Способ получения пептидов или их солей
мнЕ 1
ФФ и®т@ g egg
О П И С A H H 6 «» 664560 изоьгятения
Союз Сбэетсннк
Соцналнстнчеснни
Республнк (61) Дополнительный к патенту (22) ЗаявлЕно 23.12.77 (21) 2556814/23-04 (23) ПриоритЕт — (32) 24. 12 ° 76
2 (51) M. Кл.
С 07 С 103/52
А 61 К 37/02 (31) В3-607 (33) ВНР
Государственный комитет
СССР по делам изобретений и открытий
Опубликовано2505.79 Бюллетень № 19 (53) УДК 547-964.
° 4,07 (088.8) Дата опубликования описания 2505,79
Иностранцы
Иштван Шен, Лайош Кишфалуди, Винце Варро, Ласло Варга и Йожеф Нафради (BHP) (72) Авторы изобретения
Иностранное предприятие Рихтер Гедеон Ведьесети Дьяр PT (BHP) (71) Заявитель! (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ ИЛИ ИХ СОЛЕЙ
30
Изобретение относится к способам получения пептидов — новых соединений, обладающих биологической активностью, которые могут найти применение в медицине.
В пептидной химии в синтезе пептидных цепей широко используют различные методы конденсации, например метод актнвированных эфиров, Карбодиимидный и т.п. (1).
Использование известных методов конденсации пептидных цепей позволяет получить новые пептиды, обладающие биологической активностью.
Цель изобретения — синтез новых. пептидов, обладающих интересными фармакологическими свойствами.
Предлагаемый способ получения пептидов общей формулы
A. — Trp —  — Азр — Phg — NH
2 где A — 2- (L, D) - (трет-бутилоксикарбониламиноокси) ацетил, 2- (L, D) — (трет-бутилоксикарбониламиноокси) пропионил;
 — метионил, лейцил, норлейцил, 2-аминодеканоил, или их солей, заключается в том, что тетрапептид общей формулы
Н вЂ” Trp —  — Asp — Phg — NH
2 где В имеет указанные значения, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы
A — Х где A имеет указанные значеиия;
Х вЂ” пентахлорфенокси- или пентафторфеноксигруппа.
Исходные тетрапептидамиды общей формулы
H — Trp — B — Asp — Phg — NHZ где В имеет указанные значения, получают известным способом частичной конденсации или постепенным удлинением цепи азидным методом, методом смешанных ангидридов, карбодиимидным методом, методом активированных эфиров и т..п. функциональные группы, не принимающие участия в реакции, при необходимости защищают, в частности, груп- пами, отделяемыми с помощью гидролиза, ацидолиза или каталитического гидрирования. Карбоксильную группу защищают, например, этерификацией бензиловым спиртом, трет-бутанолом или п-хлорбенэиловым спиртом. Для защиты аминоокси- и аминогрупп исполЬзуюг формильную, тозильную, тритильную, трифторацетильную, о-нитросульфенильную, фталильную, п-хлоркарбобензоксигруппу, однако предпочтитель664560 но применять карбобензокси- и третбутилоксикарбонильные группы. Атом азота в индольной основе триптофана защищают формильной группой.
Соответствующим подбором защитных групп осуществляют селективное или . одновременное отделение их известным способом (например, гидролизом,,ацидолизом, каталитическим гидрированием) .
Для присоединения защищенной (аминоокси)ацильной группы на аминном конце применяют пентагалогенфениловые эфиры, активный эфир вводят в реакцию с H — Trp —  — Asp — Phg — NH, имеющим карбоксильную группу на конце цепи. Для синтеза последнего используют
Š— L — Phg — ОН или Š— D — Phg — OH где Š— защитная группа, и после отделения защитнОй группы Z постепенно наращивают тетрапептид защищенными (N-оксисукцинимид) аминокислотными эфирами или (пентагалогенфенил)аминокислотными эфирами. Защитную группу Z отделяют обработкой уксуснокислым бромистым водородом или каталитическим гидрогенолизом. Вместо защитной группы Е используют ВОС-группу, которую отделяют обработкой в более слабо кислой
:среде.
Фрагмент, защицающий /Ь -карбоксильную группу аспарагиновой кислоты, отделяют селективно на стадиях дипепхлороформ : метанол 95:5 (1); хлороформ : метанол 9:1 (2); хлороформ : н-гексан : уксусная к этилацетат : (пиридин : уксусная этилацетат : (пиридин : уксусная этилацетат : (пиридин,: уксусная этилацетат г (пиридин : уксусная этилацетат : (пиридин : уксусная этилацетат : (пиридин : уксусная этилацетат : (пиридин : уксусная
«Для обнаружения пятен на тонкослойных хроматограмглах применяют раствор нингидрина. Пластины после обрызгивания просушивают в течение
5 мин при 105 С. Затем хроматограммы поглещают в камеру с газообразным хлором и после аэрации обрабатывают раствором о-толуидин/KJ.
Для очистки веществ колоночной хроматографией применяют силикагель (кизельгель G) с зернами размером
62-200 мкм.
Пример 1.
1. N- (Бензилоксикарбонил) -D-фенилглицин амид.
К раствору 24,0 r (84 ммоль)
Z — D — Phg — ОН в 170 глл хлороформа добавляют 11,6 мл (84 ммоль) трг4этиламина. Затем к полученному раствору прикапывают 8,9 мл (84 ммоль) этилового эфира хлоругольной кислоты при
"10 С и смесь перемешивают еще в течение 10 мин при -10 С, далее вводят газообразный аммиак в течение 1 ч. тида, трипептида или тетрапептида или вместе с группой, защищающей аминогруппу, ацидолизом или каталитическим гидрогенолизом.
Конечные продукты очицают кристаллизацией, переосаждением, адсорбцион5 ной хроматографией на силикагеле или ионообменной хроматографией на кар-, боксиметилцеллюлозе.
Новые соединения получают в виде свободных кислот или солей в зависи10 мости от метода их получения. Соли, образованные с помощью органических или неорганических кислот, могут быть превращены во внутренние соли известными методами или при очистке.
