номер доступа DQ885219; SEQ ID NO: 217) и промотор из чувствительного к сахарозе гена ArRolC A. rhizogenes (Yokoyama с соавт., 1994; номер доступа DQ160187; SEQ ID NO: 218) дополнительно выбраны для экспрессии ZmWRI1 в ткани стебля. Таким образом, каждый из этих промоторов индивидуально присоединяют в направлении против хода транскрипции к участкам, кодирующим ZmWRI1 или ZmLEC1, как указано ниже.

Промежуточный вектор, pOIL100, вначале получают клонированием последовательности, кодирующей WRI1 Z. mays, и участка терминатора транскрипции/полиаденилирования, фланкированных сайтами AscI-NcоI, в такие же сайты в бинарном векторе pJP3343. Различные версии конструкций для экспрессии WRI1 основаны на данном векторе и получены клонированием различных промоторов в pOIL100. pOIL101 получают клонированием фрагмента XhoI-Sal, содержащего промотор e35S с удвоенным участком энхансера, в сайт XhoI pOIL100. pOIL102 получают клонированием фрагмента HindIII-AvrII, содержащего промотор гена убихитина Z. mays, в сайты HindIII-XbaI pOIL100. pOIL103 получают клонированием фрагмента HindIII-NcoI, содержащего промотор гена PEPC Z. mays, в сайты HindIII-NcoI pOIL100. pOIL104 получают клонированием фрагмента HindIII-AvrII, содержащего промотор гена SSU Z. mays, в сайты HindIII-AvrII pOIL100.

Синтезирован синтетический фрагмент, содержащий участок промотора SEE1 Z. mays, фланкированный уникальными сайтами HindIII-XhoI. Данный фрагмент клонируют в направлении против хода транскрипции по отношению к участку, кодирующему белок WRI1 Z. mays, используя сайты HindIII-XhoI в pOIL100. Результирующий вектор обозначен pOIL329. Синтезирован содержащий синтетический фрагмент участок промотора AlSAP A. littoralis, фланкированный уникальными сайтами XhoI-XbaI. Данный фрагмент клонируют в направлении против хода транскрипции по отношению к участку, кодирующему WRI1 Z. mays, используя сайты XbaI-Xho I в pOIL100. Результирующий вектор обозначен pOIL330. Синтезирован содержащий синтетический фрагмент участок промотора ArRolC A. rhizogenes, фланкированный уникальными сайтами PspOMI-XhoI. Данный фрагмент клонируют в направлении против хода транскрипции по отношению к участку, кодирующему WRI1 Z. mays, используя сайты PspOMI-XhoI в pOIL100. Результирующий вектор обозначен pOIL335. В конце, бинарный вектор (pOIL333), содержащий кассету экспрессии SEE1 Z. mays::ZmLEC1, получают в три стадии. Вначале, вектор экспрессии 35S::GUS конструируют амплификацией участка, кодирующего GUS, с фланкирующими праймерами, содержащими сайты AvrII и KpnI. Далее полученный фрагмент клонируют в сайты SpeI-KpnI pJP3343. Результирующий вектор обозначен pTV111. Затем, участок 35S промотора pTV111 заменяют промотором SEE1Z. mays. На этой стадии последовательность SEE1 Z. mays амплифицируют с применением фланкирующих праймеров, содержащих уникальные сайты HindIII и XhoI. Результирующий фрагмент разрезают соответствующими рестрикционными ферментами и субклонируют в сайты SalI-HindIII pTV111. Результирующий вектор обозначен pOIL332. Далее последовательность, кодирующую ZmLEC1 амплифицируют с применением фланкирующих праймеров, содержащих сайты NotI и EcoRV. Полученный фрагмент субклонируют в соответствующие сайты pOIL332 с получением pOIL333.

Готовят ДНК для биолистической трансформации, расщепляя скелеты векторов pOIL101, pOIL102, pOIL103, pOIL104, pOIL197, pOIL329, pOIL330, pOIL333 и pOIL335 рестрикционными ферментами, с последующим выделением на геле. Затем ДНК pOIL197 смешивают с ДНК pOIL101, pOIL102, pOIL103, pOIL104, pOIL329, pOIL330, pOIL333 или pOIL335 и осуществляют трансформацию эксплантов S. bicolor посредством биолистически опосредованной трансформации. В качестве альтернативы, трансформацию с помощью конструкций для экспрессии таких же комбинаций генов осуществляют по отдельности или в форме сотрансформации путем опосредованной Agrobacterium трансформации (Gurel с соавт., 2009; Wu с соавт., 2014).

Трансгенные растения регенерируют и отбирают резистентные к антибиотикам. В случае, если двумя конструкциями сотрансформируют одно и то же событие, наблюдается повышенное содержание масла в тканях трансгенных растений, не относящихся к семенам.

Химерные конструкции ДНК для опосредованной Agrobacterium трансформации применяются для трансформации Zea mays (кукуруза), как описано Gould с соавт., (1991). Вкратце, экспланты верхушек побегов культивируют с трансгенной Agrobacterium в течение двух дней перед перемещением на соленую среду МС, содержащую канамицин и карбенициллин. После нескольких кругов субкультуривирования, самопроизвольно формируются трансформированные побеги и корни, и экспланты переносят в грунт. Кроме того, конструкции применяются для трансформации Hordeum vulgare (ячмень) и Avena sativa (овес) с применением способов трансформации, известных для указанных видов. Вкратце, в случае ячменя применяют культуры Agrobacterium для трансформации клеток в незрелых эмбрионах ячменя (сорт Golden Promise) в соответствии с опубликованными способами (Tingay с соавт., 1997; Bartlett с соавт., 2008) с некоторыми модификациями в том, что эмбрионы длиной от 1,5 до 2,5 мм выделяют из незрелых зерновок и удаляют эмбриональные оси. Полученные экспланты культивируют в течение 2-3 дней с трансгенной Agrobacterium, а затем культивируют в темноте в течение 4-6 недель на средах, содержащих тиментин и гигромицин для генерации эмбриогенного каллюса, после чего переносят в переходные среды в условиях слабой освещенности на две недели. Затем каллюсы переносят в регенерационные среды, чтобы позволить регенерацию побегов и корней, перед переносом регенерировавших ростков в грунт. Трансформированные растения получают и выращивают до стадии зрелости в теплице.

Пример 5. Повышение содержания масла в двудольных растениях

Содержание масла в двудольных растениях вида Trifolium repens (клевер), бобовых, обычно применяемых в качестве пастбищной культуры, повышается при экспрессии комбинации генов WRI1, DGAT и олеозина в вегетативных частях. Конструкцию pJP3502 применяют для трансформации T. repens путем опосредованной Agrobacterium трансформации (Larkin с соавт., 1996). Вкратце, генетическую конструкцию pJP3502 вводят в A. tumefaciens посредством стандартной процедуры электропорации. Бинарный вектор дополнительно содержит ген селекционного маркера 35S:NptII в пределах T-ДНК. Трансформированные клетки Agrobacterium выращивают на твердых средах ЛБ с добавлением канамицина (50 мг/л) и рифампицина (25 мг/л) и инкубируют при 28°C в течение двух дней. Единичную колонию используют для инициации свежей культуры. После 48 часов энергичного культивирования, клетки Agrobacterium применяют для обработки семядоль T. repens (сорт. Haifa), вырезанных из набухшего семени, как описано Larkin с соавт. (1996). После совместного культивирования в течение трех дней экспланты обрабатывают 25 мг/л канамицина, чтобы отобрать трансформированные побеги, а затем переносят в среду для корнеобразования для формирования корней, перед переносом в грунт.

Шесть трансформированных растений, содержащих T-ДНК из pJP3502, были получены и перенесены в грунт в теплице. Повышенное содержание масла наблюдалось в ткани некоторых из растений, не относящейся к семенам, причем одно растение продемонстрировало повышение уровней ТАГ в листьях более чем в 4 раза. Такие растения пригодны в качестве корма для животных, например, путем выращивания растений на пастбищах, что обеспечивает питание с повышенным содержанием энергии на единицу массы (плотность энергии) и приводит к повышению темпов прироста у животных.

Дополнительно, конструкцию pJP3502 применяют для трансформации других бобовых растений, таких как люцерна посевная (Medicago sativa) и люцерна усеченная (Medicago truncatula), по способу Wright с соавт. (2006), с получением трансгенных растений с повышенным содержанием ТАГ в вегетативных частях. Были получены три предполагаемых трансгенных растения M. truncatula. Трансгенные растения пригодны в качестве пастбищной культуры или в качестве сена или силоса как источника питания для животных, таких как крупный рогатый скот, овцы и лошади, обеспечивая повышенную плотность энергии в корме.

С целью повышения содержания масла в семенах бобовых, синтезирован фрагмент ДНК, содержащий комбинацию двух химерных генов, а именно (a) первого химерного гена, кодирующего WRI1 A. thaliana, экспрессируемый промотором запасаемого белка фазеолина бета-типа Phaseolus vulgaris и 5' НТУ плюс (b) второго химерного гена, кодирующего DGAT1 A. thaliana, экспрессируемый промотором вициллина Pisum sativum и 5' НТУ. Фрагмент ДНК вставляют в бинарный вектор pORE04, содержащий химерный ген, кодирующий олеозин, для получения конструкции T-ДНК, содержащей три химерных гена и ген селекционного маркера (Фиг. 2), которую применяют для трансформации Lupinus angustifolius, другого бобового растения, способом, который описан Pigeaire с соавт. (1997). Вкратце, экспланты верхушек побегов L. angustifolius культивируют с трансгенной Agrobacterium перед тщательным увлажнением раствором канамицина (20 мг/мл) и переносом на регенерирующую среду, не содержащую канамицина. Множественные пазушные побеги, развивающиеся из верхушек побегов, вырезают помещают на среду, содержащую 50 мг/л канамицина, и выжившие побеги переносят на свежую среду, содержащую 50 мг/л канамицина. Затем здоровые побеги переносят в грунт. Гены на T-ДНК экспрессируются в клетках трансформированных растений, повышая содержание масла в вегетативных тканях и семенах. Дополнительно применяют специфичный для семени промотор, управляющий геном WRI1, с целью повышения содержания масла в трансгенных семенах Lupinus.

Кроме того, конструкцию применяют для трансформации Glycine max, как описано Zhang с соавт. (1999), с получением трансгенных растений сои с повышенным содержанием ТАГ в семенах. Были получены трансгенные растения, что продемонстрировано ПЦР на ДНК, полученной из образцов растений. Растения выращивали до стадии зрелости и собирали урожай семян. Ожидается, что, по данным неразрушающего ЯМР, содержание масла в семенах будет повышено.

Вторая генетическая конструкция для повышения содержания масла в семенах люпина и сои сконструирована путем синтеза инсерции ДНК, содержащей три кассеты экспрессии генов, а именно первой, содержащей промотор β-конглицинина Glycine max, экспрессирующий DGAT2A Umbelopsis ramanniana, второй, содержащей промотор KTi3 Glycine max, экспрессирующий WRI1 A. thaliana, и третьей, содержащей промотор β-конглицинина Glycine max, экспрессирующий MGAT2 Mus musculus. Фрагмент SbfI-PstI данной инсерции клонируют в бинарный вектор pORE04 на сайте PstI, с получением pJP3569. Версию без гена MGAT2 получают, клонируя фрагмент SbfI-SwaI меньшего размера в pORE04 на сайтах EcoRV-PstI, с получением pJP3570, Кроме того, получены версии, содержащие только ген WRI1 и только ген DGAT2A. Указанные бинарные векторы применяют для трансформации Glycine max с получением трансгенного семени. Содержание масла в семени первичных трансформантов анализируют неразрушающим ЯМР перед посевом, чтобы получить семя T2.

Версия pJP3569, пригодная для трансформации люпина, получена ПЦР амплификацией кассет экспрессии WRI1 и DGAT2A в единичном ампликоне, адаптированном с помощью рестрикционных сайтов NotI. Фрагмент NotI клонируют в pJP3416 на сайте PspOMI с получением бинарного вектора pJP3678, содержащего ген селекционного маркера ФАТ.

Пример 6. Эксперименты для повышения содержания масла в вегетативных частях рапса

Два бинарных вектора экспрессии применяют для трансформации B. napus (сорт Оскар) с целью изучения влияния на аккумуляцию ТАГ в семени и/или вегетативных тканях. Вначале конструируют плазмиды pJP3414 путем инсерции последовательности, кодирующей кодон-оптимизированный белок WRI1 A. thaliana, в бинарный вектор 35S-pORE04, который содержит пустую кассету экспрессии 35S. Таким образом, T-ДНК pJP3414 содержит кодон-оптимизированную версию фактора транскрипции WRI1 A. thaliana под контролем конститутивного промотора 35S. Ткань листа 11 независимо трансформированных саженцев B. napus T0, трансформированных pJP3414, как описано в Примере 1, каждый образец, которой содержит повышенные уровни ТАГ, сравнивают с растениями, трансформированными пустым вектором (pORE04). Однако, ни в одном из случаев уровень ТАГ не превышал 1%. Максимальные уровни были обнаружены в линии 31, которая содержала до 0,58% ТАГ, в пересчете на сухую массу. Содержание масла в трансгенном семени T1 не было существенно повышенным, по сравнению с семенами дикого типа (Оскар) и трансформированными пустым контрольным вектором. Семена T1 трех линий, демонстрирующих самые высокие уровни ТАГ в ткани листа, регенерированы на среде МС, содержащей 3% сахарозы. Не наблюдалось разницы в прорастании через 5 и 8 дней, по сравнению с нетрансформированным контролем (Оскар).

В попытке дополнительного повышения уровней ТАГ в вегетативных тканях B. napus, применяют второй вектор, pJP3502 (Vanhercke с соавт., 2014), для трансформации B. napus (сорт Оскар). Уровни ТАГ количественно определяют в образцах трансгенных листьев, полученных перед цветением. Однако, содержание ТАГ дополнительно не повышается, и состав жирных кислот не отличается от нетрансформированных контрольных растений в такой же стадии роста.

Результаты экспериментов с B. napus, описанных в данном Примере, которые обеспечивают содержание ТАГ в листьях менее чем 1%, абсолютно противоречат приведенным в Примерах 2 и 3 для видов Nicotiana, которые обеспечивают около 20-30% ТАГ. Авторы изобретения тщательно изучали эти результаты в поиске объяснения разницы между видами. Идентифицировано несколько отличий между видами. Одно из отличий, которое изобретатели приняли как обеспечивающее существенную разницу, состояло в принадлежности Brassica napus к так называемым видам 16:3, тогда как вид Nicotiana относится к так называемым видам 18:3. Это связано с относительным вкладом так называемых прокариотных и эукариотных путей в синтез липида в пластидах (Фиг. 1), и, таким образом, по мнению авторов изобретения, с количеством ДАГ, доступным для синтеза ТАГ. Это навело авторов изобретения на идею о том, что модель с модификацией соотношения синтеза жирных кислот через эукариотный путь относительно прокариотного пути, например, уменьшение аккумуляцию 16:3 относительно 18:3, изменила бы уровень ТАГ, который аккумулируется в растительных клетках или фотосинтезирующих микробных клетках. Они ожидали, что модификация, которая изменит баланс в пользу эукариотного пути, будет обеспечивать преимущество с точки зрения уровней аккумуляции ТАГ, особенно в так называемых растениях 16:3. Вкратце, для превращения клеток ʺ16:3ʺ в более сходные с клетками ʺ18:3ʺ.

Авторами изобретения выдвинута гипотеза о том, что присутствие C18:1-АПБ в пластиде, которое ингибирует АККазу по механизм обратной связи, могло бы быть более выражено в растениях 16:3 за счет синтеза и удерживания жирных кислот в пластиде по прокариотному пути. И наоборот, ими выдвинута гипотеза о том, что растения C18:3 способны к аккумуляции более высоких уровней ТАГ в вегетативных тканях за счет повышенного экспорта C18:1 из пластид для снабжения эукариотного пути. Как показано в Примерах 2-4 настоящего документа, это наблюдалось в таких видах, как N. tabacum и N. benthamiana, в которых присутствует более высокое соотношение пластидных липидов C18:3/C16:3 относительно таких видов, как B. napus, которые содержат низкие уровни C18:3 в пластидных липидах. Данная модель, согласно гипотезе авторов изобретения, объяснила бы, почему стабильная трансформация генами экспрессии WRI+DGAT+олеозина из вектора pJP3502 как в N. tabacum, так и в N. benthamiana приводила к высоким уровням аккумуляции ТАГ и обширным изменениям в составе жирных кислот. И наоборот, трансформация таким же вектором B. napus приводила только к незначительному повышению аккумуляции ТАГ и небольшому изменению состава жирных кислот. Данную модель исследовали, как описано ниже.

Пример 7. Модификация пластидной экспрессии GPAT

Повышенная экспрессия пластидной GPAT в растительных клетках

Целый ряд экспериментов выполнялся для проверки гипотезы о том, что присутствие высокоактивного прокариотного пути 16:3 в растении (т.е. так называемом растении 16:3) обеспечивало бы значительно более низкие уровни ТАГ в вегетативных тканях при введении комбинации генов на pJP3502, относительно растений 18:3. Такие эксперименты описаны в следующих Примерах. Вначале, авторы изобретения оценивали, может ли повышенная экспрессия пластидной GPAT воспрепятствовать высокому уровню аккумуляции ТАГ в трансгенном N. benthamiana, увеличивая поток в прокариотном пути.

Кодирующий участок для экспрессии пластидной GPAT Arabidopsis thaliana, ATS1 (Nishida с соавт., 1993), амплифицируют методом ОТ-ПЦР из общей РНК A. thaliana и клонируют в качестве фрагмента EcoRI-PstI в бинарный вектор экспрессии pJP3343 под контролем промотора 35S, с получением конститутивного вектора экспрессии pOIL098. Влияние повышенной экспрессии пластидной GPAT на генетическом фоне высокого содержания масла в листьях определяли путем инфильтрации ткани листа с высоким содержанием масла химерным вектором pOIL098. Ткань листа с высоким содержанием масла генерируют совместной инфильтрацией бинарными векторами экспрессии WRI1 и DGAT (Пример 1) или инфильтрацией pOIL098 листьев растения Nicotiana, стабильно трансформированного T-ДНК из pJP3502 или другого вектора высокого содержания масла. Ожидается, что содержание масла будет снижено в инфильтрованных пятнах на листьях, соэкспрессирующих ген, кодирующий ATS1. Это определяют методом анализа ОЖК и ТАГ как доли от сухой массы образца. Дополнительно, это определяют путем наблюдения за инкорпорацией меченного ацетата в жирные кислоты, продуцированные микросомами или листовыми лизатами, полученными из инфильтрованных пятен на листьях.

Аккумуляция масла в Arabidopsis thaliana с мутантной пластидной GPAT

Мутант ats1 A. thaliana содержит разрушительную мутацию в гене, кодирующем пластидную GPAT, которая снижает активность пластидной GPAT до уровня только 3,8% от дикого типа (Kunst с соавт., 1988). Уровни аккумуляции ТАГ за пределами семян, по меньшей мере в листьях, стеблях и корнях, как в материнской A. thaliana, так и растении с мутантной ats1 оценивают и сравнивают. T-ДНК конструкции pJP3502 для повышенной экспрессии комбинации генов, кодирующих WRI1, DGAT и олеозин, вводят путем трансформации в растения обоих генотипов. Комбинация генов в T-ДНК pJP3502 повышает синтез жирных кислот в обоих типах генетического фона растений. Однако, ожидается, что в присутствии мутантного ats1 аккумуляция ТАГ в среднем будет существенно выше, чем в трансгенных растениях, полученных от генотипа дикого типа (материнский), за счет снижения активности пластидной GPAT и таким образом уменьшения потока жирных кислот в пластидный прокариотный путь. Соотношение C16:3 и C18:3 жирных кислот существенно снижается в листьях с мутантным ats1, как трансформированных, так и нетрансформированных.

Сайленсинг гена, кодирующего пластидную GPAT в растительных клетках

В дополнение к генетической модификации растения введением мутации в ген, кодирующий пластидную GPAT, поток жирных кислот через прокариотный путь 16:3 может быть уменьшен и, таким образом, повышено содержание масла в вегетативных частях путем сайленсинга пластидной GPAT. Это демонстрируется получением трансгенной кассеты, содержащей конститутивный или специфичный для листьев промотор, экспрессирующий шпилечную РНК, соответствующую участку гена, кодирующего пластидную GPAT выбранного вида. В качестве примера, кассету экспрессии шпилечной РНКи получают с использованием фрагмента SalI-EcoRV последовательности кДНК пластидной GPAT A. thaliana размером 581 пара оснований (NM_179407, SEQ ID NO: 177). Кроме того, участок любого гена, кодирующего пластидную GPAT, последовательность которого в высокой степени идентична нуклеотидной последовательности NM_179407, можно применять для конструирования гена с целью экспрессии шпилечной РНК для сайленсинга эндогенного гена пластидной GPAT. Конструкция шпРНКи, содержащая фрагмент пластидной GPAT N. benthamiana размером 732 пары оснований (SEQ ID NO: 219), фланкированный уникальными сайтами SmaI и KasI, разработана с целью стабильной трансформации N. tabacum. Синтезированный фрагмент пластидной GPAT N. benthamiana субклонируют в сайты SmaI-KasI pJP3303, с получением pOIL113. Ожидается, что уменьшение удерживания жирных кислот в пластидах будет приводить к повышению аккумуляции ТАГ, особенно при объединении с компонентом ʺPushʺ, таким как повышенная экспрессия фактора транскрипции, такого как WRI1, или компонентом ʺPullʺ, таким как DGAT или PDAT и/или сниженная активность SDP1 или ТГД.

Инактивация гена, кодирующего пластидную GPAT или, более того, любого гена может быть достигнута с применением способов ККППРП/Cas9. Например, инактивация гена, кодирующего пластидную GPAT A. thaliana (номер доступа NM_179407) может осуществляться разрушением гена, опосредованным ККППРП/Cas9/короткой направляющей РНК (крРНК), с последующим мутагенезом посредством восстановления ДНК негомологичным соединением концов (НГСК). Перед направленным расщеплением ДНК, Cas9 стимулирует разделение цепей ДНК и позволяет КНРНК гибридизоваться со специфической последовательностью длиной 20 нуклеотидов гена-мишени. Это помещает ДНК-мишень в активный сайт Cas9 в надлежащей ориентации относительно сайта связывания с PAM (тандемные гуанозиновые нуклеотиды). Такое расположение позволяет отдельным нуклеазным доменам Cas9 независимо расщеплять каждую цепь последовательности ДНК-мишени в точке, отстоящей на 3 нуклеотида в направлении против хода транскрипции относительно сайта PAM. Далее происходит восстановление двухцепочечного разрыва ДНК путем подверженного ошибкам НГСК, в ходе которого происходят делеции или инсерции нескольких нуклеотидов, что приводит к инактивации гена пластидной GPAT. Последовательности кнРНК, нацеленные на ген GPAT A. thaliana, идентифицированы и отобраны с применением веб-инструмента CRISPRP (Xie с соавт., 2014). Последовательность-мишень длиной 20 нуклеотидов может быть любой последовательностью длиной 20 нуклеотидов в пределах гена-мишени, в том числе в пределах не кодирующих участков гена, таких как промотор или интрон, при условии, что она является специфической последовательностью в пределах генома. Последовательность может быть вставлена в бинарный вектор, содержащий кассету экспрессии ККППРП/Cas9/кнРНК и селекционный маркер канамицина для растений (Jiang с соавт., 2013) и трансформирована в растительные клетки путем опосредованного Agrobacterium превращения. Можно осуществить скрининг трансгенных растений T1 на предмет мутаций в гене пластидной GPAT методом ПЦР амплификации и секвенирования ДНК.

Пример 8. Повышение экспрессии тиоэстеразы в растительных клетках

Синтез жирных кислот de novo происходит в пластидах эукариотных клеток, где жирные кислоты синтезируются при связывании с ацилпереносящим белком в форме конъюгатов ацил-АПБ. После удлинения цепи до ацильных групп C16:0 и C18:0, а затем введения кратной связи в C18:1 во время связывания с АПБ, жирные кислоты отщепляются от АПБ тиоэстеразами и входят в эукариотный путь посредством экспорта из пластид и транспорта в ЭР, где они принимают участие в биогенезе мембран и запасных липидов. В хлоропластах процесс экспорта включает две стадии: во-первых, ацильные цепи высвобождаются в форме свободных жирных кислот по действием ферментов тиоэстераз (тиоэстераза жирного ацила; ТЖА), во-вторых, введение в реакцию с КоА с образованием эфиров ацил-КоА, что катализируется длинноцепочечными ацил-КоА синтетазами (ДЦАС). A. thaliana содержит 3 тиоэстеразы жирного ацила, которые могут отличаться на основании их специфичности в отношении ацильной цепи. FATA1 и FATA2 преимущественно гидролизуют ненасыщенные ацил-АПБ, в то время как насыщенные цепи ацил-АПБ обычно расщепляются FATB.

С целью изучения влияния соэкспрессии тиоэстеразы и генов, кодирующих полипептиды WRI1 и/или DGAT, на содержание общих жирных кислот, содержание ТАГ и состав жирных кислот получают химерные гены для каждой из трех тиоэстераз A. thaliana путем инсерции кодирующих участков в бинарный вектор экспрессии pJP3343 для временной экспрессии в клетках листьев N. benthamiana промотором 35S. Кодирующие белок участки FATA1 A. thaliana (номер доступа NP_189147.1, SEQ ID NO: 202) и FATA2 (номер доступа NP_193041.1, SEQ ID NO: 203) амплифицируют из кДНК стручков с применением праймеров, содержащих сайты EcoRI и PstI, и далее клонируют в pJP3343 с применением таких же рестрикционных сайтов. Полученные векторы экспрессии обозначены pOIL079 и pOIL080, соответственно. Кодирующий белок участок гена FATB A. thaliana (номер доступа NP_172327.1, SEQ ID NO: 204) амплифицируют с применением праймеров, содержащих фланкированные сайты NotI и SacI, и клонируют в соответствующие рестрикционные сайты pJP3343, с получением pOIL081. Конструкциями pOIL079, pOIL080 и pOIL081 инфильтруют ткань листа N. benthamiana, отдельно или в комбинации с конструкциями, содержащими гены. фактора транскрипции WRI1 A. thaliana (AtWRI1) (pJP3414) и/или DGAT1 ацилтрансферазы (AtDGAT1) (pJP3352). Для сравнения, химерные гены, кодирующие FatB1 Cocos nucifera (CnFATB1) (pJP3630), FatB2 C. nucifera (CnFATB2) (pJP3629) вводят в ткань листа N. benthamiana параллельно с тиоэстеразами Arabidopsis, чтобы сравнить влияние полипептидов FatB, обладающих специфичностью в отношении СЦЖК, с тиоэстеразами Arabidopsis, не обладающими специфичностью в отношении СЦЖК. Все эксперименты с инфильтрацией включают химерный ген для экспрессии супрессора сайленсинга p19, как описано в Примере 1. Отрицательный контроль инфильтруют только T-ДНК p19.

Наблюдалось синергетическое влияние для экспрессии тиоэстеразы и повышенной экспрессии WRI1 и/или DGAT на уровни ТАГ в листьях N. benthamiana. Экспрессия генов тиоэстеразы без генов WRI1 или DGAT существенно повышает уровни ТАГ свыше низкого уровня в отрицательном контроле (только p19). Например, экспрессия тиоэстеразы FATB2 кокоса приводила к повышению уровней ТАГ в листьях в 8,2 раза, по сравнению с отрицательным контролем. Соэкспрессия фактора транскрипции WRI1 A. thaliana с каждой из тиоэстераз дополнительно повышала уровни ТАГ, по сравнению с контролем AtWRI1. Соэкспрессия каждой из тиоэстераз CnFATB1 и CnFATB2 кокоса с WRI1 приводила к более высоким уровням ТАГ, чем каждой из трех тиоэстераз A. thaliana с WRI1. Интересно, что противоположное наблюдалось, если ацилтрансфераза DGAT1 A. thaliana соэкспрессировалась в комбинации с тиоэстеразой и WRI1. Это наводит на мысль о лучшей специфичности в отношении ацильной цепи тиоэстераз A. thaliana и ацилтрансферазы DGAT1 A. thaliana, что приводит к увеличенному потоку ацильных цепей от ацил-АПБ в ТАГ. Кроме того, не-СЦЖК тиоэстеразы были значительно более эффективны с точки зрения увеличения процента олеиновой кислоты в общем содержании жирных кислот в листьях. Соэкспрессия AtWRI1, AtDGAT1 и AtFATA2 приводила к наиболее высокому уровню ТАГ в листьях, обеспечивая уровень, который более чем в 1,6 раза превышал наблюдаемый при соэкспрессии AtWRI1 и AtDGAT1 без тиоэстеразы. Указанные эксперименты подтвердили синергетическое повышение синтезе и аккумуляции масла, при соэкспрессии WRI1 и DGAT, а также продемонстрировали дальнейшее синергетическое увеличение при добавлении тиоэстеразы к комбинации.

Три различных бинарных вектора экспрессии сконструированы для оценки влияния соэкспрессии генов, кодирующих WRI1, DGAT1 и FATA, на уровни ТАГ и состав жирных кислот в листьях стабильно трансформированного N. tabacum. Вектор pOIL121 содержит ген SSU::AtWRI1 для экспрессии AtWRI1 промотором SSU, гена 35S::AtDGAT1 для экспрессии AtDGAT промотором 35S и гена enTCUP2::AtFATA2 для экспрессии AtFATA2 промотором enTCUP2, который является конститутивным промотором. Указанные генетические конструкции получают из pOIL38, вначале расщепляя ДНК с помощью NotI для удаления гена, кодирующего олеозин S. indicum. Кодирующий белок участок гена FATA2 A. thaliana амплифицируют и фланкируют сайтами NotI с применением ДНК pOIL80 в качестве шаблона. Далее этот фрагмент вставляют в сайт NotI pOIL38. Затем pOIL121 служит материнским вектором для pOIL122, который содержит дополнительную кассету шпилечной РНК enTCUP2::SDP1 для опосредованного РНКи сайленсинга эндогенного гена SDP1 в трансгенных растениях. Чтобы этого достичь, полноразмерную кассету шпильки SDP1 N. benthamiana выделяют из pOIL51 (Пример 11) в виде фрагмента SfoI-SmaI и клонируют в сайт SfoI pOIL121, с получением pOIL122 (Фиг. 3). Третий вектор, pOIL123, содержащий гены SSU::WRI1 и 35S::DGAT1 и ген шпилечной РНК enTCUP2::SDP1 получают подобным образом, клонируя кассету шпилечной РНК enTCUP2::SDP1 в виде фрагмента SfoI-SmaI в сайт SfoI pOIL36.

Вкратце, векторы содержали комбинации генов:

pOIL121: SSU::AtWRI1, 35S::AtDGAT1, enTCUP2::AtFATA2.

pOIL122: SSU::AtWRI1, 35S::AtDGAT1, enTCUP2::AtFATA2, enTCUP2::шпилька SDP1.

pOIL123: SSU::AtWRI1, 35S::AtDGAT1, enTCUP2::шпилька SDP1.

Каждую из трех конструкций применяют для получения трансформированных растений N. tabacum (сорт Wi38) путем опосредованной Agrobacterium трансформации. Каждое из соэкспрессии тиоэстеразы FATA2 A. thaliana или сайленсинга эндогенной липазы ТАГ SDP1 в комбинации с экспрессией AtWRI1 и AtDGAT1 приводило к дальнейшему повышению уровней ТАГ, по сравнению с экспрессией AtWRI1 и AtDGAT1 в отсутствие как гена тиоэстеразы, так и гена сайленсинга SDP1. Наиболее высокий выход ТАГ получают с применением pOIL122 посредством сочетанного действия всех четырех химерных генов.

Необходимо отметить, что N. benthamiana является растением 18:3. Такие же конструкции pOIL079, pOIL080 и pOIL081 применяются для трансформации A. thaliana, растения 16:3.

Авторами изобретения была задумана модель, повышающая пластидный экспорт жирных кислот, например, снижения аккумуляции ацил-АПБ в пластидах путем повышения активности тиоэстеразы жирного ацила, таким образом, повышая биосинтеза жирных кислот в результате снижения ингибирования ацетил-КоА карбоксилазы (АККазы) по механизму обратной связи (Andre с соавт., 2012; Moreno-Perez с соавт., 2012). Повышенная экспрессия тиоэстеразы повышает экспорт ацильных цепей из пластид в ЭР, таким образом, предлагая эффективную связь между так называемыми «Push» и «Pull» стратегиями метаболического конструирования.

Пример 9. Выработка среднецепочечных жирных кислот в вегетативных растительных клетках

Eccleston с соавт. (1996) изучали аккумуляцию C12:0 и C14:0 жирных кислот как в семенах, так и в листьях трансгенных растений Brassica napus, трансформированных конститутивно экспрессирующимся геном, кодирующим тиоэстеразу California Bay Laurel 12:0-АПБ (Umbellularia californica). В указанном исследовании сообщалось об аккумуляции значительных уровней C12:0 в зрелых семенах B. napus, но только очень низкие уровни C12:0 наблюдались в ткани листа, несмотря на высокие уровни экспрессии и активности тиоэстеразы 12:0-АПБ. Такие же результаты были получены при трансформации гена в A. thaliana (Voelker с соавт., 1992). Данное исследование было расширено соэкспрессией LPAAT Cocos nucifera и тиоэстеразы Umbellularia californica, что приводило к повышению аккумуляции общей C12:0, в также к увеличению фракции трилаурина в семенах B. napus (Knutzon с соавт., 1999). Таким образом, уровень техники указывает на то, что синтез среднецепочечных жирных кислот (СЦЖК) в вегетативных растительных клетках был проблематичным.

Для оценки влияния введения тиоэстераз, обладающих специфичностью в отношении СЦЖК, в комбинации с другими генами, описанными в настоящем документе, химерные ДНК для экспрессии несколько различных тиоэстераз синтезированы и введены в растительные клетки, отдельно или в комбинациях. Кодирующие белок участки для тиоэстераз из организмов, которые доказанно вырабатывают СЦЖК (Jing с соавт., 2011), синтезируют и вставляют в виде фрагментов EcoRI в бинарный вектор pJP3343, который содержит кассету экспрессии промотора 35S (Vanhercke с соавт., 2013). Тиоэстеразы были следующими: тиоэстераза Cinnamomum camphora14:0-АПБ (обозначена как Cinca-TE) (Yuan с соавт., 1995; номер доступа Q39473.1; SEQ ID NO: 193), ацил-АПБ тиоэстераза FatB1 Cocos nucifera (Cocnu-TE1;номер доступа AEM72519.1 SEQ ID NO: 194), ацил-АПБ тиоэстераза FatB2 Cocos nucifera (Cocnu-TE2; номер доступа AEM72520.1; SEQ ID NO: 195), ацил-АПБ тиоэстераза FatB3 Cocos nucifera (Cocnu-TE3; номер доступа AEM72521.1; SEQ ID NO: 196), ацил-(АПБ) тиоэстераза типа B Cuphea lanceolata (Cupla-TE) (Topfer с соавт., 1995; номер доступа CAB60830.1; SEQ ID NO: 197), Cuphea viscosissima FatB1 (Cupvi-TE; номер доступа AEM72522.1; SEQ ID NO: 198) и 12:0-АПБ тиоэстераза Umbellularia californicа (Umbca-TE) (Voelker с соавт., 1992; номер доступа Q41635.1; SEQ ID NO: 199). Все указанные тиоэстеразы принадлежат к классу FATB и обладают специфичность в отношении СЦЖК. Дополнительно были клонированы кодирующие белок участки для LPAAT C. nucifera (Cocnu-LPAAT, тип СЦЖК) (Knutzon с соавт., 1995; номер доступа Q42670.1; SEQ ID NO: 200) и пластидной LPAAT1 A. thaliana (Arath-PLPAAT; номер доступа AEE85783.1; SEQ ID NO: 201). Ранее было показано, что Cocnu-LPAAT повышает инкорпорацию СЦЖК в положении sn-2 ТАГ в семенах (Knutzon с соавт., 1995), тогда как пластидную LPAAT A. thaliana (Arath-PLPAAT) (Kim с соавт., 2004) применяли в качестве контрольной LPAAT, чтобы определить влияние любой специфичности в отношении СЦЖК, которой Cocnu-LPAAT может обладать. Первая LPAAT использует ацил-КоА в качестве одного субстрата и в своем природном окружении функционирует в ЭР, тогда как последняя ПLPAAT использует ацил-АПБ в качестве субстрата и функционирует в пластиде.

Гены тиоэстеразы вводят в листья Nicotiana benthamiana путем опосредованной Agrobacterium инфильтрации, как описано в Примере 1, наряду с геном для соэкспрессии супрессора сайленсинга p19 и Cocnu-LPAAT или Arath-ПLPAAT, чтобы определить, могут ли СЦЖК вырабатываться в листовой ткани N. benthamiana. Инфильтрованные зоны листьев собирают и лиофилизируют в течение пяти дней после инфильтрации со смесями Agrobacterium, после чего определяют общее содержание и состав жирных кислот методом ГХ, как описано в Примере 1 (Таблица 7). Для данных, приведенных в Таблице 7, ошибка представляет стандартное отклонение для трех инфильтраций. Инфильтрованные зоны контрольных листьев содержали только следовые (< 0,1%) или нулевые уровни C12:0 и C14:0 жирных кислот, тогда как C16:0 присутствовала в количестве 14,9%±0,6 в ОЖК общих липидов листа. Уровни C12:0 значительно повышались только при экспрессии Cocnu-TE3 (1,2%±0,1) и Umbca-TE (1,6%±0,1). Экспрессия каждой из изучаемых тиоэстераз приводила к аккумуляции C14:0 в листьях N. benthamiana, причем Cinca-TE давала наиболее высокий уровень, 11,3%±1,0, Кроме того, экспрессия каждой из тиоэстераз, за исключением Umbca-TE, приводит к повышенным уровням C16:0. Наиболее высокий уровень аккумуляции C16:0 (35,4%±4,7) наблюдается при экспрессии Cocnu-TE1. Выраженный некроз инфильтрованных зон наблюдался в листьях при экспрессии только генов FATB, который, похоже, коррелирует с уровнем выработки СЦЖК. Авторы изобретения считают, что некроз, вероятно, возникает за счет уровней свободных жирных кислот (СЖК) выше оптимальных, а также за счет обширной аккумуляции СЦЖК скорее в фосфолипидных пулах липида, чем в ТАГ.

Таблица 7. Состав общих жирных кислот листа (% от общих жирных кислот листа) для выбранных жирных кислот в листьях Nicotiana benthamiana, инфильтрованных различными тиоэстеразами (ТЭ) и LPAAT. Результаты сгруппированы по соинфильтрованому гену (единичные гены (кроме p19, присутствующего во всех образцах), Arath-LPAAT+различные ТЭ, Cocnu-LPAAT+различные ТЭ). «Контроль» означает неинфильтрованный лист N. benthamiana, тогда как «только p19» содержит только ген супрессора сайленсинга. 16:3 представляет собой 16:3^Δ7,10,13; 18:3 представляет собой 18:3^Δ9,12,15. Гены идентифицированы, как определено в тексте.

		12:0	14:0	16:0	16:3	18:3
	Контроль	0,2±0	0,1±0	14,0±0,2	8,1±0,1	57,2±0
	только p19	0,2±0	0,1±0	14,9±0,6	7,0±0,8	53,1±0,7

Тесты для одинарного гена	Cinca-TE	0,4±0	11,3±1,0	21,9±0,7	5,0±0,2	38,5±1,0
	Cocnu-TE1	0,2±0	6,3±0,6	35,4±4,7	4,2±1,4	29,9±5,5
	Cocnu-TE2	0,2±0	7,1±0,3	31,9±2,2	4,7±0,5	32,9±2,8
	Cocnu-TE3	1,2±0,1	7,2±1,3	19,6±1,6	5,7±0,5	44,8±2,9
	Cupla-TE	0,2±0	1,1±0,2	21,8±2,9	6,0±0,6	48,2±3,1
	Cupvi-TE	0,2±0	0,6±0,1	17,3±1,3	6,4±0,4	52,9±2,1
	Umbca-TE	1,6±0,1	1,1±0,2	14,4±0,8	6,5±0,3	52,7±0,1
	Arath-LPAAT	0,2±0	0,4±0,5	17,4±1,0	6,2±0,3	51,4±1,3
Cocnu-LPAAT	0,1±0,1	0,1±0	15,1±1,5	6,7±0,5	52,2±4,2

+Arath-LPAAT	Cinca-TE	0,2±0	7,8±0,1	24,6±0,4	5,3±0,2	39,2±1,5
	Cocnu-TE1	0,2±0	4,6±1,3	35,3±1,4	4,4±0,7	32,7±2,0
	Cocnu-TE2	0,2±0	6,1±0,4	32,5±1,8	4,7±0,1	34,1±0,6
	Cocnu-TE3	0,9±0,2	8,5±0,4	21,4±1,9	5,6±0,2	41,7±0,6
	Cupla-TE	0,2±0	1,0±0,1	23,4±2,7	5,9±0,5	47,3±1,2
	Cupvi-TE	0,2±0	0,6±0	19,0±0,2	6,3±0,1	51,4±1,0
Umbca-TE	1,2±0,2	1,1±0,1	15,4±0,2	6,5±0,2	52,3±1,3

+Cocnu-LPAAT	Cinca-TE	0,7±0,2	14,9±1,6	23,0±3,7	4,8±1,4	35,4±3,3
	Cocnu-TE1	0,2±0	5,4±0,9	40,2±2,8	3,3±0	27,8±1,1
	Cocnu-TE2	0,2±0	6,6±1,0	38,3±1,1	3,7±0,2	28,2±1,1
	Cocnu-TE3	2,0±0,3	10,9±1,0	24,4±1,8	4,9±0,5	37,7±0,9
	Cupla-TE	0,5±0,1	1,6±0,3	22,2±0,6	6,0±0,3	46,9±2,0
	Cupvi-TE	0,5±0	1,1±0	19,6±0,8	6,0±0,2	49,8±0,3
Umbca-TE	3,3±0,5	1,2±0,1	13,9±0,4	6,4±0,2	51,3±1,7

Соинфильтрация химерным геном для экспрессии Arath-PLPAAT с тиоэстеразами демонстрирует тенденцию к снижению аккумуляции как C12:0, так и C14:0, по сравнению с отсутствием LPAAT, при небольшом повышении аккумуляции C16:0. И наоборот, соинфильтрация генами для экспрессии Cocnu-LPAAT или Umbca-TE повышает аккумуляцию C12:0 до 3,3%±0,5, тогда как обнаруженная аккумуляция C14:0 в образце Cinca-TE+Cocnu-LPAAT составляет 14,9%±1,6. Самые высокие уровни C16:0 наблюдались после соэкспрессии Cocnu-TE1 и Cocnu-LPAAT (40,2%±2,8). Добавление LPAAT к каждой зоне инокуляции снижает степень некроза листовой ткани. Неожиданно было обнаружено, что C8:0 и C10:0 жирные кислоты также вырабатывались в растительных клетках в экспериментах с временной экспрессией. Аккумуляция C8:0 и C10:0 не наблюдается при экспрессии только тиоэстеразы. Однако, если экспрессия тиоэстеразы сочетается с соэкспрессией CuphoFatB с CnLPAAT и AtWRI1, обнаруживается присутствие C8:0 в концентрации 0,27 ± 0,09% от общего содержания жирных кислот в растительных клетках. Кроме того, в случае соэкспрессии CuplaFatB с CnLPAAT и AtWRI1, было обнаружено присутствие C10:0 в 0,54 ± 0,16% от общего содержания жирных кислот.

Полученные результаты указывают на то, что специфичность тиоэстераз в отношении ацила, о которой сообщалось ранее, наблюдаемая при экспрессии в семени, по существу сохранялась в листьях N. benthamiana, и указанная система экспрессии была валидной системой для оценки специфичности в отношении ацила. Добавление пластидной ПLPAAT A. thaliana не повышает аккумуляции СЦЖК, хотя иприводит к несколько повышенной аккумуляции C16:0 в клетках A. thaliana. И наоборот, LPAAT C. nucifera повышает аккумуляцию в листьях N. benthamiana, жирных кислот C12:0, C14:0 и C16:0, которые найдены в масле C. nucifera (Laureles с соавт., 2002). Это указывает на то, что природная LPAAT N. benthamiana не экспрессируется с высокими уровнями в листовой ткани или не обладает высокой активностью в отношении субстратов C12:0, C14:0 и C16:0.

Выработка среднецепочечных жирных кислот в вегетативных растительных клетках, аккумулирующих высокие уровни ТАГ

Авторами изобретения ранее была достигнута выработка 15% ТАГ в листьях N. tabacum путем координированной экспрессии химерных генов, кодирующих WRI1 A. thaliana, DGAT1 A. thaliana и олеозин S. indicum (Vanhercke с соавт., 2014). Для оценки возможности достижения или повышения аккумуляция СЦЖК, которая наблюдалась после экспрессии тиоэстераз в комбинации с LPAAT, в растительных клетках, вырабатывающих высокие уровни ТАГ (Vanhercke с соавт., 2013), указанные гены соэкспресируют. Осуществляют инфильтрацию комбинациями C12:0, C14:0 и C16:0 тиоэстеразы/LPAAT с наилучшими результатами (Cocnu-LPAAT плюс тиоэстераза Umbca-TE, Cinca-TE и Cocnu-TE2, соответственно), с предварительно описанными комбинациями Arath-WRI1+DGAT и без них (Vanhercke с соавт., 2013). Данные проиллюстрированы на Фиг. 4.

Аккумуляция соответствующих СЦЖК (C12:0 для Umbca-TE, C14:0 для Cinca-TE и C16:0 для Cocnu-TE2) является систематической и значительно повышается, в основном при добавлении Arath-WRI1 к комбинациям: C12:0 составляет 9,5%±0,9 от общих жирных кислот листа в образцах Umbca-TE+Cocnu-LPAAT+Arath-WRI1, уровень C14:0 составляет 18,5%±2,6 в образцах Cinca-TE+Cocnu-LPAAT+Arath-WRI1, и уровень C16:0 составляет 38,3%±3,0 в образцах Cocnu-TE2+Cocnu-LPAAT+Arath-WRI1. Обнаружено, что инфильтрация тиоэстеразой плюс Arath-WRI1 оказывает существенно более выраженное влияние на C12:0 в присутствии Umbca-TE, на C14:0 в присутствии Cinca-TE и на C16:0 в присутствии Cocnu-TE2, по сравнению с инфильтрацией тиоэстеразой плюс Cocnu-LPAAT в отсутствие WRI1 (Фиг. 5). Добавление Cocnu-LPAAT к смесям тиоэстераза плюс Arath-WRI1 оказывало влияние на состав жирных кислот, с относительно небольшим повышением C12:0 и C14:0, наблюдаемом в наборах Umbca-TE и Cinca-TE, и небольшим снижением C16:0 в наборе Cocnu-TE2. Максимальные зарегистрированные уровни составляли: 8,8%±1,1 C12:0 в общих жирных кислотах листа, наблюдаемые в образцах Umbca-TE+Arath-WRI1+Cocnu-LPAAT, 14,1%±3,5 C14:0 в образцах Cinca-TE+Arath-WRI1+Cocnu-LPAAT и 48,6%±3,7 C16:0 в образцах Cocnu-TE2+Arath-WRI1.

Интересно, что единственной тиоэстеразой, для которой Arath-WRI1 не повышает настолько сильно аккумуляцию СЦЖК, является Cocnu-TE2, хотя аккумуляция по-прежнему значительно возрастает. Добавление только указанного гена приводит к повышению аккумуляции C16:0 с 16,0%±0,4 до 37,3%±0,6, тогда как дальнейшее добавление Arath-WRI1 увеличивает данный показатель только на 48,6%±1,7. Это может происходить благодаря промежуточным соединениям C12:0 и C14:0, относительно недолго существующим в ходе пластидного синтеза жирных кислот, по сравнению с C16:0.

Другие эффекты, которые были отмечены, включают повышение уровней C16:0 и C18:1^Δ9 и снижение уровня C18:3^Δ9,12,15 в присутствии Arath-WRI1. Дальнейшее добавление Cinca-TE и Cocnu-TE2 все еще дополнительно снижает уровни C18:3^Δ9,12,15. В противоположность этому, дополнительное количество C12:0 вырабатывается после добавления Arath-WRI1 к Umbca-TE, по-видимому, скорее за счет C16:0, чем дополнительного количества C18:3^Δ9,12,15 (Фиг. 5).

Дополнительно, подмножество образцов было проанализировано методом ЖХ-МС, с целью лучшего понимания аккумуляции СЦЖК. Пластидные галактолипиды моногалактозилдиацилглицерин (MGDG) и дигалактозилдиацилглицерин (ДГДГ) содержат только низкие уровни C12:0 и C14:0 и сниженные уровни C16:0, по сравнению с инфильтрацией контрольным p19. Основным видом C12:0-содержащих MGDG в образцах Umbca-TE является 30:3, указывая на то, что одна C18:3 и одна C12:0 были солокализованы на моногалактозильном скелете. Другим основным видом C12:0-содержащих MGDG является 28:0, указывая на то, что второй жирной кислотой является C16:0. Основными видами C14:0-содержащих MGDG в образцах Cinca-TE являются 28:0 и 30:0, указывая на то, что значительная доля C14:0 в MGDG принадлежит ди-C14:0 или C16:0. C12:0-содержащие и C14:0-содержащие MGDG не были обнаружены в контрольной выборке p19. И наоборот, C16:0-содержащие виды MGDG демонстрируют тенденцию к снижению в образцах Cocnu-TE2. Все основные виды MGDG в образцах дикого типа (C16:3-содержащий 34:6, C18:3-содержащий 34:6 и C18:3-содержащий 36:6) демонстрируют тенденцию к снижению при экспрессии трансгенов. Указанное снижение является наиболее выраженным в присутствии комбинации WRI+DGAT.

Только следовые уровни C12:0-содержащих видов ДГДГ наблюдаются в образцах Umbca-TE. Основными C14:0-содержащими видами, наблюдаемыми в образцах Cinca-TE, являются 28:0 и 30:0, оба из которых отсутствуют в контроле. Кроме того, указанные виды наблюдаются с повышенными уровнями в образцах Cocnu-TE2, но только со следовыми уровнями в образцах Umbca-TE. Все основные виды ДГДГ в образцах дикого типа (C16:0-содержащий 34:3, C18:3-содержащий 34:3 и C18:3-содержащий 36:6) демонстрируют тенденцию к снижению при экспрессии трансгенов. Указанное снижение является наиболее выраженным в присутствии WRI.

Подобным образом, содержание видов ТАГ в общем значительно повышено во всех образцах, содержащих WRI+DGAT, как было описано ранее (Vanherckeetal.,2013) (Vanhercke с соавт., 2013). Обнаружено, что виды C12:0 являются преобладающими в высоком образце Umbca-TE ТАГ, виды C14:0 в образце Cinca-TE с высоким содержанием ТАГ, и виды C16:0 в высоком образце Cocnu-TE2 ТАГ. Анализ фракции ТАГ методом ЖХ-МС демонстрирует, что C12:0-содержащий 36:0 является преобладающим видом ТАГ, в два раза превышая уровень видов ТАГ, содержащих C18:3, во всех образцах Umbca-TE, содержащих фактор транскрипции WRI. Кроме того, C14:0-содержащий 42:0, является преобладающим видом ТАГ в образцах Cinca-TE, сотрансформированных LPAAT, DGAT, WRI или WRI+DGAT, хотя ответ значительно более выражен в случае образцов, содержащих WRI. Содержание нескольких C16:0-содержащих видов ТАГ значительно повышено как в образцах Cinca-TE с высоким содержанием ТАГ (например, 44:0 и 50:3), так и в образцах Cocnu-TE2 (например, 46:0, 48:0, 50:2 и 50:3). Повторимся, наиболее выраженное повышение уровня C16:0 наблюдается в присутствии WRI.

Стабильная трансформация для выработки СЦЖК в вегетативных тканях

Получена серия генетических конструкций в бинарном векторе, с целью стабильной трансформации растений, например, табака комбинациями генов для выработки СЦЖК в вегетативных тканях, чтобы идентифицировать оптимальные комбинации генов. Указанные конструкции содержат ген для экспрессии WRI1 под контролем промотора SSU (см. Пример 8, pOIL121) или специфичного для старения промотора SAG12, ген, кодирующий DGAT масличной пальмы (ниже), ген, кодирующий LPAAT кокоса (CocnuLPAAT, см. выше) под контролем промотора enTCUP, и несколько генов, экспрессирующих различные тиоэстеразы жирного ацила (FATB), экспрессируемые промотором 35S или промотора SAG12. Они описаны ниже.

Клонирование гена, кодирующего DGAT Elaeis guineensis (масличная пальма)

Для начальной оценки различных ферментов DGAT, в том числе характерных ферментов DGAT1, DGAT2 и DGAT3, последовательности-кандидаты DGAT масличной пальмы были идентифицированы на основе опубликованной транскриптомы (Dussert с соавт., 2013) и кодон-оптимизированы для экспрессии в Nicotiana tabacum. Далее кодирующие белок участки по отдельности клонируют в бинарные векторы экспрессии под контролем промотора 35S для оценки в экспериментах с временной экспрессией в листьях N. benthamiana, как описано в Примере 1. Изученные комбинации гена являются такими, как указано ниже:

1 P19 (отрицательный контроль)

2 P19+CnLPAAT+WRI1

3 P19+CnLPAAT+AtWRI1+AtDGAT1

4 P19+CnLPAAT+AtWRI1+EgDGAT1

5 P19+CnLPAAT+AtWRI1+EgDGAT2

6 P19+CnLPAAT+AtWRI1+EgDGAT3

7 P19+CincaFatB

8 P19+CincaFatB+CnLPAAT+WRI1

9 P19+CincaFatB+CnLPAAT+AtWRI1+AtDGAT1

10 P19+CincaFatB+CnLPAAT+AtWRI1+EgDGAT1

11 P19+CincaFatB+CnLPAAT+AtWRI1+EgDGAT2

12 P19+CincaFatB+CnLPAAT+AtWRI1+EgDGAT3

Результаты для уровней ОЖК и ТАГ, а также уровней общих СЦЖК в ОЖК или ТАГ проиллюстрированы на Фиг. 6. По сравнению с AtDGAT1, экспрессия EgDGAT1 приводит к более выраженной аккумуляции общих жирных кислот и повышенных уровней ТАГ. Общее содержание СЦЖК в общем содержании жирных кислот снижается при экспрессии EgDGAT1, по сравнению с AtDGAT1, но уровни СЦЖК, присутствующих в ТАГ, остаются такими же (Фиг. 6).

Подготовка генетических конструкций

Генетические конструкции для стабильной трансформации (Таблица 8) собирают посредством последовательной инсерции кассет генов с применением совместимых сайтов рестрикционных ферментов. Четыре генных конструкции (Таблица 8), каждая из которых содержит ген, кодирующий DGAT1 масличной пальмы (EgDGAT1), который экспрессируется промотором 35S, ген, кодирующий LPAAT C. nucifera (CnLFAAT), который экспрессируется из конститутивного промотора enTCUP2, и ген, кодирующий AtWRI1, который экспрессируется промотором SSU или промотора SAG12, в дополнение к одной из серий генов, кодирующих ферменты FATB.

Кроме того, пять генных конструкций содержат ген для экспрессии шпилечной РНК с целью снижения экспрессии эндогенного гена, кодирующего ацил-активизирующий фермент (ААФ). Шпилька сконструирована на основе сходства последовательности с идентифицированным AAE15 Arabidopsis lyrata (EFH44575.1) и геномом N. benthamiana. Показано, что ААФ принимают участие в повторной активации СЦЖК, и, таким образом, дальнейшем удлинении. Предполагалось, что сайленсинг ААФ может повысить аккумуляцию СЦЖК. Кассету шпильки конструируют в векторе pKANNIBAL, а затем субклонируют в вектор экспрессии pWBVec2 (Wang с соавт., 2004), с экспрессией шпильки под контролем промотора 35S.

Таблица 8. Краткое описание собранных генетических конструкций.

	Конструкция	Комбинация генов
Конструкции с одинарным геном	pKR1	35S::UmbcaFATB
	pKR2	35S::CincaFATB
	pKR3	35S::CocnuFATB2
	pOIL115	SAG12::CincaFATB
	pOIL116	SAG12::UmbcaFATB
pOIL117	SAG12::CocnuFATB2
Компоненты конструкции	pOIL300	35S::EgDGAT1
	pOIL301	Конструкция enTCUP::CnLPAAT в конструкции FATBrmediaFATB
	pOIL302	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT
	pOIL303	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SSU:AtWRI1
pOIL304	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SAG12:AtWRI1
Конструкции с четырьмя генами	pOIL305	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SSU:AtWRI1+35S::UmbcaFATB
	pOIL306	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SSU:AtWRI1+35S::CincaFATB
	pOIL307	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SSU:AtWRI1+35S::CocnuFATB2
	pOIL308	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SSU:AtWRI1+SAG12::UmbcaFATB
	pOIL309	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SSU:AtWRI1+SAG12::CincaFATB
	pOIL310	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SSU:AtWRI1+SAG12::CocnuFATB2
	pOIL311	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SAG12:AtWRI1+35S::UmbcaFATB
	pOIL312	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SAG12:AtWRI1+35S::CincaFATB
	pOIL313	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SAG12:AtWRI1+35S::CocnuFATB2
	pOIL314	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SAG12:AtWRI1+SAG12::UmbcaFATB
	pOIL315	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SAG12:AtWRI1+SAG12::CincaFATB
pOIL316	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SAG12:AtWRI1+SAG12::CocnuFATB2
Конструкции с пятью генами	pOIL317	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SSU:AtWRI1+35S::UmbcaFATB+35S::hpNbAAE
	pOIL318	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SSU:AtWRI1+35S::CincaFATB+35S::hpNbAAE
	pOIL319	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SSU:AtWRI1+35S::CocnuFATB2+35S::hpNbAAE
	pOIL320	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SSU:AtWRI1+SAG12::UmbcaFATB+35S::hpNbAAE
	pOIL321	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SSU:AtWRI1+SAG12::CincaFATB+35S::hpNbAAE
	pOIL322	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SSU:AtWRI1+SAG12::CocnuFATB2+35S::hpNbAAE
	pOIL323	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SAG12:AtWRI1+35S::UmbcaFATB+35S::hpNbAAE
	pOIL324	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SAG12:AtWRI1+35S::CincaFATB+35S::hpNbAAE
	pOIL325	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SAG12:AtWRI1+35S::CocnuFATB2+35S::hpNbAAE
	pOIL326	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SAG12:AtWRI1+SAG12::UmbcaFATB+35S::hpNbAAE
	pOIL327	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SAG12:AtWRI1+SAG12::CincaFATB+35S::hpNbAAE
pOIL328	35S::EgDGAT1+enTCUP::CnLPAAT+SAG12:AtWRI1+SAG12::CocnuFATB2+35S::hpNbAAE

Указанные генетические конструкции применяют для получения трансформированных растений табака сортов Висконсин 38 и линии с высоким содержанием масла, трансформированной T-ДНК из pJP3502. Наблюдается, что растения, трансформированные конструкциями с одним геном FATB, экспрессирующимся промотором 35S, были существенно меньше, чем трансформированные соответствующей конструкцией FATB, экспрессирующейся промотором SAG12 или, конструкциями с четырьмя генами. Считалось, что меньший размер растений вызван синтезом СЦЖК, которые не инкорпорировались эффективно в ТАГ.

Обсуждение

В настоящем исследовании обнаружено, что выработка C12:0 в листовых клетках составляет только около 1,6% от общего содержания жирных кислот после экспрессии только Umbca-TE (Таблица 7). Добавление гена для экспрессии Arath-WRI оказывает более выраженное влияние на аккумуляцию C12:0 и C14:0 в листовой ткани, чем добавление LPAAT кокоса (Фиг. 4 и 5). Это показывает, что WRI1 в комбинации с тиоэстеразой значительно повышает аккумуляцию СЦЖК в листовых клетках, действуя синергетически. Важно отметить, что обнаружена аккумуляция большей части C12:0, C14:0 и C16:0 в листьях в форме ТАГ, липида, который не аккумулируется со значительными уровнями в листьях дикого типа. Данные эксперименты продемонстрировали, что клетки в вегетативных частях растений могут быть модифицированы таким образом, чтобы вырабатывать СЦЖК, особенно C12:0 и C14:0, в ТАГ с высокими уровнями. Дополнительно, уровни C16:0 были значительно повышены.

Пример 10, Влияние различных полипептидов фактора транскрипции на аккумуляцию ТАГ

В экспериментах с WRI1 и DGAT, о которых сообщалось ранее (Vanhercke с соавт., 2013), применяли синтетический ген, кодирующий AtWR I1 A. thaliana (номер доступа AAP80382.1), и синтетический ген, кодирующий AtDGAT1, также из A. thaliana (номер доступа AAF19262; SEQ ID NO: 1). Для сравнения других полипептидов WRI с AtWRI1 на предмет их способности объединяться с DGAT для повышения содержания масла, другие последовательности, кодирующие WRI, были идентифицированы и использованы при генерации конструкций для экспрессии в листьях N. benthamiana. Нуклеотидные последовательности, кодирующие факторы транскрипции A. thaliana WRI3 (номер доступа AAM91814.1, SEQ ID NO: 205) и WRI4 (номер доступа NP_178088.2, SEQ ID NO: 206) (To с соавт., 2012), синтезированы и вставлены в виде фрагментов EcoRI в pJP3343 под контролем промотора 35S. Результирующие бинарные векторы экспрессии обозначены pOIL027 и pOIL028, соответственно. Кодирующую последовательность для WRI1 (AsWRI1, SEQ ID NO: 207) овса (Avena sativa) амплифицируют методом ПЦР из вектора, предложенного проф. Sten Stymne (Шведский университет сельскохозяйственных наук), с применением фланкирующих праймеров, содержащих дополнительные сайты EcoRI. Амплифицированный фрагмент вставляют в pJP3343 с получением pOIL055. Последовательность-кандидат WRI1 из S. bicolor (номер доступа XP_002450194.1, SEQ ID NO: 208) идентифицирована поиском BLASTp на сервере Национального центра биотехнологической информации (НЦБИ) с применением аминокислотной последовательности WRI1 Zea mays (номер доступа NP_001137064.1, SEQ ID NO: 209) в качестве запроса. Кодирующий белок участок гена WRI1S. bicolor (SbWRI1) синтезирован и вставлен в виде фрагмента EcoRI в pJP3343, с получением pOIL056. Ген-кандидат, кодирующий WRI1, идентифицирован из транскриптомы китайского сального дерева (Triadica sebifera; TsWRI1, SEQ ID NO: 210) (Uday с соавт., подана). Кодирующий белок участок синтезирован и вставлен в виде фрагмента EcoRI в pJP3343, с получением pOIL070, Бинарные векторы pJP3414 и pJP3352, содержащие кодирующие последовательности для экспрессии. полипептидов WRI1 и DGAT1 A. thaliana являются такими, как описано Vanhercke с соавт. (2013).

Плазмиды, содержащие последовательности, кодирующие различные WRI, вводят в листовую ткань N. benthamiana для временной экспрессии с применением гена, кодирующего белок вирусного супрессора p19 во всех процедурах инокуляции, как описано в Примере 1. Гены, кодирующие полипептиды WRI, оценивают отдельно или в комбинации с геном ацилтрансферазы DGAT1, причем задача последнего состоит в обеспечении более высокого биосинтеза и аккумуляции ТАГ. Положительным контролем в данном эксперименте служит комбинация генов, кодирующих фактор транскрипции WRI1 A. thaliana и AtDGAT1. Все процедуры инфильтрации осуществляют в трех экземплярах с применением трех различных растений, и уровни ТАГ анализируют, как описано в Примере 1. Экспрессия большинства индивидуальных полипептидов WRI в отсутствие экзогенно введенного DGAT1 приводит к повышенным, но все еще низким уровням ТАГ (< 0,23%, в пересчете на сухую массу) в инфильтрованных зонах листа, по сравнению с контролем, который содержал только конструкцию p19 (Фиг. 7). Исключение составляет TsWRI1, который, сам по себе, по-видимому, не повышает значительно уровней ТАГ. Кроме того, отличия в уровнях ТАГ, полученных при экспрессии различных факторов транскрипции WRI, сами по себе не являются большими. Как AsWRI1, так и SbWRI1 давали уровни ТАГ, подобные собственно AtWRI1. Анализ состава жирных кислот ТАГ выявляет только незначительные изменения, за исключением повышенных уровней C18:1Δ9 при экспрессии AtWRI3 в инфильтрованных листовых тканях (Таблица 9).

Таблица 9. Состав жирных кислот ТАГ в образцах листьев N. benthamiana, инфильтрованных различными химерными генами для экспрессии WRI (n=3).

Инфильтрованные гены	C16:0	C16:1	C18:0	C18:1	C18:2	C18:3n3	C20:0	C20:1	C22:0	C24:0
Контроль (P19)	33,6 ± 4,7	0,5 ± 0,4	8,9 ± 2,2	4,7 ± 0,6	16,9 ± 1,0	32,2 ± 7,8	1,1 ± 0,2	0,8 ± 1,5	0,0	0,0
WRI1	35,5 ± 3,4	0,7 ± 0,2	5,2 ± 0,8	5,4 ± 1,3	17,1 ± 1,0	33,1 ± 2,7	0,8 ± 0,1	0,5 ± 0,6	0,3 ± 0,0	0,0
WRI3	27,3 ± 1,6	0,9 ± 0,2	4,8 ± 0,3	10,2 ± 1,5	16,1 ± 1,0	37,8 ± 1,2	0,8 ± 0,1	0,6 ± 0,7	0,1 ± 0,2	0,0
WRI4	30,1 ± 0,4	1,0 ± 0,4	5,2 ± 0,8	4,6 ± 0,6	17,2 ± 0,4	38,1 ± 1,6	0,8 ± 0,1	1,3 ± 1,3	0,0	0,0
AsWRI	35,7 ± 3,0	1,7 ± 0,4	5,3 ± 0,7	6,5 ± 0,3	15,4 ± 0,4	31,6 ± 1,6	0,8 ± 0,1	0,4 ± 0,7	0,3 ± 0,1	0,0
SbWRI	37,4 ± 0,8	1,9 ± 0,3	4,8 ± 0,3	7,0 ± 1,2	15,2 ± 0,3	30,8 ± 0,3	0,8 ± 0,1	0,4 ± 0,6	0,3 ± 0,0	0,0
TsWRI	34,5 ± 4,8	0,0	9,4 ± 8,2	5,9 ± 1,7	16,0 ± 0,7	29,3 ± 12,4	0,0	н/о	0,0	0,0
Контроль (P19)	31,0 ± 2,1	0,9 ± 0,1	8,7 ± 1,3	8,0 ± 2,3	24,9 ± 1,5	22,1 ± 4,7	2,0 ± 0,1	0,0	0,6 ± 0,6	0,2 ± 0,4
WRI1+DGAT	27,7 ± 0,1	0,3 ± 0,0	7,0 ± 0,1	17,2 ± 0,7	27,9 ± 0,9	14,7 ± 0,3	2,4 ± 0,2	0,3 ± 0,0	1,1 ± 0,1	0,8 ± 0,2
WRI3+DGAT	30,0 ± 0,8	0,6 ± 0,1	5,9 ± 0,4	13,9 ±2,9	21,5 ± 1,1	21,3 ± 0,8	2,8 ± 0,1	0,2 ± 0,0	1,8 ± 0,1	1,0 ± 0,2
WRI4+DGAT	27,0 ± 0,5	0,2 ± 0,1	8,5 ± 0,2	5,8 ± 0,7	23,9 ± 0,8	25,2 ± 1,3	3,5 ± 0,1	0,2 ± 0,0	2,1 ± 0,2	1,7 ± 0,2
AsWRI+DGAT	33,8 ± 0,5	1,1 ± 0,1	5,5 ± 0,9	12,2 ± 1,6	26,0 ± 1,9	16,3 ± 1,3	2,2 ± 0,2	0,2 ± 0,0	1,2 ± 0,1	0,8 ± 0,1
SbWRI+DGAT	34,6 ± 0,5	1,3 ± 0,1	5,6 ± 0,4	13,9 ± 1,6	23,6 ± 1,3	15,8 ± 0,6	2,2 ± 0,1	0,2 ± 0,0	1,2 ± 0,1	0,9 ± 0,1
TsWRI+DGAT	25,4 ± 0,5	0,2 ± 0,0	9,4 ± 0,1	7,7 ± 1,0	27,0 ± 1,3	22,1 ± 2,4	3,6 ± 0,2	0,2 ± 0,0	1,8 ± 0,2	1,3 ± 0,2

Все образцы дополнительно инфильтрованы конструкцией P19. Образцы ТАГ дополнительно содержат 0,1-0,4% C14:0; 0,5-1,2% C16:3 и; 0,1-0,7% C18:1Δ11.

В противоположность этому, отличия в выходах ТАГ при экспрессии различных полипептидов WRI являются более выраженными при соэкспрессии с ацилтрансферазой AtDGAT1. Это снова демонстрирует синергетический эффект соэкспрессии WRI1 и DGAT на биосинтез ТАГ в инфильтрованной листовой ткани N. benthamiana, как сообщается Vanhercke с соавт. (2013). Промежуточные уровни ТАГ наблюдаются при соэкспрессии DGAT1 с векторами экспрессии AtWRI3, AtWRI4 и TsWRI1, в то время как уровни, полученные с AsWRI1 и AtWRI1, значительно ниже. В качестве результата, который не мог быть предсказан заранее, наиболее высокие выходы ТАГ получены при соэкспрессии DGAT с SbWRI1, даже если эксперимент проводят на клетках двудольных. Анализ состава жирных кислот обнаруживает повышенные уровни ТАГ C18:1^{Δ 9} и сниженные уровни C18:3^{Δ 9,12,15} (АЛК) в случае SbWRI1, AsWRI1 и положительного контроля AtWRI1 (Таблица 9). Однако, в отличие от AtWRI1, экспрессия AsWRI1 и SbWRI1 в обоих случаях продемонстрировала повышенные уровни C16:0, по сравнению с отрицательным контролем p19. Интересно, что инфильтрованные AtWRI3 образцы листьев продемонстрировали отличный профиль ТАГ, обогащенный C18:1^{Δ 9}, в то время как C16:0 и АЛК изменения только слегка коснулись.

Данный эксперимент демонстрирует, что фактор транскрипции WRI1 S. bicolor, SbWRI1, превосходит AtWRI1 при соэкспрессии с DGAT с точки зрения повышения уровней ТАГ в вегетативных частях растения. Кроме того, авторами изобретения сделан вывод о том, что фактор транскрипции, например, WRI1, из однодольного растения мог бы надлежащим образом функционировать в клетке двудольного растения, и, в действительности, даже мог бы обладать превосходящей активность, по сравнению с соответствующем фактором транскрипции двудольного растения. Кроме того, фактор транскрипции двудольного растения мог бы надлежащим образом функционировать в клетке однодольного растения.

Применение других факторов транскрипции

Получены генетические конструкции для экспрессии каждого из 14 различных факторов транскрипции в растительных клетках, с целью оценки их способности функционировать в плане повышения уровней ТАГ в комбинации с другими генами, принимающими участие в биосинтезе и аккумуляции ТАГ. Указанные факторы транскрипции были кандидатами в качестве альтернатив WRI1 или для добавления к комбинациям, содержащим один или более из факторов транскрипции WRI1, LEC1 и LEC2, для применения в растительных клетках, особенно в вегетативных частях растения. Их выбор в значительной степени основан на сообщениях об их участии в эмбриогенезе (обзор в Baud и Lepiniec (2010), а также Ikeda с соавт. (2006)), подобно LEC2. Таким образом, проведены эксперименты для оценки их функции с применением системы экспрессии N. benthamiana (Пример 1), как указано ниже.

Нуклеотидные последовательности участков, кодирующих белок для следующих факторов транскрипции кодон-оптимизированы для экспрессии в N. benthamiana и N. tabacum, синтезированы и субклонированы в виде фрагментов NotI-SacI в соответствующие сайты pJP3343: A. thaliana FUS3 (pOIL164) (Luerssen с соавт., 1998; номер доступа AAC35247; SEQ ID NO:160), A. thaliana LEC1L (pOIL165) (Kwong с соавт. 2003; номер доступа AAN15924; SEQ ID NO:157), A. thaliana LEC1 (pOIL166) (Lotan с соавт., 1998; номер доступа AAC39488; SEQ ID NO:149), G. max MYB73 (pOIL167) (Liu с соавт., 2014; номер доступа ABH02868; SEQ ID NO:221), A. thaliana bZIP53 (pOIL168) (Alonso с соавт., 2009; номер доступа AAM14360; SEQ ID NO:222), A. thaliana AGL15 (pOIL169) (Zheng с соавт., 2009; номер доступа NP_196883; SEQ ID NO:223), A. thaliana MYB118 (номер доступа AAS58517; pOIL170; SEQ ID NO:224), MYB115 (Wang с соавт., 2002; номер доступа AAS10103; pOIL171; SEQ ID NO:225), A. thaliana TANMEI (pOIL172) (Yamagishi с соавт., 2005; номер доступа BAE44475; SEQ ID NO:226), A. thaliana WUS (pOIL173) (Laux с соавт., 1996; номер доступа NP_565429; SEQ ID NO:227), A. thaliana BBM (pOIL174) (Boutilier с соавт., 2002; номер доступа AAM33893, SEQ ID NO:145), B. napus GFR2a1 (номер доступа AFB74090; pOIL177; SEQ ID NO:228) и GFR2a2 (номер доступа AFB74089; pOIL178; SEQ ID NO:229) (Liu с соавт. (2012c)). Кроме того, кодон-оптимизированная версия фактора транскрипции PHR1 A. thaliana, принимающего участие в адаптации к условиям фосфатного голодания при высокой освещенности, подобным образом субклонирована в pJP3343 (pOIL189) (Nilsson с соавт. (2012); номер доступа AAN72198; SEQ ID NO: 230). Указанные факторы транскрипции кратко описаны в Таблице 10.

В качестве скринингового теста для определения функции указанных факторов транскрипции, генетические конструкции вводят в клетки листьев N. benthamiana, как описано в Примере 1, с геном, кодирующим DGAT1, или без него, или с другими комбинациями генов, такими как кодирующие WRI1, LEC2, hpSDP1 или тиоэстеразу FATA, и определяют общее содержание липида и состав жирных кислот в клетках листьев. Факторы транскрипции, которые существенно повышают общее содержание липида, идентифицированы и отобраны.

Для стабильной трансформации растений с применением генов, кодирующих альтернативные факторы транскрипции, получены следующие бинарные конструкции. Гены для экспрессии факторов транскрипции используют промотор SSU или промотор SAG12. Показано, что повышенная экспрессия эмбриогенных факторов транскрипции, таких как LEC1 и LEC2, индуцирует различные плеотропные эффекты, нежелательные в настоящем контексте, включая соматический эмбриогенез (Feeney с соавт. (2012); Santos-Mendoza с соавт. (2005); Stone с соавт. (2008); Stone с соавт. (2001); Shen с соавт. (2010)). Для минимизации возможного отрицательного влияния на развитие растений и выход биомассы, специфичные для ткани или стадии развития промоторы являются предпочтительнее конститутивных промоторов с точки зрения управления эктопической экспрессией основных регуляторов эмбриогенеза.

Таблица 10. Дополнительные факторы транскрипции и генетические конструкции для их экспрессии

Плазмида	Фактор транскрипции	Вид	Длина (аминокислоты)	Номер доступа
pOIL164	FUS3	A. thaliana	312	AAC35247
pOIL165	LEC1L	A. thaliana	234	AAN15924
pOIL166	LEC1	A. thaliana	208	AAC39488
pOIL167	MYB73	G. max	74	ABH02868
pOIL168	bZIP53	A. thaliana	146	AAM14360
pOIL169	AGL15	A. thaliana	268	NP_196883
pOIL170	MYB118	A. thaliana	437	AAS58517
pOIL171	MYB115	A. thaliana	359	AAS10103
pOIL172	TANMEI	A. thaliana	386	BAE44475
pOIL173	WUS	A. thaliana	292	NP_565429
pOIL174	BBM	A. thaliana	584	AAM33803
pOIL177	GFR2a1	B. napus	453	AFB74090
pOIL178	GFR2a2	B. napus	461	AFB74089
pOIL189	PHR1	A. thaliana	409	AAN72198

Пример 11. Сайленсинг ТАГ липазы в растениях, аккумулирующих высокие уровни ТАГ в листовой ткани

Сахарозависимая ТАГ липаза 1 (SDP1) продемонстрировала свою роль в обороте ТАГ в несеменных тканях A. thaliana, а также в ходе прорастания семени (Eastmond с соавт., 2006; Kelly с соавт., 2011; Kelly с соавт., 2013). SDP1 экспрессируется в развивающемся семени, а полипептид SDP1 дополнительно присутствует в зрелом семени в связи с масляными включениями (но не в качестве покрытия). Сайленсинг гена, кодирующего SDP1, приводил к небольшому, но значимому повышению уровней ТАГ в корнях и стеблях A. thaliana (< 0,4%, в пересчете на сухую массу), в то время как еще менее выраженное увеличение наблюдается в листовой ткани (Kelly с соавт., 2013).

Для определения возможности дальнейшего повышения уровней ТАГ в тканях листа и стебля, по сравнению с соэкспрессией AtWRI1 и AtDGAT1, разработан эксперимент с сайленсингом эндогенного гена SDP1 в растениях N. tabacum, которые являются гомозиготными по T-ДНК, содержащей гены для трансгенной экспрессии полипептидов WRI, DGAT1 и олеозина (Vanhercke с соавт., 2014). Поиск BLAST по транскриптоме N. benthamiana (Naim с соавт., 2012) с применением нуклеотидной последовательности AtSDP1 в качестве запроса идентифицировал транскрипт (Nbv5tr6385200, SEQ ID NO: 173) с гомологией в отношении гена SDP1 A. thaliana. Участок (SEQ ID NO: 174) размером 713 пар оснований выбран для опосредованного шпилькой сайленсинга гена. Сконструирован синтетический фрагмент размером 3,903 тыс. пар оснований на основе вектора pHELLSGATE12, который содержит, в приведенном порядке, конститутивный промотор enTCUP2, фрагмент SDP1 N. benthamiana размером 713 пар оснований в смысловой ориентации, фланкированный сайтами attB1 и attB2, интрон Pdk, последовательность интрона cat в обратной ориентации, второй фрагмент SDP1 N. benthamiana размером 713 пар оснований, фланкированный сайтами attB1 и attB2, в обратной (антисмысловой) ориентации, и участок терминатора/сайт полиаденилирования OCS 3' (Фиг. 8). Вставку субклонируют в pJP3303 с применением рестрикционных сайтов SmaI и KasI, причем полученный вектор экспрессии обозначен pOIL051. Данная химерная ДНК содержит ген селекционного маркера, обеспечивающий резистентность к гигромицину.

pOIL051 применяют для получения трансформированных растений N. tabacum путем опосредованной Agrobacterium трансформации. Исходные растительные клетки получают от трансгенных растений, гомозиготных по T-ДНК pJP3502 (Vanhercke с соавт., 2014). Трансгенные растения, содержащие T-ДНК из pOIL051, отбирают по резистентности к гигромицину и переносят в грунт в теплице или в комнату с контролируемой средой для продолжения роста. В ходе развития растения образцы листьев собирают с подтвержденных двойных трансформантов (Растения T0) перед цветением, в период цветения и на стадии завязывания семян, и в каждом определяют уровень ТАГ. Трансгенные растения, содержащие только низкие уровни ТАГ в листьях или содержащие ТАГ на том же уровне, что и контрольные, идентифицируют с помощью экстракции липида из образцов листьев и анализа пятен ТСХ и отбрасывают. Уровни ТАГ в оставшейся популяции трансформантов количественно определяют методом ГХ, как описано в Примере 1. Перед цветением большинство из указанных растений демонстрируют значительно повышенные уровни ТАГ (> 5% от сухой массы листьев) в листовой ткани, в то время как в 4 растениях присутствовали уровни ТАГ выше 10% (Таблица 11). Максимальный уровень ТАГ, наблюдаемый в листьях указанных растений, перед цветением, составил 11,3% в растении 51-13. Для сравнения, трансгенные растения материнской линии N. tabacum, экспрессирующие AtWRI1, AtDGAT1 и олеозин, демонстрирует уровни ТАГ приблизительно 2% перед цветением и около 6% в ходе цветения (Vanhercke с соавт., 2014). Таким образом, добавление SDP1-ингибирующей конструкции к комбинации AtWRI1 плюс AtDGAT1 является синергетическим с точки зрения повышения уровней ТАГ в этих растениях. Неожиданно было обнаружено, что содержание ТАГ в листьях, собранных с двойных трансформированных растений в стадии цветения, было значительно повышено, составляя 30,5%, в пересчете на сухую массу (Таблица 12), что представляет собой увеличение в 5 раз относительно растений без сайленсинга SDP1. К большому удивлению авторов изобретения, уровень ТАГ достиг потрясающего значения 70,7% (% от сухой массы) в образцах стареющих листьев (зеленых и желтых) на стадии завязывания семян (Таблица 13). Применение ЯМР для измерения содержания масла в цельных листьях растений табака на стадии завязывания семян, содержание ТАГ в некоторых зеленых листьях, начавших стареть, составило около 43%, а в некоторых коричневых, дегидратированных листьях составило 42%. Если такие листья зажать между двумя коричневыми бумажными фильтрами, выделяющееся масло впитывается в бумагу и делает ее просвечивающейся, тогда как для листьев контрольного табака этого не наблюдалось, что предлагает простой способ скрининга для обнаружения растений с высоким содержанием масла.

Два первичных трансформанта (№61, №69), каждый из содержал Т-ДНК из pJP3502 и pOIL51 и демонстрировал высокие уровни ТАГ, проанализированы цифровой капельной ПЦР (цкПЦР) с применением специфичной для гена гигромицина пары праймеров, с целью определения количества инсерций T-ДНК pOIL51. Растение, обозначенное №61, содержит одну инсерцию T-ДНК из pOIL51, тогда как растение №69 содержит три инсерции T-ДНК из pOIL51. Проведен повторный скрининг растений-потомков T1 обеих линий методом цкПЦР с целью идентификации гомозиготных, гетерозиготных и нулевых растений. Растения-потомки растения №61, не содержащие инсерций из pOIL51 (нулевые; всего 7) или 2 инсерции T-ДНК (т.е., гомозиготные по указанной T-ДНК; всего 12) отобраны для дальнейшего анализа. Кроме того, растения-потомки линии №69, содержащие инсерции нулевые T-ДНК от pOIL51 (нуль; всего 2) или 2 такие инсерции (всего 15) или 4 или 5 инсерций (всего 5) сохраняли для дальнейшего анализа.

Таблица 11. Уровни ТАГ и состав жирных кислот ТАГ (% от сухой массы листьев) в листовой ткани растений N. tabacum (Поколение T0), экспрессирующих трансгены WRI1, DGAT1 и олеозина и супертрансформированных T-ДНК, кодирующей конструкцию шпильки SDP1 (pOIL051), по сравнению с диким типом (нетрансформированный). Образцы листьев собраны в течение вегетативной стадии (перед цветением). Образцы липида дополнительно содержали 0,0-0,2% C16:3, 0,0-0,4% C20:1; 0,0-0,1% C20:2n-6.

Линия	C14:0	C16:0	C16:1	C18:0	C18:1	C18:1d11	C18:2	C18:3n3	C20:0	C22:0	C24:0	% ТАГ
дикий тип	2,5	20,2	0,0	8,6	5,6	0,0	18,9	44,2	0,0	0,0	0,0	0,1
23-31	0,0	66,0	0,0	0,0	34,0	0,0	0,0	0,0	0,0	0,0	0,0	0,0
23-29	0,0	36,1	1,4	5,1	21,0	0,8	23,3	7,1	2,4	1,5	1,1	2,9
57	0,1	47,2	0,3	5,4	19,2	1,9	0,0	21,2	2,1	1,2	1,1	3,4
23-1	0,2	30,8	1,9	4,9	41,2	1,0	13,7	2,4	1,9	1,1	0,7	4,0
58	0,1	31,4	0,2	3,8	12,2	1,6	33,6	13,2	1,7	1,0	0,7	4,0
21	0,1	31,9	0,3	3,9	10,7	1,5	32,3	15,2	1,9	1,1	0,8	4,7
23-30	0,2	34,1	0,7	4,9	29,4	0,9	17,5	5,7	2,9	1,8	1,7	4,9
40	0,1	34,4	0,2	4,3	14,3	1,5	29,7	11,8	1,7	1,0	0,7	5,1
22	0,1	35,8	0,2	4,3	12,8	1,5	29,8	11,7	1,8	1,0	0,7	5,1
15	0,1	37,2	0,1	3,9	8,6	1,7	29,3	16,0	1,5	0,8	0,6	5,1
16	0,1	35,2	0,1	3,9	13,9	1,7	28,5	13,6	1,4	0,7	0,6	5,3
25	0,1	34,4	0,2	3,9	15,4	1,8	27,6	13,2	1,6	0,9	0,7	5,4
65	0,1	26,9	0,2	3,8	19,2	1,5	35,7	9,1	1,7	0,8	0,6	5,5
12	0,2	31,7	0,2	3,6	15,9	1,7	30,5	12,8	1,6	0,9	0,7	5,5
28	0,1	31,4	0,2	3,5	13,5	1,7	32,7	13,7	1,5	0,8	0,6	5,6
26	0,1	31,4	0,2	3,5	13,5	1,7	32,7	13,7	1,5	0,8	0,6	5,8
19	0,1	30,5	0,2	3,7	14,9	1,6	31,7	13,7	1,7	0,9	0,7	5,9
30	0,1	30,4	0,2	3,7	21,3	2,2	31,2	7,4	1,6	0,8	0,7	5,9
6	0,1	37,5	0,2	4,4	10,5	1,7	31,9	10,6	1,5	0,7	0,6	6,0
4	0,1	34,2	0,2	3,9	11,9	1,7	32,6	12,5	1,4	0,6	0,5	6,1
42	0,1	30,6	0,2	4,5	17,3	1,8	32,7	9,2	1,7	0,9	0,7	6,3
45	0,1	31,6	0,2	3,9	18,2	1,8	30,4	10,5	1,6	0,8	0,6	6,6
56	0,1	26,8	0,2	4,2	20,0	1,5	34,3	8,7	1,9	1,0	0,8	6,7
43	0,1	28,5	0,2	3,8	18,6	1,6	34,1	9,6	1,7	0,9	0,6	7,1
32	0,1	28,1	0,2	3,4	16,8	1,8	35,5	10,6	1,6	0,8	0,6	7,2
70	0,1	26,3	0,2	3,5	25,5	1,8	31,0	8,9	1,3	0,6	0,5	7,4
69	0,1	30,9	0,2	4,0	15,7	1,7	31,7	12,9	1,5	0,7	0,5	7,4
61	0,1	31,0	0,2	4,0	16,4	1,6	34,1	9,5	1,5	0,7	0,5	7,5
20	0,1	33,3	0,1	3,8	11,7	1,6	31,4	14,8	1,5	0,8	0,6	7,8
53	0,1	33,1	0,1	3,8	18,2	1,9	29,8	10,4	1,3	0,6	0,5	8,4
18	0,1	29,4	0,2	3,7	18,4	1,7	32,8	10,9	1,4	0,6	0,5	9,1
51-1	0,1	29,0	2,0	3,6	17,1	1,6	33,8	9,9	1,4	0,7	0,5	9,2
47	0,1	30,5	0,1	4,2	20,3	1,5	31,9	8,3	1,5	0,7	0,5	9,3
51-60	0,1	30,7	2,6	3,4	15,8	1,9	31,2	11,6	1,3	0,7	0,5	10,2
46	0,1	24,8	0,1	3,6	28,8	1,6	30,3	7,9	1,3	0,6	0,5	10,2
48	0,1	33,1	0,1	3,8	16,5	1,7	30,4	11,4	1,4	0,7	0,5	10,7
51-13	0,1	25,4	2,2	3,3	23,8	1,6	32,7	8,3	1,3	0,6	0,4	11,3

Таблица 12. Уровни ТАГ и состав ТАГ (% от сухой массы листа) в листовой ткани растений N. tabacum (Поколение T0), экспрессирующих трансгены WRI1, DGAT1 и олеозина и супертрансформированных T-ДНК, кодирующей конструкцию шпильки SDP1 (pOIL051). Образцы листьев собраны в период цветения.

Линия	C14:0	C16:0	C16:1	C18:0	C18:1	C18:1d11	C18:2	C18:3n3	C20:0	C22:0	C24:0	% ТАГ
дикий тип	0,2	14,8	0,6	8,5	9,2	0,3	20,0	44,5	0,6	0,3	0,4	0,3
21	0,1	25,7	2,1	3,7	21,2	1,0	31,0	11,7	1,5	0,8	0,6	8,8
56	0,1	33,2	1,4	4,9	20,7	1,0	26,3	7,4	2,1	1,3	0,9	9,2
65	0,1	24,7	1,5	3,8	28,5	1,0	29,0	7,5	1,7	0,9	0,6	12,0
42	0,1	34,0	1,5	4,4	16,8	1,1	29,4	7,6	2,2	1,4	1,1	13,1
28	0,1	29,5	2,4	3,5	16,4	1,2	28,7	14,6	1,5	1,0	0,6	13,2
30	0,1	19,1	1,9	3,3	31,8	1,0	30,6	9,3	1,3	0,7	0,4	13,6
20	0,1	22,4	1,8	3,7	27,4	0,9	29,0	10,8	1,7	0,9	0,7	14,6
19	0,1	20,9	1,7	3,1	28,4	1,0	31,6	10,0	1,4	0,8	0,5	15,7
12	0,1	24,4	1,6	3,6	22,1	0,9	35,1	8,9	1,4	0,8	0,5	15,8
16	0,1	21,5	1,8	3,4	34,9	1,0	26,2	7,9	1,4	0,7	0,5	16,4
57	0,1	25,0	1,7	4,1	27,7	1,0	28,4	8,4	1,6	0,9	0,6	17,2
26	0,1	22,5	1,6	3,5	28,4	1,1	31,2	7,6	1,7	1,0	0,7	18,0
39	0,1	30,0	2,2	3,7	22,7	1,6	24,3	11,6	1,5	0,9	0,7	18,1
70	0,1	22,1	2,1	3,6	36,3	1,0	24,2	7,2	1,4	0,7	0,5	18,3
45	0,1	21,4	1,8	3,7	34,4	1,0	27,5	6,9	1,4	0,8	0,5	19,1
32	0,1	23,3	1,6	3,2	24,4	1,1	33,6	9,0	1,5	0,9	0,6	19,5
18	0,1	23,4	2,1	3,3	26,4	0,9	30,2	10,3	1,4	0,7	0,5	20,6
20Y	0,1	22,3	1,6	3,6	30,3	0,9	28,5	9,1	1,6	0,9	0,6	20,8
43	0,1	28,1	2,0	3,5	21,5	1,2	29,9	10,2	1,5	0,9	0,6	21,2
4	0,1	27,9	1,9	3,7	26,3	1,2	26,2	9,3	1,5	0,8	0,5	21,8
1	0,1	23,8	2,0	3,7	30,2	1,1	28,1	8,0	1,4	0,7	0,5	22,3
61	0,1	24,2	2,2	4,0	32,0	1,1	25,2	7,8	1,5	0,8	0,6	23,9
60	0,1	24,4	2,2	3,7	31,0	1,1	25,4	8,6	1,5	0,8	0,6	25,0
46	0,1	23,3	2,0	3,7	32,9	1,0	24,0	9,2	1,6	0,9	0,7	25,7
6	0,1	31,5	2,6	3,5	19,5	1,6	25,5	12,7	1,3	0,7	0,5	26,3
13	0,1	21,8	1,9	3,6	35,1	1,0	25,1	8,1	1,5	0,8	0,5	26,8
69	0,1	21,8	1,6	4,3	33,4	0,8	26,9	7,6	1,7	0,8	0,5	26,9
53	0,1	27,1	2,1	3,5	24,1	1,2	29,4	9,2	1,4	0,8	0,5	29,2
48	0,1	29,5	2,5	3,9	21,1	1,3	29,0	9,2	1,6	0,8	0,6	29,5
47	0,1	30,9	2,5	3,4	19,4	1,5	28,5	10,6	1,3	0,8	0,5	30,5

Таблица 13. Уровни ТАГ и состав ТАГ (% от сухой массы листа) в листовой ткани растений N. tabacum (Поколение T0), экспрессирующих трансгены WRI1, DGAT1 и олеозина и супертрансформированных T-ДНК, кодирующей конструкцию шпильки SDP1 (pOIL051). Образцы листьев собраны в стадии завязывания семян. Y=желтый лист, G =зеленый лист.

Образец	C14:0	C16:0	C16:1	16:3	C18:0	C18:1	C18:1d11	C18:2	C18:3n3	C20:0	C20:1d11	C22:0	C24:0	Содержание ТАГ (% см)
дт	0,0	13,0	0,0	0,0	8,4	7,0	0,0	24,7	46,8	0,0	0,0	0,0	0,0	0,3
73	0,0	26,6	1,7	0,0	8,5	9,4	0,0	27,0	25,6	1,1	0,0	0,0	0,0	0,6
18	0,1	15,0	1,8	0,0	4,8	14,4	0,4	43,9	16,3	1,7	0,4	0,7	0,5	3,3
41	0,1	22,3	1,2	0,3	4,4	24,0	0,6	32,8	10,8	1,7	0,3	0,8	0,5	5,2
19	0,1	14,5	1,5	0,3	3,0	21,6	0,7	44,8	10,6	1,4	0,4	0,7	0,4	7,2
20	0,1	26,7	2,4	0,1	4,3	24,9	1,0	25,2	11,3	1,9	0,3	1,0	0,8	9,6
30	0,1	18,6	1,5	0,3	3,5	24,8	0,7	38,9	8,9	1,4	0,3	0,7	0,4	9,9
65	0,1	22,2	1,4	0,3	3,5	30,9	0,7	29,1	8,1	1,7	0,3	1,0	0,6	11,3
42	0,1	23,6	1,5	0,2	4,1	29,0	0,9	30,3	5,9	2,0	0,4	1,3	0,8	12,0
32	0,1	21,3	1,3	0,3	3,3	21,4	0,9	40,7	7,1	1,7	0,3	1,0	0,6	13,7
39	0,1	25,8	1,7	0,3	3,6	27,2	1,2	27,2	8,2	2,0	0,4	1,4	0,9	14,0
45	0,1	23,0	1,5	0,1	3,8	28,0	0,9	32,6	6,3	1,8	0,3	1,0	0,6	14,4
13	0,1	26,9	2,8	0,1	3,7	32,6	1,1	21,6	7,6	1,6	0,3	0,8	0,7	14,6
R45	0,1	23,4	1,5	0,2	4,1	27,8	0,9	32,2	6,1	1,8	0,3	1,0	0,6	14,6
21	0,1	23,1	1,6	0,2	3,5	27,4	0,8	31,2	8,2	1,8	0,3	1,1	0,7	15,0
9	0,1	23,2	1,4	0,2	3,5	23,3	0,8	35,6	8,5	1,6	0,3	0,9	0,5	15,4
12	0,1	24,5	1,4	0,2	3,4	22,3	0,8	36,2	7,4	1,7	0,3	1,1	0,7	15,9
4	0,1	21,9	1,8	0,2	3,6	22,8	0,9	35,9	9,5	1,6	0,3	0,9	0,6	16,1
49	0,1	23,5	1,4	0,2	4,0	25,3	0,8	34,3	6,6	1,8	0,3	1,1	0,7	16,8
26	0,1	22,2	1,3	0,2	3,8	25,4	0,8	35,2	6,5	2,1	0,3	1,3	0,8	17,2
16	0,1	22,2	1,8	0,3	3,4	29,9	0,8	30,1	8,1	1,5	0,3	0,9	0,6	18,2
1	0,1	27,4	2,7	0,1	4,0	32,0	1,2	22,9	6,3	1,6	0,3	0,8	0,7	18,7
70	0,1	27,1	2,7	0,2	3,7	32,6	1,0	21,5	7,6	1,6	0,3	0,8	0,7	19,0
6	0,1	30,6	2,6	0,2	3,3	13,0	1,4	32,8	12,9	1,4	0,2	0,9	0,6	21,5
47	0,1	28,0	2,1	0,2	3,6	18,5	1,3	33,2	9,9	1,5	0,2	0,9	0,5	21,6
69	0,1	25,4	2,3	0,1	4,3	32,4	0,9	23,5	7,4	1,8	0,3	0,8	0,6	22,5
53	0,1	23,9	2,1	0,2	3,4	28,2	1,1	30,2	7,6	1,5	0,3	0,9	0,5	23,2
46	0,1	25,9	2,7	0,2	3,7	32,0	1,1	22,8	8,2	1,6	0,3	0,8	0,7	24,0
43	0,1	23,7	1,6	0,2	3,1	22,6	0,9	37,6	7,4	1,4	0,2	0,8	0,5	24,0
48	0,1	27,4	2,2	0,1	4,1	23,0	1,1	31,3	6,9	1,9	0,3	1,0	0,7	24,4
28	0,1	23,0	1,4	0,2	3,3	24,8	1,0	35,6	7,3	1,6	0,3	0,9	0,6	26,6
1Y	0,1	24,3	2,5	0,1	3,8	35,7	1,1	22,6	6,7	1,6	0,3	0,7	0,6	28,1
56G	0,1	25,5	1,8	0,2	3,7	26,7	0,9	29,8	7,3	1,8	0,3	1,1	0,7	33,9
57	0,1	25,1	1,9	0,2	3,2	20,1	1,0	35,2	10,0	1,5	0,3	0,9	0,6	35,4
56Y	0,2	24,8	1,4	0,2	4,1	27,2	0,8	31,0	6,0	2,0	0,4	1,2	0,8	39,6
69Y	0,1	24,7	2,1	0,2	4,1	32,0	0,8	24,3	7,8	1,9	0,3	0,9	0,7	46,5
R69Y	0,1	24,7	2,1	0,2	4,1	32,0	0,8	24,4	7,9	1,9	0,3	0,9	0,7	46,8
61	0,1	26,6	2,7	0,1	3,6	31,6	1,1	23,8	7,4	1,4	0,3	0,7	0,5	49,2
61Y	0,1	25,8	2,4	0,1	3,7	32,4	1,1	24,3	6,9	1,5	0,3	0,7	0,5	58,1
60	0,1	24,6	2,4	0,2	3,6	34,1	1,0	24,4	6,4	1,5	0,3	0,7	0,5	70,7

Отобранные растения T1 выращены в теплице в то же время и при тех же условиях, что и контрольные растения. Образцы ткани зеленых листьев растений T1, собранные перед цветением, сушат и определяют содержание общих жирных кислот (ОЖК) и ТАГ методом ГХ. Содержание ОЖК в растениях, содержащих обе Т-ДНК, варьирует от 4,6% до 16,1%, в пересчете на сухую массу, в том числе уровни ТАГ в тех же листьях от 1,2% до 11,8%, в пересчете на сухую массу (Фиг. 9). Это намного больше, чем в растениях, содержащих только T-ДНК из pJP3502, выращенных бок-о-бок в таких же условиях и проанализированных на такой же стадии роста, что снова демонстрирует синергию между снижением активности ТАГ липазы и комбинации WRI1 плюс DGAT. В растениях, содержащих только T-ДНК pJP3502, присутствует от 4,2% до 6,8% ОЖК, в том числе уровни ТАГ от 1,4% до 4,1%, в пересчете на сухую массу (Фиг. 9). Содержание в растениях дикого типа в среднем составляет около 0,8% ОЖК, в том числе менее чем 0,5% ТАГ, в пересчете на сухую массу. Состав жирных кислот в общем содержании жирных кислот и содержание ТАГ в листьях каждой из линий, №61 и №69, является сходным с их составом в листьях, содержащих только T-ДНК из pJP3502 (материнский). По сравнению с контрольными листьями дикого типа, растения, содержащие Т-ДНК из pOIL51 и pJP3502, демонстрируют повышенные уровни C16:0, C18:1 и C18:2 жирных кислот. Такой существенный сдвиг состава жирных кислот в значительной степени происходит за счет C18:3, содержание которой снижается с около 50-55% до около 20-30%, как процент от общего содержания жирных кислот.

Значительное повышение уровней ОЖК, включая уровни ТАГ, между растениями, содержащими только T-ДНК pJP3502, и растениями, содержащими Т-ДНК из pOIL51 и pJP3502, сохраняется на протяжении развития растения. Контрольные растения, содержащие только T-ДНК из pJP3502, содержат от 7,7% до 17,5% ТАГ в ходе цветения, в то время как в период завязывания семян уровни ТАГ варьируют от 14,1% до 20,7%, в пересчете на сухую массу. Содержание ТАГ в листьях растений, содержащих Т-ДНК pJP3502 и pOIL51, варьирует от 6,3% до 23,3% в период цветения и от 12,6% до 33,6% в период завязывания семян. Подобные изменения состава жирных кислот во фракции ТАГ для обеих стадий были обнаружены, как было описано ранее для стадии вегетативного роста.

Кроме того, найдены повышенные уровни ТАГ и в других вегетативных тканях трансгенных растений, таких как корни и стебель. Некоторые ткани корня трансгенных растений N. tabacum, трансформированных T-ДНК pOIL051, содержат 4,4% ТАГ, а некоторые ткани стебля содержат 7,4% ТАГ, в пересчете на сухую массу (Фиг. 10). Растения дикого типа и N. tabacum, содержащие только T-ДНК из pJP3502, демонстрируют намного более низкие уровни ТАГ в обоих видах тканей. Добавление конструкции шпильки SDP1 с целью снижения экспрессии эндогенной липазы ТАГ оказывает очевидное синергетическое влияние с генами, кодирующими фактор транскрипции и биосинтез ТАГ (WRI1 и DGAT), с точки зрения повышения содержания ТАГ в стеблях и корнях. Необходимо отметить, что более низкие уровни ТАГ в корнях сравнимы с тканями стебля в пределах одного и того же растения, в то время как в растениях дикого типа и N. tabacum, содержащие только T-ДНК из pJP3502 наблюдается обратная тенденция. Состав ТАГ в тканях корня и стебля демонстрирует изменения в содержании C18:1 и C18:3 жирных кислот, подобные наблюдаемым ранее в трансгенной листовой ткани. Уровни C18:2 в ТАГ снижены в трансгенной ткани стебля, в то время как содержание C16 жирных кислот обычно снижено в трансгенных тканях корня, по сравнению с контролем дикого типа.

Таким образом, авторами изобретения сделан вывод о том, что добавление экзогенного гена к комбинации WRI1 и DGAT с целью сайленсинга эндогенного гена SDP1 повышает общее содержание жирных кислот, в том числе содержание ТАГ, на всех стадиях роста растения, и оказывает синергетическое влияние с WRI1 и DGAT, особенно в стеблях и корнях. Семена T1 трансгенных растений помещают на питательные среды для тканей in vitro при комнатной температуре, чтобы проверить степень и расчет времени прорастания. Прорастание семени T1 трех независимо трансформированных линий по-прежнему сравнивают с семенем трансгенных растений, трансформированных T-ДНК из pJP3502. Кроме того, ранняя сила саженца, по-видимому, остается интактной. Это было неожиданным, с учетом роли SDP1 в прорастании семени A. thaliana и наблюдаемых дефекты при прорастании мутантов SDP1 (Eastmond с соавт., 2006). Для преодоления любых дефектов прорастания, если они возникнут, разработана вторая конструкция, в которой ингибирующая SDP1 РНК экспрессируется промотором, который в семени по существу не экспрессируется или экспрессируется с низкими уровнями, например, такого как промотор из фотосинтетического гена, например, SSU. Авторы изобретения считают предпочтительным снизить риск вредного влияния на прорастание семени или раннюю силу саженца, чтобы избежать конститутивного промотора для контроля экспрессии РНК, ингибирующей SDP1, или по меньшей мере избежать промотора, экспрессирующегося в семенах.

Необходимо отметить, что растения T0 с наиболее высокими уровнями ТАГ выращены в условиях высокой освещенности в комнате с контролируемой средой (интенсивность света 500 микромоль, световой цикл 16 часов света/26°C-8 часов темноты/18°C), и они выглядели меньше (около 70% высоты относительно растений, трансформированных T-ДНК из pJP3502), чем контрольные растения дикого типа. Авторами изобретения сделан вывод о том, что комбинация трансгенов и/или генетических модификаций для подходов ʺpushʺ, ʺpullʺ, ʺprotectʺ и ʺpackageʺ особенно благоприятна для достижения высоких уровней ТАГ в вегетативных частях растения. В данном примере, WRI1 обеспечивает ʺpushʺ, DGAT обеспечивает ʺpullʺ, сайленсинг SDP1 обеспечивает ʺprotectʺ, и олеозин обеспечивает ʺpackageʺ ТАГ.

Пример 12. Специфическая для старения экспрессия фактора транскрипции

Сообщалось, что эктопическая экспрессия основных регуляторов развития эмбриона и семени, например LEC2, повышает уровни ТАГ в несеменных тканях (Santos-Mendoza с соавт., 2005; Slocombe с соавт., 2009; Andrianov с соавт., 2010). Однако, повышенная экспрессия конститутивного LEC2 в растениях, трансформированных геном 35S-LEC2, приводит к нежелательному плеотропному влиянию на развитие и морфологию растения, включая соматический эмбриогенез и аномальные структура листа (Stone с соавт., 2001; Santos-Mendoza с соавт., 2005). Для оценки того, будет ограничение экспрессии LEC2 стадией старения листьев в ходе развития растения, т.е. после того, как растения полностью выросли и достигли полной биомассы, минимизировать нежелательные фенотипические эффекты, но по-прежнему увеличивать уровни липида в листьях, разработана и получена химерная ДНК для экспрессии LEC2 под контролем специфичного для старения промотора A. thaliana из гена SAG12 (U37336; Gan и Amasino, 1995).

Для получения генетической конструкции, получен синтетический фрагмент ДНК размером 3,635 тыс. пар оснований, содержащий, в указанном порядке, специфичный для старения промотор SAG12 A. thaliana, последовательность, кодирующую белок LEC2 и участок терминатора/полиаденилирования гена лектина Glycine max. Указанный фрагмент вставляют между рестрикционными сайтами SacI и NotI pJP3303. Данная конструкция обозначена как pOIL049 и оценена в листьях растения N. tabacum, стабильно трансформированных генами, кодирующими полипептиды WRI1, DGAT1 и олеозина, содержащими T-ДНК из pJP3502. С применением опосредованных Agrobacterium способов трансформации, конструкцию pOIL049 используют для трансформации клеток растений N. tabacum, гомозиготных по T-ДНК pJP3502 (Пример 3). Трансгенные растения, содержащие гены из pOIL049, отбирают на основе резистентности к гигромицину и выращивают в теплице до стадии зрелости. Образцы ткани трансгенных листьев получены на разных стадиях роста, включая старение листьев, и содержат повышенные уровни ТАГ, по сравнению с материнской линией N. tabacum pJP3502.

Всего получено 149 независимых растений T0 (т.е. первичных трансформантов). Cобраны образцы верхних зеленых листьев всех растений и нижних коричневых, полностью постаревших листьев выбранных событий на стадию завязывания семян в процессе развития растения, и содержание ТАГ количественно определено с помощью ТСХ-ГХ. Количество инсерций T-ДНК pOIL49 в отобранных растениях определено методом цкПЦР, с применением пары праймеров, специфичной в отношении гена гигромицина. Уровень ТАГ 30,2%, в пересчете на сухую массу, наблюдается в ткани зеленых листьев, собранной на стадии завязывания семян. Уровни ТАГ в коричневых листьях ниже в большинстве растений, от которых получены образцы. Однако, три растения (№32b, №8b и №23c) продемонстрировали более высокие уровни ТАГ в ткани постаревших коричневых листьев, чем в зеленых растущих листьях. Указанные растения содержали 1, 2 или 3 инсерции T-ДНК из pOIL49.

Проведен скрининг потомства T1 растений №23c и №32b методом цкПЦР с целью идентификации нулевых, гетерозиготных и гомозиготных по T-ДНК из pOIL049 растений. Растения-потомки растения №23c, содержащего нуль инсерций T-ДНК из pOIL049 (нулевые; всего 7) или две T-ДНК инсерции T-ДНК из pOIL049 (гомозиготные; всего 4) отобран для дальнейшего анализа. Кроме того, растения-потомки растения №32b, содержащие нуль инсерций (нулевые; всего 6) или две инсерции (гомозиготные; всего 9) сохранены для дальнейшего анализа. Образцы ткани зеленых листьев получены перед цветением, и содержание ОЖК и ТАГ определено методом ГХ. Растения дикого типа и растения, трансформированные T-ДНК из pJP3502, были такими же как описано ранее (Пример 11), и были выращен бок-о-бок в одной теплице. Уровни ОЖК перед цветением в листьях трансформантов, содержащих T-ДНК из pOIL049, варьируют от 5,2% до 19,5%, в пересчете на сухую массу (Фиг. 12). Уровни ТАГ в этих же тканях варьируют от 0,8% до 15,4%, в пересчете на сухую массу. Это значительно больше, чем в растениях, содержащих только T-ДНК из pJP3502. Содержание ТАГ в растениях, содержащих Т-ДНК из pJP3502 и pOIL049, дополнительно повышается до уровня от 38,5% до 34,9% в период цветения и завязывания семян, соответственно. Когда состав жирных кислот в общем содержании жирных кислот был проанализирован для листьев, гомозиготных по T-ДНК из pOIL049, наблюдались повышенные уровни C18:2 и сниженные уровни C18:3 (Фиг. 12), в то время как процентное содержание C16:0 и C18:1 остается приблизительно таким же, как и в листьях, трансформированных только T-ДНК из pJP3502. Указанные данные демонстрируют, что добавление второго гена фактора транскрипции под контролем неконститутивного промотора с целью обеспечения регулируемой развитием экспрессии может дополнительно повышать уровни ТАГ в вегетативных тканях растения. Кроме того, данные указывают на некоторую степень экспрессии специфичного для старения промотора SAG12 в зеленой ткани до старения листьев.

Уровни ТАГ значительно повышены в ткани стебля, по сравнению с растениями N. tabacum дикого типа и трансгенными растениями, содержащими только T-ДНК из pJP3502. Некоторые ткани стебля трансгенных растений N. tabacum, трансформированные T-ДНК из pOIL049, содержат 4,9% ТАГ, в пересчете на сухую массу (Фиг. 11). С другой стороны, уровни ТАГ в ткани корня демонстрируют более выраженную вариацию между тремя растениями pOIL049, причем некоторые ткани корня содержат 3,4% ТАГ. Необходимо отметить, что более низкие уровни ТАГ в корнях были сравнимыми с тканью стебля в пределах того же растения, в то время как обратная тенденция наблюдалась в растениях дикого типа и N. tabacum, содержащих только T-ДНК из pJP3502. Состав ТАГ в тканях корня и стебля демонстрирует изменения в содержании C18:1 и C18:3 жирных кислот, подобные наблюдаемым ранее в трансгенной листовой ткани. Уровни C18:2 в ТАГ снижены в трансгенной ткани стебля, в то время как содержание C16 жирных кислот обычно снижено в трансгенных тканях корня, по сравнению с контролем дикого типа.

Получены соответствующие генетические конструкции, кодирующие другие факторы транскрипции под контролем промотора SAG12, а именно LEC1, LEC1like, FUS3, ABI3, ABI4, ABI5 и другие (Пример 10). Например, получены дополнительные конструкции для экспрессии фактора транскрипции однодольных LEC1 Zea mays (Shen с соавт., 2010) или LEC1 Sorghum bicolor (номер доступа Genbank XM_002452582.1) под контролем полученного из однодольных гомолога промотора SAG12 A. thaliana, такого как промотор SEE1 маиса (Robson с соавт., 2004). Дальнейшие конструкции получены для экспрессии факторов транскрипции под контролем регулируемых развитием промоторов, например, таких, которые предпочтительно экспрессируются в период цветения (например, чувствительные к длительности светового дня промоторы), фитохромных промоторов, криптохромных промоторов, или в стеблях растения в ходе вторичного роста, таких как промотор из гена CesA. Указанные конструкции применяются для трансформации растений, причем отбираются растения, которые вырабатывают по меньшей мере 8% ТАГ в вегетативных частях.

