Ыц- в. б. иваков, к. л. шаханина и в. а. чибисова i

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

G01N1/38 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Со?сг Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №вЂ”

Заявлено 29.Х11.1970 (№ 1606989/31-16) с присоединением заявки №вЂ”

Приоритет

Опубликовано 30.111.1972. Бюллетень № 12

Дата опубликования описания 18 т/.1972

М. Кл. С 12k 9/00

G 01п 1/28

Комитет по волам изобретений и открытий при Совете Министров

СССР

УДК 612..398.1:616-276 (088.8) Авторы изобретения

Ю. Е. Скляр, I. II. Михайлов, M. Н. Мейсель, В. Е. Барскн?йт вЂ” --В. Б. Ива?- .ов, К. Л. 111аха??ина и В. А. Чибисова

Заявитель

ФЛУОРОХРОМ ДЛЯ Л1ОМИНЕСЦЕНТНОЙ МЕТКИ БЕЛКА

Пр еда? ет изобретения

Изобретение относится к микробиологии, в??русологии, иммунологии и гистохимпи.

Известно применение ряда ксянтсновых красителей для люм??несцепт??ой метки бслка.

В изобретении предлагается использовать

N,N,N,N -тетраэтил - 4-(дихлор-силл - триазпниламино)-розамин, что позволяет расширить ассортимент флуоресцентных метчиков белка, Преимуществом предлагаемого флуорохром а является наличие интенсивной красно-оряпкевой флуоресценции, хорошо конгрястирующей с зеленым флуоресцепно;?.

Пример 1. 50 л я флуоро.;.рома растворяют в 5 мл смеси спирта и ацетона (1: 1) и по каплям при перемешивяпнп добявлгнот к раствору 1 г глобулинов в 0,1 .ноль фосфатпом буферном растворе (рН 8,6). После перемепшван ия в течение 2 час при ком??атпой те.шературе несвязанный флуорохром удаляют на сефадексе Г-25 в 0,01 л?оль фосфятном буферном растворе (рН 7,5). Получе?т? ые сыворотки используют для исследования под JI?oil?IIIBcIiентным микроскопом, например МЛ-2.

Препараты сибиреязвен?юй, туляремийной и других сывороток дают ?II?TO?lc?IBl?DB краснооранжевое свечение, оцениваемое визуально по

4-крестовой системе на 3 вЂ” 4 креста. Аналогичные результаты дает конъ?огяция с бычьим альбумином.

Пример 2. Гистологические препараты (мазки, отпечатки, срезы) помещают в 0,02 о/оный раствор флуохрома в 0,15 лтоль фосфатно;I буферном растворе (рН 5,7 вЂ” 6,0), выдерживщгт 1 кас прп 60 С и тщательно отмывают спиртом и водой. Препараты рассматривают в люмипесце: тный микроскоп, используя для возбуждения флуоресценции синюю л инию ртути (436 ил?). Препараты обладают интен10 сивпсй флуоресценцисй в красной области спектра. Распределение интенсивности флуорссцепцип соответствует распределению концсптряцп?? белков па препарате.

Пример 3. Для обнаружения мякроко15 лнчсств белков коньюгацию проводят в растворс (росфатного буфера с рН 6,0 при соотношении белка и флуорохрома 1: 10 по весу. Окраi?Illa;;I;IIe проводят в течение 1 час при 60 С.

Нссвязан ый краситель отделяют на сефадексе

20 Г-25. Продукт реакции флуорохрома с белком обладает интенсивной флуоресценцией, позволяюп;ей обнаружить малые концентрации бело

Применение N,N,N,N -тетраэтил-4- (дихлорсилт и-трпазиппламино) -розамина в качестве флуорохрома для люминесцентной метки бел30 кя.