Новые соединения

Изобретение относится к новым соединениям формулы (I), к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения, и к применению указанных соединений в лечении заболеваний, опосредованных активностью FGFR, например рака. 6 н. и 14 з.п. ф-лы, 3 табл., 6 пр.

(I).

 

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к новым хиноксалиновым, хинолиновым и хиназолиноновым производным соединениям, к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения, к способам получения указанных соединений и к применению указанных соединений в лечении заболеваний, например, рака.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В первом аспекте настоящее изобретение предусматривает соединения формулы (I),

(I),

в том числе их любую таутомерную или стереохимически изомерную форму, где

X₁ представляет собой N, и X₂ представляет собой С (a);

X₁ представляет собой СH, и X₂ представляет собой С (b); или

X₁ представляет собой С(=O), и X₂ представляет собой N (c);

и где пунктирная линия представляет связь в случае (a) и (b), и где пунктирная линия отсутствует в случае (c);

n представляет целое число, равное 1 или 2;

R₁ представляет водород, C_1-6алкил, гидрокси-C_1-6алкил, C_1-6алкил, замещенный -C(=O)NHCH₃, или C_1-6алкил, замещенный -S(=O)₂-C_1-4алкилом;

R_2a представляет фтор или хлор;

R_2b представляет метокси или гидроксил;

R_2c представляет метокси или гидроксил;

R_2d представляет водород, фтор или хлор;

R₃ представляет водород, C_1-6алкил, C_3-6циклоалкил или C_1-2алкил, замещенный C_3-6циклоалкилом;

R₄ представляет водород, метил или этил;

их фармацевтически приемлемые соли или их сольваты.

Согласно одному варианту осуществления представлены соединения формулы (Ia):

(Ia),

в том числе их любая таутомерная или стереохимически изомерная форма, где

n представляет целое число, равное 1 или 2;

R₁ представляет водород, C_1-6алкил, гидрокси-C_1-6алкил, C_1-6алкил, замещенный -C(=O)NHCH₃, или C_1-6алкил, замещенный -S(=O)₂-C_1-4алкилом;

R_2a представляет фтор или хлор;

R_2b представляет метокси или гидроксил;

R_2c представляет метокси или гидроксил;

R_2d представляет водород, фтор или хлор;

R₃ представляет водород, C_1-6алкил, C_3-6циклоалкил или C_1-2алкил, замещенный C_3-6циклоалкилом;

R₄ представляет водород, метил или этил;

их фармацевтически приемлемые соли или их сольваты.

Согласно одному варианту осуществления представлены соединения формулы (Ib):

(Ib),

в том числе их любая таутомерная или стереохимически изомерная форма, где

n представляет целое число, равное 1 или 2;

R₁ представляет водород, C_1-6алкил, гидрокси-C_1-6алкил, C_1-6алкил, замещенный -C(=O)NHCH₃, или C_1-6алкил, замещенный -S(=O)₂-C_1-4алкилом;

R_2a представляет фтор или хлор;

R_2b представляет метокси или гидроксил;

R_2c представляет метокси или гидроксил;

R_2d представляет водород, фтор или хлор;

R₃ представляет водород, C_1-6алкил, C_3-6циклоалкил или C_1-2алкил, замещенный C_3-6циклоалкилом;

R₄ представляет водород, метил или этил;

их фармацевтически приемлемые соли или их сольваты.

Согласно одному варианту осуществления представлены соединения формулы (Ic):

(Ic),

в том числе их любая таутомерная или стереохимически изомерная форма, где

n представляет целое число, равное 1 или 2;

R₁ представляет водород, C_1-6алкил, гидрокси-C_1-6алкил, C_1-6алкил, замещенный -C(=O)NHCH₃, или C_1-6алкил, замещенный -S(=O)₂-C_1-4алкилом;

R_2a представляет фтор или хлор;

R_2b представляет метокси или гидроксил;

R_2c представляет метокси или гидроксил;

R_2d представляет водород, фтор или хлор;

R₃ представляет водород, C_1-6алкил, C_3-6циклоалкил или C_1-2алкил, замещенный C_3-6циклоалкилом;

R₄ представляет водород, метил или этил;

их фармацевтически приемлемые соли или их сольваты.

В каждой из WO2006/092430, WO2008/003702, WO01/68047, WO2005/007099, WO2004/098494, WO2009/141386, WO2004/030635, WO2008/141065, WO2011/026579, WO2011/028947, WO2007/003419, WO00/42026, WO2012/154760, WO2011/047129, WO2003/076416, WO2002/096873, WO2000/055153, EP548934, US4166117, WO2011/135376, WO2012/073017, WO2013/061074, WO2013/061081, WO2013/061077, WO2013/061080, WO2013/179034, WO2013/179033, WO2014/174307, WO2015/144803, WO2015/144804, WO2015/144808 раскрываются серии гетероциклильные производные.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Если в контексте не указывается иное, упоминания формулы (I) во всех разделах настоящего документа (в том числе в путях применения, способах и других аспектах настоящего изобретения) включают в себя упоминания всех других подформул (например, Ia, Ib, Ic), подгрупп, ссылок, вариантов осуществления и примеров, определенных в настоящем документе.

Приставка "C_x-y" (где x и y представляют собой целые числа), используемая в данном документе, относится к числу атомов углерода в данной группе. Таким образом, C_1-6алкильная группа содержит от 1 до 6 атомов углерода, C_3-6циклоалкильная группа содержит от 3 до 6 атомов углерода, гидрокси-C_1-6алкильная группа содержит от 1 до 6 атомов углерода и т. д.

Термин 'C_1-2алкил', 'C_1-4алкил', или 'C_1-6алкил', используемый в настоящем документе в качестве группы или части группы, относится к линейной или разветвленной насыщенной углеводородной группе, содержащей 1 или 2, или от 1 до 4, или от 1 до 6 атомов углерода. Примеры таких групп включают в себя метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил, изопентил, неопентил или гексил и т. п.

Термин 'C_3-6циклоалкил', используемый в настоящем документе, относится к насыщенному моноциклическому углеводородному кольцу из от 3 до 6 атомов углерода. Примеры таких групп включают в себя циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил.

Термин 'гидрокси-C_1-4алкил' или 'гидрокси-C_1-6алкил', используемый в настоящем документе в качестве группы или части группы, относится к C_1-4алкильной или C_1-6алкильной группе, определенной в настоящем документе, где один или более чем один атом водорода замещается гидроксильной группой. Термины 'гидрокси-C_1-4алкил' или 'гидрокси-C_1-6алкил', поэтому, включают в себя моногидрокси-C_1-4алкил, моногидрокси-C_1-6алкил, а также полигидрокси-C_1-4алкил и полигидрокси-C_1-6алкил. Гидроксильной группой могут быть замещены один, два, три или больше атомов водорода, таким образом, гидрокси-C_1-4алкил или гидрокси-C_1-6алкил может иметь одну, две, три или более гидроксильных групп. Примеры таких групп включают гидроксиметил, гидроксиэтил, гидроксипропил и т. п.

Всякий раз при упоминании выше или ниже каждый заместитель независимо может быть выбран из перечня многочисленных определений, при этом предусматриваются все химически возможные комбинации.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I), (Ia), (Ib) или (Ic) n представляет целое число, равное 1.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I), (Ia), (Ib) или (Ic) n представляет целое число, равное 2.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I), (Ia), (Ib) или (Ic) R₁ представляет водород или C_1-6алкил, в частности, C_1-6алкил, более конкретно, метил.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I), (Ia), (Ib) или (Ic) R₁ представляет водород.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I), (Ia), (Ib) или (Ic) R_2a представляет фтор.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I), (Ia), (Ib) или (Ic) R_2a представляет хлор.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I), (Ia), (Ib) или (Ic) R_2b представляет метокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I), (Ia), (Ib) или (Ic) R_2b представляет гидрокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I), (Ia), (Ib) или (Ic) R_2c представляет метокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I), (Ia), (Ib) или (Ic) R_2c представляет гидрокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I), (Ia), (Ib) или (Ic) R_2b представляет метокси, и R_2c представляет гидроксил.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I), (Ia), (Ib) или (Ic) R_2b представляет гидроксил, и R_2c представляет метокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I), (Ia), (Ib) или (Ic) R_2b и R_2c оба представляют метокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I), (Ia), (Ib) или (Ic) R_2b и R_2c оба представляют гидроксил.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I), (Ia), (Ib) или (Ic) R_2d представляет водород.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I), (Ia), (Ib) или (Ic) R_2d представляет фтор или хлор, в частности, фтор.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I), (Ia), (Ib) или (Ic) R₃ представляет C_1-6алкил, в частности, C_1-4алкил, еще более конкретно, метил или изопропил, в частности, изопропил.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I), (Ia), (Ib) или (Ic) R₃ представляет водород.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I), (Ia), (Ib) или (Ic) R₄ представляет водород.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I) предусматриваются одно или несколько из следующих, в частности, все из следующих:

n представляет целое число, равное 1 или 2;

R₁ представляет водород или C_1-6алкил, в частности, C_1-6алкил, более конкретно, C_1-4алкил, еще более конкретно, метил;

R_2a представляет фтор или хлор, в частности, фтор;

R_2b представляет метокси или гидроксил, в частности, метокси;

R_2c представляет метокси или гидроксил, в частности, метокси;

R_2d представляет водород, фтор или хлор;

R₃ представляет C_1-6алкил, в частности, C_1-4алкил, еще более конкретно, метил или изопропил, в частности, изопропил;

R₄ представляет водород.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I) n представляет целое число, равное 2.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I) n представляет целое число, равное 1.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I) R₁ представляет водород.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I) R₁ представляет C_1-6алкил, в частности, C_1-4алкил, еще более конкретно, метил.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I) R_2a представляет фтор или хлор, в частности, фтор.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I) R_2b представляет метокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I) R_2b представляет гидрокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I) R_2c представляет метокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I) R_2c представляет гидрокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I) R_2b представляет метокси, и R_2c представляет гидроксил.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I) R_2b представляет гидроксил, и R_2c представляет метокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I) R_2b и R_2c оба представляют метокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I) R_2b и R_2c оба представляют гидроксил.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I) R_2d представляет водород.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I) R_2d представляет фтор или хлор, в частности, фтор.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I) R₃ представляет водород.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I) R₃ представляет C_1-6алкил, в частности, C_1-4алкил, еще более конкретно, метил или изопропил, в частности, изопропил.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (I) R₄ представляет водород.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Iа) предусматриваются одно или несколько из следующих, в частности, все из следующих:

n представляет целое число, равное 1 или 2, в частности, 1;

R₁ представляет водород или C_1-6алкил, в частности, C_1-6алкил, более конкретно, C_1-4алкил, еще более конкретно, метил;

R_2a представляет фтор или хлор, в частности, фтор;

R_2b представляет метокси или гидроксил, в частности, метокси;

R_2c представляет метокси или гидроксил, в частности, метокси;

R_2d представляет водород, фтор или хлор, в частности, фтор;

R₃ представляет C_1-6алкил, в частности, C_1-4алкил, еще более конкретно, метил или изопропил, в частности, изопропил;

R₄ представляет водород.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ia) n представляет целое число, равное 2.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ia) n представляет целое число, равное 1.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ia) R₁ представляет водород.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ia) R₁ представляет C_1-6алкил, в частности, C_1-4алкил, еще более конкретно, метил.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ia) R_2a представляет фтор или хлор, в частности, фтор.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ia) R_2b представляет метокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ia) R_2b представляет гидрокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ia) R_2c представляет метокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ia) R_2c представляет гидрокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ia) R_2b представляет метокси, и R_2c представляет гидроксил.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ia) R_2b представляет гидроксил, и R_2c представляет метокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ia) R_2b и R_2c оба представляют метокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ia) R_2b и R_2c оба представляют гидроксил.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ia) R_2d представляет водород.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ia) R_2d представляет фтор или хлор, в частности, фтор.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ia) R₃ представляет водород.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ia) R₃ представляет C_1-6алкил, в частности, C_1-4алкил, еще более конкретно, метил или изопропил, в частности, изопропил.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ia) R₄ представляет водород.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ib) предусматриваются одно или несколько из следующих, в частности, все из следующих:

n представляет целое число, равное 1;

R₁ представляет водород или C_1-6алкил, в частности, C_1-6алкил, более конкретно, C_1-4алкил, еще более конкретно, метил;

R_2a представляет фтор или хлор, в частности, фтор;

R_2b представляет метокси или гидроксил, в частности, метокси;

R_2c представляет метокси или гидроксил, в частности, метокси;

R_2d представляет водород, фтор или хлор, в частности, водород или фтор, более конкретно, фтор;

R₃ представляет C_1-6алкил, в частности, C_1-4алкил, еще более конкретно, метил или изопропил, в частности, изопропил;

R₄ представляет водород.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ib) n представляет целое число, равное 2.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ib) n представляет целое число, равное 1.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ib) R₁ представляет водород.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ib) R₁ представляет C_1-6алкил, в частности, C_1-4алкил, еще более конкретно, метил.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ib) R_2a представляет фтор или хлор, в частности, фтор.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ib) R_2b представляет метокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ib) R_2b представляет гидрокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ib) R_2c представляет метокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ib) R_2c представляет гидрокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ib) R_2b представляет метокси, и R_2c представляет гидроксил.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ib) R_2b представляет гидроксил, и R_2c представляет метокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ib) R_2b и R_2c оба представляют метокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ib) R_2b и R_2c оба представляют гидроксил.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ib) R_2d представляет водород.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ib) R_2d представляет фтор или хлор, в частности, фтор.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ib) R₃ представляет водород.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ib) R₃ представляет C_1-6алкил, в частности, C_1-4алкил, еще более конкретно, метил или изопропил, в частности, изопропил.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ib) R₄ представляет водород.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Iс) предусматриваются одно или несколько из следующих, в частности, все из следующих:

n представляет целое число, равное 1;

R₁ представляет водород или C_1-6алкил, в частности, C_1-6алкил, более конкретно, C_1-4алкил, еще более конкретно, метил;

R_2a представляет фтор или хлор, в частности, фтор;

R_2b представляет метокси или гидроксил, в частности, метокси;

R_2c представляет метокси или гидроксил, в частности, метокси;

R_2d представляет водород, фтор или хлор, в частности, водород или фтор, более конкретно, фтор;

R₃ представляет C_1-6алкил, в частности, C_1-4алкил, еще более конкретно, метил или изопропил, в частности, изопропил;

R₄ представляет водород.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Iс) n представляет целое число, равное 2.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Iс) n представляет целое число, равное 1.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Iс) R₁ представляет водород.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Iс) R₁ представляет C_1-6алкил, в частности, C_1-4алкил, еще более конкретно, метил.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Iс) R_2a представляет фтор или хлор, в частности, фтор.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Iс) R_2b представляет метокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Iс) R_2b представляет гидрокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Iс) R_2c представляет метокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Iс) R_2c представляет гидрокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Iс) R_2b представляет метокси, и R_2c представляет гидроксил.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Iс) R_2b представляет гидроксил, и R_2c представляет метокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Iс) R_2b и R_2c оба представляют метокси.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Iс) R_2b и R_2c оба представляют гидроксил.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ic) R_2d представляет водород.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Ic) R_2d представляет фтор или хлор, в частности, фтор.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Iс) R₃ представляет водород.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Iс) R₃ представляет C_1-6алкил, в частности, C_1-4алкил, еще более конкретно, метил или изопропил, в частности, изопропил.

Согласно одному варианту осуществления в соединении формулы (Iс) R₄ представляет водород.

Согласно одному варианту осуществления соединение формулы (I), определенное в настоящем документе, выбрано из следующих соединений или представляет собой одно из следующих соединений:

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

их фармацевтически приемлемой соли или их сольвата.

Согласно одному варианту осуществления соединение формулы (I), определенное в настоящем документе, выбрано из следующих соединений или представляет собой одно из следующих соединений:

;

;

;

;

;

;

;

;

;

;

их фармацевтически приемлемой соли или их сольвата.

Согласно одному варианту осуществления соединение формулы (I), определенное в настоящем документе, выбрано из следующих соединений или представляет собой одно из следующих соединений:

;

;

;

;

;

;

;

;

;

их фармацевтически приемлемой соли или их сольвата.

Согласно одному варианту осуществления соединение формулы (I), определенное в настоящем документе, выбрано из следующих соединений или представляет собой одно из следующих соединений:

;

;

;

;

их фармацевтически приемлемой соли или их сольвата.

Согласно одному варианту осуществления соединение формулы (I), определенное в настоящем документе, выбрано из следующих соединений или представляет собой одно из следующих соединений:

;

;

их фармацевтически приемлемую соль или их сольват.

Во избежание неясности следует учитывать, что каждое общее и конкретное предпочтение, вариант осуществления и пример для одного заместителя могут быть объединены с каждым общим и конкретным предпочтением, вариантом и примером для одного или нескольких, предпочтительно всех других заместителей, определенных в настоящем документе, и что все такие варианты осуществления охватываются настоящей заявкой.

Способы получения соединений формулы (I)

В данном разделе, как и во всех других разделах настоящей заявки, если контекст не указывает иное, ссылки на формулу (I) также предусматривают все другие подгруппы и их примеры, определенные в настоящем документе.

В целом, соединения формулы (I) могут быть получены согласно следующей схеме реакций 1.

Схема 1

На схеме 1 применены следующие условия реакции:

1: реакция промежуточного соединения формулы (II) с формальдегидом в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, диоксан, N,N-диметилформамид, N,N-диметилацетамид, при температуре, варьирующей от комнатной температуры до температуры образования конденсата.

В целом, соединения формулы (IVa) могут быть получены согласно следующей реакционной схеме 2. На схеме 2 W₁ представляет подходящую уходящую группу, такую как, например, Cl или Br; W₂ представляет подходящую уходящую группу, такую как, например, Cl, Br или I; PG¹ представляет подходящую защитную группу, такую как, например, трет-(бутоксикарбонил); PG² представляет подходящую защитную группу, такую как, например, трет-бутил-диметилсилил; и W₃ представляет C_1-4алкил или толил.

На схеме 2 применяли следующие условия реакции:

1: в присутствии подходящего основания, такого как, например, цезия карбонат, и подходящего растворителя, такого как, например, ацетонитрил или метилтетрагидрофуран, при подходящей температуре, такой как, например, в диапазоне от комнатной температуры до температуры образования конденсата;

2: в присутствии подходящего восстанавливающего средства, такого как, например, олова хлорид, в подходящем растворителе, таком как, например, спирт, например, этанол;

В качестве альтернативы, в присутствии железа, в присутствии подходящей кислоты, например, аммония хлорид, и подходящего растворителя, такого как, например, смесь метилтетрагидрофурана/метанола и воды;

3: в присутствии подходящего основания, такого как, например, лития гидроксид, и подходящего растворителя, такого как, например, смесь метилтетрагидрофурана и воды, при подходящей температуре, такой как, например, в диапазоне от комнатной температуры до 60°C;

4: в присутствии подходящего реагента, такого как, например, триэтилортоформиат, подходящей кислоты, такой как, например, уксусная кислота, и подходящего растворителя, такого как, например, толуол, при подходящей температуре, такой как, например, температура образования конденсата;

5: в присутствии подходящего депротонирующего средства, такого как, например, натрия гидрид, и подходящего растворителя, такого как, например, диметилформамид;

6: в присутствии подходящего катализатора, такого как, например, трис(дибензилиденацетон)дипалладий (0), подходящего основания, такого как, например, натрия карбонат, и подходящего растворителя, такого как, например, смесь диоксана и воды;

7: в присутствии подходящего средства для снятия защиты, такого как, например, подходящее десилилирующее средство, например, фторид тетрабутиламмония, и подходящего растворителя, такого как, например, метилтетрагидрофуран;

8: в присутствии подходящего основания, такого как, например, триметиламин или диизопропилэтиламин, и подходящего растворителя, такого как, например, дихлорметан;

9: при отсутствии растворителя или в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, ацетонитрил, при подходящей температуре, такой как, например, температура образования конденсата, необязательно в условиях закупорки;

10: в подходящем растворителе, таком как, например, дихлорметан, в присутствии подходящего восстанавливающего средства, такого как, например, диметилсульфид, и при подходящей температуре, такой как, например, -78°C;

11: в присутствии подходящую восстанавливающего средства, такого как, например, триацетоксиборогидрид, и подходящего растворителя, такого как, например, спирт, например, метанол.

Предполагается, что рядовому специалисту в данной области будет понятно, при каком условии и для какой части молекулы может быть применима защитная группа. Например, защитная группа на заместителе R₁ или на пиразольном фрагменте, или защитная группа на заместителе R₃ или на заместителе R_2a,b,c, или их комбинации. Предполагается, что специалисту в данной области будет известна наиболее приемлемая защитная группа, такая как, например, -C(=O)-O-C_1-4алкил или , или O-Si(CH₃)₂(C(CH₃)₃), или -CH₂-O-CH₂CH₂-O-CH₃.

Настоящее изобретение также предусматривает дейтерированные соединения. Такие дейтерированные соединения можно получать с использованием подходящих дейтерированных промежуточных соединений в процессе синтеза.

Соединения формулы (I) также могут быть превращены друг в друга посредством реакций, известных из уровня техники, или преобразований функциональных групп.