Уровни крахмала и сахаров

Уровни крахмала и растворимых сахаров измеряют в листовой ткани, образцы которой получены от растений дикого типа и трансгенных растений, содержащих T-ДНК из pJP3502 или Т-ДНК из pJP3502 и pOIL51 или pJP3502 и pOIL049. В общем, в листьях, содержащих обе Т-ДНК, найдена обратная корреляция между уровнями ТАГ и крахмала в листовой ткани, в пересчете на сухую массу (Фиг. 13). И наоборот, в трансгенных растениях уровни растворимых сахаров в листьях являются таким же, как и в растениях дикого типа, наводя на мысль об отсутствии значимого узкого места в превращении сахаров в ТАГ. Влияние положения листьев в растении наблюдается в растениях дикого типа, в которых уровни крахмала демонстрируют тенденцию к повышению от более низкого к более высокому положению листьев. В трансгенных растениях обнаружено отсутствие такого эффекта.

Пример 13. Специфическая для стебля экспрессия гена, кодирующего фактор транскрипции

Листья растений N. tabacum, экспрессирующих трансгены, которые кодируют WRI1, DGAT и олеозин, на стадии завязывания семян содержат около 16% ТАГ. Однако, уровни ТАГ намного ниже в стеблях (1%) и корнях (1,4%) растений (Vanhercke с соавт., 2014). Авторами изобретения было оценено, являются ли более низкие уровни ТАГ в стеблях и корнях результатом слабой промоторной активности промотора SSU Rubisco, применяемого для экспрессии гена, кодирующего WRI1 в трансгенных растениях. Трансген DGAT в T-ДНК pJP3502 экспрессируется промотором CaMV35S, который более активно экспрессируется в стеблях и корнях, и таким образом он вряд ли является ограничивающим фактором для аккумуляции ТАГ в стеблях и корнях.

В попытке увеличить биосинтез ТАГ в ткани стебля, разработана конструкция, в которой ген, кодирующий WRI1, размещен под контролем. промотора SDP1 A. thaliana. Синтезирован синтетический фрагмент ДНК размером 3,156 тыс. пар оснований, содержащий промотор SDP1 A. thaliana размером 1,5 тыс. пар оснований (SEQ ID NO: 175) (Kelly с соавт., 2013), и далее участок, кодирующий полипептид WRI1 A. thaliana, и участок терминатора/полиаденилирования лектина G. max. Указанный фрагмент вставлен между сайтами SacI и NotI pJP3303. Результирующий вектор обозначен как pOIL050, и в дальнейшем применяется для трансформации клеток растений N. tabacum, гомозиготных по T-ДНК из pJP3502 путем опосредованной Agrobacterium трансформации. Трансгенные растения отобраны на основе резистентности к гигромицину, причем всего 86 независимых трансгенных растений выращены в теплице до стадии зрелости. Получены образцы ткани трансгенного листа и стебля на стадии завязывания семян, которые содержат более высокие уровни ТАГ, чем материнские растения N. tabacum, трансформированные pJP3502.

Пример 14. Повышение содержания масла в семенах

Несколько групп сообщали о повышенных уровнях ТАГ в ткани семени маиса, рапса или Arabidopsis thaliana при повышенной экспрессии индивидуальных генов, кодирующих WRI1 и DGAT1 (Shen с соавт., 2010; Liu с соавт., 2010; Weselake с соавт., 2008; Jako с соавт., 2001; обзор в Liu с соавт., 2012). Недавно, van Erp с соавт. (2014) исследовали влияние соэкспрессии WRI1 и DGAT1 на содержание масла семян в A. thaliana. Абсолютные уровни ТАГ, повышаются с 38% в растениях дикого типа и контроле с пустым вектором до 44% в трансгенных линиях. Сайленсинг липазы ТАГ SDP1 в комбинации с повышенной экспрессией WRI1 и DGAT1 повышал уровни ТАГ до 45%. Необходимо отметить, что, хотя обнаружено увеличение средней массы семян, однако количество семян на растении было ниже, чем в контрольных растениях.

Синтетический фрагмент ДНК размером приблизительно 14,3 тыс. пар оснований, содержащий открытые рамки считывания, кодирующие MGAT2 M. musculus, DGAT1 A. thaliana, WRI1 A. thaliana и полипептиды GPAT4 A. thaliana под контролем специфичных для семени промоторов из генов, кодирующих FAE1, конлинин 1 и конлинин 2, синтезирован и вставлен в виде фрагмента Not I-PstI в pJP3416. Результирующий вектор обозначен как pTV55 (Фиг. 14). Серии производных векторов сконструированы из pTV55 последовательным удалением индивидуальных кассет экспрессии, причем на каждой стадии применялось расщепление рестрикционным ферментом, с последующим самолигированием. Кассету GPAT4 удаляют расщеплением PacI, с получением pTV56. Последующее расщепление SrfI удаляет кассету экспрессии MGAT2, с образованием pTV57. Кассету WRI1 удаляют с применением фланкирующих рестрикционных сайтов SbfI, с получением pTV58. В конце, кассету DGAT1 в pTV58 обменивают на кассету WRI1 путем расщепления Srf I и PacI, с последующей обработкой T4 ДНК полимеразой и лигированием. Кассету WRI1 вырезают из pTV57 с применением SbfI и обрабатывают T4 полимеразой. Лигирование кассеты WRI с тупыми концами в расщепленный SrfI-PacI скелет pTV58 дает pTV59. Каждый вектор содержит e35S (содержащий удвоенный участок энхансера)::ген ФАТ в качестве гена селекционного маркера, обеспечивая резистентность к BASTA.

Вкратце, конструкции содержат следующие комбинации генов:

pTV55: ProCnl1::MGAT2+ProCnl2::DGAT1+ProCnl1::GPAT4+ProFAE1::WRI1;

pTV56: ProCnl1::MGAT2+ProCnl2::DGAT1+ProFAE1::WRI1;

pTV57: ProCnl2::DGAT1+ProFAE1::WRI1;

pTV58; ProCnl2::DGAT1;

pTV59: ProFAE1::WRI1.

Конструкции pTV55-pTV59 по отдельности вводят в штамм AGL1 A. tumefaciens и применяют для трансформации C. sativa (сорт Celine) методом погружения цветков, адаптированным из Liu и другие (2012). Вкратце, недавно открытые цветочные почки погружают в. раствор A. tumefaciens на 15 с, заворачивают в пленку из пластического материала и оставляют на ночь в темноте при 24°C, после чего пластический материал удаляют. Всего выполняют 3-4 погружения цветков, на основании качества доступных цветков. Растения выращивают до уровня зрелости и собирают урожай семян T1. После прорастания семени T1 на грунте, укоренившиеся саженцы T1 (7-10 дней) обрызгивают 0,1% гербицидом BASTA (250 г/л аммония глюфосината; Crop Science Pty Ltd, Виктория, Австралия) для отбора для растений, экспрессирующих ген селекционного маркера ФАТ. Выжившие саженцы отделяют, переносят в свежие горшки с грунтом и выращивают до состояния зрелости в теплице при 22±1°C (день) и 18±1°C (ночь). Урожай семян T2 собирают, и содержание масла (которое по меньшей мере на 95% состоит из ТАГ) для 3 независимых партий семян по 50 мг от каждой линии измеряют методом ЯМР (MQC, Oxford Instruments). Калибровочные образцы готовят с сухой бумагой Kimwipes, содержащей известные количества масла семян C. sativa, в пробирках для ЯМР диаметром 10 мм, чтобы генерировать диапазон содержания масла на основании массы бумаги и масла. Калибровочные образцы опечатывают парафильмом и перед использованием выдерживают при 40°C в нагревательном блоке по меньшей мере в течение 1 часа, чтобы позволить маслу равномерно распределиться в ткани. Калибровочные образцы измеряют трижды с применением зонда с магнитом на 0,55 Тесла диаметром 10 мм, функционирующим на частоте резонанса протона 23,4 МГц в течение 16 секунд. Температуру магнита поддерживают на уровне 40°C. Образцы семян вначале сушат в печи при температуре 105°C на протяжении ночи, чтобы гарантировать содержание влажности менее чем 5%. Затем образцы взвешивают, переносят в стеклянную пробирку диаметром 10 мм и инкубируют при 40°C в течение 1 часа перед анализом методом ЯМР. Содержание масла измеряют методом ЯМР в трех экземплярах с калибровкой на основании массовой компенсации.

Количество вставленных копий T-ДНК в каждой трансформированной линии определяют цифровой ПЦР (цПЦР). Вначале геномную ДНК расщепляют с помощью EcoRI и BamHI, чтобы гарантировать физическое разделение Т-ДНК в случае множественных инсерций. Ген LEAFY C. sativa (lfy) выбран в качестве референтного гена, и селекционный маркер выбран в качестве гена-мишени в реакции мультиплексной цПЦР. Зонды метят с помощью HEX (референтного гена) или FAM (гена-мишени). Условия амплификации были следующими: 95°C в течение 10 минут (повышение со скоростью 2,5°C/с), 39 циклов при 94°C в течение 30 секунд (повышение со скоростью 2,5°C/с) и при 61°C в течение 1 минуты (повышение со скоростью 2,5°C/с), 98°C в течение 10 минут. После ПЦР амплификации, флуоресценцию отдельных капелек измеряют с помощью устройства для считывания капелек QX100 (BioRad), и количество копий вычисляют с применением программного обеспечения QuantaSoft (версия 1.3.2.0, BioRad).

Трансформация C. sativa дает множественные трансгенные события, демонстрирующие повышенные уровни ТАГ в сегрегированных семенах T2, по сравнению с нетрансформированным контролем дикого типа (Фиг. 15). Интересно, что наиболее высокие уровни ТАГ получены с pTV57, который содержит гены, кодирующие WRI1 и DGAT1. Дополнительная инсерция MGAT2 (pTV56) и MGAT2+GPAT4 (pTV55) приводит к несколько более низким уровням ТАГ, по сравнению с pTV55. Определение количества копий выявило 1 или 2 инсерции T-ДНК для линий pTV57, демонстрирующих второе по величине и самое высокое содержание масла, соответственно (Таблица 14).

Гомозиготные растения T2, трансформированные T-ДНК из pTV057, дополнительно были скрещены с растениями C. sativa, трансформированными генами для экспрессии десатураз и элонгаз жирных кислот, необходимых для синтеза и аккумуляции ДГК в семени (WO2013/185184). Семена F1 демонстрируют повышенное содержание масла, по данным ЯМР, по сравнению с семенами C. sativa, трансформированными конструкцией ДГК и без T-ДНК pTV57. Содержание ДГК в семенах определяют путем измерения уровней ДГК во фракции ТАГ, по сравнению с содержанием ДГК C. sativa в материнском растении. Общее содержание ДГК в семенах (мг ДГК/г семян), содержащих обе Т-ДНК, повышено относительно общего содержания ДГК в семенах, содержащих только конструкцию ДГК.

Таблица 14. Содержание масла (%) в семени T2 и количество копий (цифровая ПЦР) в трансгенных событиях pTV57 C. sativa.

Линия pTV57	Масло из семян (%)	Количество копий
CMD29-1	36,97	?
CMD29-2	36,69	?
CMD29-3	35,16	1,02
CMD29-4	28,47	6,6
CMD29-5	40,60	2
CMD29-6	37,86	4,68
CMD29-7	39,17	2,94
CMD29-8	39,88	0,947
CMD29-9	36,70	1,04
CMD29-10	37,19	0,935
CMD29-11	31,20	14,3
CMD29-20	33,08	6

Пример 15. Влияние экспрессии белка масляных включений на аккумуляцию и оборот ТАГ

Растения N. tabacum, трансформированные T-ДНК pJP3502 и экспрессирующие трансгены, которые кодируют WRI1, DGAT1 A. thaliana и олеозин S. indicum, содержат повышенные уровни ТАГ в вегетативных тканях. Как проиллюстрировано в Примере 11 выше, при сайленсинге эндогенного гена, кодирующего липазу ТАГ SDP1, в таких растениях, уровни ТАГ в листьях дополнительно повышаются, что указало авторам изобретения на тот факт, что происходит значительный оборот ТАГ в растениях, которые сохранили активность SDP1. Таким образом, был определен уровень экспрессии трансгенов в растениях. Хотя гибридизация методом Нозерн-блоттинга подтвердила выраженную экспрессию WRI1 и DGAT1 и некоторую экспрессию мРНК олеозина, анализ экспрессии методом цифровой ПЦР и кОТ-ПЦР обнаружил только очень низкие уровни транскриптов олеозина. Анализ экспрессии выявил, что ген, кодирующий олеозин, экспрессируется слабо, по сравнению с трансгенами WRI1 и DGAT1. На основании указанных экспериментов, авторами изобретения был сделан вывод о том, что масляные включения в листовой ткани не были полностью защищены от расщепления ТАГ из-за ненадлежащей выработки белка олеозина, кодируемого T-ДНК в pJP3502. Для повышения стабильности аккумуляции ТАГ в процессе развития растения, были разработаны несколько модификаций pJP3502, в которых ген олеозина был заменен. Указанные модифицированные конструкции были такими, как указано ниже.

1. pJP3502 содержит ген (в SEQ ID NO: 176 приведена комплементарная ему последовательность), кодирующий олеозин S. indicum, который слабо экспрессировался. Данный ген содержит внутренний интрон UBQ10, который может снижать уровень экспрессии. Для проверки этого, синтетический фрагмент ДНК размером 502 пары оснований, содержащий ген олеозина S. indicum и не содержащий внутреннего интрона UBQ10, был синтезирован и вставлен в pJP3502 в виде фрагмента NotI, заменяя в pJP3502 ген олеозина, содержащий интрон. Результирующая плазмида обозначена как pOIL040.

2. Промотор маленькой субъединицы (SSU) Rubisco, управляющий экспрессией гена олеозина в pJP3502, был заменен конститутивным промотором enTCUP2. На данный момент, фрагмент размером 2321 пар оснований, содержащий промотор enTCUP2, кодирующий белок олеозин участок, участок терминатора/полиаденилирования лектина G. max и первые 643 пары оснований в направлении по ходу транскрипции промотора SSU, управляющего экспрессией wri1, синтезирован и субклонирован в сайты AscI и SpeI pJP3502, с получением pOIL038.

3. Подобной стратегией следовали для экспрессии сконструированной версии гена олеозина S. indicum, содержащего 6 введенных остатков цистеина (o3-3) под контролем промотора enTCUP2 (Winichayakul с соавт., 2013). Фрагмент размером 2298 пар оснований, содержащий промотор enTCUP2, кодирующий белок олеозин участок o3-3, участок терминатора/полиаденилирования лектина G. max и первые 643 пары оснований в направлении по ходу транскрипции промотора SSU, управляющего экспрессией wri1, синтезирован и субклонирован в сайты AscI и SpeI pJP3502, с получением pOIL037.

4. Сайты NotI, фланкирующие ген олеозина S. indicum в pJP3502, применяются для обмена кодирующего белок участка на участок, кодирующий олеозин 3 арахиса (номер доступа AAU21501.1) (Parthibane с соавт., 2012a; Parthibane с соавт., 2012b). Фрагмент размером 528 пар оснований, содержащий ген олеозина 3, фланкированный сайтами NotI, синтезирован и субклонирован в соответствующий сайт pJP3502. Результирующий вектор обозначен как pOIL041

5. Дополнительно, фланкированный NotI фрагмент размером 1077 пар оснований, который содержит ген, кодирующий стеролеозин A. thaliana (Arab-1) (номер доступа AAM10215.1) (Jolivet с соавт., 2014), синтезирован и субклонирован в сайт NotI pJP3502, с получением pOIL043.

6. Поверхностный белок липидных капелек Nannochloropsis oceanic (ПБЛК) (номер доступа AFB75402.1) (Vieler с соавт., 2012) синтезирован в виде NotI-фланкированного фрагмента размером 504 пары оснований и субклонирован в сайт NotI pJP3502, с получением pOIL044.

7. И наконец, калеозин A. thaliana (CLO3) (номер доступа O22788.1) (Shimada с соавт., 2014) синтезирован в виде фланкированного NotI фрагмента размером 612 пар оснований и субклонирован в pJP3502, с получением pOIL042.

Каждую из этих конструкций вводят в клетки листьев N. benthamiana, как описано в Примере 1. Временная экспрессия как pJP3502, так и pOIL040 в листовой ткани N. benthamiana приводит к повышенным уровням ТАГ и подобным изменениям профиля жирных кислот в ТАГ, однако pOIL040 повышает уровень ТАГ в большей степени (1,3% по сравнению с 0,9%). Каждая из конструкций pOIL037, pOIL038, pOIL041, pOIL042 и pOIL043 применяется для стабильной трансформации растений N. tabacum (сорт W38) с помощью опосредованных Agrobacterium способов. Трансгенные растения отбирают на основании резистентности к канамицину и выращивают в теплице до состояния зрелости. На различных стадиях развития растения отбирают образцы трансгенной листовой ткани, которые содержат повышенные уровни ТАГ, по сравнению с N. tabacum дикого типа и растениями N. tabacum, трансформированными pJP3502.

Клонирование и характеристика полипептидов БСЛК из Sapium sebifera

Олеозины не экспрессируются с высокими уровнями в несеменных тканях растения, аккумулирующих масло, таких как мезокарп оливы, масличной пальмы и авокадо (Murphy, 2012). Вместо этого, в данных тканях идентифицированы белки, связанные с липидными капельками (БСЛК), которые могут играть роль, подобную роли олеозина в тканях семени (Horn с соавт., 2013). Таким образом, авторы изобретения рассмотрели возможность того, что олеозин не является оптимальным упаковочным белком для защиты аккумулированного масла от липазы ТАГ или другого влияния цитозольных ферментов в вегетативных тканях растений. Таким образом, полипептиды БСЛК были идентифицированы и оценены на предмет повышения аккумуляции ТАГ, как указано ниже.

Плод китайского сального дерева Sapium sebifera, члена семейства Euphorbiaceae, представляет особый интерес для авторов изобретения, поскольку он содержит богатую маслом ткань за пределами семени. Недавнее исследование (Divi с соавт., подано для публикации) показало, что указанная маслянистая ткань под названием жировой слой может происходить из мезокарпа плода растения. Таким образом, авторами изобретения подвергнута сомнению транскриптома S. sebifera из-за последовательностей БСЛК. Сравнительный анализ экспрессированных генов в тканях оболочки фрукта и семени выявил группу из трех ранее идентифицированных генов БСЛК, которые экспрессировались с высокими уровнями в жировом слое.

Нуклеотидные последовательности, кодирующие три БСЛК, получены методом ОТ-ПЦР с применением РНК, происходящих из жировой ткани, и трех пар праймеров. Последовательности праймеров основаны на последовательностях ДНК, фланкирующих полный кодирующий участок для каждого из трех генов. Последовательности праймера: для БСЛК1, 5'-TTTTAACGATATCCGCTAAAGG-3' (SEQ ID NO: 245) и 5'-AATGAATGAACAAGAATTAAGTC-3' (SEQ ID NO: 246) AT-3'; БСЛК2, 5'-CTTTTCTCACACCGTATCTCCG-3' (SEQ ID NO: 247) и 5'-AGCATGATATA CTTGTCGAGAAAGC-3' (SEQ ID NO: 248); БСЛК3, 5'-GCGACAGTGTAGCGTTTT-3' (SEQ ID NO: 249) и 5'-ATACATAAAATGAAAACTATTGTGC-3' (SEQ ID NO: 250).

Анализ транскриптомы S. sebifera обнаружил многочисленные ортологи для каждого из генов БСЛК, в том числе восемь БСЛК1, шесть БСЛК2 и шесть БСЛК3 генов, с менее чем 10% дивергенцией последовательностей в пределах каждого семейства гена. Предполагаемые последовательности пептида выровнены, и филогенетическое дерево сконструировано с применением программного обеспечения Genious (Фиг. 16), вместе с гомологами БСЛК из других видов растений, включая два из авокадо (Pam), один из масличной пальмы, один из Parthenium argentatum (Par), два из Arabidopsis (Ath), пять из Taraxacum brevicorniculatum (Tbr), три из Hevea brasiliensis (Hbr), как проиллюстрировано на Фиг. 16. Филогенетическое дерево выявило, что SsLDAP3 разделяет большую степень идентичности аминокислотных последовательностей с полипептидами БСЛК1 и БСЛК2 из авокадо и БСЛК из масличной пальмы, в то время как полипептиды SsLDAP1 и SsLDAP2 были более дивергентными.

Генетические конструкции для повышенной экспрессии БСЛК

Для оценки функции БСЛК из S. sebifera получены векторы экспрессии для экспрессии каждого из указанных полипептидов под контролем промотора 35S в клетках листа. Полноразмерные последовательности кДНК SsLDAP вставляют в вектор назначения pDONR207 посредством реакций рекомбинации, заменяя участки CcdB и Cm(R) вектора назначения фрагментами кДНК SsLDAP. Последующее подтверждение методом анализа рестрикционного расщепления и секвенирования ДНК, конструкции вводят в штамм AGL1 Agrobacterium tumefaciens и применяют для временной экспрессии в клетках листьев N. benthamiana и стабильной трансформации N. tabacum.

Экспрессия каждого из трех генов SsLDAP под транскрипциональным контролем промотора 35S в листьях N. benthamiana в комбинации с экспрессией 35S::AtDGAT1 и 35S::AtWRI1 дает значительно более высокие уровни аккумуляции ТАГ, по сравнению с клетками, инфильтрованными генами 35S::AtDGAT1 и 35S::AtWRI1 без конструкции БСЛК. Уровень ТАГ повышается приблизительно в 2 раза, по сравнению с уровнем ТАГ в контрольных клетках. В клетках, получающих комбинацию генов, наблюдается значительное повышение уровня α-линоленовой кислоты (АЛК) и снижение уровня насыщенных жирных кислот, относительно контрольных клеток.

Солокализация ЖФБ-химерных полипептидов БСЛК с капельками липида в клетках листа

С целью характеристики SsLDAP in vivo и наблюдения за их поведением в динамике, получены экспрессионные конструкции для экспрессии химерных полипептидов, состоящих из полипептидов БСЛК, слитых с желтым флуоресцентным белком (ЖФБ). Для каждого химерного полипептида, ЖФБ был слит в рамке с C-концом SsLDAP. Полная открытая рамка считывания каждого из трех генов БСЛК, без стоп-кодона на 3' конце, слита с последовательностью ЖФБ и химерными генами, вставленными в pDONR207. После подтверждения полученных конструкций методом рестрикционного расщепления и секвенирования ДНК, в конструкции вводят в штамм AGL1 A. tumefaciens и применяют для временной экспрессии в клетках листа N. benthamiana и стабильной трансформации N. tabacum. Через три дня после инфильтрации клеток листа конструкциями БСЛК-ЖФБ, листовые диски из инфильтрованных областей окрашивают Красным Нилом, который положительно окрашивает липидные капельки, и визуализируют под однофокусным микроскопом, чтобы обнаружить красное окрашивание (капельки липида) и флуоресценцию полипептида ЖФБ. Наблюдается солокализация БСЛК-ЖФБ с липидными капельками, указывая на связь БСЛК с липидными капельками в клетках листа.

Пример 16. Модификация жирных кислот в различных пулах липида в листьях, аккумулирующих высокие уровни ТАГ

Авторами изобретения описана выработка повышенных уровней ТАГ в N. tabacum путем соэкспрессии трансгенов, кодирующих WRI1 A. thaliana, DGAT1 A. thaliana и олеозин S. indicum (Vanhercke и другие, 2014). Для изучения возможности совмещения модификаций жирных кислот в различных пулах липида, которые существуют в листьях, с соэкспрессией комбинации гена WRI1 и DGAT1, выполнялись эксперименты с временной экспрессией, чтобы посмотреть, могут ли встречаться жирные кислоты в пулах ацил-КоА и ацил-ФХ. В одном эксперименте экспрессию трансгена, кодирующего элонгазу жирных кислот A. thaliana (AtFae1), которая удлиняет C18:1-КоА до C20:1-КоА, сочетали с генами, кодирующими WRI1 и DGAT, с целью оценки модификаций в пуле ацил-КоА. Во втором эксперименте трансген, кодирующий десатуразу 2 жирных кислот A. thaliana (AtFAD2), которая преобразует C18:1-ФХ в C18:2-ФХ посредством введения кратной связи, сочетали с генами WRI1 и DGAT, с целью оценки модификаций в пуле ФХ. Указанные эксперименты разработаны для оценки доступности ацильных субстратов в ЭР растительных клеток.

Ген, кодирующий AtFAE1, экспрессируется промотором CaMV35S в листьях N. benthamiana, отдельно или в комбинации с WRI1 и DGAT1, как описано в Примере 1, в трех экземплярах. Образцы листьев собирают через 5 дней после инфильтрации клетками Agrobacteriu, содержащими различные комбинации генов. Общий липид экстрагируют из образцов листьев, и в каждом случае фракцию ТАГ отделяют с помощью ТСХ. Определяют состав жирных кислот каждой фракции ТАГ и проводят количественное определение методом ГХ с применением известного количества C17:0-ТАГ в качестве внутреннего стандарта. Как проиллюстрировано в Таблице 15, доля C20:1 в ТАГ значительно повышается при экспрессии AtAFE1. Кроме того, соэкспрессия WRI1 и DGAT1 с AtFAE1 повышает уровень продукта C20:1, по сравнению с контролем, в то время как общее количество ТАГ повышается с 0,8 до 14,9 мкг/мг листа. Продукт C20:1 в ТАГ аккумулируется с таким высоким содержанием, как 0,96 мкг на мг, по сравнению с 0,04 мкг на мг без комбинации WRI1 и DGAT1.

Таблица 15. Модифицированные уровни жирных кислот после трансгенной экспрессии модифицирующих ферментов в листьях N. benthamiana.

Образец	C18:1 (%)	C20:1 (%)	ТАГ (мкг/мг см)	C20:1 (мкг/мг см)
Контроль	6,9 ± 1,5	0,4 ± 0,4	0,4 ± 0,3	0,01
WRI1+DGAT1	17,1± 1,0	0,4 ± 0,2	16,3 ± 2,1	0,06
AtFAE1	7,0 ± 3,0	4,7 ± 3,1	0,8 ± 0,8	0,04
WRI1+DGAT1 +AtFAE1	15,3 ± 0,5	6,4 ± 0,2	14,9 ± 2,5	0,96

Дополнительно, AtFAD2 соэкспрессируют промотором CaMV35S в листьях N. benthamiana, отдельно или в комбинации с WRI1 и DGAT1. Определяют состав жирных кислот фракции ТАГ, и проводят количественное определение, как описано выше. Уровень жирной кислоты C18:2 в ТАГ значительно повышается при соэкспрессии AtFAD2 с WRI1 и DGAT1, с 10,7% до 37,9%, а уровень C18:1 снижается с 19,5% до 7,6%. Кроме того, наблюдаются значительные уровни ТАГ (13,4 мкг/мг листа) при соэкспрессии WRI+DGAT1+AtFAD2 в листьях. Полученные результаты явно демонстрируют, что состав и количество жирных кислот могут быть модифицированы добавлением ферментов модификации жирных кислот в комбинации по меньшей мере с WRI1 и DGAT, и таким образом их можно применять для повышения аккумуляции модифицированных жирнокислотных продуктов, генерируемых в одном или обоих пулах ацил-КоА и ФХ, и в конечном счете, хранения в ТАГ в вегетативных частях растения.

Пример 17. Сайленсинг генов ТГД в растениях

Согласно оценкам Li-Beisson с соавт. (2013), в листьях Arabidopsis (растения 16:3) приблизительно 40% жирных кислот, синтезированных в хлоропластах, поступают в прокариотный путь, тогда как 60% экспортируются для поступления в эукариотный путь. После того десатурации в ЭР, около половины указанных экспортированных жирных кислот возвращается в пластиду, чтобы обеспечить синтез галактолипидов для тилакоидных мембран. В транспорте (импорт) жирных кислот в пластиду, в виде ДАГ или фосфолипидов, принимает участие TGD1, пермеаза-подобный белок внутреннего хлоропластного конверта. Переносчик липидов ABC Arabidopsis, содержащий белки TGD1, 2 и 3, идентифицирован Benning с соавт. (2008 и 2009), и позже Roston с соавт. (2012). Указанный комплекс белка локализован во внутренней мембране хлоропластного конверта, и предполагается, что он опосредует перенос фосфатидата через указанную мембрану. Полипептид TGD2 представляет собой фосфатидил-связывающий белок, и TGD3 представляет собой АТФазу. Новый белок Arabidopsis, TGD4, идентифицирован с помощью генетического подхода (Xu с соавт., 2008), причем инактивация гена TGD4 также блокирует перенос липида из ЭР в пластиды. Последние биохимические данные указывают на то, что TGD4 является фосфатидат-связывающим белком, расположенным во внешней мембране хлоропластного конверта (Wang и Benning, 2012).

Xu с соавт. (2005) описали неплотные аллели tgd1 в A. thaliana, приводящие к снижению роста растения и высокой частоте абортов эмбриона. Листовая ткань мутантов tgd1 A. thaliana содержит повышенные уровни ТАГ, вероятно в форме цитозольных масляных капелек. Кроме того, повышенные уровни ТАГ найдены в корнях мутантов tgd1. Не было обнаружено отличий в содержании масла в семенах. О подобной аккумуляции ТАГ в листовой ткани сообщалось для мутантов A. thaliana tgd2 (Awai с соавт., 2006), tgd3 (Lu с соавт., 2007) и tgd4 (Xu с соавт., 2008). Все мутантные аллели tgd были достаточно неплотными или значительно ослабляли развитие растения.

Сайленсинг TGD1

Конструкция сайленсинга, направленная против пластидного импортера TGD1, сгенерирована на основании полноразмерного транскрипта мРНК, идентифицированного в транскриптоме N. benthamiana. Фрагмент размером 685 пар оснований амплифицируют из кДНК листа N. benthamiana при инкорпорации в сайт PmlI на 5' конце. Вначале фрагмент TGD1 клонируют в pENTR/D-TOPO (Invitrogen), и затем вставляют в вектор назначения pHELLSGATE12 посредством клонирования LR (Gateway). Полученный вектор экспрессии, обозначенный как pOIL025, временно экспрессируют в N. benthamiana, чтобы оценить влияние сайленсинга гена TGD1 на уровни ТАГ в листьях. Конструкцию шпильки TGD1 размещают под контролем индуцибельного промотора alcA A. niger путем субклонирования в виде фрагмента Pml I-EcoRV в сайты NheI (Кленова)-SfoI pOIL020 (ниже). Полученным вектором, обозначенным как pOIL026, супертрансформируют гомозиготную линию N. tabacum pJP3502 с целью дополнительного повышения уровней масла в листьях.

Получены дополнительные конструкции для экспрессии шпилечной РНК с целью снижения экспрессии генов TGD-2, -3 и -4. С применением указанных конструкций получены трансформированные растения, и в трансформантах определено содержание масла. Трансформированные растения скрещены с трансформантами, полученными с применением pJP3502 или других комбинаций генов, как изложено выше.

Пример 18. Экспрессия комбинаций генов в картофельных клубнях

Конструкция pJP3506

Генетическая конструкция, содержащая три гена для экспрессии в картофельных клубнях, получена и применяется для трансформации картофеля. Указанная конструкция обозначена как pJP3506 и базируется на существующем векторе pJP3502 (WO2013/096993) с заменой промоторов, чтобы обеспечить специфическую для клубня экспрессию. pJP3506 содержит (i) ген резистентности к канамицину NPTII под управлением промотора 35S с удвоенным участком энхансера (e35S), в качестве гена селекционного маркера, и три экспрессионные кассеты генов, которые представляют собой (ii) 35S::AtDGAT1, кодирующую DGAT1 Arabidopsis thaliana, (iii) B33::AtWRI1, кодирующую WRI1 Arabidopsis thaliana, и (iv) B33::олеозин кунжута, кодирующую олеозин из Sesame indicum. Нуклеотидные последовательности, кодирующие указанные полипептиды, являются такими же, как в pJP3502. Промотор пататина B33 (B33) представляет собой специфичный для клубня промотор, полученный из Solanum tuberosum, который был предложен д-ром Alisdair Fernie, Институт молекулярной физиологии растений им. Макса Планка, Потсдам, Германия. Круговая карта плазмиды pJP3506 представлена на Фиг. 17.

Последовательность промотора пататина B33 S. tuberosum, применяемая в конструкции pJP3506, представляет собой укороченную версию, в которой 183 нуклеотида удалены на 5' конце и 261 нуклеотид удален на 3' конце, по сравнению с номером доступа GenBank X14483. Нуклеотидная последовательность промотора пататина B33, применяемого в pJP3506, приведена в SEQ ID NO: 211.

Трансформация картофеля

Саженцы картофеля (Solanum tuberosum), сорт Atlantic, выращенные в культуре ткани, в асептических условиях, приобретены у Toolangi Elite, сертифицированного органа семенного картофеля в Виктории (СОСКВА), Австралия. Междоузлия стебля разрезают на куски длиной приблизительно 1 см под суспензией штамма LBA4404 Agrobacterium tumefaciens, содержащего pJP3506. Клетки Agrobacterium выращивают до OD 0,2 и разбавляют равным объемом среды МС. Избыток суспензии Agrobacterium удаляют кратковременным промоканием куском стебля стерильной фильтровальной бумагой, с последующим переносом на среду МС и инкубированием при 24°C в течение двух дней (сокультивирование). Затем междоузлия переносят на свежую среду МС с добавлением 200 мкг/л НУК, 2 мг/л бензиламинопурина (БАП) и 250 мг/л цефотаксима. Селекцию трансгенных каллюсов начинают через 10 дней, после переноса междоузлий на свежую среду МС с добавлением 2 мг/л БАП, 5 мг/л GA3, 50 мг/л канамицина и 250 мг/л цефотаксима. Побеги, регенерирующие из каллюсов, вырезают и помещают на простую среду МС для индукции корней, перед пересадкой в горшок диаметра 15 см, содержащий почвенную смесь и выращиванием в теплице до состояния зрелости растения, включая рост клубня.

Экстракция ДНК и молекулярная идентификация трансгенных растений методом ПЦР

Диски диаметром около 1 см получают из листьев картофеля от растений в теплице. Их помещают в планшет для микротитрования с глубокими лунками и лиофилизируют в течение 48 часов. Далее лиофилизированные образцы листьев измельчают в порошок, добавляя стальной шарик в каждую лунку, и встряхивают планшет в лизаторе для тканей Reicht (Qiagen) с максимальной частотой 28/с в течение 2 минут для каждой стороны планшета для микротитрования. 375 мкл экстракционного буфера, содержащего 0,1 М Трис-HCl, pH 8,0, 0,05 М ЭДТА и 1,25% натрия додецилсульфата (НДС) добавляют в каждую лунку, содержащую порошкообразную листовую ткань. Через 1 час инкубации при 65°C, 187 мкл 6 М ацетата аммония добавляют в каждую лунку, и смеси выдерживают при 4°C в течение 30 минут перед центрифугированием планшетов на протяжении 30 минут при 3000 об/мин. 340 мкл супернатанта из каждой лунки переносят в новый планшет для микротитрования с глубокими лунками, содержащий 220 мкл изопропанола и выдерживают в течение 5 минут при комнатной температуре перед центрифугированием при 3000 об/мин на протяжении 30 минут. Осажденные гранулы ДНК промывают 70% этанолом, сушат на воздухе и ресуспендируют в 225 мкл H₂O на образец.

По два мкл каждого препарата ДНК образцов листьев добавляют к 20 мкл реакционной смеси ПЦР с помощью системы ПЦР HotStar (Qiagen). Пару олигонуклеотидных праймеров, основанных на 5' и 3' последовательностях из гена WRI1 Arabidopsis thaliana, кодон-оптимизированного для табака, применяют в реакциях ПЦР. Последовательности праймеров: Nt-Wri-P3: 5'-CACTCGTGCTTTCCATCATC-3' (SEQ ID NO: 212) и Nt-Wri-P1: 5'-GAAGGCTGAGCAACAAGAGG-3'(SEQ ID NO: 213). Кроме того, пару олигонуклеотидных праймеров, основанных на гене DGAT1 Arabidopsis thaliana, кодон-оптимизированном для табака, применяют в отдельной реакции ПЦР для каждого образца ДНК. Последовательности праймеров: Nt-DGAT-P2: 5'-GGCGATTTTGGATTCTGC-3' (SEQ ID NO: 214) и Nt-DGAT-P3: 5'-CCCAACCCTTCCGTATACAT-3' (SEQ ID NO: 215). Амплификацию проводят с начальным циклом при 95°C в течение 15 минут, за которым следуют 40 циклов при 95°C в течение 30 секунд, при 57° C в течение 30 с и при 72°C в течение 60 секунд. Продукты ПЦР обрабатывают электрофорезом на 1% агарозном геле для обнаружения специфичных продуктов амплификации

Анализ липида картофельных клубней

Тонкие ломтики клубней, собранные с регенерированных картофельных растений для подтвержденных трансгенных растений и нетрансформированного контроля, лиофилизируют в течение 72 часов, и анализируют содержание и состав липида. Общие липиды экстрагируют из сухих тканей клубня с применением хлороформа: метанола: 0,1 М KCl (2:1:1 об/об/об), как указано ниже. Лиофилизированные ткани клубня вначале гомогенизируют в хлороформе: метаноле (2:1, об/об) в пробирке Эппендорфа, содержащей металлический шар, с помощью лизатора для тканей Reicht (Qiagen) в течение 3 минут при частоте 29/с. После смешивания каждого гомогената с Vibramax 10 (Heidolph) при 2000 об/мин в течение 15 минут, к каждому образцу добавляют 1/3 объема 0,1 М раствора KCl и дополнительно перемешивают. После центрифугирования при 10000 g в течение 5 минут, из каждого образца отбирают нижнюю фракцию, содержащую липиды, и полностью выпаривают в потоке N₂. Каждый препарат липида растворяют в 3 мкл CHCl₃ на миллиграмм сухой массы клубня. Аликвоты препаратов липида наносят на пластину для тонкослойной хроматографии (ТСХ) (20 см x 20 см, силикагель 60, Merck) и элюируют гексаном: диэтиловым эфиром: уксусной кислотой (70:30:1, об/об/об). Пластину ТСХ обрызгивают примулином и визуализируют в УФ-свете, чтобы проявить пятна липида. ТАГ и ФХ извлекают, соскабливая кремния диоксид с подходящих полос, и превращают в метиловые эфиры жирных кислот (МЭЖК), инкубируя материал в 1 н метанольной HCl (Supelco, Беллефонт, Пенсильвания) при 80°C в течение 2 часов, вместе с известным количеством тригептадеканоина (Nu-Chek PREP, Inc., США) в качестве внутреннего стандарта для количественного определения липида. МЭЖК анализируют на приборе ГХ-ПИД (7890A ГХ, Agilent Technologies, Пало Альто, Калифорния), оборудованном колонкой BPX70 длиной 30 м (внутренний диаметр 0,25 мм, толщина пленки 0,25 мм, SGE, Остин, США), как было описано ранее (Petrie с соавт., 2012). Пики интегрируют с помощью программного обеспечения Agilent Technologies ChemStation (версия B.04.03).

Среди приблизительно 100 регенерированных индивидуальных трансгенных линий, анализ липидов, полученных из молодых картофельных клубней диаметром приблизительно 2 см обнаружил повышенные уровни общих липидов, ТАГ и фракций фосфолипидов в клубнях многих трансгенных растений, причем наблюдается диапазон от отсутствия повышения до значительного повышения. Первый анализ липидов картофельного клубня показал, что типичный картофельный клубень дикого типа в ранней стадии развития (диаметр около 2 см) содержит около 0,03% ТАГ, в пересчете на сухую массу.

Содержание общих липидов было повышено до 0,5-4,7% масс. (сухая масса) в клубнях 21 индивидуального трансгенного растения, представляющего 16 независимо трансформированных линий (Таблица 16). Клубни линии №69 продемонстрировали наиболее высокую аккумуляцию ТАГ, в среднем 3,3%, в пересчете на сухую массу. Это соответствует повышению приблизительно в 100 раз относительно клубней дикого типа в такой же стадии развития. Дополнительно, клубни этой же трансгенной линии аккумулировали наиболее высокие из наблюдаемые уровней фосфолипидов, 1,0% масс. в молодых клубнях, в пересчете на сухую массу (Таблица 18). Кроме того, повышенная аккумуляция липида сопровождалась модификацией состава жирных кислот в трансгенных клубнях. Трансгенные клубни систематически аккумулировали более высокие проценты насыщенных и мононенасыщенных жирных кислот (МНЖК) и более низкие уровни полиненасыщенных жирных кислот (ПНЖК) в общем содержании жирных кислот и во фракции ТАГ общих жирных кислот (Таблица 17), конкретно, сниженный уровень 18:3 (АЛК), который был уменьшен с около 17% для дикого типа до менее чем 10% в трансгенных клубнях. Уровень олеиновой кислоты (18:1) в общем содержании жирных кислот повышался с около 1% для дикого типа до более чем 5% во многих линиях и более чем 15% в некоторых клубнях. Хотя уровни пальмитиновой кислоты были повышены, уровни стеариновой кислоты (18:0) были сниженные в лучших трансгенных линиях (Таблица 16 и 17).

Трансгенные картофельные растения содержали в теплице, чтобы позволить непрерывный рост клубней. Клубни большего размера линии №69 содержали более высокие уровни ОЖК и ТАГ, чем клубни диаметром приблизительно 2 см.

Дополнительно повышенные уровни ОЖК и ТАГ получены в картофельных клубнях путем добавления химерного гена, кодирующего сайленсинговую РНК для снижения экспрессия эндогенного гена SDP1, в комбинации с генами WRI1 и DGAT.

Дальнейшие комбинации генов для трансформации картофеля

Общую РНК из свежих, развивающихся картофельных (Solanum tuberosum L., сорт Atlantic) клубней экстрагируют способом TRIzol (Invitrogen). Выбранные участки кДНК, кодирующие маленькую субъединицу АГФазы картофеля и SDP1, получены с помощью ОТ-ПЦР с применением следующих праймеров: st-AGPs1: 5'-ACAGACATGTCTAGACCCAGATG-3' (SEQ ID NO: 251), st-AGPa1: 5'-CACTCTCATCCCAAGTGAAGTTGC-3' (SEQ ID NO: 252); st-SDP1-s1: 5'-CTGAGATGGAAGTGAAGCACAGATG-3' (SEQ ID NO: 253), и st-SDP1-a1: 5'-CCATTGTTAGTCCTTTCAGTC-3' (SEQ ID NO: 254). Далее продукты ПЦР очищают и лигируют с pGEMT Easy.

Таблица 16. Общий выход липида (% масс. от сухой массы картофельного клубня) и жирнокислотный состав в характерных молодых клубнях картофеля, трансформированных T-ДНК pJP3506, до цветения растений. Клубни линии 65 были эквивалентны клубням дикого типа (нетрансгенным).

Образец	C14:0	C16:0	C16:1	C16:3	C18:0	C18:1	C18:1 d11	C18:2	C18:3	C20:0	C20:1	C22:0	C24:0	% ОЖК
4-2	0,2	16,1	0,2	0,0	5,8	0,5	11,7	55,5	5,5	2,1	0,2	0,6	1,5	1,4
19	0,2	18,1	0,2	0,0	5,8	0,4	12,9	52,2	5,9	2,0	0,2	0,7	1,5	1,5
27-2	0,2	18,9	0,3	0,0	6,5	0,5	5,5	55,0	8,0	2,0	0,2	0,8	2,1	0,7
27-4	0,2	19,0	0,3	0,0	6,5	5,4	0,5	57,0	7,9	1,6	0,0	0,5	1,1	0,6
27-5	0,2	17,8	0,6	0,0	6,4	2,2	0,4	57,6	11,7	1,5	0,0	0,4	1,2	0,7
27-6	0,2	18,7	0,4	0,0	6,9	6,3	0,5	55,9	8,2	1,6	0,0	0,4	0,9	0,8
55	0,2	17,8	0,6	0,0	6,4	7,9	0,5	55,7	8,6	1,4	0,0	0,3	0,7	1,0
65	0,2	19,4	0,4	0,0	5,7	1,2	0,5	53,6	17,2	0,9	0,0	0,0	1,0	0,5
69	0,3	19,8	0,1	0,0	3,2	16,5	0,9	53,2	3,7	1,1	0,3	0,4	0,6	4,7
78	0,2	19,5	0,5	0,0	5,3	4,9	0,5	54,7	11,7	1,2	0,0	0,4	1,0	0,9
83	0,2	16,7	0,4	0,0	6,5	7,3	0,5	56,2	8,5	1,7	0,6	0,5	0,9	1,3
95-1	0,3	21,0	0,2	0,1	3,1	15,2	0,8	52,8	4,2	1,1	0,2	0,3	0,7	3,0
95-2	0,4	21,3	0,3	0,1	4,1	7,1	1,0	56,1	7,3	1,2	0,2	0,3	0,7	2,7
95-3	0,4	21,4	0,3	0,0	4,3	8,5	0,9	54,5	7,4	1,3	0,0	0,3	0,7	1,5
100	0,4	19,0	0,5	0,0	5,4	7,6	0,8	55,5	7,3	1,4	0,5	0,5	0,9	1,0
104	0,2	18,0	0,2	0,0	6,1	0,5	6,8	56,1	7,6	2,3	0,1	0,6	1,5	0,9
106	0,2	19,7	0,2	0,1	4,6	0,9	10,7	54,1	5,7	1,7	0,1	0,6	1,3	1,3

Таблица 17. Выход ТАГ (% масс. от сухой массы картофельного клубня) и его жирнокислотный состав в характерных молодых клубнях картофеля, трансформированных T-ДНК pJP3506, до цветения растений.

Образец	C14:0	C16:0	C16:1	C16:3	C18:0	C18:1	C18:1 d11	C18:2	C18:3	C20:0	C20:1	C22:0	C24:0	% ТАГ
ДТ	0,4	13,4	0,0	0,0	4,6	5,5	0,5	59,9	15,7	0,0	0,0	0,0	0,0	0,03
4-2	0,3	15,4	0,2	0,0	7,0	0,6	16,4	52,5	3,1	2,6	0,2	0,6	1,1	0,5
19	0,2	16,3	0,1	0,0	7,2	18,0	0,5	50,9	3,6	1,9	0,2	0,4	0,6	0,8
27-2	0,0	19,0	0,0	0,0	11,2	9,8	0,0	52,8	4,4	2,8	0,0	0,0	0,0	0,2
27-4	0,4	17,4	0,0	0,0	10,2	9,4	0,0	55,4	4,7	2,6	0,0	0,0	0,0	0,2
27-5	0,0	17,9	0,0	0,0	12,5	4,4	0,0	54,9	7,1	3,2	0,0	0,0	0,0	0,1
27-6	0,0	17,1	0,0	0,0	9,9	10,6	0,0	55,0	4,9	2,5	0,0	0,0	0,0	0,2
55	0,3	17,6	0,5	0,0	8,5	12,5	0,6	52,5	5,2	1,9	0,0	0,0	0,6	0,5
65	0,0	18,1	0,0	0,0	12,0	0,0	0,0	55,6	14,4	0,0	0,0	0,0	0,0	0,0
69	0,3	20,1	0,6	0,0	3,8	20,3	1,0	49,4	2,2	1,3	0,2	0,3	0,5	3,3
78	0,0	19,1	0,0	0,0	8,2	9,4	0,0	52,5	8,4	2,4	0,0	0,0	0,0	0,2
83	0,3	16,4	0,2	0,0	8,7	11,1	0,6	53,4	5,4	2,6	0,0	0,5	0,7	0,5
95-1	0,3	21,7	0,4	0,1	3,6	18,5	1,0	50,1	2,8	0,9	0,2	0,2	0,3	2,2
95-2	0,6	23,4	0,4	0,0	5,1	10,1	1,2	51,9	5,3	1,4	0,0	0,0	0,5	0,9
95-3	0,3	17,2	0,3	0,0	7,7	0,6	11,6	49,7	8,9	2,5	0,0	0,0	1,1	0,1
100	0,0	18,8	0,5	0,0	8,0	12,0	0,8	54,0	3,9	2,0	0,0	0,0	0,0	0,4
104	0,3	17,7	0,0	0,0	8,4	0,6	11,0	52,1	4,7	3,2	0,0	0,7	1,3	0,3
106	0,4	20,1	0,3	0,0	5,4	15,5	1,1	51,8	3,6	1,4	0,0	0,0	0,4	0,7

Таблица 18. Выход фосфолипидов (% масс. от сухой массы картофельного клубня) и их жирнокислотный состав в характерных молодых клубнях картофеля, трансформированных T-ДНК pJP3506, до цветения.

Образец	C14:0	C16:0	C16:1	C16:3	C18:0	C18:1	C18:1 d11	C18:2	C18:3	C20:0	C20:1	C22:0	C24:0	% ФЛ
4-2	0,2	21,2	0,2	0,0	4,6	0,4	3,8	57,8	9,3	0,9	0,0	0,0	1,7	0,3
19	0,1	22,7	0,2	0,0	4,4	5,1	0,3	54,9	8,9	0,7	1,0	0,5	1,2	0,4
27-2	0,2	21,0	0,3	0,0	5,2	2,8	0,4	56,9	9,3	0,9	1,3	0,4	1,4	0,4
27-4	0,0	22,9	0,0	0,0	6,0	2,3	0,0	57,2	8,8	1,1	0,0	0,0	1,6	0,3
27-5	0,0	19,6	0,5	0,0	5,0	1,2	0,0	58,7	12,6	1,0	0,0	0,0	1,4	0,4
27-6	0,0	22,9	0,0	0,0	6,3	2,6	0,0	56,3	9,3	1,2	0,0	0,0	1,5	0,3
55	0,1	21,2	0,4	0,0	5,1	2,1	0,0	57,8	11,4	0,7	0,0	0,0	1,0	0,4
65	0,0	21,4	0,4	0,0	5,9	1,1	0,0	53,2	15,7	1,0	0,0	0,0	1,3	0,3
69	0,2	21,5	0,2	0,0	2,3	3,7	0,6	61,9	7,9	0,6	0,0	0,4	0,8	1,0
78	0,0	22,1	0,4	0,0	4,4	2,7	0,4	55,6	12,2	0,8	0,0	0,0	1,3	0,4
83	0,2	21,1	0,3	0,0	5,0	2,9	0,4	57,1	10,7	0,8	0,0	0,4	1,1	0,5
95-1	0,2	24,8	0,5	0,0	2,6	3,5	0,6	59,1	7,6	0,6	0,0	0,0	0,6	0,6
95-2	0,3	22,1	0,0	0,0	2,7	2,1	0,6	61,0	9,6	0,7	0,0	0,0	0,9	0,6
95-3	0,2	23,2	0,5	0,0	3,1	3,6	0,7	57,7	9,3	0,7	0,0	0,0	0,9	0,5
100	0,0	23,3	0,5	0,0	4,6	3,0	0,4	57,2	9,0	0,8	0,0	0,0	1,1	0,4
104	0,0	21,3	0,0	0,0	4,8	2,7	0,0	58,3	10,1	1,0	0,0	0,0	1,7	0,4
106	0,2	23,2	0,2	0,0	3,8	3,0	0,6	57,1	8,6	0,7	1,0	0,4	1,1	0,4

После верификации секвенированием ДНК, клонированные продукты ПЦР непосредственно применяют в качестве последовательности гена-мишени, с целью получения конструкции шпилечной РНКи, или сливают посредством ПЦР с перекрывающимися праймерами. Три фрагмента ПЦР (SDP1, АГФаза, СЗБ+АГФ) в дальнейшем клонируют в вектор pKannibal, который содержит специфические рестрикционные сайты, для клонирования желательного фрагмента в смысловой и антисмысловой ориентации. Выбранные рестрикционные сайты представляют собой BamHI и HindIII для клонирования фрагмента в смысловой ориентации и KpnI и XhoI для вставки фрагмента в антисмысловой ориентации. Наборы праймеров, применяемые для амплификации трех фрагментов гена-мишени, модифицируют добавлением рестрикционных сайтов, которые направляют фрагмент в клонирующие сайты pKannibal. Экспрессионные кассеты, содержащие фрагмент-мишень ДНК между промотором 35S и терминатором OCS в pKannibal, высвобождают с помощью Not1 и клонируют в бинарный вектор pWBVec2, с гигромицином в качестве селекционного маркера для растений. Такие бинарные векторы вводят в штамм AGL1 A. tumefaciens и применяют для трансформации картофеля, как изложено выше.

Пример 19. Повышение содержания масла в однодольных растениях

Экспрессия в эндосперме

Содержание масла в эндосперме однодольных видов растений Triticum aestivum (пшеница) и, таким образом, в зерне растений, повышают экспрессию комбинации генов, кодирующих WRI1, DGAT и олеозин, в эндосперме в ходе развития семени с применением специфичных для эндоспермы промоторов. Конструкция (обозначенная как pOIL-Endo2) содержит химерные гены: (a) промотор гена Glu1 Brachypodium distachyon::кодирующий белок участок гена Zea mays, кодирующего полипептид ZmWRI1 (SEQ ID NO: 35)::участок терминатора/полиаденилирования из гена лектина Glycine max, (b) промотор гена глютенина Bx17 Triticum aestivum::кодирующий белок участок гена A. thaliana, кодирующего полипептид AtDGAT1 (SEQ ID NO: 1)::участок терминатора/полиаденилирования из гена Nos Agrobacterium tumefaciens, (c) промотор гена GluB4 Oryza sativa::кодирующий белок участок гена Sesame indicum, кодирующего участок полипептида олеозина::участок терминатора/полиаденилирования из гена лектина Glycine max и (d) промотор 35S::участок, кодирующий резистентность к гигромицину, в качестве гена селекционного маркера. Конструкцию применяют для трансформации незрелых эмбрионов T. aestivum (сорт Fielder) путем опосредованной Agrobacterium трансформации. Инокулированные незрелые эмбрионы подвергают воздействию гигромицина, чтобы отобрать трансформированные побеги, а затем переносят в среду корнеобразования для формирования корней, перед переносом в грунт.

Получены тридцать трансформированных растений, на которых завязалось семя T1 и которые содержат T-ДНК из pOIL-Endo2. Урожай зрелых семян собран со всех 30 растений, и 6 семян каждого семейства разрезаны пополам. Половинки, содержащие эмбрион, хранили для последующего проращивания; другую половинку, содержащую по большей части эндосперм, экстрагировали и оценивали содержание масла. T-ДНК, вставленная в геном пшеницы, все еще сегрегируется в семенах T1 указанных растений, поэтому семена T1 представляют собой смесь гомозиготных трансформированных, гетерозиготных трансформированных и нулевых по T-ДНК. Повышенное содержание масла наблюдается в эндосперме некоторых из семян, причем некоторые семена демонстрируют повышение уровней ТАГ более, чем в 5 раз. В половинках с эндоспермом шести семян (сорт Fielder) дикого типа содержание ТАГ составляет около 0,47% масс. (диапазон от 0,37% до 0,60%), по сравнению с содержанием ТАГ 2,5% в некоторых зернах. В некоторых семействах все шесть семян содержат свыше 1,7% ТАГ; другие очевидно сегрегированы между диким типом и повышенным содержанием ТАГ. Кроме того, в эндосперме с повышенным содержанием ТАГ состав жирных кислот модифицирован, демонстрируя повышение процентного содержания олеиновой кислоты и пальмитиновой кислоты и снижение процентного содержания линолевой кислоты (Таблица 19). Семя T1 беспрепятственно прорастало с той же скоростью, что и семя соответствующего дикого типа, причем растения, представляющие индивидуумы как с высоким содержанием масла, так и с низким содержанием масла из 14 семейств T0 выращены до состояния зрелости. Указанные растения обладали полноценной мужской и женской фертильностью.

Зерно пригодно для получения пищевых продуктов для потребления человеком, или в качестве корма для животных, обеспечивая зерно с повышенным содержанием энергии на единицу массы (плотность энергии) и давая повышенные темпы прироста у животных, таких как, например, домашняя птица, свиньи, крупный рогатый скот, овцы и лошади.

Таблица 19. Состав жирных кислот (% от общих жирных кислот) в ТАГ и общее содержание ТАГ (% масс. масла в половинке с эндоспермом) в трансгенном эндосперме пшеницы

Образец	C14:0	C16:0	C16:1	C16:3	C18:0	C18:1	C18:1d11
Контроль 1	0,3	16,9	0,1	0,0	1,6	15,6	0,6
Контроль 2	0,3	16,0	0,1	0,1	1,6	15,1	0,6
F5,3	0,1	20,1	0,1	0,1	2,6	23,5	0,6
F16,3	0,1	19,1	0,1	0,1	2,8	24,2	0,6
Образец	C18:2	C18:3n3	C20:0	C20:1	C22:0	C24:0	% масс. масла
Контроль 1	60,4	4,0	0,1	0,4	0,0	0,0	0,5
Контроль 2	61,3	4,3	0,1	0,3	0,0	0,0	0,49
F5,3	48,5	2,4	0,8	0,7	0,3	0,4	2,5
F16,3	48,1	2,9	0,7	0,5	0,3	0,4	1,8

Дополнительно, конструкцию pOIL-Endo2 применяют для трансформации кукурузы (Zea mays) и риса (Oryza sativa), с целью получения трансгенных растений с повышенным содержанием ТАГ в эндосперме и, таким образом, в зерне.

Экспрессия в листьях и стеблях

Серия бинарных векторов экспрессии разработана для опосредованной Agrobacterium трансформации сорго (S. bicolor) и пшеницы (Triticum aestivum), с целью повышения содержания масла в вегетативных тканях. Исходными векторами для конструкций являются pOIL093-095, pOIL134 и pOIL100-104 (см. Пример 4). Вначале, фрагмент ДНК, кодирующий опосредованной WRI1 Z. mays, амплифицируют методом ПЦР с применением pOIL104 в качестве шаблона и праймеров, содержащих рестрикционные сайты KpnI. Указанный фрагмент субклонируют в направлении по ходу транскрипции относительно конститутивного промотора Actin1 Oryza sativa в pOIL095, используя сайт KpnI. Результирующий вектор обозначен как pOIL154. Фрагмент ДНК, кодирующий DGAT2a Umbelopsis ramanniana под контролем промотора убихитина Z. mays (pZmUbi), выделяют из pOIL134 в виде фрагмента NotI и вставляют в сайт NotI pOIL154, с получением pOIL155. Экспрессионную кассету, состоящую из кодирующего ФАТ участка под контролем промотора pZmUbi, фланкированного на 3' конце участком терминатора/полиаденилирования NOS A. tumefaciens, конструируют амплификацией кодирующего ФАТ участка с применением pJP3416 в качестве шаблона. Разработаны праймеры для инкорпорации рестрикционных сайтов BamHI и SacI на 5' и 3' конце, соответственно. После двойного расщепления BamHI+SacI, фрагмент ФАТ клонируют в соответствующие сайты pZLUbi1casNK. Полученное промежуточное соединение обозначено как pOIL141. Далее, кассету селекционного маркера ФАТ вводят в скелет pOIL155. В этой точке pOIL141 вначале разрезают с помощью NotI, фрагмента Кленова ДНК полимеразы I с тупыми концами, и далее расщепляют с помощью AscI. Затем полученный фрагмент размером 2622 пар оснований субклонируют в сайты ZraI-AscI pOIL155, с получением pOIL156. В конце, промотор Actin1, управляющий экспрессией WRI1 pOIL156, обменивают на промотор маленькой субъединицы Rubisco Z. mays (pZmSSU), с получением pOIL157. Данный вектор получен ПЦР амплификацией промотора SSU Z. mays, с применением pOIL104 в качестве шаблона и фланкирующих праймеров, содержащих рестрикционные сайты Asi SI и PmlI. Далее полученный ампликон разрезают с помощью SpeI+MluI и субклонируют в соответствующие сайты pOIL156.

Указанные векторы таким образом содержат следующие кассеты экспрессии:

pOIL156: промотор актина 1 O. sativa::WRI1 Z. mays, промотор убихитина Z. mays::DGAT2a U. rammaniana и промотор убихитина Z. mays::ФАТ

pOIL157: промотор SSU Z. mays::WRI1 Z. mays, промотор убихитина Z. mays::DGAT2a U. rammaniana и убихитина Z. mays::ФАТ.

Вторые серии бинарных векторов экспрессии, содержащих промотор старения SEE1 Z. mays (Robson с соавт., 2004, см. Пример 4), фактор транскрипции LEC1 Z. mays (Shen с соавт., 2010) и фрагмент SDP1 шпРНКи S. bicolor, сконструированы, как указано ниже. Вначале участок прикрепления к матриксу (MAR) вводят в pORE04 путем расщепления pDCOT с помощью AatII+ SnaBI, и субклонирования в сайты AatII+ EcoRV pORE04. Полученный промежуточный вектор обозначен как pOIL158. Далее ген селекционного маркера ФАТ под контролем промотора убихитина Z. mays субклонируют в pOIL158. К этому времени, pOIL141 вначале расщеплен NotI, обработан фрагментом Кленова ДНК полимеразы I и в конце расщеплен AscI. Полученный фрагмент вставляют в сайты AscI+ ZraI pOIL158, с получением pOIL159. Оригинальный источник репликации RK2 oriV в pOIL159 заменяют источником RiA4 путем рестрикционного расщепления pJP3416 с помощью SwaI+ SpeI, с последующим субклонированием в сайты SwaI+AvrII pOIL159. Полученный вектор обозначен как pOIL160. Синтезирован фрагмент «part1 старения однодольных» размером 10,019 тыс. пар оснований, содержащий следующие кассеты экспрессии: актин 1 O. sativa::DGAT1 A. thaliana, кодон-оптимизированный для экспрессии в Z. mays, SEE1Z. mays::WRI1Z. mays, SEE1 Z. mays::LEC1Z. mays. Данный фрагмент субклонируют в виде фрагмента SpeI-EcoRV в сайты SpeI-StuI pOIL160, с получением pOIL161. Синтезирован второй фрагмент « part2 старения однодольных» размером 7,967 тыс. пар оснований, который содержит следующие элементы: MAR, убихитин Z. mays::шпРНКи, фрагмент, нацеленный на S. bicolor/SDP1 T. aestivum, пустая кассета под контролем промотора актина 1 O. sativa. Последовательности двух ТАГ липаз SDP1 S. bicolor (номера доступа XM_002463620; SEQ ID NO. 242 и XM_002458486; SEQ ID NO: 169) и одна последовательность SDP1 T. aestivum (номер доступа AK334547) (SEQ ID NO: 243) получены методом поиска BLAST с последовательностью SDP1 A. thaliana (номер доступа NM_120486). Разработана конструкция синтетической шпильки (SEQ ID NO: 244), содержащая четыре фрагмента (67 пар оснований, 90 пар оснований, 50 пар оснований, 59 пар оснований) последовательности XM_002458486 S. bicolor, которая продемонстрировала наиболее высокую идентичность с последовательностью SDP1 T. aestivum. Кроме того, включен фрагмент размером 278 пар оснований, полученный из липазы SDP1 S. bicolor XM_002463620, с целью усиления эффективности сайленсинга в отношении обеих последовательностей SDP1 S. bicolor. Фрагмент «part2 старения однодольных» субклонируют в виде фрагмента BsiWI-EcoRV в сайты BsiWI-FspI pOIL161. Полученный вектор обозначен pOIL162.

Генетические конструкции pOIL156 pOIL157, pOIL162 и pOIL163 применяют для трансформации S. bicolor и T. aestivum с применением опосредованной Agrobacterium трансформации. Трансгенные растения отобраны на основе резистентности к гигромицину и содержат повышенные уровни ТАГ и ОЖК в вегетативных тканях, по сравнению с нетрансформированными контрольными растениями. Такие растения пригодны для питания животных в виде сена или силоса, а также могут применяться для получения зерна или экстракции масла.

Пример 20. Экстракция масла и получение биотоплива

Экстракция липида из листьев

Урожай трансгенных листьев табака, трансформированных T-ДНК из pJP3502, собирают с растений, выращенных в теплице на протяжении летних месяцев. Листья сушат, а затем измельчают до фрагментов размером 1-3 мм перед экстракцией. Измельченный материал обрабатывают экстракцией в аппарате Сокслета (кипячение с обратным холодильником) в течение 24 часов с выбранными растворителями, как описано ниже. 5 г материала сухих листьев табака и 250 мл растворителя применяют в каждом эксперименте с экстракцией.

Экстракция гексаном в качестве растворителя

Гексан обычно находит коммерческое применение в качестве растворителя для экстракции масла из прессованных семян масличных культур, например, рапса, причем гексан экстрагирует нейтральные (неполярные) липиды, и в другой роли он применяется впервые. Масса экстрагированного липида составила 1,47 г из 5 г листового материала, выход липида составил 29% масс. Проведен анализ экстрагированного гексаном липида в ДМСО методом 1H ЯМР. Анализ продемонстрировал сигналы, типичные для длинноцепочечных жирных кислот в триглицериде, без ароматических продуктов. Далее липид обрабатывают ГХМС с целью идентификации основных компонентов. Анализ экстрагированного гексаном липида методом прямой ГХМС провести сложно, поскольку температура кипения слишком высокая, и материал разлагается в ходе ГХМС. В таких ситуациях общая техника анализа включает первоначальное получение метиловых эфиров жирных кислот, которые были получены, как указано ниже: 18 мг липидного экстракта растворяют в 1 мл толуола, добавляют 3 мл сухого 3 н метанольного раствора HCL и перемешивают на протяжении ночи при 60°C. К охлажденному флакону добавляют 5 мл 5% NaCl и 5 мл гексана и встряхивают. Органический слой извлекают, и экстракцию повторяют еще с 5 мл гексана. Объединенные органические фракции нейтрализуют 8 мл 2% KHCO3, отделяют и сушат с помощью Na2SO4. Растворитель выпаривают в потоке N2, после чего концентрацию доводят до 1 мг/мл в гексане для анализа ГХМС. Основными жирными кислотами являются 16:0 (пальмитиновая, 38,9%) и 18:1 (олеиновая, 31,3%).

ЖК	16:0	16:1	18:0	18:1	18:2	20:0	22:0
% дт	38,9	4,6	6,4	31,3	2,5	1,5	0,6

Экстракция ацетоном в качестве растворителя

Ацетон применяют в качестве растворителя для экстракции, поскольку его свойства растворителя должны обеспечивать экстракцию практически всего липида из листьев, т.е. как неполярных, так и полярных липидов. Экстрагированное ацетоном масло выглядит подобным экстрагированному гексаном липиду. Масса экстрагированного липида составила 1,59 г из 5 г листьев табака, т.е. 31,8% масс. Проведен анализ липида в ДМСО методом 1H ЯМР. Наблюдаются сигналы, типичные для длинноцепочечных жирных кислот в триглицериде, сигналов ароматических продуктов.

Экстракция горячей водой в качестве растворителя

Осуществлена попытка экстракции горячей водой в качестве растворителя для экстракции, с целью определения ее пригодности для получения масла из листьев табака. Экстрагированный водой материал выглядит гелеподобным и желируется при охлаждении. Масса экстракта составила 1,9 г или 38% масс. Полученный материал подобен густому гелю и, вероятно, содержит полярные соединения из листьев, такие как сахара и другие углеводы. Проведен анализ материала в ДМСО методом 1H ЯМР. Анализ продемонстрировал сигналы, типичные для длинноцепочечных жирных кислот в триглицериде, и не показал экстрагированных ароматических продуктов. Лишний твердый материал был экстрагирован гексаном, давая 20% масс. липида, что указывает на неэффективность экстракции неполярных липидов водой.

Экстракция этанолом в качестве растворителя

Этанол применяли в качестве растворителя для экстракции, с целью определения его пригодности для получения масла из листьев табака. Экстрагированный этанолом липид выглядит подобным как липиду, экстрагированному водой, так и липиду, экстрагированному гексаном, он имеет желто-красный цвет, гелеподобный внешний вид и желируется при охлаждении. Масса экстрагированного липида составила 1,88 г из 5 г табака, или 37,6% масс. Кроме того, этанол в качестве растворителя экстрагировал из листьев табака некоторые полярные соединения.

Экстракция эфиром в качестве растворителя

Осуществлена попытка экстракции диэтиловым эфиром в качестве растворителя для экстракции, поскольку предполагалось, что он может экстрагировать меньшее количество примесей, чем другие растворители. В результате экстракции получено 1,4 г или 28% масс. Экстрагированный эфиром липид подобен материалу, экстрагированному гексаном, имеет желтоватый цвет и выглядит немного чище, чем гексановый экстракт. Несмотря на то, что полученный с диэтиловым эфиром экстракт выглядит наиболее чистым маслом, анализ методом ЯМР продемонстрировал смесь большего количества органических соединений.

Получение биодизельного топлива из растений табака

Партия трансгенных растений табака была выращена на протяжении зимы (не являющейся его нормальным сезоном роста), с целью оценки выработки масла в листьях в течение более холодного сезона, с меньшим природным освещением. Листья зрелых растений содержат около 10% масла, в пересчете на сухую массу; это намного ниже, чем в растениях, выращенных в течение летнего периода. Несмотря на это, липид экстрагирован и превращен в биодизельное топливо, как указано ниже. Стадии способа представляли собой: (a) экстракцию неочищенного липида, (b) очистку ТАГ из липида, и (c) превращение очищенных ТАГ в биодизельное топливо.

Гексан (петролейный эфир 40-60C) применяют в качестве растворителя для экстракции, с целью получения масла, в основном содержащего неполярный липид. 500 г листового материала табака сушат, взвешивают, а затем пропитывают гексаном на протяжении ночи при перемешивании. Смесь фильтруют, затем гексановый экстракт сушат с помощью сульфата магния и обрабатывают с активированным углем для дезодорирования масла. Раствор фильтруют, причем полученная жидкость, упаренная на роторном испарителе, дает около 42 граммов неочищенного масла. Оно имеет желтый/зеленый цвет и вязкую консистенцию при охлаждении. Часть указанного масла использовали в попытке получить биодизельное топливо напрямую, однако количество примесей и высокое содержание свободных жирных кислот привело к образованию большого количества мыла, которое препятствовало протеканию реакции метилирования и отделению продукта. Таким образом, в случае получения биодизельного топлива существует необходимость в дальнейшей очистке указанного масла, с целью обогащения фракцией ТАГ до реакции переэтерификации.

Одной из проблем с выращенным зимой образцом является присутствие относительно высоких уровней свободных жирных кислот (СЖК) в экстрагированном материале, что приводит к повышенному образованию мыла, препятствующего отделению метиловых эфиров и глицериновых продуктов. С целью очистки ТАГ в масле исследованы несколько систем растворителя, причем смесь гексана/этилацетата 80:20 выбрана в качестве подходящей для колоночной хроматографии. Выполнено разделение на колонке с кремния диоксидом, с применением гексана:этилацетата (80:20). Более гидрофобные ТАГ элюируются с колонки первыми, в виде оранжевого/желтого масла. Далее элюируется темно-зеленая полоса, содержащая смесь растворимых в гексане компонентов из листьев табака, включая хлорофилл, смешанный с некоторым количеством ТАГ и СЖК. Конечный продукт вымывается из колонки чистым этилацетатом и в основном представляет собой СЖК.

Очищенные ТАГ, обогащенные отдельно от СЖК и фосфатов, а также других примесей, на этой стадии могут быть превращены в биодизельное топливо. Это осуществлено путем введения ТАГ в реакцию с метанолом в присутствии основного катализатора, с получением метилового эфира (биодизельное топливо) и глицерина в качестве побочного продукта. Альтернативный способ, катализируемая кислотой этерификация, может применяться для введения жирных кислот в реакцию со спиртом, с получением биодизельного топлива в присутствии СЖК, с меньшими требованиями к чистоте ТАГ. Другие способы, такие как реакторы с фиксированным слоем, суперкритические реакторы и ультразвуковые реакторы позволяют отказаться или уменьшают применение химических катализаторов, и дополнительно могут применяться для получения биодизельного топлива из липидов. Однако, способы с основным катализом являются наиболее экономичными для превращения очищенных ТАГ, требуя только низких значений температуры и давления, с получением выхода превращения свыше 98% при условии низких влажности и содержания свободных жирных кислот в исходном масле.

Очищенные ТАГ обрабатывают раствором метоксида (NaOH и метанол смешивают до полного растворения) при температуре масла 60°C. Смесь выдерживают при 60°C и перемешивают в течение 2 часов, пока происходит реакция переэтерификации. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, при этом образуются две фазы, причем верхний слой представляет собой биодизельное топливо, а нижний слой является глицерином. Далее фазы разделяют с применением делительной воронки, и извлекают биодизельное топливо.

Гидротермическая обработка вегетативных тканей с высоким содержанием масла

Другой, более прямой подход к превращению вегетативных частей растения в промышленные продукты, такие как жидкое горючее, состоит в гидротермической обработке (ГТО). Ее применяют для превращения материала листьев трансгенного табака, содержащего около 30% масс. ОЖК, в возобновляемое биодизельное топливо, которое может быть добавлено в обычную сырую нефть на нефтеперерабатывающем заводе, с целью получения возобновляемого дизельного топлива (парафиновое дизельное топливо). Нефтяное дизельное топливо является смесью большого количества углеводородных соединений, в основном алканов, и определяется как фракция на выходе нефтеперерабатывающего завода в промежутке 200-300°C, обычно содержащая в основном C13-C22 углеводороды. При типичном превращении листа трансгенного табака посредством ГТО, твердый вегетативный растительный материал трансгенного табака смешивают с водой, чтобы получить концентрацию твердых веществ 16-50%. Далее указанную суспензию подвергают воздействию температуры 270-400°C и давления 70-350 бар. Длительность реакции варьирует в промежутке 1-60 минут, причем эксперименты проводились с NaOH и KOH в качестве катализатора и без них.

После окончания ГТО обработки и охлаждения реакционной смеси последнюю разделяют на 3 различных продуктовых потока, а именно газ, твердые вещества и жидкая бионефть. Выход бионефти составляет 25-40%, в пересчете на сухую массу относительно количества исходного материала. На Фиг. 18 проиллюстрировано, что намного больший выход бионефти был получен для материала листьев трансгенного табака, по сравнению с материалом листьев табака соответствующего дикого типа.

Прямое превращение липида в вегетативных частях растения в биодизельное топливо in situ

В другой серии экспериментов водный компонент реакции ГТО был заменен растворителем метанолом. Существует целый ряд причин для попытки применения метанола, причем одна из них состоит в идее непосредственного превращения ТАГ из масла листьев (in situ), в одну стадию, с получением метиловых эфиров жирных кислот (МЭЖК) непосредственно в липиде и прямым получением биодизельного топлива. Применяются такие же условия реакции и оборудование, что и в предыдущих экспериментах с ГТО, с заменой воды метанолом, температура реакции составляет 335°C, и давление 240 бар, с применением NaOH в качестве катализатора. Вегетативные растительные части трансгенного табака дают 47% масс. бионефти, в пересчете на исходную массу, в то время как табак дикого типа дает 35% масс. бионефти. Анализ методом H¹ ЯМР двух полученных образцов бионефти продемонстрировал только небольшое количество МЭЖК, причем анализ методом ЯМР бионефти из трансгенного табака продемонстрировал большое количество МЭЖК биодизельного топлива.

Квалифицированным специалистам в данной области будет понятно, что могут быть осуществлены многочисленные вариации и/или модификации изобретения, как проиллюстрировано в конкретных вариантах реализации изобретения, без выхода за пределы контекста изобретения, как было подробно описано. Таким образом, представленные варианты реализации изобретения следует во всех отношениях интерпретировать как иллюстративные, но не ограничивающие.

Все публикации, которые обсуждаются и/или на которые ссылаются в настоящем документе, включены в настоящий документ в полном объеме.

Любое обсуждение документов, действий, материалов, устройств, изделий или подобного, включенное в настоящий документ, служит исключительно цели обеспечения контекста для настоящего изобретения. Это не следует интерпретировать как согласие с тем, что любые или все из этих материалов образуют часть уровня техники или были общедоступным знанием в данной области, относящимся к настоящему изобретению, поскольку они существовали до даты приоритета каждого из пунктов формулы изобретения в данной заявке.

ССЫЛКИ:

Alemanno et al. (2008) Planta 227:853-866.

Almeida and Allshire (2005) TRENDS Cell Biol. 15:251-258.

Alonso et al. (2009) Plant Cell 21: 1747-1761.

Alonso et al. (2010) Green Chem. 12:1493-1513.

Alvarez et al. (2000) Theor. Appl. Genet. 100:319-327.

Andre at al (2012) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 109:10107-10112.

Andrianov et al. (2010) Plant Biotech. J. 8:277-287.

Awai et al (2006) Biochem. Soc. Trans. 34:395-398.

Bartlett et al. (2008) Plant Methods 4:22.

Baud et al. (2007) Plant J. 50:825-838.

Baud and Lepiniec (2010) Progr. Lipid Res. 49: 235-249.

Baumlein et al. (1991) Mol. Gen. Genet. 225:459-467.

Baumlein et al. (1992) Plant J. 2:233-239.

Belide et al. (2013) Plant Cell Tiss. Org. Cult. DOI 10.1007/s11240-013-0295-1.

Ben Saad et al. (2011) Transgenic Res 20: 1003-1018.

Benning et al (2008) Prog. Lipid Res. 47:381-389.

Benning et al (2009) J. Biol. Chem 284:17420-17427.

Bibikova et al. (2002) Genetics 161:1169-1175.

Bligh and Dyer (1959) Canadian Journal of Biochemistry and Physiology 37:911-917.

Bourque (1995) Plant Sci. 105:125-149.

Boutilier et al. (2002) Plant Cell 14:1737-1749.

Bouvier-Nave et al. (2000) European Journal of Biochemistry/FEBS 267:85-96.

Bradford (1976) Anal. Biochem. 72:248-254.

Broothaerts et al. (2005) Nature 433:629-633.

Broun et al. (1998) Plant J. 13:201-210.

Browse et al. (1986) Biochem J 235: 25-31.

Buchanan-Wollaston (1994) Plant Physiol. 105:839-846.

Busk et al. (1997) Plant J. 11:1285-1295.

Cao et al. (2007) J. Lipid Res. 48:583-591.

Capuano et al. (2007) Biotechnol. Adv. 25:203-206.

Chen et al (2011) Plant Physiol. 155:851-865.

Chikwamba et al. (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100:11127-11132.

Christie (1993) Advances in Lipid Methodology - Two, Oily Press, Dundee, pp195-213.

Chung et al. (2006) BMC Genomics 7:120.

Comai et al. (2004) Plant J 37: 778-786.

Cong et al. (2013) Science 339:819-823.

Corrado and Karali (2009) Biotechnol. Adv. 27:733-743.

Courvalin et al. (1995) Life Sci. 318:1207-1212.

Coutu et al. (2007) Transgenic Res. 16:771-781.

Dandik and Aksoy (1998) Fuel Process Technol. 57: 81-92.

Darji et al. (1997) Cell 91:765-775.

Dauk et al (2007) Plant Sci. 173:43-49.

Dulermo and Nicaud (2011) Metab. Eng. 13:482-491.

Durrett et al. (2008) Plant J. 54:593-607.

Dussert et al. (2013) Plant Physiol.162:1337-1358.

Dyer et al. (2002) Plant Physiol. 130:2027-2038.

Eastmond et al. (2006) Plant Cell 18: 665-675.

Eccleston et al (1996) Planta 198:46-53.

Ellerstrom et al. (1996) Plant Mol. Biol. 32:1019-1027.

Endalew et al. (2011) Biomass and Bioenergy 35:3787-3809.

Feeney et al. (2012) Plant Physiol 162: 1881-1896.

Finkelstein et al. (1998) Plant Cell 10:1043-1054.

Froissard et al. (2009) FEMS Yeast Res 9:428-438.

Gan (1995) Molecular characterization and genetic manipulation of plant senescence. PhD thesis. University of Wisconsin, Madison.

Gan and Amasino (1995) Science 270:1986-1988.

Gazzarrini et al. (2004) Dev. Cell 7:373-385.

Ghosal et al. (2007) Biochimica et Biophysica Acta 1771:1457-1463.

Ghosh et al. (2009) Plant Physiol. 151:869-881.

Gidda et al (2013) Plant Signaling Behav. 8:e27141.

Girijashankar and Swathisree, (2009) Physiol. Mol. Biol. Plants 15: 287-302.

Gong and Jiang (2011) Biotechnol. Lett. 33:1269-1284.

Gould et al. (1991) Plant Physiol. 95:426-434.

Greenwell et al. (2010) J. R. Soc. Interface 7:703-726.

Gurel et al. (2009) Plant Cell Rep. 28:429-444.

Hershey and Stoner (1991) Plant Mol. Biol. 17:679-690.

Hinchee et al. (1988) Biotechnology 6:915-922.

Hom et al. (2007) Euphytica 153:27-34.

Horn et al. (2013). Plant Physiol 162:1926-1936.

Horvath et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97:1914-1919.

Huang (1996) Plant Physiol. 110:1055-1061.

Ichihara et al (1988) Biochim. Biophys. Acta 958:125-129.

Ikeda et al. (2006) Pl Biotech J. 23: 153-161.

Iwabuchi et al. (2003) J. Biol. Chem. 278:4603-4610.

Jako et al (2001) Plant Physiol. 126:861-874.

James et al. (2010) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 107:17833-17838.

Jepson et al. (1994) Plant Mol. Biol. 26:1855-1866.

Jiang, et al. (2013) Nucleic Acids Research 41(20) e188.

Jing et al. (2011) BMC Biochemistry 12:44.

Jolivet et al. (2014) Plant Physiol. Biochem. 42:501-509.

Jones et al. (1995) Plant Cell 7: 359-371.

Karmakar et al. (2010) Bioresource Technology 101:7201-7210.

Kelly et al. (2011) Plant Physiol. 157: 866-875.

Kelly et al (2013a) Plant Biotech. J. 11:355-361.

Kelly et al. (2013b) Plant Physiol. 162:1282-1289.

Kereszt et al. (2007) Nature Protocols 2:948-952.

Kim et al. (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:1156-1160.

Kim et al. (2004) Plant Physiol. 134:1206-1216.

Knutzon et al. (1995) Plant Physiol. 109:999-1006.

Koziel et al. (1996) Plant Mol. Biol. 32:393-405.

Kuhn et al. (2009) J. Biol. Chem. 284:34092-102.

Kunst et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:4143-4147.

Kwong et al. (2003) Plant Cell 15:5-18.

Lacroix et al. (2008) Proc. Natl. Acad. Sci.U.S.A. 105: 15429-15434.

Lardizabal et al. (2008) Plant Physiol. 148: 89-96.

Larkin et al. (1996) Transgenic Res. 5:325-335.

Laureles et al. (2002) J. of Agric. and Food Chem. 50:1581-1586.

Lebrun et al. (1987) Nucl. Acids Res. 15:4360.

Laux et al. (1996) Development 122: 87-96.

Lazo et al. (1991) Bio/Technology 9:963-967.

Lee et al. (1998) Science 280:915-918.

Lee et al., (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100:2152-2158.

Li-Beisson et al (2013) The Arabidopsis Book, 2013.

Li et al. (1996) FEBS Lett. 379:117-121.

Li et al. (2006) Phytochemistry 67: 904-915.

Lin et al. (2005) Plant Physiol. Biochem. 43:770-776.

Liu et al. (2010a) Fuel 89:2735-2740.

Liu et al. (2010b) Plant Physiol. Biochem. 48: 9-15.

Liu et al (2012a) Prog. Lipid Res. 51:350-377.

Liu et al. (2012b) In Vitro Cellular and Dev. Biol. Plant 48:462-468.

Liu et al. (2012c) J Exp Bot 63: 3727-3740.

Liu et al. (2014) BMC Plant Biol. 14: 73.

Lotan et al. (1998) Cell 93: 1195-1205.

Lu et al (2007) J. Biol. Chem. 282: 35945-35953.

Luerssen et al. (1998) Plant J. 15: 755-764.

Lui et al. (2009) J. Agric. Food Chem. 57: 2308-2313.

Maher and Bressler (2007) Bioresource Technology 98:2351-2368.

Matsuoka et al. (1994) Plant J. 6:311-319.

Matsuoka and Minami (1989) Eur. J. Biochem. 181: 593-598.

McElroy et al. (1990) Plant Cell 2: 163-171.

Meier et al. (1997) FEBS Lett. 415:91-95.

Millar and Waterhouse (2005). Funct Integr Genomics 5:129-135.

Mojica et al. (2000) Mol Microbiol 36:244-246.

Mongrand et al. (1998) Phytochemistry 49:1049-1064.

Moreno-Perez (2012) PNAS 109:10107-10112.

Mu et al. (2008) Plant Physiol. 148:1042-1054.

Murphy et al. (2012). Protoplasma 249:541-585.

Naim et al. (2012) PLoS One 7: e52717.

Needleman and Wunsch (1970) J. Mol Biol. 45: 443-453.

Nilsson et al. (2012) Physiol. Plantarum 144: 35-47.

Nishida et al (1993) Plant Mol. Biol. 21:267-277.

Nomura et al. (2000) Plant Mol. Biol. 44: 99-106.

Ohlrogge and Browse (1995) Plant Cell 7: 957-970.

Padidam (2003) Curr. Opin. Plant Biol. 6:169-77.

Padidam et al. (2003) Transgenic Res. 12:101-9.

Parthibane et al. (2012a) J. Biol. Chem. 287:1946-1965.

Parthibane et al. (2012b) Plant Physiol. 159:95-104.

Pasquinelli et al. (2005). Curr. Opin. Genet. Develop. 15:200-205.

Perez-Vich et al. (1998) J.A.O.C.S. 75:547-555.

Perrin et al. (2000) Mol. Breed. 6:345-352.

Petrie et al. (2012) PLOS One 7: e35214.

Phillips et al. (2002) Journal of Food Composition and Analysis 12:123-142.

Pigeaire et al. (1997) Mol. Breed. 3:341-349.

Potenza et al. (2004) In Vitro Cell Dev. Biol. Plant 40:1-22.

Powell et al. (1996) Vaccines 183, Abstract.

Qiu et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:31561-3156.

Robson et al. (2004) Plant Biotechnol J 2:101-112.

Rossell and Pritchard (1991) Analysis of Oilseeds, Fats and Fatty Foods. Elsevier Science Publishers Ltd: London (Chapter 2, pp.48-53).

Roston et al (2012) J. Biol. Chem. 287:21406-21415.

Ruuska et al. (2002) Plant Cell 14:1191-1206.

Saha et al. (2006) Plant Physiol. 141:1533-1543.

Santos-Mendoza et al. (2005) FEBS Lett. 579:4666-4670.

Santos-Mendoza et al. (2008) Plant J. 54:608-620.

Schaffner (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 77:2163-2167.

Schnurr et al. (2002) Plant Physiol 129:1700-1709.

Scott et al. (2010) Plant Biotechnol. J. 8:912-27.

Shen et al. (2010) Plant Phys. 153: 980-987.

Semwal et al. (2011) Bioresource Technology 102:2151-2161.

Senior (1998) Biotech. Genet. Engin. Revs. 15:79-119.

Shen et al. (2010) Plant Physiol. 153:980-987.

Shiina et al. (1997) Plant Physiol. 115:477-483.

Shimada and Hara-Nishimura (2010) Biol. Pharm. Bull. 33:360-363.

Shimada et al. (2014) Plant Physiol. 164:105-118.

Shockey et al. (2002) Plant Physiol 129:1710-1722.

Sizemore et al. (1995) Science 270:299-302.

Slade and Knauf (2005) Transgenic Res. 14: 109-115.

Slocombe et al. (2009) Plant Biotechnol. J. 7: 694-703.

Smith et al. (2000) Nature 407:319-320.

Somerville et al. (2000) Lipids. In BB Buchanan, W Gruissem, RL Jones, eds, Biochemisty and Molecular Biology of Plants. American Society of Plant Physiologists, Rockville, MD, pp 456-527.

Srinivasan et al. (2007) Planta 225:341-51.

Stalker et al. 1988 Science 242: 419-423.

Stone et al. (2001) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.98: 11806-11811.

Stone et al. (2008) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.105: 3151-3156.

Tan et al. (2011) Plant Physiol. 156:1577-1588.

Taylor (1997) The Plant Cell 9:1245-1249.

Thillet et al. (1988) J. Biol. Chem 263:12500-12508.

Tingay et al. (1997) Plant J. 11:1369-1376.

To et al. (2012) Plant Cell 24:5007-5023.

Topfer et al. (1995) Science 268:681-686.

Ulmasov et al. (1995) Plant Physiol. 108:919-927.

van de Loo et al. (1995) Proc Natl Acad Sci U S A. 92:6743-6747.

Van Erp et al. (2014) Plant Physiol. 165-30-36.

Vanhercke et al. (2013) FEBS Letters 587:364-369.

Vanhercke et al. (2014). Plant Biotech. J. 12:231-239.

Vieler et al. (2012) Plant Physiol. 158:1562-1569.

Voelker et al. (1992) Science 257:72-74.

Voinnet et al. (2003) Plant J. 33:949-956.

Wang and Benning (2012) Plant J 70:614-623.

Wang et al. (2002) Plant J 32:831-843.

Wang et al. (2004) PNAS 101:3275-3280.

Waterhouse et al. (1998). Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95:13959-13964.

Weiss (2003) Int. J. Med. Microbiol. 293:95-106.

Weselake et al. (2008) J. Exp. Botany 59: 3543-3549.

Winichayakul et al. (2013) Plant Physiol. 162:626-639.

Wood et al. (2009). Plant Biotech. J. 7: 914-924.

Wright et al. (2006) Methods Mol Biol. 343:120-135.

Wu et al. (2014) In Vitro Cellular and Dev. Biol.-Plant 50:9-18.

Xie et al. (2014) Mol. Plant 7:923-926.

Xu et al (2010) Plant and Cell Physiol. 51:1019-1028.

Xu et al (2005) Plant Cell 17:3094-3110.

Xu et al (2008) Plant Cell 20:2190-2204.

Yamagishi et al. (2005) Pl Physiol 139: 163-173.

Yamasaki et al. (2004) Plant Cell 16:3448-3459.

Yang et al. (2003) Planta 216:597-603.

Yang et al. (2010)Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.107:12040-12045.

Yen et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99:8512-8517.

Yen et al. (2005) J. Lipid Res. 46: 1502-1511.

Yokoyama et al. (1994) Mol Gen Genet 244: 15-22.

Yuan et al. (1995) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 92:10639-10643.

Zhang et al. (1999) Plant Cell, Tissue and Organ Culture 56:37-46.

Zheng et al. (2009) Pl Physiol 21: 2563-2577.

Zolman et al (2001) Plant Physiol. 127:1266-1274.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Commonwealth Scientific and Industrial Research

Organisation

<120> СПОСОБЫ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОМЫШЛЕННЫХ ПРОДУКТОВ ИЗ РАСТИТЕЛЬНЫХ ЛИПИДОВ

<130> 517481

<150> AU 2014902617

<151> 2014-07-07

<150> AU 2015900084

<151> 2015-01-13

<150> AU 2015900284

<151> 2015-01-30

<160> 254

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 520

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 1

Met Ala Ile Leu Asp Ser Ala Gly Val Thr Thr Val Thr Glu Asn Gly

1 5 10 15

Gly Gly Glu Phe Val Asp Leu Asp Arg Leu Arg Arg Arg Lys Ser Arg

20 25 30

Ser Asp Ser Ser Asn Gly Leu Leu Leu Ser Gly Ser Asp Asn Asn Ser

35 40 45

Pro Ser Asp Asp Val Gly Ala Pro Ala Asp Val Arg Asp Arg Ile Asp

50 55 60

Ser Val Val Asn Asp Asp Ala Gln Gly Thr Ala Asn Leu Ala Gly Asp

65 70 75 80

Asn Asn Gly Gly Gly Asp Asn Asn Gly Gly Gly Arg Gly Gly Gly Glu

85 90 95

Gly Arg Gly Asn Ala Asp Ala Thr Phe Thr Tyr Arg Pro Ser Val Pro

100 105 110

Ala His Arg Arg Ala Arg Glu Ser Pro Leu Ser Ser Asp Ala Ile Phe

115 120 125

Lys Gln Ser His Ala Gly Leu Phe Asn Leu Cys Val Val Val Leu Ile

130 135 140

Ala Val Asn Ser Arg Leu Ile Ile Glu Asn Leu Met Lys Tyr Gly Trp

145 150 155 160

Leu Ile Arg Thr Asp Phe Trp Phe Ser Ser Arg Ser Leu Arg Asp Trp

165 170 175

Pro Leu Phe Met Cys Cys Ile Ser Leu Ser Ile Phe Pro Leu Ala Ala

180 185 190

Phe Thr Val Glu Lys Leu Val Leu Gln Lys Tyr Ile Ser Glu Pro Val

195 200 205

Val Ile Phe Leu His Ile Ile Ile Thr Met Thr Glu Val Leu Tyr Pro

210 215 220

Val Tyr Val Thr Leu Arg Cys Asp Ser Ala Phe Leu Ser Gly Val Thr

225 230 235 240

Leu Met Leu Leu Thr Cys Ile Val Trp Leu Lys Leu Val Ser Tyr Ala

245 250 255

His Thr Ser Tyr Asp Ile Arg Ser Leu Ala Asn Ala Ala Asp Lys Ala

260 265 270

Asn Pro Glu Val Ser Tyr Tyr Val Ser Leu Lys Ser Leu Ala Tyr Phe

275 280 285

Met Val Ala Pro Thr Leu Cys Tyr Gln Pro Ser Tyr Pro Arg Ser Ala

290 295 300

Cys Ile Arg Lys Gly Trp Val Ala Arg Gln Phe Ala Lys Leu Val Ile

305 310 315 320

Phe Thr Gly Phe Met Gly Phe Ile Ile Glu Gln Tyr Ile Asn Pro Ile

325 330 335

Val Arg Asn Ser Lys His Pro Leu Lys Gly Asp Leu Leu Tyr Ala Ile

340 345 350

Glu Arg Val Leu Lys Leu Ser Val Pro Asn Leu Tyr Val Trp Leu Cys

355 360 365

Met Phe Tyr Cys Phe Phe His Leu Trp Leu Asn Ile Leu Ala Glu Leu

370 375 380

Leu Cys Phe Gly Asp Arg Glu Phe Tyr Lys Asp Trp Trp Asn Ala Lys

385 390 395 400

Ser Val Gly Asp Tyr Trp Arg Met Trp Asn Met Pro Val His Lys Trp

405 410 415

Met Val Arg His Ile Tyr Phe Pro Cys Leu Arg Ser Lys Ile Pro Lys

420 425 430

Thr Leu Ala Ile Ile Ile Ala Phe Leu Val Ser Ala Val Phe His Glu

435 440 445

Leu Cys Ile Ala Val Pro Cys Arg Leu Phe Lys Leu Trp Ala Phe Leu

450 455 460

Gly Ile Met Phe Gln Val Pro Leu Val Phe Ile Thr Asn Tyr Leu Gln

465 470 475 480

Glu Arg Phe Gly Ser Thr Val Gly Asn Met Ile Phe Trp Phe Ile Phe

485 490 495

Cys Ile Phe Gly Gln Pro Met Cys Val Leu Leu Tyr Tyr His Asp Leu

500 505 510

Met Asn Arg Lys Gly Ser Met Ser

515 520

<210> 2

<211> 314

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 2

Met Gly Gly Ser Arg Glu Phe Arg Ala Glu Glu His Ser Asn Gln Phe

1 5 10 15

His Ser Ile Ile Ala Met Ala Ile Trp Leu Gly Ala Ile His Phe Asn

20 25 30

Val Ala Leu Val Leu Cys Ser Leu Ile Phe Leu Pro Pro Ser Leu Ser

35 40 45

Leu Met Val Leu Gly Leu Leu Ser Leu Phe Ile Phe Ile Pro Ile Asp

50 55 60

His Arg Ser Lys Tyr Gly Arg Lys Leu Ala Arg Tyr Ile Cys Lys His

65 70 75 80

Ala Cys Asn Tyr Phe Pro Val Ser Leu Tyr Val Glu Asp Tyr Glu Ala

85 90 95

Phe Gln Pro Asn Arg Ala Tyr Val Phe Gly Tyr Glu Pro His Ser Val

100 105 110

Leu Pro Ile Gly Val Val Ala Leu Cys Asp Leu Thr Gly Phe Met Pro

115 120 125

Ile Pro Asn Ile Lys Val Leu Ala Ser Ser Ala Ile Phe Tyr Thr Pro

130 135 140

Phe Leu Arg His Ile Trp Thr Trp Leu Gly Leu Thr Ala Ala Ser Arg

145 150 155 160

Lys Asn Phe Thr Ser Leu Leu Asp Ser Gly Tyr Ser Cys Val Leu Val

165 170 175

Pro Gly Gly Val Gln Glu Thr Phe His Met Gln His Asp Ala Glu Asn

180 185 190

Val Phe Leu Ser Arg Arg Arg Gly Phe Val Arg Ile Ala Met Glu Gln

195 200 205

Gly Ser Pro Leu Val Pro Val Phe Cys Phe Gly Gln Ala Arg Val Tyr

210 215 220

Lys Trp Trp Lys Pro Asp Cys Asp Leu Tyr Leu Lys Leu Ser Arg Ala

225 230 235 240

Ile Arg Phe Thr Pro Ile Cys Phe Trp Gly Val Phe Gly Ser Pro Leu

245 250 255

Pro Cys Arg Gln Pro Met His Val Val Val Gly Lys Pro Ile Glu Val

260 265 270

Thr Lys Thr Leu Lys Pro Thr Asp Glu Glu Ile Ala Lys Phe His Gly

275 280 285

Gln Tyr Val Glu Ala Leu Arg Asp Leu Phe Glu Arg His Lys Ser Arg

290 295 300

Val Gly Tyr Asp Leu Glu Leu Lys Ile Leu

305 310

<210> 3

<211> 340

<212> Белок

<213> Ricinus communis

<400> 3

Met Gly Glu Glu Ala Asn His Asn Asn Asn Asn Asn Asn Ile Asn Ser

1 5 10 15

Asn Asp Glu Lys Asn Glu Glu Lys Ser Asn Tyr Thr Val Val Asn Ser

20 25 30

Arg Glu Leu Tyr Pro Thr Asn Ile Phe His Ala Leu Leu Ala Leu Ser

35 40 45

Ile Trp Ile Gly Ser Ile His Phe Asn Leu Phe Leu Leu Phe Ile Ser

50 55 60

Tyr Leu Phe Leu Ser Phe Pro Thr Phe Leu Leu Ile Val Gly Phe Phe

65 70 75 80

Val Val Leu Met Phe Ile Pro Ile Asp Glu His Ser Lys Leu Gly Arg

85 90 95

Arg Leu Cys Arg Tyr Val Cys Arg His Ala Cys Ser His Phe Pro Val

100 105 110

Thr Leu His Val Glu Asp Met Asn Ala Phe His Ser Asp Arg Ala Tyr

115 120 125

Val Phe Gly Tyr Glu Pro His Ser Val Phe Pro Leu Gly Val Ser Val

130 135 140

Leu Ser Asp His Phe Ala Val Leu Pro Leu Pro Lys Met Lys Val Leu

145 150 155 160

Ala Ser Asn Ala Val Phe Arg Thr Pro Val Leu Arg His Ile Trp Thr

165 170 175

Trp Cys Gly Leu Thr Ser Ala Thr Lys Lys Asn Phe Thr Ala Leu Leu

180 185 190

Ala Ser Gly Tyr Ser Cys Ile Val Ile Pro Gly Gly Val Gln Glu Thr

195 200 205

Phe Tyr Met Lys His Gly Ser Glu Ile Ala Phe Leu Lys Ala Arg Arg

210 215 220

Gly Phe Val Arg Val Ala Met Glu Met Gly Lys Pro Leu Val Pro Val

225 230 235 240

Phe Cys Phe Gly Gln Ser Asn Val Tyr Lys Trp Trp Lys Pro Asp Gly

245 250 255

Glu Leu Phe Met Lys Ile Ala Arg Ala Ile Lys Phe Ser Pro Ile Val

260 265 270

Phe Trp Gly Val Leu Gly Ser His Leu Pro Leu Gln Arg Pro Met His

275 280 285

Val Val Val Gly Lys Pro Ile Glu Val Lys Gln Asn Pro Gln Pro Thr

290 295 300

Val Glu Glu Val Ser Glu Val Gln Gly Gln Phe Val Ala Ala Leu Lys

305 310 315 320

Asp Leu Phe Glu Arg His Lys Ala Arg Val Gly Tyr Ala Asp Leu Thr

325 330 335

Leu Glu Ile Leu

340

<210> 4

<211> 322

<212> Белок

<213> Vernicia fordii

<400> 4

Met Gly Met Val Glu Val Lys Asn Glu Glu Glu Val Thr Ile Phe Lys

1 5 10 15

Ser Gly Glu Ile Tyr Pro Thr Asn Ile Phe Gln Ser Val Leu Ala Leu

20 25 30

Ala Ile Trp Leu Gly Ser Phe His Phe Ile Leu Phe Leu Val Ser Ser

35 40 45

Ser Ile Phe Leu Pro Phe Ser Lys Phe Leu Leu Val Ile Gly Leu Leu

50 55 60

Leu Phe Phe Met Val Ile Pro Ile Asn Asp Arg Ser Lys Leu Gly Gln

65 70 75 80

Cys Leu Phe Ser Tyr Ile Ser Arg His Val Cys Ser Tyr Phe Pro Ile

85 90 95

Thr Leu His Val Glu Asp Ile Asn Ala Phe Arg Ser Asp Arg Ala Tyr

100 105 110

Val Phe Gly Tyr Glu Pro His Ser Val Phe Pro Ile Gly Val Met Ile

115 120 125

Leu Ser Leu Gly Leu Ile Pro Leu Pro Asn Ile Lys Phe Leu Ala Ser

130 135 140

Ser Ala Val Phe Tyr Thr Pro Phe Leu Arg His Ile Trp Ser Trp Cys

145 150 155 160

Gly Leu Thr Pro Ala Thr Arg Lys Asn Phe Val Ser Leu Leu Ser Ser

165 170 175

Gly Tyr Ser Cys Ile Leu Val Pro Gly Gly Val Gln Glu Thr Phe Tyr

180 185 190

Met Lys Gln Asp Ser Glu Ile Ala Phe Leu Lys Ala Arg Arg Gly Phe

195 200 205

Ile Arg Ile Ala Met Gln Thr Gly Thr Pro Leu Val Pro Val Phe Cys

210 215 220

Phe Gly Gln Met His Thr Phe Lys Trp Trp Lys Pro Asp Gly Glu Leu

225 230 235 240

Phe Met Lys Ile Ala Arg Ala Ile Lys Phe Thr Pro Thr Ile Phe Trp

245 250 255

Gly Val Leu Gly Thr Pro Leu Pro Phe Lys Asn Pro Met His Val Val

260 265 270

Val Gly Arg Pro Ile Glu Val Lys Gln Asn Pro Gln Pro Thr Ala Glu

275 280 285

Glu Val Ala Glu Val Gln Arg Glu Phe Ile Ala Ser Leu Lys Asn Leu

290 295 300

Phe Glu Arg His Lys Ala Arg Val Gly Tyr Ser Asp Leu Lys Leu Glu

305 310 315 320

Ile Phe

<210> 5

<211> 355

<212> Белок

<213> Mortierella ramanniana

<400> 5

Met Ala Ser Lys Asp Gln His Leu Gln Gln Lys Val Lys His Thr Leu

1 5 10 15

Glu Ala Ile Pro Ser Pro Arg Tyr Ala Pro Leu Arg Val Pro Leu Arg

20 25 30

Arg Arg Leu Gln Thr Leu Ala Val Leu Leu Trp Cys Ser Met Met Ser

35 40 45

Ile Cys Met Phe Ile Phe Phe Phe Leu Cys Ser Ile Pro Val Leu Leu

50 55 60

Trp Phe Pro Ile Ile Leu Tyr Leu Thr Trp Ile Leu Val Trp Asp Lys

65 70 75 80

Ala Pro Glu Asn Gly Gly Arg Pro Ile Arg Trp Leu Arg Asn Ala Ala

85 90 95

Trp Trp Lys Leu Phe Ala Gly Tyr Phe Pro Ala His Val Ile Lys Glu

100 105 110

Ala Asp Leu Asp Pro Ser Lys Asn Tyr Ile Phe Gly Tyr His Pro His

115 120 125

Gly Ile Ile Ser Met Gly Ser Phe Cys Thr Phe Ser Thr Asn Ala Thr

130 135 140

Gly Phe Asp Asp Leu Phe Pro Gly Ile Arg Pro Ser Leu Leu Thr Leu

145 150 155 160

Thr Ser Asn Phe Asn Ile Pro Leu Tyr Arg Asp Tyr Leu Met Ala Cys

165 170 175

Gly Leu Cys Ser Val Ser Lys Thr Ser Cys Gln Asn Ile Leu Thr Lys

180 185 190

Gly Gly Pro Gly Arg Ser Ile Ala Ile Val Val Gly Gly Ala Ser Glu

195 200 205

Ser Leu Asn Ala Arg Pro Gly Val Met Asp Leu Val Leu Lys Arg Arg

210 215 220

Phe Gly Phe Ile Lys Ile Ala Val Gln Thr Gly Ala Ser Leu Val Pro

225 230 235 240

Thr Ile Ser Phe Gly Glu Asn Glu Leu Tyr Glu Gln Ile Glu Ser Asn

245 250 255

Glu Asn Ser Lys Leu His Arg Trp Gln Lys Lys Ile Gln His Ala Leu

260 265 270

Gly Phe Thr Met Pro Leu Phe His Gly Arg Gly Val Phe Asn Tyr Asp

275 280 285

Phe Gly Leu Leu Pro His Arg His Pro Ile Tyr Thr Ile Val Gly Lys

290 295 300

Pro Ile Pro Val Pro Ser Ile Lys Tyr Gly Gln Thr Lys Asp Glu Ile

305 310 315 320

Ile Arg Glu Leu His Asp Ser Tyr Met His Ala Val Gln Asp Leu Tyr

325 330 335

Asp Arg Tyr Lys Asp Ile Tyr Ala Lys Asp Arg Val Lys Glu Leu Glu

340 345 350

Phe Val Glu

355

<210> 6

<211> 388

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 6

Met Lys Thr Leu Ile Ala Ala Tyr Ser Gly Val Leu Arg Gly Glu Arg

1 5 10 15

Gln Ala Glu Ala Asp Arg Ser Gln Arg Ser His Gly Gly Pro Ala Leu

20 25 30

Ser Arg Glu Gly Ser Gly Arg Trp Gly Thr Gly Ser Ser Ile Leu Ser

35 40 45

Ala Leu Gln Asp Leu Phe Ser Val Thr Trp Leu Asn Arg Ser Lys Val

50 55 60

Glu Lys Gln Leu Gln Val Ile Ser Val Leu Gln Trp Val Leu Ser Phe

65 70 75 80

Leu Val Leu Gly Val Ala Cys Ser Ala Ile Leu Met Tyr Ile Phe Cys

85 90 95

Thr Asp Cys Trp Leu Ile Ala Val Leu Tyr Phe Thr Trp Leu Val Phe

100 105 110

Asp Trp Asn Thr Pro Lys Lys Gly Gly Arg Arg Ser Gln Trp Val Arg

115 120 125

Asn Trp Ala Val Trp Arg Tyr Phe Arg Asp Tyr Phe Pro Ile Gln Leu

130 135 140

Val Lys Thr His Asn Leu Leu Thr Thr Arg Asn Tyr Ile Phe Gly Tyr

145 150 155 160

His Pro His Gly Ile Met Gly Leu Gly Ala Phe Cys Asn Phe Ser Thr

165 170 175

Glu Ala Thr Glu Val Ser Lys Lys Phe Pro Gly Ile Arg Pro Tyr Leu

180 185 190

Ala Thr Leu Ala Gly Asn Phe Arg Met Pro Val Leu Arg Glu Tyr Leu

195 200 205

Met Ser Gly Gly Ile Cys Pro Val Ser Arg Asp Thr Ile Asp Tyr Leu

210 215 220

Leu Ser Lys Asn Gly Ser Gly Asn Ala Ile Ile Ile Val Val Gly Gly

225 230 235 240

Ala Ala Glu Ser Leu Ser Ser Met Pro Gly Lys Asn Ala Val Thr Leu

245 250 255

Arg Asn Arg Lys Gly Phe Val Lys Leu Ala Leu Arg His Gly Ala Asp

260 265 270

Leu Val Pro Ile Tyr Ser Phe Gly Glu Asn Glu Val Tyr Lys Gln Val

275 280 285

Ile Phe Glu Glu Gly Ser Trp Gly Arg Trp Val Gln Lys Lys Phe Gln

290 295 300

Lys Tyr Ile Gly Phe Ala Pro Cys Ile Phe His Gly Arg Gly Leu Phe

305 310 315 320

Ser Ser Asp Thr Trp Gly Leu Val Pro Tyr Ser Lys Pro Ile Thr Thr

325 330 335

Val Val Gly Glu Pro Ile Thr Ile Pro Lys Leu Glu His Pro Thr Gln

340 345 350

Gln Asp Ile Asp Leu Tyr His Thr Met Tyr Met Glu Ala Leu Val Lys

355 360 365

Leu Phe Asp Lys His Lys Thr Lys Phe Gly Leu Pro Glu Thr Glu Val

370 375 380

Leu Glu Val Asn

385

<210> 7

<211> 328

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 7

Met Ala His Ser Lys Gln Pro Ser His Phe Gln Ser Leu Met Leu Leu

1 5 10 15

Gln Trp Pro Leu Ser Tyr Leu Ala Ile Phe Trp Ile Leu Gln Pro Leu

20 25 30

Phe Val Tyr Leu Leu Phe Thr Ser Leu Trp Pro Leu Pro Val Leu Tyr

35 40 45

Phe Ala Trp Leu Phe Leu Asp Trp Lys Thr Pro Glu Arg Gly Gly Arg

50 55 60

Arg Ser Ala Trp Val Arg Asn Trp Cys Val Trp Thr His Ile Arg Asp

65 70 75 80

Tyr Phe Pro Ile Thr Ile Leu Lys Thr Lys Asp Leu Ser Pro Glu His

85 90 95

Asn Tyr Leu Met Gly Val His Pro His Gly Leu Leu Thr Phe Gly Ala

100 105 110

Phe Cys Asn Phe Cys Thr Glu Ala Thr Gly Phe Ser Lys Thr Phe Pro

115 120 125

Gly Ile Thr Pro His Leu Ala Thr Leu Ser Trp Phe Phe Lys Ile Pro

130 135 140

Phe Val Arg Glu Tyr Leu Met Ala Lys Gly Val Cys Ser Val Ser Gln

145 150 155 160

Pro Ala Ile Asn Tyr Leu Leu Ser His Gly Thr Gly Asn Leu Val Gly

165 170 175

Ile Val Val Gly Gly Val Gly Glu Ala Leu Gln Ser Val Pro Asn Thr

180 185 190

Thr Thr Leu Ile Leu Gln Lys Arg Lys Gly Phe Val Arg Thr Ala Leu

195 200 205

Gln His Gly Ala His Leu Val Pro Thr Phe Thr Phe Gly Glu Thr Glu

210 215 220

Val Tyr Asp Gln Val Leu Phe His Lys Asp Ser Arg Met Tyr Lys Phe

225 230 235 240

Gln Ser Cys Phe Arg Arg Ile Phe Gly Phe Tyr Cys Cys Val Phe Tyr

245 250 255

Gly Gln Ser Phe Cys Gln Gly Ser Thr Gly Leu Leu Pro Tyr Ser Arg

260 265 270

Pro Ile Val Thr Val Val Gly Glu Pro Leu Pro Leu Pro Gln Ile Glu

275 280 285

Lys Pro Ser Gln Glu Met Val Asp Lys Tyr His Ala Leu Tyr Met Asp

290 295 300

Ala Leu His Lys Leu Phe Asp Gln His Lys Thr His Tyr Gly Cys Ser

305 310 315 320

Glu Thr Gln Lys Leu Phe Phe Leu

325

<210> 8

<211> 361

<212> Белок

<213> Bos taurus

<400> 8

Met Lys Thr Leu Ile Ala Ala Tyr Ser Gly Val Leu Arg Gly Thr Gly

1 5 10 15

Ser Ser Ile Leu Ser Ala Leu Gln Asp Leu Phe Ser Val Thr Trp Leu

20 25 30

Asn Arg Ala Lys Val Glu Lys Gln Leu Gln Val Ile Ser Val Leu Gln

35 40 45

Trp Val Leu Ser Phe Leu Val Leu Gly Val Ala Cys Ser Val Ile Leu

50 55 60

Met Tyr Thr Phe Cys Thr Asp Cys Trp Leu Ile Ala Val Leu Tyr Phe

65 70 75 80

Thr Trp Leu Val Phe Asp Trp Asn Thr Pro Lys Lys Gly Gly Arg Arg

85 90 95

Ser Gln Trp Val Arg Asn Trp Ala Val Trp Arg Tyr Phe Arg Asp Tyr

100 105 110

Phe Pro Ile Gln Leu Val Lys Thr His Asn Leu Leu Thr Ser Arg Asn

115 120 125

Tyr Ile Phe Gly Tyr His Pro His Gly Ile Met Gly Leu Gly Ala Phe

130 135 140

Cys Asn Phe Ser Thr Glu Ala Thr Glu Val Ser Lys Lys Phe Pro Gly

145 150 155 160

Ile Arg Pro Tyr Leu Ala Thr Leu Ala Gly Asn Phe Arg Met Pro Val

165 170 175

Leu Arg Glu Tyr Leu Met Ser Gly Gly Ile Cys Pro Val Asn Arg Asp

180 185 190

Thr Ile Asp Tyr Leu Leu Ser Lys Asn Gly Ser Gly Asn Ala Ile Ile

195 200 205

Ile Val Val Gly Gly Ala Ala Glu Ser Leu Ser Ser Met Pro Gly Lys

210 215 220

Asn Ala Val Thr Leu Arg Asn Arg Lys Gly Phe Val Lys Leu Ala Leu

225 230 235 240

Arg His Gly Ala Asp Leu Val Pro Thr Tyr Ser Phe Gly Glu Asn Glu

245 250 255

Val Tyr Lys Gln Val Ile Phe Glu Glu Gly Ser Trp Gly Arg Trp Val

260 265 270

Gln Lys Lys Phe Gln Lys Tyr Ile Gly Phe Ala Pro Cys Ile Phe His

275 280 285

Gly Arg Gly Leu Phe Ser Ser Asp Thr Trp Gly Leu Val Pro Tyr Ser

290 295 300

Lys Pro Ile Thr Thr Val Val Gly Glu Pro Ile Thr Ile Pro Arg Leu

305 310 315 320

Glu Arg Pro Thr Gln Gln Asp Ile Asp Leu Tyr His Ala Met Tyr Val

325 330 335

Gln Ala Leu Val Lys Leu Phe Asp Gln His Lys Thr Lys Phe Gly Leu

340 345 350

Pro Glu Thr Glu Val Leu Glu Val Asn

355 360

<210> 9

<211> 388

<212> Белок

<213> Mus musculus

<400> 9

Met Lys Thr Leu Ile Ala Ala Tyr Ser Gly Val Leu Arg Gly Glu Arg

1 5 10 15

Arg Ala Glu Ala Ala Arg Ser Glu Asn Lys Asn Lys Gly Ser Ala Leu

20 25 30

Ser Arg Glu Gly Ser Gly Arg Trp Gly Thr Gly Ser Ser Ile Leu Ser

35 40 45

Ala Leu Gln Asp Ile Phe Ser Val Thr Trp Leu Asn Arg Ser Lys Val

50 55 60

Glu Lys Gln Leu Gln Val Ile Ser Val Leu Gln Trp Val Leu Ser Phe

65 70 75 80

Leu Val Leu Gly Val Ala Cys Ser Val Ile Leu Met Tyr Thr Phe Cys

85 90 95

Thr Asp Cys Trp Leu Ile Ala Val Leu Tyr Phe Thr Trp Leu Ala Phe

100 105 110

Asp Trp Asn Thr Pro Lys Lys Gly Gly Arg Arg Ser Gln Trp Val Arg

115 120 125

Asn Trp Ala Val Trp Arg Tyr Phe Arg Asp Tyr Phe Pro Ile Gln Leu

130 135 140

Val Lys Thr His Asn Leu Leu Thr Thr Arg Asn Tyr Ile Phe Gly Tyr

145 150 155 160

His Pro His Gly Ile Met Gly Leu Gly Ala Phe Cys Asn Phe Ser Thr

165 170 175

Glu Ala Thr Glu Val Ser Lys Lys Phe Pro Gly Ile Arg Pro Tyr Leu

180 185 190

Ala Thr Leu Ala Gly Asn Phe Arg Met Pro Val Leu Arg Glu Tyr Leu

195 200 205

Met Ser Gly Gly Ile Cys Pro Val Asn Arg Asp Thr Ile Asp Tyr Leu

210 215 220

Leu Ser Lys Asn Gly Ser Gly Asn Ala Ile Ile Ile Val Val Gly Gly

225 230 235 240

Ala Ala Glu Ser Leu Ser Ser Met Pro Gly Lys Asn Ala Val Thr Leu

245 250 255

Lys Asn Arg Lys Gly Phe Val Lys Leu Ala Leu Arg His Gly Ala Asp

260 265 270

Leu Val Pro Thr Tyr Ser Phe Gly Glu Asn Glu Val Tyr Lys Gln Val

275 280 285

Ile Phe Glu Glu Gly Ser Trp Gly Arg Trp Val Gln Lys Lys Phe Gln

290 295 300

Lys Tyr Ile Gly Phe Ala Pro Cys Ile Phe His Gly Arg Gly Leu Phe

305 310 315 320

Ser Ser Asp Thr Trp Gly Leu Val Pro Tyr Ser Lys Pro Ile Thr Thr

325 330 335

Val Val Gly Glu Pro Ile Thr Val Pro Lys Leu Glu His Pro Thr Gln

340 345 350

Lys Asp Ile Asp Leu Tyr His Ala Met Tyr Met Glu Ala Leu Val Lys

355 360 365

Leu Phe Asp Asn His Lys Thr Lys Phe Gly Leu Pro Glu Thr Glu Val

370 375 380

Leu Glu Val Asn

385

<210> 10

<211> 3

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> консервативная последовательность

