Способ получения антибиотического препарата для лечения и профилактики дифтерии
_#_ 69008
1<ласс 91, ЗО h, 6
СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЪСТВУ
Л. А. Зильбер и Л. М. Якобсон
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИЧЕСКОГО
ПРЕПАРАТА ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ
ДИФТЕРИИ
Н;ь333 Зе3333 2(I;I 33vv("ghk 1 34II г:Iil Л,"3 я3 3334 I 354 13 33333333«3е43(ТВ33
83(Р;Зв3333»33;3не33п33 (:(;(:Н
Как известно, все попытки получения препаратов, подавляю3цих дифтерийные микробы в полости зева и носа, до сих пор не дали результатов.
Согласно изобретению. предлагается препарат, обладающий этими свойствами. Исходя из Tolo, что красная кровь животнь3х, болеющих дифтерией, не изменяется при этой инфекции, и полагая, что эта невосприимчивость обусловлена наличием в эритроцитах веществ антибиотического типа, выделяемых из эритроцитов по методу любо-Кониковой 0?1;I получен препарат (названный «Эритрин»), бактерицидный в отношении дифтерийной пало 3ки, а также стафилококков, стрептококков и др.
Предлагаемый способ получения препарата заключается в следующем.
Кровь быков, овец, свиней и других животных дефибринируют обычным способом, затем центрифугируют 20 — 30 мин., плазму декантируют, а эритроциты, оставшиеся в осадке, обрабатывают концентрированной соляной кислотой (удсльный вес 1,19) из расчета 100 лл кислоты на 1 л эритроцитов.
Кислоту В 1 ив ают Всю cp(13 3 при непрерывном помешивании. чтобы не получилось вязкого коагулята.
После обработки кислотой, эритроциты представляют собой кашицеобразную массу темнокоричн Bo го цвета.
Массу эритроцитов, обработанKHC IOTOII, OCT3B,IIIIOT IlPH натной температуре в течение суток, послс чего ее фильтруют, заливают по весу 8-кратным количеством ацетона и энергично встряхивают.
Экстракцию ацетоном производят в течение 18 час. при комнатной температуре.
Ацетоновую вытяжку темнокоричневого цвета отфильтровывают через бумажный фильтр и полученный фильтрат упаривают в вакуум-установке до появления опалесценции.
Сгугценный экстракт быстро вливают 2,5 — 3-кратный объем 5%-ного раствора хлористого натрия, что вызывает почти немедленное появ№ 69(08 лен«с «оричнсво-черного ос3 1«3, иногда падяющегO па дно крупны3IH .",!0«ЪЯЫИ.
Солевой раствор, в котором идет
ОСЯжДСНIIС, ОТСTcl il«ci(Т .Я (1 ТКИ.
К(1 к и р я вl!ло, 3?1 этОт (pÎK Bc J) KHÿ51 чя(сть я<и («Ости успсвает просВстлиться и сс уд le!ÿþò,äå«3í T3k(«cé. г!Иж(!ий слой жидкости цснтриф) ГНР) !ОТ, ос3,10« ПРОхlыВЯIОт . и сти.(,п!ров !(filo«, Во (Он и СОбиряют н ci б<) !1.!;1: (х чя((овых сТрК 1 ях иг! и
Чя f(! Kc! Х 1 1Ст!) «, «ATOP ЫС П0 1еlцяlОТ В суш«.)ьный ш«яф пя 6 — 18 часов при 35 — 40 . Предварительно подСХ Н!С«!lb!i! ÎC3Д01\ IOXICI((3!OT 3c(1 ЕХI пяд фосфорны,(;шг«др! дом «à неCK0, II>KO (Нсif,. i51 OKOkfc13TPP(hf f01 О просушивяния. 113 о «!Ого литра эритроцитОВ 11ри обработке прсдляГас10 — 12 а ктив«огo бяктс1) ицидного «репа р ата — эритрипя.
Пр« ранении В эксикаторс пр« температуре 16 — 18" «репарат со-.
