2-хлор-6-метил-4-арилалкилфенолы, проявляющие антимикробную активность
Союз Советскик
Социалистических
Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 110377 (2)) 2460620/23-04
/ (23) Приоритет — (32) 15.03. 76 (3() ХР СОбс/191842 (33) ГДР (5() М. Кл, С 07 С 39/28/I
А 61 К 31/055
Гоеударствеииый комитет
СССР ио делам изобретеиий
v„ открытий
Опубликовано 050779. Бюллетень № 25 (53) УДК547.568.5 (088.8) Дата опубликования описании 0807.79 (72) Авторы иэобретения
Иностранцы
Аксель Крамер, Эберхард Иреттер, Эрих Грюнерт, Вольфганг Войффен и Ильтруд Хеппе (ГДР) Иностранное предприятие ФЕВ йенаФарм (ГДР) P() Заявитель (5 4 ) 2-ХЛОР-б-METHJI-4-АРИЛАЛКИЛФЕНОЛЬГ,"
ПРОЯВЛЯЮЩИЕ АНТИМИКРОБНУЮ AKTHBHOCTh (О
Си . Х у, .ф .Л
Н0
Сн, 3
Изобретение относится к новым веществам, в частности к 2-хлор-6-метил-4- арилалкилфенолам, проявляющим антимикробную активность, которые могут быть использованы при изготовлении фармацевтических препаратов.
Известны различные вещества, проявляющие антимикробную и фунгистатическую активность, например гексаметилентетрамин (1), тетраметилтиурамдисульфид (2)„ 4-бромфенил" изотиоцианат (3), 3,5-дибензилтетрагидро-1,3,5-тиадиазин-2-тион (дибензтион) (4), 3-нитрофурфуральсемикарбаэон (5-нитрофураль) (5).
Целью изобретения является выявление новых веществ, проявляющих . антимикробную активность.
Предлагаемые 2-хлор-б-метил-4-арилалкилфенолы общей формулы где R — -водород,,метил;
Х вЂ” водород, хлор, проявляющие антимикробную активность, синтезируют цо реакции Фриделя—
Крафтса (б) взаимодействием побочного продукта, образующегося в производстве 4-хлор-2-метилфенола и содержащего в основном 2-хлор-б-метилфенол и небольшие количества 2-метил- фенола и 4-хлор-б-метилфенола, с бенэилхлоридом или его хлорзамещенным, или бензиловым спиртом или его хлорзамещенным, или стиролом.
При большом содержании:в исход-" ном продукте 2-метилфенола и 4-хлор-2-метилфенола целесообразно для повышения чистоты и увеличения выхода целевых соецииений снизить количество вышеуказанных примесей. Это достигают путем отгонки 4-хлор-2-метилфенола, хлорирования 2-метилфенола, находящегося в получаемой смеси 2-хлор-б-метилфенола, 2-хлор-6-метилфенола и 2-метилфенола, и последующей дистилляции.
Арилалкилирующий агент, например бензилХлорид, используют в избытке или в количествах, меньших эквива-лентного количества.
В качестве катализатора применяют хлорид алюминия, хлорнд сурьмы (V)„ трехфтористый бор, хлорид железа (ХХХ), хлорид титана (Iv), хлооид олова (IV), в особенности хлорид ции-
672189 4 ка. Каталитическое действие оказы нают также металлы, например цинк или титан, а также, особенно при использовании бензилового спирта, планиковая, серная и фосфорная кислота или пятиокись фосфора.
При использовании бензилхлорида и стирола целесообразно применять катализаторы в количествах, меньших чем эквимолярные. В случае использования бензйлового спирта можно применять и избыток катализатора. 10
Процесс ведут как в среде раство "рителя, так и без него. В качестве растворителя используют, например, петролейный эФир, сероуглерод, хлороформ и уксусную кислоту.
Взаимодействие с бензилхлоридом. бензилоным спиртом или стиролом осуществляют прн 20-200 С. В отсутствие раствбрителей реакцию целесообразно проводить при 60-200 С, предпочти- 20 тельно при 100 †1 С. Продолжительность ее при этом составляет несколько часов. При проведении реакции в среде низкокипящих растворителей продолжительность реакции возрастает.