<400> 10

Tyr Phe Pro

<210> 11

<211> 4

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> консервативная последовательность

<400> 11

His Pro His Gly

<210> 12

<211> 4

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> консервативная последовательность

<400> 12

Glu Pro His Ser

<210> 13

<211> 24

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> консервативная последовательность

<220>

<221> X

<222> (2)..(2)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (5)..(5)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (6)..(6)

<223> Лизин (K) или Аргинин (R)

<220>

<221> X

<222> (7)..(7)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (9)..(11)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (13)..(15)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (16)..(16)

<223> Лейцин (L) или Валин (V)

<220>

<221> X

<222> (19)..(21)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (24)..(24)

<223> Глютаминовая кислота (E) или Глютамин (Q)

<400> 13

Arg Xaa Gly Phe Xaa Xaa Xaa Ala Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa

1 5 10 15

Val Pro Xaa Xaa Xaa Phe Gly Xaa

<210> 14

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> консервативная последовательность

<220>

<221> X

<222> (3)..(3)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (5)..(7)

<223> любая аминокислота

<400> 14

Phe Leu Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Asn

1 5

<210> 15

<211> 118

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> консервативная последовательность

<400> 15

Ala Leu Val Val Ala Asn His Gln Ser Phe Leu Asp Pro Leu Val Leu

1 5 10 15

Ser Ala Leu Leu Pro Arg Lys Gly Gly Arg Val Arg Phe Val Ala Lys

20 25 30

Lys Glu Leu Phe Tyr Val Pro Leu Leu Gly Trp Leu Leu Arg Leu Leu

35 40 45

Gly Ala Ile Phe Ile Asp Arg Glu Asn Gly Arg Leu Ala Arg Ala Ala

50 55 60

Leu Arg Glu Ala Val Arg Leu Leu Arg Asp Gly Gly Trp Leu Leu Ile

65 70 75 80

Phe Pro Glu Gly Thr Arg Ser Arg Pro Gly Lys Leu Leu Pro Phe Lys

85 90 95

Lys Gly Ala Ala Arg Leu Ala Leu Glu Ala Gly Val Pro Ile Val Pro

100 105 110

Val Ala Ile Arg Gly Thr

115

<210> 16

<211> 187

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> консервативная последовательность

<220>

<221> X

<222> (15)..(15)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (18)..(18)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (23)..(23)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (25)..(26)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (28)..(30)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (32)..(33)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (35)..(38)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (41)..(41)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (46)..(48)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (53)..(53)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (55)..(57)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (61)..(61)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (67)..(67)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (72)..(72)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (74)..(77)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (79)..(79)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (114)..(114)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (127)..(128)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (136)..(136)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (139)..(142)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (144)..(144)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (150)..(150)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (164)..(165)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (167)..(172)

<223> любая аминокислота

<400> 16

Ala Val Phe Asp Lys Asp Gly Thr Leu Thr Glu Asp Asp Thr Xaa Phe

1 5 10 15

Leu Xaa Tyr Leu Leu Lys Xaa Leu Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Leu Xaa

20 25 30

Xaa Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Ser Xaa Leu Thr Leu Ser Xaa Xaa Xaa

35 40 45

Asp Leu Leu Glu Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Gly Gly Ile Xaa Val Ile Gly

50 55 60

Leu Ala Xaa Arg Tyr Leu Glu Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Glu Xaa Ala

65 70 75 80

Lys Leu Phe Glu Gly Phe Ile Lys Pro Asp Ala Ala Glu Leu Leu Lys

85 90 95

Glu Leu His Glu Ala Gly Leu Arg Val Val Val Leu Thr Gly Asp Pro

100 105 110

Arg Xaa Ile Ala Lys Pro Val Ala Lys Glu Leu Gly Ile Asp Xaa Xaa

115 120 125

Asn Val Leu Ala Thr Glu Leu Xaa Asp Glu Xaa Xaa Xaa Xaa Val Xaa

130 135 140

Gly Arg Ile Thr Gly Xaa Leu Asp Lys Ala Arg Ala Val Glu Arg Leu

145 150 155 160

Val Val Leu Xaa Xaa Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Val Val Ala Ile

165 170 175

Gly Asp Ser Ala Asn Asp Leu Pro Ala Leu Lys

180 185

<210> 17

<211> 190

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> консервативная последовательность

<400> 17

Ile Lys Ala Val Val Phe Asp Lys Asp Gly Thr Leu Thr Asp Gly Glu

1 5 10 15

Pro Pro Ile Ala Glu Ala Ile Val Glu Ala Ala Ala Glu Leu Gly Leu

20 25 30

Pro Leu Leu Leu Pro Leu Glu Glu Val Glu Lys Leu Leu Gly Arg Gly

35 40 45

Val Glu Gly Ile Glu Arg Ile Leu Leu Glu Gly Gly Leu Thr Ala Glu

50 55 60

Leu Leu Leu Glu Leu Glu Gly Glu Leu Ala Ala Gly Lys Thr Ala Val

65 70 75 80

Leu Val Ala Leu Asp Gly Glu Val Leu Gly Leu Ile Ala Leu Ala Asp

85 90 95

Lys Leu Tyr Pro Gly Ala Arg Glu Ala Leu Lys Ala Leu Lys Glu Arg

100 105 110

Gly Ile Lys Val Ala Ile Leu Thr Asn Gly Asp Arg Ala Asn Ala Glu

115 120 125

Ala Val Leu Glu Ala Leu Gly Leu Ala Asp Leu Phe Asp Val Ile Val

130 135 140

Asp Ser Asp Asp Val Gly Pro Val Lys Pro Lys Pro Glu Ile Phe Leu

145 150 155 160

Lys Ala Leu Glu Arg Leu Gly Val Lys Pro Glu Glu Val Leu Met Val

165 170 175

Gly Asp Gly Val Asn Asp Ala Pro Ala Leu Ala Ala Ala Gly

180 185 190

<210> 18

<211> 15

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> консервативная последовательность

<400> 18

Gly Asp Leu Val Ile Cys Pro Glu Gly Thr Thr Cys Arg Glu Pro

1 5 10 15

<210> 19

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> консервативная последовательность

<220>

<221> X

<222> (2)..(2)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (4)..(4)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (5)..(5)

<223> Треонин (T) или Валин (V)

<220>

<221> X

<222> (6)..(6)

<223> Лейцин (L) или Валин (V)

<400> 19

Asp Xaa Asp Xaa Xaa Xaa

1 5

<210> 20

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> консервативная последовательность

<220>

<221> X

<222> (2)..(2)

<223> 17-20 аминокислот; где аминокислоты могут быть любыми аминокислотами

<220>

<221> X

<222> (3)..(3)

<223> Глицин (G) или Серин (S)

<220>

<221> X

<222> (4)..(4)

<223> Аспарагиновая кислота (D) или Серин (S)

<220>

<221> X

<222> (5)..(7)

<223> любая аминокислота

<220>

<221> X

<222> (8)..(8)

<223> Аспарагиновая кислота (D) или Аспарагин (N)

<400> 20

Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

1 5

<210> 21

<211> 356

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 21

Met Asp Trp Glu Ile Arg Gly Ser Ser Leu Gly Gln Lys Leu Leu Glu

1 5 10 15

Phe Asp Ser Glu Gln Glu Arg Gln Thr Arg Phe Arg Ala Tyr Asp Ser

20 25 30

Glu Glu Ala Ala Ala His Thr Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp

35 40 45

Gly Pro Asp Thr Ile Leu Asn Phe Pro Ala Glu Thr Tyr Thr Lys Glu

50 55 60

Leu Glu Glu Met Gln Arg Val Thr Lys Glu Glu Tyr Leu Ala Ser Leu

65 70 75 80

Arg Arg Gln Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly

85 90 95

Val Ala Arg His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg

100 105 110

Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Asn Thr Gln Glu

115 120 125

Glu Ala Ala Ala Ala Tyr Asp Met Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Ala

130 135 140

Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Ile Ser Asn Tyr Ile Asp Arg Leu Lys

145 150 155 160

Lys Lys Gly Val Phe Pro Phe Pro Val Asn Gln Ala Asn His Gln Glu

165 170 175

Gly Ile Leu Val Glu Ala Lys Gln Glu Val Glu Thr Arg Glu Ala Lys

180 185 190

Glu Glu Pro Arg Glu Glu Val Lys Gln Gln Tyr Val Glu Glu Pro Pro

195 200 205

Gln Glu Glu Glu Glu Lys Glu Glu Glu Lys Ala Glu Gln Gln Glu Ala

210 215 220

Glu Ile Val Gly Tyr Ser Glu Glu Ala Ala Val Val Asn Cys Cys Ile

225 230 235 240

Asp Ser Ser Thr Ile Met Glu Met Asp Arg Cys Gly Asp Asn Asn Glu

245 250 255

Leu Ala Trp Asn Phe Cys Met Met Asp Thr Gly Phe Ser Pro Phe Leu

260 265 270

Thr Asp Gln Asn Leu Ala Asn Glu Asn Pro Ile Glu Tyr Pro Glu Leu

275 280 285

Phe Asn Glu Leu Ala Phe Glu Asp Asn Ile Asp Phe Met Phe Asp Asp

290 295 300

Gly Lys His Glu Cys Leu Asn Leu Glu Asn Leu Asp Cys Cys Val Val

305 310 315 320

Gly Arg Glu Ser Pro Pro Ser Ser Ser Ser Pro Leu Ser Cys Leu Ser

325 330 335

Thr Asp Ser Ala Ser Ser Thr Thr Thr Thr Thr Thr Ser Val Ser Cys

340 345 350

Asn Tyr Leu Val

355

<210> 22

<211> 430

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 22

Met Lys Lys Arg Leu Thr Thr Ser Thr Cys Ser Ser Ser Pro Ser Ser

1 5 10 15

Ser Val Ser Ser Ser Thr Thr Thr Ser Ser Pro Ile Gln Ser Glu Ala

20 25 30

Pro Arg Pro Lys Arg Ala Lys Arg Ala Lys Lys Ser Ser Pro Ser Gly

35 40 45

Asp Lys Ser His Asn Pro Thr Ser Pro Ala Ser Thr Arg Arg Ser Ser

50 55 60

Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Phe Glu Ala

65 70 75 80

His Leu Trp Asp Lys Ser Ser Trp Asn Ser Ile Gln Asn Lys Lys Gly

85 90 95

Lys Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asp Ser Glu Glu Ala Ala Ala His

100 105 110

Thr Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro Asp Thr Ile Leu

115 120 125

Asn Phe Pro Ala Glu Thr Tyr Thr Lys Glu Leu Glu Glu Met Gln Arg

130 135 140

Val Thr Lys Glu Glu Tyr Leu Ala Ser Leu Arg Arg Gln Ser Ser Gly

145 150 155 160

Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His

165 170 175

Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr

180 185 190

Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Asn Thr Gln Glu Glu Ala Ala Ala Ala Tyr

195 200 205

Asp Met Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Ala Asn Ala Val Thr Asn Phe

210 215 220

Asp Ile Ser Asn Tyr Ile Asp Arg Leu Lys Lys Lys Gly Val Phe Pro

225 230 235 240

Phe Pro Val Asn Gln Ala Asn His Gln Glu Gly Ile Leu Val Glu Ala

245 250 255

Lys Gln Glu Val Glu Thr Arg Glu Ala Lys Glu Glu Pro Arg Glu Glu

260 265 270

Val Lys Gln Gln Tyr Val Glu Glu Pro Pro Gln Glu Glu Glu Glu Lys

275 280 285

Glu Glu Glu Lys Ala Glu Gln Gln Glu Ala Glu Ile Val Gly Tyr Ser

290 295 300

Glu Glu Ala Ala Val Val Asn Cys Cys Ile Asp Ser Ser Thr Ile Met

305 310 315 320

Glu Met Asp Arg Cys Gly Asp Asn Asn Glu Leu Ala Trp Asn Phe Cys

325 330 335

Met Met Asp Thr Gly Phe Ser Pro Phe Leu Thr Asp Gln Asn Leu Ala

340 345 350

Asn Glu Asn Pro Ile Glu Tyr Pro Glu Leu Phe Asn Glu Leu Ala Phe

355 360 365

Glu Asp Asn Ile Asp Phe Met Phe Asp Asp Gly Lys His Glu Cys Leu

370 375 380

Asn Leu Glu Asn Leu Asp Cys Cys Val Val Gly Arg Glu Ser Pro Pro

385 390 395 400

Ser Ser Ser Ser Pro Leu Ser Cys Leu Ser Thr Asp Ser Ala Ser Ser

405 410 415

Thr Thr Thr Thr Thr Thr Ser Val Ser Cys Asn Tyr Leu Val

420 425 430

<210> 23

<211> 430

<212> Белок

<213> Arabidopsis lyrata

<400> 23

Met Lys Arg Arg Leu Thr Thr Ser Thr Ser Ser Ser Ser Pro Ser Ser

1 5 10 15

Ser Val Ser Ser Ser Thr Thr Thr Ser Ser Pro Ile Gln Ser Glu Ala

20 25 30

Pro Arg Pro Lys Arg Ala Lys Arg Ala Lys Lys Ser Ser Pro Ser Gly

35 40 45

Asp Lys Ser His Asn Pro Thr Ser Pro Ala Ser Thr Arg Arg Ser Ser

50 55 60

Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Phe Glu Ala

65 70 75 80

His Leu Trp Asp Lys Ser Ser Trp Asn Ser Ile Gln Asn Lys Lys Gly

85 90 95

Lys Gln Gly Ala Tyr Asp Ser Glu Glu Ala Ala Ala His Thr Tyr Asp

100 105 110

Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro Asp Thr Ile Leu Asn Phe Pro

115 120 125

Ala Glu Thr Tyr Thr Lys Glu Leu Glu Glu Met Gln Arg Val Thr Lys

130 135 140

Glu Glu Tyr Leu Ala Ser Leu Arg Arg Gln Ser Ser Gly Phe Ser Arg

145 150 155 160

Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn Gly Arg

165 170 175

Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu

180 185 190

Gly Thr Tyr Asn Thr Gln Glu Glu Ala Ala Ala Ala Tyr Asp Met Ala

195 200 205

Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Ala Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Ile Ser

210 215 220

Asn Tyr Ile Asp Arg Leu Lys Lys Lys Gly Val Phe Pro Phe Pro Val

225 230 235 240

Asn Gln Pro Asn His Gln Glu Ala Ile Leu Val Glu Ala Lys Gln Glu

245 250 255

Ile Glu Thr Arg Glu Ala Lys Glu Glu Pro Arg Glu Glu Val Lys Gln

260 265 270

Gln Tyr Val Glu Glu Pro Pro Gln Glu Glu Lys Glu Glu Glu Lys Ala

275 280 285

Glu Gln Gln Glu Ala Glu Phe Val Gly Tyr Lys Asp Glu Gly Ala Val

290 295 300

Val Asn Cys Cys Ile Asp Ser Ser Ala Ile Met Glu Met Asn Arg Cys

305 310 315 320

Gly Asp Asn Asn Glu Leu Ala Trp Asn Phe Cys Met Met Asp Ser Gly

325 330 335

Phe Ala Pro Phe Leu Thr Asp Gln Asn Leu Ser Asn Glu Asn Pro Ile

340 345 350

Glu Tyr Pro Glu Leu Phe Asn Glu Leu Ala Phe Glu Asp Asn Ile Asp

355 360 365

Phe Met Phe Asp Glu Ala Lys Asn Asp Cys Leu Ser Leu Glu Asn Leu

370 375 380

Asp Cys Cys Val Val Gly Arg Glu Ser Pro Thr Ser Ser Ser Ser Pro

385 390 395 400

Leu Ser Cys Phe Ser Thr Asp Ser Ala Ser Ser Thr Thr Thr Thr Thr

405 410 415

Ser Val Ser Cys Asn Tyr Leu Gly Leu Phe Val Gly Ser Glu

420 425 430

<210> 24

<211> 413

<212> Белок

<213> Brassica napus

<400> 24

Met Lys Arg Pro Leu Thr Thr Ser Pro Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ser

1 5 10 15

Ser Ser Ala Cys Ile Leu Pro Thr Gln Ser Glu Thr Pro Arg Pro Lys

20 25 30

Arg Ala Lys Arg Ala Lys Lys Ser Ser Leu Arg Ser Asp Val Lys Pro

35 40 45

Gln Asn Pro Thr Ser Pro Ala Ser Thr Arg Arg Ser Ser Ile Tyr Arg

50 55 60

Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Tyr Glu Ala His Leu Trp

65 70 75 80

Asp Lys Ser Ser Trp Asn Ser Ile Gln Asn Lys Lys Gly Lys Gln Val

85 90 95

Tyr Leu Gly Ala Tyr Asp Ser Glu Glu Ala Ala Ala His Thr Tyr Asp

100 105 110

Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro Asn Thr Ile Leu Asn Phe Pro

115 120 125

Val Glu Thr Tyr Thr Lys Glu Leu Glu Glu Met Gln Arg Cys Thr Lys

130 135 140

Glu Glu Tyr Leu Ala Ser Leu Arg Arg Gln Ser Ser Gly Phe Ser Arg

145 150 155 160

Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn Gly Arg

165 170 175

Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu

180 185 190

Gly Thr Tyr Asn Thr Gln Glu Glu Ala Ala Ala Ala Tyr Asp Met Ala

195 200 205

Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Ala Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Ile Gly

210 215 220

Asn Tyr Ile Asp Arg Leu Lys Lys Lys Gly Val Phe Pro Phe Pro Val

225 230 235 240

Ser Gln Ala Asn His Gln Glu Ala Val Leu Ala Glu Thr Lys Gln Glu

245 250 255

Val Glu Ala Lys Glu Glu Pro Thr Glu Glu Val Lys Gln Cys Val Glu

260 265 270

Lys Glu Glu Ala Lys Glu Glu Lys Thr Glu Lys Lys Gln Gln Gln Glu

275 280 285

Val Glu Glu Ala Val Ile Thr Cys Cys Ile Asp Ser Ser Glu Ser Asn

290 295 300

Glu Leu Ala Trp Asp Phe Cys Met Met Asp Ser Gly Phe Ala Pro Phe

305 310 315 320

Leu Thr Asp Ser Asn Leu Ser Ser Glu Asn Pro Ile Glu Tyr Pro Glu

325 330 335

Leu Phe Asn Glu Met Gly Phe Glu Asp Asn Ile Asp Phe Met Phe Glu

340 345 350

Glu Gly Lys Gln Asp Cys Leu Ser Leu Glu Asn Leu Asp Cys Cys Asp

355 360 365

Gly Val Val Val Val Gly Arg Glu Ser Pro Thr Ser Leu Ser Ser Ser

370 375 380

Pro Leu Ser Cys Leu Ser Thr Asp Ser Ala Ser Ser Thr Thr Thr Thr

385 390 395 400

Ala Thr Thr Val Thr Ser Val Ser Trp Asn Tyr Ser Val

405 410

<210> 25

<211> 415

<212> Белок

<213> Brassica napus

<400> 25

Met Lys Arg Pro Leu Thr Thr Ser Pro Ser Thr Ser Ser Ser Thr Ser

1 5 10 15

Ser Ser Ala Cys Ile Leu Pro Thr Gln Pro Glu Thr Pro Arg Pro Lys

20 25 30

Arg Ala Lys Arg Ala Lys Lys Ser Ser Ile Pro Thr Asp Val Lys Pro

35 40 45

Gln Asn Pro Thr Ser Pro Ala Ser Thr Arg Arg Ser Ser Ile Tyr Arg

50 55 60

Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Tyr Glu Ala His Leu Trp

65 70 75 80

Asp Lys Ser Ser Trp Asn Ser Ile Gln Asn Lys Lys Gly Lys Gln Val

85 90 95

Tyr Leu Gly Ala Tyr Asp Ser Glu Glu Ala Ala Ala His Thr Tyr Asp

100 105 110

Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro Asp Thr Ile Leu Asn Phe Pro

115 120 125

Ala Glu Thr Tyr Thr Lys Glu Leu Glu Glu Met Gln Arg Cys Thr Lys

130 135 140

Glu Glu Tyr Leu Ala Ser Leu Arg Arg Gln Ser Ser Gly Phe Ser Arg

145 150 155 160

Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn Gly Arg

165 170 175

Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu

180 185 190

Gly Thr Tyr Asn Thr Gln Glu Glu Ala Ala Ala Ala Tyr Asp Met Ala

195 200 205

Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Ala Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Ile Ser

210 215 220

Asn Tyr Ile Asp Arg Leu Lys Lys Lys Gly Val Phe Pro Phe Pro Val

225 230 235 240

Ser Gln Ala Asn His Gln Glu Ala Val Leu Ala Glu Ala Lys Gln Glu

245 250 255

Val Glu Ala Lys Glu Glu Pro Thr Glu Glu Val Lys Gln Cys Val Glu

260 265 270

Lys Glu Glu Pro Gln Glu Ala Lys Glu Glu Lys Thr Glu Lys Lys Gln

275 280 285

Gln Gln Gln Glu Val Glu Glu Ala Val Val Thr Cys Cys Ile Asp Ser

290 295 300

Ser Glu Ser Asn Glu Leu Ala Trp Asp Phe Cys Met Met Asp Ser Gly

305 310 315 320

Phe Ala Pro Phe Leu Thr Asp Ser Asn Leu Ser Ser Glu Asn Pro Ile

325 330 335

Glu Tyr Pro Glu Leu Phe Asn Glu Met Gly Phe Glu Asp Asn Ile Asp

340 345 350

Phe Met Phe Glu Glu Gly Lys Gln Asp Cys Leu Ser Leu Glu Asn Leu

355 360 365

Asp Cys Cys Asp Gly Val Val Val Val Gly Arg Glu Ser Pro Thr Ser

370 375 380

Leu Ser Ser Ser Pro Leu Ser Cys Leu Ser Thr Asp Ser Ala Ser Ser

385 390 395 400

Thr Thr Thr Thr Thr Ile Thr Ser Val Ser Cys Asn Tyr Ser Val

405 410 415

<210> 26

<211> 285

<212> Белок

<213> Glycine max

<400> 26

Met Lys Arg Ser Pro Ala Ser Ser Cys Ser Ser Ser Thr Ser Ser Val

1 5 10 15

Gly Phe Glu Val His His Pro Ile Glu Lys Arg Arg Pro Lys His Pro

20 25 30

Arg Arg Asn Asn Leu Lys Ser Gln Lys Cys Lys Gln Asn Gln Thr Thr

35 40 45

Thr Gly Gly Arg Arg Ser Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg

50 55 60

Trp Thr Gly Arg Phe Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Ser Ser Trp Asn

65 70 75 80

Asn Ile Gln Ser Lys Lys Gly Lys Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asp

85 90 95

Thr Glu Glu Ser Ala Ala Arg Thr Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr

100 105 110

Trp Gly Lys Asp Ala Thr Leu Asn Phe Pro Ile Glu Thr Tyr Thr Lys

115 120 125

Asp Leu Glu Glu Met Asp Lys Val Ser Arg Glu Glu Tyr Leu Ala Ser

130 135 140

Leu Arg Arg Gln Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Ile Ser Lys Tyr Arg

145 150 155 160

Gly Val Ala Arg His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly

165 170 175

Arg Val Cys Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Lys Thr Gln

180 185 190

Glu Glu Ala Ala Val Ala Tyr Asp Met Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly

195 200 205

Val Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Ile Ser Asn Tyr Met Asp Lys Ile

210 215 220

Lys Lys Lys Asn Asp Gln Thr Leu Gln Gln Gln Gln Thr Glu Val Gln

225 230 235 240

Thr Glu Thr Val Pro Asn Ser Ser Asp Ser Glu Glu Ala Glu Val Glu

245 250 255

Gln Gln His Thr Thr Thr Ile Thr Thr Pro Pro Pro Ser Glu Asn Leu

260 265 270

His Met Leu Pro Gln Glu His Gln Val Gly Gly Trp Val

275 280 285

<210> 27

<211> 417

<212> Белок

<213> Jatropha curcas

<400> 27

Met Lys Arg Ser Ser Ala Ser Ser Cys Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser

1 5 10 15

Ser Ser Pro Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ala Cys Ser Ala Ser Ser Ser

20 25 30

Cys Leu Asp Ser Val Ser Pro Pro Asn His His Gln Leu Arg Ser Glu

35 40 45

Lys Ser Lys Ser Lys Arg Ile Arg Lys Ile Gln Thr Lys Gln Asp Lys

50 55 60

Cys Gln Thr Thr Ala Thr Thr Thr Ser Pro Ser Gly Gly Gly Arg Arg

65 70 75 80

Ser Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Phe

85 90 95

Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Ser Ser Trp Asn Asn Ile Gln Asn Lys

100 105 110

Lys Gly Arg Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asp Asn Glu Glu Ala Ala

115 120 125

Ala His Thr Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Gln Asp Thr

130 135 140

Thr Leu Asn Phe Pro Ile Glu Thr Tyr Ser Lys Glu Leu Glu Glu Met

145 150 155 160

Gln Lys Met Ser Lys Glu Glu Tyr Leu Ala Ser Leu Arg Arg Arg Ser

165 170 175

Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His

180 185 190

His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Gly Asn

195 200 205

Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Asn Thr Gln Glu Glu Ala Ala Ala

210 215 220

Ala Tyr Asp Met Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Ala Asn Ala Val Thr

225 230 235 240

Asn Phe Asp Val Ser His Tyr Ile Asp Arg Leu Lys Lys Lys Gly Ile

245 250 255

Pro Leu Asp Lys Ile Leu Pro Glu Thr Leu Ser Lys Gly Ser Lys Glu

260 265 270

Ser Glu Glu Ile Glu Arg Thr Ser Pro Leu Pro Leu Pro Ser Pro Pro

275 280 285

Ser Pro Ser Ile Thr Pro Leu His Glu Glu Ile Val Ser Pro Gln Leu

290 295 300

Leu Glu Thr Glu Cys Pro Gln His Pro Pro Cys Met Asp Thr Cys Thr

305 310 315 320

Met Ile Val Met Asp Pro Ile Glu Glu His Glu Leu Thr Trp Ser Phe

325 330 335

Cys Leu Asp Ser Gly Leu Val Pro Leu Pro Val Pro Asp Leu Pro Leu

340 345 350

Ala Asn Gly Cys Glu Leu Pro Asp Leu Leu Asp Asp Thr Gly Phe Glu

355 360 365

Asp Asn Ile Asp Leu Ile Phe Asp Ala Cys Cys Phe Gly Asn Asp Ala

370 375 380

Asn Pro Ala Asp Glu Asn Gly Lys Glu Arg Leu Ser Ser Ala Ser Thr

385 390 395 400

Ser Pro Ser Cys Ser Thr Thr Leu Thr Ser Val Ser Cys Asn Tyr Ser

405 410 415

Val

<210> 28

<211> 443

<212> Белок

<213> Ricinus communis

<400> 28

Met Lys Arg Ser Pro Thr Ser Pro Cys Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser

1 5 10 15

Tyr Ser Ser Ser Ser Ala Ser Ser Ser Cys Val Gly Pro Asp Asp Thr

20 25 30

Pro Val Ala Pro Gly Ser His His His His Asp His His Gln Leu Arg

35 40 45

Ser Gln Lys Ser Ser Lys Arg Ile Arg Lys Val Lys Lys Lys Gln Gln

50 55 60

Asn His Asn Ile Asp Gln Asn Asn Thr Asn Thr Thr Ile Thr Ala Pro

65 70 75 80

Thr Ser Ala Arg Arg Ser Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg

85 90 95

Trp Thr Gly Arg Phe Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Ser Ser Trp Asn

100 105 110

Asn Ile Gln Asn Lys Lys Gly Arg Gln Gly Ala Tyr Asp Asn Glu Glu

115 120 125

Ala Ala Ala His Thr Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro

130 135 140

Glu Thr Thr Leu Asn Phe Pro Ile Glu Thr Tyr Pro Lys Glu Leu Glu

145 150 155 160

Glu Met Gln Lys Met Ser Lys Glu Glu Tyr Leu Ala Ser Leu Arg Arg

165 170 175

Gln Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala

180 185 190

Arg His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe

195 200 205

Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Asn Thr Gln Glu Glu Ala

210 215 220

Ala Ala Ala Tyr Asp Met Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Ala Asn Ala

225 230 235 240

Val Thr Asn Phe Asp Ile Ser Asn Tyr Ile Asp Arg Leu Lys Lys Lys

245 250 255

Gly Ile Leu Leu Asp Gln Ile Leu Pro Asp Gln Pro Leu Arg Lys Cys

260 265 270

Ser Ser Glu Ser Glu Glu Ala Glu Ala Glu Ala Glu Val Glu Arg Leu

275 280 285

Pro Ser Leu Pro Ser Ser Ile Leu Pro Gln Glu Gln Asp Thr Ile Ser

290 295 300

Pro Gln Leu Gln Cys Thr Gln Leu Leu Pro Ser Met Asp Ser Cys Thr

305 310 315 320

Met Ile Asn Met Asp Pro Ile Glu Asp Asn Glu Leu Thr Trp Ser Phe

325 330 335

Cys Leu Asp Ser Gly Leu Thr Leu Phe Ser Val Pro Glu Leu Pro Leu

340 345 350

Glu Asn Ala Cys Glu Leu Pro Asp Leu Phe Asp Asp Thr Gly Phe Glu

355 360 365

Asp Asn Ile Asp Leu Ile Phe Asp Gly Cys Cys Phe Gly Asn Asp Asp

370 375 380

Asp Gly Gly Gly Gly Ala Asn His Gln Glu Phe Met Val Glu Ser Arg

385 390 395 400

Gly Cys Arg Val Gly Glu Val Gly Ile Ser Gly Ser Met Glu Glu Glu

405 410 415

Asn Gly Lys Glu Met Cys Cys Ser Ser Ser Ser Pro Ser Cys Ser Thr

420 425 430

Thr Thr Ser Val Ser Cys Cys Asn Tyr Ser Val

435 440

<210> 29

<211> 402

<212> Белок

<213> Populus trichocarpa

<400> 29

Met Lys Arg Ser Ser Ser Cys Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser

1 5 10 15

Ser Cys Val Ala Ser Glu Ser Ile His Lys Pro Lys Ala Lys Arg Ile

20 25 30

Arg Lys Asn Gln Lys Ser Asn Gln Gly Lys Ser Gln Asn Ala Ala Ala

35 40 45

Ala Ala Ala Asn Asn Ser His Asn Ser Gly Lys Arg Ser Ser Ile Tyr

50 55 60

Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Phe Glu Ala His Leu

65 70 75 80

Trp Asp Lys Ser Ser Trp Asn Ser Ile Gln Asn Lys Lys Gly Lys Gln

85 90 95

Gly Ala Tyr Asp Asn Glu Glu Ala Ala Ala His Thr Tyr Asp Leu Ala

100 105 110

Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Ser Glu Thr Thr Leu Asn Phe Pro Ile Glu

115 120 125

Thr Tyr Thr Lys Glu Ile Glu Glu Met Gln Lys Val Thr Lys Glu Glu

130 135 140

Tyr Leu Ala Ser Leu Arg Arg Gln Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val

145 150 155 160

Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn Gly Arg Trp Glu

165 170 175

Ala Arg Ile Gly Arg Val Tyr Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr

180 185 190

Tyr Asn Thr Gln Glu Glu Ala Ala Ala Ala Tyr Asp Met Ala Ala Ile

195 200 205

Gln Tyr Arg Gly Ala Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Val Ser Asn Tyr

210 215 220

Ile Glu Arg Leu Arg Lys Lys Gly Ile Pro Ile Asp Arg Ile Leu Gln

225 230 235 240

Glu Gln Gln Leu Leu Asn Asn Ser Val Asp Ser Ser Val Glu Val Glu

245 250 255

Val Glu Gln Pro Thr Pro Pro Pro Gln Gln Gln Gln Glu Glu Gln Glu

260 265 270

Gln Lys Ile Val Ser Ser Ser Ser Gln Leu Gln Cys Ser Gln Leu Asn

275 280 285

Ser Ser Leu Asp Gly Thr Pro Pro Met Val Ile Met Asp Thr Ile Glu

290 295 300

Glu His Glu Leu Ala Trp Ser Phe Cys Met Asp Ser Gly Leu Ser Leu

305 310 315 320

Thr Met Pro Asp Leu Pro Leu Glu Asn Ser Cys Glu Leu Pro Asp Leu

325 330 335

Phe Asp His Thr Gly Phe Glu Asp Asn Ile Asp Leu Ile Phe Asp Ala

340 345 350

Cys Cys Tyr Gly Lys Glu Ala Asn Pro Ala Gly Tyr Thr Leu Glu Asp

355 360 365

Asn Ser Thr Gly Gly Val Glu Glu Asp Arg Leu Ser Ser Asp Ser Val

370 375 380

Ser Asn Ser Pro Thr Ser Ser Thr Thr Thr Ser Val Ser Cys Asn Tyr

385 390 395 400

Ser Val

<210> 30

<211> 409

<212> Белок

<213> Vitis vinifera

<400> 30

Met Val Lys Arg Ser Ser Pro Gly Ser Ser Ser Ser Pro Ser Ser Ser

1 5 10 15

Ser Thr Ser Ser Asp Ala Ala Ser Arg Pro Ala Pro Pro Ser Gly Gly

20 25 30

Lys Pro Lys Ser Arg Lys Lys Glu Ala Lys Lys Asn Ser Asn Gly Asn

35 40 45

Gly Ser Asn Ser Lys Asn Lys Arg Thr Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr

50 55 60

Lys His Arg Trp Thr Gly Arg Phe Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Ser

65 70 75 80

Ser Trp Asn Asp Ile Ser Asn Lys Arg Gly Arg Gln Gly Ala Tyr Tyr

85 90 95

Asn Glu Glu Ala Ala Ala Arg Thr Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr

100 105 110

Trp Gly Pro Thr Thr Pro Leu Asn Phe Pro Leu Glu Thr Tyr Gln Lys

115 120 125

Asp Ala Glu Glu Met Glu Lys Met Ser Lys Glu Glu Tyr Leu Ala Leu

130 135 140

Leu Arg Arg Gln Ser Asn Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys His His

145 150 155 160

His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Leu Gly Asn Lys

165 170 175

Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ser Thr Gln Glu Glu Ala Ala Ala Ala

180 185 190

Tyr Asp Met Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Leu Asn Ala Val Thr Asn

195 200 205

Phe Asp Ile Ser Asn Tyr Val Lys Leu Gly Arg Val Glu Ala Gln Val

210 215 220

Gln Glu Leu Ala Gln Gln Leu Gln Pro Asn Thr Pro Ile Gly Pro Gln

225 230 235 240

Asn Glu Leu Gln Lys Glu Glu Glu Glu Gln Leu Gln Glu Pro Val Leu

245 250 255

Ser Ser Ser Gln His Leu Pro Ser Met Asp Ser Ser Ala Met Glu Ile

260 265 270

Met Asp Pro Ala Asp Asp Pro Asp Leu Pro Trp Asn Phe Cys Ala Tyr

275 280 285

Ser Thr Leu Leu Val Pro Asp Val Pro Leu Gly Lys Gly Gly Glu Leu

290 295 300

Ser Asp Leu Phe Tyr Glu Lys Gly Phe Glu Asp Asn Ile Asp Tyr Met

305 310 315 320

Phe Glu Gly Ala Ala Gly Asn Glu Glu Glu Ser Asn Ser Ala Glu Asn

325 330 335

Gly Val Lys Glu Asn Gly Phe Met His Glu Leu Glu Val Asp Gly Lys

340 345 350

Leu Gln Asn Val Val Gly Phe Phe Phe Leu Ser Phe Phe Phe Leu Pro

355 360 365

Lys Arg Ala Gly Ile Arg Lys Arg Gly Val Asp Ser Cys Met Gln Leu

370 375 380

Phe Leu Tyr Phe Val Phe Leu Phe Tyr Pro Phe Leu Pro Glu Val Ser

385 390 395 400

Lys Phe Leu Phe His Leu Ser Leu Asp

405

<210> 31

<211> 420

<212> Белок

<213> Brachypodium distachyon

<400> 31

Met Lys Arg Ser Pro Pro Gln Pro Ser Pro Ser Pro Ser Ser Ser Pro

1 5 10 15

Ala Ser Ser Ser Ser Ser Pro Ser Ser Ser Asp Ser Ser Ser Ser Ile

20 25 30

Ala Ile Pro Arg Lys Arg Ala Arg Thr Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly

35 40 45

Gly Lys Ala Arg Ala Ala Ala Ala Lys Arg Pro Lys Lys Asp Gly Lys

50 55 60

Asp Ser Gly Ser Ser Ser Asn Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Lys Arg

65 70 75 80

Ser Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Phe

85 90 95

Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Asn Cys Phe Thr Ser Leu Gln Asn Lys

100 105 110

Lys Lys Gly Arg Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asp Thr Glu Glu Ala

115 120 125

Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro Glu

130 135 140

Thr Thr Leu Asn Phe Ser Ala Asp Asp Tyr Gly Lys Glu Arg Ser Glu

145 150 155 160

Met Glu Ala Val Ser Arg Glu Glu Tyr Leu Ala Ala Leu Arg Arg Arg

165 170 175

Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg

180 185 190

His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Leu Gly

195 200 205

Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Phe Asp Thr Gln Glu Glu Ala Ala

210 215 220

Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Ile Gln Tyr Arg Gly Ala Asn Ala Val

225 230 235 240

Thr Asn Phe Asp Ile Ser Arg Tyr Leu Asp Gln Pro Gln Leu Leu Glu

245 250 255

Gln Leu Gln Gln Gln Gln Gly Pro Gln Val Val Ala Ala Leu Gln Glu

260 265 270

Glu Ala Gln Arg Asp His Gln Ser Asp Asn Ala Val Gln Glu Leu Asn

275 280 285

Ser Gly Glu Ala Gln Thr Pro Gly Gly Ile Asp Glu Pro Ile Ala Ile

290 295 300

Gly Asp Ser Thr Glu Asp Ile Asn Thr Ser Leu Thr Val Asp Asp Ile

305 310 315 320

Ile Glu Glu Ser Leu Trp Ser Pro Tyr Glu Phe Asp Ile Met Ala Gly

325 330 335

Val Asn Val Ser Asn Ser Met Asn Leu Ser Glu Leu Phe Ser Asp Val

340 345 350

Ala Phe Glu Gly Asn Ile Gly Cys Leu Phe Glu Glu Cys Ser Gly Ile

355 360 365

Asp Asp Cys Ser Ser Arg His Gly Ala Gly Leu Ala Ala Phe Gly Leu

370 375 380

Phe Thr Glu Gly Asp Asp Lys Leu Lys Asp Val Ser Glu Met Glu Met

385 390 395 400

Glu Val Asn Pro Gln Ala Asn Asp Val Ser Cys Pro Pro Lys Met Ile

405 410 415

Thr Val Cys Asn

420

<210> 32

<211> 423

<212> Белок

<213> Hordeum vulgare

<400> 32

Met Lys Arg Ser Pro Pro Pro Gln Pro Ser Pro Ser Ser Ser Pro Ala

1 5 10 15

Cys Ser Pro Ser Pro Ser Ser Pro Ser Ser Ser Asp Ser Ser Ser Ile

20 25 30

Ala Ile Pro Arg Lys Arg Ala Arg Thr Gln Lys Ala Gly Ser Ala Lys

35 40 45

Ala Lys Ala Ala Pro Lys Arg Ala Lys Lys Asp Ser Gly Arg Ser Thr

50 55 60

Lys Asp Ser Asp Ala Ser Ala Asn Gly Ala Ala Ala Ser Gly Lys Arg

65 70 75 80

Ser Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Phe

85 90 95

Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Asn Cys Phe Thr Ser Ile Gln Asn Lys

100 105 110

Lys Lys Gly Arg Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asp Thr Glu Glu Ala

115 120 125

Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro Glu

130 135 140

Thr Thr Leu Asn Phe Thr Val Asp Glu Tyr Ala Lys Glu Arg Ser Glu

145 150 155 160

Met Glu Ala Val Ser Arg Glu Glu Tyr Leu Ala Ala Leu Arg Arg Arg

165 170 175

Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg

180 185 190

His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Leu Gly

195 200 205

Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Phe Asp Thr Gln Glu Glu Ala Ala

210 215 220

Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Ala Asn Ala Val

225 230 235 240

Thr Asn Phe Asp Ile Ser Arg Tyr Leu Asp Gln Pro Gln Leu Leu Ala

245 250 255

Gln Leu Glu Gln Gly Pro Gln Val Val Pro Ala Leu Gln Glu Glu Leu

260 265 270

Gln His Asp His Gln Ser Asp Asn Ala Val Gln Glu Leu Asn Ser Gly

275 280 285

Glu Ala Gln Lys Pro Gly Ser Val Ser Glu Pro Ile Ala Val Asp Asp

290 295 300

Thr Asp Asn Thr Gly Asp Ile Gly Ala Pro Leu Val Phe Asp Ser Gly

305 310 315 320

Val Glu Glu Asn Leu Trp Ser Pro Cys Met Asp Tyr Asp Val Asp Pro

325 330 335

Ile Phe Gly Pro Asn Ile Ser Ser Ser Met Asn Leu Ser Glu Trp Phe

340 345 350

Asn Asp Pro Ala Phe Glu Ser Asn Ile Gly Tyr Met Phe Glu Gly Cys

355 360 365

Ser Asp Val Asp Asp Cys Ser Thr Arg His Gly Ala Gly Leu Ser Ala

370 375 380

Leu Gly Phe Leu Lys Glu Gly Asp Asp Lys Leu Lys Asp Gly Ser Asp

385 390 395 400

Met Glu Ala Glu Ile Thr Pro Gln Ala Asn Asp Val Ser Cys Pro Pro

405 410 415

Lys Met Ile Thr Val Cys Asn

420

<210> 33

<211> 443

<212> Белок

<213> Oryza sativa

<400> 33

Met Ala Lys Arg Ser Ser Pro Asp Pro Ala Ser Ser Ser Pro Ser Ala

1 5 10 15

Ser Ser Ser Pro Ser Ser Pro Ser Ser Ser Ser Ser Glu Asp Ser Ser

20 25 30

Ser Pro Met Ser Met Pro Cys Lys Arg Arg Ala Arg Pro Arg Thr Asp

35 40 45

Lys Ser Thr Gly Lys Ala Lys Arg Pro Lys Lys Glu Ser Lys Glu Val

50 55 60

Val Asp Pro Ser Ser Asn Gly Gly Gly Gly Gly Lys Arg Ser Ser Ile

65 70 75 80

Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Phe Glu Ala His

85 90 95

Leu Trp Asp Lys Asn Cys Ser Thr Ser Leu Gln Asn Lys Lys Lys Gly

100 105 110

Arg Gln Gly Ala Tyr Asp Ser Glu Glu Ala Ala Ala Arg Ala Tyr Asp

115 120 125

Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro Glu Thr Val Leu Asn Phe Pro

130 135 140

Leu Glu Glu Tyr Glu Lys Glu Arg Ser Glu Met Glu Gly Val Ser Arg

145 150 155 160

Glu Glu Tyr Leu Ala Ser Leu Arg Arg Arg Ser Ser Gly Phe Ser Arg

165 170 175

Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn Gly Arg

180 185 190

Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Leu Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu

195 200 205

Gly Thr Phe Asp Thr Gln Glu Glu Ala Ala Lys Ala Tyr Asp Leu Ala

210 215 220

Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Ala Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Ile Ser

225 230 235 240

Cys Tyr Leu Asp Gln Pro Gln Leu Leu Ala Gln Leu Gln Gln Glu Pro

245 250 255

Gln Leu Leu Ala Gln Leu Gln Gln Glu Pro Gln Val Val Pro Ala Leu

260 265 270

His Glu Glu Pro Gln Asp Asp Asp Arg Ser Glu Asn Ala Val Gln Glu

275 280 285

Leu Ser Ser Ser Glu Ala Asn Thr Ser Ser Asp Asn Asn Glu Pro Leu

290 295 300

Ala Ala Asp Asp Ser Ala Glu Cys Met Asn Glu Pro Leu Pro Ile Val

305 310 315 320

Asp Gly Ile Glu Glu Ser Leu Trp Ser Pro Cys Leu Asp Tyr Glu Leu

325 330 335

Asp Thr Met Pro Gly Ala Tyr Phe Ser Asn Ser Met Asn Phe Ser Glu

340 345 350

Trp Phe Asn Asp Glu Ala Phe Glu Gly Gly Met Glu Tyr Leu Phe Glu

355 360 365

Gly Cys Ser Ser Ile Thr Glu Gly Gly Asn Ser Met Asp Asn Ser Gly

370 375 380

Val Thr Glu Tyr Asn Leu Phe Glu Glu Cys Asn Met Leu Glu Lys Asp

385 390 395 400

Ile Ser Asp Phe Leu Asp Lys Asp Ile Ser Asp Phe Leu Asp Lys Asp

405 410 415

Ile Ser Ile Ser Asp Gly Glu Arg Ile Ser Pro Gln Ala Asn Asn Ile

420 425 430

Ser Cys Pro Gln Lys Met Ile Ser Val Cys Asn

435 440

<210> 34

<211> 420

<212> Белок

<213> Sorghum bicolor

<400> 34

Met Asp Met Glu Arg Ser Gln Gln Gln Lys Ser Pro Thr Glu Ser Pro

1 5 10 15

Pro Pro Pro Ser Pro Ser Ser Ser Ser Ser Ser Val Ser Ala Asp Thr

20 25 30

Val Leu Pro Pro Pro Gly Lys Arg Arg Arg Ala Ala Thr Thr Ala Lys

35 40 45

Ala Lys Ala Gly Ala Lys Pro Lys Arg Ala Arg Lys Asp Ala Ala Ala

50 55 60

Ala Ala Asp Pro Pro Pro Pro Pro Ala Ala Ala Ala Ala Gly Lys Arg

65 70 75 80

Ser Ser Val Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Phe

85 90 95

Glu Ala His Leu Trp Asp Lys His Cys Leu Ala Ala Leu His Asn Lys

100 105 110

Lys Lys Gly Arg Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asp Ser Glu Glu Ala

115 120 125

Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro Glu

130 135 140

Thr Leu Leu Asn Phe Pro Val Glu Asp Tyr Ser Ser Glu Met Pro Glu

145 150 155 160

Met Glu Gly Val Ser Arg Glu Glu Tyr Leu Ala Ser Leu Arg Arg Arg

165 170 175

Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg

180 185 190

His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Gly

195 200 205

Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Phe Asp Thr Gln Glu Glu Ala Ala

210 215 220

Lys Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Val Asn Ala Val

225 230 235 240

Thr Asn Phe Asp Ile Ser Cys Tyr Leu Asp His Pro Leu Phe Leu Ala

245 250 255

Gln Leu Gln Gln Glu Pro Gln Val Val Pro Ala Leu Asn Gln Glu Ala

260 265 270

Gln Pro Asp Gln Ser Glu Thr Glu Thr Ile Ala Gln Glu Ser Val Ser

275 280 285

Ser Glu Ala Lys Thr Pro Asp Asp Asn Ala Glu Pro Asp Asp Asn Ala

290 295 300

Glu Pro Asp Asp Ile Ala Glu Pro Leu Ile Thr Val Asp Asp Ser Ile

305 310 315 320

Glu Glu Ser Leu Trp Ser Pro Cys Met Asp Tyr Glu Leu Asp Thr Met

325 330 335

Ser Arg Ser Asn Phe Gly Ser Ser Ile Asn Leu Ser Glu Trp Phe Asn

340 345 350

Asp Ala Asp Phe Asp Ser Asn Ile Gly Cys Leu Phe Asp Gly Cys Ser

355 360 365

Ala Val Asp Glu Gly Gly Lys Asp Gly Val Gly Leu Ala Asp Phe Ser

370 375 380

Leu Leu Glu Asp Phe Ser Leu Phe Glu Ala Gly Asp Gly Gln Leu Lys

385 390 395 400

Asp Val Leu Ser Asp Met Glu Glu Gly Ile Gln Pro Pro Thr Met Ile

405 410 415

Ser Val Cys Asn

420

<210> 35

<211> 395

<212> Белок

<213> Zea mays

<400> 35

Met Glu Arg Ser Gln Arg Gln Ser Pro Pro Pro Pro Ser Pro Ser Ser

1 5 10 15

Ser Ser Ser Ser Val Ser Ala Asp Thr Val Leu Val Pro Pro Gly Lys

20 25 30

Arg Arg Arg Ala Ala Thr Ala Lys Ala Gly Ala Glu Pro Asn Lys Arg

35 40 45

Ile Arg Lys Asp Pro Ala Ala Ala Ala Ala Gly Lys Arg Ser Ser Val

50 55 60

Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Phe Glu Ala His

65 70 75 80

Leu Trp Asp Lys His Cys Leu Ala Ala Leu His Asn Lys Lys Lys Gly

85 90 95

Arg Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asp Ser Glu Glu Ala Ala Ala Arg

100 105 110

Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro Glu Thr Leu Leu

115 120 125

Asn Phe Pro Val Glu Asp Tyr Ser Ser Glu Met Pro Glu Met Glu Ala

130 135 140

Val Ser Arg Glu Glu Tyr Leu Ala Ser Leu Arg Arg Arg Ser Ser Gly

145 150 155 160

Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His

165 170 175

Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr

180 185 190

Leu Tyr Leu Gly Thr Phe Asp Thr Gln Glu Glu Ala Ala Lys Ala Tyr

195 200 205

Asp Leu Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Val Asn Ala Val Thr Asn Phe

210 215 220

Asp Ile Ser Cys Tyr Leu Asp His Pro Leu Phe Leu Ala Gln Leu Gln

225 230 235 240

Gln Glu Pro Gln Val Val Pro Ala Leu Asn Gln Glu Pro Gln Pro Asp

245 250 255

Gln Ser Glu Thr Gly Thr Thr Glu Gln Glu Pro Glu Ser Ser Glu Ala

260 265 270

Lys Thr Pro Asp Gly Ser Ala Glu Pro Asp Glu Asn Ala Val Pro Asp

275 280 285

Asp Thr Ala Glu Pro Leu Ser Thr Val Asp Asp Ser Ile Glu Glu Gly

290 295 300

Leu Trp Ser Pro Cys Met Asp Tyr Glu Leu Asp Thr Met Ser Arg Pro

305 310 315 320

Asn Phe Gly Ser Ser Ile Asn Leu Ser Glu Trp Phe Ala Asp Ala Asp

325 330 335

Phe Asp Cys Asn Ile Gly Cys Leu Phe Asp Gly Cys Ser Ala Ala Asp

340 345 350

Glu Gly Ser Lys Asp Gly Val Gly Leu Ala Asp Phe Ser Leu Phe Glu

355 360 365

Ala Gly Asp Val Gln Leu Lys Asp Val Leu Ser Asp Met Glu Glu Gly

370 375 380

Ile Gln Pro Pro Ala Met Ile Ser Val Cys Asn

385 390 395

<210> 36

<211> 413

<212> Белок

<213> Brachypodium distachyon

<400> 36

Met Glu Ala Tyr Cys Ser Thr Leu Val Lys Asp Glu Leu Ile Asn Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Gly Ser Ala Gly Gly Met Arg Tyr Cys Glu Ala Ala Pro

20 25 30

Arg Val Ser Pro Pro Val Ala Ile Lys Ser Val Lys Arg Arg Lys Arg

35 40 45

Glu Pro Pro Ala Val Ser Gly Met Thr Thr Val Ser Gly Gly Gly Lys

50 55 60

Asp Gly Asp Lys Ser Ala Gly Asn Ala Ala Ala Lys Arg Ser Ser Arg

65 70 75 80

Phe Arg Gly Val Ser Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Phe Glu Ala His

85 90 95

Leu Trp Asp Lys Gly Thr Trp Asn Pro Thr Gln Lys Lys Lys Gly Lys

100 105 110

Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asn Glu Glu Glu Ala Ala Ala Arg Ala

115 120 125

Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro Thr Thr Tyr Thr Asn

130 135 140

Phe Pro Val Val Asp Tyr Glu Lys Glu Leu Lys Val Met Gln Gly Val

145 150 155 160

Ser Arg Glu Glu Tyr Leu Ala Ser Ile Arg Arg Lys Ser Asn Gly Phe

165 170 175

Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn

180 185 190

Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu

195 200 205

Tyr Leu Gly Thr Tyr Ser Thr Gln Glu Glu Ala Ala Arg Ala Tyr Asp

210 215 220

Ile Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Ile Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp

225 230 235 240

Leu Ser Ser Tyr Ile Arg Trp Leu Lys Pro Asn Ser Thr Ile Asn Thr

245 250 255

Asn Thr Pro Ala Ala Glu Leu Ala Ile Leu Gly Gly Gly Gly Thr Pro

260 265 270

Ala Ala Leu Ile Thr Pro Pro Pro Thr Met His Val Pro Arg Leu Leu

275 280 285

Pro Pro Leu Val Lys Gly Arg Gly Ser Ser Ile Ala Asp Asp Val Ser

290 295 300

Ala Gly Ser Cys Val Phe Gly Gly Pro Ser Pro Ser Pro Ser Pro Thr

305 310 315 320

Thr Thr Ala Leu Ser Leu Leu Leu Arg Ser Ser Val Phe Gln Glu Leu

325 330 335

Val Ala Gln Gln Gln Pro Pro Ser Thr Val Asp Asp Asp Asp Asp Ile

340 345 350

Gly Gly His Ala Ala Val Ser Asp Ala Ala Gln Arg Ala Ala Glu Glu

355 360 365

Asn Glu Glu Ser Phe Gly Glu Val Leu Tyr Gly Ala Gly Glu Gly Glu

370 375 380

Ala Ala Thr Ala Phe Ser Cys Ser Met Tyr Glu Leu Gly Leu Asp Asp

385 390 395 400

Asn Phe Ala Arg Ile Glu Glu Ser Leu Trp Gly Cys Leu

405 410

<210> 37

<211> 423

<212> Белок

<213> Brachypodium sylvaticum

<400> 37

Met Glu Ala Tyr Cys Ser Ser Leu Val Lys Asp Glu Leu Ile Asn Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Met Arg Tyr Cys Glu Ala Ala Pro Arg

20 25 30

Val Ser Pro Pro Val Ala Ile Lys Ser Val Lys Arg Arg Lys Arg Glu

35 40 45

Pro Pro Ala Val Ser Gly Met Thr Thr Val Ser Gly Gly Gly Gly Gly

50 55 60

Asn Gly Lys Asp Gly Asp Lys Ser Ala Gly Asn Ala Ala Ala Ala Lys

65 70 75 80

Arg Ser Ser Arg Phe Arg Gly Val Ser Arg His Arg Trp Thr Gly Arg

85 90 95

Phe Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Gly Thr Trp Asn Pro Thr Gln Lys

100 105 110

Lys Lys Gly Lys Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asn Glu Glu Glu Ala

115 120 125

Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro Thr

130 135 140

Thr Tyr Thr Asn Phe Pro Val Val Asp Tyr Glu Lys Glu Leu Lys Val

145 150 155 160

Met Gln Gly Val Ser Arg Glu Glu Tyr Leu Ala Ser Ile Arg Arg Lys

165 170 175

Ser Asn Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg

180 185 190

His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Gly

195 200 205

Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ser Thr Gln Glu Glu Ala Ala

210 215 220

Arg Ala Tyr Asp Ile Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Ile Asn Ala Val

225 230 235 240

Thr Asn Phe Asp Leu Ser Ser Tyr Ile Arg Trp Leu Lys Pro Asn Ser

245 250 255

Ala Ala Asn Thr Asn Thr Pro Pro Ala Ala Ala Ala Glu Leu Ala Ile

260 265 270

Leu Gly Gly Ala Pro Ala Ala Leu Ile Ser Pro Ala Pro Ala Pro Thr

275 280 285

Thr Met Arg Val Pro Arg Leu Leu Pro Pro Leu Val Arg Gly Arg Gly

290 295 300

Gly Ser Ile Pro Asp Asp Val Ser Ala Gly Gly Ser Cys Val Phe Gly

305 310 315 320

Ser Pro Ser Pro Ser Pro Ser Pro Thr Thr Thr Ser Ala Leu Ser Leu

325 330 335

Leu Leu Arg Ser Ser Val Phe Gln Glu Leu Val Ala Gln Gln Gln Pro

340 345 350

Pro Ser Ile Val Asp Asp Asp Asp Gly Val Gly Gly Gln Glu Ala Val

355 360 365

Ser Asp Ala Ala Glu Arg Ala Ala Glu Glu Asn Glu Glu Ser Phe Gly

370 375 380

Glu Val Leu Tyr Gly Ala Gly Glu Gly Glu Ala Ala Ala Ala Phe Ser

385 390 395 400

Cys Ser Met Tyr Glu Leu Gly Leu Asp Asp Ser Phe Ala Arg Ile Glu

405 410 415

Glu Ser Leu Trp Gly Cys Leu

420

<210> 38

<211> 399

<212> Белок

<213> Oryza sativa

<400> 38

Met Glu Thr Tyr Gly Leu Val Lys Asp Glu Leu Leu His Gly Ile Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gln Gly Arg Leu Tyr Cys Glu Val Lys Pro Thr Ala Ala Pro

20 25 30

Ala Val Ile Thr Ala Ala Gly Gly Gly Ala Lys Ser Val Lys Arg Arg

35 40 45

Lys Arg Glu Pro Ser Ala Ala Ala Met Ser Ala Val Thr Val Ala Gly

50 55 60

Asn Gly Lys Glu Ala Gly Gly Ser Asn Ala Ala Asn Lys Arg Ser Ser

65 70 75 80

Arg Phe Arg Gly Val Ser Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Phe Glu Ala

85 90 95

His Leu Trp Asp Lys Gly Thr Trp Asn Pro Thr Gln Lys Lys Lys Gly

100 105 110

Lys Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asn Glu Glu Asp Ala Ala Ala Arg

115 120 125

Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro Thr Thr Tyr Thr

130 135 140

Asn Phe Pro Val Ala Asp Tyr Glu Lys Glu Leu Lys Leu Met Gln Gly

145 150 155 160

Val Ser Lys Glu Glu Tyr Leu Ala Ser Ile Arg Arg Lys Ser Asn Gly

165 170 175

Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His

180 185 190

Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr

195 200 205

Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ser Thr Gln Glu Glu Ala Ala Arg Ala Tyr

210 215 220

Asp Ile Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Ile Asn Ala Val Thr Asn Phe

225 230 235 240

Asp Leu Ser Thr Tyr Ile Arg Trp Leu Lys Pro Pro Ser Ser Ser Ser

245 250 255

Ala Ala Gly Thr Pro His His His Gly Gly Gly Met Val Val Gly Ala

260 265 270

Asp Arg Val Leu Ala Pro Ala Gln Ser Tyr Pro Ile Ser Ala Ala Ala

275 280 285

Asp Asp Asp Val Ala Gly Cys Trp Arg Pro Leu Pro Ser Pro Ser Ser

290 295 300

Ser Thr Thr Thr Ala Leu Ser Leu Leu Leu Arg Ser Ser Met Phe Gln

305 310 315 320

Glu Leu Val Ala Arg Gln Pro Val Val Glu Gly Asp Asp Gly Gln Leu

325 330 335

Ala Val Val Ser Gly Asp Asp Ala Asp Ala Asp Ala Asp Ser Asp Val

340 345 350

Lys Glu Pro Pro Pro Glu Ser Glu Tyr Gly Glu Val Phe Ala Ser Asp

355 360 365

Glu Ala Ala Ala Ala Ala Ala Tyr Gly Cys Ser Met Tyr Glu Leu Asp

370 375 380

Asp Ser Phe Ala Leu Ile Asp Asp Ser Val Trp Asn Cys Leu Ile

385 390 395

<210> 39

<211> 488

<212> Белок

<213> Sorghum bicolor

<400> 39

Met Glu Thr Tyr Ser Leu Gln Val Lys Asp Glu Leu His Gly Gly Gly

1 5 10 15

Ile Gly Ile Gly Gly Gly Gly Gln Gly Leu Tyr Cys Gly Ala Thr Pro

20 25 30

Arg Pro Ala Ala Pro Ala Ala Thr Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Asp

35 40 45

Gly Ala Val Lys Ser Asn Lys Arg Ser Arg Lys Arg Glu Pro Pro Pro

50 55 60

Pro Pro Pro Ser Ser Leu Val Thr Met Ser Asn Gly Gly Lys Asp Glu

65 70 75 80

Ala Val Ala Gly Ser Gly Asp Lys Ser Ala Ser Ser Asn Ser Asn Ala

85 90 95

Ser Lys Arg Ser Ser Arg Phe Arg Gly Val Ser Arg His Arg Trp Thr

100 105 110

Gly Arg Phe Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Gly Thr Trp Asn Pro Thr

115 120 125

Gln Lys Lys Lys Gly Lys Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asn Glu Glu

130 135 140

Asp Ala Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly

145 150 155 160

Pro Thr Thr Tyr Thr Asn Phe Pro Val Val Asp Tyr Glu Arg Glu Leu

165 170 175

Lys Val Met Gln Asn Val Ser Lys Glu Glu Tyr Leu Ala Ser Ile Arg

180 185 190

Arg Lys Ser Asn Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val

195 200 205

Ala Arg His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val

210 215 220

Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ser Thr Gln Glu Glu

225 230 235 240

Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Ile Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Ile Asn

245 250 255

Ala Val Thr Asn Phe Asp Leu Ser Thr Tyr Ile Arg Trp Leu Lys Pro

260 265 270

Gly Gly Gly Val Glu Asp Ser Ala Ala Gly Thr Pro Thr Ser Gly Val

275 280 285

Arg Ala Pro Gly Ile Pro Pro Ala Ser Leu Ser Leu Gln Ala Gly Gly

290 295 300

Leu Leu Gln His Pro His Gly Ala Ala Ala Gly Met Leu Gln Val Asp

305 310 315 320

Val Asp Asp Leu Tyr Arg Gly Gln Leu Ala Ala Ala Arg Gly Ala Ala

325 330 335

Leu Phe Ser Gly Gly Ile Asp Asp Val Gly Ser Val Tyr Ala Ala Gly

340 345 350

Ser Ala Gly Pro Ser Pro Thr Ala Leu Cys Ala Gly Arg Pro Ser Pro

355 360 365

Ser Pro Ser Pro Ser Ser Ser Thr Thr Ala Leu Ser Leu Leu Leu Arg

370 375 380

Ser Ser Val Phe Gln Glu Leu Val Ala Arg Asn Ala Gly Gly Gly Ala

385 390 395 400

Ala Gln Gln Gln Gln Leu Val Val Ala Asp Asp Asp Gly Ala Val Ser

405 410 415

Pro Ala Asp Val Val Asp Ala Lys Val Glu Gln Pro Glu Ala Glu Gly

420 425 430

Glu Leu Gly Arg His Gly Asp Gln Leu Tyr Gly Ala Ala Arg Ala Asp

435 440 445

Glu Asp Glu Asp Ala Phe Ala Cys Ser Met Tyr Glu Leu Asp Asp Ser

450 455 460

Phe Ala Arg Met Glu Gln Ser Leu Trp Gly Cys Leu Arg Ser Ser Asp

465 470 475 480

Ala Pro Asp Asn Met Asn Asn Leu

485

<210> 40

<211> 443

<212> Белок

<213> Sorghum bicolor

<400> 40

Met Glu Ser Ser Gly Met Met Met Val Lys Ser Glu Ile Glu Ser Cys

1 5 10 15

Gly Tyr Pro Gly Pro Ser Ser Ser Thr Ala Pro Ala Ala Gly Val Val

20 25 30

Ile Gly Gly Ser Ala Thr Thr Glu Arg Gly Glu Gly Gly His His His

35 40 45

His His His Gln Val Val Val Arg Arg Arg Arg Arg Glu Pro Pro Leu

50 55 60

Leu Ala Pro Ile Ala Gly Gly Gly Ile Gly Lys Pro Leu Pro Ser Ile

65 70 75 80

Thr Val Lys Arg Ser Ser Arg Phe Arg Gly Val Ser Arg His Arg Trp

85 90 95

Thr Gly Arg Phe Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Asn Ser Trp Asn Pro

100 105 110

Thr Gln Arg Lys Lys Gly Lys Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asp Glu

115 120 125

Glu Glu Ala Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp

130 135 140

Gly Pro Thr Thr Tyr Thr Asn Phe Pro Val Met Asp Tyr Glu Lys Glu

145 150 155 160

Leu Lys Ile Met Glu Asn Leu Thr Lys Glu Glu Tyr Leu Ala Ser Leu

165 170 175

Arg Arg Lys Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly

180 185 190

Val Ala Arg His His Gln Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg

195 200 205

Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ser Thr Gln Glu

210 215 220

Glu Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Ile Ala Ala Ile Glu Tyr Lys Gly Val

225 230 235 240

Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Leu Arg Ser Tyr Ile Thr Trp Leu Lys

245 250 255

Pro Ser Gly Ala Pro Ala Ala Phe Asn Pro Glu Ala Ala Leu Leu Met

260 265 270

Gln Ala Ala Pro Ala Glu Gln Leu Leu His Pro Ala Glu Thr Ala Gln

275 280 285

Met Leu Pro Arg Val Gly Asn Pro Phe Leu Leu Asp His Gly Ala Ala

290 295 300

Pro Pro Gly Ser Ser Gly Gly Gly Gly Gln Asp Ala Ser Met Ser Ser

305 310 315 320

Met Val Ser Pro Gly Ala Gly Gly Gly Met Arg Arg Arg Gly Ser Ser

325 330 335

Thr Ala Leu Ser Leu Leu Leu Lys Ser Ser Met Phe Arg Gln Leu Val

340 345 350

Glu Lys Asn Ser Asp Ala Glu Glu Gly Val Arg Asp Arg Glu Asp Ala

355 360 365

Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala His Pro Ala Gly Pro Gly Asp Ala Tyr

370 375 380

Glu Tyr His Asn Phe Phe Gln Gly Glu Ala Pro Pro Asp Met Cys Asp

385 390 395 400

Leu Phe Ser Ser Gly Gly Gly Gly Asp His Ala Arg Asn Ala Gly Phe

405 410 415

His Gly Glu Ile Ala Ala Cys Tyr Asp Asp Gly Glu Gly Leu Asp Gly

420 425 430

Trp Asn Gly Phe Gly Asn Met Ser Ser Leu Gln

435 440

<210> 41

<211> 407

<212> Белок

<213> Glycine max

<400> 41

Met Glu Leu Ala Pro Val Lys Ser Glu Leu Ser Pro Arg Ser His Arg

1 5 10 15

Leu Leu Met Ile Asp Gly Ser Glu Val Ile Gly Thr Lys Cys Val Lys

20 25 30

Arg Arg Arg Arg Asp Ser Ser Thr Ala Val Leu Gly Gly Asn Gly Gln

35 40 45

Gln Gly Glu Gln Leu Glu Glu Gln Lys Gln Leu Gly Gly Gln Ser Thr

50 55 60

Ala Thr Thr Val Lys Arg Ser Ser Arg Phe Arg Gly Val Ser Arg His

65 70 75 80

Arg Trp Thr Gly Arg Phe Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Gly Thr Trp

85 90 95

Asn Pro Thr Gln Lys Lys Lys Gly Lys Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr

100 105 110

Asn Asp Glu Glu Ala Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys

115 120 125

Tyr Trp Gly Ile Ser Thr Phe Thr Asn Phe Pro Val Ser Asp Tyr Glu

130 135 140

Lys Glu Ile Glu Ile Met Lys Thr Val Thr Lys Glu Glu Tyr Leu Ala

145 150 155 160

Ser Leu Arg Arg Arg Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr

165 170 175

Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile

180 185 190

Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ser Thr

195 200 205

Gln Glu Glu Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Ile Ala Ala Ile Glu Tyr Arg

210 215 220

Gly Ile Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Leu Ser Thr Tyr Ile Arg Trp

225 230 235 240

Leu Arg Pro Gly Thr His Pro Thr Ala Ser His Asp Gln Lys Pro Ser

245 250 255

Thr Asp Ala Gln Pro Phe Ala Thr Ser Asn Ser Met Gln Ala Arg Gly

260 265 270

Asn Ile Glu Val Ser Asn Ser Asn Lys Asn Ser Phe Pro Ser Gly Lys

275 280 285

Leu Asp Ser Thr Lys Lys Arg Asp Phe Ser Lys Tyr Met Asn Pro Leu

290 295 300

Ser Pro Cys Asn Lys Pro Ser Ser Pro Thr Ala Leu Gly Leu Leu Leu

305 310 315 320

Lys Ser Ser Val Phe Arg Glu Leu Met Gln Arg Asn Leu Asn Ser Ser

325 330 335

Ser Glu Glu Ala Glu Glu Val Glu Leu Lys Tyr Pro His Glu Gly Asn

340 345 350

Asp Gly Val Gly Gly Ile Tyr Asp Asn Glu Asn Thr Asn Asn Ser Tyr

355 360 365

Phe Cys Ser Ser Asn Ile Ser Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Ser Glu

370 375 380

Glu Ser Pro Leu Pro Met Tyr His Gly Thr Val Gln Ser Leu Trp Asn

385 390 395 400

Ser Ala Phe Asn Met Ser Asn

405

<210> 42

<211> 406

<212> Белок

<213> Glycine max

<400> 42

Met Glu Leu Ala Pro Val Lys Ser Glu Leu Ser Pro Arg Ser His Arg

1 5 10 15

Leu Val Ile Ile Asp Gly Ser Asp Val Ile Ser Thr Lys Cys Ala Lys

20 25 30

Arg Arg Arg Arg Asp Ser Ser Met Ala Val Leu Gly Gly Asn Gly Gln

35 40 45

Gln Gly Glu Gln Leu Glu Glu Gln Lys Gln Leu Gly Gly Gln Ser Thr

50 55 60

Ala Thr Thr Val Lys Arg Ser Ser Arg Phe Arg Gly Val Ser Arg His

65 70 75 80

Arg Trp Thr Gly Arg Phe Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Gly Thr Trp

85 90 95

Asn Pro Thr Gln Lys Lys Lys Gly Lys Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr

100 105 110

Asn Asp Glu Glu Ala Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys

115 120 125

Tyr Trp Gly Thr Ser Thr Phe Thr Asn Phe Pro Val Ser Asp Tyr Glu

130 135 140

Lys Glu Ile Glu Ile Met Lys Thr Val Thr Lys Glu Glu Tyr Leu Ala

145 150 155 160

Ser Leu Arg Arg Arg Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr

165 170 175

Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile

180 185 190

Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ser Thr

195 200 205

Gln Glu Glu Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Ile Ala Ala Ile Glu Tyr Arg

210 215 220

Gly Ile Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Leu Ser Thr Tyr Ile Arg Trp

225 230 235 240

Leu Arg Pro Gly Thr His Pro Thr Ala Ser His Asp Gln Lys Pro Ser

245 250 255

Thr Asp Ala Gln Leu Phe Ala Thr Ser Asn Ser Met Gln Thr Arg Gly

260 265 270

Asn Ile Glu Val Ser Asn Ser Asn Met His Ser Phe Pro Ser Gly Glu

275 280 285

Leu Asp Ser Thr Lys Lys Arg Asp Phe Ser Lys Tyr Met Asn Pro Leu

290 295 300

Ser Pro Cys Asn Lys Pro Ser Ser Pro Thr Ala Leu Gly Leu Leu Leu

305 310 315 320

Lys Ser Ser Val Phe Arg Glu Leu Met Gln Arg Asn Leu Asn Ser Ser

325 330 335

Ser Glu Glu Ala Asp Val Glu Leu Lys Tyr Pro Gln Glu Gly Asn Asp

340 345 350

Gly Val Gly Gly Ile Tyr Asp Asn Asp Asn Thr Ser Asn Ser Tyr Phe

355 360 365

Cys Ser Ser Asn Ile Ser Arg Leu Pro Asn Leu Glu Ser Ser Glu Glu

370 375 380

Cys Pro Leu Pro Met Tyr His Gly Thr Met Gln Ser Leu Trp Asn Ser

385 390 395 400

Ala Phe Asn Met Ser Asn

405

<210> 43

<211> 418

<212> Белок

<213> Populus trichocarpa

<400> 43

Met Glu Met Thr Arg Asn Thr Gly Asp Gln Ile Ser Leu Gly Arg Arg

1 5 10 15

Arg Leu Cys Met Ile Glu Glu Glu Arg Arg Ala Gly Glu Ala Gly Lys

20 25 30

Cys Ile Lys Arg Arg Arg Arg Asp Pro Ser Thr Phe Ala Leu Ser Cys

35 40 45

Asn Ile Asn Asp Gln Gln Ser Asp Gln Gln Gln Gln Gln Gln Ser Leu

50 55 60

Gly Asp Arg Thr Ala Ala Val Ala Thr Thr Val Lys Arg Ser Ser Arg

65 70 75 80

Phe Arg Gly Val Ser Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Phe Glu Ala His

85 90 95

Leu Trp Asp Lys Gly Thr Trp Asn Pro Thr Gln Arg Lys Lys Gly Lys

100 105 110

Gln Gly Ala Tyr Asp Glu Glu Glu Ser Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu

115 120 125

Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Thr Ser Thr Phe Thr Asn Phe Pro Ala

130 135 140

Ser Asp Tyr Glu Lys Glu Ile Glu Ile Met Lys Thr Val Thr Lys Glu

145 150 155 160

Glu Tyr Leu Ala Ser Leu Arg Arg Arg Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly

165 170 175

Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn Gly Arg Trp

180 185 190

Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly

195 200 205

Thr Tyr Ser Thr Gln Glu Glu Ala Ala His Ala Tyr Asp Ile Ala Ala

210 215 220

Ile Glu Tyr Arg Gly Ile Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Leu Ser Thr

225 230 235 240

Tyr Ile Arg Trp Leu Lys Pro Glu Ala Ser Leu Pro Ala Pro Gln Thr

245 250 255

Gln Glu Ser Lys Pro Ala Ser Asp Pro Leu Pro Met Ala Thr Phe Ser

260 265 270

Asn His Leu Pro Ser Glu Lys Pro Thr Gln Leu Ser Val Leu Gln Met

275 280 285

Asp Pro Ser Leu Met Asp Asn Leu Asn Thr Pro Lys Asn Glu Asp Ile

290 295 300

Phe His Arg Lys Thr Leu Pro Val Ser Pro Leu Thr Arg Ser Ser Ser

305 310 315 320

Ser Thr Ala Leu Ser Leu Leu Phe Lys Ser Ser Ile Phe Lys Glu Leu

325 330 335

Val Glu Lys Asn Leu Asn Thr Thr Ser Glu Glu Ile Glu Glu Asn Asp

340 345 350

Ser Lys Asn Pro His Asn Gly Asn Asn Asn Ala Gly Glu Ala Phe Tyr

355 360 365

Asp Gly Leu Ser Pro Ile Pro His Thr Gly Thr Ser Thr Glu Asp Pro

370 375 380

Phe Leu Cys Ser Glu Gln Gly Glu Thr Asn Thr Leu Pro Pro Tyr Ser

385 390 395 400

Gly Met Glu Gln Ser Leu Trp Asn Gly Ala Leu Ser Met Pro Ser Arg

405 410 415

Phe His

<210> 44

<211> 336

<212> Белок

<213> Vitis vinifera

<400> 44

Met Glu Met Thr Thr Val Lys Ser Glu Leu Gly Leu Glu Arg Gly Arg

1 5 10 15

Leu Cys Thr Ala Glu Thr Asp Ala Leu Glu Val Thr Lys Cys Val Lys

20 25 30

Arg Arg Arg Arg Asp Pro Ser Ala Val Thr Pro Gly Cys Ser Lys Gln

35 40 45

Gly Glu Gln Gln Lys Gln Val Leu Leu Gln Ala Gly Gln Ser Ile Thr

50 55 60

Ala Ile Ala Thr Thr Met Lys Arg Ser Ser Arg Phe Arg Gly Val Ser

65 70 75 80

Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Phe Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Gly

85 90 95

Ser Trp Asn Val Thr Gln Arg Lys Lys Gly Lys Gln Val Tyr Leu Gly

100 105 110

Ala Tyr Asp Glu Glu Glu Ser Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala

115 120 125

Leu Lys Tyr Trp Gly Pro Ser Thr Phe Thr Asn Phe Pro Val Ser Asp

130 135 140

Tyr Glu Lys Glu Ile Glu Ile Met Gln Gly Leu Thr Lys Glu Glu Tyr

145 150 155 160

Leu Ala Ser Leu Arg Arg Arg Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser

165 170 175

Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala

180 185 190

Arg Ile Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr

195 200 205

Ser Thr Gln Glu Glu Ala Ala His Ala Tyr Asp Ile Ala Ala Ile Glu

210 215 220

Tyr Arg Gly Ile Asn Ala Val Thr Asn Phe Glu Leu Ser Thr Tyr Val

225 230 235 240

Arg Trp Leu Arg Pro Arg Ala Thr Ala Leu Thr Pro Gln Glu Pro Arg

245 250 255

Ser Asn Ser Ile Met Gln Ala Ser Ser Asn Cys Leu Pro Asn Glu Glu

260 265 270

Val Glu Leu Ser Phe Leu Ser Pro Asn Pro Phe Thr Val Asp Asp Leu

275 280 285

Ala Thr Pro Leu Lys Gln Glu Lys Phe Gln Arg Glu Val Ser Ile Ser

290 295 300

Pro Cys Thr Lys Ser Ser Ser Pro Thr Ala Leu Ser Leu Leu His Arg

305 310 315 320

Ser Ser Val Phe Arg Gln Leu Val Glu Lys Asn Ser Asn Ser Ile Glu

325 330 335

<210> 45

<211> 389

<212> Белок

<213> Glycine max

<400> 45

Met Ala Met Met Lys Glu Asn Ile Ile Glu Val Ser Leu Gly Arg Arg

1 5 10 15

Gln Met Ser Met Thr Glu Gly Glu Phe Gln Gly Thr Arg Ser Val Lys

20 25 30

Arg Arg Arg Arg Glu Val Ala Ala Ala Ala Gly Ser Gly Asp Asp Asn

35 40 45

His Gln Gln Gln Leu Pro Gln Gln Glu Val Gly Glu Asn Thr Thr Val

50 55 60

Asn Thr Thr Lys Arg Ser Ser Arg Phe Arg Gly Val Ser Arg His Arg

65 70 75 80

Trp Thr Gly Arg Tyr Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Leu Ser Trp Asn

85 90 95

Ile Thr Gln Lys Lys Lys Gly Lys Gln Gly Ala Tyr Asp Glu Glu Glu

100 105 110

Ser Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Thr

115 120 125

Ser Thr Phe Thr Asn Phe Pro Ile Ser Asp Tyr Glu Lys Glu Ile Gln

130 135 140

Ile Met Gln Thr Met Thr Lys Glu Glu Tyr Leu Ala Thr Leu Arg Arg

145 150 155 160

Lys Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala

165 170 175

Arg His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe

180 185 190

Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ser Thr Gln Glu Glu Ala

195 200 205

Ala Arg Ala Tyr Asp Ile Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Ile His Ala

210 215 220

Val Thr Asn Phe Asp Leu Ser Thr Tyr Ile Lys Trp Leu Lys Pro Ser

225 230 235 240

Gly Gly Gly Thr Leu Glu Ala Asn Leu Glu Ser His Ala Ala Leu Glu

245 250 255

His Gln Lys Val Ala Ser Pro Ser Asn Tyr Ala Leu Thr Glu Glu Ser

260 265 270

Lys Ser Leu Ala Leu His Asn Ser Phe Phe Ser Pro Tyr Ser Leu Asp

275 280 285

Ser Pro Val Lys His Glu Arg Phe Gly Asn Lys Thr Tyr Gln Phe Ser

290 295 300

Ser Asn Lys Ser Ser Ser Pro Thr Ala Leu Gly Leu Leu Leu Arg Ser

305 310 315 320

Ser Leu Phe Arg Glu Leu Val Glu Lys Asn Ser Asn Val Ser Gly Glu

325 330 335

Glu Asp Asp Gly Glu Ala Thr Lys Asp Gln Gln Thr Gln Ile Ala Thr

340 345 350

Asp Asp Asp Leu Gly Gly Ile Phe Phe Asp Ser Phe Ser Asp Ile Pro

355 360 365

Phe Val Cys Asp Pro Asn Arg Tyr Asp Leu Glu Leu Gln Glu Arg Asp

370 375 380

Leu His Ser Ile Phe

385

<210> 46

<211> 389

<212> Белок

<213> Glycine max

<400> 46

Met Val Met Met Lys Glu Asn Ile Ile Glu Glu Lys Leu Gly Arg Ser

1 5 10 15

Gln Met Ser Met Val Glu Gly Glu Phe Gln Gly Thr Trp Gly Val Lys

20 25 30

Arg Arg Arg Arg Glu Val Ala Ala Ala Ala Ser Ser Gly Asp Asp Asn

35 40 45

His His Gln Gln Leu Pro Gln Gln Glu Val Gly Glu Asn Ser Ser Ile

50 55 60

Ser Thr Thr Lys Arg Ser Ser Arg Phe Arg Gly Val Ser Arg His Arg

65 70 75 80

Trp Thr Gly Arg Tyr Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Leu Ser Trp Asn

85 90 95

Ile Thr Gln Lys Lys Lys Gly Lys Gln Gly Ala Tyr Asp Glu Glu Glu

100 105 110

Ser Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Asn

115 120 125

Ser Thr Phe Thr Asn Phe Pro Ile Ser Asp Tyr Glu Lys Glu Ile Glu

130 135 140

Ile Met Gln Thr Met Thr Lys Glu Glu Tyr Leu Ala Thr Leu Arg Arg

145 150 155 160

Lys Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala

165 170 175

Arg His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe

180 185 190

Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ser Thr Gln Glu Glu Ala

195 200 205

Ala Arg Ala Tyr Asp Ile Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Ile His Ala

210 215 220

Val Thr Asn Phe Asp Leu Ser Thr Tyr Ile Lys Trp Leu Lys Pro Ser

225 230 235 240

Gly Gly Gly Thr Pro Glu Glu Asn Leu Glu Ser His Ala Val Leu Glu

245 250 255

His Gln Lys Leu Ala Ser Pro Ser Asn Tyr Ala Leu Thr Glu Glu Ser

260 265 270

Lys Ser Leu Val Leu Pro Asn Ser Phe Ile Ser Pro Asp Ser Leu Asp

275 280 285

Ser Pro Val Lys His Glu Ser Phe Gly Asn Lys Thr Tyr Gln Phe Ser

290 295 300

Arg Asn Lys Ser Ser Ser Pro Thr Ala Leu Gly Leu Leu Leu Arg Ser

305 310 315 320

Ser Leu Phe Arg Glu Leu Val Glu Lys Asn Ser Asn Val Ser Gly Glu

325 330 335

Glu Ala Asp Gly Glu Val Thr Lys Asp Gln Gln Pro Gln Leu Ala Ser

340 345 350

Asp Asp Asp Leu Asp Gly Ile Phe Phe Asp Ser Phe Gly Asp Ile Pro

355 360 365

Phe Val Cys Asp Pro Thr Arg Tyr Asn Leu Glu Leu Gln Glu Arg Asp

370 375 380

Leu His Ser Ile Phe

385

<210> 47

<211> 392

<212> Белок

<213> Medicago truncatula

<400> 47

Met Ala Met Leu Ile Glu Asn Glu Val Met Cys Leu Gly Lys Ser Gln

1 5 10 15

Arg Ser Met Asp Gly Lys Glu Val Lys Gly Ala Arg Arg Val Lys Arg

20 25 30

Gln Arg Arg Asp Ala Ile Val Pro Lys Ile Gly Asp Asp Ala Asn Lys

35 40 45

Met Ala Gln Lys Gln Val Gly Glu Asn Ser Thr Thr Asn Thr Ser Lys

50 55 60

Arg Ser Ser Arg Phe Arg Gly Val Ser Arg His Arg Trp Thr Gly Arg

65 70 75 80

Phe Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Leu Ser Trp Asn Thr Thr Gln Lys

85 90 95

Lys Lys Gly Lys Gln Gly Ala Tyr Asp Glu Glu Glu Ser Ala Ala Arg

100 105 110

Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Thr Ser Thr Phe Thr

115 120 125

Asn Phe Pro Ile Ser Asp Tyr Asp Lys Glu Ile Glu Ile Met Asn Thr

130 135 140

Met Thr Lys Glu Glu Tyr Leu Ala Thr Leu Arg Arg Lys Ser Ser Gly

145 150 155 160

Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His

165 170 175

Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr

180 185 190

Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ser Thr Gln Glu Glu Ala Ala Arg Ala Tyr

195 200 205

Asp Ile Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Ile His Ala Val Thr Asn Phe

210 215 220

Glu Leu Ser Ser Tyr Ile Lys Trp Leu Lys Pro Glu Thr Thr Thr Glu

225 230 235 240

Glu Asn His Glu Ser Gln Ile Leu Gln Lys Glu Ser Arg Thr Leu Ala

245 250 255

Pro Pro Asn Asn Ser Thr Leu Leu Gln Glu Ser Lys Leu Leu Ala Leu

260 265 270

Gln Lys Ser Phe Phe Ile Pro Asn Asp Leu Asn Ser Thr Glu Lys Gln

275 280 285

Glu Ser Ser Phe Glu Asn Lys Asn Tyr His Phe Leu Ser Asn Lys Ser

290 295 300

Thr Ser Pro Thr Ala Leu Ser Leu Leu Leu Arg Ser Ser Leu Phe Arg

305 310 315 320

Glu Leu Leu Glu Lys Asn Ser Asn Val Ser Glu Asp Glu Val Thr Lys

325 330 335

Glu Gln Gln Gln Gln Gln Ile Thr Ser Asp Asp Glu Leu Gly Gly Ile

340 345 350

Phe Tyr Asp Gly Ile Asp Asn Ile Ser Phe Asp Phe Asp Pro Asn Ser

355 360 365

Cys Asn Ile Glu Leu Gln Glu Arg Asp Leu His Ser Ile Ser Cys Leu

370 375 380

Tyr Gln Tyr Leu Asn Phe Gly Gln

385 390

<210> 48

<211> 386

<212> Белок

<213> Populus trichocarpa

<400> 48

Met Met Met Ile Lys Asn Glu Glu Asn Pro Gly Arg Arg Arg Gly Cys

1 5 10 15

Ile Ala Asp Ser Glu Ala Gln Val Ala Arg Cys Val Lys Arg Arg Arg

20 25 30

Arg Asp Pro Ala Ile Val Ala Leu Gly Ser Asp Asp Asn Gln Ser Gln

35 40 45

Gln Gln Met Pro Gln Lys Gln Thr Asp Gln Thr Ser Ala Ala Thr Thr

50 55 60

Val Lys Arg Ser Ser Arg Phe Arg Gly Val Ser Arg His Arg Trp Thr

65 70 75 80

Gly Arg Phe Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Leu Ser Trp Asn Val Thr

85 90 95

Gln Lys Lys Lys Gly Lys Gln Gly Ala Tyr Asp Glu Glu Glu Ser Ala

100 105 110

Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Thr Ser Thr

115 120 125

Phe Thr Asn Phe Pro Ile Ser Asp Tyr Glu Lys Glu Ile Glu Ile Met

130 135 140

Gln Thr Val Thr Lys Glu Glu Tyr Leu Ala Ser Leu Arg Arg Lys Ser

145 150 155 160

Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His

165 170 175

His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Gly Asn

180 185 190

Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ser Thr Gln Glu Glu Ala Ala Arg

195 200 205

Ala Tyr Asp Ile Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Ile Asn Ala Val Thr

210 215 220

Asn Phe Asp Leu Ser Thr Tyr Ile Arg Trp Ile Lys Pro Gly Val Ala

225 230 235 240

Ala Gln Ala Ala Ala Asn Glu Leu Gln Thr Val Thr Asp Pro Gln Thr

245 250 255

Ala Ala Thr Leu Thr Asp Thr Tyr Thr Pro Arg Glu Glu Thr Lys Pro

260 265 270

Ser Leu Phe Leu Pro Asn Gln Phe Thr Ala Asp Tyr Leu Asn Ser Pro

275 280 285

Pro Lys Leu Asp Ala Phe Gln Asn Asn Ile Phe Val Asp Ser Ser Asn

290 295 300

Lys Thr Ser Ser Pro Thr Ala Leu Ser Leu Leu Leu Arg Ser Ser Val

305 310 315 320

Phe Arg Glu Leu Val Glu Lys Asn Ser Asn Val Cys Glu Glu Glu Thr

325 330 335

Asp Gly Asn Glu Ile Lys Asn Gln Pro Met Ala Gly Ser Asp Asp Glu

340 345 350

Tyr Gly Gly Ile Phe Tyr Asp Gly Ile Gly Asp Ile Pro Phe Val Tyr

355 360 365

Ser Ser Asn Lys Tyr Ser Leu Gly Leu Glu Glu Arg Glu Leu Gln Phe

370 375 380

Val Leu

385

<210> 49

<211> 372

<212> Белок

<213> Ricinus communis

<400> 49

Met Glu Met Met Met Val Lys Asn Glu Glu Ile Ser Gly Arg Arg Arg

1 5 10 15

Ala Ser Val Thr Glu Ser Glu Ala Tyr Val Ala Arg Cys Val Lys Arg

20 25 30

Arg Arg Arg Asp Ala Ala Val Val Thr Val Gly Gly Asp Asp Ser Gln

35 40 45

Ser His Gln Gln Gln Gln Gln Gln Gln Pro Glu Gln Gln Ala His Gln

50 55 60

Ile Ser Ala Ala Thr Thr Val Lys Arg Ser Ser Arg Tyr Arg Gly Val

65 70 75 80

Ser Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Phe Glu Ala His Leu Trp Asp Lys

85 90 95

Leu Ser Trp Asn Val Thr Gln Lys Lys Lys Gly Lys Gln Gly Ala Tyr

100 105 110

Asp Glu Glu Glu Ser Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys

115 120 125

Tyr Trp Gly Thr Ser Thr Phe Thr Asn Phe Pro Ile Ser Asp Tyr Glu

130 135 140

Lys Glu Ile Glu Ile Met Gln Thr Val Thr Lys Glu Glu Tyr Leu Ala

145 150 155 160

Ser Leu Arg Arg Lys Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr

165 170 175

Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile

180 185 190

Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ser Thr

195 200 205

Gln Glu Glu Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Ile Ala Ala Ile Glu Tyr Arg

210 215 220

Gly Ile Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Leu Ser Thr Tyr Ile Arg Trp

225 230 235 240

Leu Lys Pro Glu Val Ala Ala Gln Val Ala Ala Asn Glu Pro Gln Thr

245 250 255

Val Ala Glu Ser Arg Met Leu Pro Ser Ile Asn Asn Arg Ile Ala Arg

260 265 270

Glu Glu Ser Lys Pro Ser Phe Phe Ser Ala Thr Pro Phe Ser Leu Asp

275 280 285

Cys Trp Ser Tyr Pro Arg Lys Gln Glu Glu Phe Gln Asn Arg Thr Pro

290 295 300

Ile Thr Pro Cys Ser Lys Thr Ser Ser Pro Thr Ala Leu Ser Leu Leu

305 310 315 320

Leu Arg Ser Ser Ile Phe Arg Glu Leu Val Glu Lys Asn Ser Asn Val

325 330 335

Ser Glu Asp Glu Asn Glu Gly Glu Glu Thr Lys Asn Gln Ser Gln Ile

340 345 350

Gly Ser Asp Asp Glu Phe Gly Gly Leu Phe Tyr Glu Arg Ile Gly Asp

355 360 365

Ile Pro Phe Ile

370

<210> 50

<211> 404

<212> Белок

<213> Vitis vinifera

<400> 50

Met Glu Met Met Arg Val Lys Ser Glu Glu Asn Leu Gly Arg Arg Arg

1 5 10 15

Met Cys Val Ala Asp Ala Glu Ala Gln Gly Thr Arg Cys Val Lys Arg

20 25 30

Arg Arg Arg Asp Pro Ala Ile Val Thr Leu Gly Cys Asp Asp Gln Ser

35 40 45

Gln Gln Gln Gln Leu Pro Asn Gln Gln Pro Asp Gln Ala Ser Ala Ala

50 55 60

Thr Thr Val Lys Arg Ser Ser Arg Phe Arg Gly Val Ser Arg His Arg

65 70 75 80

Trp Thr Gly Arg Phe Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Phe Ser Trp Asn

85 90 95

Val Thr Gln Lys Lys Lys Gly Lys Gln Gly Ala Tyr Asp Glu Glu Glu

100 105 110

Ser Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Ala

115 120 125

Ser Thr Phe Thr Asn Phe Pro Val Ser Asp Tyr Glu Lys Glu Ile Glu

130 135 140

Ile Met Gln Ser Val Thr Lys Glu Glu Tyr Leu Ala Cys Leu Arg Arg

145 150 155 160

Lys Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala

165 170 175

Arg His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe

180 185 190

Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ser Thr Gln Glu Glu Ala

195 200 205

Ala Arg Ala Tyr Asp Ile Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Ile Asn Ala

210 215 220

Val Thr Asn Phe Asp Leu Ser Thr Tyr Ile Arg Trp Leu Asn Pro Ala

225 230 235 240

Ala Asn Asn Pro Val Val Pro His Glu Ser Arg Ala Asn Thr Glu Pro

245 250 255

Gln Ala Leu Ala Ser Ser Asn Phe Val Leu Ser Glu Glu Ser Glu Pro

260 265 270

Leu Phe Phe His Ser Asn Ser Phe Thr Met Asp Asp Leu Asn Pro Pro

275 280 285

His Lys Gln Glu Val Phe Gln Thr Lys Ile Pro Ile Glu Pro Cys Ser

290 295 300

Lys Ser Ser Ser Pro Thr Ala Leu Gly Leu Leu Leu Arg Ser Ser Ile

305 310 315 320

Phe Arg Glu Leu Val Glu Lys Asn Ser Asn Ala Pro Glu Asp Glu Thr

325 330 335

Asp Ala Glu Asp Thr Lys Asn Gln Gln Gln Val Gly Ser Asp Asp Glu

340 345 350

Tyr Gly Ile Phe Tyr Asp Gly Ile Gly Asp Ile Pro Phe Val Cys Pro

355 360 365

Ser Asn Gly Asp Arg Asn Glu Leu Gln Glu Arg Leu Pro Leu Pro Phe

370 375 380

Thr Ile Ser Gln Gly Asn Pro Tyr Gly Thr Ala Val Leu Thr Ser Met

385 390 395 400

Gln Ser Ile Asn

<210> 51

<211> 378

<212> Белок

<213> Brachypodium distachyon

<400> 51

Met Ala Lys Gln Arg Thr Asp Ser Ala Gly Thr Asp Ala Ala Ala Val

1 5 10 15

Gln Leu Thr Lys Pro Lys Arg Thr Arg Lys Ser Val Pro Arg Arg Glu

20 25 30

Ser Pro Ser Arg Arg Thr Ser Ala Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg

35 40 45

Trp Thr Gly Arg Phe Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Asn Thr Trp Thr

50 55 60

Gln Ser Gln Arg Lys Lys Lys Gly Arg Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr

65 70 75 80

Gly Gly Glu Glu Ala Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys

85 90 95

Tyr Trp Gly Arg Asp Thr Val Leu Asn Phe Pro Leu Ser Asn Tyr Asp

100 105 110

Glu Glu Trp Lys Glu Met Glu Gly Gln Ser Arg Glu Glu Tyr Ile Gly

115 120 125

Ser Leu Arg Arg Lys Ser Thr Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr

130 135 140

Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn Gly Lys Trp Glu Ala Arg Ile

145 150 155 160

Gly Arg Val Tyr Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Gly Thr

165 170 175

Gln Glu Glu Ala Ala Met Ala Tyr Asp Ile Ala Ala Ile Glu His Arg

180 185 190

Gly Leu Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Val Ser Arg Tyr Ile Asp Trp

195 200 205

His Arg Arg Leu Cys Arg Asp Leu Gly Asp Asn Ile Ile Thr Pro Leu

210 215 220

Thr Asn Pro Thr Val Asp Leu Glu Glu Ala Met Ala Gly Asp Asp Asp

225 230 235 240

Asp Gly Gln Phe Leu Leu Pro Ser Gln Ala Thr Thr Pro Pro Ser Thr

245 250 255

Ser Ser Ala Leu Gly Leu Leu Leu Leu Ser Pro Arg Leu Lys Glu Val

260 265 270

Ile Glu Gly Ser Gly Ala Ala Ser Ala Met Ala Ala Ser Thr Ser Glu

275 280 285

Ser Ser Ala Ala Gly Ser Pro Pro Pro Ser Trp Ser Ser Ser Ser Cys

290 295 300

Ser Pro Ser Pro Pro Ser Pro Ser His Ser Pro Pro Glu Thr Gln Gln

305 310 315 320

Lys Gln Gln Gln Gln Glu Tyr Gly Ala Ser Ala Ala Ala Ala Arg Cys

325 330 335

Ser Phe Pro Asp Asp Val Gln Thr Tyr Phe Gly Cys Glu Asp Gly Cys

340 345 350

Ala Glu Val Asp Thr Phe Leu Phe Gly Asp Leu Ser Ala Tyr Ala Ala

355 360 365

Pro Met Phe Gln Phe Glu Leu Leu Asp Val

370 375

<210> 52

<211> 416

<212> Белок

<213> Oryza sativa

<400> 52

Met Ala Lys Arg Arg Ser Asn Gly Glu Thr Ala Ala Ala Ser Ser Asp

1 5 10 15

Asp Ser Ser Ser Gly Val Cys Gly Gly Gly Gly Gly Gly Glu Val Glu

20 25 30

Pro Arg Arg Arg Gln Lys Arg Pro Arg Arg Ser Ala Pro Arg Asp Cys

35 40 45

Pro Ser Gln Arg Ser Ser Ala Phe Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp

50 55 60

Thr Gly Arg Phe Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Asn Thr Trp Asn Glu

65 70 75 80

Ser Gln Ser Lys Lys Gly Arg Gln Gly Ala Tyr Asp Gly Glu Glu Ala

85 90 95

Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly His Asp

100 105 110

Thr Val Leu Asn Phe Pro Leu Ser Thr Tyr Asp Glu Glu Leu Lys Glu

115 120 125

Met Glu Gly Gln Ser Arg Glu Glu Tyr Ile Gly Ser Leu Arg Arg Lys

130 135 140

Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg

145 150 155 160

His His His Asn Gly Lys Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Gly

165 170 175

Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ala Thr Gln Glu Glu Ala Ala

180 185 190

Val Ala Tyr Asp Ile Ala Ala Ile Glu His Arg Gly Leu Asn Ala Val

195 200 205

Thr Asn Phe Asp Ile Asn Leu Tyr Ile Arg Trp Tyr His Gly Ser Cys

210 215 220

Arg Ser Ser Ser Ala Ala Ala Ala Thr Thr Ile Glu Asp Asp Asp Phe

225 230 235 240

Ala Glu Ala Ile Ala Ala Ala Leu Gln Gly Val Asp Glu Gln Pro Ser

245 250 255

Ser Ser Pro Ala Thr Thr Arg Gln Leu Gln Thr Ala Asp Asp Asp Asp

260 265 270

Asp Asp Leu Val Ala Gln Leu Pro Pro Gln Leu Arg Pro Leu Ala Arg

275 280 285

Ala Ala Ser Thr Ser Pro Ile Gly Leu Leu Leu Arg Ser Pro Lys Phe

290 295 300

Lys Glu Ile Ile Glu Gln Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ser Ser Ser Gly

305 310 315 320

Ser Ser Ser Ser Ser Ser Thr Asp Ser Pro Ser Ser Ser Ser Ser Ser

325 330 335

Ser Leu Ser Pro Ser Pro Leu Pro Ser Pro Pro Pro Gln Gln Gln Pro

340 345 350

Thr Val Pro Lys Asp Asp Gln Tyr Asn Val Asp Met Ser Ser Val Ala

355 360 365

Ala Ala Arg Cys Ser Phe Pro Asp Asp Val Gln Thr Tyr Phe Gly Leu

370 375 380

Asp Asp Asp Gly Phe Gly Tyr Pro Glu Val Asp Thr Phe Leu Phe Gly

385 390 395 400

Asp Leu Gly Ala Tyr Ala Ala Pro Met Phe Gln Phe Glu Leu Asp Val

405 410 415

<210> 53

<211> 440

<212> Белок

<213> Sorghum bicolor

<400> 53

Met Ala Arg Pro Arg Lys Asn Ala Gly Thr Asp Glu Asp Asn Pro Asn

1 5 10 15

Ala Ala Thr Gly Val Ser Val Thr Gly Lys Pro Pro Lys Leu Lys Arg

20 25 30

Val Arg Arg Lys Gly Glu Pro Arg Glu Ser Ser Thr Pro Ser Gln Arg

35 40 45

Ser Ser Ala Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Phe

50 55 60

Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Asp Ala Arg Asn Gly Ser Arg Asn Lys

65 70 75 80

Lys Gly Lys Gln Gly Ala Tyr Asp Asp Glu Glu Ala Ala Ala Arg Ala

85 90 95

His Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro Ala Thr Val Leu Asn

100 105 110

Phe Pro Leu Cys Gly Tyr Asp Glu Glu Leu Arg Glu Met Glu Ala Gln

115 120 125

Pro Arg Glu Glu Tyr Ile Gly Ser Leu Arg Arg Arg Ser Ser Gly Phe

130 135 140

Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn

145 150 155 160

Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Leu Gly Asn Lys Tyr Leu

165 170 175

Tyr Leu Gly Thr Phe Ala Thr Gln Glu Glu Ala Ala Val Ala Tyr Asp

180 185 190

Ile Ala Ala Ile Glu His Arg Gly Leu Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp

195 200 205

Ile Ser His Tyr Val Asn His Trp His Arg His Cys His Gly Pro Ser

210 215 220

Asp Asp Ser Leu Gly Val Val Val Asp Asp Val Ala Ala Phe Gln Leu

225 230 235 240

Pro Asp Asp Leu Pro Glu Cys Pro Ala Ala Ala Ile Gly Val Glu Glu

245 250 255

Thr Thr Gly Gly Asp Ala Glu Phe His Asn Gly Glu Glu Gly Tyr Leu

260 265 270

Gln His His Thr Ser Gly Pro Phe Gly Ala Gln Gln Gln Leu Pro Asp

275 280 285

Glu Thr Gly Ala Leu Ala Ala His Gln Met Ala Pro Asn Ser Ser Ala

290 295 300

Leu Asp Met Val Leu Gln Ser Pro Lys Phe Lys Glu Leu Met Glu Gln

305 310 315 320

Val Ser Ala Ala Ala Ala Ala Val Ala Ser Glu Ser Ser Ile Gly Gly

325 330 335

Ser Met Ser Ser Ser Ser Pro Ser Pro Ser Leu Ser Ser Phe Ser Pro

340 345 350

Ser Pro Leu Gln Leu Pro Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ser Phe Ser Pro

355 360 365

Ser Ser Pro Leu Gln Gln Pro Ser Pro Pro Leu Gln Gln Pro Glu Phe

370 375 380

Val Glu Gly Ala Pro Ala Ala Arg Cys Ser Phe Pro Asp Asp Val Gln

385 390 395 400

Thr Phe Phe Asp Phe Glu Asn Glu Ser Asp Met Ser Phe Met Tyr Ala

405 410 415

Glu Val Asp Thr Phe Leu Phe Gly Asp Leu Gly Ala Tyr Ala Ala Pro

420 425 430

Ile Phe His Phe Asp Leu Asp Val

435 440

<210> 54

<211> 408

<212> Белок

<213> Zea mays

<400> 54

Met Ala Arg Pro Arg Lys Asn Gly Gly Thr Asp Glu Asp Asp Ala Asn

1 5 10 15

Ala Ala Thr Gly Ala Thr Gly Lys Pro Lys Lys Leu Met Lys Arg Ala

20 25 30

Arg Arg Lys Ser Glu Ser Pro Ser Pro Arg Ser Ser Ala Tyr Arg Gly

35 40 45

Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Phe Glu Ala His Leu Trp Asp

50 55 60

Lys Asp Ala Arg Asn Gly Ser Arg Ser Lys Lys Gly Lys Gln Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gly Ala Tyr Asp Asp Glu Asp Ala Ala Ala Arg Ala His Asp Leu

85 90 95

Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro Ala Gly Thr Val Leu Asn Phe Pro

100 105 110

Leu Ser Gly Tyr Asp Glu Glu Arg Arg Glu Met Glu Gly Gln Pro Arg

115 120 125

Glu Glu Tyr Val Ala Ser Leu Arg Arg Arg Ser Ser Gly Phe Ala Arg

130 135 140

Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn Gly Arg

145 150 155 160

Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Leu Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu

165 170 175

Gly Thr Tyr Ala Thr Gln Glu Glu Ala Ala Val Ala Tyr Asp Met Ala

180 185 190

Ala Ile Glu His Arg Gly Phe Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Ile Ser

195 200 205

His Tyr Ile Asn His Trp His Arg His Cys His Gly Pro Cys Asp Gly

210 215 220

Ser Leu Gly Ala Met Asp Val Ala Pro Asn Val Ser Leu Glu Leu Asp

225 230 235 240

Leu Leu Glu Cys Pro Ala Thr Val Gly Leu Gly Leu Glu Glu Thr Thr

245 250 255

Gly Asp Asp Glu Phe His Asn Arg Glu Asp Tyr Leu Gly His Leu Phe

260 265 270

Gly Val Gln Gln Leu Pro Asp Glu Met Gly Pro Pro Ala His Gln Met

275 280 285

Ala Pro Ala Ser Ser Ala Leu Asp Leu Val Leu Gln Ser Pro Arg Phe

290 295 300

Lys Glu Leu Met Gln Gln Val Ser Ala Ala Gly Ala Ser Glu Thr Asn

305 310 315 320

Gly Gly Ser Met Arg Ser Ser Pro Ser Thr Ser Leu Cys Ser Phe Ser

325 330 335

Pro Ser Pro Leu Glu Leu Pro Ser Pro Pro Leu Gln Gln Pro Thr Glu

340 345 350

Phe Ile Asp Gly Ala Pro Pro Arg Cys Ser Phe Pro Asp Asp Val Gln

355 360 365

Ser Phe Phe Asp Phe Lys Asn Asp Asn Asp Met Ser Phe Val Tyr Ala

370 375 380

Glu Val Asp Thr Phe Leu Phe Gly Asp Leu Gly Ala Tyr Ala Pro Pro

385 390 395 400

Met Phe Asp Phe Asp Leu Tyr Glu

405

<210> 55

<211> 304

<212> Белок

<213> Arabidopsis lyrata

<400> 55

Met Ala Lys Val Ser Arg Arg Ser Lys Lys Thr Ile Val Glu Asp Glu

1 5 10 15

Ile Ser Asp Lys Thr Ala Ser Ala Ser Glu Ala Ala Ser Ile Val Phe

20 25 30

Lys Ser Lys Arg Lys Arg Lys Ser Pro Pro Arg Asn Ala Pro Pro Gln

35 40 45

Arg Ser Ser Pro Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg

50 55 60

Tyr Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Asn Ser Trp Asn Glu Thr Gln Thr

65 70 75 80

Lys Lys Gly Arg Gln Val Tyr Ile Gly Ala Tyr Asp Glu Glu Glu Ala

85 90 95

Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Arg Asp

100 105 110

Thr Leu Leu Asn Phe Pro Leu Leu Ile Tyr Asp Glu Asp Val Lys Glu

115 120 125

Met Glu Gly Gln Ser Lys Glu Glu Tyr Ile Gly Ser Leu Arg Arg Lys

130 135 140

Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg

145 150 155 160

His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Gly

165 170 175

Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ala Thr Gln Glu Glu Ala Ala

180 185 190

Ile Ala Tyr Asp Ile Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Leu Asn Ala Val

