Способ получения фосфонатных эфиров нуклеозидов

 

Союз Советсккв

Соцнапкстическив

Республик

И Е (ii 729196

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свкд-ву— (22) Заявлено 26.11.76 (21) 2423536/23-04 (5()м. кл.

С 07 Н 19/00//

А 61 К 31/70 с присоединением заявки .%

Госудорстввннмй комитет (23) Приоритет

Опубликовано 25,04.80. Бюллетень №15 ао донам нзобрвтвний и открытий (53) УДК 547.261.. l8.0 7(088.8) Дата опубликования описания 28.04.80 (72) Авторы изобретения

Ю. В. Хропов, Н. Н. Гуляев и Е. С. Северин

Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени государственный университет им. М. B. Ломоносова (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФОСФОНАТНЫХ ЭФИРОВ НУКЛЕОЗИДОВ

Н

R,— — Р— ОСИ

ОН

Предлагается усовершенствованный способ получения фосфонатных эфиров нуклеозидов обшей формулы

ОН ОН 0 10 и

2дВ В.= С1СН-; ВгСН СН вЂ”; C1CH С3НСН

 — остаток аденина, урацила, структурных аналогов природных нуклеоти- дов, необходимых для биологических исследований, Известен способ получения фосфонатных эфиров нуклеозидов, включающий обработку соответствующих 2,3 -0-изопрс пилиденовых производных нуклеозидов хлорангидридами соответствующих фосфоновых кислот, причем в качестве хлорангидридов используют дихлорангибриды, в присутствии органического основания — пиридина,— снятие изопропилиденовой защиты с помощью 0,1 н. раствора серной кислоты,нейтрализацию реакционной смеси гидроокисью бария и выделение продукта с помощью высоковольтного препаративного электро° ° ореза. Выход целевого продукта 15-20%

Недостатками известного метода являются невысокий выход целевого продукта, необходимость использования для выделения целевого продукта дефицитной и дорогостояшей аппаратуры (установка высоко вопьтного электрофореза), продолжительность способа: обработка гидроокисью бария для нейтрализации реакционной смеси, отделение сульфата бария фильтрованием, Целью изобретения является увеличение выхода целевого продукта и упрощение процесса.

Указанная цель достигается использованием в качестве хлорангидрида фосфоновых кислот монохлорангидрида, а в качестве органического основания — триэтилами729196!

О !!

Р. — Г-ОСН2

ОН !

MC?I2 р 8

II (ио)22 H на, очисткой целевого продукта, осушествляемой перед снятием изопропилиденовой зашиты с помошью тонкослойной хромато-. графии на силикагеле с флуоресцентным индикатором с последующим снятием защиты 90%-ным раствором трифторуксусной кислоты.

Описывается способ получения фосфонатных эфиров нуклеозидов общей формулы

ОН ОН

ИВ,п,= С1СН ВГСК СН2, C1C??2CNHCH2

 — остаток аденина, урацила, 20

I / включающий обработку 2,3 -О-изопропил иденовых производных нуклеозкдов обшей формулы

0 0

X/ с б

30 где В имеет указанные значения, монохлорангидридом фосфоновых кислот обшей формулы

rate R. имеет указанные значения, в присутствии триэтиламина; очистку целевого продукта осуществляют перед сня тием изопропилиденовой зашиты с помошью тонкослойной хроматографии на силикагеле с флуоресцентным индикатором, снятие изопропилиденовой зашиты проводят

90%-ным раствором трифторуксусной кис45 лоты. Выход целевого продукта 30-45%.