Соединения формулы (I), где R₁ представляет водород, могут быть превращены в соединение формулы (I), где R₁ представляет C_1-6алкил или гидрокси-C_1-6алкил, путем реакции с C_1-6алкил-W или гидрокси-C_1-6алкил-W, где W представляет подходящую уходящую группу, такую как, например, галоген, например, бром и т. п., в присутствии подходящего основания, такого как, например, натрия гидрид или калия карбонат, и подходящего растворителя, такого как, например, ацетонитрил или N,N-диметилформамид.

Соединения формулы (I), где R₁ представляет водород, также могут быть превращены в соединение формулы (I), где R₁ представляет C_1-6алкил-OH, путем реакции с W-C_1-6алкил-O-Si(CH₃)₂(C(CH₃)₃) в присутствии подходящего основания, такого как, например, натрия гидрид, и подходящего растворителя, такого как, например, N,N-диметилформамид, с последующей реакцией снятия силильной защитной группы известными в уровне техники способами.

Соединения формулы (I), где R₁ представляет водород, также могут быть превращены в соединение формулы (I), где R₁ представляет этил, замещенный -S(=O)₂-C_1-4алкилом, путем реакции с C_1-4алкил-винилсульфоном, в присутствии подходящего основания, такого как, например, триэтиламин, и подходящего растворителя, такого как, например, спирт, например, метанол, или путем реакции с C_1-4алкил-2-бромэтилсульфоном в присутствии подходящего депротонирующего средства, такого как, например, NaH, и подходящего растворителя, такого как, например, диметилформамид.

Соединения формулы (I), где R_2b или R_2c представляет -OCH₃, могут быть превращены в соединение формулы (I), где R_2b или R_2c представляет -OH, путем реакции с трехбромистым бором в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, дихлорметан.

Соединения формулы (I), где R_2b или R_2c представляет -OH, могут быть превращены в соединение формулы (I), где R_2b или R_2c представляет -OCH₃, путем реакции с метилйодом, в присутствии подходящего основания, такого как, например, калия карбонат, и подходящего растворителя, такого как, например, N,N-диметилформамид.

Промежуточные соединения формулы (II) могут быть получены, как описано в WO2011/135376, WO2013/061074 и WO2014/174307.

Следующий аспект настоящего изобретения относится к способу получения соединения формулы (I), определенного в настоящем документе, при этом способ предусматривает:

(i) реагирование соединения формулы (II) с формальдегидом в присутствии подходящего растворителя, такого как, например, диоксан, N,N-диметилформамид, N,N-диметилацетамид, при подходящей температуре, такой как температура, варьирующая от комнатной температуры до температуры образования конденсата;

,

где пунктирная линия, X₁, X₂, R₁, R_2a, R_2b, R_2c, R_2d, R₃, R₄ и n определены в настоящем документе; и необязательно последующее превращение одного соединения формулы (I) в другое соединение формулы (I).

Фармацевтически приемлемые соли, их сольваты или производные

В данном разделе, как и во всех других разделах настоящей заявки, если в контексте не указывается иное, упоминания формулы (I) включают в себя упоминания всех других их подгрупп, предпочтений, вариантов осуществления и примеров, определенных в настоящем документе.

Если не указано иное, упоминание конкретного соединения также включают в себя его ионные формы, соли, сольваты, изомеры, таутомеры, сложные эфиры, пролекарства, изотопы и их защищенные формы, например, обсуждаемые ниже; предпочтительно, их ионные формы, или соли, или таутомеры, или изомеры, или сольваты; и более предпочтительно, их ионные формы, или соли, или таутомеры, или сольваты, или защищенные формы, еще более предпочтительно, их соли, или таутомеры, или сольваты. Многие соединения формулы (I) могут существовать в форме солей, например, кислотно-аддитивные соли или в некоторых случаях соли органических и неорганических оснований, таких как карбоксилатные, сульфонатные и фосфатные соли. Все такие соли попадают в объем настоящего изобретения, а упоминания соединений формулы (I) включают в себя солевые формы соединений. Будет понятно, что упоминания ʺпроизводныхʺ включают в себя упоминания их ионных форм, солей, сольватов, изомеров, таутомеров, сложных эфиров, пролекарств, изотопов и защищенных форм.

Согласно одному аспекту настоящее изобретение относится к соединению, определенному в настоящем документе, или к его соли, таутомеру или сольвату. Согласно следующему аспекту настоящее изобретение относится к соединению, определенному в настоящем документе, или к его соли или сольвату. Упоминания соединений формулы (I) и их подгрупп, определенных в настоящем документе, включают в себя соли, или сольваты, или таутомеры соединений.

Солевые формы соединений настоящего изобретения, как правило, представляют собой фармацевтически приемлемые соли, и примеры фармацевтически приемлемых солей обсуждаются в Berge et al. (1977) "Pharmaceutically Acceptable Salts," J. Pharm. Sci., Vol. 66, pp. 1-19. Однако соли, которые не являются фармацевтически приемлемыми, также могут быть получены в виде форм промежуточных соединений, которые затем могут быть превращены в фармацевтически приемлемые соли. Такие формы не являющихся фармацевтически приемлемыми солей, которые могут быть применимы, например, в очистке или отделении соединений настоящего изобретения, также составляют часть настоящего изобретения.

Соли настоящего изобретения могут быть синтезированы из исходного соединения, которое содержит основный или кислотный фрагмент, традиционными химическими способами, такими как способы, описанные в Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. Heinrich Stahl (Editor), Camille G. Wermuth (Editor), ISBN: 3-90639-026-8, Hardcover, 388 pages, August 2002. Как правило, такие соли могут быть получены путем реагирования свободных кислотных или основных форм этих соединений с подходящими основанием или кислотой в воде или в органическом растворителе, или в смеси этих двух; как правило, используют неводные среды, такие как эфир, этилацетат, этанол, изопропанол или ацетонитрил. Соединения настоящего изобретения могут существовать в виде моно- или дисолей в зависимости от pKa кислоты, из которая образована соль.

Кислотно-аддитивные соли могут быть образованы с обширным рядом кислот, как неорганических, так и органических. Примеры кислотно-аддитивных солей включают в себя соли, образованные кислотой, выбранной из группы, состоящей из уксусной, 2,2-дихлоруксусной, адипиновой, альгининовой, аскорбиновой (например,

L-аскорбиновой), L-аспартатной, бензолсульфоновой, бензойной, 4-ацетамидобензойной, бутановой,

(+) камфорной, камфор-сульфоновой, (+)-(1S)-камфор-10-сульфоновой, каприновой, капроновой, каприловой, коричной, лимонной, цикламовой, додецилсерной, этан-1,2-дисульфоновой, этансульфоновой, 2-гидроксиэтансульфоновой, муравьиной, фумаровой, галактаровой, гентизиновой, глюкогептоновой, D-глюконовой, глюкуроновой (например, D-глюкуроновой), глутаминовой (например, L-глутаминовой),

α-оксоглутаровой, гликолиевой, гиппуровой, бромистоводородной, хлористоводородной, йодистоводородной, изэтионовой, молочной (например, (+)-L-молочной, (±)-DL-молочной), лактобионовой, малеиновой, яблочной, (-)-L-яблочной, малоновой,

(±)-DL-миндальной, метансульфоновой, нафталинсульфоновой (например, нафталин-2-сульфоновой), нафталин-1,5-дисульфоновой, 1-гидрокси-2-нафтойной, никотиновой, азотной, олеиновой, оротовой, оксалиновой, пальмитиновой, памоевой, фосфорной, пропионовой, L-пироглутаминовой, пировиноградной, салициловой, 4-амино-салициловой, себациновой, стеариновой, янтарной, серной, танниновой, (+)-L-винной, тиоциановой, толуолсульфоновой (например, п-толуолсульфоновой), ундециленовой и валериановой кислот, а также ацилированных аминокислот и ионообменных смол.

Одна конкретная группа солей состоит из солей, образованных из уксусной, хлористоводородной, йодистоводородной, фосфорной, азотной, серной, лимонной, молочной, янтарной, малеиновой, яблочной, изэтионовой, фумаровой, бензолсульфоновой, толуолсульфоновой, метансульфоновой (мезилат), этансульфоновой, нафталинсульфоновой, валериановой, уксусной, пропановой, бутановой, малоновой, глюкуроновой и лактобионовой кислот. Другая группа кислотно-аддитивных солей включает в себя соли, образованные из уксусной, адипиновой, аскорбиновой, аспартатной, лимонной, DL-молочной, фумаровой, глюконовой, глюкуроновой, гиппуровой, хлористоводородной, глутамовой, DL-яблочной, метансульфоновой, себациновой, стеариновой, янтарной и винной кислот.

Если соединение является анионным или имеет функциональную группу, которая может быть анионной, то может быть образована соль с подходящим катионом. Примеры подходящих неорганических катионов включают в себя без ограничения ионы щелочных металлов, такие как Na⁺ и K⁺, катионы щелочноземельных металлов, такие как Ca²⁺ и Mg²⁺, и другие катионы, такие как Al³⁺. Примеры подходящих органических катионов включают в себя без ограничения ион аммония (т. е. NH₄⁺) и ионы замещенного аммония (например, NH₃R⁺, NH₂R₂⁺, NHR₃⁺, NR₄⁺).

Примерами некоторых подходящих ионов замещенного аммония являются ионы, полученные из этиламина, диэтиламина, дициклогексиламина, триэтиламина, бутиламина, этилендиамина, этаноламина, диэтаноламина, пиперазина, бензиламина, фенилбензиламина, холина, меглумина и трометамина, а также аминокислот, таких как лизин и аргинин. Примером распространенного иона четвертичного аммония является N(CH₃)₄⁺.

Если соединения формулы (I) содержат функциональную группу амина, то они могут формировать соли четвертичного аммония, например, путем реакции с алкилирующим средством согласно способам, хорошо известным специалисту. Такие соединения четвертичного аммония попадают в объем формулы (I). Соединения формулы (I), содержащие функциональную группу амина, также могут формировать N-оксиды. Упоминание в настоящем документе соединения формулы (I), которое содержит функциональную группу амина, также предусматривает N-оксид. Если соединение содержит несколько функциональных групп амина, то один или более чем один атом азота могут быть окислены с образованием N-оксида. Конкретными примерами N-оксидов являются N-оксиды третичного амина или атома азота в содержащем азот гетероцикле. N-оксиды могут быть образованы путем обработки соответствующего амина окислительным средством, таким как пероксид водорода или перкислота (например, пероксикарбоновая кислота), см. например, Advanced Organic Chemistry, by Jerry March, 4^th Edition, Wiley Interscience, pages. Более конкретно, N-оксиды могут быть получены с помощью процедура из L. W. Deady (Syn. Comm. (1977), 7, 509-514), при которой аминовое соединение подвергают реакции с м-хлорпероксибензойной кислотой (MCPBA), например, в инертном растворителе, таком как дихлорметан.

Соединения настоящего изобретения могут образовывать сольваты, например, с водой (т. е. гидраты) или распространенные органические растворители. Применяемый в настоящем документе термин "сольват" означает физическую связь соединений настоящего изобретения с одной или несколькими молекулами растворителя. Эта физическая связь подразумевает различную степень ионного и ковалентного связывания, включая водородную связь. В некоторых случаях сольват будет способен выделению, например, когда одна или несколько молекул растворителя включены в кристаллическую решетку кристаллического твердого вещества. Подразумевается, что термин "сольват" охватывает как жидкофазовые, так и изолируемые сольваты. Неограничивающие примеры подходящих сольватов включают в себя соединения настоящего изобретения в комбинации с водой, изопропанолом, этанолом, метанолом, DMSO, этилацетатом, уксусной кислотой или этаноламином и т. п. Соединения настоящего изобретения могут проявлять свои биологические эффекты при нахождении в растворе.

Сольваты хорошо известны в фармацевтической химии. Они могут быть важными для способов получения вещества (например, для его очистки), хранения вещества (например, его стабильности) и облегчения обработки вещества и зачастую образуются как часть стадий выделения или очистки при химическом синтезе. Специалист в данной области сможет определить посредством стандартных и длительно используемых методик, образовался ли гидрат или другой сольват при условиях выделения или условиях очистки, используемых для получения данного соединения. Примеры таких методик включают в себя термогравиметрический анализ (TGA), дифференциальную сканирующую калориметрию (DSC), рентгеновскую кристаллографию (например, монокристаллическую рентгеновскую кристаллографию или рентгеновскую порошковую дифрактометрию) и ЯМР твердого тела (SS-NMR, также известный как ЯМР с вращением образца под магическим углом или MAS-NMR). Такие методики являются такой же частью стандартного аналитического инструментария квалифицированного химика, как ЯМР, IR, HPLC и MS. В качестве альтернативы квалифицированный специалист сможет при необходимости сформировать сольват с использованием условий кристаллизации, которые предусматривают количество растворителя, необходимое для конкретного сольвата. Соответственно, стандартные способы, описываемые выше, могут быть использованы для установления формирования сольватов. Также формула (I) охватывает любые комплексы (например, комплексы включения или клатраты с соединениями, такими как циклодекстрины или комплексы с металлами) соединений.

Кроме того, соединения настоящего изобретения могут иметь одну или несколько полиморфных (кристаллических) или аморфных форм и как таковые попадают в объем настоящего изобретения.

Соединения формулы (I) могут существовать в ряде различных геометрических изомерных и таутомерных форм, и упоминания соединений формулы (I) предусматривают все эти формы. Во избежание неоднозначности толкования, если соединение может существовать в одной из нескольких геометрических изомерных и таутомерных форм, и только одна специально описана или показана, то все остальные, тем не менее, охватываются формулой (I). Другие примеры таутомерных форм включают, например, кето-, энол- и энолатную формы, например, как в следующих таутомерных парах: кето/энол (показано ниже), имин/энамин, амид/иминоспирт, амидин/эндиамины, нитрозо/оксим, тиокетон/энтиол и нитро/аци-нитро.

Если соединения формулы (I) содержат один или несколько хиральных центров и могут существовать в форме двух или более оптических изомеров, то упоминания соединений формулы (I) предусматривают все их оптические изомерные формы (например, энантиомеры, эпимеры и диастереоизомеры) либо как отдельные оптические изомеры, либо как смеси (например, рацемические смеси) двух или более оптических изомеров, если контекст не требует иного. Оптические изомеры могут быть охарактеризованы и идентифицированы по их оптической активности (т. е. как+и - изомеры или d и l изомеры), или они могут быть охарактеризованы с точки зрения их абсолютной стереохимии с использованием номенклатуры "R и S", разработанной Cahn, Ingold и Prelog, см. Advanced Organic Chemistry by Jerry March, 4^th Edition, John Wiley & Sons, New York, 1992, pages 109-114, и см. также Cahn, Ingold & Prelog (1966) Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 5, 385-415. Оптические изомеры могут быть разделены с помощью ряда методик, в том числе хиральной хроматографии (хроматографии на хиральной подложке), и такие методики хорошо известны специалисту в данной области. Как альтернатива хиральной хроматографии, оптические изомеры могут быть разделены путем формирования диастереоизомерных солей с хиральными кислотами, такими как (+)-винная кислота, (-)-пироглутаминовая кислота, (-)-ди-толуоил-L-винная кислота, (+)-миндальная кислота, (-)-яблочная кислота и (-)-камфорсульфоновая кислота, с разделением диастереоизомеров посредством предпочтительной кристаллизации, а затем растворения солей с получением отдельного энантиомера свободного основания.

Если соединения формулы (I) существуют в виде двух или более оптических изомерных форм, то один энантиомер в паре энантиомеров может демонстрировать преимущества над другим энантиомером, например, в отношении биологической активности. Таким образом, в некоторых случаях может быть желательным применение в качестве терапевтического средства только одного из пары энантиомеров или только одного из множества диастереоизомеров. Следовательно, настоящее изобретение относится к композициям, содержащим соединение формулы (I), имеющее один или несколько хиральных центров, где по меньшей мере 55% (например, по меньшей мере 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95%) соединения формулы (I) составляет один оптический изомер (например, энантиомер или диастереоизомер). Согласно одному общему варианту осуществления 99% или больше (например, практически все) общего количества соединения формулы (I) может составлять один оптический изомер (например, энантиомер или диастереоизомер). Если идентифицируют определенную изомерную форму (например, S-конфигурацию или E-изомер), это означает, что указанная изомерная форма практически не содержит другого изомера(ов), т. е. указанная изомерная форма составляет по меньшей мере 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% или больше (например, практически все) общего количества соединения настоящего изобретения.

Где-либо, выше или ниже, соединения включают в себя следующую связь , это указывает на то, что соединение представляет собой один стереоизомер с неизвестной конфигурацией или смесь стереоизомеров.

Соединения настоящего изобретения включают в себя соединения с одной или несколькими изотопными замещениями, и упоминание конкретного элемента предусматривает все изотопы данного элемента. Например, упоминание водорода предусматривает в своих границах ¹H, ²H (D) и ³H (T). Подобным образом, упоминания углерода и кислорода предусматривают в своих границах, соответственно, ¹²C, ¹³C и ¹⁴C, а также ¹⁶O и ¹⁸O. Изотопы могут быть радиоактивными или нерадиоактивными. Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения соединения не содержат радиоактивные изотопы. Такие соединения являются предпочтительными для терапевтического применения. Согласно другому варианту осуществления, однако, соединение может содержать один или несколько радиоизотопов. Соединения, содержащие такие радиоизотопы, могут быть применимы в диагностическом контексте.

Сложные эфиры, такие как сложные эфиры карбоновых кислот и сложные ацилоксиэфиры соединений формулы (I), несущие группу карбоновой кислоты или гидроксильную группу, также охватываются формулой (I). Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения формула (I) предусматривает сложные эфиры соединений формулы (I), несущие гидроксильную группу. Согласно другому варианту осуществления настоящего изобретения формула (I) не предусматривает в своих границах сложные эфиры соединений формулы (I), несущие гидроксильную группу. Примеры ацилоксигрупп (обратного сложного эфира) представлены с помощью -OC(=O)R, где R представляет собой ацилоксизаместитель, например, C_1-7алкильную группу, C_3-20гетероциклильную группу или C_5-20арильную группу, предпочтительно C_1-7алкильную группу. Конкретные примеры ацилоксигрупп включают в себя без ограничения -OC(=O)CH₃ (ацетокси), -OC(=O)CH₂CH₃, -OC(=O)C(CH₃)₃, -OC(=O)Ph и -OC(=O)CH₂Ph.

Например, некоторые пролекарства представляют собой сложные эфиры активного соединения (например, физиологически приемлемый метаболически подвижный сложный эфир). "Пролекарства" означают, например, любое соединение, которое превращается in vivo в биологически активное соединение формулы (I). В ходе метаболизма группа сложного эфира отщепляется с получением активного лекарственного средства. Такие сложные эфиры могут быть образованы путем эстерификации, например, какой-либо из гидроксильных групп в исходном соединении, при необходимости с предварительной защитой любых других реакционно активных групп, присутствующих в исходном соединении, с последующим снятием защиты при необходимости.

Примеры таких метаболически подвижных сложных эфиров включают в себя C_1-6аминоалкил [например, аминоэтил; 2-(N,N-диэтиламино)этил; 2-(4-морфолино)этил) и ацилокси-C_1-7алкил [например, ацилоксиметил; ацилоксиэтил; пивалоилоксиметил; ацетоксиметил; 1-ацетоксиэтил; 1-(1-метокси-1-метил)этил-карбонилоксиэтил; 1-(бензоилокси)этил; изопропокси-карбонилоксиметил; 1-изопропокси-карбонилоксиэтил; циклогексил-карбонилоксиметил; 1-циклогексил-карбонилоксиэтил; циклогексилокси-карбонилоксиметил; 1-циклогексилокси-карбонилоксиэтил; (4-тетрагидропиранилокси) карбонилоксиметил; 1-(4-тетрагидропиранилокси)карбонилоксиэтил; (4-тетрагидропиранил)карбонилоксиметил и 1-(4-тетрагидропиранил)карбонилоксиэтил]. Также некоторые пролекарства активируются ферментативно с получением активного соединения или соединения, которое при следующей химической реакции дает активное соединение (например, как направленная на антитела ферментно-пролекарственная терапия (ADEPT), направленная на гены ферментно-пролекарственная терапия (GDEPT), направленная на лиганды ферментно-пролекарственная терапия (LIDEPT) и т.д.). Например, пролекарством может быть производное сахаров или другой гликозидный конъюгат, или может быть аминокислотное производное сложного эфира.

Протеинтирозинкиназы (PTK)

Соединения настоящего изобретения, описываемые в настоящем документе, ингибируют или модулируют активность некоторых тирозинкиназ, и, таким образом, соединения будут применимы в лечении или профилактике, в частности, в лечении болезненных состояний или состояний, опосредованных этими тирозинкиназами, в частности, FGFR.

FGFR

Семейство факторов роста фибробластов (FGF) рецепторов протеинтирозинкиназы (PTK) регулирует множество различных физиологических функций, включая митогенез, заживление ран, клеточную дифференцировку и ангиогенез, и развитие На рост как нормальных, так и опухолевых клеток, также как и на пролиферацию, воздействуют путем изменения локальной концентрации FGF, внеклеточные сигнальные молекулы которых действуют в качестве аутокринных, а также в качестве паракринных факторов Аутокринная передача сигналов FGF может быть особенно важной при развитии форм рака, зависимых от стероидного гормона, до гормон-независимого состояния FGF и их рецепторы экспрессируются при повышенных уровнях в различных тканях и клеточных линиях, и считают, что повышенная экспрессия способствует злокачественному фенотипу. Кроме того, ряд онкогенов являются гомологами генов, кодирующих рецепторы фактора роста, и существует возможность аберрантной активации FGF-зависимой передачи сигнала при раке поджелудочной железы у человека (Knights et al., Pharmacology and Therapeutics 2010 125:1 (105-117); Korc M. et al Current Cancer Drug Targets 2009 9:5 (639-651)).

