Питательная среда для выращивания шродуцентов литических ферментов

 

О П И С А Н И Е 383726

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Зависимое от авт. свидетельства ¹!

М. Кл, С 12Ь 3 00

С 1:d 13!О

Заявлено 23.XI.1971 (№ 1718213/28-13) с присоединением заявки М

Приоритет

Опубликовано 23.Ч.1973, Бюллетень _#_å 24

Дата опубликования описания 8,VIII.1973 комитет па делан изобретеиий и открытий при Совете Министров

УДК 577.15.07(088,8) Авторы изобретения

Заявитель

О. В. Кислухина и К. А. Калунянц

Всесоюзный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых веществ

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ

П|РОДУЦЕНТОВ ЛИТИт1ЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ

0,1 0,02

0,1 «-0,02

Остальное

Изобретение относится к производству ферментов.

Известна питательная среда для выращивания продуцецтов литических ферментов, например Bacillus subtilis, Bacillus mesentericus, содержащая источник углерода — крахмал, органические соединения азота, семиводньш сульфат магния и воду.

Целью изобретения является повышение активности продуцируемых ферментов.

Достигается это тем, что предлагаемая питательная среда дополнительно содержит двузамещенный фосфорнокислый аммоний, хлористый калий и хлористый кальций.

В качестве органических соединений азота питательная среда содержит экстракт соевых бобов, а также казеин,и сухие дрожжи.

Компоненты питательной среды взяты в следующих количествах (г/л):

Двузамещенный фосфорнокислый аммоний 4,0+0,1

Хлористый калий 0,6 1-0,06

Семиводный сульфат магния

Хлористый кальций

Вода

Дополнительно питательная среда содержит подсолнечное масло.

Пример 1. 40 г соевых бобов помещают в колбу, приливают 200 лгл 0,1%-ного NaOH, кипятят в течение 1 час, затем отделяют экстракт путем фильтрации на воронке Бюхнера.

10 г растворимого картофельного крахмала суспендируют в 200 лтл воды и клейстеруют путем подогреванпя суспензии до 85 C при постоянном перемешивании на водяной бане.

Экстракт соевых бооов и раствор клейстерн10 зованного крахмала сливают вместе, îiëaa дают до комнатной температуры и добавляют:

40 лтл 10%-ного (Н4)2 НРО4, 6 лгл 10%-ного

КС1; 1 и 2 10% -ного Мд3047НзО; 1 лтл 10%ного СаС4 и водопроводную воду до объе15 ма l л.

В среде устанавливают рН 7,0 прп помощи концентрированного раствора СНзСООН, а затем разливают ее в колбы Эрленмейера емкостью 300 лтл (по 100 лл в колбу) и стерн20 лизуют в течение 1 час при 0,5 ати.

Охлажденную до 35 С стерильную питательную среду засевают водной суспензней культуры Вас. subtilis N, выращенной на скошенном сусло-пептонном агаре. При прнго25 товлении суспензии в пробирку 18+180 л лт с культурой вливают 20 л1л стерильной водопроводной воды, н в колбы со средой вносят по

1 лтл такой суспензии.

Выращивание проводят на качалке со ско30 ростью вращения 160 об/мин при темпсрату3i8 3726

4,0+-0,1

0,6+0,06

Составитель Г. Субботина

Техред 3. Тараненко

Корректор Е. Талалаева

Редактор Н. Спиридонова.Заказ 2I40/6 1зд Ы 1587 Тираж 467 Подписное

ЦНИИПИ Когиитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, )К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр, Сапунова, 2 ре 37+-1 С в течение 16 час. Активность литических ферментов в фильтрате культуры составляет 2720 ед.ЛА/мл.

Пример 2. Способ приготовления питательной среды и посевного материала, а также режим выращивания культуры те же, что и в примере 1.

В качестве продуцента литических ферментов используют штамм Вас. sul)tllls 402. Активность лптических ферментов в фильтрате культуральной жидкости составляет

5000 ед. ЛА/мл.

Пример 3. 20 кг соевых бобов помещают в аппарат, име1ощий рубашку для подогрева паром и нижний сливной штуцер. В аппарат вливают 100 л воды и добавляют 10 г NaOH.

Зкстракцию соевых бобов проводят в течение

1 час с момента закипания, а затем экстракт переводят в ферментер емкостью 1000 л и добавляют: 2 кг (NH») НРО»- 0,3 кг КС1;

0,05 кг NgSO»7H>O; 0,05 кг Са Cl>, воду до объема 500 л и затем 5 кг растворимого картофельного крахмала. Среду перемешивают

15 мин, устанавливают в ней при помощи концентрированной уксусной кислоты рН 7,2, приливают 0.5 л подсолнечного масла и стерилизуют при перемешивании в течение 1 час при температуре 116 — 120 C.

Охлажденную до 40 С стерильную питательную среду засевают водной суспепзией культуры Вас. subtilis 402, выращенной в колбах Эрленмейера емкостью 750 мл на пшеничных отрубях 71%-ной влажности (по 20 г воздушно-сухих или 60 г увлажненных отрубей в колбе) в течение 2 суток при температуре 37 С.

Ферментацию ведут 12 час при режиме; температура 36 1-1 С, давление в аппарате 0,3—

0,5 ати, расход воздуха — 0,5 объемов в 1 мин, перемешивание постоянное (180 об/мин).

Активность литических ферментов г, фильтрате культуральной жидкости составляет

1870 ед.ЛА/мл.

Пример 4. В ферментер емкостью 1000 л наливают 500 л воды и вносят (кг): растворимый крахмал — 5; (NH») НРО» — 2; КС1—

0,3; МАЗО»7Н О вЂ” 0,05; CaC1 — 0,05; технический казеин — 1; сухие медицинские дрожжи — 0,25. Среду перемешивают 15 мин, а затем при помощи концентрированной

СНзСООН устанавливают в ней рН 7,2, добавляют 0,5 л подсолнечного масла и стерилизуют при постоянном перемешивании и температуре 116 †1 С в течение 1 час.

Посевной материал приготавливают так же, как и в примере 1, в качестве продуцента литических ферментов используют культуру

Бас, subtilis N.

Режим ферментации: температура 36 — 37 С, расход воздуха — 0,5 объемов в 1 мин, давление в аппарате 0,3 — 0,5 ати, постоянное перемешивание (180 об/мин), Продол)кительность выращивания 12 час, активность литических ферментов в фильтрате культуральной жид15 кости 1200 ед. ЛА/мл.

Предмет изобретения

1. Питательная среда для выращивания продуцентов литических ферментов, например

20 Bacillus sut)tilis, Bacillus mesentericus содер)кащая источник углерода — крахмал, органические соединения азота, семиводный сульфат магния и воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения активности продуцируемых

25 ферментов, среда дополнительно содержит двузамещенный фосфорнокислый аммоний, хлористый калий и хлористый кальций.

2. Питательная среда по п, 1, отличающаяся тем, что в качестве органических соедине50 ний азота она содержит экстракт соевых бобов.

3. Питательная среда по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве органического соединения азота она содержит казеин и сухие

35 дрожжи.

4. Питательная среда по пп. 1 — 3, отличающаяся тем, что ее компоненты взяты в следующих количествах (г/л):

40 Двузамещепны)1 ч)осфорнокислый аммопий

Хлористый калий

Семиводный сульфат магния 0,1+0,02

Хлористы и кальций 0,1+-0,02

Вода Остальное

5. Питательная среда по пп. 1 — 4, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит

50 подсолнечное масло.