Е.В. Комаров, В.Г. Крунчак, A.Ã. Родичев, B.Ñ. Нынь, Л.Г. Кардо-Сысоева, Т.М. Крошилова, A.Ã. Сорокин и И.М. Терешин (72) Авторы изобретения (71) Заявитель

Всесоюзный научно-исследовательский технологический институт антибиотиков и ферментов медицинского назначения (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ .РИБОКСИНА

Изобретение относится к усовершенствованному способу выделения рибоксина (инозина), применяющегося для лечения сердечно-сосудистых заболеваний. 5

Известен способ выделения рибоксина иэ раствора смеси нуклеотидов, включающий образование металлокомплекса введением 0,8%-ного раствора серебра .с последующим отделением металла пропусканием через подкисленную суспензию комплекса сильного тока сероводорода, и выделение целевого продукта проводят отделением осадка сульфида серебра, нейтрализацией 15 раствора полученного после отделения осадка сульфида серебра раствора гидроокисью бария, осаждением избыточного бария сульфатом натрия, упариванием раствора и кристаллизацией целе- 20 вого продукта из 80%-ного зтанола(1).

Известный способ имеет следующие недостатки: использование соли дорогостоящего металла, недостаточно полное комплексообразование рибоксина 25 с серебром в присутствии большого количества примесей, осаждение комплекса и ezо разлЬжения в кислых растворах в течение продолжительного. времени (происходит гйдролиз рибоксина), 30

2 что приводит к низкому качеству и к большим потерям целевого продукта (выход целевого продукта 8 + 2% с содержанием гипоксантина 5% -и гуаноэина 2.0%) .

Цель изобретения вЂ” упрощение процесс а, увеличение выхода и к ачеств а целевого продукта.

Цель достигается использованием в качестве комплексообраэователя водорастворимых солей меди, подкислением раствора до рН 4,0-5,0, добавлением раствора щелочи до рН 8,3-8,7, отделением металла комплекса от рибоксина добавлением порошка щавелевой кислоты до рН 2,7-3,8, охлаждением до 2 вЂ” 2 С и выделением целевого продукта зкстракцией горячей водой тем,пературы 80-95 С, что позволяет повысить выход целевого продукта до 4,204,53%, получить целевой продукт с содержанием гипоксантина не более 2% и гуаноэина не более 3%, заменить дорогостоящий реагент комплексообразования (соли серебра) на доступный (со ли меди) и сократить число стадий выделения.

Способ выделения рибоксина иэ растворов смеси нуклеотидов, согласно настоящему изобретению, заключается в

744003 ( рак ты помещают в емкость, где ри боквЂ” син из раствора выделяют вымораживанием.

Пример 2. Берут 800 л нативного раствора с содержанием всех нуклеотидов 11 г/л, в том числе рибоксина 9 г/л. Содержание остаточного сахара в нативном растворе 0,93, В,нативный раствор добавляют порошок перхлората меди (Cu(С О ) ) a соотношении 2:1. Далее аналогично примеру 1.

Пример 3. Берут 800 л нативного раствора с содержанием всех нуклеотидов 11 г/л, в том числе рибоксина 9 г/л. Содержание остаточного сахара в нативном .растворе 0,9%. В

15 нативный раствор добавляют порошок меди азотнокислой fCu(НОз)д ) в соотношении 2:1. Далее аналогично примеру 1 °

Пример 4. Берут 800 л натив20 ного раствора с содержанием всех нуклеотидов 9 г/л, в том числе рибоксина 8 г/л. Содержание остаточного сахара в нативном растворе 2,8 г/л. В нативный раствор добавляют порошок

25 меди сернокислой в количестве 21,6 кг при соотношении 3:1. Далее аналогично примеру 1.

Пример 5 ° Берут 100 л нативного раствора с содержанием всех нуклеотидов 12,5 г/л, в ТоМ числе рибоксина 7 г/л, гуаноэина 3,0 г/л и гипок.сантина 2,5 г/л. Содержание остаточного сахара 1,4%. В нативный раствор добавляют порошок меди сернокислой в соотношении 2:1 к общему содержанию иуклеотидов. Измеряют рН и раствором 30%-ной серной кислоты доводят до значения 4,5. Раствором

40Ъ-ной щелочи подщелачивают до рН

5,3 + 0,1. При этом выпадает осадок комплекса меди с гипоксантином. Осадок отфильтровывают, вес осадка

17 кг. Фильтрат далее обрабатывают аналогично примеру l.