Этими двумя прототипическими членами являются кислотный фактор роста фибробластов (aFGF или FGF1) и основный фактор роста фибробластов (bFGF или FGF2), и к настоящему времени идентифицированы по меньшей мере двадцать четко различимых членов семейства FGF. Клеточный ответ на факторы роста фибробластов передается через четыре типа высокоаффинных трансмембранных рецепторов фактора роста фибробластов протеинтирозинкиназы (FGFR), пронумерованных от 1 до 4 (от FGFR1 до FGFR4).

Разрыв пути FGFR1 должен воздействовать на пролиферацию опухолевых клеток, так как эта киназа активируется во многих типах опухолей в дополнение к пролиферации эндотелиальных клеток. Сверхэкспрессия и активация FGFR1 в связанной с опухолью сети сосудов позволили предположить роль этих молекул при ангиогенезе опухоли.

В недавнем исследовании была показана связь между экспрессией FGFR1 и онкогенностью при классических лобулярных карциномах (CLC). CLC составляют 10-15% от всех случаев форм рака молочной железы, и обычно они характеризуются недостатком экспрессии p53 и Her2, в то же время сохраняя экспрессию рецептора эстрогена. Амплификация гена 8p12-p11.2 была продемонстрирована в ~50% случаев CLC, и было показано, что это связано с повышенной экспрессией FGFR1. Предварительные исследования с siRNA, направленной против FGFR1, или с низкомолекулярным ингибитором рецептора показали, что клеточные линии, в которых происходит эта амплификация, являются особенно чувствительными к ингибированию этого сигнального пути. Рабдомиосаркома (RMS), самая распространенная саркома мягких тканей у детей, по-видимому, является результатом аномальной пролиферации и дифференцировки в процессе миогенеза скелета. FGFR1 сверхэкспрессируется при первичных опухолях рабдомиосаркомы, и это связано с гипометилированием 5' CpG-островка и аномальной экспрессией генов AKT1, NOG и BMP4. FGFR1 также связывают с плоскоклеточным раком легкого, раком толстой и прямой кишок, глиобластомой, астроцитомами, раком предстательной железы, мелкоклеточным раком легкого, меланомой, раком головы и шеи, раком щитовидной железы, раком матки.

Рецептор 2 фактора роста фибробластов имеет высокую аффинность к кислотным и/или основным факторам роста фибробластов, а также к лигандам фактора роста кератиноцитов. Рецептор 2 фактора роста фибробластов также репродуцирует мощные остеогенные эффекты фактора роста фибробластов в процессе роста остеобластов и дифференцировки. Было показано, что мутации рецептора 2 фактора роста фибробластов, приводящие к комплексным функциональным изменениям, индуцируют аномальную оссификацию швов черепа (краниосиностоз), что предполагает важную роль передачи сигнала FGFR при внутримембранном остеогенезе. Например, при синдроме Аперта (AP), характеризующимся преждевременной оссификацией швов черепа, большинство случаев связаны с точечными мутациями, порождающими приобретение функции рецептора 2 фактора роста фибробластов. Кроме того, скрининг мутации у пациентов с синдромными краниосиностозами указывает, что ряд рецидивных мутаций FGFR2 являются причиной тяжелых форм синдрома Пфейффера. Конкретные мутации FGFR2 включают в себя W290C, D321A, Y340C, C342R, C342S, C342W, N549H, K641R в FGFR2.

Ряд тяжелых нарушений при развитии скелета человека, включающих синдромы Аперта, Крузона, Джексона-Вейсса, пахидермии складчатой Бира-Стивенсона и Пфейффера, связаны с возникновением мутаций рецептора 2 фактора роста фибробластов. В большинстве, но не во всех случаях синдром Пфейффера (PS) также вызывается с самого начала мутацией гена рецептора 2 фактора роста фибробластов, и недавно было показано, что мутации рецептора 2 фактора роста фибробластов нарушают одно из основных правил регулирования лигандной специфичности. А именно, две мутантные сплайс-формы рецептора фактора роста фибробластов, FGFR2c и FGFR2b, приобрели способность связывать атипичные FGF лиганды и активироваться с помощью атипичных FGF лигандов. Эта потеря лигандной специфичности приводит к аберрантной передаче сигналов и предполагает, что тяжелые фенотипы этих синдромов заболевания являются результатом эктопической лиганд-зависимой активации рецептора 2 фактора роста фибробластов.

Генетические аберрации рецептора тирозинкиназы FGFR3, такие как хромосомные транслокации или точечные мутации, приводят к эктопически экспрессируемым или разрегулированным конститутивно активным рецепторам FGFR3. Такие нарушения связаны с подгруппой множественных миелом и раком мочевого пузыря, гепатоцеллюлярным раком, плоскоклеточной карциномой полости рта и карциномами шейки матки Соответственно, ингибиторы FGFR3 могли бы применяться при лечении множественной миеломы, карцином мочевого пузыря и шейки матки. FGFR3 также сверхэкспрессируется при раке мочевого пузыря, в частности, инвазивном раке мочевого пузыря. FGFR3 часто активируется в результате мутации при уротелиальной карциноме (UC). Повышенная экспрессия была связана с мутацией (85% мутантных опухолей характеризовались высоким уровнем экспрессии), но 42% опухолей без признаков мутации также характеризовались сверхэкспрессией, в том числе многие мышечно-инвазивные опухоли. FGFR3 также связывают с раком эндометрия и щитовидной железы.

Сверхэкспрессию FGFR4 связывают с неблагоприятным прогнозом как при карциноме предстательной железы, так и при карциноме щитовидной железы Кроме того, полиморфизм зародышевых клеток (Gly388Arg) связывают с повышенной частотой случаев рака легкого, молочной железы, толстой кишки печени (HCC) и предстательной железы Кроме того, также было обнаружено, что процессированная форма FGFR4 (включающая киназный домен) присутствует в 40% гипофизарных опухолей, но не присутствует в нормальной ткани. Сверхэкспрессия FGFR4 была обнаружена в опухолях печени, толстой кишки и легкого. FGFR4 вовлечен в рак толстой и прямой кишок и рак печени, где экспрессия его лиганда FGF19 зачастую повышена. FGFR4 также связывают с астроцитомами, рабдомиосаркомой.

Фиброзные состояния представляют собой важную медицинскую проблему, являющуюся следствием аномального или избыточного отложения фиброзной ткани. Они возникают при многих заболеваниях, включая цирроз печени, гломерулонефрит, фиброз легких, системный фиброз, ревматоидный артрит, а также естественный процесс заживления ран. Механизмы патологического фиброза пока еще полностью не изучены, но считают, что фиброз является результатом действия различных цитокинов (включая фактор некроза опухолей (TNF), фактор роста фибробластов (FGF), тромбоцитарный фактор роста (PDGF) и трансформирующий фактор роста бета (TGFβ), вовлеченных в пролиферацию фибробластов и отложение внеклеточной протеиновой матрицы (включая коллаген и фибронектин). Это приводит к изменению структуры и функции ткани и к последующей патологии.

В ряде доклинических исследований была продемонстрирована повышающая регуляция фактора роста фибробластов на предклинических моделях фиброза легких. Сообщалось, что TGFβ1 и PDGF вовлечены в фиброгенный процесс, а в последующем опубликованном исследовании предполагается, что повышение FGF и последующее усиление пролиферации фибробластов может происходить в ответ на повышенный TGFβ1. Потенциальную терапевтическую важность нацеливания на фиброзный механизм при состояниях, таких как идиопатический фиброз легких (IPF), подтверждает сообщение о клиническом эффекте противофиброзного средства пирфенидона. Идиопатический фиброз легких (также называемый криптогенным фиброзирующим альвеолитом) является прогрессирующим состоянием, включающим в себя рубцевание легкого. Постепенно альвеолярные мешочки легких замещаются фиброзной тканью, которая становится более толстой, вызывая необратимую потерю способности ткани переносить кислород в кровоток. Симптомы этого состояния включают одышку, хронический сухой кашель, утомляемость, боль в груди и потерю аппетита, приводящую к быстрой потере веса. Это состояние является чрезвычайно тяжелым с приблизительно 50% смертностью через 5 лет.

Таким образом, соединения, которые ингибируют FGFR, будут применимыми в обеспечении средства предупреждения роста или индуцирования апоптоза в опухолях, в частности, путем ингибирования ангиогенеза. Поэтому ожидается, что соединения будут одобрены как пригодные в лечении или предупреждении пролиферативных нарушений, таких как формы рака. В частности, опухоли с активирующими мутантами рецепторных тирозинкиназ (RTK) или повышающей регуляцией рецепторных тирозинкиназ могут быть особенно чувствительными к ингибиторам. Для пациентов с активирующими мутантами какой-либо из изоформ специфических RTK, обсуждаемых в настоящем документе, лечение ингибиторами RTK также может быть особенно полезным, например, для пациентов с опухолями, например, опухолями мочевого пузыря или головного мозга, с транслокацией FGFR3-TACC3.

Рецептор фактора роста эндотелия сосудов (VEGFR)

Хронические пролиферативные заболевания часто сопровождаются сильным ангиогенезом, который может способствовать или поддерживать воспалительное и/или пролиферативное состояние, или который приводит к распаду ткани в результате инвазивной пролиферации кровеносных сосудов.

Термин ʺангиогенезʺ обычно используют для описания развития новых кровеносных сосудов или их замены, или неоваскуляризации. Ангиогенез является необходимым и нормальным физиологическим процессом, в результате которого формируется сосудистая система у эмбриона. Ангиогенез не происходит обычно в большинстве нормальных тканей взрослого организма, и исключениями являются места овуляции, менструаций и заживления ран. Однако многие заболевания характеризуются непрерывно возобновляющимся и неконтролируемым ангиогенезом. Например, при артрите новые капиллярные кровеносные сосуды внедряются в сустав и разрушают хрящ. При диабете (и при многих различных заболеваниях глаз) новые сосуды проникают в макулу или сетчатку или другие структуры глаза и могут вызывать слепоту. Развитие атеросклероза связано с ангиогенезом Было обнаружено, что рост опухоли и метастазирование зависит от ангиогенеза.

Установление факта вовлечения ангиогенеза при основных заболеваниях сопровождалось исследованиями по идентификации и разработке ингибиторов ангиогенеза. Эти ингибиторы обычно классифицируют по их воздействию на отдельные цели в каскаде ангиогенеза, такие как активация эндотелиальных клеток в результате ангиогенного сигнала; синтез и высвобождение деструктивных ферментов; миграция эндотелиальных клеток; пролиферация эндотелиальных клеток и образование капиллярных сосудов. Поэтому ангиогенез происходит многостадийно, и делаются попытки выявить и разработать соединения, которые способны блокировать ангиогенез на этих различных стадиях.

Имеются публикации, в которых описывается, что ингибиторы ангиогенеза, действующие на основе различных механизмов, применяются при лечении заболеваний, таких как рак и метастазирование, глазные заболевания, артрит и гемангиома

Фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), полипептид, является митогенным для эндотелиальных клеток in vitro и стимулирует ангиогенные ответы in vivo. VEGF также был связан с ненадлежащим ангиогенезом. VEGFR являются протеинтирозинкиназами (PTK). PTK катализируют фосфорилирование специфических остатков тирозина в белках, вовлеченных в функцию клетки, таким образом, регулируют рост, выживание и дифференциацию клеток.

Было идентифицировано три рецептора PTK для VEGF: VEGFR-1 (Flt-1); VEGFR-2 (Flk-1 или KDR) и VEGFR-3 (Flt-4). Эти рецепторы вовлечены в ангиогенез и участвуют в сигнальной трансдукции. Особый интерес представляет VEGFR-2, который является трансмембранным рецептором PTK, экспрессированным главным образом в эндотелиальных клетках. Активация VEGFR-2 посредством VEGF является критической стадией в пути сигнальной трансдукции, которая инициирует ангиогенез опухоли. Экспрессия VEGF может являться конститутивной для опухолевых клеток и может также быть положительно регулированной в ответ на определенные стимулы. Одним таким стимулом является гипоксия, где экспрессия VEGF является положительно регулированной как в опухолевых, так и в связанных тканях хозяина. Лиганд VEGF активирует VEGFR-2 посредством связывания с его внеклеточным сайтом связывания VEGF. Это ведет к димеризации рецептора VEGFR и аутофосфорилированию остатков тирозина во внутриклеточном киназном домене VEGFR-2. Киназный домен осуществляет перенос фосфата с ATP на тирозиновые остатки, таким образом, обеспечивает сайты связывания для сигнальных белков после VEGFR-2, что приводит, в конечном итоге, к инициации ангиогенеза.

Ингибирование сайта связывания домена киназы VEGFR-2 могло бы блокировать фосфорилирование тирозиновых остатков и предотвратить инициирование ангиогенеза.

Ангиогенез является физиологическим процессом образования новых кровеносных сосудов, опосредованным различными цитокинами, называемыми ангиогенными факторами. Несмотря на то, что его потенциальная патофизиологическая роль в твердых опухолях интенсивно изучается в течение более чем 3 десятилетий, усиление ангиогенеза при хроническом лимфолейкозе (CLL) и других злокачественных гематологических заболеваниях было выявлено совсем недавно. Повышенный уровень ангиогенеза был документально подтвержден различными экспериментальными способами как в костном мозге, так и в лимфатических узлах у пациентов с CLL. Несмотря на то, что роль ангиогенеза в патофизиологии этого заболевания еще полностью не выяснена, на основе экспериментальных данных можно предположить, что в развитии заболевания играют роль несколько ангиогенных факторов. Было также показано, что биологические маркеры ангиогенеза имеют большую прогностическую важность при CLL. Это указывает на то, что ингибиторы VEGFR могут также оказывать лечебный эффект на пациентов, страдающих лейкозами, такими как CLL.

Для того, чтобы масса опухоли превысила критический размер, должна развиваться связанная с ней сосудистая система. Было сделано предположение, что направленное воздействие на сосудистую систему опухоли может ограничить развитие опухоли и может быть использовано при противораковой терапии. Исследования опухолевого роста показали, что опухоли с небольшой массой могут продолжать существовать в ткани без наличия какой-либо связанной с опухолью сосудистой системы. Блокирование роста опухолей, лишенных сосудов, было приписано эффектам гипоксии в центре опухоли. Совсем недавно был идентифицирован ряд проангиогенных и противоангиогенных факторов, и это привело к созданию концепции "ангиогенного переключения", процесса, в котором нарушение нормального соотношения ангиогенных стимулов и ингибиторов в массе опухоли делает возможным автономную васкуляризацию. По-видимому, ангиогенное переключение определяется такими же генетическими изменениями, которые приводят и к злокачественной трансформации: активации онкогенов и потере генов, подавляющих рост опухоли. Некоторые факторы роста действуют в качестве положительных регуляторов ангиогенеза. Наиболее важными из них являются фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), основной фактор роста фибробластов (bFGF) и ангиогенин. Белки, такие как тромбоспондин (Tsp-1), ангиостатин и эндостатин, выполняют функцию отрицательных регуляторов ангиогенеза.

Ингибирование VEGFR2, но не VEGFR1, заметно нарушает ангиогенное переключение, непрерывно возобновляющийся ангиогенез и начальный рост опухоли на моделях мышей. На поздних стадиях опухолей возникала фенотипическая устойчивость к блокаде VEGFR2, так как после начального периода подавления роста опухоли начинался повторный рост опухоли в процессе ее обработки. Эта устойчивость к блокаде VEGF включает повторную активацию опухолевого ангиогенеза, независящего от VEGF и связанного с опосредованным гипоксией индуцированием других проангиогенных факторов, включая членов семейства FGF. Эти другие проангиогенные сигналы функционально вовлечены в реваскуляризацию и возобновление роста опухолей на стадии эвазии, так как блокада FGF ослабляет развитие вопреки ингибированию VEGF.

Имеются данные о нормализации кровеносных сосудов глиобластомы у пациентов, подвергнутых лечению с помощью ингибитора рецептора тирозинкиназы pan-VEGF, AZD2171, при исследовании фазы 2 Определение нормализации сосудов MRI в комбинации с циркулирующими биомаркерами обеспечивает эффективное средство для оценки ответа на противоангиогенные средства.

PDGFR

Злокачественная опухоль является результатом неконтролируемой пролиферации клеток. Рост клеток контролируется тонким балансом между факторами, способствующими росту и ингибирующими рост. В нормальных тканях продуцирование и активность этих факторов приводит к тому, что дифференцированные клетки растут контролируемым и регулируемым образом, что поддерживает нормальную целостность и функционирование органа. Злокачественная клетка уклонилась от этого контроля; естественный баланс нарушен (посредством множества механизмов) и нерегулированный, происходит нарушенный рост клеток. Фактор роста, важный для развития опухоли, представляет собой фактор роста тромбоцитов (PDGF), который включает семейство пептидных факторов роста, которые передают сигналы через тирозинкиназные рецепторы на поверхности клетки (PDGFR) и стимулируют различные клеточные функции, включая рост, пролиферацию и дифференциацию.

Преимущества селективного ингибитора

Разработка ингибиторов киназ FGFR с дифференцируемыми профилями селективности предоставляет новую возможность для использования этих направленных средств в подгруппах пациентов, чьи заболевания вызваны нарушением регуляции FGFR. Соединения, которые проявляют пониженное ингибирующее действие на дополнительные киназы, в частности, VEGFR2 и PDGFR-бета, позволяют дифференцировать побочный эффект или токсический профиль и, в силу этого, предоставляют возможность более эффективного лечения этих показаний. Ингибиторы VEGFR2 и PDGFR-бета связаны с токсичностью, такой как гипертензия или отек, соответственно. В случае ингибиторов VEGFR2 этот гипертензивный эффект часто является дозолимитирующим, может быть противопоказан в определенных группах пациентов и требует клинического применения.

Биологическая активность и терапевтические пути применения

Соединения настоящего изобретения и их подгруппы обладают ингибирующей или модулирующей активностью в отношении рецептора фактора роста фибробластов (FGFR) и/или ингибирующей или модулирующей активностью в отношении рецептора фактора роста эндотелия сосудов (VEGFR), и/или ингибирующей или модулирующей активностью в отношении рецептора фактора роста тромбоцитов (PDGFR), и они могут применяться для предупреждения или лечения болезненных состояний или состояний, описываемых в настоящем документе. Кроме того, соединения настоящего изобретения и их подгруппы могут применяться для предупреждения или лечения заболеваний или состояния, опосредованных киназами. Ссылки на предотвращение, или профилактику, или лечение болезненного состояния или состояния, такого как рак, подразумевают облегчение или снижение частоты заболевания раком.

Используемый в настоящем документе термин "модулирование", применительно к активности киназы, обозначает изменение уровня биологической активности протеинкиназы. Таким образом, модулирование охватывает физиологические изменения, которые приводят к повышению или понижению соответствующей активности протеинкиназы. Во втором случае модулирование может называться "ингибированием". Модулирование может возникать в результате непосредственного или косвенного воздействия, и оно может быть опосредовано любым механизмом и на любом физиологическом уровне, включая, например, уровень экспрессии гена (включающей, например, транскрипцию, трансляцию и/или посттрансляционную модификацию), уровень экспрессии регуляторных элементов кодирующих генов, которые непосредственно или косвенно воздействуют на уровни активности киназы. Таким образом, модулирование может включать повышенную/подавленную экспрессию или избыточную или недостаточную экспрессию киназы, включая амплификацию гена (т. е. множество копий гена) и/или повышенную или пониженную экспрессию в результате транскрипционного эффекта, а также гиперактивность (или гипоактивность) и (де)активацию протеинкиназы(протеинкиназ) (включая (де)активацию) в результате мутации(ий). Термины "модулированный", "модулирование" и "модулировать" следует истолковывать соответствующим образом.

Используемый в настоящем документе термин "опосредованный", применяемый, например, в отношении описанной в настоящем документе киназы (и применяемый, например, к различным физиологическим процессам, заболеваниям, состояниям, патологическим состояниям, терапевтическим средствами, методам лечения или вмешательствам), используется ограничительно таким образом, что он применяется только к таким разнообразным процессам, заболеваниям, состояниям, патологическим состояниям, способам лечения и вмешательства, в которых киназа играет биологическую роль. В случаях, когда термин применяют к заболеванию, состоянию или патологическому состоянию, биологическая роль, которую играет киназа, может быть непосредственной или косвенной, и может быть необходимой и/или достаточной для проявления симптомов заболевания, состояния или патологического состояния (или их этиологии или развития). Таким образом, активность киназы (и, в частности, аберрантные уровни активности киназы, например, избыточная экспрессия киназы) не обязательно должна быть непосредственной причиной заболевания, состояния и патологического состояния, и более того, предполагается, что опосредованные киназой заболевания, состояния или патологические состояния включают те, которые имеют полифакториальную этиологию и комплексное развитие, и в которые соответствующая киназа вовлечена только частично. В случае, когда термин применяют к лечению, профилактике или вмешательству, выполняемая киназой роль может быть непосредственной или косвенной, и может быть необходимой и/или достаточной для проведения лечения, профилактики или результата вмешательства. Таким образом, болезненное состояние или патологическое состояние, опосредованное киназой, включает в себя развитие устойчивости к любому конкретному противораковому лекарственному средству или к противораковой терапии.

