Фармацевтическая композиция для терапии дефицита гормона роста, содержащая слитый белок hgh

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к терапевтическому слитому белку на основе гормона роста человека и композициям с ним, и может быть использовано в терапии дефицита гормона роста. Предложенный слитый белок hGH GX-H9 включает гормон роста человека и гибридный Fc. Слитый белок hGH GX-H9 вводится пациенту один раз в неделю в дозе от 0,4 до 1,6 мг/кг на кг массы тела пациента, либо один раз в каждые две недели в дозе от 0,8 до 3,2 мг/кг на кг массы тела пациента. Изобретение обеспечивает продолжительное время присутствия гормона роста in vivo таким образом, что величина IGF-1 SDS сохраняется в нормальном диапазоне в течение длительного периода времени. 6 н. и 3 з.п. ф-лы, 10 ил., 5 табл., 5 пр.

 

Область техники

Настоящее раскрытие относится к фармацевтической композиции, предназначаемой для лечения дефицита гормона роста, которая содержит слитый белок hGH-hyFc (GX-H9) гормона роста человека, получаемый слиянием гибридного Fc с гормоном роста человека (hGH). Более конкретно, настоящее раскрытие относится к способу применения слитого белка hGH, эффективного в отношении лечения дефицита гормона роста, и фармацевтической композиции, предназначаемой для лечения дефицита гормона роста, которая содержит слитый белок hGH (GX-H9) и фармацевтически приемлемый носитель, при этом слитый белок hGH (GX-H9) вводится один раз в неделю в дозировке от 0,4 до 1,6 мг на кг массы тела пациента или вводится один раз в две недели в дозировке от 0,8 до 3,2 мг на кг массы тела пациента.

Кроме того, настоящее раскрытие относится к способу лечения дефицита гормона роста, который содержит этап введения слитого белка hGH (GX-H9) педиатрическому пациенту с дефицитом гормона роста один раз в неделю в дозировке от 0,4 до 1,6 мг на кг массы тела пациента, или один раз каждые две недели в дозировке от 0,8 до 3,2 мг на кг массы тела пациента.

Помимо этого, настоящее раскрытие относится к комплекту, содержащему контейнер, который содержит слитый белок hGH и фармацевтически приемлемый носитель; и вкладыш, указывающий, что слитый белок hGH применяется пациентом для лечения дефицита гормона роста один раз в неделю в дозировке от 0,4 до 1,6 мг/кг на кг массы тела пациента или один раз каждые две недели в дозировке от 0,8 до 3,2 мг на кг массы тела пациента.

Уровень техники

Гормон роста, одноцепочечный полипептид, состоящий из 191 аминокислоты, является гормоном, который секретируется из передней доли гипофиза. Гормон роста связывается с рецептором гормона роста, экспрессируя IGF-1 (инсулиноподобный фактор роста 1), который вовлечен в процессы роста и регенерации клеток. Известно, что гормон роста синтезируется в теле нормальных людей в гипофизе и продуцирование его увеличивается вплоть до наступления половой зрелости и постепенно снижается с возрастом.

Типичные расстройства дефицита гормона роста включают дефицит гормона роста у взрослых (Adult Growth Hormone Deficiency, AGHD) и дефицит гормона роста у детей (Pediatric Growth Hormone Deficiency, PGHD). Дефицит гормона роста у взрослых встречается, когда гипофиз пациента оказывается поврежден под действием облучения или вследствие хирургического вмешательства в процессе лечения опухолей головного мозга, мозгового кровотечения и т.п., или же возникает идиопатически. Если секреция гормона роста не соответствует норме, проявляются такие снижающие качество жизни симптомы, как потеря массы тела, снижение минеральной плотности костной ткани, увеличение жировых отложений, сниженный уровень содержания липопротеинов высокой плотности (HDL), увеличенный уровень содержания липоротеинов низкой плотности (LDL), сниженная мышечной силы и другие подобные симптомы. Пациенты с дефицитом гормона роста у взрослых имеют индекс стандартного отклонения (Standard Deviation Score, SDS) IGF-1, равный -2 или менее (<-2 SDS), или процентиль <2,5 от возрастной нормы. Уровни гормона роста в крови могут быть измерены с помощью стимуляционных тестов, включая тест на переносимость инсулина (ITT), тест стимуляции аргинином + GHRH (GHRH+ARG), тест со стимуляцией глюкагоном, тест L-DOPA, тесты с клонидином и т.п. Если пиковый уровень гормона роста (GH) составляет 11,0 мкг/л или ниже у больных с индексом массы тела (BMI) менее 25 кг/м², 8,0 мкг/л или ниже у больных с индексом массы тела от 25 до 30 кг/м², или же 4,0 мкг/л или ниже у больных с индексом массы тела более 30 кг/м², такие пациенты рассматриваются как имеющие дефицит гормона роста (Guidelines for Use of Growth Hormone in Clinical Practice, Endocr. Pract. 2009;15 (Suppl 2)).

Дефицит гормона роста у детей встречается в случаях повреждения гипофиза или вследствие порока развития. Если ухудшается секреция гормона роста, появляется низкорослость, при которой наблюдается рост, соответствующий нижним 3% кривой роста данной возрастной группы или составляющий 5 см или менее в год, кроме того, также проявляются симптомы, включающие низкие уровни глюкозы, сниженную физическую подготовленность, депрессию и умственную незрелость. Следующие дети могут рассматриваться в качестве имеющих дефицит гормона роста у детей: дети, рост которых по меньшей мере на 3 SD ниже средней величины по одной и той же возрастной группе; дети, рост которых по меньшей мере на 1,5 SD ниже среднего роста родителей; дети, которые по меньшей мере на 2 SD ниже средней величины роста по меньшей мере на 1 SD ниже роста в одной и той же возрастной группе в течение периода 1 год или более; дети в возрасте 2 лет или старше, имеющие величину SD по меньшей мере на 0,5 ниже; или дети, которые не показывают никаких симптомов низкорослости, но имеют SD менее 2 на протяжении 1 года или более или сохраняют SD 1,5 в течение 2 лет или более (Consensus guideline for the diagnosis and treatment of GH deficiency in childhood and adolescence: summary statement of the GH Research Society. GH Research Society, J. Clin. Endocrinol. Metab., 2000 Nov; 85(11): 3990-3).

В случае дефицита гормона роста у взрослых доза лекарственного средства определялась на основе массы тела пациента, но в последние годы доза индивидуализировалась для каждого пациента, предполагаемого для проведения терапии. Более конкретно, после начала лечения с применением дозы ниже расчетной подходящей дозы такая доза увеличивается или уменьшается в диапазоне от 0,1 до 0,2 мг/день в зависимости от клинических проявлений, случаев нежелательных явлений или уровней IGF-1. Терапевтическая доза гормона роста должна быть определена с учетом пола, уровня эстрогена, возраста и других подобных данных пациента. Лечение дефицита гормона роста у взрослых нацелено на нормализацию метаболизма и улучшение качества жизни. В этой связи доза гормона роста подходящим образом должна быть определена так, чтобы уровни IGF-1 в крови находились в нормальном диапазоне (от -2 SDS до 2 SDS), зависящем от возраста и пола пациента.

В случае дефицита гормона роста у детей рекомендуется начинать лечение как можно скорее после диагностирования наличия дефицита гормона роста у детей. Как правило, применяется режим ежевечернего подкожного введения гормона роста и рекомендованная доза гормона роста составляет от 25 до 50 мкг/кг/день. Обычно рекомендуется выполнять проверку динамики роста через 3-месячные или 6-месячные интервалы, отслеживая высоту роста, изменения в темпах роста, соблюдение пациентом режима и схемы лечения, отслеживая неблагоприятные события для подтверждения безопасности и измеряя уровни сывороточного IGF-1 или IGFBP-3. Лечение пациентов с дефицитом гормона роста у детей обычно направлено на нормализацию высоты роста и доза гормона роста подходящим образом должна быть определена так, чтобы уровни IGF-1 в крови поддерживались в нормальном диапазоне (от -2 SDS до 2 SDS), зависящем от возраста и пола пациента.