Продукты реакции ныделяют обычными способами с помощью дистилляции и кристаллизации.
Пример 1. 500 r продукта, содержащего 70,9% 2-хлор-6-метилфенола, 10,4% 2-метилфенола, 14,4Ъ
4-хлор-2-метилфенола, 0,9% 2,4-дихлор-á-,ìåòèëôåíoëà, 3,33 различных хлорированных фенолов и 0,13 воды, нагревают с 11 г безводного хлорида 35 цинка при .перемешивании в отсутствие влаги до 100 С. В течение 2 ч прибавЛяют по каплям 535 г бензилхлорида, в течение 1 ч нагревают до 150155 С и при этой температуре перемешивают в течение 5 ч. После охлаж- 40 дения реакционную массу промывают водой и дистиллируют.
Получают 214 г 2-хлор-6-метил-4-бензилфенола, чистота 97,8%, т.кип. 128-129 С/О, 2 мму п, 1, 5944. 45
Вычислено,%: Cl 15,24; С 72,28
Н 5,68.
С,„Н„С8О.
Найдено, Ъ: Cl 14, 79; С 72, 56
Н 5,82, 50
Пример 2. Проводят опыт, как в примере 1, добавляя по каплям
682 г 4-хлорбенэилхлорида.
Получают 158 г 2-хлор-б-метил-4-(4-хлорбензил)-фенола, чистота 98,6 т.кип. 144-150"С/0,1 мм, пф 1,6029.
Вычислено,Ъ| Cl 26,54; С 62,921 Н 4,53.
CZ> Й, CtqO
Найдено, Ъ | С1 26, 18 у С 62, 87;
Н 4,77.
Пример 3. Нэ 500 г продукта такого же состава, как и н примере 1, 13 г безводного хлорида цинка, 828 г
3,4-дихлорбеизилхлорида аналогично примеру 1 получают реакционнув массу, 65 промывают ее водой, дистиллируют и перекристаллнзовывают из бензина (т.кип. 60-70 С) .
Получают 188 г 2-хлор-б-метил-4— (3,4-дихлорбензил) -фенола, чистота 99,2%, т.пл . 106-107 С.
Вычислено,%: Cl 35,27; С 55,75;
Н 3,67.
Cg H1l С84 О
Найдено, Ъ: Cl 35,08; С 55,89;
Н 3,78.
Пример 4. Через 494 r дистиллата технического 2-хлор-б-метилфенола, содержащего 84,8Ъ 2-хлор-б-метилфенола и 15,2Ъ 2-метилфенола, при...
35 С пропускают в течение 1 ч 25 г хлора, перемешивают при этой температуре в течение 1 ч, промывают водой и дистиллируют.
Получают 434 r 2-хлор-6-метнлфенола, чистота 94,2Ъ, т.кип. 72 C/7 мм.
Вычислено,%: Cl 24,9.
Найдено,Ъ: Cl 24,1..
K 356,4 г 2-хлор-б- метилфенола, 800 мл хлороформа и 60 г безводного хлорида цинка добавляют по каплям в течение 25 мин при энергичном перемешнвании 126,6 r бенэилхлорида, перемешивают при этой температуре в течение 12 ч с обратным холодильником, промывают водой, отгоняют растворитеяь и дистиллируют. Получают
204,0 г 2-хлор-б-метилфенола, которые могут быть возвращены в процесс, и 163,2 г 2-хлор-6-метил-4-бензилфенола, т.кип. 127,2 С/0,2 мм, и 1 5935.
Tl р и м е р 5. При определении бактериостатической и микостатической активности 2-хлор-6-метил-4-арилалкилфенолы (ХМФ) вводят в питательную среду в концентрации, изменяющейся н геометрической прогрессии.
