Способ прогнозирования формирования вторичного иммунодефицита

Авторы патента:

Багмет Александр Данилович (RU)

Зайцева Наталия Сергеевна (RU)

Харитонова Мария Владимировна (RU)

Сизякова Людмила Петровна (RU)

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

Владельцы патента RU 2747658:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ростовский Государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО РостГМУ Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к области медицины и касается способа прогнозирования формирования вторичного иммунодефицита у военнослужащих-участников военных конфликтов. Сущность способа заключается в том, что у военнослужащего выполняют забор венозной крови, в которой определяют, %: экспрессию Toll-подобных рецепторов на моноцитах (TLR4) и относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов (CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺). Вычисляют значение коэффициента прогнозирования по формуле K=0,29-0,05xTLR4+0,64x(CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺). При выполнении условия К>0,48 прогнозируют формирование вторичного иммунодефицита у военнослужащих-участников военного конфликта. Использование способа позволяет с высокой точностью прогнозировать формирование вторичного иммунодефицита у военнослужащих-участников военных конфликтов. 2 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно клинической иммунологии, и может найти применение для прогнозирования формирования вторичного иммунодефицита у военнослужащих-участников военных конфликтов.

Общеизвестным триггером развития вторичного иммунодефицита является стресс. Участие военнослужащих в военных конфликтах является стрессовым фактором наивысшей степени интенсивности (Караяни А.Г, Утлик Э.П. Саморегуляция функциональных состояний в боевой обстановке // Психопедагогика в правоохранительных органах. - 2018. - №3 (74). - С. 5-9).

Наличие вторичного иммунодефицита может нарушать работо- и боеспособность военнослужащих, вызывать частые простудные заболевания у взрослых более 4 раз в год при продолжительности каждого эпизода инфекционно-воспалительного процесса более двух недель, рецидивирующие инфекции, которые обычно не возникают у людей со здоровым иммунитетом: герпес, папилломовирусная инфекция, инфекции, вызванные грибами рода Candida, рецидивирующие бактериальные инфекции, вызывающие фурункулез, ЛОР-заболевания, небольшое повышение температуры неясной природы при исключении туберкулеза и онкозаболеваний, рецидивирующие лимфоадениты и лимфоаденопатии, астенический синдром, хронические язвы и незаживающие раны (Захарова Д.А. и др. Клинические и иммунологические особенности вторичной иммунной недостаточности у лиц разного возраста - Смоленский медицинский альманах. - 2018. - №1. - С. 118-120), а в последствие, в отдаленном периоде наблюдения, может формировать иммуноопосредованную патологию: онкозаболевания, аллергические и аутоиммунные процессы (Зайцева Н.С. Иммунноэндокринные взаимодействия как основа развития дезаптационной патологии у ветеранов боевых действий // Российский иммунологический журнал. - 2015. - №3. - С. 85-87). Поэтому разработка способов прогнозирования формирования вторичных иммунодефицитов у военнослужащих-участников вооруженных конфликтов является актуальной задачей современной клинической иммунологии.

Проведенными исследованиями по научно-медицинской и патентной литературе найдены различные способы прогнозирования иммунодефицитного состояния.

Так, патентом РФ №2107912 (опубл. 27.03.1998) защищен «Способ прогнозирования состояния иммунной системы». Выполняют забор пуповинной крови тотчас после родов, в которой определяют относительное содержание В-лимфоцитов (В_л). При выполнении условия В_л≥18% прогнозируют иммунодефицитное состояние.

Патентом РФ №2121684 (опубл. 10.11.1998) защищен «Способ прогнозирования иммунодефицитного состояния». Выполняют забор пуповинной крови новорожденных, в которой определяют относительное содержание Т-лимфоцитов, нейтрофилов с рецепторами к С3 компоненту комплемента и НСТ-активности нейтрофилов. При их значениях, соответственно, менее 19, 15 и 19% прогнозируют развитие иммунодефицитного состояния на первом году жизни.