195 200 205

Thr Asn Phe Asp Val Ser Arg Tyr Leu Asn Pro Asp Ala Ala Asp Ser

210 215 220

Lys Pro Ile Arg Asn Asp Pro Glu Ser Ser Asp Asp Asn Lys Cys Pro

225 230 235 240

Lys Ser Glu Glu Ile Ile Glu Pro Ser Thr Ser Pro Glu Ala Ile Thr

245 250 255

Thr Arg Arg Ser Phe Pro Asp Asp Ile Gln Thr Tyr Phe Gly Cys Gln

260 265 270

Asp Ser Gly Lys Leu Ala Thr Glu Glu Asp Val Ile Phe Gly Gly Leu

275 280 285

Asn Ser Phe Ile Asn Pro Gly Phe Tyr Asn Glu Phe Asp Tyr Gly Pro

290 295 300

<210> 56

<211> 308

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 56

Met Ala Lys Val Ser Gly Arg Ser Lys Lys Thr Ile Val Asp Asp Glu

1 5 10 15

Ile Ser Asp Lys Thr Ala Ser Ala Ser Glu Ser Ala Ser Ile Ala Leu

20 25 30

Thr Ser Lys Arg Lys Arg Lys Ser Pro Pro Arg Asn Ala Pro Leu Gln

35 40 45

Arg Ser Ser Pro Tyr Arg Gly Val Thr Arg Trp Thr Gly Arg Tyr Glu

50 55 60

Ala His Leu Trp Asp Lys Asn Ser Trp Asn Asp Thr Gln Thr Lys Lys

65 70 75 80

Gly Arg Gln Gly Ala Tyr Asp Glu Glu Glu Ala Ala Ala Arg Ala Tyr

85 90 95

Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Arg Asp Thr Leu Leu Asn Phe

100 105 110

Pro Leu Pro Ser Tyr Asp Glu Asp Val Lys Glu Met Glu Gly Gln Ser

115 120 125

Lys Glu Glu Tyr Ile Gly Ser Leu Arg Arg Lys Ser Ser Gly Phe Ser

130 135 140

Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn Gly

145 150 155 160

Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr

165 170 175

Leu Gly Thr Tyr Ala Thr Gln Glu Glu Ala Ala Ile Ala Tyr Asp Ile

180 185 190

Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Leu Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Val

195 200 205

Ser Arg Tyr Leu Asn Pro Asn Ala Ala Ala Asp Lys Ala Asp Ser Asp

210 215 220

Ser Lys Pro Ile Arg Ser Pro Ser Arg Glu Pro Glu Ser Ser Asp Asp

225 230 235 240

Asn Lys Ser Pro Lys Ser Glu Glu Val Ile Glu Pro Ser Thr Ser Pro

245 250 255

Glu Val Ile Pro Thr Arg Arg Ser Phe Pro Asp Asp Ile Gln Thr Tyr

260 265 270

Phe Gly Cys Gln Asp Ser Gly Lys Leu Ala Thr Glu Glu Asp Val Ile

275 280 285

Phe Asp Cys Phe Asn Ser Tyr Ile Asn Pro Gly Phe Tyr Asn Glu Phe

290 295 300

Asp Tyr Gly Pro

305

<210> 57

<211> 303

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 57

Met Ala Lys Val Ser Gly Arg Ser Lys Lys Thr Ile Val Asp Asp Glu

1 5 10 15

Ile Ser Asp Lys Thr Ala Ser Ala Ser Glu Ser Ala Ser Ile Ala Leu

20 25 30

Thr Ser Lys Arg Lys Arg Lys Ser Pro Pro Arg Asn Ala Pro Leu Gln

35 40 45

Arg Ser Ser Pro Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg

50 55 60

Tyr Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Asn Ser Trp Asn Asp Thr Gln Thr

65 70 75 80

Lys Lys Gly Arg Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asp Glu Glu Glu Ala

85 90 95

Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Arg Asp

100 105 110

Thr Leu Leu Asn Phe Pro Leu Pro Ser Tyr Asp Glu Asp Val Lys Glu

115 120 125

Met Glu Gly Gln Ser Lys Glu Glu Tyr Ile Gly Ser Leu Arg Arg Lys

130 135 140

Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg

145 150 155 160

His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Ala

165 170 175

Thr Gln Glu Glu Ala Ala Ile Ala Tyr Asp Ile Ala Ala Ile Glu Tyr

180 185 190

Arg Gly Leu Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Val Ser Arg Tyr Leu Asn

195 200 205

Pro Asn Ala Ala Ala Asp Lys Ala Asp Ser Asp Ser Lys Pro Ile Arg

210 215 220

Ser Pro Ser Arg Glu Pro Glu Ser Ser Asp Asp Asn Lys Ser Pro Lys

225 230 235 240

Ser Glu Glu Val Ile Glu Pro Ser Thr Ser Pro Glu Val Ile Pro Thr

245 250 255

Arg Arg Ser Phe Pro Asp Asp Ile Gln Thr Tyr Phe Gly Cys Gln Asp

260 265 270

Ser Gly Lys Leu Ala Thr Glu Glu Asp Val Ile Phe Asp Cys Phe Asn

275 280 285

Ser Tyr Ile Asn Pro Gly Phe Tyr Asn Glu Phe Asp Tyr Gly Pro

290 295 300

<210> 58

<211> 332

<212> Белок

<213> Arabidopsis lyrata

<400> 58

Met Glu Glu Ile Thr Arg Lys Ser Lys Lys Thr Ser Val Glu Asn Glu

1 5 10 15

Thr Gly Asp Asp Gln Ser Ala Thr Ser Val Val Val Lys Ala Lys Arg

20 25 30

Lys Arg Arg Ser Gln Pro Arg Asp Ala Pro Pro Gln Arg Ser Ser Val

35 40 45

His Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Tyr Glu Ala His

50 55 60

Leu Trp Asp Lys Asn Ser Trp Asn Glu Thr Gln Ser Lys Lys Gly Arg

65 70 75 80

Gln Gly Ala Tyr Asp Glu Glu Asp Ala Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu

85 90 95

Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Arg Asp Thr Ile Leu Asn Phe Pro Leu

100 105 110

Cys Asn Tyr Glu Glu Asp Ile Lys Glu Met Glu Ser Gln Ser Lys Glu

115 120 125

Glu Tyr Ile Gly Ser Leu Arg Arg Lys Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly

130 135 140

Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Lys His His His Asn Gly Arg Trp

145 150 155 160

Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly

165 170 175

Thr Tyr Ala Thr Gln Glu Glu Ala Ala Ile Ala Tyr Asp Ile Ala Ala

180 185 190

Ile Glu Tyr Arg Gly Leu Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Ile Ser Arg

195 200 205

Tyr Met Lys Leu Pro Val Pro Glu Asn Pro Ile Asp Ala Ala Asn Asn

210 215 220

Leu Leu Glu Ser Pro His Ser Asp Ser Ser Pro Phe Ile Asn Pro Thr

225 230 235 240

His Glu Ser Asp Leu Ser Gln Ser Gln Ser Ser Ser Asp Asp Asn Asp

245 250 255

Asp Arg Lys Thr Lys Leu Leu Lys Ser Ser Pro Leu Asn Ala Glu Glu

260 265 270

Val Ile Gly Pro Ser Thr Pro Pro Glu Ile Ala Pro Pro Arg Arg Ser

275 280 285

Phe Pro Glu Asp Ile Gln Thr Tyr Phe Gly Cys Gln Asn Ser Gly Lys

290 295 300

Leu Thr Thr Glu Glu Asp Asp Val Ile Phe Gly Asp Leu Asp Ser Phe

305 310 315 320

Leu Thr Pro Asp Phe Tyr Ser Glu Leu Asn Asp Cys

325 330

<210> 59

<211> 328

<212> Белок

<213> Thellungiella halophila

<400> 59

Met Ala Lys Val Ser Gln Arg Ser Lys Lys Thr Ile Val Asn Asp Glu

1 5 10 15

Ile Ser Asp Lys Lys Ala Val Ala Val Ala Ser Val Ser Ser Ser Ala

20 25 30

Phe Leu Lys Ser Lys Arg Lys Arg Lys Leu Pro Pro Gln Asn Ala Pro

35 40 45

Pro Gln Arg Ser Ser Ser Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr

50 55 60

Gly Arg Tyr Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Asn Cys Trp Asn Glu Thr

65 70 75 80

Gln Thr Lys Lys Gly Arg Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asp Glu Glu

85 90 95

Glu Ala Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly

100 105 110

Arg Asp Thr Leu Leu Asn Phe Pro Leu Pro Thr Tyr Glu Glu Asp Val

115 120 125

Lys Glu Met Glu Gly His Ser Arg Glu Glu Tyr Ile Gly Ser Leu Arg

130 135 140

Arg Lys Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val

145 150 155 160

Ala Arg His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val

165 170 175

Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ala Thr Gln Glu Glu

180 185 190

Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Ile Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Leu Asn

195 200 205

Ala Val Thr Asn Phe Asp Val Ser Arg Tyr Leu Asn Leu Pro Glu Ser

210 215 220

Lys Asn Pro Ser Ala Ala Ala Asn His Leu Pro Asp Glu Ser Asp Tyr

225 230 235 240

Tyr Asp Ser Met Pro Val Arg Asn Pro Asn His Glu Pro Arg Ser Pro

245 250 255

Asp Gly Gln Thr Ser Ser Glu Asp Asn Asp Tyr Thr Lys Thr Glu Glu

260 265 270

Thr Leu Asp Pro Glu Ala Ile Pro Ser Arg Arg Ser Phe Pro Asp Asp

275 280 285

Ile Gln Thr Tyr Phe Gly Cys Gln Asp Ser Gly Lys Leu Ala Thr Glu

290 295 300

Glu Asp Val Ile Phe Gly Gly Phe Asn Ser Phe Ile Asn Pro Gly Phe

305 310 315 320

Tyr Asn Asp Phe Asp Tyr Ala Pro

325

<210> 60

<211> 345

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 60

Met Phe Ile Ala Val Glu Val Ser Pro Val Met Glu Asp Ile Thr Arg

1 5 10 15

Gln Ser Lys Lys Thr Ser Val Glu Asn Glu Thr Gly Asp Asp Gln Ser

20 25 30

Ala Thr Ser Val Val Leu Lys Ala Lys Arg Lys Arg Arg Ser Gln Pro

35 40 45

Arg Asp Ala Pro Pro Gln Arg Ser Ser Val His Arg Gly Val Thr Arg

50 55 60

His Arg Trp Thr Gly Arg Tyr Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Asn Ser

65 70 75 80

Trp Asn Glu Thr Gln Thr Lys Lys Gly Arg Gln Val Tyr Leu Gly Ala

85 90 95

Tyr Asp Glu Glu Asp Ala Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu

100 105 110

Lys Tyr Trp Gly Arg Asp Thr Ile Leu Asn Phe Pro Leu Cys Asn Tyr

115 120 125

Glu Glu Asp Ile Lys Glu Met Glu Ser Gln Ser Lys Glu Glu Tyr Ile

130 135 140

Gly Ser Leu Arg Arg Lys Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys

145 150 155 160

Tyr Arg Gly Val Ala Lys His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg

165 170 175

Ile Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ala

180 185 190

Thr Gln Glu Glu Ala Ala Ile Ala Tyr Asp Ile Ala Ala Ile Glu Tyr

195 200 205

Arg Gly Leu Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Ile Ser Arg Tyr Leu Lys

210 215 220

Leu Pro Val Pro Glu Asn Pro Ile Asp Thr Ala Asn Asn Leu Leu Glu

225 230 235 240

Ser Pro His Ser Asp Leu Ser Pro Phe Ile Lys Pro Asn His Glu Ser

245 250 255

Asp Leu Ser Gln Ser Gln Ser Ser Ser Glu Asp Asn Asp Asp Arg Lys

260 265 270

Thr Lys Leu Leu Lys Ser Ser Pro Leu Val Ala Glu Glu Val Ile Gly

275 280 285

Pro Ser Thr Pro Pro Glu Ile Ala Pro Pro Arg Arg Ser Phe Pro Glu

290 295 300

Asp Ile Gln Thr Tyr Phe Gly Cys Gln Asn Ser Gly Lys Leu Thr Ala

305 310 315 320

Glu Glu Asp Asp Val Ile Phe Gly Asp Leu Asp Ser Phe Leu Thr Pro

325 330 335

Asp Phe Tyr Ser Glu Leu Asn Asp Cys

340 345

<210> 61

<211> 299

<212> Белок

<213> Glycine max

<400> 61

Met Ala Lys Lys Ser Gln Lys Ser Leu Lys Asn Asn Asn Asn Asn Asn

1 5 10 15

Thr Thr Arg Lys Arg Thr Arg Lys Ser Val Pro Arg Asp Ser Pro Pro

20 25 30

Gln Arg Ser Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly

35 40 45

Arg Tyr Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Asn Cys Trp Asn Glu Ser Gln

50 55 60

Ser Lys Lys Gly Arg Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asp Asp Glu Glu

65 70 75 80

Ala Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Gln

85 90 95

Asp Thr Ile Leu Asn Phe Pro Leu Ser Asn Tyr Glu Glu Lys Leu Lys

100 105 110

Glu Met Glu Gly Gln Ser Lys Glu Glu Tyr Ile Gly Ser Leu Arg Arg

115 120 125

Lys Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala

130 135 140

Arg His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe

145 150 155 160

Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ala Thr Gln Glu Glu Ala

165 170 175

Ala Ala Ala Tyr Asp Met Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Leu Asn Ala

180 185 190

Val Thr Asn Phe Asp Leu Ser Arg Tyr Ile Asn Trp Pro Arg Pro Lys

195 200 205

Thr Glu Glu Asn His Gln Asn Thr Pro Ser Asn Gln Asn Val Asn Ser

210 215 220

Asn Ala Glu Leu Glu Leu Gly Ser Ala Ser Asp Glu Ile Thr Glu Glu

225 230 235 240

Gly Val Ala Arg Ser Ser Glu Ser Glu Ser Asn Pro Ser Arg Arg Thr

245 250 255

Phe Pro Glu Asp Ile Gln Thr Ile Phe Glu Asn Asn Gln Asp Ser Gly

260 265 270

Ile Tyr Ile Glu Asn Asp Asp Ile Ile Phe Gly Asp Leu Gly Ser Phe

275 280 285

Gly Ala Pro Ile Phe His Phe Glu Leu Asp Val

290 295

<210> 62

<211> 393

<212> Белок

<213> Brachypodium distachyon

<400> 62

Met Ala Lys Pro Arg Lys Asn Ser Ala Ala Ala Asn Asn Asn Asn Asn

1 5 10 15

Asp Asn Ser Thr Asn Ala Asn Asn Ala Val Ala Glu Ala Ala Ala Ala

20 25 30

Asp Val Arg Ala Lys Pro Lys Lys Arg Thr Arg Lys Ser Val Pro Arg

35 40 45

Glu Ser Pro Ser Gln Arg Ser Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His

50 55 60

Arg Trp Thr Gly Arg Phe Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Asn Ser Trp

65 70 75 80

Asn Glu Ser Gln Asn Lys Lys Gly Lys Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr

85 90 95

Asp Glu Glu Glu Ala Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys

100 105 110

Tyr Trp Gly Pro Asp Thr Ile Leu Asn Phe Pro Leu Ser Val Tyr Asp

115 120 125

Asp Glu Leu Lys Glu Met Glu Gly Gln Ser Arg Glu Glu Tyr Ile Gly

130 135 140

Ser Leu Arg Arg Lys Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr

145 150 155 160

Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile

165 170 175

Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ala Thr

180 185 190

Gln Glu Glu Ala Ala Met Ala Tyr Asp Met Ala Ala Ile Glu Tyr Arg

195 200 205

Gly Leu Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Leu Ser Arg Tyr Ile Lys Trp

210 215 220

Leu Arg Pro Gly Gly Gly Val Asp Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Arg

225 230 235 240

Asn Pro His Pro Met Leu Ala Gly Leu Ala Thr Gln Glu Glu Leu Pro

245 250 255

Ala Ile Asp His Leu Leu Asp Gly Met Ala Phe Gln Gln His Gly Leu

260 265 270

His Ser Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gln Glu Phe Pro Leu Pro

275 280 285

Pro Ala Leu Gly His Ala Pro Thr Thr Ser Ala Leu Ser Leu Leu Leu

290 295 300

Gln Ser Pro Lys Phe Lys Glu Met Ile Glu Arg Thr Ser Ala Ala Glu

305 310 315 320

Thr Thr Thr Thr Ala Thr Thr Thr Ser Ser Ser Ser Ser Pro Arg Pro

325 330 335

Ala Ala Ser Pro Gln Cys Ser Phe Pro Glu Asp Ile Gln Thr Phe Phe

340 345 350

Gly Cys Asp Asp Gly Val Gly Val Gly Val Gly Ala Val Gly Tyr Thr

355 360 365

Asp Val Asp Gly Leu Phe Phe Gly Asp Leu Ser Ala Tyr Ala Ser Ser

370 375 380

Thr Ala Phe His Phe Glu Leu Asp Leu

385 390

<210> 63

<211> 379

<212> Белок

<213> Oryza sativa

<400> 63

Met Ala Lys Pro Arg Lys Asn Ser Thr Thr Thr Asn Thr Ser Ser Ser

1 5 10 15

Gly Val Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Val Lys Pro Lys Arg Thr

20 25 30

Arg Lys Ser Val Pro Arg Glu Ser Pro Ser Gln Arg Ser Ser Val Tyr

35 40 45

Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Phe Glu Ala His Leu

50 55 60

Trp Asp Lys Asn Ser Trp Asn Glu Ser Gln Asn Lys Lys Gly Lys Gln

65 70 75 80

Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asp Asp Glu Glu Ala Ala Ala Arg Ala Tyr

85 90 95

Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro Asp Thr Ile Leu Asn Phe

100 105 110

Pro Leu Ser Ala Tyr Glu Gly Glu Leu Lys Glu Met Glu Gly Gln Ser

115 120 125

Arg Glu Glu Tyr Ile Gly Ser Leu Arg Arg Lys Ser Ser Gly Phe Ser

130 135 140

Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn Gly

145 150 155 160

Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr

165 170 175

Leu Gly Thr Tyr Ala Thr Gln Glu Glu Ala Ala Met Ala Tyr Asp Met

180 185 190

Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Leu Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Leu

195 200 205

Ser Arg Tyr Ile Lys Trp Leu Arg Pro Gly Ala Asp Gly Ala Gly Ala

210 215 220

Ala Gln Asn Pro His Pro Met Leu Gly Ala Leu Ser Ala Gln Asp Leu

225 230 235 240

Pro Ala Ile Asp Leu Asp Ala Met Ala Ser Ser Phe Gln His Asp Gly

245 250 255

His Gly Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gln Leu Ile Pro Ala Arg His Ser

260 265 270

Leu Gly His Thr Pro Thr Thr Ser Ala Leu Ser Leu Leu Leu Gln Ser

275 280 285

Pro Lys Phe Lys Glu Met Ile Glu Arg Thr Ser Ala Ala Glu Thr Thr

290 295 300

Thr Thr Ser Ser Thr Thr Thr Ser Ser Ser Ser Pro Ser Pro Pro Gln

305 310 315 320

Ala Thr Lys Asp Asp Gly Ala Ser Pro Gln Cys Ser Phe Pro Lys Asp

325 330 335

Ile Gln Thr Tyr Phe Gly Cys Ala Ala Glu Asp Gly Ala Ala Gly Ala

340 345 350

Gly Tyr Ala Asp Val Asp Gly Leu Phe Phe Gly Asp Leu Thr Ala Tyr

355 360 365

Ala Ser Pro Ala Phe His Phe Glu Leu Asp Leu

370 375

<210> 64

<211> 398

<212> Белок

<213> Sorghum bicolor

<400> 64

Met Ala Lys Pro Arg Lys Asn Ser Ala Ala Ala Asn Asn Asn Asn Ser

1 5 10 15

Ser Ser Asn Gly Ala Gly Asp Leu Thr Pro Arg Ala Lys Pro Lys Arg

20 25 30

Thr Arg Lys Ser Val Pro Arg Glu Ser Pro Thr Gln Arg Ser Ser Val

35 40 45

Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Phe Glu Ala His

50 55 60

Leu Trp Asp Lys Asn Ser Trp Asn Glu Ser Gln Asn Lys Lys Gly Lys

65 70 75 80

Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asp Asp Glu Glu Ala Ala Ala Arg Ala

85 90 95

Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro Asp Thr Ile Leu Asn

100 105 110

Phe Pro Ala Ser Ala Tyr Glu Gly Glu Met Lys Gly Met Glu Gly Gln

115 120 125

Ser Arg Glu Glu Tyr Ile Gly Ser Leu Arg Arg Lys Ser Ser Gly Phe

130 135 140

Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn

145 150 155 160

Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu

165 170 175

Tyr Leu Gly Thr Tyr Ala Thr Gln Glu Glu Ala Ala Met Ala Tyr Asp

180 185 190

Met Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Leu Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp

195 200 205

Leu Ser Arg Tyr Ile Lys Trp Leu Arg Pro Gly Ala Gly Gly Met Ala

210 215 220

Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gln Asn Pro His Pro Met Leu Gly Gly Leu

225 230 235 240

Ala Gln Gln Leu Leu Leu Pro Pro Pro Ala Asp Thr Thr Thr Thr Asp

245 250 255

Gly Ala Gly Ala Ala Ala Phe Gln His Asp His His Gly Ala Glu Ala

260 265 270

Phe Pro Leu Pro Pro Arg Thr Ser Leu Gly His Thr Pro Thr Thr Ser

275 280 285

Ala Leu Ser Leu Leu Leu Gln Ser Pro Lys Phe Lys Glu Met Ile Gln

290 295 300

Arg Thr Glu Ser Gly Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Ser Ser Leu

305 310 315 320

Ser Ser Ser Pro Pro Pro Thr Pro Ser Pro Ser Pro Pro Arg Arg Ser

325 330 335

Pro Ala Pro Thr Gln Pro Pro Val Gln Ala Ala Ala Arg Asp Ala Ser

340 345 350

Pro His Gln Arg Gly Phe Pro Glu Asp Val Gln Thr Phe Phe Gly Cys

355 360 365

Glu Asp Thr Ala Gly Ile Asp Val Glu Ala Leu Phe Phe Gly Asp Leu

370 375 380

Ala Ala Tyr Ala Thr Pro Ala Phe His Phe Glu Met Asp Leu

385 390 395

<210> 65

<211> 396

<212> Белок

<213> Zea mays

<400> 65

Met Ala Arg Pro Arg Lys Asn Ser Ala Ala Ala Ala Asn Asn Asn Asn

1 5 10 15

Ser Asn Thr Thr Asn Ala Gly Asn Ala Ala Val Asp Leu Ala Ala Arg

20 25 30

Val Lys Pro Lys Arg Thr Arg Lys Ser Val Pro Arg Glu Ser Pro Ser

35 40 45

Gln Arg Ser Ser Val Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly

50 55 60

Arg Phe Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Asn Ser Trp Asn Glu Ser Gln

65 70 75 80

Asn Lys Lys Gly Lys Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asp Asp Glu Asp

85 90 95

Ala Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro

100 105 110

Asp Thr Ile Leu Asn Phe Pro Ala Ser Ala Tyr Glu Ala Glu Leu Lys

115 120 125

Glu Met Glu Gly Gln Ser Arg Glu Glu Tyr Ile Gly Ser Leu Arg Arg

130 135 140

Lys Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala

145 150 155 160

Arg His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe

165 170 175

Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Gly Thr Gln Glu Glu Ala

180 185 190

Ala Met Ala Tyr Asp Met Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Leu Asn Ala

195 200 205

Val Thr Asn Phe Asp Leu Ser Arg Tyr Ile Lys Trp Leu Arg Pro Gly

210 215 220

Ala Gly Ala Ala Gln Asn Pro His Pro Met Leu Asp Gly Leu Ala Gln

225 230 235 240

Gln Leu Leu Leu Ser Pro Glu Gly Thr Ile Asp Gly Ala Ala Phe His

245 250 255

Gln Gln Gln His Asp His Arg Gln Gln Gly Ala Ala Glu Leu Pro Leu

260 265 270

Pro Pro Arg Ala Ser Leu Gly His Thr Pro Thr Thr Ser Ala Leu Gly

275 280 285

Leu Leu Leu Gln Ser Ser Lys Phe Lys Glu Met Ile Gln Arg Ala Ser

290 295 300

Ala Ala Glu Ser Gly Thr Thr Thr Val Thr Thr Thr Ser Ser Ser Ser

305 310 315 320

Ser Gln Pro Pro Thr Pro Thr Pro Thr Pro Ser Pro Ser Pro Pro Pro

325 330 335

Thr Pro Pro Val Gln Pro Ala Arg Asp Ala Ser Pro Gln Cys Ser Phe

340 345 350

Pro Glu Asp Ile Gln Thr Phe Phe Gly Cys Glu Asp Val Ala Gly Val

355 360 365

Gly Ala Gly Val Asp Val Asp Ala Leu Phe Phe Gly Asp Leu Ala Ala

370 375 380

Tyr Ala Ser Pro Ala Phe His Phe Glu Met Asp Leu

385 390 395

<210> 66

<211> 362

<212> Белок

<213> Glycine max

<400> 66

Met Ala Lys Lys Ser Gln Leu Arg Thr Gln Lys Asn Asn Ala Thr Asn

1 5 10 15

Asp Asp Ile Asn Leu Asn Ala Thr Asn Thr Val Ile Thr Lys Val Lys

20 25 30

Arg Thr Arg Arg Ser Val Pro Arg Asp Ser Pro Pro Gln Arg Ser Ser

35 40 45

Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Tyr Glu Ala

50 55 60

His Leu Trp Asp Lys His Cys Trp Asn Glu Ser Gln Asn Lys Lys Gly

65 70 75 80

Arg Gln Gly Ala Tyr Asp Asn Glu Glu Ala Ala Ala His Ala Tyr Asp

85 90 95

Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Gln Asp Thr Ile Leu Asn Phe Pro

100 105 110

Leu Ser Asn Tyr Leu Asn Glu Leu Lys Glu Met Glu Gly Gln Ser Arg

115 120 125

Glu Glu Tyr Ile Gly Ser Leu Arg Arg Lys Ser Ser Gly Phe Ser Arg

130 135 140

Gly Ile Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn Gly Arg

145 150 155 160

Trp Glu Ala Arg Ile Gly Lys Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu

165 170 175

Gly Thr Tyr Ala Thr Gln Glu Glu Ala Ala Thr Ala Tyr Asp Leu Ala

180 185 190

Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Leu Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Leu Ser

195 200 205

Arg Tyr Ile Lys Trp Leu Lys Pro Asn Asn Thr Asn Ser Asn Asn Asp

210 215 220

Gln Ile Ser Ile Asn Leu Thr Asn Ile Asn Asn Asn Cys Thr Asn Asn

225 230 235 240

Phe Ile Pro Asn Pro Asp Gln Glu Gln Glu Val Ser Phe Phe His Asn

245 250 255

Gln Asp Ser Leu Asn Asn Thr Ile Val Glu Glu Ala Thr Leu Val Pro

260 265 270

His Gln Pro Arg Pro Ala Ser Ala Thr Leu Ala Leu Glu Leu Leu Leu

275 280 285

Gln Ser Ser Lys Phe Lys Glu Met Val Glu Met Thr Ser Val Ala Asn

290 295 300

Leu Ser Thr Gln Met Glu Ser Asp Gln Leu Pro Gln Cys Thr Phe Pro

305 310 315 320

Asp His Ile Gln Thr Tyr Phe Glu Tyr Glu Asp Ser Asn Lys Tyr Glu

325 330 335

Glu Gly Asp Asp Leu Leu Phe Lys Phe Ser Glu Phe Ser Ser Ile Val

340 345 350

Pro Phe Tyr His Cys Asp Glu Phe Glu Ser

355 360

<210> 67

<211> 370

<212> Белок

<213> Glycine max

<400> 67

Met Ala Lys Lys Ser Gln Leu Arg Thr Gln Lys Asn Asn Val Thr Thr

1 5 10 15

Asn Asp Asp Asn Asn Leu Asn Val Thr Asn Thr Val Thr Thr Lys Val

20 25 30

Lys Arg Thr Arg Arg Ser Val Pro Arg Asp Ser Pro Pro Gln Arg Ser

35 40 45

Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Tyr Glu

50 55 60

Ala His Leu Trp Asp Lys His Cys Trp Asn Glu Ser Gln Asn Lys Lys

65 70 75 80

Gly Arg Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asp Asn Glu Glu Ala Ala Ala

85 90 95

His Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Gln Asp Thr Ile

100 105 110

Leu Asn Phe Pro Leu Ser Asn Tyr Leu Asn Glu Leu Lys Glu Met Glu

115 120 125

Gly Gln Ser Arg Glu Glu Tyr Ile Gly Ser Leu Arg Arg Lys Ser Ser

130 135 140

Gly Phe Ser Arg Gly Ile Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His

145 150 155 160

His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Lys Val Phe Gly Asn Lys

165 170 175

Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ala Thr Gln Glu Glu Ala Ala Thr Ala

180 185 190

Tyr Asp Leu Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Leu Asn Ala Val Thr Asn

195 200 205

Phe Asp Leu Ser Arg Tyr Ile Lys Trp Leu Lys Pro Asn Asn Asn Thr

210 215 220

Asn Asn Val Ile Asp Asp Gln Ile Ser Ile Asn Leu Thr Asn Ile Asn

225 230 235 240

Asn Asn Asn Asn Cys Thr Asn Ser Phe Thr Pro Ser Pro Asp Gln Glu

245 250 255

Gln Glu Ala Ser Phe Phe His Asn Lys Asp Ser Leu Asn Asn Thr Ile

260 265 270

Val Glu Glu Val Thr Leu Val Pro His Gln Pro Arg Pro Ala Ser Ala

275 280 285

Thr Ser Ala Leu Glu Leu Leu Leu Gln Ser Ser Lys Phe Lys Glu Met

290 295 300

Met Glu Met Thr Ser Val Ala Asn Leu Ser Ser Thr Gln Met Glu Ser

305 310 315 320

Glu Leu Pro Gln Cys Thr Phe Pro Asp His Ile Gln Thr Tyr Phe Glu

325 330 335

Tyr Glu Asp Ser Asn Arg Tyr Glu Glu Gly Asp Asp Leu Met Phe Lys

340 345 350

Phe Asn Glu Phe Ser Ser Ile Val Pro Phe Tyr Gln Cys Asp Glu Phe

355 360 365

Glu Ser

370

<210> 68

<211> 356

<212> Белок

<213> Medicago truncatula

<400> 68

Met Ala Lys Lys Ser Gln Lys Gln Ile Glu Lys Asp Asp Asn Ala Ser

1 5 10 15

Asn Asp Asn Asp Asn Leu Asn Pro Ser Asn Thr Val Thr Thr Lys Ala

20 25 30

Lys Arg Thr Arg Lys Ser Val Pro Arg Thr Ser Pro Pro Gln Arg Ser

35 40 45

Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Tyr Glu

50 55 60

Ala His Leu Trp Asp Lys Asn Cys Trp Asn Glu Ser Gln Asn Lys Lys

65 70 75 80

Gly Arg Gln Gly Ala Tyr Asp Asn Glu Glu Thr Ala Ala His Ala Tyr

85 90 95

Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Gln Asp Thr Ile Ile Asn Phe

100 105 110

Pro Leu Ser Asn Tyr Gln Lys Glu Leu Ile Glu Met Glu Ser Gln Ser

115 120 125

Arg Glu Glu Tyr Ile Gly Ser Leu Arg Arg Lys Ser Ser Gly Phe Ser

130 135 140

Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn Gly

145 150 155 160

Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Lys Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr

165 170 175

Leu Gly Thr Tyr Ala Thr Gln Glu Glu Ala Ala Thr Ala Tyr Asp Met

180 185 190

Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Leu Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Leu

195 200 205

Ser Arg Tyr Ile Lys Trp Leu Lys Pro Asn Asn Asn Asn Asn Asp Asp

210 215 220

Asn Asn Lys Ser Asn Ile Asn Leu Cys Asp Ile Asn Ser Asn Ser Ser

225 230 235 240

Ala Asn Asp Ser Asn Ser Asn Glu Glu Leu Glu Phe Ser Leu Val Asp

245 250 255

Asn Glu Ile Ser Leu Asn Asn Ser Ile Asp Glu Ala Thr Leu Val Gln

260 265 270

Pro Arg Pro Thr Ser Ala Thr Ser Ala Leu Glu Leu Leu Leu Gln Ser

275 280 285

Ser Lys Phe Lys Glu Met Val Glu Met Ala Ser Met Thr Ser Asn Val

290 295 300

Ser Thr Thr Leu Glu Ser Asp Gln Leu Ser Gln Cys Ala Phe Pro Asp

305 310 315 320

Asp Ile Gln Thr Tyr Phe Glu Tyr Glu Asn Phe Asn Asp Thr Met Leu

325 330 335

Glu Asp Leu Asn Ser Ile Met Pro Thr Phe His Tyr Asp Phe Glu Gly

340 345 350

Ala Glu Val Leu

355

<210> 69

<211> 347

<212> Белок

<213> Glycine max

<400> 69

Met Ala Lys Gln Gln Thr His Lys Ile Asn Ala Ser Thr Asn Asn Asn

1 5 10 15

Ile Ser Thr Thr Asn Thr Val Thr Ala Lys Val Lys Arg Thr Arg Arg

20 25 30

Ser Val Pro Arg Asp Ser Pro Pro Gln Arg Ser Ser Ile Tyr Arg Gly

35 40 45

Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Tyr Glu Ala His Leu Trp Asp

50 55 60

Lys Asn Cys Trp Asn Glu Ser Gln Asn Lys Lys Gly Arg Gln Gly Ala

65 70 75 80

Tyr Asp Asp Glu Glu Ala Ala Ala His Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu

85 90 95

Lys Tyr Trp Gly Gln Asp Thr Ile Leu Asn Phe Pro Leu Ser Thr Tyr

100 105 110

Gln Asn Glu Leu Lys Glu Met Glu Gly Gln Ser Arg Glu Glu Tyr Ile

115 120 125

Gly Ser Leu Arg Arg Lys Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys

130 135 140

Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg

145 150 155 160

Ile Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ala

165 170 175

Thr Gln Glu Glu Ala Ala Thr Ala Tyr Asp Met Ala Ala Ile Glu Tyr

180 185 190

Arg Gly Val Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Leu Ser Arg Tyr Ile Lys

195 200 205

Trp Leu Lys Pro Asn Asn Asn Asn Thr Thr Val Asn Ser Asn Leu Ile

210 215 220

Asp Ser Asn Pro Asn Cys Glu Thr Asn Phe Thr Ser Asn Ser Asn Gln

225 230 235 240

Gln Gln Gly Phe Asn Phe Phe Asn Arg Gln Glu Ser Phe Asn Asn Glu

245 250 255

Glu Ala Ala Met Thr Gln Pro Arg Pro Ala Val Ala Thr Ser Ala Leu

260 265 270

Gly Leu Leu Leu Gln Ser Ser Lys Phe Lys Glu Met Met Glu Met Thr

275 280 285

Ser Ala Thr Asp Leu Ser Thr Pro Pro Ser Glu Ser Glu Leu Pro Ser

290 295 300

Cys Thr Phe Pro Asp Asp Ile Gln Thr Tyr Phe Glu Cys Glu Asp Ser

305 310 315 320

His Arg Tyr Gly Glu Gly Asp Asp Ile Met Phe Ser Val Leu Asn Gly

325 330 335

Phe Val Pro Pro Met Phe His Cys Asp Asp Phe

340 345

<210> 70

<211> 351

<212> Белок

<213> Glycine max

<400> 70

Met Ala Lys Gln Gln Thr His Glu Ile Asn Ala Ser Thr Asn Asn Asn

1 5 10 15

Ile Asn Thr Thr Lys Thr Val Thr Thr Lys Val Lys Arg Thr Arg Arg

20 25 30

Ser Val Pro Arg Asn Ser Pro Pro Gln Arg Ser Ser Ile Tyr Arg Gly

35 40 45

Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Tyr Glu Ala His Leu Trp Asp

50 55 60

Lys Asn Cys Trp Asn Glu Ser Gln Asn Lys Lys Gly Arg Gln Gly Ala

65 70 75 80

Tyr Asp Asp Glu Glu Ala Ala Ala His Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu

85 90 95

Lys Tyr Trp Gly Gln Asp Thr Ile Leu Asn Phe Pro Leu Ser Thr Tyr

100 105 110

Gln Asn Glu Leu Lys Glu Met Glu Gly Gln Ser Arg Glu Glu Tyr Ile

115 120 125

Gly Ser Leu Arg Arg Lys Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys

130 135 140

Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg

145 150 155 160

Ile Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ala

165 170 175

Thr Gln Glu Glu Ala Ala Thr Ala Tyr Asp Met Ala Ala Ile Glu Tyr

180 185 190

Arg Gly Leu Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Leu Ser Arg Tyr Ile Lys

195 200 205

Trp Leu Lys Pro Asn Asn Asn Asn Asn Lys Val Asn Ser Asn Asn Leu

210 215 220

Ile Val Ser Ile Pro Asn Cys Ala Thr Asn Phe Thr Pro Asn Ser Asn

225 230 235 240

Gln Gln Gln Gly Phe Asn Phe Phe Asn Ser Gln Glu Ser Phe Asn Asn

245 250 255

Asn Glu Glu Ala Ala Met Thr Gln Pro Arg Pro Ala Ala Ala Thr Ser

260 265 270

Ala Leu Gly Leu Leu Leu Gln Ser Ser Lys Phe Lys Glu Met Met Glu

275 280 285

Met Thr Ser Ala Ile Asp Leu Ser Thr Pro Pro Ser Glu Ser Glu Leu

290 295 300

Pro Pro Cys Thr Phe Pro Asp Asp Ile Gln Thr Tyr Phe Glu Cys Glu

305 310 315 320

Asp Ser His Arg Tyr Gly Glu Gly Asp Asp Ile Met Phe Ser Glu Leu

325 330 335

Asn Gly Phe Val Pro Pro Met Phe His Cys Asp Asp Phe Glu Ala

340 345 350

<210> 71

<211> 353

<212> Белок

<213> Populus trichocarpa

<400> 71

Met Ala Lys Leu Ser Gln Lys Asn Thr Lys Asn Thr Ala Ser Asn Asn

1 5 10 15

Asn Asn Thr Thr Asn Gly Val Thr Lys Val Lys Arg Thr Arg Arg Ser

20 25 30

Val Pro Arg Asp Ser Pro Pro Gln Arg Ser Ser Ile Tyr Arg Gly Val

35 40 45

Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Tyr Glu Ala His Leu Trp Asp Lys

50 55 60

Asn Cys Trp Asn Glu Ser Gln Asn Lys Lys Gly Arg Gln Gly Ala Tyr

65 70 75 80

Asp Asp Glu Glu Ala Ala Ala His Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys

85 90 95

Tyr Trp Gly Pro Glu Thr Ile Leu Asn Phe Pro Leu Ser Thr Tyr Gln

100 105 110

Asn Glu Leu Lys Glu Met Glu Gly Gln Ser Arg Glu Glu Cys Ile Gly

115 120 125

Ser Leu Arg Arg Lys Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr

130 135 140

Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile

145 150 155 160

Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ala Thr

165 170 175

Gln Glu Glu Ala Ala Thr Ala Tyr Asp Met Ala Ala Ile Glu Tyr Arg

180 185 190

Gly Leu Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Leu Ser Arg Tyr Ile Lys Trp

195 200 205

Leu Lys Pro Asn Gln Asn Asn Thr Asp Asn Asn Asn Gly Leu Asp Leu

210 215 220

Pro Asn Pro Ile Ile Gly Thr Asp Asn Ser Thr His Pro Asn Pro Asn

225 230 235 240

Gln Glu Leu Gly Thr Thr Phe Leu Gln Ile Asn Gln Gln Thr Tyr Gln

245 250 255

Pro Ser Glu Thr Thr Leu Thr Gln Pro Arg Pro Ala Thr Asn Pro Ser

260 265 270

Ser Ala Leu Gly Leu Leu Leu Gln Ser Ser Lys Phe Lys Glu Met Met

275 280 285

Glu Met Thr Ala Val Thr Asp Cys Pro Pro Thr Pro Pro Ser Gly Leu

290 295 300

Asp Pro Thr Pro Cys Ser Phe Leu Glu Asp Val Gln Thr Tyr Phe Asp

305 310 315 320

Cys Leu Asp Ser Ser Asn Tyr Gly Asp Gln Gly Asp Asp Met Ile Phe

325 330 335

Gly Asp Leu Asn Ser Phe Val Pro Pro Met Phe Gln Cys Asp Phe Glu

340 345 350

Thr

<210> 72

<211> 323

<212> Белок

<213> Vitis vinifera

<400> 72

Met Ala Lys Leu Ser Gln Gln Asn His Lys Asn Ser Ala Asn Ser Asn

1 5 10 15

Ala Thr Asn Thr Thr Leu Ser Val Thr Lys Val Lys Arg Thr Arg Lys

20 25 30

Thr Val Pro Arg Asp Ser Pro Pro Gln Arg Ser Ser Ile Tyr Arg Gly

35 40 45

Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Tyr Glu Ala His Leu Trp Asp

50 55 60

Lys Asn Cys Trp Asn Glu Ser Gln Asn Lys Lys Gly Arg Gln Val Tyr

65 70 75 80

Leu Gly Ala Tyr His Asp Glu Glu Ala Ala Ala His Ala Tyr Asp Leu

85 90 95

Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro Glu Thr Ile Leu Asn Phe Pro Leu

100 105 110

Ser Thr Tyr Glu Lys Glu Leu Lys Glu Met Glu Gly Leu Ser Arg Glu

115 120 125

Glu Tyr Ile Gly Ser Leu Arg Arg Arg Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly

130 135 140

Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn Gly Arg Trp

145 150 155 160

Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly

165 170 175

Thr Tyr Ala Thr Gln Glu Glu Ala Ala Thr Ala Tyr Asp Met Ala Ala

180 185 190

Ile Glu Tyr Arg Gly Leu Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Leu Ser Arg

195 200 205

Tyr Ile Lys Trp Leu Lys Pro Asn Gln Asn Asn Pro Cys Glu Gln Pro

210 215 220

Asn Asn Pro Asn Leu Asp Ser Asn Leu Thr Pro Asn Pro Asn His Asp

225 230 235 240

Phe Gly Ile Ser Phe Leu Asn His Pro Gln Thr Ser Gly Thr Ala Ala

245 250 255

Cys Lys Met Met Glu Met Thr Thr Ala Ala Asp His Leu Ser Thr Pro

260 265 270

Pro Glu Ser Glu Leu Pro Arg Cys Ser Phe Pro Asp Asp Ile Gln Thr

275 280 285

Tyr Phe Glu Cys Gln Asp Ser Gly Ser Tyr Glu Glu Gly Asp Asp Val

290 295 300

Ile Phe Ser Glu Leu Asn Ser Phe Ile Pro Pro Met Phe Gln Cys Asp

305 310 315 320

Phe Ser Ala

<210> 73

<211> 347

<212> Белок

<213> Vitis vinifera

<400> 73

Met Ala Lys Leu Ser Gln Gln Asn His Lys Asn Ser Ala Asn Ser Asn

1 5 10 15

Ala Thr Asn Thr Thr Leu Ser Val Thr Lys Val Lys Arg Thr Arg Lys

20 25 30

Thr Val Pro Arg Asp Ser Pro Pro Gln Arg Ser Ser Ile Tyr Arg Gly

35 40 45

Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Tyr Glu Ala His Leu Trp Asp

50 55 60

Lys Asn Cys Trp Asn Glu Ser Gln Asn Lys Lys Gly Arg Gln Gly Ala

65 70 75 80

Tyr His Asp Glu Glu Ala Ala Ala His Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu

85 90 95

Lys Tyr Trp Gly Pro Glu Thr Ile Leu Asn Phe Pro Leu Ser Thr Tyr

100 105 110

Glu Lys Glu Leu Lys Glu Met Glu Gly Leu Ser Arg Glu Glu Tyr Ile

115 120 125

Gly Ser Leu Arg Arg Arg Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys

130 135 140

Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg

145 150 155 160

Ile Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ala

165 170 175

Thr Gln Glu Glu Ala Ala Thr Ala Tyr Asp Met Ala Ala Ile Glu Tyr

180 185 190

Arg Gly Leu Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Leu Ser Arg Tyr Ile Lys

195 200 205

Trp Leu Lys Pro Asn Gln Asn Asn Pro Cys Glu Gln Pro Asn Asn Pro

210 215 220

Asn Leu Asp Ser Asn Leu Thr Pro Asn Pro Asn His Asp Phe Gly Ile

225 230 235 240

Ser Phe Leu Asn His Pro Gln Thr Ser Gly Thr Ala Ala Cys Ser Glu

245 250 255

Pro Pro Leu Thr Gln Thr Arg Pro Pro Ile Ala Ser Ser Ala Leu Gly

260 265 270

Leu Leu Leu Gln Ser Ser Lys Phe Lys Glu Met Met Glu Met Thr Thr

275 280 285

Ala Ala Asp His Leu Ser Thr Pro Pro Glu Ser Glu Leu Pro Arg Cys

290 295 300

Ser Phe Pro Asp Asp Ile Gln Thr Tyr Phe Glu Cys Gln Asp Ser Gly

305 310 315 320

Ser Tyr Glu Glu Gly Asp Asp Val Ile Phe Ser Glu Leu Asn Ser Phe

325 330 335

Ile Pro Pro Met Phe Gln Cys Asp Phe Ser Ala

340 345

<210> 74

<211> 275

<212> Белок

<213> Populus trichocarpa

<400> 74

Met Gly Lys Thr Ser Lys Gln Ser Leu Lys Asn Ser Ala Asn Thr Ser

1 5 10 15

Ile Asn Pro Ala Thr Lys Val Lys Arg Thr Arg Lys Ser Val Pro Arg

20 25 30

Asp Ser Pro Pro Gln Arg Ser Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His

35 40 45

Arg Trp Thr Gly Arg Tyr Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Asn Cys Trp

50 55 60

Asn Glu Ser Gln Asn Lys Lys Gly Arg Gln Gly Ala Tyr Asp Asp Glu

65 70 75 80

Glu Ala Ala Gly His Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly

85 90 95

Gln Asp Thr Ile Leu Asn Phe Pro Leu Ser Thr Tyr Glu Glu Glu Phe

100 105 110

Lys Glu Met Glu Gly His Ser Lys Glu Glu Tyr Ile Gly Ser Leu Arg

115 120 125

Arg Lys Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val

130 135 140

Ala Arg His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val

145 150 155 160

Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ala Thr Gln Glu Glu

165 170 175

Ala Ala Thr Ala Tyr Asp Met Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Leu Asn

180 185 190

Ala Val Thr Asn Phe Asp Leu Ser Arg Tyr Ser Ser Lys Phe Lys Glu

195 200 205

Met Leu Glu Arg Thr Ser Ala Ser Asp Cys Pro Leu Thr Pro Pro Glu

210 215 220

Ser Asp Arg Asp Pro Pro Arg Arg Ser Phe Pro Asp Asp Ile Gln Thr

225 230 235 240

Tyr Phe Asp Cys Gln Asp Ser Ser Ser Tyr Thr Asp Gly Asp Asp Ile

245 250 255

Ile Phe Gly Asp Leu His Ser Phe Ala Ser Pro Ile Phe His Cys Glu

260 265 270

Leu Asp Gly

275

<210> 75

<211> 304

<212> Белок

<213> Vitis vinifera

<400> 75

Met Ala Lys Thr Ser Gln Lys Ser Gln Lys Thr Thr Gly Asn Ser Thr

1 5 10 15

Asn Asn Asn Gly Gly Ser Val Ala Lys Val Lys Arg Thr Arg Lys Ser

20 25 30

Val Pro Arg Asp Ser Pro Pro Gln Arg Ser Ser Ile Phe Arg Gly Val

35 40 45

Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Tyr Glu Ala His Leu Trp Asp Lys

50 55 60

Asn Cys Trp Asn Glu Ser Gln Asn Lys Lys Gly Arg Gln Val Tyr Leu

65 70 75 80

Gly Ala Tyr Asp Asp Glu Glu Ala Ala Ala His Ala Tyr Asp Leu Ala

85 90 95

Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Gln Glu Thr Ile Leu Asn Phe Pro Leu Ser

100 105 110

Ala Tyr Gln Glu Glu Leu Lys Glu Met Glu Gly Gln Ser Lys Glu Glu

115 120 125

Tyr Ile Gly Ser Leu Arg Arg Lys Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val

130 135 140

Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His Asn Gly Arg Trp Glu

145 150 155 160

Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr

165 170 175

Tyr Ala Thr Gln Glu Glu Ala Ala Thr Ala Tyr Asp Met Ala Ala Ile

180 185 190

Glu Tyr Arg Gly Leu Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Leu Ser Arg Tyr

195 200 205

Ile Asn Ser Pro Ala Pro Asn Pro Asn Pro Ser Asp His Glu Leu Gly

210 215 220

Leu Ser Phe Leu Gln Gln Gln His Gly Ser Asp Ala Thr Glu Leu Pro

225 230 235 240

Leu Ser His Ala Arg Ser Asp Cys Pro Leu Thr Pro Pro Asp Gln Ile

245 250 255

Glu Met Pro Arg Ser Ser Phe Pro Asp Asp Ile Gln Thr Tyr Phe Asp

260 265 270

Cys Gln Glu Thr Asn Ser Tyr Gly Glu Ser Asp Asp Ile Ile Phe Gly

275 280 285

Asp Leu Lys Tyr Phe Ser Ser Pro Met Phe Gln Cys Glu Leu Asp Thr

290 295 300

<210> 76

<211> 393

<212> Белок

<213> Sorghum bicolor

<400> 76

Met Ala Ser Pro Asn Pro Glu Ala Ala Ala Gly Leu Gln Thr Val Ala

1 5 10 15

Val Ala Ala Gly Gly Gly Glu Gly Gly Ser Ser Ser Ser Leu Gly Ala

20 25 30

Val Ala Gly Ala Ala Ala Val Ser Ser Ser Gly Glu Leu Val Pro Arg

35 40 45

Arg Ser Leu Ala Val Arg Lys Glu Arg Val Cys Thr Ala Lys Glu Arg

50 55 60

Ile Ser Arg Met Pro Pro Cys Ala Ala Gly Lys Arg Ser Ser Ile Tyr

65 70 75 80

Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Tyr Glu Ala His Leu

85 90 95

Trp Asp Lys Ser Thr Trp Asn Gln Asn Gln Asn Lys Lys Gly Lys Gln

100 105 110

Gly Ala Tyr Asp Asp Glu Glu Ala Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala

115 120 125

Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Ala Gly Thr Gln Ile Asn Phe Pro Val Ser

130 135 140

Asp Tyr Ala Arg Asp Leu Glu Glu Met Gln Met Ile Ser Lys Glu Asp

145 150 155 160

Tyr Leu Val Ser Leu Arg Arg Gln Leu His Asn Ser Arg Trp Asp Thr

165 170 175

Ser Leu Gly Leu Gly Asn Asp Tyr Met Ser Leu Ser Cys Gly Lys Asp

180 185 190

Ile Met Leu Asp Gly Lys Phe Ala Gly Ser Phe Gly Leu Glu Arg Lys

195 200 205

Ile Asp Leu Thr Asn Tyr Ile Arg Trp Trp Leu Pro Lys Lys Thr Arg

210 215 220

Gln Ser Asp Thr Ser Lys Thr Glu Glu Ile Ala Asp Glu Ile Arg Ala

225 230 235 240

Ile Glu Ser Ser Met Gln Gln Thr Glu Pro Tyr Lys Leu Pro Ser Leu

245 250 255

Gly Leu Gly Ser Pro Ser Lys Pro Ser Ser Val Gly Leu Ser Ala Cys

260 265 270

Ser Ile Leu Ser Gln Ser Asp Ala Phe Lys Ser Phe Leu Glu Lys Ser

275 280 285

Thr Lys Leu Ser Glu Glu Cys Thr Leu Ser Lys Glu Ile Val Glu Gly

290 295 300

Lys Thr Val Ala Ser Val Pro Ala Thr Gly Tyr Asp Thr Gly Ala Ile

305 310 315 320

Asn Ile Asn Met Asn Glu Leu Leu Val Gln Arg Ser Thr Tyr Ser Met

325 330 335

Ala Pro Val Met Pro Thr Pro Met Lys Thr Thr Trp Ser Pro Ala Asp

340 345 350

Pro Ser Val Asp Pro Leu Phe Trp Ser Asn Phe Val Leu Pro Ser Ser

355 360 365

Gln Pro Val Thr Met Ala Thr Ile Thr Thr Thr Thr Asn Glu Val Ser

370 375 380

Ser Ser Asp Pro Phe Gln Ser Gln Glu

385 390

<210> 77

<211> 428

<212> Белок

<213> Lupinus angustifolius

<400> 77

Met Ala Ser Ser Ser Ser Asp Pro Gly Lys Ser Glu Ile Gly Gly Gly

1 5 10 15

Ala Ala Glu Thr Ser Glu Ala Ala Ala Val Ala Val Ala Val Thr Asn

20 25 30

Asp Gln Ser Leu Leu Tyr Arg Gly Leu Lys Lys Ala Lys Lys Glu Arg

35 40 45

Gly Cys Thr Ala Lys Glu Arg Ile Ser Lys Met Pro Pro Cys Ala Ala

50 55 60

Gly Lys Arg Ser Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr

65 70 75 80

Gly Arg Tyr Glu Ala His Leu Arg Asp Lys Ser Thr Trp Asn Gln Asn

85 90 95

Gln Asn Lys Lys Gly Lys Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asp Asp Glu

100 105 110

Glu Ala Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly

115 120 125

Pro Gly Thr Leu Ile Asn Phe Pro Val Thr Asp Tyr Thr Arg Asp Leu

130 135 140

Glu Glu Met Gln Asn Val Ser Arg Glu Glu Tyr Leu Ala Ser Leu Arg

145 150 155 160

Arg Lys Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Ile Ser Lys Tyr Arg Ala Leu

165 170 175

Ser Ser Arg Trp Glu Pro Ser Tyr Ser Arg Phe Ala Gly Ser Asp Tyr

180 185 190

Phe Asn Ser Met His Tyr Gly Ala Gly Asp Asp Ser Ala Ala Glu Ser

195 200 205

Glu Tyr Ala Ser Gly Phe Cys Ile Glu Arg Lys Ile Asp Leu Thr Gly

210 215 220

His Ile Lys Trp Trp Gly Ser Asn Lys Ser Arg Gln Pro Asp Ala Gly

225 230 235 240

Thr Arg Leu Ser Glu Glu Lys Arg His Gly Phe Ala Gly Asp Ile Cys

245 250 255

Ser Glu Pro Lys Thr Leu Glu Gln Lys Val Gln Pro Thr Glu Pro Tyr

260 265 270

Gln Met Pro Glu Leu Gly Arg Ser His Asn Glu Lys Lys His Arg Ser

275 280 285

Ser Ala Val Ser Ala Leu Ser Ile Leu Ser Gln Ser Ala Ala Tyr Lys

290 295 300

Ser Leu Gln Glu Lys Ala Ser Lys Lys Gln Glu Asn Ser Thr Asp Asn

305 310 315 320

Asp Glu Asn Glu Asn Lys Asn Thr Val Asn Lys Leu Asp His Gly Lys

325 330 335

Ala Val Glu Lys Ser Ser Asn His Asp Gly Gly Ser Asp Arg Val Asp

340 345 350

Ile Glu Ile Gly Thr Thr Gly Ala Leu Ser Leu Gln Arg Asn Ile Tyr

355 360 365

Pro Leu Thr Pro Phe Leu Ser Ala Pro Leu Leu Thr Ala Tyr Asn Thr

370 375 380

Val Asp Pro Ser Leu Val Asp Pro Val Leu Trp Thr Ser Leu Val Pro

385 390 395 400

Met Leu Ser Ala Gly Leu Ser Cys Pro Thr Gln Val Thr Lys Thr Glu

405 410 415

Thr Ser Ser Ser Tyr Thr Ile Phe Gln Pro Glu Gly

420 425

<210> 78

<211> 440

<212> Белок

<213> Ricinus communis

<400> 78

Met Ala Ser Ser Ser Ser Asp Pro Gly Leu Lys Pro Glu Leu Gly Gly

1 5 10 15

Gly Ser Gly Gly Glu Ser Ser Glu Ala Val Ile Ala Asn Asp Gln Leu

20 25 30

Leu Leu Tyr Arg Gln Leu Lys Lys Pro Lys Lys Glu Arg Gly Cys Thr

35 40 45

Ala Lys Glu Arg Ile Ser Lys Met Pro Pro Cys Thr Ala Gly Lys Arg

50 55 60

Ser Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Tyr

65 70 75 80

Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Ser Thr Trp Asn Gln Asn Gln Asn Lys

85 90 95

Lys Gly Lys Gln Gly Ala Tyr Asp Asp Glu Glu Ala Ala Ala Arg Ala

100 105 110

Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro Gly Thr Leu Ile Asn

115 120 125

Phe Pro Val Thr Asp Tyr Ser Arg Asp Leu Glu Glu Met Gln Asn Val

130 135 140

Ser Arg Glu Glu Tyr Leu Ala Ser Leu Arg Arg Lys Ser Ser Gly Phe

145 150 155 160

Ser Arg Gly Ile Ser Lys Tyr Arg Gly Leu Ser Ser Gln Trp Asp Ser

165 170 175

Ser Phe Gly Arg Met Pro Gly Ser Glu Tyr Phe Ser Ser Ile Asn Tyr

180 185 190

Gly Ala Ala Asp Asp Pro Ala Ala Glu Ser Glu Tyr Val Gly Ser Leu

195 200 205

Cys Phe Glu Arg Lys Ile Asp Leu Thr Ser Tyr Ile Arg Trp Trp Gly

210 215 220

Phe Asn Lys Thr Arg Glu Ser Val Ser Lys Ser Ser Asp Glu Arg Lys

225 230 235 240

His Gly Tyr Gly Glu Asp Ile Ser Glu Leu Lys Ser Ser Glu Trp Ala

245 250 255

Val Gln Ser Thr Glu Pro Tyr Gln Met Pro Arg Leu Gly Met Pro Asp

260 265 270

Asn Gly Lys Lys His Lys Cys Ser Lys Ile Ser Ala Leu Ser Ile Leu

275 280 285

Ser His Ser Ala Ala Tyr Lys Asn Leu Gln Glu Lys Ala Ser Lys Lys

290 295 300

Gln Glu Asn Cys Thr Asp Asn Asp Glu Lys Glu Asn Lys Lys Thr Asn

305 310 315 320

Lys Met Asp Tyr Gly Lys Ala Val Glu Lys Ser Thr Ser His Asp Gly

325 330 335

Ser Asn Glu Arg Leu Gly Ala Ala Leu Gly Met Ser Gly Gly Leu Ser

340 345 350

Leu Gln Arg Asn Ala Tyr Gln Leu Ala Pro Phe Leu Ser Ala Pro Leu

355 360 365

Leu Thr Asn Tyr Asn Ala Ile Asp Pro Leu Val Asp Pro Ile Leu Trp

370 375 380

Thr Ser Leu Val Pro Val Leu Pro Ala Gly Phe Ser Arg Asn Ser Glu

385 390 395 400

Val Gly Met Gly Leu Gln Ile Val Ser Cys His Lys Asp Arg Asp Lys

405 410 415

Phe Asn Leu Tyr Leu Leu Ser Ala Gly Gly Val Ser Thr Phe Leu Leu

420 425 430

Leu Val Val His Trp Arg Phe Cys

435 440

<210> 79

<211> 428

<212> Белок

<213> Lupinus angustifolius

<400> 79

Met Ala Ser Ser Ser Ser Asp Pro Gly Lys Ser Glu Ile Gly Gly Gly

1 5 10 15

Ala Ala Glu Thr Ser Glu Ala Ala Ala Val Ala Val Ala Val Thr Asn

20 25 30

Asp Gln Ser Leu Leu Tyr Arg Gly Leu Lys Lys Ala Lys Lys Glu Arg

35 40 45

Gly Cys Thr Ala Lys Glu Arg Ile Ser Lys Met Pro Pro Cys Ala Ala

50 55 60

Gly Lys Arg Ser Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr

65 70 75 80

Gly Arg Tyr Glu Ala His Leu Arg Asp Lys Ser Thr Trp Asn Gln Asn

85 90 95

Gln Asn Lys Lys Gly Lys Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asp Asp Glu

100 105 110

Glu Ala Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly

115 120 125

Pro Gly Thr Leu Ile Asn Phe Pro Val Thr Asp Tyr Thr Arg Asp Leu

130 135 140

Glu Glu Met Gln Asn Val Ser Arg Glu Glu Tyr Leu Ala Ser Leu Arg

145 150 155 160

Arg Lys Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Ile Ser Lys Tyr Arg Ala Leu

165 170 175

Ser Ser Arg Trp Glu Pro Ser Tyr Ser Arg Phe Ala Gly Ser Asp Tyr

180 185 190

Phe Asn Ser Met His Tyr Gly Ala Gly Asp Asp Ser Ala Ala Glu Ser

195 200 205

Glu Tyr Ala Ser Gly Phe Cys Ile Glu Arg Lys Ile Asp Leu Thr Gly

210 215 220

His Ile Lys Trp Trp Gly Ser Asn Lys Ser Arg Gln Pro Asp Ala Gly

225 230 235 240

Thr Arg Leu Ser Glu Glu Lys Arg His Gly Phe Ala Gly Asp Ile Cys

245 250 255

Ser Glu Pro Lys Thr Leu Glu Gln Lys Val Gln Pro Thr Glu Pro Tyr

260 265 270

Gln Met Pro Glu Leu Gly Arg Ser His Asn Glu Lys Lys His Arg Ser

275 280 285

Ser Ala Val Ser Ala Leu Ser Ile Leu Ser Gln Ser Ala Ala Tyr Lys

290 295 300

Ser Leu Gln Glu Lys Ala Ser Lys Lys Gln Glu Asn Ser Thr Asp Asn

305 310 315 320

Asp Glu Asn Glu Asn Lys Asn Thr Val Asn Lys Leu Asp His Gly Lys

325 330 335

Ala Val Glu Lys Ser Ser Asn His Asp Gly Gly Ser Asp Arg Val Asp

340 345 350

Ile Glu Ile Gly Thr Thr Gly Ala Leu Ser Leu Gln Arg Asn Ile Tyr

355 360 365

Pro Leu Thr Pro Phe Leu Ser Ala Pro Leu Leu Thr Ala Tyr Asn Thr

370 375 380

Val Asp Pro Ser Leu Val Asp Pro Val Leu Trp Thr Ser Leu Val Pro

385 390 395 400

Met Leu Ser Ala Gly Leu Ser Cys Pro Thr Gln Val Thr Lys Thr Glu

405 410 415

Thr Ser Ser Ser Tyr Thr Ile Phe Gln Pro Glu Gly

420 425

<210> 80

<211> 508

<212> Белок

<213> Aspergillus fumigatus

<400> 80

Met Lys Met Ser Ala Ser Lys Thr Val Thr Ser Ser Ala Ser Ala Val

1 5 10 15

Ser Thr Ser Ser Gly Arg Ser Thr Pro Ser Lys Leu Val Asn Gly Ala

20 25 30

Thr Arg Asn Gly Ser Ala Ala Ala Gly Asn Gly Ser Thr Gly Thr Ala

35 40 45

Lys Gly Lys Arg Arg Ser Lys Tyr Arg His Val Ala Ala Tyr His Ser

50 55 60

Glu Leu Arg His Ser Ser Leu Ser Arg Glu Thr Ser Val Val Pro Ser

65 70 75 80

Phe Leu Gly Phe Arg Asn Leu Met Val Ile Val Leu Val Ala Met Asn

85 90 95

Leu Arg Leu Ile Ile Glu Asn Phe Met Lys Tyr Gly Val Leu Ile Cys

100 105 110

Ile Lys Cys His Asp Tyr Arg Lys Gln Asp Val Val Leu Gly Ser Ile

115 120 125

Leu Phe Ala Leu Val Pro Cys His Leu Phe Leu Ala Tyr Ile Ile Glu

130 135 140

Leu Val Ala Ala Gln Gln Ser Lys Lys Thr Val Gly Arg Gln Lys Lys

145 150 155 160

Asp Leu Ser Thr Glu Glu Arg Glu Arg Glu Gln Gln Ala Phe Arg Ser

165 170 175

Thr Trp Arg Tyr Thr Ala Phe Phe His Thr Val Asn Ala Thr Leu Cys

180 185 190

Leu Ala Val Thr Ser Phe Val Val Tyr Phe Tyr Ile Asn His Pro Gly

195 200 205

Ile Gly Thr Ile Cys Glu Leu His Ala Ile Ile Val Trp Leu Lys Asn

210 215 220

Cys Ser Tyr Ala Phe Thr Asn Arg Asp Leu Arg Gln Ala Met Val Asp

225 230 235 240

Pro Ser Ala Glu Ser Ala Leu Pro Glu Ile Tyr Ser Thr Cys Pro Tyr

245 250 255

Pro Arg Asn Ile Thr Leu Gly Asn Leu Thr Tyr Phe Trp Leu Ala Pro

260 265 270

Thr Leu Val Tyr Gln Pro Val Tyr Pro Arg Ser Ser His Ile Arg Trp

275 280 285

Ser Phe Val Ala Lys Arg Leu Ala Glu Phe Phe Gly Leu Ala Val Phe

290 295 300

Ile Trp Leu Leu Ser Ala Gln Tyr Ala Ala Pro Val Leu Arg Asn Ser

305 310 315 320

Ile Asp Lys Ile Ala Val Met Asp Ile Ala Ser Ile Leu Glu Arg Val

325 330 335

Met Lys Leu Ser Thr Ile Ser Leu Val Ile Trp Leu Ala Gly Phe Phe

340 345 350

Ala Leu Phe Gln Ser Leu Leu Asn Ala Leu Ala Glu Val Met Arg Phe

355 360 365

Gly Asp Arg Glu Phe Tyr Thr Asp Trp Trp Asn Ser Pro Ser Leu Gly

370 375 380

Ala Tyr Trp Arg Ser Trp Asn Arg Pro Val Tyr Leu Phe Met Lys Arg

385 390 395 400

His Val Phe Ser Pro Leu Val Gly Arg Gly Trp Ser Pro Phe Ala Ala

405 410 415

Ser Phe Met Val Phe Ser Leu Ser Ala Val Leu His Glu Met Leu Val

420 425 430

Gly Ile Pro Thr His Asn Leu Ile Gly Val Ala Phe Ala Gly Met Met

435 440 445

Phe Gln Leu Pro Leu Ile Ala Val Thr Ala Pro Phe Glu Lys Val Asn

450 455 460

Asp Ala Leu Gly Lys Ile Val Gly Asn Ser Ile Phe Trp Val Ser Phe

465 470 475 480

Cys Leu Val Gly Gln Pro Leu Gly Ala Leu Leu Tyr Phe Phe Ala Trp

485 490 495

Gln Ala Lys Tyr Gly Ser Val Ser Lys Ile His Val

500 505

<210> 81

<211> 521

<212> Белок

<213> Ricinus communis

<400> 81

Met Thr Ile Leu Glu Thr Pro Glu Thr Leu Gly Val Ile Ser Ser Ser

1 5 10 15

Ala Thr Ser Asp Leu Asn Leu Ser Leu Arg Arg Arg Arg Thr Ser Asn

20 25 30

Asp Ser Asp Gly Ala Leu Ala Asp Leu Ala Ser Lys Phe Asp Asp Asp

35 40 45

Asp Asp Val Arg Ser Glu Asp Ser Ala Glu Asn Ile Ile Glu Asp Pro

50 55 60

Val Ala Ala Val Thr Glu Leu Ala Thr Ala Lys Ser Asn Gly Lys Asp

65 70 75 80

Cys Val Ala Asn Ser Asn Lys Asp Lys Ile Asp Ser His Gly Gly Ser

85 90 95

Ser Asp Phe Lys Leu Ala Tyr Arg Pro Ser Val Pro Ala His Arg Ser

100 105 110

Leu Lys Glu Ser Pro Leu Ser Ser Asp Leu Ile Phe Lys Gln Ser His

115 120 125

Ala Gly Leu Phe Asn Leu Cys Ile Val Val Leu Val Ala Val Asn Ser

130 135 140

Arg Leu Ile Ile Glu Asn Leu Met Lys Tyr Gly Trp Leu Ile Lys Thr

145 150 155 160

Gly Phe Trp Phe Ser Ser Arg Ser Leu Arg Asp Trp Pro Leu Phe Met

165 170 175

Cys Cys Leu Ser Leu Pro Val Phe Pro Leu Ala Ala Tyr Leu Val Glu

180 185 190

Lys Ala Ala Tyr Arg Lys Tyr Ile Ser Pro Pro Ile Val Ile Phe Leu

195 200 205

His Val Ile Ile Thr Ser Ala Ala Val Leu Tyr Pro Ala Ser Val Ile

210 215 220

Leu Ser Cys Glu Ser Ala Phe Leu Ser Gly Val Thr Leu Met Glu Leu

225 230 235 240

Ala Cys Met Val Trp Leu Lys Leu Val Ser Tyr Ala His Thr Asn Tyr

245 250 255

Asp Met Arg Ala Ile Ala Asp Thr Ile His Lys Glu Asp Ala Ser Asn

260 265 270

Ser Ser Ser Thr Glu Tyr Cys His Asp Val Ser Phe Lys Thr Leu Ala

275 280 285

Tyr Phe Met Val Ala Pro Thr Leu Cys Tyr Gln Pro Ser Tyr Pro Arg

290 295 300

Thr Ala Phe Ile Arg Lys Gly Trp Val Phe Arg Gln Phe Val Lys Leu

305 310 315 320

Ile Ile Phe Thr Gly Phe Met Gly Phe Ile Ile Glu Gln Tyr Ile Asn

325 330 335

Pro Ile Val Gln Asn Ser Gln His Pro Leu Lys Gly Asp Leu Leu Tyr

340 345 350

Ala Ile Glu Arg Val Leu Lys Leu Ser Val Pro Asn Leu Tyr Val Trp

355 360 365

Leu Cys Leu Phe Tyr Cys Phe Phe His Leu Trp Leu Asn Ile Val Ala

370 375 380

Glu Leu Leu Arg Phe Gly Asp Arg Glu Phe Tyr Lys Asp Trp Trp Asn

385 390 395 400

Ala Lys Thr Val Glu Glu Tyr Trp Arg Met Trp Asn Met Pro Val His

405 410 415

Lys Trp Met Val Arg His Ile Tyr Phe Pro Cys Leu Arg Arg Lys Ile

420 425 430

Pro Arg Gly Val Ala Ile Val Ile Ala Phe Phe Val Ser Ala Val Phe

435 440 445

His Glu Leu Cys Ile Ala Val Pro Cys His Met Phe Lys Leu Trp Ala

450 455 460

Phe Phe Gly Ile Met Phe Gln Ile Pro Leu Val Val Ile Thr Asn Tyr

465 470 475 480

Phe Gln Arg Lys Phe Arg Ser Ser Met Val Gly Asn Met Ile Phe Trp

485 490 495

Phe Phe Phe Cys Ile Leu Gly Gln Pro Met Cys Val Leu Leu Tyr Tyr

500 505 510

His Asp Leu Met Asn Arg Asp Gly Asn

515 520

<210> 82

<211> 526

<212> Белок

<213> Vernicia fordii

<400> 82

Met Thr Ile Pro Glu Thr Pro Asp Asn Ser Thr Asp Ala Thr Thr Ser

1 5 10 15

Gly Gly Ala Glu Ser Ser Ser Asp Leu Asn Leu Ser Leu Arg Arg Arg

20 25 30

Arg Thr Ala Ser Asn Ser Asp Gly Ala Val Ala Glu Leu Ala Ser Lys

35 40 45

Ile Asp Glu Leu Glu Ser Asp Ala Gly Gly Gly Gln Val Ile Lys Asp

50 55 60

Pro Gly Ala Glu Met Asp Ser Gly Thr Leu Lys Ser Asn Gly Lys Asp

65 70 75 80

Cys Gly Thr Val Lys Asp Arg Ile Glu Asn Arg Glu Asn Arg Gly Gly

85 90 95

Ser Asp Val Lys Phe Thr Tyr Arg Pro Ser Val Pro Ala His Arg Ala

100 105 110

Leu Lys Glu Ser Pro Leu Ser Ser Asp Asn Ile Phe Lys Gln Ser His

115 120 125

Ala Gly Leu Phe Asn Leu Cys Ile Val Val Leu Val Ala Val Asn Ser

130 135 140

Arg Leu Ile Ile Glu Asn Ile Met Lys Tyr Gly Trp Leu Ile Lys Thr

145 150 155 160

Gly Phe Trp Phe Ser Ser Arg Ser Leu Arg Asp Trp Pro Leu Leu Met

165 170 175

Cys Cys Leu Thr Leu Pro Ile Phe Ser Leu Ala Ala Tyr Leu Val Glu

180 185 190

Lys Leu Ala Cys Arg Lys Tyr Ile Ser Ala Pro Thr Val Val Phe Leu

195 200 205

His Ile Leu Phe Ser Ser Thr Ala Val Leu Tyr Pro Val Ser Val Ile

210 215 220

Leu Ser Cys Glu Ser Ala Val Leu Ser Gly Val Ala Leu Met Leu Phe

225 230 235 240

Ala Cys Ile Val Trp Leu Lys Leu Val Ser Tyr Ala His Thr Asn Phe

245 250 255

Asp Met Arg Ala Ile Ala Asn Ser Val Asp Lys Gly Asp Ala Leu Ser

260 265 270

Asn Ala Ser Ser Ala Glu Ser Ser His Asp Val Ser Phe Lys Ser Leu

275 280 285

Val Tyr Phe Met Val Ala Pro Thr Leu Cys Tyr Gln Pro Ser Tyr Pro

290 295 300

Arg Thr Ala Ser Ile Arg Lys Gly Trp Val Val Arg Gln Phe Val Lys

305 310 315 320

Leu Ile Ile Phe Thr Gly Phe Met Gly Phe Ile Ile Glu Gln Tyr Ile

325 330 335

Asn Pro Ile Val Gln Asn Ser Gln His Pro Leu Lys Gly Asp Leu Leu

340 345 350

Tyr Ala Ile Glu Arg Val Leu Lys Leu Ser Val Pro Asn Leu Tyr Val

355 360 365

Trp Leu Cys Met Phe Tyr Cys Phe Phe His Leu Trp Leu Asn Ile Leu

370 375 380

Ala Glu Leu Leu Arg Phe Gly Asp Arg Glu Phe Tyr Lys Asp Trp Trp

385 390 395 400

Asn Ala Arg Thr Val Glu Glu Tyr Trp Arg Met Trp Asn Met Pro Val

405 410 415

His Lys Trp Met Val Arg His Ile Tyr Phe Pro Cys Leu Arg His Lys

420 425 430

Ile Pro Arg Gly Val Ala Leu Leu Ile Thr Phe Phe Val Ser Ala Val

435 440 445

Phe His Glu Leu Cys Ile Ala Val Pro Cys His Ile Phe Lys Leu Trp

450 455 460

Ala Phe Ile Gly Ile Met Phe Gln Ile Pro Leu Val Gly Ile Thr Asn

465 470 475 480

Tyr Leu Gln Asn Lys Phe Arg Ser Ser Met Val Gly Asn Met Ile Phe

485 490 495

Trp Phe Ile Phe Cys Ile Leu Gly Gln Pro Met Cys Leu Leu Leu Tyr

500 505 510

Tyr His Asp Leu Met Asn Arg Lys Gly Thr Thr Glu Ser Arg

515 520 525

<210> 83

<211> 523

<212> Белок

<213> Vernonia galamensis

<400> 83

Met Ala Leu Leu Asp Thr Pro Gln Ile Gly Glu Ile Thr Thr Thr Ala

1 5 10 15

Thr Thr Thr Ile Arg Arg Arg Thr Thr Val Lys Pro Asp Ala Gly Ile

20 25 30

Gly Asp Gly Leu Phe Asp Ser Ser Ser Ser Ser Lys Thr Asn Ser Ser

35 40 45

Phe Glu Asp Gly Asp Ser Leu Asn Gly Asp Phe Asn Asp Lys Phe Lys

50 55 60

Glu Gln Ile Gly Ala Gly Asp Glu Ser Lys Asp Asp Ser Lys Gly Asn

65 70 75 80

Gly Gln Lys Ile Asp His Gly Gly Val Lys Lys Gly Arg Glu Thr Thr

85 90 95

Val Val His Tyr Ala Tyr Arg Pro Ser Ser Pro Ala His Arg Arg Ile

100 105 110

Lys Glu Ser Pro Leu Ser Ser Asp Ala Ile Phe Lys Gln Ser His Ala

115 120 125

Gly Leu Phe Asn Leu Cys Ile Val Val Leu Val Ala Val Asn Gly Arg

130 135 140

Leu Ile Ile Glu Asn Leu Met Lys Tyr Gly Leu Leu Ile Asn Ser Asn

145 150 155 160

Phe Trp Phe Ser Ser Arg Ser Leu Arg Asp Trp Pro Leu Leu Met Cys

165 170 175

Cys Leu Thr Pro Ser Asp Phe Pro Leu Ala Ala Tyr Ile Val Glu Lys

180 185 190

Leu Ala Trp Lys Lys Arg Ile Ser Asp Pro Val Val Ile Thr Leu His

195 200 205

Val Ile Ile Thr Thr Thr Ala Ile Leu Tyr Pro Val Phe Met Ile Leu

210 215 220

Arg Phe Asp Ser Val Val Leu Ser Gly Val Ser Leu Met Leu Cys Ala

225 230 235 240

Cys Ile Asn Trp Leu Lys Leu Val Ser Phe Val His Thr Asn Tyr Asp

245 250 255

Met Arg Ser Leu Leu Asn Ser Thr Asp Lys Gly Glu Val Glu Pro Met

260 265 270

Ser Ser Asn Met Asp Tyr Phe Tyr Asp Val Asn Phe Lys Ser Leu Val

275 280 285

Tyr Phe Met Val Ala Pro Thr Leu Cys Tyr Gln Ile Ser Tyr Pro Arg

290 295 300

Thr Ala Phe Ile Arg Lys Gly Trp Val Leu Arg Gln Leu Ile Lys Leu

305 310 315 320

Val Ile Phe Thr Gly Phe Met Gly Phe Ile Ile Glu Gln Tyr Ile Asn

325 330 335

Pro Ile Val Lys Asn Ser Arg His Pro Leu Lys Gly Asp Phe Leu Tyr

340 345 350

Ala Ile Glu Arg Val Leu Lys Leu Ser Val Pro Asn Leu Tyr Val Trp

355 360 365

Leu Cys Met Phe Tyr Cys Phe Phe His Leu Trp Leu Asn Ile Leu Ala

370 375 380

Glu Leu Leu Cys Phe Gly Asp Arg Glu Phe Tyr Lys Asp Trp Trp Asn

385 390 395 400

Ala Gln Thr Ile Glu Glu Tyr Trp Arg Leu Trp Asn Met Pro Val His

405 410 415

Lys Trp Ile Val Arg His Leu Tyr Phe Pro Cys Leu Arg Asn Gly Ile

420 425 430

Pro Lys Gly Ala Ala Ile Leu Val Ala Phe Phe Met Ser Ala Val Phe

435 440 445

His Glu Leu Cys Ile Ala Val Pro Cys His Ile Phe Lys Phe Trp Ala

450 455 460

Phe Ile Gly Ile Met Phe Gln Val Pro Leu Val Leu Leu Thr Asn Tyr

465 470 475 480

Leu Gln His Lys Phe Gln Asn Ser Met Val Gly Asn Met Ile Phe Trp

485 490 495

Cys Phe Phe Ser Ile Phe Gly Gln Pro Met Cys Val Leu Leu Tyr Tyr

500 505 510

His Asp Val Met Asn Gln Lys Gly Lys Ser Lys

515 520

<210> 84

<211> 517

<212> Белок

<213> Vernonia galamensis

<400> 84

Met Ala Leu Leu Asp Thr Pro Gln Ile Gly Glu Ile Thr Thr Thr Ala

1 5 10 15

Thr Thr Thr Ile Arg Gln His Pro Leu Gly Lys Pro Asp Ala Gly Ile

20 25 30

Gly Asp Gly Leu Phe Ser Ser Ser Ser Ser Lys Thr Asn Ser Ser Phe

35 40 45

Glu Asp Gly Asp Ser Leu Asn Gly Asp Phe Asn Asp Lys Phe Lys Glu

50 55 60

Gln Ile Gly Ala Gly Asp Glu Ser Lys Lys Gly Asn Gly Lys Ile Asp

65 70 75 80

His Gly Gly Val Lys Lys Gly Arg Glu Thr Thr Val Val His Tyr Ala

85 90 95

Tyr Arg Pro Ser Ser Pro Ala His Arg Arg Ile Lys Glu Ser Pro Leu

100 105 110

Ser Ser Asp Ala Ile Phe Lys Gln Ser His Ala Gly Leu Phe Asn Leu

115 120 125

Cys Ile Val Val Leu Val Ala Val Asn Gly Arg Leu Ile Ile Glu Asn

130 135 140

Leu Met Lys Tyr Gly Leu Leu Ile Asn Ser Lys Phe Trp Phe Ser Ser

145 150 155 160

Arg Ser Leu Arg Asp Trp Pro Leu Leu Met Cys Trp Leu Thr Pro Ser

165 170 175

Asp Phe Pro Leu Ala Ala Tyr Ile Val Glu Lys Leu Ala Trp Lys Lys

180 185 190

Arg Ile Ser Asp Pro Val Val Ile Thr Leu His Val Val Ile Thr Thr

195 200 205

Thr Ala Ile Leu Tyr Pro Ile Phe Met Ile Leu Arg Phe Asp Ser Val

210 215 220

Val Leu Leu Gly Val Ser Leu Met Leu Cys Ala Cys Ile Asn Trp Leu

225 230 235 240

Lys Leu Val Ser Phe Val His Thr Asn Tyr Asp Met Arg Ser Leu Leu

245 250 255

Asn Ser Thr Gly Lys Gly Glu Val Glu Pro Met Ser Ser Asn Met Asp

260 265 270

Tyr Phe Tyr Asp Ile Asn Phe Lys Ser Leu Val Tyr Phe Met Val Ala

275 280 285

Pro Thr Leu Cys Tyr Gln Ile Ser Tyr Pro Arg Thr Ala Phe Ile Arg

290 295 300

Lys Gly Trp Val Phe Arg Gln Leu Ile Lys Leu Val Ile Phe Thr Gly

305 310 315 320

Phe Met Gly Phe Ile Ile Glu Gln Tyr Ile Asn Pro Ile Val Lys Asn

325 330 335

Ser Arg His Pro Leu Asn Gly Asp Phe Leu Tyr Ala Ile Glu Arg Val

340 345 350

Leu Lys Val Ser Val Pro Asn Leu Tyr Val Trp Leu Cys Met Phe Tyr

355 360 365

Cys Phe Phe His Leu Trp Leu Asn Ile Leu Ala Glu Leu Leu Trp Phe

370 375 380

Gly Asp Arg Glu Phe Tyr Lys Asp Trp Trp Asn Thr Gln Thr Ile Glu

385 390 395 400

Glu Tyr Trp Arg Leu Trp Asn Met Pro Val His Lys Trp Ile Val Arg

405 410 415

His Leu Tyr Phe Pro Cys Leu Arg Asn Gly Ile Ser Lys Gly Ala Ala

420 425 430

Ile Leu Val Ala Phe Phe Met Ser Ala Val Phe His Glu Leu Cys Ile

435 440 445

Ala Val Pro Cys His Ile Leu Lys Phe Trp Ala Phe Ile Gly Ile Met

450 455 460

Phe Gln Val Pro Leu Val Leu Leu Thr Asn Tyr Leu Gln His Lys Phe

465 470 475 480

Gln Asn Ser Met Val Gly Asn Met Ile Phe Trp Cys Phe Phe Ser Ile

485 490 495

Phe Gly Gln Pro Met Cys Val Phe Leu Tyr Tyr His Glu Val Asn Gln

500 505 510

Lys Gly Lys Ser Lys

515

<210> 85

<211> 507

<212> Белок

<213> Euonymus alatus

<400> 85

Met Ala Ala Asn Leu Asn Glu Ala Ser Asp Leu Asn Phe Ser Leu Arg

1 5 10 15

Arg Arg Thr Gly Gly Ile Ser Ser Thr Thr Val Pro Asp Ser Ser Ser

20 25 30

Glu Thr Ser Ser Ser Glu Ala Asp Tyr Leu Asp Gly Gly Lys Gly Ala

35 40 45

Ala Asp Val Lys Asp Arg Gly Asp Gly Ala Val Glu Phe Gln Asn Ser

50 55 60

Met Lys Asn Val Glu Arg Ile Glu Lys His Glu Ser Arg Val Gly Leu

65 70 75 80

Asp Ser Arg Phe Thr Tyr Arg Pro Ser Val Pro Ala His Arg Thr Ile

85 90 95

Lys Glu Ser Pro Leu Ser Ser Asp Ala Ile Phe Lys Gln Ser His Ala

100 105 110

Gly Leu Phe Asn Leu Cys Ile Val Val Leu Val Ala Val Asn Ser Arg

115 120 125

Leu Ile Ile Glu Asn Leu Met Lys Tyr Gly Trp Leu Ile Arg Ser Gly

130 135 140

Phe Trp Phe Ser Ser Arg Ser Leu Arg Asp Trp Pro Leu Phe Met Cys

145 150 155 160

Cys Leu Thr Leu Pro Val Phe Pro Leu Ala Ala Phe Leu Phe Glu Lys

165 170 175

Leu Ala Gln Lys Asn Leu Ile Ser Glu Pro Val Val Val Leu Leu His

180 185 190

Ile Val Asn Thr Thr Ala Ala Val Leu Tyr Pro Val Leu Val Ile Leu

195 200 205

Arg Cys Asp Ser Ala Phe Met Ser Gly Val Thr Leu Met Leu Phe Ala

210 215 220

Cys Ile Val Trp Leu Lys Leu Val Ser Tyr Ala His Thr Asn Tyr Asp

225 230 235 240

Met Arg Ala Leu Thr Lys Ser Val Glu Lys Gly Asp Thr Pro Leu Ser

245 250 255

Ser Gln Asn Met Asp Tyr Ser Phe Asp Val Asn Ile Lys Ser Leu Ala

260 265 270

Tyr Phe Met Val Ala Pro Thr Leu Cys Tyr Gln Ile Ser Tyr Pro Arg

275 280 285

Thr Pro Tyr Val Arg Lys Gly Trp Val Val Arg Gln Phe Val Lys Leu

290 295 300

Ile Ile Phe Thr Gly Leu Met Gly Phe Ile Ile Glu Gln Tyr Ile Asn

305 310 315 320

Pro Ile Val Gln Asn Ser Gln His Pro Leu Lys Gly Asn Phe Leu Tyr

325 330 335

Ala Ile Glu Arg Val Leu Lys Leu Ser Val Pro Asn Leu Tyr Val Trp

340 345 350

Leu Cys Met Phe Tyr Cys Leu Phe His Leu Trp Leu Asn Ile Leu Ala

355 360 365

Glu Leu Leu Cys Phe Gly Asp Arg Glu Phe Tyr Lys Asp Trp Trp Asn

370 375 380

Ala Lys Thr Val Glu Glu Tyr Trp Arg Met Trp Asn Met Pro Val His

385 390 395 400

Lys Trp Met Val Arg His Ile Tyr Phe Pro Cys Leu Arg Asn Gly Ile

405 410 415

Pro Lys Gly Val Ala Phe Val Ile Ser Phe Leu Val Ser Ala Val Phe

420 425 430

His Glu Leu Cys Ile Ala Val Pro Cys His Ile Phe Lys Leu Trp Ala

435 440 445

Phe Phe Gly Ile Met Leu Gln Val Pro Leu Val Leu Ile Thr Ser Tyr

450 455 460

Leu Gln Asn Lys Phe Arg Ser Ser Met Val Gly Asn Met Met Phe Trp

465 470 475 480

Phe Ser Phe Cys Ile Phe Gly Gln Pro Met Cys Leu Leu Leu Tyr Tyr

485 490 495

His Asp Leu Met Asn Arg Asn Gly Lys Met Glu

500 505

<210> 86

<211> 498

<212> Белок

<213> Caenorhabditis elegans

<400> 86

Met Gln Met Arg Gln Gln Thr Gly Arg Arg Arg Arg Gln Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Ser Asn Gly Ser Leu Ala Ser Ser Arg Arg Ser Ser Phe Ala Gln

20 25 30

Asn Gly Asn Ser Ser Arg Lys Ser Ser Glu Met Arg Gly Pro Cys Glu

35 40 45

Lys Val Val His Thr Ala Gln Asp Ser Leu Phe Ser Thr Ser Ser Gly

50 55 60

Trp Thr Asn Phe Arg Gly Phe Phe Asn Leu Ser Ile Leu Leu Leu Val

65 70 75 80

Leu Ser Asn Gly Arg Val Ala Leu Glu Asn Val Ile Lys Tyr Gly Ile

85 90 95

Leu Ile Thr Pro Leu Gln Trp Ile Ser Thr Phe Val Glu His His Tyr

100 105 110

Ser Ile Trp Ser Trp Pro Asn Leu Ala Leu Ile Leu Cys Ser Asn Ile

115 120 125

Gln Ile Leu Ser Val Phe Gly Met Glu Lys Ile Leu Glu Arg Gly Trp

130 135 140

Leu Gly Asn Gly Phe Ala Ala Val Phe Tyr Thr Ser Leu Val Ile Ala

145 150 155 160

His Leu Thr Ile Pro Val Val Val Thr Leu Thr His Lys Trp Lys Asn

165 170 175

Pro Leu Trp Ser Val Val Met Met Gly Val Tyr Val Ile Glu Ala Leu

180 185 190

Lys Phe Ile Ser Tyr Gly His Val Asn Tyr Trp Ala Arg Asp Ala Arg

195 200 205

Arg Lys Ile Thr Glu Leu Lys Thr Gln Val Thr Asp Leu Ala Lys Lys

210 215 220

Thr Cys Asp Pro Lys Gln Phe Trp Asp Leu Lys Asp Glu Leu Ser Met

225 230 235 240

His Gln Met Ala Ala Gln Tyr Pro Ala Asn Leu Thr Leu Ser Asn Ile

245 250 255

Tyr Tyr Phe Met Ala Ala Pro Thr Leu Cys Tyr Glu Phe Lys Phe Pro

260 265 270

Arg Leu Leu Arg Ile Arg Lys His Phe Leu Ile Lys Arg Thr Val Glu

275 280 285

Leu Ile Phe Leu Ser Phe Leu Ile Ala Ala Leu Val Gln Gln Trp Val

290 295 300

Val Pro Thr Val Arg Asn Ser Met Lys Pro Leu Ser Glu Met Glu Tyr

305 310 315 320

Ser Arg Cys Leu Glu Arg Leu Leu Lys Leu Ala Ile Pro Asn His Leu

325 330 335

Ile Trp Leu Leu Phe Phe Tyr Thr Phe Phe His Ser Phe Leu Asn Leu

340 345 350

Ile Ala Glu Leu Leu Arg Phe Ala Asp Arg Glu Phe Tyr Arg Asp Phe

355 360 365

Trp Asn Ala Glu Thr Ile Gly Tyr Phe Trp Lys Ser Trp Asn Ile Pro

370 375 380

Val His Arg Phe Ala Val Arg His Ile Tyr Ser Pro Met Met Arg Asn

385 390 395 400

Asn Phe Ser Lys Met Ser Ala Phe Phe Val Val Phe Phe Val Ser Ala

405 410 415

Phe Phe His Glu Tyr Leu Val Ser Val Pro Leu Lys Ile Phe Arg Leu

420 425 430

Trp Ser Tyr Tyr Gly Met Met Gly Gln Ile Pro Leu Ser Ile Ile Thr

435 440 445

Asp Lys Val Val Arg Gly Gly Arg Thr Gly Asn Ile Ile Val Trp Leu

450 455 460

Ser Leu Ile Val Gly Gln Pro Leu Ala Ile Leu Met Tyr Gly His Asp

465 470 475 480

Trp Tyr Ile Leu Asn Phe Gly Val Ser Ala Val Gln Asn Gln Thr Val

485 490 495

Gly Ile

<210> 87

<211> 498

<212> Белок

<213> Rattus norvegicus

<400> 87

Met Gly Asp Arg Gly Gly Ala Gly Ser Ser Arg Arg Arg Arg Thr Gly

1 5 10 15

Ser Arg Val Ser Val Gln Gly Gly Ser Gly Pro Lys Val Glu Glu Asp

20 25 30

Glu Val Arg Glu Ala Ala Val Ser Pro Asp Leu Gly Ala Gly Gly Asp

35 40 45

Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala His Thr Arg Asp Lys Asp Arg

50 55 60

Gln Thr Ser Val Gly Asp Gly His Trp Glu Leu Arg Cys His Arg Leu

65 70 75 80

Gln Asp Ser Leu Phe Ser Ser Asp Ser Gly Phe Ser Asn Tyr Arg Gly

85 90 95

Ile Leu Asn Trp Cys Val Val Met Leu Ile Leu Ser Asn Ala Arg Leu

100 105 110

Ser Leu Glu Asn Leu Ile Lys Tyr Gly Ile Leu Val Asp Pro Ile Gln

115 120 125

Val Val Ser Leu Phe Leu Lys Asp Pro Tyr Ser Trp Pro Ala Pro Cys

130 135 140

Leu Ile Ile Ala Ser Asn Ile Phe Ile Val Ala Thr Phe Gln Ile Glu

145 150 155 160

Lys Arg Leu Ser Val Gly Ala Leu Thr Glu Gln Met Gly Leu Leu Leu

165 170 175

His Val Val Asn Leu Ala Thr Ile Ile Cys Phe Pro Ala Ala Val Ala

180 185 190

Leu Leu Val Glu Ser Ile Thr Pro Val Gly Ser Leu Phe Ala Leu Ala

195 200 205

Ser Tyr Ser Ile Ile Phe Leu Lys Leu Ser Ser Tyr Arg Asp Val Asn

210 215 220

Leu Trp Cys Arg Gln Arg Arg Val Lys Ala Lys Ala Val Ser Ala Gly

225 230 235 240

Lys Lys Val Ser Gly Ala Ala Ala Gln Asn Thr Val Ser Tyr Pro Asp

245 250 255

Asn Leu Thr Tyr Arg Asp Leu Tyr Tyr Phe Ile Phe Ala Pro Thr Leu

260 265 270

Cys Tyr Glu Leu Asn Phe Pro Arg Ser Pro Arg Ile Arg Lys Arg Phe

275 280 285

Leu Leu Arg Arg Val Leu Glu Met Leu Phe Phe Thr Gln Leu Gln Val

290 295 300

Gly Leu Ile Gln Gln Trp Met Val Pro Thr Ile Gln Asn Ser Met Lys

305 310 315 320

Pro Phe Lys Asp Met Asp Tyr Ser Arg Ile Ile Glu Arg Leu Leu Lys

325 330 335

Leu Ala Val Pro Asn His Leu Ile Trp Leu Ile Phe Phe Tyr Trp Leu

340 345 350

Phe His Ser Cys Leu Asn Ala Val Ala Glu Leu Leu Gln Phe Gly Asp

355 360 365

Arg Glu Phe Tyr Arg Asp Trp Trp Asn Ala Glu Ser Val Thr Tyr Phe

370 375 380

Trp Gln Asn Trp Asn Ile Pro Val His Lys Trp Cys Ile Arg His Phe

385 390 395 400

Tyr Lys Pro Met Leu Arg Leu Gly Ser Asn Lys Trp Met Ala Arg Thr

405 410 415

Gly Val Phe Trp Ala Ser Ala Phe Phe His Glu Tyr Leu Val Ser Ile

420 425 430

Pro Leu Arg Met Phe Arg Leu Trp Ala Phe Thr Ala Met Met Ala Gln

435 440 445

Val Pro Leu Ala Trp Ile Val Asn Arg Phe Phe Gln Gly Asn Tyr Gly

450 455 460

Asn Ala Ala Val Trp Val Thr Leu Ile Ile Gly Gln Pro Val Ala Val

465 470 475 480

Leu Met Tyr Val His Asp Tyr Tyr Val Leu Asn Tyr Asp Ala Pro Val

485 490 495

Gly Ala

<210> 88

<211> 488

<212> Белок

<213> Homo sapiens

<400> 88

Met Gly Asp Arg Gly Ser Ser Arg Arg Arg Arg Thr Gly Ser Arg Pro

1 5 10 15

Ser Ser His Gly Gly Gly Gly Pro Ala Ala Ala Glu Glu Glu Val Arg

20 25 30

Asp Ala Ala Ala Gly Pro Asp Val Gly Ala Ala Gly Asp Ala Pro Ala

35 40 45

Pro Ala Pro Asn Lys Asp Gly Asp Ala Gly Val Gly Ser Gly His Trp

50 55 60

Glu Leu Arg Cys His Arg Leu Gln Asp Ser Leu Phe Ser Ser Asp Ser

65 70 75 80

Gly Phe Ser Asn Tyr Arg Gly Ile Leu Asn Trp Cys Val Val Met Leu

85 90 95

Ile Leu Ser Asn Ala Arg Leu Phe Leu Glu Asn Leu Ile Lys Tyr Gly

100 105 110

Ile Leu Val Asp Pro Ile Gln Val Val Ser Leu Phe Leu Lys Asp Pro

115 120 125

Tyr Ser Trp Pro Ala Pro Cys Leu Val Ile Ala Ala Asn Val Phe Ala

130 135 140

Val Ala Ala Phe Gln Val Glu Lys Arg Leu Ala Val Gly Ala Leu Thr

145 150 155 160

Glu Gln Ala Gly Leu Leu Leu His Val Ala Asn Leu Ala Thr Ile Leu

165 170 175

Cys Phe Pro Ala Ala Val Val Leu Leu Val Glu Ser Ile Thr Pro Val

180 185 190

Gly Ser Leu Leu Ala Leu Met Ala His Thr Ile Leu Phe Leu Lys Leu

195 200 205

Phe Ser Tyr Arg Asp Val Asn Ser Trp Cys Arg Arg Ala Arg Ala Lys

210 215 220

Ala Ala Ser Ala Gly Lys Lys Ala Ser Ser Ala Ala Ala Pro His Thr

225 230 235 240

Val Ser Tyr Pro Asp Asn Leu Thr Tyr Arg Asp Leu Tyr Tyr Phe Leu

245 250 255

Phe Ala Pro Thr Leu Cys Tyr Glu Leu Asn Phe Pro Arg Ser Pro Arg

260 265 270

Ile Arg Lys Arg Phe Leu Leu Arg Arg Ile Leu Glu Met Leu Phe Phe

275 280 285

Thr Gln Leu Gln Val Gly Leu Ile Gln Gln Trp Met Val Pro Thr Ile

290 295 300

Gln Asn Ser Met Lys Pro Phe Lys Asp Met Asp Tyr Ser Arg Ile Ile

305 310 315 320

Glu Arg Leu Leu Lys Leu Ala Val Pro Asn His Leu Ile Trp Leu Ile

325 330 335

Phe Phe Tyr Trp Leu Phe His Ser Cys Leu Asn Ala Val Ala Glu Leu

340 345 350

Met Gln Phe Gly Asp Arg Glu Phe Tyr Arg Asp Trp Trp Asn Ser Glu

355 360 365

Ser Val Thr Tyr Phe Trp Gln Asn Trp Asn Ile Pro Val His Lys Trp

370 375 380

Cys Ile Arg His Phe Tyr Lys Pro Met Leu Arg Arg Gly Ser Ser Lys

385 390 395 400

Trp Met Ala Arg Thr Gly Val Phe Leu Ala Ser Ala Phe Phe His Glu

405 410 415

Tyr Leu Val Ser Val Pro Leu Arg Met Phe Arg Leu Trp Ala Phe Thr

420 425 430

Gly Met Met Ala Gln Ile Pro Leu Ala Trp Phe Val Gly Arg Phe Phe

435 440 445

Gln Gly Asn Tyr Gly Asn Ala Ala Val Trp Leu Ser Leu Ile Ile Gly

450 455 460

Gln Pro Ile Ala Val Leu Met Tyr Val His Asp Tyr Tyr Val Leu Asn

465 470 475 480

Tyr Glu Ala Pro Ala Ala Glu Ala

485

<210> 89

<211> 11

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> консервативная последовательность

<220>

<221> X

<222> (4)..(4)

<223> Треонин (T) или Серин (S)

<400> 89

Arg Gly Val Xaa Arg His Arg Trp Thr Gly Arg

1 5 10

<210> 90

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> консервативная последовательность

<220>

<221> X

<222> (1)..(1)

<223> Фенилаланин (F) или Тирозин (Y)

<400> 90

Xaa Glu Ala His Leu Trp Asp Lys

1 5

<210> 91

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> консервативная последовательность

<400> 91

Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly

1 5

<210> 92

<211> 8

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> консервативная последовательность

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой

<220>

<221> X

<222> (5)..(5)

<223> Серин (S) или Аланин (A)

<220>

<221> X

<222> (8)..(8)

<223> любая аминокислота

<400> 92

Ser Xaa Gly Phe Xaa Arg Gly Xaa

1 5

<210> 93

<211> 14

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> консервативная последовательность

<220>

<221> X

<222> (3)..(3)

<223> Гистидин (H) или Гутамин (Q)

<220>

<221> X

<222> (6)..(6)

<223> Аргинин (R) или Лизин (K)

<220>

<221> X

<222> (12)..(12)

<223> Аргинин (R) или Лизин (K)

<220>

<221> misc_feature

<222> (13)..(13)

<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой

<400> 93

His His Xaa Asn Gly Xaa Trp Glu Ala Arg Ile Gly Xaa Val

1 5 10

<210> 94

<211> 9

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> консервативная последовательность

<220>

<221> X

<222> (7)..(7)

<223> любая аминокислота

<400> 94

Gln Glu Glu Ala Ala Ala Xaa Tyr Asp

1 5

<210> 95

<211> 165

<212> Белок

<213> Brassica napus

<400> 95

Met Gly Ile Leu Arg Lys Lys Lys His Glu Arg Lys Pro Ser Phe Lys

1 5 10 15

Ser Val Leu Thr Ala Ile Leu Ala Thr His Ala Ala Thr Phe Leu Leu

20 25 30

Leu Ile Ala Gly Val Ser Leu Ala Gly Thr Ala Ala Ala Phe Ile Ala

35 40 45

Thr Met Pro Leu Phe Val Val Phe Ser Pro Ile Leu Val Pro Ala Gly

50 55 60

Ile Thr Thr Gly Leu Leu Thr Thr Gly Leu Ala Ala Ala Gly Gly Ala

65 70 75 80

Gly Ala Thr Ala Val Thr Ile Ile Leu Trp Leu Tyr Lys Arg Ala Thr

85 90 95

Gly Lys Ala Pro Pro Lys Val Leu Glu Lys Val Leu Lys Lys Ile Ile

100 105 110

Pro Gly Ala Ala Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Gly Ala Ala Pro Ala

115 120 125

Ala Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala Val Ala Pro Ala Ala Ala Pro Ala

