Патент ссср 306637

 

ОП ИСАНИ Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

Вова Советских

Социалистических

Республик

Зависимый от патента ¹

Заявлено 31 Vll.1967 (№ 1176749/28-13)

Приоритет 08Х111.1966, ¹ 51664/66, Япония

МПК С 12d 13/06

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров

СССР

УДК 663.18(088.8) Опубликовано 11.VI.1971, Бюллетень ¹ 19

Дата опубликования описания 19Х11.1971

Автор изобретения

Иностранец

Кииоши Накаяма (Япония) Иностранная фирма

«Киова Хакко Когио Компани (Япония) Заявитель

Лимитед>

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АДЕНИНОВЫХ СОЕДИНЕНИИ

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается получения аденозиндифосфата и аденозинтрифосфата, которые используются как биохимические реагенты, медикаменты, а также принимают у )астие в синтезе ацетилкофермента А, активного сульфата и холестирина.

Известен способ получения адениновых соединений путем выращивания их продуценгов, например Corynebacterium, Brevibacteriuru «a 1О питательной среде, содержащей источники углерода, например глюкозу, фруктозу, сахарозу, крахмал, мелассу, глицерин и органические кислоты. В питательной среде имеются также источники азота, например мочев l«a, 15 аммониевые соли, гидролизат казеина, дрожжевой экстракт. Процесс идет а присутствии неорганических веществ, необходимых для роста продуцентов, например сульфата аммония, фосфата натрия, и аденина или его производ- 20 ных при температуре 20 — 40 С и рН среды

5,0 — 9,0 с последующим выделением адениновых соединений из культуральной жидкости.

Целью изобретения является разработка 25 процесса получения аденозиндифосфа та и аденозинтрифосфата методом брожения в промышленном масштабе с высоким выходом.

Для этого в качестве штаммов с высокой сг особностью продуцирования аденознндпфосфата или аденозинтрифосфата применяют специальные виды Corynebacterium, Вгел .;acteruim, Arthrobacter u licrococcus.

Микроорганизмы, использованные в изобретении, отличаются тем, что они продуцируют аденозиндифосфат и аденозинтрифосфат в питательной среде в том случае, если выращивание этих микроорганизмов производится в присутствии аденина. Питательная среда содержит определенное количество неорган «leских фосфатов, а также источники азота, неорганические соединения и т п., используемые микроорганизмами.

По предлагаемому способу применяют питательную среду, в которой содержание углсводов как основного источника углерода составляет около 5 — 20 О О. В качестве углеводов можно использовать, например, глюкозу, фруктозу, мальтозу, сахарозу, крахмал, гпдролизат его, мелассу и т. п., а также другис источники углерода, в частности глицерин, маннит, сорбит, органические кислоты, у леводороды и т. д. При этом можно использовать один вид какого-либо углевода, либо смесь двух или более, 306637

Неорганическиг фосфаты, которые вводят по изобретению, содержатся в количестве около 0,4 — 3% в виде Р04. Подходящими неорганическими фосфатами, которые могут найти эффективное применение, являются тринатрийфосфат, мононатрийфосфат, динатрийфосфат, трикалийосфат, монокалийфосат, днкалийфосфат и другие аналогичные неор анические фосфаты. Наилучшими можно считать моно- и дикалийфосфат. В питательную среду аденин или его производные можно вводить на любой стадии процесса выращивания, причем их количество для оптимального напол1 ения аденозиндифосфата или аденозинтрифосфата должно быть около 1 — 10мг/мл. Лденин можно использовать в форме инертных солей, например хлоргидрата или сульфата, либо в виде производных, например, аденозина, которые легко превращаются в аденин в результате специфических свойств, использованных штаммов микроорганизмов. Можно назвать следующие производные аденина: аденинрибозид и аденинриботид, включая TBKже естественные вещества, содержащие адснин.

Истоником азота могут служить различныс неорганические и органические соли нли такие соединения, как мочевина или аммониевые соли (например, хлорид, сульфат, нитрат, фосфат и т. д.), либо одна или несколько аминокислот, либо другие естественные вещества с содержанием азота, как жидкость от замочки кукурузы, дрожжевой экстракт, мясной экстракт, рыбная мука, пептон, бульон, гидролизат казеина, растворимые составные части рыбы, экстракт рисовых отрубей и т. д.

Эти вещества также можно использовать в отдельности, либо в комбинации из двух или более веществ. Иногда может оказаться необходимым также введение в культуральную среду некоторых специфических обязательных питательных веществ, природа которых зависит от взятого микроорганизма. Как пример можно привести различные аминокислоты, как-то: аспарагиновую кислоту, треонин, метионин и т. д., и/или витамины, как биотнн, тиамин, кобаламин и др.

Брошение проводится в аэробных условиях, например, при аэробном всряхивании культуры или при перемешивании погру жной культу.ры при температуре около 20 — 40 С и рН около 5 — 9.

После окончания брожения аденозиндифосфат и аденозинтрифосфат можно выделить из культураной жидкости известными способами, например с помощью ионнообмснных смол, путем осаждения металическими солями, экстракцией, обычной адсорбцией, хроматографией и т. д.