Пример б. Берут 80 л нативного раствора с содержанием всех нуклеотидов 12,5 г/л, в том числе рибоксина 7 г/л, гуанозина 3,0 г/л и гипоксантина 2,5 г/л. Содержание остаточного сахара 1,4%. В нативный раствор добавляют порошок меди сернокислой в соотношении 2:1 к общему содержанию нуклеотидов. Измеряют рН и раствором ЗОВ-ной серной кислоты доводят до значения 4,5. Раствором

40Ъ-ной щелочи подщелачивают до рН 5,2. Выпавший осадок комплекса меди с гипоксантином отфильтровывают. Фильтрат продолжают подщелачивать до рН 7,5. Выпавший вторично осадок, являющийся комплексом меди с гуанозином, отфильтровывают. Фильтрат далее обрабатывают аналогично примеру 1.

Формула изобретения

1. Способ выделения рибоксина иэ

Время подщелачивания 40 мин. Суспензию выдерживают 30 мин и выпавший комплекс меди с рибоксином отфильт- Зр ровывают. Выход рибоксина на этой стадии 98-99%. Вес комплекса 139 кг при влажности 80%. Полученный комплекс промывают водой течение 20 мин, из расчета 3 л воды на l кг комплекса и снова отфильтровывают. Комплекс меди с рибоксином переносят в реактор, снабженный рубашкой с рассолом и мешалкой, со скоростью вращения

100 об/мин. Включают рассол и мешалку и начинают засыпать порошок щавелевой кислоты. После выделения первой порции щавелевой кислоты вводят рНвЂ” метрический датчик и далее щавелевую кислоту добавляют до значения рН 2,73,5, Количество загруженной щавелевой 45 кислоты вЂ” 11 кг. Суспензию рибоксина с оксалатом меди при включенной мешалке охлаждают до температуры 2 «+ 2 С и выдерживают до остаточной концентрации рибоксина в растворе не более $p

15 г/л. Время выдержки 3 ч. Суспенэию отфильтровывают. Фильтрат с содержанием рибоксина и оксалата меди переносят в друк-фильтрэкстрактор. В экстрактор добавляют горячую воду с температурой 80 C в количестве 46,5 л.

Перемешивают в течение 15 мин и отфильтровывают. Концентрация рибоксина в фильтрате 80 г/л. После фильтрации в экстрактор заливают вторую порцию горячей воды в количестве 15 л. 60

Концентрация рибоксина в фильтрате

43,5 г/л. При третьей экстракции концентрация рибоксина „в .растворе 11 г/л.

Выход рибоксина на стадии экстракции составляет 603. Первйй и второй зкст- 65 введении в раствор смеси нуклеотидов водорастворимой соли меди, предпочтительно сульфата меди, предпочтительно в мольном соотношении к общему содержанию нуклеотидов 2:1, в добавлении кислоты до рН 4,0-5,0, в добавлении раствора щелочи до рН 8,3-8,7, предпочтительно дробное подцелачивание до рН 5,5-7,1 с удалением промежуточного осадка, последующее отделение металла проводят добавлением к комплексу порошка щавелевой кислоты до рН 2,7-3„8, охлаждением до 2

- 2 C и выделение целевого продукта осуществляют экстракцией горячей водой температуры 80-95 С с после- цующим вымораживанием экстракта.

Пример 1. Берут 800 л нативюго раствора с содержанием всех ну:леотидов 11 г/л, в том числе рибок ина 9 г/л. Содержание остаточного сахара " в нативном растворе 0,9%. В танивный раствор добавляют порошок меди сернокислой (CuSOq 5НдО) в количестве 17,6 кг. Измеряют рН и раствором 30%-ной серной кислоты доводят до значения 4,5-5,0, раствором

40В-ной щелочи (NaOH) подщелачивают до рН 8,6. раствора смеси нуклеотидов, включаю744003 растворимой соли меди используют сульфат меди.

Составитель Л. Никулина

Редактор Т. Никольская Техред .Н.Бабурка Корректор,А, Гриценко

Тираж 495 Подписное

ЦИНИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 3653/2

Филиал ППП Патент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 щнй образование металлокомплекса с после;,ующим отделением металла и выделением целевого продукта, о т л и ч а ю шийся тем, что, с целью упрощения процесса, увеличения выхода и качества целевого продукта, образование металлокомплекса осуществляют введением водорастворнмой соли меди, подкислением до рН 4,05,0, добавлением раствора щелочи до рН 8,3-8,7, последующее отделение металла проводят добавлением к комплексу порошка щавелевой кислоты до рН 2,7-3,8, охлаждением до 2 + 2 С и выделение целевого продукта осуществляют экстракцией горячей водой температуры 80-95 С с последующим вымораживанием экстракта.

2. Способ по п. 1, о т л и ч а юшийся тем, что в качестве водо-.

3. Способ по п. 1. о т л и ч а юшийся тем, что водорастворимую соль меди вводят в мольном соотношении к общему содержанию нуклеотидов

2:1.

4. Способпоп. 1, отлич аюшийся тЬм, что добавление щелочи до конечного значения рН 8,3-8,7 проводят дробно до рН 5,5-7,1 с уда-. лением промежуточного .осадка.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент ФРГ В 1133730 кл. 12 р 7/11, опублик. 1956 (прототип> .