В приведенных далее примерах используют следуюцие сокращения:
Ogfу — Тонкослойную хроматографию проводят на слоях силикагеля (торговое наигленование — кизельгель g), приго30 товленных по Италю. Для проявления хроматограмгл применяют следующие смеси рàcTворителей: I ислота 8: 1: 1) (3); кислота: вода 20: б: 11) 9: 1 (4); кислота: вода= 20:6:11) 8:2 (5); кислота: вода 20: б: 11) 7: 3 (6); кислота: вода 20: 6: 11) 3: 2 (7); кислота: вода 20: 6: 11) 1.1 (8); кислота: вода 20: 6: 11) 2: 3 (.9); кислота: вода 20: б: 11) 85: 15 (10); Смесь оставляют на ночь и затем упаривают в вакууме, твердый остаток 45 обрабатывают водой. Продукт кристаллизуют из этанола. Получают 11,8 r (49,4%) хроматографически чистого Z — D — Phg — NH2 плавяцегося при 171-173оС; Р4 0,75; (сС ) — 76,8 (с 1,0, в диметилформамиде) . НайАено, Ъ: С 67,43; Н 5,70; N 9,98. С!6 H iI, O N (М 284,30) Вычислено, Ъ: С 67,59; Н 5,67; N 9,85. 2. D-Фенилглицинамид-гидробромид. К раствору 20,0 r (70 ммоль) Z — D — Phg — NH 1), В 40 мл уксусной кислоты добавляют 70 мл 8 н. раствора бромистого.водорода в уксус60 ной кислоте. Спустя 1 ч реакционную смесь разбавляют эфиром, гидробромид отфильтровывают. Соль, содержащую большое избыточное количество бромистого водорода, перекристаллизовывают 65 из десятикратного количества этанола. 6645 К раствору 5, О r (14 ммоль) Н вЂ” Asp — (О Ва) — Р— Phg — ЫН ° HCf (пример 1.4) и 4,85 г (14 ммоль) B0C-Met Su в 60 мл диметилформамида добавляют 1,96 мл (14 ммоль) триэтил- . амина. На следующий день суспензию упаривают в вакууме и остаток обрабатывают водой. Получают 7,83 r продукта, который осветляют, обрабатывая горячий раствор в 40 мл этанола при 60 кипении 40 мл воды. Получают 6,57 г (84%) хроматографически чистогоВОСМе1-Аер-(0 Su)-D- Vhg - ХН плавя- л щегося при 194-196оC. После перекристаллизации из этанола т.пл. 197- 65 р Получают 14, 15 r (87, 53) Н вЂ” D — Phg — NHz HBr, т.пл. 263,0263 5оC; R) 040; (сс ) -756 (с 10, в диметилформамиде) . Найдено, %: С 41,40; Н 4,82; N 12,01. Сан, ONzB1(M 231 10) Вычислено, Ъ: С 41,60; Н 4,77; N 12,13. 3. N-(Бензилоксикарбонил)-Ь-аспарагил- /о †(трет-бутилэфир)-Р-фенилглицинамид. 6,31 г Z — Asp — (OtBu) -ОЯи, 3, 89 г (16, 8 ммоль) Н вЂ” D — Phg -МН ° HBr (пример 1. 2) и 2,10 мл (15 ммоль) триэтиламина суспендируют в 150 мл хлороформа и реакционную 15 массу оставляют на ночь. Загустевшую суспензию упаривают в вакууме и остаток перекристаллизовывают из этанола. Получают 5,02 r (73,63) хроматографически чистого Š— Asp — (О Bu) — D — Phg — NH i плавящегося при 17920 о 181 С. После перекристаллизации из этилацетата продукт плавится при .188-189оС. Н4 О 75. (с6 ) 59 9о (с 1, в диметилформамиде) ° Найдено, %: С 63,22; Н 6,60; N 8,96. С 4 Hzq ОЬНз (М 455, 50) Вычислено, Ъ: С 6328; H 6,42; N9,,23 ° 4. L-Аспарагил- p — (трет-бутилэфир) -30 -D-фенилглицинамид-гидрохлорид. К раствору 12,83 r (28,2 ммоль) Š— Asp — (О Bu) — D — Phg — NH (пример 1,3) в 200 мл диметилформамида при охлаждении добавляют 2,46 мл 35 (28,2 ммоль) концентрированной соля- ной кислоты, а затем 2 г палладия на активированном угле. При постоянном перемешивании через суспензию пропускают водород в течение 2,5 ч. Ка- 40 тализатор отфильтровывают, фильтват упаривают и остаток растворяют в этаноле. Раствор осветляют, растворитель отгоняют в вакууме и остаток обрабатывают эфиром. Получают 10,0 r (99%) хроматографически чистого H — Asp — (O Bu) -- D — Phg — NH HCE плавящегося при 169-170 С, Н4 0,15. 5. N (трет-бутилоксикарбойил)-L-метионил-L-аспарагил- )о †(трет-бутилэфир)-D-фенилглицинамид. 50 60 6 198 С; В4 О, 75; (, ) -67,2 "(с 1,0, в диметилформамиде) ° Найдено, %: С 56,81; Н 7,34; N 9,98; S 5.69 С 6 40 ОуИ4$ (М 552, 69) Вы сислено, Ъ: С 56,51; Н 7, 30; N 10,14; S 5,78. б. L-Метионил-L-аспарагил-D-фенилглицинамид-гидрохлорид, К раствору 5,6 r (10,1.ммоль) ВОС-Met-À5ð-(0 Bu)-D-Vhg- ХН2 (при мер 1.5) в 10 мл уксусной кислоты добавляют 3,5 мл (35 ммоль) меркаптоэтанола и 50 мл 4 н. раствора НСГ в ледяной уксусной кислоте ° Через 30 мин реакционную смесь упаривают в вакууме и твердый остаток обрабатывают безводным эфиром. Получают 4,84 r Н-Ме1-Аэр-D- Phg — NHz НСР (R > О, 1), содержащего избыточную соляную кислоту. 7. N-(трет-Бутилоксикарбонил) -L-триптофил-Ь-метионил-L-аспарагил-D-фенилглицинамид. К раствору 4,4 r (10,,2 ммоль) Н-(Act-Amp-13-Phg - ИН - МС8 (пример 1.6) и 4, 10 r (10, 2 ммоль) ВОС - Т г р - 05 и в 100 мл диметилформамида добавляют 2, 85 мл (20, 4 ммоль) триэтиламина. На следующий день суспензию упаривают. в вакууме и остаток обрабатывают водой. Получают 6,66 г (95,8%) 3QC-Tap-ihet -Rap-Р-Phg-ÌÌz,ò.ïë. 216218оС (с разложением) . После перекристаллизации из 80Ъ-ного этанола продукт плавится с разложением при 222оСр Н 0,3у (p() и -65,5 (с 1,О, в диметилформамиде) . Найдено, Ъ.: С 58,23; Н 6,30; N 12,60; $4,86. C gg H4z O8N6 S (М 6 82, 81) Вычислено, Ъ: С 58,05; Н 6,20; N 12,31; S 4,68. 8. L-Триптофил-L-метионил-L-аспарагил-13-фенилглицинамид. 6,0 г (88,8 ммоль)ЭОС-Т р — AAet >sp-B -7ИД - ИН . (пример l. 7) обрабатывают 60 мл солянокислого раствора диоксана в присутствии 3,1 мл (44 ммоль) меркаптоэтанола. Через 15 мин реакционную. смесь разбавляют безводным эфиром. Гидрохлорид, содержащий 6,23 г избыточной соляной кислоты, отфильтровывают. Затем из этой смеси готовят суспензию в 150 мл воды. рН суспензии доводят до 7 с помощью триэтиламина, после чего перемешивают смесь, отфильтровывают осадок и, наконец, промывают его водой. Получают 4, О г (78%) Н-Tr p — Met - Asp-D->hg -NHZ который, разлагаясь, плавится при 230-232 С; В 0,3. 