Когда терапия гормонами роста была впервые введена в 1950-ых, гормоны роста извлекались из мертвых человеческих тел, но количество гормонов роста, пригодных для получения от одного человека, было очень ограниченным и по этой причине было трудно обеспечить устойчивое снабжение гормонами роста, в связи с чем они были весьма дорогостоящими. С тех пор, поскольку были разработаны методы рекомбинации генов, на рынок были выведены гормоны роста, синтезируемые в E. coli (Somatropin, 1981, Genentech, США). Примеры рекомбинантного лекарственного препарата гормона роста, имеющегося в настоящее время на рынке США, включают Genotropin от Pfizer, Humatrope от Eli Lilly, Nutropin от Genentech, Norditropin от Novo Nordisk и т.д.

Однако все рекомбинантные препараты гормона роста представлены в форме суточной дозы, которая должна вводиться шесть или семь раз в неделю. В случае дефицита гормона роста у взрослых применяется Humatrope в дозировке 0,2 мг/день (в диапазоне от 0,15 до 0,30 мг/день). Когда определение дозы Nutropin не основывается на массе тела, стартовая доза Nutropin равна 0,2 мг/день (в диапазоне от 0,15 до 0,3 мг/день) и эта доза может изменяться в диапазоне от 0,1 до 0,2 мг/день с интервалами в 1 - 2 месяца. Когда доза Nutropin определяется на основе массы тела, применяется его стартовая доза не более 0,005 мг/кг/день. В случае, если доза Nutropin должна быть увеличена, доза увеличивается так, чтобы она составляла не более 0,01 мг/кг/день через 4 недели после введения. Когда определение дозы Norditropin не основывается на массе тела, его стартовая доза равна 0,2 мг/день (в диапазоне от 0,15 до 0,3 мг/день) и эта доза Norditropin может изменяться в диапазоне от 0,1 до 0,2 мг/день с интервалами в 1 - 2 месяца. Когда доза Norditropin определяется на основе массы тела, Norditropin применяется так, чтобы его стартовая доза была не более 0,004 мг/кг/день. Когда доза Norditropin должна быть увеличена, это увеличение выполняется так, чтобы спустя 6 недель величина дозы составляла бы не более 0,016 мг/кг/день. Для детей с дефицитом гормона роста применяется Genotropin в дозировке от 0,16 до 0,24 мг/кг/неделя и Humatrope в дозировке от 0,026 до 0,043 мг/кг/день. Кроме того, применяется Norditropin в дозировке 0,3 мг/кг/неделя и применяется Norditropin в дозировке от 0,024 до 0,034 мг/кг/день.

Современные препараты гормона роста представлены в форме суточной дозы и имеют, в частности, неудобство, связанное с необходимостью их ежедневного введения педиатрическим пациентам на протяжении длительного периода лечения в 3 - 4 года. Кроме того, известно, что нервно-психическое напряжение, следующее за инъекцией этих препаратов гормона роста, снижает качество жизни. Помимо этого, часто возникает проблема соблюдения режима и схемы лечения, когда пациент непреднамеренно не получает инъекцию, и эта проблема представляет собой самый значительный фактор ухудшения терапевтического эффекта. К тому же известно, что по мере увеличения количества лет лечения число эпизодов несоблюдения значительно увеличивается (Endocrine practice, 2008 март; 14 (2): 143-54). Известно, что темпы увеличения роста у около 2/3 пациентов снижаются из-за фактического несоблюдения предписанных режимов терапии (низкая комплаентность) (PloS one, 2011 январь; 6 (1): e16223).

В связи с этими проблемами были предприняты настойчивые попытки разработки с помощью различных технологий препаратов гормонов роста длительного действия. Однако среди продуктов, которые были успешно разработаны и направлены в продажу, единственным препаратом, обеспечиваемым в форме ежемесячной дозировки, оказался Nutropin Depot, разработанный Genentech, но и он был отозван с рынка из-за трудности производства. Помимо этого, в форме еженедельной дозировки был разработан Eutropin Plus/Declage (LG Life Sciences, Ltd.), использующий гиалуроновую кислоту (HA, hyaluronic acid), но по сравнению с продуктами первого поколения он имеет недостаток, состоящий в необходимости применения шприца с большой иглой.

Таким образом, с учетом снижения комплаентности пациентов из-за неудобств, вызываемых необходимостью приема суточной дозы и другими различными причинами, существует потребность в разработке препаратов гормонов роста длительного действия, которые являлись бы безопасными и эффективными, отвечая комплаентности пациентов. GX-H9 (hGH-гибридный Fc) представляет собой препарат гормона роста длительного действия. В патенте США № 7 867 491 гибридный Fc, способный к преодолению комплементзависимой цитотоксичности и антителозависимой клеточноопосредованной цитотоксичности, которые являются проблемами стандартных технологий слияния Fc, был получен объединением иммуноглобулина IgD и иммуноглобулина IgG4. Помимо этого, в патенте США № 8 529 899 слиянием гибридного Fc с гормоном роста человека (hGH) был получен слитый белок hGH (hGH-hyFc, GX-H9), пригодный для замены стандартных препаратов гормона роста, относящихся к типу принимаемых ежесуточно. Однако фактическое in vivo время полужизни слитого белка Fc значительно варьирует в зависимости от вида физиологически активного компонента, присоединяемого к Fc, и это также влияет на дозировку слитого белка. Доза, кратность приема и другие подобные параметры слитого белка GX-H9 гормона роста человека (hGH) и hyFc, которые являлись бы эффективными и безопасными при лечении дефицита гормона роста, пока еще не прояснены.

Соответственно, с целью определения дозы и кратности приема слитого белка hGH GX-H9, способных продемонстрировать оптимальное действие, авторами настоящего изобретения были выполнены клинические испытания на 32 здоровых взрослых (2013-002771-18), 45 пациентах с дефицитом гормона роста у взрослых (2014-002698-13, EudraCT / NCT02946606, ClinicalTrials.gov) и 56 пациентах с дефицитом гормона роста у детей (2015-001939-21, EudraCT). В результате авторы определили дозу, кратность приема, безопасность и другие подобные характеристики GX-H9, способные поддерживать величины IGF-1 SDS в нормальном диапазоне на протяжении длительного периода времени, минимизируя при этом те побочные эффекты, которые могут быть вызваны гормоном роста, и таким образом сделали настоящее изобретение.

Раскрытие изобретения

Техническая задача

Целью настоящего раскрытия является предоставление способа лечения дефицита гормона роста с помощью слитого белка hGH GX-H9, эффективного при терапии дефицита гормона роста, путем выяснения дозы и кратности приема слитого белка hGH GX-H9.

Для достижения указанной выше цели настоящее раскрытие обеспечивает фармацевтическую композицию, предназначаемую для лечения дефицита гормона роста, которая содержит слитый белок hGH GX-H9 и фармацевтически приемлемый носитель, при том, что слитый белок hGH применяется один раз в неделю в дозе от 0,4 до 1,6 мг на кг массы тела педиатрического пациента.

Настоящее раскрытие также обеспечивает фармацевтическую композицию, предназначаемую для лечения дефицита гормона роста, которая содержит слитый белок hGH GX-H9 и фармацевтически приемлемый носитель, при том, что слитый белок hGH вводится один раз в две недели в дозе от 0,8 до 3,2 мг на кг массы тела педиатрического пациента.