Общим недостатком описанных выше способов являются ограниченные функциональные возможности применения только у лиц определенного возраста.

Наиболее близким техническим решением, принятым за прототип, является описанный в патенте РФ №2691117 (опубл. 11.06.2019) «Способ прогнозирования риска формирования Т-хелперного иммунодефицита», включающий исследование крови пациента из пальца - капиллярной крови, в которой подсчитывают общее количество лейкоцитов, лимфоцитов и моноцитов крови. При одновременном выявлении концентрации лимфоцитов меньше 1,5×10⁹ кл/л и моноцитов менее 0,35×10⁹ кл/л прогнозируют высокий уровень риска 90% Т-хелперного иммунодефицита.

Недостатком прототипа является недостаточная достоверность способа, составляющая по данным авторов работы 90%, а также ограниченные функциональные возможности способа, так как с его помощью можно прогнозировать формирования только частного случая вторичного иммунодефицита, а именно Т-хелперного иммунодефицита, и область применения только у плавсостава.

Задачей изобретения является разработка достоверного способа прогнозирования формирования вторичного иммунодефицита у военнослужащих-участников военных конфликтов.

Техническим результатом, проявляющимся при реализации данного способа, является расширение его функциональных возможностей и повышение достоверности прогнозирования формирования вторичного иммунодефицита.

Технический результат достигается тем, что у военнослужащего-участника военного конфликта выполняют забор венозной крови, в которой определяют, %: экспрессию Toll-подобных рецепторов на моноцитах (TLR4) и относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов (CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺). Вычисляют значение коэффициента прогнозирования по формуле К=0,29-0,05xTLR4+0,64x(CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺). При выполнении условия К>0,48 прогнозируют формирование вторичного иммунодефицита у военнослужащих-участников военного конфликта.

Подробное описание способа

У военнослужащего-участника военного конфликта из локтевой вены выполняют забор венозной крови, в которой определяют, %: экспрессию Toll-подобных рецепторов на моноцитах (TLR4) (Ковальчук Л.В. и др. Изучение системы Toll-подобных рецепторов врожденного иммунитета в острый период после инфаркта миокарда / Весник РГМУ. - 2010. - №1. - С. 19) и относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов (CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺) (Черешнев В.А. Субпопуляционный состав регуляторных Т-лимфоцитов у пациентов с ВИЧ-инфекцией при эффективной анти-ретровирусной терапии / Бюллетень сибирской медицины. - 2019. - №18 (1). - С. 249).

Экспрессию Toll-подобных рецепторов TLR4, %, определяют по методике, описанной в работе Л.Н. Мамедовой с соавт. (Мамедова Л.Н. и др. Динамическое определение Toll рецепторов у больных язвенным колитом / Медицинский вестник Юга России. - 2013. - С. 91). Относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов (CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺), %, определяют методом проточной цитофлюориметрии, например, на анализаторе Cytom-ic FC фирмы Beckman Coulter (США). Вычисляют значение коэффициента прогнозирования по формуле К=0,29-0,05xTLR4+0,64x(CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺). При выполнении условия К>0,48 прогнозируют формирование вторичного иммунодефицита у военнослужащего-участника военного конфликта.

Для разработки способа нами было проведено обследование 58 военнослужащих в возрасте от 27 до 42 лет сразу после возвращения из зоны военного конфликта, через 3 и через 6 мес. В венозной крови определяли абсолютное и относительное количество Т-лимфоцитов (CD3⁺), Т-лимфоцитов-хелперов (CD3⁺CD4⁺), цитотоксических Т-лимфоцитов (CD3⁺CD8⁺), клеток-натуральных киллеров (CD3⁺CD16⁺), регуляторных Т-лимфоцитов (CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺), В-лимфоцитов (CD19⁺), величину иммунорегуляторного индекса, содержание основных классов иммуноглобулинов (IgA, IgM, IgG), экспрессию Toll-подобных рецепторов на моноцитах (TLR2, TLR4 и TLR9), значение коэффициента стимуляции нейтрофилов в НСТ-тесте.