9. Пентахлорфениловый эфир третбутилоксикарбониламинооксиуксусной кислоты, 8, О г (41 8 ммоль)ВОС-Oping -ОМ и 11, 1 r (42, О ммоль) пентахлорфеноа растворяют в 160 мл безводного диоксана. Раствор охлаждают до темпеатуры не менее 5 С и затем к нему Получают гидро бромид, выход 88, 8Ъ, RЗ 0,25; (a) +76,5 (с 1,0, в диметилформамиде) . 3. N- (Бензилоксикарбонил) -Ь-аспарагил- p — (трет-бутилэфир) -L-фенилглицинамид. 5 8,65 r (37,5 ммоль) Н-L,- Рппф — NHz-HB (пример 2.2) вводят во взаимодействие с 21,6 г (37, 5 ммоль) 2-Asp-(О &и)-ОРСР в 160 мл диметилформамида в присутствии 5,15 мл 1р (37,5 ммоль) триэтиламина. После 30 мин перемешивания в суспензию добавляют еще 5,15 мл (37,5 ммоль) триэтиламина. Реакционную. смесь выдерживают в течение ночи, затем упаривают в вакууме, остаток обрабатывают эфиром. Осадок отфильтровывают, промывают водой, продукт (13,9 r) перекристаллизовывают из водного этанола. Получают 10,6 r (65,8Ъ) хроматографиче ски чистого Z — Asp - (О Bu) — (- РИф20 -МН2, т.пл. 207-2080С. Дополнитель- . ная перекристаллизация из этанола повышает температуру плавления продукта до 209 С; В . 0,75; (Ф )оt21,6О (с 1, 57, в диметилформамиде) . 25 Найдено, Ъ: С 63,50; Н 6, 38; N 9,23. Cz4Nzq O Ng (И 455,50) Вычислено, Ъ: С 6328; Н 6,42; N,9,23. 3() осадок, полученный из эфирного маточного раствора первичного продукта, отфильтровывают, промывают водой, перекристаллизовывают из этанола. Получают 0,47 r (2,9Ъ) Z-Asp-(0 BU)-0 — РИД вЂ” N Hq т. пл. 188-189 С В 0,75; (а )> -59,0 (с 1,0, в диметйлформамиде). 4. L-Аспарагил- /Ь вЂ (трет-бутилэфир)— -L-фенилглицинамид-гидрохлорид. Применяют 9,6 r (21 ммоль) Z, -Абр. -(О Bu) — 4 — Phg- ИН (пример 2. 3), отщепляют защитную группу в условиях описанных для D-диастереомера (пример 1.4). Получают 8.,03 г хроматографически чистого Н- Asp-(О Ви) -)-Phg45 -НН2 НС0 содержащего избыточную соляную кислоту, R О, 35. 5. N-(трет-Бутилоксикарбонил)-L-метионил-L-аспарагил-)5 †(трет-бутилэфир)-L-фенилглицннамид. 50 К раствору 3,95 г (10,5 ммоль) Н-Asp -(О Su)-L-th) -ИН -HCO (пример 2,4) и 5,22 r (12,6 ммоль) BOC-Met-ОРДЕР в 50 мл безводного диметилформамида добавляют 2,94 мл (21 ммоль) 55 триэтиламина. Смесь экстрагируют гексаном, гексановый экстракт отделяют и промывают водой ° Экстракт упаривают, 5,38 г первичного продукта растворяют в 25 мл кипящего метанола и осаждают 25 мл воды. Получают 4,70 r (81Ъ)ЗОС-Net,-hep-(O bu)-L-Phg-)(HZ небольшое количество которого очи1 щают переосаждением из смеси метанола с эфиром, получают продукт с т.пл. 162 -163 С; R4 0 75. (а(,) 5 5 65 (с 1,0, в диметилформамиде) . 664560 добавляют 8,6 г (42,0 ммоль) дициклогексилкарбодимида. Реакционную смесь оставляют на ночь при комнатной температуре, выпавший осадок отфильтровывают, фильтрат упаривают в вакууме, а остаток перекристаллизовывают из смеси диоксана и этанола. Получают 13, 7 r (74, ЗЪ) ВОС - ОДСу-ОРСР т.пл. 167-168 C; R О, 7. Найдено, Ъ: С 35,37; Н 2,90; N 3,31; С0 40,12. С,,з Í „O,NCe> (М 439;51) Вычислено, Ъ: С 35 52; Н 2 75; И 3,18у СР 40,33. 10 „2- (трет-Byòèëoêñèêàðáîíèëàìèнокси) -ацетил-L-,òðèïòîôèë-L-метионил-1.-аспарагил-L-фенилглицинамид. К суспензии 1,50 r (2,57 ммоль) Н-Тгр-Met-Asp-0- Phg - ИН2 (пример 1.8) .в 15 мл диметилформамида добавляют 2,26 мл (5, 11 ммоль) триэтиламина и 1,20 r (2,73 ммоль) ВОС-Ogle ОРСР (пример 1.9) . Суспензию перемешивают до полного растворения всех веществ, раствор оставляют на ночь. Затем упаривают, к ос-татку добавляют эфир. Получают 2,12 г сырья,:которое растворяют в небольшом количестве смеси 5 растворителей и пропускают через колонку, приготовленную из 20 r силикагеля. Затем смесью 5 растворителей осуществляют элюирование при скорости 15 мл/час. Фракции, содержащие продукт, упаривают, остаток дважды перекристаллнзовывают из 20 мл 80Ъ-ного этанола. Получают 0,82 г (41,4Ъ)3ОС-О ц -Ч рр Ае Asp-3-Р ) й))„который,разлагаясь, плавится при 199-200" Су R+> О, 15 R1f 0,40у- (dJ)Q -40рЗ (с 1,0р в диметилформамиде). Найдено, Ъг С 55,91; Н 6,18; М 13,35; S 4,16. . СЗБ Н 450 ю N7 S (M 755, 86 ) Вычислено, Ъ: С 55,62; Н 6,00; N 12,97; S 4,24. Пример 2. 1. N-(Бензилоксикарбонил)-L-фенилглицинамид. К раствору 27,6 г (97 ммоль)2 -Ь- -Р(1ф - Ok в 300 мл безводного тетрагидрофурана добавляют 13,55 мп (9 7 ммоль) триэтиламина, а затем при -10 С 12 1 мл (97 ммоль) пивалоилхлорида. Суспензию смешанного ангидрида перемешивают при -10 С в течение 10 мин. Охлаждение убирают, реакционную массу оставляют на 1 ч при комйатной температуре и вводят газообразный аммиак. Реакционную -смесь оставляют на ночь, упаривают и остаток обрабатывают, как описано для D-энантиомера. Получают 18,90 r (68,7Ъ) Е -1. - РИ6 - КН, т.пл. 172173аС R4 0 75; (< ) +80 7о (с в диметилформамиде) . 2. L-Фенилглицинамид-гидробромид. Продукт обрабатывают в условиях, описанных в примере 1.2, применяя в качестве исходного Е-L- PÈô -)(Hz. 664560 1О Найдено, Ъ: С 56, 70; Н 7, 34; N 10, 35; S 5,68. СгЬН4о Ы4Б (М Вычислено, Ъ: С 56, 51; Н 7, 30; Ы 10,14; S 5,7. 6. L-Иетионил-L-аспарагил-L-фенилглицинамид-гидрохлорид. 5 4,2 r (7,6 ммоль) 30C-Met-Авр-(p Получают 3, 2 r (97Ъ) Н-Met -Amp-(-Р6Д-NH ÍCÐ, т.пл. 198-2000Су 10 R 0,25 (среднее значение для D-диастереомера). 7. N-(трет-Бутилоксикарбонил) -1-триптофил-L-метионил-L-аспарагил-L-фенилглицинамид. 15 Йз 3,45 г (8 ммоль) Н-Met-Asp-1-РИф- КЙ2 НСР в условиях, описанных раньше (пример 1.7), получают 4,77 r (97,9Ъ)50С-Ч р-AAet -Agp- (, - phd -ЙН2, который, разлагаясь, плавится при 191-1930С. Перекристаллизацию небольшой пробы осуществляют из 80Ъ-ного этанола, полученный продукт, разлагаясь, плавится при 200 C; R 0,35; (вс ) О (с 1,0; в диметилформамиде), Найдено, Ъ: С 58,05; Н 6,21; Я 12,64; Я 4,77. С Н4,о8яьS (М 682,81) ВычиСлено, Ъ: С 58,04; Н 6,20; N 12,31; S 4,68. 8. N-Триптофил-L-метионил-L-аспа- 30 рагил-L-фенилглицинамид. 