Настоящее раскрытие также обеспечивает набор, содержащий контейнер, который содержит слитый белок hGH GX-H9 и фармацевтически приемлемый носитель; и вкладыш, указывающий, что слитый белок hGH вводится педиатрическому пациенту один раз в неделю в дозе от 0,4 до 1,6 мг/кг на кг массы тела пациента в целях терапии дефицита гормона роста.

Настоящее раскрытие также обеспечивает набор, содержащий контейнер, который содержит слитый белок hGH GX-H9 и фармацевтически приемлемый носитель; и вкладыш, указывающий, что слитый белок hGH вводится педиатрическому пациенту один раз в две недели в дозе от 0,8 до 3,2 мг/кг на кг массы тела пациента в целях терапии дефицита гормона роста.

Настоящее раскрытие также обеспечивает способ терапии дефицита гормона роста, при этом данный способ содержит этап введения слитого белка hGH GX-H9 педиатрическому пациенту с дефицитом гормона роста один раз в неделю в дозе от 0,4 до 1,6 мг на кг массы тела пациента. Настоящее раскрытие предлагает применение слитого белка hGH GX-H9 в производстве лекарственного препарата, предназначенного для лечения дефицита гормона роста посредством его введения педиатрическому пациенту с дефицитом гормона роста один раз в неделю в дозе от 0,4 до 1,6 мг на кг массы тела пациента. Настоящее раскрытие обеспечивает композицию, содержащую слитый белок hGH GX-H9 и предназначаемую для лечения дефицита гормона роста посредством ее введения педиатрическому пациенту с дефицитом гормона роста один раз в неделю в дозе от 0,4 до 1,6 мг на кг массы тела пациента.

Настоящее раскрытие также обеспечивает способ терапии дефицита гормона роста, при этом данный способ содержит этап введения слитого белка hGH GX-H9 педиатрическому пациенту с дефицитом гормона роста один раз в две недели в дозе от 0,8 до 3,2 мг на кг массы тела пациента. Настоящее раскрытие предлагает применение слитого белка hGH GX-H9 в производстве лекарственного препарата, предназначенного для лечения дефицита гормона роста посредством его введения педиатрическому пациенту с дефицитом гормона роста один раз в две недели в дозе от 0,8 до 3,2 мг на кг массы тела пациента. Настоящее раскрытие обеспечивает композицию, содержащую слитый белок hGH GX-H9 и предназначаемую для лечения дефицита гормона роста посредством ее введения педиатрическому пациенту с дефицитом гормона роста один раз в две недели в дозе от 0,8 до 3,2 мг на кг массы тела пациента.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 показывает результаты измерения аффинности связывания рецептора Fcγ (FcγR) I для слитого белка hGH (GX-H9).

Фиг. 2 показывает результаты измерения аффинности связывания C1q для слитого белка hGH (GX-H9).

Фиг. 3 показывает результаты измерений увеличения массы тела у крыс с удаленным гипофизом после введения Genotropin (Pfizer) или GX-H9.

Фиг. 4 представляет фармакокинетические характеристики слитого белка hGH (GX-H9) или Eutropin (LG Life Sciences), показанные после подкожного введения крысам однократной дозы каждого из препаратов.

Фиг. 5 представляет фармакокинетические характеристики слитого белка hGH (GX-H9) или Eutropin, показанные после подкожного введения однократной дозы каждого из препаратов обезьянам.

Фиг. 6 представляет фармакокинетические характеристики слитого белка hGH (GX-H9), показанные после регулярного введения GX-H9 обезьянам на протяжении 4 недель.

Фиг. 7 показывает фармакокинетические характеристики в зависимости от дозы слитого белка hGH (GX-H9) на первой стадии клинического испытания на здоровых взрослых добровольцах.

Фиг. 8 показывает фармакодинамические характеристики в зависимости от дозы слитого белка hGH (GX-H9) (изменения относительно исходного уровня) на первой стадии клинического испытания на здоровых взрослых добровольцах.

Фиг. 9 показывает дозозависимые фармакокинетические характеристики в зависимости от дозы в период однократной дозы (SD) и в многодозовый период (MD) слитого белка hGH (GX-H9) на втором этапе клинического испытания на пациентах с дефицитом гормона роста у детей.

Фиг. 10 показывает фармакодинамические характеристики (среднее IGF-1 SDS) в зависимости от дозы в период однократной дозы (SD) и в многодозовый период (MD) введения слитого белка hGH (GX-H9) на втором этапе клинического испытания на пациентах с дефицитом гормона роста у детей.

Наилучший вариант осуществления изобретения

Доза и кратность введения слитого белка GX-H9 гормона роста человека (hGH), которые являются эффективными в отношении стимуляции фактического роста у людей, до сих пор еще не были прояснены.

Авторы настоящего изобретения выполнили клинические испытания (2015-001939-21) на 56 пациентах с гормональным дефицитом у детей с целью определения дозы и кратности приема GX-H9, способных показать оптимальную эффектность. В результате авторы настоящего изобретения обнаружили, что когда слитый белок hGH GX-H9 вводится один раз в неделю в дозе от 0,4 до 1,6 мг на кг массы тела педиатрических пациентов или вводится один раз каждые две недели в дозе от 0,8 до 3,2 мг на кг массы тела педиатрических пациентов, гормон роста может продолжительное время находиться in vivo таким образом, что величина IGF-1 SDS могла сохраняться в нормальном диапазоне в течение длительного периода времени.

В этой связи в первом аспекте настоящее раскрытие касается фармацевтической композиции, предназначаемой для лечения дефицита гормона роста, которая содержит слитый белок hGH GX-H9 и фармацевтически приемлемый носитель, при том, что слитый белок hGH вводится один раз в неделю в дозе от 0,4 до 1,6 мг на кг массы тела педиатрического пациента. В частности, настоящее раскрытие касается фармацевтической композиции, при том, что слитый белок hGH вводится один раз в неделю в дозе от 0,5 до 1,5 мг, от 0,7 до 1,3 мг или от 0,8 до 1,2 мг на кг массы тела педиатрического пациента.

В дополнение к этому, во втором объекте настоящее раскрытие касается фармацевтической композиции, предназначаемой для лечения дефицита гормона роста, которая содержит слитый белок hGH GX-H9 и фармацевтически приемлемый носитель, при том, что слитый белок hGH вводится один раз в две недели в дозе от 0,8 до 3,2 мг на кг массы тела педиатрического пациента. В частности, настоящее раскрытие касается фармацевтической композиции, при том, что слитый белок hGH вводится один раз в две недели в дозе от 1,0 до 3,0 мг, от 1,4 до 2,6 мг или от 1,6 до 2,4 мг на кг массы тела педиатрического пациента.

В фармацевтической композиции настоящего раскрытия слитый белок hGH (GX-H9) может содержать аминокислотную последовательность с SEQ ID № 1. Фармацевтическая композиция настоящего раскрытия может вводиться подкожно.

В другом аспекте настоящее раскрытие касается способа лечения дефицита гормона роста, при этом данный способ содержит этап введения слитого белка hGH GX-H9 педиатрическому пациенту с дефицитом гормона роста один раз в неделю в дозе от 0,4 до 1,6 мг на кг массы тела пациента.

В еще одном аспекте настоящее раскрытие касается способа лечения дефицита гормона роста, при этом данный способ содержит этап введения слитого белка hGH GX-H9 педиатрическому пациенту с дефицитом гормона роста один раз в две недели в дозе от 0,8 до 3,2 мг на кг массы тела пациента.

В данном контексте термин « слитый белок hGH GX-H9» относится к слитому белку гормона роста человека hGH-hyFc, полученному слиянием гибридного Fc с гормоном роста человека (hGH). слитый белок hGH GX-H9 может содержать аминокислотную последовательность с SEQ ID № 1, прилагаемую к данному документу. слитый белок hGH GX-H9 может быть получен согласно способу, раскрытому в патенте США № 8 529 899.