Статистическую обработку результатов обследования проводили в помощью программы Statistica 12,0 (StatSoft, США), которая позволила определить статистически достоверные (р>0,05) параметры - экспрессию Toll-подобных рецепторов на моноцитах (TLR4) и относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов (CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺), характеризующие риск формирования вторичного иммунодефицита у военнослужащих участников-военных конфликтов.

Определение линейно-дискриминантной функции по формуле К=0,29-0,05xTLR4+0,64x(CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺) позволило разработать статистически достоверный (р>0,05) критерий прогнозирования формирования вторичного иммунодефицита у военнослужащих-участников военных конфликтов: при выполнении условия К>0,48 прогнозируют формирование вторичного иммунодефицита у военнослужащего-участника военного конфликта.

Практическая реализуемость способа иллюстрируется примерами из клинической практики.

Пример 1: военнослужащий А., 37 лет, после возвращения из зоны военного конфликта, где он находился в течение 3 месяцев, был направлен на диспансеризацию в Консультативно-диагностическую поликлинику ФГКУ «1602 Военный клинический госпиталь» Министерства обороны РФ (КДП ФГКУ «1602 ВКГ» МО РФ). Пациенту А. было выполнено обследование согласно заявленному способу. Пациенту А. из локтевой вены выполнили забор венозной крови, в которой определяли, %: экспрессию Toll-подобных рецепторов на моноцитах (TLR4) и относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов (CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺). Экспрессию Toll-подобных рецепторов TLR4, %, определяли по методике, описанной в работе Л.Н. Мамедовой с соавт. (Мамедова Л.Н. и др. Динамическое определение Toll рецепторов у больных язвенным колитом / Медицинский вестник Юга России. - 2013. - С. 91). Относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов (CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺), %, определяли методом проточной цитофлюориметрии, например, на анализаторе Cytomic FC фирмы Beckman Coulter (США). Было получено TLR4=16%, (CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺)=2,5%. Вычислили коэффициент прогнозирования

К=0,29-0,05xTLR4+0,64x(CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺)=0,29-0,05х 16+0,64x2,5=0,29-0,8+1,6=1,09.

Поскольку было выполнено условие К=1,09>0,48, у пациента А. прогнозировали формирование вторичного иммунодефицита.

Дальнейшее наблюдение показало, что у пациента А. через 2 месяца после возвращения из зоны вооруженного конфликта развился вторичный иммунодефицит, что подтвердило достоверность заявляемого способа.

Пример 2: военнослужащий М., 29 лет, после возвращения из зоны военного конфликта, где он находился в течение 6 месяцев, был направлен на диспансеризацию в КДП ФГКУ «1602 ВКГ» МО РФ. Пациенту М. было выполнено обследование согласно заявленному способу. Пациенту М. из локтевой вены выполнили забор венозной крови, в которой определяли, %: экспрессию Toll-подобных рецепторов на моноцитах (TLR4) и относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов (CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺). Экспрессию Toll-подобных рецепторов TLR4, %, определяли по методике, описанной в работе Л.Н. Мамедовой с соавт. (Мамедова Л.Н. и др. Динамическое определение Toll рецепторов у больных язвенным колитом / Медицинский вестник Юга России. - 2013. - С. 91). Относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов (CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺), %, определяли методом проточной цитофлюориметрии, например, на анализаторе Cytomic FC фирмы Beckman Coulter (США). Было получено TLR4=14%, (CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺)=1,5%. Вычислили коэффициент прогнозирования

К=0,29-0,05xTLR4+0,64x(CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺)=0,29-0,05x14+0,64x1,5=0,29-0,7+0,96=0,55.

Поскольку было выполнено условие К=0,55>0,48, у пациента М. прогнозировали формирование вторичного иммунодефицита.

Дальнейшее наблюдение показало, что у пациента М. через 2 месяца после возвращения из зоны вооруженного конфликта развился вторичный иммунодефицит, что подтвердило достоверность заявляемого способа.