4, 4 г (б, 33 ммоль) 30С - Тг р - M et— -ASP-L -7hg -ИН (пример 2. 7) обрабатывают в условиях, описанных в примере 1.8. Получают 2,90 г (76,5Ъ) Н 35 -VrP- МЕ1 — А БР— ). — РЬф — ЙНг котоРый плавится с разложением при 210 С; В 0,3О. 9. 2- (трет-Бутилоксикарбониламиноокси) ацетил-L-триптофил-L-метионил-L40 -аспарагил-L- фенилглици н амид. Процесс ведут в условиях, описанных для D-диастереомера (пример 1.10), используя в качестве исходного про- дукта 1,0 г (1,71 ммоль) Н-Trp-Met-Авр45 4- Phg-éH (пример 2.8) . Первичныи продукт очищают колоночной. хроматографией на силикагеле „для элюирования используют смесь 10 ра- створителей. Получают 0,48 г (37,2Ъ) ВОС-0$8g-7rp-Met-Amp -).-T>hg -MHq, т. пл. 169-170 С (с разложением); R 0,35; (ж )и +8,2 (с 1,0, в диметйлформамиде) . Найдено, Ъ: С 55,11; Н 6,23; N 13,04; S 4,10. 55 СЗ Н 4 0)о NtS (М 755,86) Вычислено, Ъ: С 55, 62; Н 6, 00; V 12,97; S 4,24. Пример 3. 1. Пентахлорфениловый эфир 2-(трет-бутилоксикарбониламиноокси)-D-пропионовой кислоты. .К раствору 4,10 г (20 ммоль) БОС-D-0A(!a - ОН и 5,32 г (20 ммоль) пентахлорфенола в 20 мл диметилформамида, охлажденному до Î С добавsréþò 4, 12 r (20 ммоль) дициклогексилкарбодиимида. Реакционную смесь при О С перемешивают в течение 30 мин, затем охлаждение убирают и реакционную массу оставляют на ночь при комнатно."; температуре. Осадок отфильтровывают, маточник упаривают в вакууме. Остаток обрабатывают безводным эфиром и Фильтруют. Получают 6,25 г продукта, который очищают перекристаллизацией из этанола. Полу- . чают 5,80 r (64Ъ) ЬОС-Э-САРа -0РСР, т.пл. 123 124 C; R 0 85у (о (с 1, О,. в диоксане) . Найдено, Ъ:. С 37, 16; Н 3, 29; СР 39, 01. .. С 4 Н j4 05ИСР5 (М 453, 54) Вычислено, Ъ: С 37,10; Н 3, 10; СР 39,10. 2. 2-D-(трет-Бутилоксикарбониламинокси)пропионил-L-триптофил-Ь-метионил-L-аспарагил-D-фенилглицинамид. К раствору 1,5 r(2,,57 ммоль) Н-Trp-Met-Asp-2-РИЯ -NH (пример 1.8) в 50 мл диметилформамида добавляют 2,26 мл (5, 14 ммоль) триэтиламина и 1,24 г (2,73 ммоль)ЭОС-D-ОАРа-ОРСР (пример 3.1) Смесь выдерживают 5 ч упаривают в вакууме и остаток растирают с эфиром. Получают 1,9 г первичного продукта. После перекристаллизации из 10 мл 96Ъ-ного этанола выделяют 1,06 г (53,5Ъ) хроматографически чистого 30С-D- ОдРа -Т р- AAet-Asp-D-РИЯ-МН Т.ïë. 200-204 С (c разложением); R< 015; Н 030; ((6 ) -24 9" (c 1,0, в диметилформамиде), Найдено, Ъ: С 56, 33; Н 5, 88; N l2,7О; S 4, 09. СзьН47Ою 078 (М 769,89) Вычислено, Ъ: С 56, 16; Н 6, 15; N 12,74; S.4, 16. Пример 4. 2-D-(трет-Бутилоксикарбонилокси)пропионил-L-триптофил-L-метионил-L-аспарагил-L-фенилглицинамид. ф раствору 1,0 г (1,71 ммоль) H Р- МИ - А ьр -(-Phg- g H > (пример 2. 8) в 30 мл диметилформамида добавляют 0,24 мл (1,71 ммоль) триэтиламина и О, 85 г (l, 88 ммоль) РОС -Э-САРа -0РСР (пример 3.1) . Смесь оставляют на ночь, затем упаривают в вакууме, остаток обрабатывают безводным эфиром. Первичный продукт растворяют в небольшом количестве смеси 10 растворителей и пропускают через колонку со 100 г силикагеля. Продукт элюируют смесью 10 растворителей со скоростью 15 мл/ч. Фракции, содержащие продукт, объединяют „ упаривают и получают 0,74 г (56Ъ)ЗОС-3-САРа-Tr p-Met-Авр-L-Щ- г т.пл. 167-168 Су RSi О, 30; (сС ); +29,8 (с 1,0, в диметилформамиде). Найдено, Ъ: С 56,40; Н 6,31; И 12,65у S 4,01. С ь Н 4 0 ю Ng S (М 76 9, 89) Вычислено, Ъ . С 56, 16; Н 6, 15; К 12, 74; S 4,16. 6645 Пр.имер 5. 1. N- (Бензилоксикарбонил) -L-лейцил-Ь-аспарагил- P — (трет-бутилэфир)— -D-фенилглицинамид. К раствору 5,0 г (14,0 ммоль) . и- Аэр — (а Вгг) -D- Р гг(5 — NHz НСИ (пример 1.4) и 5,13 r (14,2 ммоль) 5 Е-Leu-05u в 60 мл диметилформамида добавляют 1,96 мл (14,0 ммоль) триэтиламина. Реакционную смесь оставляют на ночь и затем упаривают в вакууме, остаток растирают с водой. гО Полученные 7,32 г первичного продукта растворяют в этаноле, осветляют и кристаллизуют. Получают 6,05 r (77,7%) Z,-Leu- А sp- (O Bu}-V-Phg- NHz т.пл. 192-194 C; R> О, 75. Небольшую пробу подвергают перекристаллизации из,этанола, дополнительно очищенный продукт имеет т.пл. 195-196 С; (3> -69,5 (c 1,0, в диметилформамиде). Найдено, %: С 63,54; H 7,38г N 10,07. CgpH4eOyN4 (М 568,67) Вычислено, Ъ: С б 3, 36; Н 7, 09; N 9,8. 2. L-Лейцил-L-аспарагил-D-фенил- 25 глицинамид. К 5,20 г (9,15 ммоль)2 -Leu-Asp-I0 Bu)-D-РЬД- ИН (пример 5. 1) добавля.ют 50 мл 1 н. раствора бромистого водорода в уксусной кислоте, смесь вы- 30 держивают 1 ч. Реакционную массу упаривают в вакууме и гидробромид изолируют безводным эфиром. 5,33 r гидробромида суспендируют в 50 мл хлороформа, рН суспензии доводят до 35 7 с помощью триэтиламина, полученный гелеобразный продукт отфильтровывают и промывают этанолом. Получают }{-Ьeо-Авр-D-Phg - МН> выход 2 45 г (70,5Ъ); т.пл. 218 †2 С; : R y 0,25. 3. N- (трет-Бутилоксикарбонил) -L-триптофил-L метионил-Ь-аспарагил-D- фен ил гли цин амид. 60 12 2,8 г (4,2 ммоль) ВОС-Trp-Ьeu-Asp-З-Р6 -КН (пример 5.3) обрабатывают 30 кл солянокислого диоксана в присутствии 0,59 мл (8,4 ммоль) меркаптоэтанола. Через 15 мин реакционную смесь разбавляют безводным эфиром. 2,60 г гидробромида суспендируют в 150 мл „воды. рН суспензии доводят до б с помощью триэтиламина, осадок отфильтровывают и промывают водой. Получают 2,22 г (93,7Ъ) H-Trp- Leu -Asp-P-Vhg-NH>который, разлагаясь, плавится при 246-248 C; Ry 0,35. 5. 