Фармацевтическая композиция, включающая слитый белок hGH GX-H9, согласно настоящему раскрытию может вводиться педиатрическому пациенту с дефицитом гормона роста.

«Низкорослость» обозначает случай, при котором высота составляет менее 2 среднеквадратичных отклонений (SD) или 3 процентиль (3%) от нормальной, или случай, при котором рост увеличивается каждый год на 5 см или менее. Дефицит гормона роста может включать врожденный или приобретенный дефицит. Что касается врожденного дефицита, когда гипофиз не развивается надлежащим образом, вследствие чего возникают нарушения секреции гормона роста, может наблюдаться дефицит гормона роста. Приобретенный дефицит гормона роста может встречаться из-за повреждений мозговой ткани, вызванных дефицитом кислорода вследствие тяжелых родов. Другие причины дефицита гормона роста включают повреждения гипофиза, вызванные облучением для целей терапии опухоли головного мозга, или туберкулезным менингитом после рождения. Указывающие на дефицит гормона роста симптомы включают замедление роста и низкорослость, а врожденный дефицит гормона роста демонстрирует симптомы низкого уровня глюкозы, начиная с возраста новорожденного. Кроме того, ребенок демонстрирует такие симптомы, как повышенная беспокойность и сниженная жизнеспособность.

Фармацевтическая композиция настоящего раскрытия содержит фармацевтически приемлемый носитель. Фармацевтически приемлемый носитель может быть любым носителем при условии, что он является нетоксичным веществом, подходящим для доставки слитого белка hGH пациенту. Примеры носителя, который может применяться в настоящем раскрытии, включают стерилизованную воду, спирты, жиры, воска и инертные твердые вещества. Также в фармацевтические композиции настоящего раскрытия могут быть введены фармацевтически приемлемые вспомогательные средства, такие как буферные вещества, диспергирующие агенты, разбавители и другие подобные, а именно: бактериостатическая вода для инъекции (BWFI), физиологический раствор с фосфатным буфером, раствор Рингера, раствор декстрозы, раствор сахарозы, раствор полаксамера и другие подобные.

В настоящем раскрытии слитый белок hGH GX-H9 может вводиться один раз в неделю в дозе от 0,4 до 1,6 мг на кг массы тела педиатрического пациента, например, один раз в неделю в дозе 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1 или 1,2 мг на кг массы тела пациента. Предпочтительно слитый белок hGH GX-H9 может вводиться один раз в неделю в дозе от 0,5 до 1,5 мг, от 0,7 до 1,3 мг или от 0,8 до 1,2 мг на кг массы тела пациента. Помимо этого, слитый белок hGH GX-H9 может вводиться один раз в две недели в дозе от 0,8 до 3,2 мг на кг массы тела педиатрического пациента, например, один раз в две недели в дозе 1,0, 1,2, 1,4, 1,6, 1,8, 2,0, 2,2, 2,4, 2,6 или 2,8 мг на кг массы тела пациента. Предпочтительно слитый белок hGH GX-H9 может вводиться один раз в две недели в дозе от 1,0 до 3,0 мг, от 1,4 до 2,6 мг или от 1,6 до 2,4 мг на кг массы тела пациента. Более предпочтительно слитый белок hGH GX-H9 вводится один раз в неделю в дозе от 0,8 до 1,2 мг на кг массы тела пациента или один раз каждые две недели в дозе от 1,6 до 2,4 мг на кг массы тела пациента.

Доза слитого белка hGH может регулироваться на основе массы тела пациента и может быть увеличена или уменьшена в зависимости от прогресса после введения. Доза слитого белка hGH, которая применяется в дальнейшем, может быть выше или ниже начальной дозы, или же может равняться начальной дозе. На начальном этапе слитый белок hGH может быть введен в низкой дозе с тем, чтобы гарантировать безопасность, а затем, после подтверждения отсутствия нежелательных явлений или иного подобного, доза может быть постепенно увеличена. Кроме того, доза слитого белка hGH может регулироваться посредством контроля величины IGF-I SDS в полученном от пациента образце плазмы или сыворотки. Доза hGH слитого белка, подходящая для конкретного пациента, может варьировать в зависимости от возраста, пола, конституции, массы тела и другие подобных характеристик пациента.

Фармацевтическая композиция, содержащая слитый белок hGH GX-H9, может быть введена субъекту различными способами. Например, фармацевтическая композиция может вводиться парентерально, например, подкожно или внутривенно. Эта композиция может быть стерилизована с применением стандартных способов стерилизации, хорошо известных в данной области. При необходимости композиция может содержать фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, предназначенные для приближения к физиологическим условиям, такие как регулирующие pH и буферные вещества, средства корректировки токсичности и другие подобные, например, ацетат натрия, хлорид натрия, хлорид калия, хлорид кальция, лактат натрия и т.д. Концентрация слитого белка hGH в этих рецептурах может варьировать в широких пределах и может быть выбрана, исходя, прежде всего, из объемов жидкой фазы, вязкости и т.п., в соответствии с конкретным выбранным способом введения.

В еще одном объекте настоящее раскрытие касается набора, содержащего контейнер, который содержит слитый белок hGH GX-H9 и фармацевтически приемлемый носитель; и вкладыш, указывающий, что слитый белок hGH вводится педиатрическому пациенту один раз в неделю в дозе от 0,4 до 1,6 мг/кг на кг массы тела пациента в целях терапии дефицита гормона роста. В частности, настоящее раскрытие касается набора, содержащего контейнер, который содержит слитый белок hGH GX-H9 и фармацевтически приемлемый носитель; и вкладыш, указывающий, что слитый белок hGH вводится педиатрическому пациенту один раз в две недели в дозе от 0,8 до 3,2 мг/кг на кг массы тела пациента в целях терапии дефицита гормона роста.

Такой вкладыш может иметь форму инструкции, указывающей, что слитый белок hGH вводится педиатрическому пациенту в целях лечения дефицита гормона роста.

Слитый белок hGH и фармацевтически приемлемый носитель могут быть представлены в одном и том же контейнере или в индивидуальных контейнерах. В одном воплощении подходящие контейнеры могут включать бутылки, виалы, пакеты, шприцы (например, «карандашного» типа, обеспечивающие возможность контроля дозировки, шприцы, позволяющие выполнять экстренное введение посредством смешивания растворителя и сублимированного действующего вещества после удаления разграничительного барьера, и т.д.) и другие подобные. Контейнер может быть образован из различных материалов, например, стекла, полимерного материала или металла. Включенный в контейнер ярлык может представлять инструкции по применению. Помимо этого, с коммерческой точки зрения и с учетом интересов потребителя набор может включать другие предпочтительные материалы, например, буфер, разбавитель, фильтр, иглу, шприц и т.д.

Примеры

Далее настоящее изобретение будет описано более подробно с обращением к соответствующим примерам. Среднему специалисту в данной области будет очевидно, что эти примеры представлены лишь в иллюстративных целях и не должны рассматриваться в качестве ограничивающих объем настоящего раскрытия.

Пример 1. Получение слитого белка hGH GX-H9.

Слитый белок hGH GX-H9 может быть получен согласно способу, раскрытому в патенте США № 8 529 899.

Прежде всего кодирующая аминокислотную последовательность SEQ ID №1 последовательность нуклеиновых кислот hGH-hyFc, в которой hyFc слит с гормоном роста человека (hGH), была вставлена в экспрессионный вектор pAD15, конструируя таким образом клеточную линию, экспрессирующую и продуцирующую hGH-hyFc. Для создания вектора, содержащего структурный ген hGH-hyFc, в качестве гена гормона роста человека (hGH) использовалась последовательность GenBank AAA98618.1, а в качестве гена hyFc применялись для слияния последовательности GenBank P01880 (IgD) и GenBank AAH25985 (IgG4). Полученные от поставщиков гены при помощи специфических рестрикционных ферментов были вставлены в вектор экспрессии для получения продуцирующей белок слияния клеточной линии.