При бактериостатических испытаниях используют микробы Staph °
aureus, Entегоkokken, Й. coIi, Prot.
mirabiIis u Pseud, aeruginosa, при микостатических испытаниях грибки
Trich. montagrophytes и типично растущие Trich. rubrum, Trich, tonsurans, Trich. schonIeinii, Misraporon
audouinii, Nisrapon canis trichosporon
cutaneum и два штамма Candida аУЪ1 †. сапз4
Оценивгаот бактериостатическую (KgW< ) и микостатическую (K W<0 ) активность ХМФ, гексаметилентетрамина, тетраметилтиурамдисульфида, анти-, сейтического туалетного мыла из смеси поверхностно -активных веществ (ПЛВ), мыла из смеси ПАВ с добавкой
3% (определение бактериостатической активиости) или 1Ъ (определение микостатической активности) ХМФ.
K()Wg и Kg W 0 предельные коли честна испытуемого препарата, при введении которых наблюдается абсолютное торможение и замедление роста
6 72189 микробов (величина разбавления) . Полученные результаты приведены в табл. 1.
Результаты испытаний показывают, что ХМФ обладают хорсшей активностью по отношению к бактериям и высокой активностью по отношению к грибкаМ.
Бактериостатическое действие наблюдается при разбавленнях до
1: 10 000.
Прн разбавлениях л:е до 1: 1000 рост бактерий полностью подавляется. Микостатическое действие наблюдается в среднем при разбавлениях до 1. 50000. При разбавлениях до
1: 32 000 достигается полное торможение роста.
ХиФ превосходят по бактервостатической и мнкостатической активности гексаметилентетрамин, а по микостатической активности тетраметилтиурамди сул ьфи д.
При использовании ХИФ в комбинации с антисептическим малом бактериостатическая активность его не только сохраняется, но ч сильно возрастает (более, чем в 6 раз) . Иикостатическая активность такого мыва . также возрастает при добавке в него
ХИФ.
Пример 6. Определяют микостатическую активность по отнсиаению к искусственно вызванному кандидозу петушиного гребня ХИФ, введенного в состав мала из смеси ПАВ или в пропиленгликоль, который сам обладает микостатической активностью, собственно ваала и пропиленгликоля, а также бората натрия, используемого при лечении кандвдоэа у людей.
Натертый гребень пятинедельного цыпленка инфвцируют культурой Candida
aIbicans (пятно величиной с горсшину) .
По два раза в день гребень оп1Фыскивают 20%-ным раствором декстрозы.
Начиная с пятого и до седьмого дня после инфицирования проводят ле- 45 чение испытуемыми препаратами и оценивают результаты по пятибальной шкале:
1 — диаметр микозного очага 5 мм 50
2 — диаметр микозного очага 5-10 мм
3 — диаметр микозного очага 1.0-?О мм
4 — диаметр 55 микозного очага 20 мм (больше
2/3 греби я)
5 — йоражен весь гребень
Иа чертеже показан ход лечения
204-ным раствором бората натрия в глицерине (кривая 1), ЗЪ-ным раствором ХИФ в пропиленгликоле (крввая 2), пропиленглвколем (кривая 3), малом из смеси ПАВ с добавкой 3% ХИФ (кривая 4), малом из смеси BAB (кривая 5)
Контроль — кривая б, 65
Иыло из смеси ПАВ с добавкой ЗВ
ХИФ оказывает такое же действие, как и борат натрия.
Активность пропиленгликоля и мыла из смеси DAB увеличивается при добавке к ним ХИФ.
При использовании 20%-кого раст» вора бората натрия s гМицерине, 3%ного раствора ХИФ в пропиленглвколе, пропиленгликоля, мыла из смеси ПАВ с добавкой ЗВ ХИФ или мала лечение протекает в 3,5, 2,4, 1,9, 2,6 или 2, 4 раза быстрее по сравнению с контролем соответственно.
Пример 7. С помощью источ-. ника HK-излучения у морских свинок ,получают стандартные ожоги третьей степени (диаметр около 3 см).
Лечение начинают на двенадцатый день после облучения н удаления струпьев (вариант A) или сразу же после облучения для предотвращения раневой инфекции (выделены возбудители Staph. aureus u Е.СОХИ, наблюдавшейся обычно у животных, которых не лечили (вариант Б) .
