Патент ссср 308582
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
308582
Союз Советских
Социалистических
Республик
Зависимый от патента ¹
Заявлено 15.11.1968 (№ 1218162!28-13) МПК С 07g 7/028
Приоритет 16.II.1967, № ВП Ga/122730, ГДР
Опубликовано 01.VII 1971. Бюллетень № 21
Дата опубликования описания 7.IX.1971
Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров
СССР
УДК 577.157.637.333.1 (088.8) Авторы изобретения
Иностранцы
Карл Цикрик, Иоханн Хубер и Райнер Пиппиг (Германская Демократическая Республика) Иност анное п е п иятие
Заявитель
p pap
«Форшунгсинститут фюр ди Герунгсиндустри, Энзимологи унд технише
Микробиологи» (Германская Демократическая Республика) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТНОГО ПРЕПАРАТА
ИЗ КУЛЬТУРЫ БАКТЕРИЙ MESEHTERICUS SUBTILIS, СПОСОБНОГО ОСАЖДАТЬ БЕЛОК МОЛОКА
Изобретение относится в основном к сыродельной промышленности и касается способа получения биохимическим путем с помощью бактерий группы Mesehtericus subtilis селективно осаждающего молочный белок или же предпочтительно обладающего протеолитическим действием ферментного препарата, который может быть использован при изготовлении сыров в качестве заменителя сычужного фермента. Кроме того, предлагаемый препаратт может быть использован при производстве моющих средств, кормов, в кожевенной промышленности, в медицине.
Известен способ получения ферментного препарата из культуры бактерий Mesehtericus
subtilis, способного осаждать белок молока, путем приготовления посевного материала с последующими культивированием его на производственной питательной среде и выделением препарата из культуральной среды одним из известных способов.
Для получения ферментного препарата с повышенной активностью предлагается посевной материал для сохранения и высева бактерий готовить на свежем обезжиренном молоке, а в качестве питательной среды использовать обезжиренное молоко, овсяный шрот, пшеничные отруби, ячменный шрот и неорганические соли.
Для получения препарата, обладающего
5 предпочтительно протеолптической активностью, в производственну1о питательную среду дополнительно вводят кукурузное молоко, картофельный крахмал и перетертый сырой картофель.
10 Предлагаемый способ заключается в следующем. Бактерии группы Mesehtericus
subtilis получают из различных естественных субстратов, например картофеля, помидор, яблок, молока, сырого казеина, и высевают на
15 следующие питательные среды: агар, приготовленный на мясном экстракте; пептоновый агар; агар, полученный из соединения хпшалазурь-лактоза-мясной экстракт; агар, приготовленный на глюкозном бульоне, и казеино20 вый агар. Полученные чистые культуры бактерий после нескольких пассажей пересевают в лакмусовое молоко и затем определяют протеолитическую активность.
Обнаруживают несколько штаммов
25 Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Bacillus
cereus var, mycoides и другие, — обладающих
308582
Изд. № 943
Тираж 473
Заказ 2248/ii
Подписнос
Сапунова, 2
Типография, пр. после выдержки в соответствующих жидких питательных средах энзимной активностью пор ядка 1: 1000, 1: 3000 и более.
Активный штамм группы МезеЫег1сцэ
subtilis пересевают в обезжиренное свежее молоко, что способствует энзимной адаптации, а затем после окончания инкубационного периода — в колбу на качалке со свежим сепарированным молоком. По достижении необходимой интенсивности полученный материал используют в качестве посевного для выращивания культуры на производственной питательной среде.
Подбирая состав последней, получают культуру необходимой протеолитической активности. Выращивание бактерий в питательной среде следует проводить в аэробных условиях. Ферментаторы необходимо снабдить системой принудительной вентиляции и перемешивающим устройством. Температура выращивания 28 — 37 С, а продолжительность выращивания 18 — 32 час. Энзимная активность равняется 1: 1000 — 1: 3000 в пересчете на активность сычужного фермента. Протеолитическая активность зависит от состава питательной среды.