130 135 140

Ala Ala Pro Ala Pro Lys Pro Ala Ala Pro Pro Ala Pro Lys Pro Ala

145 150 155 160

Ala Ala Pro Ser Ile

165

<210> 96

<211> 193

<212> Белок

<213> Brassica napus

<400> 96

Met Ala Asp Val Arg Thr His Ala His Gln Val Gln Val His Pro Leu

1 5 10 15

Arg Gln Gln Glu Gly Gly Ile Lys Val Val Tyr Pro Gln Ser Gly Pro

20 25 30

Ser Ser Thr Gln Val Leu Ala Val Ile Ala Gly Val Pro Val Gly Gly

35 40 45

Thr Leu Leu Thr Leu Ala Gly Leu Thr Leu Ala Gly Ser Val Ile Gly

50 55 60

Leu Met Leu Ala Phe Pro Leu Phe Leu Ile Phe Ser Pro Val Ile Val

65 70 75 80

Pro Ala Ala Phe Val Ile Gly Leu Ala Met Thr Gly Phe Met Ala Ser

85 90 95

Gly Ala Ile Gly Leu Thr Gly Leu Ser Ser Met Ser Trp Val Leu Asn

100 105 110

His Ile Arg Arg Val Arg Glu Arg Met Pro Asp Glu Leu Glu Glu Ala

115 120 125

Lys Gln Arg Leu Ala Asp Met Ala Glu Tyr Val Gly Gln Arg Thr Lys

130 135 140

Asp Ala Gly Gln Thr Ile Glu Glu Lys Ala His Asp Val Arg Glu Ser

145 150 155 160

Lys Thr Tyr Asp Val Arg Asp Arg Asp Thr Lys Gly His Thr Ala Thr

165 170 175

Gly Gly Asp Arg Asp Thr Lys Thr Thr Arg Glu Val Arg Val Ala Thr

180 185 190

Thr

<210> 97

<211> 188

<212> Белок

<213> Brassica napus

<400> 97

Met Ala Asn Val Asp Arg Arg Val Asn Val Asp Arg Thr Asp Lys Gly

1 5 10 15

Leu Gln Leu Gln Pro Gln Tyr Glu Asp Arg Val Gly Tyr Gly Tyr Gly

20 25 30

Tyr Gly Gly Asn Thr Asp Tyr Lys Ser Cys Gly Pro Ser Thr Asn Gln

35 40 45

Ile Val Ala Leu Ile Ala Gly Val Pro Ile Gly Gly Ser Leu Leu Ala

50 55 60

Leu Ala Gly Leu Thr Leu Ala Gly Ser Val Ile Gly Phe Met Leu Ser

65 70 75 80

Ile Pro Leu Phe Leu Leu Phe Ser Pro Val Ile Val Pro Ala Ala Leu

85 90 95

Thr Ile Gly Leu Ala Val Thr Gly Ile Leu Ala Ser Gly Leu Phe Gly

100 105 110

Leu Thr Gly Leu Ser Ser Val Ser Trp Val Leu Asn Tyr Ile Arg Gly

115 120 125

Arg Ser Asp Thr Val Pro Glu Gln Leu Asp Tyr Ala Lys Arg Arg Met

130 135 140

Ala Asp Ala Val Gly Tyr Ala Gly Gln Lys Gly Lys Glu Met Gly Gln

145 150 155 160

Tyr Val Gln Asp Lys Ala His Glu Ala His Asp Thr Ser Leu Thr Thr

165 170 175

Glu Thr Asn Gly Lys Thr Arg Arg Ala His Ile Ala

180 185

<210> 98

<211> 180

<212> Белок

<213> Brassica napus

<400> 98

Met Ala Asp Thr Ala Arg Thr His His Asp Ile Thr Ser Arg Asp Gln

1 5 10 15

Tyr Pro Ile Leu Gly Arg Asp Arg Asp Gln Tyr Pro Tyr Gly Arg Ser

20 25 30

Asp Tyr Gln Thr Ser Gly Gln Asp Tyr Ser Lys Thr Arg Gln Ile Ala

35 40 45

Lys Ala Ala Thr Ala Val Thr Ala Gly Gly Ser Leu Leu Val Leu Ser

50 55 60

Ser Leu Thr Leu Val Gly Thr Val Ile Ala Leu Thr Val Ala Thr Thr

65 70 75 80

Leu Leu Val Ile Phe Ser Pro Ile Leu Val Pro Ala Leu Ile Thr Val

85 90 95

Ala Leu Leu Ile Thr Gly Phe Leu Ser Ser Gly Gly Phe Gly Ile Ala

100 105 110

Asp Ile Thr Val Phe Ser Trp Ile Tyr Lys Tyr Ala Thr Gly Glu His

115 120 125

Pro Gln Gly Ser Asp Lys Leu Asp Ser Ala Arg Met Lys Leu Gly Thr

130 135 140

Lys Ala Gln Asp Ile Lys Asp Arg Ala Gln Tyr Tyr Gly Gln Gln His

145 150 155 160

Thr Gly Gly Glu His Asp Arg Asp Arg Thr Arg Gly Thr His His Thr

165 170 175

Thr Thr Thr Thr

180

<210> 99

<211> 210

<212> Белок

<213> Brassica napus

<400> 99

Met Ala Asp Thr His Arg Val Asp Arg Thr Asp Arg His Leu Gln Phe

1 5 10 15

Gln Ser Pro Tyr Glu Gly Gly Arg Val Ser Ile Gln Tyr Glu Gly Gly

20 25 30

Gly Gly Ala Gly Gly Tyr Gly Gly Arg Gly Gly Gly Tyr Gly Ala Glu

35 40 45

Gly Tyr Lys Ser Met Met Pro Glu Arg Gly Pro Ser Ser Thr Gln Val

50 55 60

Leu Ser Phe Leu Val Gly Val Pro Ile Val Gly Ser Leu Leu Ala Ile

65 70 75 80

Ala Gly Leu Leu Leu Ala Gly Ser Val Ile Gly Leu Leu Ile Ser Ile

85 90 95

Pro Leu Phe Leu Leu Phe Ser Pro Val Ile Val Pro Ala Ala Leu Thr

100 105 110

Ile Gly Leu Ala Ala Thr Gly Phe Leu Ala Ser Gly Met Phe Gly Leu

115 120 125

Thr Gly Leu Ser Ser Val Ser Trp Val Leu Asn Tyr Leu Arg Gly Thr

130 135 140

Arg Lys Ser Ser Val Pro Glu Gln Leu Glu Tyr Ala Lys Lys Arg Met

145 150 155 160

Ala Asp Ala Val Gly Tyr Ala Gly Gln Lys Gly Lys Gly Met Gly Gln

165 170 175

His Val Gln Asn Lys Ala Gln Glu Ala Lys Gln Tyr Asp Ile Ser Lys

180 185 190

Thr His Asp Thr Thr Thr Lys Gly His Glu Thr Thr Gln Arg Thr Ala

195 200 205

Ala Ala

210

<210> 100

<211> 149

<212> Белок

<213> Brassica napus

<400> 100

Met Ala Asn Gln Thr Arg Thr His Gln Asp Ile Ile Val Arg Asp Ser

1 5 10 15

Arg Ile Thr Leu Asp Arg Asp His Pro Lys Thr Gly Ala Gln Met Val

20 25 30

Lys Val Ala Thr Gly Val Ala Ala Gly Gly Ser Leu Leu Val Leu Ser

35 40 45

Gly Leu Thr Leu Ala Gly Thr Val Ile Ala Phe Ala Val Ala Thr Pro

50 55 60

Leu Leu Ile Ile Phe Ser Pro Val Leu Val Pro Ala Val Ile Thr Val

65 70 75 80

Val Leu Ile Ile Thr Gly Phe Leu Ala Ser Gly Gly Phe Gly Ile Ala

85 90 95

Ala Ile Thr Ala Phe Ser Trp Leu Tyr Arg His Met Thr Gly Ser Gly

100 105 110

Ser Asp Gln Lys Ile Glu Ser Ala Arg Met Lys Val Gly Ser Arg Gly

115 120 125

Tyr Asp Thr Lys Tyr Gly Gln His Asn Ile Gly Val His Gln Gln His

130 135 140

Gln Gln Ala Ala Ser

145

<210> 101

<211> 137

<212> Белок

<213> Arachis hypogaea

<400> 101

Met Ala Glu Ala Leu Tyr Tyr Gly Gly Arg Gln Arg Gln Glu Gln Pro

1 5 10 15

Arg Ser Thr Gln Leu Val Lys Ala Thr Thr Ala Val Val Ala Gly Gly

20 25 30

Ser Leu Leu Ile Leu Ala Gly Leu Val Leu Ala Gly Thr Val Ile Gly

35 40 45

Leu Thr Thr Ile Thr Pro Leu Phe Val Ile Phe Ser Pro Val Leu Val

50 55 60

Pro Ala Val Ile Thr Val Ala Leu Leu Gly Leu Gly Phe Leu Ala Ser

65 70 75 80

Gly Gly Phe Gly Val Ala Ala Ile Thr Val Leu Thr Trp Ile Tyr Arg

85 90 95

Tyr Val Thr Gly Lys His Pro Pro Gly Ala Asn Gln Leu Asp Thr Ala

100 105 110

Arg His Lys Leu Met Gly Lys Ala Arg Glu Ile Lys Asp Phe Gly Gln

115 120 125

Gln Gln Thr Ser Gly Ala Gln Ala Ser

130 135

<210> 102

<211> 150

<212> Белок

<213> Arachis hypogaea

<400> 102

Met Thr Asp Arg Thr Gln Pro His Ala Val Gln Val His Thr Thr Ala

1 5 10 15

Gly Arg Phe Gly Asp Thr Ala Ala Gly Thr Asn Arg Tyr Ala Asp Arg

20 25 30

Gly Pro Ser Thr Ser Lys Val Ile Ala Val Ile Thr Gly Leu Pro Ile

35 40 45

Gly Gly Thr Leu Leu Leu Phe Ala Gly Leu Ala Leu Ala Gly Thr Leu

50 55 60

Leu Gly Leu Ala Val Thr Thr Pro Leu Phe Ile Leu Phe Ser Pro Val

65 70 75 80

Ile Val Pro Ala Thr Ile Val Val Gly Leu Ser Val Ala Gly Phe Leu

85 90 95

Thr Ser Gly Ala Cys Gly Leu Thr Gly Leu Ser Ser Phe Ser Trp Val

100 105 110

Met Asn Tyr Ile Arg Gln Thr His Gly Ser Val Pro Glu Gln Leu Glu

115 120 125

Met Ala Lys His Arg Met Ala Asp Val Ala Gly Tyr Val Gly Gln Lys

130 135 140

Thr Lys Asp Val Gly Gln

145 150

<210> 103

<211> 166

<212> Белок

<213> Arachis hypogaea

<400> 103

Met Ser Asp Gln Thr Arg Thr Gly Tyr Gly Gly Gly Gly Ser Tyr Gly

1 5 10 15

Ser Ser Tyr Gly Gly Gly Gly Thr Tyr Gly Ser Ser Tyr Gly Thr Ser

20 25 30

Tyr Asp Pro Ser Thr Asn Gln Pro Ile Arg Gln Ala Ile Lys Phe Met

35 40 45

Thr Ala Ser Thr Ile Gly Val Ser Phe Leu Ile Leu Ser Gly Leu Ile

50 55 60

Leu Thr Gly Thr Val Ile Gly Leu Ile Ile Ala Thr Pro Leu Leu Val

65 70 75 80

Ile Phe Ser Pro Ile Leu Val Pro Ala Ala Ile Thr Leu Ala Leu Ala

85 90 95

Ala Gly Gly Phe Leu Phe Ser Gly Gly Cys Gly Val Ala Ala Ile Ala

100 105 110

Ala Leu Ser Trp Leu Tyr Ser Tyr Val Thr Gly Lys His Pro Ala Gly

115 120 125

Ser Asp Arg Leu Asp Tyr Ala Lys Gly Val Ile Ala Asp Lys Ala Arg

130 135 140

Asp Val Lys Asp Arg Ala Lys Asp Tyr Ala Gly Ala Gly Arg Ala Gln

145 150 155 160

Glu Gly Thr Pro Gly Tyr

165

<210> 104

<211> 176

<212> Белок

<213> Arachis hypogaea

<400> 104

Met Ala Thr Ala Thr Asp Arg Ala Pro His Gln Val Gln Val His Thr

1 5 10 15

Pro Thr Thr Gln Arg Val Asp Val Pro Arg Arg Gly Tyr Asp Val Ser

20 25 30

Gly Gly Gly Ile Lys Thr Leu Leu Pro Glu Arg Gly Pro Ser Thr Ser

35 40 45

Gln Ile Ile Ala Val Leu Val Gly Val Pro Thr Gly Gly Thr Leu Leu

50 55 60

Leu Leu Ser Gly Leu Ser Leu Leu Gly Thr Ile Ile Gly Leu Ala Ile

65 70 75 80

Ala Thr Pro Val Phe Ile Phe Phe Ser Pro Val Ile Val Pro Ala Val

85 90 95

Val Thr Ile Gly Leu Ala Val Thr Gly Ile Leu Thr Ala Gly Ala Cys

100 105 110

Gly Leu Thr Gly Leu Met Ser Leu Ser Trp Met Ile Asn Phe Ile Arg

115 120 125

Gln Val His Gly Thr Thr Val Pro Asp Gln Leu Asp Ser Val Lys Arg

130 135 140

Arg Met Ala Asp Met Ala Asp Tyr Val Gly Gln Lys Thr Lys Asp Ala

145 150 155 160

Gly Gln Glu Ile Gln Thr Lys Ala Gln Asp Val Lys Arg Ser Ser Ser

165 170 175

<210> 105

<211> 153

<212> Белок

<213> Ricinus communis

<400> 105

Met Ala Asp Arg Pro Gln Pro His Gln Val Gln Val His Arg Tyr Asp

1 5 10 15

Pro Thr Thr Gly Tyr Lys Gly Gln Gln Lys Gly Pro Ser Ala Ser Lys

20 25 30

Val Leu Ala Val Leu Thr Phe Leu Pro Val Gly Gly Gly Leu Leu Ser

35 40 45

Leu Ser Gly Ile Thr Leu Thr Asn Thr Leu Ile Gly Met Ala Ile Ala

50 55 60

Thr Pro Leu Phe Ile Leu Phe Gly Pro Ile Ile Leu Pro Ala Ala Val

65 70 75 80

Val Ile Gly Leu Ala Met Met Ala Phe Met Val Ala Gly Ala Leu Gly

85 90 95

Leu Ser Gly Leu Thr Ser Gln Ser Trp Ala Leu Lys Tyr Phe Arg Glu

100 105 110

Gly Thr Ala Met Pro Glu Ser Leu Asp Gln Ala Lys Lys Arg Met Gln

115 120 125

Asp Met Ala Gly Tyr Val Gly Met Lys Thr Lys Glu Val Gly Gln Asp

130 135 140

Ile Gln Arg Lys Ala Gln Glu Gly Lys

145 150

<210> 106

<211> 138

<212> Белок

<213> Ricinus communis

<400> 106

Met Ala Glu His Gln Gln Ser Pro Val Val Ser His Arg Pro Arg Val

1 5 10 15

Asn Gln Leu Val Lys Ala Gly Thr Ala Ala Thr Ala Gly Ser Ser Leu

20 25 30

Leu Phe Leu Ser Gly Leu Thr Leu Thr Gly Thr Val Ile Ala Leu Ala

35 40 45

Leu Ala Thr Pro Leu Met Val Leu Phe Ser Pro Val Leu Leu Pro Ala

50 55 60

Val Ile Ile Ile Ser Leu Ile Gly Ala Gly Phe Leu Thr Ser Gly Gly

65 70 75 80

Phe Gly Phe Gly Ala Ile Leu Val Leu Ser Trp Ile Tyr Arg Tyr Val

85 90 95

Thr Gly Lys Gln Pro Pro Gly Ala Glu Ser Leu Asp Gln Ala Arg Leu

100 105 110

Lys Leu Ala Gly Lys Ala Arg Glu Met Lys Asp Arg Ala Glu Gln Phe

115 120 125

Gly Gln His Val Thr Gly Gln Gln Thr Ser

130 135

<210> 107

<211> 226

<212> Белок

<213> Glycine max

<400> 107

Met Thr Thr Gln Val Pro Pro His Ser Val Gln Val His Thr Thr Thr

1 5 10 15

Thr His Arg Tyr Glu Ala Gly Val Val Pro Pro Gly Ala Arg Phe Glu

20 25 30

Thr Ser Tyr Glu Ala Gly Val Lys Ala Ala Ser Ile Tyr His Ser Glu

35 40 45

Arg Gly Pro Thr Thr Ser Gln Val Leu Ala Val Leu Ala Gly Leu Pro

50 55 60

Val Gly Gly Ile Leu Leu Leu Leu Ala Gly Leu Thr Leu Ala Gly Thr

65 70 75 80

Leu Thr Gly Leu Ala Val Ala Thr Pro Leu Phe Val Leu Phe Ser Pro

85 90 95

Val Leu Val Pro Ala Thr Val Ala Ile Gly Leu Ala Val Ala Gly Phe

100 105 110

Leu Thr Ser Gly Ala Phe Gly Leu Thr Ala Leu Ser Ser Phe Ser Trp

115 120 125

Ile Leu Asn Tyr Ile Arg Glu Thr Gln Pro Ala Ser Glu Asn Leu Ala

130 135 140

Ala Ala Ala Lys His His Leu Ala Glu Ala Ala Glu Tyr Val Gly Gln

145 150 155 160

Lys Thr Lys Glu Val Gly Gln Lys Thr Lys Glu Val Gly Gln Asp Ile

165 170 175

Gln Ser Lys Ala Gln Asp Thr Arg Glu Ala Ala Ala Arg Asp Ala Arg

180 185 190

Glu Ala Ala Ala Arg Asp Ala Arg Glu Ala Ala Ala Arg Asp Ala Lys

195 200 205

Val Glu Ala Arg Asp Val Lys Arg Thr Thr Val Thr Ala Thr Thr Ala

210 215 220

Thr Ala

225

<210> 108

<211> 223

<212> Белок

<213> Glycine max

<400> 108

Met Thr Thr Val Pro Pro His Ser Val Gln Val His Thr Thr Thr His

1 5 10 15

Arg Tyr Glu Ala Gly Val Val Pro Pro Ala Arg Phe Glu Ala Pro Arg

20 25 30

Tyr Glu Ala Gly Ile Lys Ala Pro Ser Ser Ile Tyr His Ser Glu Arg

35 40 45

Gly Pro Thr Thr Ser Gln Val Leu Ala Val Val Ala Gly Leu Pro Val

50 55 60

Gly Gly Ile Leu Leu Leu Leu Ala Gly Leu Thr Leu Ala Gly Thr Leu

65 70 75 80

Thr Gly Leu Val Val Ala Thr Pro Leu Phe Ile Ile Phe Ser Pro Val

85 90 95

Leu Ile Pro Ala Thr Val Ala Ile Gly Leu Ala Val Ala Gly Phe Leu

100 105 110

Thr Ser Gly Val Phe Gly Leu Thr Ala Leu Ser Ser Phe Ser Trp Ile

115 120 125

Leu Asn Tyr Ile Arg Glu Thr Gln Pro Ala Ser Glu Asn Leu Ala Ala

130 135 140

Ala Ala Lys His His Leu Ala Glu Ala Ala Glu Tyr Val Gly Gln Lys

145 150 155 160

Thr Lys Glu Val Gly Gln Lys Thr Lys Glu Val Gly Gln Asp Ile Gln

165 170 175

Ser Lys Ala Gln Asp Thr Arg Glu Ala Ala Ala Arg Asp Ala Arg Asp

180 185 190

Ala Arg Glu Ala Ala Ala Arg Asp Ala Arg Asp Ala Lys Val Glu Ala

195 200 205

Arg Asp Val Lys Arg Thr Thr Val Thr Ala Thr Thr Ala Thr Ala

210 215 220

<210> 109

<211> 155

<212> Белок

<213> Linum usitatissimum

<400> 109

Met Asp Gln Thr His Gln Thr Tyr Ala Gly Thr Thr Gln Asn Pro Ser

1 5 10 15

Tyr Gly Gly Gly Gly Thr Met Tyr Gln Gln Gln Gln Pro Arg Ser Tyr

20 25 30

Gln Ala Val Lys Ala Ala Thr Ala Ala Thr Ala Gly Gly Ser Leu Ile

35 40 45

Val Leu Ser Gly Leu Ile Leu Thr Ala Thr Val Ile Ser Leu Ile Ile

50 55 60

Ala Thr Pro Leu Leu Val Ile Phe Ser Pro Val Leu Val Pro Ala Leu

65 70 75 80

Ile Thr Val Gly Leu Leu Ile Thr Gly Phe Leu Ala Ser Gly Gly Phe

85 90 95

Gly Val Ala Ala Val Thr Val Leu Ser Trp Ile Tyr Arg Tyr Val Thr

100 105 110

Gly Gly His Pro Ala Gly Gly Asp Ser Leu Asp Gln Ala Arg Ser Lys

115 120 125

Leu Ala Gly Lys Ala Arg Glu Val Lys Asp Arg Ala Ser Glu Phe Ala

130 135 140

Gln Gln His Val Thr Gly Gly Gln Gln Thr Ser

145 150 155

<210> 110

<211> 180

<212> Белок

<213> Linum usitatissimum

<400> 110

Met Ala Asp Arg Thr Thr Gln Pro His Gln Val Gln Val His Thr Gln

1 5 10 15

His His Tyr Pro Thr Gly Gly Ala Phe Gly Arg Tyr Glu Gly Val Leu

20 25 30

Lys Gly Gly Pro Tyr His Gln Gln Gly Thr Gly Ser Gly Pro Ser Ala

35 40 45

Ser Lys Val Leu Ala Val Met Thr Ala Leu Pro Ile Gly Gly Thr Leu

50 55 60

Leu Ala Leu Ala Gly Ile Thr Leu Ala Gly Thr Met Ile Gly Leu Ala

65 70 75 80

Ile Thr Thr Pro Ile Phe Val Ile Cys Ser Pro Val Leu Val Pro Ala

85 90 95

Ala Leu Leu Ile Gly Phe Ala Val Ser Ala Phe Leu Ala Ser Gly Met

100 105 110

Ala Gly Leu Thr Gly Leu Thr Ser Leu Ser Trp Phe Ala Arg Tyr Leu

115 120 125

Gln Gln Ala Gly Gln Gly Val Gly Val Gly Val Pro Asp Ser Phe Asp

130 135 140

Gln Ala Lys Arg Arg Met Gln Asp Ala Ala Gly Tyr Met Gly Gln Lys

145 150 155 160

Thr Lys Glu Val Gly Gln Glu Ile Gln Arg Lys Ser Gln Asp Val Lys

165 170 175

Ala Ser Asp Lys

180

<210> 111

<211> 181

<212> Белок

<213> Helianthus annuus

<400> 111

Thr Thr Thr Thr Tyr Asp Arg His Phe Thr Thr Thr Gln Pro His Tyr

1 5 10 15

Arg Gln Asp Asp Arg Ser Arg Tyr Asp Gln Gln Thr His Ser Gln Ser

20 25 30

Thr Ser Arg Thr Leu Ala Ile Ile Ala Leu Leu Pro Val Gly Gly Ile

35 40 45

Leu Leu Gly Leu Ala Ala Leu Thr Phe Ile Gly Thr Leu Ile Gly Leu

50 55 60

Ala Leu Ala Thr Pro Leu Phe Val Ile Phe Ser Pro Ile Ile Val Pro

65 70 75 80

Ala Val Leu Thr Ile Gly Leu Ala Val Thr Gly Phe Leu Ala Ser Gly

85 90 95

Thr Phe Gly Leu Thr Gly Leu Ser Ser Leu Ser Tyr Leu Phe Asn Met

100 105 110

Val Arg Gln Thr Ala Gly Ser Val Pro Glu Ser Leu Asp Tyr Val Lys

115 120 125

Gly Thr Leu Gln Asp Ala Gly Glu Tyr Ala Gly Gln Lys Thr Lys Asp

130 135 140

Phe Gly Gln Lys Ile Gln Ser Thr Ala His Glu Met Gly Asp Gln Gly

145 150 155 160

Gln Val Gly Val His Ala Gln Val Gly Gly Gly Lys Glu Gly Arg Lys

165 170 175

Ser Gly Asp Arg Thr

180

<210> 112

<211> 156

<212> Белок

<213> Zea mays

<400> 112

Met Ala Asp His His Arg Gly Ala Thr Gly Gly Gly Gly Gly Tyr Gly

1 5 10 15

Asp Leu Gln Arg Gly Gly Gly Met His Gly Glu Ala Gln Gln Gln Gln

20 25 30

Lys Gln Gly Ala Met Met Thr Ala Leu Lys Ala Ala Thr Ala Ala Thr

35 40 45

Phe Gly Gly Ser Met Leu Val Leu Ser Gly Leu Ile Leu Ala Gly Thr

50 55 60

Val Ile Ala Leu Thr Val Ala Thr Pro Val Leu Val Ile Phe Ser Pro

65 70 75 80

Val Leu Val Pro Ala Ala Ile Ala Leu Ala Leu Met Ala Ala Gly Phe

85 90 95

Val Thr Ser Gly Gly Leu Gly Val Ala Ala Leu Ser Val Phe Ser Trp

100 105 110

Met Tyr Lys Tyr Leu Thr Gly Lys His Pro Pro Ala Ala Asp Gln Leu

115 120 125

Asp His Ala Lys Ala Arg Leu Ala Ser Lys Ala Arg Asp Val Lys Asp

130 135 140

Ala Ala Gln His Arg Ile Asp Gln Ala Gln Gly Ser

145 150 155

<210> 113

<211> 244

<212> Белок

<213> Brassica napus

<400> 113

Val Ser Lys Pro Asp Asp Cys Arg Arg Ile Val Asp Glu Thr Ile Ser

1 5 10 15

His Phe Gly Arg Leu Asp His Leu Val Asn Asn Ala Gly Ile Met Gln

20 25 30

Ile Ser Met Phe Glu Asn Ile Glu Glu Ile Thr Arg Thr Arg Ala Val

35 40 45

Met Asp Thr Asn Phe Trp Gly Ser Val Tyr Thr Thr Arg Ala Ala Leu

50 55 60

Pro Tyr Leu Arg Gln Ser Asn Gly Lys Ile Val Ala Met Ser Ser Ser

65 70 75 80

Ala Ala Trp Leu Thr Ala Pro Arg Met Ser Phe Tyr Asn Ala Ser Lys

85 90 95

Ala Ala Leu Leu Asn Phe Phe Glu Thr Leu Arg Ile Glu Leu Gly Ser

100 105 110

Asp Val His Ile Thr Ile Val Thr Pro Gly Tyr Ile Glu Ser Glu Leu

115 120 125

Thr Gln Gly Lys Tyr Phe Ser Gly Glu Gly Glu Leu Val Val Asn Gln

130 135 140

Asp Ile Arg Asp Val Gln Ile Gly Ala Phe Pro Val Thr Ser Val Ser

145 150 155 160

Gly Cys Ala Lys Gly Ile Val Lys Gly Val Cys Arg Lys Gln Arg Tyr

165 170 175

Val Thr Glu Pro Ser Trp Phe Lys Val Thr Tyr Leu Trp Lys Val Phe

180 185 190

Cys Pro Glu Leu Ile Glu Trp Gly Cys Arg Leu Leu Phe Leu Ser Gly

195 200 205

His Gly Thr Ser Glu Lys Asn Ala Leu Asn Lys Lys Ile Leu Asp Ile

210 215 220

Pro Gly Val Arg Ser Ala Leu Tyr Pro Glu Ser Ile Arg Thr Pro Glu

225 230 235 240

Ile Lys Ser Glu

<210> 114

<211> 349

<212> Белок

<213> Brassica napus

<400> 114

Met Glu Leu Ile Asn Asp Phe Leu Asn Leu Thr Ala Pro Phe Phe Thr

1 5 10 15

Phe Phe Gly Leu Cys Phe Phe Leu Pro Pro Phe Tyr Phe Phe Lys Phe

20 25 30

Val Gln Ser Ile Phe Ser Thr Ile Phe Ser Glu Asn Val Tyr Gly Lys

35 40 45

Val Val Leu Ile Thr Gly Ala Ser Ser Gly Ile Gly Glu Gln Leu Ala

50 55 60

Tyr Glu Tyr Ala Ser Lys Gly Ala Cys Leu Ala Leu Thr Ala Arg Arg

65 70 75 80

Lys Asn Arg Leu Glu Glu Val Ala Glu Ile Ala Arg Glu Val Gly Ser

85 90 95

Pro Asn Val Val Thr Val His Ala Asp Val Ser Lys Pro Asp Asp Cys

100 105 110

Arg Arg Ile Val Asp Glu Thr Ile Ser His Phe Gly Arg Leu Asp His

115 120 125

Leu Val Asn Asn Ala Gly Ile Met Gln Ile Ser Met Phe Glu Asn Ile

130 135 140

Glu Glu Ile Thr Arg Thr Arg Ala Val Met Asp Thr Asn Phe Trp Gly

145 150 155 160

Ala Val Tyr Thr Thr Arg Ala Ala Leu Pro Tyr Leu Arg Gln Ser Asn

165 170 175

Gly Lys Ile Val Ala Met Ser Ser Ser Ala Ala Trp Leu Thr Ala Pro

180 185 190

Arg Met Ser Phe Tyr Asn Ala Ser Lys Ala Ala Leu Leu Asn Phe Phe

195 200 205

Glu Thr Leu Arg Ile Glu Leu Gly Ser Asp Val His Ile Thr Ile Val

210 215 220

Thr Pro Gly Tyr Ile Glu Ser Glu Leu Thr Gln Gly Lys Tyr Val Ser

225 230 235 240

Gly Glu Gly Glu Leu Val Val Asn Gln Asp Ile Arg Asp Val Gln Ile

245 250 255

Gly Ala Phe Pro Val Thr Ser Val Ser Gly Arg Ala Lys Gly Ile Val

260 265 270

Lys Gly Val Cys Arg Lys Glu Arg Tyr Val Thr Glu Pro Ser Trp Phe

275 280 285

Lys Val Thr Tyr Leu Trp Lys Val Phe Cys Pro Glu Leu Ile Glu Trp

290 295 300

Gly Cys Arg Leu Met Phe Leu Ser Gly His Gly Thr Pro Glu Glu Asn

305 310 315 320

Ala Leu Asn Lys Lys Ile Leu Asp Ile Pro Gly Val Arg Ser Ala Leu

325 330 335

Tyr Pro Glu Pro Ile Arg Thr Pro Glu Ile Lys Ser Glu

340 345

<210> 115

<211> 456

<212> Белок

<213> Brassica napus

<400> 115

Met Val Asp Leu Leu Asn Ser Val Met Asn Leu Val Ala Pro Pro Ala

1 5 10 15

Thr Met Val Val Met Ala Phe Ser Trp Pro Leu Leu Cys Phe Ile Thr

20 25 30

Phe Ser Glu Arg Leu Tyr Asn Ser Tyr Phe Val Thr Glu Asp Met Glu

35 40 45

Asp Lys Val Val Val Ile Thr Gly Ala Ser Pro Ala Ile Gly Glu Gln

50 55 60

Ile Ala Tyr Glu Tyr Ala Lys Arg Gly Ala Asn Leu Val Leu Val Ala

65 70 75 80

Arg Arg Glu Gln Arg Leu Arg Val Val Ser Asn Asn Ala Arg Gln Ile

85 90 95

Gly Ala Asn His Val Ile Ile Ile Ala Ala Asp Val Val Lys Glu Asp

100 105 110

Asp Cys Arg Arg Phe Ile Thr Gln Ala Val Asn Tyr Tyr Gly Arg Val

115 120 125

Asp His Leu Val Asn Ser Ala Ser Leu Gly His Thr Phe Tyr Phe Asp

130 135 140

Glu Val Ser Asp Thr Thr Val Phe Pro His Leu Leu Asp Ile Asn Phe

145 150 155 160

Trp Gly Asn Val Tyr Pro Thr Tyr Val Ala Leu Pro His Leu Gln Lys

165 170 175

Thr Asn Gly Arg Ile Val Val Asn Ala Ser Val Glu Asn Trp Leu Pro

180 185 190

Leu Pro Arg Met Ser Leu Tyr Ser Ala Ala Lys Ala Ala Leu Val Asn

195 200 205

Phe Tyr Glu Thr Leu Arg Phe Glu Leu Asn Gly Asp Val Gly Ile Thr

210 215 220

Ile Ala Thr His Gly Trp Ile Gly Ser Glu Met Ser Arg Gly Lys Phe

225 230 235 240

Met Leu Glu Glu Gly Ala Glu Met Gln Trp Lys Glu Glu Arg Glu Val

245 250 255

Pro Ala Asn Gly Gly Pro Leu Glu Glu Phe Ala Lys Met Ile Val Ala

260 265 270

Gly Ala Cys Arg Gly Asp Ala Tyr Val Lys Phe Pro Asn Trp Tyr Asp

275 280 285

Val Phe Leu Leu Tyr Arg Val Phe Thr Pro Asn Val Leu Arg Trp Thr

290 295 300

Phe Lys Leu Leu Leu Ser Ser Glu Gly Ser Arg Gln Ser Ser Leu Val

305 310 315 320

Gly Val Gly Gln Gly Leu Pro Pro Glu Glu Ser Ser Ser Gln Met Lys

325 330 335

Leu Met Leu Glu Gly Gly Ser Pro Arg Val Thr Ala Ser Pro Pro Arg

340 345 350

Tyr Thr Pro Ser Pro Ser Pro Pro His His Thr Ala Ser Pro Pro Arg

355 360 365

Tyr Thr Pro Ser Pro Ser Pro Pro His His Thr Ser Ser Pro Gln Arg

370 375 380

Tyr Thr Pro Ser Pro Ser Pro Pro His Tyr Thr Ser Ser Arg His Arg

385 390 395 400

Tyr Thr Pro Ser Pro Ser Pro Pro His Tyr Thr Glu Ser Pro Pro Leu

405 410 415

Tyr Thr Glu Ser Pro Pro His Tyr Thr Thr Ser Pro Asn Trp Tyr Thr

420 425 430

Glu Ser Pro Pro Arg Tyr Thr Pro Ser Pro Ser Pro Pro Arg Phe Ser

435 440 445

Arg Phe Asn Ile Gln Glu Leu Pro

450 455

<210> 116

<211> 348

<212> Белок

<213> Sesamum indicum

<400> 116

Met Asp Leu Ile His Thr Phe Leu Asn Leu Ile Ala Pro Pro Phe Thr

1 5 10 15

Phe Phe Phe Leu Leu Phe Phe Leu Pro Pro Phe Gln Ile Phe Lys Phe

20 25 30

Phe Leu Ser Ile Leu Gly Thr Leu Phe Ser Glu Asp Val Ala Gly Lys

35 40 45

Val Val Val Ile Thr Gly Ala Ser Ser Gly Ile Gly Glu Ser Leu Ala

50 55 60

Tyr Glu Tyr Ala Lys Arg Gly Ala Cys Leu Val Leu Ala Ala Arg Arg

65 70 75 80

Glu Arg Ser Leu Gln Glu Val Ala Glu Arg Ala Arg Asp Leu Gly Ser

85 90 95

Pro Asp Val Val Val Val Arg Ala Asp Val Ser Lys Ala Glu Asp Cys

100 105 110

Arg Lys Val Val Asp Gln Thr Met Asn Arg Phe Gly Arg Leu Asp His

115 120 125

Leu Val Asn Asn Ala Gly Ile Met Ser Val Ser Met Leu Glu Glu Val

130 135 140

Glu Asp Ile Thr Gly Tyr Arg Glu Thr Met Asp Ile Asn Phe Trp Gly

145 150 155 160

Tyr Val Tyr Met Thr Arg Phe Ala Ala Pro Tyr Leu Arg Asn Ser Arg

165 170 175

Gly Arg Ile Val Val Leu Ser Ser Ser Ser Ser Trp Met Pro Thr Pro

180 185 190

Arg Met Ser Phe Tyr Asn Ala Ser Lys Ala Ala Ile Ser Gln Phe Phe

195 200 205

Glu Thr Leu Arg Val Glu Phe Gly Pro Asp Ile Gly Ile Thr Leu Val

210 215 220

Thr Pro Gly Phe Ile Glu Ser Glu Leu Thr Gln Gly Lys Phe Tyr Asn

225 230 235 240

Ala Gly Glu Arg Val Ile Asp Gln Asp Met Arg Asp Val Gln Val Ser

245 250 255

Thr Thr Pro Ile Leu Arg Val Glu Ser Ala Ala Arg Ser Ile Val Arg

260 265 270

Ser Ala Ile Arg Gly Glu Arg Tyr Val Thr Glu Pro Ala Trp Phe Arg

275 280 285

Val Thr Tyr Trp Trp Lys Leu Phe Cys Pro Glu Val Met Glu Trp Val

290 295 300

Phe Arg Leu Met Tyr Leu Ala Ser Pro Gly Glu Pro Glu Lys Glu Thr

305 310 315 320

Phe Gly Lys Lys Val Leu Asp Tyr Thr Gly Val Lys Ser Leu Leu Tyr

325 330 335

Pro Glu Thr Val Gln Val Pro Glu Pro Lys Asn Asp

340 345

<210> 117

<211> 350

<212> Белок

<213> Zea mays

<400> 117

Met Leu Gly Met Ser Arg Thr Gly Leu Ala Gly Ala Ala Leu Arg Val

1 5 10 15

Ala Leu Thr Ala Leu Leu Pro Leu Val Leu Pro Ala Tyr Tyr Val Tyr

20 25 30

Lys Leu Thr Thr Tyr Leu Leu Gly Ala Val Phe Pro Glu Asp Val Ala

35 40 45

Gly Lys Val Val Leu Ile Thr Gly Ala Ser Ser Gly Ile Gly Glu His

50 55 60

Leu Ala Tyr Glu Tyr Ala Lys Arg Gly Ala Tyr Leu Ala Leu Val Ala

65 70 75 80

Arg Arg Glu Ala Ser Leu Arg Glu Val Gly Asp Val Ala Leu Gly Leu

85 90 95

Gly Ser Pro Gly Val Leu Val Leu Pro Ala Asp Val Ser Lys Pro Arg

100 105 110

Asp Cys Glu Gly Phe Ile Asp Asp Thr Ile Ser Tyr Phe Gly Arg Leu

115 120 125

Asp His Leu Val Asn Asn Ala Ser Ile Trp Gln Val Cys Lys Phe Glu

130 135 140

Glu Ile Gln Asp Val Arg His Leu Arg Ala Leu Met Asp Ile Asn Phe

145 150 155 160

Trp Gly His Val Tyr Pro Thr Arg Leu Ala Ile Pro His Leu Arg Arg

165 170 175

Ser Arg Gly Arg Ile Val Gly Val Thr Ser Asn Ser Ser Tyr Ile Phe

180 185 190

Ile Gly Arg Asn Thr Phe Tyr Asn Ala Ser Lys Ala Ala Ala Leu Ser

195 200 205

Phe Tyr Asp Thr Leu Arg Met Glu Leu Gly Ser Asp Ile Arg Ile Thr

210 215 220

Glu Val Val Pro Gly Val Val Glu Ser Glu Ile Thr Lys Gly Lys Met

225 230 235 240

Leu Thr Lys Gly Gly Glu Met Lys Val Asp Gln Asp Glu Arg Asp Ala

245 250 255

Ile Leu Gly Pro Thr Pro Ala Glu Pro Val Gly Asp Phe Ala Arg Thr

260 265 270

Val Val Arg Asp Val Cys Arg Gly Ala Arg Tyr Val Phe Glu Pro Arg

275 280 285

Trp Tyr Met Gly Val Tyr Leu Leu Arg Ala Cys Leu Pro Glu Val Leu

290 295 300

Ala Trp Asn Ser Arg Leu Leu Thr Val Asp Thr Val Gly Ala Ser Thr

305 310 315 320

Thr Asp Thr Leu Gly Lys Trp Leu Val Glu Leu Pro Gly Val Arg Arg

325 330 335

Val Val Gln Pro Pro Ser Leu Arg Ser Pro Glu Ile Lys Asp

340 345 350

<210> 118

<211> 245

<212> Белок

<213> Brassica napus

<400> 118

Met Gly Thr Ala Thr Glu Ile Met Glu Arg Asp Ala Met Ala Thr Val

1 5 10 15

Ala Pro Tyr Ala Pro Val Thr Phe His Arg Arg Ala Arg Val Asp Leu

20 25 30

Asp Asp Arg Leu Pro Lys Pro Tyr Met Pro Arg Ala Leu Gln Ala Pro

35 40 45

Asp Arg Glu His Pro Tyr Gly Thr Pro Gly His Lys Asn Tyr Gly Leu

50 55 60

Ser Val Leu Gln Gln His Val Ala Phe Phe Asp Ile Asp Asp Asn Gly

65 70 75 80

Ile Ile Tyr Pro Trp Glu Thr Tyr Ser Gly Leu Arg Met Ile Gly Phe

85 90 95

Asn Ile Ile Gly Ser Leu Ile Ile Ala Ala Val Ile Asn Leu Ala Leu

100 105 110

Ser Tyr Ala Thr Leu Pro Gly Trp Leu Pro Ser Pro Phe Phe Pro Ile

115 120 125

Tyr Ile His Asn Ile His Lys Ser Lys His Gly Ser Asp Ser Arg Thr

130 135 140

Tyr Asp Asn Glu Gly Arg Phe Met Pro Val Asn Leu Glu Leu Ile Phe

145 150 155 160

Ser Lys Tyr Ala Lys Thr Leu Pro Asp Lys Leu Ser Leu Gly Glu Leu

165 170 175

Trp Asp Met Thr Glu Gly Gln Arg Asp Ala Trp Asp Ile Phe Gly Trp

180 185 190

Phe Ala Ser Lys Ile Glu Trp Gly Leu Leu Tyr Leu Leu Ala Arg Asp

195 200 205

Glu Glu Gly Phe Leu Ser Lys Glu Ala Ile Arg Arg Cys Phe Asp Gly

210 215 220

Ser Leu Phe Glu Tyr Cys Ala Lys Ile Tyr Val Gly Ile Asn Glu Asp

225 230 235 240

Lys Thr Ala Tyr Tyr

245

<210> 119

<211> 244

<212> Белок

<213> Brassica napus

<400> 119

Met Val Arg Glu Ser Met Gly Glu Glu Ser Glu Ala Phe Ala Thr Thr

1 5 10 15

Ala Pro Leu Ala Pro Val Thr Gly Glu Arg Lys Val Arg Asn Asp Leu

20 25 30

Glu Glu Thr Leu Pro Lys Pro Tyr Leu Ala Arg Ala Leu Val Ala Pro

35 40 45

Asp Thr Glu His Pro Asn Gly Ser Glu Gly His Asp Ser Lys Gly Met

50 55 60

Ser Val Thr Gln Gln His Val Ala Phe Phe Asp Gln Asn Gly Asp Gly

65 70 75 80

Ile Val Tyr Pro Trp Glu Thr Tyr Ala Gly Phe Arg Asp Leu Gly Phe

85 90 95

Asn Pro Ile Ser Ser Val Phe Trp Ala Ile Phe Ile Asn Phe Ala Phe

100 105 110

Ser Tyr Val Thr Leu Pro Ser Trp Leu Pro Ser Pro Leu Leu Pro Val

115 120 125

Tyr Ile Asp Asn Ile His Lys Ala Lys His Gly Ser Asp Ser Ser Thr

130 135 140

Tyr Asp Thr Glu Gly Arg Tyr Val Pro Val Asn Leu Glu Asn Ile Phe

145 150 155 160

Ser Lys Tyr Ala Leu Thr Ala Pro Asn Lys Ile Thr Leu Lys Glu Leu

165 170 175

Trp Asn Leu Thr Glu Gly Asn Arg Met Ala Ile Asp Pro Phe Gly Trp

180 185 190

Leu Ala Asn Lys Val Glu Trp Leu Leu Val Tyr Leu Leu Ala Lys Asp

195 200 205

Glu Glu Gly Phe Val Ser Lys Glu Ala Val Arg Gly Val Phe Asp Ala

210 215 220

Ser Phe Phe Glu Tyr Cys Ala Lys Lys Asn Lys Glu Lys Ala Asp Ser

225 230 235 240

Arg Lys Gln Asp

<210> 120

<211> 245

<212> Белок

<213> Sesamum indicum

<400> 120

Met Ala Thr His Val Leu Ala Ala Ala Ala Glu Arg Asn Ala Ala Leu

1 5 10 15

Ala Pro Asp Ala Pro Leu Ala Pro Val Thr Met Glu Arg Pro Val Arg

20 25 30

Thr Asp Leu Glu Thr Ser Ile Pro Lys Pro Tyr Met Ala Arg Gly Leu

35 40 45

Val Ala Pro Asp Met Asp His Pro Asn Gly Thr Pro Gly His Val His

50 55 60

Asp Asn Leu Ser Val Leu Gln Gln His Cys Ala Phe Phe Asp Gln Asp

65 70 75 80

Asp Asn Gly Ile Ile Tyr Pro Trp Glu Thr Tyr Ser Gly Leu Arg Gln

85 90 95

Ile Gly Phe Asn Val Ile Ala Ser Leu Ile Met Ala Ile Val Ile Asn

100 105 110

Val Ala Leu Ser Tyr Pro Thr Leu Pro Gly Trp Ile Pro Ser Pro Phe

115 120 125

Phe Pro Ile Tyr Leu Tyr Asn Ile His Lys Ala Lys His Gly Ser Asp

130 135 140

Ser Gly Thr Tyr Asp Thr Glu Gly Arg Tyr Leu Pro Met Asn Phe Glu

145 150 155 160

Asn Leu Phe Ser Lys His Ala Arg Thr Met Pro Asp Arg Leu Thr Leu

165 170 175

Gly Glu Leu Trp Ser Met Thr Glu Ala Asn Arg Glu Ala Phe Asp Ile

180 185 190

Phe Gly Trp Ile Ala Ser Lys Met Glu Trp Thr Leu Leu Tyr Ile Leu

195 200 205

Ala Arg Asp Gln Asp Gly Phe Leu Ser Lys Glu Ala Ile Arg Arg Cys

210 215 220

Tyr Asp Gly Ser Leu Phe Glu Tyr Cys Ala Lys Met Gln Arg Gly Ala

225 230 235 240

Glu Asp Lys Met Lys

245

<210> 121

<211> 243

<212> Белок

<213> Zea mays

<400> 121

Met Ser Ser Tyr Ser Pro Pro Pro Pro Pro Pro Arg Asp Gln Ser Met

1 5 10 15

Asp Thr Glu Ala Pro Asn Ala Pro Ile Thr Arg Glu Arg Arg Leu Asn

20 25 30

Pro Asp Leu Gln Glu Gln Leu Pro Lys Pro Tyr Leu Ala Arg Ala Leu

35 40 45

Glu Ala Val Asp Pro Ser His Pro Gln Gly Thr Lys Gly Arg Asp Pro

50 55 60

Arg Gly Met Ser Val Leu Gln Gln His Ala Ala Phe Phe Asp Arg Asn

65 70 75 80

Gly Asp Gly Val Ile Tyr Pro Trp Glu Thr Phe Gln Gly Leu Arg Ala

85 90 95

Ile Gly Cys Gly Leu Thr Val Ser Phe Ala Phe Ser Ile Leu Ile Asn

100 105 110

Leu Phe Leu Ser Tyr Pro Thr Gln Pro Gly Trp Leu Pro Ser Pro Leu

115 120 125

Leu Ser Ile Arg Ile Asp Asn Ile His Lys Gly Lys His Gly Ser Asp

130 135 140

Ser Glu Thr Tyr Asp Thr Glu Gly Arg Phe Asp Pro Ser Lys Phe Asp

145 150 155 160

Ala Ile Phe Ser Lys Tyr Gly Arg Thr His Pro Asn Ala Ile Thr Arg

165 170 175

Asp Glu Leu Ser Ser Met Leu Gln Gly Asn Arg Asn Thr Tyr Asp Phe

180 185 190

Leu Gly Trp Leu Ala Ala Ala Gly Glu Trp Leu Leu Leu Tyr Ser Leu

195 200 205

Ala Lys Asp Lys Asp Gly Leu Leu Gln Arg Glu Thr Val Arg Gly Leu

210 215 220

Phe Asp Gly Ser Leu Phe Glu Arg Leu Glu Asp Asp Asn Asn Lys Lys

225 230 235 240

Lys Ser Ser

<210> 122

<211> 11142

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательность ТДНК

<400> 122

tcctgtggtt ggcatgcaca tacaaatgga cgaacggata aaccttttca cgccctttta 60

aatatccgat tattctaata aacgctcttt tctcttaggt ttacccgcca atatatcctg 120

tcaaacactg atagtttaaa ctgaaggcgg gaaacgacaa tctgctagtg gatctcccag 180

tcacgacgtt gtaaaacggg cgccctagaa tctaattatt ctattcagac taaattagta 240

taagtatttt tttaatcaat aaataataat taataattta ttagtaggag tgattgaatt 300

tataatatat tttttttaat catttaaaga atcttatatc tttaaattga caagagtttt 360

aaatggggag agtgttatca tatcacaagt aggattaatg tgttatagtt tcacatgcat 420

tacgataagt tgtgaaagat aacattatta tatataacaa tgacaatcac tagcgatcga 480

gtagtgagag tcgtcttatt acactttctt ccttcgatct gtcacatggc ggcggcccga 540

attctcacac aaggtagttg caagacactg aagtggtggt agtggtagta gaagaagcag 600

aatcggtaga aaggcaagac aatggagaag atgaagatgg tggagattct cttcccacaa 660

cgcagcaatc aaggttttca aggttaaggc actcgtgctt tccatcatcg aacatgaagt 720

cgatgttatc ctcgaaagca agctcgttga agagttctgg gtactcaatt gggttctcgt 780

tagcaaggtt ttgatcggta aggaatgggg agaatccagt atccatcatg cagaagttcc 840

aagcaagttc gttgttatct ccgcacctat ccatttccat gatggtggaa gaatcaatgc 900

agcagttaac aacggcagct tcctcagaat atcccacaat ttcagcctct tgttgctcag 960

ccttctcttc ctctttttct tcttcctctt gaggtggttc ctcaacgtat tgttgcttaa 1020

cctcttccct aggttcctct ttagcttctc tagtctcaac ctcttgctta gcctcaacaa 1080

gaataccctc ttgatggtta gcctggttaa ctgggaatgg gaaaacgccc ttcttcttaa 1140

gcctgtcgat gtagttggag atatcgaagt tggtaacagc gttagcacct ctgtactcaa 1200

tagcagccat atcataagca gctgcagcct cttcttgagt gttgtaagtt ccgaggtaga 1260

ggtacttgtt tccgaaaact cttccaatcc tagcttccca tcttccgtta tgatgatgcc 1320

tagcaactcc cctatactta gaaactcccc tagagaatcc agatgactgc cttctaaggg 1380

aagcaagata ctcttctttg gtcaccctct gcatctcttc aagttctttg gtgtaagtct 1440

cagctgggaa gttaagaatg gtatctgggc cccaatactt aagagcagca agatcatagg 1500

tatgagcagc agcctcttca gaatcataag ctccaaggta aacctgcttg cccttcttgt 1560

tttggatgga gttccaagag gacttatccc aaaggtgagc ttcgaatctt ccagtccatc 1620

tatgcctagt aacacctctg tagatagatg accttctggt agaagctgga gaagttgggt 1680

tatgagactt atcgccagat ggagatgact tcttagccct cttagctctc tttggtcttg 1740

gagcttcaga ttgaattggg ctagaggtag tagtagaaga ggacactgaa gaagatggag 1800

aactagagca ggtagaggta gtgagcctct tcttcatgaa ttctgttctt ctttactctt 1860

tgtgtgactg aggtttggtc tagtgctttg gtcatctata tataatgata acaacaatga 1920

gaacaagctt tggagtgatc ggagggtcta ggatacatga gattcaagtg gactaggatc 1980

tacaccgttg gattttgagt gtggatatgt gtgaggttaa ttttacttgg taacggccac 2040

aaaggcctaa ggagaggtgt tgagaccctt atcggcttga accgctggaa taatgccacg 2100

tggaagataa ttccatgaat cttatcgtta tctatgagtg aaattgtgtg atggtggagt 2160

ggtgcttgct cattttactt gcctggtgga cttggccctt tccttatggg gaatttatat 2220

tttacttact atagagcttt catacctttt ttttaccttg gatttagtta atatataatg 2280

gtatgattca tgaataaaaa tgggaaattt ttgaatttgt actgctaaat gcataagatt 2340

aggtgaaact gtggaatata tatttttttc atttaaaagc aaaatttgcc ttttactaga 2400

attataaata tagaaaaata tataacattc aaataaaaat gaaaataaga actttcaaaa 2460

aacagaacta tgtttaatgt gtaaagatta gtcgcacatc aagtcatctg ttacaatatg 2520

ttacaacaag tcataagccc aacaaagtta gcacgtctaa ataaactaaa gagtccacga 2580

aaatattaca aatcataagc ccaacaaagt tattgatcaa aaaaaaaaaa cgcccaacaa 2640

agctaaacaa agtccaaaaa aaacttctca agtctccatc ttcctttatg aacattgaaa 2700

actatacaca aaacaagtca gataaatctc tttctgggcc tgtcttccca acctcctaca 2760

tcacttccct atcggattga atgttttact tgtacctttt ccgttgcaat gatattgata 2820

gtatgtttgt gaaaactaat agggttaaca atcgaagtca tggaatatgg atttggtcca 2880

agattttccg agagctttct agtagaaagc ccatcaccag aaatttacta gtaaaataaa 2940

tcaccaatta ggtttcttat tatgtgccaa attcaatata attatagagg atatttcaaa 3000

tgaaaacgta tgaatgttat tagtaaatgg tcaggtaaga cattaaaaaa atcctacgtc 3060

agatattcaa ctttaaaaat tcgatcagtg tggaattgta caaaaatttg ggatctacta 3120

tatatatata atgctttaca acacttggat ttttttttgg aggctggaat ttttaatcta 3180

catatttgtt ttggccatgc accaactcat tgtttagtgt aatactttga ttttgtcaaa 3240

tatatgtgtt cgtgtatatt tgtataagaa tttctttgac catatacaca cacacatata 3300

tatatatata tatatattat atatcatgca cttttaattg aaaaaataat atatatatat 3360

atagtgcatt ttttctaaca accatatatg ttgcgattga tctgcaaaaa tactgctaga 3420

gtaatgaaaa atataatcta ttgctgaaat tatctcagat gttaagattt tcttaaagta 3480

aattctttca aattttagct aaaagtcttg taataactaa agaataatac acaatctcga 3540

ccacggaaaa aaaacacata ataaatttgg ggcccctaga atctaattat tctattcaga 3600

ctaaattagt ataagtattt ttttaatcaa taaataataa ttaataattt attagtagga 3660

gtgattgaat ttataatata ttttttttaa tcatttaaag aatcttatat ctttaaattg 3720

acaagagttt taaatgggga gagtgttatc atatcacaag taggattaat gtgttatagt 3780

ttcacatgca ttacgataag ttgtgaaaga taacattatt atatataaca atgacaatca 3840

ctagcgatcg agtagtgaga gtcgtcttat tacactttct tccttcgatc tgtcacatgg 3900

cggcggcccg cggccgcttc attactcgag ccaggaggat ggatcgatgc tggtctgaga 3960

ccctgctacc ggttgctgac tgaactgctc ggcacggtcc ttcatttcac gggccttgct 4020

cgccaacttt gtcttggccg actccaactg atccgctccg ggtggatgtt tccccgtcag 4080

gtaacggtag atccaggaca gcacagacag agcggcaaca ccaaatcccc cgcttgccag 4140

aaaacccgct cccaacagga agatggtgat gactgcagat cagaaaaact cagattaatc 4200

gacaaattcg atcgcacaaa ctagaaacta acaccagatc tagatagaaa tcacaaatcg 4260

aagagtaatt attcgacaaa actcaaatta tttgaacaaa tcggatgata tctatgaaac 4320

cctaatcgag aattaagatg atatctaacg atcaaaccca gaaaatcgtc ttcgatctaa 4380

gattaacaga atctaaacca aagaacatat acgaaattgg gatcgaacga aaacaaaatc 4440

gaagattttg agagaataag gaacacagaa atttacctgc agggaccagt acaggcgaga 4500

agatcaccag gagaggtgtg gcgattgtca gcgcaatgac cgttccagcc agggtcaacc 4560

cggataacac caacaggcta cctccggcag taaccgcggt cgctgccttt acaacacgct 4620

gagcacgcgg ttgcagttgc aagtgggggg cacgtgtttg ttgctgctgc ccgtagtgct 4680

ctgccatggt tttttttaac ggagcaagcg gccgctgttc ttctttactc tttgtgtgac 4740

tgaggtttgg tctagtgctt tggtcatcta tatataatga taacaacaat gagaacaagc 4800

tttggagtga tcggagggtc taggatacat gagattcaag tggactagga tctacaccgt 4860

tggattttga gtgtggatat gtgtgaggtt aattttactt ggtaacggcc acaaaggcct 4920

aaggagaggt gttgagaccc ttatcggctt gaaccgctgg aataatgcca cgtggaagat 4980

aattccatga atcttatcgt tatctatgag tgaaattgtg tgatggtgga gtggtgcttg 5040

ctcattttac ttgcctggtg gacttggccc tttccttatg gggaatttat attttactta 5100

ctatagagct ttcatacctt ttttttacct tggatttagt taatatataa tggtatgatt 5160

catgaataaa aatgggaaat ttttgaattt gtactgctaa atgcataaga ttaggtgaaa 5220

ctgtggaata tatatttttt tcatttaaaa gcaaaatttg ccttttacta gaattataaa 5280

tatagaaaaa tatataacat tcaaataaaa atgaaaataa gaactttcaa aaaacagaac 5340

tatgtttaat gtgtaaagat tagtcgcaca tcaagtcatc tgttacaata tgttacaaca 5400

agtcataagc ccaacaaagt tagcacgtct aaataaacta aagagtccac gaaaatatta 5460

caaatcataa gcccaacaaa gttattgatc aaaaaaaaaa aacgcccaac aaagctaaac 5520

aaagtccaaa aaaaacttct caagtctcca tcttccttta tgaacattga aaactataca 5580

caaaacaagt cagataaatc tctttctggg cctgtcttcc caacctccta catcacttcc 5640

ctatcggatt gaatgtttta cttgtacctt ttccgttgca atgatattga tagtatgttt 5700

gtgaaaacta atagggttaa caatcgaagt catggaatat ggatttggtc caagattttc 5760

cgagagcttt ctagtagaaa gcccatcacc agaaatttac tagtaaaata aatcaccaat 5820

taggtttctt attatgtgcc aaattcaata taattataga ggatatttca aatgaaaacg 5880

tatgaatgtt attagtaaat ggtcaggtaa gacattaaaa aaatcctacg tcagatattc 5940

aactttaaaa attcgatcag tgtggaattg tacaaaaatt tgggatctac tatatatata 6000

taatgcttta caacacttgg attttttttt ggaggctgga atttttaatc tacatatttg 6060

ttttggccat gcaccaactc attgtttagt gtaatacttt gattttgtca aatatatgtg 6120

ttcgtgtata tttgtataag aatttctttg accatataca cacacacata tatatatata 6180

tatatatatt atatatcatg cacttttaat tgaaaaaata atatatatat atatagtgca 6240

ttttttctaa caaccatata tgttgcgatt gatctgcaaa aatactgcta gagtaatgaa 6300

aaatataatc tattgctgaa attatctcag atgttaagat tttcttaaag taaattcttt 6360

caaattttag ctaaaagtct tgtaataact aaagaataat acacaatctc gaccacggaa 6420

aaaaaacaca taataaattt gggcgcgccg cgtattggct agagcagctt gccaacatgg 6480

tggagcacga cactctcgtc tactccaaga atatcaaaga tacagtctca gaagaccaaa 6540

gggctattga gacttttcaa caaagggtaa tatcgggaaa cctcctcgga ttccattgcc 6600

cagctatctg tcacttcatc aaaaggacag tagaaaagga aggtggcacc tacaaatgcc 6660

atcattgcga taaaggaaag gctatcgttc aagatgcctc tgccgacagt ggtcccaaag 6720

atggaccccc acccacgagg agcatcgtgg aaaaagaaga cgttccaacc acgtcttcaa 6780

agcaagtgga ttgatgtgat aacatggtgg agcacgacac tctcgtctac tccaagaata 6840

tcaaagatac agtctcagaa gaccaaaggg ctattgagac ttttcaacaa agggtaatat 6900

cgggaaacct cctcggattc cattgcccag ctatctgtca cttcatcaaa aggacagtag 6960

aaaaggaagg tggcacctac aaatgccatc attgcgataa aggaaaggct atcgttcaag 7020

atgcctctgc cgacagtggt cccaaagatg gacccccacc cacgaggagc atcgtggaaa 7080

aagaagacgt tccaaccacg tcttcaaagc aagtggattg atgtgatatc tccactgacg 7140

taagggatga cgcacaatcc cactatcctt cgcaagacct tcctctatat aaggaagttc 7200

atttcatttg gagaggacac gctgaaatca ccagtctctc tctacaaatc tatctctgcg 7260

atcgcatggc gattttggat tctgctggcg ttactacggt gacggagaac ggtggcggag 7320

agttcgtcga tcttgatagg cttcgtcgac ggaaatcgag atcggattct tctaacggac 7380

ttcttctctc tggttccgat aataattctc cttcggatga tgttggagct cccgccgacg 7440

ttagggatcg gattgattcc gttgttaacg atgacgctca gggaacagcc aatttggccg 7500

gagataataa cggtggtggc gataataacg gtggtggaag aggcggcgga gaaggaagag 7560

gaaacgccga tgctacgttt acgtatcgac cgtcggttcc agctcatcgg agggcgagag 7620

agagtccact tagctccgac gcaatcttca aacagagcca tgccggatta ttcaacctct 7680

gtgtagtagt tcttattgct gtaaacagta gactcatcat cgaaaatctt atgaagtatg 7740

gttggttgat cagaacggat ttctggttta gttcaagatc gctgcgagat tggccgcttt 7800

tcatgtgttg tatatccctt tcgatctttc ctttggctgc ctttacggtt gagaaattgg 7860

tacttcagaa atacatatca gaacctgttg tcatctttct tcatattatt atcaccatga 7920

cagaggtttt gtatccagtt tacgtcaccc taaggtgtga ttctgctttt ttatcaggtg 7980

tcactttgat gctcctcact tgcattgtgt ggctaaagtt ggtttcttat gctcatacta 8040

gctatgacat aagatcccta gccaatgcag ctgataaggc caatcctgaa gtctcctact 8100

acgttagctt gaagagcttg gcatatttca tggtcgctcc cacattgtgt tatcagccaa 8160

gttatccacg ttctgcatgt atacggaagg gttgggtggc tcgtcaattt gcaaaactgg 8220

tcatattcac cggattcatg ggatttataa tagaacaata tataaatcct attgtcagga 8280

actcaaagca tcctttgaaa ggcgatcttc tatatgctat tgaaagagtg ttgaagcttt 8340

cagttccaaa tttatatgtg tggctctgca tgttctactg cttcttccac ctttggttaa 8400

acatattggc agagcttctc tgcttcgggg atcgtgaatt ctacaaagat tggtggaatg 8460

caaaaagtgt gggagattac tggagaatgt ggaatatgcc tgttcataaa tggatggttc 8520

gacatatata cttcccgtgc ttgcgcagca agataccaaa gacactcgcc attatcattg 8580

ctttcctagt ctctgcagtc tttcatgagc tatgcatcgc agttccttgt cgtctcttca 8640

agctatgggc ttttcttggg attatgtttc aggtgccttt ggtcttcatc acaaactatc 8700

tacaggaaag gtttggctca acggtgggga acatgatctt ctggttcatc ttctgcattt 8760

tcggacaacc gatgtgtgtg cttctttatt accacgacct gatgaaccga aaaggatcga 8820

tgtcatgagc gatcgcgatc gttcaaacat ttggcaataa agtttcttaa gattgaatcc 8880

tgttgccggt cttgcgatga ttatcatata atttctgttg aattacgtta agcatgtaat 8940

aattaacatg taatgcatga cgttatttat gagatgggtt tttatgatta gagtcccgca 9000

attatacatt taatacgcga tagaaaacaa aatatagcgc gcaaactagg ataaattatc 9060

gcgcgcggtg tcatctatgt tactagatcc ctgcagggcg tattggctag agcagcttgc 9120

caacatggtg gagcacgaca ctctcgtcta ctccaagaat atcaaagata cagtctcaga 9180

agaccaaagg gctattgaga cttttcaaca aagggtaata tcgggaaacc tcctcggatt 9240

ccattgccca gctatctgtc acttcatcaa aaggacagta gaaaaggaag gtggcaccta 9300

caaatgccat cattgcgata aaggaaaggc tatcgttcaa gatgcctctg ccgacagtgg 9360

tcccaaagat ggacccccac ccacgaggag catcgtggaa aaagaagacg ttccaaccac 9420

gtcttcaaag caagtggatt gatgtgataa catggtggag cacgacactc tcgtctactc 9480

caagaatatc aaagatacag tctcagaaga ccaaagggct attgagactt ttcaacaaag 9540

ggtaatatcg ggaaacctcc tcggattcca ttgcccagct atctgtcact tcatcaaaag 9600

gacagtagaa aaggaaggtg gcacctacaa atgccatcat tgcgataaag gaaaggctat 9660

cgttcaagat gcctctgccg acagtggtcc caaagatgga cccccaccca cgaggagcat 9720

cgtggaaaaa gaagacgttc caaccacgtc ttcaaagcaa gtggattgat gtgatatctc 9780

cactgacgta agggatgacg cacaatccca ctatccttcg caagaccttc ctctatataa 9840

ggaagttcat ttcatttgga gaggacacgc tgaaatcacc agtctctctc tacaaatcta 9900

tctctctcga gatgattgaa caagatggat tgcacgcagg ttctccggcc gcttgggtgg 9960

agaggctatt cggctatgac tgggcacaac agacaatcgg ctgctctgat gccgccgtgt 10020

tccggctgtc agcgcagggg aggccggttc tttttgtcaa gaccgacctg tccggtgccc 10080

tgaatgaact tcaagacgag gcagcgcggc tatcgtggct ggccacgacg ggcgttcctt 10140

gcgcagctgt gctcgacgtt gtcactgaag cgggaaggga ctggctgcta ttgggcgaag 10200

tgccggggca ggatctcctg tcatctcacc ttgctcctgc cgagaaagta tccatcatgg 10260

ctgatgcaat gcggcggctg catacgcttg atccggctac ctgcccattc gaccaccaag 10320

cgaaacatcg catcgagcga gcacgtactc ggatggaagc cggtcttgtc gatcaggatg 10380

atctggacga agagcatcag gggctcgcgc cagccgaact gttcgccagg ctcaaggcgc 10440

gcatgcccga cggcgaggat ctcgtcgtga ctcatggcga tgcctgcttg ccgaatatca 10500

tggtggaaaa tggccgcttt tctggattca tcgactgtgg ccggctgggt gtggcggacc 10560

gctatcagga catagcgttg gctacccgtg atattgctga agagcttggc ggcgaatggg 10620

ctgaccgctt cctcgtgctt tacggtatcg ccgctcccga ttcgcagcgc atcgccttct 10680

atcgccttct tgacgagttc ttctgaaacg cgtgatcgtt caaacatttg gcaataaagt 10740

ttcttaagat tgaatcctgt tgccggtctt gcgatgatta tcatataatt tctgttgaat 10800

tacgttaagc atgtaataat taacatgtaa tgcatgacgt tatttatgag atgggttttt 10860

atgattagag tcccgcaatt atacatttaa tacgcgatag aaaacaaaat atagcgcgca 10920

aactaggata aattatcgcg cgcggtgtca tctatgttac tagatcgacg tccgtacggt 10980

taaaaccacc ccagtacatt aaaaacgtcc gcaatgtgtt attaagttgt ctaagcgtca 11040

atttgtttac accacaatat atcctgccac cagccagcca acagctcccc gaccggcagc 11100

tcggcacaaa atcaccactc gatacaggca gcccatcagt cc 11142

<210> 123

<211> 16749

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательность вектора

<400> 123

gcttcctcgt gctttacggt atcgccgctc ccgattcgca gcgcatcgcc ttctatcgcc 60

ttcttgacga gttcttctga aacgcgtgat cgttcaaaca tttggcaata aagtttctta 120

agattgaatc ctgttgccgg tcttgcgatg attatcatat aatttctgtt gaattacgtt 180

aagcatgtaa taattaacat gtaatgcatg acgttattta tgagatgggt ttttatgatt 240

agagtcccgc aattatacat ttaatacgcg atagaaaaca aaatatagcg cgcaaactag 300

gataaattat cgcgcgcggt gtcatctatg ttactagatc gacgtccgta cggttaaaac 360

caccccagta cattaaaaac gtccgcaatg tgttattaag ttgtctaagc gtcaatttgt 420

ttacaccaca atatatcctg ccaccagcca gccaacagct ccccgaccgg cagctcggca 480

caaaatcacc actcgataca ggcagcccat cagtccacta gacgctcacc gggctggttg 540

ccctcgccgc tgggctggcg gccgtctatg gccctgcaaa cgcgccagaa acgccgtcga 600

agccgtgtgc gagacaccgc agccgccggc gttgtggata cctcgcggaa aacttggccc 660

tcactgacag atgaggggcg gacgttgaca cttgaggggc cgactcaccc ggcgcggcgt 720

tgacagatga ggggcaggct cgatttcggc cggcgacgtg gagctggcca gcctcgcaaa 780

tcggcgaaaa cgcctgattt tacgcgagtt tcccacagat gatgtggaca agcctgggga 840

taagtgccct gcggtattga cacttgaggg gcgcgactac tgacagatga ggggcgcgat 900

ccttgacact tgaggggcag agtgctgaca gatgaggggc gcacctattg acatttgagg 960

ggctgtccac aggcagaaaa tccagcattt gcaagggttt ccgcccgttt ttcggccacc 1020

gctaacctgt cttttaacct gcttttaaac caatatttat aaaccttgtt tttaaccagg 1080

gctgcgccct gtgcgcgtga ccgcgcacgc cgaagggggg tgccccccct tctcgaaccc 1140

tcccggcccg ctctcgcgtt ggcagcatca cccataattg tggtttcaaa atcggctccg 1200

tcgatactat gttatacgcc aactttgaaa acaactttga aaaagctgtt ttctggtatt 1260

taaggtttta gaatgcaagg aacagtgaat tggagttcgt cttgttataa ttagcttctt 1320

ggggtattta aatactgtag aaaagaggaa ggaaataata aatggctaaa atgagaatat 1380

caccggaatt gaaaaaactg atcgaaaaat accgctgcgt aaaagatacg gaaggaatgt 1440

ctcctgctaa ggtatataag ctggtgggag aaaatgaaaa cctatattta aaaatgacgg 1500

acagccggta taaagggacc acctatgatg tggaacggga aaaggacatg atgctatggc 1560

tggaaggaaa gctgcctgtt ccaaaggtcc tgcaccttga acggcatgat ggctggagca 1620

atctgctcat gagtgaggcc gatggcgtcc tttgctcgga agagtatgaa gatgaacaaa 1680

gccctgaaaa gattatcgag ctgtatgcgg agtgcatcag gctctttcac tccatcgaca 1740

tatcggattg tccctatacg aatagcttag acagccgctt agccgaattg gattacttac 1800

tgaataacga tctggccgat gtggattgcg aaaactggga agaagacacc ccatttaaag 1860

atccgcgcga gctgtatgat tttttaaaga cggaaaagcc cgaagaggaa cttgtctttt 1920

cccacggcga cctgggagac agcaacatct ttgtgaaaga tggcaaagta agtggcttta 1980

ttgatcttgg gagaagcggc agggcggaca agtggtatga cattgccttc tgcgtccggt 2040

cgatcaggga ggatattggg gaagaacagt atgtcgagct attttttgac ttactgggga 2100

tcaagcctga ttgggagaaa ataaaatatt atattttact ggatgaattg ttttagtacc 2160

tagatgtggc gcaacgatgc tggcgacaag caggagcgca ccgacttctt ccgcatcaag 2220

tgttttggct ctcaggccga ggcccacggc aagtatttgg gcaaggggtc gctggtattc 2280

gtgcagggca agattcggaa taccaagtac gagaaggacg gccagacggt ctacgggacc 2340

gacttcattg ccgataaggt ggattatctg gacaccaagg caccaggcgg atcaaatcag 2400

gaataagggc acattgcccc ggcgtgagtc ggggcaatcc cgcaaggagg gtgaatgaat 2460

cggacgtttg accggaaggc atacaggcaa gaactgatcg acgcggggtt ttccgccgag 2520

gatgccgaaa ccatcgcaag ccgcaccgtc atgcgtgcgc cccgcgaaac cttccagtcc 2580

gtcggctcga tggcccagca agctacggcc aagatcgagc gcgacagcgt gcaactggct 2640

ccccctgccc tgcccgcgcc atcggccgcc gtggagcgtt cgcgtcgtct cgaacaggag 2700

gcggcaggtt tggcgaagtc gatgaccatc gacacgcgag gaactatgac gaccaagaag 2760

cgaaaaaccg ccggcgagga cctggcaaaa caggtcagcg aggccaagca agccgcgttg 2820

ctgaaacaca cgaagcagca gatcaaggaa atgcagcttt ccttgttcga tattgcgccg 2880

tggccggaca cgatgcgagc gatgccaaac gacacggccc gctctgccct gttcaccacg 2940

cgcaacaaga aaatcccgcg cgaggcgctg caaaacaagg tcattttcca cgtcaacaag 3000

gacgtgaaga tcacctacac cggcgtcgag ctgcgggccg acgatgacga actggtgtgg 3060

cagcaggtgt tggagtacgc gaagcgcacc cctatcggcg agccgatcac cttcacgttc 3120

tacgagcttt gccaggacct gggctggtcg atcaatggcc ggtattacac gaaggccgag 3180

gaatgcctgt cgcgcctaca ggcgacggcg atgggcttca cgtccgaccg cgttgggcac 3240

ctggaatcgg tgtcgctgct gcaccgcttc cgcgtcctgg accgtggcaa gaaaacgtcc 3300

cgttgccagg tcctgatcga cgaggaaatc gtcgtgctgt ttgctggcga ccactacacg 3360

aaattcatat gggagaagta ccgcaagctg tcgccgacgg cccgacggat gttcgactat 3420

ttcagctcgc accgggagcc gtacccgctc aagctggaaa ccttccgcct catgtgcgga 3480

tcggattcca cccgcgtgaa gaagtggcgc gagcaggtcg gcgaagcctg cgaagagttg 3540

cgaggcagcg gcctggtgga acacgcctgg gtcaatgatg acctggtgca ttgcaaacgc 3600

tagggccttg tggggtcagt tccggctggg ggttcagcag ccagcgcttt actgagatcc 3660

tcttccgctt cctcgctcac tgactcgctg cgctcggtcg ttcggctgcg gcgagcggta 3720

tcagctcact caaaggcggt aatacggtta tccacagaat caggggataa cgcaggaaag 3780

aacatgtgag caaaaggcca gcaaaaggcc aggaaccgta aaaaggccgc gttgctggcg 3840

tttttccata ggctccgccc ccctgacgag catcacaaaa atcgacgctc aagtcagagg 3900

tggcgaaacc cgacaggact ataaagatac caggcgtttc cccctggaag ctccctcgtg 3960

cgctctcctg ttccgaccct gccgcttacc ggatacctgt ccgcctttct cccttcggga 4020

agcgtggcgc tttctcatag ctcacgctgt aggtatctca gttcggtgta ggtcgttcgc 4080

tccaagctgg gctgtgtgca cgaacccccc gttcagcccg accgctgcgc cttatccggt 4140

aactatcgtc ttgagtccaa cccggtaaga cacgacttat cgccactggc agcagccact 4200

ggtaacagga ttagcagagc gaggtatgta ggcggtgcta cagagttctt gaagtggtgg 4260

cctaactacg gctacactag aagaacagta tttggtatct gcgctctgct gaagccagtt 4320

accttcggaa aaagagttgg tagctcttga tccggcaaac aaaccaccgc tggtagcggt 4380

ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa aaggatctca agaagatcct 4440

ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta agggattttg 4500

gtcatgagat tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt tggatctcct gtggttggca 4560

tgcacataca aatggacgaa cggataaacc ttttcacgcc cttttaaata tccgattatt 4620

ctaataaacg ctcttttctc ttaggtttac ccgccaatat atcctgtcaa acactgatag 4680

tttaaactga aggcgggaaa cgacaatctg ctagtggatc tcccagtcac gacgttgtaa 4740

aacgggcgtc tgcgatcgct gaagttccta tacttttcag agaataggaa cttcggaata 4800

ggaacttccc atgggatcta gtaacataga tgacaccgcg cgcgataatt tatcctagtt 4860

tgcgcgctat attttgtttt ctatcgcgta ttaaatgtat aattgcggga ctctaatcat 4920

aaaaacccat ctcataaata acgtcatgca ttacatgtta attattacat gcttaacgta 4980

attcaacaga aattatatga taatcatcgc aagaccggca acaggattca atcttaagaa 5040

actttattgc caaatgtttg aacgatcacg ctagcggata acaatttcac acagggatat 5100

cactagtaaa aggtaccgag ctcctgcagt atcgatgcgg ccgcaaagtc gacgaattct 5160

cattagcaga actcaagatg ctgatcctct ggaacgttga acttgagctt gtgttcctcg 5220

aaaagcttgc acaactcttt gatgtaacgc tggtgaagtc tatcaacttc ctctctagaa 5280

ggctgaggag tcatttgaac ctcgataggc tttccaacga tagtagtgat aggctgtctg 5340

aaaggcatga gtccgaaaga gtattggaaa actccccttc catggaaaag tggaaggctg 5400

attcccataa tcttttggag tctgttctgg atccatctaa gccaagttcc aggagtgttc 5460

tcaacctggt tgaagaggtt gttctctccg aatgagaaga taggaacaag agcagcacca 5520

tgcataagag caagtctgat gaatccctta cggttcttca agagaagtct gtaagcacca 5580

ggtctagcat caagagcctc ttgagcacct ccaacgatga tagcaagaag gtttccacca 5640

ccctttctgc taaggatgtg atcagcagaa actttctcgc tagacacgag tccaccagac 5700

atgatgtaat ctctgaagaa tggagccctg aaccaaacgg taagcatcat aaggtaggat 5760

ctgattccag ggaacaaaga ggtgaatcca gtagactcag tacagaggtt aaggaaagca 5820

ccagcagcaa gaacaccatg aggatggaat ccagcaatgt agttacggct aggatcaagc 5880

tcagcagtct taacgagaga cacagggaag taatccttca tgtacttcca gatggccaat 5940

cttctgaaga attggatagg tctaccacct tgtctaggct tatcccaatc caagtaccac 6000

caggtagcgt aaagaacaga gaaaagccag aacctggtga acaagagtcc aacgaagata 6060

acgatgcaga gttgagcaag agcaaggaat gagaaaaccc actgaagaac agcgaaagtc 6120

tgcaatcttc tctcccaagg aacaagaagt ggagcgaact cgaccatgaa ttcagtcccc 6180

cgtgttctct ccaaatgaaa tgaacttcct tatatagagg aagggtcttg cgaaggatag 6240

tgggattgtg cgtcatccct tacgtcagtg gagatatcac atcaatccac ttgctttgaa 6300

gacgtggttg gaacgtcttc tttttccacg atgctcctcg tgggtggggg tccatctttg 6360

ggaccactgt cggcagaggc atcttcaacg atggcctttc ctttatcgca atgatggcat 6420

ttgtaggagc caccttcctt ttccactatc ttcacaataa agtgacagat agctgggcaa 6480

tggaatccga ggaggtttcc ggatattacc ctttgttgaa aagtctcaat tgccctttgg 6540

tcttctgaga ctgtatcttt gatatttttg gagtagacaa gtgtgtcgtg ctccaccatg 6600

ttgacgaaga ttttcttctt gtcattgagt cgtaagagac tctgtatgaa ctgttcgcca 6660

gtctttacgg cgagttctgt taggtcctct atttgaatct ttgactccat gggatccaag 6720

ggccctagaa tctaattatt ctattcagac taaattagta taagtatttt tttaatcaat 6780

aaataataat taataattta ttagtaggag tgattgaatt tataatatat tttttttaat 6840

catttaaaga atcttatatc tttaaattga caagagtttt aaatggggag agtgttatca 6900

tatcacaagt aggattaatg tgttatagtt tcacatgcat tacgataagt tgtgaaagat 6960

aacattatta tatataacaa tgacaatcac tagcgatcga gtagtgagag tcgtcttatt 7020

acactttctt ccttcgatct gtcacatggc ggcggcccga attctcacac aaggtagttg 7080

caagacactg aagtggtggt agtggtagta gaagaagcag aatcggtaga aaggcaagac 7140

aatggagaag atgaagatgg tggagattct cttcccacaa cgcagcaatc aaggttttca 7200

aggttaaggc actcgtgctt tccatcatcg aacatgaagt cgatgttatc ctcgaaagca 7260

agctcgttga agagttctgg gtactcaatt gggttctcgt tagcaaggtt ttgatcggta 7320

aggaatgggg agaatccagt atccatcatg cagaagttcc aagcaagttc gttgttatct 7380

ccgcacctat ccatttccat gatggtggaa gaatcaatgc agcagttaac aacggcagct 7440

tcctcagaat atcccacaat ttcagcctct tgttgctcag ccttctcttc ctctttttct 7500

tcttcctctt gaggtggttc ctcaacgtat tgttgcttaa cctcttccct aggttcctct 7560

ttagcttctc tagtctcaac ctcttgctta gcctcaacaa gaataccctc ttgatggtta 7620

gcctggttaa ctgggaatgg gaaaacgccc ttcttcttaa gcctgtcgat gtagttggag 7680

atatcgaagt tggtaacagc gttagcacct ctgtactcaa tagcagccat atcataagca 7740

gctgcagcct cttcttgagt gttgtaagtt ccgaggtaga ggtacttgtt tccgaaaact 7800

cttccaatcc tagcttccca tcttccgtta tgatgatgcc tagcaactcc cctatactta 7860

gaaactcccc tagagaatcc agatgactgc cttctaaggg aagcaagata ctcttctttg 7920

gtcaccctct gcatctcttc aagttctttg gtgtaagtct cagctgggaa gttaagaatg 7980

gtatctgggc cccaatactt aagagcagca agatcatagg tatgagcagc agcctcttca 8040

gaatcataag ctccaaggta aacctgcttg cccttcttgt tttggatgga gttccaagag 8100

gacttatccc aaaggtgagc ttcgaatctt ccagtccatc tatgcctagt aacacctctg 8160

tagatagatg accttctggt agaagctgga gaagttgggt tatgagactt atcgccagat 8220

ggagatgact tcttagccct cttagctctc tttggtcttg gagcttcaga ttgaattggg 8280

ctagaggtag tagtagaaga ggacactgaa gaagatggag aactagagca ggtagaggta 8340

gtgagcctct tcttcatgaa ttcactagtg attaaatttt gttggtgctt tgagcatata 8400

acaagcatgg tatatatagg cacgtaaaca agttgagaaa ttttactttg agtttgacat 8460

aaccaataaa agttagtgct gtttattacc tcactcagtt tgcaccgcaa ctgtcgttag 8520

tgatgtttac ctttcctttt tctattattt attagtatta tataatatat atatatgtgt 8580

gatgagactt gaaattgttt agcaccgcaa atgtccttct tgaggggagg ttttcttttg 8640

ctgaggttgg ggtgtcacat acacccccct ctatggactc aacgtccttg ctgaggttta 8700

ccccacacta catgagattt ttctagactc aatactatga tatttctcgc cttatcggaa 8760

ttggttaaac tcagttgaag ttagggtcat atcgataaaa ttgacacatg atcgactctg 8820

atattaaaca gattctctcc ctcgaacctc actcactttc ctttttctat tctttattag 8880

tattatataa tagatccgtt ccaaccattc acgtacataa gaagagagat attttttttt 8940

aatggactaa catgacaaat aaaacaaaca aaggagtaat gatcactaca acaaattaga 9000

ttatgaggga caaataattt catcatctat aaatcatgtt tcgtcactaa aaattttgtg 9060

tgacgaaaaa gatttcgtca atcagttgtc actaaaaata tacaaagacg atttaatgat 9120

gtttaccttt ccttttctat tctttattag tattatataa taaatatatg tgtgatgaga 9180

cttgaaattg tttagcaccg caaatgtcct tgttgaaggg aggttttctt ttgctgaggt 9240

tggggtgtca catacacccc ctctatggac tgaacgtcct ttttgaggtt tattttacac 9300

tgcatgagat ttttctagat tcaacattat gatttctaga ctcaacacta cgatcgtcac 9360

taaagactat tttttatata taaaaaaaat actttgtcct taaatgtata aattagggat 9420

aaatttatta ttataaaaaa ggttaataat tttgtgatta aatctattat tttgtcactg 9480

aaagtgtttg cttttaccga cgacatatat gtcactaaat attatcataa gtagtgacaa 9540

ttacaattgt cacaaaataa aaaaaattat tcatattcaa caaaaaaggg tactacgaca 9600

atacattttt tgtcactgaa agtaatcaag ttgtgataaa ttaatttatt taatgacaaa 9660

aatatttgta tcaaaattca cccatgatca tataataaaa ataactaaaa ttatactaaa 9720

gcataaatga caagaaaatc taactaaaac atatcaaata ttactcctaa acaaagacat 9780

ataagtaaaa atttcttcca aagtatcaat aacgtggtga cacatagctt gcaatcaatc 9840

ttgcttcaat tttcaccttt tatacctgta aaaagaaaga gaaaataaaa caatgattta 9900

aaaatcgaat tcccgcggcc cctagaatct aattattcta ttcagactaa attagtataa 9960

gtattttttt aatcaataaa taataattaa taatttatta gtaggagtga ttgaatttat 10020

aatatatttt ttttaatcat ttaaagaatc ttatatcttt aaattgacaa gagttttaaa 10080

tggggagagt gttatcatat cacaagtagg attaatgtgt tatagtttca catgcattac 10140

gataagttgt gaaagataac attattatat ataacaatga caatcactag cgatcgagta 10200

gtgagagtcg tcttattaca ctttcttcct tcgatctgtc acatggcggc ggcccgcggc 10260

cgcttcatta ctcgagccag gaggatggat cgatgctggt ctgagaccct gctaccggtt 10320

gctgactgaa ctgctcggca cggtccttca tttcacgggc cttgctcgcc aactttgtct 10380

tggccgactc caactgatcc gctccgggtg gatgtttccc cgtcaggtaa cggtagatcc 10440

aggacagcac agacagagcg gcaacaccaa atcccccgct tgccagaaaa cccgctccca 10500

acaggaagat ggtgatgact gcagatcaga aaaactcaga ttaatcgaca aattcgatcg 10560

cacaaactag aaactaacac cagatctaga tagaaatcac aaatcgaaga gtaattattc 10620

gacaaaactc aaattatttg aacaaatcgg atgatatcta tgaaacccta atcgagaatt 10680

aagatgatat ctaacgatca aacccagaaa atcgtcttcg atctaagatt aacagaatct 10740

aaaccaaaga acatatacga aattgggatc gaacgaaaac aaaatcgaag attttgagag 10800

aataaggaac acagaaattt acctgcaggg accagtacag gcgagaagat caccaggaga 10860

ggtgtggcga ttgtcagcgc aatgaccgtt ccagccaggg tcaacccgga taacaccaac 10920

aggctacctc cggcagtaac cgcggtcgct gcctttacaa cacgctgagc acgcggttgc 10980

agttgcaagt ggggggcacg tgtttgttgc tgctgcccgt agtgctctgc catggaaatt 11040

ttgttggtgc tttgagcata taacaagcat ggtatatata ggcacgtaaa caagttgaga 11100

aattttactt tgagtttgac ataaccaata aaagttagtg ctgtttatta cctcactcag 11160

tttgcaccgc aactgtcgtt agtgatgttt acctttcctt tttctattat ttattagtat 11220

tatataatat atatatatgt gtgatgagac ttgaaattgt ttagcaccgc aaatgtcctt 11280

cttgagggga ggttttcttt tgctgaggtt ggggtgtcac atacaccccc ctctatggac 11340

tcaacgtcct tgctgaggtt taccccacac tacatgagat ttttctagac tcaatactat 11400

gatatttctc gccttatcgg aattggttaa actcagttga agttagggtc atatcgataa 11460

aattgacaca tgatcgactc tgatattaaa cagattctct ccctcgaacc tcactcactt 11520

tcctttttct attctttatt agtattatat aatagatccg ttccaaccat tcacgtacat 11580

aagaagagag atattttttt ttaatggact aacatgacaa ataaaacaaa caaaggagta 11640

atgatcacta caacaaatta gattatgagg gacaaataat ttcatcatct ataaatcatg 11700

tttcgtcact aaaaattttg tgtgacgaaa aagatttcgt caatcagttg tcactaaaaa 11760

tatacaaaga cgatttaatg atgtttacct ttccttttct attctttatt agtattatat 11820

aataaatata tgtgtgatga gacttgaaat tgtttagcac cgcaaatgtc cttgttgaag 11880

ggaggttttc ttttgctgag gttggggtgt cacatacacc ccctctatgg actgaacgtc 11940

ctttttgagg tttattttac actgcatgag atttttctag attcaacatt atgatttcta 12000

gactcaacac tacgatcgtc actaaagact attttttata tataaaaaaa atactttgtc 12060

cttaaatgta taaattaggg ataaatttat tattataaaa aaggttaata attttgtgat 12120

taaatctatt attttgtcac tgaaagtgtt tgcttttacc gacgacatat atgtcactaa 12180

atattatcat aagtagtgac aattacaatt gtcacaaaat aaaaaaaatt attcatattc 12240

aacaaaaaag ggtactacga caatacattt tttgtcactg aaagtaatca agttgtgata 12300

aattaattta tttaatgaca aaaatatttg tatcaaaatt cacccatgat catataataa 12360

aaataactaa aattatacta aagcataaat gacaagaaaa tctaactaaa acatatcaaa 12420

tattactcct aaacaaagac atataagtaa aaatttcttc caaagtatca ataacgtggt 12480

gacacatagc ttgcaatcaa tcttgcttca attttcacct tttatacctg taaaaagaaa 12540

gagaaaataa aacaatgatt taaaggcgcg ccgcgtattg gctagagcag cttgccaaca 12600

tggtggagca cgacactctc gtctactcca agaatatcaa agatacagtc tcagaagacc 12660

aaagggctat tgagactttt caacaaaggg taatatcggg aaacctcctc ggattccatt 12720

gcccagctat ctgtcacttc atcaaaagga cagtagaaaa ggaaggtggc acctacaaat 12780

gccatcattg cgataaagga aaggctatcg ttcaagatgc ctctgccgac agtggtccca 12840

aagatggacc cccacccacg aggagcatcg tggaaaaaga agacgttcca accacgtctt 12900

caaagcaagt ggattgatgt gataacatgg tggagcacga cactctcgtc tactccaaga 12960

atatcaaaga tacagtctca gaagaccaaa gggctattga gacttttcaa caaagggtaa 13020

tatcgggaaa cctcctcgga ttccattgcc cagctatctg tcacttcatc aaaaggacag 13080

tagaaaagga aggtggcacc tacaaatgcc atcattgcga taaaggaaag gctatcgttc 13140

aagatgcctc tgccgacagt ggtcccaaag atggaccccc acccacgagg agcatcgtgg 13200

aaaaagaaga cgttccaacc acgtcttcaa agcaagtgga ttgatgtgat atctccactg 13260

acgtaaggga tgacgcacaa tcccactatc cttcgcaaga ccttcctcta tataaggaag 13320

ttcatttcat ttggagagga cacgctgaaa tcaccagtct ctctctacaa atctatctct 13380

gcgatcgcat ggcgattttg gattctgctg gcgttactac ggtgacggag aacggtggcg 13440

gagagttcgt cgatcttgat aggcttcgtc gacggaaatc gagatcggat tcttctaacg 13500

gacttcttct ctctggttcc gataataatt ctccttcgga tgatgttgga gctcccgccg 13560

acgttaggga tcggattgat tccgttgtta acgatgacgc tcagggaaca gccaatttgg 13620

ccggagataa taacggtggt ggcgataata acggtggtgg aagaggcggc ggagaaggaa 13680

gaggaaacgc cgatgctacg tttacgtatc gaccgtcggt tccagctcat cggagggcga 13740

gagagagtcc acttagctcc gacgcaatct tcaaacagag ccatgccgga ttattcaacc 13800

tctgtgtagt agttcttatt gctgtaaaca gtagactcat catcgaaaat cttatgaagt 13860

atggttggtt gatcagaacg gatttctggt ttagttcaag atcgctgcga gattggccgc 13920

ttttcatgtg ttgtatatcc ctttcgatct ttcctttggc tgcctttacg gttgagaaat 13980

tggtacttca gaaatacata tcagaacctg ttgtcatctt tcttcatatt attatcacca 14040

tgacagaggt tttgtatcca gtttacgtca ccctaaggtg tgattctgct tttttatcag 14100

gtgtcacttt gatgctcctc acttgcattg tgtggctaaa gttggtttct tatgctcata 14160

ctagctatga cataagatcc ctagccaatg cagctgataa ggccaatcct gaagtctcct 14220

actacgttag cttgaagagc ttggcatatt tcatggtcgc tcccacattg tgttatcagc 14280

caagttatcc acgttctgca tgtatacgga agggttgggt ggctcgtcaa tttgcaaaac 14340

tggtcatatt caccggattc atgggattta taatagaaca atatataaat cctattgtca 14400

ggaactcaaa gcatcctttg aaaggcgatc ttctatatgc tattgaaaga gtgttgaagc 14460

tttcagttcc aaatttatat gtgtggctct gcatgttcta ctgcttcttc cacctttggt 14520

taaacatatt ggcagagctt ctctgcttcg gggatcgtga attctacaaa gattggtgga 14580

atgcaaaaag tgtgggagat tactggagaa tgtggaatat gcctgttcat aaatggatgg 14640

ttcgacatat atacttcccg tgcttgcgca gcaagatacc aaagacactc gccattatca 14700

ttgctttcct agtctctgca gtctttcatg agctatgcat cgcagttcct tgtcgtctct 14760

tcaagctatg ggcttttctt gggattatgt ttcaggtgcc tttggtcttc atcacaaact 14820

atctacagga aaggtttggc tcaacggtgg ggaacatgat cttctggttc atcttctgca 14880

ttttcggaca accgatgtgt gtgcttcttt attaccacga cctgatgaac cgaaaaggat 14940

cgatgtcatg agcgatcgcg atcgttcaaa catttggcaa taaagtttct taagattgaa 15000

tcctgttgcc ggtcttgcga tgattatcat ataatttctg ttgaattacg ttaagcatgt 15060

aataattaac atgtaatgca tgacgttatt tatgagatgg gtttttatga ttagagtccc 15120

gcaattatac atttaatacg cgatagaaaa caaaatatag cgcgcaaact aggataaatt 15180

atcgcgcgcg gtgtcatcta tgttactaga tccctgcagg gcgtattggc tagagcagct 15240

tgccaacatg gtggagcacg acactctcgt ctactccaag aatatcaaag atacagtctc 15300

agaagaccaa agggctattg agacttttca acaaagggta atatcgggaa acctcctcgg 15360

attccattgc ccagctatct gtcacttcat caaaaggaca gtagaaaagg aaggtggcac 15420

ctacaaatgc catcattgcg ataaaggaaa ggctatcgtt caagatgcct ctgccgacag 15480

tggtcccaaa gatggacccc cacccacgag gagcatcgtg gaaaaagaag acgttccaac 15540

cacgtcttca aagcaagtgg attgatgtga taacatggtg gagcacgaca ctctcgtcta 15600

ctccaagaat atcaaagata cagtctcaga agaccaaagg gctattgaga cttttcaaca 15660

aagggtaata tcgggaaacc tcctcggatt ccattgccca gctatctgtc acttcatcaa 15720

aaggacagta gaaaaggaag gtggcaccta caaatgccat cattgcgata aaggaaaggc 15780

tatcgttcaa gatgcctctg ccgacagtgg tcccaaagat ggacccccac ccacgaggag 15840

catcgtggaa aaagaagacg ttccaaccac gtcttcaaag caagtggatt gatgtgatat 15900

ctccactgac gtaagggatg acgcacaatc ccactatcct tcgcaagacc ttcctctata 15960

taaggaagtt catttcattt ggagaggaca cgctgaaatc accagtctct ctctacaaat 16020

ctatctctct cgagatgatt gaacaagatg gattgcacgc aggttctccg gccgcttggg 16080

tggagaggct attcggctat gactgggcac aacagacaat cggctgctct gatgccgccg 16140

tgttccggct gtcagcgcag gggaggccgg ttctttttgt caagaccgac ctgtccggtg 16200

ccctgaatga acttcaagac gaggcagcgc ggctatcgtg gctggccacg acgggcgttc 16260

cttgcgcagc tgtgctcgac gttgtcactg aagcgggaag ggactggctg ctattgggcg 16320

aagtgccggg gcaggatctc ctgtcatctc accttgctcc tgccgagaaa gtatccatca 16380

tggctgatgc aatgcggcgg ctgcatacgc ttgatccggc tacctgccca ttcgaccacc 16440

aagcgaaaca tcgcatcgag cgagcacgta ctcggatgga agccggtctt gtcgatcagg 16500

atgatctgga cgaagagcat caggggctcg cgccagccga actgttcgcc aggctcaagg 16560

cgcgcatgcc cgacggcgag gatctcgtcg tgactcatgg cgatgcctgc ttgccgaata 16620

tcatggtgga aaatggccgc ttttctggat tcatcgactg tggccggctg ggtgtggcgg 16680

accgctatca ggacatagcg ttggctaccc gtgatattgc tgaagagctt ggcggcgaat 16740

gggctgacc 16749

<210> 124

<211> 137

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> последовательность линкера

<400> 124

atttaaatgc ggccgcgaat tcgtcgattg aggacgtccc tactagacct gctggacctc 60

ctcctgctac ttactacgat tctctcgctg tgcatatggt cagtcatgcc cgggcctgca 120

ggcggccgca tttaaat 137

<210> 125

<211> 434

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> шпРНКи

<400> 125

gtgagcaatg aaccaagatt tatcaatacc gttacttttg atagcaaaga gggttctcct 60

actcttgtta tggtccacgg atatggtgcc tctcagggtt tcttctttcg gaatttttat 120

gcccttgcga ggcatttcaa agttattgct attgatcagc ttggctgggg tggttcaagc 180

aggcctgact tcacatgcag aagtacagaa gagactgaag attggtttat tgattccttt 240

gaggagtggc gcaaagccaa aaaccttagc aactttattt tgcttgggca ctcctttgga 300

gggtatgtcg ctgcaaaata tgctctcaag catccagagc atgttcagca gttgattctg 360

gtaggaccag ctggatttac atcagagact gaacatatgt ccgagcggct tacccagttt 420

agagcaacat ggaa 434

<210> 126

<211> 593

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> шпРНКи

<400> 126

actgctgatg ctgtcaggca gtatctatgg ttgtttgagg agcataatgt tcttgaattc 60

ctcgtacttg ctggagatca tctatatcga atggattatg aaaagttcat tcaagcccac 120

agagaaacag atgctgatat tactgttgcc gcactgccaa tggatgaaaa gcgagccact 180

gcatttggtc tcatgaagat tgacgaagaa ggacgcatta ttgaatttgc agagaaaccg 240

aaaggagagc aattgaaagc aatgaaagtg gatactacca ttttaggtct tgatgatgag 300

agagctaaag agatgccttt tatcgcaagt atgggtatat atgtcattag caaagatgtg 360

atgttaaact tacttcgtga taagttccct ggtgccaatg attttggcag tgaagttatt 420

cctggtgcaa cttcgcttgg gatgagagtg caagcttatt tatatgatgg atactgggaa 480

gatattggta ccatcgaagc tttctacaat gccaatttgg gcattaccaa aaagccagtc 540

ccagatttta gcttctatga ccgatcagct ccaatctaca cccaacctcg ata 593

<210> 127

<211> 5

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> мотив липазы

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> Xaa может быть любой природной аминокислотой

<400> 127

Gly Xaa Ser Xaa Gly

1 5

<210> 128

<211> 6

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> мотив ацилтрансферазы

<220>

<221> X

<222> (2)..(5)

<223> любая аминокислота

<400> 128

His Xaa Xaa Xaa Xaa Asp

1 5

<210> 129

<211> 7

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> вероятный мотив связывания с липидом

<220>

<221> X

<222> (2)..(4)