Вектор экспрессии, полученный вышеописанным способом, был трансфицирован кальций-фосфатным методом в клетки CHO DG44 (Columbia University, США). Через 6 часов после трансфекции трансфицированные клетки были промыты фосфатным буфером, а затем питательная среда была заменена на 10% среду dFBS (Gibco, США, 30067-334), MEM alpha (Gibco, 12561, США, каталожный номер 12561-049), HT (гипоксантин-тимидиновая среда) + (Gibco, США, 11067-030)). Чрез 48 часов после трансфекции клетки были серийно разведены 10%, не содержащей HT средой dFBS + MEM alpha на 100 мм чашке и выполнен HT отбор. Клетки оставляли до тех пор, пока не образовывались единичные колонии, в то время как питательная среда заменялась дважды в неделю. Затем для увеличения продуктивности с помощью DHFR-системы была выполнена MTX-амплификация HT-отобранных клонов. После завершения MTX-амплификации клетки пересеивались около 4-5 раз для стабилизации и затем была выполнена оценка продуктивности с получением, таким образом, клонов, подходящих для продуцирования желаемого белка.

С целью получения одиночного клона, демонстрирующего самую высокую продуктивность, было выполнено клонирование методом предельных разведений (LDC, Limiting Dilution Cloning). Для выполнения LDC клетки были разведены в ростовой среде и высеяны в 96-луночный планшет в концентрации 1 клетка на лунку. В дни с 10 по 14 после посева клетки были собраны с лунок, содержавших, согласно микроскопическому рассмотрению, одиночные клоны, и собранные клетки культивировались в матрасе T25 так, чтобы могла быть выполнена оценка продуктивности таких клеток. Таким образом была отобрана клеточная линия, имевшая высокую продуктивность.

Из выбранной клеточной линии была забрана культуральная среда и затем из этой культуральной среды выделен желаемый белок. Для этой цели образец содержащей белок культуральной среды был адсорбирован (иммобилизация образца) с помощью Prosep Ultra Plus (Prosep® Ultra Plus, Merck) и затем кондиционирован с помощью 50 ммоль фосфата натрия, 150 ммоль хлорида натрия и pH-буфера 7.0. Для элюирования применялась колонка XK16/20 (GE Healthcare) и желаемый белок элюировался с использованием 100 ммоль цитрата натрия, 200 ммоль L-аргинина и pH-буфера 3.1.

Пример 2. Тест на антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность (ADCC) и комплементзависимую цитотоксичность (CDC) слитого белка hGH GX-H9.

Для подтверждения того, что гибридный участок Fc GX-H9 не вызывает антителозависимой клеточноопосредованной цитотоксичности (ADCC) и комплементзависимой цитотоксичности (CDC), была выполнена проверка методом твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA).

В качестве положительного контроля применялись Rituxan (Roche, Швейцария) и Enbrel (Amgen, США), известные как обладающие очень высокой связывающей способностью по отношению к рецептору Fcγ (FcγR) I, II и III. Каждый из GX-H9, Rituxan and Enbrel наносился на 96-луночный планшет и затем оставлялся для прохождения реакции с серийно разведенным рецептором Fcγ I. После завершения реакции каждый из реакционных растворов был промыт буфером для удаления рецептора Fcγ I, не связанного с испытуемыми веществам. Затем была измерена аффинность связывания между рецептором Fcγ I и каждым из испытуемых веществ, используя биотинилированное анти-FcγRI антитело и HRP-конъюгированный стрептавидин.

Также с помощью описанного выше способа ELISA была измерена аффинность связывания между GX-H9 и C1q, который вызывает комплементзависимую цитотоксичность. В качестве положительного контроля применялись Rituxan (Roche, Швейцария) и Enbrel (Amgen, США), а аффинность связывания между C1q и каждым из испытуемых веществ измерялась с помощью HRP-конъюгированного анти-C1q антитела.

В результате, как показано на фиг. 1, GX-H9 продемонстрировал низкую аффинность связывания в отношении рецептора Fcγ I, который вызывает антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность, и, как можно видеть из Фиг. 2, GX-H9 также имел низкую аффинность связывания для C1q, который вызывает комплементзависимую цитотоксичность.

Пример 3. Результаты доклинического испытания слитого белка hGH (GX-H9).

3-1: Испытание эффекта повторного подкожного введения GX-H9 на крысах с удаленным гипофизом.

Эффект GX-H9 был проверен с использованием крыс с удаленным гипофизом, которые являются моделями болезней животных. В качестве контроля применялся Genotropin (Pfizer, США), который является лекарственной формой для ежедневного приема. GX-H9 был введен один раз в неделю и его эффект был сопоставлен с эффектом в контроле.

Тест выполнялся на особях, показывавших прибавление в весе около 10% или менее в течение около одной недели после гипофизэктомии. В группе 1 в качестве отрицательного контроля было выполнено на протяжении 2 недель подкожное введение чистого носителя. Группе 2 вводился Genotropin каждый день в дозе 0,2 мг/кг. В группе 3 было выполнено один раз в неделю подкожное введение Genotropin в дозе 1,4 мг/кг, которая представляет собой еженедельную дозу Genotropin. В группе 4 один раз в неделю было выполнено подкожное введение GX-H9 в дозе 1,4 мг/кг (соответствующей еженедельной дозе Genotropin). В группе 5 один раз в неделю было выполнено подкожное введение GX-H9 в дозе 3,5 мг/кг (соответствующей 1/2 мольного количества еженедельной дозы Genotropin). В группе 6 GX-H9 подкожно вводился один раз в неделю в дозе 7,0 мг/кг (соответствующей идентичному мольному количеству еженедельной дозы Genotropin). Каждый день после введения лекарственного средства отслеживались наблюдаемые у каждой крысы симптомы и измерялась масса тела каждой крысы.

В результате, как показано на фиг. 3, когда Genotropin вводился ежедневно в дозе 0,2 мг/кг, было получено среднее прибавление массы тела около 20 г, но, когда Genotropin был введен один раз в неделю в дозе 1.4 мг/кг, никакого прироста массы тела отмечено не было. Когда GX-H9 был введен один раз в неделю в дозе 7 мг/кг (группа 6), группа 6 показала более высокое прибавление массы по сравнению с группой 3, которой вводился Genotropin в идентичном мольном количестве. Кроме того, введение 3,5 мг/кг GX-H9 (группа 5) показало эффект, подобный полученному при ежедневном введении 0,2 мг/кг Genotropin (группа 2).

3-2: Фармакокинетическое исследование после однократной дозы подкожного введения слитого белка hGH (GX-H9) с использованием крыс.

Для проверки фармакокинетики GX-H9 крысам была подкожно введена однократная доза GX-H9. В качестве контроля для сравнения эффектов крысам была ведена однократная доза Eutropin (LG Life Sciences, Ltd., Корея). Группе 1 была введена подкожно однократная доза 200 мкг/кг Eutropin и группе 2 была введена подкожно однократная доза 200 мкг/кг GX-H9. Группе 3 была введена подкожно однократная доза 1 000 мкг/кг GX-H9.

Перед подкожным введением и спустя 1, 4, 8, 12, 18, 24, 36, 48, 72, 96, 120, 144, 168, 216, 264 и 336 часов после подкожного введения у крыс брались образцы крови. В крови измерялась концентрация каждого испытуемого вещества, используя метод анализа биопроб (ELISA), специфический для каждого испытуемого вещества.