Согласно заявленному способу нами в КДП ФГКУ «1602 ВКГ» МО РФ обследовано 72 военнослужащих в возрасте от 27 до 46 лет после выполнения профессиональных обязанностей в зоне военного конфликта, в которой они находились в течение 3-6 месяцев. Проводили забор венозной крови, в которой определяли, %: экспрессию Toll-подобных рецепторов на моноцитах (TLR4) и относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов (CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺). Вычислили коэффициент прогнозирования К по приведенной выше формуле, значение которого у 29 военнослужащих составило от 0,49 до 1,28. Поскольку по результатам исследования у 29 военнослужащих было выполнено условие К>0,48, у них прогнозировали формирование вторичного иммунодефицита. Дальнейшее наблюдение за этими 29 военнослужащими показало развитие у них вторичного иммунодефицита, что подтвердило высокую достоверность заявляемого способа.

Таким образом, предложенный способ объективен, достоверен и может быть использован для прогнозирования формирования вторичного иммунодефицита у военнослужащих-участников военных конфликтов.

Способ прогнозирования формирования вторичного иммунодефицита у военнослужащих-участников военных конфликтов, включающий исследование крови пациента, отличающийся тем, что исследуют венозную кровь, в которой определяют, %: экспрессию Toll-подобных рецепторов на моноцитах (TLR4) и относительное количество регуляторных Т-лимфоцитов (CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺), после чего вычисляют коэффициент прогнозирования (К) по формуле:

К=0,29-0,05xTLR4+0,64x(CD3⁺CD4⁺Foxp3⁺),

при выполнении условия К>0,48 прогнозируют формирование вторичного иммунодефицита у военнослужащих-участников военного конфликта.

Изобретение относится к медицине, в частности к способам выявления активности врожденного иммунитета. Способ выявления активности врожденного иммунитета, включающий введение в образец крови стимулирующего агента и последующую количественную оценку активности врожденного иммунитета, причём в качестве стимулирующего агента используют натриевую соль сополимера (1→4)-6-0-карбоксиметил-β-D-глюкозы, (1→4)-β-D-глюкозы, (2→24)2,3,14,15,21,24,29,32-октагидрокси-23-(карбоксиметоксиметил)-7,10-диметил-4,13-ди(2-пропил)-19,22,26,30,31-пентаоксагенацикло [23,3,2,216O5,28O9,18O12,17] дотриактонта 1,3,5(28),6,6(27),9(18),10,12(17),13,15-декаена с молекулярной массой Mm=28000-30000 и определенной структурной формулой, стимулирующий агент вводят в количестве, обеспечивающем его концентрацию 0,5 или 0,05 мг/мл в образце крови, а количественную оценку уровня активности гена USP18 производят по его изменению по отношению к активности гена контрольного образца и в случае возрастания его активности делают вывод об активности врожденного иммунитета.

Способ приготовления эритроцитарного диагностикума иммуноглобулинового туляремийного // 2747420

Изобретение относится к биотехнологии и касается способа приготовления эритроцитарного диагностикума иммуноглобулинового туляремийного. Сущность способа заключается в том, что получают 20% взвеси формалинизированных эритроцитов для сенсибилизации туляремийными иммуноглобулинами, выделенными из иммунной сыворотки, фракционированной каприловой кислотой.

Способ выявления антител - иммуноглобулинов класса g в сыворотке крови к возбудителям тяжелых острых респираторных вирусных инфекций, включая sars-cov-2, с одновременным прогнозом тяжести протекания коронавирусной инфекции covid-19, на гидрогелевом биочипе // 2746815

Изобретение относится к области вирусологии и иммунологии. Предложен способ для мультиплексного обнаружения антител класса G против антигенов коронавируса SARS-CoV-2 и других вирусов семейства бета-коронавирусов, вирусов гриппа А и В, вирусов парагриппа II и III типов при одновременном выявлении прогностических аутоантител класса G против интерферонов I типа, ассоциированных с тяжелым течением коронавирусной инфекции COVID-19.