<223> любая аминокислота

<400> 129

Val Xaa Xaa Xaa His Gly Phe

1 5

<210> 130

<211> 1224

<212> ДНК

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 130

atggcggaag aaatctcaaa gacgaaggtg ggatcttctt ctactgcttc ggtggctgat 60

tcatctgctg ctgcgtcggc tgcaacgaat gcggccaaat caagatggaa aattttgtgg 120

cctaattcgc tccggtggat tcctacgtcc accgattaca tcatcgccgc cgagaaacgt 180

cttctctcca tcctcaagac gccttatgta caagagcaag tcagtattgg ttcaggacca 240

ccaggttcta aaatcaggtg gtttaggtct acgagcaatg agtcacgtta catcaacact 300

gttacatttg atgccaagga gggagctcct acactcgtca tggttcatgg ttatggtgct 360

tctcaagggt ttttcttccg taattttgat gctcttgcca gtcgatttag agtgatcgct 420

attgatcaac ttgggtgggg tggttcaagt aggcctgatt ttacatgtag aagcacagaa 480

gaaactgagg catggtttat cgactccttt gaggaatggc gtaaagccca gaatctcagt 540

aactttattc tattaggaca ttcttttgga ggctatgttg ctgctaaata cgcgcttaag 600

catcctgaac atgttcaaca cttaattctg gtgggatctg ctgggttctc agcagaagca 660

gatgccaaat cagaatggct cactaaattt agagcaacat ggaaaggtgc agtcctaaat 720

catttatggg agtcaaattt cactcctcag aagctggtta gaggattagg tccttggggt 780

ccaggtcttg taaatcggta tacaactgca agatttggtg cacattcgga gggaactggg 840

ctaacagaag aggaagccaa attgctaacc gattatgtgt accatacttt ggctgcaaag 900

gctagtggag agttatgctt gaaatacatc ttctcatttg gagcatttgc taggaagccc 960

ctcttacaaa gtgcatcaga gtggaaagtg ccaacaacgt ttatctatgg aatgaatgat 1020

tggatgaact atcaaggtgc ggtggaagcg aggaaatcca tgaaggtccc ttgcgaaatc 1080

attcgggttc cacagggtgg tcattttgtg ttcatagaca acccaattgg ttttcattct 1140

gcagtgcttt atgcttgccg caagtttata tctcaagact cctctcatga tcaacaactc 1200

ctagatggtc tacgattggt ttag 1224

<210> 131

<211> 1700

<212> ДНК

<213> Brachypodium distachyon

<400> 131

tccgcgcccg aaacgatccc aacagaagct ctaatctcca aagccgccgc gcgtgttgag 60

ggtggtgcgg ggaaaagctt ggtgtcgtga gcccccgtgt cgcatgcgcc gcgctgccgc 120

cgtgacgagg atggcagcga ccgaggagat gaggcaggcg tccgccgccg ccgccgccac 180

ggtgaccgag gcctcggcgt cggcggcccc gcccgcgggg tccaggtggg cgcgggtgtg 240

gccggccgcg ctgcgctgga tccccacctc caccgagcgc atcatcgccg ccgagaagcg 300

cctcctctcc gtactcaaaa ctgggtatgt ccaagaacaa gttaacattg gctcggctcc 360

acccgggtca aaagtaagat ggtttagatc atcaagtgat gagccaaggt tcatcaatac 420

agtgacattt gatagcaagg agaatgctcc cactcttgtc atggtccatg gttatggtgc 480

ttcacagggt ttcttcttta gaaattttga tgcccttgca agccgtttcc gagtgattgc 540

cattgatcag cttggttggg gtggatcaag tagacctgac ttcacctgta aaagtaccga 600

agaaactgag gcttggttca tagattcttt agaggaatgg cgtaaagcaa agaacctcag 660

taattttata ttgctcggtc attctttcgg aggatatgtt gcagcaaaat atgccttgca 720

gcatcctgaa cacgtgcagc acttaatttt ggtcggttct gctgggtttt catcagaaac 780

agatcatagc tctgagtggt taaccaagtt tcgagcaaca tggaaaggca tgctagtgaa 840

ccaactatgg gagtccaatt ttactcctca aagaattgta agaggattgg gtccttgggg 900

cccagatttg gttcgcagat ataccactgc taggtttggc tcatattcaa caggtgaatt 960

actaacagaa catgagtccg gcttgctgac agattacatt taccatacat tagctgccaa 1020

agctagtgga gagctgtgct tgaaatatat tttttccttg ggggcatttg caaggaaacc 1080

tcttctgcag agtgcatctg actggaaagt gccgaccact ttcatatatg gccatgacga 1140

ttggatgaaa taccaggggg cacagcaagc acgcaaggat atgaaagttc cttgcgaaat 1200

catcagagtc ccacagggag gacattttgt gttcatagat aacccttccg ggttccattc 1260

ggcagtcttc tatgcgtgcc ggaaattttt atctggagat gcagaggagg gtctctctct 1320

tcctgatggc ctgatatctg catgacagca tgaggcgcga tgtcatacca attagcggta 1380

tgaacacaaa gcaaagctat acggagctag gaaatgttac aaatgtcacg actcaccaga 1440

aatgttacaa atgtcaccac tcaccagttt cctttttgta tgtatgaatt gtgtgaatat 1500

acacgtcatt catatttgcc ggcgtatcag tacttcaata gtgataaaac atgatcatat 1560

atatatgtat gatttctcta gtcggttctc atcaagtcaa gttattgtga ttggtgaatg 1620

atatactttc caggtcaact ttgtgtttgc atgtacaaac tatcatggaa catatcagta 1680

tagtttatga tttgtcttcc 1700

<210> 132

<211> 1484

<212> ДНК

<213> Glycine max

<400> 132

gtcatggatg cgcgtcactg ctcgcgttca ttataatggc ggaagagata accaagaacg 60

acgtcggagt aacctccaaa accaccagaa gcagctccag gttctggcct cgttggattc 120

ccacttccac cgatcacatc atcgctgccg agaagcgcct tctttccgtc gtcaagactg 180

gttatgttca agagcatgtt aacattggct ctggtcctcc tggctccaaa gtgaggtggt 240

tccgttcatc cagcaacgag ccgcggttta ttaacaccgt tacatttgac agtaaacccc 300

attctccaac gcttgtcatg attcatggtt atgctgcttc acaggggttc ttttttcgca 360

attttgacgc gcttgcgtct cgatttagag tcattgctgt tgatcaactt ggatggggtg 420

gatcgagcag acctgatttc acatgcaaaa gcactgaaga aactgaggca tggtttattg 480

attcttttga ggaatggaga aaagccaaaa acttgagcaa ttttatactg ctcggacatt 540

cttttggtgg ttatgttgct gccaaatatg cgctcaagca ccctgagcat gtacaacact 600

tgattctggt tggatctgct ggattttcat ctgaatcaga tgcaaagtct gagtggataa 660

caaggtttcg agcaacatgg aagggggcag ttttgaacca tctttgggaa tcaaatttca 720

cacctcagaa acttgtcagg ggtttaggtc cttggggtcc caacatagtc cgcaagtata 780

caagtgctag gtttggtaca cattcaactg gggaaatact gactgaagag gaatcaacat 840

tgctgacaga ctatgtttac cacacattgg cggccaaagc tagtggagag ctgtgcttaa 900

aatatatttt ttcatttgga gcatttgcta ggatgcccct tcttctcagt gcctcagagt 960

ggaaggtgcc caccactttc atgtatggtt tccaagactg gatgaattat caaggtgccc 1020

aagaagctcg caagcatatg aaggttccat gcgaaatcat caggattcct cagggtgggc 1080

actttgcgtt cattgacaac ccaactgcct tccattcagc tgttttttat gcttgtcgaa 1140

ggtttcttac acctgatcca gacaatgaat ctcttcctaa agggctaacc tctgcatagg 1200

ttaggtctta attttgtgct attcctgtct atatgtattt taatattttt ttttactaat 1260

taaatttcat aattgaatga aatcatatgt atattgtttc agtaaagtgg aatttactga 1320

aaatatttgt aatagcaact tcaacaaaaa tcgatttgta ggagaaattt cttccctgga 1380

aattgttcta ttttaaatct tgttgctcat aagatattat gacttcattc aactaataat 1440

tcatgtcgtt taggaaaagt agttagttat attaaatttg tcaa 1484

<210> 133

<211> 1662

<212> ДНК

<213> Zea mays

<400> 133

accatacggg cggggccgca ccgaccgaac ctaaccgaga gcacgagcat acccgtcccg 60

actccgactg cagagcatca gccgaggaga aaagtcggga gaaacgcgcg tgacgtctgc 120

ccgcgtcgta tgcgccgcgc tgccgtcgcc gcgacgacga cgacgaccag gatggcagcc 180

gaggagatga gacgggcctc cgcctcaacg gccacggcgg agatgccggc gtcgccggcg 240

ccggcgcaag cggggtcgag gtgggcgcgg gtgtggccgc gcgcgctccg gtggatcccc 300

acctccacgg accgcatcat cgccgccgag aagcgactcc tcacgatagt caaaactgga 360

tatgtccagg aacgagtcaa cattggctct gctccacctg ggtcaaaagt aagatggttt 420

aggtcagcaa gtgatgaacc aaggttcatt aatactgtaa catttgatag caaggagaat 480

gcccccaccc tggttatggt ccatggctat ggagcttcac aggggttctt ctttcgaaac 540

tttgatgccc ttgcaagccg ttttagggtg attgccattg atcagcttgg ctggggtggt 600

tcaagcagac ctgacttcac atgtaaaagt accgaagaaa ctgaggcatg gttcatagat 660

tctttcgagg agtggcgcaa ggccaagaac ctcagtaatt ttatattgct tggtcactct 720

tttggaggat atgttgctgc aaaatatgcg ctaaagcacc ctgaacacgt tcaacagttg 780

attttggttg gtcctgctgg cttctcatca gaaacagagc atagctctga gtggttaacc 840

aagtttcgag caacatggaa aggcatgcta atgaatcgtc tttgggagtc caattttact 900

ccccaaaggg ttattagggg attgggtcct tggggtccag gtctagtaca gagatatacc 960

agtgccaggt ttggtacaag ttctactggt gaattactaa cagatgaaga atcggcattg 1020

atgacagatt atatgtacca tacgttagct gccaaagcta gtggagagct gtgcttgaaa 1080

tatatatttt ccttcggggc atttgcaagg aaacctcttc tgcagtgcgc gtccgattgg 1140

aaagtgccga ctactttcat atatgggcag caagattgga tgaactacca aggcgctcag 1200

caagcacgga aggacatgaa agttccttgt gaaataatca gggtgccgca gggtggacat 1260

tttgtgttca tagacaaccc ttcagggttc cactcggctg tcttctatgc gtgccgtaat 1320

cttctatcag taaatggaga ggagggattc acatttcctg atggcctaat atctgcgtga 1380

agtggcatgt tcaacaagct tgctcaacaa cagtttacat aaagcaaaga tatacgattg 1440

tggaaatcat tgcccatttc caccaatttg cttgtatacg gattatgctg tgtatatatt 1500

acataacaaa tgtattagta tcatttaatg cacgatttgt gaaagggcct gagtttgtat 1560

ttagcgaatt ttaggttggt ttttttccct ttttcttctt tcagtgcgct tgctagtcaa 1620

tcccatacta taagccgtga tcatttaaaa aaaaaaaaaa aa 1662

<210> 134

<211> 1763

<212> ДНК

<213> Sorghum bicolor

<400> 134

actgcagatg cgcggtcgtc ggctccggct cgcggaggcg agaacggcga accagcccgt 60

gtctctgttc cctttcttcc ctttaaaaac acggcaaaaa aaaagctagc cggttacgct 120

accgaaccga acggctcggc acgcgggcac gggcgcgggg tcgcaccgga aaagcacgag 180

cagagcagac ctgacgtctc cagactgcag gagcatcatc agtcgaggag gaggaagtgt 240

ggggggggga aagggaaacg tgcgcgtcgt atgcgcctcg ctgccgtcgc caggacgacc 300

aggatggcag ccgaggagat gaggcgggcc tcggcctccg cggcggtcgc ggccacgacg 360

gaggcggcgc cggcgccggc gcaagcgggg tccaggtggg cgcgggtgtg gccgagcgcg 420

ctccggtgga tccccacctc cacggatcgc atcatcgccg cggagaagcg gctcctctcg 480

atagtcaaaa ctgggtatgt ccaggaacaa gtcaacattg gctcagctcc acctgggtca 540

aaagtaagat ggtttaggtc agcgagtgat gaaccaaggt tcattaatac tgtaacattt 600

gatggcaagg agaacgcccc caccctggtt atggtccatg gctatggagc ttcacagggg 660

ttcttctttc gaaactttga cgcccttgca agtcgtttta gggtgattgc cattgatcag 720

cttggctggg gtggttcaag cagacctgac ttcacatgta aaagtaccga agaaactgag 780

gcatggttca tagattcttt tgaggagtgg cgcaaggcca agaacctcag taattttata 840

ttgcttggtc actcctttgg aggatatgtt gcggcaaagt atgccctaaa gcaccctgaa 900

cacattcagc acttagtttt ggttggtcct gctggcttct cgtcagaaac agaccatagc 960

tctgagtggt taaccaagtt tcgagcaaca tggaaaggca tgctagtgaa tcatctttgg 1020

gagtccaatt ttactcccca aagagttatt agaggattgg gcccttgggg tccaggtcta 1080

gtacaaagat ataccagtgc caggtttggt acacgttcaa ctggtgatat actaacagat 1140

caagaatcaa cattgttgac agattatatt taccatacct tagctgccaa agctagtgga 1200

gagctgtgct tgaaatatat attttccttc ggggcatttg caaggaaacc tcttctgcag 1260

tgcgcatccg attggaaagt gccgactact ttcatatatg gtcaggaaga ttggatgaac 1320

taccaagggg ctcagcaagc acggaaggac atgaaagttc cttgtgaaat aatcagggtg 1380

ccacagagtg gacattttgt gtttatagac aacccttcag ggttccactc ggctgtcttc 1440

tacgcgtgcc gtaatctttt atcccaaaat ggggaggagg gcttcacatt tcctggtggc 1500

ctaatatctg catgaagtgg catgttcaac aatcttatcg tgcccaacaa tagtttatat 1560

gaagcaaaga tatacgatgg tggaaatctt tgctcatttc caccaatctg gaaatatttg 1620

tgccctcttc caccaatttg tttgtatacg gattatgccg tgtatatatt ctgtgttgac 1680

tgtaagaaac ataatgtatt aacattatgt aatgtatgta cgattcttta tttgattttc 1740

aacttgcaat acgcaagaac cac 1763

<210> 135

<211> 1399

<212> ДНК

<213> Ricinus communis

<400> 135

cgccttttta ccagtcaatt tccattttta tatataagtg cttttgctta atttaagact 60

aactacagcg acgaattcgc gtttatgaaa ttgcttcgcc tacgactgct acgagtatct 120

agctcctcaa tatcatcaat aatggcggaa ggggctgctg ccacatcagc atcagcatca 180

gcgtcagcgt cagcgtcatg ggcaaaaaca agatctctac ggccatctgc tctccgttgg 240

atcccaactt caaccgatca catcatcgcc gccgaaaagc gtcttctctc cctcgtcaag 300

actccctatg ttgtggaaca agtgaatata gggtctggcc caccggggtc gaaggtgagg 360

tggtttcgtt ctaaaagcga cgaggcacgg tttattaaca cggttacttt tgatagcaaa 420

gaggaggatt ctcctacact ggttatggtt catggatatg ctgcttctca aggcttcttc 480

tttcgcaatt ttgatgctct tgcttctcgt ttcaggctca ttgctattga tcagctcggt 540

tggggtggat caagtagacc tgattttacg tgtaagagca ctgaagaaac tgaggcatgg 600

ttcattgact cctttgaggc ttggcgtaaa gagaaaaacc tcagtaactt catcttactt 660

ggacattctt tcggagggta tattgcagct aaatatgcac tcaagcatcc tgagcatgtt 720

caacatctga ttttagtggg atctgctgga ttttcatcag aatctgaaga caaatctgag 780

cagcttactc ggttcagagc aacatggaag ggagcagttt tgaatcattt atgggagtct 840

aattttactc ctcagaaggt tattagaggt ttaggtcctt ggggtccaga tctcgtacgc 900

aagtacacaa ctgctagatt tggttcatat tcaactggtg agatattaaa ggaggaggag 960

tccaaattgc ttacagacta tgtgtaccat accttagccg ccaaagctag tggagagcta 1020

tgcttgaaat atatattttc ttttggagca tttgctcgga tgccccttct acaaagcgcg 1080

tcacaatgga aagtgccaac tactttcata tatgggatgc aagattggat gaattatcaa 1140

ggggcccaaa gagctcgcaa agatatgaat gtcccatgtg aaatcattag ggttcctcag 1200

ggcgggcact tcgttttcat agacaaccca actgggtttc attcagctgt gttatatgcc 1260

tgccggagat ttctctcacc cgatcctgat aatgaatctc ttcctgaagg tctgatatct 1320

gcgtaggaag tgtggtttgt aattatttct tttttatttg ttgtgtataa tttatctgag 1380

aatttccaat tctttcaat 1399

<210> 136

<211> 1480

<212> ДНК

<213> Medicago truncatula

<400> 136

ggttggctca tagttccttt tacctgttga aaacaaaaca tatggagtaa cattttagtc 60

agaaattcaa agctacgcac ttgattaaac taattatcga aaaatggcgg aagaaattag 120

acaaaaggac gacgtcgatt catcttcgaa atctaaaagc ttctggtctt cactccgttg 180

gattcccact tctaccgatc atatcatcgc cgctgagaaa cgccttcttt ccattatcaa 240

gactgggtat gctcaagagc atgttaatat aggttctggt cctcctggct ctaaagttag 300

atggttccgt tcaaccagta acgagccacg ctttctcaac actgttacat ttgatagtaa 360

acccgattct cctacacttg ttatggttca tggatacgct gcttctcagg gtttcttctt 420

tcgcaatttt gatgctctcg cctctcgttt cagaatcatt gctgttgatc aacttggttg 480

gggaggatca agcagacctg atttcacatg caaaagtacc gaagaaactg aggcatggtt 540

cattgattct ttcgaggaat ggagaaaagc caaaaatctt accaatttca tactgcttgg 600

acattctttt ggtggttatg ttgcttccaa atacgcgctc aagcaccctc agcacgtaca 660

acacttaatt ttggtgggac ctgccgggtt tacagaagaa acagatccaa agactgagtt 720

tgttactaag tttcgagcaa catggaaggg agcagttctg aaccatctat gggaatctaa 780

ttttacacct cagaaaattg tcagaggttt aggtccttgg ggtcctaaca tggtccgcaa 840

atatacaagt gctaggtttg gtacacattc aaccgggcaa aaactgattg acgaggaatc 900

aagtctgctg actgattatg tttatcatac attggcggcc aaagctagtg gggagctgtg 960

tttaaaatat atttttgcat ttggagcatt tgctaggatg ccccttcttc aaagtgctca 1020

agagtggaag gtgcccacca cattcatata tggttacgaa gattggatga attatgaagg 1080

tgcccaagaa gctcgcaagc atatgaaggt tccatgtgaa attatcaggg tccctaaggc 1140

cggccatttt gtgttcattg acaacccaag tggcttccat tcagctgtgt tttatgcttg 1200

tcgaaggttt cttaccccaa attcggacaa tgaatctctt cccgaagggc tatcgtctgc 1260

ttaggattta attttgcatc aatccagtgt atattaatat ggttattaat ttttttttac 1320

ttcataactg aatgaagccg tgtcttgttt ctcagtgaag tggaatataa tggaaatata 1380

tgtaattgta ataacaataa tattgatttg ttggggaact ttgaggacaa aaacatattc 1440

tggtaaaatt ttgttgcaca tgcgacaaac atatgctgtg 1480

<210> 137

<211> 1317

<212> ДНК

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 137

gatctctctc cctctctctc tctctctctc cgggaaaaat ggataacttc ttaccctttc 60

cctcttctaa cgcaaactct gtccaagaac tctctatgga tcctaacaac aatcgctcgc 120

acttcacaac agtccctact tatgatcatc atcaggctca gcctcatcac ttcttgcctc 180

cgttttcata cccggtggag cagatggcgg cggtgatgaa tcctcagccg gtttacttat 240

cggagtgtta tcctcagatc ccggttacgc aaaccggaag tgaattcggt tctctggttg 300

gtaatccttg tttgtggcaa gagagaggtg gttttcttga tccgcgtatg acgaagatgg 360

caaggatcaa caggaaaaac gccatgatga gatcaagaaa caactctagc cctaattcta 420

gtccaagtga gttggttgat tcaaagagac agctgatgat gcttaacttg aaaaataacg 480

tgcagatctc cgacaagaaa gatagctacc aacagtccac atttgataac aagaagctta 540

gggttttgtg tgagaaggaa ttgaagaaca gcgatgttgg gtcactcggg aggatagttc 600

taccaaagag agatgcagaa gcaaatcttc cgaagctatc tgataaagaa ggaatcgttg 660

tacagatgag agatgttttc tctatgcagt cttggtcttt caaatacaag ttttggtcca 720

ataacaagag cagaatgtat gtcctcgaga acacaggaga atttgtgaag caaaatggag 780

ctgagatagg agacttttta acaatatacg aggacgaaag caagaatctc tacttcgcca 840

tgaatggaaa ttcgggaaaa caaaatgaag gaagagaaaa tgagtcgagg gaaaggaacc 900

actacgaaga ggcaatgctt gattacatac caagagacga agaggaagct tccattgcaa 960

tgctcatcgg aaatctaaac gatcactatc ccatccctaa cgatctcatg gacctcacca 1020

ctgaccttca gcaccatcaa gccacgtcct catcaatgcc acctgaggat cacgcgtacg 1080

tgggttcatc cgatgatcag gtgagcttta acgactttga gtggtggtga tatggtggtg 1140

gaagttctca agttcataac cccctttatg aaaatagacc ttaagatata caaaagagat 1200

taaaagaaaa aaaagttagt atatttcatc atatctctca ttgaagatga gatttatatc 1260

tataattgtt taatagtgtt tttattactt ttctatcaat atattaaagt tttaatt 1317

<210> 138

<211> 1439

<212> ДНК

<213> Medicago truncatula

<400> 138

tttcatcctt acatattttg catattgaaa cacgtaggat ggaataagat tgataacaaa 60

aattgcattg tttgcatatt gaaaacatgg gacaattgca tgggttcatg tgcttcatta 120

taagccacac attaggaaac acaggttgat attcaccact atttaacata agaatatctc 180

atgtgtaagc attcatacaa atatcacaat tgaattaaaa accaaagaaa tgtcttcctc 240

taacttctct tgtatcctat ccatctcctt aacattcttc atcttgctac tgaacaaggt 300

gaattcagca gaaacaactt ccttttccat cacaaaattt gtcccagatc aaaagaatct 360

catcttccaa ggcgatgcga aaactgcctc aacagggaag ttagaactct ccaaggcagt 420

caagaactct attggtagag ctctttattc cgcccctatt cacatttggg atagcaaaac 480

cggtagtgtg gctaactttc aaactacctt cacctttaca ataacggcgc ctaatactta 540

taatgttgca gacggtcttg cattcttcat tgcaccaatt gatactaagc cgaaatcaat 600

tcatcatgga ggataccttg gagttttcga tagcaaaact tacaaaaaat caattcaaac 660

tgttgcagtt gaaattgaca ctttctataa tgctcaatgg gatccaaatc ccggaaatat 720

aagtagcact ggtcgacata ttggaatcga tgtaaactct atcaaatcaa taagcaccgt 780

gccgtggagt ttggaaaaca ataaaaaggc taatgttgcg atagggttta atggtgcaac 840

aaatgtgttg agtgttgatg tggaatatcc tttgattcgt cattataccc taagtcatgt 900

tgtgcctttg aaggatgttg ttcctgagtg ggtaaggatt ggtttctctt cttctactgg 960

agccgaatat tcagcacatg atattttatc gtggtctttt gattcaaagt tgaacctagg 1020

ttttgagaac aatatcaatg ccaatgtttc aagctctact caagctgcat agttgaaaac 1080

ttatccatta tgtatgtgtg agtgtaacca accagtctaa gaaaactata ataagatacc 1140

tgaaataatg gttcattatc gtgtagtaga aatatggtca caccatatct tctttttttt 1200

ttaataaatt atggaataat gctatttctc gcgagagtta tgtttcggaa agattcatga 1260

atagatgtta atcaattaga tctatatata tatatatata tatatatata tatatatata 1320

tagcattttc ttaaattatg catatgtaat atcgtgtaat gctattgttt atatcaatga 1380

atggtgtttt gtagtcacat aattcgtaat ttctctccat gagaacagcg aaccaatta 1439

<210> 139

<211> 1393

<212> ДНК

<213> Brassica napus

<400> 139

gagatgggta tccctataag gtgcagcatc gaaccatctg caacattttg actcgttttc 60

ttttgtgttt ttataacatc tgtctcttct tcactcgatc tccctctctt ttctttttca 120

atctccccaa cgaacctccc ttcataactc tctttctctc cccgggaaat atggataact 180

tcttgccctt ttcctcttct aacgcaaact ctgtccaaga actctccatg gatcttaaca 240

agaatcgctc gcacttctcc atggcgcagc ctcagcactt gttgccgcct tactcgtacg 300

ttgcatgtcc ggcacttgat cagacgggga ccatgaatca tcagcctctt cactcatcgg 360

atgcttttcc tcagatcccg gttgtacaaa ccggaggtga attcggctat ttggtttgta 420

agcccggtgt gaggcaggaa cgaggtggat ttcttgatcc acactccact aagatggcta 480

ggatcaacag gaagaaggcg atgctaagat caagaaacaa ctctaaccct aattctagtt 540

cgaatgagtt ggttgattca aggagacaag tggctcttac catgaaaaat aatgccgaga 600

ttgctgctag aaaagatttt tatcgattct cctcattcga taacaagaaa cttagggttt 660

tgttggtgaa gcacttgaag aacagcgatg ttgggtcact tggaaggatt gttctaccaa 720

agagagaagc agaaggaaat cttccggagc tatctgataa agaaggaatg gtattagaga 780

tgagagatgt tgactctgtg cagtcttggt ctttcaaata caagtactgg tccaataaca 840

agagcagaat gtatgtcctc gaaaacacag gagaatttgt gaagaaaaat ggagtattga 900

tgggagacta tctaacaatc tacgaggacg aaagcaagaa tctctacttc tccatcagaa 960

agcacccaca caaacaaaat gatggaagag aggatgagtc gatggaagtt atcgagatga 1020

acttctatga agatataatg tttgattaca taccaaatga tgaagacgat tccattgcaa 1080

tgctcctcgg aaatctaaac gagcactatc cctacccaaa tgatcttatg gatctcactg 1140

tcaatcttga tcagcatcag caagccacct cctcgtcgcc acctgctgat cacatgagct 1200

cgaacgattt cttatggtga tgtgatggac gttgatatgg attccctttg agatgatata 1260

caagggatga aaagaaaaga gtatcatatt catatccata tttgtttgat aaaatgtgtt 1320

tgttcccaat ctattattta tgaaaaactt atttgtgttt aactccagat taattaaata 1380

tttttcattt gac 1393

<210> 140

<211> 1755

<212> ДНК

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 140

atgaactcga tgaataactg gttaggcttc tctctctctc ctcatgatca aaatcatcac 60

cgtacggatg ttgactcctc caccaccaga accgccgtag atgttgccgg agggtactgt 120

tttgatctgg ccgctccctc cgatgaatct tctgccgttc aaacatcttt tctttctcct 180

ttcggtgtca ccctcgaagc tttcaccaga gacaataata gtcactcccg agattgggac 240

atcaatggtg gtgcatgcaa taacattaac aataacgaac aaaatggacc aaagcttgag 300

aatttcctcg gccgcaccac cacgatttac aataccaacg agaccgttgt agatggaaat 360

ggcgattgtg gaggaggaga cggtggtggt ggcggctcac taggcctttc gatgataaaa 420

acatggctga gtaatcattc ggttgctaat gctaatcatc aagacaatgg taacggtgca 480

cgaggcttgt ccctctctat gaattcatct actagtgata gcaacaacta caacaacaat 540

gatgatgtcg tccaagagaa gactattgtt gatgtcgtag aaactacacc gaagaaaact 600

attgagagtt ttggacaaag gacgtctata taccgcggtg ttacaaggca tcggtggaca 660

ggtagatacg aggcacattt atgggacaat agttgcaaaa gagaaggcca gactcgcaaa 720

ggaagacaag tttatctggg aggttatgac aaagaagaaa aagcagctag ggcttacgat 780

ttagccgcac taaagtattg gggaaccacc actactacta acttcccctt gagtgaatat 840

gagaaagagg tagaagagat gaagcacatg acgaggcaag agtatgttgc ctctctgcgc 900

aggaaaagta gtggtttctc tcgtggtgca tcgatttatc gaggagtaac aaggcatcac 960

caacatggaa ggtggcaagc taggatcgga agagtcgccg gtaacaaaga cctctacttg 1020

ggaactttcg gcacacagga agaggctgct gaggcttatg acattgcagc cattaaattc 1080

agaggattaa gcgcagtgac taacttcgac atgaacagat acaatgttaa agcaatcctc 1140

gagagcccga gtctacctat tggtagttct gcgaaacgtc tcaaggacgt taataatccg 1200

gttccagcta tgatgattag taataacgtt tcagagagtg caaataatgt tagcggttgg 1260

caaaacactg cgtttcagca tcatcaggga atggatttga gcttattgca gcaacagcag 1320

gagaggtacg ttggttatta caatggagga aacttgtcta ccgagagtac tagggtttgt 1380

ttcaaacaag aggaggaaca acaacacttc ttgagaaact cgccgagtca catgactaat 1440

gttgatcatc atagctcgac ctctgatgat tctgttaccg tttgtggaaa tgttgttagt 1500

tatggtggtt atcaaggatt cgcaatccct gttggaacat cggttaatta cgatcccttt 1560

actgctgctg agattgctta caacgcaaga aatcattatt actatgctca gcatcagcaa 1620

caacagcaga ttcagcagtc gccgggagga gattttccgg tggcgatttc gaataaccat 1680

agctctaaca tgtactttca cggggaaggt ggtggagaag gggctccaac gttttcagtt 1740

tggaacgaca cttag 1755

<210> 141

<211> 2061

<212> ДНК

<213> Medicago truncatula

<400> 141

atgaacttgt taggtttctc tctatctcca caagaacaac atccatcaac acaagatcaa 60

acggtggctt cccgttttgg gttcaaccct aatgaaatct caggctctga tgttcaagga 120

gatcactgct atgatctctc ttctcacaca actcctcatc attcactcaa cctttctcat 180

cctttttcca tttatgaagc tttccacaca aataacaaca ttcacaccac tcaagattgg 240

aaggagaact acaacaacca aaacctacta ttgggaacat catgcatgaa ccaaaatgtg 300

aacaacaaca accaacaagc acaaccaaag ctagaaaact tcctcggtgg acactctttc 360

accgaccatc aagaatacgg tggtagcaac tcatactctt cattacacct cccacctcat 420

cagccggaag catcctgtgg cggtggtgat ggtagtacaa gtaacaataa ctcaataggt 480

ttatctatga taaaaacatg gctcagaaac caaccaccac caccagaaaa caacaacaat 540

aacaacaatg aaagtggtgc acgtgtgcag acactatcac tttctatgag tactggctca 600

cagtcaagtt catctgtgcc tcttctcaat gcaaatgtga tgagtggtga gatttcctca 660

tcggaaaaca aacaaccacc cacaactgca gttgtacttg atagcaacca aacaagtgtc 720

gttgaaagtg ctgtgcctag aaaatccgtt gatacatttg gacaaagaac ttccatttac 780

cgtggtgtaa caaggcatag atggacaggg agatatgaag ctcacctttg ggataatagt 840

tgtagaagag aggggcagac tcgcaaagga aggcaagttt acttgggagg ttatgacaaa 900

gaagaaaaag cagctagagc ctatgatttg gcagcactaa aatattgggg aacaactact 960

acaacaaatt ttccaattag ccattatgaa aaagaagtgg aagaaatgaa gcatatgaca 1020

aggcaagagt acgttgcgtc attgagaagg aaaagtagtg gtttttcacg aggtgcatcc 1080

atttaccgag gagtaacaag acatcatcaa catggtagat ggcaagctag gattggaaga 1140

gttgcaggca acaaagatct ctacctagga actttcagca ctcaagaaga ggcagcagag 1200

gcatatgatg tggcagcaat aaaattcaga ggactgagtg cagttacaaa ctttgacatg 1260

agcagatatg atgtcaaaac catacttgag agcagcacat taccaattgg tggtgctgca 1320

aagcgtttaa aagacatgga gcaagttgaa ttgaatcatg tgaatgttga tattagccat 1380

agaactgaac aagatcatag catcatcaac aacacttccc atttaacaga acaagccatc 1440

tatgcagcaa caaatgcatc taattggcat gcactttcat tccaacatca acaaccacat 1500

catcattaca atgccaacaa catgcagtta cagaattatc cttatggaac tcaaactcaa 1560

aagctttggt gcaaacaaga acaagattct gatgatcata gtacttatac tactgctact 1620

gatattcatc aactacagtt agggaataat aataacaata ctcacaattt ctttggttta 1680

caaaatatca tgagtatgga ttctgcttcc atggataata gttctggatc taattctgtt 1740

gtttatggtg gtggagatca tggtggttat ggaggaaatg gtggatatat gattccaatg 1800

gctattgcaa atgatggtaa ccaaaatcca agaagcaaca acaattttgg tgagagtgag 1860

attaaaggat ttggttatga aaatgttttt gggactacta ctgatcctta tcatgcacag 1920

gcagcaagga acttgtacta tcagccacaa caattatctg ttgatcaagg atcaaattgg 1980

gttccaactg ctattccaac acttgctcca aggactacca atgtctctct atgtcctcct 2040

ttcactttgt tgcatgaata g 2061

<210> 142

<211> 363

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 142

Met Asp Asn Phe Leu Pro Phe Pro Ser Ser Asn Ala Asn Ser Val Gln

1 5 10 15

Glu Leu Ser Met Asp Pro Asn Asn Asn Arg Ser His Phe Thr Thr Val

20 25 30

Pro Thr Tyr Asp His His Gln Ala Gln Pro His His Phe Leu Pro Pro

35 40 45

Phe Ser Tyr Pro Val Glu Gln Met Ala Ala Val Met Asn Pro Gln Pro

50 55 60

Val Tyr Leu Ser Glu Cys Tyr Pro Gln Ile Pro Val Thr Gln Thr Gly

65 70 75 80

Ser Glu Phe Gly Ser Leu Val Gly Asn Pro Cys Leu Trp Gln Glu Arg

85 90 95

Gly Gly Phe Leu Asp Pro Arg Met Thr Lys Met Ala Arg Ile Asn Arg

100 105 110

Lys Asn Ala Met Met Arg Ser Arg Asn Asn Ser Ser Pro Asn Ser Ser

115 120 125

Pro Ser Glu Leu Val Asp Ser Lys Arg Gln Leu Met Met Leu Asn Leu

130 135 140

Lys Asn Asn Val Gln Ile Ser Asp Lys Lys Asp Ser Tyr Gln Gln Ser

145 150 155 160

Thr Phe Asp Asn Lys Lys Leu Arg Val Leu Cys Glu Lys Glu Leu Lys

165 170 175

Asn Ser Asp Val Gly Ser Leu Gly Arg Ile Val Leu Pro Lys Arg Asp

180 185 190

Ala Glu Ala Asn Leu Pro Lys Leu Ser Asp Lys Glu Gly Ile Val Val

195 200 205

Gln Met Arg Asp Val Phe Ser Met Gln Ser Trp Ser Phe Lys Tyr Lys

210 215 220

Phe Trp Ser Asn Asn Lys Ser Arg Met Tyr Val Leu Glu Asn Thr Gly

225 230 235 240

Glu Phe Val Lys Gln Asn Gly Ala Glu Ile Gly Asp Phe Leu Thr Ile

245 250 255

Tyr Glu Asp Glu Ser Lys Asn Leu Tyr Phe Ala Met Asn Gly Asn Ser

260 265 270

Gly Lys Gln Asn Glu Gly Arg Glu Asn Glu Ser Arg Glu Arg Asn His

275 280 285

Tyr Glu Glu Ala Met Leu Asp Tyr Ile Pro Arg Asp Glu Glu Glu Ala

290 295 300

Ser Ile Ala Met Leu Ile Gly Asn Leu Asn Asp His Tyr Pro Ile Pro

305 310 315 320

Asn Asp Leu Met Asp Leu Thr Thr Asp Leu Gln His His Gln Ala Thr

325 330 335

Ser Ser Ser Met Pro Pro Glu Asp His Ala Tyr Val Gly Ser Ser Asp

340 345 350

Asp Gln Val Ser Phe Asn Asp Phe Glu Trp Trp

355 360

<210> 143

<211> 280

<212> Белок

<213> Medicago truncatula

<400> 143

Met Ser Ser Ser Asn Phe Ser Cys Ile Leu Ser Ile Ser Leu Thr Phe

1 5 10 15

Phe Ile Leu Leu Leu Asn Lys Val Asn Ser Ala Glu Thr Thr Ser Phe

20 25 30

Ser Ile Thr Lys Phe Val Pro Asp Gln Lys Asn Leu Ile Phe Gln Gly

35 40 45

Asp Ala Lys Thr Ala Ser Thr Gly Lys Leu Glu Leu Ser Lys Ala Val

50 55 60

Lys Asn Ser Ile Gly Arg Ala Leu Tyr Ser Ala Pro Ile His Ile Trp

65 70 75 80

Asp Ser Lys Thr Gly Ser Val Ala Asn Phe Gln Thr Thr Phe Thr Phe

85 90 95

Thr Ile Thr Ala Pro Asn Thr Tyr Asn Val Ala Asp Gly Leu Ala Phe

100 105 110

Phe Ile Ala Pro Ile Asp Thr Lys Pro Lys Ser Ile His His Gly Gly

115 120 125

Tyr Leu Gly Val Phe Asp Ser Lys Thr Tyr Lys Lys Ser Ile Gln Thr

130 135 140

Val Ala Val Glu Ile Asp Thr Phe Tyr Asn Ala Gln Trp Asp Pro Asn

145 150 155 160

Pro Gly Asn Ile Ser Ser Thr Gly Arg His Ile Gly Ile Asp Val Asn

165 170 175

Ser Ile Lys Ser Ile Ser Thr Val Pro Trp Ser Leu Glu Asn Asn Lys

180 185 190

Lys Ala Asn Val Ala Ile Gly Phe Asn Gly Ala Thr Asn Val Leu Ser

195 200 205

Val Asp Val Glu Tyr Pro Leu Ile Arg His Tyr Thr Leu Ser His Val

210 215 220

Val Pro Leu Lys Asp Val Val Pro Glu Trp Val Arg Ile Gly Phe Ser

225 230 235 240

Ser Ser Thr Gly Ala Glu Tyr Ser Ala His Asp Ile Leu Ser Trp Ser

245 250 255

Phe Asp Ser Lys Leu Asn Leu Gly Phe Glu Asn Asn Ile Asn Ala Asn

260 265 270

Val Ser Ser Ser Thr Gln Ala Ala

275 280

<210> 144

<211> 349

<212> Белок

<213> Brassica napus

<400> 144

Met Asp Asn Phe Leu Pro Phe Ser Ser Ser Asn Ala Asn Ser Val Gln

1 5 10 15

Glu Leu Ser Met Asp Leu Asn Lys Asn Arg Ser His Phe Ser Met Ala

20 25 30

Gln Pro Gln His Leu Leu Pro Pro Tyr Ser Tyr Val Ala Cys Pro Ala

35 40 45

Leu Asp Gln Thr Gly Thr Met Asn His Gln Pro Leu His Ser Ser Asp

50 55 60

Ala Phe Pro Gln Ile Pro Val Val Gln Thr Gly Gly Glu Phe Gly Tyr

65 70 75 80

Leu Val Cys Lys Pro Gly Val Arg Gln Glu Arg Gly Gly Phe Leu Asp

85 90 95

Pro His Ser Thr Lys Met Ala Arg Ile Asn Arg Lys Lys Ala Met Leu

100 105 110

Arg Ser Arg Asn Asn Ser Asn Pro Asn Ser Ser Ser Asn Glu Leu Val

115 120 125

Asp Ser Arg Arg Gln Val Ala Leu Thr Met Lys Asn Asn Ala Glu Ile

130 135 140

Ala Ala Arg Lys Asp Phe Tyr Arg Phe Ser Ser Phe Asp Asn Lys Lys

145 150 155 160

Leu Arg Val Leu Leu Val Lys His Leu Lys Asn Ser Asp Val Gly Ser

165 170 175

Leu Gly Arg Ile Val Leu Pro Lys Arg Glu Ala Glu Gly Asn Leu Pro

180 185 190

Glu Leu Ser Asp Lys Glu Gly Met Val Leu Glu Met Arg Asp Val Asp

195 200 205

Ser Val Gln Ser Trp Ser Phe Lys Tyr Lys Tyr Trp Ser Asn Asn Lys

210 215 220

Ser Arg Met Tyr Val Leu Glu Asn Thr Gly Glu Phe Val Lys Lys Asn

225 230 235 240

Gly Val Leu Met Gly Asp Tyr Leu Thr Ile Tyr Glu Asp Glu Ser Lys

245 250 255

Asn Leu Tyr Phe Ser Ile Arg Lys His Pro His Lys Gln Asn Asp Gly

260 265 270

Arg Glu Asp Glu Ser Met Glu Val Ile Glu Met Asn Phe Tyr Glu Asp

275 280 285

Ile Met Phe Asp Tyr Ile Pro Asn Asp Glu Asp Asp Ser Ile Ala Met

290 295 300

Leu Leu Gly Asn Leu Asn Glu His Tyr Pro Tyr Pro Asn Asp Leu Met

305 310 315 320

Asp Leu Thr Val Asn Leu Asp Gln His Gln Gln Ala Thr Ser Ser Ser

325 330 335

Pro Pro Ala Asp His Met Ser Ser Asn Asp Phe Leu Trp

340 345

<210> 145

<211> 584

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 145

Met Asn Ser Met Asn Asn Trp Leu Gly Phe Ser Leu Ser Pro His Asp

1 5 10 15

Gln Asn His His Arg Thr Asp Val Asp Ser Ser Thr Thr Arg Thr Ala

20 25 30

Val Asp Val Ala Gly Gly Tyr Cys Phe Asp Leu Ala Ala Pro Ser Asp

35 40 45

Glu Ser Ser Ala Val Gln Thr Ser Phe Leu Ser Pro Phe Gly Val Thr

50 55 60

Leu Glu Ala Phe Thr Arg Asp Asn Asn Ser His Ser Arg Asp Trp Asp

65 70 75 80

Ile Asn Gly Gly Ala Cys Asn Thr Leu Thr Asn Asn Glu Gln Asn Gly

85 90 95

Pro Lys Leu Glu Asn Phe Leu Gly Arg Thr Thr Thr Ile Tyr Asn Thr

100 105 110

Asn Glu Thr Val Val Asp Gly Asn Gly Asp Cys Gly Gly Gly Asp Gly

115 120 125

Gly Gly Gly Gly Ser Leu Gly Leu Ser Met Ile Lys Thr Trp Leu Ser

130 135 140

Asn His Ser Val Ala Asn Ala Asn His Gln Asp Asn Gly Asn Gly Ala

145 150 155 160

Arg Gly Leu Ser Leu Ser Met Asn Ser Ser Thr Ser Asp Ser Asn Asn

165 170 175

Tyr Asn Asn Asn Asp Asp Val Val Gln Glu Lys Thr Ile Val Asp Val

180 185 190

Val Glu Thr Thr Pro Lys Lys Thr Ile Glu Ser Phe Gly Gln Arg Thr

195 200 205

Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Tyr Glu

210 215 220

Ala His Leu Trp Asp Asn Ser Cys Lys Arg Glu Gly Gln Thr Arg Lys

225 230 235 240

Gly Arg Gln Val Tyr Leu Gly Gly Tyr Asp Lys Glu Glu Lys Ala Ala

245 250 255

Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro Thr Thr Thr

260 265 270

Thr Asn Phe Pro Leu Ser Glu Tyr Glu Lys Glu Val Glu Glu Met Lys

275 280 285

His Met Thr Arg Gln Glu Tyr Val Ala Ser Leu Arg Arg Lys Ser Ser

290 295 300

Gly Phe Ser Arg Gly Ala Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His His

305 310 315 320

Gln His Gly Arg Trp Gln Ala Arg Ile Gly Arg Val Ala Gly Asn Lys

325 330 335

Asp Leu Tyr Leu Gly Thr Phe Gly Thr Gln Glu Glu Ala Ala Glu Ala

340 345 350

Tyr Asp Ile Ala Ala Ile Lys Phe Arg Gly Leu Ser Ala Val Thr Asn

355 360 365

Phe Asp Met Asn Arg Tyr Asn Val Lys Ala Ile Leu Glu Ser Pro Ser

370 375 380

Leu Pro Ile Gly Ser Ser Ala Lys Arg Leu Lys Asp Val Asn Asn Pro

385 390 395 400

Val Pro Ala Met Met Ile Ser Asn Asn Val Ser Glu Ser Ala Asn Asn

405 410 415

Val Ser Gly Trp Gln Asn Thr Ala Phe Gln His His Gln Gly Met Asp

420 425 430

Leu Ser Leu Leu Gln Gln Gln Gln Glu Arg Tyr Val Gly Tyr Tyr Asn

435 440 445

Gly Gly Asn Leu Ser Thr Glu Ser Thr Arg Val Cys Phe Lys Gln Glu

450 455 460

Glu Glu Gln Gln His Phe Leu Arg Asn Ser Pro Ser His Met Thr Asn

465 470 475 480

Val Asp His His Ser Ser Thr Ser Asp Asp Ser Val Thr Val Cys Gly

485 490 495

Asn Val Val Ser Tyr Gly Gly Tyr Gln Gly Phe Ala Ile Pro Val Gly

500 505 510

Thr Ser Val Asn Tyr Asp Pro Phe Thr Ala Ala Glu Ile Ala Tyr Asn

515 520 525

Ala Arg Asn His Tyr Tyr Tyr Ala Gln His Gln Gln Gln Gln Gln Ile

530 535 540

Gln Gln Ser Pro Gly Gly Asp Phe Pro Val Ala Ile Ser Asn Asn His

545 550 555 560

Ser Ser Asn Met Tyr Phe His Gly Glu Gly Gly Gly Glu Gly Ala Pro

565 570 575

Thr Phe Ser Val Trp Asn Asp Thr

580

<210> 146

<211> 686

<212> Белок

<213> Medicago truncatula

<400> 146

Met Asn Leu Leu Gly Phe Ser Leu Ser Pro Gln Glu Gln His Pro Ser

1 5 10 15

Thr Gln Asp Gln Thr Val Ala Ser Arg Phe Gly Phe Asn Pro Asn Glu

20 25 30

Ile Ser Gly Ser Asp Val Gln Gly Asp His Cys Tyr Asp Leu Ser Ser

35 40 45

His Thr Thr Pro His His Ser Leu Asn Leu Ser His Pro Phe Ser Ile

50 55 60

Tyr Glu Ala Phe His Thr Asn Asn Asn Ile His Thr Thr Gln Asp Trp

65 70 75 80

Lys Glu Asn Tyr Asn Asn Gln Asn Leu Leu Leu Gly Thr Ser Cys Met

85 90 95

Asn Gln Asn Val Asn Asn Asn Asn Gln Gln Ala Gln Pro Lys Leu Glu

100 105 110

Asn Phe Leu Gly Gly His Ser Phe Thr Asp His Gln Glu Tyr Gly Gly

115 120 125

Ser Asn Ser Tyr Ser Ser Leu His Leu Pro Pro His Gln Pro Glu Ala

130 135 140

Ser Cys Gly Gly Gly Asp Gly Ser Thr Ser Asn Asn Asn Ser Ile Gly

145 150 155 160

Leu Ser Met Ile Lys Thr Trp Leu Arg Asn Gln Pro Pro Pro Pro Glu

165 170 175

Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Glu Ser Gly Ala Arg Val Gln Thr Leu

180 185 190

Ser Leu Ser Met Ser Thr Gly Ser Gln Ser Ser Ser Ser Val Pro Leu

195 200 205

Leu Asn Ala Asn Val Met Ser Gly Glu Ile Ser Ser Ser Glu Asn Lys

210 215 220

Gln Pro Pro Thr Thr Ala Val Val Leu Asp Ser Asn Gln Thr Ser Val

225 230 235 240

Val Glu Ser Ala Val Pro Arg Lys Ser Val Asp Thr Phe Gly Gln Arg

245 250 255

Thr Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Tyr

260 265 270

Glu Ala His Leu Trp Asp Asn Ser Cys Arg Arg Glu Gly Gln Thr Arg

275 280 285

Lys Gly Arg Gln Val Tyr Leu Gly Gly Tyr Asp Lys Glu Glu Lys Ala

290 295 300

Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Thr Thr Thr

305 310 315 320

Thr Thr Asn Phe Pro Ile Ser His Tyr Glu Lys Glu Val Glu Glu Met

325 330 335

Lys His Met Thr Arg Gln Glu Tyr Val Ala Ser Leu Arg Arg Lys Ser

340 345 350

Ser Gly Phe Ser Arg Gly Ala Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His

355 360 365

His Gln His Gly Arg Trp Gln Ala Arg Ile Gly Arg Val Ala Gly Asn

370 375 380

Lys Asp Leu Tyr Leu Gly Thr Phe Ser Thr Gln Glu Glu Ala Ala Glu

385 390 395 400

Ala Tyr Asp Val Ala Ala Ile Lys Phe Arg Gly Leu Ser Ala Val Thr

405 410 415

Asn Phe Asp Met Ser Arg Tyr Asp Val Lys Thr Ile Leu Glu Ser Ser

420 425 430

Thr Leu Pro Ile Gly Gly Ala Ala Lys Arg Leu Lys Asp Met Glu Gln

435 440 445

Val Glu Leu Asn His Val Asn Val Asp Ile Ser His Arg Thr Glu Gln

450 455 460

Asp His Ser Ile Ile Asn Asn Thr Ser His Leu Thr Glu Gln Ala Ile

465 470 475 480

Tyr Ala Ala Thr Asn Ala Ser Asn Trp His Ala Leu Ser Phe Gln His

485 490 495

Gln Gln Pro His His His Tyr Asn Ala Asn Asn Met Gln Leu Gln Asn

500 505 510

Tyr Pro Tyr Gly Thr Gln Thr Gln Lys Leu Trp Cys Lys Gln Glu Gln

515 520 525

Asp Ser Asp Asp His Ser Thr Tyr Thr Thr Ala Thr Asp Ile His Gln

530 535 540

Leu Gln Leu Gly Asn Asn Asn Asn Asn Thr His Asn Phe Phe Gly Leu

545 550 555 560

Gln Asn Ile Met Ser Met Asp Ser Ala Ser Met Asp Asn Ser Ser Gly

565 570 575

Ser Asn Ser Val Val Tyr Gly Gly Gly Asp His Gly Gly Tyr Gly Gly

580 585 590

Asn Gly Gly Tyr Met Ile Pro Met Ala Ile Ala Asn Asp Gly Asn Gln

595 600 605

Asn Pro Arg Ser Asn Asn Asn Phe Gly Glu Ser Glu Ile Lys Gly Phe

610 615 620

Gly Tyr Glu Asn Val Phe Gly Thr Thr Thr Asp Pro Tyr His Ala Gln

625 630 635 640

Ala Ala Arg Asn Leu Tyr Tyr Gln Pro Gln Gln Leu Ser Val Asp Gln

645 650 655

Gly Ser Asn Trp Val Pro Thr Ala Ile Pro Thr Leu Ala Pro Arg Thr

660 665 670

Thr Asn Val Ser Leu Cys Pro Pro Phe Thr Leu Leu His Glu

675 680 685

<210> 147

<211> 336

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> индуцибельный промотор

<400> 147

tcgatagttg tgatagttcc cacttgtccg tccgcatcgg catccgcagc tcgggatagt 60

tccgacctag gattggatgc atgcggaacc gcacgagggc ggggcggaaa ttgacacacc 120

actcctctcc acgcaccgtt caagaggtac gcgtatagag ccgtatagag cagagacgga 180

gcactttctg gtactgtccg cacgggatgt ccgcacggag agccacaaac gagcggggcc 240

ccgtacgtgc tctcctaccc caggatcgca tccccgcata gctgaacatc tatataaaga 300

cccccaaggt tctcagtctc accaacatca tcaacc 336

<210> 148

<211> 2466

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> индуктор

<400> 148

atggccgaca ctagaagaag gcagaaccac tcttgtgacc catgccgtaa gggcaagaga 60

agatgtgatg ctccagagaa ccgtaacgag gctaatgaga acggatgggt gtcatgctct 120

aactgcaaga ggtggaacaa ggactgcacc ttcaactggc ttagctccca aaggtctaag 180

gctaagggtg ctgctccaag agctaggact aagaaggcta ggactgctac tactacctcc 240

gagccttcta cttccgctgc tactattcca actcccgagt ccgataatca cgatgctcca 300

ccagtgatca actcccacga tgctttgcca tcttggactc agggacttct ttctcaccct 360

ggcgatctct tcgacttctc ccattctgct attccagcta acgctgagga tgctgctaac 420

gtgcaatctg atgctccatt cccatgggat cttgctatcc caggcgattt ctctatggga 480

cagcaacttg agaagcccct ctccccattg tctttccagg ctgttcttct tccaccacac 540

tccccaaaca ctgatgatct cattcgtgag cttgaggaac agactaccga tccagattcc 600

gtgactgaca ctaactccgt tcagcaagtt gctcaggatg gctctctttg gtctgatagg 660

cagtctccac tcctcccaga aaacagtttg tgcatggctt ccgactctac cgctagaagg 720

tatgctaggt ccaccatgac caagaacctc atgaggatct accacgactc catggaaaac 780

gccctttctt gctggcttac tgagcacaac tgcccatact ccgaccagat ttcttacctc 840

ccaccaaagc aaagggctga gtggggacca aattggtcta acaggatgtg cattagggtg 900

tgcaggctcg atagggtgtc aacttctctt agaggaaggg ctctctccgc tgaagaagat 960

aaggctgctg ctagggcact tcaccttgct attgtggctt tcgcttctca gtggactcaa 1020

catgctcaaa ggggagctgg acttaacgtc ccagctgata ttgctgctga cgagcgttct 1080

attaggcgta acgcttggaa tgaggctagg catgcacttc agcacactac tggaatccca 1140

tccttcaggg tgatcttcgc caacatcatc ttcagcctca ctcagtccgt gctcgatgat 1200

gatgagcaac atggaatggg agctaggctc gataagcttc tcgagaatga tggtgctcca 1260

gtgttcctcg agactgctaa taggcagctc tacaccttca ggcacaagtt cgctaggatg 1320

cagagaaggg gtaaggcttt caataggctt cctggtggat ccgtggcttc tactttcgct 1380

ggaattttcg agactcccac cccctcatct gagtctccac aacttgatcc agtggtggct 1440

tctgaggaac acaggtctac tctgtctctc atgttctggc tcgggatcat gttcgacact 1500

ctgtctgctg ctatgtacca gaggccactt gttgtgtccg atgaggactc ccagatctct 1560

tctgcttctc caccaagaag aggtgccgag actcctatta accttgattg ctgggagcca 1620

ccaaggcagg tcccatctaa tcaagagaag tctgatgtgt ggggcgacct gttccttagg 1680

acttctgatt ctttgcccga ccacgagtcc cacactcaaa tttctcaacc agctgctagg 1740

tggccatgca cttatgaaca agctgctgct gctctctcct ctgctactcc tgttaaggtg 1800

ttgctttaca ggcgtgtgac tcagctccag actttgttgt ataggggagc ttctccagct 1860

aggcttgagg ctgctattca gaggactctc tacgtgtaca accactggac tgctaagtac 1920

cagccattca tgcaggattg cgttgccaac catgagcttc tcccatccag gatccagtct 1980

tggtacgtga tccttgatgg acactggcac cttgctgcta tgcttttggc tgatgtgctc 2040

gagtccatcg acagggattc ctactccgat atcaaccaca tcgacctcgt gactaagctc 2100

aggcttgata acgctcttgc tgtgtctgct ctcgctaggt catctcttag aggccaagaa 2160

ctcgatccag gcaaggcttc tccaatgtac aggcacttcc acgactccct tactgaggtt 2220

gcattccttg ttgagccatg gactgtggtg ctcatccact catttgctaa ggctgcttac 2280

atcctcctcg attgccttga tcttgatggt cagggaaacg ctctcgctgg ataccttcaa 2340

cttaggcaga actgcaacta ctgcatcagg gctctccagt tccttggccg taagtctgat 2400

atggctgctc tcgtggctaa ggatcttgag aggggactca acggaaaggt cgacagcttc 2460

ctctaa 2466

<210> 149

<211> 208

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 149

Met Thr Ser Ser Val Ile Val Ala Gly Ala Gly Asp Lys Asn Asn Gly

1 5 10 15

Ile Val Val Gln Gln Gln Pro Pro Cys Val Ala Arg Glu Gln Asp Gln

20 25 30

Tyr Met Pro Ile Ala Asn Val Ile Arg Ile Met Arg Lys Thr Leu Pro

35 40 45

Ser His Ala Lys Ile Ser Asp Asp Ala Lys Glu Thr Ile Gln Glu Cys

50 55 60

Val Ser Glu Tyr Ile Ser Phe Val Thr Gly Glu Ala Asn Glu Arg Cys

65 70 75 80

Gln Arg Glu Gln Arg Lys Thr Ile Thr Ala Glu Asp Ile Leu Trp Ala

85 90 95

Met Ser Lys Leu Gly Phe Asp Asn Tyr Val Asp Pro Leu Thr Val Phe

100 105 110

Ile Asn Arg Tyr Arg Glu Ile Glu Thr Asp Arg Gly Ser Ala Leu Arg

115 120 125

Gly Glu Pro Pro Ser Leu Arg Gln Thr Tyr Gly Gly Asn Gly Ile Gly

130 135 140

Phe His Gly Pro Ser His Gly Leu Pro Pro Pro Gly Pro Tyr Gly Tyr

145 150 155 160

Gly Met Leu Asp Gln Ser Met Val Met Gly Gly Gly Arg Tyr Tyr Gln

165 170 175

Asn Gly Ser Ser Gly Gln Asp Glu Ser Ser Val Gly Gly Gly Ser Ser

180 185 190

Ser Ser Ile Asn Gly Met Pro Ala Phe Asp His Tyr Gly Gln Tyr Lys

195 200 205

<210> 150

<211> 236

<212> Белок

<213> Arabidopsis lyrata

<400> 150

Met Glu Arg Gly Ala Pro Phe Ser His Tyr Gln Leu Pro Lys Ser Ile

1 5 10 15

Ser Glu Leu Asn Leu Asp Gln His Ser Asn Pro Asn Pro Met Thr Ser

20 25 30

Ser Val Val Val Ala Asp Ala Ser Asp Asn Asn Lys Gly Ile Val Ala

35 40 45

Gln Gln Gln Pro Pro Cys Met Ala Arg Glu Gln Asp Gln Tyr Met Pro

50 55 60

Ile Ala Asn Val Ile Arg Ile Met Arg Lys Ile Leu Pro Ser His Ala

65 70 75 80

Lys Ile Ser Asp Asp Ala Lys Glu Thr Ile Gln Glu Cys Val Ser Glu

85 90 95

Tyr Ile Ser Phe Val Thr Gly Glu Ala Asn Glu Arg Cys Gln Arg Glu

100 105 110

Gln Arg Lys Thr Ile Thr Ala Glu Asp Ile Leu Trp Ala Met Ser Lys

115 120 125

Leu Gly Phe Asp Asn Tyr Val Asp Pro Leu Thr Val Phe Ile Asn Arg

130 135 140

Tyr Arg Glu Ile Glu Thr Asp Arg Gly Ser Ala Leu Arg Glu Pro Pro

145 150 155 160

Ser Leu Arg Gln Ala Tyr Gly Gly Asn Gly Ile Gly Phe His Gly Pro

165 170 175

Ser His Gly Leu Pro Pro Pro Gly Pro Tyr Gly Tyr Gly Met Leu Asp

180 185 190

Gln Ser Met Val Met Gly Gly Gly Arg Tyr Tyr Gln Asn Gly Ser Ser

195 200 205

Gly Gln Asp Glu Ser Ser Ala Gly Gly Gly Ser Ser Ser Ser Ile Asn

210 215 220

Gly Met Pro Ala Phe Asp Ser Tyr Gly Gln Tyr Lys

225 230 235

<210> 151

<211> 230

<212> Белок

<213> Brassica napus

<400> 151

Met Glu Arg Gly Ala Pro Leu Ser His Tyr Gln Leu Pro Lys Ser Asn

1 5 10 15

Ser Gly Leu Asn Leu Asp Gln His Asn Asn Ser Ile Pro Thr Met Thr

20 25 30

Gly Ser Ile Ser Ala Cys Asp Asp Lys Asn Lys Thr Ile Leu Pro Gln

35 40 45

Gln Gln Pro Ser Met Pro Arg Glu Gln Asp Gln Tyr Met Pro Ile Ala

50 55 60

Asn Val Ile Arg Ile Met Arg Lys Ile Leu Pro Pro His Ala Lys Ile

65 70 75 80

Ser Asp Asp Ala Lys Glu Thr Ile Gln Glu Cys Val Ser Glu Tyr Ile

85 90 95

Ser Phe Val Thr Gly Glu Ala Asn Glu Arg Cys Gln Arg Glu Gln Arg

100 105 110

Lys Thr Ile Thr Ala Glu Asp Ile Leu Trp Ala Met Ser Lys Leu Gly

115 120 125

Phe Asp Asp Tyr Val Gly Pro Leu Asn Val Phe Ile Asn Arg Tyr Arg

130 135 140

Glu Phe Glu Thr Asp Arg Gly Cys Ser Leu Arg Gly Glu Ser Ser Phe

145 150 155 160

Lys Pro Val Tyr Gly Gly Ser Gly Met Gly Phe His Gly Pro Pro Pro

165 170 175

Pro Gly Ser Tyr Gly Tyr Gly Met Leu Asp Gln Ser Met Val Met Gly

180 185 190

Gly Gly Arg Tyr Tyr His Asn Gly Ser Gly Gln Asp Gly Ser Val Ser

195 200 205

Gly Gly Gly Gly Ser Ser Ser Ser Met Asn Gly Met Pro Val Tyr Asp

210 215 220

Gln Tyr Gly Gln Tyr Lys

225 230

<210> 152

<211> 252

<212> Белок

<213> Ricinus communis

<400> 152

Met Glu Arg Gly Gly Arg Val His Arg Tyr Arg Arg His Ala Lys Gln

1 5 10 15

Pro Thr Pro Thr Thr Ser Ala Thr Ala Ser Thr Ser Pro Gly Met Ser

20 25 30

Ser Val Gln Thr Thr Ile Cys Ser Asn Ile Asn Leu Pro Ser Thr Leu

35 40 45

Ser Leu Ser Asn Ser Thr Ala Ala Pro Gln Ala Pro Gln Gln Gln Gln

50 55 60

Leu Gln Pro Ser Gln Cys Leu Val Arg Glu Gln Asp Gln Tyr Met Pro

65 70 75 80

Ile Ala Asn Val Ile Arg Ile Met Arg Arg Ile Leu Pro Pro His Ala

85 90 95

Lys Ile Ser Asp Asp Ala Lys Glu Thr Ile Gln Glu Cys Val Ser Glu

100 105 110

Tyr Ile Ser Phe Ile Thr Gly Glu Ala Asn Asp Arg Cys Gln Arg Glu

115 120 125

Gln Arg Lys Thr Ile Thr Ala Glu Asp Val Leu Trp Ala Met Gly Lys

130 135 140

Leu Gly Phe Asp Asp Tyr Val Glu Pro Leu Thr Leu Phe Leu Asn Arg

145 150 155 160

Tyr Arg Glu Met Glu Asn Glu Arg Ser Thr Ile Arg Asp Pro Ile Leu

165 170 175

Lys Arg Ser Ser Val Gly Val Val Asp Tyr Gly Asn Leu Gly Met Asn

180 185 190

Pro Phe Met Pro Thr Phe Pro Met Ile Pro Pro Pro Gln Gly Tyr Phe

195 200 205

Asp Ser Asn Met Leu Gly Gly Tyr Tyr Arg Asp Ala Pro Asp Gly Ala

210 215 220

Ser Gly Ala Ala Ser Gly Ser Asn Leu Ala Ala Ser Ser Ala Pro Asn

225 230 235 240

Ser Leu Leu His Phe Asp Pro Phe Ala Gln Phe Lys

245 250

<210> 153

<211> 198

<212> Белок

<213> Glycine max

<400> 153

Met Asn Met Asn Met Arg Gln Gln Gln Val Ala Ser Ser Asp Gln Asn

1 5 10 15

Cys Ser Asn His Ser Ala Ala Gly Glu Glu Asn Glu Cys Thr Val Arg

20 25 30

Glu Gln Asp Arg Phe Met Pro Ile Ala Asn Val Ile Arg Ile Met Arg

35 40 45

Lys Ile Leu Pro Pro His Ala Lys Ile Ser Asp Asp Ala Lys Glu Thr

50 55 60

Ile Gln Glu Cys Val Ser Glu Tyr Ile Ser Phe Ile Thr Gly Glu Ala

65 70 75 80

Asn Glu Arg Cys Gln Arg Glu Gln Arg Lys Thr Ile Thr Ala Glu Asp

85 90 95

Val Leu Trp Ala Met Ser Lys Leu Gly Phe Asp Asp Tyr Ile Glu Pro

100 105 110

Leu Thr Met Tyr Leu His Arg Tyr Arg Glu Leu Glu Gly Asp Arg Thr

115 120 125

Ser Met Arg Gly Glu Pro Leu Gly Lys Arg Thr Val Glu Tyr Ala Thr

130 135 140

Leu Ala Thr Ala Phe Val Pro Pro Pro Phe His His His Asn Gly Tyr

145 150 155 160

Phe Gly Ala Ala Met Pro Met Gly Thr Tyr Val Arg Glu Thr Pro Pro

165 170 175

Asn Ala Ala Ser Ser His His His His Gly Ile Ser Asn Ala His Glu

180 185 190

Pro Asn Ala Arg Ser Ile

195

<210> 154

<211> 240

<212> Белок

<213> Medicago truncatula

<400> 154

Met Glu Thr Gly Gly Gly Phe His Gly Tyr Arg Lys Leu Pro Thr Asn

1 5 10 15

Thr Asn Ser Ser Ala Val Ala Gly Thr Leu Lys Leu Ser Ser Val Ser

20 25 30

Glu Met Asn Thr Arg Gln Gln Val Gly Glu Gln Asn Asn Asn Gly Thr

35 40 45

Glu Gln Asp Asn Glu Cys Ile Val Arg Glu Gln Asp Arg Phe Met Pro

50 55 60

Ile Ala Asn Val Ile Arg Ile Met Arg Lys Ile Leu Pro Pro His Ala

65 70 75 80

Lys Ile Ser Asp Asp Ala Lys Glu Thr Ile Gln Glu Cys Val Ser Glu

85 90 95

Tyr Ile Ser Phe Ile Thr Gly Glu Ala Asn Glu Arg Cys Gln Arg Glu

100 105 110

Gln Arg Lys Thr Ile Thr Ala Glu Asp Val Leu Trp Ala Met Ser Lys

115 120 125

Leu Gly Phe Asp Asp Tyr Ile Glu Pro Leu Thr Met Tyr Leu His Arg

130 135 140

Tyr Arg Glu Leu Glu Gly Asp Arg Thr Ser Met Arg Val Glu Pro Leu

145 150 155 160

Gly Lys Arg Gly Met Glu Tyr Gly Asn Leu Gly Gly Phe Val Pro Gln

165 170 175

Phe His Ile Gly His Pro Asn Gly Gly Tyr Tyr Gly Asn Ala Ala Pro

180 185 190

Thr Tyr Met Met Arg Asp Gly Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn

195 200 205

Ala Pro Asn Ala Ala Asn Ala Ala Gly Gly Ser Ser His Ser Gln Ala

210 215 220

Leu Ala Asn Ala Glu Ala Asn Gly His His His His His Gln Tyr Lys

225 230 235 240

<210> 155

<211> 278

<212> Белок

<213> Zea mays

<400> 155

Met Asp Ser Ser Ser Phe Leu Pro Ala Ala Gly Ala Glu Asn Gly Ser

1 5 10 15

Ala Ala Gly Gly Ala Asn Asn Gly Gly Ala Ala Gln Gln His Ala Ala

20 25 30

Pro Ala Ile Arg Glu Gln Asp Arg Leu Met Pro Ile Ala Asn Val Ile

35 40 45

Arg Ile Met Arg Arg Val Leu Pro Ala His Ala Lys Ile Ser Asp Asp

50 55 60

Ala Lys Glu Thr Ile Gln Glu Cys Val Ser Glu Tyr Ile Ser Phe Ile

65 70 75 80

Thr Gly Glu Ala Asn Glu Arg Cys Gln Arg Glu Gln Arg Lys Thr Ile

85 90 95

Thr Ala Glu Asp Val Leu Trp Ala Met Ser Arg Leu Gly Phe Asp Asp

100 105 110

Tyr Val Glu Pro Leu Gly Ala Tyr Leu His Arg Tyr Arg Glu Phe Glu

115 120 125

Gly Asp Ala Arg Gly Val Gly Leu Val Pro Gly Ala Ala Pro Ser Arg

130 135 140

Gly Gly Asp His His Pro His Ser Met Ser Pro Ala Ala Met Leu Lys

145 150 155 160

Ser Arg Gly Pro Val Ser Gly Ala Ala Met Leu Pro His His His His

165 170 175

His His Asp Met Gln Met His Ala Ala Met Tyr Gly Gly Thr Ala Val

180 185 190

Pro Pro Pro Ala Gly Pro Pro His His Gly Gly Phe Leu Met Pro His

195 200 205

Pro Gln Gly Ser Ser His Tyr Leu Pro Tyr Ala Tyr Glu Pro Thr Tyr

210 215 220

Gly Gly Glu His Ala Met Ala Ala Tyr Tyr Gly Gly Ala Ala Tyr Ala

225 230 235 240

Pro Gly Asn Gly Gly Ser Gly Asp Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly

245 250 255

Gly Ser Ala Ser His Thr Pro Gln Gly Ser Gly Gly Leu Glu His Pro

260 265 270

His Pro Phe Ala Tyr Lys

275

<210> 156

<211> 225

<212> Белок

<213> Arachis hypogaea

<400> 156

Met Glu Thr Gly Gly Gly Phe His Gly Tyr Arg Asn Leu Pro Thr Thr

1 5 10 15

Thr Ser Gly Leu Lys Leu Ser Val Ser Glu Met Asn Met Arg Ala Val

20 25 30

Glu Asn Asn Thr Gly Ser Ser Asn Asn Asn His Thr Asp Asp Asn Glu

35 40 45

Cys Thr Val Arg Glu Gln Asp Arg Phe Met Pro Ile Ala Asn Val Ile

50 55 60

Arg Ile Met Arg Lys Ile Leu Pro Pro His Ala Lys Ile Ser Asp Asp

65 70 75 80

Ala Lys Glu Thr Ile Gln Glu Cys Val Ser Glu Tyr Ile Ser Phe Ile

85 90 95

Thr Gly Glu Ala Asn Glu Arg Cys Gln Arg Glu Gln Arg Lys Thr Ile

100 105 110

Thr Ala Glu Asp Val Leu Trp Ala Met Ser Lys Leu Gly Phe Asp Asp

115 120 125

Tyr Ile Glu Pro Leu Thr Met Tyr Leu His Arg Tyr Arg Glu Leu Glu

130 135 140

Gly Asp Arg Thr Ser Met Arg Gly Glu Pro Leu Gly Lys Arg Thr Val

145 150 155 160

Asp Tyr Gly Thr Leu Gly Val Ala Ala Ala Ser Thr Phe Val Pro Pro

165 170 175

Phe His Ile Gly His His His His His Pro His Pro Ser Ser Tyr Tyr

180 185 190

Gly Thr Pro Met Gly Asn Tyr Ile Arg Asp Ala Pro Asn Ala Gly Ser

195 200 205

Ser Leu Gln Pro Pro Ser Leu Ala His Ala Glu Pro Asn Thr Gln Tyr

210 215 220

Lys

225

<210> 157

<211> 234

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 157

Met Glu Arg Gly Gly Phe His Gly Tyr Arg Lys Leu Ser Val Asn Asn

1 5 10 15

Thr Thr Pro Ser Pro Pro Gly Leu Ala Ala Asn Phe Leu Met Ala Glu

20 25 30

Gly Ser Met Arg Pro Pro Glu Phe Asn Gln Pro Asn Lys Thr Ser Asn

35 40 45

Gly Gly Glu Glu Glu Cys Thr Val Arg Glu Gln Asp Arg Phe Met Pro

50 55 60

Ile Ala Asn Val Ile Arg Ile Met Arg Arg Ile Leu Pro Ala His Ala

65 70 75 80

Lys Ile Ser Asp Asp Ser Lys Glu Thr Ile Gln Glu Cys Val Ser Glu

85 90 95

Tyr Ile Ser Phe Ile Thr Gly Glu Ala Asn Glu Arg Cys Gln Arg Glu

100 105 110

Gln Arg Lys Thr Ile Thr Ala Glu Asp Val Leu Trp Ala Met Ser Lys

115 120 125

Leu Gly Phe Asp Asp Tyr Ile Glu Pro Leu Thr Leu Tyr Leu His Arg

130 135 140

Tyr Arg Glu Leu Glu Gly Glu Arg Gly Val Ser Cys Ser Ala Gly Ser

145 150 155 160

Val Ser Met Thr Asn Gly Leu Val Val Lys Arg Pro Asn Gly Thr Met

165 170 175

Thr Glu Tyr Gly Ala Tyr Gly Pro Val Pro Gly Ile His Met Ala Gln

180 185 190

Tyr His Tyr Arg His Gln Asn Gly Phe Val Phe Ser Gly Asn Glu Pro

195 200 205

Asn Ser Lys Met Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Ser Gly Ala Arg Val

210 215 220

Glu Val Phe Pro Thr Gln Gln His Lys Tyr

225 230

<210> 158

<211> 231

<212> Белок

<213> Brassica napus

<400> 158

Met Glu Arg Gly Gly Phe His Gly Tyr Arg Lys Phe Ser Leu Asn Thr

1 5 10 15

Thr Asn Pro Ser Glu Pro Ala Arg Phe Leu Met Ala Glu Gly Ser Met

20 25 30

Gln Leu Ala Glu Pro Asn Gln Thr Asn Lys Thr Ala Asn Gly Gly Glu

35 40 45

Glu Glu Cys Val Val Arg Glu Gln Asp Arg Phe Met Pro Ile Ala Asn

50 55 60

Val Ile Arg Ile Met Arg Arg Ile Leu Pro Ala His Ala Lys Ile Ser

65 70 75 80

Asp Asp Ser Lys Glu Thr Ile Gln Glu Cys Val Ser Glu Tyr Ile Ser

85 90 95

Phe Ile Thr Gly Glu Ala Asn Glu Arg Cys Gln Arg Glu Gln Arg Lys

100 105 110

Thr Ile Thr Ala Glu Asp Val Leu Trp Ala Met Ser Lys Leu Gly Phe

115 120 125

Asp Asp Tyr Ile Glu Pro Leu Thr Leu Tyr Leu His Arg Tyr Arg Glu

130 135 140

Leu Glu Gly Asp Arg Gly Val Gly Tyr Asn Ala Gly Ser Val Gly Met

145 150 155 160

Thr Ser Gly Met Val Val Lys Arg Pro Asn Gly Thr Met Gly Glu Tyr

165 170 175

Gly Ala Tyr Gly Val Val Pro Gly Met His Met Ala Pro Tyr His Tyr

180 185 190

Arg His Gln Asn Gly Tyr Ala Tyr Ser Gly Asn Glu Pro Asp Ser Lys

195 200 205

Met Gly Gly Pro Ser Ser Ala Ala Asn Gly Ser Arg Val Glu Leu Phe

210 215 220

Pro Thr Gln Gln His Lys Tyr

225 230

<210> 159

<211> 216

<212> Белок

<213> Phaseolus coccineus

<400> 159

Met Glu Ser Gly Gly Phe His Gly Tyr Arg Lys Leu Pro Asn Thr Thr

1 5 10 15

Ser Pro Gly Leu Lys Leu Ser Val Ser Asp Met Asn Asn Val Asn Thr

20 25 30

Ser Arg Gln Val Ala Gly Asp Asn Asn His Thr Ala Asp Glu Ser Asn

35 40 45

Glu Cys Thr Val Arg Glu Gln Asp Arg Phe Met Pro Ile Ala Asn Val

50 55 60

Ile Arg Ile Met Arg Lys Ile Leu Pro Pro His Ala Lys Ile Ser Gly

65 70 75 80

Asp Ala Lys Glu Thr Ile Gln Glu Cys Val Ser Glu Tyr Ile Ser Phe

85 90 95

Ile Thr Gly Glu Ala Asn Glu Arg Cys Gln Arg Glu Gln Arg Lys Thr

100 105 110

Ile Thr Ala Glu Asp Val Leu Trp Ala Met Ser Lys Leu Gly Phe Asp

115 120 125

Asp Tyr Met Glu Pro Leu Thr Met Tyr Leu His Arg Tyr Arg Glu Leu

130 135 140

Glu Gly Asp Arg Thr Ser Met Arg Gly Glu Ser Leu Gly Lys Arg Thr

145 150 155 160

Ile Glu Tyr Ala Pro Met Gly Val Gly Val Ala Thr Ala Phe Val Pro

165 170 175

Pro Gln Phe His Pro Asn Gly Tyr Tyr Gly Pro Ala Met Gly Ala Tyr

180 185 190

Val Ala Pro Pro Asn Ala Ala Ser Ser His His His Gly Met Pro Asn

195 200 205

Thr Glu Pro Asn Ala Arg Ser Met

210 215

<210> 160

<211> 312

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 160

Met Val Asp Glu Asn Val Glu Thr Lys Ala Ser Thr Leu Val Ala Ser

1 5 10 15

Val Asp His Gly Phe Gly Ser Gly Ser Gly His Asp His His Gly Leu

20 25 30

Ser Ala Ser Val Pro Leu Leu Gly Val Asn Trp Lys Lys Arg Arg Met

35 40 45

Pro Arg Gln Arg Arg Ser Ser Ser Ser Phe Asn Leu Leu Ser Phe Pro

50 55 60

Pro Pro Met Pro Pro Ile Ser His Val Pro Thr Pro Leu Pro Ala Arg

65 70 75 80

Lys Ile Asp Pro Arg Lys Leu Arg Phe Leu Phe Gln Lys Glu Leu Lys

85 90 95

Asn Ser Asp Val Ser Ser Leu Arg Arg Met Ile Leu Pro Lys Lys Ala

100 105 110

Ala Glu Ala His Leu Pro Ala Leu Glu Cys Lys Glu Gly Ile Pro Ile

115 120 125

Arg Met Glu Asp Leu Asp Gly Phe His Val Trp Thr Phe Lys Tyr Arg

130 135 140

Tyr Trp Pro Asn Asn Asn Ser Arg Met Tyr Val Leu Glu Asn Thr Gly

145 150 155 160

Asp Phe Val Asn Ala His Gly Leu Gln Leu Gly Asp Phe Ile Met Val

165 170 175

Tyr Gln Asp Leu Tyr Ser Asn Asn Tyr Val Ile Gln Ala Arg Lys Ala

180 185 190

Ser Glu Glu Glu Glu Val Asp Val Ile Asn Leu Glu Glu Asp Asp Val

195 200 205

Tyr Thr Asn Leu Thr Arg Ile Glu Asn Thr Val Val Asn Asp Leu Leu

210 215 220

Leu Gln Asp Phe Asn His His Asn Asn Asn Asn Asn Asn Asn Ser Asn

225 230 235 240

Ser Asn Ser Asn Lys Cys Ser Tyr Tyr Tyr Pro Val Ile Asp Asp Val

245 250 255

Thr Thr Asn Thr Glu Ser Phe Val Tyr Asp Thr Thr Ala Leu Thr Ser

260 265 270

Asn Asp Thr Pro Leu Asp Phe Leu Gly Gly His Thr Thr Thr Thr Asn

275 280 285

Asn Tyr Tyr Ser Lys Phe Gly Thr Phe Asp Gly Leu Gly Ser Val Glu

290 295 300

Asn Ile Ser Leu Asp Asp Phe Tyr

305 310

<210> 161

<211> 321

<212> Белок

<213> Brassica napus

<400> 161

Met Met Ala Asp Glu Asn Val Glu Thr Lys Ala Ser Thr Leu Ile Ala

1 5 10 15

Ser Val Gly His Gln Gly His Gly Phe Gly Ser Gly Ser Gly Gly His

20 25 30

His Gly Leu Ser Ala Ser Val Pro Leu Leu Gly Val Asn Ser Lys Lys

35 40 45

Arg Arg Met Pro Arg Gln Arg Arg Ser Ser Ser Ser Phe Asn Leu Leu

50 55 60

Ser Leu Pro Pro Pro Met Pro Leu Ser Pro His Val Pro Thr Pro Leu

65 70 75 80

Ser Ala Arg Lys Ile Asp Pro Arg Lys Leu Arg Phe Leu Phe Gln Lys

85 90 95

Glu Leu Lys Asn Ser Asp Val Ser Ser Leu Arg Arg Met Ile Leu Pro

100 105 110

Lys Lys Ala Ala Glu Ala His Leu Pro Ala Leu Glu Cys Lys Glu Gly

115 120 125

Ile Pro Ile Arg Met Glu Asp Leu Asp Gly Leu His Val Trp Thr Phe

130 135 140

Lys Tyr Arg Tyr Trp Pro Asn Asn Asn Ser Arg Met Tyr Val Leu Glu

145 150 155 160

Asn Thr Gly Asp Phe Val Asn Ala His Gly Leu Gln Leu Gly Asp Phe

165 170 175

Ile Met Val Tyr Leu Asp Leu Asp Ser Asn Asn Tyr Val Ile Gln Ala

180 185 190

Arg Lys Ala Ser Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Asp Val Thr Ile Ile

195 200 205

Glu Glu Asp Asp Val Tyr Thr Asn Leu Thr Lys Ile Glu Asn Thr Val

210 215 220

Val Asn Asp Leu Leu Ile Gln Asp Phe Asn His His Asn Asp Asn Ser

225 230 235 240

Ser Asn Asn Asn Ser Asn Asn Asn Ile Asn Asn Asn Lys Cys Ser Tyr

245 250 255

Tyr Tyr Pro Val Ile Asp Asp Ile Thr Thr Asn Thr Ala Ser Phe Val

260 265 270

Tyr Asp Thr Thr Thr Leu Thr Ser Asn Asp Ser Pro Leu Asp Phe Leu

275 280 285

Gly Gly His Thr Thr Thr Thr Thr Asn Thr Tyr Tyr Ser Lys Phe Gly

290 295 300

Ser Phe Glu Gly Leu Gly Ser Val Glu Asn Ile Ser Leu Asp Asp Phe

305 310 315 320

Tyr

<210> 162

<211> 314

<212> Белок

<213> Medicago truncatula

<400> 162

Met Met Met Asp Glu Gly Glu Gly Lys Lys Lys Val Val Val Gln Lys

1 5 10 15

Thr Glu Ala Cys Gly Phe Met Ala Gly Val Glu Asp Glu Leu Gly Phe

20 25 30

Val Asn Val Lys Gly Asp Asn Asn Asn Gly Ser Gly Gln Arg Ile His

35 40 45

His Asp His Gly Phe Val Ala Ala Ala Phe Gly Thr Val His Arg Lys

50 55 60

Lys Arg Met Ala Arg Gln Arg Arg Ser Ser Ser Ser Thr Ile Thr Ile

65 70 75 80

His Leu Lys Asn Leu Pro Ser Ser Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr

85 90 95

Thr Ser His Val Pro Ile Ser Pro Ile Pro Pro Leu Phe His Ser Leu

100 105 110

Pro Pro Ala Arg Glu Ile Asp His Arg Arg Leu Arg Phe Leu Phe Gln

115 120 125

Lys Glu Leu Lys Asn Ser Asp Val Ser Ser Leu Arg Arg Met Val Leu

130 135 140

Pro Lys Lys Ala Ala Glu Ala Phe Leu Pro Val Leu Glu Ser Lys Glu

145 150 155 160

Gly Ile Leu Leu Ser Met Asp Asp Leu Asp Gly Leu His Val Trp Ser

165 170 175

Phe Lys Tyr Arg Phe Trp Pro Asn Asn Asn Ser Arg Met Tyr Val Leu

180 185 190

Glu Asn Thr Gly Asp Phe Val Ser Thr His Gly Leu Arg Phe Gly Asp

195 200 205

Ser Ile Met Val Tyr Gln Asp Asn Gln Asn His Asn Tyr Val Ile Gln

210 215 220

Ala Lys Lys Ala Cys Asp Gln Asp Glu Tyr Met Glu Glu Ala Asn Asp

225 230 235 240

Thr Ile Asn His Ile Phe Val Asp Asp Tyr Glu Val Asn Lys Ser Cys

245 250 255

Phe Asp Val Ala Tyr Pro Ala Met Asn Asp Thr Ser Met Ser Phe Ile

260 265 270

Tyr Asp Thr Thr Ile Ser Asn Asp Ser Pro Leu Asp Phe Leu Gly Gly

275 280 285

Ser Met Thr Asn Tyr Ser Arg Ile Gly Ser Val Glu Thr Phe Gly Ser

290 295 300

Val Glu Asn Leu Ser Leu Asp Asp Phe Tyr

305 310

<210> 163

<211> 3275

<212> ДНК

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 163

ggttggctat atggtccaaa ttttgatttg caatatgaga ttgcacagag agaacaatct 60

ttcattatga ttaattattg tacaagtaac aaacaccaat ctccgatata ctttggctct 120

ttagcacatt gttatgctag aagttagcgg aaatctatat gttgttaaac gcagcgttta 180

aattgaacag tgtaatttac cttgaaattt taagactaca tgctgtttag aatttcagat 240

gaaaacatct tgatgtttta gaaatccacg tgggaatagc gtaaaatctt atccaacgaa 300

cttattttgg ttttgttgta tttgtgcaag tcgtcacgct aatcgaaaaa agaaaagaaa 360

aaaagaagcc gtcatgatcg gccatttctc ggccgagtct gagtctgact ctgcgtccgt 420

gtcaccatta tcagatcgag cctgtcttat ctcgttgcga ttccctatgc aaaaatcttc 480

ttcttttttt tattccccca tttatctctg atctcttctc tcttctcaag taaacctctc 540

tgcttcacgt ctcttctttt cttgtcgatt ttccccagat aatcagttga aaacacaccc 600

aaattcatct tcgaatcaat aatggatata agtaatgagg ctagtgtcga tcccttttcg 660

attggaccat catctatcat gggtcgaacc attgctttca gagtcttgtt ctgtagatca 720

atgtcacagc ttaggcgtga tctctttcgg ttcttgttgc attggtttct tagatttaag 780

ctgaccgttt caccgtttgt gtcgtggttt catcctcgga accctcaagg gattttagcg 840

gtggttacaa tcattgcctt tgtgttgaaa cgatacacga atgtgaaaat aaaggcggaa 900

atggcttacc ggaggaagtt ttggaggaat atgatgcgga cggctttgac ttatgaggaa 960

tgggctcatg ctgctaagat gttagagaag gaaacaccaa agatgaatga atctgatctt 1020

tatgatgaag agttggttaa gaacaagctt caggagcttc gtcatcgtcg ccaagaaggc 1080

tcacttagag acattatgtt ttgtatgaga gctgatttgg tgaggaatct cggtaatatg 1140

tgtaattcgg agcttcataa aggtagactt caggttccta gacatatcaa agagtacatt 1200

gatgaggtgt ctactcagtt gagaatggtt tgtaactctg attcagagga gctttcttta 1260

gaagagaagc tttcttttat gcatgaaaca cggcatgcct ttggtagaac ggctttgctt 1320

ttgagtggtg gggcttctct tggtgcgttt catgttggtg tggttaggac tttggttgag 1380

cataagcttt tacctcgaat aattgctggt tctagtgttg gatccatcat ttgtgctgtt 1440

gtggcctcaa ggtcttggcc agaactacag agtttctttg agaattcttt gcattcttta 1500

cagttctttg atcagctcgg aggcgtgttc tcaatagtga aacgggtaat gacacaaggg 1560

gctctacacg atatcagaca gttgcaatgt atgcttagaa acctcacaag caatctcaca 1620

ttccaagaag cttatgacat gacaggaagg attctcggga tcaccgtttg ctccccaaga 1680

aagcatgaac ctcctcggtg tcttaactat ttgacttcgc ctcatgtggt tatatggagc 1740

gcagtgactg cttcttgtgc ttttcctggt ctctttgaag ctcaagagct aatggctaaa 1800

gatcgaagtg gagagatcgt accgtatcat ccacctttca atttggatcc agaagtaggc 1860

actaaatcat catctggacg ccggtggaga gatggtagtt tggaggttga tttaccaatg 1920

atgcagctta aagaactgtt caatgtcaat cattttattg tgagccaagc caatcctcac 1980

attgctccat tactgcgtct aaaggattta gttcgagctt atggtggtag attcgcagct 2040

aagctcgcgc atctagtgga gatggaggtc aaacatagat gcaaccaggt attagagctc 2100

ggttttcctc tcggtggact cgcaaagctt tttgctcagg agtgggaagg tgatgttaca 2160

gttgtaatgc ctgctactct tgctcagtac tcgaagatta tacaaaatcc gactcatgtc 2220

gagcttcaga aagcggctaa ccaaggaaga agatgcactt gggagaagct ctcagccata 2280

aaatcaaact gcgggatcga gcttgcgctt gatgattctg tagctattct taaccatatg 2340

cggaggctca agaaaagtgc ggagagagcc gccactgcca cgtcttcgtc tcatcacgga 2400

ttggcttcaa ccaccagatt caatgcttca agaagaatcc catcttggaa cgtccttgcc 2460

agagagaact caacaggctc actggatgat ctagtcactg acaataacct ccacgcttct 2520

tcgggcagga atttaagcga cagtgaaaca gagagcgtgg agttgagttc ttggacaaga 2580

actggtggac ctttaatgag aacagcttct gctaataagt tcattgattt tgttcagagt 2640

cttgatatcg acattgcatt ggtcagagga tttagtagca gtcccaattc tccagcagtt 2700

cctcctggtg gctcgtttac tccaagcccg agatccatag cggctcattc ggatatcgaa 2760

tcaaacagca atagcaacaa tcttggaaca agcacttcaa gcataacagt tactgaaggt 2820

gatcttctac agcctgagag aacgagtaac ggatttgtgt taaacgtcgt taaaagagag 2880

aacttgggaa tgccatcgat tgggaaccaa aatacagagt taccagagag tgtacagctc 2940

gatataccgg agaaggagat ggattgtagc tctgtatcag aacacgaaga agatgataac 3000

gacaatgaag aagaacataa cggctcgagt ctggttactg tttcttcaga agattccggt 3060

ttacaagaac cggtgtctgg tagtgttata gatgcttaga gtgtgattga ttcaagtgag 3120

tatagattct taattaaatt tgcagagttt ccaaagggtt tagtgcacca cttgtgtatg 3180

tttgtattgc ttattgtttg aaattcattt gtgaaatcga aatatatctg taaattcaga 3240

aaatattctc tcatccatta caaaatattt gagtc 3275

<210> 164

<211> 2795

<212> ДНК

<213> Brassica napus

<400> 164

tcccacgctc aggttctaat tgcaaaaaag gatcatactt tccttattaa aatcaatttc 60

ctgtgcttga tttctatctt aggaagctcg tagtagtttc tctgatagtg aatttgatga 120

aacaaagaaa aaaatgctga cttggtctca gattctaatt aaacacacac acacacataa 180

cctccaatgg atataagcaa cgaggccaat gtcgatccct tctcaatcgg accaacctcc 240

atcctcggcc gaaccatcgc cttcagagtc ctcttctgca aatcaatgct ccagctccgc 300

cgcgacctct tccgcttcct cctccactgg ttcctcacac tcaagctcgc cgtctccccc 360

tttgtctcct ggttccaccc ccggaacccc caggggatcc tcgccgtcgt cacgatcatc 420

gccttcgtcc tgaaacgcta caccaacgtg aaggccaagg ccgagatggc ctaccgtaga 480

aagttctgga ggaacatgat gcgcgcggcg ttgacttacg aggaatgggc tcacgccgct 540

aagatgttgg ataaagagac tccgaagatg aacgagtccg atctttacga tgaagagttg 600

gttaagaaca agctaatgga gcttcgtcat cgacgtcatg agggctctct tagagacatt 660

attttctgta tgagagctga tcttgtgaga aatctcggta atatgtgtaa ccctgagctt 720

cacaagggaa ggcttcacgt gccgagactc atcaaagagt atatcgatga ggtctctaca 780

cagcttagga tggtttgcga catggacact gaagagcttt ctctggagga gaaactttct 840

tttatgcatg agaccagaca cgcgtatgga agaacagctc tacttctcag tggaggagct 900

tctcttgggg ctttccatct tggtgtggtc aagacgcttg tggaacataa gctattgcca 960

agaattatag ctggttcaag cgtggggtct gtaatgtgtg cggttgtggg gacaaggtca 1020

tggcccgagt tgcagagctt ctttgaaggg tcctggcatg ctctgcagtt ctttgatcag 1080

atgggaggaa ttttcactac tgtgaagcgg gttatgactc aaggcgcagt ccatgagatc 1140

cggcatctgc aatggaagtt gaggaatctc accaacaatc tcacagtccg gaatttccgg 1200

gtcgacgact tcgaggatac tcgggataac ggtttgctca ccgacgaagc actagccgcc 1260

tcggtgctta actatctcac ttctcctcac gtggtgatat ggagcgcggt gactgcttct 1320

tgcgctttcc ctggtttgtt tgaagctcag gagctgatgg ctaaagatag gagtggggag 1380

atagtgccgt atcatccgcc ttttaatttg gaaccggagg aaggtgggga taagtcgtct 1440

acgaggaggt ggagagatgg gagtttggag gttgatttgc cgatgatgca gcttaaggag 1500

ctgtttaatg ttaatcattt tattgtgagc caggctaatc ctcacattgc tccgttgctg 1560

cgtttgaagg atatagttag agcttatgga ggtcgatttg cagcaaagct cgcgcaactc 1620

gcggagatgg aagtgaagca tagatgtaat caagtactag aactcgggct tcctctaaga 1680

gaagtagctt cactatttgc tcaagaatgg gaaggcgatg tcacaattgt catgccagct 1740

actttttctc agtacttgaa gatcatacaa gtcgacgatt tcgtcgagct tcaaaaagcc 1800

gctaaccaag gaaggagatg cacttgggag aagctatcag ccataaaagc aaactgtggg 1860

atcgagcttg cgcttgatga gtgtgtaact aatcttaacc atatgcgtag gctcaacaga 1920

agcgctgaga gagccgctgc tgctgctggc acgtcctcct cgtctcatca cggattagct 1980

tcaacgacaa gattcaatgc ttctagaaga atcccgtctt ggaacgtcat cgctagagag 2040

aactcaactg gctcactgga cgacctcgtc actgacagta acaataataa tctccacgcg 2100

gggaggaacc taagcgacag cgaaacggag agcgtggaga tgagttcttg gacgaggact 2160

ggtggaccgt tgatgagaac agcttctgct aataggttca ctgactttgt ccatggtctt 2220

gacgtggaca ttgcgttgac aagagggttt actagcagcc ctaactctcc agcggttcct 2280

ggcccggtta gtccgagttt tagtccaaga tcgagatcct tggcggctca atccgagagc 2340

gaatctgaca agagggaaag tagcaacagt tctagtatat cagctactga aggtgatctt 2400

ctgcagcctg agagaacgag taacggtttt gttttgaacg ttgttagaag agagaacttg 2460

gggatgcctg tggagaacca gagcggtgag ctgccggaga gtgtacagat agatatacct 2520

gagagggaga tggataatag ctctgtctca ggacatgaag atgataatga tgataatgat 2580

gatgaagaag aagaacataa gggctcggtt ccggttaaag attccggttt acaagattct 2640

tgtagtgtaa tagatgctta gactgatttg atccgagtga agagattctt gttcagcaaa 2700

gatcttggag tgttttagtg ctttgtaaat agtacaacta taggccgcaa gtaaggtgca 2760

tgttgtgtat gtttgcagtg attatgttga aaatt 2795

<210> 165

<211> 2670

<212> ДНК

<213> Brachypodium distachyon

<400> 165

atggaagaat ccggagaagc gagtattggg gccttcagga tcgggccgtc gacgcttctc 60

ggccgcggcg tcgcgcttcg cgtgctcctg ttcagctcgc tctggcgtct ccgggcgcgg 120

gcgcgcgccg ctgtgtcgcg cgtgcgcagg gccacgctgc caatggccgc gtcctggctt 180

cacctcagga acacccatgg cgtcctcctg attctcgtgc tcttcgggtt gctcctcagg 240

aagctctccg gtgcgcggtc gcggctggcg ctggcgcgcc ggcgtaggct gtgcaagagc 300

gcgatgcgct acgcggcgac gtatgagcag tgggtgcgtg ccgccaaggt gctcgacaga 360

atgtctgagc aggtgaacga gtctgatttt tacgacgagg agctgatcaa gagtaggctt 420

gaggagctcc ggaggcggag ggaggaaggg tcgctccggg atgtggtgtt ctgtatgcgc 480

ggcgatctcg tgaggaactt ggggaacatg tgtaatcctg agcttcataa gggcaggctc 540

gaggtgccca ggctgataaa agatttcatt gatgaggttt caactcagct gaaaatggtg 600

tgtgaatctg acaccgatgc gttatttttg gaagagaagc ttgcctttgt tcaggaaacc 660

aggcatgcct atgggaggac agcactactc ttaagtgggg gcgcttcact gggctctttc 720

catgtaggtg tagtgaaaac attagttgag cataagcttc tgcctcggat aatagcaggg 780

tctagcgttg gttccattat atgttcaatt gttgctactc gaacatggcc tgagattgag 840

agcttcttca tagactcatt acaaatctta cagttcttcg gtaggatagg tggaattttt 900

gctgtgacca aacgggttat gacttatggt gcacttcatg acattagcca gatgcaaagg 960

cttttgaggg atctcacaag taacttaaca tttcaagagg cttacgatat aactggccgt 1020

gttcttgggg tcactgtttg ctctcccaga aaaaacgagc cacctcgctg cctcaactac 1080

ctgacatcac cacatgttgt tatctggagt gctgtaactg cttcgtgtgc attccctggc 1140

ctctttgaag ctcaggaatt gatggcaaag gataggtttg gccacatagt tcccttccat 1200

gcgccctttt ccacagatcc agaacaaggt cctggagcat caaagcggcg atggagggac 1260

ggaagtttgg agatggattt accgatgatg caactaaagg agttattcaa tgtgaatcat 1320

ttcatcgtca gccaagctaa tcctcacatc tctccactcc tccgaatgaa ggagattgtc 1380

agatcctatg gaggtcgctt tgcgggaaag ctcgctcgtc ttgctgagat ggaggtgaag 1440

tatcgatgta accaagttct agaagttggc ctcccactgg gaggacttgc aaagttgttt 1500

gctcaggact gggagggtga tgtcactatg gttatgccag caacagtagc tcagtacttg 1560

aagattatac aagatccaac atatgcagaa ctccaaatgg ctgccaatca gggtcaaaga 1620

tgcacgtggg agaagctctc agcgatcaga gcaaactgtg caattgaact tgcattggat 1680

gaatccattg cggttctcaa ccacaaacga aggttaagaa gaagcacaag ggcagcagct 1740

tcttcccagg aatataccag caatgttcga ctcagaacac caaggagggt accctcatgg 1800

agctgcatca gtcgagagaa ttcgtcagga tctctctcag aagatcactt tgcggtcgct 1860

atttcatcca gtcaccaagg tactatacga gttgatggcg caccaaacat gcctcatcat 1920

gttcgtcaca gttcacacga tggaagtgag agcgaatcag aaaccattga cttaaattca 1980

tggaccagga gtggtgggcc tctaatgagg acttcatcag ctgatcagtt catcagtttt 2040

atccagaatc tcgagattga atctgagttc gatagggttc gtactacaga ggatgacaat 2100

acaggtattt tatcaggatc tacattttca aaagatccat acccaaacat tagttctaga 2160

gtcactacac cagatagatg cacagaagtt tctgaaacag agtcgtgcaa cgccggcaac 2220

acaagcatca ctgtttctga aggagatttg ctacaacctg agaggactac caccggaatt 2280

ctactcaatt ttgtcagaag agaagatctg cttggtcagc ataacagtga tgctgacatg 2340

accgaaagct ccttagccga agcatatgtg gacacatcac atttggaatc ttgtgatgcc 2400

atctcagcct ctgacagttc tgaaggtaac aaagacgcag ctgactcaga gaatctcttg 2460

gtttctcatg cagatttagt aacttcgcat caatcttcag ttgatgataa caaaggtggc 2520

tagattttga aagaattctt ttagtggctt gctaagtcga tgctgtacag gaaaaactgt 2580

agtgtctccg tttcgtgagc actactgctg gtagcatagt gaatattgta ctttgtacca 2640

gatactaaat aaatttgatt gcttgccatt 2670

<210> 166

<211> 3884

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Populus trichocarpa

<400> 166

gttttctttc ccttatccgc ctttgattgc aaaagtcaat gtcagagcca tcaccccctc 60

cttgctcaat ctttacgtaa ccgtatgtat atccttatct tcttctaaca tttcccaaga 120

ctccgatcct gtatttattg tattcacttc acccttcttc tctctttcct tcccgaacga 180

aaacaaagtc tcaatctttc attctctgtt tgtctaaagt ctgtacattc ttcactttct 240

cgagttgggt ttctttcttg aatttggttt cttgggtttg attttgtttt tcaagtggat 300

attgctattt attgggtggt gatattgaga cccttttgtt agttttgtat attggttttt 360

gaggtggatg tagttttttt aggggtttta gggtttggtt attgaaaact catatggcaa 420

ggttggcttc tggcaatctg gatttataag attctgtttt tcttgttgac acagtacagg 480

atcaaaaggg ttggattttt gttacttgtc aatatcttct tattttgtga tagctagtcc 540

ttttgcatta ggattgcata tctttattct atctacttca ttgtctctct atatattgcc 600

atcctatccg gggagagaca gattcaattg ttttattgtc cttctcattc tcattagaat 660

caaagtcttg acatacaatc ctttcacaat tgtgaaattt gattccttag tgaccatcta 720

ttgtagctgt ttcatatttg tttcgttcaa gctaattctg ttgttagatt tgagacaaaa 780

gaaggccccg cttccaatta cagaccactt tcttgttttg gttttagcta agatatggat 840

ataagcaatg aggccagtgt tgaccctttc aaaatcggac cttcatcgat cattggtagg 900

acaattgctt tcagagttct gttctgtaaa tcaatctcac atttgaggca aaaaatcttt 960

catgtgttgt tgaattacat ttatagagtt ggtgaatttg tggcgcctat gttatcatgg 1020

tttcatccaa ggaatccaca agggatattg gccatgatga cgataattgc atttttattg 1080

aaaagatatg cgaatgttaa attgagggcc gaaacagcgt ataggaggaa attttggagg 1140

aatacgatga gaactgcgtt gacatacgag gagtggtttc atgctgctaa aatgcttgat 1200

aaagagaccc caaagatgca tgaatgtgat ctctatgatg aagaactagt caggaacaag 1260

cttcaagagc tccaccaccg tcgccaagag ggatgtctta gagatataat cttttttatg 1320

agagccgatc ttgtaagaaa tctcggtaat atgtgtaacc ctgagcttca caagggtagg 1380

cttcaagtgc ccaagctcat aaaggaatat attgacgagg tctcaactca gttaagaatg 1440

gtttgtgact ccgattcaga ggagctttcg ttggaagaaa agcttgcttt catgcatgaa 1500

acgagacatg cttttgggag aacagctttg cttctgagtg gaggtgcttc acttggagcg 1560

tttcatgtgg gtgtggttaa aacactggtg gagcacaagc ttatgccccg aataattgct 1620

ggttctagtg tggggtcaat tatgtgttca gttgttgcca ccagatcgtg gccagagctg 1680

caaagttttt ttgaggattc ctggcactcg tttcagtttt ttgaccaatt gggtggaatt 1740

ttcacagttg tgaagagggt catgagacaa ggagctgttc atgaaatccg gcagttgcaa 1800

tggatgttaa ggcatcttac aagtaatctt acatttcaag aagcttatga catgactggt 1860

cgaattcttg ggatcacagt ttgctcacct aggaagcatg agccccctag atgccttaat 1920

taccttactt cccctcatgt tgttatatgg agtgcagtca ctgcttcttg tgcttttcct 1980

ggcctttttg aagcccagga actaatggca aaggacagaa gtggggaact tgtgccttat 2040

cacccaccct ttaatctgga tcctgaagaa ggatctgatg cacctatgcg taggtggagg 2100

gatggtagcc tggagattga tttaccaatg atacaattga aggaactatt caatgtcaat 2160

cattttattg taagtcaagc gaatcctcac attgctccat tgttgagact gaaggatata 2220

gtcagggcat atgggggtag ctttgctgcc aagcttgctc atctcgctga gatggaggta 2280

aaacatagat gcaatcaggt attggaactt ggttttccat taggtggact tgccaagctt 2340

tttgctcaag aatgggaagg tgatgttact gttgttatgc ctgccacact cgctcagtac 2400

tcaaaaatta ttcaaaaccc aaatcacttg gagcttcaaa aggcatcaaa ccaaggcaga 2460

aggtgcacat gggagaagct ttctgccata aaagctaatt gtggtattga gcttgctctt 2520

gatgagtgtg tttctgttct gaaccacatg cgtagactca aaaggagtgc tgagagagct 2580

gctgctgctt ctcatggcca agcaagctct gcgagcacat tgagatttag tgcttcaaaa 2640

agaattcctt cttggaattg catcgcaaga gaaaactcaa caggctcact tgaagaagac 2700

ttccttgctg atgttgcttc aacattccat caaggagttg gtgtggctgg aggaacttct 2760

actggtagga atttgagaac acaacgcaac ctacatcatg atggaagtga tagtgaatct 2820

gaaagtgtag atttgaattc ttggacaaga tctggcgggc ctttgatgag gactgcttct 2880

gcaaataagt tcattgactt tgtccaaagt ctggatgttg attctgagct aaggaaaggc 2940

ttcatggctc atcctaactc gcctggggct cagatgggag gcagggatcc atataatcag 3000

atctcaagag tgacaacccc agatagaaat tcagaaagtg agtttgatca gagagatttt 3060

agcaatagaa attctactgg tggttctagc attacagtca ccgaaggaga ttttttgcag 3120

cctgaaagaa tccataacgg gtttgtgctg aatattgtaa agaaagaaga tttggcacat 3180

cccaatagga tccatgattt ggagaattac aatagtgaag ttcctgaatg tgttcagctt 3240

gattgtcctg aaaaggacat ggatgctagc tcagaatcgg actatgctgc agaggaagac 3300

gactcccctg caacagattc cttgcataaa tcagcttcca ctcttgatca cacagatgat 3360

tctgtcgttc atgacattca ggagaagcat gtcgtggatg gttaactttg agtttcttct 3420

gcattactgt accaaaatat tgggtggagt tgattcccgg gttactgtca atcaaaggtt 3480

tccgactttc cgtcacaact ggagtatcat agacgagatt tagaatctgt ttatttttta 3540

ttttaaaaat atttttgaaa aaaattttga ttttattttg attttatttt tgttttaaat 3600

taatattttt ttggtgtttt tcatattatt ttgatatgtt gatattaaaa ataaattttt 3660

aatatcaatt attcaatcag atatattttt aagtaaaaca agacagtttg aaaagtaatc 3720

ggaactttta aaaggttgct cttagtagtg aattataaaa aacaattgaa agcaatctgg 3780

cagcgtcagg ctattgctgt tgtaaactaa ttttgtgcgc atactatgca acaattgtaa 3840

tccacatgct tagatttcag ccaacgagat ggaatttgac cctc 3884

<210> 167

<211> 2490

<212> ДНК

<213> Medicago truncatula

<400> 167

atggatcgta taagtaatga agccactgtt gatctttttc caatcggtcc ttcaggaatt 60

cttgcccgaa caattgcatt cagagtcctt ttctgcaaat ccatttcaca tttaaggtat 120

caattattct taactttatt cgattcgttt catagattta gaaaattctg gggacccatt 180

atatcatcct tgcatccaaa aaaccctcaa gggatattag ccatcatcac cattctcgct 240

ttcttgttaa aacgttacag taatgttaaa gtaagagctg aattagcata caggagaaaa 300

ttttggagaa atatgatgag atcagctttg acttatgagg agtgggctca tgcagctaag 360

atgcttgata aagagacgac attgaagacg atgaatgaat ccgattttta cgatgtagaa 420

ttggttagga ataaggttca agagttacga catcgtagac aagaggggtc tcttagagat 480

attatctttt gtatgagagc tgatcttgtt agaaatttag gtaatatgtg taaccctcag 540

cttcataaag gtaggcttca tgtgccgaga cagattaagg agtatattga tgaggtggcg 600

atgcagttga gaatggtttg tcattctgat tccgaggagc tttctttgga agaaaagctt 660

gctttcatgc atgaaactag acacgcgttt gggaggacgg ctttgttgtt gagtggtggt 720

gcttctcttg gagcttttca tgtcggtgta gttaaaacct tggtggaaca taaacttatg 780

ccgaggataa tttctggttc gagtgtagga tccattatgt gctctattgt tgctactagg 840

tcttggcctg agcttcaaag cttttttgaa gattcgttgc actcgttaca gttttttgat 900

caaatgggtg ggatttttac gattgtcaag agggttacaa catttggtgc agttcatgag 960

atcagacagt tgcagattat gttgaggcat ctaacgagca atcttacatt tcaagaagct 1020

tacgacatga caggtcgagt tcttgggatt acagtttgct ccccaaggaa gcatgaaccg 1080

cctagatgtc ttaactactt gacttcaccc catgttgtta tatggagtgc agtcacagct 1140

tcttgtgcct ttcctggtct ttttgaggct caggaattga tggcaaagga tagaagtgga 1200

gagattgttc cttaccatcc tccatttaat ttgggtcctg aagagggttc ctcacaagtg 1260

cggcgttgga gggatggtag cttggagatc gatctaccta tgatgcagtt gaaagaattg 1320

ttcaatgtca atcattttat tgttagtcag gccaatcctc atattgcgcc attattgaga 1380

ttaaaagaat ttgtacgagc ttatggaggt aattttgctg ccaagctggc tcatctggta 1440

gagatggagg ttaaacatcg atgtaatcaa atactggaac ttggttttcc attaggtgga 1500

cttgccaagc tgtttgctca ggactgggaa ggtgatgtga cagttgttat gcctgctact 1560

cttgctcagt actcaaaaat tatccagaac ccttcttatg tggagcttca gaaggcagct 1620

aaccaaggga gaagatgcac ttgggagaag ctttcagcca ttaaagcaaa ttgtggaatt 1680

gagcttgctc ttgatgagtg tgttgcaatt ctcaatcata tgagaagact caaaagaagt 1740

gccgagagag ctgcttctgc ttctcatggt ctttctagta ctgtcaaatt tagtgcttca 1800

aaaagaattc catcatggaa tgtcattgcg cgagagaatt ctacaggatc tcttgaagac 1860

tttcttgcag acactgctgc ttcatttcat cacggggtta gtagttccag tggagccacg 1920

ggtaaaaatt ccaagcacca ccgcagcatg catgatgtaa gtgacagtga atccgaaagt 1980

gctgaattga atacctggac cagatctggt ggtcctttga tgagaactgc ttcggcagat 2040

atgttcaccg actttgtcca aaacttagaa gttgatactg aactaaacag aggaatggga 2100

actaatttta gccctcgtga ttcccagtat cacagtccca gattaacaac accggataga 2160

tgctccgaga actcagaacc cgatcagaga gaaaatggca acaaggttgt catgaatgga 2220

tctagcataa tggtaactga aggtgatctt ttgcagcctg agagaatcca taatggaatt 2280

gtgtttaatg ttgtcaagaa agaagactta acaccttcaa gtaggagtca tgattatgat 2340

agtgaaattg ctgagtgtct ccaaattgaa tgtccaggga aggagatgga tgatgctgct 2400

agctcagctt cagaaaacgg agatgacgat tctgcaacag ctaggcccct aactgaaaca 2460

ccagactcta atcctacaga taattcctga 2490

<210> 168

<211> 2783

<212> ДНК

<213> Glycine max

<400> 168

atggatcata ttagtaatga ggccagtgtt gaccgttttc caattggtcc ttctggcatt 60

cttggtagga caattgcttt cagggttctt ttttgcaagt ctatctcaca ttttaggcac 120

cacatattta ttgtgttgtt agatctcttc tataggttta gggggggttt ggcatccttt 180

atatcatggt tgcatcccag gaaccctcaa gggatattgg caatgatgac aattgttgct 240

ttcttgttga aacgatacac aaatgtgaaa tcaagggctg aaatggcata taggaggaag 300

ttttggagaa acatgatgag aagtgctttg acctatgagg agtgggctca tgcagctaag 360

atgcttgata aagagacaac aaagatgaat gaatcagacc tttatgatgt ggaattggtg 420

aggaacaagc ttcaagagct ccgccaccgt cgacaagagg gatctctcgg agatataatg 480

ttttttatgc gtgccgatct tattagaaat ttaggtaata tgtgtaaccc tgaactacac 540

aagggtaggc ttcaggtgcc taaattaatc aaggagtaca ttgatgaagt aacgactcaa 600

ttgagaatgg tctgtgattc tgattcagag gagctatcat tggaagaaaa gcttgctttc 660

atgcatgaaa ctaggcatgc atttgggagg actgctttgc tgttaagtgg gggtgcctct 720

cttggagctt ctcatgtggg tgtagttaaa acactggtag aacataaact catgcctagg 780

ataattgctg gttcaagtgt gggatccatt atgtgtgctg ttgttgccac taggacttgg 840

cctgagctcc agagcttttt tgaggattca tggcactcat tgcaattttt tgatcaaatg 900

ggtgggattt ttgcagttgt taagagagtc acaacattgg gtgctgttca tgagatcaga 960

cagttgcaaa tgatgttgag gcatctaaca agcaacctta catttcaaga agcttatgac 1020

atgacaggca gaattcttgg gattactgtt tgttccccaa ggaagcatga accgcctaga 1080

tgtcttaact acttgacttc accccatgtg gttatatgga gtgcagtaac cgcttcttgt 1140

gcctttcctg gcctttttga ggctcaagaa ttgatggcaa aggatagaag tggagagatt 1200

gttccttacc accctccttt taacttaggc cctgaagagg gctccacacc agtgcgccgt 1260

tggagggatg gtagcttgga gattgattta cctatgatgc agttgaaaga actattcaat 1320

gtcaatcatt ttatagttag tcaggccaac cctcatattg caccactatt gagattgaaa 1380

gaatttgtgc ggacttatgg gggcaacttt gctgccaagc ttgctcatct tgtggagatg 1440

gaggtgaaac ataggtgtca tcaaatactg gaacttggtt ttccattagg tggacttgct 1500

aaattgtttg ctcaagactg ggaaggtgat gtgactgttg ttattcccgc aactcttgct 1560

cagtacacca aaattataca gaacccttct tatggagagc ttcaaaaggc agccaaccaa 1620

gggagaagat gtacctggga gaaactttca gccataaaag caaattgtgg cattgagctt 1680

gctcttgatg agtgtgttgt gattctcaat catatgagaa gactaaagag aattgctgag 1740

agagctgctt ctgcctctca tggtttgtcc agcactgtca ggttcagtgc ttcaaaaaga 1800

attccttcgt ggaattgcat tgcacgagag aattcgaccg gctcccttga ggaccttact 1860

gatgttgcct cctcattgca tcaaggcatc ggcagttcca gcagagccaa tggcaaaact 1920

tggaagaccc accgtggcat acatgatgga agtgacagtg actctgaaag tgttgatttg 1980

cattcttgga caagaactgg cgggcctttg atgagaacta cttcagcaaa tatgttcgtt 2040

gattttctcc aaaacttaga ggttgatacg gatcctaata aaggcttagt gagtcacact 2100

atccataatg attttcagta tcatagcccc aggctcacaa cactagatag gaactctgat 2160

agcacagaat ctgagccaag ggaaactggc aacagggttg tcaatgtgtc cagcatactt 2220

gtgaccgaag gtgatcttct gcagcctgaa aggatccata atgggattgt gtttaatgtt 2280

gtcaagaaag aagacttgtc acccttaagt agtagcagtc atggttttga aaattacaac 2340

attgaagttg ctgaatgtgt ccaagatgag tgtccaggga aggagataga tgctgctagc 2400

tctgcatctg aacacggaga tgatgaagaa tccatgccag ccaggtcctt aactgacatg 2460

ccagattaca attccattga tcatcattcg ggcacagatt cgggtatgga tcaaagcatt 2520

gttgacagtt agtgtcaagt atcagttctt ttccagtgac attttaatat tttgttccta 2580

ttgccctcca tattgtaaat agtactcatt ctagacttgg agaggtcttt attcatgatt 2640

ttgatgggaa tagcccacca atttggtttg ctcataaatg taacaaagat aaagagtttg 2700

tatacataaa ttccacgaca acattgatat ttcttggtta ccacttctca gatgaatgaa 2760

atggagacat ggttttcata att 2783

<210> 169

<211> 2724

<212> ДНК

<213> Sorghum bicolor

<400> 169

atggatgaca tcgccagcga ggcgccggtg ggggcgttcg ccatcggccc gtccacggcg 60

ctgggccgcg ccgtcgcgct ccgggtgctg ctctgcggct ccgcggcgcg cctgcggcac 120

cgcctggccg cggcgctccg cgccgcgctg cccgtcgcgg cggcgtggct gcacccgcgc 180

gacaacacgc gcgggatcct gctcgccgtc tgcgccgtcg cgctcctgct gcggggccga 240

cgcggcaggg ccgggctgcg ggcgagggtg cagtccgcct accgccgcaa gttctggcgg 300

aacatgatgc gcgccgcgct cacctacgag gagtgggcgc acgcggcgcg gatgctggag 360

cgcgaggccg ccccgcgccg cgccagcgac gccgacctct acgacgagga gctcgtccgc 420

aataagctcc gcgagctcag gcaccggcgc cacgagggat cgctcaggga catcgtcttc 480

tgcatgcgcg cggacctgct caggaacctc ggcaatatgt gcaaccccga actgcacaaa 540

gggaggctgc aggtgcctag actcataaag gaatacattg aggaagtatc tactcaactg 600

aaaatggtct gtgattctga ttcagatgag ttgcctcttg aagagaaact cgcatttatg 660

catgagacaa ggcatgcctt tggtagaaca gccttgctgc taagtggagg tgcttcattg 720

ggatcctttc atgtgggtgt tgttaaaacc ttggtagagc ataaactttt gccaaggata 780

atttcaggat caagtgttgg ctcgataatg tgttctatag tagcaacaag atcatggcct 840

gagctggaga gcttttttga agagtggcat tccctgaaat tttttgatca gatgggtgga 900

atctttcctg tggttaaaag aattttgacg caaggcgctg ttcatgatat aaggcacttg 960

caggtgcttt tgagaaacct taccagcaat ttgacatttc aagaagctta tgacatgact 1020

ggtcggattc ttgttgtcac cgtgtgttct ccaaggaagc atgagccgcc tcgatgccta 1080

aactatttaa catcacctca tgttcttatc tggagtgcag taacagcttc ctgtgctttt 1140

cctggacttt ttgaggccca agaattgatg gcaaaagata gatttggtca aaccattcct 1200

ttccatgctc cattcttatt aggcatagaa gaacgaactg ttgctccaac ccgccgctgg 1260

agagatggga gcttagaaag cgatttaccc atgaagcaat tgaaggaact attcaatgtg 1320

aatcatttca tagtaagcca agccaatcct cacatagctc cgctgttgag actaaaggaa 1380

atcgtcaggg cttatggagg cagcttcgct gccaagcttg ctgaacttgc tgagatggaa 1440

gtcaaacata ggtgtaatca agttttggaa cttggatttc ctctaggagg attagctaaa 1500

ttatttgctc aagattggga aggcgatgtt acagttgtta tgccagccac tcttgcgcag 1560

tattccaaga tgatacagaa cccatcttat gctgagcttc agaaggctgc gaatcaaggt 1620

aggagatgca cttgggaaaa gctatcagcc atcagggcaa attgtgctat tgagcttgca 1680

ctggatgaat gtgttgccct cctgaaccac ttgcgtaggc taaagaggag tgcagaaaga 1740

gcatccgcat cgcaaggata tggtccagca atcaggttct gcccatctag gaggattcca 1800

tcctggaatc tcatagcaag agaaaattca actggttctc ttgaagaaga aatgcttaca 1860

tctcctcaag gacctggagg agttgctgga acatctacca gaaaccagta tcctcagaga 1920

agtgcacatg agagcagcga cagtgaatct gagagtattg atttacactc ttggacaaga 1980

agtggtggcc ctcttatgag gacaacctca gccaataaat tcatcagctt tgttcagaat 2040

cttgagatcg acacagaatc cagaacaatt ccatcgaggg aagacataac tgatcttgtg 2100

acaccaaatg ctggtacctt ggcagctcat gcagtgagta gagaagcaat cgataggagc 2160

ttggacaatt cagctttaga tatccatgat accagtaccc ctagatcgac atttggccct 2220

tcaacaagta ttgtggtttc tgaaggtgac ttgttgcagc ctgaaaagat tgaaaatggt 2280

attttgttta atgttgtaag gagggatact ctgctcgggt ctagtagtgg agttgagtct 2340

caaggatctc ctcgggaacc agatgttgaa acagtacaga cggagtgcct tgatggcgtg 2400

tctacttctg atgatgatga tgacaaggaa ctaaatgcca ttgatgatgg aggaactagt 2460

cccatgagca gaaataatct acaacatcag gggtcctcac tggaagaaaa attataccat 2520

ccctcttcct taaattctga agacgagaca aacacaaaca aaccagaagc tgcatcgatt 2580

tttgatatat gtacagatat gcatccggca tctattagcc tacctgaagg gtcttcagaa 2640

aagacagaac tggaaacaac aaagattcct gatgacaatt cagctgttat gaatgatgaa 2700

gttgcctcag gtgctggtaa ctaa 2724

<210> 170

<211> 2985

<212> ДНК

<213> Zea mays

<400> 170

cattctctct ctctctctcc cttttcaatt tcgggggctt tatttctctc ctcccacgcc 60

ttgcatcttc ttgatgcgtt gcgtcccgac tcgaggcaga catcggaggc gcgccactga 120

cttagctcgc gatttctaga tccgcaaccc tgcgctgctc aactccgatt cttttagttc 180

ggattcgggt agcagcaggg cttcggtggc gatgacttga ttgatacgaa ttggggattt 240

cttgctgttt gcgcctctct tcgtatcggc gctgaagggc tcagctcgag attagaacaa 300

tttgggtttt ggggtctttt cttcttctac tactgctggt caagttcaca gaaatcgctg 360

gctccgtggt ccaatggacg agtccgggga agcgagcgtc ggctccttca ggatcgggcc 420

gtcgacgctg ctgggccgcg gggtggcgtt ccgcgtgctc ctcttcagct cgctgtggcg 480

cctgcgggcg cgcgcgtacg cggccatctc gcgcgtgcgc agcgcggcgc tgccggtggc 540

ggcgtcctgg ctgcacctca ggaacagcca cggcgtcctc ctcatggccg tgctcctcgc 600

cctcttcctg aggaaactct cggccgcgcg gtcgcgggcg gcgctcgcgc gccggcgcag 660

gcagcacgag aaggccatgc tgcatgccgg gacgtacgag gtctgggcgc gcgccgccaa 720

ggtgctcgac aagatgtctg agcaggtcca cgaggcggat ttctacgacg aggagctcat 780

caggaatagg ctcgaggaac tccggagacg gagggaggac gggtcgctcc gggacgtggt 840

gttctgtatg cgcggcgatc ttgttaggaa cttggggaac atgtgcaacc ctgaacttca 900

caagggcagg ctagaggttc ctaagcttat aaaggagtac attgaagagg tttctactca 960

actaagaatg gtgtgcgaat ctgacactga cgagttgctg ttggaagaga aacttgcctt 1020

tgttcaggag accaggcatg cctttgggag gacagcgcta ctcttaagtg ggggtgcttc 1080

actcgggtct ttccatgtag gtgtagtgaa aacattggtt gagcataagc ttctgcctcg 1140

gattatagca ggatcaagcg ttggttccat catatgttcg atcgttgcta cccgtacatg 1200

gcctgagatt gagagcttct tcacagactc attacagacc ttgcagtttt tcgacaggat 1260

gggcggaatt tttgcagtga tgaggcgtgt caccacttat ggtgcactgc atgacattag 1320

ccagatgcaa aggcttttga gggatctcac aagtaactta acatttcaag aggcttatga 1380

catgaccggc cgtgttcttg ggatcaccgt ttgctctcct agaaaaaatg agccaccccg 1440

ctgcctcaac tacctgacgg caccacatgt tgttatttgg agtgcagtaa ccgcctcttg 1500

tgcatttcct gggctctttg aagctcagga actgatggca aaggataggt tcggcaacat 1560

cgttcccttc catgcaccct ttgccacaga tcctgaacaa ggtcctggag catcgaagcg 1620

caggtggaga gacgggagct tggagatgga tttacccatg atgagactta aggagttgtt 1680

taatgtaaac catttcattg tgagccaaac taaccctcac atttctccac tcctccggat 1740

gaaagagctt gttagagcct atggagggcg ctttgctgga aagcttgctc gtcttgctga 1800

aatggaggtt aagtatcgat gcaaccaaat cctagagatc ggtcttccaa tgggaggact 1860

tgcaaaattg tttgcccagg attgggaggg tgatgtgacc atggttatgc cagcaacact 1920

tgctcagtac ttgaagatca ttcagaatcc aacatacgcg gagctccaaa tggctgccaa 1980

ccaaggccgc aggtgcacat gggagaagct ctccgcaatc agagcgaact gcgccattga 2040

acttgcactt gacgaatcca tagcggttct aaaccacaaa cggaggctaa aacgaagcat 2100

ggagaggacg gcggcggctt cgcagggtca ctctaactat gtccgaccca agactccgag 2160

gaggataccg tcatggagcc gcatcagtcg agagaactct ttggagtctc tctcggaaga 2220

gatctctgcg gttgctgctt cgtccatgca gcaaggcgct gctcttgttg tcggcgcacc 2280

accaacgact ctttctcagc atgttcggcg cagttctcat gacggaagtg agagtgagtc 2340

agaaaccatt gaccttaatt cctggaccag gagtggaggg cctctaatga ggacagcgtc 2400

cgccgacagg ttcatcagtt tcatccataa cattgagatt gacacagaat taagtaggcc 2460

ctgtgctgtg gaaggtgatg ctgcaggtat tttgtcagaa tctaccttcc caaacggtcc 2520

acgaccgaac aatagctcaa gtgttagtat gccaggtaga tgcacagaaa attctgggac 2580

cgagtcgtgc aacactgtca acaccagagc ttctactccc acaagcatgg ctgttcgtga 2640

aggagatttg ctgccgcctg aaagcactac tgataatgtc ctacttaaca ttgtgaaaag 2700

agacgccctg caggatggtg taactgaatt ggcggaaagc tcctgcgctg aaggatatgc 2760

ggcaaactgt gacaccgtct cagggctaga ctgctgaagg taacaagacg ctcgctgctg 2820

acttgagcaa tcaacaatta gctgatgatt agattcttct tgattttgat gatgaaaggt 2880

catttatatg tagctcacta cagcaacgca gtgtaggaaa attgtacctg ctcgatttaa 2940

actttaaaga gcatgccatg agtagctttg ttaatgttaa tattc 2985

<210> 171

<211> 1998

<212> ДНК

<213> Physcomitrella patens

<400> 171

atgaattact tagacactga cgccgacgct gcgctagagc atttcggcat tggacctctg 60

actttggcgc aaagagttgt ggcctttcgc gtcctatttt gtcgttgggt gaaagagctt 120

cgtgttgccc tcgcaaagag gctgcagcgg acacggaggg tatggagaca ggtgttctat 180

atgtggtttg ggtggttgaa ccctcgaaat cccagcgtcc ttctgttagc tgccgttgta 240

gcaaccatgc tcatgagaag agcgaaggca gggtctcaga aagcagagat tgcgtacaga 300

cggaagttct ggtccaattt aatgagggca gctttgacgt atgaggaatg ggctcatgcg 360

gcgcggatgc tagagaagga gcagaatcgg aggaaagatt cagacttgta cgatgaggat 420

ttggtgcgtt cgaagctcaa cgatcttcga ttgcgtcgtt tggagggtgg tgtggaggac 480

attcttttct gcattagggc cgatttagtg cgtaatttgg gtaacatgtg caatcccgaa 540

ctgcacaaag gccggctaca aactcccccc ctcatccagg aatacatcaa cgaagtgaga 600

taccatcttc gagctgtgtg tgggagcgac tcggacagct tcacacttga cgaaaaaatt 660

gcttttattc atgaaacccg ccatggtttt ggtcgcactg cacttcttct gagtggtgga 720

gcagctcttg gagcgtttca tcttggggtt gttcgaaccc ttgtcgagca tcgtttactt 780

ccccgagtga ttgccggtgc cagtgtggga tctgtcatat gctcatttgc tgcaactcga 840

acttggacag agctccagag ctttttcgaa gacaccatgc cccccatgca ctttttcgaa 900

aacatgggga gcatttttgc tattgcgcac aggcttctga ctcgaggtgc tgtgcatgaa 960

attggtatgc tgcaaaggaa aatgagacag ctcattgggg atttgacctt tcaggaagct 1020

tacgatctat ctggccgcgt gcttggaatc tctgtatgct cacctcggag actcgagcct 1080

ccgagatgtt taaattattt aacttctccc catgtagtca tttggagcgc agtcactgca 1140

tcctgcgcat tcccaggcct ttttgaagca caggagctga tggcgaagga tcgaactggt 1200

caacttgtac cctatcattc gccacctcag gttggccccg aggacaagga catggaaaag 1260

gggattggga agcggcgatg gcgagacggc agtctggaaa gcgatttgcc aatgatgcag 1320

ttgaaggaac tgtttaatgt gaatcatttc attgtcagcc aggcgaatcc gcatattaca 1380

ccatttttga ggttcaagga ttttgttcgt gcatatggag gagatttcgc tggaaaattg 1440

gcacacttag cggagatgga ggttaagcac cggtgcaagc agatgatgga gatgggcttt 1500

gaggtgtttg gattggctaa gctcttcgca caagattggg aaggagatgt cacgattgtg 1560

atgccggcca cttttgccca gtttgccaag atcatcacga acctgacagc cacagatctt 1620

cgcaaggcag tgatgcaagg ccgacgctgc acctgggcga agctatcagc cattcaggcc 1680

aactgtggca tagaattgat gctagacgaa tgtgtctctg aattaaaccg tcgtaggaaa 1740

gccctgcgtg aaatagagcg cagcgcaatg cagagcagcc atggtgggat gcgcgggtta 1800

tcaggaacaa agcgtatccc atcctggaac atcatcgccc gagagaattc ctgcggttcg 1860

ctagatgaag agagtcttca cgaggtgcgg atcccacatg atggtagcga cagcgacgat 1920

aatctggacc aaaatcagct ttcgtggacg agagcaggtg gcccgctcat gcggaccgca 1980

tcagcagcca aattcgtg 1998

<210> 172

<211> 3439

<212> ДНК

<213> Hordeum vulgare

<400> 172

gatcgcagtt agtttggctt gtacgtcgcg ttccccttcc acccttatct ccttctccgg 60

ctgaccggga cgccgcattt gtcccatcca cggcacggca cggcacgggc acgggaggga 120

gaagaagaag cccagctcga ctcctcctcc gcctcctcct ttcctctgat cccctccgtt 180

tgcccattcc ccagatccca gcacgccatg cccgggcgcg caggcgccaa gccgcaccgc 240

gcgcatttct cttccgccct gctccgatcc aaggccgcgg aggtgaccca gtgagctctc 300

ccgccacgcc cgtccgtccg ccggttcatc ggtcgcccat ggacgtcatc accaacgagg 360

cgcgcgtggg ggcgttcgcg atcggcccgt ccacggcggc gggccgggcg ctcgcgctgc 420

gcgtgctcct ctgcggctcc ctggcgcggc tgcggcaccg cctcgccgcc gcgctgcgcg 480

ccgcggcgcc cctggcggcg gcctggctgc acccgcgcca caacacgcgg gggatcctgc 540

tggccgtctg cgccgtcgcg ctcctgctgc gcggccgcgg gggccgcgcc ggggtgcgcg 600

cgcgcgtgca gtccgcctac cgccgcaagt tctggcgcaa catgatgcgc gccgcgctca 660

cctacgagga gtgggcgcac gccgcgcgga tgctcgagcg agagacgccg cgccgcgcca 720

ccgacgccga cctctacgac gaggagctcg tgcgcaacaa gctccgcgag ctcaggcacc 780

gtcgccagga gggctcgctc agggacatcg tcttctgcat gcgcgccgac ctgctcagga 840

accttggtaa catgtgcaac cccgagctcc acaagttgag gctgcaggtg cctaaactca 900

tcaaggaata cattgaggag gtatctactc aactgaaaat ggtttgcaat tctgattcag 960

acgagttacc tctcgaggag aaactggcat ttatgcatga gacaaggcat gcctttggta 1020

gatctgcctt actgctaagt ggaggagctt catttgggtc tttccatgta ggtgttgtga 1080

aaaccttggt agagcataag cttctaccta ggattatttc aggatcaagc gttggcgcaa 1140

taatgtgtgc tattgtcgcc acaaggtcat ggccagaact ggagagtttt tttgaggagt 1200

ggcattcctt gaaattcttt gaccaaatgg gtgggatctt tcctgtattt aaaagaattt 1260

tgacgcatgg ggctgttcat gacattaggc acttgcagac gcaattgaga aatcttacaa 1320

gcaacttaac atttcaagag gcatatgaca tgactggccg ggttctcgtt gttaccgtgt 1380

gttctccaag aaaacatgag ccacctcgat gcctgaacta tttgacgtca cctcacgttc 1440

tcatctggag tgcggtaact gcttcctgtg ctttccctgg actttttgag gcccaggagt 1500

tgatggccaa agatagattc ggagaaacag ttccttttca tgctccattc ttgttgggcg 1560

tggaggaacg agctgatgct gctacacggc gatggagaga tgggagctta gaaagtgatt 1620

tgcccatgaa gcagttgaag gaattattca acgtaaatca cttcatagta agccaagcca 1680

atcctcacat tgctccatta ctgagactaa aggagatcat cagggcttat ggaggcagct 1740

ttgctgcaaa gcttgctgaa cttgctgaga tggaagttaa gcataggttc aatcaagttc 1800

tggaacttgg atttccatta ggaggaatag ctaagttatt tgctcaacat tgggaaggtg 1860

atgtgacaat tgttatgcca gccactcttg ctcagtattc gaagatcata cagaatcctt 1920

cgtattctga gcttcagaaa gcagcaagtc agggtaggcg atgcacttgg gaaaagctct 1980

ctgccatcag ggcaaactgc gctattgagc ttgcattaga tgaatgtgtt gccctcctga 2040

accacatgcg taggctgaag agaagtgcag aaagagcagc cgcttcacaa ggatatggtg 2100

ctacaattag actctgtcca tctagaagga ttccgtcatg gaatctcata gcaagagaaa 2160

attcaactgg ttctctcgat gaggagatgc tcacatctcc cactgttaca agccatcaag 2220

cagttggagg gactgctggg ccatctaaca gaaatcacca tctccaacat agtatacatg 2280

atagcagtga cagtgaatct gagagtatag acttgaactc atggacgaga agtggtggcc 2340

ctctcatgag gacagcctcg gctaataaat tcatcagctt tgttcagaac cttgagattg 2400

acccagagtt cagaacaatt tcaccaaagg ggagtgaagg tgatattttg acaccgaata 2460

gtaacttgtt tgctggtcac ccaattggta gagagccagt tgataatcat ccaaggcctg 2520

ttactcctgg taggacctca ggcaatacag gttccgatcc tcatgatact cctgttccta 2580

ggtctccatt tggtctttcc gcgagtatca tggtccctga aggtgacttg ctgcagcctg 2640

aaaagattga gaatggtatt ttattcaatg ttgtccgaag ggatactctc ctagcgtcta 2700

ctagcggagt tgaacctcat ggatcttcac atgaggcaga tgtggaaact gtaccgaccg 2760

agtgccttta tggtgcttcg gatgacgacg acaacgtgga actgaatgcc aatgatgaag 2820

cgctatctga tcgtggagat cagagatctt cagttgcagg aaatctagat tcgtccgctt 2880

ccatggactg tcaagctgaa gcaagtacta ctcgatcaga agctccatct ctctttgata 2940

tctgtgtgga gattcctcca gcaaccatga ccacagaaaa tagtcggcct gacgagcctt 3000

cttcagacat aagactggag actgtaaaga cagaatgccc tgatgagaat tctgctgctg 3060

ggaatgctga agttgactca gttcctgcca gtaaagaatc ttcctattgg tctcagacat 3120

cagaaattgg acagcagcat caagtggata tgggatctgt gaactcctgt actgtttcat 3180

tttcagaaga tgatagacat gtgagcctta tttcgaacga gaaaccggtc actacttcca 3240

gtggcggagc tgagagtatg acatctggaa gaagtgaagc tgactagcat agaacttgcc 3300

tgttgaccga cctaatgttt ttctgtgttg ggacttggta gtttgaacaa ttcagcttga 3360

tctgatccat gctatgtgtg caatttaaac tcgtgtcacg atcaaactga attgtgtcta 3420

tatgtaggtg ttgtaatcc 3439

<210> 173

<211> 3470

<212> ДНК

<213> Nicotiana benthamiana

<400> 173

gttatctgat ccaaacttct gactttttct attttccgaa tccctatgtt ttttaataaa 60

tccatctctg ccattgcagt gatatattca tttattgtta tcaccttctt catttattgg 120

tccctctgtg ttttccatat attgaaggag aaaacattaa ctttatgcga ttttgtagtt 180

tttctggttg attcctacaa ccccttttga cattgatctt gtgggttaca aaaaacattg 240

aatctttatg tcaaaatttg atctttgtat ttcattttaa attgaaattt gatttttggg 300

ggtattaagg attcttttgt cggttgattt tgtgcctttt ttgccaagtt cttgtcggtc 360

tctgagctga atttccataa tttgacaaaa agaaaaggct aaagcagaaa ggttgggagt 420

ttctttcttt gactttcaga aactaaggta ttttctttga tctaattctt gttaatatct 480

ggttcaatct gattccgttg aatcttgtga atagcctttg tttccctatt gtcagaaaat 540

tatttccttt tcactttcct cgactctcag aagttagtac aatctttgtt ctgctaaatc 600

ttgtgaataa cctttagctt agagttttag gtatctgtat attgggttct cttaacattt 660

agcctagaag ccttctctag gattagtccc ccttttcatt gagatggata taagtaatga 720

ggctacaatt gacttctttt ccattggacc tactacgata ttgggtcgaa caatcgcctt 780

tagagtgttg ttctgtaaat caatttcaca attgaagcat cacctatttc atttcttgat 840

atattacttg tacaaattca agaatggttt gtcatactac ttgacaccct tgatctcgtg 900

gttgcaccct cgtaatccac aaggaatatt ggcattggta acgcttctcg ccttcttgtt 960

gaggcgatac acgaatgtaa aaatcaaggc tgagatggcc tataggagga agttttggag 1020

gaatatgatg agatctgcat tgacttatga ggagtgggct catgctgcca agatgctaga 1080

taaagagacc cctaaaatga atgaggcaga tctttatgat gtagaattag ttcgaaataa 1140

actccaagag cttcgacatc gtaggcaaga gggttctatg agggatatca tattctgtat 1200

gagagctgac cttgttagga atcttggtaa tatgtgtaat ccagaacttc acaagggaag 1260

gcttcatgtg cctagactga ttaaggatta tattgatgag gtttcaactc agttgagaat 1320

ggtatgcgac tctgattcgg aggagcttct cttggaagag aagcttgctt tcatgcatga 1380

aacaagacat gcctttggta ggacagcttt gcttttaagt ggaggtgctt ctttaggagc 1440

tttccatgtg ggcgtggtga aaacacttgt agaacacaaa ctgatgccac ggataattgc 1500

tggttcaagt gtcggctcga ttatgtgctc catagttgca actcgatctt ggcctgagct 1560

ccagagtttt ttcgaggact cctggcactc tttgcaattt ttcgatcagt tgggtgggat 1620

ttttactatt ttcaggaggg tcatgaccca gggtgctgta catgagatca gacagctgca 1680

ggtgctgtta cgtaatctca cgaataatct tactttccaa gaagcctatg acatgactgg 1740

tagagttctg gggattactg tttgctcgcc taggaaacat gaacctccta gatgcttgaa 1800

ctacttgact tcacctcatg ttgttatatg gagtgccgtt accgcttctt gtgcctttcc 1860

tggtctcttc gaagctcaag aacttatggc aaaggataga agtggagatc ttgttccata 1920

tcacccacca tttcatttgg gtcctgatgc cacttctagt gcatctgctc gtcgttggag 1980

ggatggtagc ttggaggttg atttgccaat gatgcagcta aaggagctct tcaatgtcaa 2040

tcactttatt gtgagccagg cgaatccgca tattgctcca ctgctgagga tcaaagagtt 2100

tgtaagagct tatggaggca actttgctgc caagcttgct caacttacgg aaatggaggt 2160

gaagcacaga tgcaatcagg tattagaact tggttttccc ttgggaggat tagcaaagct 2220

ttttgctcaa gaatgggagg gtgatgtaac tgttgtaatg cctgccactc tagctcagta 2280

ctcaaaaatc atacagaatc cctcgactct ggagctgcaa aaagcagcaa atcaaggaag 2340

aaggtgcact tgggaaaaac tctcagccat gaaagcaaac tgtggaattg agcttgcact 2400

tgatgaatgc gttgctatac tgaatcacat gcgtagactg aaaaggagtg ctgagagggc 2460

ggctgctgct tcacatggct tggcaagcac tgtcagattt aacacttcca gaagaattcc 2520

ttcttggaac tgcattgcac gagagaactc aacaggctcc cttgaagatt ttcttgcgga 2580

tgttgctgct tcacatcatc aaggaggcag tggttcgggg gcgcatgtta accgtagttg 2640

gcgaacgcac cggaatgcac atgatggtag tgacagtgag ccggaaaatg tggaccttaa 2700

ttcttggaca agatcgggtg gtcctttgat gaggacaaca tcagctgata agtttattga 2760

ctttgtccag aacttggaaa ttggttcgcg attgaacaaa ggattgacta ttgacctcaa 2820

caatattatt cctcagatgg caagcaggga ccatttctcc ccgagcccaa gggtaacaac 2880

acctgataga agttcagata cagaatttga tcaaagagat tttagttaca gggtccctgc 2940

gagtagttca agcattatgg taggcgaagg tgaccttctg cagcctgaaa ggactaacag 3000

cggtattgtc ttcaatgtgg taaggaaagg agacttgacc ccatcgaaca gaagccttga 3060

ttcagaaaat aatagttccg tgcaggatgc agttgctgag tgcgtgcaac ttgaaagtcc 3120

agaaaaggag atggatatta gctcagtatc ggaggatggt gagaatgatg ttgggcaagg 3180

aagtagggta aatgaagttg attgtagtaa aaatcgttca tcaatcggtg atggcaacga 3240

taagcaagtt attgatactt gagagtttag ctttgattat tctacacagg ccattcgaat 3300

tattttttat actcaaatgg agcttctttc agagctaaca cactcagaat tggggttgta 3360

aatagtgcaa gtagcaaatc tgtaataaat gtttagtgta gtcatcaccc ttctactagt 3420

tcaaagtggc tcagttcaat tcaaattcag aacttcgata attcatgttt 3470

<210> 174

<211> 713

<212> ДНК

<213> Nicotiana benthamiana

<400> 174

tgtatgagag ctgaccttgt taggaatctt ggtaatatgt gtaatccaga acttcacaag 60

ggaaggcttc atgtgcctag actgattaag gattatattg atgaggtttc aactcagttg 120

agaatggtat gcgactctga ttcggaggag cttctcttgg aagagaagct tgctttcatg 180

catgaaacaa gacatgcctt tggtaggaca gctttgcttt taagtggagg tgcttcttta 240

ggagctttcc atgtgggcgt ggtgaaaaca cttgtagaac acaaactgat gccacggata 300

attgctggtt caagtgtcgg ctcgattatg tgctccatag ttgcaactcg atcttggcct 360

gagctccaga gttttttcga ggactcctgg cactctttgc aatttttcga tcagttgggt 420

gggattttta ctattttcag gagggtcatg acccagggtg ctgtacatga gatcagacag 480

ctgcaggtgc tgttacgtaa tctcacgaat aatcttactt tccaagaagc ctatgacatg 540

actggtagag ttctggggat tactgtttgc tcgcctagga aacatgaacc tcctagatgc 600

ttgaactact tgacttcacc tcatgttgtt atatggagtg ccgttaccgc ttcttgtgcc 660

tttcctggtc tcttcgaagc tcaagaactt atggcaaagg atagaagtgg aga 713

<210> 175

<211> 1500

<212> ДНК

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 175

cgaaaaaaga agtagaatat atatatatat atatatatat atatatatat atatatattc 60

gtgtggacat cataaatgcc taaatgataa tagttgattt cgagttttat tttcgttact 120

tccaatcaaa ttctccttgc accatattta tttttttact gtgagaacat atataagtat 180

atattggaat tacgtatccg agaggttttt gcatatttcg tttatttatt ttcgatatcc 240

acactactgt attattaaaa atttgaaaaa ttcaactagg gcttttcatc ttctctagaa 300

ttattcgttt atttatgtcg atgtccacac tattattaaa ataaaacgag aggatatggt 360

tggatcatcc aagtttcgtt tatgactctt tgttcattta caaacgttta gttttccact 420

taagttttga aaagagttaa tttccaatat attcggcaca gtttttcaag tgtattcatc 480

tgtttttttt ttttttggtt ggctatatgg tccaaatttt gatttgcaat atgagattgc 540

acagagagaa caatctttca ttatgattaa ttattgtaca agtaacaaac accaatctcc 600

gatatacttt ggctctttag cacattgtta tgctagaagt tagcggaaat ctatatgttg 660

ttaaacgcag cgtttaaatt gaacagtgta atttaccttg aaattttaag actacatgct 720

gtttagaatt tcagatgaaa acatcttgat gttttagaaa tccacgtggg aatagcgtaa 780

aatcttatcc aacgaactta ttttggtttt gttgtatttg tgcaagtcgt cacgctaatc 840

gaaaaaagaa aagaaaaaaa gaagccgtca tgatcggcca tttctcggcc gagtctgagt 900

ctgactctgc gtccgtgtca ccattatcag atcgagcctg tcttatctcg ttgcgattcc 960

ctatgcaaaa atcttcttct tttttttatt cccccattta tctctgatct cttctctctt 1020

ctcaagtaaa cctctctgct tcacgtctct tcttttcttg tcgattttcc ccagataatc 1080

aggtaaataa ggctactttc ttatttgatc tggtggtctt tgtgttgaaa tctctgggtt 1140

ttctctgttg atttcaaagt tctctctttt tttttttgtt tactgggtgc tgtgaaaaat 1200

gatcttgtca aagtctcctc ttttcatcga attgaaactc taattagaaa aaagatcata 1260

acttttatta aaaaaatgag tttgctttgc ttaattttgc gaattgcttc atagattcat 1320

tgattagcct atttggggta acaaaaaaaa gctgacacgg tttcagattc caaaaataga 1380

tcatgactct gtttcttctc tgcagaggtt ttaataaata tatgcttctt ctcatgagtt 1440

ctcgtttttt ttgtcacctt cgcagttgaa aacacaccca aattcatctt cgaatcaata 1500

<210> 176

<211> 2871

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Нуклеотидная последовательность, комплементарная гену pSSU-олеозина

