Способ получения витамина е

 

Социалистических республик (11 430678

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

"(!

i: (6l) ooo Te Hoe K RBT. свид-ву (5 I ) М. Кл.

С 07 D 311/72

А 6 1 К 3 1/355

I (22) Заявлено 23. 05. 72 (21) 1783343/31-16

1 с присоединением заявки ¹ йаудврвтвюи1ьй ивиитвт

С0СР ае лвлан изавривнив и вткрытий (23)ПриоритетОпубликовано30. 11.79. Бюллетень № 44 (53) УДК 577 161.3(088.8) Дата опубликования описания,03. 12. 79 с

И. И. Иванов, Л. Б. Рубин, Ю. Э. Швинка, М. Н. Мерзляк, Н. П. Адамова, А. Б. Рубин и K. А. Калунянц (72) Авторы изобретения

Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени государственный университет им. М. В. Ломоносова (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВИТАМИНА E

Изобретение относится к области по-. лучения лекарственных препаратов.

Известен способ получения витамина Е из растительного сырья, например из зерен пшеницы, заключающийся в том, что исходный материал экстрагируют смесью хлороформ-метанол (2:1), омылятот хлороформную фракцию, экстрагируют целевой продукт изоктаном, экстракт вьщаривают, остаток растворяют в хлоро- )g форме и используя сефадекс LH-20., выделяют активные фракции. Выход продукта недостаточно высок — 0,009 мг/г от сухого веса сырья.

Цель изобретения — повышение выхода д5 витамина Е из сырья.

Зго достигается тем, что в качестве исходного сырья используют культуры мнкроорганизмов, например рода Ect,о1Ыж+лйонр1гйе или Qhodopseudo onoe, 20 выращенные при дополннте ьйом освещении в логарифмическои или стационарной фаза роста светом спектрального диапазона 270-800 нм и интенсивностью не

2 более 10 эрг/см,с в течение от

1Е х

-9

10 с до 48 ч, и выделяют целевой продукт после разрушения клеток через интервалы времени от 1 мин до 48 ч после прекращения освещения.

П р, и м е р 1. Пурпурные серные бактерии Ес1о111огhodasð t.d в порозЪп1.

"ко выращивают на среде Ларсена,. имеющей следующий состат, вес.%:

NHoCK О, 1

КН РО 0 1

Мц-СЕ, 0,05

С а CC 0,01

МаС6 0 1

Na & 9H О 01

Na НСО 0,4

6Н O 0,003

С Нь COO Na 0,2

-9

Микроэлементы О, 1. 10

Н,О 100

Культивирование ведут при 30 С рН среды 8,0-8,2, B анаэробных условиях при освещении светом от лампы накали10

П р и,м е р 2. Культуру бактерий

EctotН1огНобо РФц s9opos8nr4owi выращивают по примеру 1 на стапионар3 4.ч06 ванин 60 Вт интенсивностью

2 10 эрг/см с. В конце логарифми4 ческой фазы (24-30 ч) роста бактерии, культивируемые в кварцевых сосудах емкостью 0,6 л, подвергают действию дополнительного света спектральной области 330-690 нм от лампы БУФ-30 в сочетании со светофильтром БС-3

I интенсивностью 1050 эрг/см, с в те ченйе 12 ч. После воздействия дополнительного света бактерии на 2 ч помешают в исходные условия, после чего клетки осаждают на центрифуге, разрушают ультразвуком 20000 кГП в течение

4 мин. Дезинтегрированные клетки под15 вергают экстракции смесью хлороформ— метаноо (2:1) в течение 20 мин на холоде 4 С на качалке. 1Хентрифугированием 4000х20 мин разделяют фракции.