2-(трет-Бутилоксикарбониламиноокси)-ацетил-L-триптофил-L-лейцил-L-аспарагил-D-фенилглицинамид. К раствору 1,10 r (1,95 ммоль) " - 3 гр-1.eu-Asp-Э-Vhg-. Nkz (пример 5.4) и 0,28 г (2,0 ммоль) триэтиламина в 10 мл диметилформамиде добавляют 0,92 r (2, 10 ммоль)30C-Ogpu — ОРСР (пример 1.9). Смесь оставляют на ночь, упаривают в вакууме и остаток растирают с безводным эфиром. Первичный продукт (1,46 г) в горячем состоянии отфильтровывают из десятикратного количества этилацетата. Полученные 1,31 r вещества растворяют в небольшом количестве смеси 10 растворителей и пропускают через колонку, приготовленную из 80 г силикагеля. Элюирование осуществляют смесью 10 растворителей со скоростью 8 мл/ч. Фракции, содержащие чистый продукт, собирают, упаривают и получают 0,52 г продукта, который перекристаллизовывают из 80%-ного этанола, Получают 0,45 r (31,3Ъ)BOC-Og0g-Trp-Leu-Asp-0- Рhg- NH z который плавится при 206-208 C; R< 0,75; (с )п -51,7 (с 0,5, в диметилформамиде). Найдено, Ъ: С 58,70; Н 6,65; N 13,51. С Н470ю Мт (М 737,82) Вычислено, Ъ: С 58,60; Н 6 г 42) N 13,29. К раствору 2,.25 г (5,93 ммолг ) H-Leu- ASp-0 — Why - 4HZ (пример 5.2) в смеси из 50 мл диметилформамида и 10 мл гексаметилентриамида ортофосФорной кислоты добавляют 0,84 мл (5, 93 ммоль) триэтиламина и 2,65 r 50 (6,6 ммоль)) ВОС-Тгр-05u . Реакционную смесь перемешивают 4 ч и полученный прозрачный раствор оставляют на ночь. Затем в вакууме отгоняют диметилформамид, к остатку добавляют воду и ос;тавляют на холоде, выпавший осадок отфильтровывают. Первичный продукт (4,31 r) суспендируют в воде, суспензию дважды доводят до кипения, затем фильтруют в горячем состоянии. Получают 2,87 г (72,8%) ВОС-Trp-(,eu-Asp-D-Phg-ЙН2 т,пл. 195-200 гC R> 0,55. Продукт перерабатывают без дальйейшей очистки, 4. L-Триптофил-L-лейцил"Ь-аспарагил-D-фенилглицинамид. 65 Пример б. 1. N-(Бензилоксикарбонил)-L-лейцил-L-аспарагил-(трет-бутилэфир)-L-фенилглицинамид. В качестве исходного вещества бе-. рут 4,0 г (11,2 ммопь) k- Asp -(0 Получают 3,0 г (47%)Е-)eu-Дэр-(0 Bu}-L-7И -ИНдкоторый разлагаясь, плавится при 193-194 С; й+ 0,70; R 0,65; (с(,)р О (c 1,0, в диметилформамиде) . Найдено, %: С 63,79; Н 7,30; N 9,59. СбаН4оОЪN4(М 568,67) Вычислено, Ъ: С 63,36; Н 7,09; N 9,85. 2. L-Лейцил-L-аспарагил- fh -(трет-бутилэфир)-L-фенилглициламид-гидрохлорид. )3 2, 75 г (4, 84 ммоль) Z,-(ец - Asp(0 Su)-L- Phg- МН (пример 6. 1) растворяют н 50 мл диметилформамида и защитную группу отделяют гидрированием в присутствии 0,45 мл (5,2 ммоль) концентрированной соляной кислоты с использованием в качестве катализатора палладия на активированном угле. Спустя 2 ч катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают в вакууме. Остаток обрабатывают безводным эфиром. Получают 2, 25 г (98,5%) H-Leu- Asp-(фВо)-Ь- IO -Рйф-ЙН НСР который плавится при 1821830С; В 0,15. 3, Ь-Лейцил-L-аспарагил-L-фенилглицинамид-гидрохлорид. 2,25 r (4,80 ммоль) Н- Leu-Аьр-j0 -(.-РИД - NH> ° НИ (пример 6.2) обрабатывают 20 мл солянокислой уксусной кислоты. Спустя 40 мин реакционную смесь упаривают в вакууме и остаток растирают с эфиром. Получают 2,0 г (99%) н-Leu-Asp-L-Thg NHn нсР, который, разлагаясь, плавится при 210 C; Rg 0,20. 4-. N-(трет-Бутилоксикарбонил)-L-триптофил-L-метионил-L-аспарагил-Ь-фенилглициламид. К. раствору 2,2 г (5 3 ммоль) H-Leu-Asp-L-Whg-ЙН НСР (пример 6.3) в 60 мл диметилформамида в присутствии 1,48 мл (10,6 ммоль) триэтил. амина добавляют 2,32 r (5,8 ммоль) ВОС-Тгр-()5u . Реакционную смесь упаривают в вакууме, остаток растворяют водой ° Первичный продукт (3,30 г) растворяют в 70 мл 80%-ного этанола, осветляют и кристаллизуют. Получают 35 2, 30 r (65% ) ВОС-Тгр-Leu- Asp- L-Phg- МН, который, разлагаясь, плавится при 205 †207; R< 0,40; (ос )д -7,3 (с 1,0, в диметилформамиде) . 5. Ь-Триптофил-L-лейцил-L-аспара- 40 гил-L-фенилглицинамид. 2,23 г (3,25 ммоль)ВОС-Тгр-(,eu-Asp-L-phd-МН (пример 6. 4) обрабатывают 25 мл солянокислого диоксана в присутствии 0,47 мл (6,7 ммоль) мер- 45 каптоэтанола. Через 10 мин .реакционную смесь разбавляют безводным эфиром, Гидрохлорид отфильтровывают и суспендируют в воде, с помощью три этиламина доводят значение рН суспензии до 7, отфильтровывают осадок и промывают водой. Получают 1,16 r (61%) Н-Тгр-Ьео -Asð-Ь-РИф-МН z, который, разлагаясь, плавится при 214215 C; Rg 0,40. 6. 2- (трет-Бутилоксикарбониламино- 55 окси) ацетил-L-триптофил-L-лейцил-?— -аспарагил-Ь-фенилглицин амид. К раствору 0,57 r (1,0 ммоль) Н- 1 гр- Leu-Asp -Ь-РИ -й Н (пример 6.5) и 0,48 r (1,1 ммоль7ВОС-ОДРУ-ОРСР 60 (пример 1.9) в. 15 мл диметилформамида добавляют 0,14 мл (1,0 ммоль) триэтиламина; Смесь оставляют на ночь, упаривают в вакууме и остаток обрабатывают эфиром. Полученный первичный продукт (0,81 r) очищают способом, описанным уже для D-днастереомера, Получают 0,30 г (40,5%) ВОС-ОДРЧ -Trp-Leu-4sp-L-7hg-МН Продукт, разлагаясь, плавится при 196-198 C; Rg 0,35; (с6 )и О (с 1,0, в диметилформамиде) . Наидено, %: С 58,35;"Н 6,20; N 13, 07. CDbH4rO)o Nv (N 737, 82) Вычислено, %: С 58,60; Н 6,42; N 13,29. Пример 7 ° 2-D- (трет-Бутилоксикарбониламиноокси ) пропинил-L-триптофил-L-лейцил-L-аспарагил-D-фенилглицинамид. К реакционной смеси из 1, 15 г (2, 03 ммоль) Н -Тгр-Leu-Asp D- Phg-NH (пример 5.4) и 1,0 г (2,2 ммоль) (ВОС-Р-ОАРа-ОРСР (пример 3.1) в 10 мл диметилформамида добавляют 0,29 мл (2, 03 ммоль) триэтиламина. Смесь выдерживают в течение ночи, затем упаривают в вакууме, остаток обрабатывают эфиром. Первичный продукт (1,56 r) растворяют в 50 мл 80%-ного этанола, содержащего 0,3 мп уксусной кислоты. Перед кристаллизацией раствор осветляют. Получают 0,86 г (56%) ВОС-0-ОАГа-1-гр-Ьео †Asp -D-РйД-NHq, который, разлагаясь, плавится при 213214 С; и 02; Rg 04у (сс ) -287 (с 1,0, в диметилформамиде) . Найдено,.%: С 59,10; Н 6,52; N 13,20. С37Н4д О р N (М 751,85) Вычислено, %: С 59,111 Н 6,57; N 13,04, Пример 8. 2-D-(трет-Бутилоксикарбониламиноокси) пропионил-L-триптофил-L-лейцил-Ь-аспарагил-L-фенилглицинамид. 0,57 г (1, О ммоль) Н- Ггр — Leu — Asp-)->hg- NH2 (пример 6.5) И 0,50 r (1, 1 ммоль) ВОС-2-ОАРа -ОРСР (пример 3. 