Таким образом, например, соединения настоящего изобретения могут быть применимы для облегчения или снижения частоты случаев заболевания раком.

Более конкретно, соединения формулы (I) и их подгруппы являются ингибиторами FGFR. Например, соединения настоящего изобретения обладают активностью в отношении FGFR1, FGFR2, FGFR3 и/или FGFR4 и, в частности, в отношении FGFR, выбранных из FGFR1, FGFR2 и FGFR3, или, в частности, соединения формулы (I) и их подгруппы являются ингибиторами FGFR4.

Предпочтительными соединениями являются соединения, которые ингибируют один или несколько FGFR, выбранных из FGFR1, FGFR2, FGFR3 и FGFR4. Предпочтительными соединениями настоящего изобретения являются соединения, которые имеют значения IC₅₀ менее чем 0,1 мкМ.

Соединения настоящего изобретения также обладают активностью против VEGFR.

Кроме того, многие из соединений настоящего изобретения проявляют селективность в отношении киназ FGFR 1, 2 и/или 3, и/или FGFR4 по сравнению с VEGFR (в частности, VEGFR2) и/или PDGFR, и такие соединения представляют один предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения. В частности, соединения проявляют селективность в отношении VEGFR2. Например, многие соединения настоящего изобретения имеют значения IC₅₀ в отношении FGFR1, 2 и/или 3 и/или FGFR4, которые составляют от десятой до сотой части значения IC₅₀ в отношении VEGFR (в частности, VEGFR2) и/или PDGFR B. В частности, предпочтительные соединения настоящего изобретения имеют по меньшей мере в 10 раз более высокую активность в отношении или при ингибировании FGFR, в частности FGFR1, FGFR2, FGFR3 и/или FGFR4, чем в отношении VEGFR2. Более предпочтительные соединения настоящего изобретения имеют по меньшей мере в 100 раз более высокую активность в отношении или ингибировании FGFR, в частности, FGFR1, FGFR2, FGFR3 и/или FGFR4, чем в отношении VEGFR2. Это может быть определено с помощью с использованием способов, описываемых в настоящем документе.

Вследствие их активности при модулировании или ингибировании киназ FGFR, VEGFR и/или PDGFR соединения могут применяться в качестве средства предотвращения роста или индуцирования апоптоза неоплазии, в частности, путем ингибирования ангиогенеза. Поэтому ожидается, что соединения будут одобрены как пригодные в лечении или предупреждении пролиферативных нарушений, таких как формы рака. Кроме того, соединения согласно настоящему изобретению могут быть пригодными в лечении заболеваний, в которых присутствует нарушение пролиферации, апоптоза или дифференциации.

В частности, опухоли с активированными мутантами VEGFR или с повышенной регуляцией VEGFR и пациенты с повышенными уровнями лактатдегидрогеназы в сыворотке могут быть особенно чувствительными к соединениям настоящего изобретения. Для пациентов с обсуждаемыми в настоящем документе активированными мутантами любой из изоформ специфических RTK лечение с помощью соединений настоящего изобретения может также быть особенно эффективным. Например, при сверхэкспрессии VEGFR в клетках острого лейкоза, когда клональные клетки-предшественники могут экспрессировать VEGFR. Кроме того, конкретные опухоли с активированными мутантами или с повышенной регуляцией или сверхэкспрессией любой из изоформ FGFR, такой как FGFR1, FGFR2 или FGFR3, или FGFR4, могут быть особенно чувствительны к соединениям настоящего изобретения, и, таким образом, для обсуждаемых в настоящем документе пациентов с такими конкретными опухолями лечение с помощью соединений настоящего изобретения может также быть особенно эффективным. Может быть предпочтительным, чтобы лечение было связано или направлено на мутантную форму одной из рецепторных тирозинкиназ, обсуждаемых в настоящем документе. Диагностирование опухолей с такими мутациями может быть осуществлено с использованием методик, известных специалисту в данной области и описываемых в настоящем документе, таких как RTPCR и FISH.

Примеры видов рака, которые можно лечить (или подавлять) включают без ограничения карциному, например карциному мочевого пузыря, рак молочной железы, рак толстой кишки (например, виды рака ободочной и прямой кишки, такие как аденокарцинома толстой кишки и аденома толстой кишки), рак почек, рак уротелия, рак матки, рак эпидермиса, рак печени, рак легкого (например, аденокарциному, мелкоклеточный рак легкого и немелкоклеточные карциномы легкого, плоскоклеточный рак легкого), рак пищевода, рак головы и шеи, рак желчного пузыря, рак яичников, рак поджелудочной железы (например, экзокринную карциному поджелудочной железы), рак желудка, рак желудочно-кишечного тракта (также известный как рак желудка) (например, гастроинтестинальные стромальные опухоли), рак шейки матки, рак эндометрия, рак щитовидной железы, рак предстательной железы или рак кожи (например, эпидермоидный рак или выбухающую дерматофибросаркому); рак гипофиза, опухоль кроветворной ткани лимфоидного происхождения, например, лейкоз, острый лимфоцитарный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, B-клеточную лимфому (например, диффузную В-крупноклеточную лимфому), T-клеточную лимфому, лимфому Ходжкина, неходжкинскую лимфому, волосатоклеточную лимфому или лимфому Беркетта; опухоль кроветворной ткани миелоидного происхождения, например, виды лейкоза, острый и хронический виды миелоидного лейкоза, хронический миеломоноцитарный лейкоз (CMML), миелопролиферативное нарушение, миелопролиферативный синдром, миелодиспластический синдром или промиелоцитарный лейкоз; множественную миелому; фолликулярный рак щитовидной железы; гепатоцеллюлярный рак, опухоль мезенхимального происхождения (например, саркому Юинга), например, фибросаркому или рабдомиосаркому; опухоль центральной или периферической нервной системы, например астроцитому, нейробластому, глиому (такую как мультиформная глиобластома) или шванному; меланому; семиному; тератокарциному; остеосаркому; пигментную ксеродерму; кератоакантому; фолликулярный рак щитовидной железы или саркому Капоши. В частности, плоскоклеточный рак легкого, рак молочной железы, колоректальный рак, глиобластому, астроцитому, рак предстательной железы, мелкоклеточный рак легких, меланому, рак головы и шеи, рак щитовидной железы, рак матки, рак желудка, гепатоцеллюлярный рак, рак шейки матки, множественную миелому, рак мочевого пузыря, рак эндометрия, рак уротелия, рак толстой кишки, рабдомиосаркому, рак питуитарной железы.

Примеры форм рака, которые можно лечить (или ингибировать), включают в себя без ограничения рак мочевого пузыря, уротелиальный рак, метастатический уротелиальный рак, хирургически неоперабельный уротелиальный рак, рак молочной железы, глиобластому, рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, плоскоклеточный рак легкого, аденокарциному легкого, легочную аденокарциному, мелкоклеточный рак легкого, рак яичника, эндометриальный рак, рак шейки матки, саркому мягких тканей, плоскоклеточную карциному головы и шеи, рак желудка, рак пищевода, плоскоклеточную карциному пищевода, аденокарциному пищевода, холангиокарциному, гепатоцеллюлярную карциному.

Некоторые формы рака устойчивы к лечению конкретными лекарственными средствами. Это может быть обусловлено типом опухоли или может возникать вследствие лечения с помощью соединения. В этой связи, упоминания множественной миеломы предусматривают чувствительную к бортезомибу множественную миелому или рефракторную множественную миелому. Подобным образом, упоминания хронического миелогенного лейкоза предусматривают чувствительный к имитанибу хронический миелогенный лейкоз и рефракторный хронический миелогенный лейкоз. Хронический миелогенный лейкоз также известен как хронический миелолейкоз, хронический гранулоцитарный лейкоз или CML. Подобным образом, острый миелогенный лейкоз также называют острым миелобластным лейкозом, острым гранулоцитарным лейкозом, острым нелимфоидным лейкозом или AML.

Соединения согласно настоящему изобретению можно также применять в лечении связанных с кроветворением заболеваний аномальной пролиферации клеток, либо предраковых, либо стабильных, таких как миелопролиферативные заболевания. Миелопролиферативные заболевания ("MPD") представляют собой группу заболеваний костного мозга, при котором продуцируется избыток клеток. Они связаны с миелодиспластическим синдромом и могут быть вовлечены в него. Миелопролиферативные заболевания включают истинную полицитемию, эссенциальную тромбоцитемию и первичный миелофиброз. Дополнительное гематологическое нарушение представляет собой гиперэозинофильный синдром. T-клеточные лимфопролиферативные заболевания включают таковые, происходящие от естественных клеток-киллеров.

Кроме того, соединения настоящего изобретения могут применяться при гастроинтестинальной (также известной как гастральной) форме рака, например при гастроинтестинальных стромальных опухолях. Гастроинтестинальная форма рака относится к злокачественным состояниям желудочно-кишечного тракта, включающего в себя пищевод, желудок, печень, желчную систему, поджелудочную железу, кишки и анус.

Таким образом, при фармацевтических композициях, применениях или способах согласно настоящему изобретению для лечения заболевания или состояния, включающего аномальный рост клеток, заболевание или состояние, включающее аномальный рост клеток, в одном варианте осуществления представляет собой рак.

Конкретные подтипы форм рака включают в себя множественную миелому, рак мочевого пузыря, шейки матки, предстательной железы и щитовидной железы, легкого, молочной железы и толстой кишки.

Дополнительный подтип форм рака включает в себя множественную миелому, рак мочевого пузыря, гепатоцеллюлярную, плоскоклеточную карциному полости рта и карциномы шейки матки.

Дополнительный подтип форм рака включает в себя гепатоцеллюлярный рак, характеризующийся амплификацией или сверхэкспессией FGF19.

Подтип рака включает в себя холангиокарциному, в частности, холангиокарциному с геномными изменениями (слияниями и/или мутациями) FGFR.

Подтип рака включает в себя запущенную или рефракторную NSCLC, рак молочной железы, мультиформную глиобластому, уротелиальный рак, рак яичника, рак головы и шеи, рак пищевода, рак желудка и холангиокарциному, в частности, запущенную или рефракторную NSCLC, рак молочной железы, мультиформную глиобластому, уротелиальный рак, рак яичника, рак головы и шеи, рак пищевода, рак желудка и холангиокарциному с геномными изменениями (слияниями и/или мутациями) FGFR.

Подтип рака включает в себя метастатический или хирургически неоперабельный уротелиальный рак, в частности, метастатический или хирургически неоперабельный уротелиальный рак с геномными изменениями (слияниями и/или мутациями) FGFR.

Подтип рака включает в себя рак с геномными изменениями (слияниями и/или мутациями) FGFR.

Соединение настоящего изобретения, обладающее ингибиторной активностью в отношении FGFR, такого как FGFR1, может быть, в частности, применимым в лечении или предупреждении рака молочной железы, в частности, классических лобулярных карцином (CLC).

Поскольку соединения настоящего изобретения обладают активностью в отношении FGFR4, они также найдут применение в лечении форм рака предстательной железы или гипофиза или найдут применение в лечении рака молочной железы, рака легкого, рака предстательной железы, рака печени (HCC) или рака легкого.

В частности, соединения настоящего изобретения как ингибиторы FGFR применимы в лечении множественной миеломы, миелопролиферативных нарушений, эндометриального рака, рака предстательной железы, рака мочевого пузыря, рака легкого, рака яичника, рака молочной железы, рака желудка, рака толстой и прямой кишок и плоскоклеточной карциномы ротовой полости.

Дополнительными подтипами рака являются множественная миелома, эндометриальный рак, рак мочевого пузыря, рак шейки матки, рак предстательной железы, рак легкого, рак молочной железы, рак толстой и прямой кишок, и карциномы щитовидной железы.

В частности, соединения настоящего изобретения применимы при лечении множественной миеломы (в частности, множественной миеломы с транслокацией t(4;14) или со сверхэкспрессией FGFR3), рака предстательной железы (гормонально-рефракторного рака предстательной железы), рака эндометрия (в частности, эндометриальных опухолей с активированными мутациями в FGFR2) и рака молочной железы (в частности, лобулярного рака молочной железы).

В частности, соединения применяются для лечения лобулярных карцином, таких как CLC (классическая лобулярная карцинома).

Так как соединения обладают активностью в отношении FGFR3, они могут применяться при лечении множественной миеломы и рака мочевого пузыря.

В частности, соединения обладают активностью против опухолей с транслокацией FGFR3-TACC3, в частности, опухолей мочевого пузыря или головного мозга с транслокацией FGFR3-TACC3.

В частности, соединения могут применяться при лечении множественной миеломы с положительной транслокацией t(4;14).

Согласно одному варианту осуществления соединения могут быть применимы для лечения саркомы. Согласно одному варианту осуществления соединения применимы для лечения рака легкого, например, плоскоклеточной карциномы.

Так как соединения обладают активностью в отношении FGFR2, они могут применяться при лечении форм рака эндометрия, яичника, желудка, печеночно-клеточного рака, рака матки, шейки матки и рака толстой и прямой кишок. FGFR2 также сверхэкспрессируется при эпителиальном раке яичника, поэтому соединения настоящего изобретения могут специально применяться при лечении рака яичника, такого как эпителиальный рак яичника.

Согласно одному варианту осуществления соединения могут быть применимы для лечения рака легкого, в частности, NSCLC (немелкоклеточного рака легкого), плоскоклеточной карциномы, рака печени, рака почки, рака молочной железы, рака толстой кишки, рака толстой и прямой кишок, рака предстательной железы.

Соединения настоящего изобретения также могут быть применимы в лечении опухолей, получавших предварительное лечение ингибитором VEGFR2 или антителом против VEGFR2 (например, авастином).

В частности, соединения настоящего изобретения могут быть применимы в лечении устойчивых к VEGFR2 опухолей. Ингибиторы VEGFR2 и антитела против такового используют в лечении карциномы щитовидной железы и почечно-клеточной карцином, поэтому соединения настоящего изобретения могут быть применимы в лечении устойчивой к VEGFR2 карциномы щитовидной железы и почечно-клеточной карцином.

Формы рака могут представлять собой формы рака, которые чувствительны к ингибированию любого одного или нескольких FGFR, выбранных из FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, например, одного или нескольких FGFR, выбранных из FGFR1, FGFR2 или FGFR3.

Является или не является конкретный тип рака чувствительным к ингибированию передачи сигналов FGFR или VEGFR, можно определить с помощью анализа клеточного роста, изложенного ниже, или с помощью метода, изложенного в разделе, озаглавленном "Способы диагностирования".

Соединения настоящего изобретения и, в частности, соединения, обладающие ингибиторной активностью в отношении FGFR или VEGFR, могут применяться особенно в лечении или предупреждении типа форм рака, связанных с присутствием или характеризующихся присутствием повышенных уровней FGFR или VEGFR, например, форм рака, упоминаемых в контексте вводного раздела настоящей заявки.

Соединения настоящего изобретения могут быть применимы для лечения взрослой группы населения. Соединения настоящего изобретения могут быть применимы для лечения детской группы населения.

Было обнаружено, что некоторые ингибиторы FGFR могут быть использованы в комбинации с другими противораковыми средствами. Например, может давать положительный эффект объединение ингибитора, который индуцирует апоптоз, с другим средством, которое действует на основе другого механизма, для регулирования клеточного роста, с воздействием таким образом на две из характерных особенностей развития рака. Примеры таких комбинаций изложены ниже.

Соединения согласно настоящему изобретению могут быть применимы в лечении других состояний, которые являются результатом нарушений пролиферации, таких как сахарный диабет II типа или инсулиннезависимый сахарный диабет, аутоимунные заболевания, травма головы, инсульт, эпилепсия, нейродегенеративные заболевания, такие как болезнь Альцгеймера, заболевание двигательных нейронов, прогрессирующий надъядерный паралич, кортико-базальная дегенерация и болезнь Пика, например, аутоимунные заболевания и нейродегенеративные заболевания.

Одна подгруппа болезненных состояний и патологических состояний, при которых могут применяться соединения настоящего изобретения, состоит из воспалительных заболеваний, сердечно-сосудистых заболеваний и заживления ран.

Также известно, что FGFR и VEGFR участвуют в апоптозе, ангиогенезе, пролиферации, дифференцировке и транскрипции, и, таким образом, соединения согласно настоящему изобретению также могут быть пригодны в лечении следующих заболеваний, отличных от рака; хронических воспалительных заболеваний, например, системной красной волчанки, опосредованного аутоиммунным ответом гломерулонефрита, ревматоидного артрита, псориаза, воспалительного заболевания кишечника, аутоиммунного сахарного диабета, реакций гиперчувствительности в виде экземы, астмы, COPD, ринита и заболеваний верхних дыхательных путей; сердечно-сосудистых заболеваний, например, гипертрофии сердца, рестеноза, атеросклероза; нейродегенеративных нарушений, например, болезни Альцгеймера, СПИД-ассоциированной деменции, болезни Паркинсона, бокового амиотрофического склероза, пигментного ретинита, спинальной мышечной атрофии и мозжечковой дегенерации; гломерулонефрита; миелодиспластических синдромов, инфаркта миокарда, ассоциированного с ишемическим повреждением, инсульта и реперфузионного повреждения, аритмии, атеросклероза, вызванных токсинами или связанных со злоупотреблением алкоголя заболеваний печени, заболеваний органов кроветворения, например, хронической анемии и апластической анемии; дегенеративных заболеваний опорно-двигательной системы, например, остеопороза и артрита, чувствительного к аспирину риносинусита, муковисцидоза, рассеянного склероза, заболеваний почек и ассоциированной с раковым заболеванием боли.

Кроме того, мутации FGFR2 связаны с рядом тяжелых нарушений развития скелета человека, и, таким образом, соединения настоящего изобретения могли бы применяться при лечении нарушений развития скелета человека, включая аномальную оссификацию швов черепа (краниосиностоз), синдром Аперта (AP), синдром Крузона, синдром Джексона-Вейсса, синдром Биара-Стивенсона складчатой кожи и синдром Пфеффера.

Соединение настоящего изобретения, обладающее ингибирующей активностью в отношении FGFR, таких как FGFR2 или FGFR3, может быть особенно применимо при лечении или предупреждении заболеваний скелета. В частности, заболеваниями скелета являются ахондроплазия или танатофорная карликовость (также известная как танатофорная дисплазия).

Соединение настоящего изобретения, обладающее ингибирующей активностью в отношении FGFR, такого как FGFR1, FGFR2 или FGFR3, может быть особенно применимо при лечении или предупреждении патологий, при которых симптомом является прогрессирующий фиброз. Фиброзные состояния, при лечении которых могут применяться соединения настоящего изобретения, включают в себя заболевания, характеризующиеся аномальным или избыточным отложением фиброзной ткани, например при циррозе печени, гломерулонефрите, фиброзе легких, системном фиброзе, ревматоидном артрите, а также при естественном процессе заживления ран. В частности, соединения настоящего изобретения также могут быть применимы в лечении фиброза легких, в частности, идиопатического фиброза легких.

Сверхэкспрессия и активация FGFR и VEGFR в связанной с опухолью сосудистой системе позволяет предположить возможность использования соединений настоящего изобретения для предотвращения и блокирования инициирования опухолевого ангиогенеза. В частности, соединения настоящего изобретения могут применяться при лечении рака, метастазирования, лейкозов, таких как CLL, глазных заболеваний, таких как возрастная макулярная дистрофия, в частности, влажная форма возрастной макулярной дистрофии, ишемических пролиферативных ретинопатий, таких как ретинопатия недоношенных (ROP) и диабетическая ретинопатия, ревматоидного артрита и гемангиомы.

Активность соединений настоящего изобретения в качестве ингибиторов FGFR1-4, VEGFR и/или PDGFR A/B может быть измерена с помощью анализов, описанных ниже в примерах, и уровень активности, проявляемой данным соединением, может быть определен с помощью значения IC₅₀. Предпочтительными соединениями настоящего изобретения являются соединения, имеющие значение IC₅₀ меньше чем 1 мкМ, более предпочтительно меньше чем 0,1 мкМ.

Настоящее изобретение относится к соединениям, которые обладают ингибирующей или модулирующей активностью в отношении FGFR и которые могут применяться в предупреждении или лечении болезненных состояний или патологических состояний, опосредованных киназами FGFR.

Согласно одному варианту осуществления представлено соединение, определенное в настоящем документе для применения в терапии, для применения в качестве лекарства. Согласно следующему варианту осуществления представлено соединение, определенное в настоящем документе для применения в профилактике или лечении, в частности, в лечении болезненного состояния или состояния, опосредованного киназой FGFR.

Таким образом, например, соединения настоящего изобретения могут быть применимы для облегчения или снижения частоты случаев заболевания раком. Таким образом, согласно следующему варианту осуществления представлено соединение, определенное в настоящем документе, для применения в профилактике или лечении, в частности, в лечении, рака. Согласно одному варианту осуществления соединение, определенное в настоящем документе, предназначено для применения в профилактике или лечении зависимого от FGFR рака. Согласно одному варианту осуществления соединение, определенное в настоящем документе, предназначено для применения в профилактике или лечении рака, опосредованного киназами FGFR.