Результаты представлены на фиг. 4 и в нижеследующей таблице 1. Из этих фармакокинетических данных можно видеть, что после однократной дозы GX-H9, введенной подкожно в дозировке 200 или 1 000 мкг/кг, пиковая концентрация в крови была достигнута в 17 часов или 24 часа (T_max), и что GX-H9 обнаруживался в крови вплоть до 9 дней и 11 дней, соответственно. Когда доза введения была увеличена, системное воздействие также увеличилось.

Таблица 1

Фармакокинетические параметры	Eutropin	GX-H9
200 мкг/кг	200 мкг/кг	1°000 мкг/кг
Rsq	0,88±0,08	0,93±0,04	0,99±0,01
Tmax (h)	4,00±0,00	24,0±8,49	16,8±2,68
Cmax (нг/мл)	240±64	42±4	650±158
Lambda_z	3,00±0,00	6,80±2,17	7,60±0,89
Lambda_z нижняя	10±2	46±25	38±5
Lambda_z верхняя	20±3	182±32	206±40
AUClast (нг.час/мл)	1,019±246	2,477±303	16,165±2,961
T1/2 (час)	5,6±1,0	35,7±5,0	37,1±4,1

При сравнении с группой, получившей 200 мкг/кг Eutropin, который являлся контрольным веществом, в случае группы, которой подкожно вводилось 200 мкг/кг GX-H9, испытуемое вещество было обнаружено в крови по истечении более длительного промежутка времени (24 часа для Eutropin против 9 дней для GX-H9) и GX-H9 поддерживался в крови, в то время как время (T_max), потребовавшееся для достижения максимальной концентрации в крови, показало разницу около 20 часов (4 часа для Eutropin против 24 часов для GX-H9). Такие результаты указывают на то, что крысы были системно подвергнуты воздействию GX-H9 в течение более длительного промежутка времени по сравнению с контрольным лекарственным средством Eutropin. Кроме того, когда доза GX-H9 была увеличена, системное воздействие после подкожного введения увеличилось пропорционально степени увеличения дозы.

3-3: Фармакокинетическое исследование после подкожного введения слитого белка hGH (GX-H9) с использованием обезьян.

Были проанализированы фармакокинетические параметры GX-H9 и контрольного вещества Eutropin на обезьянах вида яванский макак. GX-H9 вводился подкожно один раз в неделю с общим количеством повторов, равным четырем, в дозах 500 мкг/кг и 1 000 мкг/кг, а контрольное вещество Eutropin было введено подкожно однократной дозой 1 000 мкг/кг самцам обезьян (3 обезьяны в группе).

В группах, получавших GX-H9, кровь отбиралась перед первым и пятым введениями (день 0 и день 21) и спустя 1, 4, 8, 12, 18, 24, 30, 36, 48, 60, 72, 96, 120, 144 и 168 часов после введения.

В группах, получавших Eutropin, кровь отбиралась перед введением однократной дозы и спустя 1, 4, 8, 12, 18, 24, 30, 36, 48, 60, 72, 96, 120, 144 и 168 часов после введения разовой дозы.

Были измерены концентрации содержания в крови испытуемых веществ, используя метод анализа биопроб (ELISA), специфический для каждого из GX-H9 и Eutropin, результаты которого показаны на фиг. 5 и в нижеследующей таблице 2 (однократное введение дозы) и на фиг. 6 и в нижеследующей таблице 3 (повторное введение). Из фиг. 5 и 6, таблиц 2 и 3 видно, что когда GX-H9 был введен в дозе 500 или 1 000 мкг/кг, системное воздействие увеличивалось в соответствии с увеличением дозы как после однократного введения, так и после повторного введения (4 недели).

По сравнению с контрольным лекарственным средством Eutropin (1 000 мкг/кг, подкожное введение в однократной дозе) в случае введения GX-H9 (500 или 1 000 мкг/кг) испытуемое вещество обнаруживалось в крови в течение более длительного периода времени (спустя 168 часов после введения GX-H9 против 12 - 18 часов после введения Eutropin). А именно, когда был подкожно введен GX-H9, обезьяны были системно подвергнуты воздействию GX-H9 на протяжении более длительного промежутка времени по сравнению с контрольным лекарственным средством Eutropin. Кроме того, показано, что, когда доза GX-H9 увеличилась с 500 до 1 000 мкг/кг, системное воздействие после подкожного введения GX-H9 увеличивалось пропорционально степени увеличения дозы.

Пример 4. Результаты первой стадии клинического испытания слитого белка hGH (GX-H9).

4-1: Фармакокинетические показатели слитого белка hGH (GX-H9) у здоровых взрослых.

Была осуществлена первая стадия клинического испытания на здоровых добровольцах с использованием рандомизированного, двойного слепого, плацебо-контролируемого однократного введения дозы и с пошаговым увеличением дозы. Стадия 1 клинического испытания преследовала цель оценки безопасности, резистентности к лекарственному средству и фармакокинетических/фармакодинамических характеристик при однократном введении дозы GX-H9. Здоровые добровольцы были распределены случайным образом по испытательным группам или группам плацебо и затем подверглись однократному подкожному введению GX-H9 в четырех дозировках (0,2, 0,4, 0,8 и 1,6 мг/кг) с последующим мониторингом на протяжении в общей сложности 56 дней.

В группах, получавших Eutropin, кровь отбиралась перед введением однократной дозы и спустя 0,25, 1, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 24, 28, 32, 36, 40, 48, 54, 60, 72, 80, 96, 144, 312, 480, 648 и 1320 часов после введения разовой дозы.

Концентрации в крови GX-H9 были проанализированы с помощью метода анализа биопроб (ELISA), специфического для GX-H9, и результаты показаны ниже в таблице 4 и на фиг. 7 (средний диапазон).

После однократной дозы подкожного введения GX-H9 максимум геометрического среднего концентрации наблюдался около 12 часов (8 - 16 часов) и второй пик, более низкий, чем пик, наблюдаемый около 12 часов, был отмечен около 32 часов (28 - 32 часа) после введения. Время, потребовавшееся для достижения максимальной концентрации в крови, составило 12 - 16 часов в группах дозы 0,2 - 0,8 мг/кг и 34 часа в группе дозы 1,6 мг/кг. Второй пик в группе самой высокой дозы соответствовал C_max (см. фиг. 7). C_max и AUC увеличивались по дозам при всех дозировках. Период полувыведения (t_1/2) составил от 69,2 часа до 138 часов и различался между индивидуумами.

4-2: Фармакокинетические показатели слитого белка hGH (GX-H9) у здоровых взрослых.

В группах, получавших GX-H9, кровь отбиралась перед введением однократной дозы и спустя 12, 24, 36, 48, 60, 72, 96, 144, 312, 480, 648 и 1320 часов после введения разовой дозы. На фиг. 8 показаны результаты изменений концентрации IGF-1, выраженные в процентах относительно исходных величин, измеренных в образцах крови перед выполнением введения.

Фиг. 8 показывает процентные изменения (%) концентрации в крови IGF-1 (нг/мл) по сравнению с исходными величинами в группе плацебо и группах, получавших 0,2, 0,4, 0,8 и 1,6 мг/кг GX-H9. Видно, что когда GX-H9 вводился подкожно однократной дозой в дозировках 0,2, 0,4, 0,8 и 1,6 мг/кг, концентрация в крови IGF-1 увеличивалась дозозависимым образом. Средние максимальные показатели увеличения (процентные изменения от исходных величин) составили 81%, 157%, 301% и 349% при дозировках 0,2, 0,4, 0,8 и 1,6 мг/кг, соответственно. Время, потребовавшееся для достижения максимальной концентрации IGF-1 в крови, составило от 48 до 60 часов в дозовой группе 0,2 - 0,8 мг/кг и 48 часа в группе дозы 1,6 мг/кг. Средняя концентрация IGF-1 восстанавливалась до исходного уровня в день 7 после введения в дозе 0,2 мг/кг и в день 14 при других дозировках.