Ежедневно один раэ в день обрабатывают ожоги 1%-ным раствором ХИФ в пропиленгликоле, 10%-ным водным раствором автисептического туалетного мыла из смеси ПАВ или 1%-ным раствором 4-хлор-2-этилфенилового эфира уксусной кислоты в пропиленгликоле. <ак в варианте A так и в варианте Б нроявлжотся антисептические свой- ства ХИФ (см.табл. 2). уже на второй день после начала лечения раны подсохли и были свободны от гнойных отложений.
Иыло, содержащее смесь ПАВ, значительно менее эффективно, хотя при его использовании раны также подсохли на второй день и были свободны от гнойных отложений. Грануляцвя начинает медленно появляться лишь на третий день.
4-Хлор-2-этилфениловый эфир уксусной кислоты, обладающий хорсмимв бактериостатвческимв и микостатвческими свойствамв, однако не эффективен при лечении ран. При лечении этим соединением 4 -50% животных, т.е. примерно такое же количество, как и в контроле, умирает на третийпятый день лечейия.
ХМФ обладают лишь незначительной токсичностью (изучена на белых мышах) . Средняя смертельная доза при пероральном введении 17002180 мг/кг, прн подкожном введении 1000 мг/кг н при внутрввенном введении 96 2мг/кг, П р и и е р 8. Изучают токсическое действие на кожу н сенсибилнзирующие свойства ХИФ, 4-бромфенилнзотноцианата, обладающего антнмикробной актввнбстью, двбензтиона, об-. ладающего фунгистатнческой активностью, н 1-3-динвтро-4-хлорбензола, 672189 обладающего сенсибилизирующими свойствами.
У белых морских свинок весом около 250 г выбривают спину электробритвой. Испытания начинают через
24 ч.
Концентрация испытуемого препарата, втираемого в спину в виде мази, составляет 12 8) 6,4> 3 2) 0 8)
0,2 и 0,054. Мазь нанОсят в соответствии с тестом Готта.
Через 48 ч мазь удаляют.
Спустя 30 мин и затем ежедневно определяют кожную реакцию вплоть до затухания.
При отрицательном результате проводят дополнительные испытания, умень-15 шая концентрацию препарата в 4 раза.
Сесибилиэирующие свойства каждого из испытуемых препаратов определяют в группе из 40 животных с помощью аппликационной кожной пробы. 20 у свинок выбривают спину, через
24 ч ежедневно втирают. по 0,3 r мази, массируя спину в течение 2 мин.
Сенсибилизацию проводят в течение
10 дней . 25
После десятидневного перерыва спину вновь выбривают и через 24 ч определяют результирующую реакцию с помощью аппликационной кожной пробы на другой стороне тела.
Контролем (отрицательная реакция) служит основа мази без добавки испытуемого препарата.
В конце опыта проверяют чувствительность каждого животного к 1,3-динитро-4-хлорбензолу(положительная реакция, получение экземы при сенсибилизационном испытании) .
Даже в максимальной концентрации (12,8Ъ) ХМФ не оказывают на кожу раздражающего действия (см.табл . 3), в 40 то время как 4-бромфенилизотиоцианат оказывает раздражающее действие уже в самых низких концентрациях (см. табл. 4) .
Хотя дибензтион также не окаэы- 45 вает токсического действия на кожу, однако по сенсибилизирующей активности он уступает ХМФ.
При использовании дибензтиона сенсибилизирующая реакция проявляется в среднем через 24 ч после аппликационной кожной пробы в форме эритемы, из которой на второй и третий день обычно развивается отек, за которым на четвертый — седьмой день после начала опыта следует шелушЕние в области реакционного очага.
Типичная экземная реакция с узелками, пузырьками и некрозом не наблюдается ни в одном из случаев.
Хотя все препараты содержали дибензтион < количество положительных реакций (в каждом опыте группа из
50 животных), колеблющееся от 0 до
84%, очень различно (см. табл. 5) .
По-видимому, в этом случае какое-то влияние оказывает основа препарата.
В общем, сенсибилизирующая способность оценивается как умеренная.
Пример 9. Испытывают ХМФ в виде 1%-ного раствора в пропиленгликоле, а также в å из смеси ПАВ.