Следовательно, настоящее изобретение относится inter alia к:

- способу профилактики или лечения болезненного состояния или состояния, опосредованного киназой FGFR, при этом способ предусматривает введение субъекту, нуждающемуся в этом, соединения формулы (I), определенного в настоящем документе;

- способу профилактики или лечения болезненного состояния или состояния, описываемых в настоящем документе, при этом способ предусматривает введение субъекту, нуждающемуся в этом, соединения формулы (I), определенного в настоящем документе;

- способу профилактики или лечения рака, при этом способ предусматривает введение субъекту при необходимости этого соединения формулы (I), определенного в настоящем документе;

- способу облегчения или уменьшения частоты возникновения болезненного состояния или состояния, опосредованного киназой FGFR, при этом способ предусматривает введение субъекту, нуждающемуся в этом, соединения формулы (I), определенного в настоящем документе;

- способу ингибирования киназы FGFR, при этом способ предусматривает введение в контакт киназы с ингибирующим киназу соединением формулы (I), определенным в настоящем документе;

- способу модулирования клеточного процесса (например, клеточного деления) путем ингибирования активности киназы FGFR с использованием соединения формулы (I), определенного в настоящем документе;

- соединению формулы (I), определенному в настоящем документе, для применения в качестве модулятора клеточного процесса (например, клеточного деления) путем ингибирования активности киназы FGFR;

- соединению формулы (I), определенному в настоящем документе, для применения в профилактике или лечении рака, в частности, лечения рака.

- соединению формулы (I), определенному в настоящем документе, для применения в качестве модулятора (например, ингибитора) FGFR;

- применению соединения формулы (I), определенного в настоящем документе, для изготовления лекарственного препарата для профилактики или лечения болезненного состояния или состояния, опосредованного киназой FGFR, при этом соединение характеризуется формулой (I), определенной в настоящем документе;

- применению соединения формулы (I), определенного в настоящем документе, для изготовления лекарственного препарата для профилактики или лечения болезненного состояния или состояния, определенного в настоящем документе;

- применению соединения формулы (I), определенного в настоящем документе, для изготовления лекарственного препарата для профилактики или лечения, в частности, лечения рака;

- применению соединения формулы (I), определенного в настоящем документе, для изготовления лекарственного препарата для модулирования (например, ингибирования) активности FGFR;

- применению соединения формулы (I), определенного в настоящем документе, для изготовления лекарственного препарата для модулирования клеточного процесса (например, клеточного деления) путем ингибирования активности киназы FGFR;

- применению соединения формулы (I), определенного в настоящем документе, для изготовления лекарственного препарата для профилактики или лечения заболевания или состояния, характеризуемого повышающей регуляцией киназы FGFR (например, FGFR1, или FGFR2, или FGFR3, или FGFR4);

- применению соединения формулы (I), определенного в настоящем документе, для изготовления лекарственного препарата для профилактики или лечения рака, при этом раком является рак, характеризуемый повышающей регуляцией киназы FGFR (например, FGFR1, или FGFR2, или FGFR3, или FGFR4);

- применению соединения формулы (I), определенного в настоящем документе, для изготовления лекарственного препарата для профилактики или лечения рака у пациента, выбранного из подгруппы населения, обладающей генетическими аберрациями киназы FGFR3;

- применению соединения формулы (I), определенного в настоящем документе, для изготовления лекарственного препарата для профилактики или лечения рака у пациента, которого диагностировали как составляющего часть подгруппы населения, обладающей генетическими аберрациями киназы FGFR3;

- способу профилактики или лечения заболевания или состояния, характеризующегося повышающей регуляцией киназы FGFR (например, FGFR1, или FGFR2, или FGFR3, или FGFR4), при этом способ предусматривает введение соединения формулы (I), определенного в настоящем документе;

- способу облегчения или уменьшения частоты возникновения состояния заболевания или состояния, характеризующегося повышающей регуляцией киназы FGFR (например, FGFR1, или FGFR2, или FGFR3, или FGFR4), при этом способ предусматривает введение соединения формулы (I), определенного в настоящем документе;

- способу профилактики или лечения (или облегчения, или уменьшения частоты возникновения) рака у пациента, страдающего или предположительно страдающего раком; при этом способ предусматривает (i) подвергание пациента диагностическому тесту для определения наличия у пациента генетических аберраций гена FGFR3; и (ii) если у пациента имеется указанный вариант, то введение пациенту соединения формулы (I), определенного в настоящем документе, обладающего активностью ингибирования киназы FGFR3;

- способу профилактики или лечения (или облегчения, или уменьшения частоты возникновения) болезненного состояния или состояния, характеризующегося повышающей регуляцией киназы FGFR (например, FGFR1, или FGFR2, или FGFR3, или FGFR4); при этом способ предусматривает (i) подвергание пациента диагностическому тесту для выявления маркерной характеристики повышающей регуляции киназы FGFR (например, FGFR1, или FGFR2, или FGFR3, или FGFR4); и (ii) если диагностический тест указывает на повышающую регуляцию киназы FGFR, то введение пациенту соединения формулы (I), определенного в настоящем документе, обладающего активностью ингибирования киназы FGFR3;

Согласно одному варианту осуществления заболеванием, опосредованным киназами FGFR, является онкологическое заболевание (например, рак). Согласно одному варианту осуществления заболеванием, опосредованным киназами FGFR, является не связанное с онкологией заболевание (например, любое заболевание, раскрываемое в настоящем документе, за исключением рака). Согласно одному варианту осуществления заболеванием, опосредованным киназами FGFR, является состояние, описываемое в настоящем документе. Согласно одному варианту осуществления заболеванием, опосредованным киназами FGFR, является скелетное состояние, описываемое в настоящем документе. Конкретные аномалии в развитии скелета человека включают в себя аномальную оссификацию швов черепа (краниосиностоз), синдром Аперта (AP), синдром Крузона, синдром Джексона-Вейсса, синдром пахидермии складчатой Бира-Стивенсона, синдром Пфейффера, ахондроплазию и танатофорную карликовость (также известную как танатофорная дисплазия).

Мутированные киназы

Мутации киназы, приводящие к ее устойчивости при действии лекарственных средств, могут возникать у групп пациентов, подвергавшихся лечению ингибиторами киназы. Мутации происходят частично в областях белка, которые связываются или взаимодействуют с конкретным ингибитором, применяемым при терапии. Такие мутации понижают или повышают способность ингибитора связывать и ингибировать соответствующую киназу. Это может происходить в любом из аминокислотных остатков, которые взаимодействуют с ингибитором или которые являются важными для обеспечения связывания указанного ингибитора с целью. Ингибитор, который связывает целевую киназу без необходимости взаимодействия с мутированным аминокислотным остатком, по-видимому, не будет подвержен воздействию мутации и будет оставаться эффективным ингибитором данного фермента.

Исследование образцов от пациентов с раком желудка показало присутствие двух мутаций в FGFR2 - Ser167Pro в экзоне IIIa и мутации сайта сплайсинга 940-2A-G в экзоне IIIc. Эти мутации тождественны генеративным активирующим мутациям, которые вызывают синдромы краниосиностоза и были обнаружены в 13% исследованных тканей первичного рака желудка. Кроме того, активирующие мутации в FGFR3 были обнаружены у 5% тестируемых образцов от пациентов, и сверхэкспрессия FGFR коррелировала с неблагоприятным прогнозом в этой группе пациентов.

Кроме того, существуют хромосомные транслокации или точечные мутации, обнаруженные в FGFR, что обуславливает состояние приобретения функции, состояние сверхэкспресии или конститутивно активные биологические состояния.

Таким образом, соединения настоящего изобретения найдут конкретное применение, связанное с формами рака, при которых экспрессируется мутантная молекулярная цель, такая как FGFR. Диагностирование опухолей с такими мутациями может быть осуществлено с использованием методик, известных специалисту в данной области и описываемых в настоящем документе, таких как RTPCR и FISH.

Было сделано предположение, что мутации консервативного остатка треонина в сайте связывания АТФ FGFR могут быть причиной устойчивости к действию ингибитора. Аминокислоту валин 561 мутировали в метионин в FGFR1, что соответствует ранее описанным мутациям, обнаруженным в Abl (T315) и EGFR (T766), которые, как было показано, вызывают устойчивость к действию селективных ингибиторов. Данные анализа для V561M FGFR1 показали, что эта мутация вызывала устойчивость к действию ингибитора тирозинкиназы в отличие от немутантного типа.

Способы диагностирования

Перед введением соединения формулы (I) пациент может быть подвергнут скрининговому исследованию с целью определения, является ли заболевание или состояние, от которого пациент страдает или возможно страдает, заболеванием или состоянием, которое восприимчиво к лечению с помощью соединения, обладающего активностью против FGFR и/или VEGFR.

Например, биологический образец, взятый у пациента, может быть подвергнут анализу с целью определения, является ли состояние или заболевание, такое как рак, от которого пациент страдает или возможно страдает, состоянием или заболеванием, которое характеризуется генетической аномалией или аномальной экспрессии белка, что приводит к повышающей регуляции уровней или активности FGFR и/или VEGFR, или к сенсибилизации пути к нормальной активности FGFR и/или VEGFR, или к повышающей регуляции этих сигнальных путей фактора роста, такой как уровни лиганда фактора роста или активность лиганда фактора роста, или к повышающей регуляции активации биохимического пути после FGFR и/или VEGFR.

Примеры таких аномалий, которые приводят к активации или сенсибилизации сигнала FGFR и/или VEGFR, включают в себя потерю или ингибирование апоптозных путей, повышенную регуляцию рецепторов или лигандов или присутствие мутантных вариантов рецепторов или лигандов, например, вариантов PTK. Опухоли с мутантами FGFR1, FGFR2 или FGFR3, или FGFR4, или с повышенной регуляцией, в частности, со сверхэкспрессией FGFR1, или мутантами FGFR2 или FGFR3 с приобретенной функцией, могут быть особенно чувствительны к ингибиторам FGFR.

Например, при ряде состояний были идентифицированы точечные мутации, порождающие приобретенную функцию в FGFR2. В частности, активирующие мутации в FGFR2 были идентифицированы в 10% эндометриальных опухолей.

Кроме того, генетические аберрации рецептора тирозинкиназы FGFR3, такие как хромосомные транслокации или точечные мутации, приводящие к эктопическим экспрессированным или разрегулированным, конститутивно активным рецепторам FGFR3, были выявлены и связаны с подгруппой множественных миелом, карцином мочевого пузыря и шейки матки. Конкретная мутация T674I рецептора PDGF была идентифицирована у пациентов, подвергавшихся лечению с помощью иматиниба. Кроме того, амплификация гена 8p12-p11.2 была выявлена в ~50% случаев лобулярного рака молочной железы (CLC), и было показано, что это связано с повышенной экспрессией FGFR1. Предварительные исследования с siRNA, направленной против FGFR1, или с низкомолекулярным ингибитором рецептора показали, что клеточные линии, в которых происходит эта амплификация, являются особенно чувствительными к ингибированию этого сигнального пути.

В качестве альтернативы, взятый у пациента биологический образец может быть подвергнут анализу на предмет потери отрицательного регулятора или суппрессора FGFR или VEGFR. В настоящем контексте термин "потеря" охватывает делецию гена, кодирующего регулятор или суппрессор, процессинг гена (например, путем мутации), процессинг продуктов транскрипции гена или инактивацию продукта транскрипции (например, в результате точечной мутации) или секвестрацию с помощью другого продукта гена.

Термин повышающая регуляция включает повышенную экспрессию или сверхэкспрессию, включающую амплификацию гена (т. е. множество копий генов) и повышенную экспрессию в результате транскрипционного эффекта, и гиперактивность и активацию, в том числе активацию в результате мутаций. Таким образом, пациент может быть подвергнут диагностическому тесту с целью обнаружения маркерной характеристики повышающей регуляции FGFR и/или VEGFR. Термин диагностирование включает в себя скрининг. Под маркером авторы настоящего изобретения понимают генетические маркеры, включая, например, определение состава ДНК для идентификации мутаций FGFR и/или VEGFR. Термин маркер также включает в себя маркеры, которые являются характеристиками повышающей регуляции FGFR и/или VEGFR, включая ферментную активность, уровни фермента, состояние фермента (например, фосфорилированный или нет) и уровни mRNA упомянутых выше белков.

Диагностические тесты и скрининги обычно проводят на биологическом образце, выбранном из образцов биопсии опухоли, образцов крови (выделение и обогащение сбрасываемых опухолевых клеток), биопсии экскрементов, слюны, хромосомного анализа, плевральной жидкости, перитонеальной жидкости, буккальных соскобов, биопсии или мочи.

Способы идентификации и анализа мутаций и повышающей регуляции белков известны специалисту в данной области. Способы скрининга могут предусматривать без ограничения стандартные способы, такие как полимеразная цепная реакция с обратной транскриптазой (RT-PCR) или гибридизация in-situ, такая как флуоресцентная гибридизация in situ (FISH).

Идентификация индивидуального обладания мутацией в FGFR и/или VEGFR может означать, что для пациента может быть особенно подходящим лечение с помощью ингибитора FGFR и/или VEGFR. Предпочтительно, чтобы опухоли перед началом лечения могли быть подвергнуты скринингу на присутствие варианта FGFR и/или VEGFR. Процесс скрининга будет обычно предусматривать прямое секвенирование, анализ олигонуклеотида на микрочипах или мутантного специфического антитела. Кроме того, диагностирование опухолей с такими мутациями может быть осуществлено с использованием методик, известных специалисту в данной области и описываемых в настоящем документе, таких как RT-PCR и FISH.

Кроме того, мутантные формы, например, FGFR или VEGFR2, могут быть идентифицированы путем прямого секвенирования, например, образцов биопсии опухолей с помощью ПЦР и способов секвенирования ПЦР-продуктов, описываемых выше. Для специалиста в данной области будет очевидным, что в данном случае могут быть применимы все эти хорошо известные методики выявления сверхэкспрессии, активации или мутаций упомянутых выше белков.

При скрининге с помощью RT-PCR уровень mRNA в опухоли оценивают путем создания копии cDNA mRNA, а затем амплификации cDNA с помощью ПЦР. Способы ПЦР-мплификации, выбор праймеров и условий для амплификации известны специалисту в данной области. Манипуляции с нуклеиновой кислотой и ПЦР проводят с помощью стандартных способов, описанных, например, в Ausubel, F.M. et al., eds. (2004) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc., или Innis, M.A. et al., eds. (1990) PCR Protocols: a guide to methods and applications, Academic Press, San Diego. Реакции и манипуляции, предусматривающие методики с нуклеиновыми кислотами, также описываются в Sambrook et al., (2001), 3^rd Ed, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press. В качестве альтернативы может быть использован коммерчески доступный набор для RT-PCR (например, Roche Molecular Biochemicals) или методика, описанная в патентах Соединенных Штатов №№ 4666828, 4683202, 4801531, 5192659, 5272057, 5882864 и 6218529, содержание которых включено в настоящий документ посредством ссылки. Примером методики гибридизации in situ для оценки экспрессии mRNA является флуоресцентная гибридизация in situ (FISH) (см. Angerer (1987) Meth. Enzymol., 152: 649).

Обычно гибридизация in situ включает в себя следующие основные стадии: (1) фиксацию анализируемой ткани; (2) обработку образца перед гибридизацией для повышения доступности целевой нуклеиновой кислоты и для снижения неспецифического связывания; (3) гибридизацию смеси нуклеиновых кислот с нуклеиновой кислотой в биологической структуре или ткани; (4) промывки после гибридизации для удаления фрагментов нуклеиновой кислоты, не связанных при гибридизации, и (5) выявление гибридизированных фрагментов нуклеиновой кислоты. Используемые для таких путей применения зонды обычно метят, например, с помощью радиоизотопов или флуоресцентных репортеров. Предпочтительные зонды являются достаточно длинными, например, от приблизительно 50, 100 или 200 нуклеотидов до приблизительно 1000 или больше нуклеотидов, что позволяет осуществлять специфическую гибридизацию с целевой нуклеиновой кислотой(ами) в строгих условиях. Стандартные способы проведения FISH описаны в Ausubel, F.M. et al., eds. (2004) Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc and Fluorescence In Situ Hybridization: Technical Overview by John M. S. Bartlett in Molecular Diagnosis of Cancer, Methods and Protocols, 2nd ed.; ISBN: 1-59259-760-2; March 2004, pps. 077-088; Series: Methods in Molecular Medicine.

Способы анализа экспрессии генов описаны DePrimo et al. (2003), BMC Cancer, 3:3. В нескольких словах, протокол является следующим: двухнитевую cDNA синтезируют из общей РНК с использованием олигомера (dT)24 для инициирования синтеза первой спирали cDNA, затем синтеза второй спирали cDNA со случайными гексамерными праймерами. Двухнитевую cDNA используют в качестве матрицы для транскрипции cRNA in vitro с использованием биотинилированных рибонуклеотидов. cRNA химически фрагментируют в соответствии с протоколами, описанными Affymetrix (Santa Clara, Калифорния, США), а затем гибридизируют в течение ночи на матрицах генома человека.

В качестве альтернативы белковые продукты, экспрессированные из mRNA, могут быть проанализированы путем иммуногистохимического исследования образцов опухолей, твердофазного иммунологического анализа на микротитровальных планшетах, вестерн-блоттинга, двухмерного электрофореза в SDS-полиакриламидном геле, ELISA, проточной цитометрии и других известных в технике способов выявления специфических белков. Способы выявления могут предусматривать применение сайт-специфических антител. Для специалиста в данной области является очевидным, что в данном случае могут применяться все эти хорошо известные методики для выявления повышенной регуляции FGFR и/или VEGFR, или выявления вариантов или мутантов FGFR и/или VEGFR.

Аномальные уровни белков, таких как FGFR или VEGFR, могут быть измерены с помощью стандартных ферментных анализов, например, таких анализов, которые описываются в настоящем документе. Активация или сверхэкспрессия может также быть выявлена в образце ткани, например, ткани опухоли, путем измерения активности тирозинкиназы при анализе, таком как от Chemicon International. Представляющая интерес тирозинкиназа может быть иммунопреципитирована из лизата образца, а ее активность измерена.

Альтернативные способы измерения сверхэкспрессии или активации FGFR или VEGFR, включая их изоформы, предусматривают измерение плотности микрососудов. Она может, например, быть измерена с помощью способов, описанных у Orre and Rogers (Int J Cancer (1999), 84(2) 101-8). Способы анализа также предусматривают применение маркеров, например, в случае VEGFR они включают в себя CD31, CD34 и CD105.

Следовательно, все эти методики могут также быть использованы для идентификации опухолей, в частности, подходящих для лечения с помощью соединений настоящего изобретения.

Соединения настоящего изобретения применяются, в частности, для лечения пациента с мутированным FGFR. Мутация G697C в FGFR3 наблюдается в 62% случаев плоскоклеточного рака полости рта и вызывает конститутивную активацию активности киназы. Активирующие мутации FGFR3 были также идентифицированы в случаях карциномы мочевого пузыря. Эти мутации были 6 видов с различными степенями распространенности: R248C, S249C, G372C, S373C, Y375C, K652Q. Кроме того, было обнаружено, что полиморфизм Gly388Arg в FGFR4 ассоциируется с повышенной частотой возникновения и агрессивностью рака предстательной железы, толстой кишки, легкого, печени (HCC) и молочной железы. Соединения настоящего изобретения применяются, в частности, для лечения пациента с транслокацией FGFR3-TACC3.

Поэтому дополнительный аспект настоящего изобретения относится к применению соединения в соответствии с настоящим изобретением для изготовления лекарственного препарата для лечения или профилактики болезненного состояния или состояния у пациента, которого подвергали скринингу, и у которого было обнаружено заболевание или состояние или риск его возникновения, которое будет восприимчивым к лечению с помощью соединения, обладающего активностью в отношении FGFR.

Конкретные мутации, для обнаружения которых пациента подвергают скринингу, включают в себя мутации G697C, R248C, S249C, G372C, S373C, Y375C, K652Q в FGFR3 и полиморфизм Gly388Arg в FGFR4.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к соединению настоящего изобретения для применения в профилактике или лечении рака у пациента, выбранного из группы, обладающей вариантом гена FGFR (например, мутацией G697C в FGFR3 и полиморфизмом Gly388Arg в FGFR4).

Определение нормализации сосудов с помощью MRI (например, с помощью MRI с градиентным эхо, спиновым эхо и контрастным усилением для измерения объема крови, относительного размера сосуда и сосудистой проницаемости) в комбинации с циркулирующими биомаркерами (циркулирующими клетками-предшественниками (CPC), CEC, SDF1 и FGF2) также могут быть использованы для идентификации VEGFR2-устойчивых опухолей для лечения с помощью соединения настоящего изобретения.

Фармацевтические композиции и комбинации

Ввиду применимости их фармакологических свойств, представленные соединения могут быть составлены в различных фармацевтических формах для целей введения.