4-3: Проверка на безопасность слитого белка hGH (GX-H9) у здоровых взрослых.

Возникшие во время применения препарата нежелательные явления, наблюдаемые у испытуемых, были проанализированы в зависимости от применяемого препарата, с точки зрения соотношения нежелательных явлений с препаратом и в отношении интенсивности нежелательных явлений. Результаты в сводном виде представлены в таблице 5 ниже.

Как показано на фиг. 5, всего было сообщено о 54 нежелательных явлениях у 21 испытуемого индивидуума. О смертельных или серьезных нежелательных явлениях не сообщалось. О тяжелом нежелательном явлении сообщалось у одного испытуемого субъекта, но было определено, что это тяжелое нежелательное явление с приемом лекарственного средства не ассоциируется. Все нежелательные явления, исключая вышеупомянутое нежелательное явление, были легкими. Наиболее часто сообщалось о нежелательных явлениях, представлявших нарушения со стороны скелетно-мышечной и соединительной ткани (19 случаев), системные расстройства и расстройства участка введения (11 случаев) и неврологические расстройства (10 случаев). Три или более зарегистрированных нежелательных явления касались мышечных болей (7 случаев), реакций участка катетеризации (6 случаев), головной боли (5 случаев), ринофарингита (5 случаев), боли в суставах (4 случая) и боли в конечностях (3 случая).

Что касается испытуемых субъектов, подвергавшихся однократному введению GX-H9, то наличие или отсутствие антитела к препарату (ADA, Anti-Drug Antibody) отслеживалось перед введением, а также в день 28 и день 56 после введения. В результате пациенты с образованным GX-H9 антителом не обнаружились.

Пример 5. Результаты второй стадии клинического испытания слитого белка hGH (GX-H9).

5-1: Фармакокинетические показатели слитого белка hGH (GX-H9) у пациентов с дефицитом гормона роста у детей.

В рандомизированном, открытом, контролируемом по действующему препарату исследовании выбора оптимального режима дозирования, стадия 2 клинического испытания на педиатрических пациентах с дефицитом гормона роста выполнялась в целях оценки безопасности, резистентности к лекарственному средству, эффективности и фармакокинетических/фармакодинамических характеристик GX-H9 при введении один раз в неделю или один раз каждые две недели. GX-H9 вводился один раз в неделю в дозе 0,8 мг/кг, один раз в неделю в дозе 1,2 мг/кг и один раз каждые две недели в дозе 2,4 мг/кг на протяжении в общей сложности 6 месяцев, а затем были оценены эффективность и безопасность GX-H9 на протяжении в общей сложности 24 месяцев введения, включая расширенный 18-месячный период. В качестве контрольного препарата применялся Genotropin ежедневно в дозе 0,03 мг/кг на протяжении 12 месяцев.

Период клинического испытания на педиатрических пациентах состоял из периода отбора, периода введения однократной дозы (4 недели), периода определения диапазона доз при многократном введении (6 месяцев), расширенного периода введения (6 месяцев), дополнительно расширенного периода введения (12 месяцев) и периода последующего наблюдения безопасности (1 месяц). В течение периода однократного введения забор крови для анализов PK/PD был выполнен следующим образом:

Когорта GX-H9 (Когорта 1, 0,8 мг/кг, один раз в неделю; Когорта 2, 1,2 мг/кг, один раз в неделю; и Когорта 3, 2,4 мг/кг, два раза в месяц); режим отбора проб: 0 (-1 час), 16 (± 2 часа), 40 (± 2 часа), 64 (± 4 часа), 88 (± 4 часа), 112 (± 6 часов), 160 (± 12 часов), 336 (± 48 часов) и 672 (± 48 часов).

Когорта Genotropin® (Когорта 4): режим отбора проб: 0 (-1 час), 16 (± 2 часа), 88 (± 4 часа), 160 (± 12 часов), 336 (± 48 часов) и 672 (± 48 часов).

В течение периода определения дозы многократного введения (6 месяцев), непрерывно применялась определенная доза. Спустя 3 месяца был выполнен анализ PK/PD в равновесном состоянии. Забор крови был выполнен следующим образом.

Для испытуемых субъектов, распределенных в группу введения GX-H9 один раз в неделю, забор крови осуществлялся в день 85 (включая и PK, и PD): 0 (-1 час), 16 (± 2 часа), 40 (± 2 часа), 64 (± 4 часа), 88 (± 4 часа), 112 (± 6 часов) и 160 (± 12 часов).

Для испытуемых субъектов, распределенных в группу введения GX-H9 дважды в месяц, забор крови осуществлялся в день 85 (включая и PK, и PD): 0 (-1 час), 16 (± 2 часа), 40 (± 2 часа), 64 (± 4 часа), 88 (± 4 часа), 112 (± 6 часов), 160 (± 12 часов) и 336 (± 48 часов).

Для испытуемых субъектов, распределенных в Когорту введения Genotropin® один раз в день, забор крови выполнялся в день 85, перед выбытием, но после введения лекарственного средства (включая и PK, и PD): 0 (-1 час), 6 (± 2 часа), 12 (± 2 часа), 18 (± 2 часа), 24 (± 2 часа).

В результате, как можно видеть на фиг. 9, все дозы в 0,8, 1,2 и 2,4 мг/кг поддерживались in vivo на подходящих уровнях, без аккумулирования in vivo.

5-2: Фармакодинамические показатели слитого белка hGH (GX-H9) у пациентов с дефицитом гормона роста у детей.

Анализ фармакодинамических показателей слитого белка был выполнен c тем же хронометражем, что и режим отбора крови для фармакодинамического анализа, описанный в вышеприведенном Примере 5-1.

В течение периода введения однократной дозы забор крови для анализов PK/PD был выполнен следующим образом:

Когорта GX-H9 (Когорта 1, Когорта 2 и Когорта 3): режим отбора проб: 0 (-1 час), 16 (± 2 часа), 40 (± 2 часа), 64 (± 4 часа), 88 (± 4 часа), 112 (± 6 часов), 160 (± 12 часов), 336 (± 48 часов) и 672 (± 48 часов).

Когорта Genotropin® (Когорта 4): режим отбора проб: 0 (-1 час), 16 (± 2 часа), 88 (± 4 часа), 160 (± 12 часов), 336 (± 48 часов) и 672 (± 48 часов).

В течение периода определения диапазона доз при многократном введении забор крови выполнялся следующим образом:

PK/PD испытуемых субъектов, распределенных в группу введения GX-H9 один раз в неделю: режим отбора проб: 0 (-1 час), 16 (± 2 часа), 40 (± 2 часа), 64 (± 4 часа), 88 (± 4 часа), 112 (± 6 часов) и 160 (± 12 часов).

PK/PD испытуемых субъектов, распределенных в группу введения GX-H9 два раза в месяц: режим отбора проб: 0 (-1 час), 16 (± 2 часа), 40 (± 2 часа), 64 (± 4 часа), 88 (± 4 часа), 112 (± 6 часов), 160 (± 12 часов), 336 (± 48 часов).

PK/PD испытуемых субъектов, распределенных в Когорту введения Genotropin® один раз в день: режим отбора проб: 0 (-1 час), 6 (± 2 часа), 12 (± 2 часа), 18 (± 2 часа) и 24 (± 2 часа).

В результате, как может видеть на фиг. 10, все дозы в 0,8, 1,2 и 2,4 мг/кг поддерживались in vivo на подходящих уровнях, без аккумулирования in vivo. Кроме того, было подтверждено, что средние величины IGF-1 SDS in vivo находились в нормальном диапазоне (от (-2 SDS до 2 SDS).

5-3: Проверка безопасности слитого белка hGH (GX-H9) у пациентов с дефицитом гормона роста у детей.