После окончания процесса выращивания культуральную жидкость отфильтровывают, а фильтрат сгущают. Полученный концентрированный продукт (при концентрации 1: 10—
1: 12) пригоден для использования в сыроделии, его активность 1: 10000 — 1: 15000. Могут применяться также сухие продукты осаждения, имеющие активность сычужного фермента 1:100000 и более.
Чтобы содержащий протеазу фильтрат можно было применять в других областях, его необходимо переработать и очистить. Так, для применения в медицине энзим осаждают с помощью сульфата аммония или танина, или органических осадителей, например ацетона, этилового спирта, изопропилового спирта.
Продукт осаждения можно экстрагировать, например, 1>/в-ным раствором NaC1, затем повторно осадить и после этого высушить.
Если энзим хотят использовать в промышленности, производящей моющие средства или корма, то можно ограничиться сырым (необработанным) продуктом осаждения.
Пример 1. Активный штамм группы
Mesehtericus subtilis пересевают в сепарированное свежее молоко и выращивают при
30 С в течение 30 — 48 час, после чего пересевают в колбу на качалке, содержащую свежее обезжиренное молоко. Затем выращенный материал используют для засевания Iipoизводственной питательной среды, состоящей из 20в/в молока; 1 /о овсяного шрота; 1 пшеничных отрубей; 1 /о ячменного шрота; 0,01 /о
КН2РО4 0 05% (МН ) gSO4 и 0>01 /о Мд504 рН среды после стерилизации б,7 — 7,2.
После окончания процесса выращивания культуры берут пробу и определяют коагулирующую молочный белок энзимную активность ее в единицу времени, причем определение проводят в обезжиренном молоке.
Пример 2. Для получения препарата с предпочтительно протеолитическим действием процесс ведут, как указано в примере 1, но в производственную питательную среду вводят
1% ячменного шрота, 0,8в/, пшеничных отрубей, 0,7% овсяного шрота, 1,2 /о протертого сырого картофеля и 0,01 /о СаС12.
11 р и м е р 3. В ферментаторах емкостью
500 л готовят питательный раствор из 1>/> ячменного шрота, 1в/р овсяного шрота, 20 сепарированного свежего молока, 0,5% картофельного крахмала, 0,02о/о СаСОз и 0,01 /о
hlgSO4. Затем раствор стерилизуют при перемешивании, рН после стерилизации 6,5 — 7,0.
После засева культуры, полученной по примеру 1, ферментатор содержит 200 — 350 л культурального раствора. Содержимое перемешивают и продувают через него воздух (лучше всего в количестве 70 — 120 л/мин) .
Для гашения пены используют растительные, животные масла или пеногасители, приготовленные на силиконовой основе.
Спустя 18 — 28 час процесс выращивания оканчивается. Культуральный раствор отфильтровывают, фильтрат концентрируют, например, в соотношении 1: 10. Затем полученный концентрат с активностью 1: 10000 — 1: 20000 в пересчете на активность сычужного фермента или продукт, осажденный из концентрата, с активностью 1: 100000 поставляют сыродельной промышленности.
Предмет изобретения
1. Способ получения ферментного препарата из культуры бактерий /v!esehtericus
subtilis, способного осаждать белок молока, путем приготовления посевного материала с последующими культивированием его на производственной питательной среде и выделением препарата из культуральной среды одним из известных способов, отличающийся тем, что, с целью получения ферментного препарата с повышенной активностью, посевной материал для сохранения и высева бактерий приготовляют на свежем обезжиренном молоке, а в качестве питательной среды используют обезжиренное молоко, овсяный шрот, пшеничные отруби, ячменный шрот и неорганические соли.
2. Способ по и. 1, отличающийся тем, что, с целью получения препарата, обладающего предпочтительно протеолитической активностью, в производственную питательную среду дополнительно вводят кукурузное молоко, картофельный крахмал и перетертый сырой картофель.
