Изобретение относится к усовершенствованному способу получения пуриновых дезоксинуклеозид-5 -трифосфатов, которые используются в биохимических исследованиях, например, для получения синтетических аналогов дезоксинуклеиновых кислот.

Известен способ получения дезоксинуклеозид-5 -трифосфатов, заключающийся в фосфорилировании соот ветствующих дезоксинуклеозид-5 -монофосфатов в присутствии ионов М(з ацетилфосфата, аденозиндифосфата, цистина, очищенного ферментного пре парата (очищеннои ацетокиназы), выделенного из Escherichia coC (E.со6) и буфера трис- НСс при рН 7,5. Выход дезоксинуклеозид-5 -трифосфатов 60-75Ъ в расчете на исходный 20 дезоксинуклеозид-5 -монофосфат (11.

Недостатками такого способа являются использование высокоочищенйого ферментного препарата (очистка которого требует многократного фракционирования выделенного из клеток

E cori фермента), что осложняет процесс, и относительно невысокий выход целевого продукта (60-75Ъ). 30

Целью изобретения является упрощение процесса и повышение выхода целевого продукта.

Цель достигается использованием в .качестве ферментного препарата цельного нефракционированногo экстракта из Е.coe MRE = 600.

Это позволяет избежать трудоемких стадии Фракционирования фермента и повысить выход целевого продукта до 80-82Ъ.

Способ получения пуриновых дезоксинуклеозид-5 -трифосфатов согласно изобретению заключается в том, что соответствующие дезоксинуклеозид-5 -монофосфаты фосфорилируют в присутствии ионов hAg -", ацетилфосфата, в трис-НСе буфете при рН 7,5, используя цельный нефракционированный экстракт E.co84 HARE = 600 .

Выход целевого продукта 80-82Ъ.

Пример . Приготовление ферментного препарата.

50 г клеток с.соС1 AARON,,= 600 суспендируют в 150 мл 0,05 11 трис-НСс буфера (рН 7,5) и разрушают ультразвуком на ультразвуковом генераторе с частотои 18+0,4 кгц в течение 15 мин. Суспензию центрифугируют в течение 20 мин при 12000с), 660976

Формула изобретения

Составитель Л. Никулина

Р акто 3. Бо о кина Тех е >.Петко Кор екто И. Иуска

Заказ 2372/20 Тираж 512

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035 Москва Ж-35 Ра шская наб. д 4/5

Подписное

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 надосадочную жидкость собирают и используют в качестве ферментного препарата. Концентрация белка в нем

14 мг/мл.

Ферментный препарат хранят в за.вЂ” мороженном виде при вЂ” 10ОС.

Синтез дезоксиаденозин-5 -трифосфата.

1500 мл реакционной смеси состава, мкмоль/мл: дезоксиаденозин-5 -монофосфат 10; ацетилфосфат 30, трис- 10 .НС6 буфер (рН 7,5) 40; ацетат магния

15; ферментный препарат 0,25 мг/мл термостатируют при 37 С в течение

2 ч. Реакцию останавливают прогреванием реакционной смеси в кипящей )5 водянои бане в течение 2-3 мин, .а затем быстро охлаждают. Образовавшийся осадок белка удаляют центриФугированием и надосадочную жидкость хроматографируют на ионооб- 20 меннон смоле Дауэкс 1х2 в градиенте

Li CC при рН 2,3. Фракции элюата, содержащие дезоксиаденозин-5 -трифосфат, объединяют и нейтрализуют гидратом окиси лития до рН 7,0. Дезоксиаценозин-5 -трифосфат осах<дают в виде литиевой соли охлажденной смесью этанол-ацетон (10:1).. Осадок собирают центрифугированием и лиофильно высушивают. Выход дезоксиаденозин-5 -трифосфата 82% в расчете на исходный дезоксиаденозин-5 -монофосфат.

Содержание основного вещества в продукте 94%, спектральные отношения, pd 2: Пало /Ваьо = О, 82, 35

02.go /Dying = 0,22.