Пример 1. Используют Corynebacterium

sp № 383 АТСС 21084. Ее выращивают при

30 С в течение 24 «ас в культуральной среде, состоящей из 2% глюкозы, 1% пептона, 1, ц дрожжевого эстракта, 0,3% хлористого натрия и 30 мкг/л биотина.

Среда брожения имеет следующий сост ав (в г): 120 глюкозы, 12 К НР04, 12 КН2Р04, 12 MgSO4 7НО, 6 мочевины, 10 дрожжезого экстракта и 30 мкг биотина на 1 л культуральной среды.

Из указанных соединений мочевину стерилизуют отдельно в виде 12%-ного раствора и нриливакгг к 19 мл остальной части фермснтационной среды, которую стерилизуют в автоклаве при давлении 1 кг/см- в течение

10 мин, Выбранной культурой инокулиру1от

20 мл ферментационной среды, причем количество инокулума равно 10 об. %. Брожение проводят при аэробном встряхивании культуры при температуре 30 С. После выращивания культуры в течение 72 «ас добавляют аденин к ферментационной среде в таком количестве, чтобы концентрация его составила

2 мг/мл. Еще через 48 «ас аденозиндифосфат и аденозинтрифосфат накапливаются в ферментационной жидкости в количестве 1,1 и

4,2 мг/мл соответственно.

Фильтрат, полученный путем фильтрования ферментационной жидкости от клеток, пропускают через колонку с сильноосновной анионообменной смолой типа дауэкс 1 (Х2) в хлористой форме. Каждую фракцию аденозиндифосфата и аденозинтрифосфата, которую получают путем элюирования соляной кислотой, нейтрализуют едким натром и затем обрабатывают углеродистым порошком, после чего ее концентрируют и охлаждают. Получают кристаллы натриевых солей аденозиндифосфата и аденозинтрифосфата.

Пример 2. Используют Arthrobacter № 3486 ЛТСС 21085. Условия выравнивания те же, что и в примере 1. В ферментационной жидкости накапливается 2,1 мг аденозиндифосфата и 3,8 мг аденозинтрифосфата íà l,мл.

П р и м ер 3. Используют Miегоcoccus sodonensis АТСС 15932. Условия выращивания те же, что и в примере 1. Количество аденозиндифосфата и аденозинтрифосфата в ферментационной жидкости составляет 0,6 и

1,7 мг на 1 мл соответственно.

Предмет изобретения

Способ получения адениновых соединений путем выращивания их продуцентов, например Corynebacterium, Brevibacterium, на питательной среде, содержащей истоlilHKH углерода, например глюкозу, фруктозу, сахарозу, крахмал, мелассу, глицерин, органиче кие кислоты, источники азота, например мочевину, аммониевые соли, гидролизат казеина, дрожжевой экстракт, в присутствии неорганических веществ, необходимых для роста продуцентов, например сульфата аммония, фосфата натрия, и аденина или его производ нгх при температуре 20 — 40 С и рН среды, равном 5,0 — 9,0, с последующим выделением адениновых соединений из культуральной жидкости, отли«аюи!ийся ем, что, с целью получе306637

Составитель С, Могилевский

Текред Л. Я. Левина Корректор Л. Б. Бадылама

Редактор Л. К. Ушакова

Заказ 2028, !8 Изд. М 859 Тираж 473 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий прп Совете Министров СССР

Москва, 5К-35, Раушская наб., д. 4!5

Типография, пр. Сапунова, 2 ния аденозиндифосфата и аденозинтрифосфата на данной питательной среде, в качестве продуцентов микроорганизмов используют один из штаммов Corynebacter! sp 3483

ОТСС 21084, Arthrobacter sp 3486 АТСС 21085, Micrococcus sodonen sis ATCC 15932.

Патент ссср 306637 Патент ссср 306637 Патент ссср 306637 

 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения пуриновых нуклеозидов, таких как инозин и ксантозин, а также способ получения пуриновых нуклеотидов, таких как инозин-5'-фосфат, ксантозин-5'-фосфат и гуанозин-5'-фосфат, в качестве продуцентов используют штаммы бактерий, принадлежащих как к роду Escherichia, так и роду Bacillus, в которых продукция пуриновых нуклеозидов указанными бактериями увеличена за счет увеличения активности белка, кодируемого геном rhtA (ybiF)

Изобретение относится к биотехнологии и предоставляет собой способ получения пуриновых нуклеозидов, таких как инозин и гуанозин, а также способ получения 5'-инозиновой кислоты или 5'-гуаниловой кислоты, с использованием бактерий, принадлежащих как к роду Escherichia, так и к роду Bacillus, в котором продукция пуриновых нуклеозидов указанными бактериями увеличена за счет увеличения активности белка, кодируемого геном yeaS (leuE)

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к бактерии, принадлежащей к роду Bacillus, обладающей способностью к продукции пуриновых нуклеозидов, способу получения пуринового нуклеозида и способу получения пуринового нуклеотида

 // 395082
Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способам для получения рибоксина (инозина), используемого в медицине при терапевтическом лечении ряда болезней сердца, печени и при нарушениях клеточного метаболизма, таких как лейкопении и др
Наверх