Способ оценки имплантационной состоятельности эндометрия при повторных неудачах имплантации, ассоциированных с хроническим эндометритом // 2746644

Изобретение относится к области медицины, а именно к патоморфологии, гинекологии и репродуктологии, и может быть использовано для выявления нарушений имплантационных возможностей эндометрия при хроническом эндометрите (ХЭ) у пациенток с повторными неудачами имплантации (ПНИ).

Способ получения и анализа флуоресцентных соединений в плазме // 2746503

Группа изобретений относится к области медицины и фармацевтики, а именно к способам измерения количества флуоресцентного соединения в плазме. В одном варианте способ включает измерение количества флуоресцентного соединения - МВ-102, для чего осуществляют сбор образца плазмы, разбавление образца плазмы по меньшей мере одним растворителем, анализ разбавленного образца при помощи ВЭЖХ для измерения, таким образом, количества соединения в плазме, причем образец плазмы не сушат перед анализом ВЭЖХ и к образцу не добавляют никакого внутреннего стандарта.

Универсальный антителоопосредованный биосенсор // 2746486

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к антитело-опосредованному биосенсору, содержащему клетку, экспрессирующую химерный гибридный белок, который содержит антитело-связывающий домен Fcγ-рецептора, трансмембранный домен и сигнальный домен альфа-иммуноглобулина, и может быть использовано в медицине.

Способ трансфекции и культивирования клеток, синтезирующих рекомбинантный белок глутаматдекарбоксилазу // 2746162

Изобретение относится к области молекулярной генетики и медицинской биотехнологии и может быть использовано в медицине при создании технологий дифференциальной диагностики аутоиммунного сахарного диабета, синдрома мышечной скованности и других заболеваний.

Способ приготовления библиотеки днк // 2746126

Изобретение относится к биотехнологии. Описан способ приготовления библиотеки ДНК из ДНК, выделенной из биологического образца, для последующего секвенирования методами секвенирования нового поколения, в котором: (1) фрагментируют ДНК, выделенную из образца с получением смесифрагментов ДНК; (2) восстанавливают концевые последовательности фрагментов ДНК, полученных на стадии (1), (затупляют концы) и обогащают полученную смесь фрагментов ДНК целевыми последовательностями ДНК посредством магнитных частиц с ковалентно-присоединенными к ним олигонуклеотидными зондами, являющимися специфичными к целевым последовательностям ДНК;(3) лигируют целевые последовательности ДНК, полученные на этапе (2), с олигонуклеотидными адаптерами, содержащими олигонуклеотидную последовательность, применяющуюся в упомянутом методе секвенирования нового поколения; (4) очищают последовательности ДНК, полученные на этапе (3), посредством упомянутых магнитных частиц, характеризующийся тем, что упомянутые магнитные частицы представляют собой магнитные частицы, к которым ковалентно присоединены олигонуклеотидные зонды, имеющие последовательности нуклеотидов SEQ ID NO: 1 - 387.

Способ прогнозирования репродуктивных потерь в сроке до 22 недель беременности у женщин с угрожающим выкидышем и привычным невынашиванием в анамнезе // 2746033

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и раскрывает способ прогнозирования репродуктивных потерь у женщин с угрожающим выкидышем ранних сроков и привычным невынашиванием в анамнезе.

Способ изготовления матричного биосенсора на основе восстановленного оксида графена и матричный биосенсор на полимерной подложке // 2745663

Использование: для проведения исследований в области биотехнологий. Сущность изобретения заключается в том, что изготовление матричного биологического сенсора на основе восстановленного оксида графена включает формирование на полимерной подложке пленки оксида графена, локальную модификацию оксид-графеновой пленки по заданному рисунку с образованием нескольких проводящих каналов и иммобилизацию на модифицированной оксид-графеновой пленке биомолекул, обеспечивающих избирательное взаимодействие с другими биологическими агентами.