В Т-ДНК pJP3502. В порядке (комплементарная последовательность):

Терминатор лектина Glycine max 348 нт, 3' экзон 255 нт, Интрон UBQ10

304 нт, 5' экзон 213 нт, промотор SSU

<400> 176

ggcccctaga atctaattat tctattcaga ctaaattagt ataagtattt ttttaatcaa 60

taaataataa ttaataattt attagtagga gtgattgaat ttataatata ttttttttaa 120

tcatttaaag aatcttatat ctttaaattg acaagagttt taaatgggga gagtgttatc 180

atatcacaag taggattaat gtgttatagt ttcacatgca ttacgataag ttgtgaaaga 240

taacattatt atatataaca atgacaatca ctagcgatcg agtagtgaga gtcgtcttat 300

tacactttct tccttcgatc tgtcacatgg cggcggcccg cggccgcttc attactcgag 360

ccaggaggat ggatcgatgc tggtctgaga ccctgctacc ggttgctgac tgaactgctc 420

ggcacggtcc ttcatttcac gggccttgct cgccaacttt gtcttggccg actccaactg 480

atccgctccg ggtggatgtt tccccgtcag gtaacggtag atccaggaca gcacagacag 540

agcggcaaca ccaaatcccc cgcttgccag aaaacccgct cccaacagga agatggtgat 600

gactgcagat cagaaaaact cagattaatc gacaaattcg atcgcacaaa ctagaaacta 660

acaccagatc tagatagaaa tcacaaatcg aagagtaatt attcgacaaa actcaaatta 720

tttgaacaaa tcggatgata tctatgaaac cctaatcgag aattaagatg atatctaacg 780

atcaaaccca gaaaatcgtc ttcgatctaa gattaacaga atctaaacca aagaacatat 840

acgaaattgg gatcgaacga aaacaaaatc gaagattttg agagaataag gaacacagaa 900

atttacctgc agggaccagt acaggcgaga agatcaccag gagaggtgtg gcgattgtca 960

gcgcaatgac cgttccagcc agggtcaacc cggataacac caacaggcta cctccggcag 1020

taaccgcggt cgctgccttt acaacacgct gagcacgcgg ttgcagttgc aagtgggggg 1080

cacgtgtttg ttgctgctgc ccgtagtgct ctgccatggt tttttttaac ggagcaagcg 1140

gccgctgttc ttctttactc tttgtgtgac tgaggtttgg tctagtgctt tggtcatcta 1200

tatataatga taacaacaat gagaacaagc tttggagtga tcggagggtc taggatacat 1260

gagattcaag tggactagga tctacaccgt tggattttga gtgtggatat gtgtgaggtt 1320

aattttactt ggtaacggcc acaaaggcct aaggagaggt gttgagaccc ttatcggctt 1380

gaaccgctgg aataatgcca cgtggaagat aattccatga atcttatcgt tatctatgag 1440

tgaaattgtg tgatggtgga gtggtgcttg ctcattttac ttgcctggtg gacttggccc 1500

tttccttatg gggaatttat attttactta ctatagagct ttcatacctt ttttttacct 1560

tggatttagt taatatataa tggtatgatt catgaataaa aatgggaaat ttttgaattt 1620

gtactgctaa atgcataaga ttaggtgaaa ctgtggaata tatatttttt tcatttaaaa 1680

gcaaaatttg ccttttacta gaattataaa tatagaaaaa tatataacat tcaaataaaa 1740

atgaaaataa gaactttcaa aaaacagaac tatgtttaat gtgtaaagat tagtcgcaca 1800

tcaagtcatc tgttacaata tgttacaaca agtcataagc ccaacaaagt tagcacgtct 1860

aaataaacta aagagtccac gaaaatatta caaatcataa gcccaacaaa gttattgatc 1920

aaaaaaaaaa aacgcccaac aaagctaaac aaagtccaaa aaaaacttct caagtctcca 1980

tcttccttta tgaacattga aaactataca caaaacaagt cagataaatc tctttctggg 2040

cctgtcttcc caacctccta catcacttcc ctatcggatt gaatgtttta cttgtacctt 2100

ttccgttgca atgatattga tagtatgttt gtgaaaacta atagggttaa caatcgaagt 2160

catggaatat ggatttggtc caagattttc cgagagcttt ctagtagaaa gcccatcacc 2220

agaaatttac tagtaaaata aatcaccaat taggtttctt attatgtgcc aaattcaata 2280

taattataga ggatatttca aatgaaaacg tatgaatgtt attagtaaat ggtcaggtaa 2340

gacattaaaa aaatcctacg tcagatattc aactttaaaa attcgatcag tgtggaattg 2400

tacaaaaatt tgggatctac tatatatata taatgcttta caacacttgg attttttttt 2460

ggaggctgga atttttaatc tacatatttg ttttggccat gcaccaactc attgtttagt 2520

gtaatacttt gattttgtca aatatatgtg ttcgtgtata tttgtataag aatttctttg 2580

accatataca cacacacata tatatatata tatatatatt atatatcatg cacttttaat 2640

tgaaaaaata atatatatat atatagtgca ttttttctaa caaccatata tgttgcgatt 2700

gatctgcaaa aatactgcta gagtaatgaa aaatataatc tattgctgaa attatctcag 2760

atgttaagat tttcttaaag taaattcttt caaattttag ctaaaagtct tgtaataact 2820

aaagaataat acacaatctc gaccacggaa aaaaaacaca taataaattt g 2871

<210> 177

<211> 1578

<212> ДНК

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 177

gtcacacaca cataaacact ccacacgctc tgcttcgtcc aatcaccaaa cacgctttaa 60

tgactctcac gttttcctcc tccgccgcaa ccgttgccgt tgctgctgca accgtaacct 120

cctccgctag ggttccggtt tatccactcg cttcgtcgac tcttcgtgga ttagtatctt 180

tcagattaac cgcgaagaag ctgtttctgc cgcctcttcg ttctcgcggc ggcgttagtg 240

tgagagccat gtctgagctt gttcaggata aagaatcgtc cgtcgcggcg agcattgctt 300

tcaatgaagc cgccggtgag acgccgagtg agcttagtca ttcccgtact ttcttggatg 360

cgcgaagtga acaagatctt ttatctggta tcaagaagga agctgaagct ggaaggttgc 420

cagcaaatgt tgcagcagga atggaagaat tgtattggaa ctacaaaaat gcagttttaa 480

gtagtggagc ttccagggca gatgaaactg ttgtatcaaa catgtctgtt gcttttgatc 540

gcatgcttct tggtgtggag gatccttata cttttaatcc atatcataaa gcagtcagag 600

aaccatttga ctactacatg tttgtccata catacatccg tcctcttatt gatttcaaaa 660

attcgtacgt tggaaatgct tctatattct ctgagctgga agacaagatt cgacagggac 720

acaatatcgt gttgatatca aaccatcaaa gtgaagctga tccggctgtc atttctctat 780

tgcttgaagc acaatctcct ttcataggag agaacattaa atgtgtggct ggtgatcgag 840

tcatcactga tcctctttgt aagccgttca gtatgggaag gaacctcata tgtgtttact 900

cgaaaaagca catgaatgat gatcctgagc ttgttgacat gaaaagaaaa gcaaacacac 960

gaagcttaaa ggagatggct acaatgctaa ggtctggcgg tcaacttata tggattgcac 1020

caagcggtgg aagggaccgc ccgaatcctt ctactgggga atggtttcct gcaccctttg 1080

atgcttcttc ggtagacaac atgagaagac tggttgaaca ttctggcgct cctggacata 1140

tatatccaat gtctttgctt tgctatgaca tcatgccccc tccaccccag gttgagaaag 1200

aaatcggaga gaaaagatta gttgggtttc acggtactgg actatcaatt gctcctgaaa 1260

tcaacttctc agacgtcaca gcagactgcg agagccctaa tgaggcgaaa gaagcataca 1320

gccaagcttt gtacaagtcg gtgaatgaac aatacgagat cttaaactct gcgattaaac 1380

acagaagagg agtagaagca tcaacttcaa gggtctcttt gtcacaacct tggaattagt 1440

ctctcgtttt agggtaacac tttcaaaact cataaatctt ctgtctcaga agttttgttg 1500

caactgtata tatattgaga gagagagcat tgttctttca tttgcaggat acacaaacac 1560

aatcaatgga aaatactc 1578

<210> 178

<211> 459

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 178

Met Thr Leu Thr Phe Ser Ser Ser Ala Ala Thr Val Ala Val Ala Ala

1 5 10 15

Ala Thr Val Thr Ser Ser Ala Arg Val Pro Val Tyr Pro Leu Ala Ser

20 25 30

Ser Thr Leu Arg Gly Leu Val Ser Phe Arg Leu Thr Ala Lys Lys Leu

35 40 45

Phe Leu Pro Pro Leu Arg Ser Arg Gly Gly Val Ser Val Arg Ala Met

50 55 60

Ser Glu Leu Val Gln Asp Lys Glu Ser Ser Val Ala Ala Ser Ile Ala

65 70 75 80

Phe Asn Glu Ala Ala Gly Glu Thr Pro Ser Glu Leu Ser His Ser Arg

85 90 95

Thr Phe Leu Asp Ala Arg Ser Glu Gln Asp Leu Leu Ser Gly Ile Lys

100 105 110

Lys Glu Ala Glu Ala Gly Arg Leu Pro Ala Asn Val Ala Ala Gly Met

115 120 125

Glu Glu Leu Tyr Trp Asn Tyr Lys Asn Ala Val Leu Ser Ser Gly Ala

130 135 140

Ser Arg Ala Asp Glu Thr Val Val Ser Asn Met Ser Val Ala Phe Asp

145 150 155 160

Arg Met Leu Leu Gly Val Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Asn Pro Tyr His

165 170 175

Lys Ala Val Arg Glu Pro Phe Asp Tyr Tyr Met Phe Val His Thr Tyr

180 185 190

Ile Arg Pro Leu Ile Asp Phe Lys Asn Ser Tyr Val Gly Asn Ala Ser

195 200 205

Ile Phe Ser Glu Leu Glu Asp Lys Ile Arg Gln Gly His Asn Ile Val

210 215 220

Leu Ile Ser Asn His Gln Ser Glu Ala Asp Pro Ala Val Ile Ser Leu

225 230 235 240

Leu Leu Glu Ala Gln Ser Pro Phe Ile Gly Glu Asn Ile Lys Cys Val

245 250 255

Ala Gly Asp Arg Val Ile Thr Asp Pro Leu Cys Lys Pro Phe Ser Met

260 265 270

Gly Arg Asn Leu Ile Cys Val Tyr Ser Lys Lys His Met Asn Asp Asp

275 280 285

Pro Glu Leu Val Asp Met Lys Arg Lys Ala Asn Thr Arg Ser Leu Lys

290 295 300

Glu Met Ala Thr Met Leu Arg Ser Gly Gly Gln Leu Ile Trp Ile Ala

305 310 315 320

Pro Ser Gly Gly Arg Asp Arg Pro Asn Pro Ser Thr Gly Glu Trp Phe

325 330 335

Pro Ala Pro Phe Asp Ala Ser Ser Val Asp Asn Met Arg Arg Leu Val

340 345 350

Glu His Ser Gly Ala Pro Gly His Ile Tyr Pro Met Ser Leu Leu Cys

355 360 365

Tyr Asp Ile Met Pro Pro Pro Pro Gln Val Glu Lys Glu Ile Gly Glu

370 375 380

Lys Arg Leu Val Gly Phe His Gly Thr Gly Leu Ser Ile Ala Pro Glu

385 390 395 400

Ile Asn Phe Ser Asp Val Thr Ala Asp Cys Glu Ser Pro Asn Glu Ala

405 410 415

Lys Glu Ala Tyr Ser Gln Ala Leu Tyr Lys Ser Val Asn Glu Gln Tyr

420 425 430

Glu Ile Leu Asn Ser Ala Ile Lys His Arg Arg Gly Val Glu Ala Ser

435 440 445

Thr Ser Arg Val Ser Leu Ser Gln Pro Trp Asn

450 455

<210> 179

<211> 2455

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Populus trichocarpa

<400> 179

agtgcgggtg attgggtgag gagtgaagac gctgatttta gaggttttga gagagtggca 60

gtctgcagag aataggaatc cgaccatatc ctccaaaacc cgcgctggac tcagtcaccg 120

ccaatcatca atcagccacc catcaacacc aaaaatcccc gtccttttga tttccaccac 180

ataaaaatag cacactgctc ctccttcact ccattcctat cttaataata ataataataa 240

taaagctcaa ctcttctctt ctaagtcaag acatgatcct ttccattcct gctccttcgt 300

cggcattctt cacaactact aaaccgtctc caccttttcc tagggtttct aaactctgct 360

tcttaacccc ctcatattct ctttcccttc gttttagatc cactgctcga cgctccactt 420

cttttccttg tgtcctctct tctctcaacc ttcacgcaat ggctgaactc gttcaggata 480

aagaagtctt cgcttctgct gaagttgatt acagcaagaa gaaaaacagg actcgttctc 540

gctcgtttct tgatgcaaca actgaacaag agttactgtc gggaatcagg aaggaatcag 600

aagcaggaaa acttccttca aatgttgctg caggaatgaa agatctgtat cagaactaca 660

aaaccgcagt tttgcaaagt ggaattccca acgcacatga gattgtattg gaaaatatgg 720

ctgctgcatt ggatcttata ttctttgatg ttgaggaccc gtttatcttc tcaccttatc 780

acaaagcttt gagaaagcca tatgactact ttgaatttgg tcaaaagtat atccgtccat 840

tgattgattt tagaaattca tatgtaggca atgtttccat tttcaatgaa attcaagaga 900

agcttcggca gggtcacaat attgtcttga tatcaaacca ccaaactgaa gcagatccag 960

ctgtcattgc actgttgctt gaaacatcaa gccctcacat tgctgaaaac ttgatctatg 1020

ttgctgggga tagagttgtc acagatcctc tttgcaagcc attcagcatg ggaaggaatc 1080

ttatatgtgt atactcaaaa aagcacatga atgatgaccc tgaacattca gaggagaaga 1140

gaaaagcaaa tatccgaagt ttgaaagaga tggctttgct tttaaggggt ggctcacaaa 1200

tagtctggat tgcaccaagt ggtggcaggg accgtccaga tcccttgtca ggagagtggt 1260

atccggcaca ctttgatgct tcttcagtag acaacatgag aaggcttgct gaacattctg 1320

gagctccagg acatgtttat cctctggcac tattatgcca tgacatcatg ccccctccgc 1380

ctcaggtgga aaaggaaatt ggagagagaa gagttatttc atttcatgga gttggattat 1440

cagttgcacc agaaatcagc ttctctgaag ttacagcggc atatgaaaat cctgaagagg 1500

ctaaggaggt atatacagag gctctgtata agtctgtgac tgagcaatac aatgtgctta 1560

aatctgctgt acatggaaaa caagggctag gggcgtccat tccaactgtt tctttgtcac 1620

agccatggaa ttagtcaacc ttttctatac ttgattaggc caatagtttt gttatatagt 1680

tctgcaactc ctggaccaca attctagcgg tccttctagt caagtatgtg ccaggagaag 1740

cttctctctc catgatgata tggatggctt tttctggaga tgcaatctaa gctacaagtt 1800

tttgctgtgc ttacattcta tcaaagccaa atctcacaca atatcttgaa gccaaattca 1860

tctgaaacgc gagctgttcc agaggttcaa tttcaggtgt gcagataaca gttcctagta 1920

aacacaagag ctagtcgtct gaggcgatat acatgtatat tttctcaatt ttttggtggc 1980

cgatcatatt ctttttacac caattgctca attgctactc atttttctcc ctcgttcacc 2040

ttcaataact agaagttttc atgctataac acttgcacac agaagtacta tgaacagagt 2100

tggagcacat tttgcctctt gactaaacaa gacttgtttt tagctgccac accaaacttt 2160

ttatatgatg caattatggt agtcgttttc tcttgttttg gtcaaaaccc aaaccagcta 2220

tagttgctac agccaatcga gagtggtgca tgtttgtttg tttttttttt tttttttgtc 2280

ctcagttata gtaaccatgt tcaactgaac tatgcatctc ttaggacacc acctcttaag 2340

ccccgtgatc taaccgtgtt ttcgaatttt tttttttttt ttgggctttt ggtttattta 2400

aacgcagcag ctttgaccca agttaaaaca aaaaaatcta ttaaaaaaat tgtag 2455

<210> 180

<211> 1389

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Jatropha curcas

<400> 180

atgacacttt ctgcttttcc ttccacattc ctctttagaa tacaatcgcc atcaacgcct 60

agggtttcca tttccctccc ttccttatct tcaaagctct gtttggttcc tccctctttt 120

tctcctcctt cgcttgctct taaatcgagt gcgcgaagga ccatttgtcc ttgcttgctc 180

tcttctctca acgccaacgt ggctcacctt ctcaaggagg aaaaagaagt tgtggcttcg 240

gcttccggct gcgagaagga ggaggaaaag aagatggaac agcctagtca ctcccgcact 300

ttcctgcatg ccagaacgga acaagatttg ctgtctggaa ttagaaaaga agcagaagca 360

gggaggttgc cttcaaatgt tgcagcaggg atggaagaat tgtatcagaa ttatagaaat 420

gcagtgatac aaagtggaac ccccaatgca gaagagatca tactgtcaaa tatggccgtt 480

gctttggatc gtataagctt ggatgttgag gacccttttg tcttctcaca ttatcacaga 540

gcattgagag agccgtttga ctactataac ttcggtcaaa attatattcg tcctttggtt 600

gattttagaa attcttatgt tggcaatatt tcccttttcc atgaagtgga agagaagctt 660

cagcagggtc ataatattgt cttgatgtca aatcaccaaa ctgaagcaga cccggctata 720

attgcattgc tgcttgagaa aacaaagccc tatattgctg agaatttgat ctatatagca 780

ggtggtagag tcataacaga tcctctttgc aagccattca gcatgggaag gaatcttata 840

tgcgtgtact caaaaaaaca catgaatgat gttcctgagc ttactgagat gaagaaaaga 900

gcaaacatac ggagtttgaa ggagatggcc attccattaa ggggtgggtc acgaatagtg 960

tggattgccc caagtggtgg tagggaccgc ccagatcatc tgactggaga atggtatcca 1020

gcaccatttg atgcttcttc agtggataac atgagaaggc ttgctgaaca ttctggtgct 1080

cctgggcata tttatccatt ggcattatta tgccatgaca taatgccccc tccccttcag 1140

gtgcaaaagg aaattggaga gaaacgagtg atctcctttc atggggttgg attatcaatt 1200

gcaccgggaa tcagcttctc tgaaattgcg ggtagttgtg aaaatcctga agaggcaaag 1260

aacatttatt cacaacttct gtatgattca gtgactgcgc aatacaacgt gcttaaatct 1320

gccataaatg gcaaacgagg gctagaggct tcaattccaa ctgtctcttt gtcacaacca 1380

tggaattaa 1389

<210> 181

<211> 1368

<212> ДНК

<213> Ricinus communis

<400> 181

atgattcttt ccattctttc ccctacacta ccatcgccta gggtttgtat ttccatttct 60

tctgtatctt caaagctctc tctagtccct gtctcttctt tttctcttcc tcctcctttg 120

gccatagtaa gatggtcatc aaggtcctcc atttgtcctt gtttcttctc ttcttctctc 180

aacgccaatc cagtccccga actcctcaac gatgataaga agaagaacaa caacaacaac 240

aagagcaaga agggaaagtg tactcctcac tcccgcactt ttcttgatgc aagaactgaa 300

caagagttgc tgtatggaat taggaaggaa gcagatgcag ggaggttgcc tttaaacatt 360

gcagcaggga tggaagaagt ttatcggaat tatagaaatg cagttttgca aagtggaatt 420

ccaaatgcaa aagaaatcat actgtcaaat atggctgttg cgttagatcg tatgtgcttg 480

gatgttgagg acccttttgt cttctcacct tatcataaag cactaagaga accattcgat 540

tactataatt ttggtcaaaa ttatatccgt cctctgattg attttaggaa ttcatatgtt 600

ggcaacattt cgcttttcca tgaagttgag cagaagcttc agcagggtca caatattatt 660

ttgatgtcaa accaccagac tgaagcagat ccagctgtca ttgcattgtt gcttgaaaaa 720

acaaatccct acattgctga gaatttgatc tacgttgcag gtgatagagt tgtaacagat 780

actctatgca agccattcag catgggaagg aatcttatat gtgtgtactc gaaaaaacac 840

atggctgatg ttcctgagct tactgagatg aagaaaaaag caaacattcg cagtttaaag 900

gagatggtca tgattttaag ggatgggtct caaattgttt ggattgctcc aagtggtggc 960

agggaccgcc cagattcttt gactggagaa tggtgtccag caccctttga tgcttcttca 1020

gtggataaca tgagaaggat tactgaacat tctggcgctc caggacatat ttttccatta 1080

gcgttgttat gccacgatat catgccccct ccacctgagg tacaaaagga aattggagaa 1140

agaagaatga tctcctttca tggagctgga ttatctattg cacccgaaat cagcttctct 1200

gaaattgctg ttgcttgcga agatcatgaa gaggctaaga acgcatatgc acaggtttta 1260

tatgattctg tgactgagca atacaatgtg cttaaatctg ccatacatgg aaaacaagga 1320

ctagaggcat caacttctac cgtctcattg tcgcaaccat gggattag 1368

<210> 182

<211> 1344

<212> ДНК

<213> Helianthus annuus

<400> 182

atgtcgattc tcccgtcttc ttctcctact ctcttcttct ccaccgcaaa ccctagggtt 60

tctgtttctc tttcacttac ttctacagtt tctacatctt catccgtgcg cagtcgctcg 120

attttccggc attttccgta cctagcgttt tctagggcag cgaatgccgc cgcggagacg 180

tttgaaggca agaagtggtc gtcgtcctcc gctacacaac cgatctccgg atccgagctc 240

ggttactcgc atacattcat cgatgctctg tctgaacaag atcttctttc tgtaattcaa 300

agagaggtag aagctggagc actgccaaaa catatcgctc actcaatgga ggaactctat 360

cagaactaca aaaatgcggt tttccaaagt ggtaatccct gtgcagaaga tactgtattg 420

tcaaacatgc gtgtagcatt tgatcgaatg ttcttggatg tgaaggagcc tttcgaattt 480

tcaccgtatc atgaagctat tcgagagcct tttaattact atatgtttgg tcaaaattat 540

attcgtcctc tgatcaattt cagggaatca tatgttggca acgtctctct tttcagtgaa 600

atggaagaac aactgaagca gggtgaaaat gtaattttga tctcaaacca ccaatccgaa 660

gcagatccag ctgtcattgc cttgttgctt gaaacaacaa atccttatat ttccgagaac 720

ataatctatg tggcagggga cagagttata acggatcctc tttgtaagcc tttcagcatg 780

ggaaggaact tgctgtgcgt atattcaaaa aaacatatga acgatgttcc tgagcttgct 840

gatatgaaaa ggagagcaaa tacaagaagt ttaaaagaga tggctttgct tttgaggggt 900

ggatcaaaaa taatatggat tgcaccaagt ggtggaaggg acaggcctga tcccgtcaca 960

aatcaatggt ttccagcacc attcgatgcc agttctctgg acaacatgag aaggcttgtg 1020

gaccatgctg gtgtggtggg tcatatatat cctttagcca tactatgcca tgacatcatg 1080

ccccctcctc ctcaggttga gaaagaaatt ggagagaaaa ggttgatatc ttttcatggc 1140

actggaatat cagttgcacc tgaagttgat ttccaaaacg ccactgcttc ttgtggatcc 1200

cccgaggagg ccaaggcagt ttattcacag gcactttatg attcagtgtg cgagcaatac 1260

aacgtgctac aatccgccat aaatggagca aaaggcttag aagcatcaac atcaagtgtc 1320

tcattgtcgc aacctgttga ctag 1344

<210> 183

<211> 1374

<212> ДНК

<213> Medicago truncatula

<400> 183

atgtttacaa caccattttc ttctccttca accgcatttt tctctccacc taaagcctca 60

tattcttctt cttcttcttc ttcttcttct tcttcttcgt tacctcttcg tagttctttc 120

actttttatc atcttcgatt taatgcaaca acttcttctt cttctgtaac aacttctgga 180

acttcttctt cttcatattg ttctcctctt gctttcaatt ctaataataa aaaacctaaa 240

gaaatttctg ctaatatggc ggcttcttct gtttcttctc gcactttcct caatgccaga 300

aatgaacaag atgttctttc tggaattaag aaggaagtag aagccggaac tttgcccccc 360

actattgctg aagggatgga agaattgtac cttaactata aaagtgcagt tgttaaaagt 420

ggagatccca aagcagatga gattgtattg tcaaatatga ctgctttatt agatcgcata 480

tttttggatg tgaaggagcc ttttgtcttt gaagcacacc ataaagcaaa gagagagcct 540

tttgactact acatgtttgg ccaaaattat attcgtccct tagttgattt caacacttct 600

tacgttggca acatgcccct tttcatacaa atggaagagc aacttaagca gggacacaat 660

attatcttga tgtcaaacca ccaaagtgaa gctgatccag ctattattgc attgctgctt 720

gaaatgcgac ttccacatat tgctgaaaac ttgatttatg tggcaggaga tagagttata 780

accgatcctc tatgcaagcc cttcagtatt ggcaggaatc tgatctgtgt ttattcaaaa 840

aagcacatgc ttgatgatcc agcacttgta gagacgaaaa gaaaagcaaa tacacgaagt 900

ctgaaggaaa tggccacgct tttaaggagt ggatcacaaa taatttggat tgccccaagc 960

ggtggtaggg atcgaccagt tgccaactct ggggaatggg caccggcacc ctttgattct 1020

tcttcagtgg acaatatgcg aaggcttgtc gatcattcag gtccaccagg tcatatctat 1080

cctatggcaa tactgtgcca tgacataatg ccccctccac taaaggttga aaaagaaatt 1140

ggggagaaaa gaattatatc atatcatggg actggcatat cacttgctcc agaaataagc 1200

ttttccgaca tcactgcttc ttgtgaaaat cctgaaaagg ctaaagaagc atactcgaaa 1260

gccttgtatg attctgtgac tagtcaatat gatgtgctgg agtctgccat acacggcaaa 1320

aaaggattag aagcatcaac tcccgcagtt tccttgtcgc agccatggaa gtag 1374

<210> 184

<211> 1967

<212> ДНК

<213> Glycine max

<400> 184

ggctgagact gaggagcgga tcctatctct ctttcacaca ctctccttct ctttcgtatg 60

aagaatgagc acgaccggtt cttcggctta ccactgtgtg gcacacctcc caaataataa 120

gactatgttt atgctctcta cgccgccaac aaccacattc ttcgctacgc ctagggttct 180

tccgtttctc tcttcaaaac tttcttcttc ttcttcttct tctactgcgt cgtcctcgcc 240

ttgttgctcc tccatcactc ccaaggttaa atccaaagat aacaacaatt gctacctcgt 300

ctccgctaaa cattctcccg ctaacatgtc cgcttcggtt tcgtcacgca ccttcctcaa 360

cgctcggaac gaacaagagc ttctagctgg aatcaggaaa gaagtagaag ctggatctct 420

gcctgctaat gttgctgcag gaatggaaga agtgtacaat aactataaaa gtgcagttat 480

ccaaagtgga gatcccaagt caaaggagat tgtattgtcg aatatgattg ctttattgga 540

tcgcatattc ttggatgtga cggatccttt tgtctttcaa ccacaccaca aagcaaagag 600

agagcctttt gactactacg tgtttggtca gaattatatc cgtcctttag ttgatttcaa 660

aaattcttat gttggcaaca tgcccctttt cattgaaatg gaagagaaac ttaagcaggg 720

acacaacatc atcttgatgt caaatcacca aactgaagct gatccagcca tcattgcttt 780

gctgctcgaa acacgactcc catatattgc tgaaaacatg acctatgtag caggagatag 840

agttataact gatcctctgt ccaaaccatt cagtattggc aggaatctca tttgtgttta 900

ctctaaaaag cacatgcttg atgatccagc tcttgtagag atgaaaagaa atgcaaatat 960

acgagctctg aaggaaatgg ctatgctttt aaggagtgga tcacaaatag tctggattgc 1020

cccaagtggt ggaagggatc gcccagatcc ccacaccgga gaatgggcac cggcaccctt 1080

tgatacttct tcggtagata atatgagaag acttgttgaa cattctggtc caccgggcca 1140

tgtatatcct ttggcgatat tgtgccatga tataatgccc cctccactaa aggttgagaa 1200

agaaattggg gagaaaagaa ttatatcctt tcatgggact ggcatatcag tggctccagc 1260

attaagcttt tctgaaacta ctgctactag tgaaaatcct gaaaaggcta aggaggtatt 1320

cacaaaagcc ctgtatgatt ctgtgacgga gcaatataat gtgctgaaat ctgcaataca 1380

tggcaaaaaa ggatttgaag catcaactcc agtagtttct ttgtcacagt catggaagta 1440

gatgaaatct gcatttcttc attgcaattt gctctgatgc agaagcaagt tacaagactt 1500

cagtcaaaca atttcaactg attcacttct gagggactgc ctattactac accggtcacc 1560

gaatgattta gcttgttgga agtttgcagt caaatacata tttttcattt catttttcct 1620

tttgctcttg gttgccgtta tcagcattca attcatctgg aatctgtttc agttcagaag 1680

gttcaaattc tgctgcttac tgtacaggtc tctcttagtt cggtgtcaga tttggttcgt 1740

tgactgataa aatactaaat tttttaccta caattttgtg atcaggctta gctagctgaa 1800

tagataaaat ataattggtt ccatttgtat tttaagtcaa ctttgttcca ttatagatga 1860

atagatgtta gtattacatg ttcagacggg gtcagtgaat aaactggtcc aaatgctaat 1920

gcaaaattat tcatattggt aaaataaaag ctctacagtt accgtta 1967

<210> 185

<211> 1674

<212> ДНК

<213> Carthamus tinctorius

<400> 185

tctctctctc tcacacacaa cacacaaaac acacactact gctactttct ctctctacta 60

cactctcctc tcgctatgtc gatcttcttc tctccttcct cccctactct cttcttctcc 120

accacaaacg caaatcctag ggtttctcct tcatcttcac cttcttctgc cttcactcct 180

cctctgtctt cttctcgcct ccgcccgatt ctccgggggt ttccgtgcct cgcgttctct 240

gcgccggcga atgccgccca tggcacggcg gagaccgtcc acggcaataa gtggccgtca 300

ccgtcgtcct cctcctctgc tgctacgcaa ccgtccgctg gatccgacca cggtcactct 360

cgtacattca tcgatgctcg ttccgaacaa gatcttcttt ctggaattca aagagagttg 420

gaagctggaa cactgccaaa acatattgct caagcaatgg aggagctata tcagaactac 480

aaaaatgcag ttctccaaag tgcggctcct catgcagaag atattgtgtt gtcaaacatg 540

cgtgtagcgt ttgatcgtat gttcttggat gtgaaggagc cgtttgaatt ttcaccatat 600

catgaagcta ttttggaacc ttttaactac tatatgtttg gtcaaaatta tattcggcct 660

ttggtcaatt tcagggaatc atacgttggc aatgtctccg ttttcggtgt aatggaagag 720

cagcttaagc agggtgacaa ggtggttttg atctcaaacc atcaaacaga agcagatcca 780

gctgttattg ccttgatgct tgaaacaaca aacccccata tttctgagaa cataatctac 840

gtggcagggg atagagtaat aacagatcct ctttgcaagc ctttcagcat gggaaggaat 900

ctgttgtgcg tgtattcaaa aaagcatatg aatgatgttc ctgagcttgc tgagatgaaa 960

aaaagatcaa atacaagaag tttaaaaggg aggatggctt tgcttttgag gggcggatct 1020

aaaataatat ggattgcgcc aagtggtggc agggacaggc cagatcctat cacaaatcag 1080

tggtttccgg caccgtttga tgccacttcg cttgacaaca tgagaaggct cgtggaccat 1140

gctggtttgg tgggtcacat atatccttta gccatattgt gccatgacat catgccccct 1200

cctcttcagg ttgagaaaga aattggagag aagagttgga tctcttttca tggcaccgga 1260

atatcagtgg caccggaaat taatttccaa gaagttactg cctcttgtgg gtcccccgag 1320

gaggcgaagg cagcttattc acaggcactc tatgattccg tgtgtgaaca atacaaggtg 1380

ctacattctg cggtacatgg aggaaaaggg ttagaagcat caacaccaag tgtctcgttg 1440

tcacaaccct tgcagtttct cgattagtct cttggtttag aggaggtgaa agcatattct 1500

tttgtttaga tgacataggt gtatagatga taccgaagaa tagatgtaca aacaagtgat 1560

agaaagatgt atgtctaatc aaaaaatgtt ttctgcatct tgtaaaggga tcttcaaaac 1620

agacctttta ttttagctgc agcaaccaat atatcaaaac aggtttttct tttt 1674

<210> 186

<211> 1893

<212> ДНК

<213> Solanum tuberosum

<400> 186

cgcacatatt catttcactc actttctttc ccgacccttt ctctctctaa agctctccag 60

tctgtggtga tgttgatcct ctcagcggct tcgtcttctt cttcctcctt catgctttct 120

tccgcttcgt cttcttctgc acgcattccg aggcagttat cttcattttc aacttgtgtt 180

ccagtagtag taacaactgt ttcttctgca gcaacttcga ctctatttcc gatttcctgc 240

ttcggtgtga aatcgaggac tgttgggatt cggaagctgc ggtgtgccgt tttttgtgct 300

tcgaaggtac gtggaatggc agaaatgatt gaagatgcca tgacggtttc tgcttctgag 360

agccatgagc ttccgcagtc ccgagacttc cttgacgcac gcactggaga agacttgcta 420

tctgctgttc aaaaagctgt ggaagatgaa aaactgccgc ttaatgttgc tgaaggaatg 480

gaggatttgt atcagaacta tcggaatgca gttttacaaa gtggagtccc caaagcagat 540

gaggccactt tgtataacat ggctcttgta tttgatcgtg tttttgtgga tgtgaaggat 600

ccttttgaat tctcgccata tcataaggcc attcgtgaac cttttgacta ttacaagttt 660

ggtcaaaatt atatccgcca gctagttgat ttcaggagtt cttatgttgg gaatatctca 720

gttttcggtg aaatggcaga gaagcttaaa cagggtgata atgttgtctt gatgtcaaac 780

catcaaagtg aagccgatcc tgcgattatt gcactcttga ttgaatcaaa gctcccagat 840

attgctgaga acattattta tgttgctgga gatagagtta ttactgatcc tctttgcaag 900

ccattcagca tgggaaggaa tctcctgtgt gtttattcga aaaaacatat gaatgatgac 960

cccgaacttg ctgagatgaa aaagagagca aacacaagaa gcttgaagga gatggctttg 1020

ctattgaggg gtggatcaaa aataatatgg attgctccta gtggtggaag agataggcca 1080

gaccctgtta caaacgaatg gtatccagca ccatttgatg cttccgcgac agacaacatg 1140

aggaggcttg tacaacatgc tggtgtccct ggtcacattt atcctctagc aattttgtgc 1200

catgatatta tgccccctcc cgcccaggtt gagaaaaata tcggggagaa aagagttgta 1260

tcttttcatg gagctggcat atctgtggca cccaaaattg attttcatga ggttgctggt 1320

gctttggagg accctgaggc taagatggta tatacaaagg cactttatga ctctgtaagc 1380

cagcagtaca atgtgctaaa ttctgctata catggcaaac aaggactgaa ggcatcaata 1440

cctagtgttt cattatcaca accatggcag tagcttctct tccaacttta tttttcatat 1500

cttgttgctg tagtcagttt tgcagatgtt tgtttggcag ttacaatcaa atcacaagga 1560

ttacactcac aatctttcca cataccacgc ttgcatgtgg ttagtctatg cagaaagttg 1620

atacaaacaa agtaattctc gaagttacag caaacataac ctgaaggaat ttttttggca 1680

gggttagata attcttttga cacgaatgta cagttgcttt acattgtatt tataccaaat 1740

gttagatcca aatttgttag taatgatagc tttcaagtac tcaattctga ctttttaagg 1800

tcaagtgtta gtagctatcc tagattgctg ctcatcttgc ctttgaagtg gtaatccaat 1860

ttgttgagaa atataataaa tgatgctctg cta 1893

<210> 187

<211> 2016

<212> ДНК

<213> Oryza sativa

<400> 187

gggctggaga tggagatgga gatggagatg gagggtgggt ttggcacaaa tcccgaagcg 60

ctccggcgac cactcccaac ccagtcccca ctagggtaac aacccccttt cggattaggt 120

ttctagaagc ttcttctatg caggcgccgc cgctcgcctc ctcgccgtcg ccggcgtgga 180

ccgccatcct gcccgcgccg gcgaggctct gctgctcccg ccgcggcgcc ctccgcctcg 240

aagccaaggc cgcctggagg ccggcggccc gagggccgcg ggtgccggcc aagggcgccg 300

tcctcgcctc cgaggtggtg ggcccctctc ccctcctcga cgcgcgcaac gagcaagagc 360

tcattttgca tatcagaaag gaagtggaga aagggaagct gcctgcagat gtcgctgcca 420

atctagaaga gctatactac aactacaagg acgcggttat gcagagcagg gatccaaatg 480

cacacgacat cgtgctttca aacatggtgg ccctgttcga ttgtgttctg ctcgatgtag 540

agaatccgtt tacctttccg ccttatcaca aagctgtcag ggaaccattc gactattaca 600

tgtttggtca gaactacatt aggccccttg tagactatag aaattcatat gttggtaata 660

tatccatttt ccaagacatg gaacagaagc tccaacaggg ccataatgtt gttctgatgt 720

ctaaccatca gacagaagca gatccagcaa tcattgcttt gctgcttgaa agaagcaacc 780

catggatcag cgaaaacata gtttatgttg ctggtgatag ggttgttaca gatcctctct 840

gcaagccatt tagtatggga agaaacctca tttgtgtgta ctcaaaaaag catatgaatg 900

attttcctga gctagttgat atgaagagga gggcaaatac tcgtagtctg aaggaaatgg 960

ctttactttt acgtggcggt tcacagataa tttggatagc accaagtggt ggtagagatc 1020

gtccggatcc tttgacagga gaatggcatc cggcaccatt tgatgcatct gcagtggaca 1080

acatgaggag gcttctggag cattctggtg ttcctgggca catatatcca ctctcactgc 1140

tctgctatga ggttatgcct ccaccacaga aggttgagaa agagattggt gagcaaaggg 1200

ttatatcctt ccatggtgta ggcttgtcag taactgaaga gataaagtac agcgacatta 1260

cggttcatac ccaaaatgtc gacgagtgca gagagaaatt ctcagagtca ttgtacaact 1320

cagtcgttga tcagtataat gcgctcaaat ctgctatctt tagaggtcga ggagcagatt 1380

catcggacag tgccatctca ctctcacaac catggcgatg aaactccgct ttctcagttt 1440

tgttctgtct ggatttctca atgaagttac cttcatttct tttcgacaca gcagatgaac 1500

tgctgccgac attgcaattt ttcctggcag aaccttttaa acttcggtat cctaacccat 1560

actaatcatg aaggggaggc tgttactgtc atgcaaatct tgcctagtat gatgatttta 1620

cccagctgaa tcccagccac acatgatgcg ttcgttcatt gtttgcacac aaatattatt 1680

gcgtcatatg agtattcttt gggtcagaac tgcacagcaa cgcggcctgg gcactcaatc 1740

tggcatgttg tctatggggt gcatgcttgt taacagaaga agcccaacat gtgggatttt 1800

gttttttgcg gttaattttt ttcctgtttt ccttttgttc catgtatata tattcgattt 1860

tgatctccag gtttggagat acaatggtca aagtgttatg atagtctctt agtttgttgc 1920

ctcgaagtta tactcgggcg caacatgtct gactgatatt ctgatgatgt tactcgtttc 1980

tgaacttcct gacgccaata tggtgcttgg atgttg 2016

<210> 188

<211> 1888

<212> ДНК

<213> Sorghum bicolor

<400> 188

atgcacgcgc cgccgctggt cgcgttcgca gggggcgcct gccccgccac cgccgcctcg 60

tcctcgccgt cgccctggct ggcctcgccg cgggccgcca tcctcgccgc gccggcgagg 120

ctcctacggt cccgccgcgg ggcacttcgg ctggaagcca aggccgcgtg gagggctgcc 180

ggagggggac ggggcccgag ggtcccggcc aagggcgctg tgctcgcctc ctatatgggc 240

gccgaggagg tggtgggacc ttcgtcgctg ctcgacgagg aagagctcat ttcacatatc 300

agaaaggaac tggataatgg aaaactccct gcagatgttg ccagtaatct ggaggagttg 360

tattataatt acaggaatgc tgttctgcaa aatggagatc ctaatgcata tgagatcatg 420

ctttcaaata tgacggcttt gtttgatcgt gttctactgg atgtacagaa tccatttacc 480

tttccacctt atcacaaagc tgtgcgagaa ccgttcgact attacatgtt tggtcagaac 540

tacattaggc ctctggtaga tttcaggaac tcctatgttg gcaacatttc actttttcat 600

gacatggaag agaagctgca ccagggccac aatgttgttt tgatgtctaa ccatcagaca 660

gaagcagatc cagcaattat ctccttgctt cttgaaaaaa ccaatccatg gattagtgaa 720

aacatagttt atgttgctgg agatagggtt gttatggatc cactttgcaa gccatttagc 780

atgggaagaa atctcatttg cgtgtactcg aaaaagcata tgaatgattt tcctgagcta 840

gttgagatga agaggagatc aaatacccga agtctcaagg aaatggcctt gcttttacgt 900

ggtggctcac agttaatttg gattgcacca agtggtggta gagaccgccc aaatccttca 960

acaggagaat ggtacccggc gccattcgat tcatctgcag tggacaatat gaggaggctt 1020

ctggagcatg ctggcgttcc tgggcacata tatccactat cattgctgtg ctatgaggtt 1080

atgcctccac cacaacaggt tgagaaagag attggtgagc agagggtgat atccttccat 1140

ggagtaggct tgtcagtaac tgaagaaata aaatatgggg atattactgc tcataccaag 1200

aatgctgatg agggaaggga gctattcaca aatactttgt acaactcagt tgttaatcag 1260

tacgatgtgc tcaaatctgc tatctttaga gatcgtggag cagctgtatc aaacaatgtc 1320

atctcattgt cacaaccatg gagatgaatg ttagctttct cagtttgggt ccagatttat 1380

tactgaagtt accttttcag aagagcaggt gaactgccat tgtgcaattt cactggagaa 1440

actcttgaac tttaatcttt ttgataccac tcgactttat cagtcatggt ggagcctgtc 1500

attgtcatgc agatccttgc taagaagtct gtggacaact gttggttggt caagggtgac 1560

tggtgattct gcacataggg atcctcgtaa ctgttgcatg cggtcgtccg caaattactg 1620

gttgctcagc aacgtgctgg ttgggcactg aggaatccgt caggttgcat cctttttgcc 1680

ttgacgtcaa tttgtgtagt tgaaggttga agtgataaat tgttttatct tgtcttgtca 1740

tcatgtatat aggctcgagt cttttttggc tccacatttt tttggagata taaaagcagc 1800

aggagttatg acatgccctc agtcggccct ccttgttgaa accctttgga tgtaacctgt 1860

ctatttctta tatatactca ctgaaagt 1888

<210> 189

<211> 2046

<212> ДНК

<213> Zea mays

<400> 189

gaggattcat ctcgtgtcga cgacgccttc gccctctccg agtctccgtc cgtcttccgc 60

gtcctccgca gctggactcg tgcgctattc cccaggacgc tactcccact agggttttcg 120

gattaggttt ctagaacctt ccaccgccgc ctctccatgc acgcgccgcc gctggtcacg 180

ttcgcagggg gcgcctgccc caccaccgcc tccgcttcgc cgtcgccctg gttggcctcg 240

ccgcgggacg ccatctttgc cgcgccggcg aggcccctac ggtcccgccg cgggacactc 300

cggctggaag ctaaggccgc gtggagggct gccggagggg gacggggccc gcgggtcccg 360

gccaagggcg ctgtgctcgc ctcctatatg ggcgccgagg aggtggtggg accatcgtcg 420

ctgcttgacg aggaagagtt catttctcac atcagaaagg aactggataa tggaaaactt 480

cctgcagatg ttgccagtaa cctggaggag ctgtattata attacaggaa tgcggttctg 540

caaaatggag atccaaatgc atatgaggtc atgctttcaa atatgatgac cttgtttgat 600

cgtgttctac tggatgtaca gaatccattt aactttccac cttatcataa agctttgcga 660

gaaccgttcg actattacat gtttggtcag aactacatta ggcctctggt agatttcagg 720

aactcctatg ttggcaacat ttcccttttc catgatatcg aagagaatct ccaccagggc 780

cacaatgttg ttttgatgtc taaccatcag tcagaagcag atccagcaat tattgccttg 840

cttcttgaaa aaaccaatcc ttggattagt gaaaacatag tttatgttgc tggcgatagg 900

gttgttaccg atccgctttg caagccattt agcatgggaa gaaatctcat ttgcgtgtac 960

tcgaaaaagc atatgaatga tttccctgag ctaattgaga tgaagaggag atcaaatact 1020

cgaagtctca aggaaatggc attgctttta cgtggtggtt cacagttaat ttggattgca 1080

ccgagtggtg gtagagaccg cccaaatccc tcatcaggag aatggtaccc ggcaccattc 1140

gattcatctg cagtggacaa tatgaggagg cttctggagc atgctggtgt tcctgggcac 1200

atatatccac tatcattgct gtgctatgag gttatgcctc caccacaaca ggttgagaag 1260

gagattggtg agcagagggt gatatccttc catggagcag gcttgtcagt aactgaagaa 1320

ataaactatg gagacattac tgctcatacc aagaatgctg atgagggaag ggagctattc 1380

acaaatacct tgtacaactc agttgttaac cagtacaatg tgctcaaatc tgctatcttt 1440

agagatcgtg gagcagctgt atcaaacaat gtcatctcac tgtcacaacc atggcgatga 1500

atgtccagtt tcgttactga agttaccttt tcaaaagagc aggtgaacta tcattgtgca 1560

attttgctgg gagaaactct tgaacttaaa tctttttgat atcactagac ttcatcaatc 1620

atggtggagc ctgttattgt catgcagatg ctcgctaaga agtctgcaac tgttggttgg 1680

tcaagggtga ttggcgattt tgcacatacg gatccgcagt tactgctgcc tcaggttgct 1740

cagcaatgtg ctgctggttg ggcaccgagg aatccatcag gttgcatcct ttttgcccgg 1800

acgtcgattt gtgcagttga agtggtaaac gtttttttat cttgtttcgt catcatgtat 1860

atacgtaggc ttgagtcatt gttggctcca cattttttgg agatataaat gcggtaggag 1920

ttatgagatg tccacagtcg gccctccctt gttgaattcc tttggatgta tcctctctct 1980

ttcgtacatg cactcactga aagtcaatgc aaatatctcg tgtttctagt aaaaaaaaaa 2040

aaaaaa 2046

<210> 190

<211> 1994

<212> ДНК

<213> Hordeum vulgare

<400> 190

gagaaaccaa gaagcgagaa tcggcaccgt tcccgtcgcc gcctcgtcgc ctccgtcgcc 60

cgtcttcctt ttccgccgat tcgtgcccac caccaccact ctccttccca ctggctaggg 120

ttttcggttt ctagaacctc acgcccgccc gctccatgca agccccgccg ctcgccgcgc 180

tcgccggagg cgcctgggcc tctcaccgac ctgccatact agcggcgccg gcgggcctcc 240

gccgtcccag gcgctgcgcc ctccggctgc ccgcgtggag ggcggccgga ggcggccggg 300

ccccgcggct accggtcaag ggcgccgtgc tcgcctccga cacgggggcg gacgaggagg 360

tcgcggggcc atcgcccctg ctcgacgtgc gcagcgagca agagttcgtt ctacgcgtca 420

ggaaggaagt ggagagaggg aagttgcgtc cagatgttgc tgacaacttt gaaaacctgt 480

actgcaatta caagaatgcg gtgctacaaa atggggatcc aaatgcatat cagatcatgc 540

tttccaacat gatggattta tttgaccgcg ttctgctaga tgcagagaat ccatttacgt 600

ttcagcctta tcacaaggcc atcagagaac cgtttgacta ttacactttc ggtcagaact 660

acattaggcc actggtagat tttaggaact cttatgtcgg taacatttct gtattcagtg 720

atatggagaa gcagctccgg cagggtcata atgttgttct gatgtctaat catcagacag 780

aagcggatcc agcagttatt gccttgtcac ttgaaagaag caatccgtgg attagcgaga 840

acatagttta tgttgctggg gatagggttc ttacagatcc tctttgcaag ccatttagca 900

tgggaagaaa cctcctttgt gtgtactcaa aaaagcatat gaatgatttt cctgagctaa 960

ttgagatgaa gaggagggca aacactcgaa gtctcaagga aatggctttg cttttacgtg 1020

ggggttcaca tataatttgg atagctccga gtggcggtag agaccgtcct gaccccttga 1080

ctggagaatg gcacccggcg ccatttgatg catctgcagt ggataatatg aggaggcttc 1140

tggagcattc tggcgttcct gggcacatat atccattatc attgctatgc tatgagatta 1200

tgcctccacc acaacagatt gagaaagaga ttggtgagca aagggtgata tccttccatg 1260

gtgtaggctt gtcagtagct gaagaaataa agtatgggga tgttactgct caatctcaga 1320

atgctgatga ggcaaggggg aacttctcag aggctctgta cagttcagtt gttgatcaat 1380

ataatgtcct caagtctgct atctttagag accgtggagc agtttcgtcg aaccctgcca 1440

tctcactctc gcaaccatgg cggtgaaact aagctttctc aggcctggat ttctcatttc 1500

ttttcgacag agcagatgaa ctgctatagt gcaacgttgt ggttttttgc tgggatggcc 1560

ttaaactttg atgtcgtcac agttaggatg aggccctgca gatcctgtaa gttgttgaag 1620

tcgcgggaag gaaaaaccgt gtgatatgct gctacaccgt gttcatgtag tgacaggaag 1680

tctgcggctg ttgtcaggtc taaatcctaa atagcacggc ggaacccagc agcagatgat 1740

gcatgtgttc atcttttgtg aacagctact gctgtatcag atggctatca tctgggccag 1800

attggtccag caaatacaga ttggcccctg gatcctggca gtcgtctgga tcaaaatgct 1860

gatatttctt tttgtgctcg tcttattttt ttgattagtt ttgtgtacat attaattctt 1920

ttgctccaaa atttggagac acatgacatg atatatacag agcagagccc aatatgtgtc 1980

gccttcctgt taac 1994

<210> 191

<211> 1936

<212> ДНК

<213> Physcomitrella patens

<400> 191

ggacgagcgg agtggagagc tatggcggca gcagctggtt ccgctggcgt ggtatgttgg 60

tctagggcag agaagcagca tgccccggtc agggggggtg gaactagtgt taccagtagt 120

accagtggca gcggccatgc gtcgttgaaa gggagcttcg atcggctcca aggtaaccgc 180

cttctgccgc aagccttgac tatgccgtcg ctgtttcggg cgaaacgcaa tggcagaagg 240

acgccgggga atgccgtgac caatttcggg aaatctgaat tccatcgtga aattagtggg 300

agtacgcggg cgaccacgca ggtggctgaa gccaccacag ctggtcttag ggagaccatt 360

gaggaccgcg ctattatcga cggtcattct cacagttttg aaggaattca atcggaagaa 420

gagttgatgc aggtaattga aaaggaggtg gaatccggtc ggctgccgaa gcgtgctggc 480

gcgggaatgg tagagttgta tcgcaattat cgagatgctg tagtgagcag tggcgtagaa 540

aatgcgatgg atattgttgt gaaagtcatg tcaactgtgt tggaccggat tcttctgcag 600

ttcgaggagc cattcacatt tggatcgcac cacaagagaa tggtggagcc gtatgattac 660

tacacatttg gtcagaacta tgtgcgtcct ctcctagatt tcaggaactc ttaccttggg 720

aacttaaaga tctttgacca gatagagaag aacctgaaag aggggcacaa cgtcattttt 780

ctatccaatc accagactga ggcagatcct gctgttatgg cgctgttgct tgagcactct 840

cacccctatt tggcagagaa cttgacctat gtggctggag acagggttgt gctggatcca 900

ttctgcaaac cttttagtat gggcaggaat ctcttgtgcg tgtattcaaa aaagcacatt 960

cacgatgtac cggaccttgc tgaaatgaaa atcaaagcta atgcgaagac tttgagacag 1020

atgacgatcc tgctgaggca gggaggtcaa ttattatggg tagcacccag tggtggacgc 1080

gatcgccctg atcctgagac caacgaatgg gttcctgcac attttgactc gtctgctgtg 1140

gagaatatga agcgactatc tgacattgtc cgagtacctg ctcatttaca tgccctatca 1200

ttactatgtt ttgagattat gccacctcct gtccaggtac aaaaggagct aggagagcga 1260

agagcagtag gatttagcgg agttggtcta gccgtttccg agcaactaga ttatgattcc 1320

attgcgaagt tagtcgacga ttccaaaaat gcgaaggatg ccttttcgga tgcggcatgg 1380

agcgaagtca atgatatgta taacgtgtta aaagaagcaa tttatggtga ccaaggttgt 1440

gctgttagca cagattcctt gagactggaa cagccctggt ttgatggaag caggcgaact 1500

gattgaaaat aggtcatttg aagttttatg taaaagtatg aagcatcctt attgcttttt 1560

acgctgtcta agctccaagg atgtaagaat tcagcagcgt gtataatggc tacattgtca 1620

tgtgatattc tttctgattc gtgcgacacg atggccatgc ctgctcaatc cttgtcacca 1680

ggcgtctcag taggaaacgg tggtactgat tgctgtctgt ccgacttgat ttagtagctc 1740

ggattctgcg tactggataa cttggtctgg taatagggac cgatcctatc ggtgaggagt 1800

ttgtgatata gatcaatact gcactttgtt acaatcggaa tagatgcatt cattattcat 1860

ccaagccaac acatcctgag ttggagcata agttgaagca ctcctcaact tcattgaaag 1920

gagatttctc actacg 1936

<210> 192

<211> 2260

<212> ДНК

<213> Chlamydomonas reinhardtii

<400> 192

gaagaatgct gcacgcgact cagcagcgcg cggtcgctgg ccgtcgcccg ttctcgggtg 60

cgcgcgcgtc gaaccgcgtt gttgctcacg cggctgcgac cgtcgccacc agtctgccga 120

ccgttgacgt ccagttccac cagcctaagc tggcgggcgt gaccaacgag cagcagttca 180

aggcggtaat caaggggctg gtcgctcagg gcaagttccc tccgcagctg gagcccgctt 240

gggattactt ctatgacaac tacaagaagg ctgtcaccag cagtggcgtc gctggggccg 300

atgagaagct tgtcacccag gtgcaagcca gcattctgga caatgtcctg aaccaggcgg 360

tgaaccccta caccttcccc tctttccaca cccgcctaat tgagccctac aactactatg 420

acttcggtca gcgctacgtc gcgaccctca tcgacttcca gaactccgtg ctgggtttcc 480

gcgagcgttt cgaccgcgtt caggagctgc tggaccagaa gcacaacgtt gttatcctcg 540

cgaaccacca gacggaggcc gaccccggtg tgtttgccca tatgctggcg aagacgcacc 600

ctaagctggc gacggatgtg atctacgtcg ctggcgaccg cgttgtcacc gatccgatgt 660

gcaagccctt ctccatgggc cgcaacctct tctgcgtgca ctccaagaag cacatggacg 720

acgctccgga gctgaaggcc gcaaagatgg agaccaaccg caagacgctg gtcgccatgc 780

aacgcaagct gaacgagggc ggcacgctca tgtggatcgc ccccagcggc ggccgcgacc 840

gccccaacgc caacgacgag tgggtgcccg ataactttga tcccgccgcc gtggagctga 900

tgcgcaacct ggtgcagcgc gccaagcagc cgggccacct gatgcccatg tccatgttca 960

gctaccccat gatgccgccg cccaagaccg tggacaagtc cattggcgag cgccgcctca 1020

cggccttcac gggcgtgggc atctccctgt gcgaggagct ggacgtggcg gccatcatcg 1080

cggccagcgg ctcggaggag aaggagcaga aggctctggc caaggccgcg cacgacgcgg 1140

tgaaggagtc gtacgcggtg ctgtccaagg ccatccagga tcccgccttc cgcgccaccc 1200

gcaaggagtt cacacagccc tggatggcgt aaggaggcgg gagcagcagc ggcagtggcg 1260

gcagcgacag cagtggcgga tcttgggggc acgaggcagc agctagcaca cgcggggccg 1320

gtggcggcag cggacgggag aggtgctggt gcggatgctg gtgccaggag cagtgcgtct 1380

atgcctggcg gcggcgccga ccggtgctga agctgttgtc ggcagcagca gcgggaactt 1440

gcgctggcga tggctgaagg tgatgtggct ggccgtacag caaatgctgc tgtcacgcat 1500

tgtcagcggc ggccgctggg tccgctggga tgtgaggagt gcgagatcag cataggccag 1560

gcgggtgggt tgcggtgccg ctgccgacac gtcgcacagg aaggagcagg aagggtgcgg 1620

ctgagcacca gggtcacttg gggcctgtgt tagcgtgacc gggcctgaaa ggggtatttg 1680

tctggggagc agctcgacgc acattcgtgg gattgcttag gaaggagcgt tgggatggct 1740

gtgccgcgcg gtgtgcccag cacgttgact ggctctgacc cgggtcaacc aatgcgttgc 1800

ggccgttgca acgatgcttc taatcagcgt gagatggagt gtacgaatgc aggtatgacg 1860

atgaccatag acgagtgtga gcgtgtgtat ctgtggattg gacacggttc attcaatcca 1920

ttcgtaccgg acatatgact atacaagacc gtgtggagtg tgtttgtgcg ctcaagactg 1980

gacgaagtgg gcgctcccga tgtggagcgc ggtgctcgcg ggttgtgtgt cttgccgcaa 2040

cgcaagcagc gtggcgtggt gtggatgatt cttgcattat gactggggtt ttaccggcgg 2100

cccagagcgt gtgtggagca aaagcaaaaa caggaacaag gagccgtgtg cacaattcgc 2160

gcggatggtg gtggctgggg atctgacagg agagtgccaa cggcggccgg gtgctagtgc 2220

ttgaacatca tgtgatattg tgattgtaca aatggactgc 2260

<210> 193

<211> 382

<212> Белок

<213> Cinnamomum camphora

<400> 193

Met Ala Thr Thr Ser Leu Ala Ser Ala Phe Cys Ser Met Lys Ala Val

1 5 10 15

Met Leu Ala Arg Asp Gly Arg Gly Met Lys Pro Arg Ser Ser Asp Leu

20 25 30

Gln Leu Arg Ala Gly Asn Ala Gln Thr Ser Leu Lys Met Ile Asn Gly

35 40 45

Thr Lys Phe Ser Tyr Thr Glu Ser Leu Lys Lys Leu Pro Asp Trp Ser

50 55 60

Met Leu Phe Ala Val Ile Thr Thr Ile Phe Ser Ala Ala Glu Lys Gln

65 70 75 80

Trp Thr Asn Leu Glu Trp Lys Pro Lys Pro Asn Pro Pro Gln Leu Leu

85 90 95

Asp Asp His Phe Gly Pro His Gly Leu Val Phe Arg Arg Thr Phe Ala

100 105 110

Ile Arg Ser Tyr Glu Val Gly Pro Asp Arg Ser Thr Ser Ile Val Ala

115 120 125

Val Met Asn His Leu Gln Glu Ala Ala Leu Asn His Ala Lys Ser Val

130 135 140

Gly Ile Leu Gly Asp Gly Phe Gly Thr Thr Leu Glu Met Ser Lys Arg

145 150 155 160

Asp Leu Ile Trp Val Val Lys Arg Thr His Val Ala Val Glu Arg Tyr

165 170 175

Pro Ala Trp Gly Asp Thr Val Glu Val Glu Cys Trp Val Gly Ala Ser

180 185 190

Gly Asn Asn Gly Arg Arg His Asp Phe Leu Val Arg Asp Cys Lys Thr

195 200 205

Gly Glu Ile Leu Thr Arg Cys Thr Ser Leu Ser Val Met Met Asn Thr

210 215 220

Arg Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile

225 230 235 240

Gly Pro Ala Phe Ile Asp Asn Val Ala Val Lys Asp Glu Glu Ile Lys

245 250 255

Lys Pro Gln Lys Leu Asn Asp Ser Thr Ala Asp Tyr Ile Gln Gly Gly

260 265 270

Leu Thr Pro Arg Trp Asn Asp Leu Asp Ile Asn Gln His Val Asn Asn

275 280 285

Ile Lys Tyr Val Asp Trp Ile Leu Glu Thr Val Pro Asp Ser Ile Phe

290 295 300

Glu Ser His His Ile Ser Ser Phe Thr Ile Glu Tyr Arg Arg Glu Cys

305 310 315 320

Thr Met Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Thr Val Ser Gly Gly Ser

325 330 335

Ser Glu Ala Gly Leu Val Cys Glu His Leu Leu Gln Leu Glu Gly Gly

340 345 350

Ser Glu Val Leu Arg Ala Lys Thr Glu Trp Arg Pro Lys Leu Thr Asp

355 360 365

Ser Phe Arg Gly Ile Ser Val Ile Pro Ala Glu Ser Ser Val

370 375 380

<210> 194

<211> 417

<212> Белок

<213> Cocos nucifera

<400> 194

Met Val Ala Ser Val Ala Ala Ser Ala Phe Phe Pro Thr Pro Ser Phe

1 5 10 15

Ser Ser Thr Ala Ser Ala Lys Ala Ser Lys Thr Ile Gly Glu Gly Ser

20 25 30

Glu Ser Leu Asp Val Arg Gly Ile Val Ala Lys Pro Thr Ser Ser Ser

35 40 45

Ala Ala Met Gln Gly Lys Val Lys Ala Gln Ala Val Pro Lys Ile Asn

50 55 60

Gly Thr Lys Val Gly Leu Lys Thr Glu Ser Gln Lys Ala Glu Glu Asp

65 70 75 80

Ala Ala Pro Ser Ser Ala Pro Arg Thr Phe Tyr Asn Gln Leu Pro Asp

85 90 95

Trp Ser Val Leu Leu Ala Ala Val Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu

100 105 110

Lys Gln Trp Thr Leu Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Pro Asp Met Leu

115 120 125

Thr Asp Ala Phe Ser Leu Gly Lys Ile Val Gln Asp Gly Leu Ile Phe

130 135 140

Arg Gln Asn Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Thr

145 150 155 160

Ala Ser Ile Glu Thr Leu Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn

165 170 175

His Val Arg Asn Ala Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ala Thr Pro

180 185 190

Glu Met Ser Lys Arg Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Lys Met Gln Val

195 200 205

Leu Val Glu His Tyr Pro Ser Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr

210 215 220

Trp Val Gly Ala Ser Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp His Val

225 230 235 240

Arg Asp Tyr Arg Thr Gly Gln Thr Ile Leu Arg Ala Thr Ser Val Trp

245 250 255

Val Met Met Asn Lys His Thr Arg Lys Leu Ser Lys Met Pro Glu Glu

260 265 270

Val Arg Ala Glu Ile Gly Pro Tyr Phe Val Glu His Ala Ala Ile Val

275 280 285

Asp Glu Asp Ser Arg Lys Leu Pro Lys Leu Asp Asp Asp Thr Ala Asp

290 295 300

Tyr Ile Lys Trp Gly Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn

305 310 315 320

Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala

325 330 335

Pro Ile Ser Ile Leu Glu Asn His Glu Leu Ala Ser Met Thr Leu Glu

340 345 350

Tyr Arg Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala

355 360 365

Ile Ser Asn Asp Cys Thr Gly Gly Leu Pro Glu Ala Ser Ile Glu Cys

370 375 380

Gln His Leu Leu Gln Leu Glu Cys Gly Ala Glu Ile Val Arg Gly Arg

385 390 395 400

Thr Gln Trp Arg Pro Arg Arg Ala Ser Gly Pro Thr Ser Ala Gly Ser

405 410 415

Ala

<210> 195

<211> 423

<212> Белок

<213> Cocos nucifera

<400> 195

Met Val Ala Ser Ile Ala Ala Ser Ala Phe Phe Pro Thr Pro Ser Ser

1 5 10 15

Ser Ser Ser Ala Ala Ser Ala Lys Ala Ser Lys Thr Ile Gly Glu Gly

20 25 30

Pro Gly Ser Leu Asp Val Arg Gly Ile Val Ala Lys Pro Thr Ser Ser

35 40 45

Ser Ala Ala Met Gln Glu Lys Val Lys Val Gln Pro Val Pro Lys Ile

50 55 60

Asn Gly Ala Lys Val Gly Leu Lys Val Glu Thr Gln Lys Ala Asp Glu

65 70 75 80

Glu Ser Ser Pro Ser Ser Ala Pro Arg Thr Phe Tyr Asn Gln Leu Pro

85 90 95

Asp Trp Ser Val Leu Leu Ala Ala Val Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala

100 105 110

Glu Lys Gln Trp Thr Leu Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Pro Asp Met

115 120 125

Leu Ala Asp Ala Phe Gly Leu Gly Lys Ile Val Gln Asp Gly Leu Val

130 135 140

Phe Lys Gln Asn Phe Ser Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg

145 150 155 160

Thr Ala Ser Ile Glu Thr Leu Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu

165 170 175

Asn His Val Lys Ser Ala Gly Leu Met Gly Asp Gly Phe Gly Ala Thr

180 185 190

Pro Glu Met Ser Lys Arg Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Lys Met Arg

195 200 205

Val Leu Ile Glu Arg Tyr Pro Ser Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp

210 215 220

Thr Trp Val Gly Pro Thr Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp His

225 230 235 240

Val Arg Asp His Arg Ser Gly Gln Thr Ile Leu Arg Ala Thr Ser Val

245 250 255

Trp Val Met Met Asn Lys Asn Thr Arg Lys Leu Ser Lys Val Pro Glu

260 265 270

Glu Val Arg Ala Glu Ile Gly Pro Tyr Phe Val Glu Arg Ala Ala Ile

275 280 285

Val Asp Glu Asp Ser Arg Lys Leu Pro Lys Leu Asp Glu Asp Thr Thr

290 295 300

Asp Tyr Ile Lys Lys Gly Leu Thr Pro Arg Trp Gly Asp Leu Asp Val

305 310 315 320

Asn Gln His Val Asn Asn Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser

325 330 335

Ala Pro Ile Ser Ile Leu Glu Asn His Glu Leu Ala Ser Met Ser Leu

340 345 350

Glu Tyr Arg Arg Glu Cys Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr

355 360 365

Ala Val Ser Asn Asp Leu Thr Asp Gly Leu Val Glu Ser Gly Ile Glu

370 375 380

Cys Gln His Leu Leu Gln Leu Glu Cys Gly Thr Glu Leu Val Lys Gly

385 390 395 400

Arg Thr Glu Trp Arg Pro Lys His Ser Pro Ala Leu Gly Asn Met Gly

405 410 415

Pro Thr Pro Gly Gly Ser Ala

420

<210> 196

<211> 414

<212> Белок

<213> Cocos nucifera

<400> 196

Met Val Ala Ser Val Ala Ala Ser Ser Ser Phe Phe Pro Val Pro Ser

1 5 10 15

Ser Ser Ser Ser Ala Ser Ala Lys Ala Ser Arg Gly Ile Pro Asp Gly

20 25 30

Leu Asp Val Arg Gly Ile Val Ala Lys Pro Ala Ser Ser Ser Gly Trp

35 40 45

Met Gln Ala Lys Ala Ser Ala Arg Ala Ile Pro Lys Ile Asp Asp Thr

50 55 60

Lys Val Gly Leu Arg Thr Asp Val Glu Glu Asp Ala Ala Ser Thr Ala

65 70 75 80

Arg Arg Thr Ser Tyr Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met Leu Leu Ala

85 90 95

Ala Ile Arg Thr Ile Phe Ser Ala Ala Glu Lys Gln Trp Thr Leu Leu

100 105 110

Asp Ser Lys Lys Arg Gly Ala Asp Ala Val Ala Asp Ala Ser Gly Val

115 120 125

Gly Lys Met Val Lys Asn Gly Leu Val Tyr Arg Gln Asn Phe Ser Ile

130 135 140

Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Val Asp Lys Arg Ala Ser Val Glu Ala Leu

145 150 155 160

Met Asn His Phe Gln Glu Thr Ser Leu Asn His Cys Lys Cys Ile Gly

165 170 175

Leu Met His Gly Gly Phe Gly Cys Thr Pro Glu Met Thr Arg Arg Asn

180 185 190

Leu Ile Trp Val Val Ala Lys Met Leu Val His Val Glu Arg Tyr Pro

195 200 205

Trp Trp Gly Asp Val Val Gln Ile Asn Thr Trp Ile Ser Ser Ser Gly

210 215 220

Lys Asn Gly Met Gly Arg Asp Trp His Val His Asp Cys Gln Thr Gly

225 230 235 240

Leu Pro Ile Met Arg Gly Thr Ser Val Trp Val Met Met Asp Lys His

245 250 255

Thr Arg Arg Leu Ser Lys Leu Pro Glu Glu Val Arg Ala Glu Ile Thr

260 265 270

Pro Phe Phe Ser Glu Arg Asp Ala Val Leu Asp Asp Asn Gly Arg Lys

275 280 285

Leu Pro Lys Phe Asp Asp Asp Ser Ala Ala His Val Arg Arg Gly Leu

290 295 300

Thr Pro Arg Trp His Asp Phe Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn Val

305 310 315 320

Lys Tyr Val Gly Trp Ile Leu Glu Ser Val Pro Val Trp Met Leu Asp

325 330 335

Gly Tyr Glu Val Ala Thr Met Ser Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys Arg

340 345 350

Met Asp Ser Val Val Gln Ser Leu Thr Ala Val Ser Ser Asp His Ala

355 360 365

Asp Gly Ser Pro Ile Val Cys Gln His Leu Leu Arg Leu Glu Asp Gly

370 375 380

Thr Glu Ile Val Arg Gly Gln Thr Glu Trp Arg Pro Lys Gln Gln Ala

385 390 395 400

Arg Asp Leu Gly Asn Met Gly Leu His Pro Thr Glu Ser Lys

405 410

<210> 197

<211> 419

<212> Белок

<213> Cuphea lanceolata

<400> 197

Met Val Ala Ala Ala Ala Thr Ser Ala Phe Phe Pro Val Pro Ala Pro

1 5 10 15

Gly Thr Ser Pro Lys Pro Gly Lys Ser Gly Asn Trp Pro Ser Ser Leu

20 25 30

Ser Pro Thr Phe Lys Pro Lys Ser Ile Pro Asn Ala Gly Phe Gln Val

35 40 45

Lys Ala Asn Ala Ser Ala His Pro Lys Ala Asn Gly Ser Ala Val Asn

50 55 60

Leu Lys Ser Gly Ser Leu Asn Thr Gln Glu Asp Thr Ser Ser Ser Pro

65 70 75 80

Pro Pro Arg Ala Phe Leu Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met Leu Leu

85 90 95

Thr Ala Ile Thr Thr Val Phe Val Ala Ala Glu Lys Gln Trp Thr Met

100 105 110

Leu Asp Arg Lys Ser Lys Arg Pro Asp Met Leu Val Asp Ser Val Gly

115 120 125

Leu Lys Ser Ile Val Arg Asp Gly Leu Val Ser Arg Gln Ser Phe Leu

130 135 140

Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Thr Ala Ser Ile Glu Thr

145 150 155 160

Leu Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ser Ile Asn His Cys Lys Ser Leu

165 170 175

Gly Leu Leu Asn Asp Gly Phe Gly Arg Thr Pro Gly Met Cys Lys Asn

180 185 190

Asp Leu Ile Trp Val Leu Thr Lys Met Gln Ile Met Val Asn Arg Tyr

195 200 205

Pro Thr Trp Gly Asp Thr Val Glu Ile Asn Thr Trp Phe Ser Gln Ser

210 215 220

Gly Lys Ile Gly Met Ala Ser Asp Trp Leu Ile Ser Asp Cys Asn Thr

225 230 235 240

Gly Glu Ile Leu Ile Arg Ala Thr Ser Val Trp Ala Met Met Asn Gln

245 250 255

Lys Thr Arg Arg Phe Ser Arg Leu Pro Tyr Glu Val Arg Gln Glu Leu

260 265 270

Thr Pro His Phe Val Asp Ser Pro His Val Ile Glu Asp Asn Asp Gln

275 280 285

Lys Leu His Lys Phe Asp Val Lys Thr Gly Asp Ser Ile Arg Lys Gly

290 295 300

Leu Thr Pro Arg Trp Asn Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Ser Asn

305 310 315 320

Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Met Pro Ile Glu Val Leu

325 330 335

Glu Thr Gln Glu Leu Cys Ser Leu Thr Val Glu Tyr Arg Arg Glu Cys

340 345 350

Gly Met Asp Ser Val Leu Glu Ser Val Thr Ala Val Asp Pro Ser Glu

355 360 365

Asn Gly Gly Arg Ser Gln Tyr Lys His Leu Leu Arg Leu Glu Asp Gly

370 375 380

Thr Asp Ile Val Lys Ser Arg Thr Glu Trp Arg Pro Lys Asn Ala Gly

385 390 395 400

Thr Asn Gly Ala Ile Ser Thr Ser Thr Ala Lys Thr Ser Asn Gly Asn

405 410 415

Ser Ala Ser

<210> 198

<211> 419

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Cuphea viscosissima

<400> 198

Met Val Ala Ala Ala Ala Thr Ser Ala Phe Phe Pro Val Pro Ala Pro

1 5 10 15

Gly Thr Ser Pro Lys Pro Gly Lys Ser Gly Asn Trp Pro Ser Ser Leu

20 25 30

Ser Pro Thr Phe Lys Pro Lys Ser Ile Pro Asn Gly Gly Phe Gln Val

35 40 45

Lys Ala Asn Ala Ser Ala His Pro Lys Ala Asn Gly Ser Ala Val Asn

50 55 60

Leu Lys Ser Gly Ser Leu Asn Thr Gln Glu Asp Thr Ser Ser Ser Pro

65 70 75 80

Pro Pro Arg Ala Phe Leu Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met Leu Leu

85 90 95

Thr Ala Ile Thr Thr Val Phe Val Ala Ala Glu Lys Gln Trp Thr Met

100 105 110

Leu Asp Arg Lys Ser Lys Arg Pro Asp Met Leu Val Asp Ser Val Gly

115 120 125

Leu Lys Ser Ile Val Arg Asp Gly Leu Val Ser Arg His Ser Phe Ser

130 135 140

Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Thr Ala Ser Ile Glu Thr

145 150 155 160

Leu Met Asn His Leu Gln Glu Thr Thr Ile Asn His Cys Lys Ser Leu

165 170 175

Gly Leu His Asn Asp Gly Phe Gly Arg Thr Pro Gly Met Cys Lys Asn

180 185 190

Asp Leu Ile Trp Val Leu Thr Lys Met Gln Ile Met Val Asn Arg Tyr

195 200 205

Pro Thr Trp Gly Asp Thr Val Glu Ile Asn Thr Trp Phe Ser Gln Ser

210 215 220

Gly Lys Ile Gly Met Ala Ser Asp Trp Leu Ile Ser Asp Cys Asn Thr

225 230 235 240

Gly Glu Ile Leu Ile Arg Ala Thr Ser Val Trp Ala Met Met Asn Gln

245 250 255

Lys Thr Arg Arg Phe Ser Arg Leu Pro Tyr Glu Val Arg Gln Glu Leu

260 265 270

Thr Pro His Phe Val Asp Ser Pro His Val Ile Glu Asp Asn Asp Gln

275 280 285

Lys Leu Arg Lys Phe Asp Val Lys Thr Gly Asp Ser Ile Arg Lys Gly

290 295 300

Leu Thr Pro Arg Trp Asn Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Ser Asn

305 310 315 320

Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Met Pro Ile Glu Val Leu

325 330 335

Glu Thr Gln Glu Leu Cys Ser Leu Thr Val Glu Tyr Arg Arg Glu Cys

340 345 350

Gly Met Asp Ser Val Leu Glu Ser Val Thr Ala Val Asp Pro Ser Glu

355 360 365

Asn Gly Gly Arg Ser Gln Tyr Lys His Leu Leu Arg Leu Glu Asp Gly

370 375 380

Thr Asp Ile Val Lys Ser Arg Thr Glu Trp Arg Pro Lys Asn Ala Gly

385 390 395 400

Thr Asn Gly Ala Ile Ser Thr Ser Thr Ala Lys Thr Ser Asn Gly Asn

405 410 415

Ser Val Ser

<210> 199

<211> 382

<212> Белок

<213> Umbellularia californica

<400> 199

Met Ala Thr Thr Ser Leu Ala Ser Ala Phe Cys Ser Met Lys Ala Val

1 5 10 15

Met Leu Ala Arg Asp Gly Arg Gly Met Lys Pro Arg Ser Ser Asp Leu

20 25 30

Gln Leu Arg Ala Gly Asn Ala Pro Thr Ser Leu Lys Met Ile Asn Gly

35 40 45

Thr Lys Phe Ser Tyr Thr Glu Ser Leu Lys Arg Leu Pro Asp Trp Ser

50 55 60

Met Leu Phe Ala Val Ile Thr Thr Ile Phe Ser Ala Ala Glu Lys Gln

65 70 75 80

Trp Thr Asn Leu Glu Trp Lys Pro Lys Pro Lys Leu Pro Gln Leu Leu

85 90 95

Asp Asp His Phe Gly Leu His Gly Leu Val Phe Arg Arg Thr Phe Ala

100 105 110

Ile Arg Ser Tyr Glu Val Gly Pro Asp Arg Ser Thr Ser Ile Leu Ala

115 120 125

Val Met Asn His Met Gln Glu Ala Thr Leu Asn His Ala Lys Ser Val

130 135 140

Gly Ile Leu Gly Asp Gly Phe Gly Thr Thr Leu Glu Met Ser Lys Arg

145 150 155 160

Asp Leu Met Trp Val Val Arg Arg Thr His Val Ala Val Glu Arg Tyr

165 170 175

Pro Thr Trp Gly Asp Thr Val Glu Val Glu Cys Trp Ile Gly Ala Ser

180 185 190

Gly Asn Asn Gly Met Arg Arg Asp Phe Leu Val Arg Asp Cys Lys Thr

195 200 205

Gly Glu Ile Leu Thr Arg Cys Thr Ser Leu Ser Val Leu Met Asn Thr

210 215 220

Arg Thr Arg Arg Leu Ser Thr Ile Pro Asp Glu Val Arg Gly Glu Ile

225 230 235 240

Gly Pro Ala Phe Ile Asp Asn Val Ala Val Lys Asp Asp Glu Ile Lys

245 250 255

Lys Leu Gln Lys Leu Asn Asp Ser Thr Ala Asp Tyr Ile Gln Gly Gly

260 265 270

Leu Thr Pro Arg Trp Asn Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn

275 280 285

Leu Lys Tyr Val Ala Trp Val Phe Glu Thr Val Pro Asp Ser Ile Phe

290 295 300

Glu Ser His His Ile Ser Ser Phe Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys

305 310 315 320

Thr Arg Asp Ser Val Leu Arg Ser Leu Thr Thr Val Ser Gly Gly Ser

325 330 335

Ser Glu Ala Gly Leu Val Cys Asp His Leu Leu Gln Leu Glu Gly Gly

340 345 350

Ser Glu Val Leu Arg Ala Arg Thr Glu Trp Arg Pro Lys Leu Thr Asp

355 360 365

Ser Phe Arg Gly Ile Ser Val Ile Pro Ala Glu Pro Arg Val

370 375 380

<210> 200

<211> 308

<212> Белок

<213> Cocos nucifera

<400> 200

Met Asp Ala Ser Gly Ala Ser Ser Phe Leu Arg Gly Arg Cys Leu Glu

1 5 10 15

Ser Cys Phe Lys Ala Ser Phe Gly Met Ser Gln Pro Lys Asp Ala Ala

20 25 30

Gly Gln Pro Ser Arg Arg Pro Ala Asp Ala Asp Asp Phe Val Asp Asp

35 40 45

Asp Arg Trp Ile Thr Val Ile Leu Ser Val Val Arg Ile Ala Ala Cys

50 55 60

Phe Leu Ser Met Met Val Thr Thr Ile Val Trp Asn Met Ile Met Leu

65 70 75 80

Ile Leu Leu Pro Trp Pro Tyr Ala Arg Ile Arg Gln Gly Asn Leu Tyr

85 90 95

Gly His Val Thr Gly Arg Met Leu Met Trp Ile Leu Gly Asn Pro Ile

100 105 110

Thr Ile Glu Gly Ser Glu Phe Ser Asn Thr Arg Ala Ile Tyr Ile Cys

115 120 125

Asn His Ala Ser Leu Val Asp Ile Phe Leu Ile Met Trp Leu Ile Pro

130 135 140

Lys Gly Thr Val Thr Ile Ala Lys Lys Glu Ile Ile Trp Tyr Pro Leu

145 150 155 160

Phe Gly Gln Leu Tyr Val Leu Ala Asn His Gln Arg Ile Asp Arg Ser

165 170 175

Asn Pro Ser Ala Ala Ile Glu Ser Ile Lys Glu Val Ala Arg Ala Val

180 185 190

Val Lys Lys Asn Leu Ser Leu Ile Ile Phe Pro Glu Gly Thr Arg Ser

195 200 205

Lys Thr Gly Arg Leu Leu Pro Phe Lys Lys Gly Phe Ile His Ile Ala

210 215 220

Leu Gln Thr Arg Leu Pro Ile Val Pro Met Val Leu Thr Gly Thr His

225 230 235 240

Leu Ala Trp Arg Lys Asn Ser Leu Arg Val Arg Pro Ala Pro Ile Thr

245 250 255

Val Lys Tyr Phe Ser Pro Ile Lys Thr Asp Asp Trp Glu Glu Glu Lys

260 265 270

Ile Asn His Tyr Val Glu Met Ile His Ala Leu Tyr Val Asp His Leu

275 280 285

Pro Glu Ser Gln Lys Pro Leu Val Ser Lys Gly Arg Asp Ala Ser Gly

290 295 300

Arg Ser Asn Ser

305

<210> 201

<211> 356

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 201

Met Asp Val Ala Ser Ala Arg Ser Ile Ser Ser His Pro Ser Tyr Tyr

1 5 10 15

Gly Lys Pro Ile Cys Ser Ser Gln Ser Ser Leu Ile Arg Ile Ser Arg

20 25 30

Asp Lys Val Cys Cys Phe Gly Arg Ile Ser Asn Gly Met Thr Ser Phe

35 40 45

Thr Thr Ser Leu His Ala Val Pro Ser Glu Lys Phe Met Gly Glu Thr

50 55 60

Arg Arg Thr Gly Ile Gln Trp Ser Asn Arg Ser Leu Arg His Asp Pro

65 70 75 80

Tyr Arg Phe Leu Asp Lys Lys Ser Pro Arg Ser Ser Gln Leu Ala Arg

85 90 95

Asp Ile Thr Val Arg Ala Asp Leu Ser Gly Ala Ala Thr Pro Asp Ser

100 105 110

Ser Phe Pro Glu Pro Glu Ile Lys Leu Ser Ser Arg Leu Arg Gly Ile

115 120 125

Phe Phe Cys Val Val Ala Gly Ile Ser Ala Thr Phe Leu Ile Val Leu

130 135 140

Met Ile Ile Gly His Pro Phe Val Leu Leu Phe Asp Pro Tyr Arg Arg

145 150 155 160

Lys Phe His His Phe Ile Ala Lys Leu Trp Ala Ser Ile Ser Ile Tyr

165 170 175

Pro Phe Tyr Lys Ile Asn Ile Glu Gly Leu Glu Asn Leu Pro Ser Ser

180 185 190

Asp Thr Pro Ala Val Tyr Val Ser Asn His Gln Ser Phe Leu Asp Ile

195 200 205

Tyr Thr Leu Leu Ser Leu Gly Lys Ser Phe Lys Phe Ile Ser Lys Thr

210 215 220

Gly Ile Phe Val Ile Pro Ile Ile Gly Trp Ala Met Ser Met Met Gly

225 230 235 240

Val Val Pro Leu Lys Arg Met Asp Pro Arg Ser Gln Val Asp Cys Leu

245 250 255

Lys Arg Cys Met Glu Leu Leu Lys Lys Gly Ala Ser Val Phe Phe Phe

260 265 270

Pro Glu Gly Thr Arg Ser Lys Asp Gly Arg Leu Gly Ser Phe Lys Lys

275 280 285

Gly Ala Phe Thr Val Ala Ala Lys Thr Gly Val Ala Val Val Pro Ile

290 295 300

Thr Leu Met Gly Thr Gly Lys Ile Met Pro Thr Gly Ser Glu Gly Ile

305 310 315 320

Leu Asn His Gly Asn Val Arg Val Ile Ile His Lys Pro Ile His Gly

325 330 335

Ser Lys Ala Asp Val Leu Cys Asn Glu Ala Arg Ser Lys Ile Ala Glu

340 345 350

Ser Met Asp Leu

355

<210> 202

<211> 362

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 202

Met Leu Lys Leu Ser Cys Asn Val Thr Asp Ser Lys Leu Gln Arg Ser

1 5 10 15

Leu Leu Phe Phe Ser His Ser Tyr Arg Ser Asp Pro Val Asn Phe Ile

20 25 30

Arg Arg Arg Ile Val Ser Cys Ser Gln Thr Lys Lys Thr Gly Leu Val

35 40 45

Pro Leu Arg Ala Val Val Ser Ala Asp Gln Gly Ser Val Val Gln Gly

50 55 60

Leu Ala Thr Leu Ala Asp Gln Leu Arg Leu Gly Ser Leu Thr Glu Asp

65 70 75 80

Gly Leu Ser Tyr Lys Glu Lys Phe Val Val Arg Ser Tyr Glu Val Gly

85 90 95

Ser Asn Lys Thr Ala Thr Val Glu Thr Ile Ala Asn Leu Leu Gln Glu

100 105 110

Val Gly Cys Asn His Ala Gln Ser Val Gly Phe Ser Thr Asp Gly Phe

115 120 125

Ala Thr Thr Thr Thr Met Arg Lys Leu His Leu Ile Trp Val Thr Ala

130 135 140

Arg Met His Ile Glu Ile Tyr Lys Tyr Pro Ala Trp Gly Asp Val Val

145 150 155 160

Glu Ile Glu Thr Trp Cys Gln Ser Glu Gly Arg Ile Gly Thr Arg Arg

165 170 175

Asp Trp Ile Leu Lys Asp Ser Val Thr Gly Glu Val Thr Gly Arg Ala

180 185 190

Thr Ser Lys Trp Val Met Met Asn Gln Asp Thr Arg Arg Leu Gln Lys

195 200 205

Val Ser Asp Asp Val Arg Asp Glu Tyr Leu Val Phe Cys Pro Gln Glu

210 215 220

Pro Arg Leu Ala Phe Pro Glu Glu Asn Asn Arg Ser Leu Lys Lys Ile

225 230 235 240

Pro Lys Leu Glu Asp Pro Ala Gln Tyr Ser Met Ile Gly Leu Lys Pro

245 250 255

Arg Arg Ala Asp Leu Asp Met Asn Gln His Val Asn Asn Val Thr Tyr

260 265 270

Ile Gly Trp Val Leu Glu Ser Ile Pro Gln Glu Ile Val Asp Thr His

275 280 285

Glu Leu Gln Val Ile Thr Leu Asp Tyr Arg Arg Glu Cys Gln Gln Asp

290 295 300

Asp Val Val Asp Ser Leu Thr Thr Thr Thr Ser Glu Ile Gly Gly Thr

305 310 315 320

Asn Gly Ser Ala Thr Ser Gly Thr Gln Gly His Asn Asp Ser Gln Phe

325 330 335

Leu His Leu Leu Arg Leu Ser Gly Asp Gly Gln Glu Ile Asn Arg Gly

340 345 350

Thr Thr Leu Trp Arg Lys Lys Pro Ser Ser

355 360

<210> 203

<211> 367

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 203

Met Leu Lys Leu Ser Cys Asn Val Thr Asp His Ile His Asn Leu Phe

1 5 10 15

Ser Asn Ser Arg Arg Ile Phe Val Pro Val His Arg Gln Thr Arg Pro

20 25 30

Ile Ser Cys Phe Gln Leu Lys Lys Glu Pro Leu Arg Ala Ile Leu Ser

35 40 45

Ala Asp His Gly Asn Ser Ser Val Arg Val Ala Asp Thr Val Ser Gly

50 55 60

Thr Ser Pro Ala Asp Arg Leu Arg Phe Gly Arg Leu Met Glu Asp Gly

65 70 75 80

Phe Ser Tyr Lys Glu Lys Phe Ile Val Arg Ser Tyr Glu Val Gly Ile

85 90 95

Asn Lys Thr Ala Thr Ile Glu Thr Ile Ala Asn Leu Leu Gln Glu Val

100 105 110

Ala Cys Asn His Val Gln Asn Val Gly Phe Ser Thr Asp Gly Phe Ala

115 120 125

Thr Thr Leu Thr Met Arg Lys Leu His Leu Ile Trp Val Thr Ala Arg

130 135 140

Met His Ile Glu Ile Tyr Lys Tyr Pro Ala Trp Ser Asp Val Val Glu

145 150 155 160

Ile Glu Thr Trp Cys Gln Ser Glu Gly Arg Ile Gly Thr Arg Arg Asp

165 170 175

Trp Ile Leu Lys Asp Cys Ala Thr Gly Glu Val Ile Gly Arg Ala Thr

180 185 190

Ser Lys Trp Val Met Met Asn Gln Asp Thr Arg Arg Leu Gln Arg Val

195 200 205

Thr Asp Glu Val Arg Asp Glu Tyr Leu Val Phe Cys Pro Pro Glu Pro

210 215 220

Arg Leu Ala Phe Pro Glu Glu Asn Asn Ser Ser Leu Lys Lys Ile Pro

225 230 235 240

Lys Leu Glu Asp Pro Ala Gln Tyr Ser Met Leu Gly Leu Lys Pro Arg

245 250 255

Arg Ala Asp Leu Asp Met Asn Gln His Val Asn Asn Val Thr Tyr Ile

260 265 270

Gly Trp Val Leu Glu Ser Ile Pro Gln Glu Ile Ile Asp Thr His Glu

275 280 285

Leu Lys Val Ile Thr Leu Asp Tyr Arg Arg Glu Cys Gln Gln Asp Asp

290 295 300

Ile Val Asp Ser Leu Thr Thr Ser Glu Thr Pro Asn Glu Val Val Ser

305 310 315 320

Lys Leu Thr Gly Thr Asn Gly Ser Thr Thr Ser Ser Lys Arg Glu His

325 330 335

Asn Glu Ser His Phe Leu His Ile Leu Arg Leu Ser Glu Asn Gly Gln

340 345 350

Glu Ile Asn Arg Gly Arg Thr Gln Trp Arg Lys Lys Ser Ser Arg

355 360 365

<210> 204

<211> 412

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 204

Met Val Ala Thr Ser Ala Thr Ser Ser Phe Phe Pro Val Pro Ser Ser

1 5 10 15

Ser Leu Asp Pro Asn Gly Lys Gly Asn Lys Ile Gly Ser Thr Asn Leu

20 25 30

Ala Gly Leu Asn Ser Ala Pro Asn Ser Gly Arg Met Lys Val Lys Pro

35 40 45

Asn Ala Gln Ala Pro Pro Lys Ile Asn Gly Lys Lys Val Gly Leu Pro

50 55 60

Gly Ser Val Asp Ile Val Arg Thr Asp Thr Glu Thr Ser Ser His Pro

65 70 75 80

Ala Pro Arg Thr Phe Ile Asn Gln Leu Pro Asp Trp Ser Met Leu Leu

85 90 95

Ala Ala Ile Thr Thr Ile Phe Leu Ala Ala Glu Lys Gln Trp Met Met

100 105 110

Leu Asp Trp Lys Pro Arg Arg Ser Asp Met Leu Val Asp Pro Phe Gly

115 120 125

Ile Gly Arg Ile Val Gln Asp Gly Leu Val Phe Arg Gln Asn Phe Ser

130 135 140

Ile Arg Ser Tyr Glu Ile Gly Ala Asp Arg Ser Ala Ser Ile Glu Thr

145 150 155 160

Val Met Asn His Leu Gln Glu Thr Ala Leu Asn His Val Lys Thr Ala

165 170 175

Gly Leu Leu Gly Asp Gly Phe Gly Ser Thr Pro Glu Met Phe Lys Lys

180 185 190

Asn Leu Ile Trp Val Val Thr Arg Met Gln Val Val Val Asp Lys Tyr

195 200 205

Pro Thr Trp Gly Asp Val Val Glu Val Asp Thr Trp Val Ser Gln Ser

210 215 220

Gly Lys Asn Gly Met Arg Arg Asp Trp Leu Val Arg Asp Cys Asn Thr

225 230 235 240

Gly Glu Thr Leu Thr Arg Ala Ser Ser Val Trp Val Met Met Asn Lys

245 250 255

Leu Thr Arg Arg Leu Ser Lys Ile Pro Glu Glu Val Arg Gly Glu Ile

260 265 270

Glu Pro Tyr Phe Val Asn Ser Asp Pro Val Leu Ala Glu Asp Ser Arg

275 280 285

Lys Leu Thr Lys Ile Asp Asp Lys Thr Ala Asp Tyr Val Arg Ser Gly

290 295 300

Leu Thr Pro Arg Trp Ser Asp Leu Asp Val Asn Gln His Val Asn Asn

305 310 315 320

Val Lys Tyr Ile Gly Trp Ile Leu Glu Ser Ala Pro Val Gly Ile Met

325 330 335

Glu Arg Gln Lys Leu Lys Ser Met Thr Leu Glu Tyr Arg Arg Glu Cys

340 345 350

Gly Arg Asp Ser Val Leu Gln Ser Leu Thr Ala Val Thr Gly Cys Asp

355 360 365

Ile Gly Asn Leu Ala Thr Ala Gly Asp Val Glu Cys Gln His Leu Leu

370 375 380

Arg Leu Gln Asp Gly Ala Glu Val Val Arg Gly Arg Thr Glu Trp Ser

385 390 395 400

Ser Lys Thr Pro Thr Thr Thr Trp Gly Thr Ala Pro

405 410

<210> 205

<211> 345

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 205

Met Phe Ile Ala Val Glu Val Ser Pro Val Met Glu Asp Ile Thr Arg

1 5 10 15

Gln Ser Lys Lys Thr Ser Val Glu Asn Glu Thr Gly Asp Asp Gln Ser

20 25 30

Ala Thr Ser Val Val Leu Lys Ala Lys Arg Lys Arg Arg Ser Gln Pro

35 40 45

Arg Asp Ala Pro Pro Gln Arg Ser Ser Val His Arg Gly Val Thr Arg

50 55 60

His Arg Trp Thr Gly Arg Tyr Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Asn Ser

65 70 75 80

Trp Asn Glu Thr Gln Thr Lys Lys Gly Arg Gln Val Tyr Leu Gly Ala

85 90 95

Tyr Asp Glu Glu Asp Ala Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu

100 105 110

Lys Tyr Trp Gly Arg Asp Thr Ile Leu Asn Phe Pro Leu Cys Asn Tyr

115 120 125

Glu Glu Asp Ile Lys Glu Met Glu Ser Gln Ser Lys Glu Glu Tyr Ile

130 135 140

Gly Ser Leu Arg Arg Lys Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys

145 150 155 160

Tyr Arg Gly Val Ala Lys His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg

165 170 175

Ile Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Tyr Ala

180 185 190

Thr Gln Glu Glu Ala Ala Ile Ala Tyr Asp Ile Ala Ala Ile Glu Tyr

195 200 205

Arg Gly Leu Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Ile Ser Arg Tyr Leu Lys

210 215 220

Leu Pro Val Pro Glu Asn Pro Ile Asp Thr Ala Asn Asn Leu Leu Glu

225 230 235 240

Ser Pro His Ser Asp Leu Ser Pro Phe Ile Lys Pro Asn His Glu Ser

245 250 255

Asp Leu Ser Gln Ser Gln Ser Ser Ser Glu Asp Asn Asp Asp Arg Lys

260 265 270

Thr Lys Leu Leu Lys Ser Ser Pro Leu Val Ala Glu Glu Val Ile Gly

275 280 285

Pro Ser Thr Pro Pro Glu Ile Ala Pro Pro Arg Arg Ser Phe Pro Glu

290 295 300

Asp Ile Gln Thr Tyr Phe Gly Cys Gln Asn Ser Gly Lys Leu Thr Ala

305 310 315 320

Glu Glu Asp Asp Val Ile Phe Gly Asp Leu Asp Ser Phe Leu Thr Pro

325 330 335

Asp Phe Tyr Ser Glu Leu Asn Asp Cys

340 345

<210> 206

<211> 303

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 206

Met Ala Lys Val Ser Gly Arg Ser Lys Lys Thr Ile Val Asp Asp Glu

1 5 10 15

Ile Ser Asp Lys Thr Ala Ser Ala Ser Glu Ser Ala Ser Ile Ala Leu

20 25 30

Thr Ser Lys Arg Lys Arg Lys Ser Pro Pro Arg Asn Ala Pro Leu Gln

35 40 45

Arg Ser Ser Pro Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg

50 55 60

Tyr Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Asn Ser Trp Asn Asp Thr Gln Thr

65 70 75 80

Lys Lys Gly Arg Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asp Glu Glu Glu Ala