Для сравнения определяют действие нитрофураля и торговой мази на основе нитрофураля (0,24 нитрофураля, 5% карбамида) в виде 1%-ного раствора в пропиленгликоле.
В левый глаз каждой из пяти (десяти) морских свинок весом окбло
250 г (подбирают животных с черным цветом глаз) закапывают по одной капле раствора испытуемого препарата, а в правый глаз в качестве стандартного раздражителя по одной капле 1,6Ъного раствора нитрата серебрая
Вплоть до 6 ч реакцию определяют ежечасно, а затем ежедневно до затухания реакции.
В конъюнктиве определяют гиперемию, секрецию, хемоз и некроэ, в роговицепомутнение.и некроз. Каждый иэ симптомокомплексов в зависимости от тяжести поражения разделяют на три степени (I-III причем III — наиболее сильная реакция) .
ХМФ, введенный в пропиленгликоль или в мыло, не вызывает поражения роговицы и, таким образом, переносится так же хорошо, как и нитрофураль (см. табл. 6).
Оба препарата вызывают лишь легкое раздражение конъюнктивы, которое проходит уже через 3-4 ч.
При введении ХМФ в виде 1%-ного раствора в пропиленгликоле лишь в одфом случае после 60 мин обнаружен точечный некроз, который однако уже через 2 ч бесследно проходит.
Индифферентные основы препарата переносятся хорошо, без всяких последствий.
Вышеприведенные результаты свидетельствуют о пригодности ХМФ (в виде раствора, добавки к мылу) в качестве антисептика, особенно эффективного по отношению к грибкам и бактериям.
Лечение кандидоза петушиных гребней наглядно показывает профилактическое действие ХМФ по отнсшению к дрожжевым грибкам.
ХМФ способствуют эаживлениЮ ран и не приводят к сенсибилиэации.
Они не вызывают необратимых повреждений при воздействии на чувствительные ткани глаза у морских свинок.
672189
Таблица 1 6 ХМФ Гексаметилентетрамии Тетраметилтиурамдисульфид 9,0 11,9 9,6 Испытуемый препарат Мыло иэ смеси ПАВ Мыло иэ смеси ПАВ с добавкой ХМФ 9,7 5 6 9,3 5,4 14,6 8,2 8,5 б 72189 » * oа II Q Il l o A э oeoz и х Э Я И ° и ф счсч Р, Ф)л ф ф "8 >5Р, фх и ° И I фл ф Ф Р Ах ф Рй а (к о Д 5е хд х к фх н. сЯ к ф )i . Э -ФОЭ иовам ф х у C ф QфЕЪ ф3о 44 AC В 35 вр 2 ня В,о П" РЪ "Al ф А1 4444 g ° ЪЛ Д е A4IA w93 Э о 5 ф м <ч о Г ОЪ вах ф g,ф ф ффо И 0Ц м Р, В k,I why Вз Рл II В В Ва ъ4 4 3 Ol Я о х Д ф Д C хцх z5 K Р ф ЪЪ ф3о lilac W Эх ох о 8н ф а о ф Ф « Э х о ф но »И Э Э о М фхя 0 х оеф ЙИА Э И СЧ 4Ч al Р ф х Ф а3 а ( н х II х A ф иЗ ®33 вх оеф ЮКA Ф D РЪ <Ч g « Ill Й к о 55" F24 Q Х«Рх о хэф кнсц д Фйаоюей A 46o Aà é «8 хУ . фейо,еа ФФМЪЭ X ф фA -eOX A aHOPXa В L oo g х«хи oj «Ao «о46 з ф 4а х Х O лъ Ф Ъ хн! 4Ъ "uЬфе «Э Ыхо РКР ф I о о о L4 43 фО К Р, хай«э М йоль ВР, ЭХ о х ни о фй Р О I 8 8 Э«Х жох I (о Э«х мох и ао Оа Эр л а3 а 4 мв6 ЯФ mA6 4:х 672189 C) М C) СЧ Ю М П3 CO с Р4 4 Л Ю с Ю (3 Ю CO Ю (3 °, РЪ СО (3 л 0Ъ Ю СМ 1 Н Ю О3 CO М (М л 1 а! Э О О Х О Х@Х Э Х Ф ч О It Э Ц Э О М О Э Х О О Еч Х ф а ! ч Х О I 1 1 1 1 1 I I 1 1 1 I t 1 I 1 I I 1 1 I 1 I 1 1 I 1 1 1 I 1 I 1 1 I 1 1 1 I I 1 I I I 1 1 1 I I I 1 I I I 1 I 1 I I 1 1 +I 1 I I I 1 1 I I !