1) обрабатывают 15 мл диметилформамида в присутствии 0,14 мл (1,0 ммоль) триэтиламина..Смесь оставляют на ночь и затем упаривают в вакууме, остаток растирают с эфиром, первичный продукт (0,77 r) растворяют в небольшом количестве смеси 10 растворителей и пропускают через колонку с 30 F силикагеля. Элюирование осуществляют смесью 10 растворителей со скоростью 5 мп/ч. Фракции, содержащие продукт, объединяют, упаривают и получают 0,46 r продукта. Последний растворяют в 10 мл метанола и осаждают, добавляя 70 мп эфира. Получают 0,26 г (34,2%)ЗОС-Х)-ОАРа-Тгр-Leu-Asð-L-РИД-Ю,который, разлагаясь, плавится при 184-185 С; Н5 0,4; {сс ) +18,8 (с 1,0, в диметилформамиде). Найдено, %: С 58,92; Н 6,401 N 12,88 ° С 7 Н4 0ю N7 (М 751,85) Вычислено, %: С 59, ll; Н 6,.57; N l3,О4. Пример 9. 1. N-трет-Бутилоксикарбонил-L-норлейцинпентафторфениловый эфир. 664560 10,0 r (24,3 ммоль) ЗОС- HOe-QH ° «DCHA растворяют в смеси иэ 75 мл эфира и 25 мл 2 н. раствора серной кислоты. После разделения фаэ органическую фазу отделяют, затем промывают сначала 25 мл 2 н. раствора сер. йой кислоты, а затем водой. Эфирный раствор упаривают в вакууме. Маслообразный продукт (5,44 г) вместе с 4, 42 r (24 ммоль) пентафторфенола растворяют в 30 мл этилацетата. Раст вор охлаждают до О С, добавляют к нему 4,63 г (22,5 ммоль) дициклогексилкарбодимида. Суспензию в течение е l ч выдерживают на холоде, а затем фильтруют. Фйльтрат упаривают в вакууме, остаток растворяют в 50 мл н-гексана и раствор промывают 5 раз (по 20 мл) 5Ъ-ным раствором бикарбоната натрия, а затем 2 раза по 20 мл водой. Раствор высушивают и упаривают в вакууме. Маслообразный остаток на холоде затвердевает. Получают 8,12 г (91Ъ) BOC-NOe -ОРДЕР, который плавится при 55-57 С; (са )и -26,8 (с 1,0, в диоксане); Rg 0,80; Ry 0,85. 2 . 4 Найдено, Ъ: С 51,51; Н 4,68; F 24,66. С 7 H gp 04NFg (М397, 35) Вычислено, Ъ: С 51,39; ff 5,07; F 23,91. 2. L-йспарагил-(трет-бутилэфир)— .-D-фенилглицинамид. l0,б г (23,2 ммоль) 2,— Amp-(() l,1 г 10Ъ-ного палладия на активированном угле. Через 3 ч сусленэию фильтруют, катализатор промывают диметилформамидом, промывную жидкость смешизают с фильтратом. Упаривают в вакууме, твердый остаток перекристаллизовывают иэ 100 -мл метанОла. Получают 5,5 г (74Ъ)Н-Авр-(0 В 4 0,15. Найдено, Ъ: С 5980; Н 710„. N 13, 18. С, Н2«04Ng (И 311,28) Вычислено, Ъ: С 59, 79; Н 7, 2 1; N 13, 08. 3. N-трет-Бутилоксикарбонил-Ь-норвалил-L-аспарагил- -(трет-бутилэфир)-D-фенилглицинамид. 1,60 r (5,0 ммоль) Н-ASp-(О«Вы)-З; -РИД-НН2 и 1,99 г (5,0 ммоль)ЗОС-N0e-OP P растворяют в 10 мл диметилформамида в присутствии 0,70 мл (5, 0 ммоль) триэтиламина. На следующий день реакционную смесь упаривают в вакууме и твердый остаток промывают эфиром. Получают 2,45 г (91,9Ъ) ВОС-Нбе-Аар-(О Вц)-Э-РИЯ-НН2 который плавится при <07-208 C; Rf 0,75; f с«) -62,8 (c 1, О„в диметйлформамиде) . Найдено, Ъ: С 60,63; Н 8,04; N 10,18. 16 С 27H420>N4 (М 534,64) Вычислено, Ъ: С 60,65; Н 7,92; N 10,48. 4. L-Норлейцил-L-аспарагил-D-фенилглицинамид-гидрохлорид. 2,20 r (4,11 ммоль)ВОС-kl?e-A5p-ô ö)-D-РИД- NH2 обрабатывают 15 мл 4 н. раствора уксусной кислоты в соляной кислоте. Через 1 ч реакционную смесь упаривают в вакууме, твердый остаток обрабатывают эфиром и фильтруют. По10 лучают 1,70 г (99Ъ) Н-N(!e-Аьр- 0-РИД-NH2 HCE который, разлагаясь, плавится при 225оC; Н7 0,20; (o4 ) -63 7 (с 1,0, в диметилформамиде) . 5. N-трет-Бутилоксикарбонил-L15 -триптофил-L-норлейцил-1,-аспарагил-D-фенилглицин амид. 1,57 г (3,78 ммоль)Н-NEe-Amp-0-РИД-ЙИ2 НС0 и 1,52 r (3,78 ммоль) ЗОС-Тгр-05и в 50 мл диметилформамида обрабатывают 1,06 мл (7,6 ммоль) "0 триэтиламина. Смесь оставляют на ночь, затем упаривают в вакууме и остаток обрабатывают водой. Получают 2,45 г (97,5ь) ВОС-Тгр — й8е,-Asp-0-Рhg-NHg, который, разлагаясь, плавится при 25 217 С; R 0,35; (сс )и -32,7 (с 1,0, в диметилформамиде) . Найдено, Ъ: С 61, 41; H 6, 86; N 12,65. СЗ4 Ы440ф, (М 664, 77) Вычислено, Ъ: С 61,431 Н 6,67; N 12,64. б. L-Триптофил-L-норлейцил-L-аспарагил-D-фенилглицинамид-гидрохлорид. 2, 20 r (3, 32 ммоль) ЗОС-Т р- КРе-Asp35 -Э-1 4g-NH2 обрабатывают 25 wr 4 н. раствора диоксана в соляной кислоте в присутствии 1,20 мл {17 .ммоль), меркаптоэтанола. Через 15 мин раствор упаривают в вакууме, к остатку добав40 ляют эфир. Осадок отфильтровывают, получают 1,99 r (99Ъ) Н-Trp-NBe-Asp-П-РИД-НН2. )4С0 кОторый, разлагаясь, плавится при 217-221 С; В 0,35; .(ас j и -54,2 (c 1,0, в диметилформамиде) . 7. 2-D- (трет-Бутилоксикарбониламиноокси) пропионил-Ь-трицтофил-L-норлейцил-L-аспарагил-D-фенилглицинамид. 1, 80 г (3,0 ммо ) Í-Vrp-Nee-Asp-э"phg-НН2 НСР, и 1,36 r (3,0 ммоль)ЗОС50 - О-ОРЯа-ОРСР в 30 мл диметилформамида обрабатывают в 1,26 мл {9,0 ммоль) триэтиламина. Смесь оставляют на ночь, упаривают в вакууме и остаток обрабатывают водой. Осадок отфильтровывают, полученное вещество очищают хроматографией на силикагеле. Получают 0,99 г ВОС-0-ОАРа-Тгр-NEe"ABp-З phd-МН,который, разлагаясь, плавится при 211-212 C; R < 0,35;R4> 0,25; (с4)п -22,80 (с 1, О, в диметилформа60 миде) . Найдено, Ъ: С 59,10, «1 6,30; И 31,21. С 7 Н49 Ою Н 4 (М 751, 85) Вычислено, Ъ| С 59,11; Н 6,57; 65 N 13,04. 664 Пример 10. 1. N-трет-Бутилоксикарбонил-Т— -норвалин-пентафторфениловый эфир. 8, О r (20 ммоль)ВОС-Ми-OH DCHA с 60 мл эфира и 20 мл 2 н. серной кислоты встряхивают до полного растворения. Эфирный раствор промывают 20 мл 2 н. раствора серной кислоты, сушат и упаривают в вакууме. Оставшееся масло вместе с 3, 70 r (20 ммоль) пентахлорфенола растворяют в 25 мл этилацетата. К раствору добавляют 3,92 r (19 -ммоль) дициклогексилкарбодиимида и смесь выдерживают 1 ч при О С. Суспензию фильтруют, фильтрат упаривают в вакууме и остаток растворяют в 50 мл н-гексана. Раствор промывают 2 раза (по 20 мп) 5Ъным раствором бикарбоната натрия, а затем 2 раза (по 20 мл) водой. Раствор упаривают в вакууме. Маслообразный остаток кристаллизуют на холоде. Получают б, 21 r (81Ъ) ВОС- Nva- Op p который плавится при б О-62 C; R> 0, 70; (оС )р -32,3 (с 1,0, в диоксане) . Найдено, Ъ: .