Способ получения вещества, обладающего гепариноподобным действием

 

342629

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союа Советскими

Социалистическим

Республии

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 01Х!1.1970 (№ 1456635/31-16) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 22.Ч1.1972. Бюллетень № 20

Дата опубликования описания 18Х11.1972

М. Кл. А 611т. 17/18

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров

СССР

УДК 615.45.615.361.36 (088.8) Авторы изобретения К. А. Шевцова, Н. Н. Пятницкий, В. М. Жминченко, М. А. Иноземцева, К. М. Лакин, В. С. Ефимов, В. М. Царенков, H. М. Рукина, 3. Б. Идельчик и А. Т. Мокроусова

Всесоюзный научно-исследовательский институт мясной промышленности

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО

ГЕПАРИНОПОДОБНЫМ ДЕЙСТВИЕМ

Изобретение относится к способам получения биологически активных веществ, а именно к получению биологически активного вещества, обладающего гепариноподобным действием.

Известен способ получения вещества, обладающего гепариноподобным действием. Предлагаемый способ отличается от известных тем, что легкие животных подвергают экстракции водным раствором хлористого натрия при рН 8,5 — 9, подкисляют до рН 2,5 — 3 осадок обрабатывают раствором, содержащим хлориды натрия и кальция при рН 9—

9,5 с последующим осаждением 96 -ным спиртом геп арин а-сырца, который обрабатывают протеолитическими ферментами при рН 8,5—

9, доводят рН до 2,3 — 2,5, центрифугируют, в раствор добавляют спирт 96 -ный при рН 8—

8,5, выделенный осадок обрабатывают двууглекислым натрием, пергидролем, спиртом

96 -ным при рН 7,6 — 8 отделяют маточный раствор, добавляют спирт 96 -ный в количестве 50% к объему раствора, отделяют осадок, обрабатывают водным раствором хлорида двухвалентного металла, спиртом 96 -ным, кипятят с водным раствором двууглекислого натрия и осаждают целевой продукт спиртом

96 -ным при рН 6,5 — 7.

Сущность изобретения заключается в том, что биологически активное вещество гепарнноид выделяют из отходов производства гепарина.

Пример, 150 кг промытых от сгустков крови легких измельчают и экстрагируют

5 300 л 5%-ного раствора поваренной соли при рН 8,5 — 9,0, устанавливаемым добавлением

20% -ного раствора едкого натра при температуре 60 С в течение 1,5 часа. Осаждение из экстракта гепарина-сырца производят соля10 ной кислотой при рН 2,5 — 3,0. Полученный сырец обрабатывают 15% -ным раствором хлористого натрия с добавлением раствора

20% -ного хлористого кальция (1% и объему раствора) при рН 9,0 — 9,5 при 70 С в течение

1s часа, затем центрифугируют. Осадок выбрасывают. В растворе устанавливают рН 2,3—

2,5 и центрифугируют. Осадок выбрасывают.

В растворе устанавливают рН 8,0 — 8,5 добавлением 20%-ного раствора едкого натра и

20 осаждают спиртом 96 -ным (150% к объему) гепарин-сырец. Центрифугируют. Гепарин-сырец подвергают протеолизу при рН

8,5 — 9,0 в течение 24 час при температуре

37 С. Затем добавлением 2н соляной кислоты

25 устанавливают рН 2,3 — 2,5, выпавший осадок отделяют центрифугированием. В растворе устанавливают рН 8,0 — 8,5 добавлением

20%-ного едкого натра, вносят натрий хлористый из расчета 3 г на литр и осаждают спирЗО том 96 -ным из расчета 170% к объему рас342629

Предмет изобретения

Составитель Т. Головина

Техред 3, Тараненко

Корректор Л. Орлова

Редактор И. Бродская

Заказ 2181/2 Изд. Ко 936 Тираж 406 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр, Сапунова, 2

3 твора. Выпавший осадок растворяют в десятикратном объеме дистиллированной воды и добавляют двууглекислого натрия из расчета

40 г на литр раствора. Смесь нагревают до кипения, охлаждают, осадок отфуговывают.

Раствор обесцвечивают добавлением 4 "/о (к объему) 30 -ного пергидроля при периодическом перемешивании в течение 12 час, затем нагревают до 70"С и охлаждают до

20"С, После чего в растворе устанавливают рН 7,6 — 8,0 добавлением 2 н соляной кислоты, вносят хлористого натрия из расчета

10 г на литр раствора и саждают спиртом

96 -ным (100 " к объему раствора). Выпавший осадок отделяют центрифугированием и растворяют в двадцати объемах дистиллированной воды. В растворе устанавливают рН

6 — 7,5 добавлением 2 н соляной кислоты, охлаждают до 5 С, добавляют хлористый натрий из расчета 3 г на литр раствора и осаждают охлажденным до 50"С спиртом 96-ным из расчета 70 к объему раствора. Выпав- ший в осадок гепанин отделяют центрифугированием, а из спиртового маточного раствора (отходы производства гепарина добавлением спирта 90 -ного 50о/о к объему раствора) выделяют фракцию гепариноида в осадок. Осадок отделяют центрифугированием и обрабатывают 10 -ным раствором хлористого цинка. Полученную смесь центрифугируют.

Прозрачный раствор осаждают спиртом

96"-ным (100 /о к объему раствора) при рН

6,5 — 7,0, устанавливаемым добавлением 2 н соляной кислоты и отстаивают при комнатной температуре 10 — 12 час. Выпавший осадок отделяют центрифугированием, растворяют в

8 /о-ном растворе двууглекислого натрия при кипячении, охлаждают и центрифугируют.

Прозрачный раствор осаждают спиртом

96 -ным при рН 6 5 — 7,5, устанавливаемым

4 добавлением 2 н соляной кислоты и отстаивают при температуре 5"С в течение 24 час.

Осадок гепариноида отделяют центрифугированием, промывают охлажденным до 5"С спиртом 96"-ным и сушат эфиром.

Выход препарата гепариноида в порошке—

228,6 г.

Активность порошка гепариноида характеризуется тем, что снижает содержание холе1О стерина в тканях и органах кроликов-самцов после шестидневного внутривенного введения при суточной дозе 100 мг/кг по сравнению с контрольными кроликами в аорте на 32 /о, в печени на 49%, а надпочечниках на 48,5"/о.

Способ получения вещества, обладающего гепариноподобным действием, отличающийся тем, что легкие животных подвергают экстракции водным раствором хлористого натрия при рН 8,5 — 9, подкисляют до рН 2,5,— 3 осадок обрабатывают раствором, содержащим хлориды натрия и кальция при рН 9—

9,5 с последующим осаждением 96 -ным спиртом гепарина-сырца, который обрабатывают протеолитическими ферментами при рН 8,5—

9, доводят рН до 2,3 — 2,5, центрифугируют, в раствор добавляют спирт 96 -ный при рН 8—

8,5, выделенный осадок обрабатывают двууглекислым натрием, пергидролем, спиртом

96 -ным при рН 7,6 — 8 отделяют маточный раствор, добавляют спирт 96 -ный в количестве 50 /о к объему раствора, отделяют осадок, обрабатывают водным раствором хлорида двухвалентного металла, спиртом 96 -ным, кипятят с водным раствором двууглекислого натрия и осаждают целевой продукт спиртом

4о 96 -ным при рН 6,5 — 7.