Нежелательные явления, наблюдавшиеся у испытуемых субъектов, были проанализированы в соответствии с применяемым лекарственным средством и в отношении связи данного лекарственного средства с нежелательными явлениями. В результате было показано, что все нежелательные явления, зарегистрированные к настоящему времени в клиническом испытании на педиатрических пациентах, находились на тех же уровнях, что и наблюдаемые при существующей практике лечения соматотропином, показывая, что GX-H9 является безопасным.

5-4: Проверка образования антител к препарату (Anti-Drug Antibody, ADA) слитого белка hGH (GX-H9) у пациентов с дефицитом гормона роста у детей.

Была оценена иммуногенность посредством определения возможности образования антител вследствие повторного введения GX-H9. До сих пор образование антител при введении GX-H9 не наблюдалось ни у одного пациента.

Известно, что доза стандартного hGH первого поколения (суточная доза), рекомендованная для лечения пациентов с дефицитом гормона роста у детей, составляет от 0,16 мг/кг до 0,24 мг/кг в неделю. Согласно настоящему раскрытию было найдено, что подходящая доза слитого белка hGH для пациентов с дефицитом гормона роста у детей составляет от 0,4 мг/кг до 1,6 мг/кг при его введении один раз в неделю и от 0,8 мг/кг до 3,2 мг/кг при введении один раз каждые две недели. Кроме того, одно- или многократное введение слитого белка hGH (GX-H9) педиатрическим пациентам не выявило никаких серьезных нежелательных явлений.

В связи с этим было найдено, что GX-H9 имеет эффективность, равную эффективности in vivo гормона роста или продуктов гормона роста первого поколения, и в то же самое время имеет увеличенный период полужизни и, таким образом, способен обеспечивать значительно улучшенную комплаентность пациентов, а также является безопасным.

Применимость в производственных условиях

Согласно настоящему раскрытию, когда слитый белок hGH GX-H9 вводится один раз в неделю в дозе от 0,4 до 1,6 мг на кг массы тела педиатрических пациентов или вводится дважды каждые две недели в дозе от 0,8 до 3,2 мг на кг массы тела педиатрических пациентов, гормон роста может продолжительное время находиться in vivo таким образом, чтобы величина IGF-1 SDS могла поддерживаться в нормальном диапазоне в течение длительного периода времени и, таким образом, рецептура гормона роста может применяться один раз в неделю или один раз каждые две недели без необходимости в ежедневном введении, таким образом обеспечивая терапию дефицита гормона роста.

Хотя настоящее раскрытие было описано подробно в отношении конкретных признаков, специалистам в данной области очевидно, что данное описание относится только к одному предпочтительному воплощению и не ограничивает объем настоящего изобретения. Таким образом, широта охвата настоящего раскрытия ограничивается прилагаемой формулой изобретения и ее эквивалентами.

<110> GENEXINE, INC.

HANDOK INC.

<120> Pharmaceutical Composition Comprising hGH Fused Protein for

Treatment of Growth Hormone Deficiency

<130> PP-B1933

<150> KR 10-2016-0110806

<151> 2016-08-30

<160> 1

<170> KoPatentIn 3.0

<210> 1

<211> 436

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<220>

<223> GX-H9

<400> 1

Phe Pro Thr Ile Pro Leu Ser Arg Leu Phe Asp Asn Ala Met Leu Arg

1 5 10 15

Ala His Arg Leu His Gln Leu Ala Phe Asp Thr Tyr Gln Glu Phe Glu

20 25 30

Glu Ala Tyr Ile Pro Lys Glu Gln Lys Tyr Ser Phe Leu Gln Asn Pro

35 40 45

Gln Thr Ser Leu Cys Phe Ser Glu Ser Ile Pro Thr Pro Ser Asn Arg

50 55 60

Glu Glu Thr Gln Gln Lys Ser Asn Leu Glu Leu Leu Arg Ile Ser Leu

65 70 75 80

Leu Leu Ile Gln Ser Trp Leu Glu Pro Val Gln Phe Leu Arg Ser Val

85 90 95

Phe Ala Asn Ser Leu Val Tyr Gly Ala Ser Asp Ser Asn Val Tyr Asp

100 105 110

Leu Leu Lys Asp Leu Glu Glu Gly Ile Gln Thr Leu Met Gly Arg Leu

115 120 125

Glu Asp Gly Ser Pro Arg Thr Gly Gln Ile Phe Lys Gln Thr Tyr Ser

130 135 140

Lys Phe Asp Thr Asn Ser His Asn Asp Asp Ala Leu Leu Lys Asn Tyr

145 150 155 160

Gly Leu Leu Tyr Cys Phe Arg Lys Asp Met Asp Lys Val Glu Thr Phe

165 170 175

Leu Arg Ile Val Gln Cys Arg Ser Val Glu Gly Ser Cys Gly Phe Arg

180 185 190

Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu

195 200 205

Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr

210 215 220

Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

225 230 235 240

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

245 250 255

Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

260 265 270

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr

275 280 285

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

290 295 300

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser

305 310 315 320

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

325 330 335

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

340 345 350

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

355 360 365

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

370 375 380

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr

385 390 395 400

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

405 410 415

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

420 425 430

Ser Leu Gly Lys

435

1. Фармацевтическая композиция, предназначенная для лечения дефицита гормона роста, которая содержит слитый белок hGH GX-H9, являющийся слитым белком гормона роста человека (hGH) и гибридного Fc, и фармацевтически приемлемый носитель, где слитый белок hGH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, и где этот слитый белок hGH вводится один раз в неделю в дозе от 0,4 до 1,6 мг на кг веса тела пациента.

2. Фармацевтическая композиция по п. 1, где слитый белок hGH вводится один раз в неделю в дозе от 0,5 до 1,5 мг на кг веса тела пациента.

3. Фармацевтическая композиция, предназначенная для лечения дефицита гормона роста, которая содержит слитый белок hGH GX-H9, являющийся слитым белком гормона роста человека (hGH) и гибридного Fc, и фармацевтически приемлемый носитель, где слитый белок hGH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1, и где этот слитый белок hGH (GX-H9) вводится один раз в каждые две недели в дозе от 0,8 до 3,2 мг на кг веса тела пациента.

4. Фармацевтическая композиция по п. 3, где слитый белок hGH вводится один раз каждые две недели в дозе от 1,0 до 3,0 мг на кг веса тела пациента.

5. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 1-4, где фармацевтическая композиция вводится подкожно.

6. Способ лечения дефицита гормона роста, который содержит этап введения слитого белка hGH GX-H9 пациенту с дефицитом гормона роста один раз в неделю в дозе от 0,4 до 1,6 мг на кг массы тела пациента, где слитый белок hGH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1.

7. Способ лечения дефицита гормона роста, который содержит этап введения слитого белка hGH GX-H9 пациенту с дефицитом гормона роста один раз в две недели в дозе от 0,8 до 3,2 мг на кг массы тела пациента, где слитый белок hGH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1.

8. Набор для применения при лечении дефицита гормона роста, содержащий контейнер, который содержит слитый белок hGH GX-H9, являющийся слитым белком гормона роста человека (hGH) и гибридного Fc, и фармацевтически приемлемый носитель; а также вкладыш, указывающий, что слитый белок hGH вводится пациенту один раз в неделю в дозе от 0,4 до 1,6 мг/кг на кг массы тела пациента, где слитый белок hGH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1.

9. Набор для применения при лечении дефицита гормона роста, содержащий контейнер, который содержит слитый белок hGH GX-H9, являющийся слитым белком гормона роста человека (hGH) и гибридного Fc, и фармацевтически приемлемый носитель; а также вкладыш, указывающий, что слитый белок hGH вводится пациенту один раз в каждые две недели в дозе от 0,8 до 3,2 мг/кг на кг массы тела пациента, где слитый белок hGH содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:1.