1I р и м е р 2. Синтез дезоксигуанозин-5 -трифосфата проводят в условиях примера 1. Готовый продукт выделяют, как в примере 1. выход дезоксигуанозин-5 -трифосфата 80Ъ в расчете на исходный дезоксигуанозин-5 вЂ”

-монофосфат. Содержание основного вещества в продукте 99Ъ. Спектральные отношения, рН 2: Э /0 =1 04; йзо /В о = 0,69

Предлагаемый способ получения пуриновых дезоксинуклеозид-5 -трифосфатов прост в технологическом исполнении и может быть применен в промышленном масштабе.

Способ получения пуриновых дезоксинуклеозид-5 -трифосфатов путем фосфорилирования соответствующих дезоксинуклеозид-5 -монофосфатов в присутствии ионов Mg +, ацетилфосфата, ферментного препарата, выделенного из

ЕзсЬегictricr сой, и буфера трисНС при рН 7,5, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью упрощения процесса и повышения выхода целевого продукта, в качестве ферментного препарата используют цельный нефракционированныи экстракт из Езсйегictlicr

col?, lARE = 600.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1.Ьefrrnan 3.R,Bessrnan М.J-,Sin s Е.S-, Kornber.g А." Enzsnratic Ssntheз1з о Ýeîu Э

x>r ibonucEeic АсЯ - Л- BioK.СпеГп 233, 9 1, р. 163 (1958) .

Способ получения пуриновых дезоксинуклеозид-5 - трифосфатов

Похожие патенты:

Патент 395082 // 395082

Патент 306637 // 306637

Способ производства 5'-инозиновой кислоты // 248566

Способ получения адениловой кислоты // 207348

Способ получения мононуклеотидов из нуклеиновых кислот // 203837

Способ получения три- и дифосфатов аденозина и гулнозинл // 183149

Способ получения меченного тритием гуанизин-5-триофосфата // 461622

Способ выделения гуанозин-5'-дифосфата // 407904

Способ получения сложных эфиров нуклеозиддифосфата // 407449

Способ получения меченного тритием гуанозин-5-трифосфата // 404348

Способ получения меченных тритиемнуклеози // 250147

Способ выделения аденозинтрифосфата // 236477

Способ получения три -птолуолсульфоната -аденозил- - метионина // 646915

Производные нуклеозидов,обладающие антиметаболической активностью // 584011

Лекарственное средство''^ --''осная'•'^^^bju;r---jc^'-; ^..':. :0 •--.:а |:'*''~'"~~ •' - ——«-.«asj^ih. // 374086

Способ получения стерильного раствора натриевой соли аденозинтрифосфорной кислоты (атф) // 101398

Способ лечения прогрессирующей дистрофии мышц // 97235

Способ лечения инфекций, вызываемых вирусом гепатита в // 2157215

Изобретение относится к медицине

Липидные сложные эфиры нуклеозидмонофосфатов, обладающие противоопухолевой активностью, способ их получения и лекарственное средство // 2165429

Изобретение относится к новым нуклеозидмонофосфатным производным с остатками липидных сложных эфиров общей формулы I, в которой R1, R2 представляют собой линейную или разветвленную насыщенную алкильную цепь, содержащую 1-20 атомов углерода; R3, R5 представляют собой водород, гидроксильные группы; R4 представляет собой гидроксильную группу; Х представляет собой атом серы, сульфинильную или сульфонильную группу; Y представляет собой атом кислорода; В представляет собой пуриновое и/или пиримидиновое основание при условии, что по крайней мере один из остатков R3 или R5 представляет собой водород; к их таутомерам, их оптически активным формам и рацемическим смесям, или их физиологически приемлемым солям неорганических и органических кислот и/или оснований, а также к способам их получения и к лекарственным средствам, содержащим упомянутые соединения

L-нуклеозиды, обладающие анти-hbv или анти-ebv активностью, способ ингибирования hbv или ebv инфекции // 2171809

Изобретение относится к области способов лечения заболеваний, вызванных вирусом гепатита B (называемым также HBV и вирусом Эпштейна-Барра (называемым также EBV, которые включают введение эффективного количества одного или более из активных соединений, раскрытых здесь, или их формацевтически приемлемых производных или пролекарств одного из этих соединений

Производные аденозина, фармацевтическая композиция и способ коррекции электрических нарушений в сердце млекопитающего // 2172320