П J) C П С1 p ci T Г! J) И ХI Е П я К) Т дЛ I Т С р 3ПИИ И IIPO(P«.1(IКТИКИ !(!1(РТСРИИ В Ви 0,25 ь-Hы . р;(створов. ПрС «clj)clT раотВОрИМ В ВОДНО« среде при рН 7,6 — 7 8, а та«?кс в ЭТИ.10ВОМ СПИ Р Г(.. Стандартный раствор препарата, иду!ций дг!я практических целей, ГОТОВЯТ В рясTBOpC 3,8 "» CIÈÌOÍHOКИС,10ГО Н(1ТРИЯ, ПРС,(в()РИТСЛЬНО ДО BC;(CkHIOXI )О КИПСПИЯ. 0,25 я сухого препарата ряC T B 0 p 5 (IO T I l p H K I i fI H H C I I H H B 1 00 сН л 3,8" -ного раствора л«монно-кисло-! о натрия. Кипячение 3 тсчсчше 2 — 3 мип. значительно повып!аст растворих!ость препарат 1, После охла?кдсния раствор фильтруют через ватный фильтр. 110?кно также растворить препарат в 0,25" -ном растворе соды, а также в фосфатных буферных ра створ ах с р Н 7,6 — 7,8. Растворы препа рата в лимоннокислом натрис сохраняют активность 7 дней, в фосфатпом буфере — 2 — 3 дня, в 0,25% соды 1 — 2 дня, в спиртс 2 — 3 дня. Для испытания бактериостатического действия предлагаемого препарата егO растворя!от в 3,8 лиЪIОННО-!<ИС:101 0 «ciT() ИЯ 113 Р?1(! TH содержания 2,5 ля препарата в 1 сл" раствора ли моши)-кис,того натрия (0,25" -«ый раствор) . Затем в отдельные прооирки с ! О лл расплавленного агара при 45 — 50 Вносят I(0 0,1 kt»I Ил«0,2,11.! Р яс1 ВОР;1 «1)спci P ?lт(1 11 Р 131 ив аlот I1О 1 ci (I I К С! Х i . Лгяровыс пластинки зяссвают сплошным f 330(lîì дифтерий«ой I13i, fo !!<и H cIcJ)c3 16 — 18 час. p0(т 1 отмечают результаты. Полное отС) ТСТBHC J)OCT 1 1! IH ЗЯЫСТНСIЯ (ГО 33 !Cp?K Kci cBH. ñ! с (ъств1 (0T 0 б31<териостатичсских свойствах препарата. КО«тр0,1см слу?кит посеВ Tp. < кс ;I«l ;(c iicTBH5l lIpP(!3 р 3Т3 0,2 лл 0,20"» -Ho го раствора прспарята разводят в 2 л.l бугп,он?1 и дслаlот р513, пос, I( доввтс Ibllblx двухкрятных рязвсдеklH«так, чтобы в перво««po()HpK(- ()hiЛ0 РЯЗВСДСПИС О(НOВ(fо! РЯСТВОря 1:10, во второй 1:20, в третьей 1:40 и T. J., JO p33BC, CH« 51 1:320 6-й пробирке. Во Все пробирки вносят по 0,1 1(,г суточной бульонной культуры днфтерийно« палочки, что равняется 600 — 800 млн. клеток на 1 лл. 1ля контроля 1 л г бульона без препарата засевают тем жс количеством дифтсрийной палочки. Через час. из каждой пробирки после встряхивания высевают по 0,1 л!.г на отдельную чашку с ягаром; па следующий день и затем чсре, 48 час. определяют результаты. Г1олное отсутствие роста в посеве из (яивысшего разведения препарата считается его титром. Например, посев из 5-ой пробирки .нс дал роста: в 5-ой пробирке разведение основного раствора препарата 1:160, учитывая, что основ«ой раствор препарата разведен в 400 раз, определяют титр эритрина 1:64000 или концентрацию препарата в 1,1!л, равную 15> 8;. Зя условную единицу активности принимают наименьшую концентрацию препарата, проявившую бактерицидность в вышсопи 3HHb(x.х? 69008 ст?п!ля? ) !Иь!к условияк, т. с. бактсрицилное действие препарата в отношении 600 м 111. клеток дифтерийной палочки в 1 ?1,1!.что соответствует концентрации препарата 31,75, в 1 !!.1 или 32 единицы Hp 1 1!