Нужную фракцию (в хлороформе) отби20 рают и частично дыпаривают под вакуумом при 30 С. К раствору добавляют пирогаллол и КОН. Производят омыление, для чего раствор кипятят 3 мин, на делительной воронке отделяют фракцию неомыляемых липидов, растворяя их в изооктане. Зту фракцию отделяют, выпаривают и растворяют в хлороформе. Пробу в объеме 0 1 мл запускают в хрома-тографическую колонку, наполненную Be, 5;— бех L Н-20. Происходит разделе =ние фракций неомыляемых липидов на Отдельные компоненты. Отбирают нужную фракцию, содержащую витамин Е (сС-токоферол) и производят количественную опенку выхода продукта. В данном режиме выход витамина Е составляет 1,2 мг на 1 г сухого веса. Идентификацию витамина Е,, например + гокоферола, проводят на основании данных тонкослойной хроматографии, гель-фильтрации и

УФ-спектров поглощения. Тонкослойную хроматографию проводят на пластинках

51 tUfof (Чехословакия) в хлороформе.

Для сЯ-токоферола Я < 0,6. Гельфильтрацию Осуществляют на колонке (l,0õ60 см) с Bep Иойех 1.Н-20 (Швеция), подвижная фаза — хлороформ.

Величина Объема выхода cL токоферола 30,5-31,0 мл. Спектр поглощения характеризуется одним четким максимумом при Д295 нм. Во всех случаях используют синтетический < . токоферол в качестве свидетеля.

78 4 ной фазе (40-50 ч) роста, культуру освещают дополнительным светом спектральной области 330-360 нм в течение 24 ч интенсивностью 610 эрг/см; с. Через

1 ч после прекращения воздействия донолнительным светом бактерии осаждают, дезинтегрируют по примеру 1. Аналогично проводят экстракцию липидов и разделение их на хроматографической колонке, В этих условиях выход витамина Е составляет 0,9 мг на 1 г сухого веса.

Идентификаци ю витамина проводят по примеру 1.

Пример 3. Бактерии культивируют как указано в примере 1. Культуру освещают вспышкой дсполнительного света спектрального дн азона

1000 нм от лампы И-.й! . .. Г .. i"r- .;.ивностью 10 эрг/см с = -e etre=.:

15 2

-5

10 с. Выделение фрак:,:, ;-:„содержащей витами Е проводят спуст.;. 10 мин после

Освещения дополни Га льйым светОм В этих усло=. -.; в-".. :.д витамина Е составляет 0, . ": .: ; сухого веса.

".:.. а р 4. Бактерии культивиру..о, rro примеру 1. Освещение дополнительным светом проводят от импульсного источника "Корона-1» 337 нм, дли-9 тельность вспышки 5 10 с, интенсивность

10 эрг/см.с, частота следования вспышек

100 Гц, длительность облучения 10 мин.

Выделение фракции, содер кащей витамин Е проводят спустя 2 ч после. прекращения освещения дополнительнь|м светом. Выход витамина Е составляет 0 07 мг на 1 г сухого веса.

Пример. 5.Бактерии Rhodopaerrdomonoy бР (штамм tr ) выращивают на среде

Ларсена; описанной в примере 1 по методике, изложенной в этом же примере.

Культуру бактерий освещают на логарифмической стадии роста светом спектрального состава 330-630 нм интенсивностью 10 эрг/см.с в течение 20 ч. Выделение фракции, содержашей витамин Е, проводят спустя 4 ч после прекращения дополнительного освещения. Выход витамина Е составляет 0,8 мг íà 1 г сухого веса.

Формула изобретения

Способ получения витамина E экстракцией исходного сырья хлороформметанольной смесью и выделения и;. Омыленного экстракта хроматографиче ..кими методаСоставитель С. Шенева

Редактор Л. Письман Техред Л. Алферова КоРРектоР Ю. МакаРенко

Заказ 7273/2 Тираж 513 Подл исное

LMHHHH Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва; Ж-35, Раушская наб.; д. 4/5

Филиал ППП Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

4306 7 ми, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, в качестве исходного сырья используют культуры микроорганизмов, например рода Ис1о1Мог подовргае или

RhodopOeudornenos, выращенные при дополнительном освещении в логарифмической или стационарной фазе роста светом спектрального диапазона 270-800 нм

16 2 и интенсивностью не более 10 эргlсм.с

-9 в течение от 10 с до 48 ч, и выделяют целевой продукт после разрушения клеток через интервалы времени от 1 мин до

48 ч после прекращения освещения.