С 50,06; Н 4,64; F 24,63. С Н 04NFg Вычислено, Ъ: С 50, 14; Н 4, 73; Г 24,78. 2. N-трет-Бутилоксикарбонил-L-норвалил-L-аспарагил- / †(трет-бу- 30 тилэфир)-D-фенилглицинамид. 1,60 г (5, О ммоль) Н-Asp-(OtBuI-D-РИ(-NHg (пример 9.2) и 1,91 r (5,0 ммоль) ВОС-Nva-ОРДЕР в 10 мп диметилформамида обрабатывают 0,70 мл 35 (5 ммоль) триэтиламина, Смесь оставляют на ночь, затем упаривают в вакууме и остаток обрабатывают эфиром. Получают 2,36 r (87,4%)j30C-Nva-Asp-(О Bu)-Q-РИ - NHg который плавится при 200 — 202 C; R< 0,75; (с6 ) -66,7 (с 1, О, в диметил формамиде ) ° Найдено, Ъ: С 60,08; Н 7,68; N 10,96, С Н40ОТ N4 (M 520, 61) Вычислено, Ъ: С 59,98; Н 7,7; N l0, 76. 3. L-Норвалил-L-аспарагил-D-фенилглицинамид-гидрохлорид. 2,0 r (3,84 ммоль)ВОС-Nva-Àsð-(О Ви)-D-РИ(5-NHg обрабатывают 15 мл 4 í. 50 раствора уксусной кислоты в соляной кислоте. Через 1 ч суспензию разбавляют эфиром и фильтруют холодной. Получают 1,52 r (98Ъ) Н-Nva-Asp-D- Phg-NHp KCB Гидрохлорид плавится, разла- 55 гаясь, при 204 С Rf О 15 (+ )р 58 О (с 1,0, в диметилформамиде) . 4. N-трет-Бутилоксикарбонил-L-триптофил-L-норвалил-L-аспарагил-D-фенилглицинамид. 1, 50 r (3, 74 ммоль) Н-Nva- Asp-D-phg-HH HCE и 1,50 r (3, 74 ммоль) ВОС— -Trp -05u растворяют в 30 мл диметилформамида, добавляют 1,05 мл (7,5 ммоль) триэтиламина. Реакцион,ную смесь оставляют на ночь, затем 560 18 упаривают в вакууме, остаток обрабатывают водой и фильтруют. Продукт (2,36 r) перекристаллизовывают иэ 300 мл 80Ъ-ного этанола. Получают 1,54 r (66,2Ъ)ВОС Trp-Nva-Asp-D-РИ -НН;, т.пл. 240ОС (с разложением)," Rð 0,35; (x.)р -60,5 (c 1,0, в диметилформамиде). Найдено, Ъ: С 60,66; Н 6,59; N 12,57. С Н4 08И (М 650,71) Вычислено, Ъ: С 60,91; Н 66,51; N 12,92. 5. L-Триптофил-L-норвалил-L-аспарагил-D-фенилглицинамид-гидрохлорид. 1, 50 r (2,30 ммоль) ВОС-Tr p-Nva-Asp-D-РИ -NH обрабатывают 20 мп 4 н. раствора диоксана в соляной кислоте в присутствии 0,77 мл (ll ммоль) меркаптоэтанола. Спустя 30 мин суспензию упаривают в вакууме, твердый остаток обрабатывают эфиром и отфильтровывают. Получают 1, 34 r (99Ъ ) Н-Tr p-Nva-Asp-D-РИф-НН ° НСР,т. пл. 216 С. (с разложением); R О, 30; (о ) р-53, 3 (с 1, О, в диметилформамиде) . 6. 2-D-(трет-Бутилоксикарбониламиноокси)пропионил-L-триптофил-Ь-норвалил-L-аспарагил-D-фенилглицинамид. 1,24 r (2, 11 ммоль)Н- Г "р-Nva-Asp-D-phg- NK2 НЛи О, 95 r (2, 10 ммоль)ВОС-0-0AEa-ОРСР растворяют в 40 мп диметилформамиде и добавляют 0,88 мл (б;3 ммоль) триэтиламина. Реакционную смесь оставляют на ночь, затем упаривают и остаток обрабатывают водой и фильтруют, промывают„ водой и эфиром. Продукт (1,40 г) перекристаллизовывают из смеси пиридина, уксусной кислоты и воды, приготовленной в соотношении 20:б:11. Получают О, 72 r ЗОС-D-OAOa- Г р -Йю-Asp-Р-РИр-)(Н2, т.пл. 210 C; Rf 0, 28; (cC ) > -26, 5 (с 1, О, в диметилформамиде) ° Найдено, Ъ: С 58,57у Н 6,20у N 13,17. сзбнатОю ит (м 737,79) Вычислено, Ъ: С 58,61; Н 6,42; N 13,29. Пример . 11. 1. Пентафторфениловый эфир 2-Ь†(трет-бутилоксикарбониламино)декановой кислоты. К раствору 4,25 r (44,7 ммоль)BOC-Ade- ОН 2,94 г (16,0 ммоль) пентафторфенола в 40 мл этилацетата, ох-. лажденному до О С, добавляют 2,99 г (14, 5 ммоль) дициклогексилкарбодиимида. Реакционную смесь 1 ч перемешивают при комнатной температуре и 1 ч при ООС. Выпавший осадок отфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме. Оставшееся маслянистое вецество растворяют в 40 мл н-гексана, Раствор в делительной воронке промывают 5 раз (по 20 мл) 5Ъ-ным раствором бикарбоната натрия в 2 раза (по 20 мл) водой сушат и упаривают в вакууме. Остаток кристаллизуют на холоде. Получают 5, 82 г (87, 5Ъ)ВОС-L-Ade-ЭРЧЕР 664560 т пл „45-46" С) R 1 О, 85; (o )и -18, 1 (с 1, О, н диоксане) . Найдено, Ъ: С 55,56; Н 5,96; F 20,89 ° C2i HggOgNFg Вычислено, Ъ: С 55,63; Н 6,22; F 20,95. 2. 2-L-(трет-Бутилоксикарбониламино)деканоксил-Ь-аспарагил- ф— †(трет-бутиэфир) -D-фенилглицинамид. 0,96 г (3,0 ммоль)Н-Абр-{OtBu)-Р-Р)Я-Ю2(пример 9. 2) и 1, 36 r (3, О ммоль) B0C- (.-Ade-ОРДЕР растворяют в 10 мл диметилформамида, к раствору добавляют 0,42 мл (3,0 ммоль) диэтиламина. Реакцг(онную смесь оставляют на ночь, затем упаринают и к остатку добавляют эфир. Суспензию фильтруют и осадок промывают эфиром. Получают 1,53 r (86, 4Ъ) ВОС-Ь-Ade-Amp-D-phd- NH, т.пл. 182-183 С; R4 О, 70; (0i, ) -27 бо (c 1,0, в диметилфоргламиде) . Найдено, Ъ: С 62,89; Н 8,66; N 9,44. С H5OOINp (М 590,89) Вычислено, Ъ: С 63 02; Н 8 55; N 9,49. 3. 2-L-Аминодеканоил-L-аспарагил-D-фенилглицин амид-гидрохлорид. 1, 40 г (2, 37 ммоль)ВОС-Ь-Ade-Азр-7)-РИД-NH2 обрабатывают 15 мл 4 н. ,раствора уксусной кислоты в соляной кислоте. Спустя 1 ч реакционную смесь упаринают в вакууме. Твердый остаток обрабатынают эфиром и фильтруют. Получают 1, О r (89,3Ъ) H-L-Ade-Amp-2-РИТ-ИН 2 НС0 т.пл. 177-178 Су R g0,35; (с(. ) -58,9О (с 1,0, в диметилформамиде) . 4. N-L-трет-Бутилоксикарбонил-N-индформил-Ь-триптофил-2-L-аминодеканоил-L-аспарагил-D-фенилглициламид. 0,90 г (1,90 ммоль)Н-Ь-Ade-Анр-З-РИД ;ИН2 НС0 и 0,94 гЗОС- Ггр (Fог)-ОРДЕР растворяют в 15 мл диметилформамида и добавляют 0,53 мл (3,8 ммоль) трйэтиламина. Яа следующий день реакционную смесь упаринают в вакууме, остаток обрабатывают водой и фильтруют, затем промывают водой. и эфиром. Получают 1,26 г (92, ОЪ) ЭОС-Тгр -(Porj-4-Ade-Amp-0-ÐÉô-)(Í2,ò.