Пример 1. Уридин-5 - р-бромэтилфосфонат, Раствор 338 мл (2 ммоль) Р-бромэтилфосфоновой кислоты и 416 мг

М (2 ммоль) пятихлористого фосфора в 10мл абсолютного хлороформа выдерживают при комнатной температуре 30 мин без доступа ватаги. Затем раствор упаривают и ос« таток высушивают в вакууме (0,01 мм о "5 рт.ст,) при 50 С в течение 1 ч. Полученный монохлорангидрид Р -бром этилфосфоновой кислоты растворяют в 15 мл абсолютного хлороформа и к раствору добавля)ют при О-5 >С 1 мл (7 ммоль) триэтиламина, а затем 454 мг (0,8 ммоль) 2

3 -О-изолропилиденуридина, Реакционную

l смесь перемешивают 1 ч при 0-5 С и о

15 ч при комнатной температуре, затем упаривают до объема 1-2 мл и продукт высаживают, добавляя 100-200 мл абсолютного эфира, Дальнейшую очистку осуществляют при помоши препаративной тонкослойной хроматографии на силикагеле с флуоресцентным индикатором в системе метиловый пирт - хлороформ (2:3 по обьему). Полосу силикагеля, содержашую продукт, обнаруживают по поглощению в УФсвете, высушивают и вещество элюируют метанолом. После отгонки растворителя остаток выдерживают 30 мин в 90%-ном растворе трифторуксусной кислоты при комнатной температуре, Далее кислоту удаляют в вакууме, остаток высушивают„ затирают с абсолютным эфиром до кристаллического состояния и получают 126 мг ! уридин-5 — $-бром этилфосфоната, выход

40%.

Найдено, %: С 29,52; Н 4,63> Р 6,69.

С,! Н !8Й 08В/ Р ° 2Н О

Вычислено, %: С 29,34; Н 4,44;

Р 6,88.

Соединение охарактеризовано хроматографической подвижностью в системах: н-бутиловый спирт — уксусная кислота— вода (5:2:3 по обьему), P 0,34, изоЭ пропиловый спирт - концентрированный, аммиак — вода .{7:1:2 по объему), R

0,48, Соединение охарактеризовано электрофоретической подвижностью относительно

/ уридин-5 -монофосфата в системах; уксусная кислота — 0,05 M ацетат аммония (pH 6,5), Е, 0,7; триэтиламмоний - бикарбонатный буфер (рН 7,5),Е 0,5, /

Пример 2. Аденозин-5 — И-хлор° ацетиламинометилфосфонат.

Раствор 375 мг (2 ммоль) g -хлорацетиламинометилфосфоновой кислоты и

416 мг (2 ммоль) пятихлористого фосфора в 10 мл абсолютного хлороформа выдерживают при комнатной температуре 30 мин без доступа влаги. Затем раствор упаривают и остаток высушивают в вакууме (0,01 мм рт.ст,) при 50 С в -.ечение 1 ч. Полученный монохлорангидрид

N -хлорацетиламинометилфосфоновой кислоты растворяют в 15 мл абсолютного хлороформа и к раствору добавляют при О5 С 1 мл (7 ммоль) триэтиламина, а за0

f I тем 246 мг (0,8 ммоль) 2,3 -О-изо7291 пропилиденаденозина. Реакционную смесь перемешивают 1 ч при 0-5 С и 15 ч при о комнатной температуре, затем упаривают до объема 1-2 мл и продукт высаживаюч, добавляя 100-200 мл абсолютного эфира.

Дальнейшую очистку осуществляют при помощи препаративной тонкослойной хроматографии на силикагеле с флуоресцентным индикатором в системе метиловый спирт - хлороформ (3:1 по объему), Полосу силикагеля, содержащую продукт, обнаруживают по поглощению в УФ-свете, высушивают и вещество элюируют метанолом. После отгонки растворителя остаток выдерживают 30 мин в 1 мл 90%-но- го раствора т рифт ору ксуси ой к ислоты при комнатной температуре. Далее кислоту удаляют в вакууме, остаток высушивают); затирают с абсолютным эфиром до кристаллического состояния и получают 146 мг о

/ аденозин-5 -Я -хлорацетиламинометилфосфоната, выход 32%, Найдено, %: С 34,59; Н 4,51.; P 6,97, C33H38 60T C P H O

Вычислено, %: С 34,34; Н 4,43;

P 6,81.