Согласно одному варианту осуществления фармацевтическая композиция (например, состав) содержит по меньшей мере одно активное соединение настоящего изобретения вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями, адъювантами, вспомогательными средствами, разбавителями, наполнителями, буферами, стабилизаторами, консервантами, лубрикантами или другими материалами, хорошо известными специалистам в данной области техники, и необязательно другими терапевтическими или профилактическими средствами.

Для получения фармацевтических композиций настоящего изобретения эффективное количество соединения настоящего изобретения в качестве активного ингредиента объединяют в однородную смесь с фармацевтически приемлемым носителем, при этом носитель может принимать широкое разнообразие форм в зависимости от формы препарата, необходимого для введения. Фармацевтические композиции могут находиться в любой форме, подходящей для перорального, парентерального, местного, интраназального, офтальмического, ушного, ректального, интравагинального или трансдермального введения. Желательно, чтобы данные фармацевтические композиции были представлены в единичной лекарственной форме, подходящей, в частности, для введения пероральным, ректальным, чрескожным путем или путем парентеральной инъекции. Например, при получении композиций в виде лекарственной формы для перорального введения можно использовать любые обычные фармацевтические среды, такие как, например, вода, гликоли, масла, спирты и т.п., в случае жидких препаратов для перорального введения, таких как суспензии, сиропы, эликсиры и растворы; или твердые носители, такие как крахмалы, сахара, каолин, смазывающие вещества, связующие вещества, разрыхлители и т.п., в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток.

Благодаря своей простоте введения таблетки и капсулы представляют собой наиболее преимущественные единичные лекарственные формы для перорального введения, в случае которых, несомненно, используют твердые фармацевтические носители. В случае композиций для парентерального введения носитель, как правило, по меньшей мере в значительной степени будет включать стерильную воду, хотя может включать и другие ингредиенты, например, для улучшения растворимости. Например, можно получать растворы для инъекций, в которых носитель представляет собой физиологический раствор, раствор глюкозы или смесь физиологического раствора и раствора глюкозы. Также можно получать суспензии для инъекций, в случае которых можно использовать соответствующие жидкие носители, суспендирующие средства и т. п. В композициях, подходящих для чрескожного введения, носитель необязательно включает средство, повышающее проницаемость, и/или подходящее смачивающее средство, необязательно в комбинации с подходящими добавками любой природы в минимальных пропорциях, при этом добавки не оказывают значительного вредного воздействия на кожу. Указанные добавки могут облегчать введение через кожу и/или могут быть полезными при получении требуемых композиций. Данные композиции можно вводить различными путями, например, в форме трансдермального пластыря, путем точечного нанесения, в форме мази. Особенно преимущественно для простоты введения и однородности дозирования составлять вышеупомянутые фармацевтические композиции в виде стандартной лекарственной формы. Стандартные лекарственные формы в контексте данного описания и формулы изобретения относятся к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единиц дозирования, при этом каждая единица содержит заранее определенное количество активного ингредиента, рассчитанное для получения желаемого терапевтического эффекта, совместно с требуемым фармацевтическим носителем. Примерами таких стандартных лекарственных форм являются таблетки (в том числе делимые таблетки или таблетки, покрытые оболочкой), капсулы, пилюли, пакеты с порошкообразным продуктом, пластинки, растворы или суспензии для инъекций, чайные ложки с верхом, столовые ложки с верхом и т. п., а также их отдельные кратные количества.

Особенно преимущественно для простоты введения и однородности дозирования составлять вышеупомянутые фармацевтические композиции в виде стандартной лекарственной формы. Единичные лекарственные формы, как применяется в описании и формуле изобретения в данном документе, относятся к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единиц дозирования, при этом каждая единица содержит заранее определенное количество активного ингредиента, рассчитанное для получения требуемого терапевтического эффекта, совместно с требуемым фармацевтическим носителем. Примерами таких стандартных лекарственных форм являются таблетки (в том числе делимые таблетки или таблетки, покрытые оболочкой), капсулы, пилюли, пакеты с порошкообразным продуктом, пластинки, растворы или суспензии для инъекций, чайные ложки с верхом, столовые ложки с верхом и т. п., а также их отдельные кратные количества.

Соединение настоящего изобретения вводят в количестве, достаточном для проявления его противоопухолевой активности.

Специалисты в данной области смогут легко определить эффективное количество на основе результатов испытаний, представленных в данном документе ниже. В целом, предполагается, что терапевтически эффективное количество будет составлять от 0,005 мг/кг до 100 мг/кг массы тела и, в частности, от 0,005 мг/кг до 10 мг/кг массы тела. Может оказаться целесообразным вводить требуемую дозу в виде одной, двух, трех, четырех или более частей дозы с соответствующими интервалами на протяжении дня. Указанные части дозы можно составлять в виде единичных лекарственных форм, например, содержащих от 0,5 до 500 мг, в частности, от 1 мг до 500 мг, более конкретно, от 10 мг до 500 мг активного ингредиента на единичную лекарственную форму.

В зависимости от режима введения фармацевтическая композиция будет предпочтительно содержать от 0,05 до 99% по весу, более предпочтительно от 0,1 до 70% по весу, еще более предпочтительно от 0,1 до 50% по весу соединения настоящего изобретения и от 1 до 99,95% по весу, более предпочтительно от 30 до 99,9% по весу, еще более предпочтительно от 50 до 99,9% по весу фармацевтически приемлемого носителя, все процентные соотношения берутся, исходя из общего веса композиции.

В качестве другого аспекта настоящего изобретения предусмотрена комбинация соединения согласно настоящему изобретению с другим противораковым средством, в особенности для применения в качестве медикамента, более конкретно для применения в лечении рака или родственных заболеваний.

Для лечения вышеуказанных состояний соединения по настоящему изобретению можно преимущественно применять в комбинации с одним или несколькими другими медицинскими средствами, более конкретно, с другими противораковыми средствами или вспомогательными средствами при терапии рака. Примеры противораковых средств или вспомогательных средств (поддерживающих средств при терапии) включают без ограничения:

- координационные соединения платины, например цисплатин, необязательно в комбинации с амифостином, карбоплатином или оксалиплатином;

- таксановые соединения, например паклитаксел, связанные с белком частицы паклитаксела (Abraxane^TM) или доцетаксел;

- ингибиторы топоизомеразы I, такие как камптотециновые соединения, например, иринотекан, SN-38, топотекан, топотекан hcl;

- ингибиторы топоизомеразы II, такие как противоопухолевые эпидофиллотоксины или подофиллотоксиновые производные, например, этопозид, этопозид фосфат или тенипозид;

- противоопухолевые алкалоиды барвинка, например, винбластин, винкристин или винорелбин;

- противоопухолевые нуклеозидные производные, например, 5-фторурацил, лейковорин, гемцитабин, гемцитабин hcl, капецитабин, кладрибин, флударабин, неларабин;

- алкилирующие средства, такие как азотистый иприт или нитрозомочевина, например, циклофосфамид, хлорамбуцил, кармустин, тиотепа, мефалан (мелфалан), ломустин, алтретамин, бусульфан, дакарбазин, эстрамустин, ифосфамид необязательно в комбинации с месной, пипоброман, прокарбазин, стрептозоцин, телозоломид, урацил;

- противоопухолевые антрациклиновые производные, например, даунорубицин, доксорубицин необязательно в комбинации с дексразоксаном, доксил, идарубицин, митоксантрон, эпирубицин, эпирубицин hcl, валрубицин;

- молекулы, которые целенаправленно воздействуют на IGF-1-рецептор, например, пикроподофилин;

- тетракарциновые производные, например, тетрокарцин A;

- глюкокортикоиды, например, преднизон;

- антитела, например, трастузумаб (антитело HER2), ритуксимаб (антитело CD20), гемтузумаб, гемтузумаб озогамицин, цетуксимаб, пертузумаб, бевацизумаб, алемтузумаб, экулизумаб, ибритумомаб тиуксетан, нофетумомаб, панитумумаб, тозитумомаб, CNTO 328;

- антагонисты эстрогеновых рецепторов, или селективные модуляторы эстрогеновых рецепторов, или ингибиторы синтеза эстрогена, например, тамоксифен, фулвестрант, торемифен, дролоксифен, фаслодекс, ралоксифен или летрозол;

- ингибиторы ароматазы, такие как эксеместан, анастрозол, летразол, тестолактон и ворозол;

- дифференцирующие средства, такие как ретиноиды, витамин D или ретиноевая кислота и средства, блокирующие метаболизм ретиноевой кислоты, (RAMBA), например, аккутан;

- ингибиторы ДНК-метилтрансферазы, например, азацитидин или децитабин;

- антифолаты, например, преметрексед динатрия;

- антибиотики, например, антиномицин D, блеомицин, митомицин С, дактиномицин, карминомицин, дауномицин, левамизол, пликамицин, митрамицин;

- антиметаболиты, например, клофарабин, аминоптерин, цитозин арабинозид или метотрексат, азацитидин, цитарабин, флоксуридин, пентостатин, тиогуанин;

- средства, индуцирующие апоптоз, и антиангиогенные средства, такие как ингибиторы Bcl-2, например, YC 137, BH 312, АВТ 737, госсипол, HA 14-1, TW 37 или декановая кислота;

- тубулин-связывающие средства, например, комбрестатин, колхицины или нокодазол;

- ингибиторы киназы (например, ингибиторы EGFR (рецептор фактора роста эпителия), MTKI (многоцелевые ингибиторы киназы), ингибиторы mTOR, ингибиторы cmet), например, флавоперидол, иматиниба мезилат, эрлотиниб, гефитиниб, дасатиниб, лапатиниб, лапатиниба дитосилат, сорафениб, сунитиниб, сунитиниба малеат, темсиролимус, 6-{дифтор[6-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)[1,2,4]триазоло[4,3-b]пиридазин-3-ил]метил}хинолин или его фармацевтически примелемая соль, 6-[дифтор(6-пиридин-4-ил[1,2,4]триазоло[4,3-b]пиридазин-3-ил)метил]хинолин или его фармацевтически приемлемая соль;

- ингибиторы фарнезилтрансферазы, например, типифарниб;

- ингибиторы гистондеацетилазы (HDAC), например бутират натрия, субероиланилидгидроксамовая кислота (SAHA), депсипептид (FR 901228), NVP-LAQ824, R306465, JNJ-26481585, трихостатин А, вориностат;

- ингибиторы убиквитин-протеасомного пути, например, PS-341, MLN.41 или бортезомиб;

- йонделис;

- ингибиторы теломеразы, например, теломестатин;

- ингибиторы матриксной металлопротеиназы, например батимастат, маримастат, приностат или метастат;

- рекомбинантные интерлейкины, например, альдеслейкин, денилейкин дифтитокс, интерферон-альфа 2а, интерферон-альфа 2b, пегинтерферон-альфа 2b;

- ингибиторы MAPK;

- ретиноиды, например, алитретиноин, бексаротен, третиноин;

- триоксид мышьяка;

- аспарагиназу;

- стероиды, например, дромостанолон пропионат, мегестрол ацетат, нандролон (деканоат, фенпропионат), дексаметазон;

- агонисты или антагонисты гонадотропин-высвобождающего гормона, например, абареликс, гозерелина ацетат, гистрелина ацетат, лейпролида ацетат;

- талидомид, леналидомид;

- меркаптопурин, митотан, памидронат, пегадемаза, пегаспаргаза, расбуриказа;

- миметики BH3, например, ABT-737;

- ингибиторы MEK, например, PD98059, AZD6244, CI-1040;

- аналоги колониестимулирующего фактора, например филграстим, пегфилграстим, сарграмостим; эритропоэтин или его аналоги (например, дарбепоэтин-альфа); интерлейкин-11; опрелвекин; золедронат, золедроновая кислота; фентанил; бисфосфонат; палифермин;

- стероидный ингибитор цитохром P450 17-альфа-гидроксилазы-17,20-лиазы (CYP17), например, абиратерон, абиратерона ацетат.

Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение относится к комбинации соединения формулы (I), его фармацевтически приемлемой соли или его сольвата, или каких-либо его подгрупп и примеров, и 6-{дифтор[6-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)[1,2,4]триазоло[4,3-b]пиридазин-3-ил]метил}хинолина или его фармацевтически приемлемой соли.

Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение относится к комбинации соединения формулы (I), его фармацевтически приемлемой соли или его сольвата, или каких-либо его подгрупп и примеров, и 6-[дифтор(6-пиридин-4-ил[1,2,4]триазоло[4,3-b]пиридазин-3-ил)метил]хинолина или его фармацевтически приемлемой соли.

Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I), его фармацевтически приемлемую соль или его сольват, или какие-либо его подгруппы и примеры и 6-{дифтор[6-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)[1,2,4]триазоло[4,3-b]пиридазин-3-ил]метил}хинолин или его фармацевтически приемлемую соль.

Согласно одному варианту осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединения формулы (I), его фармацевтически приемлемую соль или его сольват, или какие-либо его подгруппы и примеры, и 6-[дифтор(6-пиридин-4-ил[1,2,4]триазоло[4,3-b]пиридазин-3-ил)метил]хинолин или его фармацевтически приемлемую соль.

Соединения согласно настоящему изобретению также имеют терапевтические применения в повышении чувствительности опухолевых клеток к лучевой терапии и химиотерапии.

Таким образом, соединения согласно настоящему изобретению можно применять в качестве "радиосенсибилизатора" и/или "хемосенсибилизатора", или их можно давать в комбинации с другим "радиосенсибилизатором" и/или "хемосенсибилизатором".

Термин "радиосенсибилизатор", применяемый в данном документе, определен как молекула, предпочтительно молекула с низким молекулярным весом, вводимая животным в терапевтически эффективных количествах для повышения чувствительности клеток к ионизирующему излучению и/или для повышения эффективности лечения заболеваний, которые поддаются лечению ионизирующим излучением.

Термин "хемосенсибилизатор", используемый в данном документе, определен как молекула, предпочтительно молекула с низким молекулярным весом, вводимая животным в терапевтически эффективных количествах для повышения чувствительности клеток к химиотерапии и/или повышения эффективности лечения заболеваний, которые поддаются лечению химиотерапевтическими средствами.

В литературе были предложены несколько механизмов способа действия радиосенсибилизаторов, включающих: радиосенсибилизаторы, приводящие к гипоксии клеток (например, 2-нитроимидазольные соединения и соединения, включающие бензотриазина диоксид), имитирующие кислород или, альтернативно, ведущие себя как биовосстановительные средства при гипоксии; радиосенсибилизаторы, не приводящие к гипоксии клеток (например, галогенированные пиримидины), могут быть аналогами оснований ДНК и преимущественно включатся в ДНК раковых клеток и, таким образом, они способствуют индуцированному облучением разрушению молекул ДНК и/или предупреждают нормальные механизмы репарации ДНК; и различные другие предполагаемые механизмы действия были выдвинуты в качестве гипотезы для радиосенсибилизаторов в лечении заболевания.

Во многих протоколах лечения рака в настоящее время применяют радиосенсибилизаторы совместно с облучением рентгеновскими лучами. Примеры активируемых рентгеновскими лучами радиосенсибилизаторов включают без ограничения следующие: метронидазол, мизонидазол, десметилмизонидазол, пимонидазол, этанидазол, ниморазол, митомицин C, RSU 1069, SR 4233, EO9,

RB 6145, никотинамид, 5-бромдезоксиуридин (BUdR), 5-йоддезоксиуридин (IUdR), бромдезоксицитидин, фтордезоксиуридин (FudR), гидроксимочевину, цисплатин и их терапевтически эффективные аналоги и производные.

При фотодинамической терапии (PDT) форм рака применяют видимый свет в качестве радиационного активатора сенсибилизатора. Примеры фотодинамических радиосенсибилизаторов включают без ограничения следующие: производные гематопорфирина, фотофрин, производные бензопорфирина, этиопорфирин олова, феоборбид-a, бактериохлорофилл-a, нафталоцианины, фталоцианины, фталоцианин цинка и их терапевтически эффективные аналоги и производные.

Радиосенсибилизаторы можно вводить совместно с терапевтически эффективным количеством одного или нескольких других соединений, в том числе без ограничения: соединений, которые способствуют включению радиосенсибилизаторов в целевые клетки; соединений, которые контролируют поток терапевтических средств, питательных веществ и/или кислорода к целевым клеткам; химиотерапевтических средств, которые действуют на опухоль при помощи дополнительного облучения или без него; или других терапевтически эффективных соединений для лечения рака или других заболеваний.

Хемосенсибилизаторы можно вводить совместно с терапевтически эффективным количеством одного или нескольких других соединений, в том числе без ограничения: соединений, которые способствуют включению хемосенсибилизаторов в целевые клетки; соединений, которые контролируют поток терапевтических средств, питательных веществ и/или кислорода к целевым клеткам; химиотерапевтических средств, которые действуют на опухоль, или других терапевтически эффективных соединений для лечения рака или другого заболевания. Обнаружено, что антагонисты кальция, например верапамил, пригодны в комбинации с антинеопластическими средствами для придания чувствительности к химиотерапии опухолевым клеткам, устойчивым к общепринятым химиотерапевтическим средствам и для усиления эффективности таких соединений при чувствительных к лекарственным средствам злокачественных новообразованиях.

С учетом их полезных фармакологических свойств компоненты комбинации в соответствии с настоящим изобретением, т. е. одно или несколько других медицинских средств и соединение в соответствии с настоящим изобретением, могут быть составлены в различные фармацевтические формы для целей введения. Компоненты могут быть составлены отдельно в индивидуальные фармацевтические композиции или в единую фармацевтическую композицию, содержащую все компоненты.

Поэтому настоящее изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей одно или несколько других медицинских средств и соединение в соответствии с настоящим изобретением вместе с фармацевтическим носителем.

Настоящее изобретение, кроме того, относится к применению комбинации в соответствии с настоящим изобретением в изготовлении фармацевтической композиции для ингибирования роста опухолевых клеток.

Настоящее изобретение также относится к продукту, содержащему в качестве первого активного ингредиента соединение согласно настоящему изобретению и в качестве дополнительного активного ингредиента одно или несколько противораковых средств, в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения в лечении пациентов, страдающих раком.

Одно или несколько других медицинских средств и соединение в соответствии с настоящим изобретением можно вводить одновременно (например, в отдельных или единых композициях) или последовательно в другом порядке. В последнем случае два или более соединений будут введены на протяжении периода и в количестве, и способом, которые являются достаточными для гарантирования того, что достигнут преимущественный или синергический эффект. Следует иметь в виду, что предпочтительный способ и порядок введения и соответствующие величины доз и режимы для каждого компонента комбинации будут зависеть от конкретного другого медицинского средства и соединения по настоящему изобретению, подлежащих введению, их пути введения, конкретной опухоли, подвергаемой лечению, и конкретного хозяина, подвергаемого лечению. Оптимальный способ и порядок введения, а также величины доз и режим могут быть легко определены специалистами в данной области техники с применением традиционных способов и с учетом информации, изложенной в данном документе.

Весовое соотношение соединения в соответствии с настоящим изобретением и одного противоракового средства или нескольких других противораковых средств, вводимых в виде комбинации, может быть определено специалистом в данной области. Указанное соотношение и точная дозировка и частота введения зависят от конкретного применяемого соединения согласно настоящему изобретению и другого противоракового(противораковых) средства(средств), конкретного состояния, лечение которого осуществляют, тяжести состояния, лечение которого осуществляют, возраста, веса, пола, рациона, времени введения и общего физического состояния конкретного пациента, способа введения, а также других лекарств, которые индивидуум может принимать, как хорошо известно специалистам в данной области. Более того, очевидно, что эффективное суточное количество можно уменьшать или увеличивать в зависимости от реакции субъекта, подвергаемого лечению, и/или в зависимости от оценки лечащего врача, назначающего соединения по настоящему изобретению. Конкретное весовое соотношение для данного соединения формулы (I) и другого противоракового средства может находиться в диапазоне от 1/10 до 10/1, более конкретно, от 1/5 до 5/1, еще более конкретно, от 1/3 до 3/1.

Координационное соединение платины преимущественно вводят в дозе от 1 до 500 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, например от 50 до 400 мг/м², в частности для цисплатина - в дозе приблизительно 75 мг/м² и для карбоплатина - в дозе приблизительно 300 мг/м² за курс лечения.

Таксановое соединение преимущественно вводят в дозе от 50 до 400 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, например, от 75 до 250 мг/м², в частности, для паклитаксела - в дозе приблизительно от 175 до 250 мг/м² и для доцетаксела - в дозе приблизительно от 75 до 150 мг/м² за курс лечения.

Камптотециновое соединение преимущественно вводят в дозе от 0,1 до

400 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, например, от 1 до 300 мг/м², в частности для иринотекана - в дозе приблизительно от 100 до 350 мг/м² и для топотекана - в дозе приблизительно от 1 до 2 мг/м² за курс лечения.

Противоопухолевое производное подофиллотоксина преимущественно вводят в дозе от 30 до 300 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, например от 50 до 250 мг/м², в частности для этопозида - в дозе приблизительно от 35 до 100 мг/м² и для тенипозида - в дозе приблизительно от 50 до 250 мг/м² за курс лечения.

Противоопухолевый алкалоид барвинка преимущественно вводят в дозе от 2 до

30 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, в частности для винбластина - в дозе приблизительно от 3 до 12 мг/м², для винкристина - в дозе приблизительно от 1 до 2 мг/м² и для винорелбина - в дозе приблизительно от 10 до 30 мг/м² за курс лечения.