85 90 95

Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Arg Asp

100 105 110

Thr Leu Leu Asn Phe Pro Leu Pro Ser Tyr Asp Glu Asp Val Lys Glu

115 120 125

Met Glu Gly Gln Ser Lys Glu Glu Tyr Ile Gly Ser Leu Arg Arg Lys

130 135 140

Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg

145 150 155 160

His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Ala

165 170 175

Thr Gln Glu Glu Ala Ala Ile Ala Tyr Asp Ile Ala Ala Ile Glu Tyr

180 185 190

Arg Gly Leu Asn Ala Val Thr Asn Phe Asp Val Ser Arg Tyr Leu Asn

195 200 205

Pro Asn Ala Ala Ala Asp Lys Ala Asp Ser Asp Ser Lys Pro Ile Arg

210 215 220

Ser Pro Ser Arg Glu Pro Glu Ser Ser Asp Asp Asn Lys Ser Pro Lys

225 230 235 240

Ser Glu Glu Val Ile Glu Pro Ser Thr Ser Pro Glu Val Ile Pro Thr

245 250 255

Arg Arg Ser Phe Pro Asp Asp Ile Gln Thr Tyr Phe Gly Cys Gln Asp

260 265 270

Ser Gly Lys Leu Ala Thr Glu Glu Asp Val Ile Phe Asp Cys Phe Asn

275 280 285

Ser Tyr Ile Asn Pro Gly Phe Tyr Asn Glu Phe Asp Tyr Gly Pro

290 295 300

<210> 207

<211> 445

<212> Белок

<213> Avena sativa

<400> 207

Met Lys Arg Ser Pro Pro Pro Ala Pro Pro Ala Ala Pro Pro Pro Pro

1 5 10 15

Gln Pro Ser Pro Ser Ser Ser Ser Pro Ala Cys Ser Pro Ser Pro Ser

20 25 30

Ser Ser Ser Cys Pro Ser Ser Ser Asp Ser Ser Ser Ile Val Ile Pro

35 40 45

Arg Lys Arg Ala Arg Thr Gln Lys Ala Ala Ser Gly Lys Pro Lys Ala

50 55 60

Lys Ala Ser Ala Lys Arg Pro Lys Lys Asp Ala Ser Arg Ser Ser Lys

65 70 75 80

Glu Thr Asp Ala Asn Gly Ala Ala Ala Ala Ala Gly Lys Arg Ser Ser

85 90 95

Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Phe Glu Ala

100 105 110

His Leu Trp Asp Lys Asn Cys Phe Thr Ser Val Gln Asn Lys Lys Lys

115 120 125

Gly Arg Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asp Thr Glu Asp Ala Ala Ala

130 135 140

Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Ser Glu Thr Ile

145 150 155 160

Leu Asn Phe Ser Val Glu Asp Tyr Ala Lys Glu Met Pro Glu Met Glu

165 170 175

Ala Val Ser Arg Glu Glu Tyr Leu Ala Ala Leu Arg Arg Arg Ser Ser

180 185 190

Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His

195 200 205

His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Leu Gly Asn Lys

210 215 220

Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Phe Asp Thr Gln Glu Glu Ala Ala Lys Ala

225 230 235 240

Tyr Asp Leu Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Ala Asn Ala Val Thr Asn

245 250 255

Phe Asp Ile Ser Cys Tyr Leu Asp Gln Pro Gln Leu Leu Ala Gln Leu

260 265 270

Gln Gln Gly Pro Gln Val Val Pro Ala Leu Gln Glu Glu Leu Gln His

275 280 285

Asp Val Gln His Asp Leu Gln Asn Asp Asn Ala Val Gln Glu Leu Asn

290 295 300

Ser Gly Glu Val Gln Met Pro Gly Ala Met Asp Glu Pro Ile Ala Leu

305 310 315 320

Asp Asp Ser Thr Glu Cys Ile Asn Thr Pro Phe Glu Phe Asp Phe Ser

325 330 335

Val Glu Glu Asn Leu Trp Ser Pro Cys Met Asp Tyr Glu Leu Asp Ala

340 345 350

Ile Leu Gly Asn Asn Thr Ser Asn Ser Ala Asn Met Asn Glu Trp Phe

355 360 365

Asn Asp Ser Thr Phe Glu Ser Asn Ile Gly Cys Leu Phe Glu Gly Cys

370 375 380

Ser Asn Ile Asp Asp Cys Ser Ser Ser Lys His Cys Ala Asp Leu Ala

385 390 395 400

Ala Phe Asp Phe Phe Lys Glu Gly Asp Asp Asn Asp Phe Ser Asn Met

405 410 415

Glu Met Glu Ile Thr Pro Gln Ala Asn Asp Val Ser Cys Pro Pro Asn

420 425 430

Asp Val Ser Cys Pro Pro Lys Met Ile Thr Val Cys Asn

435 440 445

<210> 208

<211> 420

<212> Белок

<213> Sorghum bicolor

<400> 208

Met Asp Met Glu Arg Ser Gln Gln Gln Lys Ser Pro Thr Glu Ser Pro

1 5 10 15

Pro Pro Pro Ser Pro Ser Ser Ser Ser Ser Ser Val Ser Ala Asp Thr

20 25 30

Val Leu Pro Pro Pro Gly Lys Arg Arg Arg Ala Ala Thr Thr Ala Lys

35 40 45

Ala Lys Ala Gly Ala Lys Pro Lys Arg Ala Arg Lys Asp Ala Ala Ala

50 55 60

Ala Ala Asp Pro Pro Pro Pro Pro Ala Ala Ala Ala Ala Gly Lys Arg

65 70 75 80

Ser Ser Val Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Phe

85 90 95

Glu Ala His Leu Trp Asp Lys His Cys Leu Ala Ala Leu His Asn Lys

100 105 110

Lys Lys Gly Arg Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asp Ser Glu Glu Ala

115 120 125

Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro Glu

130 135 140

Thr Leu Leu Asn Phe Pro Val Glu Asp Tyr Ser Ser Glu Met Pro Glu

145 150 155 160

Met Glu Gly Val Ser Arg Glu Glu Tyr Leu Ala Ser Leu Arg Arg Arg

165 170 175

Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg

180 185 190

His His His Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Gly

195 200 205

Asn Lys Tyr Leu Tyr Leu Gly Thr Phe Asp Thr Gln Glu Glu Ala Ala

210 215 220

Lys Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Val Asn Ala Val

225 230 235 240

Thr Asn Phe Asp Ile Ser Cys Tyr Leu Asp His Pro Leu Phe Leu Ala

245 250 255

Gln Leu Gln Gln Glu Pro Gln Val Val Pro Ala Leu Asn Gln Glu Ala

260 265 270

Gln Pro Asp Gln Ser Glu Thr Glu Thr Ile Ala Gln Glu Ser Val Ser

275 280 285

Ser Glu Ala Lys Thr Pro Asp Asp Asn Ala Glu Pro Asp Asp Asn Ala

290 295 300

Glu Pro Asp Asp Ile Ala Glu Pro Leu Ile Thr Val Asp Asp Ser Ile

305 310 315 320

Glu Glu Ser Leu Trp Ser Pro Cys Met Asp Tyr Glu Leu Asp Thr Met

325 330 335

Ser Arg Ser Asn Phe Gly Ser Ser Ile Asn Leu Ser Glu Trp Phe Asn

340 345 350

Asp Ala Asp Phe Asp Ser Asn Ile Gly Cys Leu Phe Asp Gly Cys Ser

355 360 365

Ala Val Asp Glu Gly Gly Lys Asp Gly Val Gly Leu Ala Asp Phe Ser

370 375 380

Leu Leu Glu Asp Phe Ser Leu Phe Glu Ala Gly Asp Gly Gln Leu Lys

385 390 395 400

Asp Val Leu Ser Asp Met Glu Glu Gly Ile Gln Pro Pro Thr Met Ile

405 410 415

Ser Val Cys Asn

420

<210> 209

<211> 395

<212> Белок

<213> Zea mays

<400> 209

Met Glu Arg Ser Gln Arg Gln Ser Pro Pro Pro Pro Ser Pro Ser Ser

1 5 10 15

Ser Ser Ser Ser Val Ser Ala Asp Thr Val Leu Val Pro Pro Gly Lys

20 25 30

Arg Arg Arg Ala Ala Thr Ala Lys Ala Gly Ala Glu Pro Asn Lys Arg

35 40 45

Ile Arg Lys Asp Pro Ala Ala Ala Ala Ala Gly Lys Arg Ser Ser Val

50 55 60

Tyr Arg Gly Val Thr Arg His Arg Trp Thr Gly Arg Phe Glu Ala His

65 70 75 80

Leu Trp Asp Lys His Cys Leu Ala Ala Leu His Asn Lys Lys Lys Gly

85 90 95

Arg Gln Val Tyr Leu Gly Ala Tyr Asp Ser Glu Glu Ala Ala Ala Arg

100 105 110

Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu Lys Tyr Trp Gly Pro Glu Thr Leu Leu

115 120 125

Asn Phe Pro Val Glu Asp Tyr Ser Ser Glu Met Pro Glu Met Glu Ala

130 135 140

Val Ser Arg Glu Glu Tyr Leu Ala Ser Leu Arg Arg Arg Ser Ser Gly

145 150 155 160

Phe Ser Arg Gly Val Ser Lys Tyr Arg Gly Val Ala Arg His His His

165 170 175

Asn Gly Arg Trp Glu Ala Arg Ile Gly Arg Val Phe Gly Asn Lys Tyr

180 185 190

Leu Tyr Leu Gly Thr Phe Asp Thr Gln Glu Glu Ala Ala Lys Ala Tyr

195 200 205

Asp Leu Ala Ala Ile Glu Tyr Arg Gly Val Asn Ala Val Thr Asn Phe

210 215 220

Asp Ile Ser Cys Tyr Leu Asp His Pro Leu Phe Leu Ala Gln Leu Gln

225 230 235 240

Gln Glu Pro Gln Val Val Pro Ala Leu Asn Gln Glu Pro Gln Pro Asp

245 250 255

Gln Ser Glu Thr Gly Thr Thr Glu Gln Glu Pro Glu Ser Ser Glu Ala

260 265 270

Lys Thr Pro Asp Gly Ser Ala Glu Pro Asp Glu Asn Ala Val Pro Asp

275 280 285

Asp Thr Ala Glu Pro Leu Thr Thr Val Asp Asp Ser Ile Glu Glu Gly

290 295 300

Leu Trp Ser Pro Cys Met Asp Tyr Glu Leu Asp Thr Met Ser Arg Pro

305 310 315 320

Asn Phe Gly Ser Ser Ile Asn Leu Ser Glu Trp Phe Ala Asp Ala Asp

325 330 335

Phe Asp Cys Asn Ile Gly Cys Leu Phe Asp Gly Cys Ser Ala Ala Asp

340 345 350

Glu Gly Ser Lys Asp Gly Val Gly Leu Ala Asp Phe Ser Leu Phe Glu

355 360 365

Ala Gly Asp Val Gln Leu Lys Asp Val Leu Ser Asp Met Glu Glu Gly

370 375 380

Ile Gln Pro Pro Ala Met Ile Ser Val Cys Asn

385 390 395

<210> 210

<211> 430

<212> Белок

<213> Triadica sebifera

<400> 210

Met Ala Ser Ser Ser Ser Asp Pro Val Leu Lys Ala Glu Leu Gly Ser

1 5 10 15

Ser Gly Gly Gly Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Glu Ser Ser Glu Ala

20 25 30

Val Ile Ala Asn Asp Gln Leu Leu Leu Tyr Arg Gly Leu Lys Lys Pro

35 40 45

Lys Lys Glu Arg Gly Cys Thr Ala Lys Glu Arg Ile Ser Lys Met Pro

50 55 60

Pro Cys Thr Ala Gly Lys Arg Ser Ser Ile Tyr Arg Gly Val Thr Arg

65 70 75 80

His Arg Trp Thr Gly Arg Tyr Glu Ala His Leu Trp Asp Lys Ser Thr

85 90 95

Trp Asn Gln Asn Gln Asn Lys Lys Gly Lys Gln Val Tyr Leu Gly Ala

100 105 110

Tyr Asp Asp Glu Glu Ala Ala Ala Arg Ala Tyr Asp Leu Ala Ala Leu

115 120 125

Lys Tyr Trp Gly Pro Gly Thr Leu Ile Asn Phe Pro Val Thr Asp Tyr

130 135 140

Thr Arg Asp Leu Glu Glu Met Gln Asn Met Ser Arg Glu Glu Tyr Leu

145 150 155 160

Ala Ser Leu Arg Arg Lys Ser Ser Gly Phe Ser Arg Gly Ile Ser Lys

165 170 175

Tyr Arg Gly Leu Ser Ser Arg Trp Glu Ser Ser Val Gly Arg Met Pro

180 185 190

Gly Ser Glu Tyr Phe Ser Ser Ile Asn Tyr Val Asp Asp Pro Ala Ala

195 200 205

Glu Ser Glu Tyr Val Gly Ser Leu Cys Phe Glu Arg Lys Ile Asp Leu

210 215 220

Thr Ser Tyr Ile Lys Trp Trp Gly Leu Asn Lys Thr Arg Gln Ala Glu

225 230 235 240

Ser Ile Ser Lys Ser Ala Glu Glu Thr Lys Pro Gly Cys Ala Glu Asp

245 250 255

Ile Gly Gly Glu Leu Lys Thr Thr Glu Trp Ala Ile Gln Pro Thr Glu

260 265 270

Pro Tyr Gln Met Pro Arg Leu Gly Met Pro Val His Val Lys Lys His

275 280 285

Lys Gly Ser Lys Ile Ser Ala Leu Ser Val Leu Ser Gln Ser Ala Ala

290 295 300

Phe Lys Ser Leu Gln Glu Lys Ala Ser Lys Lys Gln Glu Asn Ser Thr

305 310 315 320

Asp Asn Asp Glu Asn Glu Asn Lys Asn Thr Asn Thr Asn Lys Ile Asp

325 330 335

Tyr Gly Lys Ala Val Glu Thr Ser Ala Ser His Asp Ser Ser Asn Glu

340 345 350

Arg Pro Val Thr Ala Leu Gly Met Ser Gly Gly Leu Ser Leu Lys Arg

355 360 365

Asn Val Tyr Gln Leu Thr Pro Phe Leu Ser Ala Pro Leu Leu Thr Asn

370 375 380

Tyr Gly Thr Ile Asp Gln Leu Val Asp Pro Ile Leu Trp Ala Ser Leu

385 390 395 400

Val Pro Val Leu Pro Thr Gly Leu Ser Arg Asn Pro Glu Val Thr Lys

405 410 415

Thr Glu Thr Ser Ser Thr Tyr Thr Phe Phe Arg Pro Glu Glu

420 425 430

<210> 211

<211> 1531

<212> ДНК

<213> Solanum tuberosum

<400> 211

ttttaaatca ttgttttatt ttctctttct ttttacaggt ataaaaggtg aaaattgaag 60

caagattgat tgcaagctat gtgtcaccac gttattgata ctttggaaga aatttttact 120

tatatgtctt tgtttaggag taatatttga tatgttttag ttagattttc ttgtcattta 180

tgctttagta taattttagt tatttttatt atatgatcat gggtgaattt tgatacaaat 240

atttttgtca ttaaataaat taatttatca caacttgatt actttcagtg acaaaaaatg 300

tattgtcgta gtaccctttt ttgttgaata tgaataattt tttttatttt gtgacaattg 360

taattgtcac tacttatgat aatatttagt gacatatatg tcgtcggtaa aagcaaacac 420

tttcagtgac aaaataatag atttaatcac aaaattatta acctttttta taataataaa 480

tttatcccta atttatacat ttaaggacaa agtatttttt ttatatataa aaaatagtct 540

ttagtgacga tcgtagtgtt gagtctagaa atcataatgt tgaatctaga aaaatctcat 600

gcagtgtaaa ataaacctca aaaaggacgt tcagtccata gagggggtgt atgtgacacc 660

ccaacctcag caaaagaaaa cctcccttca acaaggacat ttgcggtgct aaacaatttc 720

aagtctcatc acacatatat ttattatata atactaataa agaatagaaa aggaaaggta 780

aacatcatta aatcgtcttt gtatattttt agtgacaact gattgacgaa atctttttcg 840

tcacacaaaa tttttagtga cgaaacatga tttatagatg atgaaattat ttgtccctca 900

taatctaatt tgttgtagtg atcattactc ctttgtttgt tttatttgtc atgttagtcc 960

attaaaaaaa aatatctctc ttcttatgta cgtgaatggt tggaacggat ctattatata 1020

atactaataa agaatagaaa aaggaaagtg agtgaggttc gagggagaga atctgtttaa 1080

tatcagagtc gatcatgtgt caattttatc gatatgaccc taacttcaac tgagtttaac 1140

caattccgat aaggcgagaa atatcatagt attgagtcta gaaaaatctc atgtagtgtg 1200

gggtaaacct cagcaaggac gttgagtcca tagagggggg tgtatgtgac accccaacct 1260

cagcaaaaga aaacctcccc tcaagaagga catttgcggt gctaaacaat ttcaagtctc 1320

atcacacata tatatatatt atataatact aataaataat agaaaaagga aaggtaaaca 1380

tcactaacga cagttgcggt gcaaactgag tgaggtaata aacagcacta acttttattg 1440

gttatgtcaa actcaaagta aaatttctca acttgtttac gtgcctatat ataccatgct 1500

tgttatatgc tcaaagcacc aacaaaattt a 1531

<210> 212

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Олигонуклеотидный праймер

<400> 212

cactcgtgct ttccatcatc 20

<210> 213

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Олигонуклеотидный праймер

<400> 213

gaaggctgag caacaagagg 20

<210> 214

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Олигонуклеотидный праймер

<400> 214

ggcgattttg gattctgc 18

<210> 215

<211> 20

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Олигонуклеотидный праймер

<400> 215

cccaaccctt ccgtatacat 20

<210> 216

<211> 1970

<212> ДНК

<213> Zea mays

<400> 216

ggtacctttt ttcccagaga taaatgtgga atagctctac aaacaaacgg catgatgctg 60

acacttggat ggcgaccttg caatcccaag aactattgca tacggttgcc agtcgacaaa 120

tatctacgcc atgcatggct acggtcggaa tacaccgtag cggcgggtaa ctcgccgata 180

ccgtccacgt gtccttggat gcccggtcgc tgatacttct ggtcttctgg acatgcacca 240

agacaatcaa gtgattcaac cttaatttaa cataatataa ataatacgta acatccaact 300

gacgtgttca cctatagaga atattccttc tgattctact ttcagaatga tgccgttgcc 360

gtgtatcgag caagtactct cactcgaagt atcttatctc ccacatccag cacaaaaatc 420

ttctgttcgt ggcaaatctt gtggcggttg aacgaaagaa tgctatataa gtagctatag 480

agaacgtatt atgtgtaaac caaccgttca gtgtaaatcg tgtgtaaata gtcatgttaa 540

ttttttggcg gcagatcaag tacaaactgt atgcctcgga taaacatgta caaaccacaa 600

cactggccac tagatctata tccaacgttc ataaccatcc atccctctct gctgcactct 660

gcaaacaagc acccccatct cgtagcaaca tcttgtctcc gacaagctct cgatgtagtg 720

gaggccctcc accgcaatat cctagtgtat gatgttggag aagcgactcc taaataatgg 780

tggcaagatg ttgctaggtt tgtagccata gcctcaatct aagatcatcc caagccatgg 840

gacctgattc tacgaggcct acaaccaggc atgacacgtc gtctacccac tcttgtgcat 900

catcggtcac ttgatctgac ttggttccta accacttacc ctaggttcca aagccctaag 960

tttctcgtat attgttagtc attcttagtg ggagttttat gtgtatttca ttcctgttaa 1020

atagcatgcc aactaagcaa acatgatgat ataatatgca atctaataaa aagatatatg 1080

agtgggtttc ataaaaaagg gagagagttt catgaggagt gaaactctga atacagatac 1140

tgatatgaca gctttaaaag tagtgttatg aaatcatcat tgagaaatgg tattagcact 1200

caatcgattt ctacgctgtc aattgtcatg agcacaattt tcacccaaag aggcacacca 1260

gcaatgtccg cttgtagtgt ccgagacgtt gctccatcgc cgtcgtcttg tttctgtgcg 1320

ctccattcaa tgcggcaagt ggctcaatcc caagcggtcg tcgcctccca gccccagcag 1380

caaaatatct tcccatgcgg ccatgccttg aaaattggaa tagattctct agattcaccg 1440

ccgcgtcatc ttcactactt tctcactggc ccaatcagca tctccttctc cgagctcaat 1500

catgctcagt caagcgtcac caatggcgtc acggttggtt ttgtcactgt ctgcatgcaa 1560

gggtattttg cttcgcaagt gtaaatggaa aatggatcta aacaactgca ctgcaccaat 1620

tttggaacgc ggaaccgaga gtctgtttgg gttcgtttga aacgcgctga tgtttctcat 1680

tttttaatag atgtagttac ctgatactat ttaagttgga cgatcaaacg actgtgtcaa 1740

gtgtgattaa gaaaagcatc gaaaataaaa tttatcgcca taaaaagtta aaaacagtgg 1800

ataatagtag gacctcataa tagaaaaaat tatcaaacgg aatggagggg cccaacgcag 1860

tatatagcag ccgggtggtg ccggacatcc gacgctcgtg ccagcaggcc attcttctcg 1920

ccttactccc tcacagaacc cagtaaaata tcgccagtcc cgccgtcgag 1970

<210> 217

<211> 584

<212> ДНК

<213> Aeluropus littoralis

<400> 217

cccaagcttg accgatgcac acgctacctg ccaaggctcc ctccatccgc actctgcatc 60

gtcgcttcgg cgtaaacttc cacgtagtac ttgtacgatt ctagctagac ccagtgcgcc 120

caccctaccg ccggcgagcg ggcccccatc tcgcgccagg cttccatgcg ggtccaccgt 180

ggaccagccc tacgccgaac cgagcccatc cctccaccct ttcaccgcca agcgggaccc 240

gcgttggacc tttccgcttg gctggccccc accagcgtcc acgcgggcca acggcctcgc 300

gaaatggatc tccacacgac aaaccaaaac gagaagaaaa taaatggaaa ggaaagaaac 360

ggatcgccac gcgttccaga ggcgtccgct aaccacccga ttatgcttgc gcagcgtgcg 420

taacctcgtc gtggggttaa tccgggtggc cggatcggga aagccacggc ctttataacc 480

catccctgcc ggatcgaacc ggtaccggaa acaaaaacag ggggagaaaa aaagttcttc 540

gcgaggaagg aaaaggaaaa gtcgcgtgcc gtcctcgccc acag 584

<210> 218

<211> 928

<212> ДНК

<213> Agrobacterium rhizogenes

<400> 218

ttagcgaaag gatgtcaaaa aaggatgccc ataattggga ggagtggggt aaagcttaaa 60

gttggcccgc tattggattt cgcgaaagcg gcattggcaa acgtggagat tgctgcattc 120

aagatacttt ttctattttc tggttaagat gtaaagtatt gccacaatca tattaattac 180

taacattgta tatgtaatat agtgcggaaa ttatctatgc caaaatgatg tattaataat 240

agcaataata atatgtgtta atctttttca atcgggaata cgtttaagcg attatcgtgt 300

tgaataaatt attccaaaag gaaatacatg gttttggaga acctgctata gatatatgcc 360

aaatttacac tagtttagtg ggtgcaaaac tattatctct gtttctgagt ttaataaaaa 420

ataaataagc agggcgaata gcagttagcc taagaaggaa tggtggccat gtacgtgctt 480

ttaagagacc ctataataaa ttgccagctg tgttgctttg gtgccgacag gcctaacgtg 540

gggtttagct tgacaaagta gcgcctttcc gcagcataaa taaaggtagg cgggtgcgtc 600

ccattattaa aggaaaaagc aaaagctgag attccataga ccacaaacca ccattattgg 660

aggacagaac ctattccctc acgtgggtcg ctagctttaa acctaataag taaaaacaat 720

taaaagcagg caggtgtccc ttctatattc gcacaacgag gcgacgtgga gcatcgacag 780

ccgcatccat taattaataa atttgtggac ctatacctaa ctcaaatatt tttattattt 840

gctccaatac gctaagagct ctggattata aatagtttgg atgcttcgag ttatgggtac 900

aagcaacctg tttcctactt tgttacca 928

<210> 219

<211> 732

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> конструкция шпРНКи, содержащая фрагмент размером 732 пары оснований

<400> 219

aatgcagttt tacaaagtgg agtacccaaa gcagatgaga tcattttgta taacatggct 60

cttgtgttgg atcgtatttt tgtggatgtg aaggatgctt ttgagttctc accacatcat 120

aaggccattc gtgaaccttt tgactattac aagtttggcc aaaattatat ccgcccttta 180

cttgatttca ggagttctta tgttggcaat atatcagttt ttggtgaaat agaagagaag 240

ctcaagcagg gcgttaatgt tgttttgatg tcaaaccacc aaagtgaagc agatccagcg 300

gttattgctc tgttgcttga atcgaggcac ccatacattg ctgagaacat aatttatgtt 360

gcaggagata gagttattac tgatcctctt tgcaagccat tcagcatggg aaggaatctc 420

ctgtgtgttt attcgaaaaa acatatgggt gatgacccca aacttgtcga gaagaaaagg 480

agagcaaaca caagaagctt gaaggagatg gctgtgctat tgaggggtgg atcaaaacta 540

atatggattg ctcctagtgg tggaagagat aggccaaacc ctgttacaaa agaatggtat 600

ccagcgccat ttgatgcttc ttcaacagac aacatgagaa ggcttgtaga acatgctggt 660

gtccctggtc acatttatcc tctagcaata ttatgctatg atattatgcc ccctccgccc 720

caggttgaga aa 732

<210> 220

<211> 512

<212> Белок

<213> Elaeis guineensis

<400> 220

Met Ala Val Ser Lys Asn Pro Glu Thr Leu Ala Pro Asp Gln Glu Pro

1 5 10 15

Ser Lys Glu Ser Asp Leu Arg Arg Arg Pro Ala Ser Ser Pro Ser Ser

20 25 30

Thr Ala Ala Ser Pro Ala Val Pro Asp Ser Ser Ser Arg Thr Ser Ser

35 40 45

Ser Ile Thr Gly Ser Trp Thr Thr Ala Leu Asp Gly Asp Ser Gly Ala

50 55 60

Gly Ala Val Arg Ile Gly Asp Pro Lys Asp Arg Ile Gly Glu Ala Asn

65 70 75 80

Asp Ile Gly Glu Lys Lys Lys Ala Cys Ser Gly Glu Val Pro Val Gly

85 90 95

Phe Val Asp Arg Pro Ser Ala Pro Val His Val Arg Val Val Glu Ser

100 105 110

Pro Leu Ser Ser Asp Thr Ile Phe Gln Gln Ser His Ala Gly Leu Leu

115 120 125

Asn Leu Cys Val Val Val Leu Ile Ala Val Asn Ser Arg Leu Ile Ile

130 135 140

Glu Asn Leu Met Lys Tyr Gly Leu Leu Ile Gly Ser Gly Phe Phe Phe

145 150 155 160

Ser Ser Arg Leu Leu Arg Asp Trp Pro Leu Leu Ile Cys Ser Leu Thr

165 170 175

Leu Pro Val Phe Pro Leu Gly Ser Tyr Met Val Glu Lys Leu Ala Tyr

180 185 190

Lys Lys Phe Ile Ser Glu Pro Val Val Val Ser Leu His Val Ile Leu

195 200 205

Ile Ile Ala Thr Ile Met Tyr Pro Val Phe Val Ile Leu Arg Cys Asp

210 215 220

Ser Pro Ile Leu Ser Gly Ile Asn Leu Met Leu Phe Val Ser Ser Ile

225 230 235 240

Cys Leu Lys Leu Val Ser Tyr Ala His Ala Asn Tyr Asp Leu Arg Ser

245 250 255

Ser Ser Asn Ser Ile Asp Lys Gly Ile His Lys Ser Gln Gly Val Ser

260 265 270

Phe Lys Ser Leu Val Tyr Phe Ile Met Ala Pro Thr Leu Cys Tyr Gln

275 280 285

Pro Ser Tyr Pro Arg Thr Thr Cys Ile Arg Lys Gly Trp Val Ile Cys

290 295 300

Gln Leu Val Lys Leu Val Ile Phe Thr Gly Val Met Gly Phe Ile Ile

305 310 315 320

Glu Gln Tyr Ile Asp Pro Ile Ile Lys Asn Ser Gln His Pro Leu Lys

325 330 335

Gly Asn Val Leu Asn Ala Met Glu Arg Val Leu Lys Leu Ser Ile Pro

340 345 350

Thr Leu Tyr Val Trp Leu Cys Val Phe Tyr Cys Thr Phe His Leu Trp

355 360 365

Leu Asn Ile Leu Ala Glu Leu Leu Cys Phe Gly Asp Arg Glu Phe Tyr

370 375 380

Lys Asp Trp Trp Asn Ala Lys Thr Ile Glu Glu Tyr Trp Arg Met Trp

385 390 395 400

Asn Met Pro Val His Lys Trp Met Leu Arg His Val Tyr Leu Pro Cys

405 410 415

Ile Arg Asn Gly Ile Pro Lys Gly Val Ala Met Val Ile Ser Phe Phe

420 425 430

Ile Ser Ala Ile Phe His Glu Leu Cys Ile Gly Ile Pro Cys His Ile

435 440 445

Phe Lys Phe Trp Ala Phe Ile Gly Ile Met Phe Gln Val Pro Leu Val

450 455 460

Ile Leu Thr Lys Tyr Leu Gln Asn Lys Phe Lys Ser Ala Met Val Gly

465 470 475 480

Asn Met Ile Phe Trp Phe Phe Phe Ser Ile Tyr Gly Gln Pro Met Cys

485 490 495

Val Leu Leu Tyr Tyr His Asp Val Met Asn Arg Lys Val Gly Thr Glu

500 505 510

<210> 221

<211> 74

<212> Белок

<213> Glycine max

<400> 221

Met Ala Asp Ile Asp Arg Ser Phe Asp Asn Asn Val Ser Ala Val Ser

1 5 10 15

Thr Glu Lys Ser Ser Gln Val Ser Asp Val Glu Phe Ser Glu Ala Glu

20 25 30

Glu Ile Leu Ile Ala Met Val Tyr Asn Leu Val Gly Glu Arg Trp Ser

35 40 45

Leu Ile Ala Gly Arg Ile Pro Gly Arg Thr Ala Glu Glu Ile Glu Lys

50 55 60

Tyr Trp Thr Ser Arg Phe Ser Thr Ser Gln

65 70

<210> 222

<211> 146

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 222

Met Gly Ser Leu Gln Met Gln Thr Ser Pro Glu Ser Asp Asn Asp Pro

1 5 10 15

Arg Tyr Ala Thr Val Thr Asp Glu Arg Lys Arg Lys Arg Met Ile Ser

20 25 30

Asn Arg Glu Ser Ala Arg Arg Ser Arg Met Arg Lys Gln Lys Gln Leu

35 40 45

Gly Asp Leu Ile Asn Glu Val Thr Leu Leu Lys Asn Asp Asn Ala Lys

50 55 60

Ile Thr Glu Gln Val Asp Glu Ala Ser Lys Lys Tyr Ile Glu Met Glu

65 70 75 80

Ser Lys Asn Asn Val Leu Arg Ala Gln Ala Ser Glu Leu Thr Asp Arg

85 90 95

Leu Arg Ser Leu Asn Ser Val Leu Glu Met Val Glu Glu Ile Ser Gly

100 105 110

Gln Ala Leu Asp Ile Pro Glu Ile Pro Glu Ser Met Gln Asn Pro Trp

115 120 125

Gln Met Pro Cys Pro Met Gln Pro Ile Arg Ala Ser Ala Asp Met Phe

130 135 140

Asp Cys

145

<210> 223

<211> 268

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 223

Met Gly Arg Gly Lys Ile Glu Ile Lys Arg Ile Glu Asn Ala Asn Ser

1 5 10 15

Arg Gln Val Thr Phe Ser Lys Arg Arg Ser Gly Leu Leu Lys Lys Ala

20 25 30

Arg Glu Leu Ser Val Leu Cys Asp Ala Glu Val Ala Val Ile Val Phe

35 40 45

Ser Lys Ser Gly Lys Leu Phe Glu Tyr Ser Ser Thr Gly Met Lys Gln

50 55 60

Thr Leu Ser Arg Tyr Gly Asn His Gln Ser Ser Ser Ala Ser Lys Ala

65 70 75 80

Glu Glu Asp Cys Ala Glu Val Asp Ile Leu Lys Asp Gln Leu Ser Lys

85 90 95

Leu Gln Glu Lys His Leu Gln Leu Gln Gly Lys Gly Leu Asn Pro Leu

100 105 110

Thr Phe Lys Glu Leu Gln Ser Leu Glu Gln Gln Leu Tyr His Ala Leu

115 120 125

Ile Thr Val Arg Glu Arg Lys Glu Arg Leu Leu Thr Asn Gln Leu Glu

130 135 140

Glu Ser Arg Leu Lys Glu Gln Arg Ala Glu Leu Glu Asn Glu Thr Leu

145 150 155 160

Arg Arg Gln Val Gln Glu Leu Arg Ser Phe Leu Pro Ser Phe Thr His

165 170 175

Tyr Val Pro Ser Tyr Ile Lys Cys Phe Ala Ile Asp Pro Lys Asn Ala

180 185 190

Leu Ile Asn His Asp Ser Lys Cys Ser Leu Gln Asn Thr Asp Ser Asp

195 200 205

Thr Thr Leu Gln Leu Gly Leu Pro Gly Glu Ala His Asp Arg Arg Thr

210 215 220

Asn Glu Gly Glu Arg Glu Ser Pro Ser Ser Asp Ser Val Thr Thr Asn

225 230 235 240

Thr Ser Ser Glu Thr Ala Glu Arg Gly Asp Gln Ser Ser Leu Ala Asn

245 250 255

Ser Pro Pro Glu Ala Lys Arg Gln Arg Phe Ser Val

260 265

<210> 224

<211> 437

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 224

Met Glu Phe Glu Ser Val Phe Lys Met His Tyr Pro Tyr Leu Ala Ala

1 5 10 15

Val Ile Tyr Asp Asp Ser Ser Thr Leu Lys Asp Phe His Pro Ser Leu

20 25 30

Thr Asp Asp Phe Ser Cys Val His Asn Val His His Lys Pro Ser Met

35 40 45

Pro His Thr Tyr Glu Ile Pro Ser Lys Glu Thr Ile Arg Gly Ile Thr

50 55 60

Pro Ser Pro Cys Thr Glu Ala Phe Gly Ala Cys Phe His Gly Thr Ser

65 70 75 80

Asn Asp His Val Phe Phe Gly Met Ala Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Ile

85 90 95

Glu Pro Asn Val Ser His Val Ser His Asp Asn Thr Met Trp Glu Asn

100 105 110

Asp Gln Asn Gln Gly Phe Ile Phe Gly Thr Glu Ser Thr Leu Asn Gln

115 120 125

Ala Met Ala Asp Ser Asn Gln Phe Asn Met Pro Lys Pro Leu Leu Ser

130 135 140

Ala Asn Glu Asp Thr Ile Met Asn Arg Arg Gln Asn Asn Gln Val Met

145 150 155 160

Ile Lys Thr Glu Gln Ile Lys Lys Lys Asn Lys Arg Phe Gln Met Arg

165 170 175

Arg Ile Cys Lys Pro Thr Lys Lys Ala Ser Ile Ile Lys Gly Gln Trp

180 185 190

Thr Pro Glu Glu Asp Lys Leu Leu Val Gln Leu Val Asp Leu His Gly

195 200 205

Thr Lys Lys Trp Ser Gln Ile Ala Lys Met Leu Gln Gly Arg Val Gly

210 215 220

Lys Gln Cys Arg Glu Arg Trp His Asn His Leu Arg Pro Asp Ile Lys

225 230 235 240

Lys Asp Gly Trp Thr Glu Glu Glu Asp Ile Ile Leu Ile Lys Ala His

245 250 255

Lys Glu Ile Gly Asn Arg Trp Ala Glu Ile Ala Arg Lys Leu Pro Gly

260 265 270

Arg Thr Glu Asn Thr Ile Lys Asn His Trp Asn Ala Thr Lys Arg Arg

275 280 285

Gln His Ser Arg Arg Thr Lys Gly Lys Asp Glu Ile Ser Leu Ser Leu

290 295 300

Gly Ser Asn Thr Leu Gln Asn Tyr Ile Arg Ser Val Thr Tyr Asn Asp

305 310 315 320

Asp Pro Phe Met Thr Ala Asn Ala Asn Ala Asn Ile Gly Pro Arg Asn

325 330 335

Met Arg Gly Lys Gly Lys Asn Val Met Val Ala Val Ser Glu Tyr Asp

340 345 350

Glu Gly Glu Cys Lys Tyr Ile Val Asp Gly Val Asn Asn Leu Gly Leu

355 360 365

Glu Asp Gly Arg Ile Lys Met Pro Ser Leu Ala Ala Met Ser Ala Ser

370 375 380

Gly Ser Ala Ser Thr Ser Gly Ser Ala Ser Gly Ser Gly Ser Gly Val

385 390 395 400

Thr Met Glu Ile Asp Glu Pro Met Thr Asp Ser Trp Met Val Met His

405 410 415

Gly Cys Asp Glu Val Met Met Asn Glu Ile Ala Leu Leu Glu Met Ile

420 425 430

Ala His Gly Arg Leu

435

<210> 225

<211> 359

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 225

Met Tyr His Gln Asn Leu Ile Ser Ser Thr Pro Asn Gln Asn Ser Asn

1 5 10 15

Pro His Asp Trp Asp Ile Gln Asn Pro Leu Phe Ser Ile His Pro Ser

20 25 30

Ala Glu Ile Pro Ser Lys Tyr Pro Phe Met Gly Ile Thr Ser Cys Pro

35 40 45

Asn Thr Asn Val Phe Glu Glu Phe Gln Tyr Lys Ile Thr Asn Asp Gln

50 55 60

Asn Phe Pro Thr Thr Tyr Asn Thr Pro Phe Pro Val Ile Ser Glu Gly

65 70 75 80

Ile Ser Tyr Asn Met His Asp Val Gln Glu Asn Thr Met Cys Gly Tyr

85 90 95

Thr Ala His Asn Gln Gly Leu Ile Ile Gly Cys His Glu Pro Val Leu

100 105 110

Val His Ala Val Val Glu Ser Gln Gln Phe Asn Val Pro Gln Ser Glu

115 120 125

Asp Ile Asn Leu Val Ser Gln Ser Glu Arg Val Thr Glu Asp Lys Val

130 135 140

Met Phe Lys Thr Asp His Lys Lys Lys Asp Ile Ile Gly Lys Gly Gln

145 150 155 160

Trp Thr Pro Thr Glu Asp Glu Leu Leu Val Arg Met Val Lys Ser Lys

165 170 175

Gly Thr Lys Asn Trp Thr Ser Ile Ala Lys Met Phe Gln Gly Arg Val

180 185 190

Gly Lys Gln Cys Arg Glu Arg Trp Arg Asn His Leu Arg Pro Asn Ile

195 200 205

Lys Lys Asn Asp Trp Ser Glu Glu Glu Asp Gln Ile Leu Ile Glu Val

210 215 220

His Lys Ile Val Gly Asn Lys Trp Thr Glu Ile Ala Lys Arg Leu Pro

225 230 235 240

Gly Arg Ser Glu Asn Ile Val Lys Asn His Trp Asn Ala Thr Lys Arg

245 250 255

Arg Leu His Ser Val Arg Thr Lys Arg Ser Asp Ala Phe Ser Pro Arg

260 265 270

Asn Asn Ala Leu Glu Asn Tyr Ile Arg Ser Ile Thr Ile Asn Asn Asn

275 280 285

Ala Leu Met Asn Arg Glu Val Asp Ser Ile Thr Ala Asn Ser Glu Ile

290 295 300

Asp Ser Thr Arg Cys Glu Asn Ile Val Asp Glu Val Met Asn Leu Asn

305 310 315 320

Leu His Ala Thr Thr Ser Val Tyr Val Pro Glu Gln Ala Val Leu Thr

325 330 335

Trp Gly Tyr Asp Phe Thr Lys Cys Tyr Glu Pro Met Asp Asp Thr Trp

340 345 350

Met Leu Met Asn Gly Trp Asn

355

<210> 226

<211> 386

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 226

Met Ser Lys Arg Pro Pro Pro Asp Pro Val Ala Val Leu Arg Gly His

1 5 10 15

Arg His Ser Val Met Asp Val Ser Phe His Pro Ser Lys Ser Leu Leu

20 25 30

Phe Thr Gly Ser Ala Asp Gly Glu Leu Arg Ile Trp Asp Thr Ile Gln

35 40 45

His Arg Ala Val Ser Ser Ala Trp Ala His Ser Arg Ala Asn Gly Val

50 55 60

Leu Ala Val Ala Ala Ser Pro Trp Leu Gly Glu Asp Lys Ile Ile Ser

65 70 75 80

Gln Gly Arg Asp Gly Thr Val Lys Cys Trp Asp Ile Glu Asp Gly Gly

85 90 95

Leu Ser Arg Asp Pro Leu Leu Ile Leu Glu Thr Cys Ala Tyr His Phe

100 105 110

Cys Lys Phe Ser Leu Val Lys Lys Pro Lys Asn Ser Leu Gln Glu Ala

115 120 125

Glu Ser His Ser Arg Gly Cys Asp Glu Gln Asp Gly Gly Asp Thr Cys

130 135 140

Asn Val Gln Ile Ala Asp Asp Ser Glu Arg Ser Glu Glu Asp Ser Gly

145 150 155 160

Leu Leu Gln Asp Lys Asp His Ala Glu Gly Thr Thr Phe Val Ala Val

165 170 175

Val Gly Glu Gln Pro Thr Glu Val Glu Ile Trp Asp Leu Asn Thr Gly

180 185 190

Asp Lys Ile Ile Gln Leu Pro Gln Ser Ser Pro Asp Glu Ser Pro Asn

195 200 205

Ala Ser Thr Lys Gly Arg Gly Met Cys Met Ala Val Gln Leu Phe Cys

210 215 220

Pro Pro Glu Ser Gln Gly Phe Leu His Val Leu Ala Gly Tyr Glu Asp

225 230 235 240

Gly Ser Ile Leu Leu Trp Asp Ile Arg Asn Ala Lys Ile Pro Leu Thr

245 250 255

Ser Val Lys Phe His Ser Glu Pro Val Leu Ser Leu Ser Val Ala Ser

260 265 270

Ser Cys Asp Gly Gly Ile Ser Gly Gly Ala Asp Asp Lys Ile Val Met

275 280 285

Tyr Asn Leu Asn His Ser Thr Gly Ser Cys Thr Ile Arg Lys Glu Ile

290 295 300

Thr Leu Glu Arg Pro Gly Val Ser Gly Thr Ser Ile Arg Val Asp Gly

305 310 315 320

Lys Ile Ala Ala Thr Ala Gly Trp Asp His Arg Ile Arg Val Tyr Asn

325 330 335

Tyr Arg Lys Gly Asn Ala Leu Ala Ile Leu Lys Tyr His Arg Ala Thr

340 345 350

Cys Asn Ala Val Ser Tyr Ser Pro Asp Cys Glu Leu Met Ala Ser Ala

355 360 365

Ser Glu Asp Ala Thr Val Ala Leu Trp Lys Leu Tyr Pro Pro His Lys

370 375 380

Ser Leu

385

<210> 227

<211> 292

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 227

Met Glu Pro Pro Gln His Gln His His His His Gln Ala Asp Gln Glu

1 5 10 15

Ser Gly Asn Asn Asn Asn Asn Lys Ser Gly Ser Gly Gly Tyr Thr Cys

20 25 30

Arg Gln Thr Ser Thr Arg Trp Thr Pro Thr Thr Glu Gln Ile Lys Ile

35 40 45

Leu Lys Glu Leu Tyr Tyr Asn Asn Ala Ile Arg Ser Pro Thr Ala Asp

50 55 60

Gln Ile Gln Lys Ile Thr Ala Arg Leu Arg Gln Phe Gly Lys Ile Glu

65 70 75 80

Gly Lys Asn Val Phe Tyr Trp Phe Gln Asn His Lys Ala Arg Glu Arg

85 90 95

Gln Lys Lys Arg Phe Asn Gly Thr Asn Met Thr Thr Pro Ser Ser Ser

100 105 110

Pro Asn Ser Val Met Met Ala Ala Asn Asp His Tyr His Pro Leu Leu

115 120 125

His His His His Gly Val Pro Met Gln Arg Pro Ala Asn Ser Val Asn

130 135 140

Val Lys Leu Asn Gln Asp His His Leu Tyr His His Asn Lys Pro Tyr

145 150 155 160

Pro Ser Phe Asn Asn Gly Asn Leu Asn His Ala Ser Ser Gly Thr Glu

165 170 175

Cys Gly Val Val Asn Ala Ser Asn Gly Tyr Met Ser Ser His Val Tyr

180 185 190

Gly Ser Met Glu Gln Asp Cys Ser Met Asn Tyr Asn Asn Val Gly Gly

195 200 205

Gly Trp Ala Asn Met Asp His His Tyr Ser Ser Ala Pro Tyr Asn Phe

210 215 220

Phe Asp Arg Ala Lys Pro Leu Phe Gly Leu Glu Gly His Gln Glu Glu

225 230 235 240

Glu Glu Cys Gly Gly Asp Ala Tyr Leu Glu His Arg Arg Thr Leu Pro

245 250 255

Leu Phe Pro Met His Gly Glu Asp His Ile Asn Gly Gly Ser Gly Ala

260 265 270

Ile Trp Lys Tyr Gly Gln Ser Glu Val Arg Pro Cys Ala Ser Leu Glu

275 280 285

Leu Arg Leu Asn

290

<210> 228

<211> 453

<212> Белок

<213> Brassica napus

<400> 228

Met Asp Leu Gly Ser Val Thr Gly Asn Val Asn Gly Ser Pro Ser Leu

1 5 10 15

Lys Glu Leu Arg Glu Ser Lys Gln Asp Arg Ser Glu Phe Asp Gly Glu

20 25 30

Asp Cys Leu Gln Gln Ser Ser Lys Leu Ala Arg Thr Ile Ala Glu Asp

35 40 45

Lys His Leu Pro Ser Ser Tyr Ala Ala Ala Tyr Ser Arg Pro Met Ser

50 55 60

Phe His Gln Gly Ile Pro Leu Ala Arg Ser Ala Ser Leu Leu Ser Ser

65 70 75 80

Asp Ser Arg Arg Gln Glu His Met Leu Ser Phe Ser Asp Lys Pro Glu

85 90 95

Ala Phe Asp Phe Ser Lys Tyr Val Gly Leu Asp Asn Asn Lys Asn Ser

100 105 110

Leu Ser Pro Phe Leu His Gln Leu Pro Pro Pro Tyr Cys Arg Thr Pro

115 120 125

Gly Gly Gly Tyr Gly Ser Gly Gly Met Met Met Ser Met Gln Gly Lys

130 135 140

Gly Pro Phe Thr Leu Thr Gln Trp Ala Glu Leu Glu Gln Gln Ala Leu

145 150 155 160

Ile Tyr Lys Tyr Ile Thr Ala Asn Val Pro Val Pro Ser Ser Leu Leu

165 170 175

Ile Ser Ile Gln Lys Ser Phe Tyr Pro Tyr Arg Ser Phe Pro Pro Ser

180 185 190

Ser Phe Gly Trp Gly Thr Phe His Leu Gly Phe Ala Gly Gly Lys Met

195 200 205

Asp Pro Glu Pro Gly Arg Cys Arg Arg Thr Asp Gly Lys Lys Trp Arg

210 215 220

Cys Ser Lys Asp Ala Val Pro Asp Gln Lys Tyr Cys Glu Arg His Ile

225 230 235 240

Asn Arg Gly Arg His Arg Ser Arg Lys Pro Val Glu Val Gln Pro Gly

245 250 255

Gln Thr Ala Ala Ser Lys Ala Ala Ala Val Ala Ser Arg Asn Thr Ala

260 265 270

Ser Gln Ile Pro Asn Asn Arg Val Gln Asn Val Ile Tyr Pro Ser Thr

275 280 285

Val Asn Leu Pro Pro Lys Glu Gln Arg Asn Asn Asn Asn Ser Ser Phe

290 295 300

Gly Phe Gly His Val Thr Ser Pro Ser Leu Leu Thr Ser Ser Tyr Leu

305 310 315 320

Asp Phe Ser Ser Asn Gln Asn Lys Pro Glu Glu Leu Lys Ser Asp Trp

325 330 335

Thr Gln Leu Ser Met Ser Ile Pro Val Ala Ser Ser Ser Pro Ser Ser

340 345 350

Thr Ala Gln Asp Lys Thr Thr Leu Ser Pro Leu Arg Leu Asp Leu Pro

355 360 365

Ile Gln Ser Gln Gln Glu Thr Leu Glu Ala Val Arg Lys Val Asn Thr

370 375 380

Trp Ile Pro Ile Ser Trp Gly Asn Ser Leu Gly Gly Pro Leu Gly Glu

385 390 395 400

Val Leu Asn Ser Thr Thr Ser Ser Pro Thr Leu Gly Ser Ser Pro Thr

405 410 415

Gly Val Leu Gln Lys Ser Thr Phe Cys Ser Leu Ser Asn Ser Ser Ser

420 425 430

Val Thr Ser Pro Val Ala Asp Asn Asn Arg Asn Asn Asn Val Asp Tyr

435 440 445

Phe His Tyr Thr Thr

450

<210> 229

<211> 461

<212> Белок

<213> Brassica napus

<400> 229

Met Asp Leu Gly Ser Val Thr Gly Asn Val Asn Gly Ser Pro Gly Leu

1 5 10 15

Lys Glu Leu Arg Gly Ser Lys Gln Asp Arg Ser Gly Phe Asp Gly Glu

20 25 30

Asp Cys Leu Gln Gln Ser Ser Lys Leu Ala Arg Thr Ile Ala Glu Asp

35 40 45

Lys His Leu Pro Ser Ser Tyr Ala Ala Tyr Ser Arg Pro Met Ser Phe

50 55 60

His Gln Gly Ile Pro Leu Thr Arg Ser Ala Ser Leu Leu Ser Ser Asp

65 70 75 80

Ser Arg Arg Gln Glu His Met Leu Ser Phe Ser Asp Lys Pro Glu Ala

85 90 95

Phe Asp Phe Ser Lys Tyr Val Gly Leu Asp Asn Asn Lys Asn Ser Leu

100 105 110

Ser Pro Phe Leu His Gln Leu Pro Pro Pro Tyr Cys Arg Ser Ser Gly

115 120 125

Gly Gly Tyr Gly Ser Gly Gly Met Met Met Ser Met Gln Gly Lys Gly

130 135 140

Pro Phe Thr Leu Thr Gln Trp Ala Glu Leu Glu Gln Gln Ala Leu Ile

145 150 155 160

Tyr Lys Tyr Ile Thr Ala Asn Val Pro Val Pro Ser Ser Leu Leu Ile

165 170 175

Ser Ile Gln Lys Ser Phe Tyr Pro Tyr Arg Ser Phe Pro Pro Ser Ser

180 185 190

Phe Gly Trp Gly Thr Phe His Leu Gly Phe Ala Gly Gly Lys Met Asp

195 200 205

Pro Glu Pro Gly Arg Cys Arg Arg Thr Asp Gly Lys Lys Trp Arg Cys

210 215 220

Ser Lys Asp Ala Val Pro Glu Gln Lys Tyr Cys Glu Arg His Ile Asn

225 230 235 240

Arg Gly Arg His Arg Ser Arg Lys Pro Val Glu Val Gln Pro Gly Gln

245 250 255

Thr Ala Ala Ser Lys Ala Val Ala Ser Arg Asp Thr Ala Ser Gln Ile

260 265 270

Pro Ser Asn Arg Val Gln Asn Val Ile Tyr Pro Ser Asn Val Asn Leu

275 280 285

Gln Pro Lys Glu Gln Arg Asn Asn Asp Asn Ser Pro Phe Gly Phe Gly

290 295 300

His Val Thr Ser Ser Ser Leu Leu Thr Ser Ser Tyr Leu Asp Phe Ser

305 310 315 320

Ser Asn Gln Glu Lys Pro Ser Gly Asn His His Asn Gln Ser Ser Trp

325 330 335

Pro Glu Glu Leu Lys Ser Asp Trp Thr Gln Leu Ser Met Ser Ile Pro

340 345 350

Val Ala Ser Ser Ser Pro Ser Ser Thr Ala Gln Asp Lys Thr Ala Leu

355 360 365

Ser Pro Leu Arg Leu Asp Leu Pro Ile Gln Ser Gln Gln Glu Thr Leu

370 375 380

Glu Ser Ala Arg Lys Val Asn Thr Trp Ile Pro Ile Ser Trp Gly Asn

385 390 395 400

Ser Leu Gly Gly Pro Leu Gly Glu Val Leu Asn Ser Thr Thr Ser Ser

405 410 415

Pro Thr Leu Gly Ser Ser Pro Thr Gly Val Leu Gln Lys Ser Thr Phe

420 425 430

Cys Ser Leu Ser Asn Ser Ser Ser Val Thr Ser Pro Ile Ala Asp Asn

435 440 445

Asn Arg Asn Asn Asn Val Asp Tyr Phe His Tyr Thr Thr

450 455 460

<210> 230

<211> 409

<212> Белок

<213> Arabidopsis thaliana

<400> 230

Met Glu Ala Arg Pro Val His Arg Ser Gly Ser Arg Asp Leu Thr Arg

1 5 10 15

Thr Ser Ser Ile Pro Ser Thr Gln Lys Pro Ser Pro Val Glu Asp Ser

20 25 30

Phe Met Arg Ser Asp Asn Asn Ser Gln Leu Met Ser Arg Pro Leu Gly

35 40 45

Gln Thr Tyr His Leu Leu Ser Ser Ser Asn Gly Gly Ala Val Gly His

50 55 60

Ile Cys Ser Ser Ser Ser Ser Gly Phe Ala Thr Asn Leu His Tyr Ser

65 70 75 80

Thr Met Val Ser His Glu Lys Gln Gln His Tyr Thr Gly Ser Ser Ser

85 90 95

Asn Asn Ala Val Gln Thr Pro Ser Asn Asn Asp Ser Ala Trp Cys His

100 105 110

Asp Ser Leu Pro Gly Gly Phe Leu Asp Phe His Glu Thr Asn Pro Ala

115 120 125

Ile Gln Asn Asn Cys Gln Ile Glu Asp Gly Gly Ile Ala Ala Ala Phe

130 135 140

Asp Asp Ile Gln Lys Arg Ser Asp Trp His Glu Trp Ala Asp His Leu

145 150 155 160

Ile Thr Asp Asp Asp Pro Leu Met Ser Thr Asn Trp Asn Asp Leu Leu

165 170 175

Leu Glu Thr Asn Ser Asn Ser Asp Ser Lys Asp Gln Lys Thr Leu Gln

180 185 190

Ile Pro Gln Pro Gln Ile Val Gln Gln Gln Pro Ser Pro Ser Val Glu

195 200 205

Leu Arg Pro Val Ser Thr Thr Ser Ser Asn Ser Asn Asn Gly Thr Gly

210 215 220

Lys Ala Arg Met Arg Trp Thr Pro Glu Leu His Glu Ala Phe Val Glu

225 230 235 240

Ala Val Asn Ser Leu Gly Gly Ser Glu Arg Ala Thr Pro Lys Gly Val

245 250 255

Leu Lys Ile Met Lys Val Glu Gly Leu Thr Ile Tyr His Val Lys Ser

260 265 270

His Leu Gln Lys Tyr Arg Thr Ala Arg Tyr Arg Pro Glu Pro Ser Glu

275 280 285

Thr Gly Ser Pro Glu Arg Lys Leu Thr Pro Leu Glu His Ile Thr Ser

290 295 300

Leu Asp Leu Lys Gly Gly Ile Gly Ile Thr Glu Ala Leu Arg Leu Gln

305 310 315 320

Met Glu Val Gln Lys Gln Leu His Glu Gln Leu Glu Ile Gln Arg Asn

325 330 335

Leu Gln Leu Arg Ile Glu Glu Gln Gly Lys Tyr Leu Gln Met Met Phe

340 345 350

Glu Lys Gln Asn Ser Gly Leu Thr Lys Gly Thr Ala Ser Thr Ser Asp

355 360 365

Ser Ala Ala Lys Ser Glu Gln Glu Asp Lys Lys Thr Ala Asp Ser Lys

370 375 380

Glu Val Pro Glu Glu Glu Thr Arg Lys Cys Glu Glu Leu Glu Ser Pro

385 390 395 400

Gln Pro Lys Arg Pro Lys Ile Asp Asn

405

<210> 231

<211> 685

<212> ДНК

<213> Nicotiana benthamiana

<400> 231

aaagtccact ggaagaatac tcttcaacag ttggaaagag ttggacctaa gtcggttggt 60

gtctgtctgt taacagcagc ttttgttggc atggccttca ctatccaatt tgttagagaa 120

ttcactagat tagggttaaa tagatctgtt ggtggggtgt tggcccttgc cttttcaaga 180

gagctaagtc cagttgtcac atcaattgta gttgctgggc gtatcggtag tgcatttgct 240

gcggaactgg gcactatgca ggtatctgag cagactgaca cgttgagagt tcttggtgca 300

aatcctgttg attatttggt gacaccaaga gtgattgctt cttgcgttgc attaccattt 360

ttaaccctaa tgtgctttac agttggaatg gcatccagcg cccttttggc agatggtgtt 420

tatggaatta gcataaacat aatcttagat tctgctctga gagctcttag atcatgggac 480

cttattagtg caatgattaa atcaggggtg tttggtgcta ttatatccat cataagctgt 540

gcttgggggg tcaccacgct gggaggtgcc aaaggggttg gagagtcgac tacttcagca 600

gtagttttat ctcttgttgg catattcata gctgactttg ctctctcttg ctgtttcttc 660

cagggtgctg gcgattccct gaaga 685

<210> 232

<211> 824

<212> Белок

<213> Solanum tuberosum

<400> 232

Met Asp Ile Ser Asn Glu Ala Lys Val Glu Phe Ile Ser Ile Gly Pro

1 5 10 15

Ser Ser Ile Val Gly Arg Thr Ile Ala Phe Arg Val Leu Phe Cys Lys

20 25 30

Ser Ile Ser Arg Leu Arg His Asn Ile Phe His Phe Leu Ile Tyr Tyr

35 40 45

Leu Tyr Lys Ile Lys Asn Cys Leu Ser Tyr Tyr Leu Thr Pro Leu Ile

50 55 60

Lys Trp Phe His Pro Arg Asn Pro Gln Gly Ile Leu Ala Leu Val Thr

65 70 75 80

Leu Leu Ala Phe Leu Leu Arg Arg Tyr Thr Asn Val Lys Ile Arg Ala

85 90 95

Asp Met Val Tyr Lys Arg Lys Phe Trp Arg Asn Met Met Lys Ser Ala

100 105 110

Leu Thr Tyr Glu Glu Trp Ala His Ala Ala Lys Met Leu Glu Lys Glu

115 120 125

Thr Pro Lys Met Asn Glu Ala Glu Phe Tyr Asp Glu Glu Leu Val Val

130 135 140

Asn Lys Leu Gln Glu Leu Gln His Arg Arg Asn Glu Gly Ser Leu Arg

145 150 155 160

Asp Ile Met Phe Phe Met Arg Ala Asp Leu Val Arg Asn Leu Gly Asn

165 170 175

Met Cys Asn Pro Gln Leu His Lys Gly Arg Leu His Val Pro Lys Leu

180 185 190

Ile Lys Glu Tyr Ile Asp Glu Val Ser Thr Gln Leu Lys Met Val Cys

195 200 205

Asp Tyr Asp Ser Asp Glu Ile Leu Leu Glu Glu Lys Leu Ala Phe Met

210 215 220

His Glu Thr Arg His Ala Phe Gly Arg Thr Ala Leu Leu Leu Ser Gly

225 230 235 240

Gly Ala Ser Leu Gly Ala Phe His Val Gly Val Val Lys Thr Leu Val

245 250 255

Glu His Lys Leu Met Pro Arg Ile Ile Ala Gly Ser Ser Val Gly Ser

260 265 270

Ile Met Cys Ser Val Val Ala Thr Arg Ser Trp Pro Glu Leu Gln Ser

275 280 285

Phe Phe Glu Asn Phe Trp His Val Leu Gln Pro Phe Glu Gln Met Gly

290 295 300

Gly Ile Leu Thr Val Phe Arg Arg Ile Met Arg Gln Gly Ala Val His

305 310 315 320

Glu Ile Arg Gln Leu Gln Val Met Leu Arg His Leu Thr Asn Asn Leu

325 330 335

Thr Phe Gln Glu Ala Tyr Asp Met Thr Gly Arg Val Leu Gly Ile Thr

340 345 350

Val Cys Ser Pro Arg Lys His Glu Pro Pro Arg Cys Leu Asn Tyr Leu

355 360 365

Thr Ser Pro His Val Val Ile Trp Ser Ala Val Thr Ala Ser Cys Ala

370 375 380

Phe Pro Gly Leu Phe Glu Ala Gln Glu Leu Met Ala Lys Asp Arg Ser

385 390 395 400

Gly Asn Leu Val Pro Tyr His Pro Pro Phe His Leu Glu Pro Asp Gln

405 410 415

Ala Ala Ala Ser Gly Ser Ser Ala Arg Arg Trp Arg Asp Gly Ser Leu

420 425 430

Glu Ile Asp Leu Pro Met Met Gln Leu Lys Glu Leu Phe Asn Val Asn

435 440 445

His Phe Ile Val Ser Gln Ala Asn Pro His Ile Ala Pro Leu Leu Arg

450 455 460

Ile Lys Glu Phe Val Arg Ala Tyr Gly Gly Asn Phe Ala Ala Lys Leu

465 470 475 480

Ala His Leu Thr Glu Met Glu Val Lys His Arg Cys Asn Gln Val Leu

485 490 495

Glu Leu Gly Phe Pro Leu Arg Gly Leu Ala Lys Leu Phe Ala Gln Asp

500 505 510

Trp Glu Gly Asp Val Thr Val Val Met Pro Ala Thr Leu Ala Gln Tyr

515 520 525

Leu Lys Ile Ile Gln Asn Pro Ser Thr Leu Glu Val Gln Lys Ala Ala

530 535 540

Asn Gln Gly Arg Arg Cys Thr Trp Glu Lys Leu Ser Ala Ile Lys Ala

545 550 555 560

Asn Cys Gly Ile Glu Leu Ala Leu Asp Glu Cys Val Ala Ile Leu Asn

565 570 575

His Met Arg Arg Leu Lys Arg Ser Ala Glu Arg Ala Ala Ala Ala Ser

580 585 590

Gln Gly Met Ser Ser Ser Thr Val Lys Leu Asn Ala Ser Arg Arg Ile

595 600 605

Pro Ser Trp Asn Cys Ile Ala Arg Glu Asn Ser Thr Gly Ser Leu Glu

610 615 620

Glu Asp Phe His Ala Asp Ala Ser Ser Ser Leu His His His Asn Ala

625 630 635 640

Gly Arg Asn Trp Arg Cys Asn Asn Lys Asn Ala Ala His Asp His His

645 650 655

Gly Ser Asp Ser Glu Ser Glu Asn Ala Asp Asn Asn Ser Trp Thr Arg

660 665 670

Ser Gly Gly Pro Leu Met Arg Thr Thr Ser Ala Asp Lys Phe Ile Asp

675 680 685

Tyr Val Gln Asn Leu Glu Met His Pro Ser Gln Arg Ser Ser Arg Gly

690 695 700

Leu Ser Ile Asp Leu Asn Asn Val Val Val Arg Glu Pro Leu Ser Pro

705 710 715 720

Ser Pro Arg Val Thr Thr Pro Ala Arg Arg Ser Asp Thr Glu Phe Asp

725 730 735

Gln Arg Asp Ile Arg Ile Ile Val Ala Glu Gly Asp Leu Leu Gln Thr

740 745 750

Glu Arg Thr Asn Asn Gly Ile Val Phe Asn Val Val Arg Arg Gly Asp

755 760 765

Leu Thr Pro Ser Asn Arg Ser Leu Asp Ser Glu Asn Asn Ser Cys Phe

770 775 780

His Asp Pro Val Ala Glu Cys Val Gln Leu Glu Asn Pro Glu Lys Asp

785 790 795 800

Met Asp Ile Ser Ser Ala Ser Glu Asp Gly Glu Asn Ala Val Leu Asp

805 810 815

Glu Val Thr Lys Asn Gln Ile Ile

820

<210> 233

<211> 2475

<212> ДНК

<213> Solanum tuberosum

<400> 233

atggatataa gtaatgaggc taaagtagag ttcatttcca taggaccttc ttcaattgta 60

ggtcgaacaa tagcctttcg agttttgttt tgcaaatcaa tatcgcggtt gaggcacaac 120

atttttcatt tcttgatata ttacttgtac aagatcaaga attgtctgtc atactacttg 180

acacctttga tcaaatggtt tcacccgcgt aatccacagg ggatattagc attagtaaca 240

cttctagcct tcttgttgag gcgatatacg aatgtaaaaa tcagggctga tatggtttat 300

aagaggaaat tttggaggaa tatgatgaaa tctgcattaa cttatgagga atgggctcat 360

gctgcgaaaa tgttggagaa agagacacct aaaatgaatg aagcagagtt ttatgatgaa 420

gagttagttg taaataaact tcaagaactt caacatcgtc gtaatgaagg atctttaaga 480

gatattatgt tctttatgag agctgatctt gtgagaaatc tgggtaatat gtgtaatcca 540

cagcttcata agggtaggct tcatgtgcct aaacttatta aggagtatat tgatgaggtt 600

tcaactcagt tgaaaatggt atgtgattat gattcagatg agattttgtt ggaggagaag 660

cttgctttta tgcatgaaac aagacatgct tttggtagga cagcattgct tttaagcggg 720

ggcgcgtctt tgggagcttt tcatgttggt gtggttaaga cattggttga gcacaagctt 780

atgccaagga taattgctgg ttcgagtgtt ggatcgatta tgtgttctgt agttgcaact 840

cggtcttggc ctgagctgca gagttttttt gagaattttt ggcatgtgtt gcagccgttt 900

gaacagatgg gtggaattct aactgttttc aggaggatca tgagacaagg ggctgtacat 960

gagattaggc agttgcaggt gatgttacgc catctcacga ataatcttac tttccaagaa 1020

gcttacgata tgactggtcg agttctaggg attactgttt gctcccctag aaaacatgaa 1080

cctcctagat gtttgaacta cttgacttca cctcatgttg ttatatggag tgctgtgact 1140

gcttcttgcg cgtttcctgg tctgtttgaa gctcaagaac tgatggcaaa ggatagaagt 1200

ggtaatcttg ttccttatca tccaccattt catttggaac ctgatcaggc tgcagcttct 1260

ggttcatctg ctcgtcgatg gagggatggt agcttggaga tcgatctacc tatgatgcag 1320

ctaaaagagc tattcaacgt aaaccacttt atcgtgagcc aggcgaatcc acatattgct 1380

cctttactca ggatcaaaga gtttgtaaga gcttatggag gcaactttgc tgccaagctt 1440

gctcatctta ctgagatgga agtgaagcac agatgcaatc aggtactgga acttggtttt 1500

cccttgaggg gattagccaa gctatttgct caagattggg aaggcgatgt caccgttgta 1560

atgccagcca ctcttgctca gtacttgaag atcatacaga atccctctac tttggaggtt 1620

caaaaagcag caaatcaagg gaggagatgc acttgggaga aactatcagc cattaaggca 1680

aattgtggaa ttgagcttgc tcttgatgag tgtgtagcaa tactcaacca tatgcgtaga 1740

ctaaaaagga gcgcggagag agcagctgct gcttcacaag gcatgtcaag cagcacagtc 1800

aaactcaatg cttctagacg tattccttct tggaattgca ttgcaagaga gaactcaaca 1860

ggctcccttg aagaagactt tcacgcggat gcttcttcct ctcttcatca tcacaatgct 1920

ggtcgaaact ggcgttgtaa taacaagaat gctgcacatg atcatcatgg tagtgacagt 1980

gagtctgaaa acgcggataa taattcttgg acaagatcag gtggtccatt gatgaggaca 2040

acatcagctg ataagtttat tgactatgta caaaacttgg aaatgcatcc ttcacaacga 2100

tcgagcagag gactgagtat tgacctcaac aatgttgtag tcagggagcc tctttctccg 2160

agtccacgag tgacaacacc tgctaggaga tcagatacag aatttgatca aagagacatc 2220

agaattatcg tcgctgaagg tgatttacta cagactgaaa ggactaacaa tgggattgta 2280

ttcaatgtgg taaggagagg agacttaact ccatcaaaca ggagtcttga ttcagaaaac 2340

aacagttgct ttcatgatcc agtggccgaa tgcgtgcaac tcgaaaatcc tgagaaggat 2400

atggatataa gttcagcatc agaagatgga gaaaatgcag tactagatga agtaacaaaa 2460

aatcagatca tataa 2475

<210> 234

<211> 521

<212> Белок

<213> Solanum tuberosum

<400> 234

Met Ala Ala Ser Ile Gly Ala Leu Lys Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn

1 5 10 15

Cys Ile Asn Glu Arg Arg Asn Asp Ser Thr Arg Ala Val Ser Ser Arg

20 25 30

Asn Leu Ser Phe Ser Ser Ser His Leu Ala Gly Asp Lys Leu Met Pro

35 40 45

Ile Ser Ser Leu Arg Ser Gln Gly Val Arg Phe Asn Val Arg Arg Ser

50 55 60

Ser Leu Ile Val Pro Pro Lys Ala Val Ser Asp Ser Gln Asn Ser Gln

65 70 75 80

Thr Cys Leu Asp Pro Asp Ala Ser Arg Ser Val Leu Gly Ile Ile Leu

85 90 95

Gly Gly Gly Ala Gly Thr Arg Leu Tyr Pro Leu Thr Lys Lys Arg Ala

100 105 110

Lys Pro Ala Val Pro Leu Gly Ala Asn Tyr Arg Leu Ile Asp Ile Pro

115 120 125

Val Ser Asn Cys Leu Asn Ser Asn Ile Ser Lys Ile Tyr Val Leu Thr

130 135 140

Gln Phe Asn Ser Ala Ser Leu Asn Arg His Leu Ser Arg Ala Tyr Ala

145 150 155 160

Ser Asn Met Gly Gly Tyr Lys Asn Glu Gly Phe Val Glu Val Leu Ala

165 170 175

Ala Gln Gln Ser Pro Glu Asn Pro Asp Trp Phe Gln Gly Thr Ala Asp

180 185 190

Ala Val Arg Gln Tyr Leu Trp Leu Phe Glu Glu His Thr Val Leu Glu

195 200 205

Tyr Leu Ile Leu Ala Gly Asp His Leu Tyr Arg Met Asp Tyr Glu Lys

210 215 220

Phe Ile Gln Ala His Arg Glu Thr Asp Ala Asp Ile Thr Val Ala Ala

225 230 235 240

Leu Pro Met Asp Glu Lys Arg Ala Thr Ala Phe Gly Leu Met Lys Ile

245 250 255

Asp Glu Glu Gly Arg Ile Ile Glu Phe Ala Glu Lys Pro Gln Gly Glu

260 265 270

Gln Leu Gln Ala Met Lys Val Asp Thr Thr Ile Leu Gly Leu Asp Asp

275 280 285

Lys Arg Ala Lys Glu Met Pro Phe Ile Ala Ser Met Gly Ile Tyr Val

290 295 300

Ile Ser Lys Asp Val Met Leu Ser Leu Leu Arg Asp Lys Phe Pro Gly

305 310 315 320

Ala Asn Asp Phe Gly Ser Glu Val Ile Pro Gly Ala Thr Ser Leu Gly

325 330 335

Met Arg Val Gln Ala Tyr Leu Tyr Asp Gly Tyr Trp Glu Asp Ile Gly

340 345 350

Thr Ile Glu Ala Phe Tyr Asn Ala Asn Leu Gly Ile Thr Lys Lys Pro

355 360 365

Val Pro Asp Phe Ser Phe Tyr Asp Arg Ser Ala Pro Ile Tyr Thr Gln

370 375 380

Pro Arg Tyr Leu Pro Pro Ser Lys Met Leu Asp Ala Asp Val Thr Asp

385 390 395 400

Ser Val Ile Gly Glu Gly Cys Val Ile Lys Ser Cys Lys Ile His His

405 410 415

Ser Val Val Gly Leu Arg Ser Cys Ile Ser Glu Gly Ala Ile Ile Glu

420 425 430

Asp Ser Leu Leu Met Gly Ala Asp Tyr Tyr Glu Thr Asp Ala Asp Arg

435 440 445

Lys Leu Leu Ala Ala Lys Gly Ser Val Pro Ile Gly Ile Gly Lys Asn

450 455 460

Cys His Ile Lys Arg Ala Ile Ile Asp Lys Asn Ala Arg Ile Gly Asp

465 470 475 480

Asn Val Lys Ile Ile Asn Lys Asp Asn Val Gln Glu Ala Ala Arg Glu

485 490 495

Thr Asp Gly Tyr Phe Ile Lys Ser Gly Ile Val Thr Val Ile Lys Asp

500 505 510

Ala Leu Ile Pro Ser Gly Ile Ile Ile

515 520

<210> 235

<211> 1819

<212> ДНК

<213> Solanum tuberosum

<400> 235

ctagtgattg caatcacact ctaccacaca ctctctagta gagagatcag ttgataacaa 60

gctttgttaa caatggcggc ttccattgga gccttaaaat cttcaccttc ttctaacaat 120

tgcatcaatg agagaagaaa tgattctaca cgtgcagtat ccagcagaaa tctctcattt 180

tcgtcttctc atctcgccgg agacaagttg atgcctatat cgtccttacg ttcccaagga 240

gtccgattca atgtgagaag aagttcattg attgtgccgc ctaaggctgt ttctgattcg 300

cagaattcac agacatgtct agacccagat gctagccgga gtgttttggg aattattctt 360

ggaggtggag ctgggacccg actttatcct ctaactaaaa aaagagcaaa gccagctgtt 420

ccacttggag caaattatcg tctgattgac attcctgtaa gcaactgctt gaacagtaac 480

atatccaaga tctatgttct cacacaattc aactctgcct ctctgaatcg ccacctttca 540

cgagcatatg ctagcaacat gggaggatac aaaaacgagg gctttgtgga agttcttgct 600

gctcaacaaa gtccagagaa ccccgattgg ttccagggca cggctgatgc tgtcagacaa 660

tatctgtggt tgtttgagga gcatactgtt cttgaatacc ttatacttgc tggagatcat 720

ctgtatcgaa tggattatga aaagtttatt caagcccaca gagaaacaga tgctgatatt 780

accgttgccg cactgccaat ggacgagaag cgtgccactg cattcggtct catgaagatt 840

gacgaagaag gacgcattat tgaatttgca gagaaaccgc aaggagagca attgcaagca 900

atgaaagtgg atactaccat tttaggtctt gatgacaaga gagctaaaga aatgcctttc 960

attgccagta tgggtatata tgtcattagc aaagacgtga tgttaagcct acttcgtgac 1020

aagttccctg gggccaatga ttttggtagt gaagttattc ctggtgcaac ttcacttggg 1080

atgagagtgc aagcttattt atatgatggg tactgggaag atattggtac cattgaagct 1140

ttctacaatg ccaatttggg cattacaaaa aagccggtgc cagattttag cttttacgac 1200

cgatcagccc caatctacac ccaacctcga tatctaccac catcaaaaat gcttgatgct 1260

gatgtcacag atagtgtcat tggtgaaggt tgtgtgatca agagctgtaa gattcatcat 1320

tccgtggttg gactcagatc atgcatatca gagggagcaa ttatagaaga ctcacttttg 1380

atgggggcag attactatga gactgatgct gacaggaagt tgctggctgc aaagggcagt 1440

gtcccaattg gcatcggcaa gaattgtcac attaaaagag ccattatcga caagaatgcc 1500

cgtatagggg acaatgtgaa gatcattaac aaagacaacg ttcaagaagc ggctagggaa 1560

acagatggat acttcatcaa gagtgggatt gtcaccgtca tcaaggatgc tttgattcca 1620

agtggaatca tcatctgaag gaatgcgttt taacttggtt gtcctccaag attttggcta 1680

aacagccatg aggtagaaac gtgctgaact tttattttcc tgagctgtag aaatctagtg 1740

tacatctttc tgttatgata cttctcatta cccctacaag agaagactgg atgctgtaaa 1800

aattattcgt ctagaataa 1819

<210> 236

<211> 1173

<212> ДНК

<213> Sapium sebiferum L.

<400> 236

tgccaatagc cagccaataa aacatctaca cgttttcaca cggcttttca tcacagccgt 60

tgtttttctc atctcactcc gtgccttcat cttcatcctc ttctcctctc tctctgtctc 120

tatatgtata gaagcgttag atgtcttgcg ttgttaacca attcattttt cgctttctgc 180

ttcttctaat attataagaa agtttgattc ttcttcttgt caatctttgt tcgcggcttt 240

taacgatatc cgctaaagga aatttgaaat ttcaattatg gccgatggaa acgtcaattc 300

gcaagaacag atggctaagc aggaggaaca gaggctgaag tatttggagt ttgtacaagt 360

ggctgcaata catgctgtgg tgaccttcac aaacctctat gtttatgcca aaaacaagtc 420

gggtccattg aagcccggtg ttgagactgt tgaaggtacg gtcaagagtg tggttggacc 480

tgtttatggc aagttccatg atgttcccat tgaggttctc aagtttgtcg atcgcaagat 540

tgatcaatct gtaagcagcc tagacagccg tgtgcctcca gttgtgaagc agttatcggc 600

ccaagcattt tcagtggctc gcgaagcccc agtggctgct cgtgctgtgg cttctgaagt 660

gcagactgct ggagtgaagg aaactgcatc tgggttggca agaactctgt acttcaaata 720

tgaacccaag gccaaggagc tatacaccaa gtatgaacca aaagcggaac agtgtgctgc 780

ctctgcctgg cgtaagctca atcaactccc agtcttccct catgtagctc aggttgttat 840

gccaacagca gcttattgtt ctgaaaagta caaccaggca gtacttacca ccgctgagaa 900

aggatacaga gtgtcctctt atttgccttt tgtgcccact gagagaattg ctaagttgtt 960

taggaatgag gcacctgaat ctaccccttt cctttccaat tgagcaagat gctgataaat 1020

gattcacaat ggacatgtgg acagaataaa aatctttgga tattatatgg tactgtgtat 1080

ttcaaggttc aagattactc tctacaatgt gtgaattttt gtttcagatg acttaattct 1140

tgttcattca ttatatatat atatatatat ata 1173

<210> 237

<211> 241

<212> Белок

<213> Sapium sebiferum L.

<400> 237

Met Ala Asp Gly Asn Val Asn Ser Gln Glu Gln Met Ala Lys Gln Glu

1 5 10 15

Glu Gln Arg Leu Lys Tyr Leu Glu Phe Val Gln Val Ala Ala Ile His

20 25 30

Ala Val Val Thr Phe Thr Asn Leu Tyr Val Tyr Ala Lys Asn Lys Ser

35 40 45

Gly Pro Leu Lys Pro Gly Val Glu Thr Val Glu Gly Thr Val Lys Ser

50 55 60

Val Val Gly Pro Val Tyr Gly Lys Phe His Asp Val Pro Ile Glu Val

65 70 75 80

Leu Lys Phe Val Asp Arg Lys Ile Asp Gln Ser Val Ser Ser Leu Asp

85 90 95

Ser Arg Val Pro Pro Val Val Lys Gln Leu Ser Ala Gln Ala Phe Ser

100 105 110

Val Ala Arg Glu Ala Pro Val Ala Ala Arg Ala Val Ala Ser Glu Val

115 120 125

Gln Thr Ala Gly Val Lys Glu Thr Ala Ser Gly Leu Ala Arg Thr Leu

130 135 140

Tyr Phe Lys Tyr Glu Pro Lys Ala Lys Glu Leu Tyr Thr Lys Tyr Glu

145 150 155 160

Pro Lys Ala Glu Gln Cys Ala Ala Ser Ala Trp Arg Lys Leu Asn Gln

165 170 175

Leu Pro Val Phe Pro His Val Ala Gln Val Val Met Pro Thr Ala Ala

180 185 190

Tyr Cys Ser Glu Lys Tyr Asn Gln Ala Val Leu Thr Thr Ala Glu Lys

195 200 205

Gly Tyr Arg Val Ser Ser Tyr Leu Pro Phe Val Pro Thr Glu Arg Ile

210 215 220

Ala Lys Leu Phe Arg Asn Glu Ala Pro Glu Ser Thr Pro Phe Leu Ser

225 230 235 240

Asn

<210> 238

<211> 1252

<212> ДНК

<213> Sapium sebiferum L.

<400> 238

ctacttttcc ctagcattag tattctaggc cccactctgt agattcctcc agctgcctga 60

tctaattttt tatcaactct tgaccgttcg atcatcccaa cggctcagat tcactagtac 120

ttttctcaca ccgtatctcc gattctccat gactccatcg atataaatcg cagtgctcat 180

caactgaatt ctcgaaattg cggttacaag ctgctataag aagcgaaaag aaacgctgag 240

aaacaggatc cgttcctcct ccctcgtttt ttactcctta caagatggag accgagaaga 300

agattcctga attgaagcac ttagggttcg tgaggatggc tgctattcag tcactgattt 360

gcgtctcgaa tctctacgat tacgcgaagc ataactcagg acctttgaga tccactgttg 420

gaaccgtgga gggtgccgta accaccgtag taggtccagt ttaccagaaa ttcaaagacc 480

ttcctgatga tcttcttgta tatgttgata agaaggtgga tgaaggaaca cacaagtttg 540

ataagcatgc tccacctatt gctaagaagg ctgcgagcca agcccatagt ttgtttcata 600

tagccttgga gaaggtcgaa aaactcgtgc aggaggctcg tgcaggagga cctcgtgctg 660

ctctgcattt tgtggctaca gagtcgaagc acttggcgtt gacccaatct gtgaagctgt 720

atagtaaact taatcagttc cctgtcattc acactgttac agatgtaacc cttcccacag 780

ctactcactg gtcagataag tataaccata cccttatgga cctgacccgg aagggttata 840

cgatctttgg ttatttgcct ttggttccta ttgatgacat atctaagaca tttaaacaaa 900

gtaaagcaga ggagaaagaa aatgcaacta cgcataaatc tgattcatcg gattccgact 960

aaacggttgc catcatgtct aatgggtgtg gtttgttaag tatagtggtt tgcgaaaatg 1020

ttctagggtt tatgagcctg ctcgaaagat gctgagaaat ggaaatctgt actatttagg 1080

agtttttccg tactataata atgagtatga atggtttgta aattctgcct tgtgctttct 1140

cgacaagtat atcatgcttc tattttttac tactacttac tggactactg aattgtctca 1200

taattgtccc tagtgtctaa ttaaatatca cctccaaaat attattgaaa aa 1252

<210> 239

<211> 225

<212> Белок

<213> Sapium sebiferum L.

<400> 239

Met Glu Thr Glu Lys Lys Ile Pro Glu Leu Lys His Leu Gly Phe Val

1 5 10 15

Arg Met Ala Ala Ile Gln Ser Leu Ile Cys Val Ser Asn Leu Tyr Asp

20 25 30

Tyr Ala Lys His Asn Ser Gly Pro Leu Arg Ser Thr Val Gly Thr Val

35 40 45

Glu Gly Ala Val Thr Thr Val Val Gly Pro Val Tyr Gln Lys Phe Lys

50 55 60

Asp Leu Pro Asp Asp Leu Leu Val Tyr Val Asp Lys Lys Val Asp Glu

65 70 75 80

Gly Thr His Lys Phe Asp Lys His Ala Pro Pro Ile Ala Lys Lys Ala

85 90 95

Ala Ser Gln Ala His Ser Leu Phe His Ile Ala Leu Glu Lys Val Glu

100 105 110

Lys Leu Val Gln Glu Ala Arg Ala Gly Gly Pro Arg Ala Ala Leu His

115 120 125

Phe Val Ala Thr Glu Ser Lys His Leu Ala Leu Thr Gln Ser Val Lys

130 135 140

Leu Tyr Ser Lys Leu Asn Gln Phe Pro Val Ile His Thr Val Thr Asp

145 150 155 160

Val Thr Leu Pro Thr Ala Thr His Trp Ser Asp Lys Tyr Asn His Thr

165 170 175

Leu Met Asp Leu Thr Arg Lys Gly Tyr Thr Ile Phe Gly Tyr Leu Pro

180 185 190

Leu Val Pro Ile Asp Asp Ile Ser Lys Thr Phe Lys Gln Ser Lys Ala

195 200 205

Glu Glu Lys Glu Asn Ala Thr Thr His Lys Ser Asp Ser Ser Asp Ser

210 215 220

Asp

225

<210> 240

<211> 938

<212> ДНК

<213> Sapium sebiferum L.

<400> 240

gagtattcac actctggcct gattgggttt gctataaagg gcgatcgttg caacgctcca 60

tattgtctac ttggttttgt ttcaaatctc atcattttgt aaatttgcga cagtgtagcg 120

ttttctagga aaaaggttgc taaaggaaag tagttatcaa accgcagaaa tggcggaatc 180

cgaacttaat caacacacag atatggttca agatgatgat aaaaaactca agtatctaga 240

ttttgtacaa gtggccgcga tctatgttgt ggtttgtttc tctagtatct atgaatatgc 300

taaggaaaac tccggtccac taaaaccagg ggtccaagcc gttgagtgta ccgtcaaaac 360

tgtaataagt ccggtttacg agaagtttcg cgacgtacct tttgaactcc ttaaattcgt 420

cgatcgtaaa gttgacaact ctctaggcga gttggacagg cacgtgccgt cgctggtgaa 480

gcaggcatca agccaagctc gagctgtggc tagtgaaatt caacatgctg gattggtaga 540

cgcaactaag aacattgcga agacgatgta tacaaagtat gaactgacgg cttggcagct 600

ctactgcaaa tacaagccgg tggctaagcg ttacgcggtg tcgacctggc gctcattgaa 660

ccagcttcct ctgtttcctc aagcggctca gattgcaatc ccaactgctg cttcgtggtc 720

tgagaaatac aataagatgg ttcgttacac gaaagataga ggatatccag cggcggtgta 780

tctgccattg atctcggttg agaggattgc caaggtgttc aatgaagact taaacgggcc 840

caccgtccct accaatggat catccgccgc agcacaatag ttttcatttt atgtatttat 900

gtcagattga agacgctccg gagattttga aaacctga 938

<210> 241

<211> 194

<212> Белок

<213> Sapium sebiferum L.

<400> 241

Met Ala Glu Ser Glu Leu Asn Gln His Thr Asp Met Val Gln Asp Asp

1 5 10 15

Asp Lys Lys Leu Lys Tyr Leu Asp Phe Val Gln Val Ala Ala Ile Tyr

20 25 30

Val Val Val Cys Phe Ser Ser Ile Tyr Glu Tyr Ala Lys Glu Asn Ser

35 40 45

Gly Pro Leu Lys Pro Gly Val Gln Ala Val Glu Cys Thr Val Lys Thr

50 55 60

Val Ile Ser Pro Val Tyr Glu Lys Phe Arg Asp Val Pro Phe Glu Leu

65 70 75 80

Leu Lys Phe Val Asp Arg Lys Val Asp Asn Ser Leu Gly Glu Leu Asp

85 90 95

Arg His Val Pro Ser Leu Val Lys Gln Ala Ser Ser Gln Ala Arg Ala

100 105 110

Val Ala Ser Glu Ile Gln His Ala Gly Leu Val Asp Ala Thr Lys Asn

115 120 125

Ile Ala Lys Thr Met Tyr Thr Lys Tyr Glu Leu Thr Ala Trp Gln Leu

130 135 140

Tyr Cys Lys Tyr Lys Pro Val Ala Lys Arg Tyr Ala Val Ser Thr Trp

145 150 155 160

Arg Ser Leu Asn Gln Leu Pro Leu Phe Pro Gln Ala Ala Gln Ile Ala

165 170 175

Ile Pro Thr Ala Ala Ser Trp Ser Glu Lys Tyr Asn Lys Met Val Arg

180 185 190

Tyr Thr

<210> 242

<211> 2526

<212> ДНК

<213> Sorghum bicolor

<400> 242

atggacgagt ccggggaagc gagcgtcggc tccttcagga tcggcccgtc gacgctgctg 60

ggccgcgggg tggcgctccg cgtgcttctc ttcagctcgc tgtggcgcct gcgggcgcgc 120

gcgtacgccg ccatctcgcg cgtgcgcagc gcggtgctgc cggtggcggc gtcctggctt 180

cacctcagga acacccacgg cgtcctcctc atggtcgtcc tcttcgccct ctccctgagg 240

aagctctccg gcgcgcggtc gcgggcggcg ctcgcgcgcc ggcgcaggca gtacgagaag 300

gccatgctgc atgccgggac gtacgaggtc tgggcccgcg ccgccaatgt gctcgacaag 360

atgtctgatc aggtccatga ggcggatttc tatgacgagg agctgatcag gaacaggctt 420

gaggacctcc ggaggcggag ggaggacggg tcgctgcggg acgtggtgtt ctgtatgcgc 480

ggcgatcttg ttaggaactt ggggaacatg tgcaatcctg aacttcacaa gggcaggcta 540

gaggttccta agcttataaa ggaatacatt gaagaggttt ctattcaact aagaatggtg 600

tgcgaatctg acactgatga gttgctattg ggagagaagc ttgcctttgt tcaggagacc 660

aggcatgcct ttgggaggac agccctactc ttaagtgggg gtgcttcact ggggtctttc 720

catgtaggtg tagtgaaaac attggttgag cataagcttc tgcctcggat tatagcagga 780

tcaagcgttg gttccattat atgttcgatt gttgctaccc ggacatggcc tgagattgag 840

agcttcttca cagactcatt acagaccttg cagttctttg ataggatggg tggaattttt 900

gcagtgatga ggcgagtcac cactcatggt gcactgcatg acattagcca gatgcaaagg 960

cttctgaggg atctcacaag taacttaaca tttcaagagg cttatgacat gactggccgt 1020

gtccttggga tcaccgtttg ctctcctaga aaaaatgagc caccccgctg cctcaactat 1080

ctgacgtcgc cgcacgttgt tatttggagt gctgtaactg cctcttgtgc atttcctggg 1140

ctctttgaag ctcaggaact gatggcgaag gatagattcg gcaacatagt tcccttccat 1200

gcaccctttg ccacagatcc tgaacaaggt cctggagcat caaagcgccg gtggagagat 1260

gggagcctgg aaatggattt gcccatgatg agactcaagg agttgtttaa tgtaaaccat 1320

ttcattgtga gccaaactaa tcctcacatt tctcccctcc tccgaatgaa agagcttgtt 1380

agagtctatg gagggcgctt tgctggaaag cttgctcgtc ttgctgagat ggaggttaag 1440

tatcgatgta accaaatcct agagattggt cttccaatgg gaggacttgc aaaattgttt 1500

gctcaggact gggagggtga tgtcaccatg gttatgccgg caacagtagc tcagtatttg 1560

aagattattc agaatccaac atatgcggag ctccaaatgg ctgccaacca aggccgcagg 1620

tgtacatggg agaagctctc tgcaatcaga gcaaactgtg ccatcgaact tgcattggat 1680

gaatctatag cagttttaaa ccacaaacgg aggctaaaaa gaagcatgga gaggacagag 1740

gctgctttgc agggtcattc taactatgtt cgactcaaaa ctccaaggag ggtaccatca 1800

tggagctgca tcagtcgaga gaattcttca gaatctctct cggaagagat ttcagcagtt 1860

gctacttcaa ccgcgcagca aggtgctgct cttgttgtcg gcacagccac tctttctcac 1920

catgttcgac gcaattctca tgacggaagt gagagtgaat cagaaaccat tgaccttaat 1980

tcctggacca ggagtggtgg gcctctaatg aggacagcat ctgctgacat gttcatcagt 2040

ttcatccata accttgagat tgacacggaa ttaagtaggc cctgtactgt ggagggtggt 2100

actgcaggta tttcgtcaga atctaccttc ccaaatgatc cacaaccgaa caatggctca 2160

agtgttacta ctccaggtag atgcacagaa aattctgaga ccgaggcata cgacactgtc 2220

aacaccagag ccagtcaggc ttctactccc acaagcatcg ctgtttctga aggagatttg 2280

ctgcagcctg aaagcattgc tgacggtatc ctgcttaaca ttgtgaaaag agatgccttg 2340

caggctcaaa atgacagcgt aactgaattg gccgaaagct cctgcactga aacatatgcg 2400

gaaacttgtg acaccatctc agggtctggc actgctgaag ataacaagga tactgctgac 2460

tcaagcaatc actcacttga tattgatgct tttgtagttt cgcatcaacc ttcagctgat 2520

gattag 2526

<210> 243

<211> 3099

<212> ДНК

<213> Triticum aestivum

<400> 243

atgcccgcgc ctgcaggtgc gtgcagccaa gccccaccgc tcgccttcta ttccgcgtcc 60

cctagcttgg cccggccctg ctccgatcca aggccgcggc ggtggcccag tgccctctcc 120

ctcctgccac gccgtccgcc gcccatggac gtcatcacca acgaggcgcg cgtgggggcg 180

ttcgcgatcg gcccgtccac ggcggcgggg cgcgcgctcg cgctgcgcgt gctcctctgc 240

ggctcgctgg cgcggctgcg gcaccgcctc gccgccgcgc tgcgcgccgc ggcgccgctg 300

gcggcggcct ggctgcaccc gcgccacaac acgcggggga tcctgctcgc cgtctgcgcc 360

gtcgcgctgc tgctgcgcgg ccgcgggggc cgcgccgggg tgcgcgcgcg ggtgcagtcc 420

gcctaccgcc gcaagttctg gcggaacatg atgcgcgccg cgctcaccta cgaggagtgg 480

gcgcacgccg cgcggatgct cgagcgggag acgccgcgcc gcgtcaccga cgccgacctc 540

tacgacgagg agctcgtgtg caacaagctc cgtgagctca ggcaccgccg tcaggagggc 600

tcgctcaggg acatcgtctt ctgcatgcgc gccgatctgc tcaggaacct tggtaacatg 660

tgcaaccccg agctccacaa gttgaggctg caggtgccta aaaccatcaa ggagtacatt 720

gaggaggtat ctactcaact gaaaatggtt tgcaattctg attcggacga gttacccctt 780

gaagagaaac tggcatttat gcatgagaca agacatgcct ttggtagatc ggccctactg 840

ctaagtggag gtgcttcatt tggctctttc catgtgggtg ttgtgaaaac cttggtagag 900

cataagcttc tacctaggat tatttcagga tcaagcgttg gcgcaataat gtgtgctatt 960

gtagccacac ggtcatggcc agaactagag agtttttttg aggagtggca ttccttgaaa 1020

ttctttgacc agatgggtgg gatctttcct gtatttaaaa gaattttgac gcatggagcg 1080

gttcatgaca ttaggcactt gcagacgcag ttgagaaatc ttacaagcaa tttgacattt 1140

caagaggcat atgacatgac tggccgggtt ctcgttgtta ctgtgtgttc tccaagaaaa 1200

catgagccac cacgatgcct gaactatttg acatcacctc atgttctcat ttggagtgca 1260

gtaactgctt cctgtgcttt tcctggactt tttgaggccc aggagttgat ggccaaagat 1320

agattcggag aaacagttcc ttttcatgct ccattcttgt tgggtgtgga ggaacgagct 1380

gacgctgcta cacggcgctg gagagatggc agcttagaaa gtgatttacc catgaagcaa 1440

ttgaaggaat tattcaacgt aaatcacttc atagtaagcc aagccaatcc tcacattgct 1500

ccattactga gactaaagga gatcatcagg gcttacggag gcagctttgc tgcaaagctt 1560

gctgaacttg ctgagatgga agttaagcat aggttcaatc aagttctgga acttggattt 1620

ccattaggag gaatagctaa gttgtttgct caacattggg aaggtgatgt gacaatcgtt 1680

atgccagcca cacttgctca gtattcgaag atcatacaga atccttcgta ttctgagctt 1740

cagaaagccg caagtcaggg taggcgatgc acttgggaaa agctctctgc tatcagggca 1800

aactgcgcta ttgagcttgc attagatgaa tgtgttgccc tcctgaacca catgcgtagg 1860

ctgaagagaa gtgcagaaag agcagctgct tcacaaggat atggtgctac aattagactc 1920

tgtccatcta gaaggattcc atcatggaat ctcatagcaa gagaaaattc aactggttct 1980

ctcgatgagg aaatgctcac atgtcccact gttacgagcc atcaagcagt tggagggact 2040

gctgggccat ctaacagaaa tcaccatctc caacatagta tgcatgatag cagtgacagt 2100

gaatctgaga gtatagactt gaactcatgg acgagaagtg gtggccctct catgagaaca 2160

gcctcagcta ataaattcat cagctttgtt cagaaccttg agattgacac agaattcaga 2220

acaatttcac caagggggag cgaaggtgat attgttacac cgaatagtaa cttatttgct 2280

ggtcacccaa ttggtagaga gccagttgat aaccatccag ggcctgctac tcctggtagg 2340

acctcaggca attcaggttg cgatcctcat gatactcctg ttcctaggtc tccatttggt 2400

ctttccacaa gtatcatggt ccctgaaggt gacttgctgc agccggaaaa gattgagaat 2460

ggtattttat tcaatgttgt gagaagggat gctcttgtag cgactactag cggagttgaa 2520

cctcatggat cttcacagga agcagatgtg gaaactgtac cgaccgagtg cctttatggt 2580

gcttcggatg acgacgacga caacgtggaa ctgaatgctg atcatgaagc attatctgac 2640

cctggagatc agagatcctc agttgcagga aacctagatc cgtccacttc catggattgt 2700

caagctgatg aaacaagtac tactcgatca gaagctccat ctctctttaa tatctgtgtg 2760

gagattcctc cagcaaccat gatcagagaa aatagtcggc ccgacgagcc ttcttcagac 2820

ataagactgg agattgtaaa gacagaatgc cctgatgaga attcagctgc tgggaacgat 2880

gaagttggct cagttcctgc caataaagaa tcttcctatt gttctcagac agctgaaaat 2940

agacagcagc atcaagttga tatgggatct gtgaactcct gtagtgtttc agtttcagaa 3000

gatgataggc atgtcagcct catttcgaac gagaaaccag ttactacttc cagtggcgga 3060

gcggagagta tgacatctgg aagaaatgaa gctgactag 3099

<210> 244

<211> 2198

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> фрагмент шпРНКи SDP1 S. bicolor

<400> 244

gcggcggcgt ggctgcaccc gcgcgacaac acgcgcggga tcctgctcgc cgtctgcgcc 60

gtcgcgctgg gtgcagtccg cctaccgccg caagttctgg cggaacatga tgcgcgccgc 120

gctcacctac gaggagtggg cgcacgcggc gcggatgctt ggagtgcagt aacagcttcc 180

tgtgcttttc ctggactttt tgaggcccac catctaggag gattccatcc tggaatctca 240

tagcaagaga aaattcaact ggttctctat gtgcaatcct gaacttcaca agggcaggct 300

agaggttcct aagcttataa aggaatacat tgaagaggtt tctattcaac taagaatggt 360

gtgcgaatct gacactgatg agttgctatt gggagagaag cttgcctttg ttcaggagac 420

caggcatgcc tttgggagga cagccctact cttaagtggg ggtgcttcac tggggtcttt 480

ccatgtaggt gtagtgaaaa cattggttga gcataagctt ctgcctcgga ttatagcagg 540

atcaagaagg gtggacccag ctttcttgta caaagtggtc tcgaggaatt cggtacccca 600

gcttggtaag gaaataatta ttttcttttt tccttttagt ataaaatagt taagtgatgt 660

taattagtat gattataata atatagttgt tataattgtg aaaaaataat ttataaatat 720

attgtttaca taaacaacat agtaatgtaa aaaaatatga caagtgatgt gtaagacgaa 780

gaagataaaa gttgagagta agtatattat ttttaatgaa tttgatcgaa catgtaagat 840

gatatactag cattaatatt tgttttaatc ataatagtaa ttctagctgg tttgatgaat 900

taaatatcaa tgataaaata ctatagtaaa aataagaata aataaattaa aataatattt 960

ttttatgatt aatagtttat tatataatta aatatctata ccattactaa atattttagt 1020

ttaaaagtta ataaatattt tgttagaaat tccaatctgc ttgtaattta tcaataaaca 1080

aaatattaaa taacaagcta aagtaacaaa taatatcaaa ctaatagaaa cagtaatcta 1140

atgtaacaaa acataatcta atgctaatat aacaaagcgc aagatctatc attttatata 1200

gtattatttt caatcaacat tcttattaat ttctaaataa tacttgtagt tttattaact 1260

tctaaatgga ttgactatta attaaatgaa ttagtcgaac atgaataaac aaggtaacat 1320

gatagatcat gtcattgtgt tatcattgat cttacatttg gattgattac agttgggaag 1380

ctgggttcga aatcgataag cttgcgctgc agttatcatc atcatcatag acacacgaaa 1440

taaagtaatc agattatcag ttaaagctat gtaatatttg cgccataacc aatcaattaa 1500

aaaatagatc agtttaaaga aagatcaaag ctcaaaaaaa taaaaagaga aaagggtcct 1560

aaccaagaaa atgaaggaga aaaactagaa atttacctgc acaagcttgg atcctctaga 1620

ccactttgta caagaaagct gggtccaccc ttcttgatcc tgctataatc cgaggcagaa 1680

gcttatgctc aaccaatgtt ttcactacac ctacatggaa agaccccagt gaagcacccc 1740

cacttaagag tagggctgtc ctcccaaagg catgcctggt ctcctgaaca aaggcaagct 1800

tctctcccaa tagcaactca tcagtgtcag attcgcacac cattcttagt tgaatagaaa 1860

cctcttcaat gtattccttt ataagcttag gaacctctag cctgcccttg tgaagttcag 1920

gattgcacat agagaaccag ttgaattttc tcttgctatg agattccagg atggaatcct 1980

cctagatggt gggcctcaaa aagtccagga aaagcacagg aagctgttac tgcactccaa 2040

gcatccgcgc cgcgtgcgcc cactcctcgt aggtgagcgc ggcgcgcatc atgttccgcc 2100

agaacttgcg gcggtaggcg gactgcaccc agcgcgacgg cgcagacggc gagcaggatc 2160

ccgcgcgtgt tgtcgcgcgg gtgcagccac gccgccgc 2198

<210> 245

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Олигонуклеотидный праймер

<400> 245

ttttaacgat atccgctaaa gg 22

<210> 246

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Олигонуклеотидный праймер

<400> 246

aatgaatgaa caagaattaa gtc 23

<210> 247

<211> 22

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Олигонуклеотидный праймер

<400> 247

cttttctcac accgtatctc cg 22

<210> 248

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Олигонуклеотидный праймер

<400> 248

agcatgatat acttgtcgag aaagc 25

<210> 249

<211> 18

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Олигонуклеотидный праймер

<400> 249

gcgacagtgt agcgtttt 18

<210> 250

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Олигонуклеотидный праймер

<400> 250

atacataaaa tgaaaactat tgtgc 25

<210> 251

<211> 23

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Олигонуклеотидный праймер

<400> 251

acagacatgt ctagacccag atg 23

<210> 252

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Олигонуклеотидный праймер

<400> 252

cactctcatc ccaagtgaag ttgc 24

<210> 253

<211> 25

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Олигонуклеотидный праймер

<400> 253

ctgagatgga agtgaagcac agatg 25

<210> 254

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная

<220>

<223> Олигонуклеотидный праймер

<400> 254

ccattgttag tcctttcagt c 21

<---

1. Способ получения нефтепродукта, включающий стадии:

(i) обработки в реакторе композиции, содержащей

(a) вегетативные части растения, сухая масса которых составляет по меньшей мере 2 г и в которых общее содержание неполярных липидов составляет по меньшей мере 5% масс., в пересчете на сухую массу,

(b) растворитель, который содержит воду, спирт или и то, и другое, и

причем обработка включает нагревание композиции при температуре от около 270°C до около 400°C и давлении от 70 до 350 бар на протяжении периода от 1 до 120 минут в окислительной, восстановительной или инертной среде,

с получением таким образом нефтепродукта, где нефтепродукт является углеводородным продуктом, включающим эфиры жирных кислот, один или несколько алканов, один или несколько алкенов или комбинацию любых двух или нескольких из них.

2. Способ по п. 1, в котором сухая масса вегетативных частей растения составляет по меньшей мере 1 кг.

3. Способ по п. 1 или 2, в котором общее содержание неполярных липидов в вегетативных частях растения составляет по меньшей мере 10%, по меньшей мере 15%, по меньшей мере 20%, около 25%, около 30%, около 35% или от 30% до 75%, в пересчете на сухую массу.

4. Способ по любому из пп. 1-3, в котором части вегетативного растения получены из или находятся в листе или стебле растения до цветения растения и части вегетативного растения включают общее содержание неполярных липидов по меньшей мере приблизительно 8%, по меньшей мере приблизительно 10%, по меньшей мере приблизительно 11 %, от 8% до 15% или от 9% до 12% масс., в пересчете на сухую массу.

5. Способ по любому из пп. 1-4, в котором концентрация твердых веществ в композиции составляет от 5% до 90%.

6. Способ по любому из пп. 1-5, в котором катализаторы содержат NaOH, или KOH, или оба предпочтительно в концентрации 0,1-2 М.

7. Способ по любому из пп. 1-6, в котором время обработки составляет от 1 до 60 минут, предпочтительно от 10 до 60 минут, более предпочтительно от 15 до 30 минут.

8. Способ по любому из пп. 1-7, в котором, если растворитель является водой, выход нефтепродукта в результате способа составляет от по меньшей мере 36%, 37%, 38%, 39% или 40% до максимального значения 55% или 60% масс., в пересчете на сухую массу вегетативных частей растения.

9. Способ по любому из пп. 1-8, в котором, если растворитель содержит около 80% воды, нефтепродукт содержит около 30% углеводородных соединений С13-С22.

10. Способ по любому из пп. 1-9, в котором если растворитель содержит спирт, то выход нефтепродукта в результате способа составляет от по меньшей мере 36%, 37%, 38%, 39% или 40% до максимального значения 65% или 70% масс., в пересчете на сухую массу вегетативных частей растения.

11. Способ по любому из пп. 1-10, в котором если растворитель содержит около 50% метанола, то нефтепродукт содержит около 50% метиловых эфиров жирных кислот (МЭЖК).

12. Способ по любому из пп. 1-11, в котором содержание воды в извлеченном нефтепродукте составляет менее чем около 15% масс.

13. Способ по любому из пп. 1-12, в котором выход нефтепродукта по меньшей мере на 2% масс. больше, чем выход соответствующего способа с применением соответствующих вегетативных частей растения, в которых содержание неполярного липида составляет менее чем 2%, в пересчете на сухую массу.

14. Способ по любому из пп. 1-13, в котором вегетативные части растения на стадии (i)(a) физически обрабатывают одним или более из сушки, рубки, нарезки, помола, вальцовки, прессования, дробления или перетирания.

15. Способ по любому из пп. 1-14, в котором вегетативные части растения включают листья растения, стебли или и то, и другое.

16. Способ получения гидрогенизированного нефтепродукта, включающий стадии

(i) получения нефтепродукта с использованием способа по любому из пп. 1-15, и

(ii) гидрогенизацию извлеченного нефтепродукта.

17. Способ снижения уровней кетонов или сахаров в нефтепродукте, включающий стадии

(i) получения нефтепродукта с использованием способа по любому из пп. 1-15, и

(ii) обработку извлеченного нефтепродукта водородом для снижения уровней кетонов или сахаров в нефтепродукте.

18. Способ получения синтетического газа, включающий стадии

(i) получения нефтепродукта с использованием способа по любому из пп. 1-15, и

(ii) превращение извлеченного нефтепродукта в синтетический газ.

19. Способ получения мазута, включающий стадии

(i) получения нефтепродукта с использованием способа по любому из пп. 1-15, и

(ii) фракционирование извлеченного нефтепродукта для получения мазута.

20. Способ получения дизельного топлива, включающий стадии

(i) получения нефтепродукта с использованием способа по любому из пп. 1-15, и

(ii) фракционирование извлеченного нефтепродукта для получения дизельного топлива.

21. Способ получения керосина, включающий стадии

(i) получения нефтепродукта с использованием способа по любому из пп. 1-15, и

(ii) фракционирование извлеченного нефтепродукта для получения керосина.

22. Способ получения бензина, включающий стадии

(i) получения нефтепродукта с использованием способа по любому из пп. 1-15, и

(ii) фракционирование извлеченного нефтепродукта для получения бензина.

23. Способ получения промышленного продукта, включающий стадии

(i) получения нефтепродукта с использованием способа по любому из пп. 1-15, и

(ii) превращение извлеченного нефтепродукта в промышленный продукт с применением нагревания, химических или ферментных средств или любой их комбинации, где промышленный продукт представляет собой биоспирт.

24. Способ по п. 23, в котором биоспирт представляет собой этанол, пропанол, бутанол или комбинацию одного или более или всех из них.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к мутантному или трансгенному растению табака со сниженными уровнями аспарагина и сниженными уровнями акриламида в аэрозоле, полученном после нагревании или сгорания растения табака, а также к полученному из него растительному материалу и пригодному для потребления продукту.

Растения со сниженным содержанием аспарагина // 2742725

Получение вирусоподобных частиц вируса гриппа в растениях // 2742607

Изобретение относится к биотехнологии. Описан модифицированный гемагглютинин (HA) вируса гриппа для включения в вирусоподобную частицу (ВПЧ), причем модифицированный HA вируса гриппа содержит полностью подвергнутую делеции протеолитическую петлю между субъединицами HA1 и HA2, причем полностью подвергнутая делеции протеолитическая петля содержит одноосновный или многоосновный сайт расщепления.

Гены, обеспечивающие устойчивость к podosphaera leucotricha у malus domestica // 2742492

Изобретение относится к области биохимии, в частности к гену, придающему устойчивость к Podosphaera leucotricha. Также раскрыты растение Malus Domestica, устойчивое к Podosphaera leucotricha, содержащее указанный ген, семя для выращивания устойчивого к Podosphaera leucotricha указанного растения Malus Domestica.

Пестицидные гены и способы применения // 2742467

Изобретение относится к области биохимии, в частности к рекомбинантному полипептиду, обладающему пестицидной активностью в отношении чешуекрылых и жесткокрылых насекомых-вредителей.

Композиции и способы контроля вредителей растений // 2741833

Изобретение относится к области биохимии, в частности к химерному гену, содержащему нуклеиновую кислоту, которая кодирует белок, токсичный для кукурузного мотылька (Ostrinia nubilalis).

Получение in vivo n-дегликозилированных рекомбинантных белков посредством совместной экспрессии с endo h // 2741347

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу получения дегликозилированного полипептида в клетке растения. Изобретение позволяет эффективно получать дегликозилированный полипептид.

Днк-маркер для селекции сортов ярового ячменя, устойчивых к темно-бурой пятнистости // 2740404

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой ДНК-маркер для селекции сортов ярового ячменя, устойчивых к темно-бурой пятнистости, представляющий собой пару олигонуклеотидных праймеров, имеющих нуклеотидную последовательность SEQ ID NO 1: 5'-CCTTTCCTGATTCGTGCTCTTTGG-3' и SEQ ID NO 2: 5'-CCTGTAAAAAGACTTATATTTAGT-3'.

Новые белки, обладающие ингибирующей активностью в отношении насекомых // 2740313

Изобретение относится к области биохимии, в частности, к рекомбинантной полинуклеотидной молекуле, кодирующей полипептид, обладающий ингибирующей активностью в отношении насекомых-вредителей.

Новые белки, обладающие ингибирующей активностью в отношении насекомых // 2740313

Рекомбинантное получение стевиол-гликозидов // 2741103

Изобретение относится к области области биотехнологии. Описана группа изобретений, включающая способ получения соединения стевиол–гликозида или композиции стевиол–гликозидов, соединение ребаудиозида Z2, подсластитель, содержащий вышеуказанное соединение ребаудиозид Z2, и применение подсластителя в пищевом продукте.