Соединение охарактеризовано хроматографической подвижностью в системе нбутиловый спирт — уксусная кислота — во-да (5:2:3 по объему), R 0,32, 1

Соединение охарактеризовано электрофоретической подвижностью относительно

l аденозин-5-монофосфата в системе уксусная кислота - 0,05 M ацетат аммония (pH 6в5) ю Е Оэ7

Пример 3. Аденозин-5 -хлорметилфосфонат, Раствор 130 мг (1 ммоль) хлорметилфосфоновой кислоты и 208 мг (1 .ммоль)

40 пятихлористого фосфора в 5 мл абсолютного хлороформа выдерживают при комнатной температуре 30 мин без доступа влаги. Затем раствор упаривают и остаток высушивают в вакууме (0,01 мм рт,ст,) при 50 С в течение 1 ч. Полученный моО 45 нохлорангидрид хлорметилфосфоновой кислоты растворяют в 8 мл абсолютного хлороформа и к раствору добавляют при 0-5t

0,5 мл {3,5 ммоль} триэтиламина, а затем 123 мг (0,4 ммоль) 2,3 -0-изоI ы пропилиденаденозина, Реакционную смесь перемешивают 1 ч при 0-5 С и 15 ч при

О комнатной температуре, затем упаривают до объема 1-2 мл и продукт высаживают, добавляя 100-200 мл абсолютного эфира.

Дальнейшую очистку осуществляют при помощи препаративной тонкослойной хрс» матографии на силикагеле с флуоресцент96 ным индикатором в системе метиловый спирт — хлороформ (2;3 по .объему). Полосу силикагеля, содержащую продукт, определяют по поглощению в УФ-свете, высушивают и вещество элюируют метанолом. После отгонки растворителя остаток выдерживают 30 мин в 0,5 мл 90%-ного раствора трнфторуксусной кислоты при комнатной температуре. Далее кислоту удаляют в вакууме, остаток высушивают, затирают с абсолютным эфиром до кристаллического состояния и получают 186 мг

I аденозин-5 -xnopMer ocgoHara, выход

45%, Найдено, %: С 32,02; Н 4,76; P 7,18;

С)4 H) Ng 0 CQ P 2Н 0

Вычислено, %: С 31,77; Н 4,60>

P 7,45.

Соединение охарактеризовано хроматографической подвижностью в системах н-бутиловый спирт — уксусная кислотавода (5;2:3 по объему), Р< 0,34; изопропиловый спирт — концентрированный аммиак — вода (7:1:2 по объему), P

0,49.

Соединение охарактеризовано электрофоретической подвижностью относительно

I аденозин-5 -монофосфата в системах: уксусная кислота — 0,05 М ацетат аммония (pH 6,6), Е 0,7; триэтиламмоний-бикарбонатный буфер (pH 7,5) Е

0,5.

Формула изобретения

Способ получения фосфонатных эфиров нуклеозидов обшей формулы

О

Н

Я, Р ОСН

ОК 0Е

388 R.= С10Н;; В СН Сп .-; С1СН ЮНС ( — остаток аденина, урацила, включающий обработку 2,3 -0-изопропиt лиденовых производных нуклеозидов обшей формулы

Н0СН В

0 0

3 / б

3 Ъ

729196

Н (НО} P — p

Составитель Л. Никулина

Редактор О. Кузнецова Техред М. Петко Корректор М, Демчик

Заказ 1907/23 Тираж 495 Подписное

11H HHllH. Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ПГ1П Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 где В имеет указанные значения, хлорангидридом фосфоновых кислот обшей формулы где Й. имеет укаэанные значения, в присутствии органического основания, 1О снятие иэопропилиденовой зашиты и очистку целевого продукта, о т л и ч а юm и и с я тем, что, с целью упрощения прадесса и увеличения выхода целевого продукта, в качестве хлорангидрида фосфоновых кислот используют монохлорангидрид, в качестве органического основания — триэтиламин, очистку целевого продукта осуществляют перед снятием нзопропилиденовой защиты с помошью тонкослойной хроматографии на силикагеле с флуоресцентным индикатором, а последующее снятие зашиты проводят 90%-ным раствором трифторуксусной кислоты.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Гуляев Н. H., Шаркова E. В., Дедюкина М. М„Северин Е. С., Хомутов P. М.

Избирательное ингибирование ацетил-КоАсинтетазы структурными аналогами ацетиладенилата. -"Биохимия, 36, % 6, 1971, 1267 (прототип).