-1 I I 1 1 I 1 1 1 +i +I I 1 I 1 1 I 1 1 I I 1 1 I 1 I I 1. 1 1 I I 1 1 1 1 1 I 1 +I I 1 I 1 +I 1 I t I 1 1 1 I 1 1 i 1 +1 +I I +I 1 1 1 1 I 1 I 1 I 1 +I 1 1 Н1 I I 1 1 1 I 1 I Э Я ФЬ lt Э Х Х О Э Э Х О 3С Э 0 C4 L О Э И О Н В Э Э Х Ц 672189 15 Таблица 4 12,8 4-Бромфенилизотиоциан ат 0,0008 Нез н ачит ел ьная Дибензтион Высокая (99%) 0,08 Таблица.5 Сенсибилиэирующая способность дибензтиона 3%-ный раствор дибенэтиона в пропиленгликоле 29 О 3%-ный раствор дибензтиона в бензиловом спирте/цетиолане 62 24 3%-ный дибензтион, 2%-ный метенамин в эмульсии вазе-ноловой мази 57 О О 74 26 16 1,З-Динитро-4-хлорбенэол 0,12 3%-ный дибенэтион, 2%-ный метенамин, 0,5%-ная адипиновая кислота, 4%-ная окись цинка, 3%-ная SiIipur 2%-ная S11ipurkon L в тальке, в вбде То же но в пропнлен-гли коле О, 32 и О, 11 Не повышенная 0,05 То же 672189 18 Таблица И и ° l 2хl Зхl lхl -— 3xIIxIII 2xI 1% -ный р аст вор ХМФ в пропиленгликоле 1xIII ÇxI-Мыло иэ смеси, Зх? 2xl— ПАВ с добавкой 1% ХМФ Зх1— 1xI 2хlл 1xIII 1xI -— 1xI1%-ный раствор 5-нитрофураля Мазь на основе lxI 4хl 5-нитрофураля 1xII -1xI Формула изобретения % ф 3 о 2 Х rg lb 30 2Р Ю Л2 +0 еа и Амяееэнасть лечения, ани Тираж 512 Подписное ЦНИИПИ Заказ 3826/24 Филиал nllD Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 2-Хлор-6-метил-4-арилалкилфенолы 25 ,общей формулы где R — водород, метил; X — в одород, хлор, проявляющие антимикробную активность. Источники информации, пРинятые во внимание при экспертизе 1. W. Wenffen и др. О фунгистатическом действии формальдегида, гексаметилентетрамина, и родственных соединений в опытах in vitro при раз- 4О личных концентрациях ионов водорода, ArzneimitteI forschung 9, (1959), 364-368. 2. А. Kramer и др. Микробиологические и дерматологические требования, предъявляемые к антисептическим 45 t мылам, Derm. Nechr., 159 (1973), 526539. 3 ° 1. BuchvaId и др. Новая сокращенная терапия поверхностной трихофитии участков кожи, лишенных волосяного покрова, с помощью и-бромфенилизотиоцианата, Ceskoslov. DermatoI., 37 (1962), 365. 4. W. Wenffen и др. О влиянии различных растворителей и способов распределения на бактериостатическое и фунгистатическое действие двух труднорастворимых в воде. веществ: гексахлорофена и D 47, Журнал общей гигиены и смежных областей, 9 ll ноябрь, 1967. 5 ° Н. Teubner и др. Связь между химической структурой и бактерицидным действием, отдельный оттиск иэ архива экспериментальной ветеринарной медицины, 24, Р 3 (1970) . 6. Вейганд — Хильгетаг ° Методы эксперимента в органической химии, М., "Химия", 1968, с. 765-769.