Производные нуклеозидов,обладающие антиметаболической активностью // 584011

Способ получения производных аденозина // 576955

Патент 413678 // 413678

Патент 402217 // 402217

Способ получения производных n (б)-аралкиладенозина // 399134

Способ получения амидов аденозин-5'-карбоновой кислоты // 385448

Способ получения цис-транс-изомеров n // 383297

Всесогозная ^--rrsi^j. иностранец хельмут форбрюгген^^г^~, ^г -^ - -i'trrrrojjj (федеративная республика германии) г»д..--;>&^.:^.^. -.... .....х-^./ // 372817

Нуклеозиды с модифицированными сахарами и олигонуклеотиды // 2145964

Производные арабинофуранозил-цитозина и содержащие их фармацевтические композиции // 2165260

Изобретение относится к некоторым нуклеозидным производным, которые, как было найдено, обладают ценными свойствами для лечения опухолей

L-нуклеозиды, обладающие анти-hbv или анти-ebv активностью, способ ингибирования hbv или ebv инфекции // 2171809

Изобретение относится к области способов лечения заболеваний, вызванных вирусом гепатита B (называемым также HBV и вирусом Эпштейна-Барра (называемым также EBV, которые включают введение эффективного количества одного или более из активных соединений, раскрытых здесь, или их формацевтически приемлемых производных или пролекарств одного из этих соединений

Производные гемцитабина // 2194711

Изобретение относится к производным гемцитабина формулы (I), где R1, R2, R3 независимо выбирают из водорода и C18 и С20 насыщенных и мононенасыщенных ацильных групп, при условии, что R1, R2, R3 не могут все быть водородом

Амид глицирризиновой кислоты с 5-аминоурацилом, проявляющий анти-вич активность // 2199547

Изобретение относится к новому химическому соединению, а именно к амиду глицирризиновой кислоты с 5-аминоурацилом формулы I, проявляющему анти-ВИЧ активность, в культуре клеток МТ-4, с высокой эффективностью ингибируя накопление вирусспецифического белка р24 (ID50 = 55 мкг/мл или 52,8 мкМ), суммарного вирусного антигена (ID50 = 75 мкг/мл или 72,0 мкМ), что снижает активность обратной транскриптазы (ревертазы) (RT) (ID50 = 55 мкг/мл или 52,8 мкМ)

Фармацевтическая композиция, обладающая анаболическим действием // 2212231

Изобретение относится к области медицины и касается фармацевтической композиции для лечения комплексной и ишемической болезни сердца, перенесенного инфаркта миокарда, миокардиострофии, нарушений ритма, связанных с применением сердечных гликозидов

Cdp-холин-средство для лечения синдрома алкогольной абстиненции и способ лечения с его использованием // 2251422

Cdp-холин - профилактическое средство для лечения церебральной ишемии и способ лечения с его использованием // 2255741

Кристаллические формы производного пиримидинового нуклеозида (варианты), фармацевтическая композиция, способ профилактики и лечения опухолевых заболеваний и применение кристаллической формы // 2256666

2-амино-2-дезоксинуклеозиды - ингибиторы репродукции вирусов кори и марбург // 2264409

Изобретение относится к производным 2'-амино-2'-дезоксинуклеозидов, имеющим формулу где R = Н, алкил, аминоалкил, R1 = (R2 NR3), где R2 и/или R3 = Н, ОН, NH2, алкил, бензил, при условии, что R не представляет собой Н или метил, когда R2 и R3 = Н

Моно-, ди- или трисложные эфиры 2-амино-6-(с1 - с5- алкокси-9-(d-арабинофуранозил)-9н-пурина, способ их получения, применение и фармацевтическая композиция // 2114860

Изобретение относится к моно-, ди- или три-сложным эфирам 2-амино-6-(C1-C5-алкокси)-9-( -D -арабинофуранозил)-9Н-пурина общей формулы (I) где арабинофуранозильный остаток замещен по 2'-, 3'- или 5'-положениям, а сложные эфиры образованы карбоновыми кислотами, в которых некарбонильная часть выбрана из н-пропила, трет-бутила, н-бутила, метоксиметила, бензила, феноксиметила, фенила, метансульфонила и сукцинила

Сложные эфиры нуклеозидов, фармацевтическая композиция // 2126417

Изобретение относится к группе новых соединений формулы I Nu-O-Fa, где O - кислород, Nu - нуклеозид или аналог нуклеозида, включающей такое азотное основание, как аденин, изанин, цитозин, урацил, тимин; Fa - ацил мононенасыщенной C18 мли C20 -9-жирной кислоты, в котором жирная кислота этерифицирована гидроксильной группой в 5 положении сахарного фрагмента нуклеозида или аналога нуклеозида или гидроксильной группой нециклической цепи аналога нуклеозида