г сукoгo веса. В суком вил« эритрин сокрянястся в эксикяторс нал пятифосфорпым ангилрилом или над клористым кальцием при комнатной те.,I пературс пе более 6 мсс. Посл«6 мсс. необкодимо вновь ! ?ровс рит?: его активность. Растворы эритри??а в 3,8 ) лимонно-кислого натрия сохраняют в проклял!юх! М«сте; ик 0)I?0«TI:— 7 лией. В за! BII«IHIocT?? OT !Оке?г?1?3яциц проис«ся применение эритрина осу?ЦССТВЛ?ЦОТ СМ ЯЗЫВЯНИСМ, Кс?ПЯНИЕМ, пульвсризациеli или полосканием. Зр?!Трин применяют В теплом соСТOSIII??lf, ЛЛЯ ?СГО ПРООИРК" С ПРСпаратом перед употреблением помешают в стакан с горячей водой. При дифтерии зева применяют пу,тьверцзацию и смазывание. Полость рта и зева пульверизируют теплым раствором в течение 10— 15 сск., после чего зев смазывают phlx,.ûì, пушистым, ватным тампоном. Тампон надо обильно смачивать препаратом. При дифтерии носа препарат набирают в пипетку и вводят в нос больного, с!ежац?его на спине с запрокинутой головой. Зля предупреждения образования корочек, на ночь вводят в нос вазелиновое масло. При поражении носоглотки вводят препара в большпк количсствяк — примерно QT 0.5 — 1,0 с?! в каждую ноздрю, чтобы обеспечить достаточное смачивание больной полости эритрином. При дифтерии глаза в глазную щель вводят несколько капель теплого раствора эритрина, после чего накладывают на глаз на 10 мин. ватный шарик, обильно смоченный препаратом. При дифтерии гениталий у девочек, обильно смоченную эритрином полоску ваты вкладывают между ПO, lовh?)!И МОЯМИ, 1? I?OB«PX ГИПЕРС мировяцнык отечнык половык губ цаклялывают сочно пропитанный ватный тампон. При лифтерии кожи такпс жс тампоны няклалывяют пя 10 мцп. ня пораженный участок. В остром псриоле болезни все указанные мclнипуляции повторяют«?1 «же ?асио В течение лня. Пос,те откожлеция пленок можно уллинцть промежутки мс>клу ввсЛсниями препарата. Лечение прекращают после исчезновения клинических признаков болезни и лечение больной полости считают законченной после двухкратного отрицательного посеВя НЯ ОЯЦИЛЛЫ ?ЕфЛЕРЯ. Л "?c .íII«эритрином лифтсрийнык о а нилл оноситслсй производят не менее чстырск ряз в лень, ло ис1!«Зновcния ли?1!тсрийl?ь?х О а цп !л из полости зева и носа. СI? я ? l. Ip IIâo;?ÿт >ð?lòðèí пипеткой в нос по 10 — 15 капель В кажлу?о ноздрю, зятем обильно орошают эритрином зев ц миндалины при по? !о!ци пульверизатора илц пышным тампоном, корошо смоченным эритрином, или треккратным полоскян пем. Лечение контролируют бактериологическим исследованием. Двуккр атныш отр ипат«льный результат с промежутком в 4 дня свилетельствует об излечении. Предмет изобретения Способ получения антибцотического препарата лля лечсш!я и профилактики лифтсрии, о т л и ч а юшийся тем, что эритроциты, выделенные обычным путем из дефибринированной крови быков, cB?Iней, овец и др. животнык, обрабатывают концентрировачной соляной кислотой и затем экстрагируют ацетоном, полученный экстракт сгущают и вводят в раствор хлористого натра, после чего пз нижнего слоя отстоявшейся жидкости выделяют известным образом, например центрифугированием, осалок, который высушивают.