пл. 210 С (c разложением) р R< О, 45; (oi ) > -50,5 (c 1,0, в диметилформамиде) . Найдено, Ъ: С 62,52; Н, 6,81 N 11,38. CgqHgg OqNg (М, 748,89) Вычислено, Ъ: С 62,55; Н 7,00; N 11,22. 5. L-Триптофил-2-L-аминодеканоил-L-аспарагил-D-фенилглицинамиД-гидрохлорид. 1,15 г (1,53 ммоль)ВОС Tt p)Гог)-)-Ade-Asp-D-РЬЯ-NH обрабатывают 10 мл 4 н. раствора диоксана в соляной кислоте н присутствии 0,53 мл (7,5 ммоль) меркаптоэтанола. Через 15 мин реакционную смесь упаривают в вакууме, остаток обрабатывают эфиром и отфильтровывают. Таким способом получают 0,98 г (98Ъ) Н-Тгр-L-Ade-h5p-O-Р1ф NH2 HC(. Гидрохлорид плавится при 225ОC (с разложением);В 0,451 (ai, ),-47,6 (с l, О, н диметилформаииде). б. Трет-Бутилоксикарбониламино,оксиацетил-I,-триптофил -2-Ь-аминодеканоил-I.-аспарагил-D-фенилглицинамид. 0,85 r (1,24 имоль)Н- Т гр-L-Ade-Amp D- РИф MH2 HCO и О 55 r (1 24 ииоль) ЗОС-ЩИц - ОРСР (пРимеР 1.9) Раст10 воряют в 10 мл диметилфориамида н присутствии 0,52 мл (3,72 ммоль) триэтиламина. На следующий день реакционную смесь упаривают в вакууме, остаток фильтруют, осадок промывают водой и зфирогл. Продукт (0,82 r) растворяют н небольшом количестве смеси 10 растворителей и обычным способом осуществляют хроматографию на колонке с силикагелем. Получают О, 42 гЗОС-ОДОЙ- )"гр-L-Ade-Aüp-D-РЬД-NH, т.пл. 194-198ОС (с разложением); R(0,35 Фю О 25 (a )в -35 9о(c 1 О в диметилформамиде) . Найдено, Ъ: С 60,54; Н 6,87; N l2 16. С(о Н О о NI (М 793,99) . Вычислено, Ъ: С 60,51; Н 6,98; N 12,35. Пример 12 ° 30 1. Пентафторфениловый эфир 2-D. †(трет-дибутилоксикарбониламино) деканоной кислоты. Способом, описанным для L-изомера (пример 11.1), получают плавящий35 ся при 45-46 С продукт с 75Ъ-ным выходом; Н1 0,85; (с ) +18, 1 (c 1,0, 2 ° ,н диоксане) . 2. 2-D-трет-Бутилоксикарбониламинодеканоил-L-аспарагил- (трет-бутилэфир) -В-фенилглицинамид. 1, 20 г (3, 72 ммоль) Н-Аэр-(О Ви) -D -Phg-МН2 (пример 9 ° 2) и 1,82 r (4, О миоль) ЭОС-D-Ade-ОРДЕР растйоряют в 10 мл дииетилформамида в присутствии 0,56 мл (4,0 миоль) триэтил45 амина. Через 30 мин реакционную смесь упаривают н вакууме и остаток фильтруют. Получают 1,95 r (88,8%)BOC-AdeAsp-(О Ьц)-D-V4p-КН2, который плавится при 156-157ОС; R j О, 85; (с6 ) > -47,5 50 (с 1,0, в диметилформамиде) . Найдено, Ъ: С 63, 14; Н 8,60; N 9,56. C pi Н <> ОуМ (М 590, 74) Вычислено, Ъ: С 63 02; Н 8, 53; И 9,49. 3. 2-D-Аминодеканоил-L-аспарагил-D-фенилглицинамид-гидрохлорид. 1, 83 r (3, 08 ммоль)ЗОС-Ade-Asp-(ОЪи}-Q-Phg-NH> обрабатывают 11 мл 4 н . раствора уксусной кислоты в соляной кислоте. Спустя 1 ч реакционную смесь упаринают в вакууме. Остаток фильтруют. Получают 1,45 г (99Ъ)Н- O.Ade-Азр-D-РЩ-NH2 НСР который плавится при 150-153oC; Rg 0,4Ъ;(< ) -82,4О (с 1, О, н диметилформамиде) . 664560 22 Формула изобретения Составитель В. Волкова Редактор О. Кузнецова Техред М.Петко Корректор Е.Папп Заказ 2839/56 Тираж 512 Подписное ЦЯИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035 Москва Ж вЂ” 35 Ра кая наб. д. 4 5 Б"Ы Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 4. N-трет-Бутилоксикарбонил-Ь-триптофил-2-D-аминодеканоил-L-аспарагил-D-фенилглицин-амид. К раствору 1,40 r ((22,97 ммоль) Н-D-Asp-D-Vhg-kH2 КСР и 1, 44 г (3,05 ммоль) 8ОС-Тгр-ОРДЕР в 15 мл диметилформамида добавляют 1, 26 мл 5 (9, 0 ммоль) триэтиламина. Реакционную смесь выдерживают в течение ночи, упаривают в вакууме, остаток на холоде обрабатывают эфиром и суспензию фильтруют. Осадок промлвают эфиром, 10 затем водой, содержащей небольшое количество уксусной кислоты и чистой водой. Получают 1, 72 (80,4%)3ОС-Trp-p-Ade-L-Aep-О-Phg-k)g т.пл. 170 С (с разложением); R< 0,50; {< ), -61,1 )5 (с 1,0, в диметилформамиде) . Найдено, %:. С 63,39; Н 7,21; N 11,58. Сз8 Н 2 О Ng (M 720, 84) Вычислено, %: С б 3, 31; Н 7, 27; N 11, 66. 5. L-Триптофил-2-D-аминодеканоил-L-аспарагил-D-фенилглицинамид-гидр охлорид. 1,60 г (2,22 ммоль)ЗОС- Ггр-р-Ade-Asp-p- Phg-МН2 обрабатывают 15 мл 4 н. раствора диоксана в соляной кислоте в присутствии 0,78 мл (ll, l ммоль) меркаптоэтанола. Через 10 мин реакционную смесь упаривают и остаток фильтруют. Этим способом получают 30 1,37 г (93,8%)Н-Trp-D-Ade-Amp-Р- РЬф-kHg HC8 который, .разлагаясь, плавится при 243 С; R> 0,40; (сС ) -31,7 (с 1,0, в диметйлформамиде) . б ° трет-Бутилоксикарбониламино- 35 оксиацетил-L-.òðèïòîôèë-2-D-аминодеканоил-Ь-аспарагил-D-фенилглицин-амид. К раствору 1,30 г (1,98 ммоль)Н-Trp-р-Ade-Asp- Î-phd-КН2 НСР и .0.95 г 40 (2,1 ммоль)ВОС-ОДОу -ОРСР (пример 1.9) в 15 мл диметилформамида добавляют 0,84 мп (6,0 ммоль) триэтиламина. На следующий день реакционную смесь упаривают в вакууме. Маслообразный остаток обрабатывают водой. Суспензию фильтруют и остаток промывают водой, содержащей небольшое количество уксусной кислоты. Продукт перекристаллиэовывают из 80%-ного этанола. Получают 0,96 г (61, 2%) ВОС-ОДОу-У р- О-Ade-Asp-D- Phg-kH т. пл. 200-203 С (с разложением); о 2 R> 0,45; (сс ) -26,90 (с 1,0, в димет ил формами) . Найдено, %| С 60,50; Н 6,50; N 12,19. C4o Hss О ю N7 (M 793,90) Вычислено, %: С 60,51; Н 6,98; N 12,35. Способ получения пептидов общей формулы 5- Tr p -В-Asp-phd -NH< где A — 2- (L, D) — (трет-бутилоксикарбониламиноокси} ацетил, 2- (L, D) -трет-бутилок сикарбониламиноокси) пропионил;  — метионил, лейцил, норлейцил, 2-амянодеканоил, или их солей,о т л и v а ю щ и й,с я тем, что тетрапептиды общей формулы Н-Тгр-5 — Asp-Phg — kК где В имеет укаэанные значения, подвергают взаимодействию с соединением общей формулы A — Х где A имеет указанные значения; Х вЂ” пентахлорфенокси- или пентафторфеноксигруппа. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Шредер Э., Любке К. Пептиды ч 1 М Мир 1967, с ° 116 .