Противоопухолевое нуклеозидное производное преимущественно вводят в дозе от 200 до 2500 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, например, от 700 до

1500 мг/м², в частности для 5-FU - в дозе от 200 до 500 мг/м², для гемцитабина - в дозе приблизительно от 800 до 1200 мг/м² и для капецитабина - в дозе приблизительно от 1000 до

2500 мг/м² за курс лечения.

Алкилирующие средства, такие как азотистый иприт или нитрозомочевина, преимущественно вводят в дозе от 100 до 500 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, например от 120 до 200 мг/м², в частности, для циклофосфамида - в дозе приблизительно от 100 до 500 мг/м², для хлорамбуцила - в дозе приблизительно от 0,1 до 0,2 мг/кг, для кармустина - в дозе приблизительно от 150 до 200 мг/м² и для ломустина - в дозе приблизительно от 100 до 150 мг/м² за курс лечения.

Противоопухолевое производное антрациклина преимущественно вводят в дозе от 10 до 75 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, например, от 15 до

60 мг/м², в частности, для доксорубицина - в дозе приблизительно от 40 до 75 мг/м², для даунорубицина - в дозе приблизительно от 25 до 45 мг/м² и для идарубицина - в дозе приблизительно от 10 до 15 мг/м² за курс лечения.

Антиэстрогенное средство преимущественно вводят в дозе приблизительно от 1 до 100 мг ежесуточно, в зависимости от конкретного средства и состояния, подвергаемого лечению. Тамоксифен преимущественно вводят перорально в дозе от 5 до 50 мг, предпочтительно от 10 до 20 мг два раза в сутки, продолжая терапию в течение достаточного времени для достижения и поддержания терапевтического эффекта. Торемифен преимущественно вводят перорально в дозе приблизительно 60 мг один раз в сутки, продолжая терапию в течение достаточного времени для достижения и поддержания терапевтического эффекта. Анастрозол преимущественно вводят перорально в дозе приблизительно 1 мг один раз в сутки. Дролоксифен преимущественно вводят перорально в дозе приблизительно от 20 до 100 мг один раз в сутки. Ралоксифен преимущественно вводят перорально в дозе приблизительно 60 мг один раз в сутки. Эксеместан преимущественно вводят перорально в дозе приблизительно 25 мг один раз в сутки.

Антитела преимущественно вводят в дозе приблизительно от 1 до 5 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела или, как известно из уровня техники, в другой дозе. Трастузумаб преимущественно вводят в дозе от 1 до 5 мг на квадратный метр (мг/м²) площади поверхности тела, в частности, от 2 до 4 мг/м², за курс лечения.

Данные дозы можно вводить, например, один раз, два раза или больше за курс лечения, который можно повторять, например, каждые 7, 14, 21 или 28 дней.

Соединения формулы (I), его фармацевтически приемлемые аддитивные соли, в частности, фармацевтически приемлемые кислотно-аддитивные соли, и стереоизомерные формы могут обладать ценными диагностическими свойствами, в том плане, что они могут быть использованы для выявления или идентификации образования комплекса между меченым соединением и другими молекулами, пептидами, белками, ферментами или рецепторами.

В способах выявления или идентификации можно применять соединения, которые являются мечеными с помощью средств для мечения, такими как радиоизотопы, ферменты, флуоресцентные вещества, люминесцентные вещества и т. д. Примеры радиоизотопов включают в себя ¹²⁵I, ¹³¹I, ³H и ¹⁴C. Ферменты обычно делают детектируемыми путем конъюгации с соответствующим субстратом, который, в свою очередь, катализирует детектируемую реакцию. Примеры таковых включают, например, бета-галактозидазу, бета-глюкозидазу, щелочную фосфатазу, пероксидазу и малатдегидрогеназу, предпочтительно пероксидазу хрена. Люминесцентные вещества включают, например, люминол, производные люминола, люциферин, экворин и люциферазу.

Биологические образцы могут быть определены как ткань организма или жидкости организма. Примерами жидкостей организма являются спинномозговая жидкость, кровь, плазма, сыворотка крови, моча, мокрота, слюна и т. п.

Общие пути синтеза

Следующие примеры иллюстрируют настоящее изобретение, но являются исключительно примерами и не ограничивают никоим образом объем формулы изобретения.

Промежуточные соединения формулы (II) могут быть получены, как описано в WO2011/135376, WO2013/061074 и WO2014/174307, которые включены в настоящий документ посредством ссылки.

Экспериментальная часть

Далее по тексту, термин 'DCM' или 'CH₂Cl₂' означает дихлорметан, 'Me' означает метил, 'Et' означает этил, 'MeOH' или 'CH₃OH' означает метанол, 'DMF' означает диметилформамид, 'Et₂O' означает диэтиловый эфир, 'EtOAc' означает этилацетат, 'ACN' или 'CH₃CN' означает ацетонитрил, 'CO₂' означает диоксид углерода, 'CH₃COONH₄' означает аммония ацетат, 'H₂O' означает воду, 'NaCl' означает натрия хлорид, 'THF' означает тетрагидрофуран, 'MgSO₄' означает магния сульфат, 'NH₄OH' означает аммония гидроксид, 'K₂CO₃' означает дикалия карбонат, 'BBr₃' означает трехбромистый бор, 'PPh₃' означает трифенилфосфин, 'DMSO' означает диметилсульфоксид, 'EDTA' означает этилендиаминтетрауксусную кислоту, 'SFC' означает хроматографию со сверхкритической подвижной фазой, 'MP' означает точку плавления, 'rt' означает комнатную температуру.

A. Получение промежуточных соединений

Промежуточное соединение 1 или 7-бром-2-(1-метил-1H-пиразол-4-ил)-хиноксалин описывается как промежуточное соединение 2 в WO2011/135376 и может быть получено согласно протоколам, описанным в настоящем документе для промежуточного соединения 2.

Пример A1

a) Получение промежуточного соединения 2

Смесь промежуточного соединения 1 (5 г; 17 ммоль), 2-фтор-3,5-диметоксианилина (3,6 г; 21 ммоль), натрия трет-бутоксида (5 г; 52 ммоль) и рац-бис(дифенилфосфино)-1,1'-бинафтила (0,54 г; 0,87 ммоль) в диоксане (100 мл) дегазировали при комнатной температуре в потоке азота. Через 10 минут порциями добавляли палладия (II) ацетат (388 мг; 1,7 ммоль) при комнатной температуре в потоке азота. Реакционную смесь нагревали при 95°C в течение 5 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и выливали в ледяную воду и DCM. Смесь фильтровали через подушку из целита^®. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток кристаллизовали из диэтилового эфира, осадок отфильтровывали, сушили в вакууме с получением 4 г (61%) промежуточного соединения 2.

b) Получение промежуточного соединения 3

Добавляли натрия гидрид (0,21 г; 5,35 ммоль) в раствор промежуточного соединения 2 (0,7 г; 1,85 ммоль) в DMF (25 мл) при 5°C в потоке азота. Смесь перемешивали при 5°C в течение 1 часа. Каплями добавляли (2-бромэтокси)-трет-бутилдиметилсилан (0,51 мл; 2,40 ммоль) при 5°C в потоке азота, и реакционную смесь взбалтывали при комнатной температуре в течение 24 часов. Смесь выливали в охлажденную воду, и продукт экстрагировали с помощью EtOAc. Органический слой промывали с помощью H₂O, сушили над MgSO₄, фильтровали и выпаривали с получением 1,2 г (колич.) промежуточного соединения 3. Неочищенный продукт использовали без какой-либо очистки в следующей стадии.

c) Получение промежуточного соединения 4

Тетрабутиламмония фторид (1 M в THF) (2 мл; 2 ммоль) добавляли в раствор промежуточного соединения 3 (1 г; 1,85 ммоль) в THF (20 мл), и реакционную смесь взбалтывали в течение 3 часов при комнатной температуре. Реакционную смесь разделяли между водой и EtOAc. Органический слой промывали солевым раствором, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток (1,2 г) очищали с помощью хроматографии на силикагеле (SiOH с зернами неправильной формы, 15-40 мкм; 80 г; элюент: 98% DCM, 2% MeOH, 0,1% NH₄OH). Очищенные фракции собирали, и растворитель выпаривали. Остаток (500 мг) кристаллизовали из диэтилового эфира. Осадок фильтровали и сушили с получением 410 мг (52%) промежуточного соединения 4. MP: 172°C (K).

d) Получение промежуточного соединения 5

Метансульфонил хлорид (0,3 мл; 3,88 ммоль) каплями добавляли при 5°C в раствор промежуточного соединения 4 (547 мг; 1,29 ммоль) и триэтиламина (0,9 мл; 6,46 ммоль) в DCM (15 мл). Реакционную смесь взбалтывали при данной температуре в течение 1 часа, разбавляли с помощью DCM и выливали в 10% водный раствор K₂CO₃. Органический слой декантировали, сушили над MgSO₄, фильтровали и выпаривали с получением 850 мг (>100%) промежуточного соединения 5. Неочищенный продукт использовали без очистки в следующей стадии.

e) Получение промежуточного соединения 6

Смесь промежуточного соединения 5 (0,648 г; 1,29 ммоль) и изопропиламина (2,4 мл; 28 ммоль) в CH₃CN (15 мл) нагревали при 100°C в течение 24 часов в закупоренной пробирке. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли с помощью DCM и выливали в воду. Органический слой декантировали, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (SiOH с зернами неправильной формы, 24 г; градиент от 3% MeOH, 97% DCM до 10% MeOH, 90% DCM). Очищенные фракции собирали и выпаривали с получением 452 мг (75%) промежуточного соединения 6.

Пример A2

Промежуточное соединение 7 или 7-бром-2-[1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-1H-пиразол-4-ил]-хиноксалин описывается в WO2011/135376 и может быть получено согласно протоколу, описанному в настоящем документе для получения промежуточного соединения 2.

Получение промежуточного соединения 7

7-Бром-2-хлорхиноксалин (87 г, 312,8 ммоль), 1-(тетрагидро-2H-пиран-2-ил)-4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)-1H-пиразол (76,6 г, 312,8 ммоль), 2 M водный натрия карбонат (156,4 мл, 318,8 ммоль) в диметиловом эфире этиленгликоля (1,5 л) дегазировали с N₂ в течение 10 минут. Затем добавляли тетракис(трисфенилфосфин)палладий(0) (8,6 г, 7,6 ммоль), и реакционную смесь нагревали при температуре образования конденсата в течение ночи. Смесь выливали в H₂O и EtOAc. Осадок фильтровали и высушивали с получением 68 г (60%) промежуточного соединения 7.

a) Получение промежуточного соединения 8:

Смесь промежуточного соединения 7 (4 г; 11 ммоль), 2-фтор-3,5-диметоксианилина (2,5 г; 14,4 ммоль), натрия трет-бутоксида (3,21 г; 33,4 ммоль) и рац-бис(дифенилфосфино)-1,1'-бинафтила (0,347 г; 0,557 ммоль) в диметиловом эфире этиленгликоля (200 мл) дегазировали при комнатной температуре в потоке азота. Через 10 минут порциями добавляли палладия(II) ацетат (125 мг; 0,56 ммоль) при комнатной температуре в потоке азота. Реакционную смесь нагревали при 100°C в течение 3 часов. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и выливали в ледяную воду и EtOAc. Смесь фильтровали через подушку из целита^®. Органический слой отделяли, промывали насыщенным раствором NaCl, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали досуха. Остаток (5,8 г) очищали посредством хроматографии на силикагеле (кремний с зернами неправильной формы без покрытия, 150 г, подвижная фаза: 99% DCM, 1% MeOH). Фракции, содержащие продукт, смешивали и концентрировали с получением 2,8 г (56%) промежуточного соединения 8.

b) Получение промежуточного соединения 9:

Натрия гидрид (0,479 г; 11,97 ммоль) порциями добавляли в раствор промежуточного соединения 8 (2,69 г; 5,98 ммоль) в DMF (30 мл) при 5°C в потоке азота. Смесь перемешивали при 5°C в течение 30 минут. Каплями добавляли (2-бромоэтокси)-трет-бутилдиметилсилан (3,21 мл; 14,96 ммоль) при 5°C в потоке азота. Реакционную смесь взбалтывали в течение 1 часа при 5°C, затем обеспечивали достижение комнатной температуры и взбалтывали при данной температуре в течение 4 часов. Реакционную смесь выливали в ледяную воду и добавляли EtOAc. Органический слой декантировали, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (SiOH с зернами неправильной формы, 40 г; подвижная фаза: градиент от 0% MeOH, 100% DCM до 2% MeOH, 98% DCM). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния с получением 3,4 г (93%) промежуточного соединения 9.

c) Получение промежуточного соединения 10:

При от 5 до 10°C тетрабутиламмония фторид (1 M в THF) (6,71 мл; 6,71 ммоль) добавляли в раствор промежуточного соединения 9 (3,4 г; 5,59 ммоль) в THF (84 мл), и реакционную смесь взбалтывали в течение 3 часов, обеспечивая достижение комнатной температуры. Смесь выливали в ледяную воду и добавляли EtOAc. Смесь ощелачивали 10% водным раствором калия карбоната. Органический слой отделяли, промывали солевым раствором, сушили над MgSO₄, фильтровали, и растворитель выпаривали с получением 3,77 г (коричневого масла) промежуточного соединения 10, которое непосредственно использовали на следующей стадии реакции без какой-либо дополнительной очистки.

d) Получение промежуточного соединения 11:

Метансульфонил хлорид (1,77 мл; 22,92 ммоль) каплями добавляли при 5°C в раствор промежуточного соединения 10 (3,77 г; 7,64 ммоль) и триэтиламина (5,32 мл; 38,19 ммоль) в DCM (75 мл). Реакционную смесь взбалтывали при 5°C в течение 1 часа, а затем 1 час при комнатной температуре. Реакционную смесь выливали в ледяную воду и добавляли DCM. Органический слой отделяли, сушили над MgSO₄, фильтровали, и растворитель выпаривали досуха (30°C) с получением 5,5 г (коричневого масла) промежуточного соединения 11, которое непосредственно использовали на следующей стадии реакции без какой-либо дополнительной очистки.

e) Получение промежуточного соединения 12:

Реакцию выполняли 10 раз, каждый раз с 550 мг промежуточного соединения 11, а затем 10 реакционных смесей объединяли для очистки.

В закупоренной пробирке смесь промежуточного соединения 11 (550 мг; 0,96 ммоль), изопропиламина (6,6 мл; 76,97 ммоль) в ацетонитриле (8 мл) нагревали при 140°C с использованием однорежимного микроволнового устройства с выходной мощностью, варьирующей от 0 до 400 Вт, в течение 1 часа фиксированного времени удерживания. 10 реакционных смесей объединяли, и полученную в результате смесь выливали в воду и EtOAc. Органический слой промывали водой, солевым раствором, сушили над MgSO₄, фильтровали и выпаривали. Остаток (4,34 г) очищали с помощью хроматографии на силикагеле (SiO₂, 80 г, подвижная фаза: 95% DCM, 5% MeOH, 0,5% NH₄OH). Очищенные фракции собирали, и растворитель выпаривали с получением 2,71 г (53%, желтая пена) промежуточного соединения 12.

f) Получение промежуточного соединения 13:

Раствор промежуточного соединения 12 (2,71 г; 5,07 ммоль), раствор формальдегида (1,9 мл; 25,34 ммоль, 37% в воде) в диоксане (60 мл) нагревали при 60°C в течение 3 дней. Добавляли воду и EtOAc. Смесь экстрагировали несколько раз с помощью EtOAc. Органические слои объединяли, затем промывали солевым раствором, сушили над MgSO₄, фильтровали, и растворитель выпаривали с получением 2,84 г желтой пены. Данный остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (с зернами неправильной формы, 15-40 мкм, 80 г, подвижная фаза: 0,1% NH₄OH, 99% DCM, 1% MeOH). Очищенные фракции собирали, и растворитель выпаривали с получением 1,75 г (63%, желтая пена) промежуточного соединения 13.

B. Получение соединений формулы (I)

Пример B1:

Получение соединения 1

Раствор промежуточного соединения 6 (382 мг; 0,82 ммоль) и формальдегида (37% раствора в воде; 308 мкл; 4,11 ммоль) в диоксане (10 мл) нагревали при 60°C в течение 3 дней. Добавляли H₂O и EtOAc. Органический слой декантировали, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (диоксид кремния с зернами сферической формы без покрытия, 5 мкм, 150×30,0 мм; градиент: от 71% гептана, 1% MeOH (+10% NH₄OH), 28% EtOAc до 0% гептана, 20% MeOH (+10% NH₄OH), 80% EtOAc). Очищенные фракции собирали и выпаривали до сухого состояния. Полученный в результате остаток (253 мг) кристаллизовали из ACN. Осадок фильтровали и сушили с получением 167 мг (42%) соединения 1. MP: 166°C (K).

Пример B2

Получение соединения 2

Раствор (соединения 2 из WO2013/061074) (0,123 мг; 0,27 ммоль), формальдегида (37% раствора в воде; 0,08 мл; 1 ммоль) и диоксана (4 мл) взбалтывали при комнатной температуре в течение 144 часов. Затем добавляли H₂O и EtOAc. Органический слой отделяли, высушивали над MgSO₄, фильтровали и выпаривали до сухого состояния.

Полученный в результате остаток (127 мг) очищали посредством хроматографии на силикагеле (15-40 мкм, 40 г, CH₂Cl₂/CH₃OH/NH₄OH: 96/4/0,1). Очищенные фракции собирали и выпаривали досуха с получением промежуточного соединения (41 мг), которое сушили вымораживанием с ацетонитрилом/водой (20/80) с получением 41 мг (33%, желтый порошок) соединения 2. M.P.: 110°C (гуммированное).

Другие соединения получали согласно вышеописанным протоколам из примера B1 или B2.

Например,

Соединение 4	Исходное промежуточное соединение (соединение 441 из WO2011/135376)
Соединение 5	Исходное промежуточное соединение (соединение 729 из WO2011/135376).
Соединение 6	Исходное промежуточное соединение (соединение 687 из WO2011/135376)
Соединение 12	Исходное промежуточное соединение (соединение 42 из WO2013/061074)

Другие соединения получали согласно вышеописанным протоколам из примера B1 или B2.

Соединение 7	Исходное промежуточное соединение, которое получали согласно протоколу, описанному для соединений 441 или 687 из WO2011/135376
Соединение 8	Исходное промежуточное соединение, которое получали согласно протоколу, описанному для соединений 441 или 687 из WO2011/135376
Соединение 13	Исходное промежуточное соединение , которое получали согласно протоколу, описанному для соединения 42 из WO2013/061074

Пример B3:

Получение соединения 3

2,07 HCl 1,41 H₂O

При 5°C раствор хлористоводородной кислоты в изопропиловом спирте (2 мл; 10,24 ммоль) добавляли в желтый раствор промежуточного соединения 13 (800 мг; 1,46 ммоль) в метаноле (2 мл). Раствор становился красным. Затем реакционную смесь взбалтывали при 5°C в течение 2 часов. Добавляли диэтиловый эфир, и смесь взбалтывали в течение 1 часа. Осадок фильтровали и сушили в вакууме с получением 705 мг (96%, красное твердое вещество) соединения 3. M.P.: 210°C (по Кофлеру).

Другие соединения получали согласно вышеописанному протоколу из примера B3.

Например,

Соединение 16

Исходное промежуточное соединение , которое получали согласно протоколу для промежуточного соединения 13

Пример B4:

Получение соединения 11 и

соединения 9

Соединение 11 получали путем добавления каплями 1 M раствора трехбромистого бора в DCM (4,2 мл; 4,2 ммоль) в раствор соединения 1 (400 мг; 0,84 ммоль) в DCM (20 мл) при -10°C/0°C. Обеспечивали медленное достижение раствором комнатной температуры и взбалтывали в течение 15 часов. Реакционную смесь разбавляли DCM, выливали в ледяную воду, затем ощелачивали с помощью твердого K₂CO₃, и органический слой декантировали, промывали солевым раствором, сушили над MgSO₄, фильтровали и выпаривали досуха. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле (SiOH с зернами неправильной формы, 24 г; подвижная фаза: 0,1% NH₄OH, 8% MeOH, 92% DCM). Фракции, содержащие продукт, собирали и выпаривали до сухого состояния. Остаток очищали с помощью хроматографии с обращенной фазой (YMC-actus Triart-C18, 10 мкм, 30*150 мм; подвижная фаза: градиент от 75% NH₄HCO₃ (0,2% водн.), 25% ACN до 35% NH₄HCO₃ (0,2% водн.), 65% ACN). Очищенные фракции собирали, выпаривали досуха и кристаллизовали из Et₂O с получением соединения 11 (15 мг; 4%).

Соединение 9 получали путем добавления каплями 1 M раствора трехбромистого бора в DCM (4,5 мл; 4,5 ммоль) в раствор соединения 1 (430 мг; 0,90 ммоль) в DCM (30 мл) при -10°C/0°C. Обеспечивали медленное достижение раствором комнатной температуры и взбалтывали в течение 15 часов. Реакционную смесь разбавляли DCM, выливали в ледяную воду, затем ощелачивали с помощью твердого K₂CO₃. Водный слой концентрировали до 15 мл, взбалтывали в течение 3 дней при комнатной температуре, и осадок фильтровали. Остаток помещали в ACN, промывали с помощью MeOH, затем Et₂O, и сушили в вакууме с получением соединения 9 (35 мг; 9%).

Соединение не идентифицировалось по описанному выше протоколу.

Однако данное соединение получали с помощью следующего процесса, подобного описываемому для соединения 1, исходя из 3-бензилокси-2-фтор-5-метоксианилина . Защиту бензила удаляли путем гидрогенизации при 1 бар или под давлением.

Данный 3-бензилокси-2-фтор-5-метоксианилин получали согласно приведенной ниже схеме.

Пример B5:

Соединение 14 и соединение 15 получали согласно способу, показанному на схеме 2 ниже.

Аналитическая часть

LCMS (жидкостная хроматография/масс-спектрометрия) (см. приведенную ниже таблицу)

Измерения в ходе осуществления высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC) проводили с помощью насоса для LC, детектора на диодной матрице (DAD) или УФ-детектора и колонки, как описано в соответствующих способах. При необходимости включали дополнительные детекторы (см. приведенную ниже таблицу способов).

Поток из колонки направляли в масс-спектрометр (МС), который был оснащен источником ионизации при атмосферном давлении. В компетенции специалиста в данной области техники находится установка настраиваемых параметров (например, диапазона сканирования, времени выдержки и т. п.) с целью получения ионов, позволяющих определить номинальный моноизотопный молекулярный вес (MW) соединения. Сбор данных проводили с помощью соответствующего программного обеспечения.

Соединения описывали по их экспериментальному времени удерживания (R_t) и ионам. Если не указано иное, то в таблице данных указанный молекулярный ион представляет собой [M+H]⁺ (протонированную молекулу) и/или [M-H]^- (депротонированную молекулу). В случае, если соединение не было непосредственно способно к ионизации, указывают тип аддукта (т. е. [M+NH₄]⁺, [M+HCOO]^- и т. д.). Для молекул со сложными изотопными распределениями (Br, Cl и т. п.) описанное значение является таким значением, которое получено для наименьшей массы изотопа. Все результаты получали с экспериментальными погрешностями, которые обычно ассоциированы с применяемым способом.

Далее в данном документе "SQD" означает одиночный квадрупольный детектор, "к. т." означает комнатную температуру, "BEH" означает мостиковый гибрид этилсилоксана/диоксида кремния, "HSS" означает диоксид кремния повышенной прочности, "DAD" означает детектор на диодной матрице.

Таблица способов Коды способов LCMS (поток выражен в мл/мин.; температура колонки (T) в °C; время анализа в минутах).

	Прибор	Колонка	Подвижная фаза	Градиент	Поток	Время анализа
Колонка T
Способ 1	Waters: Acquity UPLC® - DAD и Quattro MicroTM	Waters: BEH C18 (1,7 мкм, 2,1×100 мм)	A: 95% CH3COONH4 7 мМ/5% CH3CN, B: CH3CN	84,2% A в течение 0,49 минуты до 10,5% A через 2,18 минуты, удерживание в течение 1,94 минуты, снова до 84,2% A через 0,73 минуты, удерживание в течение 0,73 минуты.	0,343	6,2
40
Способ 2	Waters: Acquity UPLC® H-Class - DAD и QDa	BEH®-C18 (1,7 мкм, 2,1×1000 мм)	A: 95% CH3COONH4 7 мМ/5% CH3CN, B: CH3CN	95% A до 5% A за 1 минуту, удерживание в течение 1,6 минуты, обратно до 95% A за 1,2 минуты, удерживание в течение 0,5 минуты.	0,5	3,3
					40

Значения температуры плавления

Точки плавления получали с помощью столика Кофлера, состоящего из нагреваемой пластины с линейным температурным градиентом, скользящего указателя и температурной шкалы в градусах Цельсия.

ЯМР

ЯМР эксперимент выполняли при окружающей температуре с использованием спектрометра Bruker Avance 500, оснащенного инверсным тройным (¹H, ¹³C, ¹⁵N TXI) датчиком с градиентами z и функционирующего при 500 MГц для протона и 125 MГц для углерода, или спектрометра Bruker Avance DRX 400, использующего внутренний дейтериевый лок, оснащенного инвертным двойным (1H, 13C, SEI) датчиком с градиентами z и функционирующего при 400 MГц для протона и 100 MГц для углерода.

Таблица A1 : № соед. означает номер соединения; время удерживания (R_t) в минутах; MP означает точку плавления (°C).

Специалисту в данной области будет понятно, что соединения, синтезируемые с использованием указанных протоколов, могут существовать в виде сольвата, например, гидрата, и/или могут содержать остаточный растворитель или незначительные примеси.

№ прим.	Соединение	MP (°C)	(Кофлер (K))	Rt	[M+H]+	Способ LCMS
1		166	K	2,71	477	Способ 1
2		110 (гуммир.)	K	2,73	476	Способ 1
4		182	K	2,78	493	Способ 1
5		110 (гуммир.)	K	2,80	527	Способ 1
6		-	-	1,15	495	Способ 2
3		210	K	2,51	463	Способ 1
9		230	K	1,93	449	Способ 1
11		35 (гуммир.)	K	2,28	463	Способ 1
12		128	K	2,77	494	Способ 1
16		138	K	2,56	462	Способ 1

Соединение 1

¹H ЯМР (500 MГц, DMSO-d₆) δ 9,10 (s, 1H), 8,58 (s, 1H), 8,27 (s, 1H), 7,68 (d, J=9,14 Гц, 1H), 7,03 (d, J=9,14 Гц, 1H), 6,51 (dd, J=2,84, 6,62 Гц, 1H), 6,43 (dd, J=2,84, 5,67 Гц, 1H), 4,46 (br s, 2H), 3,97 (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 3,74-3,79 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 2,99 (quin, J=6,54 Гц, 1H), 2,85-2,92 (m, 2H), 1,14 (d, J=6,62 Гц, 6H).

Соединение 2

¹H ЯМР (400 MГц, DMSO-d₆) δ 9,02 (d, J=2,02 Гц, 1H), 8,52 (d, J=1,52 Гц, 1H), 8,44 (s, 1H), 8,16 (s, 1H), 7,67 (d, J=9,09 Гц, 1H), 7,03 (d, J=9,09 Гц, 1H), 6,45 (dd, J=2,78, 6,32 Гц, 1H), 6,35 (dd, J=2,78, 5,81 Гц, 1H), 4,16 (s, 2H), 3,93 (s, 3H), 3,81 (s, 3H), 3,66-3,78 (m, 5H), 3,10 (quin, J=6,44 Гц, 1H), 2,83 (br t, J=4,55 Гц, 2H), 1,12 (d, J=6,57 Гц, 6H).

Фармакологическая часть

Биологические анализы A

FGFR1 (ферментативный анализ)

В конечном реакционном объеме 30 мкл инкубировали FGFR1 (ч.) (25 нг/мл) с 50 мM HEPES, pH 7,5, 6 мM MnCl₂, 1 мM DTT, 0,1 мM Na₃VO₄, 0,01% Triton-X-100, 500 нM Btn-Flt3 и 5 мкM ATФ в присутствии соединения (1% DMSO, конечного). После инкубации в течение 60 минут при комнатной температуре реакцию останавливали с помощью 2,27 нM EU-anti P-Tyr, 7 мM EDTA, 31,25 нM SA-XL-665 и 0,02% BSA, который присутствовал в течение 60 минут при комнатной температуре. Сигнал времяразрешенного флуоресцентного индуктивно-резонансного переноса энергии (TR-FRET) (возб. 340 нм. исп. 620 нм, исп. 655 нм) измеряли после этого, и результаты выражали в RFU (относительных флуоресцентных единицах). В данном анализе определяли ингибирующее действие разных концентраций соединений (варьирующих от 10 мкМ до 0,1 нМ), и данные использовали для вычисления величин IC₅₀ (M) и pIC₅₀ (-logIC₅₀).

FGFR2 (ферментативный анализ)

В конечном реакционном объеме 30 мкл инкубировали FGFR2 (ч.) (150 нг/мл) с 50 мM HEPES, pH 7,5, 6 мM MnCl₂, 1 мM DTT, 0,1 мM Na₃VO₄, 0,01% Triton-X-100, 500 нM Btn-Flt3 и 0,4 мкM ATФ в присутствии соединения (1% DMSO, конечного). После инкубации в течение 60 минут при комнатной температуре реакцию останавливали с помощью 2,27 нM EU-anti P-Tyr, 7 мM EDTA, 31,25 нM SA-XL-665 и 0,02% BSA, который присутствовал в течение 60 минут при комнатной температуре. Сигнал времяразрешенного флуоресцентного индуктивно-резонансного переноса энергии (TR-FRET) (возб. 340 нм. исп. 620 нм, исп. 655 нм) измеряли после этого, и результаты выражали в RFU (относительных флуоресцентных единицах). В данном анализе определяли ингибирующее действие разных концентраций соединений (варьирующих от 10 мкМ до 0,1 нМ), и данные использовали для вычисления величин IC₅₀ (M) и pIC₅₀ (-logIC₅₀).

FGFR3 (ферментативный анализ)

В конечном реакционном объеме 30 мкл инкубировали FGFR3 (ч.) (40 нг/мл) с 50 мM HEPES, pH 7,5, 6 мM MnCl₂, 1 мM DTT, 0,1 мM Na₃VO₄, 0,01% Triton-X-100, 500 нM Btn-Flt3 и 25 мкM ATФ в присутствии соединения (1% DMSO, конечного). После инкубации в течение 60 минут при комнатной температуре реакцию останавливали с помощью 2,27 нM EU-anti P-Tyr, 7 мM EDTA, 31,25 нM SA-XL-665 и 0,02% BSA, который присутствовал в течение 60 минут при комнатной температуре. Сигнал времяразрешенного флуоресцентного индуктивно-резонансного переноса энергии (TR-FRET) (возб. 340 нм. исп. 620 нм, исп. 655 нм) измеряли после этого, и результаты выражали в RFU (относительных флуоресцентных единицах). В данном анализе определяли ингибирующее действие разных концентраций соединений (варьирующих от 10 мкМ до 0,1 нМ), и данные использовали для вычисления величин IC₅₀ (M) и pIC₅₀ (-logIC₅₀).

FGFR4 (ферментативный анализ)

В конечном реакционном объеме 30 мкл инкубировали FGFR4 (ч.) (60 нг/мл) с 50 мM HEPES, pH 7,5, 6 мM MnCl₂, 1 мM DTT, 0,1 мM Na₃VO₄, 0,01% Triton-X-100, 500 нM Btn-Flt3 и 5 мкM ATФ в присутствии соединения (1% DMSO, конечного). После инкубации в течение 60 минут при комнатной температуре реакцию останавливали с помощью 2,27 нM EU-anti P-Tyr, 7 мM EDTA, 31,25 нM SA-XL-665 и 0,02% BSA, который присутствовал в течение 60 минут при комнатной температуре. Сигнал времяразрешенного флуоресцентного индуктивно-резонансного переноса энергии (TR-FRET) (возб. 340 нм. исп. 620 нм, исп. 655 нм) измеряли после этого, и результаты выражали в RFU (относительных флуоресцентных единицах). В данном анализе определяли ингибирующее действие разных концентраций соединений (варьирующих от 10 мкМ до 0,1 нМ), и данные использовали для вычисления величин IC₅₀ (M) и pIC₅₀ (-logIC₅₀).

KDR (VEGFR2) (ферментативный анализ)

В конечном реакционном объеме 30 мкл инкубировали KDR (ч.) (150 нг/мл) с 50 мM HEPES, pH 7,5, 6 мM MnCl₂, 1 мM DTT, 0,1 мM Na₃VO₄, 0,01% Triton-X-100, 500 нM Btn-Flt3 и 3 мкM ATФ в присутствии соединения (1% DMSO, конечного). После инкубации в течение 120 минут при комнатной температуре реакцию останавливали с помощью 2,27 нM EU-anti P-Tyr, 7 мM EDTA, 31,25 нM SA-XL-665 и 0,02% BSA, который присутствовал в течение 60 минут при комнатной температуре. Сигнал времяразрешенного флуоресцентного индуктивно-резонансного переноса энергии (TR-FRET) (возб. 340 нм. исп. 620 нм, исп. 655 нм) измеряли после этого, и результаты выражали в RFU (относительных флуоресцентных единицах). В данном анализе определяли ингибирующее действие разных концентраций соединений (варьирующих от 10 мкМ до 0,1 нМ), и данные использовали для вычисления величин IC₅₀ (M) и pIC₅₀ (-logIC₅₀).

Ba/F3-FGFR1 (минус IL3 или плюс IL3) (анализ клеточной пролиферации)

На 384-луночный планшет распыляли 100 нл соединения, разбавленного DMSO, перед добавлением 50 мкл среды для культивирования клеток (не содержащая феноловый красный RPMI-1640, 10% FBS, 2 мM L-глутамина и 50 мкг/мл гентамицина), содержащей 20000 клеток на лунку трансфицированных Ba/F3-FGFR1 клеток. Клетки помещали в инкубатор при 37°C и 5% CO₂. Через 24 часа в лунки добавляли 10 мкл раствора Alamar Blue (0,5 мМ K₃Fe(CN)₆, 0,5 мМ K₄Fe(CN)₆, 0,15 мМ резазурина и 100 мМ фосфатного буфера), инкубировали в течение 4 часов при 37°C и 5% CO₂ перед измерением RFU (относительных единиц флуоресценции) (возб. 540 нм, эм. 590 нм) на флуоресцентном устройстве для считывания планшетов.

В данном анализе определяли ингибирующее действие разных концентраций соединений (варьирующих от 10 мкМ до 0,1 нМ), и данные использовали для вычисления величин IC₅₀ (M) и pIC₅₀ (-logIC₅₀).

В качестве обратного скрининга выполняли такой же эксперимент в присутствии 10 нг/мл мышиного IL3.

Ba/F3-FGFR3 (минус IL3 или плюс IL3) (анализ клеточной пролиферации)

На 384-луночный планшет распыляли 100 нл соединения, разбавленного DMSO, перед добавлением 50 мкл среды для культивирования клеток (не содержащая феноловый красный RPMI-1640, 10% FBS, 2 мM L-глутамина и 50 мкг/мл гентамицина), содержащей 20000 клеток на лунку трансфицированных Ba/F3-FGFR3 клеток. Клетки помещали в инкубатор при 37°C и 5% CO₂. Через 24 часа в лунки добавляли 10 мкл раствора Alamar Blue (0,5 мМ K₃Fe(CN)₆, 0,5 мМ K₄Fe(CN)₆, 0,15 мМ резазурина и 100 мМ фосфатного буфера), инкубировали в течение 4 часов при 37°C и 5% CO₂ перед измерением RFU (относительных единиц флуоресценции) (возб. 540 нм, эм. 590 нм) на флуоресцентном устройстве для считывания планшетов.

В данном анализе определяли ингибирующее действие разных концентраций соединений (варьирующих от 10 мкМ до 0,1 нМ), и данные использовали для вычисления величин IC₅₀ (M) и pIC₅₀ (-logIC₅₀).

В качестве обратного скрининга выполняли такой же эксперимент в присутствии 10 нг/мл мышиного IL3.

Ba/F3-KDR (минус IL3 или плюс IL3) (анализ клеточной пролиферации)

На 384-луночный планшет распыляли 100 нл соединения, разбавленного DMSO, перед добавлением 50 мкл среды для культивирования клеток (не содержащая феноловый красный RPMI-1640, 10% FBS, 2 мM L-глутамина и 50 мкг/мл гентамицина), содержащей 20000 клеток на лунку трансфицированных Ba/F3-KDR клеток. Клетки помещали в инкубатор при 37°C и 5% CO₂. Через 24 часа в лунки добавляли 10 мкл раствора Alamar Blue (0,5 мМ K₃Fe(CN)₆, 0,5 мМ K₄Fe(CN)₆, 0,15 мМ резазурина и 100 мМ фосфатного буфера), инкубировали в течение 4 часов при 37°C и 5% CO₂ перед измерением RFU (относительных единиц флуоресценции) (возб. 540 нм, эм. 590 нм) на флуоресцентном устройстве для считывания планшетов.

В данном анализе определяли ингибирующее действие разных концентраций соединений (варьирующих от 10 мкМ до 0,1 нМ), и данные использовали для вычисления величин IC₅₀ (M) и pIC₅₀ (-logIC₅₀).

В качестве обратного скрининга выполняли такой же эксперимент в присутствии 10 нг/мл мышиного IL3.

Ba/F3-FGFR4 (анализ клеточной пролиферации)

На 384-луночный планшет распыляли 100 нл соединения, разбавленного DMSO, перед добавлением 50 мкл среды для культивирования клеток (не содержащая феноловый красный RPMI-1640, 10% FBS, 2 мM L-глутамина и 50 мкг/мл гентамицина), содержащей 20000 клеток на лунку трансфицированных Ba/F3-FGFR4 клеток. Клетки помещали в инкубатор при 37°C и 5% CO2. Через 24 часа в лунки добавляли 10 мкл раствора Alamar Blue (0,5 мМ K₃Fe(CN)₆, 0,5 мМ K₄Fe(CN)₆, 0,15 мМ резазурина и 100 мМ фосфатного буфера), инкубировали в течение 4 часов при 37°C и 5% CO₂ перед измерением RFU (относительных единиц флуоресценции) (возб. 540 нм, эм. 590 нм) на флуоресцентном устройстве для считывания планшетов.

В данном анализе определяли ингибирующее действие разных концентраций соединений (варьирующих от 10 мкМ до 0,1 нМ), и данные использовали для вычисления величин IC₅₀ (M) и pIC₅₀ (-logIC₅₀).

Биологические анализы B

Анализы в отношении связывания ферментов (KINOMEscan^®)

Аффинность связывания раскрываемых в настоящем документе соединений с киназными ферментами определяли с помощью технологии KINOMEscan^®, разработанной DiscoveRx Corporation, Сан-Диего, Калифорния, США (www.kinomescan.com). В таблице A2 приводятся полученные значения pKd, при этом Kd (M) представляет собой значение константы связывания ингибитора, а pKd представляет собой -log Kd.

Таблица A2

Соединение	pKd FGFR1	pKd FGFR2	pKd FGFR3	pKd FGFR4	pKd VEGFR2
1	9,1	8,37	8,62	7,96	7,34
2	8,83	8,22	8,38	8,05	7,03
4	8,68	7,72	8,13	7,56	7,23
5	8,14	7,57	7,85	7,11	6,58
3	8,81	7,93	8,26	7,8	7,15
9	6,01	<5,52	<5,52	<5,52	<5,52
11	8,41	7,35	8,05	7,22	6,91
12	8,51	7,71	7,97	7,42	6,94
16	8,64	7,4	8,1	7,74	6,56

1. Соединение формулы (I):

(I),

где

X₁ представляет собой N, и X₂ представляет собой С (a);

X₁ представляет собой СH, и X₂ представляет собой С (b); или

X₁ представляет собой С(=O), и X₂ представляет собой N (c);

и где пунктирная линия представляет связь в случае (a) и (b), и где пунктирная линия отсутствует в случае (c);

n представляет целое число, равное 1 или 2;

R₁ представляет водород или C_1-6алкил;

R_2a представляет фтор или хлор;

R_2b представляет метокси или гидроксил;

R_2c представляет метокси или гидроксил;

R_2d представляет водород, фтор или хлор;

R₃ представляет C_1-6алкил;

R₄ представляет водород;

его фармацевтически приемлемая соль.

2. Соединение по п. 1, где соединение имеет следующую структуру:

(Ia).

3. Соединение по п. 1, где соединение имеет следующую структуру:

(Ib).

4. Соединение по п. 1, где соединение имеет следующую структуру:

(Ic).

5. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где n представляет целое число, равное 1.

6. Соединение по любому из пп. 1-4, где n представляет целое число, равное 2.

7. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где R₁ представляет C_1-4алкил.

8. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где R_2a представляет фтор.

9. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где R_2b представляет метокси.

10. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где R_2c представляет метокси.

11. Соединение по любому из предыдущих пунктов, где R_2d представляет водород.

12. Соединение по любому из пп. 1-10, где R_2d представляет фтор или хлор.

13. Соединение по п. 1, где соединение выбрано из:

;

;

;

;

;

;

;

;

;

и

или его фармацевтически приемлемая соль.

14. Фармацевтическая композиция для профилактики или лечения болезненного состояния или состояния, опосредованного киназой FGFR, содержащая эффективное количество соединения по любому из пп. 1-13.

15. Соединение по любому из пп. 1-13 для применения в профилактике или лечении болезненного состояния или состояния, опосредованного киназой FGFR.

16. Соединение по любому из пп. 1-13 для применения в профилактике или лечении рака.

17. Применение соединения по любому из пп. 1-13 для изготовления лекарственного средства для профилактики или лечения болезненного состояния или состояния, опосредованного киназой FGFR.

18. Применение соединения по любому из пп. 1-13 для изготовления лекарственного средства для профилактики или лечения рака.

19. Способ профилактики или лечения болезненного состояния или состояния, опосредованного киназой FGFR, при этом способ предусматривает введение субъекту, нуждающемуся в этом, соединения по любому из пп. 1-13.

20. Способ профилактики или лечения рака, при этом способ предусматривает введение субъекту, нуждающемуся в этом, соединения по любому из пп. 1-13.